EA029862B1 - Текстурирующие штаммы молочно-кислых бактерий - Google Patents

Текстурирующие штаммы молочно-кислых бактерий Download PDF

Info

Publication number
EA029862B1
EA029862B1 EA201390597A EA201390597A EA029862B1 EA 029862 B1 EA029862 B1 EA 029862B1 EA 201390597 A EA201390597 A EA 201390597A EA 201390597 A EA201390597 A EA 201390597A EA 029862 B1 EA029862 B1 EA 029862B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
strain
milk
lactic acid
acid bacteria
mutant
Prior art date
Application number
EA201390597A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201390597A1 (ru
Inventor
Аннетте Кибенич
Ким Иб Серенсен
Эрик Йохансен
Original Assignee
Кр. Хансен А/С
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Кр. Хансен А/С filed Critical Кр. Хансен А/С
Publication of EA201390597A1 publication Critical patent/EA201390597A1/ru
Publication of EA029862B1 publication Critical patent/EA029862B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1238—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt using specific L. bulgaricus or S. thermophilus microorganisms; using entrapped or encapsulated yoghurt bacteria; Physical or chemical treatment of L. bulgaricus or S. thermophilus cultures; Fermentation only with L. bulgaricus or only with S. thermophilus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/127—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using microorganisms of the genus lactobacteriaceae and other microorganisms or enzymes, e.g. kefir, koumiss
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/01—Preparation of mutants without inserting foreign genetic material therein; Screening processes therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
    • C12N15/746—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for lactic acid bacteria (Streptococcus; Lactococcus; Lactobacillus; Pediococcus; Enterococcus; Leuconostoc; Propionibacterium; Bifidobacterium; Sporolactobacillus)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/123—Bulgaricus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/137—Delbrueckii
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/21—Streptococcus, lactococcus
    • A23V2400/249—Thermophilus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/46—Streptococcus ; Enterococcus; Lactococcus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Dairy Products (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Изобретение относится к мутантам молочнокислых бактерий, которые проявляют устойчивость по отношению к антибиотику D-циклосерину и/или функционально эквивалентным антибиотикам и у которых обнаружена повышенная текстура в процессе роста в молоке при сохранении других свойств роста родительского штамма. Кроме того, настоящее изобретение относится к композициям, в которых содержатся такие мутанты, и к молочным продуктам, ферментированным молочнокислыми бактериями, устойчивыми по отношению к D-циклосерину и/или функционально эквивалентным антибиотикам.

Description

Изобретение относится к мутантам молочнокислых бактерий, которые проявляют устойчивость по отношению к антибиотику Ώ-циклосерину и/или функционально эквивалентным антибиотикам и у которых обнаружена повышенная текстура в процессе роста в молоке при сохранении других свойств роста родительского штамма. Кроме того, настоящее изобретение относится к композициям, в которых содержатся такие мутанты, и к молочным продуктам, ферментированным молочнокислыми бактериями, устойчивыми по отношению к Ώ-циклосерину и/или функционально эквивалентным антибиотикам.
029862 Β1
029862
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к мутантам молочно-кислых бактерий, таких как ЬаскоЪасШик йе1Ъгиески (подвид ЪШдапсш) и §1гер1ососси8 1кегторЫ1и8, которые проявляют устойчивость по отношению к антибиотику Ό-циклосерину и/или функционально эквивалентным антибиотикам и у которых обнаружена повышенная текстура в процессе роста в молоке при сохранении других свойств роста родительского штамма. Кроме того, настоящее изобретение относится к культурам, таким как стартовые культуры, в которых содержатся такие мутанты, и к молочным продуктам, ферментированным данными культурами.
Уровень техники, к которой относится изобретение
В пищевой промышленности используют многочисленные виды бактерий, в частности молочнокислые бактерии, чтобы улучшать вкус и текстуру продуктов питания, а также увеличивать срок хранения этих продуктов питания. В случае молочной промышленности молочно-кислые бактерии интенсивно используют, чтобы осуществлять скисание молока (путем ферментации), а также для текстурирования продукта, в который включаются эти бактерии.
В числе молочно-кислых бактерий, используемых в пищевой промышленности, можно упомянуть следующие роды: стрептококки (§1гер1ососси8), лактококки (Ьаскососсик), лактобациллы (ЬаскоЪасШик), лейконостоки (ЬеисопоЧос). педиококки (Рейюсоссик) и бифидобактерии (ВШйоЪаскегшт). Молочнокислые бактерии вида 81гер1ососси8 1кегторкки8 широко используют индивидуально или в сочетании с другими бактериями, такими как ЬаскоЪасШик йе1Ъгиескй (подвид Ъи1дапси8), для производства продуктов питания, в частности ферментированных продуктов. Эти бактерии включают, в частности, в композиции ферментов, используемых для производства ферментированных молочных продуктов, например йогуртов. Определенные бактерии из их числа играют ведущую роль в развитии текстуры ферментированного продукта. Данная характеристика тесно связана с производством полисахаридов.
Современные тенденции в отношении йогуртов представляют собой умеренный аромат и высокую текстуру. В настоящее время это достигается путем использования культур, которые создают умеренный аромат, добавления загустителей или белков, которые придают желательную консистенцию. Производителям йогурта требуется возможность изготавливать йогурт, обладающий этими свойствами, без добавления загущающих веществ. Это позволит им сократить затраты и упростить описание продукта на этикетке. Один весьма привлекательный путь к достижению этой цели заключается в том, чтобы использовать стартовую культуру, которая производит высокий уровень текстуры.
Чтобы удовлетворить требования промышленности, стало необходимым создание новых текстурирующих штаммов молочно-кислых бактерий, в частности, видов ЬаскоЪасШик йе1Ъгиескк (подвид Ъи1дапси8) и §1гер1ососси8 (кегторккик, для текстурирования продуктов питания. Особенно требуются новые текстурирующие штаммы ЬаскоЪасШик йе1Ъгиески (подвид Ъи1даг1си8), которые можно использовать вместе с новыми текстурирующими штаммами §1гер1ососси8 1кегторЫ1и8.
Мутанты, устойчивые по отношению к Ό-циклосерину, описаны для ряда различных бактерий, но никогда не было сообщений, что эти мутанты можно использовать для увеличения текстуры молочного продукта. Не были описаны мутанты ни §1гер1ососси8 1кегторЫ1и8, ни ЬаскоЪасШик йе1Ъгиески (подвид Ъи1дапси8).
Сущность изобретения
Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что группа мутантов молочно-кислых бактерий, которые проявляют устойчивость по отношению к Ό-циклосерину, производит более высокие значения напряжения сдвига и/или жесткости геля, чем материнский штамм, когда эти бактерии используют для ферментации молока.
Авторы настоящего изобретения предложили способ получения таких текстурирующих штаммов молочно-кислых бактерий, которые проявляют устойчивость по отношению к антибиотику Όциклосерину и/или функционально эквивалентным антибиотикам, а также они предложили новую группу устойчивых по отношению к Ό-циклосерину штаммов молочно-кислых бактерий видов ЬаскоЪасШик йе1Ъгиески (подвид Ъи1дапси8) и §1гер1ососси8 (кегторккик с высокими текстурирующими свойствами.
В соответствии с вышеупомянутыми неожиданно обнаруженными фактами настоящее изобретение относится к текстурирующим штаммам молочно-кислых бактерий, таким как ЬаскоЪасШик йе1Ъгиески (подвид Ъи1дагюи8), и к штаммам §1гер1ососси8 (кегторккик, которые проявляют устойчивость по отношению к Ό-циклосерину и/или устойчивость по отношению к функционально эквивалентному антибиотику, а также к способу получения таких штаммов. Кроме того, настоящее изобретение относится к культурам, таким как стартовые культуры, включающие мутантов, и к молочным продуктам, таким как ферментированные молочные продукты, ферментированные данными культурами.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 представляет профили скисания (рН в зависимости от времени) молока при 43°С для материнского штамма ЬаскоЪасШик йе1Ъгиески (подвид Ъи1дапси8) СНСС13995 и двух устойчивых к Όциклосерину мутантов СНСС13995, называемых СНСС12944 и СНСС12945.
Фиг. 2 представляет напряжение сдвига (при 300 1/с (Па)) полножирного молока, содержащего 2% сухого обезжиренного молока, при 43°С для материнского штамма ЬаскоЪасШик йе1Ъгиески (подвид Ъи1- 1 029862
дапсик) СНСС13995 и двух устойчивых к Ό-циклосерину мутантов СНСС13995, называемых СНСС12944 и СНСС12945.
Фиг. 3 представляет жесткость геля (при 300 1/с (Па)) полножирного молока, содержащего 2% сухого обезжиренного молока, при 43°С для материнского штамма Ьас1оЬасШи8 йе1Ьтиескн (подвид Ьи1дапсик) СНСС13995 и двух устойчивых к Ό-циклосерину мутантов СНСС13995, называемых СНСС12944 и СНСС12945.
Фиг. 4 представляет жесткость геля (при 300 1/с (Па)) полножирного молока, содержащего 2% сухого обезжиренного молока, при 43°С для материнского штамма 81тер1ососсик ШетторЫ1ик СНСС13994 и двух устойчивых к Ό-циклосерину мутантов СНСС13994, называемых СНСС13235 и СНСС13236.
Фиг. 5 представляет жесткость геля (при 300 1/с (Па)) полножирного молока, содержащего 2% сухого обезжиренного молока, при 43°С для материнского штамма 81тер1ососсик ШетторЫ1ик СНСС13994 и двух устойчивых к Ό-циклосерину мутантов СНСС13994, называемых СНСС13235 и СНСС13236.
Подробное описание
Определения.
При использовании в настоящем документе термин "молочно-кислые бактерии" означает грамположительные микроаэрофильные или анаэробные бактерии, которые ферментируют сахара, и при этом образуются кислоты, в том числе молочная кислота как преимущественно образующаяся кислота, уксусная кислота и пропионовая кислота. Наиболее полезные для промышленности молочно-кислые бактерии находятся в отряде лактобактерий (Ьас1оЬасШа1ек), который включает виды следующих родов: лактококки (ЬасФсоссик), стрептококки (§1гер!ососсик), лактобациллы (ЬасФЬасШик), лейконостоки (ЬеисопокФс), педиококки (Ребюсоссик), бревибактерии (ВгеПЪасЮпшп). энтерококки (Ейетососсик) и пропионибактерии (РторютЬаЛетшт). Кроме того, производящие молочную кислоту бактерии, принадлежащие к группе строго анаэробных бактерий, а именно виды рода бифидобактерий (ВШбоЬаЛетшт), обычно включают в группу молочно-кислых бактерий. Их часто используют в качестве пищевых культур индивидуально или в сочетании с другими молочно-кислыми бактериями. Молочно-кислые бактерии, включая бактерии видов лактобацилл (ЬасФЬасШик) и термофильных стрептококков (§1тер!ососсик ШегторНПик), обычно поставляют для молочной промышленности в форме замороженных или лиофилизированных культур для объемного инициирования или в форме так называемых культур прямого посева (Όνδ), которые предназначены для непосредственной инокуляции в ферментационный резервуар или бак для производства молочного продукта, такого как ферментированный молочный продукт. Такие культуры называются общим термином "стартовые культуры" или "инициаторы".
Термин "молоко" следует понимать как жидкость, выделяющуюся из молочных желез любых млекопитающих, таких как коровы, овцы, козы, буйволицы или верблюдицы. В предпочтительном варианте осуществления молоко представляет собой коровье молоко. Термин "молоко" также включает содержащие белки и жиры растворы, изготовленные из растительных материалов, например соевое молоко.
Термин "молочный субстрат" может представлять собой любой сырой и/или переработанный молочный материал, который можно подвергать ферментации, используя способ согласно настоящему изобретению. Таким образом, используемые молочные субстраты включают, но не ограничиваются этим, растворы/суспензии любого молока или молокоподобного продукта, содержащего белок, такого как цельное или низкожирное молоко, обезжиренное молоко, пахта, восстановленное сухое молоко, сгущенное молоко, сухое молоко, молочная сыворотка, сыворотка с пониженным содержанием белка (пермеат), лактоза, маточный раствор от кристаллизации лактозы, концентрат белка молочной сыворотки или сливки. Разумеется, молочный субстрат можно получать от любого млекопитающего, например, он может представлять собой практически чистое молоко млекопитающего или восстановленное сухое молоко.
Предпочтительно по меньшей мере часть белка в молочном субстрате представляют собой белки, содержащиеся в природном молоке, такие как казеин или белок молочной сыворотки. Однако часть белка могут представлять собой белки, которые не содержатся в природном молоке.
Перед ферментацией молочный субстрат можно подвергать гомогенизации и пастеризации, используя способы, известные в технике.
Термин "гомогенизация" при использовании в настоящем документе означает интенсивное перемешивание для получения растворимой суспензии или эмульсии. Если гомогенизацию осуществляют перед ферментацией, ее можно осуществлять таким образом, чтобы разбивать молочный жир на частицы меньшего размера, которые больше не выделяются из молока. Это можно осуществлять, пропуская молоко при высоком давлении через мелкие отверстия.
Термин "пастеризация" при использовании в настоящем документе означает обработку молочного субстрата для уменьшения или устранения присутствия живых организмов, таких как микроорганизмы. Предпочтительно пастеризацию осуществляют выдерживанием при определенной температуре в течение определенного периода времени. Заданная температура обычно достигается путем нагревания. Температуру и продолжительность обработки можно выбирать таким образом, чтобы уничтожать или инактивировать определенные бактерии, такие как вредные бактерии. После этого можно осуществлять стадию быстрого охлаждения.
Термин "ферментация" в способах настоящего изобретения означает превращение углеводов в
- 2 029862
спирты или кислоты под действием микроорганизмов. Предпочтительно ферментация в способах настоящего изобретения представляет собой превращение лактозы в молочную кислоту.
Процессы ферментации для использования в производстве ферментированных молочных продуктов хорошо известны, и специалист в данной области техники знает, каким образом выбрать подходящие технологические условия, такие как температура, кислород, количество и характеристики микроорганизмов и продолжительность процесса. Разумеется, условия ферментации выбирают таким образом, чтобы обеспечить достижение цели настоящего изобретения, т.е. получить молочный продукт в твердой или жидкой форме (ферментированный молочный продукт).
В контексте настоящего изобретения йогуртовая стартовая культура представляет собой бактериальную культуру, которая представляет собой ферментированный молочный продукт, получаемый инокуляцией и ферментацией молока с использованием композиции, включающей штамм Ьас1оЬасШи8 бе1Ьгиески (подвид Ьи1дапси8) и штамм §1гер1ососси8 1йегторЫ1и8.
В контексте настоящего изобретения термин "напряжение сдвига" определяет вязкость. Вязкость (выраженная в Па-с) определяется как отношение напряжения сдвига (Па) к скорости сдвига (1/с).
Значение напряжения стандартно определяется в настоящем документе при скорости сдвига, равной 300 1/с.
Органолептические эксперименты (данные не приведены) показали, что наилучшая корреляция между реологическими измерениями и органолептической вязкостью (ощущением в полости рта) обнаруживается, когда используют вязкость, измеренную при скорости сдвига 300 1/с.
В контексте настоящего изобретения термин "функционально эквивалентный антибиотик" следует понимать как антибиотик, имеющий такой же механизм действия или такую же мишень, как Όциклосерин, такой как, например, другие ингибиторы Ό-аланил-О-аланинлигаз, такие как, например, ванкомицин (Ту1да1 и др., Сигг. Меб. Сйет., 2009 г., т. 16, № 20, с. 2566-2580) и другие ингибиторы Όаланинрацемазы, такие как, например, О-карбамоил-Э-серин, алафосфин и галоаланины (Но11)е Эезк Епсус1ореФа оГ М1сгоЬю1оду (Настольная энциклопедия микробиологии), 2004 г., с. 239-258).
Термин "устойчивый по отношению к Ό-циклосерину и/или функционально эквивалентному антибиотику" в настоящем документе означает, что определенный мутировавший бактериальный штамм не уничтожается или уничтожается значительно медленнее по сравнению с соответствующим немутировавшим штаммом, из которого получен мутировавший штамм, в присутствии указанного антибиотика в культуральной среде. В зависимости от концентрации соединения антибиотика в культуральной среде на устойчивость могут также влиять изменения свойств роста мутировавших и немутировавших штаммов. Например, низкая концентрация антибиотика в культуральной среде предотвращает или значительно подавляет рост немутировавших штаммов, не влияя при этом на рост мутировавших штаммов. Немутировавшие штаммы, которые можно использовать в качестве чувствительных эталонных штаммов для оценки устойчивости, предпочтительно включают штаммы СНСС13995 и СНСС13994.
Примеры 1 и 2 настоящей заявки иллюстрируют выделение мутантных штаммов Еас1оЬасШи8 бе1Ьгиески (подвид Ьи1дапси8) и §1гер1ососси8 1йегторЫ1и8 соответственно, которые проявляют устойчивость по отношению к Ό-циклосерину. На основе способов, представленных в примерах 1 и 2, специалист в данной области техники сможет легко выбирать для каждого немутировавшего материнского штамма количество Ό-циклосерина или количество функционально эквивалентного антибиотика, которое своим действием уничтожает большинство клеток материнского штамма и при этом не уничтожает или уничтожает значительно медленнее мутантные штаммы, устойчивые по отношению к Όциклосерину и/или функционально эквивалентному антибиотику.
В контексте настоящего изобретения термин "мутант" следует понимать как производный штамм или штамм, который можно получить из штамма согласно настоящему изобретению (или материнского штамма), используя, например, методы генной инженерии, излучение и/или химическую обработку. Мутант может также представлять собой спонтанно возникающий мутант. Оказывается предпочтительным, чтобы мутант представлял собой функционально эквивалентный мутант, например мутант, который имеет практически одинаковые или улучшенные свойства (например, такие как вязкость, жесткость геля, покрытие полости рта, аромат, последующее скисание, скорость скисания и/или фагоустойчивость) по сравнению с материнским штаммом. Такой мутант представляет собой часть настоящего изобретения. В частности, термин "мутант" относится к штамму, полученному при воздействии на штамм согласно настоящему изобретению любой традиционно используемой мутагенной обработки, в том числе обработки химическим мутагеном, таким как этилметансульфонат (ЕМ§) или М-метил-№-нитро-Ннитрозогуанидин (ΝΤΟ), или ультрафиолетового излучения, или к спонтанно возникающему мутанту. Мутант можно подвергать нескольким процедурам мутагенеза (одну процедуру следует понимать как одну стадию мутагенеза, за которой следует стадия проверки/отбора), но для настоящего изобретения оказывается предпочтительным осуществление не более чем 20, или не более чем 10, или не более чем 5 процедур (или стадий проверки/отбора). В предпочтительном для настоящего изобретения мутанте менее чем 1, менее чем 0,1, менее чем 0,01, менее чем 0,001% или даже менее чем 0,0001% нуклеотидов в бактериальном геноме заменены другими нуклеотидами или удалены по сравнению с материнским штаммом.
- 3 029862
В контексте настоящего изобретения термин "вариант" следует понимать как штамм, который является функционально эквивалентным штамму согласно настоящему изобретению, например, имея практически одинаковые или улучшенные свойства, например, такие как вязкость, жесткость геля, покрытие полости рта, аромат, последующее скисание, скорость скисания и/или фагоустойчивость. Такие варианты, которые можно идентифицировать, используя соответствующие методы исследования, представляют собой часть настоящего изобретения.
Использование определенного и неопределенных артиклей и аналогичных вспомогательных слов в контексте описания настоящего изобретения (в частности, в контексте следующей формулы изобретения) следует истолковывать как единое обозначение единственного и множественного числа, если другое условие не определено в настоящем документе, или если это четко не противоречит контексту. Термины "представляющий", "имеющий", "включающий" и "содержащий" следует истолковывать как не предполагающие ограничения термины (т.е. имеющие значение "включающий, но не ограниченный"), если не определено другое условие. Представление интервалов значений в настоящем документе предназначено просто как способ сокращения индивидуального перечисления каждого отдельного значения, находящегося в данном интервале, если в настоящем документе не определено другое условие, и каждое отдельное значение включается в данное описание, как если бы оно было индивидуально представлено в настоящем документе. Все способы, описанные в настоящем документе, можно осуществлять в любом подходящем порядке, если в настоящем документе не определено другое условие, или если это четко не противоречит контексту. Использование в настоящем документе любых и всех примеров или соответствующих выражений (например, "такой как") предназначено просто для лучшей иллюстрации настоящего изобретения и не устанавливает ограничения в отношении объема настоящего изобретения, если не определено другое условие. Ни одно выражение в настоящем описании не следует истолковывать как обозначение того, какой-либо не заявленный элемент является существенным для практического осуществления настоящего изобретения.
Осуществление и аспекты настоящего изобретения.
Ό-циклосерин (Ό-4-амино-З-изоксазолидон) представляет собой антибиотик, которым ингибируются аланинрацемаза, Ό-аланил-О-аланинлигаза, Ό-аланилаланинсинтаза и Ό-аланинпермеаза, в результате чего происходит лизис клеток. Ό-аланинрацемаза играет важную роль в синтезе Ό-аланина, неотъемлемой части пептидогликанового слоя клеточной оболочки. Мутанты микобактерий (МусоЪас1егшт), которые проявляют устойчивость к Ό-циклосерину, производят избыток Ό-аланина путем увеличения экспрессии гена Ό-аланинрацемазы (Сасегек и др., ί. Вас1егю1., 1997 г., т.179, с. 5046-5055). Таким образом, авторы настоящего изобретения настоящего изобретения заявили о возможности выделения спонтанных мутантов штаммов молочно-кислых бактерий, которым свойственно производство большего количества Ό-аланина. Такие мутанты были выделены и охарактеризованы.
Специалист в данной области техники понимает, что и другие антибиотики, имеющие такой же механизм действия или такую же мишень, как Ό-циклосерин, можно использовать индивидуально или в сочетании с Ό-циклосерином для выделения мутантов типа, описанного в настоящем документе. Таким образом, настоящее изобретение включает также использование таких других функционально эквивалентных антибиотиков, таких как другие ингибиторы Ό-аланил-О-аланинлигаз или Ό-аланинрацемазы.
Термин "функционально эквивалентные антибиотики по отношению к Ό-циклосерину" при использовании в настоящем документе включает любое соединение, которое препятствует синтезу Ό-аланина, переносу Ό-аланина в клетку, образованию Ό-аланил-О-аланина из Ό-аланин или включению Ό-аланилΌ-аланина в составляющие элементы пептидогликанового полимера. Такие антибиотики включают, но не ограничиваются этим, антибиотики, которые ингибируют следующие ферменты: Ό-аланин-рацемаза, Ό-аланил-О-аланинлигаза, Ό-аланилаланинсинтаза и Ό-аланинпермеаза. Такие функционально эквивалентные антибиотики по отношению к Ό-циклосерину включают, но не ограничиваются этим, ванкомицин, О-карбамоил-О-серин, алафосфин и галоаланины.
Обнаружено, что некоторые мутанты Ьас1оЪасШи8 4е1Ъгиески (подвид Ъи1дагюи8) и §1гер1ососси8 1йегторЫ1и8, которые проявляют устойчивость по отношению к Ό-циклосерину, обеспечивают увеличенную текстуру в процессе роста в молоке по сравнению с родительским штаммом при сохранении других свойств роста родительского штамма.
В соответствии с вышеупомянутыми неожиданно обнаруженными фактами, настоящее изобретение в первом аспекте относится к способу получения текстурирующего штамма молочно-кислых бактерий, причем указанный способ включает:
a) обеспечение материнского штамма молочно-кислых бактерий;
b) выделение мутанта материнского штамма, который проявляет устойчивость по отношению к Όциклосерину и/или функционально эквивалентному антибиотику по отношению к Ό-циклосерину; и
c) выбор мутанта, если он производит лучшую текстуру, что определяется по увеличению напряжения сдвига и/или по увеличению жесткости геля в процессе роста в молоке, чем материнский штамм, в результате чего получается текстурирующий штамм молочно-кислых бактерий.
Таким образом, первый аспект относится к способу получения мутанта молочно-кислых бактерий, который обеспечивает увеличение напряжения сдвига и/или жесткости геля в процессе роста в молоке,
- 4 029862
причем указанный способ включает:
a) обеспечение материнского штамма молочно-кислых бактерий;
b) выделение мутанта материнского штамма, который проявляет устойчивость по отношению к Όциклосерину и/или функционально эквивалентному антибиотику по отношению к Ό-циклосерину; и
c) выбор мутанта, если он производит лучшую текстуру, что определяется по увеличению напряжения сдвига и/или по увеличению жесткости геля в процессе роста в молоке, чем материнский штамм, в результате чего получается мутант молочно-кислых бактерий, который обеспечивает увеличение напряжения сдвига и/или жесткости геля в процессе роста в молоке.
Производство выбранным мутантом большей текстуры по сравнению с материнскими штаммами, что определяется по увеличению напряжения сдвига и/или по увеличению жесткости геля, осуществляется как в полножирном, так и в низкожирном молоке.
В предпочтительном варианте осуществления молоко представляет собой коровье молоко. Предпочтительно молоко представляет собой полножирное коровье молоко.
В предпочтительном варианте осуществления материнский штамм молочно-кислых бактерий представляет собой молочно-кислые бактерии, выбранные из группы, которую составляют ЬасФЬасШик бе1Ьгиески (подвид Ьи1дагюи8) и §1гер1ососси8 1йегторЫ1и8.
Однако часть настоящего изобретения представляет собой также использование других молочнокислых бактерии, таких как бактерии видов следующих родов: лактококки (Ьас1ососси8), стрептококки (§1гер1ососси8), лактобациллы (Ьас1оЬасШи8), лейконостоки (БеисопоЧос). педиококки (Ребюсоссик), бревибактерии (Вгеу1Ьас1егшт), энтерококки (Ейегососсик), пропионибактерии (РгорюшЬас!егшт) и бифидобактерии (ВгШоЬас!егшт).
В одном предпочтительном варианте осуществления мутанты получают, инкубируя материнский штамм молочно-кислых бактерий в объеме/на поверхности среды для выращивания, содержащей Όциклосерин и/или функционально эквивалентный антибиотик по отношению к Ό-циклосерину, и выделение мутанта материнского штамма, который не уничтожает Ό-циклосерин и/или функционально эквивалентный антибиотик по отношению к Ό-циклосерину, или который уничтожается значительно медленнее, чем большинство исследованных немутировавших клеток. Однако настоящее изобретение предусматривает другие пути, известные специалисту в данной области техники, чтобы выделять мутанты, устойчивые к Ό-циклосерину и/или функционально эквивалентным антибиотикам по отношению к Όциклосерину. Соответственно материнский штамм, используемый в способе согласно первому аспекту настоящего изобретения, представляет собой штамм, который не является устойчивым (или является менее устойчивым) к Ό-циклосерину и/или функционально эквивалентному антибиотику по отношению к Ό-циклосерину.
В одном варианте осуществления мутант может являться спонтанным мутантом, устойчивым к Όциклосерину и/или функционально эквивалентному антибиотику по отношению к Ό-циклосерину.
В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения способ может включать стадию мутагенеза (например, посредством химической обработки или воздействия излучения или с помощью методов генной инженерии) материнского штамма, например, до или во время стадии Ь).
Таким образом, в одном варианте осуществления мутант может быть получен посредством мутагенеза материнского штамма, используя, например, химическую обработку или воздействие излучения, или мутант может быть получен с помощью методов генной инженерии.
Термины "текстура" или "ощущение в полости рта" означают химическое и физическое взаимодействие продукта в полости рта.
Способы определения текстуры молока включают измерение напряжения сдвига (вязкости) или жесткости геля ферментированного молока, причем они являются легко доступными и известными в технике, а также проиллюстрированы примерами в настоящем документе.
Мутант выбирают на стадии с), если он производит лучшую текстуру, что определяется по увеличению напряжения сдвига и/или по увеличению жесткости геля, в ферментированном молоке, чем материнский штамм, при инокуляции в таком же количестве, как материнский штамм, например, в количестве, составляющем по меньшей мере 104 клеток на 1 мл.
В предпочтительном варианте осуществления мутант производит в молоке вязкость, измеряемую как напряжение сдвига со скоростью 300 1/с (Па), которая составляет по меньшей мере приблизительно на 5% выше, по меньшей мере приблизительно на 10% выше, по меньшей мере приблизительно на 15% выше, по меньшей мере приблизительно на 20% выше, по меньшей мере приблизительно на 25% выше, по меньшей мере приблизительно на 30% выше, по меньшей мере приблизительно на 35% выше, по меньшей мере приблизительно на 40% выше, по меньшей мере приблизительно на 50% выше, чем вязкость, производимая материнским штаммом.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления мутант производит жесткость геля в молоке, которая составляет по меньшей мере приблизительно на 5% выше, по меньшей мере приблизительно на 10% выше, по меньшей мере приблизительно на 15% выше, по меньшей мере приблизительно на 20% выше, по меньшей мере приблизительно на 25% выше, по меньшей мере приблизительно на 30% выше, по меньшей мере приблизительно на 35% выше, по меньшей мере приблизительно на 40% выше,
- 5 029862
по меньшей мере приблизительно на 50% выше, чем жесткость геля, производимая материнским штаммом.
Предпочтительно мутант производит вязкость в полножирном коровьем молоке с добавлением 2% сухого обезжиренного молока, которая составляет более чем приблизительно 105 Па при измерении как напряжение сдвига со скоростью 300 1/с (Па) после 12 ч роста в молоке при 37°С с инокуляцией в количестве, составляющем по меньшей мере 104 клеток на 1 мл молока в случае штаммов Ьас1оЪасШи8 бе1Ътиески (подвид Ъи1дапси8), и более чем приблизительно 75 Па, измеряемое как напряжение сдвига со скоростью 300 1/с (Па) после 12 ч роста в молоке при 37°С с инокуляцией в количестве, составляющем по меньшей мере 104 клеток на 1 мл молока в случае штаммов §!гер1ососсик 1йегторЫ1и8.
В предпочтительном варианте осуществления мутант производит жесткость геля в полножирном коровьем молоке с добавлением 2% сухого обезжиренного молока, которая составляет более чем приблизительно 80 Па после 12 ч роста в молоке при 37°С с инокуляцией в количестве, составляющем по меньшей мере 104 клеток на 1 мл молока в случае штаммов Ьас1оЬасШи8 бе1Ъгиески (подвид Ъи1дапси8), и более чем приблизительно 140 Па после 12 ч роста в молоке при 37°С с инокуляцией в количестве, составляющем по меньшей мере 104 клеток на 1 мл молока в случае штаммов §!тер1ососси8 1йегторЫ1и8.
Во втором аспекте настоящее изобретение относится к штамму молочно-кислых бактерий, получаемому способом согласно первому аспекту настоящего изобретения.
В предпочтительном варианте осуществления штамм молочно-кислых бактерий представляет собой штамм, выбранный из группы, которую составляют Ьас1оЪасШи8 бе1Ъгиескй (подвид Ъи1датюи8) и §!тер1ососсик 1йегторЫ1и8.
В еще одном предпочтительном варианте осуществления штамм молочно-кислых бактерий производит вязкость в полножирном коровьем молоке с добавлением 2% сухого обезжиренного молока, которая составляет более чем приблизительно 105 Па при измерении как напряжение сдвига со скоростью 300 1/с (Па) после 12 ч роста в молоке при 37°С с инокуляцией в количестве, составляющем 104 клеток на 1 мл молока в случае штаммов Ьас1оЪасШик йе1Ъгиескп (подвид Ъи1датюи8), и более чем приблизительно 75 Па при измерении как напряжение сдвига со скоростью 300 1/с (Па) после 12 ч роста в молоке при 37°С с инокуляцией в количестве, составляющем по меньшей мере 104 клеток на 1 мл молока в случае штаммов §!тер1ососси8 !ЬегторЫ1ик.
Предпочтительно штамм молочно-кислых бактерий производит жесткость геля в полножирном коровьем молоке с добавлением 2% сухого обезжиренного молока, которая составляет более чем приблизительно 80 Па после 12 ч роста в молоке при 37°С с инокуляцией в количестве, составляющем по меньшей мере 104 клеток на 1 мл молока в случае штаммов Ьас1оЪасШи8 бе1Ъгиескй (подвид Ъи1датюи8), и более чем приблизительно 140 Па после 12 ч роста в молоке при 37°С с инокуляцией в количестве, составляющем по меньшей мере 104 клеток на 1 мл молока в случае штаммов §1тер1ососси8 (НегторНПик.
В третьем аспекте настоящее изобретение относится к штамму молочно-кислых бактерий, принадлежащему к виду Ьас1оЪасШи8 беШгиески (подвид Ъи1датюи8), выбранному из группы, которую составляют: штамм СНСС12944, который депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и культур под регистрационным номером ΌδΜ 24019, штамм СНСС12945, который депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и культур под регистрационным номером ΌδΜ 24020, и мутанты и варианты любого из перечисленных выше штаммов. Мутанты и варианты проявляют характеристики напряжения сдвига и/или жесткости геля депонированных штаммов, из которых они были произведены.
В четвертом аспекте настоящее изобретение относится к штамму молочно-кислых бактерий, принадлежащему к виду §!гер1ососсик ШетторНЛик, выбранному из группы, которую составляют: штамм СНСС13235, который депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и культур под регистрационным номером ΌδΜ 24010, штамм СНСС13236, который депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и культур под регистрационным номером ΌδΜ 24011, и мутанты и варианты любого из перечисленных выше штаммов. Мутанты и варианты проявляют характеристики напряжения сдвига и/или жесткости геля депонированных штаммов, из которых они были произведены.
В пятом аспекте настоящее изобретение относится к штамму молочно-кислых бактерий, принадлежащему к виду Ьас1оЪасШик Ле1Ъгиески (подвид Ъи1дапси8), устойчивому по отношению к Όциклосерину и/или функционально эквивалентному антибиотику и имеющему одинаковые или улучшенные характеристики напряжения сдвига и/или жесткости геля по сравнению со штаммом СНСС12944, который депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и культур под регистрационным номером ΌδΜ 24019, или штаммом СНСС12945, который депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и культур под регистрационным номером ΌδΜ 24020.
В шестом аспекте настоящее изобретение относится к штамму молочно-кислых бактерий, принадлежащему к виду §1тер1ососси8 ШетторНЛик, устойчивому по отношению к Ό-циклосерину и/или функционально эквивалентному антибиотику и имеющему одинаковые или улучшенные характеристики напряжения сдвига и/или жесткости геля по сравнению со штаммом СНСС13235, который депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и культур под регистрационным номером ΌδΜ 24010, или штаммом СНСС13236, который депонирован в Немецкой коллекции микроорганизмов и культур под регистрационным номером ΌδΜ 24011.
- 6 029862
В седьмом аспекте настоящее изобретение относится к композиции, включающей штамм молочнокислых бактерий согласно аспектам 2-6 настоящего изобретения.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения композиция включает в виде смеси или компонентов комплекта:
ί) штамм, принадлежащий к виду 5>1гер1ососси5 Ιΐιοπηορίιίΐιΐδ согласно второму, четвертому или шестому аспектам настоящего изобретения; и
ίί) штамм, принадлежащий к виду Ьас1оЪасШи8 йе1Ътиескй (подвид Ъи1датюи8) согласно второму, третьему или пятому аспектам настоящего изобретения.
В одном варианте осуществления композиция предпочтительно содержит по меньшей мере 109 КОЕ (колониеобразующих единиц) штамма, принадлежащего к виду Ьас1оЪасШи8 бе1Ъгиескп (подвид Ъи1дат1си8); и по меньшей мере 1010 КОЕ штамма, принадлежащего к виду 5>1гер1ососси5 ШетторШик. В еще одном варианте осуществления композиция содержит по меньшей мере 1011 КОЕ штамма, принадлежащего к виду ЬасЮЪасШих бе1Ъгиески (подвид Ъи1дагюи8); и по меньшей мере 1012 КОЕ штамма, принадлежащего к виду 5>1гер1ососси5 ЛетторЫ1и8.
В одном предпочтительном варианте осуществления композицию можно преимущественно использовать в качестве стартовой культуры, и она находится в замороженной, лиофилизированной или жидкой форме.
В восьмом аспекте настоящее изобретение относится к способу производства молочного продукта, такого как ферментированный молочный продукт, включающему ферментацию молочного субстрата штаммом молочно-кислых бактерий согласно любому из аспектов 2-6 настоящего изобретения или композицией согласно седьмому аспекту настоящего изобретения, и в результате этого получается молочный продукт.
В результате молочный продукт, изготовленный данным способом, содержит штамм молочнокислых бактерий согласно любому из аспектов 2-6 настоящего изобретения или штаммы молочнокислых бактерий композиции согласно седьмому аспекту настоящего изобретения соответственно.
Согласно данному способу молочный субстрат можно ферментировать, используя штамм согласно настоящему изобретению, такой как штамм, принадлежащий к виду §1тер1ососси8 1йегторЫ1и8 до, во время или после ферментации штаммом согласно настоящему изобретению, таким как штамм, принадлежащий к виду Ьас1оЪасШи8.
Кроме того, данный способ может включать до, во время и/или после ферментации введение в молочный субстрат фермента, вещества, загущающего вещества, ароматизатора и консерванта; и/или его форма необязательно представляет собой продукт типа смеси, продукт типа набора или питьевой продукт.
В десятом аспекте настоящее изобретение относится к молочному продукту, содержащему штамм молочно-кислых бактерий согласно любому из аспектов 2-6 настоящего изобретения.
В одиннадцатом аспекте настоящее изобретение относится к использованию штамма молочнокислых бактерий согласно любому из аспектов 2-6 для производства ферментированного молочного продукта.
Далее настоящее изобретение проиллюстрировано следующими неограничительными примерами.
Примеры
Пример 1. Использование Ό-циклосерина для выделения мутантов Ьас1:оЪасШи8 бе1Ъгиескп (подвид Ъи1дат1си8) с улучшенными реологическими свойствами.
Материалы и методы.
Штаммы.
Ьас1:оЪасШи8 бе1Ъгиескп (подвид ЪШдапсик) СНСС13995.
Ьас1:оЪасШи8 йе1Ътиескй (подвид Ъи1дагюи8) СНСС12944 (устойчивый по отношению к Όциклосерину мутант СНСС13995).
Ьас1:оЪасШи8 йе1Ътиескй (подвид Ъи1дагюи8) СНСС12945 (устойчивый по отношению к Όциклосерину мутант СНСС13995).
Выделение мутантов.
Чтобы выделить мутанты штамма Ьас1:оЪасШи8 беШгиески (подвид Ъи1дагюи8) СНСС13995, клетки, полученные при росте единой колонии, инокулировали в бульоне МК§, содержащем от 50 до 100 мкг/мл Ό-циклосерина, и выращивали до насыщения. Клетки разбавляли и высевали на чашки МК§, и колонии проверяли в микролитровых лунках в отношении способности роста в присутствии Ό-циклосерина в интервале от 50 до 100 мкг/мл. Как правило, 25% полученных в результате колоний проявляли быстрый рост в присутствии Ό-циклосерина. Их выбирали для дальнейшего исследования. Выбранных устойчивых по отношению к Ό-циклосерину мутантов дополнительно очищали и исследовали в отношении способности роста в молоке. Во время данного исследования наблюдали, что некоторые полученные мутанты в данных условиях производили значительно лучшую текстуру, чем родительский штамм.
Реология.
Реологический анализ осуществляли, используя реометр §1те88Тесй от фирмы РеоЬофса ПъЦитепЦ АВ (Швеция), после роста в полножирном коровьем молоке с добавлением 2% сухого обезжиренного
- 7 029862
молока.
Результаты.
Два производных мутанта СНСС13995, обозначенные СНСС12944 и СНСС12945, производили значительно лучшую текстуру, которую отличали повышенное напряжение сдвига (вязкость), а также жесткость геля, чем материнский штамм. Это было совершенно очевидно при простом перемешивании ферментированного молока пипеткой. Кроме того, наблюдали, что количество молочной сыворотки различалось для различных мутантов, и оно стало одним из параметров, использованных для выбора мутантов для дальнейшего исследования (см. приведенную ниже табл. 1). Выбранные мутанты представляли собой те, которые демонстрировали низкий уровень синерезиса: мутант 1 и мутант 11 в представленном ниже примере (табл. 1) представляют собой мутанты СНСС12944 и СНСС12945 соответственно.
Таблица 1
Мутант 1 и мутант 11 были выбраны из числа 20 мутантов вследствие малого объема производимой ими молочной сыворотки. Пустые графы относятся к мутантам, которые не свертывали молоко. Два мутанта представляют собой СНСС12945 и СНСС12944 соответственно
Мутант 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
МЛ 4 16 - 17 8 8 10,5 22 - 16 7 5 15 32 11 - 16 20 - -
Объем (мл) молочной сыворотки после роста в течение 24 ч в 100 мл молока категории В при 43°С. Фактические реологические исследования подтверждают наблюдения улучшения консистенции
(табл. 2 и фиг. 2 и 3). Повышение жесткости геля в случае мутантов СНСС12945 и СНСС12944 составляет от 52 до 59%. Напряжение сдвига также повышается, но не в такой большой степени, как жесткость геля (табл. 2 и фиг. 2 и 3).
Таблица 2
Образец Напряжение сдвига при 300 1/с (Па) Жесткость геля при 1 Гц (Па)
СНСС13995 99 58,55
СНСС12945 108,5 93,2 0
СНСС12944 108 89,05
Улучшение реологических свойств представляет собой только одно преимущество, но мутанты становятся менее привлекательными, если ухудшаются другие важные свойства, такие как скисание. Профиль скисания при росте в полножирном коровьем молоке с добавлением 2% сухого обезжиренного молока при 43°С является одинаковым для выбранных мутантов и для соответствующего материнского штамма (фиг. 1).
Вывод.
Устойчивые по отношению к Ό-циклосерину мутанты ЬасФЪасШиз бе1Ъгиескн (подвид Ъи1дапси5), описанные в настоящем документе, можно включать в культуру, такую как стартовая культура, которая производит желательный высокий уровень текстуры.
Пример 2. Использование Ό-циклосерина для выделения мутантов ЗЦеорФсоссиз ШегшорЬйиз с улучшенными реологическими свойствами.
Материалы и методы.
Штаммы
ЗйерФсоссиз ШегшорЬПиз СНСС13994
ЗйерФсоссиз ШегшорЬйиз СНСС13236 (устойчивый по отношению к Ό-циклосерину мутант СНСС13994)
ЗйерФсоссиз ШегшорЬйиз СНСС13995) (устойчивый по отношению к Ό-циклосерину мутант СНСС13994)
Выделение мутантов.
Для выделения мутантов ЗЦерФсоссиз ШегшорЬйиз СНСС13994, полученные при росте единой колонии, инокулироовали в бульоне М17 с добавлением 2% лактозы, содержащем от 50 до 70 мкг/мл Όциклосерина, и выращивали до насыщения. Клетки разбавляли и высевали на чашки М17 с добавлением 2% лактозы, и колонии собирали и проверяли в микролитровых лунках в отношении способности роста в присутствии Ό-циклосерина в интервале от 50 до 70 мкг/мл Ό-циклосерина. Как правило, 25% полученных в результате колоний проявляли быстрый рост в присутствии Ό-циклосерина. Их выбирали для дальнейшего исследования. Выбранные устойчивые по отношению к Ό-циклосерину мутанты дополнительно очищали и исследовали в отношении способности роста в молоке. Во время данного исследования наблюдали, производили ли некоторые из мутантов в данных условиях значительно лучшую текстуру, чем родительский штамм производителя. Количество молочной сыворотки также представляло собой меру, показывающую высокую или низкую жесткость геля.
Реология.
Реологический анализ осуществляли, используя реометр ЗЦеззТесЬ от фирмы КеоЬофса 1п81гишеп18 АВ (Швеция), после роста в полножирном коровьем молоке с добавлением 2% сухого обезжиренного
- 8 029862
молока.
Результаты.
Два производных мутанта СНСС13994, обозначенные СНСС13235 и СНСС13236, производили лучшую текстуру, чем материнский штамм. Это было совершенно очевидно при простом перемешивании ферментированного молока пипеткой. Кроме того, наблюдали, что количество молочной сыворотки различалось для различных мутантов, и оно стало одним из параметров, используемых для выбора мутантов для дальнейшего исследования (см. приведенную ниже табл. 3). Выбранные мутанты представляли собой те, которые демонстрировали низкий уровень синерезиса: мутант 9 и мутант 13 в табл. 3 демонстрировали низкий уровень синерезиса. Этими мутантами являются СНСС13236 и СНСС13235 соответственно.
Таблица 3
Два мутанта (9 и 13) выбраны из числа 20 мутантов
Мутант 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
мл 12 20 10 5,5 7 10 7,5 12 7 22 65 - 65 7 75 6 10 10 5 6
Объем (мл) молочной сыворотки после роста в течение 24 ч в 50 мл молока категории В при 37°С.
Фактические реологические исследования подтверждают наблюдения улучшения консистенции (фиг. 4 и 5). Мутант СНСС13236 показал увеличение напряжения сдвига на 15% и увеличение жесткости геля на 19%, в то время как мутант СНСС13235 показал только увеличение жесткости геля на 23% (табл. 4).
Таблица 4
Образец Напряжение сдвига при 300 1/с (Па) Жесткость геля при 1 Гц (Па)
СНСС13994 69,6 136,6
СНСС13236 79,7 162,5
СНСС13235 64,9 167,3
Что касается скисания, профиль является одинаковым для выбранных мутантов и для соответствующего материнского штамма (данные не представлены).
Вывод.
Устойчивые по отношению к Ό-циклосерину мутанты ЗДерФсоссиз ШегшорЬПиз, описанные в настоящем документе, можно включать в культуру, такую как стартовая культура, которая производит желательный высокий уровень текстуры.
Пример 3. Использование устойчивых по отношению к Ό-циклосерину мутантов ЗДерФсоссиз ШегшорЬПиз и ЕасФЪасШиз бе1Ъгиескл (подвид Ъи1дапсиз) для приготовления бе1Ъгиески (подвид Ъи1дапсиз) СНСС12945.
Сравнение профилей скисания для данных трех сочетаний показало, что сочетания, в которых содержались два мутанта, имели несколько более высокое значение рН, чем сочетание родительских штаммов (данные не представлены). Перемешивание ложкой продемонстрировало, что продукты, изготовленные с использованием устойчивых по отношению к Ό-циклосерину мутантов, проявляли значительно более высокое сопротивление перемешиванию по сравнению с продуктом, изготовленным с помощью родительских штаммов. Кроме того, оказалось, что полученный в результате йогурт имел более густую напоминающую сливки текстуру и более свежий вкус согласно оценкам трех экспертов.
Депонирование и экспертное решение.
Штаммы ЕасФЪасШиз бе1Ъгиески (подвид Ъи1дапсиз) СНСС12944, СНСС12945 и СНСС13995 депонированы в ООО "Немецкая коллекция микроорганизмов и культур" (Ό3ΜΖ ОтЪН, Германия, Ό-38124, Брауншвейг, Инхоффенштрассе, 7В) под регистрационными номерами Ό3Μ 24019, Ό3Μ 24020 и Ό3Μ 24021 соответственно 22 сентября 2010 г.
Штаммы ЗДерФсоссиз ШегшорЬПиз СНСС13235, СНСС13236, и СНСС13994 депонированы в ООО "Немецкая коллекция микроорганизмов и культур" (Ό3ΜΖ ОшЪН, Германия, Ό-38124, Брауншвейг, Инхоффенштрассе, 7В) под регистрационными номерами Ό3Μ 24010, Ό3Μ 24011 и Ό3Μ 24012 соответственно 22 сентября 2010 г.
Депонирование осуществлено согласно условиям Будапештского соглашения о международном признании депонирования микроорганизмов для целей процедуры выдачи патентов.
Заявитель просит предоставлять образец депонированных микроорганизмов только эксперту, утвержденному заявителем.
Список литературы.
ТуФа! и др., Сигг. Меб. СЬет., 2009 г., т. 16, № 20, с. 2566-2580.
Сасегез и др., I. ВасФпо1., 1997 г., т.179, с. 5046-5055.
11о1ре, Е)езк Епсус1ореШа о£ МюгоЪФФду (Настольная энциклопедия микробиологии), 2004 г., с.239-258.
Вся литература, процитированная в настоящем патентном документе, включается в него во всей своей полноте посредством соответствующей ссылки.
- 9 029862

Claims (14)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ получения текстурирующего штамма молочно-кислых бактерий, причем указанный способ включает:
    a) обеспечение материнского штамма молочно-кислых бактерий;
    b) выделение мутанта указанного материнского штамма, который проявляет устойчивость по отношению к Ό-циклосерину и/или функционально эквивалентному антибиотику, путем культивирования материнского штамма в присутствии указанного антибиотика, где указанный функционально эквивалентный антибиотик препятствует синтезу Ό-аланина, переносу из культуральной среды Ό-аланина в клетку, образованию Ό-аланил-О-аланина из Ό-аланина или включению О-аланил-О-аланина в структурные элементы пептидогликанового полимера в бактериальной клетке; и
    c) выбор мутанта из выделенных на стадии Ь) мутантов, ί) если он обеспечивает лучшую текстуру, что определяется по увеличению напряжения сдвига в процессе роста в молоке, чем материнский штамм, где мутант выбирают, если он производит напряжение сдвига, которое составляет по меньшей мере приблизительно на 5% больше, чем напряжение сдвига, производимое материнским штаммом, и где напряжение сдвига измеряют при 300 1/с (Па) после 12 ч роста в молоке при 37°С, или (ίί) если он обеспечивает жесткость геля, которая составляет по меньшей мере приблизительно на 5% больше, чем жесткость геля, производимая материнским штаммом.
  2. 2. Способ по п.1, в котором указанный мутант выбирают на стадии с), если он производит напряжение сдвига, которое составляет по меньшей мере приблизительно на 10% больше, чем напряжение сдвига, производимое материнским штаммом.
  3. 3. Способ по любому из предшествующих пунктов, в котором указанный материнский штамм молочно-кислых бактерий представляет собой штамм, выбранный из группы, которую составляют БасЮЬасШи8 бе1Ьгиескп (подвид ЬЫдапсщ) и ЗЦерЮсоссщ 1йегторЫ1и8.
  4. 4. Устойчивый по отношению к Ό-циклосерину текстурирующий штамм молочно-кислых бактерий Ьас1оЬасШи8 бе1Ьгиески (подвид Ьи1даг1си8) СНСС12944, который депонирован в Ό8ΜΖ под регистрационным номером Ό3Μ 24019, а также мутантный штамм, произведенный из него методами генной инженерии, при воздействии излучения и/или химической обработки, которые генерируют напряжение сдвига в полножирном коровьем молоке с добавлением 2% сухого обезжиренного молока более чем 105 Па при измерении при 300 1/с (Па) после 12 ч роста в молоке при 37°С.
  5. 5. Устойчивый по отношению к Ό-циклосерину текстурирующий штамм молочно-кислых бактерий Ьас1оЬасШи8 бе1Ьгиески (подвид Ьи1даг1си8) СНСС12945, который депонирован в Ό3ΜΖ под регистрационным номером Ό3Μ 24020, а также мутантный штамм, произведенный из него методами генной инженерии, при воздействии излучения и/или химической обработки, которые генерируют напряжение сдвига в полножирном коровьем молоке с добавлением 2% сухого обезжиренного молока более чем 105 Па при измерении при 300 1/с (Па) после 12 ч роста в молоке при 37°С.
  6. 6. Устойчивый по отношению к Ό-циклосерину текстурирующий штамм молочно-кислых бактерий ЗЦерЮсоссщ 1йегторЫ1и8 СНСС13235, который депонирован в Ό3ΜΖ под регистрационным номером Ό3Μ 24010, а также мутантный штамм, произведенный из них методами генной инженерии, при воздействии излучения и/или химической обработки, которые генерируют напряжение сдвига в полножирном коровьем молоке с добавлением 2% сухого обезжиренного молока более чем 75 Па при измерении при 300 1/с (Па) после 12 ч роста в молоке при 37°С.
  7. 7. Устойчивый по отношению к Ό-циклосерину текстурирующий штамм молочно-кислых бактерий ЗЦерЮсоссщ 1йегторЫ1и8, который представляет собой штамм СНСС13236, который депонирован в Ό3ΜΖ под регистрационным номером Ό3Μ 24011, а также мутантный штамм, произведенный из него методами генной инженерии, при воздействии излучения и/или химической обработки, которые генерируют напряжение сдвига в полножирном коровьем молоке с добавлением 2% сухого обезжиренного молока более чем 75 Па при измерении при 300 1/с (Па) после 12 ч роста в молоке при 37°С.
  8. 8. Композиция, которая пригодна в качестве стартовой культуры для производства молочного продукта, включающая штамм молочно-кислых бактерий по любому из пп.4-7 или их комбинацию.
  9. 9. Композиция по п.8, включающая:
    ί) штамм, принадлежащий к виду ЗЦерЮсоссщ 1йегторЫ1и8 по п.6 или 7; и
    и) штамм, принадлежащий к виду БасЮЬасШщ бе1Ьгиескп (подвид Ьи1дапси8) по п.4 или 5.
  10. 10. Композиция по любому из пп.8 и 9, которая находится в замороженной, лиофилизированной или жидкой форме.
  11. 11. Способ производства молочного продукта, включающий ферментацию молочного субстрата штаммом молочно-кислых бактерий по любому из пп.4-7 или композицией по любому из пп.8 и 9.
  12. 12. Молочный продукт, включающий штамм молочно-кислых бактерий по любому из пп.4-7.
  13. 13. Применение штамма молочно-кислых бактерий по любому из пп.4-7 для производства молочного продукта.
  14. 14. Применение текстурирующего штамма молочно-кислых бактерий по любому из пп.4-7 для увеличения текстуры молочного продукта.
    - 10 029862
EA201390597A 2010-10-22 2011-10-21 Текстурирующие штаммы молочно-кислых бактерий EA029862B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP10188511 2010-10-22
PCT/EP2011/068478 WO2012052557A1 (en) 2010-10-22 2011-10-21 Texturizing lactic acid bacteria strains

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201390597A1 EA201390597A1 (ru) 2013-08-30
EA029862B1 true EA029862B1 (ru) 2018-05-31

Family

ID=43385619

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201390597A EA029862B1 (ru) 2010-10-22 2011-10-21 Текстурирующие штаммы молочно-кислых бактерий

Country Status (14)

Country Link
US (2) US9453231B2 (ru)
EP (1) EP2630265B1 (ru)
JP (1) JP5898220B2 (ru)
KR (1) KR101873483B1 (ru)
CN (1) CN103270153B (ru)
BR (1) BR112013009280B1 (ru)
DK (1) DK2630265T3 (ru)
EA (1) EA029862B1 (ru)
ES (1) ES2625662T3 (ru)
HK (1) HK1188814A1 (ru)
MX (1) MX346975B (ru)
PL (1) PL2630265T3 (ru)
UA (1) UA113279C2 (ru)
WO (1) WO2012052557A1 (ru)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105713853B (zh) 2010-01-28 2020-07-17 科·汉森有限公司 基于噬菌体抗性选择的用于对食品进行质构化的乳酸细菌
BR112013009280B1 (pt) 2010-10-22 2021-08-31 Chr. Hansen A/S Método para obter uma cepa de bactérias do ácido láctico de texturização, método de produzir um laticínio e uso de uma cepa de bactérias do ácido láctico
US9462817B2 (en) 2011-02-28 2016-10-11 Franklin Foods Holdings Inc. Processes for making cheese products utilizing denatured acid whey proteins
US9635870B2 (en) 2011-02-28 2017-05-02 Franklin Foods Holdings Inc. Direct-set cheese
US10716313B2 (en) 2012-04-23 2020-07-21 Chr. Hansen A/S Ampicillin resistant texturizing lactic acid bacteria strains
EP2992765B1 (en) * 2013-04-02 2023-07-05 Kikkoman Corporation Soy milk fermented with streptococcus thermophilus and lactobacillus bulgaricus
EP3133929A1 (en) * 2014-04-23 2017-03-01 DSM IP Assets B.V. Fermented milk product
RU2751166C2 (ru) * 2015-07-09 2021-07-09 Кхр. Хансен А/С Способ получения молочного продукта, ферментированного с помощью молочнокислых бактерий и бактерий Bacillus, бактериальная композиция и ее применение в данном способе
US10959444B2 (en) * 2015-12-22 2021-03-30 Chr. Hansen A/S EPS gene cluster of texturizing lactic acid bacteria
SG11201901717XA (en) 2016-09-01 2019-03-28 Chr Hansen As New bacteria
CN110741075A (zh) * 2017-05-31 2020-01-31 科·汉森有限公司 产生嗜热链球菌突变菌株的方法
WO2019061263A1 (en) * 2017-09-29 2019-04-04 Dupont Nutrition Biosciences Aps NOVEL STRAIN OF LACTOBACILLUS PLANTARUM AND USES THEREOF
EP3740079B1 (en) * 2018-01-15 2024-02-21 Chr. Hansen A/S Fermented milk product and preparation thereof using phospholipase
CN116724114A (zh) 2021-01-12 2023-09-08 科·汉森有限公司 具有改善的质构化特性的乳酸菌菌株

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020106754A1 (en) * 2000-07-24 2002-08-08 Andreas Tauch Nucleotide sequences which codes for the alr gene
US20040009490A1 (en) * 1999-08-09 2004-01-15 Genesis Research And Development Corp. Ltd. Polynucleotides, materials incorporating them, and methods for using them
US20060099197A1 (en) * 1998-08-24 2006-05-11 Sean Farmer Probiotic, lactic acid-producing bacteria and uses thereof

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH649196A5 (fr) 1981-12-16 1985-05-15 Nestle Sa Procede de fabrication de yogourt.
JP3027460B2 (ja) 1991-12-19 2000-04-04 キッコーマン株式会社 ファージ耐性乳酸菌及びこれを用いる醤油の製造法
PH31093A (en) 1993-08-06 1998-02-05 Nestec Ltd Lactobacillus bulgaricus having decreased acid production and/or improved aroma and flavor production and food composition comprising said lactobacillus.
JP3863958B2 (ja) 1997-02-03 2006-12-27 株式会社中埜酢店 ファージ耐性納豆菌およびその納豆
JPH11103854A (ja) 1997-09-29 1999-04-20 Snow Brand Milk Prod Co Ltd ファージ耐性菌株及びこれを用いた発酵食品
FR2807764B1 (fr) 2000-04-18 2004-09-10 Agronomique Inst Nat Rech Mutants de bacteries lactiques surproducteurs d'exopolysaccharides
JP3769223B2 (ja) * 2001-11-22 2006-04-19 日本ミルクコミュニティ株式会社 後発酵型ヨーグルト
GB0205647D0 (en) 2002-03-11 2002-04-24 Danisco Cultor Niebull Gmbh Method of improving food fermentation procedures
US20030211218A1 (en) 2002-05-13 2003-11-13 Cote Antoine J. Yogurt production process and products
NZ521836A (en) 2002-10-08 2005-07-29 New Zealand Dairy Board High pressure treatment to reduce microbial spoilage in cultured dairy foods, cooked meats, vegetables and the like
FR2852604B1 (fr) * 2003-03-17 2005-05-13 Bacteries lactiques texturantes
EP1615503A1 (en) * 2003-04-11 2006-01-18 Novozymes A/S Dairy product comprising hyaluronic acid
ES2242541B1 (es) * 2004-04-30 2006-12-16 Consejo Superior De Investigaciones Cientificas Producto fermentado sin lactosa a partir de batido de frutos secos no legumbres y/o horchata.
BRPI0606433A2 (pt) 2005-01-06 2009-06-30 Chr Hansen As bactérias do ácido láctico resistentes a bacteriófagos
CA2961849C (en) 2005-08-26 2022-08-02 Dupont Nutrition Biosciences Aps Use of crispr associated genes (cas)
BRPI0708146B1 (pt) 2006-02-24 2017-07-18 Chr. Hansen A/S An inactive culture composition comprising lactic acid bacteria which provide improved lactic acid content to a milk product and a method for manu- factured manufacture of a foodstuff or product.
ES2610811T3 (es) * 2006-06-16 2017-05-03 Dupont Nutrition Biosciences Aps Bacteria Streptococcus thermophilus
EP1869983A1 (en) 2006-06-23 2007-12-26 Chr. Hansen A/S Low post-acidifying lactic acid bacteria
FR2906536B1 (fr) 2006-10-03 2008-12-26 Danisco Cluster genetique de souches de streptococcus thermophilus presentant des proprietes acidifiantes et texturantes appropriees pour les fermentations laitieres.
EA021820B1 (ru) 2007-02-02 2015-09-30 Арла Фудз Амба Питьевой йогурт и способ его производства
DK2173183T3 (da) 2007-06-06 2011-01-24 Chr Hansen As Forbedring af Bifidobakteriers vækst i fermenterede mælkeprodukter
US20090061046A1 (en) * 2007-08-02 2009-03-05 Novozymes A/S Method for producing an acidified milk drink
WO2010023178A1 (en) 2008-08-28 2010-03-04 Chr. Hansen A/S Pharmaceuticals comprising a bacterial polysaccharide
EP2448419A2 (en) 2009-06-30 2012-05-09 Chr. Hansen A/S A method for producing a fermented milk product
EA023317B1 (ru) 2009-06-30 2016-05-31 Кр. Хансен А/С Способ получения ферментированного молочного продукта
JP5944824B2 (ja) 2009-09-01 2016-07-05 セーホーエル．ハンセン アクティーゼルスカブ エキソ多糖の過剰発現による、食品をテキスチャリングするための改変されたガラクトキナーゼ発現を伴う乳酸菌
CN105713853B (zh) 2010-01-28 2020-07-17 科·汉森有限公司 基于噬菌体抗性选择的用于对食品进行质构化的乳酸细菌
EP2582787B1 (en) * 2010-06-21 2016-08-10 Chr. Hansen A/S Lactic acid bacteria for yoghurt
BR112013009280B1 (pt) 2010-10-22 2021-08-31 Chr. Hansen A/S Método para obter uma cepa de bactérias do ácido láctico de texturização, método de produzir um laticínio e uso de uma cepa de bactérias do ácido láctico

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060099197A1 (en) * 1998-08-24 2006-05-11 Sean Farmer Probiotic, lactic acid-producing bacteria and uses thereof
US20040009490A1 (en) * 1999-08-09 2004-01-15 Genesis Research And Development Corp. Ltd. Polynucleotides, materials incorporating them, and methods for using them
US20020106754A1 (en) * 2000-07-24 2002-08-08 Andreas Tauch Nucleotide sequences which codes for the alr gene

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BRON P A, ET AL.: "USE OF THE ALR GENE AS A FOOD-GRADE SELECTION MARKER IN LACTIC ACID BACTERIA", APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY, US, vol. 68, no. 11, 1 November 2002 (2002-11-01), US, pages 5663 - 5670, XP009003609, ISSN: 0099-2240 *
DELCOUR J., ET AL: "The biosynthesis and functionality of the cell-wall of lactic acid bacteria", ANTONIE VAN LEEUWENHOEK, SPRINGER, DORDRECHT; NL, vol. 76, no. 1-4, 1 July 1999 (1999-07-01), DORDRECHT; NL, pages 159 - 184, XP002616222, ISSN: 0003-6072, DOI: 10.1023/A:1002089722581 *
GOFFIN P., ET AL: "Lactate Racemization as a Rescue Pathway for Supplying D-Lactate to the Cell Wall Biosynthesis Machinery in Lactobacillus plantarum", JOURNAL OF BACTERIOLOGY, AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY, US, vol. 187, no. 19, 1 October 2005 (2005-10-01), US, pages 6750 - 6761, XP002616221, ISSN: 0021-9193, DOI: 10.1128/JB.187.19.6750-6761.2005 *
HOLS P , ET AL: "Conversion of Lactococcus lactis from homolactic to homoalanine fermentation through metabolic engineering.", NATURE BIOTECHNOLOGY, GALE GROUP INC., vol. 17, no. 6, 1 June 1999 (1999-06-01), pages 588 - 592, XP002225554, ISSN: 1087-0156, DOI: 10.1038/9902 *
PARK IL-SEON , WALSH CHRISTOPHER T: "D-alanyl-D-lactate and D-alanyl-D-alanine synthesis by D-alanyl-D-alanine ligase from vancomycin-resistant Leuconostoc mesenteroides: Effects of a phenylalanine 261 to tyrosine mutation", JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, AMERICAN SOCIETY FOR BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY, US, vol. 272, no. 14, 1 April 1997 (1997-04-01), US, pages 9210 - 9214, XP002579095, ISSN: 0021-9258, DOI: 10.1074/jbc.272.14.9210 *

Also Published As

Publication number Publication date
MX346975B (es) 2017-04-07
KR20140008307A (ko) 2014-01-21
KR101873483B1 (ko) 2018-07-03
US10392597B2 (en) 2019-08-27
BR112013009280A2 (pt) 2020-09-15
US20170009198A1 (en) 2017-01-12
CN103270153B (zh) 2019-06-28
UA113279C2 (xx) 2017-01-10
DK2630265T3 (en) 2017-05-08
EP2630265A1 (en) 2013-08-28
US9453231B2 (en) 2016-09-27
JP5898220B2 (ja) 2016-04-06
EA201390597A1 (ru) 2013-08-30
MX2013004343A (es) 2013-06-28
HK1188814A1 (zh) 2014-05-16
ES2625662T3 (es) 2017-07-20
CN103270153A (zh) 2013-08-28
PL2630265T3 (pl) 2017-09-29
BR112013009280B1 (pt) 2021-08-31
JP2013539986A (ja) 2013-10-31
US20130344199A1 (en) 2013-12-26
WO2012052557A1 (en) 2012-04-26
EP2630265B1 (en) 2017-03-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA029862B1 (ru) Текстурирующие штаммы молочно-кислых бактерий
EP2529035B1 (en) Lactic bacterium for texturizing food products selected on basis of phage resistance
JP5753085B2 (ja) 発酵乳製品におけるビフィズス菌の成長の改善
MX2008015834A (es) Bacterias acidolacticas de postacidificion baja.
BR112012004706B1 (pt) bactéria do ácido lático que carreia uma mutação na região -10 do gene galk, seu método de fabricação, composição, produto de laticínio ou produto de leite fermentado e método de fabricação dos mesmos
BR112020019974A2 (pt) Composição e processo para a produção de um produto de leite fermentado compreendendo a aplicação de uma cepa de s. thermophilus deficiente em lactose, uma cepa de l. bulgaricus deficiente em lactose e uma cepa probiótica
BR112018071271B1 (pt) Processo para a produção de um produto alimentício de armazenamento ambiente
US11484040B2 (en) Ampicillin resistant texturizing lactic acid bacteria strains
EA023870B1 (ru) Молочно-кислые бактерии для получения ферментированного молочного продукта
JP2018533910A (ja) アセトアルデヒドの濃度を低減するラクトバチルス・ファーメンタム菌
US11564399B2 (en) Method of producing Streptococcus thermophilus mutant strains
US20220256872A1 (en) Process for producing a fermented milk product with an enhanced level of probiotics
JP4794592B2 (ja) 新規乳酸菌
CN112512325A (zh) 使用孢子形成阴性芽孢杆菌菌株生产改善的乳制品的方法
US20190320673A1 (en) New bacteria
Samet-Bali et al. Enumeration and identification of microflora in “Leben”, a traditional Tunisian dairy beverage
Dimitrova Study of some technological properties of commercial strains Lactobacillus bulgaricus
EA047359B1 (ru) Способ получения улучшенного ферментированного молочного продукта с использованием негативного в отношении споруляции штамма bacillus
BR112020003693B1 (pt) Produto lácteo fermentado, seu processo de produção, composição de bactérias do ácido láctico, e uso do processo para a produção de um produto lácteo fermentado
UA113270C2 (xx) Молочнокисла бактерія streptococcus thermophilus з модифікованою галактокіназною експресією для текстурування харчових продуктів за рахунок надекспресії екзополісахариду

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM