EA028928B1

EA028928B1 - 2'-замещенные карбануклеозидные аналоги для противовирусного лечения

Info

Publication number: EA028928B1
Application number: EA201491548A
Authority: EA
Inventors: Майкл О'Нил Ханрахан Кларк
Original assignee: Джилид Сайэнс, Инк.
Priority date: 2012-03-13
Filing date: 2013-03-11
Publication date: 2018-01-31
Also published as: AU2013232378B2; JP2017206528A; CN106749272B; IN2014DN08505A; JP6525441B2; US20210253622A1; US9481704B2; US20190016749A1; EP3351552A1; JP2015509983A; MD4496C1; CN106749272A; EA201491548A1; WO2013138236A1; MD4496B1; JP2019069986A; MX355267B; EP2834258B1; KR102068856B1; PT2834258T

Abstract

В изобретении предложены соединения формулы Iа также фармацевтические композиции, содержащие соединения формулы I, и способы лечения ортомиксовирусных инфекций путем введения этих соединений. Предложенные соединения, композиции и способы являются особенно подходящими для лечения инфекций, вызванных вирусом гриппа человека.

Description

изобретение относится в целом к композициям, обладающим противовирусной активностью, более конкретно к нуклеозидам, обладающим активностью в отношении инфекций, вызываемых вирусами семейств ОйЬотухоутбае (ортомиксовирусных инфекций), а также к фармацевтическим композициям и способам, в которых они применяются.

Уровень техники

Вирусы гриппа из семейства Ог11юшу\о\апбас. которые принадлежат к родам А и В, являются причиной ежегодных сезонных эпидемий гриппа, вызывая контагиозные острые респираторные инфекции. Дети, люди преклонного возраста и люди с хроническими заболеваниями подвержены риску развития тяжелых осложнений, связанных с высокими уровнями опасности и смертности (Метой е! а1., Огид Όίκсоуегу Тобау 2008, 13, 590-595). Из трех родов гриппа вирусы типа А являются наиболее вирулентными патогенами человека, которые вызывают наиболее тяжелую болезнь, могут передаваться другим видам и вызывать пандемии гриппа человека. Недавние вспышки гриппа у людей в 2009 г, вызванные агрессивным штаммом вируса свиней Α/Η1Ν1, подчеркнули потребность в новых противовирусных терапевтических средствах. Несмотря на применение программ ежегодной вакцинации для защиты населения от инфекций, вызываемых вирусом гриппа, эти программы должны быть направлены на штаммы вируса, которые будут превалировать в сезонных вспышках, чтобы быть эффективными, и они не решают проблему неожиданных, непредвиденных пандемий гриппа. Упоминаемая выше недавняя вспышка гриппа у людей в 2009 г, вызванная агрессивным штаммом вируса свиней Α/Η1Ν1, является примером этой проблемы.

В настоящее время доступно несколько противовирусных терапевтических средств, другие находятся в стадии разработки (Неб1ипб е! а1., Упикек 2010, 2, 1766-1781). Среди доступных в настоящее время противовирусных терапевтических средств можно назвать блокаторы ионных каналов М2 амантадин и римантадин и ингибиторы нейраминидазы озельтамивир и занамивир. Однако ко всем этим средствам выработалась устойчивость. Соответственно существует постоянная потребность в новых противовирусных терапевтических средствах.

В настоящее время разрабатываются новые перспективные противогриппозные агенты с новыми механизмами действия. К этим агентам относятся фавипиравир, направленно воздействующий на репликацию вирусных генов путем ингибирования РНК-полимеразы гриппа. Однако еще не известно, станет ли это исследуемое перспективное лекарственное средство доступно для терапии. Соответственно сохраняется потребность в разработке дополнительных соединений, которые подавляют грипп по этому механизму действия.

Определенные рибозиды нуклеиновых оснований пиррол[1,2-Г][1,2,4]триазин, имидазо[1,51][1,2,4]триазин, имидазо[1,2-1][1,2,4]триазин и [1,2,4]триазоло[4,3-1][1,2,4]триазин раскрыты в СагЬоЬубга!е КекеагсЬ 2001, 331(1), 77-82; №с1ео51бек & ШНеоОбек 1996, 15(1-3), 793-807; ТеЦаЬебгоп ЬеЦегк 1994, 35(30), 5339-42; 11е1егосус1ек 1992, 34(3), 569-74; 1. СЬет. Зос. Регкт Тгапк. 1 1985, 3, 621-30; 1. СЬет. 8ос. Регкт Тгапк. 1 1984, 2, 229-38; АО 2000056734; Огдашс Ьейегк 2001, 3(6), 839-842; 1. СЬет. 8ос. Регкт Тгапк. 1 1999, 20, 2929-2936 и 1. Меб. СЬет. 1986, 29(11), 2231-5. Однако эти соединения не описаны как подходящие для лечения ортомиксовирусных инфекций. Рибозиды нуклеозидов пиррол[1,21][1,2,4]триазинила, имидазо[1,5-Г][1,2,4]триазинила, имидазо[1,2-Г][1,2,4]триазинила и [1,2,4]триазоло[4,3-1][1,2,4]триазинила, обладающие противовирусной, анти-ВГЧ и анти-КбКр активностью, раскрыты ВаЬи в АО2008/089105 и АО2008/141079, СЬо е! а1. в АО2009/132123 и Ргапсот е! а1. В АО2010/002877. Вибег е! а1. в АО2009/132135 описывают противовирусные нуклеозиды пиррол[1,21][1,2,4]триазинил, имидазо[1,5-Г][1,2,4]триазинил, имидазо[1,2-1][1,2,4]триазинил и [1,2,4]триазоло[4,31][1,2,4]триазинил, в которых положение 1' сахара нуклеозида содержит в качестве заместителя цианогруппу или метильную группу. Однако эффективность этих соединений для лечения ортомиксовирусных инфекций не раскрыта.

Краткое описание изобретения

Предложены соединения, которые ингибируют вирусы семейства ОйЬотухоутбае. Изобретение также включает соединения формулы I, которые ингибируют вирусные полимеразы нуклеиновых кислот, в частности РНК-зависимую РНК-полимеразу (КбКр) ортомиксовирусов (Ог1Ьоту\оушбае), в большей степени, чем клеточные полимеразы нуклеиновых кислот. Соединения формулы I можно применять для лечения ортомиксовирусных инфекций у человека и других животных.

Первый вариант реализации изобретения относится к соединению формулы I

или его фармацевтически приемлемой соли,

- 1 028928

где К¹ представляет собой Н;

К² представляет собой ОН или О-бензил;

К³ представляет собой Р;

К⁴ представляет собой Н, =0, ОК^а, Ν(Κ^α)2, Ν3, ΟΝ, §(О)пК^а, галоген или (С1-С₈)галогеналкил; К⁵ представляет собой Н, ОК^а, Ν(Κ^α)2, Ν3, СН 8(О)пК^а, галоген или (С1-С₈)галоалкил; каждый К^а независимо представляет собой Н или (С₁ -С₈)алкил;

п равен 0, 1 или 2 и

К⁶ представляет собой Н, бензил или

νν²

где V² представляет собой ОН и XV¹ представляет собой группу формулы 1а

„X.

где каждый Υ представляет собой О;

М2 равен 0, 1 или 2;

каждый К^х представляет собой Н и

К⁷ представляет собой Н.

В предпочтительном варианте реализации соединение формулы I представлено формулой II

или ее фармацевтически приемлемой солью.

В других предпочтительных вариантах реализации К¹ представляет собой Н, К² представляет собой ОН или О-бензил и/или К³ представляет собой Р. В конкретном варианте реализации настоящего изобретения К⁴ представляет собой ΝΗ2 и К⁵ представляет собой Н, Р, С1, Вг, Ν3, СН СР₃, ΝΗ₂, §Ме или §О₂Ме и в другом варианте реализации К⁵ представляет собой ΝΗ2 и К⁴ представляет собой =О, ОН, ОМе, С1, Вг, I, ΝΗ2, ЯНМе, ΝΗοΡγ или §Ме. В еще более предпочтительных вариантах реализации К⁴ и К⁵, оба, представляют собой ΝΗ₂ или §Ме, К⁵ представляет собой Н или К⁴ представляет собой =О. В других предпочтительных вариантах реализации К⁶ представляет собой Н, бензил, или

Я

νν¹^/ *

где V² представляет собой ОН и V¹ представляет собой группу формулы !а

где каждый Υ представляет собой О; М2 равен 2 и каждый К^х представляет собой Н. В другом варианте реализации К⁷ представляет собой Н.

Второй вариант реализации настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения формулы I согласно определению для первого варианта реализации и фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество. Третий вариант реализации настоящего изобретения относится к способу лечения ортомиксовирусной

- 2 028928

инфекции у нуждающегося в этом млекопитающего, включающему введение терапевтически эффективного количества соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли. В другом варианте реализации способ включает лечение ортомиксовирусной инфекции у нуждающегося в этом млекопитающего путем введения терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции. В некоторых вариантах реализации ортомиксовирусная инфекция, которую лечат, представляет собой инфекцию, вызванную вирусом гриппа А, инфекцию, вызванную вирусом гриппа В, или инфекцию, вызванную вирусом гриппа С. В другом варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает способ ингибирования ортомиксовирусной РНК-зависимой РНК-полимеразы.

Подробное описание изобретения

Первый вариант реализации настоящего изобретения относится к соединению формулы I

или его фармацевтически приемлемой соли;

где каждый из К¹ представляет собой Н;

К² представляет собой ОН или О-бензил;

К³ представляет собой Р;

К⁴ представляет собой Н, =0, ОК^а, Ν(Κ^α)2, Ν3, ΟΝ, §(О)пК^а, галоген или (С1-С₈)галогеналкил; К⁵ представляет собой Н, ОК^а, Ν(Κ^α)2, Ν3, ΟΝ, 8(О)пК^а, галоген или (С1-С₈)галоалкил; каждый К^а независимо представляет собой Н или (С₁ -С₈)алкил;

каждый п равен 0, 1 или 2 и

К⁶ представляет собой Н бензил или

Я,

*

где каждый Υ независимо представляет собой О;

М2 равен 0, 1 или 2; и

каждый К^х представляет собой Н; и

К⁷ представляет собой Н.

В формуле 1а, если Υ представляет собой О, К^х не является галогеном.

Если не указано иначе, следующие термины и словосочетания в настоящем тексте имеют следующие значения.

В случае использования в настоящем тексте торгового наименования заявитель предполагает независимое включение продукта, имеющего такое торговое наименование, и активный фармацевтический ингредиент(ы) товара, имеющего такое торговое наименование.

"Алкил" представляет собой углеводород, содержащий обычные, вторичные, третичные или циклические атомы углерода. Например, алкильная группа может содержать от 1 до 20 атомов углерода (т.е. С₁-С₂₀ алкил), от 1 до 8 атомов углерода (т.е. С₁-С₈ алкил) или от 1 до 6 атомов углерода (т.е. С₁-С₆ алкил). Примеры подходящих алкильных групп включают, но не ограничиваются следующими: метил (Ме, -СН₃), этил (Εΐ, -СН₂СН₃), 1-пропил (п-Рг, н-пропил, -СН₂СН₂СН₃), 2-пропил (ί-Ρτ, изопропил, -СН(СН₃)₂), циклопропил (с-пропил, сРг), 1-бутил (п-Ви, набутил, -СН₂СН₂СН₂СН₃), 2-метил-1-пропил (ίВи, изобутил, -СН₂Сн(СН₃)₂), 2-бутил (5-Ви, 5-бутил, -СН(СН₃)СН₂СН₃), 2-метил-2-пропил (ΐ-Ви, ΐ-бутил, -С(СН₃)₃), 1-пентил (н-пентил, -СН₂СН₂СН₂СН₂СН₃), 2-пентил (-СН(СН₃)СН₂СН₂СН₃), 3-пентил (-СН(СН₂СН₃)₂), 2-метил-2-бутил (-С(СН₃)₂СН₂СН₃), 3-метил-2-бутил (-СН(СН₃)СН(СН₃)₂), 3-метил-1бутил (-СН₂СН₂СН(СН₃)₂), 2-метил-1-бутил (-СН₂СН(СН₃)СН₂СН₃), 1-гексил (-СН₂СН₂СН₂СН₂СН₂СН₃), 2-гексил (-СН(СН3)СН2СН2СН2СН3), 3-гексил (-СН(СН2СН3)(СН2СН2СН3)), 2-метил-2-пентил (-С(СН₃)₂СН₂СН₂СН₃), 3-метил-2-пентил (-СН(СН₃)СН(СН₃)СН₂СН₃), 4-метил-2-пентил

(-СН(СН3)СН2СН(СН3)2), 3-метил-3-пентил (-С(СН3)(СН2СН3)2), 2-метил-3-пентил

- 3 028928

(-СН(СН₂СНз)СН(СН₃)2), 2,3-диметил-2-бутил (-С(СНз)₂СН(СНз)₂), 3,3-диметил-2-бутил

(-СН(СНз)С(СН₃)з и октил(-(СН₂)₇СН₃). "Галогеналкил" представляет собой алкильную группу в соответствии с приведенным выше определением, в которой один или большее число атомов водорода алкильной группы заменено на атом галогена. Алкильная часть галогеналкильной группы может включать от 1 до 20 атомов углерода (т.е. С1-С₂₀ галогеналкил), от 1 до 12 атомов углерода (т.е. С1-С12 галогеналкил) или от 1 до 6 атомов углерода (т.е. С₁-С₆ алкил). Примеры подходящих галогеналкильных групп включают, но не ограничиваются перечисленными: -СР₃, -СНР₂, -СРН₂, -СН₂СР₃ и т.п.

Специалисту понятно, что заместители и другие фрагменты соединений формулы I следует выбирать таким образом, чтобы полученное соединение было достаточно стабильным для получения фармацевтически приемлемого соединения, которое можно включить в фармацевтическую композицию с приемлемой стабильностью. Соединения формулы I, обладающие такой стабильностью, считаются включенным в объем настоящего изобретения.

Следует отметить, что настоящее изобретение охватывает все энантиомеры, диастереомеры и рацемические смеси, таутомеры, полиморфы, псевдополиморфы соединений в рамках объема формулы I и их фармацевтически приемлемые соли (а также комплексы, сокристаллы и т.д.), сольваты или эфиры. Все смеси таких энантиомеров и диастереомеров входят в объем настоящего изобретения. Соединение формулы I и его фармацевтически приемлемые соли могут существовать в виде различных полиморфов или псевдополиморфов. В настоящем тексте кристаллический полиморфизм обозначает способность кристаллического соединения существовать в формах с различными кристаллическими структурами. Кристаллический полиморфизм может быть обусловлен различиями в упаковке в кристаллах (полиморфизм упаковки) или различиями в упаковке между разными конформационными изомерами одной и той же молекулы (конформационный полиморфизм). В настоящем тексте кристаллический псевдополиморфизм обозначает способность гидрата соединения существовать в формах с различными кристаллическими структурами. Существование псевдополиморфов согласно настоящему изобретению обусловлено различиями в упаковке кристаллов (псевдополиморфизм упаковки) или различиям в упаковке между различными конформационными изомерами одной молекулы (конформационный псевдополиморфизм). Настоящее изобретение охватывает все псевдополиморфы соединений формулы I и их фармацевтически приемлемых солей.

Соединение формулы I и его фармацевтически приемлемые соли могут также существовать в форме аморфного твердого вещества. В настоящем тексте аморфное твердое вещество представляет собой твердое вещество, в котором отсутствует дальний порядок положений атомов твердого вещества. Это определение также применимо в случае, когда размер кристалла составляет два нанометра или меньше. Добавки, включая растворители, могут применяться для получения аморфных форм согласно настоящему изобретению. Настоящее изобретение включает все аморфные формы соединений формулы I и их фармацевтически приемлемых солей.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения соединение формулы I представлено формулой II

или ее фармацевтически приемлемой солью;

где переменные имеют значения, определенные для формулы I. В предпочтительном варианте К¹ в формуле II представляет собой Н, К⁴ представляет собой ΝΗ2 или =0 и/или К⁵ представляет собой ΝΗ2 или Н. В более предпочтительном варианте соединение выбрано из группы, состоящей из

или их фармацевтически приемлемых солей.

В предпочтительном варианте реализации соединений формулы I К¹ представляет собой Н.

В другом варианте реализации изобретения К² представляет собой ОН или О-бензил и в более

предпочтительном варианте представляет собой ОН.

В другом варианте реализации изобретения К³ представляет собой Р.

- 4 028928

В другом предпочтительном варианте реализации К⁴ выбран из Н, ΝΗ2, =0, ΝΗΜβ, ΝΗοΡγ. ОН, ОМе, С1, Вг, I, 8Ме, Ρ, Ν3, ΟΝ, СР3 и 802Ме и К⁵ выбран из Н, ΝΗ2, ΝΗΜβ, ΝΗεΡτ, ОН, ОМе, С1, Вг, I, §Ме, Ρ, Ν₃, ΟΝ, СР₃ и §0₂Ме и в более предпочтительном варианте К⁴ представляет собой =0 или ΝΗ2 и/или К⁵ представляет собой Н или ΝΗ2.

В другом варианте реализации К⁶ представляет собой Н, бензил или

ντ

где XV² представляет собой ОН и XV¹ представляет собой группу формулы 1а

М2

Формула 1а,

где Υ представляет собой О;

М2 равен 2 и

каждый К^х представляет собой Н и в более предпочтительном варианте К⁶ представляет собой Н.

В другом варианте реализации изобретения К⁷ представляет собой Н.

В других предпочтительных вариантах реализации изобретения К¹ представляет собой Н, К² представляет собой ОН и К³ представляет собой Ρ.

В другом предпочтительном варианте реализации К¹ представляет собой Н, К² представляет собой ОН, К³ представляет собой Ρ, К⁴ представляет собой ΝΗ2, Η или =0, К⁵ представляют собой ΝΗ2 или Н и К⁶ и К⁷ являются атомами водорода.

В еще одном предпочтительном варианте реализации К¹ представляет собой Н, К² представляет собой О-бензил или ОН, К³ представляет собой Ρ, К⁴ представляет собой §Ме, ΝΗ2 или =0, К⁵ представляет собой §Ме, 802Ме, Н или ΝΗ₂, К⁶ представляет собой бензил или

где V² представляет собой ОН и V¹ представляет собой группу формулы 1а

\ к* /

М2

Формула 1а,

где Υ представляет собой О;

М2 равен 2 и

каждый К^х представляет собой Н и К⁷ представляет собой Н.

В некоторых других вариантах реализации изобретения К⁴ представляет собой ΝΗ2 и К⁵ представляет собой Н, Ρ, С1, Вг, Ν3, СИ, СР₃, ΝΗ₂, 8Ме или 80₂Ме или К⁵ представляет собой ΝΗ2 и К⁴ представляет собой =0, ОН, ОМе, С1, Вг, I, ΝΗ2, NΗΜе, ΝΗοΡγ или 8Ме.

В его предпочтительных вариантах реализации К⁴ и К⁵, оба, представляют собой ΝΗ₂ или 8Ме, К⁵представляет собой Н или К⁴ представляет собой =0.

В другом варианте реализации настоящего изобретения К¹ представляет собой Н, К² представляет собой О-бензил, К³ представляет собой Ρ, К⁴ представляет собой 8Ме, ΝΗ2, ОМе или 06^^^ К⁵ представляет собой Н, 8Ме, 802Ме, ΝΗ₂, Ν₃ или Ρ, К⁶ представляет собой бензил и К⁷ представляет собой Н.

- 5 028928

В предпочтительном варианте реализации изобретения соединение формулы I представляет собой

или его фармацевтически приемлемую соль.

В другом варианте реализации настоящего изобретения соединение формулы I представляет собой

или его фармацевтически приемлемую соль.

- 6 028928

Второй вариант реализации настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения формулы I в соответствии с определением для первого варианта реализации и фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество. В конкретном варианте реализации соединение формулы I представлено формулой II в соответствии с определениями для первого варианта реализации. Термины, используемые во втором варианте реализации изобретения, определены выше применительно к первому варианту реализации. Предпочтительные варианты реализации К¹, К², К³, К⁴, К⁵, К⁶ и К⁷ во втором варианте реализации изобретения совпадают с предпочтительными вариантами для первого варианта реализации изобретения.

В предпочтительном варианте реализации второго варианта реализации изобретения соединение формулы I представляет собой

или фармацевтически приемлемую соль такого соединения и в более предпочтительном случае представляет собой

- 7 028928

или его фармацевтически приемлемую соль.

Термины "фармацевтическая композиция" и "фармацевтический состав" используются в настоящем тексте взаимозаменяемо. Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут быть изготовлены с использованием любых обычных носителей и вспомогательных веществ, которые будут выбраны в соответствии с обычной практикой. Таблетки могут содержать вспомогательные вещества, вещества, обеспечивающие скольжение, наполнители, связующие и т.п. Водные фармацевтические составы готовят в стерильной форме и, в случае если они предназначены для введения путем, отличным от перорального, они обычно являются изотоническими. Все фармацевтические составы обычно содержат вспомогательные вещества, такие как описанные в "НаибЬоок οί Рйагтасеийса1 ΕχοίρίοηΙδ" (1986). Подходящие вспомогательные вещества включают, но не ограничены перечисленными: аскорбиновая кислота и другие антиоксиданты, хелатирующие агенты, такие как ЭДТА, углеводороды, такие как декстран, гидроксиалкилцеллюлоза, гидроксиалкилметилцеллюлоза, стеариновая кислота и т.д. рН фармацевтических составов в предпочтительном случае лежит в диапазоне от приблизительно 3 до приблизительно 11, и в более предпочтительном случае, от приблизительно 7 до приблизительно 10. Хотя активные ингредиенты могут быть введены отдельно, можно предпочтительно представить их в форме фармацевтических составов. Фармацевтические составы, как для ветеринарного, так и для медицинского (для лечения людей) применения, согласно настоящему содержит по меньшей мере один активный ингредиент, определенный выше, совместно с одним или большим числом носителей или вспомогательных вещества.

"Терапевтически эффективное количество" или "эффективная доза" используются в настоящем тексте взаимозаменяемо и означают количество активного ингредиента, необходимое для достижения желаемого результата. Эффективная доза активного ингредиента зависит, по меньшей мере, от природы заболевания, которое лечат, токсичности, того, используется ли соединение в целях профилактики (более низкие дозы) или для борьбы с активной вирусной инфекцией, способа доставки и фармацевтического состава, и может быть легко определена клиницистом с использованием обычных исследований с эскалацией дозы. Эффективное количество может составлять от приблизительно 0,0001 до приблизительно 100 мг/кг массы тела в день; в предпочтительном случает от приблизительно 0,01 до приблизительно 10 мг/кг массы тела в день; в более предпочтительном варианте от приблизительно 0,1 до приблизительно 5 мг/кг массы тела в день и в наиболее предпочтительном варианте от приблизительно 0,05 до приблизительно 0,5 мг/кг массы тела в день. Например, предполагаемая доза для взрослого человека с массой тела приблизительно 70 кг может лежать в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 1000 мг, в предпочтительном варианте от приблизительно 5 до 500 мг и может быть выполнена в однодозовой или многодозовой форме.

В некоторых других вариантах реализации изобретения ортомиксовирусная инфекция, которую лечат с использованием фармацевтической композиции, вызвана вирусом гриппа А, вирусом гриппа В или вирусом гриппа С.

Фармацевтические композиции включают композиции, подходящие для пути введения, соответствующего заболеванию, которое лечат. Подходящие пути включают пероральный, ингаляционный, ректальный, назальный, топический (включая буккальный и сублингвальный), вагинальный и парентеральный (включая подкожный, внутримышечный, внутривенный, внутрикожный, интратекальный и эпидуральный) и т.п. Понятно, что предпочтительный путь введения может варьировать, например, в зависимости от состояния реципиента.

Фармацевтические композиции могут быть представлены в удобной дозированной лекарственной форме и могут быть приготовлены способом, известным в области фармацевтики. Общее описание методик фармацевтических композиций можно найти в Кетт§1ои'8 Рйагтасеийса1 8с1еисе8 (Маск РиЬйкЫид Со., ЕаЛоп. РА). Такие методы включают объединение активного ингредиента с носителем, содержащим один или большее число вспомогательных ингредиентов. Обычно фармацевтические композиции готовят путем однородного и тщательного объединения активного ингредиента с жидкими носителями или мелкодисперсными твердыми носителями, или с носителями обоих видов, с последующим формованием продукта в случае необходимости.

Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению, подходящие для перорального введения, могут быть представлены в виде дискретных единиц, таких как капсулы, саше или таблетки, каждая из которых содержит заранее определенное количество активного ингредиента, в форме порошков или гранул, в форме раствора или суспензии в водной или неводной жидкости, или в виде жидкой эмульсии типа "масло в воде" или жидкой эмульсии типа "вода в масле". Активный ингредиент также может быть введен в форме болюса, электуария или пасты.

Таблетку изготавливают путем прессования или формования, возможно с одним или большим числом вспомогательных ингредиентов. Прессованные таблетки могут быть получены путем прессования в подходящем устройстве сыпучей формы, такой как порошки или гранулы, возможно смешанной со свя- 8 028928

зующим, лубрикантом, инертным разбавителем, поверхностно-активным веществом или диспергирующим агентом. Формованные таблетки могут быть изготовлены путем формования в подходящем устройстве смеси активного ингредиента в форме порошка, смоченного инертным жидким разбавителем. Таблетки необязательно могут быть снабжены покрытием или отметками и могут быть изготовлены таким образом, чтобы обеспечивать медленное или контролируемое высвобождение активного ингредиента из таблетки. Для инфекций глаза и других наружных тканей, например рта и кожи, фармацевтические композиции в предпочтительном варианте применяют в качестве топической мази или крема, содержащих активный ингредиент (ы) в количестве, например, от 0,075 до 20% мас./мас., (включая активный ингредиенты) в диапазоне от 0,1 до 20% с шагом 0,1% мас./мас., например 0,6, 0,7% мас./мас. и т.д.), в предпочтительном случае от 0,2 до 15% мас./мас. и в наиболее предпочтительном случае от 0,5 до 10% мас./мас. В случае изготовления в форме мази активные ингредиенты могут применяться с парафиновой или смешиваемой с водой основой для мази. В альтернативном варианте активные ингредиенты могут быть изготовлены в форме крема с основой для крема типа "масло-в-воде". При желании водная фаза основы для крема может включать, например, по меньшей мере 30% мас./мас., многоатомного спирта, т.е. спирта, содержащего две или больше гидроксильных групп, такого как пропиленгликоль, бутан 1,3диол, маннитол, морбит, глицерин и полиэтилегликоль (включая РЕО 400) и их смеси. Топические фармацевтические композиции желательно, но не обязательно, содержат соединение, которое повышает впитываемость или проникновение активного ингредиента через кожу или в других пораженных участках. Примеры таких веществ, улучшающих проникновение через кожу, включают диметилсульфоксид и близкие аналоги. Масляная фаза эмульсий согласно настоящему изобретению может быть приготовлена из известных ингредиентов известным образом. Хотя эта фаза может состоять исключительно из эмульгатора (называемого также эмульгентом), она в предпочтительном случае включает смесь по меньшей мере одного эмульгатора с жиром или маслом или и с жиром, и с маслом. В предпочтительном случае гидрофильный эмульгатор применяют совместно с липофильным эмульгатором, который действует как стабилизатор. Также предпочтительно включать и масло, и жир. Совместно, эмульгатор(ы) со стабилизатором(ами) составляют так называемый эмульгирующий воск, а воск вместе с маслом и жиром составляет так называемую эмульгирующую основу для мази, которая образует масляную диспергирующую фазу фармацевтических композиций в форме крема.

Эмульгенты и стабилизаторы эмульсии для применения в фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению включают, но не ограничиваются перечисленными: Т\уссп® 60, §раи® 80, цетостеариловый спирт, бензиловый спирт, миристиловый спирт, глицерилмоностеарат и лаурилсульфат натрия.

Выбор подходящих масел или жиров для фармацевтической композиции основан на достижении желаемых косметических свойств. В предпочтительном случае крем будет нежирным, не пачкающимся и смываемым продуктом, консистенция которого предотвращает вытекание из тюбиков и других контейнеров. Могут использоваться эфиры с линейной или разветвленной цепью, моно- или диосновные эфиры, такие как диизоадипат, изоцетилстеарат, пропиленгликолевый диэфир или кокосовые жирные кислоты, изопропил миристат, децилолеат, изопропилпальмитат, бутилстеарат 2-этилгексил пальмитат или смесь эфиров с разветвленной цепью, известная как Стойато1 САР, предпочтительными являются последние три эфира. Их можно использовать отдельно или в комбинации, в зависимости от желаемых свойств. В альтернативном варианте можно применять липиды с высокой температурой плавления, такие как белый мягкий парафин и/или жидкий парафин и другие минеральные масла.

Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению содержат комбинацию согласно настоящему изобретению совместно с одним или большим числом фармацевтически приемлемых носителей или вспомогательных веществ. Фармацевтические композиции, содержащие активный ингредиент, могут быть выполнены в форме, подходящей для предполагаемого пути введения. В случае применения для перорального применения, например, могут быть приготовлены таблетки, пастилки, лепешки, водные или масляные суспензии, диспергируемые порошки или гранулы, эмульсии, твердые или мягкие капсулы, сиропы или эликсиры. Фармацевтические композиции, предназначенные для перорального применения, могут быть изготовлены в соответствии с любым известным в технике способом изготовления фармацевтических композиций, и такие композиции могут содержать один или большее число агентов, включая подсластители, вкусоароматические агенты, красители и консерванты, для обеспечения приемлемого состава. Таблетки, содержащие активный ингредиент в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемым наполнителем, которые подходят для производства таблеток, являются приемлемыми. Эти вспомогательные вещества могут представлять собой, например, инертные разбавители, такие как кальций или карбонат натрия, лактоза, кальция или фосфат натрия; гранулирующие и дезинтегрирующие агенты, такие как кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связующие агенты, такие как крахмал, желатин или гуммиарабик; и смазывающие агенты, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки могут быть без покрытия или могут быть снабжены покрытием известными способами, включая микроинкапсулирование, что позволяет задержать дезинтеграцию и всасывание в желудочно-кишечном тракте и тем самым обеспечить пролонгированное действие в течение более длительного периода. Например, можно применять задерживающий материал, такой как глицерилмоностеа- 9 028928

рат или глицерилдистеарат отдельно или с воском.

Фармацевтические композиции для перорального применения могут также быть представлены в твердых желатиновых капсулах, в которых активный ингредиент смешан с инертным твердым разбавителем, например фосфатом кальция или каолином, или в мягких желатиновых капсулах, в которых активный ингредиент смешан с водной или масляной средой, такой как арахисовое масло, жидкий парафин или оливковое масло.

Водные суспензии согласно настоящему изобретению содержат активные материалы в смеси с вспомогательными веществами, подходящими для изготовления водных суспензий. Такие вспомогательные вещества включают суспендирующий агент, такой как карбоксиметилцеллюлоза натрий, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовая камедь и гуммиарабик, а также диспергирующие или смачивающие агенты, такие как природный фосфатид (например, лецитин), продукт конденсации алкиленоксида с жирной кислотой (например, полиоксиэтиленстеарат), продукт конденсации алкиленоксида с длинноцепочечным алифатическим спиртом (например, гептадекаэтиленоксицетанол), продукт конденсации алкиленоксида с неполным эфиром, образованным жирной кислотой и ангидридом гексита (например, полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат). Водная суспензия может также содержать один или большее число консервантов, таких как этил- или н-пропил пгидроксибензоат, один или большее число красителей, один или большее число вкусоароматических веществ и один или большее число подсластителей, таких как сахароза или сахарин.

Масляные суспензии могут быть получены путем суспендирования активного ингредиента в растительном масле, таком как арахисовое масло, оливковое масло, кунжутное масло или какао-масло, или в минеральном масле, таком как жидкий парафин. Суспензии для перорального применения могут содержать загуститель, такой как пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Подсластители, такие как описаны выше, могут быть добавлены для получения композиции, приемлемой для перорального применения. Консервация этих композиций может достигаться путем добавления антиоксиданта, такого как аскорбиновая кислота.

Диспергируемые порошки и гранулы согласно настоящему изобретению, подходящие для приготовления водной суспензии путем добавления воды, содержат активный ингредиент в смеси с диспергирующим или смачивающим агентом и одним или большим числом консервантов. Примеры подходящих диспергирующих или смечивающих агентов приведены выше.

Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению также могут иметь форму эмульсий типа масло-в-воде. Масляная фаза может представлять собой растительное масло, такое как оливковое масло или арахисовое масло, минеральное масло, такое как жидкий парафин, или их смеси. Подходящие эмульгирующие агенты включают природные камеди, такие как гуммиарабик и трагакантовая камедь, природные фосфатиды, такие как лецитин соевых бобов, эфиры или неполные эфиры, образованные жирными кислотами и ангидридами гекситов, такие как сорбитанмоноолеат, и продукты конденсации этих неполных эфиров с оксидом этилена, такие как полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат. Эмульсия может также содержать подсластители и вкусоароматические агенты. Сиропы и эликсиры могут быть изготовлены с подсластителями, такими как глицерин, сорбит или сахароза. Такие фармацевтические композиции могут также содержать мягчительное средство, консервант и вкусоароматический агент или краситель.

Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут иметь форму стерильного состава для инъекций, таких как водная или масляная суспензия для инъекций. Суспензия может быть изготовлена известными способами с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих агентов, упоминавшийся выше. Стерильный состав для инъекций может представлять собой стерильный раствор или суспензию для инъекций в нетоксичном подходящем для парентерального введения разбавителя или растворителя, такого как раствор в 1,3-бутандиола, или быть приготовлен в форме лиофилизированного порошка. Приемлемые носители и растворители, которые можно применять, включают воду, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, обычно можно применять стерильные нелетучие масла в качестве растворителя или суспендирующей среды. Для этой цели может использоваться любое нелетучее мелкодисперсное масло, включая синтетические моно- и диглицериды. Кроме того, аналогичным образом в приготовлении составов для инъекций могут применяться жирные кислоты, такие как олеиновая кислота.

Количество активного ингредиента, которое может быть смешано с носителем, например, для получения дозированной лекарственной формы, будет различным в зависимости от реципиента лечения и конкретного пути введения. Например, фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением, предназначенная для перорального введения человеку, может содержать от приблизительно 1 до приблизительно 1000 мг активного ингредиента, объединенного с соответствующим и удобным количеством носителя, которое может лежать в диапазоне от приблизительно 5 до приблизительно 95% всей композиции (мас.:мас.). Может быть приготовлена фармацевтическая композиция, обеспечивающая легко измеримые количества для введения. Например, водный раствор, предназначенный для внутривенного вливания, может содержать от приблизительно 3 до приблизительно 500 мкг активного ингредиента на 1 мл раствора, что позволяет достичь скорости вливания приблизительно 30 мл/ч.

- 10 028928

Фармацевтические композиции, подходящие для топического введения в глаз, также включают глазные капли, в которых активный ингредиент растворен или суспендирован в подходящем носителе, в частности в водном растворителе для активного ингредиента. Активный ингредиент присутствует в таких фармацевтических композициях предпочтительно в концентрации от приблизительно 0,5 до приблизительно 20% мас./мас.

Фармацевтические композиции, подходящие для топического введения в рот, включают лепешки, содержащие активный ингредиент в ароматизированной основе, обычно сахарозе, и гуммиарабике или трагакантовой камеди; пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин и глицерин или сахароза и гуммиарабик; и полоскания для рта, содержащие активный ингредиент в подходящем жидком носителе.

Фармацевтические композиции для ректального введения могут быть представлены в виде суппозитория с подходящей основой, содержащей, например, какао-масло или салицилат.

Фармацевтические композиции, подходящие для внутрилегочного или назального введения, характеризуются размером частиц, например, в диапазоне от приблизительно 0,1 до приблизительно 500 мкм, например, от приблизительно 0,5, приблизительно 1, приблизительно 30, приблизительно 35 и т.д., которые вводят путем быстрого вдыхания через носовые ходы или путем вдыхания через рот для достижения альвеолярных мешков. Подходящие фармацевтические композиции включают водные или масляные растворы активного ингредиента. Фармацевтические композиции, подходящие для введения в форме аэрозоля или сухого порошка, можно приготовить в соответствии с обычными методами для лечения или профилактики ортомиксовирусных инфекций, описанных ниже.

В другом аспекте е настоящее изобретение представляет собой новую, эффективную, безопасную, нераздражающую и физиологически совместимую композицию для ингаляций, содержащую соединение формулы I, II или его фармацевтически приемлемую соль, подходящую для лечения ортомиксовирусных инфекций и, потенциально, сопутствующего бронхиолита. Предпочтительные фармацевтически приемлемые соли представляют собой соли неорганических кислот, включая гидрохлорид, гидробромид, сульфат и фосфат, поскольку вызываемое ими раздражение легких может быть меньше. В предпочтительном варианте фармацевтическую композицию для ингаляций вводят в эндобронхиальное пространство в аэрозоле с масс-медианным аэродинамическим диаметром (ММАБ) в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 5 мкм. В предпочтительно варианте соединение формулы I изготовлено в форме для аэрозольной доставки с использованием небулайзера, нагнетательного дозирующего ингалятора (рМБр или ингалятора для доставки сухого порошка (БИ).

Неограничивающие примеры небулайзеров включают атомизирующие, струйные, ультразвуковые, нагнетательные небулайзеры, небулайзеры с вибрирующей пористой пластинкой или эквивалентные небулайзеры, включающие небулайзеры использующие адаптированную технологию доставки аэрозоля (Беиуег, 1. Аего8о1 МеФсше Ри1топагу Бгид Бейуегу 2010, 23 8ирр 1, 81-810). В струйных небулайзерах поток воздуха используется для превращения жидкого раствора в капельки аэрозоля. Ультразвуковой небулайзер работает за счет пьезоэлектрического кристалла, который разделяет жидкость на маленькие капельки аэрозоля за счет сдвига. Нагнетательная небулайзерная система нагнетает раствор под давлением через маленькие поры, в результате чего образуются капельки аэрозоля. В устройстве с вибрирующей пористой пластиной высокочастотная вибрация используется для разделения потока жидкости сдвигом на капельки подходящего размера.

В предпочтительном варианте реализации фармацевтическую композицию для распыления (орошения) доставляют в эндобронхиальное пространство в аэрозоле, содержащем частицы с массмедиальным аэродинамическим диаметром (ММАБ) преимущественно в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 5 мкм с использованием небулайзера, который позволяет фармацевтические композиции соединения формулы I предположить в состояние аэрозоля с частицы с необходимым ММАБ. Для обеспечения оптимальной терапевтической эффективности и устранения побочных эффектов в отношении верхних дыхательных путей и системных побочных эффектов, ММАБ большей части частиц в аэрозоле не должен превышать 5 мкм, поскольку оседание частиц в верхних дыхательных путях снижает доставку лекарственного средства в очаг воспаления или сужения бронхов в нижних дыхательных путях. Если ММАБ аэрозоля меньше 1 мкм частицы склонны оставаться в суспендированном состоянии во вдыхаемом воздухе и соответственно выводятся наружу при выдохе.

В случае изготовления и доставки в соответствии со способом согласно настоящему изобретению, фармацевтическая композиция в форме аэрозоля для распыления обеспечивает доставку терапевтически эффективной дозы соединения формулы I в очаг ортомиксовирусной инфекции, достаточной для лечения ортомиксовирусной инфекции. Вводимое количество лекарственного средства следует корректировать в соответствии с доставкой терапевтически эффективной дозы соединения формулы I. В предпочтительном варианте реализации комбинация водной фармацевтической композиции в форме аэрозоля в комбинации с атомизирующей, разбрызгивающей, нагнетающей, вибрирующей пористой платформой или ультразвуковым небулайзером обеспечивает, в зависимости от небулайзера, доставку приблизительно по меньшей мере от 20 по меньшей мере до 90%, обычно приблизительно 70% введенной дозы соединения согласно настоящему изобретению в дыхательные пути. В предпочтительном варианте реализации обес- 11 028928

печивается доставка по меньшей мере от приблизительно 30 до приблизительно 50% активного ингредиента. В более предпочтительном варианте обеспечивается доставка от приблизительно 70 до приблизительно 90% активного ингредиента.

В другом варианте реализации настоящего изобретения соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль доставляют в форме ингаляционного порошка. Соединения согласно настоящему изобретению вводят эндобронхиальным путем в виде фармацевтической композиции в форме сухого порошка для эффективной доставки мелкодисперсных частиц соединения в эндобронхиальное пространство с использованием сухого порошка или дозирующего ингалятора. Для доставки с использованием порошкового ингалятора соединение формулы I перерабатывают в частицы со среднемассовым аэродинамическим диаметром (ММАЭ) преимущественно в диапазоне от приблизительно 1 мкм до приблизительно 5 мкм путем измельчения и сушки распылением, обработки критической жидкости или осаждения из раствора. Устройства для мокрого размола, размола на стройной мельнице и сушки распылением, а также процедуры, позволяющие получать размер частиц с ММАЭ в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 5 мкм, хорошо известны в технике. В одном варианте реализации к соединению формулы I добавляют вспомогательные вещества перед переработкой в частицы необходимого размера. В другом варианте реализации вспомогательные вещества смешивают с частицами необходимого размера для диспергирования частиц лекарственного средства, например, с использованием лактозы в качестве вспомогательного вещества.

Определение размера частиц осуществляют с использованием известных в области техники устройств. Например, мультистадийный каскадный импактор Андерсона или другие способы, конкретно указанные в Главе 601 Фармакопеи США в качестве аналитических устройств для аэрозолей в дозирующих ингаляторах или порошковых ингаляторах.

В другом предпочтительном варианте реализации соединение формулы I доставляют в форме сухого порошка с использованием устройства, какого как порошковый ингалятор или другого устройства для порошкового ингалятора или других устройств для дозирования сухого порошка. Неограничивающие примеры порошковых ингаляторов и устройств включают устройства, раскрытые в И85458135; И85740794; И85775320; И85785049; И83906950; И84013075; И84069819; И84995385; И85522385; И84668218; И84667668; И84805811 и И85388572. Существует две основные конфигурации порошковых ингаляторов. Одна конфигурация представляет собой дозирующее устройство, в котором резервуар для лекарственного средства находится внутри устройства и пациент добавляет дозу лекарственного средства в ингаляционную камеру. Вторая конфигурация представляет собой устройство с отмеренными на заводе дозами, в котором каждая отдельная доза заключена при производстве в отдельный контейнер. Обе системы основаны на преобразовании фармацевтической композиции лекарственного средства в мелкие частицы с ММАЭ от 1 до приблизительно 5 мкм, и часто изготавливают совместно со вспомогательными частицами более крупного размера, такими как лактоза, но не ограничиваясь лактозой. Лекарственный порошок помещают в ингаляционную камеру (либо при помощи дозирования устройством, либо путем нарушения целостности упаковки дозировки, отмеренной на фабрике) и частицы устремляются из устройства в ротовую полость под действием потока инспирации пациента. Неламинарные характеристики потока движения порошка обуславливают разрушение агрегатов лекарственное средствовспомогательное вещество, крупные вспомогательные частицы большей массы прижимаются к задней стенке горла, в то время как более мелкие частицы лекарственного средств располагаются глубоко в легких. В предпочтительных вариантах реализации соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль доставляют в виде сухого порошка с использованием любого типа порошкового ингалятора, описанного здесь, при этом ММАЭ сухого порошка, за исключением всех вспомогательных веществ, в основном лежит в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 5 мкм.

В другом предпочтительном варианте реализации соединение формулы I доставляют в форме сухого порошка с использованием ингалятора с отмеренными дозами. Неограничивающие примеры ингаляторов с отмеренными дозами включают устройства, описанные в И85261538; И85544647; И85622163; И84955371; И83565070; И83361306 и И86116234. В предпочтительных вариантах реализации соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль доставляют в форме сухого порошка с использованием ингалятора с отмеренными дозами, при этом ММАЭ сухого порошка, за исключением всех вспомогательных веществ, в основном лежит в диапазоне от приблизительно 1 до приблизительно 5 мкм.

Фармацевтические композиции, подходящие для вагинального введения, могут быть представлены в виде фармацевтических композиций в форме пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст или спреев, содержащих в дополнение к активному ингредиенту основы, которые в данной области техники известны как подходящие. Фармацевтические композиции, подходящие для парентерального введения, включают водные и неводные стерильные растворы для инъекций, которые могут содержать антиоксиданты, буферы, бактериостатики и растворенные вещества, которые обеспечивают фармацевтической композиции изотоничность с кровью предполагаемого реципиента, водные и неводные стерильные суспензии, которые могут включать суспендирующие агенты и загустители.

Фармацевтические композиции представлены в контейнерах, содержащих одну дозу или несколько

- 12 028928

доз, например в запаянных ампулах или виалах, и могут храниться в лиофилизированном состоянии (достигаемом сублимационной сушкой) и требуют только добавления стерильной жидкой основы, например воды для инъекций, непосредственно перед применением. Экстемпоральные растворы и суспензии для инъекций готовят из стерильных порошков, гранул и таблеток, описанного выше типа. Предпочтительными дозированными фармацевтическими композициями являются композиции, содержащие дневную дозу или часть дневной дозы активного ингредиента, описанной выше, или подходящую часть такой дозы.

Понятно, что в дополнение к конкретно указанным выше ингредиентам фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению могут включать другие агенты, обычно применяемые в этой области для рассматриваемого типа фармацевтической композиции, например агенты, подходящие для перорально применения, могут включать вкусоароматические агенты.

Настоящее изобретение дополнительно обеспечивает ветеринарные композиции, содержащие по меньшей мере один активный ингредиент, как описано выше, вместе с ветеринарным носителем для него.

Ветеринарные носители и материалы, подходящие для введения композиции, могут быть твердыми, жидкими или газообразными материалами, которые являются в остальном инертными или подходящими для применения в ветеринарии и совместимы а активным ингредиентом. Ветеринарные композиции могут вводиться перорально, парентерально или любым другим желаемым путем.

Соединения согласно настоящему изобретению можно применять для получения фармацевтических композиций с контролируемым высвобождением, содержащих в качестве активного ингредиента одно или большее число соединений согласно настоящему изобретению ("препаратов с контролируемым высвобождением"), в которых контроль и регуляция высвобождения активного ингредиента обеспечивает возможность менее частого введения или улучшение профиля фармакокинетики или токсичности данного активного ингредиента.

В другом варианте реализации в настоящей заявке раскрыты фармацевтические композиции, содержащие соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль.

Большинство инфекций, вызываемых вирусами семейства ОйБотухоутбае, являются респираторными инфекциями. Третий вариант реализации настоящего изобретения относится к способу лечения инфекций, вызванных вирусом семейства ОгШотухоушбае, у нуждающегося в этом млекопитающего. Указанный способ включает стадию введения терапевтически эффективного количества соединения согласно настоящему изобретению, как определено выше в отношении первого варианта реализации настоящего изобретения. В конкретном варианте реализации соединение формулы I представлено формулой II, как определено выше в отношении первого варианта реализации настоящего изобретения. Термины в третьем варианте реализации настоящего изобретения определены выше в отношении первого и второго вариантов реализации настоящего изобретения. Предпочтительными вариантами реализации К¹, К², К³, К⁴, К⁵, К⁶ и К⁷ в третьем варианте реализации настоящего изобретения являются те же варианты, что и для первого варианта реализации настоящего изобретения.

- 13 028928

В предпочтительном варианте соединение формулы I представляет собой

ноо'

или его фармацевтически приемлемую соль, а в более предпочтительном случае представляет собой

нет Р

или его фармацевтически приемлемую соль.

В другом варианте реализации настоящего изобретения фармацевтически эффективное количество соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли вводят нуждающемуся в этом млекопитающему.

- 14 028928

В другом варианте реализации предложено применение соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли для лечения вирусной инфекции, вызванной вирусом Оййотухоушбае.

В другом аспекте е этого третьего варианта реализации ортомиксовирусная инфекция, которую лечат, представляет собой инфекцию, вызванную вирусом гриппа А.

В другом аспекте е этого варианта реализации ортомиксовирусная инфекция представляет собой инфекцию, вызванную вирусом гриппа В. В другом аспекте этого варианта реализации ортомиксовирусная инфекция представляет собой инфекцию, вызванную вирусом гриппа С.

В предпочтительном варианте реализации способ согласно настоящему изобретению включает лечение ортомиксовирусной инфекции у нуждающегося в этом млекопитающего путем введения терапевтически эффективного количества соединения формулы I или его фармацевтически приемлемой соли или эфира.

В другом варианте реализации способ согласно настоящему изобретению включает лечение ортомиксовирусной инфекции у нуждающегося в этом млекопитающего путем введения терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции. В другом варианте реализации способ согласно настоящему изобретению включает лечение ортомиксовирусной инфекции у нуждающегося в этом млекопитающего путем введения фармацевтически эффективного количества фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению.

В еще одном варианте реализации настоящее изобретение обеспечивает способы лечения ортомиксовирусных инфекций у пациента, включающие: введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли.

В другом аспекте е настоящего изобретения ниже описаны способы, которые могут применяться для получения соединений формулы I согласно настоящему изобретению.

Композиции согласно настоящему изобретению могут действовать как ингибиторы полимеразы ортомиксовирусов, как интермедиаты для таких ингибиторов или обладать другими полезными свойствами, описанными ниже. Эти ингибиторы связываются в участках на поверхности или в полости полимеразы ортомиксовирусов, геометрия которой уникальна для полимеразы ортомиксовирусов. Композиции, связывающие полимеразу ортомиксовирусов, могут связывать ее с различной степенью обратимости. Соединения, которые связываются, по существу, необратимо, являются идеальными кандидатами для применения в этом способе согласно настоящему изобретению. По существу, необратимо связывающие композиции, если их снабдить меткой, можно применять в качестве зондов для детектирования полимеразы ортомиксовирусов. Соответственно настоящее изобретение относится к способам детектирования полимеразы ортомиксовирусов в образце, предположительно содержащем полимеразу ортомиксовирусов, включающим этапы: обработки образца, предположительно содержащего полимеразу ортомиксовирусов, композицией, содержащей соединение согласно настоящему изобретению, связанное с меткой; и наблюдения влияния образца на активность метки. Подходящие метки хорошо известны в области диагностики и включают стабильные свободные радикалы, флюорофоры, радиоизотопы, ферменты, хемилюминесцентные группы и хромогены. Мечение описанных здесь соединений осуществляют обычным образом с использованием функциональных групп, таких как гидроксил, карбоксил, сульфгидрил или амино. В контексте настоящего изобретения, образцы, предположительно содержащие полимеразу ортомиксовирусов, включают природные или созданные человеком материалы, такие как живые организмы; культуры тканей или клеток; биологические образцы, такие как образцы биологического материала (крови, сыворотки, мочи, спинномозговой жидкости, слезной жидкости, мокроты, слюны образцы тканей и т.п.); лабораторные образцы; образцы пищи, воды или воздуха; образцы биологических продуктов, такие как экстракты клеток, в частности рекомбинантных клеток, синтезирующих целевой гликопротеин, и т.п. В типичном случае предполагают, что образец содержит организм, который продуцирует полимеразу ортомиксовирусов, часто патогенный организм, такой как вирус семейства Оййотухоушбае. Образцы могут содержаться в любой среде, включая воду и смеси органический растворитель/вода. Образец включают живые организмы, такие как человек и материалы, созданные человеком, такие как культуры клеток.

Этапы обработки согласно настоящему изобретению включают добавление композиции согласно настоящему изобретению к образцу или добавление предшественника к образцу. Этап добавления включает любой способ введения, описанный здесь.

При желании, активность полимеразы ортомиксовирусов после применения композиции можно наблюдать любым способов, включая прямые и непрямые методы детектирования активности полимеразы ортомиксовирусов. Предусмотрено применение всех количественных, качественных и полуколичественных методов определения активности полимеразы ортомиксовирусов. Обычно применяется один из описанных выше методов скрининга, однако, также может применяться любой другой способ наблюдения за физиологическими свойствами живого организма.

Организмы, которые содержат полимеразу ортомиксовирусов, включают вирусы семейства Огбютухоушбае. Соединения согласно настоящему изобретению можно применять в лечении или профилактике ортомиксовирусных инфекций у животных или человека.

- 15 028928

В еще одном варианте реализации в настоящей заявке предложены способы ингибирования РНКзависимой РНК-полимеразы ортомиксовирусов в клетке. В другом аспекте е настоящее изобретение также обеспечивает способы и новые промежуточные соединения, раскрытые в настоящем тексте, которые можно применять для получения соединений формулы I согласно настоящему изобретению.

В других аспектах предложены новые способы синтеза, анализа, разделения, выделения, очистки, исследования и тестирования соединения согласно настоящему изобретению.

Также в объем настоящего изобретения входят образующие ίη νίνο продукты метаболизма описанных здесь соединений, при условии, что такие продукты являются новыми и неочевидными из уровня техники. Такие продукты могут образовываться в результате, например, окисления, восстановления, гидролиза, амидирования, этерификации и т.д. введенного соединения, в первую очередь за счет ферментативных процессов. Соответственно настоящее изобретение включает новые и неочевидные соединения, образующиеся в результате процесса, включающего контакт соединения согласно настоящему изобретению с млекопитающим в течение периода времени, достаточного для образования продукта метаболизма указанного соединения. Такие продукты обычно определяют путем приготовления радиомеченого (например, ¹⁴С или ³Н) соединения согласно настоящему изобретению, его парентерального введения в детектируемой дозе (например, выше приблизительно 0,5 мг/кг) животному, такому как крыса, мышь, морская свинка, обезьяна или человек, обеспечения времени, достаточного для метаболизирования (обычно приблизительно от 30 с до 30 ч) и выделения продуктов его превращения из мочи, крови или других биологических образцов. Эти продукты легко выделить, поскольку они содержат метку (другие выделяются с использованием антител, способных связывать эпитопы, сохранившиеся в метаболите). Структуры метаболитов определяют обычными способами, например путем анализа методом МС или ЯМР. Обычно анализ метаболитов осуществляют таким же образом, что и обычные исследования метаболизма лекарственных средств, как хорошо известно специалисту. Продукты превращения, при условии, что они не встречаются в других условиях ίη νίνο, можно применять в диагностических тестах для определения терапевтических доз соединений согласно настоящему изобретению, если они сами обладают ингибиторной активностью в отношении ортомиксовирусной полимеразы. Процедуры и методы для определения стабильности соединений в суррогатных секретах желудочно-кишечного тракта известны. Здесь, соединения определяются как стабильные в желудочно-кишечном тракте, если в суррогатных желудочных или кишечных соках после инкубации в течение 1 ч при 37°С теряется защита на менее приблизительно 50 мол.% защищенных групп. Сама по себе стабильность в желудочно-кишечном тракте не означает, что они не могут гидролизоваться ίη νίνο. Пролекарства согласно настоящему изобретению обычно стабильны в пищеварительной системе, но могут быть практически гидролизованы до исходного соединения в просвете ЖКТ, в печени или в другом органе, где происходит метаболизм, или в клетке вообще.

Примеры

В подробном описании экспериментов используется несколько аббревиатур и сокращений. Хотя для специалиста они понятны, в табл. 1 приведен список многих из этих аббревиатур и сокращений.

Таблица 1

Список аббревиатур и сокращений

Аббревиатура	Значение
Вп	Бензил
ИМ8О(ДМСО)	Диметил сульфоксид
ϋΜΡ (ДМФ)	диметилформамид
МСРВА	мета-хлорпербензойная кислота
т/ζ	отношение массы к заряду
МС или мс (М8)	масс-спектр
ТНР (ТГФ)	тетрагидрофуран
δ	частей на миллион по отношению к остаточному пику недейтерированного растворителя

Получение соединений

Соединение 1. (2§,3К,4К,5К)-4-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-2-(2,4-бис-(метилтио)имидазо [1,2-ί][ 1,2,4]триазин-7-ил)-3 -фтортетрагидрофуран-2-ол

К смеси 7-бром-2,4-бис-(метилтио)имидазо[1,2-£][1,2,4]триазин (2,5 г, 7,57 ммоль) в ТГФ (30 мл) при -78°С по каплям добавляли пВиЫ (1,6 М в гексане, 6,15 мл, 9,84 ммоль). После перемешивания при

- 16 028928

-78°С в течение 30 мин по каплям добавляли (3К,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3фтордигидрофуран-2(3Н)-он (2,43 г, 8,33 ммоль) в ТГФ (5 мл). После перемешивания при -78°С в течение 3 ч смеси позволяли нагреться до комнатной температуры. Затем смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, а затем нейтрализовали насыщенным ΝΗ₄Ο. Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом. Слои разделяли и объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили над Ν;·ι₂80₂ и концентрировали с получением сырого материала, который очищали флэш-хроматографией с использованием этилацетата/гексанов с получением целевого соединения (28,3К,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-2-(2,4-бис-(метилтио)имидазо[1,2-Г][1,2,4]триазин-7ил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ола (1) (2 г, 48%) в форме желтой пленки МС (т/ζ) 543,2 [М+Н]+.

Соединение 2. 7-((28,3 8,4К,5К)-4-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3 -фтортетрагидрофуран-2-ил)2,4-бис-(метилтио)имидазо[1,2-£][1,2,4]триазин

К раствору (28,3К,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-2-(2,4-бис-(метилтио)имидазо[1,2Г][1,2,4]триазин-7-ил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ола (1) (300 мг, 0,55 ммоль) в дихлорметане (3 мл) при -78°С по каплям добавляли ΒΡ₃·0Εΐ₂ (1,20 мл, 8,81 ммоль), с последующим добавлением Εΐ₃δίΗ (1,52 мл, 8,81 ммоль). Реакционной смеси позволяли нагреться до комнатной температуры и перемешивали ее в течение 2 ч, а затем нейтрализовали насыщенным NаΗС0₃, а затем экстрагировали дихлорметаном. Органические слои отделяли, промывали солевым раствором, сушили над №₂80₄ и концентрировали с получением сырого материала, который очищали флэш-хроматографией с использованием этилацетата/гексанов с получением целевого соединения 7-((28,38,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3фтортетрагидрофуран-2-ил)-2,4-бис-(метилтио)имидазо[1,2-Г][1,2,4]триазина (2) (218 мг, 75%) МС (т/ζ)

527,2 [М+Н]+.

Соединение 3. 7-((28,3 8,4К,5К)-4-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3 -фтортетрагидрофуран-2-ил)2-(метилтио)имидазо [1,2-Г][1,2,4]триазин-4-амин

(2) (3>

7-((28,38,4К,5К)-4-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ил)-2,4-бис-(метилтио)имидазо[1,2-Г][1,2,4]триазин (2) (390 мг, 0,74 ммоль) в жидком аммиаке (120 мл) нагревали при 60°С в стальном баллоне в течение 18 ч. Баллон охлаждали до комнатной температуры и очищали реакционную смесь флэш-хроматографией с использованием этилацетата/гексанов с получением целевого соединения 7-((28,38,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ил)-2-(метилтио)имидазо[1,2-Г][1,2,4]триазин-4-амина (3) (330 мг, 89%). МС (т/ζ): 496,2 [М+Н]+.

Соединение 4. 7-((28,3 8,4К,5К)-4-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3 -фтортетрагидрофуран-2-ил)2-(метилсулъфонил)имидазо [1,2-Г][ 1,2,4]триазин-4-амин

(3> (4)

К раствору 7-((28,38,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ил)-2(метилтио)имидазо[1,2-Г][1,2,4]триазин-4-амин (3) (300 мг, 0,57 ммоль) в дихлорметане (10 мл) при 0°С одной порцией добавляли 3-хлорпербензойную кислоту (МСРВА, 77%) (627 мг, 3,42 ммоль). Реакционной смеси позволяли нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Реакционную смесь нейтрализовали 20% раствором Να8₂0₃ в Н₂0 (15 мл) и оставляли перемешиваться на 20 мин. Слои разделяли, водный раствор экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические слои промывали насыщенным NаΗС0₃ и солевым раствором, а затем сушили над Ν;·ι₂80₂ и концентрировали с получением неочищенной смеси, которую затем очищали путем хроматографии на колонке с силикагелем с использованием этилацетата/дихлорметана с получением целевого продукта 7-((28,38,4К,5К)-4(бензилокси)-5 -(бензилоксиметил)-З -фтортетрагидрофуран-2-ил)-2-(метилсульфонил)имидазо [1,2Г][1,2,4]триазин-4-амина (4) (276 мг, 87%) в форме прозрачного масла. МС (т/ζ): 528,1 [М+Н]+.

- 17 028928

Соединение 5. 7-((28,3§,4К,5К)-4-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2ил)имидазо [1,2-ί][ 1,2,4]триазин-2,4-диамин

1-((28,3§,4К,5К)-4-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ил)-2-(метилсульфонил)имидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-4-амин (4) (276 мг, 0,52 ммоль) в жидком аммиаке (100 мл) нагревали при 110°С в течение 26 ч в стальном баллоне. Баллон охлаждали до комнатной температуры и неочищенную реакционную смесь очищали флэш-хроматографией с этилацетатом/дихлорметаном с получением целевого соединения 1-((28,3§,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2ил)имидазо[1,2-Г|[1,2,4]триазин-2,4-диамина (5) (185 мг, 78%). МС (т/ζ): 465,3 [М+Н]+.

Соединение 6. (28,3§,4К,5К)-5-(2,4-Диаминоимидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3 -ол

мн₂

,ν-Αν

ВПСЧЛМ^О

ю% ра/с, снэсоон

ΝΗ₂

^Ηϋ'Το>^Ν ν^ανη_:

Βηο' Ί=

КТ, в течение ночи

НО Р

(5) (6)

К раствору 7-((28,3§,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2ил)имидазо[1,2-Г][1,2,4]триазин-2,4-диамина (5) (145 мг, 0,31 ммоль) в уксусной кислоте (10 мл) добавляли 10% Ρά/С Оеди55а, типа Е101 ΝΕΛΥ (290 мг). Реакционную атмосферу заменяли на Η₂ (газ) и перемешивали реакционную смесь в течение 18 ч. Катализатор удаляли путем фильтрации и концентрировали смесь при пониженном давлении. Сырой продукт сушили с получением целевого продукта (28, 38,4К,5К)-5-(2,4-диаминоимидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран3-ола (6) (85 мг, 96%) в виде белого твердого вещества. МС (т/ζ): 285,2 [М+Н]+.

Ή ЯМР (400 МГц, СЭ₃0П): δ 7,45 (5, 1Η), 5,44-5,38 (т, 1Η), 5,24-5,11 (ά, 1=22, 1Η), 4,38-4,33(т, 1Η), 3,98 (5, 1Η), 3,91-3,70 (т, 2Η).

¹⁹Ρ (376 МГц, СЭ₃0П): δ (-199,86)-(-200,13) (т).

Соединение 7. 2-Амино-7-(2§,3§,4К,5К)-3-фтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2ил)имидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-4(3Н)-он

К раствору (28,3§,4К,5К)-5-(2,4-диаминоимидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (6) (310 мг, 1,09 ммоль) в 800 мл воды добавляли аденозиндезаминазу IX типа из коровьей селезенки (№ Са5 9026-93-1, 205 мкл). Раствор помещали в водяную баню при 37°С на 16 ч. Раствор концентрировали и кристаллизовали конечное соединение отдельно от примесей, используя воду в качестве кристаллизующего растворителя. Твердые вещества собирали и сушили с получением 2-амино-7-(2§,3§,4К,5К)-3-фтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)имидазо[1,2ЕЩД^триазинЧ^Щ-она (7) (246 мг, 80%) в виде чистого, беловатого твердого вещества. МС (т/ζ): 286,2 [М+Н]+.

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-ά^): δ 11,27 (5, 1Η), 7,41 (5, 1Η), 6,24 (5, 2Η), 5,43-5,42 (т, 1Η), 5,26-5,20 (ά, 1=22,8 Гц, 1Η), 5,09-4,85 (т, 2Η), 4,14-4,09 (т, 1Η), 3,77 (5, 1Η), 3,69-3,51 (т, 2Η).

¹⁹Ρ (376 МГц, ДМСО-ά^: δ (-196,68)-(-196,94) (т).

Соединение 8. ((2К,3К,4К,58)-5-(2-Амино-4-оксо-3,4-дигидроимидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-7-ил)-4фтор-3 -гидрокси-3 -гидрокситетрагидрофуран-2-ил) метилтетраводород трифосфат

2-Амино-7-(28,3§,4К,5К)-3-фтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)имидазо[1,2ЕЩД^триазинЧ^Щ-он (7) (12 мг, 0,042 ммоль) растворяли в триметилфосфате (1 мл) в инертной атмосфере (Ν₂). Добавляли оксихлорид фосфора (58 мг, 0,378 ммоль) добавляли и перемешивали смесь при 0°С в течение 2 ч, и при комнатной температуре в течение 2 ч. Путем мониторинга с использованием аналитической ионообменной колонки определяли время, когда образовывалось > 80% монофосфата.

- 18 028928

Раствор охлаждали до 0°С и добавляли раствор трибутиламина (0,15 мл, 0,63 ммоль) и триэтиламмония фосфата (0,25 г, 0,55 ммоль) в безводном ДМФ (1 мл). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2,5 ч, а затем нейтрализовали путем добавления 1н. раствора триэтиламмония бикарбоната в воде Н₂О (6 мл). Смесь концентрировали при пониженном давлении и перерастворяли остаток в Н₂О. Раствор подвергали ионообменной хроматографии с получением целевого продукта ((2К,3К,4К,5§)-5-(2-амино-4оксо-3,4-дигидроимидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокси-3-гидрокситетрагидрофуран-2ил) метилтетраводорода трифосфата (8) (в форме триэтиламмонийной соли) (11 мг, 28% выход). МС (т/ζ): 526,0 [М+Н]+.

'Н ЯМР (400 МГц, И₂О): δ 7,53 (5, 1Н), 5,43-5,37 (ά, 1=24,8 Гц, 1Н), 5,29-5,15 (ά, 1=55,2, 1Н), 4,523,47 (т, 4Н).

¹⁹Р (376 МГц, И₂О): δ (-197,33)-(-197,60) (т, 1Р).

³¹Р (162 МГц, И₂О) δ (-10,66)-(-10,78) (ά, 1=48,4 Гц, 1Р), (-11,070)-(-11,193) (ά, 1=49,2 Гц, 1Р), (-22,990)-(-23,236) (т, 1Р).

Ионообменная ВЭЖХ: растворитель А: воды; растворитель В: 1 М триэтиламмония бикарбонат. 0-50% в течение 12 мин, затем 100% в течение 5 мин, затем обратно до 0% в течение 5 мин.

Колонка: Июпех, ИИАРас РА-100, 4x250 мм.

Время удерживания=12,04 мин.

Соединение 9. 7-((2§,3§,4К,5К)-4-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2ил)имидазо [1,2-ί][ 1,2,4]триазин-4-амин

νη₂/'Уь

^θη0χΟ>^ΝΝ%02Μβ

ывнер/тнр

νη₂

-78С- кт. 31 час

ΒηΟ Ρ

К раствору 7-((2§,3§,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ил)-2(метилсульфонил)имидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-4-амина (4) (63 мг, 0,12 ммоль) в ТГФ (5 мл) при -78°С по каплям добавляли ЫВНЕ1₃ (1,0 М в ТГФ, 4,78 мл, 4,78 ммоль). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали при комнатной температуре в течение 31 ч. Реакционную смесь нейтрализовали ледяной водой и экстрагировали этилацетатом. Органический раствор промывали солевым раствором и концентрировали с получением сырой смеси, которую растворяли в СН₃ОН и концентрировали под вакуумом (3х). Неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле с использованием этилацетата/ дихлорметана, в результате получали целевой продукт 7-((2§,3§,4К,5К)-4-(бензилокси)5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ил)имидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-4-амин (9) (50 мг, 95% выход). МС (т/ζ): [М+Н]+ 450,3.

Соединение 10. (2§,3§,4К,5К)-5-(4-Аминоимидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3 -ол

К раствору 7-((2§,3§,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2ил)имидазо[1,2-£|[1,2,4]триазин-4-амина (9) (50 мг, 0,11 ммоль) в уксусной кислоте (5 мл) добавляли 10% Рά/С (100 мг). Атмосферу в реакционных сосудах заменяли на водород и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали через целит и промывали СН₃ОН. Фильтрат концентрировали с получением сырой смеси, которую очищали колоночной хроматографией на силикагеле с использованием СН₃ОН/дихлорметана, в результате получали целевой продукт (2§,3§,4К,5К)-5-(4-аминоимидазо[1,2-£][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол (10) в виде белого твердого вещества (23 мг, 77% выход). МС (т/ζ): 270,2 [М+Н]+.

'Н ЯМР (400 МГц, ДМСОй₆): δ 8.22 (ά, 1=26 Гц, 2 Н), 8,07 (5, 1Н), 7,67 (5, 1Н), 5,50-5,48 (ά, 1=6,4, 1Н), 5,42-5,36 (т, 1Н), 5,19-5,03 (т, 1Н), 4,88-4,85 (т, 1Н), 4,19-4,11 (т, 1Н), 3,83-3,81 (т, 1Н), 3,72-3,67 (т, 1Н), 3,54-3,50 (т, 1Н).

¹⁹Р (376 МГц, СИ₃ОИ): δ (-196,69)-(-196,95) (т).

Соединение 11. 7-((2§,3§,4К,5К)-4-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2ил)-2-фторимидазо [1,2-ί][1,2,4]триазин-4-амин

(5) |11)

7-((2§,3§,4К,5К)-4-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ил)имидазо[1,21][1,2,4]триазин-2,4-диамин (5) (140 мг, 0,30 ммоль) в 4 мл 50% фтороводорода/пиридин перемешивали в

- 19 028928

ванне при -10°С и добавляли 45 мкл (0,38 ммоль) ΐ-бутилнитрил. Реакционную смесь перемешивали при низкой температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь нейтрализовали путем добавления 50 мл Н₂О и экстрагировали водный слой 2x50 мл дихлорметана. Объединенные органические вещества сушили над №-1₂8О₄ и концентрировали. Остаток хроматографировали на 6 г силикагеля с получением целевого соединения 7-((28,38,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ил)-2-фторимидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-4-амина (11) (50 мг, 36%). МС (т/ζ): 468,2 [М+Н]+.

¹Н ЯМР (400 МГц, СЭС1₃): 7,60 (5, 1Н), 7,3-7,2 (Ьт, 10Н), 7,14 (Ьз, 1Н), 6,37 (Ьз, 1Н), 5,46-5,48 (бб, 1=23,2, 2,4 Гц, 1Н), 5,29-5,15 (т, 1Н), 4,72 (т, 1Н), 4,56-4,52 (т, 2Н), 4,29 (т, 2Н), 3,83-3,81 (т, 1Н), 3,653,63 (т, 1Н).

¹⁹Р (376 МГц, СЭС1₃): δ -69,1 (з), (-197,7)-(-198,0) (т).

Соединение 12. (2К,3К,4К,58)-5-(4-Амино-2-фторимидазо[1,2-1] [1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3 -ол

К раствору 7-((28,38,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2ил)имидазо[1,2-1|[1,2,4]триазин-4-амина (11) (50 мг, 0,11 ммоль) в уксусной кислоте (8 мл) добавляли 10% Рб/С (100 мг). Атмосферу в реакционном сосуде заменяли на водород и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали через целит и промывали уксусной кислотой, а затем СН₃ОН. Фильтрат концентрировали с получением сырой смеси, которую очищали обращенно-фазовой ВЭЖХ с получением целевого продукта (2Р.3Р.4Р.58)-5-(4-амино2-фторимидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (12) в виде белого твердого вещества (26 мг, 84%). МС (т/ζ): 288,1 [М+Н]+.

'Н ЯМР (400 МГц, СП₃ОЭ): δ 7,66 (5, 1Н), 5,47-5,41(бб, 1=23,6, 2,4 Гц, 1Н), 5,21-5,06 (т, 1Н), 4,354,27 (т, 1Н), 3,93 (Ьт, 1Н), 3,88 (т, 1Н), 3,68 (т, 1Н).

¹⁹Р (376 МГц, СП₃ОЭ): δ -72,15(5), (-199,39)-(-196,69) (т).

Соединение 13. 7 -Бром-4-этокси-2-(метилтио)имидазо [1,2-ί][1,2,4]триазин

К смеси 7-бром-2,4-бис-(метилтио)имидазо[1,2-1][1,2,4]триазина (1,0 г, 3,45 ммоль) в ЕЮН (25 мл) при комнатной температуре добавляли ЫаОЕ! (21% в ЕЮН, 1,28 мл, 3,45 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 ч реакцию нейтрализовали уксусной кислотой (АсОН, 1 мл). Растворители удаляли при пониженном давлении и разделяли смесь между СН₂С1₂ и 1/2 насыщенным солевым раствором. Органические вещества отделяли, сушили над Ыа₂8О₄, удаляли твердые вещества путем фильтрации и удаляли растворитель при пониженном давлении. Сырой материал очищали флэшхроматографией с использованием этилацетата/гексанов с получением целевого соединения 7-бром-4этокси-2-(метилтио)имидазо[1,2-1][1,2,4]триазина (13) (791 мг, 79%) в виде желтой пленки. МС (т/ζ): 288,9/290,8 [М+Н]+.

Соединение 14. (28,3К,4К,5К)-4-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-2-(4-этокси-2-(метилтио)имидазо [1,2-ί][ 1,2,4]триазин-7-ил)-3 -фтортетрагидрофуран-2-ол

К смеси 7-бром-4-этокси-2-(метилтио)имидазо[1,2-£][1,2,4]триазина (13) (917 мг, 3,17 ммоль) в ТГФ (15 мл) при -78°С добавляли ЬаС1₃-2 ЫС1 (0,6М в ТГФ, 5,28 мл, 3,17 ммоль), а затем по каплям добавляли иВиЫ (2,5 М в гексане, 1,27 мл, 3,17 ммоль). После перемешивания при -78°С в течение 30 мин по каплям добавляли (3К,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтордигидрофуран-2(3Н)-он (805 мг, 2,44 ммоль) в ТГФ (10 мл). После того как смесь перемешивали при -78°С в течение 30 мин и позволяли ей нагреться до комнатной температуры, смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, а затем нейтрализовали уксусной кислотой (АсОН). Реакционную смесь экстрагировали этилацетатом. Слои разделяли, объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили над Ыа₂8О₄ и концентрировали с получением сырого материала, который очищали флэш-хроматографией с использованием этилацетата/гексанов, с получением целевого соединения (28,3К,4К,5К)-4-(бензилокси)5-(бензилоксиметил)-2-(4-этокси-2-(метилтио)имидазо[1,2-1] [ 1,2,4]триазин-7-ил)-3 -фтортетрагидрофуран-2-ола (14) (244 мг, 19%) в форме желтой пленки. МС (т/ζ) 541,1 [М+Н]+.

- 20 028928

Соединение 15. 7-((2§,3§,4К,5К)-4-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2ил)-4-этокси-2-(метилтио)имидазо [1,2-ί][1,2,4]триазин

К раствору (2§,3К,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-2-(4-этокси-2-(метилтио)имидазо[1,2-£][1,2,4]триазин-7-ил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ола (X) (244 мг, 0,45 ммоль) в СН₂С1₂ (5 мл) при 0°С по каплям добавляли ВР₃ 0Εΐ₂ (900 мкл, 3,5 ммоль) с последующим добавлением Εΐ₃δίΗ (600 мкл, 3,5 ммоль). Реакционной смеси позволяли нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 3 ч. Реакционную смесь нейтрализовали насыщенным NаΗСО₃ и экстрагировали СН₂С1₂. Органические слои отделяли, промывали солевым раствором, сушили над №-ь8О₄ и концентрировали с получением сырого материала, который очищали флэш-хроматографией с использованием этилацетата/гексанов, с получением целевого соединения 7-((2§,3§,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ил)-4-этокси-2-(метилтио)имидазо[1,2-£][1,2,4]триазина (15) (107 мг, 46%). МС (т/ζ) 525,1 [М+Н]+.

Соединение 16. 7-((2§,3§,4К,5К)-4-(Бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2ил)-4-этокси-2-(метилсульфонил)имидазо [1,2-ί][ 1,2,4]триазин

К раствору 7-((2§,3§,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ил)-4этокси-2-(метилтио)имидазо[1,2-£][1,2,4]триазина (15) (107 мг, 0,204 ммоль) в СН₂С1₂ (3 мл) при комнатной температуре одной порцией добавляли 3-хлорпербензойную кислоту (МСРВА, 77%) (100 мг, 0,443 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакцию нейтрализовали 20% раствором №8₂О₃ в Н₂О (5 мл) и оставляли перемешиваться в течение 20 мин. Слои разделяли, водный раствор экстрагировали дихлорметаном СН₂С1₂. Объединенные органические слои промывали насыщенным NаΗСО₃, солевым раствором, сушили над №₂8О₄ и концентрировали с получением сырого 7-((2§,3§,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ил)-4-этокси-2(метилсульфонил)имидазо[1,2-£][1,2,4]триазин (16), который использовали без очистки. МС (т/ζ): 557,1 [М+Н]+.

Соединение 17. 2-Азидо-7-((2§,3§,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ил)-4-этоксиимидазо [1,2-ί][ 1,2,4]триазин

К раствору №% (66 мг, 1,01 ммоль) в ДМСО (5 мл) одной порцией добавляли 1-((2§,3§,4К,5К)-4(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ил)-4-этокси-2-(метилсульфонил)имидазо[1,2-£][1,2,4]триазин (16) (113 мг, 0,203 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Смесь разделяли между ЕЮЛс/Н₂О. Органические вещества отделяли и сушили над №₂8О₄, и очищали хроматографией на силикагеле с использованием ЕЮЛс/гексанов, в результате получали 2-азидо-7-((2§,3§,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2-ил)-4этоксиимидазо[1,2-£][1,2,4]триазин (17) (93 мг, 88%) в виде беловатого твердого вещества. МС (т/ζ): 520,05 [М+Н]+.

Соединение 18. (2К,3К,4К,5§)-5-(2-Амино-4-этоксиимидазо[1,2-£][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3 -ол

Раствор 2-азидо-7-((2§,3§,4К,5К)-4-(бензилокси)-5-(бензилоксиметил)-3-фтортетрагидрофуран-2ил)-4-этоксиимидазо[1,2-£][1,2,4]триазина (17) (93 мг, 0,18 ммоль) в СН₃ОН (5 мл) продували аргоном и добавляли 10% Р4/С (100 мг). Из реакционного сосуда откачивали атмосферу и повторно заполняли его Н₂ трижды. Затем реакционную смесь оставляли перемешиваться в атмосфере в течение 16 ч. Твердые вещества отфильтровывали, и удаляли органические вещества при пониженном давлении с получением сырого материала, который очищали методом ВЭЖХ с получением (2К,3К,4К,5§)-5-(2-амино-4- 21 028928

этоксиимидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола (18) (27 мг, 48%) в виде твердого вещества белого цвета. МС (т/ζ): 314,10 [М+Н]+.

Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆): δ 7.526 (5, 1Н), 8,07 (5, 1Н), 6,55 (5, 2 Н), 5,43-5,41 (б, 1=6,46 Гц, 1Н), 5,33-5,27 (бб, 1=2,25 и 22,69 Гц, 1Н), 5,11-4,96 (т, 1Н), 4,84 (1, 1=5,58 Гц, 1Н), 4,52-4,47 (д, 1=7,04 Гц, 2Н), 4,17-4,07 (т, 1Н), 3,78-3,76 (т, 1Н), 3,69-3,65 (т, 1Н), 3,511-3,45 (т, 1Н), 1,37 (1, 1=7,04 Гц, 3Н).

¹⁹Р (376 МГц, ДМСО-б₆): δ (-196,79)-(-197,05) (т).

Соединение 19. (2К,3К,4К,5§)-5-(2-Амино-4-метоксиимидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-2(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3 -ол

(2К,3К,4К,5§)-5-(2-Амино-4-метоксиимидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол (19) готовили способом, прямо аналогичным способу, использованному для получения (2К,3К,4К,5§)-5-(2-амино-4-этоксиимидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ола, за тем исключением, что использовали ЧаОМе в МеОН вместо ЧаОЕ1 в Е1ОН на первом этапе синтеза. МС (т/ζ): 300,18 [М+Н]+.

Ή ЯМР (400 МГц, СОзОО): δ 7,56 (5, 1Н), 5,46 (бб, 1=24, 2,4 Гц, 1Н), 5,15 (ббб, 1=54,8, 4,4, 2,4 Гц, 1Н), 4,34 (ббб, 1=4,4, 8, 20,4 Гц, 1Н), 4,15 (5, 3Н), 3,97 (т, 1Н), 3,91 (бб, 1=2,4, 12,4 Гц, 1Н), 3,72 (бб, 1=4,4, 12 Гц, 1Н).

¹⁹Р (376 МГц, СО₃ОП): δ (-198,98)-(-199,25) (т).

Противовирусные тесты.

Тест на ингибирование РНК-полимеразы (Κ.'₅₀).

Очищенный вирус гриппа А/РК/8/34 (Н1Ч1) получили в Абуапееб В1о1есйпо1од1е5 Иге. (Колумбия, Мерилэнд, США) в форме суспензии в ФБР, Вирионы разрушали путем обработки таким же объемом 2% буфера Тгбоп Х-100 в течение 30 мин при комнатной температуре в буфере, содержащем 100 мМ Ττΐ5НС1, рН 8, 200 мМ КС1, 3 мМ дитиотриэтола [ΌΤΤ], 10% глицерина, 10 мМ М§С1₂, 2 ед/мл ингибитора рибонуклеазы КЧа5ш и 2 мг/мл лизолицетина V типа (81дта, Сент-Луис, Миссури, США). Лизат вируса хранили при -80°С в аликвотах.

Концентрации относятся к конечным концентрациям, если не указано другое. Готовили 3-кратные серийные разведения нуклеотидных аналогов-ингибиторов в воде и добавляли в реакционную смесь, содержащую 10% лизат вируса (об./об.), 100 мМ ТП5-НС1 (рН 8,0), 100 мМ КС1, 1 мМ ΌΤΤ, 10% глицерин, 0,25% ^^-101 (восстановленный), 5 мМ М§С1₂, 0,4 ед./мл ΒΝη5ηι и 200 мкМ динуклеотидного праймера АрС (ΤηΜηΓ Сан-Диего, Калифорния, США). Реакции инициировали путем добавления субстратной смеси рибонуклеотидтрифосфата (ΝΤΡ), содержащей один а-³³Р-меченый ΝΤΡ и 100 мкМ других трех природных ΝΤΡ (Ретк1пЕ1тет, Шелтон, Коннектикут, США). Радиометка, используемая для каждого теста, соответствовали классу проверяемого нуклеотидного аналога. Концентрации для ограничения природных ΝΤΡ составляют 20, 10, 2 и 1 мкМ для ΛΤΡ, СТР, υΤΡ и СТР соответственно. Молярные отношения для ΝΤΡ для радиометки:радиомеченому ΝΤΡ лежали в диапазоне 100-400:1.

Реакционные смеси инкубировали при 30°С в течение 90 мин, а затем наносили пятнами на фильтровальную бумагу. Фильтры сушили, промывали 0,125 М №₂НРО₄ (3х), водой (1 х) и Е1ОН (1 х) и сушили на воздухе, а затем обрабатывали люминофором ΤурЬооη и измеряли радиоактивность на устройстве ΤурЬооп ГОю (СЕ Неа11Ьсаге, Пискатавэй, Нью-Джерси, США). Рассчитывали значения Κ.’₅₀ для ингибиторов путем аппропксимации данных в программе СтарЬРаб Рг15т сигмоидальной функцией доза-ответ с переменным наклоном, при заданных значениях Утах и Утт 100% и 0%. Ю₅₀ для ((2К,3К,4К,5§)-5-(2амино-4-оксо-3,4-дигидроимидазо[1,2-1][1,2,4]триазин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокси-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метилтетраводорода трифосфата (соединение 8) оказалось равным 2,8 мкМ.

Анализ инфекционности с нормальными клетками эпителия бронхов/трахеи человека (ЕС₅₀).

Нормальные клетки эпителия бронхов/трахеи человека (Ьо^а, Базель, Швейцария) высевали в 384луночные планшеты при плотности 4000 клеток на лунку в среде ВЕСМ, дополненной факторами роста (Ьоща, Базель, Швейцария). На следующий день среду удаляли, а клетки трижды промывали 100 мкл среды КРМН1% БСА (КРМГВЗА). Затем к клеткам добавляли 30 мкл РРМГВЗА. Готовили 3-кратные серийные разведения соединений в ДМСО и по 0,4 мкл разведений соединения переносили на чашки. Вирус гриппа А НК/8/68 (Абуапееб Вю1есйпо1оду Ше., Колумбия, Мэриленд, США, 13,5 МОЦ, РС/1/73 (АТСС, Манассас, Вирджиния, США, 0,3 МОЦ и вирус гриппа В В/Ьее/40 ((АТСС, Манассас, Вирджиния, США, 10 МОЦ добавляли к клеткам в 10 мкл среды РРМГВЗ. дополненной 8 мкг/мл трипсина (ХУогбйпдЮп. Лейквуд, Нью-Джерси, США). После инкубирования в течение 5 дней к клеткам добавляли 40 мкл буфера, содержащего 66 мМ Ме5 рН 6,5, 8 мМ СаС1₂, 0,5% ΝΡ-40 и 100 мкМ субстрата нейрамидазы (2'-(4-метилумбеллиферил)-а-О-Ы-ацетилнейраминовой кислоты натриевой соли гидрат (§1§та А1бпс1г Сент-Луис, Миссури, США). Флюоресценцию продукта гидролиза считывали с использованием

- 22 028928

возбуждения на длине волны 360 нм и испускания на длине волны 450 нм после инкубации в течение 1 ч при 37°С. Значения ЕС₅₀ рассчитывали с использованием нелинейной регрессии нескольких наборов данных. В таблице ниже объединены значения ЕС₅₀, объединенные в этом анализе.

Соединение	ЕС;о в отношении вируса гриппа А РС/1/73	ЕС'и в отношении вируса гриппа В Ьее/40
19	30 мкМ	36 мкМ
18	>200 мкМ	>200 мкМ
12	>100 мкМ	>100 мкМ
10	0,9 мкМ	0,9 мкМ
7	27 мкМ	37 мкМ

21 мкМ

51 мкМ

Хотя данное изобретение описано со ссылкой на различные конкретные и предпочтительные варианты реализации и методики, следует понимать, что это описание не предназначено для ограничения изобретения указанными вариантами реализации. Специалист поймет, что в рамках сущности и объема изобретения могут быть реализованы многочисленные варианты и модификации. Предполагается, что изобретение охватывает все альтернативы, модификации и эквиваленты, которые могут быть включены в объем настоящего изобретения.

1. Соединение формулы I

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

или его фармацевтически приемлемая соль;

где К¹ представляет собой Н;

К² представляет собой ОН или О-бензил;

К³ представляет собой Р;

К⁴ представляет собой Н, =О, ОК^а, И(К^а)2, Ν3, СИ, 8(О)иК^а, галоген или (С1-С8)галогеналкил; К⁵ представляет собой Н, ОК^а, И(К^а)₂, Ν₃, СИ, 8(О)_иК^а, галоген или (Ц-СДгалогеналкил;

К^а независимо представляет собой Н или (С1-С₆)алкил;

каждый и равен 0, 1 или 2;

К⁶ представляет собой Н, бензил или

Й

ΙΛ/¹^ »

где V² представляет собой ОН и XV¹ представляет собой группу формулы 1а

где каждый Υ представляет собой О; М2 равен 0, 1 или 2; каждый К^х представляет собой Н и К⁷ представляет собой Н.
2. Соединение по п.1 формулы II

- 23 028928

или его фармацевтически приемлемая соль.
3. Соединение по п.1, где К² представляет собой ОН.
4. Соединение по п.1, где К⁴ представляет собой ΝΗ2 и К⁵ представляет собой Н, Р, С1, Вг, Ν3, ΟΝ, СР₃, ΝΗ₂, 8Ме или 8О₂Ме.
5. Соединение по п.1, где К⁵ представляет собой ΝΗ2 и К⁴ представляет собой =О, ОН, ОМе, С1, Вг, I, ΝΗ2, NΗМе или 8Ме.
6. Соединение по п.1, где К⁴ выбран из группы, состоящей из Н, ΝΗ2, =О, NΗМе, ОН, ОМе, С1, Вг, I, 8Ме, Р, Ν3, СН СР3 и ЗО2Ме, и К⁵ выбран из группы, состоящей из Н, ΝΗ2, NΗМе, ОН, ОМе, С1, Вг, I, 8Ме, Р, Ν₃, СН, СР₃ и ЗО₂Ме.
7. Соединение по п.1, где К⁵ представляет собой Н или ΝΗ₂.
8. Соединение по п.1, где К⁴ представляет собой =О или ΝΗ₂.
9. Соединение по п.1, где К⁶ представляет собой Н.
10. Соединение по п.1, где К⁴ представляет собой ΝΗ2, Η или =О, К⁵ представляет собой ΝΗ2 или Н и К⁶ и К⁷ являются атомами водорода.
11. Соединение по п.1, где К² представляет собой О-бензил или ОН, К³ представляет собой Р, К⁴представляет собой 8Ме, ΝΗ2 или =О, К⁵ представляет собой 8Ме, ЗО2Ме, Η или ΝΗ₂, К⁶ представляет собой бензил или

ίί I ,____1

*

V/ ;

где А² представляет собой ОН и А¹ представляет собой группу формулы 1а

где Υ представляет собой О;

М2 равен 2; и

каждый К^х представляет собой Н; и

К⁷ представляет собой Н.
12. Соединение, выбранное из группы, состоящей из

- 24 028928

или его фармацевтически приемлемая соль.
13. Фармацевтическая композиция для лечения инфекции, вызванной вирусом ОйЬотухоуиМае, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество.
14. Способ лечения ортомиксовирусной инфекции у нуждающегося в этом млекопитающего, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-12.
15. Способ лечения ортомиксовирусной инфекции у нуждающегося в этом млекопитающего, включающий введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.13.
16. Способ по п.14 или 15, где ортомиксовирусная инфекция вызвана вирусом гриппа А.
17. Способ по п.14 или 15, где ортомиксовирусная инфекция вызвана вирусом гриппа В.
18. Способ по п.14 или 15, где ортомиксовирусная инфекция вызвана вирусом гриппа С.
19. Способ по п.14 или 15, где осуществляют ингибирование РНК-зависимой РНК-полимеразы вируса ОпЪотухоушйае.