ES2709071T3 - Análogos de carba-nucleósido 2'-sustituidos para tratamiento antiviral - Google Patents

Abstract

Un compuesto de Fórmula III:**Fórmula** en la que R8 es NH2, OMe, OCH2CH3 o =O; y R9 es NH2, H o F; o una sal, solvato o éster farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCION

Analogos de carba-nucleosido 2'-sustituidos para tratamiento antiviral

CAMPO DE LA INVENCION

La invencion se refiere de manera general a compuestos con actividad antiviral, mas particularmente nucleosidos activos contra infecciones por el virus Orthomyxoviridae, asf como a composiciones farmaceuticas que comprenden los mismos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION

Los virus de la gripe de la familia Orthomyxoviridae que pertenecen a los generos A y B son responsables de las epidemias de gripe estacional cada ano, que provocan infecciones respiratorias contagiosas agudas. Los ninos, los ancianos y las personas con enfermedades cronicas tienen un alto riesgo de desarrollar complicaciones graves que llevan a altas tasas de morbilidad y mortalidad (Memoli et al., Drug Discovery Today 2008, 13, 590-595). Entre los tres generos de gripe, los virus de tipo A son los patogenos humanos mas virulentos que provocan la enfermedad mas grave, pueden transmitirse a otras especies y dar lugar a pandemias de gripe humana. El reciente brote de gripe humana de la cepa agresiva A/H1N1 porcina en 2009 ha enfatizado la necesidad de nuevos agentes terapeuticos antivirales. Aunque los programas de vacunacion anuales se usan actualmente para proteger a las poblaciones de la infeccion por gripe, estos programas deben anticipar las cepas de virus que prevaleceran durante los brotes estacionales para ser eficaces y no abordan el problema de pandemias de gripe repentinas e imprevistas. De nuevo, el reciente brote de gripe humana de la cepa agresiva A/H1N1 porcina en 2009 es un ejemplo de este problema.

Actualmente hay varias terapias contra la gripe y otras estan en desarrollo (Hedlund et al., Viruses 2010, 2, 1766-1781). Entre las terapias contra la gripe actualmente disponibles estan los bloqueadores de los canales ionicos M2, amantadina y rimantadina, y los inhibidores de la neuraminidasa, oseltamivir y zanamivir. Sin embargo, se ha desarrollado resistencia a todos estos medicamentos. Por lo tanto, hay una necesidad continua de nuevos agentes terapeuticos contra la gripe.

Ahora hay en desarrollo nuevos agentes contra la gripe prometedores con nuevos mecanismos de accion. Entre estos nuevos agentes esta el favipiravir, que se dirige a la replicacion del gen viral mediante inhibiendo la ARN polimerasa de la gripe. Sin embargo, sigue siendo incierto si este candidato a farmaco en investigacion estara disponible para terapia. Por lo tanto, existe una necesidad continua de desarrollar compuestos adicionales que inhiban la gripe a traves de este mecanismo de accion.

Ciertos ribosidos de las nucleobases pirrolo[1,2-f][1,2,4] triazina, imidazo[1,5-f][1,2,4] riazina, imidazo[1,2-f][1, 2,4]triazina, y [1,2,4]triazolo[4,3-f][1,2,4]triazina se han descrito en Carbohydrate Research 2001, 331(1), 77-82 ; Nucleosides & Nucleotides 1996, 15(1-3), 793-807 ; Tetrahedron Letters 1994, 35(30), 5339-42 ; Heterocycles 1992, 34(3), 569-74; J. Chem. Soc. Perkin Trans. 11985, 3, 621-30 ; J. Chem. Soc. Perkin Trans. 11984, 2, 229-38 ; WO 2000056734; Organic Letters 2001, 3 (6), 839-842; J. Chem. Soc. Perkin Trans. 11999, 20, 2929-2936 ; y J. Med. Chem. 1986, 29 (11), 2231-5 . Sin embargo, estos compuestos no se han descrito como utiles para el tratamiento de infecciones por Orthomyxoviridae .

Los ribosidos de nucleobases de pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazinilo, imidazo[1,5-f][1,2,4]triazinilo, imidazo[1,2-f][1,2,4]]triazinilo, y [1,2,4]triazolo[4,3-f][1,2,4]triazinil con actividad antiviral, anti-HCV y anti-RdRp se han divulgado por Babu, WO2008/089105 y WO2008/141079, Cho et al., WO2009/132123 y Francom et al. WO2010/002877. Butler et al., WO2009/132135, divulga nucleosidos de pirrolo[1,2-f][1,2,4]triazinilo, imidazo[1,5-f][1,2,4]triazinilo, imidazo[1,2-f][1,2,4]triazinilo, y [1,2,4]triazolo[4,3-f][1,2,4]triazinil antivirales en los que la posicion 1' del azucar del nucleosido esta sustituida con un grupo ciano o metilo. Sin embargo, no se ha divulgado la eficacia de estos compuestos para el tratamiento de las infecciones por Orthomyxoviridae.

SUMARIO DE LA INVENCION

En la presente se proporcionan compuestos de Formula III que inhiben los virus de la familia Orthomyxoviridae . La invencion tambien comprende compuestos de Formula III que inhiben las polimerasas del acido nucleico vmcas, particularmente la ARN polimerasa dependiente del ARN de Orthomyxoviridae (RdRp), en lugar de polimerasas de acido nucleico celular. Los compuestos de Formula I son utiles para tratar infecciones por Orthomyxoviridae en humanos y otros animales.

La primera realizacion de la invencion esta dirigida a un compuesto de Formula IIII:

en la que

R8 es NH2, OMe, OCH2CH3 o =O; y

R9 es NH2, H o F;

o una sal, solvato o ester farmaceuticamente aceptable del mismo.

La segunda realizacion de la invencion esta dirigida a una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de Formula III, como se define en la primera realizacion de la invencion, y un portador o excipiente farmaceuticamente aceptable. En una cierta realizacion del mismo, la composicion farmaceutica comprende ademas por lo menos un agente terapeutico adicional.

En otra realizacion, el por lo menos un agente terapeutico adicional se selecciona del grupo que consiste de un corticosteroide, un modulador de transduccion de senales antiinflamatorias, un broncodilatador agonista p2-adrenorreceptor, un anticolinergico, un agente mucolttico, solucion salina hipertonica, un agente que inhibe la migracion de celulas proinflamatorias al sitio de la infeccion, y mezclas de los mismos. En ciertas realizaciones, el agente terapeutico adicional es un inhibidor de la hemaglutinina viral, un inhibidor de la neuramidasa viral, un inhibidor del canal de iones M2, un inhibidor de la ARN polimerasa dependiente del ARN de Orthomyxoviridae o una sialidasa. En otra realizacion, el agente terapeutico adicional se selecciona del grupo que consiste de ribavirin, oseltamivir, zanamivir, laninamivir, peramivir, amantadina, rimantadina, CS-8958, favipiravir, AVI-7100, inhibidor de la proteasa alfa-1 y DAS 181.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION

La primera realizacion de la presente invencion esta dirigida a un compuesto de Formula III:

en la que

R8 es NH2, OMe, OCH2CH3 o =O; y

R9 es NH2, H o F;

o una sal, solvato o ester farmaceuticamente aceptable del mismo.

A menos que se indique lo contrario, los siguientes terminos y frases como se usan en la presente se pretende que tengan los siguientes significados.

Cuando se usan nombres comerciales en la presente, los solicitantes pretenden incluir independientemente el producto de nombre comercial y el ingrediente(s) farmaceutico activo del producto de nombre comercial.

"Alquilo" es un hidrocarburo que contiene atomos de carbono normales, secundarios, terciarios o dclicos. Por ejemplo, un grupo alquilo que puede tener de 1 a 20 atomos de carbono (es decir, alquilo C1-C20), de 1 a 8 atomos de carbono (es decir, alquilo C-i-Cs), o de 1 a 6 atomos de carbono (es decir, alquilo C1-C6). Los ejemplos de grupos alquilo adecuados incluyen, pero no estan limitados a, metilo (Me,-CH3), etilo (Et,-CH2CH3), 1-propilo (n-Pr, npropilo,-CH2CH2CH3), 2-propilo (i-Pr, i-propilo,-CH(CH3)2), ciclopropilo (c-propilo, cPr), 1-butilo (n-Bu, n-butilo,-CH2CH2CH2CH3), 2-metil-1 -propilo (i-Bu, i-butilo,-CH2CH(CH3)2), 2-butilo (s-Bu, s-butilo,-CH(CH3)CH2CH3), 2-metil-2-propilo (t-Bu, t-butilo,-C(CH³)³), 1-pentilo (n-pentilo,-CH²CH²CH²CH²CH³), 2-pentilo (-CH(CH³)CH²CH²CH³), 3-pentilo (-CH(CH2CH3_)2), 2-metil-2-butilo (-C(CH3)2CH2CH3), 3-metil-2-butil (-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-metil-1-butilo (-CH2CH2CH(CH3)2), 2-metil-1 -butilo (-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-hexilo (-CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-hexilo (-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-hexilo (-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-metil-2-pentilo (-C(CH3)2CH2CH2CH 3), 3-metil-2-pentilo (-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-metil-2-pentilo (-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-metil-3-pentilo (-C(CH3)(CH2CH3)2), 2 metil-3-pentilo (-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-dimetil-2-butilo (-C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-dimetil-2-butilo (-CH(CH³)C(CH³)³, y octilo (-(CH²)^tCH³).

"Alquenilo" es un hidrocarburo que contiene atomos de carbono normales, secundarios, terciarios o dclicos con por lo menos un sitio de insaturacion, es decir, un enlace doble sp2, carbono-carbono. Por ejemplo, un grupo alquenilo puede tener de 2 a 20 atomos de carbono (es decir, alquenilo C2-C20), de 2 a 8 atomos de carbono (es decir, alquenilo C2-Ca), o 2 a 6 atomos de carbono (es decir, alquenilo C2-C6). Los ejemplos de grupos alquenilo adecuados incluyen, pero no estan limitados a, etileno o vinilo (-CH=CH2), alilo (-CH2CH=CH2), ciclopentenilo (-C5H7), y 5-hexenilo (-CH2CH2CH2CH2CH=CH2).

"Alquinilo" es un hidrocarburo que contiene atomos de carbono normales, secundarios, terciarios o dclicos con por lo menos un sitio de insaturacion, es decir, un enlace triple sp carbono-carbono. Por ejemplo, un grupo alquinilo puede tener de 2 a 20 atomos de carbono (es decir, alquinilo C2-C20), de 2 a 8 atomos de carbono (es decir, alquino C2-Ca), o de 2 a 6 atomos de carbono (es decir, alquinilo C2-C6). Los ejemplos de grupos alquinilo adecuados incluyen, pero no estan limitados a, acetilenico (-CECH), propargilo (-CH2CECH), y similares.

"Arilo" significa un radical hidrocarburo aromatico derivado de la eliminacion de un atomo de hidrogeno de un unico atomo de carbono de un sistema de anillo aromatico parental. Por ejemplo, un grupo arilo puede tener de 6 a 20 atomos de carbono, de 6 a 14 atomos de carbono, o de 6 a 10 atomos de carbono. Los grupos arilo tfpicos incluyen, pero no estan limitados a, radicales derivados de benceno (por ejemplo, fenilo), benceno sustituido, naftaleno, antraceno, bifenilo y similares.

"Arilalquilo" se refiere a un radical alquilo adclico en el que uno de los atomos de hidrogeno unidos a un atomo de carbono, tipicamente un atomo de carbono terminal o sp³, se reemplaza con un radical arilo. Los grupos arilalquilo tfpicos incluyen, pero no estan limitados a, bencilo, 2-feniletan-1-ilo, naftilmetilo, 2-naftiletan-1-ilo, naftobencilo, 2-naftofeniletan-1-ilo y similares. El grupo arilalquilo puede comprender de 7 a 20 atomos de carbono, por ejemplo, la fraccion alquilo es de 1 a 6 atomos de carbono y la fraccion arilo es de 6 a 14 atomos de carbono.

"Carbociclo" o "carbociclilo" se refiere a un anillo saturado (es decir, cicloalquilo), parcialmente insaturado (por ejemplo, cicloalquenilo, cicloalcadienilo, etc.) o aromatico que tiene de 3 a 7 atomos de carbono como un monociclo, de 7 a 12 atomos de carbono como un biciclo, y hasta aproximadamente 20 atomos de carbono como un policiclo. Los carbociclos monodclicos tienen de 3 a 7 atomos del anillo, aun mas tipicamente 5 o 6 atomos del anillo. Los carbociclos bidclicos tienen de 7 a 12 atomos del anillo, por ejemplo, dispuestos como un sistema biciclo [4,5], [5,5], [5,6] o [6,6], o 9 o 10 atomos del anillo dispuestos como un sistema biciclo [5,6] o [6,6], o anillos espiro fusionados. Ejemplos no limitativos de carbociclos monodclicos incluyen ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, 1-ciclopent-1-enilo, 1-ciclopent-2-enilo, 1-ciclopent-3-enilo, ciclohexilo, 1-ciclohex-1-enilo, 1-ciclohex-2-enilo, 1-ciclohex-3-enilo y fenilo. Ejemplos no limitativos de carbociclos biciclo incluyen naftilo, tetrahidronaftaleno, y decalina.

"Haloalquilo" es un grupo alquilo, como se ha definido anteriormente, en el que uno o mas atomos de hidrogeno del grupo alquilo se reemplazan con un atomo de halogeno. La porcion alquilo de un grupo haloalquilo puede tener de 1 a 20 atomos de carbono (es decir, haloalquilo C1-C20), de 1 a 12 atomos de carbono (es decir, haloalquilo C1-C12), o de 1 a 6 atomos de carbono (es decir, alquilo C1-C6). Los ejemplos de grupos haloalquilo adecuados incluyen, pero no estan limitados a, -CF3, -CHF2, -CFH2, -CH2CF3, y similares.

"Heterociclo" o "heterociclilo" como se usa en la presente incluye a modo de ejemplo y no de limitacion los heterociclos descritos en Paquette, Leo A.; Principles of Modern Heterocyclic Chemistry (W.A. Benjamin, Nueva York, 1968), particularmente los Capftulos 1, 3, 4, 6, 7 y 9; The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A Series of Monographs" (John Wiley & Sons, Nueva York, 1950 hasta la actualidad), en particular, los Volumenes 13, 14, 16, 19 y 28, y J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566. En una realizacion espedfica de la invencion, "heterociclo" incluye un "carbociclo" como se define en la presente, en donde uno o mas (por ejemplo, 1, 2, 3 o 4) atomos de carbono se han reemplazado con un heteroatomo (por ejemplo, O, N, o S). Los terminos "heterociclo" o "heterociclilo" incluyen anillos saturados, anillos parcialmente insaturados y anillos aromaticos (es decir, anillos heteroaromaticos).

El termino "sustituido" en referencia a alquilo, alquenilo, arilo, etc., por ejemplo, "alquilo sustituido", "alquenilo sustituido", "arilo sustituido", respectivamente, en el que uno o mas atomos de hidrogeno se reemplazan cada uno independientemente con un sustituyente no hidrogeno. Los sustituyentes tipicos incluyen, pero no estan limitados a, -X, -Rb, -OH, =O, -ORb, -SRb, -S-, -NRb2, -N+Rb3, =NRb, -CX3, -CN, -OCN, -SCN, -N=C=O, -NCS, -NO, -NO2, =N2, -N3, -NHC(=O)Rb, -OC(=O)Rb, -NHC(=O)NRb2, S(=O)2-, -S(=O)2OH, -S(=O)2Rb, -OS(=O)2ORb, S(=O)2NRb2, -S(O)Rb, -OP(O)(ORb)2, -P(O)(ORb)2, P(=O)(O-)2, -P(=O)(OH)2, -P(O)(ORb)(O-), -C(= O)Rb, -C(=O)X, C(S)Rb, -C(O)ORb, -C(O)O-, -C(S)ORb, -C(O)SRb, -C(S)SRb, -C(O)NRb2, -C(S)NRb2, -C(=NRb)NRb2, donde cada X es independientemente un halogeno: F, Cl, Br, o I; y cada Rb es independientemente H, alquilo, arilo, arilalquilo, un heterociclo, o un grupo protector o fraccion de profarmaco.

El termino "profarmaco", como se usa en la presente, se refiere a cualquier compuesto que cuando se administra a un sistema biologico genera la sustancia del farmaco, es decir, el ingrediente activo, como resultado de una reaccion(es) qmmica espontanea, reaccion(es) qmmica catalizada por enzimas, fotolisis, y/o reaccion(es) qmmica metabolica. Un profarmaco es, por tanto, una forma analoga o latente modificada covalentemente de un compuesto terapeuticamente activo.

"Grupo protector" se refiere a un fraccion de un compuesto que enmascara o altera las propiedades de un grupo funcional o las propiedades del compuesto en su totalidad. La subestructura qmmica de un grupo protector vana ampliamente. Una funcion de un grupo protector es servir como intermediario en la smtesis de la sustancia farmacologica parental. Los grupos protectores qmmicos y las estrategias para la proteccion/desproteccion son bien conocidos en la tecnica. Ver: " Protective Groups in Organic Chemistry", Theodora W. Greene (John Wiley & Sons, Inc., 1991. Los grupos protectores se usan a menudo para enmascarar la reactividad de ciertos grupos funcionales, para ayudar en la eficiencia de las reacciones qmmicas deseadas, por ejemplo, creando y rompiendo enlaces qmmicos de una manera ordenada y planificada. La proteccion de los grupos funcionales de un compuesto altera otras propiedades ffsicas ademas de la reactividad del grupo funcional protegido, como la polaridad, la lipofilicidad (hidrofobicidad) y otras propiedades que pueden medirse con herramientas analfticas comunes. Los intermedios qmmicamente protegidos pueden ser biologicamente activos o inactivos.

Los compuestos protegidos tambien pueden mostrar propiedades alteradas y, en algunos casos, optimizadas in vitro e in vivo, como el paso a traves de membranas celulares y la resistencia a la degradacion o el secuestro enzimatico. En este papel, los compuestos protegidos con los efectos terapeuticos pretendidos pueden ser referidos como profarmacos. Otra funcion de un grupo protector es convertir el farmaco parental en un profarmaco, por lo que el farmaco parental se libera tras la conversion del profarmaco in vivo. Como los profarmacos activos pueden absorberse mas eficazmente que el farmaco parental, los profarmacos pueden poseer mayor potencia in vivo que el farmaco parental. Los grupos protectores se eliminan ya sea in vitro, en el caso de productos intermedios qmmicos, o in vivo, en el caso de profarmacos. Con los productos intermedios qmmicos, no es particularmente importante que los productos resultantes despues de la desproteccion, por ejemplo, los alcoholes, sean fisiologicamente aceptables, aunque en general es mas deseable si los productos son farmacologicamente inocuos.

"Fraccion de profarmaco" significa un grupo funcional labil que se separa del compuesto inhibidor activo durante el metabolismo, sistemicamente, dentro de una celula, por hidrolisis, escision enzimatica o por algun otro proceso (Bundgaard, Hans, "Design and Application of Prodrugs" en el Textbook of Drug Design and Development (1991), P. Krogsgaard-Larsen and H. Bundgaard, Eds. Harwood Academic Publishers, pp. 113-191). Las enzimas que son capaces de un mecanismo de activacion enzimatica con los compuestos de profarmacos de fosfonato de la invencion incluyen, pero no estan limitados a, amidasas, esterasas, enzimas microbianas, fosfolipasas, colinesterasas y fosfasas. Las fracciones de profarmacos pueden servir para mejorar la solubilidad, la absorcion y la lipofilicidad para optimizar la administracion, la biodisponibilidad y la eficacia del farmaco. Una fraccion de profarmaco puede incluir un metabolito activo o el propio farmaco.

Fracciones de profarmaco ejemplares incluyen esteres de aciloximetilo -CH2OC(=O)R30 y carbonatos de aciloximetilo -CH2OC(=O)OR30 hidrolfticamente sensibles o labiles donde R30 es alquilo C1-C6, alquilo C1-C6 sustituido, arilo C6-C20 o arilo C6-C20 sustituido. El ester de aciloxialquilo se uso como una estrategia de profarmaco para acidos carboxflicos y luego se aplico a fosfatos y fosfonatos por Farquhar et al., (1983) J. Pharm. Sci. 72:324; tambien las Patentes de Estados Unidos N° 4.816.570, 4.968.788, 5.663.159 y 5.792.756. En ciertos compuestos de la invencion, una fraccion de profarmaco es parte de un grupo fosfato. El ester de aciloxialquilo puede usarse para administrar acidos fosforicos a traves de las membranas celulares y para mejorar la biodisponibilidad oral. Una variante cercana del ester de aciloxialquilo, el ester de alcoxicarboniloxialquilo (carbonato), tambien puede aumentar la biodisponibilidad oral como una fraccion de profarmaco en los compuestos de las combinaciones de la invencion. Un ester de aciloximetilo ejemplar es pivaloiloximetoxi, (POM) -CH2OC(=O)C(CH3)3. Una fraccion de profarmaco de carbonato de aciloximetilo ejemplar es pivaloiloximetilcarbonato (POC) -CH2OC(=O)OC(CH3)3.

El grupo fosfato puede ser una fraccion de profarmaco de fosfato. La fraccion de profarmaco puede ser sensible a la hidrolisis como, pero no limitado a, aquellos que comprenden un carbonato de pivaloiloximetilo (POC) o un grupo POM. Alternativamente, la fraccion de profarmaco puede ser sensible a la escision potenciada enzimatica, como un ester de lactato o un grupo ester de fosfonamidato.

Un experto en la tecnica reconocera que los sustituyentes y otras fracciones de los compuestos de Formula III debenan seleccionarse para proporcionar un compuesto que sea lo suficientemente estable para proporcionar un compuesto farmaceuticamente util que pueda formularse en una composicion farmaceutica aceptablemente estable. Se considera que los compuestos de Formula III que tienen tal estabilidad estan dentro del alcance de la presente invencion.

Cabe senalar que todos los enantiomeros, diastereoisomeros y mezclas racemicas, tautomeros, polimorfos, pseudopolimorfos de compuestos dentro del alcance de Formula III y sales farmaceuticamente aceptables (asf como complejos, co-cristales, etc.), solvatos o esteres de los mismos estan abarcados por la presente invencion. Todas las mezclas de tales enantiomeros y diastereomeros estan dentro del alcance de la presente invencion.

Un compuesto de Formula III y sus sales, solvatos o esteres farmaceuticamente aceptables pueden existir como diferentes polimorfos o pseudopolimorfos. Como se usa en la presente, polimorfismo cristalino significa la capacidad de un compuesto cristalino para existir en diferentes estructuras cristalinas. El polimorfismo cristalino puede ser el resultado de diferencias en el empaquetamiento cristalino (polimorfismo de empaquetamiento) o diferencias en el empaquetamiento entre diferentes conformadores de la misma molecula (polimorfismo conformacional). Como se usa en la presente, pseudopolimorfismo cristalino significa la capacidad de un hidrato o solvato de un compuesto para existir en diferentes estructuras cristalinas. Los pseudopolimorfos de la presente invencion pueden existir debido a diferencias en el empaquetamiento cristalino (pseudopolimorfismo de empaquetamiento) o debido a diferencias en el empaquetamiento entre diferentes conformadores de la misma molecula (pseudopolimorfismo conformacional). La presente invencion comprende todos los polimorfos y pseudopolimorfos de los compuestos de Formula III y sus sales farmaceuticamente aceptables.

Un compuesto de Formula III y sus sales, solvatos o esteres farmaceuticamente aceptables tambien pueden existir como un solido amorfo. Como se usa en la presente, un solido amorfo es un solido en el que no hay un orden de largo alcance de las posiciones de los atomos en el solido. Esta definicion se aplica tambien cuando el tamano del cristal es de dos nanometros o menos. Se pueden usar aditivos, incluyendo solventes, para crear las formas amorfas de la presente invencion. La presente invencion comprende todas las formas amorfas de los compuestos de Formula IIII y sus sales farmaceuticamente aceptables.

En una cierta realizacion de la invencion, la presente invencion esta dirigida a compuestos de Formula III:

en la que

R8 es NH2, OMe, OCH2CH3 o =O; y

R9 es NH2, H o F;

o una sal, solvato o ester farmaceuticamente aceptable del mismo.

Preferiblemente, el compuesto de formula III se selecciona del grupo que consiste de

o una sal, solvato, o ester farmaceuticamente aceptable de los mismos. Mas preferiblemente, el compuesto de Formula III se selecciona del grupo que consiste de

o una sal , solvato, o ester farmaceuticamente aceptable de los mismos

La segunda realizacion de la invencion esta dirigida a una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de Formula III, como se ha definido anteriormente con respecto a la primera realizacion de la invencion, y un portador o excipiente farmaceuticamente aceptable. Los terminos en la segunda realizacion de la invencion se definen como anteriormente con respecto a la primera realizacion de la invencion.

Los terminos "composicion farmaceutica" y "formulacion farmaceutica" se usan indistintamente en la presente. Las composiciones farmaceuticas de la presente invencion contienen compuestos de esta invencion y pueden formularse usando cualquier portador y excipiente convencional que se seleccionaran de acuerdo con la practica ordinaria. Los comprimidos contendran excipientes, deslizantes, rellenos, aglutinantes y similares. Las formulaciones farmaceuticas acuosas se preparan en forma esteril y, cuando estan destinadas a ser administradas por una administracion distinta a la oral, generalmente seran isotonicas. Todas las formulaciones farmaceuticas contendran opcionalmente excipientes como los que se exponen en el "Handbook of Pharmaceutical Excipients" (1986). Los excipientes adecuados incluyen, pero no estan limitados a, acido ascorbico y otros antioxidantes, agentes quelantes como EDTA, carbohidratos como dextrano, hidroxialquilcelulosa, hidroxialquilmetilcelulosa, acido estearico y similares. El pH de las formulaciones farmaceuticas puede variar preferiblemente de aproximadamente 3 a aproximadamente 11, y mas preferiblemente de aproximadamente 7 a aproximadamente 10.

Aunque es posible que los ingredientes activos se administren solos, puede ser preferible presentarlos como formulaciones farmaceuticas. Las formulaciones farmaceuticas, tanto para uso veterinario como para uso humano, de la invencion comprenden por lo menos un ingrediente activo, como se ha definido anteriormente, junto con uno o mas portadores o excipientes y opcionalmente agentes terapeuticos adicionales.

Una cantidad terapeuticamente eficaz o dosis eficaz se usan indistintamente en la presente y se entiende que significan la cantidad de ingrediente activo requerida para lograr el resultado deseado. La dosis eficaz del ingrediente activo depende, por lo menos, de la naturaleza de la afeccion que se este tratando, de la toxicidad, de si el compuesto se esta usando profilacticamente (dosis mas bajas) o contra una infeccion viral activa, del metodo de administracion y de la formulacion farmaceutica, y puede determinarse facilmente por el practicante clmico usando estudios de incrementos escalonados de dosis convencionales. La cantidad eficaz puede ser de aproximadamente 0,0001 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por dfa; preferiblemente, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal por dfa; mas preferiblemente, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 5 mg/kg de peso corporal por dfa; y lo mas preferible, de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 0,5 mg/kg de peso corporal por dfa. Por ejemplo, la dosis candidata diaria para un humano adulto de aproximadamente 70 kg de peso corporal puede variar de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 1000 mg, preferiblemente entre aproximadamente 5 mg y aproximadamente 500 mg, y puede tomar la forma de dosis individuales o multiples.

En otra realizacion, la composicion farmaceutica comprende ademas por lo menos un agente terapeutico adicional. El agente terapeutico adicional puede ser otro compuesto de formula I o cualquier agente terapeutico adecuado para su uso con el compuesto de Formula III. Por ejemplo, el agente terapeutico adicional puede seleccionarse del grupo que consiste de un corticosteroide, un modulador de transduccion de senales antiinflamatorias, un broncodilatador agonista de p2-adrenorreceptor, un anticolinergico, un agente mucolftico, una solucion salina hipertonica, un agente que inhibe la migracion de celulas pro-inflamatorias al sitio de la infeccion, y mezclas de los mismos. El agente terapeutico adicional tambien puede incluir otros farmacos para tratar infecciones por virus de Orthomyxoviridae. En otras realizaciones, el agente terapeutico adicional puede ser inhibidores de la hemaglutinina viral, inhibidores de la neuramidasa viral, bloqueadores del canal ionico M2, inhibidores de las ARN polimerasas dependientes del ARN de Orthomyxoviridae, sialidasas y otros farmacos para tratar infecciones por Orthomyxoviridae. En otra realizacion mas, el agente terapeutico adicional es un interferon, ribavirina, oseltamivir, zanamivir, laninamivir, peramivir, amantadina, rimantadina, CS-8958, favipiravir, AVI-7100, inhibidor de la proteasa alfa-1 o DAS 181.

En otras realizaciones determinadas de la invencion, la infeccion por Orthomyxoviridae que esta siendo tratada por la composicion farmaceutica esta provocada por un virus de la gripe A, un virus de la gripe B o un virus de la gripe C.

Las composiciones farmaceuticas incluyen aquellas adecuadas para cualquier via de administracion apropiada para la afeccion a ser tratada. Las vfas adecuadas incluyen oral, inhalacion, rectal, nasal, topica (incluyendo bucal y sublingual), vaginal y parenteral (incluyendo subcutanea, intramuscular, intravenosa, intradermica, intratecal y epidural), y similares. Se apreciara que la via preferida puede variar, por ejemplo, con la condicion del destinatario.

Las composiciones farmaceuticas pueden presentarse convenientemente en forma de dosificacion unitaria y pueden prepararse mediante cualquier metodo conocido en la tecnica de la farmacia. Las tecnicas y las composiciones farmaceuticas generalmente se encuentran en Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA). Tales metodos incluyen el paso de asociar el ingrediente activo con el portador que constituye uno o mas ingredientes accesorios. En general, las composiciones farmaceuticas se preparan asociando uniforme e mtimamente el ingrediente activo con portadores lfquidos o portadores solidos finamente divididos o ambos, y luego, si es necesario, dando forma al producto.

Las composiciones farmaceuticas de la presente invencion adecuadas para administracion oral pueden presentarse como unidades discretas como capsulas, obleas o comprimidos, cada uno conteniendo una cantidad predeterminada del ingrediente activo; como un polvo o granulos; como una solucion o una suspension en un lfquido acuoso o no acuoso; o como una emulsion lfquida de aceite en agua o una emulsion lfquida de agua en aceite. El ingrediente activo tambien puede administrarse como un bolo, electuario o pasta.

Un comprimido se fabrica por compresion o moldeo, opcionalmente con uno o mas ingredientes accesorios. Los comprimidos comprimidos pueden prepararse comprimiendo en una maquina adecuada el ingrediente activo en una forma de flujo libre como un polvo o granulos, opcionalmente mezclados con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, conservante, agente de superficie activa o dispersante. Los comprimidos moldeados pueden elaborarse moldeando en una maquina adecuada una mezcla del ingrediente activo en polvo humedecido con un diluyente lfquido inerte. Los comprimidos pueden opcionalmente recubrirse o marcarse y opcionalmente se formulan para proporcionar una liberacion lenta o controlada del ingrediente activo desde los mismos.

Para infecciones del ojo u otros tejidos externos, por ejemplo, la boca y la piel, las composiciones farmaceuticas se aplican preferiblemente como una pomada o crema topica que contiene el ingrediente(s) activo en una cantidad de, por ejemplo, el 0,075 al 20% p/p (incluyendo el ingrediente(s) activo en un intervalo entre el 0,1% y el 20% en incrementos del 0,1% p/p, como el 0,6% p/p, el 0,7% p/p, etc.), preferiblemente del 0,2 al 15% p/p y lo mas preferible del 0,5 al 10% p/p. Cuando se formulan en una pomada, los ingredientes activos pueden emplearse o con una base de pomada parafrnica o miscible en agua. Alternativamente, los ingredientes activos pueden formularse en una crema con una base de crema de aceite en agua.

Si se desea, la fase acuosa de la base de crema puede incluir, por ejemplo, por lo menos el 30% p/p de un alcohol polihndrico, es decir, un alcohol que tiene dos o mas grupos hidroxilo, como propilenglicol, butano, 1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol y polietilenglicol (incluyendo PEG 400) y mezclas de los mismos. Las composiciones farmaceuticas topicas pueden incluir deseablemente un compuesto que mejora la absorcion o penetracion del ingrediente activo a traves de la piel u otras areas afectadas. Los ejemplos de tales potenciadores de la penetracion dermica incluyen dimetilsulfoxido y analogos relacionados.

La fase oleosa de las emulsiones de esta invencion puede estar constituida por ingredientes conocidos de una manera conocida. Aunque la fase puede comprender simplemente un emulsionante (tambien conocido como un emulgente), deseablemente comprende una mezcla de por lo menos un emulsionante con una grasa o un aceite o con tanto una grasa como un aceite. Preferiblemente, se incluye un emulsionante hidrofilo junto con un emulsionante lipofilo, que actua como un estabilizante. Tambien se prefiere incluir tanto un aceite como una grasa. Juntos, el emulsionante(s) con o sin estabilizador(es) componen la denominada cera emulsionante, y la cera junto con el aceite y la grasa, componen la denominada base de pomada emulsionante que forma la fase dispersada oleosa de las composiciones farmaceuticas en crema.

Los emulgentes y estabilizantes de emulsion adecuados para su uso en la composicion farmaceutica de la invencion incluyen, pero no estan limitados a, Tween®60, Span®80, alcohol cetoesteanlico, alcohol bendlico, alcohol miristflico, monoestearato de glicerilo y lauril sulfato de sodio.

La eleccion de aceites o grasas adecuados para la composicion farmaceutica se basa en lograr las propiedades cosmeticas deseadas. La crema debe ser preferiblemente un producto no graso, que no manche y lavable con una consistencia adecuada para evitar fugas de los tubos u otros recipientes. Pueden usarse esteres de alquilo mono- o dibasicos de cadena lineal o ramificada, como di-isoadipato, estearato de isocetilo, diester de propilenglicol de acidos grasos de coco, miristato de isopropilo, oleato de decilo, palmitato de isopropilo, estearato de butilo, palmitato de 2-etilhexilo o una mezcla de esteres de cadena ramificada conocidos como Crodamol CAP, los tres ultimos siendo los esteres preferidos. Estos se pueden usar solos o en combinacion dependiendo de las propiedades requeridas. Alternativamente, se usan lfpidos de alto punto de fusion como parafina blanda blanca y/o parafina lfquida u otros aceites minerales.

Las composiciones farmaceuticas de acuerdo con la presente invencion comprenden una combinacion de acuerdo con la invencion junto con uno o mas portadores o excipientes farmaceuticamente aceptables y opcionalmente agentes terapeuticos adicionales. Las composiciones farmaceuticas que contienen el ingrediente activo pueden estar en cualquier forma adecuada para el metodo de administracion pretendido. Cuando se usan para uso oral, por ejemplo, pueden prepararse comprimidos, trociscos, grageas, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o granulos dispersables, emulsiones, capsulas duras o blandas, jarabes o elixires. Las composiciones farmaceuticas destinadas para uso oral pueden prepararse de acuerdo con cualquier metodo conocido en la tecnica para la fabricacion de composiciones farmaceuticas y tales composiciones pueden contener uno o mas agentes incluyendo agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes y agentes conservantes, para proporcionar una preparacion sabrosa. Los comprimidos que contienen el ingrediente activo en mezcla con un excipiente farmaceuticamente aceptable no toxico que son adecuados para la fabricacion de comprimidos son aceptables. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes, como calcio o carbonato de sodio, lactosa, calcio o fosfato de sodio; agentes de granulacion y disgregacion, como almidon de mafz o acido algmico; agentes aglutinantes, como almidon, gelatina o acacia; y agentes lubricantes, como estearato de magnesio, acido estearico o talco. Los comprimidos pueden no estar recubiertos o pueden recubrirse mediante tecnicas conocidas, incluyendo la microencapsulacion para retrasar la disgregacion y la adsorcion en el tracto gastrointestinal y, por lo tanto, proporcionar una accion sostenida durante un penodo mas largo. Por ejemplo, puede emplearse un material de retraso temporal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo solo o con una cera.

Las composiciones farmaceuticas para uso oral tambien pueden presentarse como capsulas de gelatina dura en las que el ingrediente activo se mezcla con un diluyente solido inerte, por ejemplo fosfato de calcio o caolm, o como capsulas de gelatina blanda en las que el ingrediente activo se mezcla con agua o un medio oleoso, como aceite de cacahuete, parafina lfquida o aceite de oliva.

Las suspensiones acuosas de la invencion contienen los materiales activos mezclados con excipientes adecuados para la fabricacion de suspensiones acuosas. Tales excipientes incluyen un agente de suspension, como carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto, y goma de acacia, y agentes dispersantes o humectantes como fosfatida natural (por ejemplo, lecitina), un producto de condensacion de un oxido de alquileno con un acido graso (por ejemplo, estearato de polioxietileno), un producto de condensacion de oxido de etileno con un alcohol alifatico de cadena larga (por ejemplo, heptadecaetilenoxicetanol), un producto de condensacion de oxido de etileno con un ester parcial derivado de un acido graso y un antndrido de hexitol (por ejemplo, monooleato de polioxietilen sorbitano). La suspension acuosa tambien puede contener uno o mas conservantes como etil o n-propil p-hidroxi-benzoato, uno o mas agentes colorantes, uno o mas agentes saborizantes y uno o mas agentes edulcorantes, como sacarosa o sacarina.

Las suspensiones oleosas pueden formularse suspendiendo el ingrediente activo en un aceite vegetal, como aceite de cacahuete, aceite de oliva, aceite de sesamo o aceite de coco, o en un aceite mineral como parafina lfquida. Las suspensiones orales pueden contener un agente espesante, como cera de abeja, parafina dura o alcohol cetilico. Pueden anadirse agentes edulcorantes, como los expuestos anteriormente, y agentes saborizantes para proporcionar una preparacion oral sabrosa. Estas composiciones pueden conservarse mediante la adicion de un antioxidante como el acido ascorbico.

Los polvos y granulos dispersables de la invencion adecuados para la preparacion de una suspension acuosa mediante la adicion de agua proporcionan el ingrediente activo en mezcla con un agente dispersante o humectante, un agente de suspension y uno o mas conservantes. Los agentes de dispersion o humectantes adecuados y los agentes de suspension se ejemplifican por los descritos anteriormente. Tambien pueden haber excipientes adicionales, por ejemplo agentes edulcorantes, saborizantes y colorantes.

Las composiciones farmaceuticas de la invencion tambien pueden estar en la forma de emulsiones de aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal, como aceite de oliva o aceite de cacahuete, un aceite mineral, como la parafina lfquida, o una mezcla de estos. Los agentes emulsionantes adecuados incluyen gomas de origen natural, como goma de acacia y goma de tragacanto, fosfatidos de origen natural, como lecitina de soja, esteres o esteres parciales derivados de acidos grasos y anhfdridos de hexitol, como monooleato de sorbitan, y productos de la condensacion de estos esteres parciales con oxido de etileno, como monooleato de polioxietilen sorbitan. La emulsion tambien puede contener agentes edulcorantes y saborizantes. Los jarabes y elixires pueden formularse con agentes edulcorantes, como glicerol, sorbitol o sacarosa. Tales composiciones farmaceuticas tambien pueden contener un demulcente, un conservante, un agente saborizante o uno colorante.

Las composiciones farmaceuticas de la invencion pueden estar en forma de una preparacion inyectable esteril, como una suspension acuosa u oleaginosa inyectable esteril. Esta suspension puede formularse de acuerdo con la tecnica conocida usando aquellos agentes dispersantes o humectantes adecuados y agentes de suspension que se han mencionado anteriormente. La preparacion inyectable esteril tambien puede ser una solucion o suspension inyectable esteril en un diluyente o solvente parenteralmente aceptable no toxico, como una solucion en 1,3-butano-diol o prepararse como un polvo liofilizado. Entre los vehfculos y solventes aceptables que pueden emplearse se encuentran el agua, solucion de Ringer y solucion isotonica de cloruro de sodio. Ademas, pueden emplearse convencionalmente aceites fijos esteriles como un solvente o medio de suspension. Con este proposito, puede emplearse cualquier aceite fijo insfpido, incluyendo mono- o digliceridos sinteticos. Ademas, tambien pueden usarse de igual manera acidos grasos como el acido oleico en la preparacion de inyectables.

La cantidad de ingrediente activo que puede combinarse con un portador, por ejemplo, para producir una forma de dosificacion unica variara dependiendo del huesped tratado y del modo particular de administracion. Por ejemplo, una composicion farmaceutica de liberacion prolongada pretendida para administracion oral a humanos puede contener de aproximadamente 1 a aproximadamente 1000 mg de ingrediente activo compuesto con una cantidad apropiada y conveniente de portador que puede variar de aproximadamente el 5 a aproximadamente el 95% del total de las composiciones (peso:peso). La composicion farmaceutica puede prepararse para proporcionar cantidades facilmente medibles para administracion. Por ejemplo, una solucion acuosa pretendida para infusion intravenosa puede contener de aproximadamente 3 a aproximadamente 500 |jg del ingrediente activo por mililitro de solucion para lograr una tasa de infusion de aproximadamente 30 ml/h.

Las composiciones farmaceuticas adecuadas para la administracion topica en el ojo tambien incluyen gotas oculares en las que el ingrediente activo se disuelve o suspende en un portador adecuado, especialmente un solvente acuoso para el ingrediente activo. El ingrediente activo esta presente preferiblemente en tales composiciones farmaceuticas en una concentracion de aproximadamente el 0,5 a aproximadamente el 20% p/p.

Las composiciones farmaceuticas adecuadas para administracion topica en la boca incluyen grageas que comprenden el ingrediente activo en una base con sabor, habitualmente sacarosa y acacia o tragacanto; pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base inerte como gelatina y glicerina, o sacarosa y acacia; y enjuagues bucales que comprenden el ingrediente activo en un portador lfquido adecuado.

Las composiciones farmaceuticas para administracion rectal pueden presentarse como un supositorio con una base adecuada que comprende, por ejemplo, manteca de cacao o un salicilato.

Las composiciones farmaceuticas adecuadas para la administracion intrapulmonar o nasal tienen un tamano de partfcula, por ejemplo, en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 500 micras, como aproximadamente 0,5, aproximadamente 1, aproximadamente 30, aproximadamente 35, etc., que se administra por inhalacion rapida a traves de las vfas nasales o por inhalacion por la boca para llegar a los sacos alveolares. Las composiciones farmaceuticas adecuadas incluyen soluciones acuosas u oleosas del ingrediente activo. Las composiciones farmaceuticas adecuadas para la administracion en aerosol o en polvo seco pueden prepararse de acuerdo con metodos convencionales y pueden administrarse con agentes terapeuticos adicionales tales como los compuestos usados hasta ahora en el tratamiento o profilaxis de infecciones por Orthomyxoviridae como se describe a continuacion.

En otro aspecto, la invencion es una composicion nueva, eficaz, segura, no irritante y fisiologicamente compatible inhalable que comprende un compuesto de Formula I, II, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, adecuada para el tratamiento de infecciones por Orthomyxoviridae y bronquiolitis potencialmente asociadas. Las sales farmaceuticamente aceptables preferidas son sales de acidos inorganicos que incluyen sales de clorhidrato, bromhidrato, sulfato o fosfato, ya que pueden provocar menos irritacion pulmonar. Preferiblemente, la composicion farmaceutica inhalable se administra al espacio endobronquial en un aerosol que comprende partfculas con un diametro aerodinamico mediano masico (MMAD) entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5 pm. Preferiblemente, el compuesto de Formula III se formula para la administracion por aerosol usando un nebulizador, un inhalador de dosis medida presurizado (pMDI) o un inhalador de polvo seco (DPI).

Ejemplos no limitativos de nebulizadores incluyen atomizacion, a chorro, ultrasonidos, presurizados, placa porosa vibrante, o nebulizadores equivalentes que incluyen aquellos nebulizadores que utilizan tecnologfa de administracion de aerosoles adaptativa (Denyer, J. Aerosol Medicine Pulmonary Drug Delivery 2010, 23 Supp 1, S1-S10). Un nebulizador a chorro utiliza presion de aire para romper una solucion lfquida en gotitas de aerosol. Un nebulizador ultrasonico funciona mediante un cristal piezoelectrico que corta un lfquido en pequenas gotitas de aerosol. Un sistema de nebulizacion presurizado fuerza la solucion bajo presion a traves de poros pequenos para generar gotitas de aerosol. Un dispositivo de placa porosa vibrante utiliza una vibracion rapida para cortar una corriente de lfquido en tamanos de gotitas apropiados.

En una realizacion preferida, la composicion farmaceutica para la nebulizacion se administra al espacio endobronquial en un aerosol que comprende partfculas con un MMAD predominantemente entre aproximadamente 1 pm y aproximadamente 5 pm usando un nebulizador capaz de aerosolizar la composicion farmaceutica del compuesto de Formula III en partfculas del MMAD requerido. Para ser terapeuticamente eficaces optimamente y para evitar los efectos secundarios respiratorios superiores y sistemicos, la mayona de las partfculas en aerosol no deben tener un MMAD mayor de aproximadamente 5 pm. Si un aerosol contiene una gran cantidad de partfculas con un MMAD mayor a 5 pm, las partfculas se depositan en las vfas respiratorias superiores disminuyendo la cantidad de farmaco administrado en el sitio de la inflamacion y la broncoconstriccion en el tracto respiratorio inferior. Si el MMAD del aerosol es mas pequeno que aproximadamente 1 pm, entonces las partfculas tienen una tendencia a permanecer suspendidas en el aire inhalado y se exhalan posteriormente durante la espiracion.

Cuando se formula y se administra de acuerdo con el metodo de la invencion, la composicion farmaceutica en aerosol para nebulizacion administra una dosis terapeuticamente eficaz del compuesto de Formula III al sitio de la infeccion por Orthomyxoviridae suficiente para tratar la infeccion por Orthomyxoviridae. La cantidad de farmaco administrado debe ajustarse para reflejar la eficiencia de la administracion de una dosis terapeuticamente eficaz del compuesto de Formula III. En una realizacion preferida, una combinacion de la composicion farmaceutica en aerosol acuoso con el nebulizador de atomizacion, a chorro, presurizado, de placa porosa vibratoria o ultrasonico permiten, dependiendo del nebulizador, de aproximadamente, por lo menos, el 20 a aproximadamente el 90%, tipicamente aproximadamente el 70% de administracion de la dosis administrada del compuesto de Formula III a las vfas respiratorias. En una realizacion preferida, se administra por lo menos de aproximadamente el 30 a aproximadamente el 50% del ingrediente activo. Mas preferiblemente, se administra de aproximadamente el 70 a aproximadamente el 90% del ingrediente activo.

En otra realizacion de la presente invencion, un compuesto de Formula III o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, se administra como un polvo inhalable seco. Los compuestos de la invencion se administran endobronquialmente como una composicion farmaceutica en polvo seco para administrar eficazmente partfculas finas de compuesto en el espacio endobronquial usando polvo seco o inhaladores de dosis medidas. Para la administracion por DPI, el compuesto de Formula III se procesa en partfculas con, predominantemente, MMAD entre aproximadamente 1 pm y aproximadamente 5 pm por secado por pulverizacion de molienda, procesamiento cntico de fluidos o precipitacion de solucion. Los dispositivos de molienda de medios, molienda por chorro y secado por pulverizacion y los procedimientos capaces de producir los tamanos de partfculas con un MMAD entre aproximadamente 1 pm y aproximadamente 5 pm son bien conocidos en la tecnica. En una realizacion, los excipientes se anaden al compuesto de Formula III antes de procesarse en partfculas de los tamanos requeridos. En otra realizacion, los excipientes se mezclan con las partfculas del tamano requerido para ayudar en la dispersion de las partfculas del farmaco, por ejemplo, usando lactosa como excipiente.

Las determinaciones del tamano de partfcula se hacen usando dispositivos bien conocidos en la tecnica. Por ejemplo, un impactador en cascada Anderson de multiples etapas u otro metodo adecuado, como los citados espedficamente en el Capftulo 601 de la Farmacopea de Estados Unidos como dispositivos de caracterizacion de aerosoles dentro de inhaladores de dosis medidas y polvo seco.

En otra realizacion preferida, un compuesto de Formula III se administra como un polvo seco usando un dispositivo como un inhalador de polvo seco u otros dispositivos de dispersion de polvos secos. Ejemplos no limitativos de inhaladores y dispositivos de polvo seco incluyen los divulgados en las in US5.458.135; US5.740.794; US5775320; US5.785.049; US3.906.950; US4.013.075; US4.069.819; US4.995.385; US5.522.385; US4.668.218; US4.667.668; US4.805.811 y US5.388.572. Hay dos disenos principales de inhaladores de polvo seco. Un diseno es un dispositivo de medicion en el que un deposito para el farmaco se coloca dentro del dispositivo y el paciente anade una dosis del farmaco a la camara de inhalacion. El segundo diseno es un dispositivo medido de fabrica en el que cada dosis individual se ha fabricado en un recipiente separado. Ambos sistemas dependen de la composicion farmaceutica del farmaco en partfculas pequenas de MMAD de 1 pm y aproximadamente 5 pm, y a menudo implican la coformulacion con partfculas de excipientes mas grandes, como, pero no limitado a, lactosa. El polvo del farmaco se coloca en la camara de inhalacion (ya sea por medicion del dispositivo o por ruptura de una dosis medida de fabrica) y el flujo inspiratorio del paciente acelera la salida del polvo del dispositivo y hacia la cavidad oral. Las caractensticas de flujo no laminar de la ruta del polvo hacen que los agregados de excipiente-farmaco se descompongan, y la masa de las partfculas de excipiente grandes provoca su impacto en la parte posterior de la garganta, mientras que las partfculas del farmaco mas pequenas se depositan profundamente en los pulmones. En realizaciones preferidas, un compuesto de Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, se administra como un polvo seco usando cualquiera de los dos tipos de inhaladores de polvo seco como se describe en la presente, en donde el MMAD del polvo seco, exclusivo de cualquier excipiente, esta predominantemente en el intervalo de aproximadamente 1 pm a aproximadamente 5 pm

En otra realizacion preferida, un compuesto de Formula III se administra como un polvo seco usando un inhalador de dosis medida. Ejemplos no limitativos de inhaladores y dispositivos de dosis medidas incluyen los divulgados en las US5.261.538; US5.544.647; US5.622.163; US4.955.371; US3.565.070; US3.361306 y US6.116.234.. En realizaciones preferidas, un compuesto de Formula I, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, se administra como un polvo seco usando un inhalador de dosis medida en donde el MMAD del polvo seco, excluyendo cualquier excipiente, esta predominantemente en el intervalo de aproximadamente 1 a aproximadamente 5 pm.

Las composiciones farmaceuticas adecuadas para administracion vaginal pueden presentarse como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o composiciones farmaceuticas en espray que contienen, ademas del ingrediente activo, los portadores que se sabe en la tecnica que son apropiados.

Las composiciones farmaceuticas adecuadas para administracion parenteral incluyen soluciones de inyeccion esteriles acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostaticos y solutos que vuelven a la composicion farmaceutica isotonica con la sangre del receptor pretendido; y suspensiones esteriles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspension y agentes espesantes.

Las composiciones farmaceuticas se presentan en recipientes de dosis unitaria o multidosis, por ejemplo ampollas y viales sellados, y pueden almacenarse en una condicion secada por congelacion (liofilizada) que requiere solamente la adicion del portador lfquido esteril, por ejemplo agua para inyeccion, inmediatamente antes de su uso. Las soluciones y suspensiones para inyeccion extemporanea se preparan a partir de polvos, granulos y comprimidos esteriles del tipo descrito anteriormente. Las composiciones farmaceuticas de dosificacion unitaria preferidas son aquellas que contienen una dosis diaria o una subdosis diaria unitaria, como se ha mencionado en la presente con anterioridad, o una fraccion apropiada de la misma, del ingrediente activo.

Debe entenderse que ademas de los ingredientes particularmente mencionados con anterioridad, las composiciones farmaceuticas de esta invencion pueden incluir otros agentes convencionales en la tecnica teniendo en cuenta el tipo de composicion farmaceutica en cuestion, por ejemplo, los adecuados para la administracion oral pueden incluir agentes saborizantes.

Tambien se describen composiciones veterinarias que comprenden por lo menos un ingrediente activo como se ha definido anteriormente junto con un portador veterinario para el mismo.

Los portadores veterinarios son materiales utiles para el proposito de administrar la composicion y pueden ser materiales solidos, lfquidos o gaseosos que son de otro modo inertes o aceptables en la tecnica veterinaria y que son compatibles con el ingrediente activo. Estas composiciones veterinarias pueden administrarse por via oral, parenteral o por cualquier otra via deseada.

Los compuestos de la invencion pueden usarse para proporcionar formulaciones farmaceuticas de liberacion controlada que contienen como un ingrediente activo uno o mas compuestos de la invencion ("formulaciones de liberacion controlada") en las que la liberacion del ingrediente activo se controla y regula para permitir una menor frecuencia de dosificacion o para mejorar el perfil farmacocinetico o de toxicidad de un ingrediente activo dado.

En otra realizacion, la presente solicitud divulga composiciones farmaceuticas que comprenden un compuesto de la presente invencion, o una sal, solvato o ester farmaceuticamente aceptable del mismo, en combinacion con por lo menos un agente terapeutico adicional, y un portador o excipiente farmaceuticamente aceptable.

Para el tratamiento de las infecciones por el virus Orthomyxoviridae, preferiblemente, el agente terapeutico adicional es activo contra las infecciones por el virus Orthomyxoviridae, en particular infecciones por el virus de la gripe. Ejemplos no limitativos de estos agentes terapeuticos activos son los inhibidores de la hemaglutinina viral, los inhibidores de la neuramidasa viral, los bloqueadores de los canales ionicos M2, los inhibidores de las ARN polimerasas dependientes del ARN de Orthomyxoviridae y las sialidasas. Ejemplos no limitativos de inhibidores de la neuramidasa incluyen oseltamivir, zanamivir, laninamivir, peramivir y CS-8958. Ejemplos no limitativos de inhibidores del canal viral M2 incluyen amantadina y rimantadina. Ejemplos no limitativos de inhibidores de ARN polimerasas dependientes del ARN de Orthomyxoviridae son ribavirina y favipiravir. Un ejemplo no limitativo de sialidasas es DAS 181. En otra realizacion, el agente terapeutico adicional se selecciona del grupo que consiste de ribavirina, oseltamivir, zanamivir, laninamivir, peramivir, amantadina, rimantadina, CS-8958, favipiravir, AVI-7100, inhibidor de la proteasa alfa-1 y DAS181.

Muchas de las infecciones por virus Orthomyxoviridae son infecciones respiratorias. Por lo tanto, los agentes terapeuticos activos adicionales usados para tratar los smtomas respiratorios y las secuelas de la infeccion pueden usarse en combinacion con los compuestos de Formula III. Por ejemplo, otros agentes terapeuticos adicionales preferidos en combinacion con los compuestos de Formula III para el tratamiento de infecciones respiratorias virales incluyen, pero no estan limitados a, broncodilatadores y corticosteroides.

Los glucocorticoides, que se introdujeron por primera vez como una terapia para el asma en 1950 (Carryer, Journal of Allergy, 21, 282-287, 1950), siguen siendo la terapia mas potente y consistentemente eficaz efectiva para esta enfermedad, aunque su mecanismo de accion todavfa no se comprende completamente (Morris, J. Allergy Clin. Immunol., 75 (1 Pt) 1-13, 1985). Desafortunadamente, las terapias con glucocorticoides orales se asocian con efectos secundarios profundos indeseables, como obesidad troncal, hipertension, glaucoma, intolerancia a la glucosa, aceleracion de la formacion de cataratas, perdida de minerales en los huesos y efectos psicologicos, todo lo cual limita su uso como agentes terapeuticos a largo plazo (Goodman y Gilman, 10a edicion, 2001). Una solucion a los efectos secundarios sistemicos es administrar farmacos esteroides directamente al sitio de la inflamacion. Los corticosteroides inhalados (ICS) se han desarrollado para mitigar los graves efectos adversos de los esteroides orales. Ejemplos no limitativos de corticosteroides que pueden usarse en combinaciones con los compuestos de Formula III son dexametasona, fosfato de sodio de dexametasona, fluorometolona, acetato de fluorometolona, loteprednol, etabonato de loteprednol, hidrocortisona, prednisolona, fludrocortisonas, triamcinolona, acetonida de triamcinolona, betametasona, diproprionato de beclometasona, metilprednisolona, fluocinolona, acetonida de fluocinolona, flunisolida, fluocortina-21-butilato, flumetasona, pivalato de flumetasona, budesonida, propionato de halobetasol, furoato de mometasona, propionato de fluticasona, ciclesonida; o una sal farmaceuticamente aceptable de los mismos.

Otros agentes antiinflamatorios que funcionan a traves de mecanismos de cascada antiinflamatorios tambien son utiles como agentes terapeuticos adicionales en combinacion con los compuestos de Formula III para el tratamiento de infecciones respiratorias virales. La aplicacion de "moduladores de transduccion de senales antiinflamatorias" (a los que se hace referencia en este texto como AISTM), como inhibidores de la fosfodiesterasa (por ejemplo, espedficos de PDE-4, PDE-5 o PDE-7), inhibidores del factor de transcripcion (por ejemplo, bloqueo de NF^kB a traves de la inhibicion de IKK) o inhibidores de las quinasas (por ejemplo, el bloqueo de P38 MAP, JNK, PI3K, EGFR o Syk) es un enfoque logico para desactivar la inflamacion, ya que estas moleculas pequenas se dirigen a un numero limitado de vfas intracelulares comunes - aquellas vfas de transduccion de senales que son puntos cnticos para la intervencion terapeutica antiinflamatoria (ver revision de PJ Barnes, 2006). Estos agentes terapeuticos adicionales no limitativo incluyen: acido 5-(2,4-difluoro-fenoxi)-1-isobutil-1H-indazol-6-carboxflico (2-dimetilamino-etil)-amida (inhibidor de la quinasa de P38 Map ARRY-797)); 3-ciclopropilmetoxi-N- (3,5-dicloro-piridin-4-il)-4-difluorormetoxi-benzamida (inhibidor de PDE-4 Roflumilast); 4-[2-(3-ciclopentiloxi-4-metoxifenil)-2-fenil-etil]-piridina (inhibidor de PDE-4 CDP-840); N-(3,5-dicloro-4-piridinil)-4-(difluorometoxi)-8-[(metilsulfonil)amino]-1-dibenzofurancarboxamida (inhibidor de PDE-4 Oglemilast); N-(3,5-dicloro-piridin-4-il)-2-[1-(4-fluorobencil)-5-hidroxi-1H-indol-3-il]-2-oxo-acetamida (inhibidor de PDE-4 AWD 12-281); acido 8-metoxi-2-trifluorometil-quinolina-5-carboxflico (3,5-dicloro-1-oxi-piridin-4-il)-amida (inhibidor de PDE-4 Sch 351591); 4-[5-(4-fluorofenil)-2-(4-metanosulfinil-fenil)-1H-imidazol-4-il]-piridina (inhibidor de P38 SB-203850); 4-[4-(4-fluoro-fenil)-1-(3-fenil-propil)-5-piridin-4-il-1H-imidazol-2-il]-but-3-in-1-ol (inhibidor de P38 RWJ-67657); 2-dietilamino-etil ester de acido 4-ciano-4-(3-ciclopentiloxi-4-metoxi-fenil)-ciclohexanocarboxflico (profarmaco 2-dietil-etil ester de Cilomilast, inhibidor de PDE-4); (3-cloro-4-fluorofenil)-[7-metoxi-6-(3-morfolin-4-il-propoxi)-quinazolin-4-il]-amina (Gefitinib, inhibidor de EGFR); y 4(4-metil-piperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il-pirimidin-2-ilamino)-fenil]-benzamida (Imatinib, inhibidor de EGFR).

Los agentes que inhiben la migracion de celulas proinflamatorias al sitio de infeccion tambien son utiles como agentes terapeuticos adicionales en combinacion con los compuestos de Formula III para el tratamiento de infecciones respiratorias virales. Ejemplos no limitativos de tales agentes que actuan a traves de este mecanismo y que han demostrado utilidad en animales, por ejemplo, reduciendo la mortalidad eventual causada por la gripe son EV-077 (un inhibidor de tromboxano sintasa/antagonista del receptor de tromboxano dual) y Fingolimod® (un antagonista del receptor de esfingosina-1-fosfato).

Las combinaciones que comprenden broncodilatadores agonistas de p2-adrenorreceptores inhalados, como formoterol, albuterol o salmeterol con los compuestos de Formula III tambien son combinaciones adecuadas, pero no limitativas, utiles para el tratamiento de infecciones virales respiratorias.

Tambien se usan combinaciones de broncodilatadores agonistas de p2-adrenorreceptores inhalados, como formoterol o salmeterol con ICS para tratar tanto la broncoconstriccion como la inflamacion (Symbicort® y Advair®, respectivamente). Las combinaciones que comprenden estas combinaciones de ICS y agonistas de p2-adrenorreceptores junto con los compuestos de Formula III tambien son combinaciones adecuadas, pero no limitativas, utiles para el tratamiento de infecciones virales respiratorias.

Para el tratamiento o la profilaxis de bronco-constriccion pulmonar, los anticolinergicos tienen un uso potencial y, por lo tanto, son utiles como agentes terapeuticos adicionales en combinacion con los compuestos de Formula III para el tratamiento de infecciones respiratorias virales. Estos anticolinergicos incluyen, pero no estan limitados a, antagonistas del receptor muscarmico (particularmente del subtipo M3) que han demostrado eficacia terapeutica en el hombre para el control del tono colinergico en la EPOC (Witek, 1999); acido 1-(4-hidroxi-1-[3,3,3-tris-(4-fluorofenil)-propionilj-pirrolidina-2-carbonil}-pirrolidina-2-carboxflico (1-metil-piperidin-4-ilmetilo))-amida; 3-[3-(2-dietilamino-acetoxi)-2-fenil-propioniloxi]-8-isopropil-8-metil-8-azonia-biciclo[3.2.1]octano (Ipratropio-N,N-dietilglicinato); ester de 1-aza-biciclo[2.2. 2] oct-3-ilo del acido 1-ciclohexil-3,4-dihidro-1H-isoquinolina-2-carboxflico (Solifenacina); ester de 1-aza-biciclo[2.2.2]oct-3-ilo del acido 2-hidroximetil-4-metanosulfinil-2-fenil-butmco (Revatropato); 2-{1-[2-(2,3-dihidro-benzofuran-5-il)-etil]-pirrolidin-3-il}-2,2-difenil-acetamida (Darifenacina); 4-azepan-1-il-2,2-difenil-butiramida (Buzepide); 7-[3-(2dietilamino-acetoxi)-2-fenil-propioniloxi]-9-etil-9-metil-3-oxa-9-azoniatriciclo[3.3.1.02,4]nonano (Oxitropium-N,N-dietilglicinato); 7-[2-(2-dietilamino-acetoxi)-2,2-di-tiofen-2-il-acetoxi]-9,9-dimetil-3-oxa-9-azonia-triciclo[3.3.1.02,4]nonano (Tiotropio-N,N-dietilglicinato); 2-(3-diisopropilamino-1-fenilpropil)-4-metil-fenil ester de acido dimetilaminoacetico (Tolterodina-N,N-dimetilglicinato); 3-[4,4-bis-(4-fluoro-fenil)-2-oxoimidazolidin-1 -il]-1-metil-1 -(2-oxo-2-piridin-2-il-etil)-pirrolidinio; 1-[1-(3-fluoro-bencil)-piperidin-4-il]-4,4-bis-(4-fluorofenil)-imidazolidin-2-ona; 1-ciclooctil-3-(3-metoxi-1-aza-biciclo[2.2.2]oct-3-il)-1-fenil-prop-2-in-1-ol; 3-[2-(2-dietilaminoacetoxi)-2,2-di-tiofen-2-il-acetoxi]-1-(3-fenoxi-propil)-1-azonia-biciclo[2.2.2]octano (aclidinio-N,N-dietilglicinato); o 1-metil-1 -(2-fenoxi-etil)-piperidin-4-il ester del acido (2-dietilamino-acetoxi)-di-tiofen-2-il-acetico.

Los compuestos de Formula III tambien pueden combinarse con agentes mucolfticos para tratar tanto la infeccion como los smtomas de infecciones respiratorias. Un ejemplo no limitativo de un agente mucolftico es el ambroxol. De manera similar, los compuestos de Formula III pueden combinarse con expectorantes para tratar tanto la infeccion como los smtomas de infecciones respiratorias. Un ejemplo no limitativo de un expectorante es la guaifenesina.

Se usa solucion salina hipertonica nebulizada para mejorar la depuracion inmediata y a corto plazo de las vfas respiratorias pequenas en pacientes con enfermedades pulmonares (Kuzik, J. Pediatrics 2007, 266). Los compuestos de Formula III tambien pueden combinarse con solucion salina hipertonica nebulizada, particularmente cuando la infeccion por el virus Orthomyxoviridae se complica con bronquiolitis. La combinacion de los compuestos de Formula III con solucion salina hipertonica tambien puede comprender cualquiera de los agentes adicionales tratados anteriormente. En un aspecto preferido, se usa solucion salina hipertonica nebulizada a aproximadamente el 3%.

Tambien es posible combinar cualquier compuesto de la invencion con uno o mas agentes terapeuticos activos distintos en una forma de dosificacion unitaria para administracion simultanea o secuencial a un paciente. La terapia de combinacion puede administrarse como un regimen simultaneo o secuencial. Cuando se administra secuencialmente, la combinacion puede administrarse en dos o mas administraciones.

La co-administracion de un compuesto de la invencion con uno o mas agentes terapeuticos activos distintos se refiere en general a la administracion simultanea o secuencial de un compuesto de la invencion y uno o mas agentes terapeuticos activos distintos, de tal manera que las cantidades terapeuticamente eficaces del compuesto de la invencion y uno o mas agentes terapeuticos activos estan presentes en el cuerpo del paciente.

La co-administracion incluye la administracion de dosificaciones unitarias de los compuestos de la invencion antes o despues de la administracion de dosificaciones unitarias de uno o mas agentes terapeuticos activos distintos, por ejemplo, la administracion de los compuestos de la invencion en segundos, minutos u horas despues de la administracion de uno o mas otros agentes terapeuticos activos distintos. Por ejemplo, una dosis unitaria de un compuesto de la invencion puede administrate primero, seguida en segundos o minutos por la administracion de una dosis unitaria de uno o mas de agentes terapeuticos activos distintos.

Alternativamente, puede administrarse primero una dosis unitaria de uno o mas agentes terapeuticos adicionales, seguida por la administracion de una dosis unitaria de un compuesto de la invencion en segundos o minutos. En algunos casos, puede ser deseable administrar una dosis unitaria de un compuesto de la invencion primero, seguido, despues de un penodo de horas (por ejemplo, 1-12 horas), de la administracion de una dosis unitaria de uno o mas de otros agentes terapeuticos activos. En otros casos, puede ser deseable administrar una dosis unitaria de uno o mas agentes terapeuticos activos distintos primero, seguido, despues de un penodo de horas (por ejemplo, 1-12 horas), de la administracion de una dosis unitaria de un compuesto del compuesto. invencion.

En la presente se describe un metodo para tratar una infeccion por Orthomyxoviridae en un mairnfero con necesidad de ello. El metodo comprende el paso de administrar una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de Formula III, como se ha definido anteriormente con respecto a la primera realizacion de la invencion. Los terminos en el metodo descrito en la presente se definen como anteriormente con respecto a la primera y segunda realizaciones de la invencion.

En otra realizacion del metodo descrito en la presente, una cantidad terapeuticamente eficaz de un racemato, enantiomero, diastereomero, tautomero, polimorfo, pseudopolimorfo, forma amorfa o hidrato de un compuesto de Formula III o una sal, solvato o ester farmaceuticamente aceptable del mismo se administra a marnffero con necesidad de ello.

En otra realizacion, en la presente se describe el uso de un compuesto de Formula III o una sal, solvato o ester farmaceuticamente aceptable del mismo para tratar una infeccion viral provocada por un virus Orthomyxoviridae .

En otro aspecto del metodo descrito, la infeccion por Orthomyxoviridae que se esta tratando es una infeccion por el virus A de la gripe. En otro aspecto del metodo descrito, la infeccion por Orthomyxoviridae es una infeccion por el virus de la gripe B. En otro aspecto del metodo descrito, la infeccion por Orthomyxoviridae es una infeccion por el virus de la gripe C.

En una realizacion preferida, el metodo descrito en la presente comprende tratar una infeccion por Orthomyxoviridae en un marnffero con necesidad de ello administrando una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de Formula III o una sal o ester farmaceuticamente aceptable del mismo.

En otra realizacion, el metodo descrito en la presente comprende tratar una infeccion por Orthomyxoviridae en un mamffero con necesidad de ello administrando una cantidad terapeuticamente eficaz de una composicion farmaceutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de Formula III, o una sal, solvato o ester farmaceuticamente aceptable del mismo, en combinacion con un diluyente o portador farmaceuticamente aceptable. En la presente invencion puede usarse cualquier portador o diluyente conocido en la tecnica para su uso en composiciones farmaceuticas, que tambien sea compatible con los otros ingredientes de la formulacion y fisiologicamente inocuo para el receptor de la misma. Los diluyentes adecuados incluyen, pero no estan limitados a, carbonato de calcio o sodio, lactosa, fosfato de calcio o sodio.

En otra realizacion, el metodo descrito en la presente comprende tratar una infeccion por Orthomyxoviridae en un mamffero con necesidad de ello administrando una cantidad terapeuticamente eficaz de una composicion farmaceutica que comprende una cantidad eficaz de un compuesto de Formula III, o una sal o ester farmaceuticamente aceptable del mismo, en combinacion con por lo menos un agente terapeutico adicional. El agente terapeutico adicional puede ser cualquier agente terapeutico adecuado para su uso con el compuesto de Formula III. Por ejemplo, el agente terapeutico puede seleccionarse del grupo que consiste de inhibidores de hemaglutinina viral, inhibidores de neuramidasa viral, bloqueadores de los canales de iones M2, inhibidores de ARN polimerasas dependientes de ARN de Orthomyxoviridae, sialidasas y otros farmacos para tratar infecciones por Orthomyxoviridae

En otra realizacion mas, en la presente se describen metodos para tratar infecciones por Orthomyxoviridae en un paciente, que comprenden: administrar al paciente una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de Formula III, o una sal, solvato o ester farmaceuticamente aceptable del mismo .

En otra realizacion mas, en la presente se describen metodos para tratar infecciones por Orthomyxoviridae en un paciente, que comprenden: administrar al paciente una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de Formula III, o una sal, solvato o ester farmaceuticamente aceptable del mismo, y por lo menos un agente terapeutico activo adicional, por lo cual se inhibe la polimerasa de Orthomyxoviridae .

En otra realizacion mas, en la presente se describen metodos para tratar infecciones por Orthomyxoviridae en un paciente, que comprenden: administrar al paciente una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de Formula III, o una sal, solvato o ester farmaceuticamente aceptable del mismo, y por lo menos un agente terapeutico activo adicional seleccionado del grupo que consiste de interferones, analogos de ribavarina, un inhibidor de hemaglutinina viral, un inhibidor de neuramidasa viral, un bloqueador del canal ionico M2, un inhibidor de ARN polimerasas dependiente del ARN de Orthomyxoviridae, una sialidasa y otros farmacos para el tratamiento de infecciones por Orthomyxoviridae.

En otra realizacion mas, en la presente se describe el uso de un compuesto de la presente invencion, o una sal, solvato y/o ester farmaceuticamente aceptable del mismo, para la preparacion de un medicamento para tratar una infeccion por Orthomyxoviridae en un paciente.

A continuacion se divulgan procesos, que pueden usarse para preparar compuestos de Formula III de la invencion.

En la presente se describen metodos para inhibir la actividad de la polimerasa de Orthomyxoviridae que comprenden el paso de tratar una muestra sospechosa de contener el virus Orthomyxoviridae con una composicion de la invencion.

Las composiciones de la invencion pueden actuar como inhibidores de la polimerasa de Orthomyxoviridae, como productos intermedios para tales inhibidores, o tener otras utilidades como se describen a continuacion. Los inhibidores se uniran a localizaciones en la superficie o en una cavidad de la polimerasa de Orthomyxoviridae que tenga una geometna unica para la polimerasa de Orthomyxoviridae. Las composiciones que se unen a la polimerasa de Orthomyxoviridae pueden unirse con varios grados de reversibilidad. Aquellos compuestos que se unen sustancialmente irreversiblemente son candidatos ideales para su uso en este metodo de la invencion. Una vez marcadas, las composiciones de union sustancialmente irreversible son utiles como sondas para la deteccion de la polimerasa de Orthomyxoviridae Por consiguiente, la invencion se refiere a metodos para detectar polimerasa de Orthomyxoviridae en una muestra sospechosa de contener polimerasa de Orthomyxoviridae que comprende los pasos de: tratar una muestra sospechosa de contener polimerasa de Orthomyxoviridae con una composicion que comprende un compuesto de la invencion unido a un marcador; y observar el efecto de la muestra sobre la actividad del marcador. Los marcadores adecuados son bien conocidos en el campo del diagnostico e incluyen radicales libres estables, fluoroforos, radioisotopos, enzimas, grupos quimioluminiscentes y cromogenos. Los compuestos de la presente se marcan de manera convencional usando grupos funcionales como hidroxilo, carboxilo, sulfhidrilo o amino.

En el contexto de la invencion, las muestras sospechosas de contener polimerasa de Orthomyxoviridae incluyen materiales naturales o hechos por el hombre como organismos vivos; cultivos de tejidos o celulas; muestras biologicas como muestras de material biologico (sangre, suero, orina, lfquido cefalorraqrndeo, lagrimas, esputo, saliva, muestras de tejidos y similares); muestras de laboratorio; muestras de comida, agua o aire; muestras de bioproductos como extractos de celulas, particularmente celulas recombinantes que sintetizan una glicoprotema deseada; y similares. Tfpicamente, la muestra sera sospechosa de contener un organismo que produce la polimerasa de Orthomyxoviridae, frecuentemente un organismo patogeno como el virus Orthomyxoviridae. Las muestras pueden estar contenidas en cualquier medio, incluyendo agua y mezclas de solventes organicos/agua. Las muestras incluyen organismos vivos, como humanos, y materiales hechos por el hombre, como cultivos celulares.

El paso de tratamiento de la invencion comprende anadir la composicion de la invencion a la muestra o anadir un precursor de la composicion a la muestra. El paso de adicion comprende cualquier metodo de administracion como se describe en la presente.

Si se desea, la actividad de la polimerasa de Orthomyxoviridae despues de la aplicacion de la composicion puede observarse mediante cualquier metodo incluyendo metodos directos e indirectos para detectar la actividad de la polimerasa de Orthomyxoviridae. Se contemplan todos los metodos cuantitativos, cualitativos y semicuantitativos para determinar la actividad de la polimerasa de Orthomyxoviridae. Tfpicamente, se aplica uno de los metodos de deteccion descritos anteriormente, sin embargo, tambien es aplicable cualquier otro metodo, como la observacion de las propiedades fisiologicas de un organismo vivo.

Los organismos que contienen la polimerasa de Orthomyxoviridae incluyen el virus Orthomyxoviridae. Los compuestos de esta invencion son utiles en el tratamiento o profilaxis de infecciones por Orthomyxoviridae en animales o en el hombre.

En otra realizacion mas, en la presente se describen metodos para inhibir la ARN polimerasa dependiente del ARN de Orthomyxoviridae en una celula, que comprenden: poner en contacto una celula infectada con el virus Orthomyxoviridae con una cantidad eficaz de un compuesto de Formula III, o una sal, solvato o ester farmaceuticamente aceptable del mismo, por lo que se inhibe la polimerasa de Orthomyxoviridae . En un aspecto de esta realizacion, la celula tambien se pone en contacto con por lo menos un agente terapeutico adicional. En ciertas realizaciones del metodo descrito en la presente, la ARN polimerasa dependiente del ARN de Orthomyxoviridae puede ser una ARN polimerasa dependiente del ARN de virus de la gripe A, una ARN polimerasa dependiente del ARN del virus de gripe B, una ARN polimerasa dependiente del ARN del virus de gripe C o mezclas de las mismas.

En otra realizacion mas, en la presente se describen metodos para inhibir la polimerasa de Orthomyxoviridae en una celula, que comprende: poner en contacto una celula infectada con el virus Orthomyxoviridae con una cantidad eficaz de un compuesto de Formula III, o una sal, solvato o ester farmaceuticamente aceptable del mismo, y por lo menos un agente terapeutico activo adicional seleccionado del grupo que consiste de interferones, analogos de ribavirina, inhibidores de la neuramidasa viral, inhibidores de la neuramidasa viral, bloqueadores de los canales ionicos M2, inhibidores de ARN polimerasas dependientes del ARN de Orthomyxoviridae, sialidasas y otros farmacos usados para tratar las infecciones por virus de Orthomyxoviridae.

En otro aspecto, en la presente se describen procesos y nuevos productos intermedios divulgados en la presente que son utiles para preparar compuestos de Formula III de la invencion.

En otros aspectos, se describen en la presente nuevos metodos para la smtesis, analisis, separacion, aislamiento, purificacion, caracterizacion y ensayo de los compuestos de esta invencion.

Tambien se describen en la presente productos metabolicos in vivo de los compuestos descritos en la presente, en la medida en que dichos productos son nuevos y no obvios sobre la tecnica anterior. Tales productos pueden resultar por ejemplo de la oxidacion, reduccion, hidrolisis, amidacion, esterificacion y similares del compuesto administrado, principalmente debido a procesos enzimaticos. Por consiguiente, en la presente se describen compuestos nuevos y no obvios producidos por un proceso que comprende poner en contacto un compuesto de esta invencion con un mairnfero durante un penodo de tiempo suficiente para producir un producto metabolico del mismo. Tales productos se identifican tfpicamente preparando un compuesto de la invencion radiomarcado (por ejemplo, 14C o 3H), administrandolo por via parenteral en una dosis detectable (por ejemplo, mas de aproximadamente 0,5 mg/kg) a un animal como una rata, raton, cobaya, mono u hombre, dejando suficiente tiempo para que se produzca el metabolismo (normalmente entre 30 segundos y 30 horas) y aislando sus productos de conversion de la orina, sangre u otras muestras biologicas. Estos productos se afslan facilmente ya que estan marcados (otros se afslan mediante el uso de anticuerpos capaces de unirse a epftopos que sobreviven en el metabolito). Las estructuras de los metabolitos se determinan de manera convencional, por ejemplo, mediante analisis de MS o RMN. En general, el analisis de los metabolitos se hace de la misma manera que los estudios de metabolismo de farmacos convencionales bien conocidos por los expertos en la tecnica. Los productos de la conversion, siempre que no se encuentren de otra manera in vivo, son utiles en ensayos de diagnostico para la dosificacion terapeutica de los compuestos de la invencion incluso si no poseen actividad inhibidora de la polimerasa de Orthomyxoviridae propia.

Se conocen recetas y metodos para determinar la estabilidad de compuestos en secreciones gastrointestinales sustitutas. Los compuestos se definen en la presente como estables en el tracto gastrointestinal, donde menos de aproximadamente el 50 por ciento molar de los grupos protegidos se desprotegen en jugo intestinal o gastrico sustituto tras la incubacion durante 1 hora a 37° C. El simple hecho de que los compuestos sean estables para el tracto gastrointestinal no significa que no puedan hidrolizarse in vivo. Los profarmacos tfpicamente seran estables en el sistema digestivo, pero pueden hidrolizarse sustancialmente al farmaco parental en la luz digestiva, el tugado u otro organo metabolico, o dentro de las celulas en general.

EJEMPLOS

Se usan ciertas abreviaturas y acronimos para describir los detalles experimentales. Aunque la mayona de estos senan comprendidos por un experto en la tecnica, la Tabla 1 contiene una lista de muchas de estas abreviaturas y acronimos.

Tabla 1. Lista de abreviaturas acronimos.

Preparacion de compuestos (Los compuestos 1-5, 9, 11, 13-17 son ejemplos de referenda)

Compuesto 1: (2S,3R,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetif)-2-(2,4-bis(metiltio)imidazo[1,2-f][1,2.4]triazin-7-il)-3-fluorotetrahidrofuran-2-ol

A una mezcla de 7-bromo-2,4-bis(metiltio)imidazo [1,2- f ][1,2,4] triazina (2,5 g, 7,57 mmol) en THF (30 ml) a -78° C se anadio gota a gota nBuLi (1,6 M en hexano, 6,15 ml, 9,84 mmol). Despues de agitar a -78° C durante 30 minutes, se anadio gota a gota (3R,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorodihidrofuran-2(3H)-ona (2,43 g, 8,33 mmol)) en THF (5 ml). Despues de agitar a -78° C durante 3 horas, la mezcla se dejo calentar a temperatura ambiente. La mezcla se agito luego a temperatura ambiente durante 30 minutos y despues se inactivo con NH4Cl saturado. La reaccion se extrajo con acetato de etilo. Las capas se separaron y las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentro para proporcionar el producto bruto, que se purifico por cromatograffa ultrarrapida en columna con acetato de etilo/hexanos para proporcionar el compuesto deseado (2S,3R,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-2-(2),4-bis(metiltio)imidazo[1,2-f][1,2.4]triazin-7-il)-3-fluorotetrahidrofuran-2-ol (1) (2 g, 48%) como espuma amarilla. Ms (m/z): 543.2 [M+H]+.

Compuesto 2: 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-2,4-bis(metiltio)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina

A una solucion de (2S,3R,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-2-(2,4-bis(metiltio)imidazo[1,2-f][1,2.4]triazin-7-il)-3-fluorotetrahidrofuran-2-ol (1) (300 mg, 0,55 mmol) en diclorometano (3 ml) a -78° C se le anadio BF3-OEt2 (1,20 ml, 8,81 mmol) gota a gota, seguido de la adicion de EtaSiH (1,52 ml, 8,81 mmol). La reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente y se agito durante 2 horas y luego se inactivo con NaHCO3 saturado y luego se extrajo con diclorometano. Las capas organicas se separaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para proporcionar el producto bruto, que se purifico por cromatograffa ultrarrapida en columna con acetato de etilo/hexanos para proporcionar el compuesto deseado 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-2,4-bis(metiltio)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina (2) (218 mg, 75%). MS (m/z): 527.2 [M+H]+.

Compuesto 3: 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-2-(metiltio)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-amina

Se calento 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-2,4-bis(metiltio)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina (2) (390 mg, 0,74 mmol) en amomaco lfquido (120 ml) a 60° C en una bomba de acero durante 18 horas. La bomba se enfrio a temperatura ambiente y la reaccion se purifico por cromatograffa ultrarrapida en columna con acetato de etilo/hexanos para proporcionar el compuesto deseado 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-2-(metiltio)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-amina (3) (330 mg, 89%). MS (m/z): 496.2 [M+H]+

Compuesto 4: 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-2-(metilsulfonil)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-amina

A una solucion de 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-2-(metiltio)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-amina (3) (300 mg, 0,57 mmol) en diclorometano (10 ml) a 0° C se anadio acido 3- cloroperbenzoico (MCPBA, 77%) (627 mg, 3,42 mmol) en una porcion. La reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente y se agito durante 2 horas. La reaccion se inactivo con una solucion de NaS2O3 al 20% en H2O (15 ml) y se dejo agitar durante 20 minutos. Las capas se separaron y la solucion acuosa se extrajo con diclorometano. Las capas organicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado y salmuera, y luego se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para proporcionar una mezcla bruta que se purifico adicionalmente mediante cromatograffa en columna de gel de sflice con acetato de etilo/diclorometano para proporcionar el producto deseado 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-2-(metilsulfonil)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-4- amina (4) (276 mg, 87%) como aceite claro. MS (m/z): 528.1 [M+H]+.

Compuesto 5: 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina-2,4-diamina

Se calento 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-2-(metilsulfonil)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-amina (4) (276 mg, 0,52 mmol) en amomaco lfquido (100 ml) a 110° C durante 26 horas en una bomba de acero. La bomba se enfrio a temperatura ambiente y la reaccion bruta se purifico por cromatograffa ultrarrapida en columna con acetato de etilo/diclorometano para proporcionar el compuesto deseado 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina-2,4-diamina (5) (185 mg, 78%). MS (m/z): 465.3 [M+H]+.

Compuesto 6: (2S,3S,4R,5R)-5-(2,4-diaminoimidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-fluoro-2-(hidroximetil))tetrahidrofuran-3-ol

A una solucion de 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina-2,4-diamina (5) (145 mg, 0,31 mmol) en acido acetico (10 ml) se le anadio 10% de Pd/C Degussa tipo E101 NE/W (290 mg). La atmosfera de reaccion se intercambio por H2 (g) y la reaccion se agito durante 18 horas. El catalizador se elimino por filtracion y la mezcla se concentro a presion reducida. El producto bruto se seco para proporcionar el producto deseado (2S,3S,4R,5R)-5-(2,4-diaminoimidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (6) (85 mg, 96%) como un solido blanco. MS (m/z): 285.2 [M+H]+.

1H NMR (400 MHz, CD3OD): 87.45 (s, 1H), 5.44-5.38 (m, 1H), 5.24-5.11 (d, J =, 1H), 4.38-4.33(m, 1H), 3.98 (s, 1H), 3.91 -3.70 (m 2H).

19F (376 MHz, CD3OD): 8 (-199.86)-(-200.13) (m)

Compuesto 7: 2-amino-7-(2S,3S,4R,5R)-3-fluoro-4-hidroxi-5-(hidroximeti)tetrahidrofuran-2-i)imidazo[1.2- f][1,2,4]triazin-4(3H)-ona

A una solucion de (2S,3S,4R,5R)-5-(2,4-diaminoimidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (6) (310 mg, 1,09 mmol) en 800 ml de agua se anadio adenosina deamina a de bazo bovino tipo IX (Cas N° 9026-93-1, 205 pl). La solucion se coloco en un bano de agua a 37° C durante 16 horas. La solucion se concentro y el compuesto final se cristalizo por separado de las impurezas usando agua como solvente de cristalizacion. Los solidos se recogieron y se secaron para proporcionar 2-amino-7-(2S,3S,4R,SR)-3-fluoro-4-hidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)imidazo[1.2-f|[1,2,4]triazin-4(3H)-ona (7) (246 mg, 80%) como un solido blanquecino puro. MS (m/z): 286.2 [M+H]+.

1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 811.27 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 6.24 (s, 2H), 5.43-5.42 (m, 1H), 5.26-5.20 (d, J = 22.8 Hz, 1H), 5.09-4.85 (m, 2H), 4.14-4.09 (m, 1H), 3.77 (s, 1H), 3.69 - 3.51 (m, 2H).

19F (376 MHz, DMSO-d6): 8 (-196.68)-(-196.94) (m)

Compuesto 8: tetrahidrogeno trifosfato de ((2R,3R,4R,SS)-5-(2-amino-4-oxo-3,4-dihidroimidazo[1,2-fl[1,2,4]triazin- 7-il)-4-fluoro-3-hidroxi-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metilo

Se disolvio 2-amino-7-(2S,3S,4R,5R)-3-fluoro-4-hidroxi-5-(hidroximetil)tetrahidrofuran-2-il)imidazo[1.2-f][1,2,4]triazin-4(3H)-ona (7) (12 mg, 0,042 mmol) en trimetilfosfato (1 ml) en una atmosfera inerte (N2). Se anadio oxicloruro de fosforo (58 mg, 0,378 mmol) y la mezcla se agito a 0° C durante 2 horas y a temperatura ambiente durante 2 horas. La monitorizacion por columna de intercambio de iones analttica determino el tiempo en el que se formo > 80% de monofosfato. La solucion se enfrio a 0° C y se anadio una solucion de tributilamina (0,15 ml, 0,63 mmol) y pirofosfato de trietilamonio (0,25 g, 0,55 mmol) en DMF anhidro (1 ml). La mezcla de la reaccion se agito a 0° C durante 2,5 horas y luego se inactivo mediante la adicion de solucion de bicarbonato de trietilamonio 1 N en H2O (6 ml). La mezcla se concentro a presion reducida y el residuo se volvio a disolver en H2O. La solucion se sometio a cromatograffa de intercambio ionico para producir el producto deseado tetrahidrogeno trifosfato de ((2R,3R,4R,SS)-5-(2-amino-4-oxo-3,4-dihidroimidazo[1,2-fl[1,2,4]triazin-7-il)-4-fluoro-3-hidroxi-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metilo (8)(como la sal de tetratrietilamonio) (11 mg, 28% de rendimiento). MS (m/z): 526.0 [M+H]+.

1H NMR (400 MHz, D2O): 87.53 (s, 1H), 5.43-5.37 (d, J = 24.8 Hz, 1H), 5.29-5.15 (d, J = 55.2, 1H), 4.52 -3.47 (m, 4H).

19F (376 MHz, D2O): 8 (-197.33)-(-197.60) (m, IF)

31P (162 MHz, D2O) 8 (-10.66)-(-10.78) (d, J = 48.4 Hz, IP), (-11.070)-(-11.193) (d, J = 49.2 Hz, IP), (-22.990)-(-23.236) (m, IP).

HPLC intercambio ionico: Solvente A: Agua; Solvente B: bicarbonato de trietilamonio 1M.

0-50% durante 12 minutos, luego 100% durante 5 minutos, luego de vuelta a 0% en 5 minutos.

Columna: Dionex, DNAPac PA-100, 4x250mm.

T^r = 12.04 min

Compuesto 9: 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina-4-amina

A una solucion de 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-2-(metilsulfonil)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-amina (4) (63 mg, 0,12 mmol) en THF (5 ml) a -78° C se le anadio LiBHEt3 (1,0 M en THF, 4,78 ml, 4,78 mmol) gota a gota. La reaccion se calento a temperatura ambiente y se agito a temperatura ambiente durante 31 horas. La mezcla de la reaccion se inactivo con agua con hielo y se extrajo con acetato de etilo. La solucion organica se lavo con salmuera y se concentro para dar una mezcla bruta que se disolvio en CH3OH y se concentro al vado (3x). El producto bruto se purifico por cromatograffa en gel de silice con acetato de etilo/diclorometano para proporcionar el producto deseado 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-ilo)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina-4-amina (9) (50 mg, 95% de rendimiento). Ms (m/z): [M+H]+ 450.3.

Compuesto 10: (2S,3S,4R,5R)-5-(4-aminoimidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofurano-3-ol

A una solucion de 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina-4-amina (9) (50 mg, 0,11 mmol) en acido acetico (5 ml) se anadio Pd/C al 10% (100 mg). La atmosfera de los recipientes de reaccion se cambio por hidrogeno y la reaccion se agito a temperatura ambiente durante la noche. La reaccion se filtro a traves de celite y el lavado con CH3OH. El filtrado se concentro para dar una mezcla bruta que se purifico por cromatograffa en columna de gel de sflice usando CH3OH/diclorometano para proporcionar el producto deseado (2S,3S,4R,SR)-5-(4-aminoimidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (10) como un solido blanco (23 mg, 77% de rendimiento). MS (m/z): 270,2 [M+H]+.

1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 68.22 (d, J = 26 Hz, 2 H), 8.07 (s, 1 H), 7.67 (s, 1 H), 5.50 - 5.48 (d, J = 6.4,1 H), 5.42 - 5.36 (m,1 H), 5.19 - 5.03 (m, 1 H), 4.88 - 4.85 (m, 1 H), 4.19 - 4.11 (m, 1H), 3.83 - 3.81 (m, 1 H), 3.72 - 3.67 (m, 1 H), 3.54 -3.50 (m, 1 H).

19F (376 MHz, CD3OD): 6 (-196.69)-(-196.95) (m)

Compuesto 11: 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-2-fluoroimidazo[ 1,2-f][1,2,4]triazin-4-amina

Se agito 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina-2,4-diamina (5) (140 mg, 0,30 mmol) en 4 ml de 50% de HF/piridina en un bano a -10° C y se anadieron 45 pl (0,38 mmol) de nitrito de t-butilo. La reaccion se agito a baja temperatura durante 1 hora. La reaccion se inactivo mediante la adicion de 50 ml de H2O y la capa acuosa se extrajo 2x 50 ml de diclorometano. Los organicos combinados se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron. El residuo se cromatografio en 6 g de gel de sflice para proporcionar el compuesto deseado 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-2-fluoroimidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-4-amina (11) (50 mg), 36%). MS (m/z): 468.2 [M+H]+. 1H NMR (400 MHz, CDCh): 7.60 (s, 1 H), 7.3-7.2 (bm, 10H), 7.14 (bs, 1H), 6.37 (bs, 1H), 5.46 - 5.48 (dd, J = 23.2, 2.4 Hz, 1 H), 5.29 - 5.15 (m,1 H), 4.72 (m, 1 H), 4.56 - 4.52 (m, 2H), 4.29 (m, 2H), 3.83 - 3.81 (m, 1 H), 3.65 - 3.63 (m, 1 H).

19F (376 MHz, CDCl3): 6 -69.1 (s), (-197.7)-(-198.0) (m).

Compuesto 12: (2R,3R,4R,5S)-5-(4-amino-2-fluoroimidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-7il)-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol

A una solucion de 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetramdronjran-2-il)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina-4-amina (11) (50 mg, 0,11 mmol) en acido acetico (8 ml), se anadiO Pd/C al 10% (100 mg). La atmOsfera del recipiente de reacciOn se intercambiO por hidrOgeno y la reacciOn se agitO a temperatura ambiente durante la noche. La reacciOn se filtrO a traves de celite y se lavO con acido acetico y luego CH3OH. El filtrado se concentrO para dar una mezcla bruta que se purificO por HPLC de fase inversa para proporcionar el producto deseado (2R,3R,4R,5S)-5-(4-amino-2-fluoroimidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (12) como un sOlido blanco (26 mg, 84%). MS (m/z): 288.1 [M+H]+.

1H NMR (400 MHz, CD3OD): 67.66 (s, 1 H), 5.47 - 5.41(dd, J = 23.6, 2.4 Hz, 1 H), 5.21 - 5.06 (m,1 H), 4.35 - 4.27 (m, 1 H), 3.93 (bm, 1 H), 3.88 (m, 1H), 3.68 (m, 1 H).

19F (376 MHz, CD3OD): 6 -72.15(s), (-199.39)-(-196.69) (m)

Compuesto 13: 7-bromo-4-etoxi-2-(metiltio)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina

A una mezcla de 7-bromo-2,4-bis(metiltio)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina (1,0 g, 3,45 mmol) en EtOH (25 ml) a temperatura ambiente, se anadiO NaOEt (21% en EtOH, 1,28 ml, 3,45 mmol). Despues de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, la reacciOn se inactivO con AcOH (1 ml). Los solventes se eliminaron a presiOn reducida, y la mezcla se repartiO entre CH2Cl2 y A salmuera saturada. Los organicos se separaron, se secaron sobre Na2SO4, los sOlidos se eliminaron por filtraciOn y el solvente se eliminO a presiOn reducida. El material bruto se purificO por cromatograffa ultrarrapida en columna con acetato de etilo/hexanos para proporcionar el compuesto deseado 7-bromo-4-etoxi-2-(metiltio)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina (13) (791 mg, 79%) como una espuma amarilla. MS (m/z): 288.9/290.8 [M+H]+.

Compuesto 14: (2S,3R,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-2-(4-etoxi-2-(metiltio)imidazo[1,2-f][1,2.4]triazin-7-il)-3-fluorotetrahidrofuran-2-ol

A una mezcla de 7-bromo-4-etoxi-2-(metiltio)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina (13) (917 mg, 3,17 mmol) en THF (15 ml) a -78° C se le anadiO LaCl3*2LiCl (0,6 M en T^hF, 5,28 ml, 3,17 mmol) seguido de la adiciOn gota a gota de nBuLi (2,5 M en hexano, 1,27 ml, 3,17 mmol). Despues de agitar a -78° C durante 30 minutos, se anadiO gota a gota (3R,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorodihidrofuran-2(3H)-ona (805 mg, 2,44 mmol) en THF (10 ml). Despues de agitar a -78° C durante 30 minutos y dejar que la mezcla se calentase a temperatura ambiente, la mezcla se agitO a temperatura ambiente durante 30 minutos y luego se inactivO con AcOH. La reacciOn se extrajo con acetato de etilo. Las capas se separaron y las capas organicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para proporcionar el producto bruto, que se purificO por cromatograffa ultrarrapida en columna con acetato de etilo/hexanos, para proporcionar el compuesto deseado (2S,3R,4R,5R)-4- (benciloxi)-5-(benciloximetilo)-2-(4-etoxi-2-(metiltio)imidazo[1,2-f][1,2.4]triazin-7-il)-3-fluorotetrahidrofuran-2-ol (14) (244 mg, 19%) como espuma amarilla. MS (m/z): 541.1 [M+H]+.

Compuesto 15: 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-4-etoxi-2- (metiltio)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina

A una solucion de (2S,3R,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-2-(4-etoxi-2-(metiltio)imidazo[1,2-f][1,2.4]triazin-7-il)-3-fluorotetrahidrofuran-2-ol (X) (244 mg, 0,45 mmol) en CH2O2 (5 ml) a 0° C se le anadio BF3-OEt2 (900 |jl, 3,5 mmol) gota a gota, seguido de la adicion de Et3SiH (600 jl, 3,5 mmol). La reaccion se dejo calentar a temperatura ambiente y se agito durante 3 horas. La reaccion se inactivo con NaHCO3 saturado y se extrajo con CH2O2. Las capas organicas se separaron, se lavaron con salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para proporcionar el producto bruto, que se purifico por cromatograffa ultrarrapida en columna con acetato de etilo/hexanos, para proporcionar el compuesto deseado 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-4-etoxi-2-(metiltio)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina (15) (107 mg, 46%). ^m S (m/z): 525.1 [M+H]+.

Compuesto 16: 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-4-etoxi-2-(metilsulfonil)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina

A una solucion de 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-4-etoxi-2-(metiltio)imidazo[1],2-f][1,2,4]triazina (15) (107 mg, 0,204 mmol) en CH2O2 (3 ml) a temperatura ambiente se le anadio acido 3-cloroperbenzoico (MCPBA, 77%) (100 mg), 0,443 mmol) en una porcion. La reaccion se agito a temperatura ambiente durante 4 horas. La reaccion se inactivo con una solucion de NaS2O3 al 20% en H2O (5 ml) y se dejo agitar durante 20 minutos. Las capas se separaron y la solucion acuosa se extrajo con CH2Ch. Las capas organicas combinadas se lavaron con NaHCO3 saturado, salmuera, se secaron sobre Na2SO4 y se concentraron para proporcionar 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-4-etoxi-2-(metilsulfonil)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina bruta (16), que se llevo a cabo sin purificacion. MS (m/z): 557.1 [M+H]+. Compuesto 17: 2-azido-7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-4-etoxiimidazo[1,2-f][1,2,4]triazina

A una solucion de NaN3 (66 mg, 1,01 mmol) en DMSO (5 ml) se anadio 7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofurano2-il)-4-etoxi-2-(metilsulfonil)imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina (16) (113 mg, 0,203 mmol) en una porcion. La reaccion se dejo agitar a temperatura ambiente durante 16 horas. La mezcla se repartio entre EtOAc/H2O. Los organicos se separaron y se secaron sobre Na2SO4, y se purificaron por cromatograffa en gel de sflice con EtOAc/hexanos para proporcionar 2-azido-7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-4-etoxiimidazo[1,2-f][1,2,4]triazina (17) (93 mg, 88%) como un solido blanquecino. MS (m/z): 520.05 [M+H]+.

Compuesto 18: (2R,3R,4R,SS)-5-(2-amino-4-etoxiimidazo[1,2-f][1,2,4]triazina-7-il)-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol

Una solucion de 2-azido-7-((2S,3S,4R,5R)-4-(benciloxi)-5-(benciloximetil)-3-fluorotetrahidrofuran-2-il)-4-etoxiimidazo[1,2-f][1,2,4]triazina (17) (93 mg, 0,18 mmol) en CH3OH (5 ml) se purgo con argon, y se anadio Pd/C al 10% (100 mg). El recipiente de reaccion se evacuo y se volvio a llenar con H2 tres veces. La mezcla de la reaccion se dejo luego agitar bajo una atmosfera de hidrogeno durante 16 horas. Los solidos se filtraron y los organicos se eliminaron a presion reducida para dar un material bruto que se purifico por HPLC para dar (2R,3R,4R,5R)-5-(2- amino-4-etoxi-imidazo[1,2-f][1,2,4]triazina-7-il)-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol (18) (27 mg, 48%) como un solido blanco. MS (m/z): 314.10 [M+H]+.

1H NMR(400 MHz, DMSO-d6): 67.526 (s, 1 H), 8.07 (s, 1 H), 6.55 (s, 2 H), 5.43- 5.41 (d, J = 6.46 Hz,1 H), 5.33 -5.27 (dd, J = 2.25 and 22.69 Hz, 1 H), 5.11 -4.96 (m, 1 H), 4.84 (t, J = 5.58 Hz, 1 H), 4.52 - 4.47 (q, J = 7.04 Hz, 2H), 4.17-4.07 (m, 1H), 3.78-3.76 (m, 1H), 3.69-3.65 (m, 1H), 3.511-3.45 (m, 1H), 1.37 (t, J = 7.04 Hz, 3H).

19F (376 MHz, DMSO-d6): 6 (-196.79)-(-197.05) (m)

Compuesto 19: (2R,3R,4R,SS)-5-(2-amino-4-metoxiimidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol

Se preparo (2R,3R,4R,5S)-5-(2-amino-4-metoxiimidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-fluoro-2-(mdroximetil)-tetrahidrofuran-3-ol (19) de una manera directamente analoga a la usada para la preparacion de (2R,3R,4R,5S)-5-(2-amino-4-etoxiimidazo[1,2-f][1,2,4]triazina-7-il)-4-fluoro-2-(hidroximetil)tetrahidrofuran-3-ol, excepto que se uso NaOMe en MeOH en lugar de NaOEt en EtOH en el primer paso de la smtesis. MS (m/z): 300.18 [M+H]+.

1H NMR (400 MHz, CD3OD): 67.56 (s, 1H), 5.46 (dd, J = 24, 2.4 Hz, 1H), 5.15 (ddd, J = 54.8, 4.4, 2.4 Hz, 1H), 4.34 (ddd, J = 4.4, 8, 20.4 Hz, 1H), 4.15 (s, 3H), 3.97 (m, 1H), 3.91 (dd, J = 2.4, 12.4 Hz, 1H), 3.72 (dd, J = 4.4, 12 Hz, 1H).

19F (376 MHz, CD3OD): 6 (-198.98)-(-199.25) (m).

Ensayos anti-gripe

Ensayo de Inhibicion de ARN Polimerasa de Gripe (IC50)

El virus purificado de gripe A/PR/8/34 (H1N1) se obtuvo de Advanced Biotechnologies Inc. (Columbia, MD) como suspension en tampon PBS. Los viriones se interrumpieron por exposicion a un volumen igual de Triton X-100 al 2% durante 30 minutos a temperatura ambiente en un tampon que contema Tris-HCl 100 mM, pH 8, KCl 200 mM, ditiotreitol [DTT] 3 mM, glicerol al 10%, MgCh 10 mM, 2 U/ml de inhibidor de RNasin ribonucleasa, y 2 mg/ml de Lisolecitina tipo V (Sigma, Saint Louis, MO). El lisado del virus se almaceno a -80° C en alfcuotas.

Las concentraciones se refieren a concentraciones finales a menos que se mencione lo contrario. Los inhibidores de analogos de nucleotidos se diluyeron 3 veces en serie en agua y se anadieron a la mezcla de la reaccion que contema 10% de lisado de virus (v/v), Tris-HCl 100 mM (pH 8,0), KCl 100 mM, DTT 1 mM, glicerol al 10%, Triton-101 al 0,25% (reducido), MgC^5 mM, 0,4 U/ml de RNasin, y 200 pM de cebador de dinucleotido ApG (TriLink, San Diego CA). Las reacciones se iniciaron mediante la adicion de una mezcla de sustrato de trifosfato de ribonucleotido (NTP) que contiene un NTP a-33P marcado y 100 pM de los otros tres NTP naturales (PerkinElmer, Shelton, CT). El radiomarcador utilizado para cada ensayo coincidio con la clase del analogo de nucleotido analizado. Las concentraciones para el NTP natural limitante son 20, 10, 2 y 1 pM para ATP, CTP, UTP y GTP, respectivamente. La relacion molar de NTP no radiomarcado:radiomarcado estaba en el intervalo de 100-400:1.

Las reacciones se incubaron a 30° C durante 90 minutos y luego se colocaron en papel de filtro DE81. Los filtros se secaron al aire, se lavaron con M Na2HPO40,125 (3x), agua (1x) y EtOH (1x), y se secaron al aire antes de exponerlos a un generador de imagenes de fosforo Typhoon y la radioactividad se cuantifico en un Typhoon Trio (GE Healthcare, Piscataway NJ)). Se calcularon los valores de IC50 para los inhibidores ajustando los datos en GraphPad Prism con una respuesta de dosis sigmoidal con ecuacion de pendiente variable, fijando los valores de Ymax e Ymin en 100% y 0%. Se determino que el IC50 para el tetrahidrogeno trifosfato de ((2R,3R,4R,5S)-5-(2-amino-4-oxo-3,4-dihidroimidazo[1,2-f][1,2,4]triazin-7-il)-4-fluoro-3-hidroxi-3-hidroxitetrahidrofuran-2-il)metilo (Compuesto 8) era 2,8 pM. Ensayo de infeccion por la gripe de celulas epiteliales bronquial/traqueal humana normal (EC50)

Se sembraron celulas epiteliales bronquiales/traqueales humanas normales (Lonza, Basilea Suiza) en placas de 384 pocillos a una densidad de 4000 celulas por pocillo en medio BEGM suplementado con factores de crecimiento (Lonza, Basilea Suiza). El medio se retira al dfa siguiente y las celulas se lavan tres veces con 100 pl de RPMI BSA al 1% (RPMI-BSA). Se anaden 30 pl de RPMI-BSA a las celulas despues de eso. Los compuestos se diluyen en serie 3 veces en DMSO, y se estampan en las placas 0,4 pl de diluciones de compuestos. Se anaden el virus de la gripe A HK/8/68 (Advanced Biotechnology Inc., Columbia, M^d , 13.5 MOI), PC/1/73 (ATCC Manassas, VA, 0.3 MOI) y el virus de la gripe B/Lee/40 ((ATCC Manassas, VA, 10 MOI) a las celulas en 10 pl de medio RPMI-BSA suplementado con 8 pg/ml de tripsina (Worthington, Lakewood, NJ). Despues de una incubacion de cinco dfas, se anaden a las celulas 40 pl de tampon que contiene Mes 66 mM pH 6,5, CaCl 8mM, NP-40 al 0,5%y 100 pM de sustrato de neuramidasa acido (2'-(4-metilumbeliferil)-a-DN-acetilneurammico, Sigma Aldrich, St. Luis, MO). La fluorescencia del producto de hidrolisis se lee usando excitacion a 360 nm y emision a 450 nm despues de 1 hora de incubacion a 37° C. Los valores de EC50se calculan mediante regresion no lineal de multiples conjuntos de datos.

La siguiente tabla resume los EC50 determinados por este ensayo:

Aunque la invencion se ha descrito con referencia a varias realizaciones y tecnicas espedficas y preferidas, se entendera que no se pretende que la invencion se limite a esas realizaciones. Un experto en la tecnica entendera que pueden realizarse muchas variaciones y modificaciones mientras se mantienen dentro del alcance de la invencion como se define en las reivindicaciones adjuntas. Se pretende que la invencion cubra todas las alternativas, modificaciones y equivalentes, que pueden incluirse dentro del alcance de la presente invencion como se define en las reivindicaciones adjuntas.

Claims (6)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de Formula III:

en la que

R6 *8 es NH2, OMe, OCH2CH3 o =O; y

R9 es NH2, H o F;

o una sal, solvato o ester farmaceuticamente aceptable del mismo.

2. Una composicion farmaceutica que comprende una cantidad terapeuticamente eficaz de un compuesto de la reivindicacion 1 , y un portador o excipiente farmaceuticamente aceptable.

3. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 2 que comprende ademas por lo menos un agente terapeutico adicional.

4. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 3, en la que el por lo menos un agente terapeutico adicional se selecciona del grupo que consiste de un corticosteroide, un modulador de transduccion de senales antiinflamatorias, un broncodilatador agonista del p2-adrenorreceptor, un anticolinergico, un agente mucolftico, solucion salina hipertonica, un agente que inhibe la migracion de celulas proinflamatorias al sitio de la infeccion, y mezclas de los mismos.

5. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 4, en la que el por lo menos un agente terapeutico adicional es un inhibidor de la hemaglutinina viral, un inhibidor de la neuramidasa viral, un inhibidor del canal ionico M2, un inhibidor de la ARN polimerasa dependiente del ARN de Orthomyxoviridae o una sialidasa.

6. La composicion farmaceutica de la reivindicacion 5, en la que el por lo menos un agente terapeutico adicional es un interferon, ribavirina, oseltamivir, zanamivir, laninamivir, peramivir, amantadina, rimantadina, CS-8958, favipiravir, AVI-7100, inhibidor de la proteasa alfa-1 o DAS 181.