EA021838B1

EA021838B1 - Производные 2,5-пиперазиндиона в качестве ингибиторов apaf-1

Info

Publication number: EA021838B1
Application number: EA201270215A
Authority: EA
Inventors: Анхель Мессегуер Пейроч; Алехандра Моуре Фернандес; Даниэль Гонсалес Пиначо; Исабель Масип Масип; Энрике Перес Пая; Нативидад Гарсиа Виллар; Эстер Монльео Мас; Хуанло Катена Руис
Original assignee: Лабораториос Салват, С.А.
Priority date: 2009-07-30
Filing date: 2010-07-29
Publication date: 2015-09-30
Also published as: JP2013500314A; EP2460798A2; NZ598125A; EP2460798B1; AU2010277505B2; EA201270215A1; KR101786761B1; KR20120052354A; BR112012002134B8; US20120122868A1; TR201907804T4; US9040701B2; WO2011012746A2; BR112012002134A2; BR112012002134B1; CA2769408A1; WO2011012746A3; CN102574818A; JP5694320B2; IN2012DN01378A

Abstract

Производные 2,5-пиперазиндиона формулы (I) являются ингибиторами фактора 1 (Apaf-1), активирующего апоптотическую пептидазу, поэтому они являются полезными в качестве активных фармацевтических ингредиентов для профилактики и/или лечения патологического и/или физиологического состояния, связанного с увеличением апоптоза.

Description

Настоящее изобретение относится к соединениям для профилактики и/или лечения расстройств, вызываемых гибелью апоптотических клеток, или для профилактики дегенеративных процессов, вызываемых гибелью апоптотических клеток.

Состояние уровня техники

Апоптоз или программируемая гибель клеток является сложным физиологическим явлением, вовлекаемым в поддержание гомеостаза клеток. Апоптоз регулируется различными клеточными контрольными механизмами вследствие их ключевой роли в поддержании здоровья. Многие патологии основаны на апоптозной дисфункции.

Следовательно, избыточная гибель апоптотических клеток может оказывать отрицательное влияние на функциональность ткани (например, гибель кардиомиоцитов в случаях инфаркта миокарда), тогда как избыточно ингибируемый апоптоз влечет за собой нерегулируемое выживание клеток (например, неопластические процессы). Клеточные компоненты, регулирующие апоптоз, находятся в постоянном динамическом равновесии в здоровых клетках. Для апоптотического каспазного каскада имеются по крайней мере два пути вполне характеризуемого активирования. Один из них, внешний путь, активируется внеклеточной сигнализацией и требует участия специфических мембранных рецепторов. Свойственный путь соответствует клеточному стрессу, токсическим агентам, радиации, окисляющим агентам, Са²⁺ перегрузке, ДНК повреждению; он активируется в ответ на онкогенез и вовлекает митохондриальную дестабилизацию. В некоторых патофизиологических состояниях (например, при аноксии в клетках трансплантируемых органов, лечении токсическими веществами), апоптоз увеличивает и избыточное число смертей клеток, нанося вред функциональности пораженной ткани и подвергая риску ее выживание в некоторых случаях.

Механизмы индукции молекулярного апоптоза влекут за собой активирование белков с активностью протеазы, называемых каспазами, которые известны также как эффекторы апоптоза. Образование молекулярного комплекса, называемого апоптосомой, необходимо для обеспечения возможности активирования каспаз. Апоптосома образуется цитохромом с, про-каспазой-9 и фактором 1 активирования апоптотической пептидазы (АраГ-1). Было продемонстрировано, что ингибирование АраГ-1 ингибирует образование апоптосомного комплекса и что оно вызывает ингибирование апоптоза (измеряемое по активации каспазы 3). В анализах клеток, при которых апоптоз вызывается с помощью гипоксии (снижение концентрации кислорода в воздухе) или с помощью химических соединений, наблюдается увеличение выживания клеток, когда последние предварительно обрабатывались ингибиторами апоптоза.

Аналогичным образом, во время процесса удаления и трансплантации органа клетки подвергаются состоянию гипоксии, которое ведет к гибели клеток, подвергая риску жизнеспособность и функционирование органа. Поэтому, например, только 70% всех роговиц, предоставляемых для трансплантации, являются подходящими для имплантации. Это является следствием того, что во время хранения роговицы происходит гибель апоптотических клеток. Аналогичная ситуация имеет место с трансплантантами почек и сердца. На рынке в продаже имеются растворы для трансплантации органов, обеспечивающие исключительно буферные и стерильные условия окружающей среды, но они не содержат каких-либо активных молекул, которые предотвращают гибель апоптотических клеток.

Исследование механизмов, вовлекаемых в апоптоз, позволило идентификацию различных потенциальных фармакологических мишеней. Поэтому были спроектированы ингибиторы, действующие на различных уровнях апоптотического каскада, такие как факторы транскрипции, киназы, регуляторы обеспечения проницаемости митохондриальной мембраны и ингибиторы семейства каспаз.

Поскольку образование апоптосомы является ключевой стадией в апоптотическом каскаде и последующей активации каспаз, ингибирование активации АраГ-1 может оказывать большее воздействие на ингибирование апоптоза, чем другие исследуемые фармакологические мишени. В научной литературе имеются указания на терапевтическую роль ингибирования АраГ-1. Поэтому негативная трансдукция АраГ-1 доминанты с помощью аденовируса на животной модели Паркинсона была более эффективной, чем негативная трансдукция доминанты каспазы-1 с помощью аденовируса.

Документ Ж.) 2007060524 описывает производные [1,4]диазепан-2,5-диона следующей ниже формулы в качестве ингибиторов апоптоза

Документ Ж.) 2008009758 описывает соединения следующей ниже формулы в качестве ингибиторов иВС13-иЕУ взаимодействия, которые могут использоваться в приготовлении фармацевтических композиций для противоопухолевой терапии или для лечения и/или профилактики заболеваний, ассоциируемых с метаболическими путями, вовлекающими фермент ИВС13, метаболическими путями, вовлекающими фактор ΝΡ-кВ транскрипции, или путями, вовлекающими ΡΟΝΑ или ΚΑΌ6. Хотя они считаются структурно аналогичными соединениям настоящего изобретения, они имеют иное применение.

К-(СК₁В2)д-СО-М(Рз)-С(В4К₅)’СО-МН2

- 1 021838

Поэтому желательно создание новых соединений, которые являются ингибиторами Ара£-1.

Описание изобретения

Настоящее изобретение предоставляет новые соединения, производные 2,5-пиперазиндиона, формулы (I), обладающие Ара£-1 ингибирующей активностью.

Следовательно, первый аспект изобретения относится к соединениям формулы (I)

и их фармацевтически приемлемым солям, в которой

К1 выбраны из -(СН₂)_0-3-арила и -(СН₂)_0-3-гетероарила,

К2 выбран из -(СН₂)_0-3-арила, -(СН₂)_0-3-гетероарила, -(СН₂)_1-2-СН(арила)₂,

КЗ выбран из -С_1-5-алкила, -(СН₂)_1-3-гетероциклила, -(СН₂)_1-3-арила и -(СН₂)_1-3-гетеро арила,

К4 выбран из -Н, -(СНК7)_1-3-СО-ЯК5К6, -(СНК7)_1-3-СО-ОК5 и -(СН₂)_1-3-СО^СНК7СО]_тт₂, η представляет собой 1; т представляет собой 1;

К5 и К6 независимо выбраны из -Н, -С_1-5-алкила и -(СН₂)_0-3-арила,

К7 выбран из -Н и -С_1-5-алкила, где арил представляет собой фенил или нафтил;

гетероарил представляет собой 5-10-членную ароматическую кольцевую систему, содержащую по меньшей мере один кольцевой гетероатом, выбранный из О, 8 и Ν;

гетероциклил представляет собой насыщенную или частично ненасыщенную 5-10-членную кольцевую систему, содержащую по меньшей мере один гетероатом в кольце, выбранный из О, 8 и Ν; где С_1-5алкильная и гетероциклическая группы могут быть необязательно замещены одним или несколькими ОК5, где арильная и гетероарильная группы могут быть необязательно замещены одним или несколькими заместителями, выбранными независимо из галогена, СВ₃, ОК5 и NО₂, при условии, что, когда К2 представляет собой 2-(4-фторфенил)этил, К4 представляет собой -(СН₂)СО-№Н₂ и η является 1, тогда если К1 представляет собой 2-(4-фторфенил)этил, К3 не является 2-(4-метоксифенил)этилом, 2-(2пиридил)этилом или 2-(2,4-дихлорфенил)этилом, и если К1 представляет собой 2-(2,4-дихлорфенил)этил, К3 не является 2-(4-метоксифенил)этилом или 2-(2-пиридил)этилом.

В конкретном воплощении изобретения К1 представляет собой -(СН₂)_0-3-арил.

В еще одном конкретном воплощении изобретения К5 представляет собой -Н или -С_1-5-алкил.

В еще одном конкретном воплощении изобретения К6 представляет собой -Н.

В еще одном конкретном воплощении изобретения соединение формулы (I) представляет собой соединение следующей структуры:

- 2 021838

В еще одном конкретном воплощении изобретения соединение формулы (I) выбирают из группы, состоящей из следующих соединений:

Еще один аспект настоящего изобретения относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в профилактике и/или лечении патологического и/или физиологического состояния, связанного с увеличением апоптоза, где патологическое и/или физиологическое состояние, связанное с увеличением апоптоза, выбрано из предотвращения цитотоксичности, патологий вследствие условий гипоксии; глазных патологий; нейродегенеративных заболеваний; диабета; остеоартрита; артрита; воспаления и иммунодефицита.

Причем глазные патологии выбраны из группы, состоящей из повреждений, вызываемых глазной хирургией, возрастной макулярной дегенерацией, диабетической ретинопатией, пигментозного ретинита или глаукомы, или где цитотоксичность опосредуема химическими веществами, радиацией или акустической травмой.

Еще один аспект настоящего изобретения относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для производства лекарственного средства, предназначенного для профилактики и/или лечения патологического и/или физиологического состояния, связанного с увеличением апоптоза, в частности, одного из упомянутых выше состояний.

Причем глазные патологи выбраны из группы, состоящей из повреждений, вызываемых глазной хирургией, возрастной макулярной дегенерацией, диабетической ретинопатией, пигментозного ретинита или глаукомы, или где цитотоксичность опосредуема химическими веществами, радиацией или акустической травмой.

Еще один аспект настоящего изобретения относится к способу профилактики и/или лечения индивидуума или органа, страдающего или восприимчивого к страданию от патологического и/или физиологического состояния, ассоциируемого с увеличением апоптоза, особенно одного из упомянутых выше состояний, включающему введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли указанному индивидууму или органу вместе с достаточными количествами фармацевтически приемлемых эксципиентов.

Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для консервирования органов или клеток.

В другом аспекте изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для производства лекарственного средства, предназначенного для консервирования органов или клеток.

В еще одном аспекте изобретение относится к способу консервирования органов или клеток, включающему введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в указанный орган или клетку вместе с достаточными количествами фармацевтически приемлемых эксципиентов.

Предпочтительными являются соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли, особенно соединения формулы (I), описанные в качестве примеров или в качестве промежуточных соединений.

Соединения настоящего изобретения могут использоваться по одному или в сочетании с одним или более соединениями, которые полезны для профилактики и/или лечения патологического и/или физиологического состояния, связанного с увеличением апоптоза, особенно такого, как предотвращения цитотоксичности, особенно цитотоксичности, опосредуемой химическими веществами, физическими агента- 3 021838 ми, такими как радиация, акустическая травма, ожоги, или биологическими агентами, такими как вирусная инфекция гепатита; патологий вследствие условий гипоксии, таких как сердечный приступ или церебральный инфаркт; глазных патологий, таких как повреждения, вызываемые глазной хирургией, возрастная макулярная дегенерация, диабетическая ретинопатия, пигментозный ретинит или глаукома; нейродегенеративных заболеваний, таких как болезни Альцгеймера, Хантингтона, Паркинсона или амиотрофический рассеянный склероз; диабета, особенно консервирование островков Лангеранса, или ассоциируемой с диабетом цитотоксичности, такой как, например, нефротоксичности; остеоартрита; артрита; воспаления или иммунодефицита, такого как ассоциируемое со СПИДом истощение СИ4+ Т лимфоцитов.

Термин С_1-5 алкил, один или в сочетании, обозначает алкильную группу с прямой или разветвленной цепью, имеющую 1-5 атомов углерода.

Термин гетероциклил, один или в сочетании, обозначает насыщенный или частично ненасыщенный гетероцикл из 5-10 связей, содержащий один или более гетероатомов, выбранных из азота, кислорода и серы. Для целей данного изобретения гетероцикл может быть моноциклической или бициклической кольцевой системой, которая может включать конденсированные кольцевые системы. Примерами гетероциклических групп являются тетрагидрофуранил (ТГФ), дигидрофуранил, диоксанил, морфолил, пиперазинил, пиперидинил, 1,3-диоксоланил, имидазолидинил, имидазолинил, пирролидил, пирролидинил, тетрагидропиранил, дигидропиранил и аналогичные.

Термин арил, один или в сочетании, относится к моно- или полициклической ароматической кольцевой системе, содержащей кольцевые углеродные атомы. Предпочтительными арилами являются моноциклические или бициклические ароматические кольцевые системы из 5-10 членов, такие как фенил или нафтил, имеющие необязательно один или несколько заместителей, предпочтительно от одного до трех, выбранных независимо из галогена, СР₃, ОН, ОК5, ОСР₃, 8Н, 8К5, ΝΗ₂, ИНСОК5, ΝΟ₂, СИ, СОК5, СООК5, ОСОК5, СОИК5К6, -(СН₂)_0-3-ИК5К6, 8Ο₂ΝΗ₂, ИН8О₂СН₃, С_!-5-алкила, арила и гетероарила.

Термин гетероарил, один или в сочетании, относится к ароматическому или частично ароматическому гетероциклу, содержащему по меньшей мере один кольцевой гетероатом, выбранный из О, 8 и Ν. Гетероарилы, таким образом, включают гетероарилы, сконденсированные с другими классами колец, таких как арилы, циклоалкилы и гетероциклы, которые являются неароматическими. Примеры гетероарильных групп включают пирролил, изоксазолил, изотиазолил, пиразолил, пиридил, оксазолил, тиазолил, имидазолил, триазолил, фурил, тиенил, пиримидил, бензизоксазолил, бензоксазолил, бензотиазолил, дигидробензофуранил, индолинил, пиридазинил, индазолил, изоиндолил, дигидробензотиенил, индолизинил, хиназолинил, нафтиридинил, изобензилфуранил, бензимидазолил, бензофуранил, бензотиенил, хинолил, индолил, изохинолил, дибензофуранил, бензотиофенил, тетрагидробензотиофенил и аналогичные.

Выражение необязательно замещен(ный) одним или несколькими заместителями обозначает, что группа может быть незамещенной или замещенной одним или несколькими заместителями, предпочтительно 1, 2, 3 или 4 заместителями, при условии, что указанная группа имеет 1, 2, 3 или 4 положения, восприимчивых к замещению.

Термин фармацевтически приемлемые соли обозначает те соли, которые сохраняют эффективность и биологические свойства свободных оснований или свободных кислот и которые не вызывают дискомфорта в биологических ощущениях или в каких-либо других ощущениях.

Согласно изобретению соединения формулы (I) и их фармацевтически приемлемые соли полезны для профилактики и/или лечения патологического и/или физиологического состояния, связанного с увеличением апоптоза, за счет их АРАР-1 ингибирующей активности.

Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые здесь, имеют те же значения, что и значения, обычно понятные специалистам в области изобретения. В практике настоящего изобретения могут использоваться методы или способы и материалы, которые аналогичны или эквивалентны тем, что приведены в описании. В описании и пунктах формулы изобретения слово включает и его варианты не имеют целью исключить другие технические признаки, добавки, компоненты, стадии или стереоизомеры соединений, о которых идет речь. Специалисты в данной области техники, очевидно, сделают выводы о других объектах, преимуществах и признаках изобретения на основании частично описания и частично практического осуществления изобретения.

Соединения формулы (I) могут быть получены с помощью следующих различных методов, известных специалисту в области органического синтеза, в частности с помощью общих процессов, показанных на следующих схемах. Исходные материалы для способов получения являются промышленно доступными или они могут быть получены известными из литературы способами. Если не указано иное, значения групп К1, К2, КЗ, К4, К5, К6 и К7 являются значениями, описанными в общей формуле (I).

Соединения формулы (I) могут быть получены согласно способам и схемам, описанным ниже.

- 4 021838

Способ А

Согласно способу А, когда с флуоренметилоксикарбонильной группы снята защита, амин II, связанный с твердым носителем или подложкой, ацилируется ацилирующим агентом III, в котором X представляет уходящую группу, например галоген, и Υ представляет собой ОН или галоген. Когда Υ представляет галоген, например хлорацетилхлорид, реакция может проводиться в присутствии основания, такого как триэтиламин. Когда Υ представляет -ОН, например бромуксусную кислоту, реакция может осуществляться в присутствии подходящего агента сочетания, например Ν,Ν'-диизопропилкарбодиимида. В обоих случаях реакция может проводиться в инертном растворителе, в котором смола способна набухать, таком как Ν,Ν-диметилформамид или метиленхлорид, и при комнатной температуре или при микроволновом облучении для минимизации времени реакции. Затем амин Аа подвергается сочетанию с использованием третичного амина в качестве основания. Реакция может осуществляться при комнатной температуре или при микроволновом облучении.

Карбоновая кислота VI, в которой РС представляет защитную группу, такую как аллил, вводится в реакцию с амином V с получением амида VII, с использованием агента сочетания, такого как, например, смесь Ν,Ν'-диизопропилкарбодиимида и 1-гидроксибензотриазола. Затем добавляется амин IVЬ с помощью реакции Михаэля с использованием основания и растворителя, такого как Ν,Ν-диметилформамид или диметилсульфоксид, с получением промежуточного соединения VIII после отщепления от смолы с использованием смеси трифторуксусной кислоты, дихлорметана и воды. Промежуточное соединение VIII циклизуется (промежуточное соединение IX), и защита снимается в основной среде, давая промежуточную кислоту X.

Промежуточное соединение X альтернативно может быть получено в твердой фазе согласно схеме 2, где амин V может быть получен из амина Аа или с помощью реакции восстановительного аминирования глиоксилатом в ТНР-АсОН с использованием восстановительного агента, такого как №ВН₃СН, или альтернативно с помощью алкилирования бромацетатом или бромацетамидом с использованием третичного амина в качестве основания. Впоследствии осуществляется сочетание с кислотой VI с получением амида VII'. Затем добавляется амин АН, и с помощью реакции Михаэля и последующей циклизации ΐη 5йи получается промежуточный сложный эфир IX, который с помощью обработки основанием дает соединение X.

Схема 2

- 5 021838

Схема 3. Получение соединения формулы (I)

Соединение формулы Ы может быть получено из промежуточного соединения X с помощью сочетания с амином, связанным с твердым носителем Уа или Уа', полученным в соответствии с методикой, указанной выше, в присутствии агента сочетания, такого как, например, комбинация ΗΆΤϋ и НОВТ. Соединение формулы 1Ь может быть получено согласно способу, сходному с синтезом соединения 1а, за исключением того, что в случае твердой фазы, в которой исходный твердый носитель (11Ь) имеет галогеновую группу вместо аминогруппы, такой как, например, хлортритильная смола, после отщепления от смолы получается кислота. Сложный эфир 1с может синтезироваться с помощью сложной этерификации соответствующей кислоты 1Ь с помощью обычных в органическом синтезе методов сложной этерификации, таких как, например, с использованием метанола в кислотной среде, такой как серная кислота. В случае 1Ь соединение может быть получено с помощью омыления сложного эфира 1с. Соединения формулы Ιά могут быть получены по реакции промежуточного соединения X с первичным амином 1Ус.

Альтернативный способ получения соединений формулы I может осуществляться с помощью ацилирования амина II аминокислотой формулы XI (способ В).

Способ В

Как вполне очевидно специалистам в области изобретения, для получения соединения формулы I можно комбинировать некоторые из стадий способа А с некоторыми из стадий способа В.

Альтернативно, соединения формулы К и П можно получать, как показано на схеме, описанной ниже.

Пептид XIII и псевдопептид XIV, которые связываются с кислотой X, могут быть получены с по- 6 021838 мощью стандартных реакций пептидного синтеза. Следовательно, амин 11а (Ζ=ΝΗ₂) или хлоридная ПЬ (Ζ=Οί) смола может вводиться в реакцию с подходящим образом защищенной аминокислотой (XII), с использованием подходящего агента сочетания. Процесс необязательно может впоследствии повторяться, предварительно со снятием защиты с амина, с получением пептида XIII. Карбоновая кислота X затем реагирует с соединением XIII с получением соединения К.

При комбинировании аминокислотных звеньев XIII с глициновым звеном (следуя способу А или В) получается псевдопептид XIV, который ведет к получению соединения И* согласно способу, сходному со способом, описанным выше.

Используемые первичные амины ^а, ^Ь и ^с являются промышленно доступными или могут быть получены с помощью известных способов (МагсН, Абуапсеб Огдатс Сйеш1з1гу, 1991, Еб. 1ойп ^Пеу & 8опз) или с помощью использования, например, схем, описанных ниже.

Схема 4 о

¹> 0/^мн

Κ^,ΟΗ ---к _νΝΗ₂

2) ΝΗ₂ΝΗ₂Η₂Ο

Амин может быть получен с помощью реакции Мицунобу, исходя из спирта и фталимида калия в присутствии, например, диэтилазодикарбоксилата (ИЕАИ) и трифенилфосфина в тетрагидрофуране в качестве растворителя и последующего высвобождения гидразингидратом (МйзипоЬи, 1. Ат. СНет. 8ос. 1972, 94, 679-680).

Ν-замещенные глицины V и XI могут быть синтезированы с помощью нескольких из способов, показанных ниже, таких как, например, восстановительное аминирование соответствующего глицина подходящим альдегидом (схема 5) с использованием восстанавливающих агентов, таких как №В11₄, NаΒΗзСN или №В11(АсО)₃, или с помощью нуклеофильного замещения сложного эфира амином Κ-ΝΗ₂(схема 6).

Схема 5

-ίΕΑ

II нк·

-СНО

ОК 2) Восстановление

Схема 6

ОК

Сокращения

Примеры

АсОЕЬ	Этилацетат
Солевой раствор	Насыщенный раствор ЫаС1
ЦСМ	Дихлорметан
ϋΙΟ	Ν, Ν' -диизопропилкарбодиимид
ΌΙΡΕΑ	Ν,Ν-диизопропилэтиламин
ϋΜΡ	Ν, Ν-диметилформамид
ДМСО	Диметилсульфоксид
ΕΌΟ	1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид
экв.	Молярный эквивалент
Εϋ₃Ν	Триэтиламин
Рпюс	9-флуоренилметоксикарбонил
ΙΡΑ	Изопропиловый спирт
нАти	Гексафторфосфат 2-(1Н-7-азабензотриазол-1- ил)-1,1,3,3-тетраметилурония
новт	1-гидроксибензотриазол
НРЬС	Высокоэффективная жидкостная хроматография
НЕМ5	Масс-спектрометрия высокого разрешения
МеОН	Метанол
РуВОР	Гексафторфосфат бензотриазол-1-илокси- триспирролидинофосфония
ЕР	Обращенная фаза
к.т.	Комнатная температура
Ьг	Время удержания
υν или уф	Ультрафиолетовый
ТРА	Трифторуксусная кислота

- 7 021838

Следующие примеры служат для лучшей иллюстрации изобретения, но они не должны рассматриваться как ограничивающие его.

Номенклатура, используемая в настоящем документе, основана на СЕУ_СНЕМ1САЬ__ΝΑΜΕ Гипсйоп в Сйешйга\ для Ехсе1 уегзюп 12.

Общие данные

Соединения синтезировались с использованием полистирольной АМ КАМ смолы, приобретаемой у фирмы Карр Ро1утеге ОшЬН (Германия). В реакциях использовались полистирольные шприцы с полиэтиленовым диском с использованием Н8501 Й1§йа1 ΙΚΑ ЬаЬог1есйтс мешалки. В реакциях, осуществляемых с помощью микроволн, использовалась СЕМ О1зсоуег модель с 10-мл стеклянными реакторами.

Продукты анализировали с помощью способ А - с помощью КР-НРЬС с использованием оборудования Не\\1еП Раскагй 8епез 1100 (УФ детектор 1315А) с использованием колонки с обращенной фазой Х-Тегга С18 (15x0,46 см, 5 мкм). Длина волны, используемая для УФ детекции, была 210 нм. В качестве подвижной фазы использовались смеси СН₃С^Н₂О с 0,1% ТЕА 1 мл/мин. Анализы проводили с градиентом от 20 до 70% СН₃СN (10 мин) и от 70 до 100% (8 мин);

способ В - продукты анализировали с использованием оборудования Адйеп! 1100 НРЬС, снабженного УФ детектором с изменчивой длиной волны и масс-спектрометром модели 1100 УЬ. Используемая для УФ детекции длина волны была 210 нм, в то время как Μδ детектор эксплуатировали по способу положительной электро-распылительной ионизации и проводили 100-1300 ш/ζ сканирование. Что касается хроматографического разделения, используемой колонкой была Кгошазй 100 С18 (4,0x40 нм, 3,5 мкм), устанавливаемая при 50°С, и инъецировали 5 мкл. Для элюирования придерживались одного из двух градиентов растворителей, описываемых ниже: 5-100% В 7 мин, 5% В 7-8,5 мин. Скорость потока подвижной фазы составляет 1,4 мл/мин. Растворитель А состоит из 0,2% муравьиной кислоты в воде, тогда как В представляет 0,2% муравьиную кислоту в ацетонитриле;

способ С - используют оборудование Уа!егз НРЬС-ИУ-МЗ, снабженное детектором, имеющим последовательно диоды, и масс-спектрометром модели ЕМ01000. Используемая для УФ детекции длина волны была 210 нм, в то время как М8 детектор эксплуатировали по способу положительной электрораспылительной ионизации и проводили 100-1000 ш/ζ сканирование. Что касается хроматографического разделения, используемой колонкой была Кгошазй С18 (2,1x50 мм, 3,5 мкм), устанавливаемая при 50°С, и инъецировали 2 мкл. Для элюирования придерживались следующего градиента: 5-100% В, 0-5 мин, 100% В, 5-6,5 мин, 5% В, 6,5-8 мин. Скорость потока подвижной фазы составляет 0,5 мл/мин.

Масс-спектрометрию высокого разрешения осуществляли с помощью ИРЬС-НКМЗ с использованием Уа!егз Асцийу ИРЬС оборудования, соединенного с масс-спектрометром Уа!егз ортогонального времени ускорения полета модели ЬСТ Ргеш1ег ХЕ. Хроматографическое разделение проводили с помощью Уа!егз Асцийу С18 колонки (10x2,1 мм, 1,7 мкм).

В качестве подвижной фазы использовали смеси СН₃СХ-Н₂О с 20 мМ муравьиной кислотой при 0,3 мл/мин. Анализы проводили с градиентом от 50 до 100% СН₃С^ 6 мин.

Промежуточное соединение VI

VI. Аллиловый эфир (2)-2-бутендиовой кислоты

1,8 мл Аллилового спирта (26 ммоль, 1,3 экв.) добавляли к 2 г раствору малеинового ангидрида (20 ммоль) в хлороформе. Реакционную смесь перемешивали при нагревании с обратным холодильником в течение 5 ч. Получающийся раствор обрабатывали 1 н. НС1 и экстрагировали хлороформом. Органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили безводным сульфатом магния и фильтровали. Растворитель выпаривали при пониженном давлении и полученный остаток идентифицировали как промежуточное соединение VI в форме масла (95% чистота, 85% выход).

Промежуточные соединения Х

X. 1. 2-(4-(2,4-Дихлорфенэтил)-1 -(3,3 -дифенилпропил)-3,6-диоксопиперазин-2-ил)уксусная кислота

Смесь 2 г Ешос-Кшк амид АМ полистирольной смолы (0,61 ммоль/г смолы, 1,22 ммоль) и 12 мл 20% пиперидина в ОМЕ перемешивали в микроволновом реакторе в течение 2 мин при 35°С. Смолу отфильтровывали и промывали ОМЕ (3x15 мл), изопропиловым спиртом (3x15 мл) и ОСМ (3x15 мл). Смолу обрабатывали раствором бромуксусной кислоты (III, 840 мг, 5 экв.) и Ν,Ν’-диизопропилкарбодиимидом (1,15 мл, 5 экв.) в ОМЕ (12 мл).

Реакционную смесь перемешивали в течение 2 мин при 60°С в микроволновом реакторе. Смолу отфильтровывали и промывали ОМЕ (3x15 мл), изопропиловым спиртом (3x15 мл) и ОСМ (3x15 мл). К

- 8 021838 смоле добавляли раствор 2,4-дихлорфенэтиламина (1Уа, 1,035 мл, 5 экв.) и триэтиламина (0,85 мл, 5 экв.) в 12 мл ΌΜΡ и суспензию перемешивали в течение 2 мин при 90°С при активировании микроволнами. Супернатант удаляли и реакцию повторяли в тех же условиях. Полученную смолу V фильтровали и промывали ΌΜΡ (3x15 мл), изопропиловым спиртом (3x15 мл) и ЭСМ (3x15 мл). Затем смолу обрабатывали раствором аллилового эфира (2)-2-бутендиовой кислоты (VI, 957 мг, 5 экв.), НОВТ (825 мг, 5 экв.) и Э1С (770 мкл, 5 экв.) в ПСМ:ПМР 2:1, 123 мл. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и фильтровали. Смолу сушили и промывали ΌΜΡ (3x15 мл), изопропиловым спиртом (3x15 мл) и ЭСМ (3x15 мл). Затем к смоле добавляли раствор 3,3-дифенилпропиламина (ΐνθ, 1,29 г, 5 экв.) и триэтиламина (0,85 мл, 5 экв.) в 12 мл ΌΜΡ и суспензию перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Смолу отфильтровывали и реакцию повторяли в течение 16 ч при той же температуре. Супернатант удаляли и смолу сушили и промывали ΌΜΡ (3x15 мл), изопропиловым спиртом (3x15 мл) и ^СΜ (3x15 мл). Отщепление от твердой фазы выполняли с помощью обработки смесью 60:40:2 ΤΡΑ/^СΜ/вода (20 мл) в течение 30 мин при комнатной температуре. Реакционную смесь фильтровали и растворители выпаривали при пониженном давлении. Затем выполняли циклизацию с помощью обработки полученного остатка 20 мл диоксана в течение 1,5 ч при нагревании с обратным холодильником (мониторинг реакции с помощью НРЬС). Затем добавляли 1:2 раствор (9 мл) 4 н. гидроксида натрия и аллилового спирта и смесь перемешивали в течение 45 мин при нагревании с обратным холодильником. Сырой продукт реакции подкисляли 1 н. соляной кислотой и растворитель упаривали. Получающийся в результате раствор экстрагировали этилацетатом (3x50 мл) и органические экстракты промывали насыщенным раствором №С1 (2x100 мл); их сушили безводным Μ§δϋ₄ и выпаривали при пониженном давлении, получая 450 мг желаемого продукта (X, 70% чистота, 95% выход при 210 нм). ΗΚΜ8 (М+Н)+ вычислено для С₂₉Н₂₉С1₂Х₂О₄, 539,1504, экспериментальное, 539,1514. Следующие соединения получали, следуя методу, сходному со способом, описанным в примере выше, но с использованием различных аминов

- 9 021838

Х.6	? Г*ι:¹· У ° 2-( 1 -(2-([ 1,1 ’-бифенил]-4-ил)этил)-4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6диоксопиперазин-2-ил)уксусная кислота	С₂₈Н₂₆С1₂Ц₂О ₄525,1348	525,1348
Х.7	кЬ ”ф дА ^^ΝγΚΛ_0Η У ° 2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6-диоксо-1 -(4(трифторметил)бензил)-пиперазин-2-ил)уксусная кислота	С₂₂Н₁₉С1₂Р₃Х₂О₄ 503,0752	503,0757

Х.13. 2-(4-(2,4-Дихлорфенэтил)-3,6-диоксо-1-(4-трифторметил)бензил)пиперазин-2-ил уксусная кислота

Стадия 1. Промежуточное соединение V'

7,55 мл ΕΙ₃Ν и 2,50 г (27 ммоль) Бромацетамида добавляли к раствору 5 г (41 ммоль) 2-(2-пиридил)этиламина в 300 мл диоксана. Получающуюся в результате смесь кипятили с обратным холодильником на протяжении ночи. Раствор выпаривали досуха и очищали на силикагеле, используя смесь АсОΕϊ:ΜόΘΗ:ΝΗ₃ (10:1:0,01) в качестве элюента, получая 2,39 г промежуточного соединения V.

Способ В: 1г: 0,261, т/ζ: 180.

Стадия 2. Промежуточное соединение VII'

4,90 мл ΕΙ₃Ν, 3,24 г (24 ммоль) НОВТ, 4,60 г (24 ммоль) ЕЭС и продукт стадии 1 добавляют к раствору, состоящему из 2,31 г (16,0 ммоль) моноэтилового эфира малеиновой кислоты в 100 мл ΏΜΡ. Образовавшуюся суспензию хранят при перемешивании при к.т. в течение 18 ч. Затем ее обрабатывают водой и добавляют АсОЕ1, органическую фазу отделяют, а водную фазу экстрагируют еще один раз этилацетатом. Органические фазы сливают вместе и последовательно промывают насыщенным раствором ΝαΙ 1СО₃ и солевым раствором. Затем их сушат безводным сульфатом натрия, растворитель отфильтровывают и выпаривают при пониженном давлении. Получают 1,5 г соединения, идентифицируемого как соединение примера νΐΙ'.13.

Способ В: 1г: 1,094, т/ζ: 306.

Стадия 3. Промежуточное соединение IX

0,8 мл (5,89 ммоль) ΕΙ₃Ν и 1,5 г Промежуточного соединения νΐΙ'.13 (4,91 ммоль) добавляли к раствору 2-тиофенилэтиламина (0,63 мл, 5,4 ммоль) в 40 мл диоксана и получающийся раствор перемешивали в течение 18 ч при нагревании с обратным холодильником. Раствор выпаривали досуха и очищали с помощью хроматографии на колонке с силикагелем, используя (10:1:0,01) смесь АсОΕί:МеОН:NΗ₃ в качестве элюента, получая 510 мг масла, идентифицируемого как промежуточное соединение, ΙΧ.13 этил(2-(3,6-диоксо-4-(2-(пиридин-2-ил)этил)-1-(2-тиофен-2-ил)этил)пиперазин-2-ил)ацетат.

Способ А: 1г: 2,289, т/ζ: 416.

Следующие промежуточные соединения получали с помощью способа, сходного с получением промежуточного соединения IX. 13

- 10 021838

- 11 021838

IX. 15	Ч-γ ° о Этил 2-(4-(2-метоксиэтил)-3,6-диоксо-1-(2-(тиофен-2ил)этил)пиперазин-2-ил)ацетат	В	2,858	369
IX. 16	⁰ о Этил 2-(3,6-диоксо-1,4-бис(2-(тиофен-2-ил)этил)пиперазин-2-ил)ацетат	В	3,560	421
IX. 17	О σ.χ- Этил 2-(4-бензил-3,6-диоксо-1 -(2-(тиофен-2-ил)этил)пиперазин-2ил)ацетат	В	3,538	401
IX. 18	,,ΌΑητ Этил 2-(4-(4-хлорбензил)-3,6-диоксо-1 -(2-(тиофен-2 ил)этил)пиперазин-2-ил)ацетат	в	4,358	435
IX. 19	⁰ III Этил 2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6-диоксо-1 -(προπ-2-ин-1 ил)пиперазин-2-ил)ацетат	с	4,233	411
- ..... Этил 2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6-диоксо-1-(пиридин-4илметил)пиперазин-2-ил)ацетат	С 3,412 464

Стадия 4. Промежуточное соединение X

1,6 мл Раствора 1 н. ЫОН добавляли к раствору 550 мг (1,32 ммоль) промежуточного соединения К.13 в 15 мл смеси МеОН:ТГФ (1:3) и оставляли перемешиваться при комнатной температуре в течение ночи. Затем смесь разбавляли АсОЕ1 и промывали водой, водную фазу подкисляли 1 н. раствором НС1 до рН 7 и экстрагировали АсОЕЕ В заключение органические фазы объединяли, сушили на безводном №₂8О₄, фильтровали и растворитель выпаривали при пониженном давлении. Получалось 330 мг бесцветного масла, идентифицируемого как промежуточное соединение X.13.

Способ В: ϊγ: 1,768, т/ζ: 388.

Следующие промежуточные соединения получали таким же способом, как для промежуточного соединения Х.13

Промеж уточное соедине ние	Структура, Название	Спосо б	1г	τηΐζ
Х.8	Υ— γ⁰ - Уз 2-(4-(4-хлорфенэтил)-3,6-диоксо-1 -(2-(тиофен-2ил)этил)пиперазин-2-ил)уксусная кислота	В	3,314	421 423

- 12 021838

- 13 021838

Х.17	О	С	3,474	373
О 2-(4-бензил-3,6-диоксо-1 ил)у	^ΧΑΎ^:Η А -(2-(тиофен-2-ил)этил)пиперазин-2ксусная кислота
	^С\|хп	О
Х.19	СА С1	^у^соон V) ⁰ 1	С	3,615	383 385
	2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6-диоксо-1 -(προπ-2-ин-1 ил)пиперазин-2-ил)уксусная кислота
	^αΎΑ	о
Х.22	С1	'-^χΧ'Ν А	С	2,995	436 438
		N
	2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6-диоксо-1-(пиридин-4илметил)пиперазин-2 - ил)уксусная кислота

Соединения формулы 1а

а) 1а.1.2. ^(2-Амино-2-оксоэтил)-№-(2,4-дихлорфенэтил)-2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-1-(3,3-дифенилпропил)-3,6-диоксопиперазин-2-ил)ацетамид

Кислоту Х.1 (100 мг, 1,1 экв.), НОВ! (40 мг, 1,5 экв.), ΗΆΤϋ (105 мг, 1,5 экв.) и ΌΙΡΕΆ (95 мкл, 3 экв.) добавляли к суспензии смолы Уа (0,61 ммоль/г смолы, 0,17 ммоль) с подходящим амином и предварительно подвергнутой разбуханию, с помощью раствора 2:1 ΌΟΜ:ΌΜΕ (дихлорметан:диметилформамид) (3 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Смолу сушили и промывали ΌΜΕ (3x3 мл), изопропиловым спиртом (3x3 мл) и ΌΟΜ (3x3 мл) и затем обрабатывали смесью 60:40:2 ΤΕΆ/ΌΟΜ/вода (5 мл) в течение 30 мин при комнатной температуре. Смолу фильтровали и фильтрат выпаривали при пониженном давлении, получая 73 мг желаемого соединения (1а.1.2, 51% выход, 91% чистоты). ΗΚΜ8 (М+Н)+вычислено для Ο₃₉Η₃₉Ο1₄Ν₄Ο₄, 767,1725, экспериментальное, 767,1741.

- 14 021838

- 15 021838

- 16 021838

- 17 021838

Ь) 1а.2.1. №(2-Амино-2-оксоэтил)-№(2,4-дихлорфенэтил)-2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-1-(4-фторбензил)-3,6-диоксопиперазин-2-ил)ацетамид

Кислоту Х.2 (100 мг, 1 экв.) добавляли к раствору 2-(4-фторбензиламино)ацетамида (1Ус, 28 мкл, 1 экв.), Э1С (85 мкл, 3 экв.) и триэтиламина (80 мкл, 3 экв.) в 2 мл ЭСМ и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Сырой неочищенный продукт реакции нейтрализовали с помощью ΝαΟΗ и экстрагировали ЭСМ. Органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили на безводном М§80₄ и выпаривали при пониженном давлении, получая 96 мг желаемого соединения 1а.2.1.

Способ Α: ϊγ: 13,239, т/ζ: 681.

Следующие промежуточные соединения получали таким же способом, как для соединения 1а.2.1:

Пример	Структура, Соединение	Способ	ΐτ	т/ζ
1а.3.2	--ΝΗ О ^с у С1 2-(1-(2-(1Я-индол-3-ил)этил)-4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6диоксопиперазин-2-ил)-Л^г-(2-амино-2-оксоэтил)-А-(2,4дих лор фенэтил)ацетамид	А	13,961	-
1а.4.2	• /8, ,с^; · _Ό С1 А-(2-амино-2-оксоэтил)-А-(2,4-дихлорфенэтил)-2-(4-(2,4дихлорфенэтил)-3,6-диоксо-1 -(2-(тиофен-2-ил)этил)пиперазин-2ил)ацетамид	А	13,228	683
1а.11.19	9 оА ⁰ А А-(2-амино-2-оксоэтил)-У-бензил-2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-1-(3морфолинопропил)-3,6-диоксопиперазин-2-ил)ацетамид	В	2,786	618 620

- 18 021838

Соединения формулы 1Ь

а) 1Ь.1.2. 2-Х-(2,4-Дихлорфенэтил)-2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-1-(3,3-дифенилпропил)-3,6-диоксопиперазин-2-ил)ацетамидо уксусная кислота

Раствор бромуксусной кислоты (275 мг, 5 экв.) и ΌΙΡΕΆ (345 мкл, 5 экв.) в ΌΜΡ (3 мл) добавляли к 200 мг 2-хлортритилхлоридной смолы (1,6 ммоль/г С1/г смолы, 0,17 ммоль) и суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смолу фильтровали и промывали ΌΜΡ (3x3 мл), изопропиловым спиртом (3x3 мл) и ЭСМ (3x3 мл). Смолу затем обрабатывали метанолом (3 мл) в течение 10 мин для удаления непрореагировавших атомов хлора. Супернатант удаляли, и остаток промывали ЭСМ (3x3 мл), изопропиловым спиртом (3x3 мл) и ΌΜΡ (3x3 мл). Затем к смоле добавляли раствор 2,4-дихлорфенэтиламина (1Уа, 340 мкл, 5 экв.) и триэтиламина (280 мкл, 5 экв.) в 3 мл ΌΜΡ и суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. После фильтрования и промывки с помощью ΌΜΡ (3x3 мл), изопропиловым спиртом (3x3 мл) и ΌΟΜ (3x3 мл) в смолу добавляли кислоту X (100 мг, 1,1 экв.) в присутствии НОВТ (40 мг, 1,5 экв.), ΗΆΤϋ (105 мг, 1,5 экв.) и ΌΙΡΕΆ (95 мкл, 3 экв.) в смеси 2:1 ^СΜ:^ΜΡ (3 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч и фильтровали. Смолу сушили и промывали ΌΜΡ (3x3 мл), изопропиловым спиртом (3x3 мл) и ^СΜ (3x3 мл). Наконец, смолу обрабатывали смесью 5:95 ΤΡΆ:ΌΟΜ (5 мл) в течение 30 мин при комнатной температуре, получая сырой неочищенный продукт реакции, который фильтровали. Растворитель фильтрата удаляли при пониженном давлении, получая 60 мг желаемого соединения (1Ь.1.2, 42% выход, 91% чистоты). ΗΚΜ8 (М+Н)+ вычислено для С₃₉Н₃₈С1₄Х₃О₅, 768,1576, экспериментальное, 768,1573.

- 19 021838

Соединения формулы к

^.1.2. Метил 2-^-(2,4-дихлорфенэтил)-2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-1-(3,3-дифенилпропил)-3,6-диоксопиперазин-2-ил)ацетамидо)ацетат

Смесь кислоты ГЬ.1.2 (30 мг, 1 экв.), метанола (7,5 мл) и Η₂8Ο₄ (20 мкл, 1 экв.) подвергали реакции в течение 15 ч при комнатной температуре. Сырой неочищенный продукт реакции нейтрализовали с помощью ΝαΟΗ и экстрагировали ЭСМ. Органические экстракты промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили на безводном М§80₄ и выпаривали при пониженном давлении, получая 22 мг же- 20 021838 лаемого соединения ^.1.2 (72% выход, 86% чистоты). НКМ8 (М+Н)+ вычислено для С₄₀Н₃₉С1₄^О₅, 782,1722, экспериментальное, 782,1216.

- 21 021838

- 22 021838

1с.4.13	'сс,л_г-_1ГЛ._о^ Этил 2-(2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6-диоксо-1 -(2-(тиофен-2ил)этил)пиперазин-2-ил)-?/-(2-метоксиэтил)-ацетамидо)ацетат	В	4,104	598 600
к.4.14	ΌΟν/νΟ У\°,	В	3,183	667 669
	V Этил 2-(2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6-диоксо-1-(2-(тиофен-2ил)этил)пиперазин-2-ил)-А-(3-морфолинопропил)ацетамидо)ацетат
1С.4.15	°ТГ 1 ΫΥ,	В	3,813	665 667
	V Этил 2-(2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6-диоксо-1 -(2-(тиофен-2ил)этил)пиперазин-2-ил)-Л^г-(3-(2-оксопирролидин-1 ил)пропил)ацетамидо)ацетат
1с.8.1	4/¼ ь С1 Этил 2-(Л^г-(4-хлорфенэтил)-2-(4-(4-хлорфенэтил)-3,6-диоксо-1 -(2(тиофен-2-ил)этил)пиперазин-2-ил)ацетамидо)ацетат	В	4,520	644 646
1с.8.3	4¼¼¼¼¹ /=\ /—N 0 ^ноО^	В	3,844	626 628
	Этил 2-(2-(4-(4-хлорфенэтил)-3,6-диоксо-1 -(2-(тиофен-2ил)этил)пиперазин-2-ил)-У-(4-гидроксифенэтил)-ацетамидо)ацетат
1с.8.4	4¼ О ЧА,	В	4,299	391
	V Этил 2-(2-(4-(4-хлорфенэтил)-3,6-диоксо-1-(2-(тиофен-2ил)этил)пиперазин-2-ил)-У-(4-метоксифенэтил)-ацетамидо)ацетат
1с.8.5		В	4,126	670 672
	X? Этил 2-(2-(4-(4-хлорфенэтил)-3,6-диоксо-1 -(2-(тиофен-2ил)этил)пиперазин-2-ил)-А-(3,4-диметоксифенэтил)ацетамидо)ацетат
1с.8.6	(ΪΪ АА^ Этил 2 -(2 -(4-(4-хлорфенэтил)-3,6-диоксо-1 -(2 -(тиофен-2 ил)этил)пиперазин-2-ил)-Л^г-(4-сульфамоилфенэтил)ацетамидо)ацетат	В	3,736	689 691

- 23 021838

- 24 021838

- 25 021838

1с.9.10	он ' Этил 2-(//-(2-(5-гидрокси-1Н-индол-3-ил)этил)-2-(4-(4метоксифенэтил)-3,6-диоксо-1 -(2-(тиофен-2-ил)этил)пиперазин-2ил)ацетамидо)ацетат	В	3,488	661
1с.9.11	Этил 2-(Ж(2-(5-метокси-1#-индол-3-ил)этил)-2-(4-(4метоксифенэтил)-3,6-диоксо-1-(2-(тиофен-2-ил)этил)пиперазин-2ил)ацетамидо)ацетат	В	3,888	675
к.9.12	Ч „ ΛΑ, Метил 2-(2-(4-(4-метоксифенэтил)-3,6-диоксо-1 -(2-(тиофен-2ил)этил)пиперазин-2-ил)-У-метилацетамидо)ацетат	В	3,233	502
1с.9.13	ч · Лл, '%9^Α4·''Ίχ Этил 2-(//-(2-метоксиэтил)-2-(4-(4-метоксифенэтил)-3,6-диоксо-1 (2-(тиофен-2-ил)этил)пиперазин-2-ил)ацетамидо)ацетат	в	3,568	560
к.9.14	ч θ оэтЧт-эх г° Этил 2-(2-(4-(4-метоксифенэтил)-3,6-диоксо-1 -(2-(тиофен-2ил)эτил)πиπеρазин-2-ил)-Λ^,-(3-мορφοлинοπροπил)ацетамидо)ацетат	в	2,772	629
1С.9.15	ч - Лл, аэрЧхэх г° Этил 2-(2-(4-(4-метоксифенэтил)-3,6-диоксо-1 -(2-(тиофен-2ил)этил)пиперазин-2-ил)-А-(3-(2-оксопирролидин-1 ил)пропил)ацетамидо)ацетат		3,316	627
1С.10.1	л—/— N 0 СГ о-/у М °А Этил 2-(Л^г-(4-хлорфенэтил)-2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-1-(2метоксиэтил)-3,6-диоксопиперазин-2-ил)ацетамидо)ацетат	в	4,376	626 628
1с. 10.2	о 2—'—\ /~^с\| С1 2— ° /=( /—Ν О С1 Этил 2-(//-(2,4-дихлорфенэтил)-2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-1 -(2метоксиэтил)-3,6-диоксопиперазин-2-ил)ацетамидо)ацетат	в	4,621	660 662

- 26 021838

- 27 021838

1С.10.14	А“ °А А ^с' V А о ^к Ν—^и Этил 2-(Х-(3-(1Я-имидазол-1-ил)пропил)-2-(4-(2,4дихлорфенэтил)-1 -(3 -морфолинопропил)-3,6-диоксопиперазин-2ил)ацетамидо)ацетат	В	2,188	665 667
1С.11.1	А -А ⁰ А А---^- Этил 2-(У-(4-хлорфенэтил)-2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-1 -(3морфолинопропил)-3,6-диоксопиперазин-2-ил)ацетамидо)ацетат	В	3,461	695 697
1с. 11.2	А ^А^ ^С1 “А С1 А—^1,0 Этил 2-(уУ-(2,4-дихлорфенэтил)-2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-1 -(3морфолинопропил)-3,6-диоксопиперазин-2-ил)ацетамидо)ацетат	В	3,590	729 731

1с. 11.3	А Этил 2-(2-(4-(2,4-дих. диоксопиперазин-2-ил	А -А ⁰ Ло А лорфенэтил)-1 -(3 -морфолинопропил)-3,6)-Л'-(4-гидроксифенэтил)-ацетамидо)ацетат	в	2,970	677 679
		—Λ
1с. 11.4	X 1	⁰V о Г	в	3,295	691 693
	Этил 2-(2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-1-(3-морфолинопропил)-3,6диоксопиперазин-2-ил)-У-(4-метоксифенэтил)-ацетамидо)ацетат
1с. 11.5	^С'1Х	0 [А А л	в	3,150	721 723
		0
	Этил 2-(2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-1 -(З-морфолинопропил)-3,6диоксопиперазин-2-ил)-Л^г-(3,4-диметоксифенэтил)ацетамидо)ацетат

- 28 021838

- 29 021838

1с,11.18	0 °τ°Α^Νι ? °⁰ нсА> Этил 2-(2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-1 -(З-морфолинопропил)-3,6диоксопиперазин-2-ил)-Л^г-(4-гидроксибензил)-ацетамидо)ацетат	В	2,787	663 665
1с.13.1	ч θ о Д о Υ С1 Этил 2-(А-(4-хлорфенэтил)-2-(3,6-диоксо-4-(2-(пиридин-2ил)этил)-1 -(2-(тиофен-2 -ил)этил)пиперазин-2 -ил)ацетамидо)ацетат	С	3,763	611 613
1с. 13.2	X · Λ.Α, 'ЭЭ'Х'ЮО $·“ ° ' С1 Этил 2-(А-(2,4-дихлорфенэтил)-2-(3,6-диоксо-4-(2-(пир идин-2 ил)этил)-1 -(2-(тиофен-2-ил)этил)пиперазин-2-ил)ацетамидо)ацетат	С	3,957	645 647
к.13.5	X > Л® °Х ¹ Этил 2-(А-(3,4-диметоксифенэтил)-2-(3,6-диоксо-4-(2-(пиридин-2 ил)этил)-1 -(2-(тиофен-2-ил)этил)пиперазин-2-ил)ацетамидо)ацетат	с	3,378	637
1С.13.7	<л „ ΛΛ ψ О^О- Этил 2-(2-(3,6-диоксо-4-(2-(пиридин-2-ил)этил)-1 -(2-(тиофен-2ил)этил)пиперазин-2-ил)-А-(4-нитрофенэтил)-ацетамидо)ацетат	с	3,528	622
1с.13.9	°\^° V ж. Υ 0 Ν > ι,χΛ,^ •чЭ Этил 2-(Я-(2-( 1 Я-индол-3-ил)этил)-2-(3,6-диоксо-4-(2-(пиридин-2ил)этил)-1 -(2-(тиофен-2-ил)этил)пиперазин-2-ил)ацетамидо)ацетат	с	3,480	616

- 30 021838

- 31 021838

- 32 021838

- 33 021838

- 34 021838

- 35 021838

Соединения формулы М

М. 1.2 №(2,4-Дихлорфенэтил)-2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-1-(3,3-дифенилпропил)-3,6-диоксопиперазин-2-ил)ацетамид

Кислоту Х.1 (100 мг, 1 экв.) добавляли к раствору 2,4-дихлорфенэтиламина ДУс, 28 мкл, 1 экв.), ГИС (85 мкл, 3 экв.) и триэтиламина (80 мкл, 3 экв.) в 2 мл ЭСМ и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Неочищенный продукт реакции нейтрализовали гидроксидом натрия и экстрагировали ЭСМ. Органические экстракты промывали насыщенным хлоридом натрия, сушили на безводном Мд8О₄ и выпаривали при пониженном давлении, получая 96 мг желаемого соединения М.1.2 (73% выход, 89% чистота). НКМ8 (М+Н)+ вычислено для С₃₇Н₃₆С1₄^О₃, 710,1511, экспериментальное, 710,1522.

Пример	Структура; Соединение	НЕМ5 (М+Н)⁺:
Вычислено	Эксперим ентальное
Ы.2.2	.0 С1 N-(2,4-дихлорфенэтил)-2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-1-(4фторбензил)-3,6-диоксопиперазин-2-ил)ацетамид	С₂9Н₂₆С1₄РМ₃Оз 624,0791	624,25
Ы.3.2	^-ΝΗ д/Ъ N^! д С1 2-( 1-(2-( 1#-индол-3-ил)этил )-4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6диоксопиперазин-2-ил)-Л^г-(2,4-дихлорфенэтил)-ацетамид	СззНзоСШОз 659,115	659,1163

- 36 021838

- 37 021838

- 38 021838

- 39 021838

- 40 021838

- 41 021838

- 42 021838

- 43 021838

И. 15.4	ч ° Лл 0' 2-(4-(2-метоксиэтид)-3,6-диоксо-1 -(2-(тиофен-2ил)этил)пиперазин-2-ил)-7/-(4-метоксифенэтил)ацетамид	В	3,046	474
И. 15.5	а „ ЛА ά.' у ¹ N-(3,4-диметоксифенэтил)-2-(4-(2-метоксиэтил)-3,6-диоксо-1 -(2(тиофен-2-ил)этил)пиперазин-2-ил)ацетамид	В	2,850	504
И. 15.6	«А „ „Л .„АЛу¹-'. 0=5=0 νη₂ 2-(4-(2-метоксиэтил)-3,6-диоксо-1-(2-(тиофен-2- ил)этил)пиперазин-2-ил)-7/-(4-сульфамоилфенэтил)ацетамид	В	2,433	523

М.15.7	Са „ ЛА Ал ί 0*%- 2-(4-(2-метоксиэтил)-3,6-диоксо-1 -(2-(тиофен-2ил)этил)пиперазин-2-ил)-7/-(4-нитрофенэтил)ацетамид	В	3,041	489
И. 15.8	Са „ Λα А-Мг'Л у „ , 0 77-(3-(177-имидазол-1 -ил)пропил)-2-(4-(2 -метоксиэтил)-3,6-диоксо1-(2-(тиофен-2-ил)этил)пиперазин-2-ил)ацетамид	В	1,847	448
М.15.9	<Х 0 ώ 7/-(2-( 1 Н-индол-3-ил)этил)-2-(4-(2-метоксиэтил)-3,6-диоксо-1-(2(тиофен-2-ил)этил)пиперазин-2-ил)ацетамид	В	3,033	483

- 44 021838

- 45 021838

- 46 021838

- 47 021838

- 48 021838

- 49 021838

- 50 021838

- 51 021838

- 52 021838

- 53 021838

- 54 021838

М.22.27	0 С1 ОЛА/ Л^г-аллил-2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6-диоксо-1 -(пиридин-4илметил)пиперазин-2-ил)ацетамид	С	3,227	475 477
М.22.3	9„ „кА „ он 2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6-диоксо-1 -(пиридин-4илметил)пиперазин-2-ил)-У-(4-гидроксифенэтил)ацетамид	С	3,273	555 557
М.22.4	9« Λχ, Ф 2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6-диоксо-1-(пиридин-4илметил)пиперазин-2-ил)-У-(4-метоксифенэтил)ацетамид	с	3,603	569 571
М.22.5	9„ Ад /Л'А, 4„ к ¹ 2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6-диоксо-1 -(пиридин-4илметил)пиперазин-2-ил)-Л^г-(3,4-диметоксифенэтил)-ацетамид	с	3,466	599 601
М.22.6	9- да, “ хд.^ 9 0=5=0 νη₂ 2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6-диоксо-1-(пиридин-4илметил)пиперазин-2-ил)-У-(4-сульфамоилфенэтил)ацетамид	с	3,173	618 620
М.22.7	0„ „кд „ ρντΆ,, 9 0*%- 2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6-диоксо-1 -(пиридин-4илметил)пиперазин-2-ил)-Л^г-(4-нитрофенэтил)ацетамид	с	3,607	584 586

- 55 021838

Ы.22.8	А 'V ЛДЗ-(1Н-имидазол-1-ил)пропил)-2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6диоксо-1 -(пиридин-4-илметил)пиперазин-2-ил)ацетамид	С	2,668	543 545
Ы.22.9	А О С1 УААк, ΗΝ-Ο А-(2-(1#-индол-3-ил)этил)-2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-3,6-диоксо-1- (пиридин-4-илметил)пиперазин-2-ил)ацетамид	С	3,569	578 580

Соединения формулы 1е

1е.1. 6-Амино-2-(2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-1-(3,3-дифенилпропил)-3,6-диоксопиперазин-2-ил)ацетамидо)гексамид

Амид-Ртос смолу Ринка (II, 500 мг, 0,305 ммоль) подвергали реакции снятия защиты с помощью 5 мл 20% пиперидина в ΌΜΡ при перемешивании в микроволновом реакторе в течение 2 мин при 60°С. Смолу фильтровали и промывали ΌΜΡ (3x15 мл), изопропиловым спиртом (3x15 мл) и БСМ (3x15 мл). Ртос-Е-Еу§(Вос)-ОН аминокислоту (XI, 286 мг, 2 экв.) связывали со смолой с использованием НОВТ (82 мг, 2 экв.) и Б1С (96 мкл, 2 экв.) в 5 мл ΌΜΡ. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смолу фильтровали и промывали ΌΜΡ (3x15 мл), изопропиловым спиртом (3x15 мл) и БСМ (3x15 мл). Как только Ртос группу удаляли с помощью 5 мл 20% пиперидина в ΌΜΡ в течение 20 мин, смолу фильтровали и промывали ΌΜΡ (3x15 мл), изопропиловым спиртом (3x15 мл) и ^СΜ (3x15 мл). Затем смолу обрабатывали раствором кислоты X (181 мг, 1,1 экв.), НАТИ (348 мг, 3 экв.), НОВТ (123 мг, 3 экв.) и ΌΙΡΕΑ (0,313 мл, 6 экв.) в 5 мл ΌΜΡ. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Смолу сушили и промывали ΌΜΡ (3x3 мл), изопропиловым спиртом (3x3 мл) и ^СΜ (3x3 мл) и затем обрабатывали смесью 80:20:2,5:2,5 ТΡΑ/^СΜ/вода/триизопропилсилан (5 мл) в течение 30 мин при комнатной температуре. Смолу фильтровали и фильтрат выпаривали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью хроматографии с нормальной фазой с использованием градиента смеси дихлорметан-метанол-аммоний, получая 15 мг требуемого соединения (1е.1, 8% выход, 100% чистоты). Μ8 (Μ+Η)+ вычислено для С₃₅Н₄₁С1₂П₅О₄, 666,26, экспериментальное, 666,40.

Соединения формулы ΙΡ

ΙΡ.1.2. 6-Амино-2-(2-(П-(2,4-дихлорфенэтил)-2-(4-(2,4-дихлорфенэтил)-1-(3,3-дифенилпропил)-3,6диоксопиперазин-2-ил)ацетамидо)гексамид

- 56 021838

Амид-Ртос смолу Ринка (II, 8 00 мг, 0,42 ммоль) подвергали реакции снятия защиты с помощью 8 мл 20% пиперидина в Г)МР при перемешивании в микроволновом реакторе в течение 2 мин при 60°С. Смолу фильтровали и промывали Г)МР (3x15 мл), изопропиловым спиртом (3x15 мл) и ИСМ (3x15 мл). Ртос-Е-Еу§(Вос)-ОН аминокислоту (XII, 497 мг, 2 экв.) связывали со смолой с использованием НОВТ (143 мг, 2 экв.) и 1ЛС (165 мкл, 2 экв.) в 8 мл ИМР. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Смолу фильтровали и промывали Г)МР (3x15 мл), изопропиловым спиртом (3x15 мл) и Г)СМ (3x15 мл). Как только Ртос группу удаляли с помощью 8 мл 20% пиперидина в Г)МР в течение 20 мин, смолу фильтровали и промывали Г)МР (3x15 мл), изопропиловым спиртом (3x15 мл) и ИСМ (3x15 мл). Затем смолу обрабатывали раствором бромуксусной кислоты (III, 295 мг, 4 экв.) и ГИС (0,33 мл, 4 экв.) в 1:2 ИМРПСМ (8 мл) и смесь перемешивали в течение 20 мин при комнатной температуре. Смолу фильтровали и промывали Г)МР (3x15 мл), изопропиловым спиртом (3x15 мл) и ИСМ (3x15 мл). К смоле добавляли раствор 2,4-дихлорфенэтиламина (Ρνά, 0,32 мл, 4 экв.) и триэтиламина (0,295 мл, 4 экв.) в 12 мл Г)МР и суспензию перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре. Супернатант удаляли и реакцию повторяли при тех же условиях. Смолу фильтровали и промывали Г)МР (3x15 мл), изопропиловым спиртом (3x15 мл) и ИСМ (3x15 мл), получая смолу XIV, которую обрабатывали раствором кислоты X (274 мг, 2 экв.), НАТи (116 мг, 1,6 экв.), нОвТ и ПИЛА (0,295 мл, 3,2 экв.) в 8 мл ИМР. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Смолу сушили и промывали Г)МР (3x3 мл), изопропиловым спиртом (3x3 мл) и ИСМ (3x3 мл) и затем обрабатывали смесью 80:20:2,5:2,5 ТРА/ИСМ/вода/триизопропилсилан (5 мл) в течение 30 мин при комнатной температуре. Остаток фильтровали, и фильтрат выпаривали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью полупрепаративной КР-НРЬС с использованием градиента смеси ацетонитрил-вода, получая 128 мг требуемого соединения (^.1.2, 34% выход, 99% чистота). НКМ8 (М+Н)+ вычислено для С₄₅Н₅₀С1₄НзО₅, 895,2675; экспериментальное, 895,2648.

Фармакологические примеры

Щ уйго анализ на ингибирование образования апоптосомы

Рекомбинантный АраР-1, продуцируемый в клетках насекомых (гАраР-1), инкубировали в присутствии (в концентрации 10 мкМ) или в отсутствие (в качестве контроля) соединений, оцениваемых в буфере для анализа (20 мМ Нерез-КОН рН 7,5, 10 мМ КС1, 1,5 мМ МдС1₂, 1 мМ ΕΏΤ^ 1 мМ ΕΘТΑ, 1 мМ ЭТТ, 0,1 мМ РМ8Р) в течение 15 мин при 30°С. Конечная концентрация гАраР-1 составляла 40 нМ. Затем добавляли ЙАТР/М§ (81§та) и очищенные лошадиные цитохромы с (81§та), достигая конечной концентрации 100 и 0,1 мкМ соответственно. Смесь инкубировали в течение 60 мин при 30°С и затем добавляли рекомбинантную прокаспазу-9, продуцируемую в Е. соН (прокаспаза-9, конечная концентрация 0,1 мкМ), и смесь инкубировали в течение 10 мин при 30°С до добавления каспаза-9 фторогенного субстрата АсΡΕΓ)Ι Ι-аГс (конечная концентрация 50 мкМ). Общий объем для анализа составлял 200 мкл. Активность каспазы контролировали по высвобождению аРс при 37°С в АаНас 1420 АогкзШюп (Х_ехс=390 нм, Х_ет=510 нм).

Значения активности некоторых соединений, описанных в примерах, приведены в следующей ниже таблице, выраженны как процент ингибирования АраР-1.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы (I)

- 57 021838 и его фармацевтически приемлемые соли, в которой К1 выбран из -(СН₂)о_-3-арила и -(СН₂)о_-3-гетероарила,

К2 выбран из -(СН₂)_0-3-арила, -(СН₂)_0-3-гетероарила и -(СН₂)_1-2-СН(арила)₂,

К3 выбран из -С_1-5-алкила, -(СН₂)_1-3-гетероциклила, -(СН₂)_1-3-арила и -(СН₂)_1-3-гетероарила,

К4 выбран из -Н, -(СНК7)_1-3-СО-КК5К6, -(СНК7)_1-3-СО-ОК5 и -(СН₂)_1-3-СО[^СНК7СО]^Н₂, п представляет собой 1;

ш представляет собой 1;

К5 и К6 независимо выбраны из -Н, -С_1-5-алкила и -(СН₂)_0-3-арила,

К7 выбран из -Н и -С_1-5-алкила, где арил представляет собой фенил или нафтил;

гетероарил представляет собой 5-10-членную ароматическую кольцевую систему, содержащую по меньшей мере один кольцевой гетероатом, выбранный из О, δ и Ν;

гетероциклил представляет собой насыщенную или частично ненасыщенную 5-10-членную кольцевую систему, содержащую по меньшей мере один гетероатом в кольце, выбранный из О, δ и Ν; где

С_1-5-алкильная и гетероциклическая группы могут быть необязательно замещены одним или несколькими ОК5, где арильная и гетероарильная группы могут быть необязательно замещены одним или несколькими заместителями, выбранными независимо из галогена, СЕ₃, ОК5 и NО₂, при условии, что, когда К2 представляет собой 2-(4-фторфенил)этил, К4 представляет собой -(СН₂)СО-ИН₂ и п является 1, тогда если К1 представляет собой 2-(4-фторфенил)этил, К3 не является 2-(4-метоксифенил)этилом, 2-(2пиридил)этилом или 2-(2,4-дихлорфенил)этилом, и если К1 представляет собой 2-(2,4-дихлорфенил)этил, К3 не является 2-(4-метоксифенил)этилом или 2-(2-пиридил)этилом.
2. Соединение по п.1, в котором К1 представляет собой -(СН₂)_0-3-арил.
3. Соединение по п.1, в котором К5 представляет собой -Н или -С_1-5-алкил.
4. Соединение по п.1, в котором К6 представляет собой -Н.
5. Соединение по п.1, которое представляет собой
6. Соединение по п.1, которое представляет собой

- 58 021838
7. Соединение по п.1, которое выбрано из группы, состоящей из
8. Применение соединения, определенного в любом из пп.1-7, или его фармацевтически приемлемой соли в профилактике и/или лечении патологического и/или физиологического состояния, связанного с увеличением апоптоза, выбранного из предотвращения цитотоксичности, патологий вследствие условий гипоксии; глазных патологий; нейродегенеративных заболеваний; диабета; остеоартрита; артрита; воспаления и иммунодефицита.
9. Применение по п.8, где глазные патологии выбраны из группы, состоящей из повреждений, вы- 59 021838 зываемых глазной хирургией, возрастной макулярной дегенерацией, диабетической ретинопатией, пигментозного ретинита или глаукомы, или где цитотоксичность опосредуема химическими веществами, радиацией или акустической травмой.
10. Применение соединения, определенного в любом из пп.1-7, или его фармацевтически приемлемой соли для консервирования органов или клеток.
11. Применение соединения, определенного в любом из пп.1-7, или его фармацевтически приемлемой соли для производства лекарственного средства, предназначенного для профилактики и/или лечения патологического и/или физиологического состояния, связанного с увеличением апоптоза, выбранного из предотвращения цитотоксичности; патологий вследствие условий гипоксии; глазных патологий; нейродегенеративных заболеваний; диабета; остеоартрита; артрита; воспаления и иммунодефицита.
12. Применение по п.11, где глазные патологии выбраны из группы, состоящей из повреждений, вызываемых глазной хирургией, возрастной макулярной дегенерацией, диабетической ретинопатией, пигментозного ретинита или глаукомы, или где цитотоксичность опосредуема химическими веществами, радиацией или акустической травмой.
13. Применение соединения, определенного в любом из пп.1-7, или его фармацевтически приемлемой соли для производства препарата, предназначенного для консервирования органов или клеток.
14. Способ профилактики и/или лечения индивидуума или органа, страдающего или восприимчивого к страданию от патологического и/или физиологического состояния, ассоциируемого с увеличением апоптоза, выбранного из предотвращения цитотоксичности, патологий вследствие условий гипоксии; глазных патологий; нейродегенеративных заболеваний; диабета; остеоартрита; артрита; воспаления и иммунодефицита, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения, определенного в любом из пп.1-7, или его фармацевтически приемлемой соли указанному индивидууму или органу вместе с достаточными количествами фармацевтически приемлемых эксципиентов.
15. Способ по п.14, где глазные патологии выбраны из группы, состоящей из повреждений, вызываемых глазной хирургией, возрастной макулярной дегенерацией, диабетической ретинопатией, пигментозного ретинита или глаукомы, или где цитотоксичность опосредуема химическими веществами, радиацией или акустической травмой.
16. Способ консервирования органов или клеток, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения, определенного в любом из пп.1-7, или его фармацевтически приемлемой соли в указанный орган или клетку вместе с достаточными количествами фармацевтически приемлемых эксципиентов.