DE69622652T2

DE69622652T2 - Substituierte indolymethylen-oxindol-analoge als tyrosin kinase inhibitoren

Info

Publication number: DE69622652T2
Application number: DE69622652T
Authority: DE
Inventors: Dario Ballinari; Carlo Battistini; Antonella Ermoli; Sergio Penco; Sergio Vioglio
Original assignee: Pharmacia Italia SpA
Current assignee: Pfizer Italia SRL
Priority date: 1995-04-07
Filing date: 1996-03-14
Publication date: 2003-03-06
Anticipated expiration: 2016-03-15
Also published as: ES2181875T3; DE69622652D1; JPH10501821A; EP0764152B1; GB9507298D0; US5849710A; EP0764152A1; WO1996032380A1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Derivate von substituierten Indolylmethylenoxindolen, ein Verfahren zu ihrer Herstellung, sie enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen und ihre Verwendung als Therapeutika, insbesondere zur Behandlung eines Patienten, der der Tyrosinkinase- Hemmung bedarf.
Die internationalen Patentanmeldungen WO 91/13055 und WO 93/01182 offenbaren Indolylmethylenoxindolderivate mit hoher in vitro-Tyrosinkinasehemmenden Aktivität. Solche Methylenoxindolderivate sind jedoch ähnlich wie andere bekannte Tyrosinkinase-Hemmer durch eine hohe Lipophilie, eine geringe wässrige Löslichkeit und eine entsprechend geringe Bioverfügbarkeit gekennzeichnet.
Jedoch kann die Aufgabe, im selben Molekül eine hohe Tyrosinkinasehemmende Aktivität und adäquate Wasserlöslichkeit zu vereinen, nicht durch blosses Einführen hydrophiler Gruppen in die Struktur von in vitro-aktiven Tyrosinkinase-Hemmern erreicht werden, da diese Strategie in den meisten Fällen in einem beträchtlichen Verlust an Hemmaktivität resultiert. Tatsächlich wird die therapeutische Wirksamkeit aller Arzneistoffe, wie dies auf diesem Gebiet bekannt ist, stark durch unterschiedliche Parameter beeinflusst, die ihre Bioverfügbarkeit beeinflussen können. Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es daher, neue Indolylmethylenoxindol-Verbindungen mit verbesserter Bioverfügbarkeit bereitzustellen.
WO-A-9622976 offenbart 3-Aryliden-2-oxindolderivate als Tyrosinkinase-Hemmer; dieses Dokument ist nur gemäss Artikel 54(3) EPÜ relevant.
Entsprechend stellt die vorliegende Erfindung neue Indol-3-ylmethylen-2-oxindolderivate mit der folgenden allgemeinen Formel (I) bereit:
worin
R&sub2; ein Substituent ist, unabhängig ausgewählt aus:
(a) einer COR&sub8;-Gruppe, in der R&sub8; eine -E-NH&sub2;- oder -E-NR&sub4;R&sub5;-Gruppe ist, worin E -CH&sub2; -CH&sub2;-CH&sub2;- oder -CH(CH&sub3;)- ist und ein Vertreter aus R&sub4; und R&sub5; Wasserstoff oder C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl und der andere C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl ist oder R&sub4; und R&sub5; zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen gesättigten heteromonocyclischen C&sub4;&submin;&sub7;-Ring bilden, der gegebenenfalls ein weiteres Heteroatom enthält, ausgewählt aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel; und
(b) einer -NHR&sub6;-Gruppe, in der R&sub6; die terminale Carbonylgruppe eines Peptidylrests ist, der 1 bis 3 Aminosäuren enthält, ausgewählt aus Alanin, Glycin, Histidin, Threonin, Glutaminsäure, Asparaginsäure und Tyrosin, worin die terminale Aminogruppe entweder frei oder in einer durch eine Amino- Schutzgruppe, ausgewählt aus Benzyloxycarbonyl, p-Methoxybenzyloxycarbonyl, t-Butoxycarbonyl (Boc), Biphenylylisopropyloxycarbonyl (BBoc), 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc), Triphenylmethyl (Trityl), O-Nitrobenzolsulfenyl (Nps), Trimethylsilylethoxycarbonyl, Di-p-nitrophenylethoxycarbonyl und Trichlorethoxycarbonyl (Troc), geschützten Form ist; und
R Wasserstoff, Halogen, Amino, Hydroxy, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkoxy, Carboxy, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkoxy-carbonyl, C&sub2;&submin;&sub6;-Alkanoyloxy, Cyano oder -NR&sub4;R&sub5; ist, worin R&sub4; und R&sub5; wie oben definiert sind, und die pharmazeutisch akzeptablen Salze von salzbildenden Verbindungen der Formel (I).
Die Erfindung schliesst in ihrem Umfang alle möglichen Isomere, Stereoisomere, insbesondere Z- und E-Isomere, und ihre Mischungen ein.
Die Alkylgruppen und die Alkyleinheit in den Alkanoylgruppen können verzweigte oder lineare Alkylketten sein. Eine C&sub1;&submin;&sub6;-Alkylgruppe ist bevorzugt eine C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylgruppe, z. B. Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, sec-Butyl oder tert-Butyl, insbesondere Methyl oder Ethyl.
Eine C&sub1;&submin;&sub6;-Alkoxygruppe ist z. B. Methoxy, Ethoxy, Propoxy, Isopropoxy, Butoxy oder tert-Butoxy, bevorzugt Methoxy, Ethoxy oder Propoxy.
Wenn R&sub4; und R&sub5; zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen gesättigten heteromonocyclischen C&sub4;&submin;&sub7;-Ring bilden, ist der Ring typischerweise ein Pyrrolidin-, Piperidin- oder Morpholinoring.
Beispiele für Aminosäuren, die gemäss der Bedeutung von R&sub6; einen Peptidylrest bilden, sind bevorzugt Glycin, Alanin und Glutaminsäure.
Entsprechend können die terminale R&sub6;-Carbonylgruppe und der relevante Peptidylrest zusammen ein Peptidoylradikal bilden, z. B. ausgewählt aus der Gruppe, die -CO-CH(CH&sub3;)-NH&sub2;, -CO-CH(CH&sub3;)-NHCO-CH(CH&sub3;)-NH&sub2;, -CO-CH(NH&sub2;)-CH(OH)CH&sub3; und -CO-CH(CH&sub3;)-NHCO-CH(NH&sub2;)-CH&sub2;-CH&sub2;-COOH einschliesst, worin die terminale Aminogruppe entweder frei oder in einer geschützten Fort, wie oben angegeben, sein kann.
Wenn R&sub6; die terminale Carbonylgruppe eines Peptidylrests wie oben definiert ist, worin die terminale Aminogruppe in einer geschützten Form ist, so ist die Amino-Schutzgruppe bevorzugt aus Butoxycarbonyl (Boc) und 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc) ausgewählt.
Eine -E-Gruppe, die eine -CH&sub2;-, -CH&sub2;-CH&sub2;- oder -CH(CH&sub3;)-Gruppe ist, ist bevorzugt -CH&sub2;- oder -CH(CH&sub3;)-.
Ein Halogenatom ist z. B. Fluor, Chlor, Brom oder Iod, bevorzugt ein Fluor-, Chlor- oder Bromatom.
Eine C&sub2;&submin;&sub6;-Alkanoylgruppe oder -Alkanoyleinheit in Alkanoyloxygruppen ist bevorzugt eine C&sub2;&submin;&sub4;-Alkanoylgruppe, insbesondere Acetyl, Propionyl oder Butyryl.
Pharmazeutisch akzeptable Salze der Verbindungen der Erfindung schliessen Säureadditionssalze mit anorganischen Säuren, z. B. Salpetersäure, Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Perchlorsäure und Phosphorsäure, oder mit organischen Säuren, z. B. Essigsäure, Propionsäure, Glykolsäure, Milchsäure, Oxalsäure, Malonsäure, Äpfelsäure, Maleinsäure, Weinsäure, Zitronensäure, Benzoesäure, Zimtsäure, Mandelsäure und Salicylsäure, und Salze mit anorganischen Basen, z. B. Alkalimetallbasen, speziell Natrium- oder Kaliumbasen, oder Erdalkalimetallbasen, speziell Calcium- oder Magnesiumbasen, oder mit organischen Basen, z. B. Alkylaminen, vorzugsweise Triethylamin, ein.
Bevorzugte Verbindungen der Erfindung sind die Verbindungen der Formel (I), worin R&sub2; unabhängig ein Substituent ist, der ausgewählt ist aus:
(a') einer COR&sub8;-Gruppe, in der R&sub8; -E-NH&sub2; oder -E-NR&sub4;R&sub5; ist, worin E wie oben definiert ist und ein Vertreter aus R&sub4; und R&sub5; C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl und der andere Wasserstoff oder C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl ist oder R&sub4; und R&sub5; zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen Pyrrolidin- oder Piperidinring bilden; und
(b') -NHR&sub6;, worin R&sub6; die terminale Carbonylgruppe eines Peptidylrests ist, der 1 oder 2 Aminosäuren wie oben definiert enthält, und R Wasserstoff, Halogen, Amino, Hydroxy, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxy, C&sub2;&submin;&sub4;-Alkoxycarbonyl, C&sub2;&submin;&sub4;-Alkanoyloxy, Cyano, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylamino oder Di(C&sub1;&submin;&sub4;-alkyl)-amino ist; und die pharmazeutisch akzeptablen Salze von salzbildenden Verbindungen der Formel (I).
Beispiele für spezifische Verbindungen der Erfindung sind die folgenden Verbindungen, die nach Bedarf entweder Z- oder E-Diastereomere oder Z,E-Mischungen der Diastereomere sein können:
5-Aminomethylcarbonyl-3-(indol-3-yl-methylen)-2-indolinon;
3-(Indol-3-ylmethylen)-5-(2-piperidin-1-yl-acetyl)-2-indolinon (interner Schlüssel: FCE 28484);
6-L-Alanylamino-(3-(5-methoxy-indol-3-ylmethylen)-2-indolinon] (interner Schlüssel: FCE 28934);
5-Alanylamino-3-[(5'-methoxy-3'-indolyl)methylen]-2-indolinon] (interner Schlüssel: FCE 28901);
5-L-Glutamyl-L-alanylamino-3-[(5'-methoxy-3'-indolyl)methylen]-2- indolinon (interner Schlüssel: FCE 28437);
und die pharmazeutisch akzeptablen Salze von salzbildenden Mitgliedern der Gruppe.
Die Verbindungen der Erfindung und die pharmazeutisch akzeptablen Salze davon können z. B. durch ein Verfahren erhalten werden, welches umfasst:
(a) Umsetzen eines Aldehyds der Formel (II):
worin R wie oben definiert ist, mit einer Verbindung der Formel (III)
worin R&sub2; wie oben definiert ist; oder
(b) Umsetzen einer Verbindung der Formel (VI):
worin R"&sub2; -NH&sub2; ist und R wie oben definiert ist, mit einem Acylierungsmittel der Formel (VII):
HOOC-R&sub8;
oder einem reaktiven Carbonylderivat davon, worin R&sub8; wie oben definiert ist, um dadurch eine Verbindung der Formel (I) zu erhalten, worin R&sub2; wie oben unter (a) definiert ist; und nach Wunsch Konvertieren einer Verbindung der Formel (I) zu einer anderen Verbindung der Formel (I) und/oder nach Wunsch Konvertieren einer Verbindung der Formel (I) zu einem pharmazeutisch akzeptablen Salz davon und/oder nach Wunsch Konvertieren eines Salzes zu einer freien Verbindung und/oder nach Wunsch Auftrennen einer Mischung aus Isomeren einer Verbindung der Formel (I) in die einzelnen Isomere.
Die Reaktion einer Verbindung der Formel (II) mit einer Verbindung der Formel (III) ist ein Analogieverfahren, das gemäss bekannten Verfahren wie nachfolgend beschrieben durchgeführt werden kann; bevorzugt in Gegenwart eines basischen Katalysators, z. B. Pyridin, Piperidin, Dimethylamin oder eines geeigneten Alkalimetallhydroxids oder -alkoxids. Zum Beispiel kann die Reaktion einer Verbindung der Formel (II) mit einer Verbindung der Formel (III) unter den Bedingungen der Knoevenagel-Reaktionen durchgeführt werden, wie sie z. B. von G. Jones in Organic Reactions 15, 204 (1967), beschrieben werden. Geeignete Katalysatoren sind organische Basen, wie Pyridin, Piperidin oder Diethylamin.
Die Kondensation kann in einem inerten organischen Lösungsmittel durchgeführt werden, z. B. Pyridin, Ethanol, Methanol, Benzol oder Dioxan, bei Temperaturen im Bereich von ca. 0 bis ca. 100ºC.
Bevorzugt wird die Reaktion in warmer Ethanollösung in Gegenwart von Piperidinkatalysator durchgeführt.
Ein reaktives Derivat einer Carbonsäure der Formel (VII) ist z. B. ein Halogenid, z. B. ein Acylchlorid oder ein Anhydrid, typischerweise ein gemischtes Anhydrid oder eine in situ erzeugte aktivierte Form aus der Carbonsäure und einem Kupplungsmittel, wie Benzotriazol-1-yl-oxy-trispyrrolidinophosphoniumhexafluorophosphat (PyBOP). Die Acylierungsreaktion einer Verbindung der Formel (VI) mit einer Verbindung der Formel (VII) wird bevorzugt in Gegenwart eines basischen Mittels, wie Pyridin, bei einer Temperatur im Bereich von ca. 0 bis ca. 50ºC durchgeführt.
Eine Verbindung der Formel (I) kann zu einer anderen Verbindung der Formel (I) gemäss bekannten Verfahren konvertiert werden.
Die optionale Salzbildung einer Verbindung der Formel (I) sowie die Konvertierung eines Salzes zur freien Verbindung und die Auftrennung einer Mischung von Isomeren in die einzelnen Isomere können durch herkömmliche Verfahren durchgeführt werden.
Zum Beispiel kann die Auftrennung einer Mischung aus geometrischen Isomeren, z. B. cis- und trans-Isomeren, durch fraktionierte Kristallisation aus einem geeigneten Lösungsmittel oder durch Chromatografie, entweder Säulenchromatografie oder Hochdruck-Flüssigkeitschromatografie, durchgeführt werden.
Die intermediären Verbindungen der Formel (II) und (III) können gemäss bekannten Verfahren aus bekannten Verbindungen erhalten werden, wie z. B. in WO 91/13055 und WO 93/01182 beschrieben. Die Fachleute werden anerkennen, dass die intermediären Verbindungen der Formeln (II) und (III) den gleichen chemischen Substituentenmodifikationen unterworfen werden können, wie sie im Zusammenhang mit den Verbindungen der Formel (I) beschrieben werden.
Jedoch können die Substituentenmodifikationen angemessen mit unterschiedlichen Graden innerhalb des Verfahrens je nach Zweckmässigkeit und in Abhängigkeit von der Natur der Substituenten und von der Verträglichkeit der Umwandlungen mit den beteiligten chemischen Strukturen durchgeführt werden.
Die intermediären Verbindungen der Formeln (VI) und (VII) sind bekannte Verbindungen oder können aus bekannten Verbindungen erhalten werden. Zum Beispiel sind die meisten der Verbindungen der Formel (VI) aus WO 91/13055 und WO 93/01182 bekannt oder können in ähnlicher Weise erhalten werden.
Verbindungen der Formel (III) (Oxindolderivat) können, falls sie nicht erhältlich sind, ebenfalls aus dem entsprechenden Indolderivat durch ein Analogieverfahren durch bekannte Methoden erhalten werden. Ein bekanntes ist ein Oxidations-Reduktions-Verfahren, das die Verwendung von Pyridiniumbromidperbromid unter Verwendung eines tertiären Alkohols als Lösungsmittel, vorzugsweise tert-Butanol, gefolgt von einer reduktiven Behandlung mit Zink in Essigsäure oder Hydrierung in Gegenwart von Palladium auf Aktivkohle umfasst.
Wenn in den neuen Verbindungen der vorliegenden Erfindung und in den zu ihrer Herstellung verwendeten Zwischenprodukten Gruppen vorhanden sind, die geschützt werden müssen, bevor die oben beschriebenen Reaktionen durchgeführt werden, so können sie vor der Durchführung der Reaktion geschützt und dann am Ende der Reaktion gemäss in der organischen Chemie wohlbekannten Verfahren entschützt werden.

PHARMAKOLOGIE

Die Verbindungen der Erfindung besitzen eine spezifische Tyrosinkinase-hemmende Aktivität. Es wird angenommen, dass Tyrosinkinase-Hemmer von grosser Bedeutung bei der Regulierung der unkontrollierten Zellvermehrung sein können, d. h. bei Zellvermehrungsstörungen.
Kürzliche Untersuchungen über die molekulare Grundlage der neoplastischen Umwandlung haben eine Familien von Genen identifiziert, als Onkogene bezeichnet, deren fehlerhafte Expression die Tumorentwicklung verursacht. Zum Beispiel besitzen die RNA-Tumorviren eine solche Onkogensequenz, deren Expression die neoplastische Konvertierung infizierter Zellen bestimmt. Verschiedene ihrer Onkogen-codierten Proteine, wie pp60v-src, p70gag-yes, p130gag-fps und P70gag-fgr, zeigen eine Protein-Tyrosinkinase-Aktivität, d. h. sie katalysieren die Übertragung des y-Phosphats von Adenosintriphosphat (ATP) auf Tyrosinreste im Proteinsubstrat. In normalen Zellen zeigen verschiedene Wachstumsfaktorrezeptoren, z. B. die Rezeptoren für PDGF, EGF, α-TGF und Insulin, eine Tyrosinkinase-Aktivität.
Die Bindung des Wachstumsfaktors (GF) aktiviert die Tyrosinkinase- Rezeptoren, so dass sie eine Autophosphorylierung erfahren und benachbarte Moleküle an Tyrosin phosphorylieren. Es wird daher angenommen, dass die Phosphorylierung dieser Tyrosinkinase-Rezeptoren eine wichtige Rolle in der Signalübertragung spielt, und dass die Hauptfunktion der Tyrosinkinase- Aktivität in normalen Zellen die Regulierung des Zellwachstums ist. Die Störung dieser Aktivität durch onkogene Tyrosinkinasen, die entweder übererzeugt werden und/oder eine veränderte Substratspezifität zeigen, kann zu einem Verlust an Wachstumskontrolle und/oder zu neoplastischer Umwandlung führen. Entsprechend kann ein spezifischer Inhibitor für Tyrosinkinase nützlich in der Untersuchung des Mechanismus der Krebsbildung, der Zellvermehrung und -differenzierung sein und kann wirksam in der Verhinderung und Chemotherapie von Krebs und anderen pathologischen Proliferationszuständen sein.
Daher können die erfindungsgemässen Verbindungen nützlich in der Behandlung von pathologischen Proliferationsstörungen in Säugetieren, einschliesslich Mensch, sein.
Ein Mensch oder Tier, z. B. ein Säugetier, kann somit durch ein Verfahren behandelt werden, das die Verabreichung einer therapeutisch wirksamen Menge einer der Verbindungen der Erfindung umfasst. Auf diese Weise kann der Zustand des Menschen oder Tieres verbessert werden. Eine Linderung des Krankheitszustandes oder der Störung, an der der Mensch oder das Tier leidet, kann erreicht werden. Typische Beispiele für solche Störungen sind gutartige und bösartige Tumoren, einschliesslich Leukämie, wie myeloblastische Leukämie, Lymphom, Sarkom, Neuroblastom, Wilms-Tumor, bösartiges Neoplasma der Blase, Brust, Lunge oder Schilddrüse, Neoplasien epitelialen Ursprungs, wie Mammakarzinom. Ferner können sie nützlich in der Behandlung von epidermaler Hyperproliferation sein, wie Psoriasis. Die Verbindungen der Erfindung können ebenfalls nützlich in der Hemmung der Entwicklung von atheromatöser Plaque und Restenose, in der Kontrolle von Angiogenese, als Antimetastatika und in der Behandlung von diabetischen Komplikationen sein. Sie besitzen ebenfalls Nützlichkeit als immunmodulierende Mittel in der Regulierung von Erkrankungen des Immunsystems, z. B. als Immunsuppressiva, und in der Behandlung von Alzheimer-Krankheit, soweit Protein-Tyrosinkinasen an diesen Krankheiten beteiligt sind.
Die Tyrosin-spezifische Proteinkinase-Aktivität der Verbindungen der Erfindung wird z. B. durch die Tatsache gezeigt, dass sie wirksam in der nachfolgend beschriebenen in vitro- und in vivo-Untersuchung sind.

IN VITRO-TEST

p45 v-abl-Kinasereinigung

Das in unserer Untersuchung verwendete Enzym war die p45 v-abl-Tyrosinkinase, die die katalytische Domäne der Abelson-Tyrosinkinase darstellt (isoliert aus dem Abelson-Leukämievirus der Maus). Die p45 v-abl-Kinase wurde wie von Wang et al. in J. Biol. Chem. 260, 64 (1985) und von Ferguson et al. in J. Biol. Chem. 260, 3652 (1985) und in Biochem. J. 257, 321 (1989) beschrieben hergestellt und isoliert.

p45 v-abl-Kinasetest

(Val&sup5;)-Angiotensin II-Phosphorylierung wurde durch Inkubieren mit 40 ng gereinigter abl-Kinase und (γ-³²P)-ATP in 50 ul Puffer durchgeführt, der Tris-HCl 25 mM, pH 8,0, MgCl&sub2; 10 mM und Dithiothreitol 0,1 mM enthielt (Kinasepuffer). Die Reaktionsmischung wurde für die angegebene Zeit bei 30ºC inkubiert und die Reaktion durch Zugabe von 50 ul 5%-iger Trichloressigsäure gestoppt. Nach kurzer Inkubation auf Eis wurden die Röhrchen zentrifugiert. Die überstände wurden auf Phosphocellulose-Papierquadrate (Whatman P-81) getüpfelt und ausgedehnt in Essigsäure gespült. Die an die getrockneten Phosphocellulose-Quadrate gebundene Radioaktivität wurde in einem Flüssigszintillationszähler gemessen. IC&sub5;&sub0;-Werte wurden aus dreifachen Bestimmungen für jeden experimentellen Punkt berechnet. Jeder Inhibitor wurde in Konzentrationen im Bereich von 0 bis 400 ug in Gegenwart fester Konzentrationen von Peptid (2 mM) und ATP (50 uM) untersucht.

IN VIVO-TEST

Hemmtest zum K562-Zellwachstum

K562-Zellen, eine menschliche myelogene Leukämiezellinie, wurden in Gewebekulturplatten mit 24 Vertiefungen (Falcon 3047) in Gegenwart zunehmender Konzentrationen der Verbindungen übergeimpft (10.000/Vertiefung). Nach 72 Stunden wurden die Zellen geerntet und unter Verwendung eines Zellzählers (Coulter-Counter-ZM) gezählt.
Die prozentuale Hemmung wurde bezüglich der unbehandelten Kontrollzellen ausgewertet.
Die Hemmaktivitätsdaten für eine repräsentative Gruppe von erfindungsgemässen Verbindungen, erhalten sowohl im in vitro-p45 v-abl-Kinasetest als auch im in vivo-Hemmtest des menschlichen chronischen Myeloidleukämie-K562-Zellwachstums, oben beschrieben, sind in der folgenden Tabelle 1 aufgeführt. TABELLE 1 Hemmung von p45-Kinase und K562-Zellwachstum
wobei FCE 28484 3-(Indol-3-ylmethylen)-5-(2-piperidin-1-yl- acetyl)-2-indolinon bedeutet; und
FCE 28437 5-L-Glutamyl-L-alanylamino-3-[(5'-methoxy-3'- indolyl)methylen]-2-indolinon bedeutet.
Hinsichtlich ihrer hohen Aktivität können die Verbindungen der Erfindung in der Medizin zur Behandlung eines Patienten verwendet werden, der der Tyrosinkinase-Hemmung bedarf.
Die Verbindungen der Erfindung können in einer Vielzahl von Arzneiformen verabreicht werden, z. B. oral in Form von Tabletten, Kapseln, zucker- oder filmüberzogenen Tabletten, flüssigen Lösungen oder Suspensionen; rektal in Form von Suppositorien; parenteral, z. B. intramuskulär, oder durch intravenöse Injektion oder Infusion; oder topisch. Die Dosierung hängt vom Alter, Gewicht, Zustand des Patienten und dem Verabreichungsweg ab. Zum Beispiel kann die zur oralen Verabreichung an erwachsene Menschen verwendete Dosierung für die Verbindung FCE 28484 im Bereich von ca. 10 bis ca. 150-200 mg pro Dosis sein, 1 bis 5 mal täglich. Natürlich können diese Dosierungsschemata zur Bereitstellung der optimalen therapeutischen Reaktion eingestellt werden.
Die Erfindung schliesst pharmazeutische Zusammensetzungen ein, die eine Verbindung der Formel (I) oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon in Verbindung mit einem pharmazeutisch akzeptablen Exzipienten (der ein Träger oder ein Verdünnungsmittel sein kann) umfassen.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen, die die Verbindungen der Erfindung enthalten, werden gewöhnlich unter Befolgen herkömmlicher Verfahren hergestellt und werden in einer pharmazeutisch geeigneten Form verabreicht.
Zum Beispiel können die festen oralen Formen zusammen mit dem Wirkstoff Verdünnungsstoffe enthalten, z. B. Lactose, Dextrose, Saccharose, Cellulose, Maisstärke oder Kartoffelstärke; Gleitmittel, z. B. Kieselerde, Talkum, Stearinsäure, Magnesium- oder Calciumstearat und/oder Polyethylenglykole; Bindemittel, z. B. Stärke, Gummi arabicum, Gelatine, Methylcellulose, Carboxymethylcellulose oder Polyvinylpyrrolidon; Tablettensprengmittel, z. B. eine Stärke, Alginsäure, Alginate oder Natriumstärkeglykolat; Brausemischungen; Farbstoffe; Süssungsmittel; Benetzungsmittel, wie Lecithin, Polysorbate, Laurylsulfate; und allgemein nicht-toxische und pharmakologisch inaktive Stoffe, die in pharmazeutischen Formulierungen verwendet werden. Die pharmazeutischen Zubereitungen können in bekannter Weise hergestellt werden, z. B. durch Misch-, Granulierungs-, Tablettier-, Zuckerüberzugs- oder Filmüberzugsverfahren.
Die flüssige Suspension zur oralen Verabreichung kann z. B. Sirupe, Emulsionen und Suspensionen sein.
Der Sirup kann als Träger z. B. Saccharose oder Saccharose mit Glycerin und/oder Mannit und/oder Sorbit enthalten.
Die Suspensionen und die Emulsionen können als Träger z. B. ein natürliches Gummi, Agar, Natriumalginat, Pectin, Methylcellulose, Carboxymethylcellulose oder Polyvinylalkohol enthalten.
Die Suspensionen oder Lösungen für intramuskuläre Injektionen können zusammen mit dem Wirkstoff einen pharmazeutisch akzeptablen Träger, z. B. steriles Wasser, Olivenöl, Ethyloleat, Glykole, z. B. Propylenglykol, und nach Wunsch eine geeignete Menge Lidocain-hydrochlorid enthalten.
Die Lösungen für intravenöse Injektionen oder zur Infusion können als Träger z. B. steriles Wasser enthalten, oder sie können vorzugsweise in Form von sterilen wässrigen, isotonischen Kochsalzlösungen sein.
Die Suppositorien können zusammen mit dem Wirkstoff einen pharmazeutisch akzeptablen Träger enthalten, z. B. Kakaobutter, Polyethylenglykol, ein Polyoxyethylensorbitan-Fettsäureester-Tensid oder Lecithin.
Zusammensetzungen zur topischen Anwendung, z. B. Cremes, Lotionen oder Pasten, können durch Vermischen des Wirkstoffs mit einem herkömmlichen ölartigen oder emulgierenden Exzipienten hergestellt werden.
Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist ein kombiniertes Behandlungsverfahren für Krebs oder zur Linderung der Zustände von Säugetieren, einschliesslich Mensch, die an Krebs leiden, wobei das Verfahren die Verabreichung
(1) einer Verbindung der Erfindung oder eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes davon und
(2) eines zusätzlichen Antitumormittels in Mengen und zeitlich nahe genug zueinander, um eine therapeutisch nützliche Wirkung zu erzeugen, umfasst.
Die vorliegende Erfindung stellt ebenfalls Produkte bereit, die eine Verbindung der Erfindung oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon und ein zusätzliches Antitumormittel als kombinierte Zubereitung zur gleichzeitigen, separaten oder aufeinanderfolgenden Verwendung in der Antikrebstherapie enthalten.
Der Begriff "Antitumormittel" soll sowohl einen einzelnen Antitumor- Arzneistoff als auch "Cocktails", d. h. eine Mischung solcher Arzneistoffe, gemäss der klinischen Praxis umfassen.
Beispiele für Antitumormittel, die mit einer Verbindung der Erfindung formuliert werden können oder alternativ in einem kombinierten Behandlungsverfahren verabreicht werden können, schliessen Doxorubicin, Daunomycin, Epirubicin, Idarubicin, 4'-Ioddoxorubicin, Methoxy-morpholino-doxorubicin, Etoposid, Fluoruracil, Melphalan, Cyclophosphamid, Bleomycin, Vinblastin und Mitomycin oder eine Mischung aus zwei oder mehreren daraus ein.
Die Verbindungen der Erfindung können daher in einer Behandlung verwendet werden, um Krebs zu lindern. Sie können an einen Patienten verabreicht werden, der an einem mit einem Antitumormittel, z. B. einem Anthracyclinglykosid, wie Doxorubicin, Daunomycin, Epirubicin oder Idarubicin, wie oben erwähnt, zusammen mit dem Antitumormittel behandelbaren Krebs leidet.
Eine Verbindung der Erfindung und ein Antitumormittel, wie ein Anthracyclinglykosid, können verabreicht werden, um den Zustand eines Patienten mit einer Leukämie, wie myeloblastischer Leukämie, Lymphom, Sarkom, Neuroblastom, Wilms-Tumor oder bösartigem Neoplasma der Blase, Brust, Lunge oder Schilddrüse, zu verbessern.
Die folgenden Beispiele veranschaulichen, aber beschränken nicht die Erfindung.

BEISPIEL 1

Herstellung von FCE 28484

Zu einer Suspension aus wasserfreiem Aluminiumchlorid (11,4 g, 85 mmol) in 1,2-Dichlorethan (10 ml) wurde unter Rühren bei 0ºC Bromacetylbromid (5,9 ml, 68 mmol) getropft.
Nach Fortsetzen des Rührens für 1 Stunde wurde in 1,2-Dichlorethan (10 ml) gelöstes 2-Indolinon (4,52 g, 34 mmol) hinzugegeben, die Mischung wurde 2 Stunden bei 0ºC gerührt und dann für 3 Stunden auf 50ºC erwärmt.
Die Reaktionsmischung wurde in Eis und Wasser (500 ml) gegossen und unter Erhalt von 5-(2-Bromacetyl)-2-indolinon (7,5 g) filtriert.
Eine Lösung aus Piperidin (0,39 ml, 3,9 mmol) und 5-(2-Bromacetyl)-2- indolinon (500 mg, 1,97 mmol) in N,N-Dimethylformamid (15 ml) wurde bei Raumtemperatur 4 Stunden gerührt, dann in Wasser gegossen (50 ml) und mit Dichlormethan (250 ml) gewaschen, die organische Phase wurde mit Wasser mehrere Male gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet.
Nach Verdampfen des Lösungsmittels wurde der Rückstand an Silicagel unter Verwendung von Ethylacetat als Elutionsmittel unter Erhalt von 5-(2-Piperidin-1-yl-acetyl)-2-indolinon (250 mg) chromatografiert.
Zu einer Lösung aus Indol-3-carboxaldehyd (150 mg, 1,03 mmol) und 5-(2-Piperidin-1-yl-acetyl)-2-indolinon (250 mg, 0,97 mmol) in Ethanol (10 ml) wurde Piperidin (0,15 ml, 1,5 mmol) unter Rühren bei 80ºC gegeben.
Nach Fortsetzen des Rührens für 3 Stunden ergab die Mischung einen Feststoff, der filtriert und mit Ethanol gewaschen wurde, um 3-(Indol-3- ylmethylen)-5-(2-piperidin-1-yl-acetyl)-2-indolinon (FCE 28484) (250 mg) zu ergeben.
¹H-NMR (400 MHz, DMSO, δ ppm): 1,3-1,6 (m, 6H); 2,50 (m, 4H); 3,78 (s, 2H); 6,93 (d, J = 7,9 Hz, 1H); 7,25 (m, 2H); 7,53 (m, 1H); 7,86 (dd, J = 1,7 Hz, J = 8,2 Hz, 1H), 8,22 (m, 1H); 8,29 (s, 1H); 8,50 (d, J = 1,7 Hz, 1H); 9,45 (s, 1H); 10,8 (bs, 1H); 12,0 (bs, 1H).
FD-MS: m/z 386 (39, [MH]&spplus;); 385 (33, [M]&spplus;); 98 (100, [C&sub6;H&sub1;&sub2;]&spplus;)
Durch analoges Vorgehen mit entsprechender Modifizierung zur Einführung der Aminogruppe unter Verwendung der Gabriel-Synthese kann die folgende Verbindung erhalten werden: 5-Aminomethylcarbonyl-3-(indol-3-yl- methylen)-2-indolinon.

BEISPIEL 2

Herstellung von FCE 28934

Zu einer Lösung aus 6-Nitroindol (1,62 g, 10 mmol) in tert-Butanol (100 ml) wurde Pyridinhydrobromidperbromid (9,6 g, 30 mmol) in 30 Minuten unter Rühren portionsweise gegeben.
Nach Fortsetzen des Rührens für 1 Stunde bei Raumtemperatur wurde das Lösungsmittel unter reduziertem Druck entfernt und der Rückstand mit Ethylacetat (250 ml) aufgenommen und mit Wasser gewaschen. Die organische Schicht wurde über Natriumsulfat getrocknet und unter reduziertem Druck aufkonzentriert. Der Rückstand wurde in Essigsäure (50 ml) gelöst, und Zinkstaub (4,3 g, 65 mmol) wurde unter Rühren bei 0ºC hinzugegeben.
Nach 1 Stunde wurde die Mischung über einem Celitekissen filtriert und mit Ethylacetat (250 ml) gewaschen.
Die organische Schicht wurde mit 5%-igem Natriumbicarbonat und dann mit Kochsalzlösung gewaschen, und das Lösungsmittel wurde unter reduziertem Druck entfernt.
Der Rückstand wurde in Dioxan (50 ml) gelöst, und Triethylamin (0,8 ml, 5,6 mmol) und Di-tert-butylpyrocarbonat (1,2 g, 5,5 mmol) wurden unter Rühren hinzugegeben. Nach Rühren für 2 Stunden bei Raumtemperatur wurde die Mischung mit Ethylacetat (100 ml) verdünnt und mit Wasser gewaschen. Die organische Schicht wurde an Natriumsulfat getrocknet und unter reduziertem Druck aufkonzentriert.
Der Rückstand wurde an Silicagel mit einer Mischung aus Ethylacetat und Cyclohexan (1 : 1) als Elutionsmittel chromatografiert, um 6-tert-Butoxycarbonylamino-2-indolinon (100 mg) zu ergeben.
FD-MS: m/z 248 (100, [M]&spplus;)
Zu einer Lösung aus 6-tert-Butoxycarbonylamino-2-indolinon (40 mg, 0,16 mmol) und 5-Methoxy-indol-3-carbaldehyd (30 mg, 0,16 mmol) in Ethanol (5 ml) wurde Piperidin (0,01 ml, 0,1 mmol) unter Rühren bei 80ºC hinzugegeben.
Nach Fortsetzen des Rührens für 4 Stunden bei 80ºC wurde das Lösungsmittel unter reduziertem Druck entfernt, und der Rückstand wurde an Silicagel mit einer Mischung aus Ethylacetat und Cyclohexan (1 : 1) als Elutionsmittel chromatografiert, um 6-tert-Butoxycarbonylamino-3-(5-methoxy-indol- 3-ylmethylen)-2-indolinon (75 mg, 0,18 mmol) zu ergeben.
Der Feststoff wurde mit Trifluoressigsäure (5 ml) aufgenommen und für 15 Minuten bei Raumtemperatur gerührt.
Die Reaktionsmischung wurde mit Ethylacetat (50 ml) verdünnt und mit 5%-igem Natriumbicarbonat gewaschen, und die organische Schicht wurde über Natriumsulfat getrocknet und unter reduziertem Druck aufkonzentriert.
Der Rückstand wurde in Tetrahydrofuran (10 ml) gelöst, und Fluorenylmethoxycarbonyl-L-alanin (75 mg, 0,24 mmol) und Benzotriazol-1-yl-oxytripyrrolidinophosphoniumhexafluorophosphat (130 mg, 0,25 mmol) wurden unter Rühren hinzugegeben.
Nach Fortsetzen des Rührens für 1 Stunde bei Raumtemperatur wurde die Mischung mit Ethylacetat (50 ml) verdünnt und mit Kochsalzlösung gewaschen.
Die organische Schicht wurde über Natriumsulfat getrocknet und unter reduziertem Druck aufkonzentriert.
Der Rückstand wurde mit Ethylacetat (50 ml) aufgenommen, und Piperidin (1 ml) wurde unter Rühren bei Raumtemperatur hinzugegeben.
Nach Rühren für 3 Stunden wurde das Lösungsmittel unter reduziertem Druck entfernt, zum Rückstand wurde Wasser (5 ml) hinzugegeben, 1 N Salzsäure wurde hinzugetropft, bis der gesamte Feststoff aufgelöst war, und die Lösung wurde an einer LoBar RP18-Säule mit Wasser als Elutionsmittel chromatografiert, um 6-L-Alanylamino-[3-(5-methoxy-indol-3-ylmethylen)-2-indolinon] (FCE 28934) (10 mg) zu ergeben.
¹H-NMR (400 MHz, DMSO, δ ppm): 1,36 (d, J = 6,5 Hz, 3HZ); 1,38 (d, J = 6,5 Hz, 3HE); 3,77 (s, 3HE); 3,80 (m, 1HE+Z); 3,86 (s, 3HZ); 6,85 (m, 1HE+Z); 7,10 (m, 2HE+1HZ); 7,40 (m, 2HE+Z); 7,68 (m, 1HE+Z); 7,76 (s, 1HE); 7,84 (d, J = 8,4 Hz, 1HZ); 8,03 (s, 1HZ); 8,12 (d, J = 2,5 Hz, 1HE); 9,33 (d, J = 2,9 Hz, 1HZ); 10,51 (s, 1HE); 10,52 (s, 1HZ); 11,8 (bs, 1HE+Z).
FAB-MS: m/z 377 (100, [MH]&spplus;); 306 (17, [MH-COCH(CH&sub3;) NH&sub2; + H]&spplus;).

BEISPIEL 3

Herstellung von FCE 28901

Zu einer gerührten Lösung aus 5-Nitroindol (4 g, 24,6 mmol) in 200 ml t-Butanol wurde portionsweise Pyridiniumbromidperbromid (30 g, 93 mmol) über einen Zeitraum von 0,5 Stunden gegeben. Die Reaktionsmischung wurde bei Raumtemperatur über Nacht gerührt, dann wurde das t-Butanol entfernt und der resultierende Rückstand in Ethylacetat/Wasser (500/500 ml) gelöst. Die organische Schicht wurde abgetrennt und die wässrige Schicht mit 300 ml Ethylacetat extrahiert. Die organischen Extrakte wurden mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum aufkonzentriert, um 8,5 g einer weniger polaren Verbindung zu ergeben, die aus Ethylacetat umkristallisiert wurde, um 7,5 g des Dibromderivats zu ergeben. Hydrierung dieser Verbindung mit 10 Äquivalenten Zinkstaub in 80 ml Essig säure bei Raumtemperatur für 3 Stunden ergab 5-Aminooxindol in guten Ausbeuten (3 g, 82% Ausbeute).
EI-MS: m/z 148 (100, [M]&spplus;); 120 (56, [M-CO]&spplus;); 119 (94, [M-CO-H]&spplus;); 105 (22, [M-HNCO]&spplus;).
Zu einer Lösung aus 5-Aminooxindol (2 g, 13,5 mmol) in 80 ml Wasser/Dioxan (3 : 1) wurden 1 N Natriumhydroxid bis zum Erhalt eines pH-Werts von 10 und dann Di-t-butylpyrocarbonat (3,5 g, 16,2 mmol) gegeben. Die Reaktion wurde für 3 Stunden unter Aufrechterhalten des pH-Werts auf 10 gerührt. Nach Extraktion mit 3 · 100 ml Ethylacetat wurden die Extrakte über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft, wobei 2,4 g 5-t-Butoxycarbonylaminooxindol erhalten wurde (71% Ausbeute).
¹H-NMR (400 MHz, DMSO, T = 45ºC): 1,49 (s, 9H); 3,87 (s, 3H); 6,72 (d, J = 8,4 Hz, 1H); 6,86 (dd, J = 2,2 Hz, J = 8,8 Hz, 1H); 7,12 (dd, J = 1,8 Hz, J = 8,4 Hz, 1H); 7,40 (d, J = 8,8 Hz, 1H); 7,54 (d, J = 2,2 Hz, 1H); 7,78 (d, J = 1,8 Hz, 1H); 7,92 (s, 1H); 8,87 (bs, 1H); 9,38 (s, 1H); 10,25 (s, 1 W); 11,8 (bs, 1H).
FD-MS: 248 (100, [M]&spplus;); 191 (18, [M-C&sub4;H&sub9;]&spplus;); 147 (5, [M-(CH&sub3;)&sub3;COCO]&spplus;).
Zu einer Lösung aus 5-t-Butoxycarbonylaminooxindol (630 mg, 2,5 mmol) und 5-Methoxyindolcarboxaldehyd (450 mg, 2,6 mmol) in absolutem Ethanol wurde Piperidin (0,26 ml, 2,6 mmol) gegeben. Die Reaktion wurde bei 80ºC für 3 Stunden durchgeführt. Ethanol wurde verdampft, und der Rückstand wurde durch Silicagel-Chromatografie (Elutionsmittel: Cyclohexan/Ethylacetat 2 : 3) gereinigt, wodurch 800 mg Produkt erhalten wurden, das in 10 ml Methylenchlorid solubilisiert und nach Zugabe von 40 ml Trifluoressigsäure für 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt wurde. Das Lösungsmittel wurde verdampft und der Rückstand mit Diethylether kristallisiert, wodurch 750 mg 5-Amino-3-[(5'-methoxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol (90% Ausbeute) erhalten wurden.
¹H-NMR (400 MHz, DMSO): 3,87 (s, 3H); 6,87 (dd, J = 2,4 Hz, J = 8,5 Hz, 1H); 6,90 (d, J = 8,2 Hz, 1H); 7,07 (dd, J = 8,2 Hz, J = 2,0 Hz, 1H); 7,42 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 7,66 (d, J = 2,4 Hz, 1H); 7,81 (d, J = 2,0 Hz, 1H); 8,18 (s, 1H); 9,44 (d, J = 3,1 Hz, 1H); 9,65 (bs, 3H); 10,67 (s, 1H); 12,03 (d, J = 3,1 Hz, 1H).
FD-MS: m/z 306 (55, [M]&spplus;); 305 (100, [M]&spplus;).
Zu einer Lösung aus 5-Amino-3-[(5'-methoxy-3'-indolyl)methylen]-2- oxindol (500 mg, 1,64 mmol) und t-Butoxycarbonyl-(L)-alanin in 80 ml Tetrahydrofuran wurden Benzotriazol-1-yloxy-trispyrrolidinophosphonium hexafluorophosphat (950 mg, 1,87 mmol) und N-Methylmorpholin (0,20 ml, 1,87 mmol) gegeben. Die Reaktion wurde bei Raumtemperatur für 4 Stunden durchgeführt.
Nach Verdampfen von Tetrahydrofuran wurde der Rückstand durch Flash- Chromatografie (Elutionsmittel: Cyclohexan/Ethylacetat 3 : 7) gereinigt, dann wurde er in Methylenchlorid solubilisiert, und nach Rühren für 1 Stunde mit 10 ml Trifluoressigsäure wurden 600 mg 5-Alanylamino-3-[(5'-methoxy-3'- indolyl)methylen]-2-indolinon (FCE 28901) erhalten (81% Ausbeute).
¹H-NMR (400 MHz, DMSO): 1,24 (d, J = 6,5 Hz, 3H); 3,46 (m, 1H); 3,87 (s, 3H); 6,76 (d, J = 8,2 Hz, 1H); 6,85 (dd, J = 2,4 Hz, J = 8,5 Hz, 1H); 7,40 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 7,48 (dd, J = 2,1 Hz, J = 8,2 Hz, 1H); 7,62 (d, J = 2,4 Hz, 1H); 7,89 (d, J = 2,1 Hz, 1H); 8,02 (s, 1H); 9,41 (s, 1H); 9,8 (bs, 1H); 10,43 (s, 1H); 11,9 (bs, 1H).
FD-MS: m/z 376 (100, [M]&spplus;); 331 (46, [M-CH&sub3;CH&sub2;NH&sub2;]&spplus;); 305 (24, [M-COCH (CH&sub3;) NH&sub2; + H]&spplus;).

BEISPIEL 4

Herstellung von FCE 28437

Zu einer Lösung aus 5-Alanylamino-3-[(5'-methoxy-3'-indolyl)methylen]-2-oxindol (600 mg, 1,42 mmol) und Boc-(L)-Glutaminsäure (t-Butylester) (500 mg, 1,65 mmol) wurden 930 mg (1,8 mmol) Benzotriazol-1-yloxy-trispyrrolidinophosphoniumhexafluorophosphat und 0,20 ml (1,8 mmol) N-Methylmorpholin gegeben. Die Reaktion wurde bei Raumtemperatur für 3 Stunden gerührt, dann wurde der Rückstand nach Verdampfen von Tetrahydrofuran durch Flash-Chromatografie (Elutionsmittel : Ethylacetat) gereinigt, wodurch 200 mg Produkt erhalten wurden, das in 8 ml Methylenchlorid solubilisiert und für 1 Stunde nach Zugabe von 8 ml Trichloressigsäure gerührt wurde. Der in Ethylacetat solubilisierte Rückstand wurde durch Zugabe von Diethylether ausgefällt und durch die Umkehrphase (Elutionsmittel: Wasser/Methanol 1 : 2) gereinigt, wodurch 100 mg 5-L-Glutamyl-L-alanylamino-3-[(5'-methoxy-3'- indolyl)methylen]-2-indolinon (FCE 28437) (51% Ausbeute) erhalten wurden.
¹H-NMR (400 MHz, DMSO): 1,30 (d, J = 7,0 Hz, 3HE); 1,35 (d, J = 7,0 Hz, 3HZ); 1,5-1,9 (m, 2HE+Z)% 2,27 (m, 2HE+Z)% 3,2-3,5 (m, 1HE+Z)% 3,81 (s, 3HZ); 3,87 (s, 3HZ); 4,3-4, 5 (m, 1HE+Z)% 6,7-6,9 (m, 2HE+Z); 7,21 (d, J = 2,6 Hz, 1HE); 7,25 (dd, J = 1,8 Hz, J = 8,4 Hz, 1HE); 7,31 (dd, J = 1,8 Hz, J = 8,4 Hz, 1H); 7,40 (m, 1HE+Z)% 7,61 (d, J = 2,6 Hz, 1HZ); 7,85 (s, 1HE); 7,89 (d, J = 1,8 Hz, 1HZ); 8,00 (s, 1HZ); 8,19 (s, 1HE); 8,3 (bs, 1HE+Z)% 8,5 (d, J = 1,8 Hz, 1HE); 9,41 (s, 1HZ); 9,92 (s, 1HZ); 10,03 (s, 1HE); 10,35 (s, 1HE); 10,44 (s, 1HZ); 11,9 (bs, 1HE+Z)
FAB-MS: m/z 506 (61, [M]&spplus;); 377 (43, [MH-Glu]&spplus;); 306 (100, [MH-GluAla]&spplus;).

BEISPIEL 5

Zu einer Suspension aus 3-(Indol-3-ylmethylen)-5-(2-piperidin-1-yl- acetyl)-2-indolinon (100 mg) in Wasser (10 ml) wurde die stöchiometrische Menge von 0,1 N HCl-Lösung (3 ml) gegeben. Die Lösung wurde gefriergetrocknet, um 105 mg 3-(Indol-3-ylmethylen)-5-(2-piperidin-1-yl-acetyl)-2- indolinon-hydrochlorid zu erhalten.

BEISPIEL 6

Zu einer Suspension aus 3-(Indol-3-ylmethylen)-5-(2-piperidin-1-yl- acetyl)-2-indolinon (25 mg) in Wasser (10 ml) wurde Amberlite Ira 900® (HCl-Form) gegeben, bis die Lösung klar wurde. Das Harz wurde abfiltriert und mit Wasser gewaschen und die Lösung gefriergetrocknet, um 3-(Indol-3- ylmethylen)-5-(2-piperidin-1-yl-acetyl)-2-indolinon-hydrochlorid (20 mg) zu ergeben.

BEISPIEL 7

Kapseln mit einer Dosis von jeweils 0,200 g, die 20 mg des Wirkstoffs enthalten, können hergestellt werden.

Zusammensetzung für 500 Kapseln

3-(Indol-3-ylmethylen)-5-(2-piperidin-1-yl-acetyl)-2- indolinon 10 g
Lactose 80 g
Maisstärke 5 g
Magnesiumstearat 5 g
Diese Formulierung wird in zweiteiligen Hartgelatinekapseln verkapselt und mit 0,200 g für jede Kapsel dosiert.

BEISPIEL 8

Tabletten, die jeweils 0,150 g wiegen und 25 mg des Wirkstoffs enthalten, können wie folgt hergestellt werden.

Zusammensetzung für 10.000 Tabletten

3-(Indol-3-ylmethylen)-5-(2-piperidin-1-yl-acetyl)-2- indolinon 250 g
Lactose 800 g
Maisstärke 415 g
Talkumpulver 30 g
Magnesiumstearat 5 g
Das 3-(Indol-3-ylmethylen)-5-(2-piperidin-1-yl-acetyl)-2-indolinon, die Lactose und die Hälfte der Maisstärke werden vermischt; die Mischung wird dann durch ein Sieb mit 0,5 mm Maschenweite getrieben.
Maisstärke (10 g) wird in warmem Wasser (90 ml) suspendiert, und die resultierende Paste wird zur Granulierung des Pulvers verwendet. Das Granulat wird getrocknet, auf einem Sieb mit 1,4 mm Maschenweite zerkleinert, dann werden die verbleibende Menge Stärke, Talkum und Magnesiumstearat hinzugegeben, sorgfältig vermischt und zu Tabletten verarbeitet.

BEISPIEL 9

Intravenöse Infusion 1 bis 10 mg/ml

Eine pharmazeutische Zubereitung zur intravenösen Infusion kann durch Auflösen von 50 mg 3-(Indol-3-ylmethylen)-5-(2-piperidin-1-yl-acetyl)-2- indolinon in Wasser zur Injektion (1.000 ml) und Versiegeln in Glasampullen von 1 bis 10 ml hergestellt werden.
Vor der Infusion kann die erhaltene Lösung gemäss allgemeiner Praxis verdünnt und in Glas-, Polypropylen-, Polyolefin- oder Polyethylenbeschichteter Ausrüstung gelagert und/oder übertragen werden.

Claims

1. Indol-3-ylmethylen-2-oxindolderivat mit der folgenden Formel (I):

worin

R&sub2; ein Substituent ist, unabhängig ausgewählt aus:

(a) einer COR&sub8;-Gruppe, in der R&sub8; eine -E-NH&sub2;- oder -E-NR&sub4;R&sub5;-Gruppe ist, worin E -CH&sub2;-, -CH&sub2;-CH&sub2;- oder -CH(CH&sub3;)- ist und ein Vertreter aus R&sub4; und R&sub5; Wasserstoff oder C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl und der andere C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl ist oder R&sub4; und R&sub5; zusammen mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen gesättigten heteromonocyclischen C&sub4;&submin;&sub7;-Ring bilden, der gegebenenfalls ein weiteres Heteroatom enthält, ausgewählt aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel; und

(b) einer -NHR&sub6;-Gruppe, in der R&sub6; die terminale Carbonylgruppe eines Peptidylrests ist, der 1 bis 3 Aminosäuren enthält, ausgewählt aus Alanin, Glycin, Histidin, Threonin, Glutaminsäure, Asparaginsäure und Tyrosin, worin die terminale Aminogruppe entweder frei ist oder in einer durch eine Amino-Schutzgruppe, ausgewählt aus Benzyloxycarbonyl, p-Methoxybenzyloxycarbonyl, t-Butoxycarbonyl (Boc), Biphenylylisopropyloxycarbonyl (BBoc), 9-Fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc), Triphenylmethyl (Trityl), O-Nitrobenzolsulfenyl (Nps), Trimethylsilylethoxycarbonyl, Di-p-nitrophenylethoxycarbonyl und Trichlorethoxycarbonyl (Troc), geschützten Form ist; und

R Wasserstoff, Halogen, Amino, Hydroxy, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkyl, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkoxy, Carboxy, C&sub1;&submin;&sub6;-Alkoxy-carbonyl, C&sub2;&submin;&sub6;-Alkanoyloxy, Cyano oder -NR&sub4;R&sub5; ist, worin R&sub4; und R&sub5; wie oben definiert sind, und die pharmazeutisch akzeptablen Salze von salzbildenden Verbindungen der Formel (I).

2. Verbindung der Formel (I) gemäss Anspruch 1, worin R&sub1; und R&sub3; Wasserstoff sind; R&sub2;

(a') eine COR&sub8;-Gruppe ist, in der R&sub8; -E-NH&sub2; oder -E-NR&sub4;R&sub5; ist, worin E wie in Anspruch 1 definiert ist und ein Vertreter aus R&sub4; und R&sub5; C&sub1;&submin;&sub4;- Alkyl und der andere Wasserstoff oder C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl ist oder R&sub4; und R&sub5; zusam men mit dem Stickstoffatom, an das sie gebunden sind, einen Pyrrolidin- oder Piperidinring bilden; oder

(b') -NHR&sub6; ist, in dem R&sub6; die terminale Carbonylgruppe eines Peptidylrests ist, der 1 oder 2 Aminosäuren wie in Anspruch 1 definiert enthält; und R unabhängig aus Wasserstoff, Halogen, Amino, Hydroxy, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxy, C&sub2;&submin;&sub4;-Alkoxycarbonyl, C&sub2;&submin;&sub4;-Alkanoyloxy, Cyano, C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylamino und Di(C&sub1;&submin;&sub4;-alkyl)-amino ausgewählt ist; und die pharmazeutisch akzeptablen Salze von salzbildenden Verbindungen der Formel (I).

3. Verbindung gemäss Anspruch 1, ausgewählt aus:

5-Aminomethylcarbonyl-3-(indol-3-yl-methylen)-2-indolinon;

3-(Indol-3-ylmethylen)-5-(2-piperidin-1-yl-acetyl)-2-indolinon;

6-L-Alanylamino-[3-(5-methoxy-indol-3-ylmethylen)-2-indolinon];

5-Alanylamino-3-[(5'-methoxy-3'-indolyl)methylen]-2-indolinon];

5-L-Glutamyl-L-alanylamino-3-[(5'-methoxy-3'-indolyl)methylen]-2- indolinon;

die nach Bedarf entweder ein Z- oder E-Diastereoisomer oder Z,E- Mischungen der Diastereomere sein kann;

und die pharmazeutisch akzeptablen Salze von salzbildenden Mitgliedern der Gruppe.

4. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel (I) gemäss Anspruch 1 oder eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes davon, wobei das Verfahren umfasst:

(a) Umsetzen eines Aldehyds der Formel (II):

worin R wie in Anspruch 1 definiert ist, mit einer Verbindung der Formel (III):

worin R&sub2; wie in Anspruch 1 definiert ist; oder

(b) Umsetzen einer Verbindung der Formel (VI):

worin R"&sub2; -NH&sub2; ist und R wie in Anspruch 1 definiert ist, mit einem Acylierungsmittel der Formel (VII):

HOOC-R&sub8;;

oder einem reaktiven Carbonylderivat davon,

worin

R&sub8; wie in Anspruch 1 definiert ist, wodurch eine Verbindung der Formel (I) erhalten wird, worin R&sub2; wie in Anspruch 1 unter (a) definiert ist; und nach Wunsch Konvertieren einer Verbindung der Formel (I) zu einer anderen Verbindung der Formel (I) und/oder nach Wunsch Konvertieren einer Verbindung der Formel (I) zu einem pharmazeutisch akzeptablen Salz davon und/oder nach Wunsch Konvertieren eines Salzes zu einer freien Verbindung und/oder nach Wunsch Auftrennen einer Mischung aus Isomeren einer Verbindung der Formel (I) in die einzelnen Isomere.

5. Pharmazeutische Zusammensetzung, die einen geeigneten Träger und/oder ein Verdünnungsmittel und als Wirkstoff eine Verbindung der Formel (I) gemäss Anspruch 1 oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon enthält.

6. Verbindung gemäss Anspruch 1 oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon zur Verwendung als Tyrosinkinase-Hemmer.

7. Verbindung oder Salz gemäss Anspruch 1 zur Verwendung als Antiproliferationsmittel.

8. Verbindung oder Salz gemäss Anspruch 1 zur Verwendung als Antimetastatikum und Antikrebsmittel und in der Kontrolle von Angiogenese.

9. Verbindung oder Salz gemäss Anspruch 1 zur Verwendung in der Hemmung der Entwicklung von atheromatöser Plaque, in der Behandlung von Alzheimer-Krankheit und als immunomodulierendes Mittel.

10. Produkte, die eine Verbindung der Formel (I) wie in Anspruch 1 definiert oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon und ein zusätzliches Antitumormittel als kombinierte Zubereitung enthalten, zur gleichzeitigen, separaten oder aufeinanderfolgenden Verwendung in der Antikrebstherapie.