EA018922B1 - Модулирующие сиртуин соединения - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к модулирующим сиртуин соединениям формулы (II) и способам их применения. Модулирующие сиртуин соединения можно использовать для увеличения продолжительности жизни клетки и лечения и/или предотвращения широкого ряда заболеваний или нарушений, включая, например, заболевания и нарушения, связанные со старением или стрессом, диабет, ожирение, нейродегенеративные заболевания, сердечно-сосудистые заболевания, нарушения свертывания крови, воспаления, злокачественные заболевания и/или приливы крови, а также заболеваний или нарушений, при которых повышенная митохондриальная активность будет оказывать положительное действие. Также обеспечиваются композиции, содержащие модулирующее сиртуин соединение в комбинации с другим лекарственным средством.

Description

Данная заявка заявляет преимущество над предварительной заявкой № 60/936636, поданной 20 июня 2007 года, содержание которой в полном объеме включено в данный документ для сведения.

Уровень техники

Семейство информационных регуляторов молчащих генов (8ГК.) представляет высококонсервативную группу генов в геномах организмов от архебактерий до различных эукариотов (Гтуе, 2000). Кодированные белки 8ΙΚ. принимают участие в различных процессах, начиная от регуляции сайленсинга генов до репарации ДНК. Белки, кодированные членами семейства генов 8ΣΚ, проявляют высокую консервативность последовательностей в основном домене из 250 аминокислот. Хорошо охарактеризованным геном в данном семействе является 8ίτ2 8. сегеуыае. который участвует в локусе сайленсинга НМ, который содержит информацию, определяющую тип спаривания, у дрожжей, эффекты положения теломеры и старение клеток (Сиагеп!е, 1999; КаеЬет1еш е! а1., 1999; 8йоте, 2000). Дрожжевой белок 8ίτ2 относится к семейству гистоновых деацетилаз (имеется обзор Сиагеп!е, 2000; 8йоте, 2000). Гомолог 8ίτ2, СоЬВ, у 8а1топе11а 1урЫтипит функционирует в качестве НАД-(никотинадениндинуклеотид)зависимой АДФ-рибозилтрансферазы (Ткапд апб Екса1ап!е-8ететепа, 1998).

Белок 8ίτ2 представляет деацетилазу класса III, которая использует НАД в качестве косубстрата (1та1 е! а1., 2000; Моахеб, 2001; 8тйй е! а1., 2000; Таппег е! а1., 2000; Таппу апб Моахеб, 2001). В отличие от других деацетилаз, многие из которых принимают участие в сайленсинге генов, 8ίτ2 является нечувствительной к ингибиторам гистоновых деацетилаз класса I и II, таких как трихостатин А (Т8А) (1та1 е! а1., 2000; Ьапбту е! а1., 2000а; διηίΐΐι е! а1., 2000).

Деацетилирование ацетиллизина под действием 8ίτ2 тесно сопряжено с гидролизом НАД, продукцией никотинамида и нового соединения ацетил-АДФ-рибозы (Таппег е! а1., 2000; Ьапбту е! а1., 2000Ь; Таппу апб Моахеб, 2001). НАД-зависимая деацетилазная активность 8ίτ2 важна для проявления его функций, которые могут связать его биологическую роль с клеточным метаболизмом у дрожжей (Сиагеп!е, 2000; Бши е! а1., 2000; Ьт е! а1., 2000; 8тйй е! а1., 2000). Гомологи 8ίτ2 у млекопитающих обладают НАД-зависимой деацетилазной активностью для гистонов (Иши е! а1., 2000; 8тйй е! а1., 2000). Большая часть информации об опосредуемых 8ίτ2 функциях основана на результатах исследований, проведенных на дрожжах (СайепЬетд, 2000; СойксЬйпд, 2000).

Биохимические исследования показали, что 8ίτ2 может легко деацетилировать аминоконцевые хвосты гистонов Н3 и Н4, приводя к образованию 1-О-ацетил-АДФ-рибозы и никотинамида. Штаммы с дополнительными копиями 8ГВ2 проявляют повышенный сайленсинг рДНК и у них имеется на 30% более длительный период существования. Недавно было показано, что дополнительные копии гомолога 8ГК.2 С. е1едапк, 8ίτ2-1, и гена 68ιτ2 Ό. те1аподак!ет существенно удлиняют продолжительность жизни данных микроорганизмов. На основе этого можно предположить, что 8ГК2-зависимый регуляторный путь старения начинается в эволюции рано и является высококонсервативным. К настоящему времени полагают, что гены 8ίτ2 развиваются для улучшения статуса организма и повышения резистентности к стрессам в целях выживания в неблагоприятных условиях.

8ГК.Т3 является гомологом 8ГК.Т1, который консервативен у прокариотов и эукариотов (Р. Опуапдо е! а1., Ргос. ЫаЙ. Асаб. 8с1. И8А, 99: 13653-13658, (2002)). Белок 8Ш.Т3 направляется к митохондриальным гребешкам под действием уникального домена, расположенного на Ν-конце. 8ГКТ3 обладает НАД+зависимой деацетилазной активностью и экспрессируется повсеместно, в частности, в метаболически активных тканях. Полагают, что при прохождении в митохондрии 8ГК.Т3 превращается в результате расщепления в небольшую активную форму за счет воздействия митохондриальной пептидазы процессинга (МРР) (В. 8с11\\ег е! а1., 1. Се11 Вю1., 158: 647-657, (2002)).

В течение более чем 70 лет известно, что ограничение в калориях благоприятно воздействует на здоровье млекопитающих и удлиняет продолжительность их жизни (Макото, 2000). Период существования дрожжей, аналогично многоклеточным организмам, также удлиняется при воздействиях, напоминающих ограничение в калориях, например низкое потребление глюкозы. Открытие того, что дрожжи и мухи, у которых отсутствует ген 8ГК.2, не выживают дольше при ограничении в калориях, служит доказательством участия генов 8ГК.2 в опосредовании положительных эффектов данного типа питания (Апбеткоп е! а1., 2003; НеИапб апб Вощна, 2004). Кроме того, мутации, которые приводят к снижению активности дрожжевого реактивного на глюкозу сАМР (аденозин-3',5'-монофосфат)-зависимого (РКА) пути, удлиняют продолжительность жизни клеток дикого типа, но не мутантных штаммов 8ίτ2, указывая, что 8ГК.2, вероятно, является ключевым бо\\'П51г1ат компонентом пути ограничения в калориях (Ьт е! а1., 2001).

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к модулирующим сиртуин соединениям и способам их применения.

В одном аспекте изобретение относится к модулирующим сиртуин соединениям структурных формул ©-(У!), подробно описанным ниже.

В другом аспекте изобретение относится к способам применения модулирующих сиртуин соединений или композиций, содержащих модулирующие сиртуин соединения. В некоторых вариантах осуще

- 1 018922 ствления модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для различных терапевтических применений, например, включая увеличение продолжительности существования клетки и лечение и/или предотвращение широкого ряда заболеваний или нарушений, связанных со старением или стрессом, диабета, ожирения, нейродегенеративных заболеваний, нейропатии, вызванной химиотерапевтическими препаратами, нейропатии, ассоциированной с ишемическим событием, глазных заболеваний и/или нарушений, сердечно-сосудистого заболевания, нарушений свертывания крови и/или приливов крови и т.д. Модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, также можно использовать для лечения заболевания или нарушения у субъекта, при котором повышенная митохондриальная активность будет оказывать положительное действие, для повышения мышечной производительности, для увеличения уровня АТФ или для лечения или предотвращения повреждения мышечной ткани, ассоциированного с гипоксией или ишемией. В других вариантах осуществления модулирующие сиртуин соединения, которые снижают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для различных терапевтических применений, например, включая повышение чувствительности клеток к стрессу, усиление апоптоза, лечение злокачественного заболевания, стимуляцию аппетита и/или стимуляцию увеличения массы тела и т.д. Как подробно описано ниже, способы включают введение субъекту, нуждающемуся в этом, фармацевтически эффективного количества модулирующего сиртуин соединения.

В некоторых аспектах модулирующие сиртуин соединения можно вводить самостоятельно или в комбинации с другими соединениями, включая другие модулирующие сиртуин соединения или другие лекарственные средства.

Подробное описание изобретения

1. Определения.

В том смысле, в котором используются в данном документе следующие термины и выражения, они имеют значения, раскрытые ниже. Если не указано иначе, то все технические и научные термины имеют такое же значение, которое обычно понимают специалисты в данной области.

В том смысле, в котором термин средство используется в данном документе, он означает химическое соединение, смесь химических соединений, биологическую макромолекулу (такую как нуклеиновая кислота, антитело, белок или его фрагмент, например пептид) или экстракт, приготовленный из биологического материала, такого как бактерии, растения, грибы, клетки или ткани животных (в частности, клетки и ткани млекопитающих). Активность таких средств может сделать их подходящими для применения в качестве лекарственного средства, которое является биологически, физиологически или фармакологически активным соединением (или соединениями), которое функционирует у субъекта местно или системно.

Термин биодоступное по отношению к соединению является общепризнанным в данной области и относится к форме соединения, которая способствует всасыванию соединения или части количества введенного соединения, может включиться иначе стать физиологически доступным для субъекта или пациента, которому его ввели.

Биологически активный фрагмент сиртуина относится к фрагменту белка сиртуина, обладающему биологической активностью, такой как способность к деацетилированию. Биологически активные фрагменты сиртуина могут содержать основной домен сиртуина. Биологически активные фрагменты 8ΙΚ.Τ1 с номером ΝΡ_036370 в ОеиВаик, которые включают связывающий НАД+ домен и связывающий субстрат домен, например, могут включать, без ограничения, аминокислоты 62-293 с номером ΝΡ__036370 в ОеиВапк, которые кодируются нуклеотидами 237-932 с номером ΝΜ_012238 в ОеиВаик. Следовательно, данную область иногда называют основным доменом. Другие биологически активные фрагменты 8ΙΚ.Τ1, также иногда называемые основными доменами, содержат аминокислоты 216-447 с номером ΝΡ_036370 в ОеиВаик, которые кодируются нуклеотидами 834-1394 с номером ΝΜ_012238 в ОеиВаик; аминокислоты примерно 242-493 с номером ΝΡ_036370 в ОеиВаик, которые кодируются нуклеотидами 777-1532 с номером ΝΜ 012238 в ОеиВаик; или аминокислоты примерно 254-495 с номером ΝΡ_036370 в ОеиВаик, которые кодируются нуклеотидами 813-1538 с номером ΝΜ_012238 в ОеиВаик.

Термин домашние животные относится к кошкам и собакам. В том смысле, в котором термин собака(и) используется в данном документе, то он относится к любому члену видов семейства псовые, среди которых имеется большое количество различных пород. Термин кошка(и) относится к кошачьим, включая домашних котов и других членов семейства кошачьих, рода кошки.

Термины содержит и содержащий означают, что могут быть включены дополнительные элементы.

Диабет относится к состоянию с высоким уровнем сахара в крови или кетоацидозу, а также хроническим общим обменным нарушениям, возникающим в результате высокого уровня сахара в крови в течение длительного периода времени или снижения толерантности к глюкозе. Диабет включает обе формы заболевания - диабет типа I и II (неинсулинзависимый сахарный диабет или ΝΙΌΌΜ). Факторы риска для развития диабета включают следующее: объем талии более чем 40 дюйм для мужчин и 35 дюйм для женщин, кровяное давление 130/85 мм рт. ст. или выше, концентрацию триглицеридов выше 150 мг/дл, концентрацию глюкозы при постановке анализа натощак выше 100 мг/дл или уровень липо

- 2 018922 протеина высокой плотности менее чем 40 мг/дл у мужчин или 50 мг/дл у женщин.

Прямой активатор сиртуина является молекулой, которая активирует сиртуин посредством связывания с ним. Прямой ингибитор сиртуина представляет молекулу, которая ингибирует сиртуин посредством связывания с ним.

Термин ΕΌ₅₀ является общепризнанным в данной области. В некоторых вариантах осуществления ΕΌ₅₀ означает дозу лекарственного препарата, которая обеспечивает 50% максимального эффекта, или альтернативно дозу, которая обеспечивает заранее определенный эффект у 50% тестированных особей или препаратов. Термин ЬО₅₀ является общепризнанным в данной области. В некоторых вариантах осуществления ЬО₅₀ означает дозу лекарственного препарата, которая вызывает гибель 50% тестируемых особей. Термин терапевтический индекс является общепризнанным в данной области, который относится к терапевтическому индексу препарата, определяемому как ΕΌ₅₀/ΕΌ₅₀.

Термин гиперинсулинемия относится к состоянию у индивидуума, при котором уровень инсулина в крови превышает норму.

Термин включая используется для обозначения включая, не ограничиваясь этим. Выражения включая и включая, не ограничиваясь этим используются взаимозаменяемо.

Термин резистентность к инсулину относится к состоянию, при котором нормальное количество инсулина вызывает субнормальную биологическую реакцию по сравнению с биологической реакций у субъекта, у которого отсутствует резистентность к инсулину.

Нарушение резистентности к инсулину, как обсуждается в данном документе, относится к любому заболеванию или состоянию, которое вызвано или в развитие которого вносит свой вклад резистентность к инсулину. Примеры включают диабет, ожирение, метаболический синдром, синдромы, связанные с резистентностью к инсулину, синдром X, резистентность к инсулину, высокое кровяное давление, гипертензию, высокий уровень холестерина в крови, дислипидемию, гиперлипидемию, атеросклероз, включая инсульт, коронарное заболевание сердца или инфаркт миокарда, гипергликемию, гиперинсулинемию и/или гиперпроинсулинемию, нарушенную толерантность к глюкозе, замедленное высвобождение инсулина, осложнения при диабете, включая коронарное заболевание сердца, стенокардию, застойную сердечную недостаточность, инсульт, когнитивные функции при деменции, ретинопатию, периферическую нейропатию, нефропатию, гломерулонефрит, гломерулосклероз, нефротический синдром, гипертензивный нефросклероз при некоторых видах злокачественных опухолей (таких как карцинома эндометрия, молочной железы, предстательной железы и ободочной кишки), осложнения при беременности, слабое состояние органов репродуктивной системы у женщин (такое как нерегулярность менструаций, бесплодие, нерегулярная овуляция, синдром поликистоза яичников (РСО8)), липодистрофию, нарушения, связанные с холестерином, такие как камни в желчном пузыре, холецистит и холелитиаз, подагру, обструктивное расстройство дыхания во время сна и проблемы с дыханием, остеоартрит, и предотвращение и лечение истончения костной ткани, например остеопороз.

Термин сельскохозяйственные животные относится к домашним четвероногим животным, которые включают выращиваемые для продукции мяса и различных субпродуктов, например, крупный рогатый скот, включая коров и других членов рода быки, свиней, включая домашних свиней и других членов семейства рода кабаны, овец и других членов рода бараны, домашних коз и других членов рода козлы; одомашненных четвероногих животных, которые выращиваются в специфических целях, таких как применение в качестве вьючных животных, например лошади, включая домашних лошадей и других членов семейства лошадиные, рода лошади.

Термин млекопитающее известно в данной области, и приведенные в качестве примера млекопитающие включают людей, приматов, сельскохозяйственных животных (в то числе крупный рогатый скот, свиней и т.д.), домашних животных (например, собак, кошек и т.д.) и грызунов (например, мышей и крыс).

Субъекты с ожирением или субъекты, страдающие ожирением, в основном представляют субъектов с индексом массы тела (ΒΜΙ), равным по меньшей мере 25 или выше. Ожирение может быть связано с резистентностью к инсулину или нет.

Термины парентеральное введение и введенные парентерально являются общепризнанными в данной области и относятся к способам введения иным, чем введение внутрь и местное введение, как правило, с помощью инъекции, и включая, не ограничиваясь этим, внутривенную, внутримышечную, внутриартериальную, интратекальную, интракапсулярную, внутриглазную, внутрисердечную, внутрикожную, внутрибрюшинную, транстрахеальную, подкожную, субкутикулярную, внутриартикулярную, субкапсулярную, субарахноидальную, интраспинальную и интрастернальную инъекцию и инфузию.

Термины пациент, субъект, индивидуум или хозяин относятся к человеку или животному, не относящемуся к человеку.

Термин фармацевтически приемлемый носитель является общепризнанным в данной области и относится к фармацевтически приемлемому веществу, композиции или носителю, такому как жидкий или твердый заполнитель, разбавитель, наполнитель, растворитель или инкапсулирующее вещество, участвующее в переносе или транспорте любой данной композиции или ее компонентов. Каждый носитель должен быть приемлемым, в смысле совместимым с данной композицией или ее компонентами, и дол

- 3 018922 жен быть нетоксичным для пациента. Некоторые примеры веществ, которые могут служить в качестве фармацевтически приемлемых носителей, включают (1) сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; (2) крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; (3) целлюлозу и ее производные, такие как натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы, этилцеллюлозу и ацетат целлюлозы; (4) порошковую трагакантовую камедь; (5) солод; (6) желатин; (7) тальк; (8) наполнители, такие как какао-масло и воски для суппозиториев; (9) масла, такие как арахисовое масло, масло семян подсолнечника, сафлоровое масло, кунжутное масло, оливковое масло, кукурузное масло и соевое масло; (10) гликоли, такие как пропиленгликоль; (11) полиолы, такие как глицерин, сорбит, маннит и полиэтиленгликоль; (12) сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; (13) агар; (14) забуферивающие вещества, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; (15) альгиновую кислоту; (16) непирогенную воду; (17) изотонический солевой раствор; (18) раствор Рингера; (19) этиловый спирт; (20) забуференные фосфатом растворы и (21) другие нетоксичные совместимые вещества, используемые в фармацевтических композициях.

Термин профилактическое или медикаментозное лечение является общепризнанным в данной области, и оно относится к введению лекарственного препарата хозяину. В том случае, когда препарат вводят до клинического проявления нежелательного состояния (например, заболевания или другого нежелательного состояния у животного-хозяина), то тогда лечение является профилактическим, т.е. оно защищает хозяина от развития нежелательного состояния, в то время, когда препарат вводят после проявления нежелательного состояния, то лечение является лечебным (т.е. оно предназначено для подавления, ослабления имеющегося нежелательного состояния или побочных эффектов, возникающих в результате него, или для стабилизации состояния).

Термин непирогенная по отношению к композиции относится к композиции, которая не содержит пирогена в количестве, которое будет приводить к развитию побочных эффектов (например, раздражению, лихорадке, воспалению, диарее, нарушению дыхательной функции, эндотоксическому шоку и т.д.) у субъекта, которому вводят композицию. Например, термин предназначен для включения композиций, которые не содержат, по существу не содержат, эндотоксинов, например, таких как липополисахарид (ЬР8).

Выражение репликативная продолжительность жизни клетки относится к числу дочерних клеток, продуцированных отдельной материнской клеткой. С другой стороны, хронологическое старение или хронологическая продолжительность жизни относятся к периоду времени, в течение которого популяция неделящихся клеток остается жизнеспособной, при отсутствии питательных веществ. Выражения увеличение продолжительности жизни клеток или удлинение продолжительности жизни клеток, по отношению к клеткам или организмам, относятся к увеличению числа дочерних клеток, продуцированных одной клеткой; к повышению способности клеток или организмов справляться со стрессами и противостоять повреждению, например, ДНК, белков; и/или к повышению способности клеток или организмов выживать и существовать в жизнеспособном состоянии в течение более длительного периода времени в конкретных условиях, например в стрессовых условиях (например, в условиях теплового шока, осмотического стресса, радиации высокой энергии, стресса, индуцированного химическими соединениями, повреждения ДНК, неадекватной концентрации соли, неадекватного уровня азота или неадекватного содержания питательных веществ).

Продолжительность жизни можно увеличить по меньшей мере примерно на 20, 30, 40, 50, 60 или в пределах между 20 и 70%, 30 и 60%, 40 и 60% или более при использовании способов, описанных в данном документе.

Выражение активирующее сиртуин соединение относится к соединению, которое повышает уровень белка сиртуина и/или увеличивает по меньшей мере одну активность белка сиртуина. В приведенном в качестве примера варианте осуществления активирующее сиртуин соединение может повысить по меньшей мере одну биологическую активность белка сиртуина по меньшей мере примерно на 10, 25, 50, 75, 100% или более. Приведенные в качестве примера биологические активности белков сиртуинов включают деацетилирование, например, гистонов и р53; увеличение продолжительности жизни; повышение стабильности генома; сайленсинг при транскрипции и регуляцию расхождения окисленных белков между материнской и дочерними клетками.

Выражение ингибирующее сиртуин соединение относится к соединению, которое снижает уровень белка сиртуина и/или уменьшает по меньшей мере одну активность белка сиртуина. В приведенном в качестве примера варианте осуществления ингибирующее сиртуин соединение может снизить по меньшей мере одну биологическую активность белка сиртуина по меньшей мере примерно на 10, 25, 50, 75, 100% или более. Приведенные в качестве примера биологические активности белков сиртуинов включают деацетилирование, например, гистонов и р53; увеличение продолжительности жизни; повышение стабильности генома; сайленсинг при транскрипции и регуляцию расхождения окисленных белков между материнской и дочерними клетками.

Выражение модулирующее сиртуин соединение относится к соединению структурных формул (Ι)-(νΐ), описанных в данном документе. В приведенных в качестве примера вариантах осуществления модулирующее сиртуин соединение либо положительно регулирует (например, активирует или стимулирует), либо отрицательно регулирует (например, ингибирует или подавляет), либо изменяет иначе функ

- 4 018922 циональную способность или биологическую активность белка сиртуина. Модулирующие сиртуин соединения могут модулировать белок сиртуин прямо или опосредованно. В некоторых вариантах осуществления модулирующее сиртуин соединение может быть активирующим сиртуин соединением или ингибирующим сиртуин соединением.

Термин белок сиртуин относится к члену семейства белков сиртуинов, обладающих деацетилазной активностью, или предпочтительно семейству δίτ2, которое включает белки: дрожжевой δίτ2 (номер Р53685 в СеиВаик), δίτ-2.1 С. с1сдап5 (номер ΝΡ_501912 в СеиВаик) и человеческий 8ΙΒΤ1 (номера ΝΜ_012238 и ΝΡ_036370 (или АР083106) в СеиВаик) и 8ΙΒΤ2 (номера ΝΜ_012237, ΝΜ_030593, ΝΡ_036369, ΝΡ__085096 и ΛΡ083107 в СеиВаик). Другие члены семейства включают гены четырех дополнительных дрожжевых 81т2-подобных, называемых генами ΗδΤ (гомологи δίτ два) ΗδΤ1, ΗδΤ2, ΗδΤ3 и ΗδΤ4, и пять других человеческих гомологов 118ΙΡΤ3. 118ΙΡΤ4. 118ΙΡΤ5. 118ΙΡΤ6 и 118ΙΡΤ7 (Втасйтаии е! а1., (1995), Сеиек Όον., 9:2888 и Ртуе е! а1., (1999), ВВВС, 260:273). Предпочтительными сиртуинами являются такие, которые в большей степени имеют гомологию с 8ΙΒΤ1, т.е. ΙιδΙΡΤΡ и/или δίτ2, чем с 8ΙΒΤ2, такие как члены, содержащие по меньшей мере часть Ν-концевой последовательности, имеющейся в 8ΙΒΤ1 и отсутствующей в 8ΙΒΤ2, какая присутствует в 8ΙΡΤ3.

Термин белок 8ΙΒΤ1 относится к члену семейства δίτ2 сиртуинов с деацетилазной активностью. В одном варианте осуществления белок 8ΙΒΤ1 включает дрожжевой δίτ2 (номер Р53685 в СеиВаик), δίτ-2.1 С. екдащ (номер ΝΡ_501912 в СеиВаик), человеческий 8ΙΒΤ1 (номера ΝΜ_012238 и ΝΡ_036370 (или АР083106) в СеиВаик) и человеческий 8ΙΒΤ2 (номера ΝΜ_012237, ΝΜ_030593, ΝΡ_036369, ΝΡ_085096 и АР083107 в СеиВаик) и их эквивалентные варианты и фрагменты. В другом варианте осуществления белок 8ΙΒΤ1 включает полипептид, содержащий последовательность, состоящую или в основном состоящую из аминокислотной последовательности с номерами ΝΡ_036370, ΝΡ_501912, ΝΡ_085096, ΝΡ_036369 или Р53685 в СеиВаик. Белки 8ΙΒΤ1 включают полипептиды, содержащие всю или часть аминокислотной последовательности с номерами ΝΡ_036370, ΝΡ_501912, ΝΡ_085096, ΝΡ_036369 или Р53685 в СеиВаик; аминокислотной последовательности с номерами ΝΡ_036370, ΝΡ_501912, ΝΡ_085096, ΝΡ_036369 или Р53685 в СеиВаик с 1 до 2, 3, 5, 7, 10, 15, 20, 30, 50, 75 или более консервативными аминокислотными заменами; аминокислотной последовательности, которая по меньшей мере на 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична таковой с номерами ΝΡ_036370, ΝΡ_501912, ΝΡ_085096, ΝΡ_036369 или Р53685 в СеиВаик, и их функциональные фрагменты. Полипептиды по изобретению также включают гомологи (например, ортологи и паралоги), варианты или фрагменты аминокислотной последовательности с номерами ΝΡ_036370, ΝΡ__501912, ΝΡ_085096, ΝΡ_036369 или Р53685 в СеиВаик.

Термин белок 8ΙΒΤ3 относится к члену семейства белков сиртуинов деацетилаз и/или к гомологу белка 8ΙΒΤ1. В одном варианте осуществления белок 8ΙΡΤ3 включает человеческий 8ΙΡΤ3 (номера ААН01042, ΝΡ_036371 или ΝΡ_001017524 в СеиВаик) и мышиный 8ΙΡΤ3 (номер ΝΡ_071878 в СеиВаик), белки и их эквивалентные варианты и фрагменты. В другом варианте осуществления белок 8ΙΒΤ3 включает полипептид, содержащий последовательность, состоящую или в основном состоящую из аминокислотной последовательности с номерами ААН01042, ΝΡ_036371, ΝΡ_001017524 или ΝΡ_071878 в СеиВаик. Белки 8ΙΒΤ3 включают полипептиды, содержащие всю или часть аминокислотной последовательности с номерами ААН01042, ΝΡ_036371, ΝΡ_001017524 или ΝΡ_071878 в СеиВаик; аминокислотной последовательности с номерами ААН01042, ΝΡ_036371, ΝΡ_001017524 или ΝΡ_071878 в СеиВаик с 1 до 2, 3, 5, 7, 10, 15, 20, 30, 50, 75 или более консервативными аминокислотными заменами; аминокислотной последовательности, которая по меньшей мере на 60, 70, 80, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентична таковой с номерами ААН01042, ΝΡ_036371, ΝΡ_001017524 или ΝΡ_071878 в СеиВаик, и их функциональные фрагменты. Полипептиды по изобретению также включают гомологи (например, ортологи и паралоги), варианты или фрагменты аминокислотной последовательности с номерами ААН01042, ΝΡ_036371, ΝΡ_001017524 или ΝΡ__071878 в СеиВаик. В одном варианте осуществления белок 8ΙΡΤ3 включает фрагмент белка 8ΙΒΤ3, который образуется в результате расщепления под действием митохондриальной пептидазы процессинга (МРР) и/или митохондриальной промежуточной пептидазы (ΜΙΡ).

Термины системное введение, введенный системно, периферическое введение и введенный периферически являются общепризнанными в данной области и относятся к введению данной композиции, лекарственного или другого вещества иначе, чем непосредственно в центральную нервную систему, таким образом, что оно поступает в систему пациента и подвергается метаболизму и другим подобным процессам.

Термин лекарственное средство является общепризнанным в данной области и относится к любому химическому веществу, которое является биологически, физиологически или фармакологически активным соединением, которое действует у субъекта локально или системно. Термин также означает любое соединение, предназначенное для применения при диагностике, вылечивании, ослаблении, лечении или предотвращении заболевания, или в усилении желаемого физического или умственного развития и/или состояния у животного или человека.

Термин терапевтическое действие является общепризнанным термином в данной области и относится к местному или системному действию у животных, в частности млекопитающих, и конкретнее у людей, вызванному фармакологически активным соединением. Выражение терапевтически эффектив

- 5 018922 ное количество означает количество такого соединения, которое обеспечивает желаемое местное или системное действие при разумном соотношении польза/риск, применимом для любого лечения. Терапевтически эффективное количество такого соединения будет варьировать в зависимости от субъекта и заболевания, которое подвергается лечению, массы тела и возраста субъекта, тяжести заболевания, способа введения и т.п., которое может легко определить специалист в данной области. Например, некоторые композиции, описанные в данном документе, можно вводить в достаточном количестве для обеспечения желаемого эффекта при разумном соотношении польза/риск, применимом для любого лечения.

Термин лечение состояния или заболевания относится к лечению, а также ослаблению по меньшей мере одного симптома состояния или заболевания.

Термин нарушение зрения относится к ослабленному зрению, которое часто является частично обратимым или необратимым при лечении (например, при хирургическом вмешательстве). Особенно тяжелое нарушение зрения называется слепотой или потерей зрения, которое относится к полной потере зрения, зрения, острота которого ниже 20/200, которое невозможно улучшить с помощью корректирующих линз, или с угловым полем зрения менее чем 20° в диаметре (радиус 10°).

2. Модуляторы сиртуина.

В одном аспекте изобретение относится к новым модулирующим сиртуин соединениям для лечения и/или предотвращения широкого ряда заболеваний или нарушений, например заболеваний или нарушений, связанных со старением или стрессом, диабета, ожирения, нейродегенеративных заболеваний, заболеваний и нарушений глаз, сердечно-сосудистого заболевания, нарушения свертываемости крови, воспаления, злокачественного заболевания и/или приливов крови. Модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, также можно использовать для лечения заболевания или нарушения у субъекта, при котором повышенная митохондриальная активность будет оказывать положительное действие, для повышения мышечной производительности, для повышения уровня АТФ или для лечения или предотвращения повреждения мышечной ткани, ассоциированного с гипоксией или ишемией. Другие соединения, раскрытые в данном документе, могут быть подходящими для применения в фармацевтической композиции и/или в одном или более способов, раскрытых в данном документе.

В одном варианте осуществления модулирующие сиртуин соединения по изобретению имеют структурную формулу

ΗΝ к^: или его соль, в которой К³ представляет 5-6-членный насыщенный азотсодержащий гетероцикл, возможно содержащий второй гетероатом, выбранный из азота или кислорода, необязательно замещенный одним или более заместителями, выбранными из С₁-С₄-алкила, амино, галогена, метокси и метоксиС₁-С₄-алкила.

Предпочтительными значениями К³ в соединениях указанной структурной формулы являются следующие: пиперазин-1-ил, 4-(метоксиэтил)пиперазин-1-ил, 3,5-диметилпиперазин-1-ил, морфолин-4-ил, пиперидин-1-ил, 4-аминопиперидин-1-ил, пирролидин-1-ил и 3-фторпирролидин-1-ил.

Наиболее предпочтительно К³ выбран из 4-(метоксиэтил)пиперазин-1-ила, морфолин-4-ила, пиперидин-1-ила и 4-аминопиперидин-1-ила.

В некоторых вариантах осуществления изобретения соединение имеет структурную формулу

В другом варианте соединение представлено структурной формулой нм

- 6 018922

В следующем варианте осуществления соединение представлено структурной формулой:

ΗΝ

Ό

Соединения по изобретению, включая новые соединения по изобретению, также можно использовать в способах, описанных в данном документе.

Модулирующие сиртуин соединения по изобретению преимущественно модулируют уровень и/или активность белка сиртуина, в частности деацетилазную активность белка сиртуина.

Отдельно или в дополнении к указанным выше свойствам некоторые модулирующие сиртуин соединения по изобретению, по существу, не обладают одной или более из следующих активностей: ингибирование Р13-киназы, ингибирование альдоредуктазы, ингибирование тирозинкиназы, трансактивирование БСРК-тирозинкиназы, расширение коронарных сосудов или спазмолитическая активность, в концентрациях соединения, которые являются эффективными для модулирования деацетилазной активности белка сиртуина (например, такого как белок 8ΙΒΤ1 и/или 8ΙΒΤ3).

Соединения, раскрытые в данном документе, включают частично или полностью дейтерированные варианты. В некоторых вариантах осуществления присутствуют один или более атомов дейтерия, например, для проведения кинетических исследований. Специалист в данной области может выбрать места, в которых должны находиться такие атомы дейтерия.

Также в объем настоящего изобретения входят соли, в частности фармацевтически приемлемые соли, модулирующих сиртуин соединений, описанных в данном документе. Соединения по настоящему изобретению, которые обладают в достаточной мере кислыми, в достаточной мере основными группами или обоими видами групп, можно подвергнуть взаимодействию с любым рядом неорганических оснований и неорганических и органических кислот с образованием соли. Альтернативно, соединения, которые в своей основе заряжены, такие как с четвертичным атомом азота, могут образовать соль с соответствующим противоионом (например, галогенидом, таким как бромид, хлорид или фторид, особенно бромид).

Соединения и их соли, описанные в данном документе, также включают гидраты (например, гемигидрат, моногидрат, дигидрат, тригидрат, тетрагидрат) и сольваты соединений и их соли. Как правило, подходящие растворители для получения сольватов и гидратов может выбрать специалист в данной области.

Соединения и их соли могут находиться в аморфной или кристаллической (в том числе сокристаллической и полиморфной) формах.

Кислоты, которые обычно применяют для получения аддитивных солей кислоты, представляют неорганические кислоты, такие как соляная кислота, бромисто-водородная кислота, йодисто-водородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота и т.п., и органические кислоты, такие как птолуолсульфоновая кислота, метансульфоновая кислота, щавелевая кислота, п-бромфенилсульфоновая кислота, угольная кислота, янтарная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, уксусная кислота и т.п. Примеры таких солей включают сульфат, пиросульфат, бисульфат, сульфит, бисульфит, фосфат, вторичный кислый фосфат, первичный кислый фосфат, метафосфат, пирофосфат, хлорид, бромид, йодид, ацетат, пропионат, деканоат, каприлат, акрилат, формиат, изобутират, капроат, гептаноат, пропиолат, оксалат, малонат, сукцинат, суберат, себакат, фумарат, малеат, бутин-1,4-диоат, гексин-1,6-диоат, бензоат, хлорбензоат, метилбензоат, динитробензоат, гидроксибензоат, метоксибензоат, фталат, сульфонат, ксилолсульфонат, фенилацетат, фенилпропионат, фенилбутират, цитрат, лактат, гамма-гидроксибутират, гликолят, тартрат, метансульфонат, пропансульфонат, нафталин-1-сульфонат, нафталин-2-сульфонат, манделат и т.п.

Аддитивные соли основания включают таковые, полученные из неорганических оснований, таких как гидроксиды аммония или щелочных или щелочно-земельных металлов, карбонаты, бикарбонаты и т.п. Такие основания, подходящие для получения солей по настоящему изобретению, включают гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид аммония, карбонат калия и т.п.

По другому варианту осуществления настоящее изобретение относится к способу получения указанных выше модулирующих сиртуин соединений. Соединения можно синтезировать с использованием обычных способов. Преимущественно данные соединения обычно синтезируют из широкодоступных веществ.

- 7 018922

Один способ получения соединений по изобретению включает взаимодействие следующего соединения:

в котором X представляет уходящую группу (например, галоген, такой как С1), с закрывающим цикл агентом (например, агентом) с образованием следующего соединения:

Как правило, данное соединение подвергают хлорированию или бромированию (например, с использованием Ν-бромсукцинимида) с образованием следующего соединения:

ο₂ν

в котором На1 представляет атом галогена, хотя приемлемыми являются другие уходящие группы. Затем данное соединение подвергают взаимодействию с гетероциклом, содержащим необязательно защищенный атом азота (например, необязательно защищенную группу К³), с получением следующего соединения:

в котором азотсодержащий гетероцикл необязательно замещен и необязательно включает один или более дополнительных гетероатомов. Соединение восстанавливают с использованием подходящего восстановителя (например, железного порошка) с получением следующего соединения:

Затем данное соединение подвергают взаимодействию с К²-замещенной пиридинкарбоновой кислотой или Х²-замещенной бензойной кислотой и, если это необходимо, снимают защиту с получением соединения по изобретению.

Синтетические способы превращений и методологии, подходящие для синтеза модулирующих сиртуин соединений, описанных в данном документе, известны в данной области, и они включают, например, описанные К. Ьагоск, Сошргейеиыуе Огдашс ТгапзРогшабопз (1989); Т.^. Огееие апб Р.О.М. ШЛз, Рго1есбуе Огоирз ίη Огдашс 8упШез1з, 26 Еб. (1991); Ь. Иезег апб М. Иезег, Иезег апб Иезег'з Кеадеп1з Рог Огдашс 8упШез1з (1994) и Ь. РациеНе, еб., Епсус1ореб1а оР Кеадеп1з Рог Огдашс 8упШез1з (1995).

В приведенном в качестве примера варианте осуществления модулирующее сиртуин соединение может проходить через цитоплазматическую мембрану клетки. Например, соединение может обладать проницаемостью в клетки, составляющей по меньшей мере примерно 20, 50, 75, 80, 90 или 95%.

Модулирующие сиртуин соединения, описанные в данном документе, также могут иметь одно или более из следующих свойств: соединение может быть, по существу, нетоксичным для клетки или субъекта; модулирующее сиртуин соединение может представлять органическую молекулу или небольшую молекулу с молекулярной массой 2000 ат. единиц массы или меньше, 1000 ат. единиц массы или меньше; соединение может иметь период полураспада в условиях нормального атмосферного давления, составляющий по меньшей мере примерно 30, 60, 120 суток, 6 месяцев или 1 год; соединение может иметь период полураспада в растворе, равный по меньшей мере примерно 30, 60, 120 суткам, 6 месяцам или 1 году; модулирующее сиртуин соединение может быть более стабильным в растворе по сравнению с ресвератролом по меньшей мере примерно на 50%, в 2, 5, 10, 30, 50 или 100 раз; модулирующее сиртуин соединение может усиливать деацетилирование фактора репарации ДНК Ки70; модулирующее сиртуин

- 8 018922 соединение может усиливать деацетилирование Ке1А/рб5; соединение может повышать скорость общего обмена и повышать чувствительность клеток к индуцированному ΤΝΡ апоптозу.

В некоторых вариантах осуществления модулирующее сиртуин соединение не обладает какой-либо значительной способностью ингибировать гистоновую деацетилазу класса I (НОАС), НЭЛС класса II или НОАС класса III в концентрациях (например, в условиях ίη νίνο), эффективных для модуляции деацетилазной активности сиртуина. Например, в предпочтительных вариантах осуществления модулирующее сиртуин соединение является активирующим сиртуин соединением и выбрано из таковых с ЕС₅₀ в отношении активации деацетилазной активности сиртуина, которая по меньшей мере в 5 раз ниже по сравнению со значением ЕС₅₀ для НОАС I и/или НОАС II и еще более предпочтительно по меньшей мере в 10, 100 или даже в 1000 раз ниже. Методы определения активности НОАС I и/или НОАС II хорошо известны в данной области, и наборы для постановки таких тестов являются промышленно доступными; см., например, ВюУыоп. Шс. (МоиШаш У|е\у. СА; \νοιΊά Мбе \\еЬ в όίονίδίοη.οοιη) и Тйотак 8с1еШШс (8тебе§Ього, N1; \\όγ1<1 \\!бе \\еЬ в Юта^сьсот).

В некоторых вариантах осуществления модулирующее сиртуин соединение не обладает какой-либо существенной способностью модулировать гомологи сиртуина. В одном варианте осуществления активатор человеческого белка сиртуина может не проявлять какой-либо значительной способности активировать белок сиртуин низших эукариотов, в частности дрожжей или патогенов человека, в концентрациях (например, в условиях ίη νίνο), эффективных для активации деацетилазной активности человеческого сиртуина. Например, активирующее сиртуин соединение может быть выбрано из таковых с ЕС₅₀ в отношении деацетилазной активности человеческого сиртуина, такого как 8Ш.Т1 и/или 8IΕΤ3. которая по меньшей мере в 5 раз ниже по сравнению со значением ЕС₅₀ для активации дрожжевого сиртуина, такого как 8ιγ2 (например, СапБ1ба, 8. сегехыае и т.д.), и еще более предпочтительно по меньшей мере в 10 раз, 100 раз или даже в 1000 раз ниже. В еще одном варианте осуществления ингибитор белка сиртуина низших эукариотов, в частности дрожжей или патогенов человека, не обладает какой-либо значительной способностью ингибировать человеческий белок сиртуин в концентрациях (например, в условиях ίη νίνο), эффективных для ингибирования деацетилазной активности белка сиртуина низших эукариотов. Например, ингибирующее сиртуин соединение может быть выбрано из таковых с Κ'\₀ в отношении ингибирования деацетилазной активности человеческого сиртуина, такого как 8Ш.Т1 и/или З^ТЗ, которая по меньшей мере в 5 раз ниже по сравнению со значением Κ'\₀ для ингибирования дрожжевого сиртуина, такого как 8п2 (например, СапБ1ба, 8. сегехыае и т.д.), и еще более предпочтительно по меньшей мере в 10 раз, 100 раз или даже в 1000 раз ниже.

В некоторых вариантах осуществления модулирующее сиртуин соединение может обладать способностью модулировать один или более гомологов белка сиртуина, таких как, например, один или более из человеческих 8Ш.Т1, 8Ш.Т2, 8Ш.Т3, 8Ш.Т4, 8Ш.Т5, 8Ш.Т6 или 8Ш.Т7. В одном варианте осуществления модулирующее сиртуин соединение может проявлять способность модулировать оба белка 8Ш.Т1 и 8Ш.Т3.

В других вариантах осуществления модулятор 8Ш.Т1 не обладает какой-либо существенной способностью модулировать гомологи белка сиртуина, например, такие как один или более из человеческих 8Ш.Т2, 8Ш.Т3, 8Ш.Т4, 8Ш.Т5, 8Ш.Т6 или 8Ш.Т7, в концентрациях (например, в условиях ίη νίνο), эффективных для модуляции деацетилазной активности человеческого 8Ш.Т1. Например, модулирующее сиртуин соединение может быть выбрано из таковых с ЕО₅₀ в отношении модуляции деацетилазной активности человеческого 8Ш.Т1, которая по меньшей мере в 5 раз ниже по сравнению со значением ЕО₅₀ для модуляции одного или более из человеческих 8Ш.Т2, 8Ш.Т3, 8Ш.Т4, 8Ж.Т5, 8Ш.Т6 или 8Ш.Т7, и еще более предпочтительно по меньшей мере в 10 раз, 100 раз или даже в 1000 раз ниже. В одном варианте осуществления модулятор 8Ш.Т1 не обладает какой-либо существенной способностью модулировать белок 8Ш.Т3.

В еще одних вариантах осуществления модулятор 8Ш.Т3 не обладает какой-либо существенной способностью модулировать другие гомологи белка сиртуина, например, такие как один или более из человеческих 8Ш.Т1, 8Ш.Т2, 8Ш.Т4, 8Ш.Т5, 8Ш.Т6 или 8Ш.Т7, в концентрациях (например, в условиях ίη νίνο), эффективных для модуляции деацетилазной активности человеческого 8Ш.Т3. Например, модулирующее сиртуин соединение может быть выбрано из таковых с ЕО₅₀ в отношении модуляции деацетилазной активности человеческого 8Ш.Т3, которая по меньшей мере в 5 раз ниже по сравнению со значением ЕО₅₀ для модуляции одного или более из человеческих 8Ш.Т1, 8Ш.Т2, 8Ш.Т4, 8Ш.Т5, 8Ш.Т6 или 8Ш.Т7, и еще более предпочтительно по меньшей мере в 10 раз, 100 раз или даже в 1000 раз ниже. В одном варианте осуществления модулятор 8Ш.Т3 не обладает какой-либо существенной способностью модулировать белок 8Ш.Т1.

В некоторых вариантах осуществления модулирующее сиртуин соединение может иметь аффинность связывания для белка сиртуина, равную примерно 10^-9 М, 10^-10 М, 10^-11 М, 10^-12 М или ниже. Модулирующее сиртуин соединение может снижать (активатор) или повышать (ингибитор) значение кажущейся Кт белка сиртуина для его субстрата или НАД+ (или другого кофактора) по меньшей мере примерно в 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 50 или 100 раз. В некоторых вариантах осуществления значения Кт определяют с использованием метода масс-спектрометрии, описанного в данном документе. Предпочтительные

- 9 018922 активирующие соединения снижают значение Кт сиртуина для его субстрата или кофактора в большей степени по сравнению с ресвератролом, при использовании в одной и той же концентрации, или снижают значение Кт сиртуина для его субстрата или кофактора аналогично ресвератролу, но в более низкой концентрации. Модулирующее сиртуин соединение может повышать значение Утах белка сиртуина по меньшей мере примерно в 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 50 или 100 раз. Модулирующее сиртуин соединение может иметь значение ΕΌ₅₀ в отношении модуляции деацетилазной активности белка 8ΙΚ.Τ1 и/или 8ΙΚ.Τ3, которое ниже чем примерно 1 нМ, ниже чем примерно 10 нМ, ниже чем примерно 100 нМ, ниже чем примерно 1 мкМ, ниже чем примерно 10 мкМ, ниже чем примерно 100 мкМ или в пределах примерно 110 нМ, примерно 10-100 нМ, примерно 0,1-1 мкМ, примерно 1-10 мкМ или примерно 10-100 мкМ. Модулирующее сиртуин соединение может модулировать деацетилазную активность белка 8ΙΚ.Τ1 и/или 8ΙΚ.Τ3 по меньшей мере примерно в 5, 10, 20, 30, 50 или 100 раз по данным клеточного теста или теста на основе клеток. Активирующее сиртуин соединение может вызывать по меньшей мере примерно 10, 30, 50, 80%, 2-, 5-, 10-, 50- или 100-кратное повышение деацетилазной активности белка сиртуина по сравнению с аналогичной концентрацией ресвератрола. Модулирующее сиртуин соединение может обладать значением ΕΌ₅₀ в отношении модуляции 8ΙΚ.Τ5, которое по меньшей мере примерно в 10, 20, 30, 50 раз выше по сравнению с таковой для модуляции 8ΙΚ.Τ1 и/или 8ΙΚ.Τ3.

3. Примерные применения.

В некоторых аспектах изобретение относится к способам модуляции уровня и/или активности белка сиртуина и способам его применения.

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способам применения модулирующих сиртуин соединений, в которых модулирующие сиртуин соединения активируют белок сиртуин, например повышают уровень или активность белка сиртуина. Модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, могут быть пригодными для различных терапевтических применений, включая, например, повышение продолжительности жизни клетки, и лечение и/или предотвращение широкого ряда заболеваний и нарушений, в том числе, например, заболеваний и нарушений, ассоциированных со старением или стрессом, диабета, ожирения, нейродегенеративных заболеваний, сердечно-сосудистого заболевания, нарушения свертываемости крови, воспаления, злокачественного заболевания и/или приливов крови и т.д. Способы включают введение субъекту, нуждающемуся в этом, фармацевтически эффективного количества модулирующего сиртуин соединения, например активирующего сиртуин соединения.

Заявители настоящего изобретения полагают, что активаторы по настоящему изобретению могут взаимодействовать с сиртуином в одном и том же положении внутри белка сиртуина (например, в активном сайте или сайте, оказывающем влияние на значения Кт или Утах активного сайта). Полагают, что это и является причиной того, что некоторые группы активаторов и ингибиторов сиртуина могут иметь значительную структурную аналогию.

В некоторых вариантах осуществления модулирующие сиртуин соединения, описанные в данном документе, можно использовать самостоятельно или в комбинации с другими соединениями. В одном варианте осуществления смесь двух или более модулирующих сиртуин соединений можно вводить субъекту, нуждающемуся в этом. В другом варианте осуществления модулирующее сиртуин соединение, которое приводит к повышению уровня и/или активности белка сиртуина, можно вводить с одним или более из следующих соединений: ресвератролом, бутеином, фисетином, пицеатаннолом или кверцетином. В приведенном в качестве примера варианте осуществления модулирующее сиртуин соединение, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина, можно вводить в комбинации с никотиновой кислотой. В еще одном варианте осуществления модулирующее сиртуин соединение, которое приводит к снижению уровня и/или активности белка сиртуина, можно вводить с одним или более из следующих соединений: никотинамидом (ΝΑΜ), суранимом; ΝΕ023 (антагонистом С-протеина); ΝΕ279 (антагонистом пуринергического рецептора); тролоксом (6-гидрокси-2,5,7,8-тетраметилхроман-2-карбоновой кислотой); (-)-эпигаллокатехином (гидроксилированным в положениях 3,5,7,3',4',5'); (-)-эпигаллокатехином галлатом (гидроксилированным в положениях 5,7,3',4',5' и галлатовый эфир в положении 3); цианидинхлоридом (3,5,7,3',4'-пентагидроксифлавилием хлоридом); делфинидинхлоридом (3,5,7,3',4',5'гексагидроксифлавилием хлоридом); мирицетином (каннабисцетином; 3,5,7,3',4',5'гексагидроксифлавоном); 3,7,3',4',5'-пентагидроксифлавоном; госсипетином (3,5,7,8,3',4'гексагидроксифлавоном), сиртинолом и сплитомицином. В еще одном варианте осуществления одно или более модулирующих сиртуин соединений можно вводить с одним или более лекарственным средством для лечения или предотвращения различных заболеваний, включая, например, злокачественное заболевание, диабет, нейродегенеративные заболевания, сердечно-сосудистое заболевание, нарушения свертываемости крови, воспаление, приливы крови, ожирение, старение, стресс и т.д. В различных вариантах комбинированные лекарственные средства, содержащие модулирующие сиртуин соединения, могут относиться к (1) фармацевтическим композициям, которые содержат одно или более модулирующих сиртуин соединений в комбинации с одним или более лекарственным средством (например, одним или более лекарственным средством, описанным в данном документе) и (2) совместному введению одного или более модулирующих сиртуин соединений с одним или более лекарственным средством, где модули

- 10 018922 рующее сиртуин соединение и лекарственное средство не формулированы в одних и тех же композициях (но могут находиться в одном и том же наборе или упаковке, такой как блистер или другая многокамерная упаковка; соединенных по отдельности закрытых контейнерах (например, в вакуумных упаковках из фольги), которые может разделить пользователь; или в наборе, в котором модулирующее сиртуин соединение(я) и другое лекарственное средство(а) находятся в отдельных резервуарах. В случае применения отдельных композиций модулирующее сиртуин соединение можно водить одновременно, с перерывами, при чередовании, до, после, или в комбинациях указанного выше, по отношению к введению другого лекарственного средства.

В некоторых вариантах осуществления способы подавления, предотвращения или лечения заболеваний или нарушений с использованием модулирующего сиртуин соединения также могут включать повышение уровня белка сиртуина, такого как человеческий 8ΙΚΤ1, 8ΙΚΤ2 и/или 8ΙΚΤ3 или их гомологов.

Повышения уровня белка можно достичь введением в клетку одной или более копий нуклеиновой кислоты, которая кодирует сиртуин. Например, уровень сиртуина можно повысить в клетке млекопитающего введением в клетку млекопитающего нуклеиновой кислоты, кодирующей сиртуин; например, повышение уровня 8ΙΚΤ1 можно обеспечить введением нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную последовательность, имеющуюся в СеиВаик под номером ΝΡ_036370, и/или повышение уровня 8ΙΚΤ3 можно обеспечить введением нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислотную последовательность с номером ААН01042 в СеиВаик.

Нуклеиновая кислота, которую вводят в клетку для повышения уровня белка сиртуина, может кодировать белок, который по меньшей мере на 80, 85, 90, 95, 98 или 99% идентичен последовательности сиртуина, например белка 8ΙΚ.Τ1 и/или 8ΙΚΤ3. Например, нуклеиновая кислота, кодирующая белок, может быть по меньшей мере примерно на 80, 85, 90, 95, 98 или 99% идентична нуклеиновой кислоте, кодирующей белок 8ΙΒΤ1 (например, в СеиВаик под номером ΝΜ_012238) и/или белок 8ΙΒΤ3 (в СеиВаик под номером ВС001042). Нуклеиновая кислота также может представлять нуклеиновую кислоту, которая гибридизуется предпочтительно в жестких условиях с нуклеиновой кислотой, кодирующей сиртуин дикого типа, например белок 8ΙΚ.Τ1 и/или 8ΙΚΤ3. Жесткие условия гибридизации могут включать гибридизацию и отмывку в 0,2х88С при 65°С. При использовании нуклеиновой кислоты, которая кодирует белок, который отличается от белка сиртуина дикого типа, такого как белок, который является фрагментом сиртуина дикого типа, белок предпочтительно является биологически активным, например способным к деацетилированию. Только является необходимым экспрессировать в клетке фрагмент сиртуина, который является биологически активным. Например, белок, который отличается от белка 8ΙΚΤ1 дикого типа с номером ΝΡ_036370 в СеиВаик, предпочтительно содержит его основную структуру. В некоторых случаях основная структура относится к аминокислотам 62-293 последовательности с номером ΝΡ_036370 в СеиВаик, которые кодированы нуклеотидами 237-932 с номером ΝΜ_012238 в СеиВаик, которая включает домены связывания с НАД, а также домены связывания с субстратом. Основной домен 8ΙΚΤ1 также может относиться к аминокислотам примерно 261-447 с номером ΝΡ_036370 в СеиВаик, которые кодированы нуклеотидами 834-1394 с номером ΝΜ_012238 в СеиВаик, к аминокислотам примерно 242-493 с номером ΝΡ_036370 в СеиВаик, которые кодированы нуклеотидами 777-1532 с номером ΝΜ_012238 в СеиВаик; или к аминокислотам примерно 254-495 с номером ΝΡ_036370 в СеиВаик, которые кодированы нуклеотидами 813-1538 с номером ΝΜ_012238 в СеиВаик. Насколько белок сохраняет биологическую функцию, например способность к деацетилированию, можно определить с использованием способов, известных в данной области.

В некоторых вариантах осуществления способы подавления, предотвращения или лечения заболеваний или нарушений с использованием модулирующего сиртуин соединения также могут включать снижение уровня белка сиртуина, такого как человеческий 8ΙΚΤ1, 8ΙΚΤ2 и/или 8ΙΚ.Τ3, или их гомологов. Снижение уровня белка можно достичь с использованием способов, известных в данной области. Например, в клетке можно экспрессировать δί-РНК, антисмысловую нуклеиновую кислоту или рибозим, направленный на сиртуин. Также можно использовать доминантно-негативный мутант сиртуина, например мутант, который не способен к деацетилированию. Например, можно использовать мутант 8ΙΚ.Τ1, Н363У, описанный, например, Ьио е1 а1., (2001), Се11, 107:137. Альтернативно, можно использовать средства, ингибирующие транскрипцию.

Способы модулирования уровня белка сиртуина также включают способы модулирования транскрипции генов, кодирующих сиртуины, способы стабилизации/дестабилизации соответствующих мРНК, и другие способы, известные в данной области.

Старение/стресс.

Соединения настоящего изобретения могут увеличивать продолжительность жизни клетки, увеличивать пролиферативную способность клетки, замедлять старение клетки, повышать выживаемость клетки, замедлять клеточное старение в клетке, способствовать мимикрии эффекта ограничения калорий, повышения резистентности клетки к стрессу или предупреждения апоптоза клетки, контактированием клетки с модулирующим сиртуин соединением по изобретению, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина. В приведенном в качестве примера варианте осуществления способы включают контактирование клетки с активирующим сиртуин соединением.

- 11 018922

Способы, описанные в данном документе, можно использовать для повышения периода времени, в течение которого клетки, в частности первичные клетки (т.е. клетки, полученные из организма, например, человека) могут сохранять жизнеспособность в клеточной культуре. Эмбриональные стволовые клетки (Е§) и плюрипотентные клетки, и клетки, подвергающиеся дифференцировке из них, также можно обработать модулирующим сиртуин соединением, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина, для поддержания клеток или их потомства в культуре в течение более длительных периодов времени. Такие клетки также можно использовать для трансплантации субъекту, например, после модификации в условиях ех νίνο.

В одном варианте осуществления клетки, которые предназначаются для хранения в течение длительных периодов времени, можно обработать модулирующим сиртуин соединением, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина. Клетки могут находиться в суспензии (например, клетки крови, сыворотка, биологические культуральные среды и т.д.) или в тканях либо органах. Например, клетки, отобранные у субъекта для трансплантации, можно обработать модулирующим сиртуин соединением, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина, для сохранения клеток крови в течение более продолжительных периодов времени. Дополнительно кровь для применения в судебной медицине также можно консервировать с использованием модулирующего сиртуин соединения, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина. Другие клетки, которые можно обработать для увеличения продолжительности их существования или защитить от апоптоза, включают клетки для потребления в пищу, например, клетки от млекопитающих, отличных от человека (например, в мясе) или растительные клетки (такие как в овощах).

Модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, также можно применять во время фаз развития и роста у млекопитающих, растений, насекомых или микроорганизмов, например, для изменения, задержки или ускорения процесса развития и/или роста.

В еще одном варианте осуществления модулирующие сиртуин соединения, повышающие уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для обработки клеток, пригодных для трансплантации или клеточной терапии, включая, например, трансплантаты твердых тканей, трансплантаты органов, клеточные суспензии, стволовые клетки, клетки костного мозга и т.д. Клетки или ткань могут представлять собой аутотрансплантат, аллотрансплантат, синотрансплантат или ксенотрансплантат. Клетки или ткань можно обработать модулирующим сиртуин соединением перед введением/имплантацией, одновременно с введением/имплантацией и/или после введения/имплантации. Клетки или ткань можно обработать до отбора клеток от донора, после извлечения клеток и ткани от донора в условиях ех νίνο или после имплантации реципиенту. Например, донора или реципиента можно обработать модулирующим сиртуин соединением системно или группу клеток/ткани можно обработать модулирующим сиртуин соединением местно, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина. В некоторых вариантах осуществления клетки или ткань (донора/реципиента) можно дополнительно обработать другим лекарственным средством, пригодным для удлинения выживаемости трансплантата, например, таким как иммуносупрессор, цитокин, ангиогенный фактор и т.д.

В еще одних вариантах осуществления клетки можно обработать модулирующим сиртуин соединением, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина в условиях ίη νίνο, например, для увеличения продолжительности их существования или предупреждения апоптоза. Например, кожу можно защитить от старения (например, от появления морщин, потери эластичности и т.д.) обработкой кожи или эпителиальных клеток модулирующим сиртуин соединением, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина. В приведенном в качестве примера варианте осуществления кожу подвергают контактированию с фармацевтической или косметической композицией, содержащей модулирующее сиртуин соединение, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина. Приведенные в качестве примера поражения кожи, которые можно успешно лечить с использованием способов, описанных в данном документе, включают нарушения или заболевания, ассоциированные с или вызванные воспалением, воздействием солнечных лучей или естественным старением. Например, композиции найдут применение в предотвращении или лечении контактного дерматита (включая контактный дерматит раздражения и аллергический контактный дерматит), атопического дерматита (также известного как аллергическая экзема), актинического кератоза, нарушений кератинизации (включая экзему), буллезного эпидермолизиса (включая пенфигус), экзофолиативного дерматита, себоррейного дерматита, эритемы (включая мультиформную эритему и нодозную эритему), повреждений, вызванных солнечными лучами или другими источниками света, дискоидной эритематозной волчанки, дерматомиозита, псориаза, рака кожи и последствий естественного старения. В еще одном варианте осуществления модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для лечения ран и/или ожогов для ускорения заживления, включая, например, ожоги первой, второй или третьей степени и/или термические, химические или электрические ожоги. Композиции можно применять местно, на кожу или слизистые.

Композиции для местного применения, содержащие одно или более модулирующих сиртуин соединений, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, также можно использовать в качестве профилактических, например, композиций для химиопредотвращения. В случае применения в

- 12 018922 способе химиопредотвращения чувствительную кожу обрабатывают перед появлением видимого патологического состояния у конкретного субъекта.

Модулирующие сиртуин соединения можно вводить субъекту местно или системно. В одном варианте осуществления модулирующее сиртуин соединение вводят местно на ткань или орган у субъекта инъекцией, с помощью композиции для местного применения и т.д.

В еще одном варианте осуществления модулирующее сиртуин соединение, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для лечения или предотвращения заболевания или состояния, вызванного или обострившегося под действием старения клеток субъекта; в способах снижения скорости старения субъекта, например, после начала старения; в способах увеличения продолжительности жизни субъекта; в способах лечения или предотвращения заболевания или состояния, связанного с продолжительностью жизни; в способах лечения или предотвращения заболевания или состояния, связанного с пролиферативной активностью клеток; и в способах лечения или предотвращения заболевания или состояния, вызванного повреждением или гибелью клеток. В некоторых вариантах осуществления способ не функционирует посредством подавления скорости развития заболеваний, которые приводят к сокращению продолжительности жизни субъекта. В некоторых вариантах осуществления способ не функционирует через снижение летальности, вызванной заболеванием, таким как злокачественное заболевание.

В еще одном варианте осуществления модулирующее сиртуин соединение, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина, можно вводить субъекту обычно для повышения продолжительности существования его клеток и для защиты его клеток от стресса и/или апоптоза. Полагается, что лечение субъекта с помощью соединения, описанного в данном документе, аналогично воздействию на субъект гормезиса, т.е. мягкого стресса, который оказывает положительное влияние на организмы и может приводить к увеличению продолжительности жизни.

Модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно вводить субъекту для предупреждения старения и связанных со старением последствий или заболеваний, таких как инсульт, сердечное заболевание, сердечная недостаточность, артрит, высокое кровяное давление и болезнь Альцгеймера. Другие патологические состояния, которые можно лечить, включают заболевания глаз, например, связанные со старением глаз, такие как катаракты, глаукома и макулярная дегенерация. Модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, также можно вводить субъектам для лечения заболеваний, например хронических заболеваний, ассоциированных с гибелью клеток, для защиты клеток от гибели. Приведенные в качестве примера заболевания включают связанные с гибелью нейронов, дисфункцией нейронов или гибелью или дисфункцией мышечных клеток, такие как болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, рассеянный склероз, амиотрофический боковой склероз и мышечная дистрофия; СПИД; скоротечный гепатит; заболевания, связанные с дегенерацией мозга, такие как болезнь Крейцфельда-Якоба; пигментный ретинит и дегенерация коры мозжечка; миелодисплазия, такая как апластическая анемия; ишемическое заболевание, такое как инфаркт миокарда и инсульт; заболевания печени, такие как гепатит в результате злоупотребления алкоголем, гепатит В и гепатит С; заболевания суставов, такие как остеоартрит; атеросклероз; алопеция; повреждение кожи, вызванное воздействием УФ-лучей; красный плоский лишай; атрофия кожи; катаракта и отторжение трансплантата. Г ибель клеток также может быть вызвана хирургической операцией, терапией лекарственными препаратами, воздействием химических веществ или радиации.

Модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, также можно вводить субъекту, страдающему острым заболеванием, возникшим, например, в результате повреждения органа или ткани, например, субъекту, страдающему инсультом или инфарктом миокарда, или субъекту, страдающему повреждением спинного мозга. Модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, также можно использовать для восстановления печени у лиц, страдающих алкоголизмом.

Сердечно-сосудистое заболевание.

Настоящие соединения могут быть использованы в способах лечения и/или предотвращения сердечно-сосудистого заболевания введением субъекту, нуждающемуся в этом, модулирующего сиртуин соединения, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина.

Сердечно-сосудистые заболевания, которые можно лечить или предотвращать с использованием модулирующих сиртуин соединений, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, включают кардиомиопатию или миокардит; такую как идиопатическая кардиомиопатия, метаболическая кардиомиопатия, кардиомиопатия в результате злоупотребления алкоголизмом, вызванная лекарственными препаратами кардиомиопатия, ишемическая кардиомиопатия и кардиомиопатия в результате гипертензии. Также поддаются лечению и предотвращению с использованием соединений и способов, описанных в данном документе, атероматозные нарушения крупных кровеносных сосудов (макроваскулярное заболевание), таких как аорта, коронарные артерии, сонные артерии, цереброваскулярные артерии, почечные артерии, подвздошные артерии, бедренные артерии и подколенные артерии. Другие сосудистые заболевания, которые можно лечить или профилактировать, включают таковые, связанные с агрегацией тромбоцитов, почечными артериолами, гломерулярными артериолами, сосудами нервов, сердечны

- 13 018922 ми артериолами и связанными капиллярными руслами глаза, почек, сердца и центральной и периферической нервной систем. Модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, также можно использовать для повышения содержания ЛНП в плазме крови у субъекта.

Еще одни нарушения, которые можно лечить модулирующими сиртуин соединениями, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, включают рестеноз, например, после вмешательства на коронарных сосудах, и нарушения, относящиеся к аномальному уровню холестерина высокой плотности и низкой плотности.

В одном варианте осуществления модулирующее сиртуин соединение, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина, можно вводить в качестве компонента комбинированной терапии с другим сердечно-сосудистым препаратом. В одном варианте осуществления модулирующее сиртуин соединение, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина, можно вводить в качестве компонента комбинированной терапии с лекарственным средством против аритмии. В еще одном варианте осуществления модулирующее сиртуин соединение, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина, можно вводить в качестве компонента комбинированной терапии с другим сердечнососудистым препаратом.

Гибель клеток/злокачественное заболевание.

Модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно вводить субъектам, недавно получившим или которые будут получать воздействие радиации или токсина. В одном варианте осуществления получение дозы радиации или токсина связано с характером работы или лечебным вмешательством, например, при введении в качестве профилактической меры. В другом варианте осуществления воздействие радиации или токсина является непреднамеренным. В таком случае соединение предпочтительно вводить как можно раньше после воздействия для подавления апоптоза и последующего развития острого радиационного синдрома.

Модулирующие сиртуин соединения также можно использовать для лечения и/или предотвращения злокачественного заболевания. В некоторых вариантах осуществления модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно применять для лечения и/или предотвращения злокачественного заболевания. Ограничение в калориях ассоциируется со снижением частоты развития связанных с возрастом нарушений, в том числе злокачественного заболевания. Следовательно, повышение уровня и/или активности белка сиртуина может быть полезным для лечения и/или предотвращения частоты проявления возрастных нарушений, например, таких как рак. Приведенные в качестве примера злокачественные заболевания, которые можно лечить с использованием модулирующего сиртуин соединения, представляют злокачественные опухоли мозга и почек; гормонзависимые злокачественные опухоли, включая карциномы молочной железы, предстательной железы, яичек и яичника; лимфомы и лейкемии. При злокачественных заболеваниях, ассоциированных с солидными опухолями, модулирующее соединение можно вводить непосредственно в опухоль. Злокачественные заболевания крови, например лейкемию, можно лечить введением модулирующего соединения в кровяное русло или в костный мозг. Также можно воздействовать на доброкачественный рост клеток, например лечить бородавки. Другие заболевания, которые можно лечить, включают аутоиммунные заболевания, например системную красную волчанку, склеродерму и артрит, при которых следует элиминировать аутоиммунные клетки. Также можно лечить вирусные инфекции, такие как герпес, ВИЧ, аденовирусная инфекция и НТЬУ-1, связанные со злокачественными и доброкачественными нарушениями, введением модулирующего сиртуин соединения. Альтернативно, клетки, полученные от субъекта, можно обработать в условиях ех νίνο для удаления нежелательных клеток, например злокачественных клеток, и внести обратно тому же или другому субъекту.

Химиотерапевтические препараты можно вводить совместно с модулирующими соединениями, описанными в данном документе, как обладающие противоопухолевой активностью, например соединениями, которые индуцируют апоптоз, соединениями, которые уменьшают продолжительность существования клеток, или соединениями, которые делают клетки чувствительными к стрессу. Химиотерапевтические препараты можно применять сами по себе с модулирующим сиртуин соединением, описанным в данном документе, в качестве индуцирующих гибель или снижающих продолжительность существования клеток, повышающих чувствительность клеток к стрессу и/или в комбинации с другими химиотерапевтическими препаратами. В дополнении к обычным химиотерапевтическим препаратам модулирующие сиртуин соединения, описанные в данном документе, также можно использовать вместе с антисмысловой РНК, ί-РНК или другими полинуклеотидами для ингибирования экспрессии клеточных компонентов, принимающих участие в нежелательной клеточной пролиферации.

Комбинированные схемы лечения, включающие модулирующие сиртуин соединения и обычный химиотерапевтический препарат, могут иметь преимущества по сравнению с комбинированными схемами лечения, известными в данной области, поскольку сочетанное введение позволяет химиотерапевтическому препарату проявлять больший эффект в более низких дозах. В предпочтительном варианте осуществления эффективная доза (ΕΌ₅₀) для химиотерапевтического препарата или комбинации химиотерапевтических препаратов при использовании в сочетании с модулирующим сиртуин соединением будет по

- 14 018922 меньшей мере в 2 раза ниже по сравнению с ΕΌ₅₀ для одного химиотерапевтического препарата и еще более предпочтительно в 5, 10 и даже 25 раз ниже. В противоположность терапевтический индекс (ΤΙ) для химиотерапевтического препарата или комбинации таких химиотерапевтических препаратов при использовании в сочетании с модулирующим сиртуин соединением будет по меньшей мере в 2 раза выше по сравнению с ΤΙ для одного химиотерапевтического препарата и еще более предпочтительно в 5, 10 и даже 25 раз выше.

Нервные болезни/нарушения.

В некоторых аспектах модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для лечения пациентов, страдающих нейродегенеративными заболеваниями и травматическими и механическими повреждениями органов центральной нервной системы (ЦНС), спинного мозга или периферической нервной системы (ПНС). Как правило, нейродегенеративные заболевания включают снижение массы и объема мозга человека в результате атрофии и/или гибели клеток мозга, которые существенно более выражены по сравнению с этими явлениями у здорового человека, когда причиной является старение. Нейродегенеративные заболевания могут развиваться постепенно, после длительного периода нормального функционирования мозга, в результате прогрессирующей дегенерации (например, дисфункции и гибели нервных клеток) в специфических областях мозга. Альтернативно, нейродегенеративные заболевания могут иметь внезапное начало, например, как это происходит при травме или воздействии токсинов. Фактическое начало развития дегенерации мозга может предшествовать клиническому проявлению в течение многих лет. Примеры нейродегенеративных заболеваний включают, не ограничиваясь этим, болезнь Альцгеймера (АО), болезнь Паркинсона (РО), болезнь Гантингтона (НО), амиотрофический боковой склероз (АБ8; болезнь Луи Гехрига), болезнь диффузных телец Леви, хорею-акантоцитоз, первичный боковой склероз, глазные болезни (неврит зрительного нерва), вызванные химиотерапией нейропатии (например, в результате применения винкристина, паклитаксела, бортезомиба), вызванные диабетом нейропатии и атаксию Фридриха. Модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для лечения данных и других нарушений, описанных ниже.

АО представляет собой нарушение ЦНС, которое приводит к потере памяти, аномальному поведению, изменениям личности и снижению умственных способностей. Данные изменения являются результатом гибели клеток мозга определенных типов и разрушения связей и поддерживающей сети (например, глиальных клеток) между ними. Наиболее ранние симптомы включают потерю памяти на недавние события, неправильное суждение и изменения личности. РИ является нарушением ЦНС, последствия которого проявляются в неконтролируемых движениях тела, ригидности, треморе и дискинезии, и оно ассоциировано с гибелью клеток мозга в областях мозга, которые продуцируют дофамин. АГ8 (моторнонейронное расстройство) представляет нарушение ЦНС, при котором атаке подвергаются моторные нейроны, компоненты ЦНС, связывающие мозг со скелетными мышцами.

НИ является еще одним нейродегенеративным заболеванием, которое вызывает появление неконтролируемых движений, потерю интеллектуальных способностей и эмоциональное нарушение. Болезнь Тай-Сакса и болезнь Сандхоффа представляют собой болезни накопления гликолипидов, при которых СМ2-ганглиозид и связанные гликолипидные субстраты β-гексозаминидазы аккумулируются в нервной системе и запускают острую нейродегенерацию.

Хорошо известно, что апоптоз играет роль в патогенезе СПИД в иммунной системе. Однако ВИЧ-1 также вызывает неврологическое заболевание, которое можно лечить модулирующим сиртуин соединением по изобретению.

Потеря нейронов также является характерным признаком прионовых заболеваний, таких как болезнь Крейцфельда-Якоба у человека, Β8Ε у крупного рогатого скота (коровье бешенство), губчатый энцефалит у овец и спонгиформная энцефалопатия (Ρ8Ε) у кошек. Модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, могут быть пригодными для лечения или предотвращения потери нейронов в результате указанных выше заболеваний.

В другом варианте осуществления модулирующее сиртуин соединение, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для лечения и предотвращения любого заболевания или нарушения, которое включает аксонопатию. Дистальная аксонопатия представляет тип периферической нейропатии, которая возникает в результате некоторых метаболических или токсических повреждений нейронов периферической нервной системы (ПНС). Это наиболее общая ответная реакция нервов на метаболические или токсические нарушения, и они могут быть вызваны обменными заболеваниями, такими как диабет, почечная недостаточность, синдромы дефицита, такие как нарушение питания и алкоголизм, или действием токсинов или лекарственных препаратов. Таковые при дистальных аксонопатиях обычно имеют место с симметричными сенсорно-моторными нарушениями. Рефлексы глубоких сухожилий и функции вегетативной нервной системы (АНС) также исчезают или снижаются в пораженных зонах.

Диабетические нейропатии представляют нейропатические расстройства, которые связаны с сахарным диабетом. Относительно распространенные состояния, которые могут быть ассоциированы с диабетической нейропатией, включают паралич трех нервов; мононейропатию; мононеврит; диабетическую

- 15 018922 амиотрофию; болезненную полинейропатию; вегетативную нейропатию и торакоабдоминальную нейропатию.

Периферическая нейропатия является медицинским термином, который обозначает повреждение нервов периферической нервной системы, вызванное болезнями нервов или являющееся побочным эффектом системного заболевания. Основные причины периферической нейропатии включают судороги, недостаток питания и ВИЧ, хотя наиболее частой причиной является диабет.

В приведенном в качестве примера варианте осуществления модулирующее сиртуин соединение, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для лечения или предотвращения рассеянного склероза (Μ8), в том числе рецидивирующего Μ8 и моносимптоматического Μ8 и других демиенилизирующих состояний, например, таких как хроническая воспалительная демиенилизирующая полинейропатия (СЮР), или симптомов, ассоциированных с ними.

В еще одном варианте осуществления модулирующее сиртуин соединение, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина, можно применять для лечения травмы нервов, включая травмы, возникающие в результате заболевания, повреждения (в том числе хирургического вмешательства), или травмы за счет окружающей среды (например, в результате действия нейротоксинов, алкоголизма и т.д.).

Модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, также могут быть пригодными для предотвращения, лечения и ослабления симптомов различных нарушений ПЦС. Термин периферическая нейропатия включает широкий ряд расстройств, при которых повреждению подвергаются нервы вне головного и спинного мозга - периферические нервы. Периферическую нейропатию также можно рассматривать в качестве периферического неврита, или если поражено много нервов, то можно использовать термины полинейропатия и полиневрит.

Заболевания ПЦС, поддающиеся лечению модулирующими сиртуин соединениями, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, включают диабет, проказу, болезнь Шарко-Мари-Туса, синдром Гийома-Барре и нейропатии плечевого сплетения (заболевания шейного и первого грудного корешков, нервных стволов, тяжей и компонентов периферических нервов плечевого сплетения).

В еще одном варианте осуществления активирующее сиртуин соединение можно использовать для лечения или предотвращения полиглутаминовой болезни. Приведенные в качестве примера полиглутаминовые болезни включают спинобульбарную мышечную атрофию (болезнь Кеннеди), болезнь Гантингтона (ΗΌ), дентаторубро-паллидольюисову атрофию (синдром реки Хо), спиноцеребеллярную атаксию типа 1, спиноцеребеллярную атаксию типа 2, спиноцеребеллярную атаксию типа 3 (болезнь МачадоЖозефа), спиноцеребеллярную атаксию типа 6, спиноцеребеллярную атаксию типа 7 и спиноцеребеллярную атаксию типа 17.

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способу лечения клеток центральной нервной системы для предупреждения повреждения в ответ на снижение потока крови к клеткам. Как правило, тяжесть повреждения, которое можно предупредить, будет зависеть от степени снижения потока крови к клеткам и продолжительности снижения. В одном варианте осуществления гибель апоптических или некротических клеток можно предотвратить. В еще одном варианте осуществления можно предупредить опосредованное ишемией повреждение, такое как цитотоксический отек или аноксемия тканей центральной нервной системы. В каждом варианте осуществления клетки центральной нервной системы могут представлять собой клетки спинного мозга или клетки головного мозга.

Другой аспект включает введение субъекту активирующего сиртуин соединения для лечения ишемического состояния центральной нервной системы. Ряд ишемических состояний центральной нервной системы можно подвергнуть лечению активирующими сиртуин соединениями, описанными в данном документе. В одном варианте осуществления ишемическое состояние представляет инсульт, который возникает при любом ишемическом повреждении центральной нервной системы, таком как гибель апоптических или некротических клеток, цитотоксический отек или аноксия тканей центральной нервной системы. Инсульт может поражать любую область мозга или иметь любую этиологию, о которой известно, что она приводит к развитию инсульта. В одной альтернативе данного варианта осуществления инсульт представляет инсульт ствола мозга. В другой альтернативе данного варианта осуществления инсульт является церебеллярным инсультом. В еще одной альтернативе данного варианта осуществления инсульт представляет эмболический инсульт. В еще одной альтернативе инсульт является геморрагическим инсультом. В дополнительном варианте осуществления инсульт представляет тромботический инсульт.

В еще одном аспекте активирующее сиртуин соединение можно вводить для уменьшения объема инфаркта в коре с ишемией после ишемического состояния центральной нервной системы. Кроме того, активирующее сиртуин соединение также преимущественно вводить для снижения размера ишемической полутени или промежуточной зоны после ишемического состояния центральной нервной системы.

В одном варианте осуществления комбинированная схема лечения может включать лекарственные препараты или соединения для терапии или предотвращения нейродегенеративных нарушений или вторичных нарушений, связанных с данными состояниями. Таким образом, комбинированная схема лечения может включать применение одного или более активаторов сиртуина и одного или более лекарственных средств против нейродегенерации.

- 16 018922

Нарушения свертывания крови.

В других аспектах модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для лечения или предотвращения нарушений свертывания крови (или гемостатических нарушений). В том смысле, в котором взаимозаменяемо используются термины гемостаз, свертывание крови и свертываемость крови в данном документе, то они относятся к контролю кровотечения, включая физиологические свойства сужения сосудов и коагуляцию. Свертывание крови помогает сохранять целостность системы кровообращения у млекопитающих после повреждения, воспаления, заболевания, врожденных дефектов, дисфункции и других нарушений. Однако образование кровяных сгустков не только останавливает кровотечение в случае травмы (гемостаз), но также может привести к серьезному повреждению и гибели органов при атеросклеротических заболеваниях посредством окклюзии важной артерии или вены. Таким образом, тромбоз представляет образование кровяного сгустка в неправильное время и в неправильном месте.

Следовательно, настоящее изобретение относится к антикоагуляционной и противотромбической терапии, направленной на подавление образования кровяных сгустков в целях предотвращения или лечения нарушений свертывания крови, таких как инфаркт миокарда, инсульт, потеря конечности при заболевании периферических артерий или эмболии легких.

В том смысле, в котором взаимозаменяемо используются термины модулирование или модуляция гемостаза и регулирование или регуляция гемостаза в данном документе, то они включают индукцию (например, стимуляцию или повышение) гемостаза, а также ингибирование (например, снижение или уменьшение) гемостаза.

В одном аспекте изобретение относится к способу снижения или подавления гемостаза у субъекта введением модулирующего сиртуин соединения, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина. Композиции и способы, раскрытые в данном документе, являются пригодными для лечения или предотвращения тромботических осложнений. В том смысле, в котором используется термин тромботическое осложнение в данном документе, то он включает любое нарушение или состояние, для которого характерна избыточная или нежелательная свертываемость или гемостатическая активность, или состояние гиперкоагуляции. Тромботические осложнения включают заболевания или нарушения, в развитии которых принимают участие адгезия тромбоцитов и образование тромба, и они могут выражаться в повышенной склонности к образованию тромбов, например повышенному количеству тромбов, тромбозу в детском возрасте, наличию фамильной тенденции к тромбозу и образованию тромбов в необычных местах.

В другом варианте осуществления комбинированная схема лечения может включать лекарственные препараты и соединения для терапии и предотвращения нарушений свертывания крови или вторичных нарушений, ассоциированных с данными состояниями. Таким образом, комбинированная схема лечения может включать применение одного или более модулирующих сиртуин соединений, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, и одного или более лекарственных антикоагуляционных или противотромботических средств.

Контроль массы тела.

В еще одном аспекте модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для лечения или предотвращения повышения массы тела или ожирения у субъекта. Например, модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для лечения или предотвращения наследственной формы ожирения, пищевого ожирения, связанного с гормонами ожирения, ожирения, развившегося в результате введения лекарственных препаратов, для снижения массы тела у субъекта, или снижения или предотвращения увеличения массы тела у субъекта. Субъект, нуждающийся в таком лечении, может представлять субъекта, страдающего ожирением, у которого имеется вероятность развития ожирения, субъекта с избыточной массой тела или вероятностью появления избыточной массы тела. Субъектов, у которых имеется вероятность появления ожирения или избыточной массы тела, можно установить, например, основываясь на фамильном анамнезе, генетических данных, рационе, уровне активности, приеме лекарственных препаратов или их различных комбинациях.

В еще одних вариантах осуществления модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно вводить субъектам, страдающим различными другими заболеваниями и состояниями, которые можно лечить или предотвращать посредством усиления потери массы тела. Такие заболевания включают, например, высокое кровяное давление, гипертензию, высокий уровень холестерина, дислипидемию, диабет типа II, резистентность к инсулину, интолерантность к глюкозе, гиперинсулинемию, коронарное заболевание сердца, стенокардию, застойную сердечную недостаточность, инсульт, камни в желчном пузыре, холецистит и холелитиаз, подагру, остеоартрит, обструктивную остановку дыхания во время сна и проблемы с дыханием, некоторые типы злокачественных опухолей (такие как карциномы эндометрия, молочной железы, предстательной железы и ободочной кишки), осложнения во время беременности, проблемы с репродуктивной системой у женщин (такие как нерегулярность менструаций, бесплодие, нерегулярная овуляция), проблемы с мочевым пузырем (такие как недержание мочи при стрессах), уратный нефролитиаз, психические расстройства (такие как депрессия,

- 17 018922 расстройства с приемом пищи, искаженное изображение тела и низкая самооценка). Наконец, у пациентов со СПИД может развиться липодистрофия или резистентность к инсулину в ответ на комбинированную терапию СПИД.

В других вариантах осуществления модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для подавления адипогенеза или жирового клеточного перерождения в условиях ίη νίίΓΟ или ίη νίνο. Такие способы можно использовать для лечения или предотвращения ожирения.

В еще одних вариантах осуществления модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для снижения аппетита и/или появления чувства сытости с обеспечением тем самым снижения массы тела и избежания увеличения массы тела. Субъект, нуждающийся в таком лечении, может быть субъектом с избыточной массой тела, ожирением и субъектом, у которого имеется вероятность иметь избыточную массу тела или ожирение. Способ может включать введение субъекту дозы соединения, например, в виде пилюли каждый день, через день или раз в неделю. Доза может представлять снижающую аппетит дозу соединения.

В приведенном в качестве примера варианте осуществления модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно применять в виде комбинированной терапии для лечения и предотвращения увеличения массы тела или ожирения. Например, одно или более модулирующих сиртуин соединений, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно вводить в комбинации с одним или более средств против ожирения.

В еще одном варианте осуществления модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно вводить для подавления вызванного лекарственными препаратами повышения массы тела. Например, модулирующее сиртуин соединение, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина, можно применять в виде комбинированной терапии с лекарственными препаратами, которые могут стимулировать аппетит или вызывать увеличение массы тела, в частности увеличение массы тела за счет факторов, иных, чем задержка воды.

Метаболические нарушения/диабет.

В другом аспекте модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для лечения или предотвращения метаболического нарушения, такого как резистентность к инсулину, преддиабетическое состояние, диабет типа ΙΙ и/или его осложнения. Введение модулирующих сиртуин соединений, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, могут приводить к повышению чувствительности к инсулину и/или снижать уровень инсулина у субъекта. Субъект, нуждающийся в таком лечении, может быть субъектом, у которого имеется резистентность к инсулину или другой симптом, предшествующий диабету типа ΙΙ, или которому поставлен диагноз диабета типа ΙΙ, или у которого имеется вероятность развития данных патологических состояний. Например, субъект может представлять субъекта с резистентностью к инсулину, например, у которого имеются высокие концентрации инсулина в крови и/или ассоциированные состояния, такие как гиперлипидемия, нарушение липогенеза, гиперхолестеролемия, аномальная толерантность к глюкозе, высокий уровень сахара глюкозы в крови, другие проявления синдрома X, гипертензия, атеросклероз и липодистрофия.

В приведенном в качестве примера варианте осуществления модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно применять в виде комбинированной терапии для лечения или предотвращения метаболического нарушения. Например, одно или более модулирующих сиртуин соединений, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно вводить в комбинации с одним или более антидиабетическим средством.

Воспалительные заболевания.

В других аспектах модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для лечения или предотвращения заболевания или нарушения, которое ассоциировано с воспалением. Модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно вводить до, во время или после начала развития воспаления. При использовании в профилактических целях соединения предпочтительно следует применять заранее, до проявления какой-либо воспалительной ответной реакции или симптома. Введение соединений может предупредить или ослабить воспалительные реакции или симптомы.

В еще одном варианте осуществления модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для лечения или предотвращения аллергических и респираторных заболеваний, включающих астму, бронхит, фиброз легких, аллергический ринит, кислородное отравление, эмфизему, хронический бронхит, острый респираторный дистресссиндром и любое хроническое обструктивное заболевание легких (СОРИ). Соединения можно использовать для лечения хронического гепатита, в том числе гепатита В и гепатита С.

Кроме того, модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для лечения аутоиммунных заболеваний, и/или воспаления, ассоциированного с аутоиммунными заболеваниями, такими как органотканевые аутоиммунные заболевания (например, синдром Рейно), склеродерма, тяжелая псевдопаралитическая миастения, отторжение транс- 18 018922 плантата, эндотоксический шок, сепсис, псориаз, экзема, дерматит, рассеянный склероз, аутоиммунный тиреоидит, увеит, системная красная волчанка, болезнь Аддисона, аутоиммунное полиграндулярное заболевание (также известное как полиграндулярный синдром) и болезнь Граве.

В некоторых вариантах осуществления одно или более модулирующих сиртуин соединений, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно применять самостоятельно или в комбинации с другими соединениями, пригодными для лечения или предотвращения воспаления.

Приливы крови.

В еще одном аспекте модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для уменьшения частоты или тяжести приливов крови и/или горячих приливов, которые являются симптомами нарушения. Например, способ включает применение модулирующих сиртуин соединений, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, самостоятельно или в комбинации с другими средствами, в целях снижения частоты или тяжести приливов и/или горячих приливов у пациентов со злокачественным заболеванием. В еще одних вариантах осуществления способ относится к применению модулирующих сиртуин соединений, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина в целях снижения частоты или тяжести приливов крови и/или горячих приливов у женщин в периоде менопаузы и после менопаузы.

В еще одном аспекте модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для терапии в целях снижения частоты или тяжести приливов крови и/или горячих приливов, которые являются побочными эффектами терапии другим лекарственным средством, например приливов, вызываемых лекарственными препаратами. В некоторых вариантах осуществления способ лечения и/или предотвращения приливов, вызываемых лекарственными препаратами, включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, композиции, содержащей по меньшей мере одно соединение, вызывающее приливы, и по меньшей мере одно модулирующее сиртуин соединение, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина. В других вариантах осуществления способ лечения и/или предотвращения приливов, вызванных лекарственным препаратом, включает раздельное введение одного или более соединений, вызывающих приливы, и одного или более модулирующих сиртуин соединений, например, когда модулирующее сиртуин соединение и лекарственный препарат, вызывающий приливы, не формулированы в одних и тех же композициях. В случае применения отдельных композиций модулирующее сиртуин соединение можно вводить (1) одновременно с лекарственным средством, вызывающим приливы; (2) с интервалами с лекарственным средством, вызывающим приливы; (3) в чередовании с лекарственным средством, вызывающим приливы; (4) перед введением лекарственного средства, вызывающего приливы; (5) после введения лекарственного средства, вызывающего приливы; и (6) в различных комбинациях указанного. Приведенные в качестве примера лекарственные средства, взывающие приливы, например, включают ниацин, фалоксифен, антидепрессанты, антипсихотические препараты, химиотерапевтические препараты, блокаторы кальциевых каналов и антибиотики.

В одном варианте осуществления модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для подавления побочных эффектов в виде приливов у сосудорасширяющих препаратов и антилипемических средств (включая средства против повышенного содержания холестерина и липотропные препараты). В приведенном в качестве примера варианте осуществления модулирующее сиртуин соединение, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для уменьшения приливов крови, ассоциированных с введением ниацина.

В еще одном варианте осуществления изобретение относится к способу лечения и/или предотвращения гиперлипидемии с ослаблением побочных эффектов в виде приливов. В еще одном показательном варианте осуществления способ включает применение модулирующего сиртуин соединения, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина, для подавления побочных эффектов в виде приливов у ралоксифена. В еще одном показательном варианте осуществления способ включает применение модулирующего сиртуин соединения, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина, для ослабления побочных эффектов в виде приливов у антидепрессантов или антипсихотических препаратов. Например, модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать в сочетании (вводить по отдельности или вместе) с ингибитором повторного захвата серотонина или антагониста рецептора 5НТ2.

В некоторых вариантах осуществления модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать в качестве компонента терапии с ингибитором повторного захвата серотонина (8К1) для ослабления приливов. В еще одном показательном варианте осуществления модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для подавления побочных эффектов в виде приливов у химиотерапевтических препаратов, таких как циклофосфамид и тамоксифен.

В еще одном варианте осуществления модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно применять для уменьшения побочных эффектов в виде приливов у блокаторов кальциевых каналов, таких как амлодипин.

- 19 018922

В еще одном варианте осуществления модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для ослабления побочных эффектов в виде приливов у антибиотиков. Например, модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать в комбинации с левофлоксацином.

Глазные болезни.

Одним аспектом настоящего изобретения является способ подавления, снижения или лечения иным образом нарушения зрения введением пациенту терапевтической дозы модулятора сиртуина, выбранного из соединений, раскрытых в данном документе, или его фармацевтически приемлемой соли, пролекарства или метаболита.

В некоторых аспектах изобретения нарушение зрения вызвано повреждением зрительного нерва или патологий центральной нервной системы. В конкретных вариантах осуществления повреждение зрительного нерва вызвано высоким внутриглазным давлением, как это происходит при развитии глаукомы. В других конкретных вариантах осуществления повреждение зрительного нерва связано с набуханием нерва, которое часто связано с инфекцией или иммунным (например, аутоиммунным) ответом, как это имеет место при неврите зрительного нерва.

В некоторых аспектах изобретения нарушение зрения вызвано повреждением сетчатки. В конкретных вариантах осуществления повреждение сетчатки вызвано нарушением притока крови к глазу (например, как это имеет место при атеросклерозе, васкулите). В конкретных вариантах осуществления повреждение сетчатки вызвано повреждением желтого пятна (например, при экссудативной или неэкссудативной макулярной дегенерации).

Приведенные в качестве примера заболевания сетчатки включают экссудативную возрастную макулярную дегенерацию, неэкссудативную возрастную макулярную дегенерацию, электронный простезис сетчатки и трансплантационную возрастную макулярную дегенерацию КРЕ, острую мультифокальную плакоидную пигментную эпителиопатию, острый некроз сетчатки, болезнь Беста, окклюзию ветви центральной артерии сетчатки, окклюзию ветви центральной вены сетчатки, ретинопатии, ассоциированные со злокачественной опухолью и аутоиммунным заболеванием, окклюзию центральной артерии сетчатки, окклюзию центральной вены сетчатки, центральную тяжелую хориоретинопатию, болезнь Илса, эпимакулярную фиброзную мембрану, сетчатую дегенерацию сетчатки, макроаневризму, диабетический отек желтого пятна, макулярный отек Ирвина-Гасса, макулярное отверстие, неоваскулярные мембраны под сетчаткой, диффузный унилатеральный подострый нейроретинит, непсевдофакический цистоидный макулярный отек, синдром предполагаемого окулярного гистоплазмоза, экссудативное отслоение сетчатки, постоперационное отслоение сетчатки, пролиферативное отслоение сетчатки, регматогенное отслоение сетчатки, тракционное отслоение сетчатки, пигментный ретинит, ретинит, вызванный СМУ, ретинобластому, ретинопатию у недоношенных детей, ретинопатию Бердшота, фоновую диабетическую ретинопатию, пролиферативную диабетическую ретинопатию, ретинопатию при гемоглобинопатии, ретинопатию Пурчера, ретинопатию Вальсальвы, юношеский ретиношиз, старческий ретиношиз, синдром Терсона и синдром белого пятна.

Другие приведенные в качестве примера заболевания включают глазные бактериальные инфекции (например, конъюнктивит, кератит, туберкулез, сифилис, гонорею), вирусные инфекции (например, инфекции глаз, вызванные вирусом герпеса простого, вирусом ветряной оспы, ретинит, вызванный цитомегаловирусом, вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), а также прогрессирующий некроз наружных слоев сетчатки, вторичный ВИЧ или другие ВИЧ-ассоциированные инфекции) и другие ассоциированные с иммунодефицитом глазные заболевания. Кроме того, глазные болезни включают грибковые инфекции (например, хороидит, вызванный Сапб1ба, гистоплазмоз), протозойные инфекции (например, токсоплазмоз) и другие, такие как глазной токсокароз и саркоидоз.

Одним аспектом изобретения является способ подавления, снижения или лечения нарушения зрения у субъекта, подвергшегося лечению химиотерапевтическим препаратом (например, нейротоксическим препаратом, препаратом, приводящим к повышению внутриглазного давления, таким как стероид), введением субъекту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтической дозы модулятора сиртуина, раскрытого в данном документе.

Другим аспектом изобретения является способ подавления, снижения или лечения нарушения зрения у субъекта, подвергшегося хирургической операции, включая хирургическую операцию на глазах и другие, проведенные на связанных внутренних органах, такие как хирургическая операция на спинном мозге, введением субъекту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтической дозы модулятора сиртуина, раскрытого в данном документе. Глазные хирургические операции включают операции по поводу катаракты, иридотомии и замены хрусталика.

Еще одним аспектом изобретения является лечение, включая подавление и профилактическое лечение, связанных с возрастом глазных болезней, в том числе катаракты, сухого глаза, возрастной макулярной дегенерации (ЛМЭ), повреждения сетчатки и т.п., введением субъекту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтической дозы модулятора сиртуина, раскрытого в данном документе.

Еще одним аспектом изобретения является предотвращение или лечение повреждения глаза, вызванного стрессом, инсульта в результате воздействия химических веществ или радиации, введением

- 20 018922 субъекту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтической дозы модулятора сиртуина, раскрытого в данном документе. Радиационное или электромагнитное повреждение глаза может включать таковые, вызванные СНТ или воздействием солнечного света или УФ.

В одном варианте осуществления комбинированная схема лечения может включать лекарственные препараты и соединения для лечения или предотвращения глазных нарушений или вторичных заболеваний, ассоциированных с данными патологическими состояниями. Таким образом, комбинированная схема лечения может включать один или более активаторов сиртуина и одно или более лекарственных средств для лечения заболевания глаз.

В одном варианте осуществления модулятор сиртуина можно вводить в сочетании с терапией для снижения внутриглазного давления. В другом варианте осуществления модулятор сиртуина можно вводить в сочетании с терапией, используемой для лечения и/или предотвращения глаукомы. В еще одном варианте осуществления модулятор сиртуина можно вводить в сочетании с терапией, используемой для лечения и/или предотвращения неврита зрительного нерва. В еще одном варианте осуществления модулятор сиртуина можно вводить в сочетании с терапией, используемой для лечения и/или предотвращения ретинопатии, вызванной цитомегаловирусом. В еще одном варианте осуществления модулятор сиртуина можно вводить в сочетании с терапией, используемой для лечения и/или предотвращения рассеянного склероза.

Ассоциированные с митохондриями заболевания и нарушения.

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к способам лечения заболеваний или нарушений, при которых повышенная митохондриальная активность будет оказывать положительное действие. Способы включают введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества активирующего сиртуин соединения. Повышенная митохондриальная активность относится к повышенной активности митохондрий при сохранении общего количества митохондрий (например, митохондриальной массы), повышенному количеству митохондрий, тем самым повышенной митохондриальной активности (например, посредством стимуляции биогенеза митохондрий) или комбинаций указанного. В некоторых вариантах осуществления заболевания и нарушения, при которых повышенная митохондриальная активность будет оказывать положительное действие, включают заболевания и нарушения, ассоциированные с дисфункцией митохондрий.

В некоторых вариантах осуществления способы лечения заболеваний или нарушений, при которых повышенная митохондриальная активность будет оказывать положительное действие, могут включать идентификацию субъекта, у которого имеется дисфункция митохондрий. Способы диагностики дисфункции митохондрий включают методы молекулярной генетики, патологические и/или биохимические анализы. Заболевания и нарушения, ассоциированные с дисфункцией митохондрий, включают заболевания и нарушения, при которых недостаток активности митохондриальной дыхательной цепи вносит свой вклад в развитие патофизиологии таких заболеваний и нарушений у млекопитающего. Заболевания и нарушения, при которых повышенная митохондриальная активность будет оказывать положительное действие, включают, например, заболевания, при которых нарушение окисления, опосредованного свободными радикалами, приводит к дегенерации тканей, развитию заболеваний, при которых клетки подвергаются неадекватному апоптозу, и заболеваний, при которых клетки не могут подвергнуться апоптозу.

В некоторых вариантах осуществления способы лечения заболеваний или нарушений, при которых повышенная митохондриальная активность будет оказывать положительное действие, которые включают введение субъекту, нуждающемуся в этом, одного или более активирующих сиртуин соединений в комбинации с другим лекарственным средством, например, таким как средство, пригодное для лечения дисфункции митохондрий, или средство, пригодное для ослабления симптома, ассоциированного с заболеванием или нарушением, включающим дисфункцию митохондрий.

В приведенных в качестве примера вариантах осуществления изобретение относится к способам лечения заболеваний или нарушений, при которых повышенная митохондриальная активность будет оказывать положительное действие, введением субъекту терапевтически эффективного количества активирующего сиртуин соединения. Приведенные в качестве примера заболевания и нарушения включают, например, нейромышечные нарушения (например, атаксию Фридриха, мышечную дистрофию, рассеянный склероз и т.д.), нарушения, выражающиеся в нестабильности нейронов (например, судороги, мигрень и т.д.), замедленное развитие, нейродегенеративные нарушения (например, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, амиотрофический боковой склероз и т.д.), ишемию, почечноканальцевый ацидоз, возрастную нейродегенерацию и снижение когнитивной функции, утомляемость в результате действия химиотерапевтических препаратов, возрастную и индуцированную химиотерапевтическими препаратами менопаузу или нерегулярность менструального цикла или овуляции, митохондриальные миопатии, повреждение митохондрий (например, в результате накопления кальция, экзитотоксичности, воздействия оксида азота, гипоксии и т.д.) и нарушение регуляции митохондрий.

Мышечная дистрофия относится к группе заболеваний, включающих нарушение нейромышечной структуры и функции, часто приводящее к атрофии скелетных мышц и дисфункции миокарда, как это имеет место при мышечной дистрофии Дюшенна. В некоторых вариантах осуществления активирующие

- 21 018922 сиртуин соединения можно использовать для уменьшения скорости снижения функциональной активности мышц и улучшения функционального статуса мышц у пациентов с мышечной дистрофией.

В некоторых вариантах осуществления модулирующие сиртуин соединения могут быть пригодными для лечения митохондриальных миопатий. Степень поражения при митохондриальных миопатиях колеблется от незначительной, медленно прогрессирующей слабости внеглазных мышц до тяжелых, фатальных миопатий у младенцев и полисистемных энцефаломиопатий. Некоторые синдромы точно выделяются с определенными перекрытиями между ними. Известные синдромы, поражающие мышцы, включают прогрессирующую внешнюю офтальмоплегию, синдром Кернса-Сейра (с офтальмоплегией, пигментной ретинопатией, нарушениями проводимости сердца, церебеллярной атаксией и сенсоневральной глухотой), синдром МЕЬЛБ (митохондриальную энцефаломиопатию, лактоцидоз и инсультоподобные эпизоды), синдром МЕКЕР (миоклоническую эпилепсию и рваные красные волокна), слабость мышц конечностей и миопатию у детей (доброкачественную или тяжелую и фатальную).

В некоторых вариантах осуществления активирующие сиртуин соединения могут быть пригодными для лечения пациентов, страдающих токсическим повреждением митохондрий, таким как токсическое повреждение в результате накопления кальция, экзитотоксичности, воздействия оксида азота или гипоксии.

В некоторых вариантах осуществления активирующие сиртуин соединения могут быть пригодными для лечения заболеваний или нарушений, связанных с отсутствием регуляции митохондрий.

Мышечная производительность.

В других вариантах осуществления изобретение относится к способам повышения мышечной производительности введением терапевтически эффективного количества активирующего сиртуин соединения. Например, активирующие сиртуин соединения могут быть пригодными для повышения физической выносливости (например, способности выполнить физическую задачу, такую как физические упражнения, физический труд, спортивная активность и т.д.), подавления или замедления физической усталости, повышения уровня кислорода в крови, увеличения энергии у здоровых субъектов, повышения работоспособности и выносливости, снижения мышечной усталости, ослабления стресса, повышения сердечной и сердечно-сосудистой функции, повышения сексуальной активности, повышения уровня АТФ в мышцах и/или снижения уровня молочной кислоты в крови. В некоторых вариантах осуществления способы включают введение количества активирующего сиртуин соединения, повышающего митохондриальную активность, усиливающего биогенез митохондрий и/или увеличивающего массы митохондрий.

Атлетическая производительность у спортсменов относится к способности мышц спортсменов функционировать при их участии в спортивных мероприятиях. Повышенную атлетическую производительность, силу, скорость и выносливость определяют по повышению силы мышечного сокращения, увеличению амплитуды мышечного сокращения, сокращению времени реактивности мышц между стимуляцией и сокращением. Спортсмен представляет субъекта, который принимает участие в спортивных мероприятиях на любом уровне и который желает достичь повышенного уровня силы, скорости и выносливости в их производительности, например, это касается тяжелоатлетов, велосипедистов, бегунов на дальние дистанции, бегунов на короткие дистанции и т.д. Повышенная атлетическая производительность в спорте выражается в способности преодолевать мышечную усталость, способности поддерживать активность в течение длительных периодов времени и иметь более эффективные тренировки.

В месте проявления мышечной производительности у спортсменов желательно создать условия, которые позволили бы соревноваться или тренироваться с более высоким уровнем устойчивости в течение продолжительного периода времени.

Полагается, что способы по настоящему изобретению также будут эффективными для лечения связанных с мышцами патологических состояний, которые включают острую саркопению, например мышечную атрофию и/или кахексию, связанных с ожогами, пребыванием в постели, иммобилизацией конечностей или крупными хирургическими операциями на органах грудной полости, брюшной полости и/или ортопедическими операциями.

В некоторых вариантах осуществления изобретение относится к новым пищевым композициям, способу их приготовления и способу применения композиций для улучшения атлетической производительности у спортсменов. Следовательно, обеспечиваются лечебные композиции, продукты питания и напитки, которые функционируют для повышения физической выносливости и/или ослабления физической усталости у людей, занимающихся различными физическими упражнениями, включая спорт, требующими выносливости и труда, требующими мышечных усилий. Такие пищевые композиции могут дополнительно содержать электролиты, кофеин, витамины, углеводы и т.д.

Другие применения.

Модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для лечения или предотвращения вирусных инфекций (таких как грипп, герпес или инфекция, вызванная вирусом папилломы) или в качестве противогрибковых средств. В некоторых вариантах осуществления модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно вводить в качестве компонента комбинированной терапии с другим лекарственным средством для лечения вирусных заболеваний. В еще одном варианте осуществления модулирую

- 22 018922 щие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно вводить в качестве компонента комбинированной терапии с другим противогрибковым средством.

Субъекты, которых можно лечить, как описано в данном документе, включают эукариоты, такие как млекопитающие, например люди, овцы, крупный рогатый скот, лошади, свиньи, собаки, кошки, приматы, отличные от людей, мыши и крысы. Клетки, которые можно обрабатывать, включают эукариотические клетки, например, от субъекта, описанного ниже, или растительные клетки, дрожжевые клетки и прокариотические клетки, например бактериальные клетки. Например, модулирующие соединения можно вводить сельскохозяйственным животным для улучшения их способности противостоять дольше неблагоприятным условиям в хозяйстве.

Модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, также можно использовать в целях повышения продолжительности существования, резистентности к стрессам и устойчивости к апоптозу у растений. В одном варианте осуществления соединение применяют на растениях, например, на периодической основе, или на грибах. В другом варианте осуществления растения генетически модифицируют для продукции соединения. В еще одном варианте осуществления растения и плоды обрабатывают соединением до сбора и перевозки в целях повышения устойчивости к повреждению во время перевозки. Семена растений также можно подвергнуть контактированию с соединением, описанным в данном документе, например, для их консервации.

В еще одних вариантах осуществления модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно использовать для модуляции продолжительности существования дрожжевых клеток. Ситуации, в которых может быть желательным увеличить период существования дрожжевых клеток, включают любой процесс, в котором применяют дрожжевые клетки, например, в производстве пива, йогурта, выпечных изделий, например хлеба. Применение дрожжей с длительным периодом существования может привести к использованию меньшего количества дрожжей или дрожжей, которые сохраняют активность в течение более продолжительных периодов времени. Дрожжи или другие клетки млекопитающих, используемые для рекомбинантного получения белков, также можно обработать, как описано в данном документе.

Модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, также можно использовать для увеличения продолжительности существования, резистентности к стрессам и устойчивости к апоптозу у насекомых. В данном варианте осуществления соединения следует применять на насекомых, например пчелах, и других насекомых, участвующих в опылении растений. В конкретном варианте осуществления соединения следует применять на пчелах, производящих мед. Как правило, способы, описанные в данном документе, можно применять для любого организма, например эукариота, который имеет промышленное значение. Например, их можно применять для рыб (аквакультур) и птиц (например, кур и диких птиц).

Более высокие дозы модулирующих сиртуин соединений, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, также можно использовать в качестве пестицида посредством воздействия на регуляцию молчащих генов и регуляцию апоптоза во время развития. В данном варианте осуществления соединение можно применять на растениях с использованием метода, хорошо известного в данной области, который гарантирует биодоступность соединения для личинок насекомых, но не для растений.

По меньшей мере, в свете наличия взаимосвязи между репродукцией и продолжительностью жизни модулирующие сиртуин соединения, которые повышают уровень и/или активность белка сиртуина, можно применять для воздействия на репродукцию организмов, таких как насекомые, животные и микроорганизмы.

4. Тесты.

Описаны различные типы тестов для определения активности сиртуина. Например, активность сиртуина можно определить с использованием флуоресцентного анализа, например, с использованием наборов промышленно доступных от ВЮМОЬ, таких как 81КТ1 РкюгиШпс Эгид Бйсоуегу Κίΐ (АК-555), 81КТ2 Ниоптс1пс Эгид ББсоусгу Κίΐ (АК-556) или 81КТ3 РкюгиШпс Эгид ББсоусгу Κίΐ (АК-557) (ВЮМОЬ 1п1сгпа11опа1. Р1утоШк Меекид, РА). Другие подходящие методы анализа сиртуина включают тест с выделением никотинамида (КаеЬег1еш с1 а1., ί. Вю1. СНет., 280(17): 17038 (2005)), тест ЕКЕТ (Магсо11е е1 а1., Апа1. Вюскет., 332:90, (2004)) и тест связывания С¹⁴-НАД на борсодержащей смоле (МсБоиадк е1 а1., Ме1кок8, 36:346, (2005)). Еще одни подходящие методы анализа сиртуина включают радиоиммуноанализ (К1А), сцинтилляционные тесты близости, тесты на основе ВЭЖХ и тесты с использованием репортерных генов (например, для транскрипционных факторов-мишеней).

Приведенным в качестве примера тестом для определения активности сиртуина является тест на основе флуоресцентной поляризации. Тесты на основе флуоресцентной поляризации описаны в данном документе и также описаны в публикации РСТ νθ 2006/094239. В других вариантах осуществления активность сиртуина можно определить с использованием методов анализа на основе масс-спектрометрии. Примеры тестов на основе масс-спектрометрии описаны в данном документе и также описаны в публикации РСТ νθ 2007/064902. Также можно использовать клеточные тесты для определения активности сиртуина. Примеры клеточных тестов описаны в данном документе и также описаны в публикации РСТ νθ 2007/064902 и νθ 2008/060400.

- 23 018922

Еще одни методы, предусмотренные в данном документе, включают скрининговые методы для идентификации соединений или средств, модулирующих сиртуин. Средство может представлять нуклеиновую кислоту, такую как аптамер. Тесты можно проводить в клеточном или бесклеточном формате. Например, тест может включать инкубацию (или контактирование) сиртуина с тестируемым соединением в условиях, при которых сиртуин может подвергаться модуляции под действием соединения, о котором известно, что оно модулирует сиртуин, и мониторинг или определение степени модуляции сиртуина в присутствии тестируемого соединения по сравнению с ситуацией, когда тестируемое соединение отсутствует. Степень модуляции сиртуина можно определить оценкой его способности деацетилировать субстрат. Приведенные в качестве примера субстраты представляют собой ацетилированные пептиды, которые можно получить от ВЮМОЬ (Р1утои!Ь Мее!тд, РА). Предпочтительные субстраты включают пептиды р53, такие как содержащие ацетилированный К382. Особенно предпочтительным субстратом является Е1иог бе Ьук-8иКТ1 (ВЮМОЬ), т.е. ацетилированный пептид Агд-Нй-Ьук-Ьук. Другие субстраты представляют пептиды человеческих гистонов Н3 и Н4 или ацетилированную аминокислоту. Субстраты могут быть флуорогенными. Сиртуин может представлять собой 8ГК.Т1, 81г2, 8ГК.Т3 или их фрагмент. Например, рекомбинантный 8ГКТ1 можно получить от ВЮМОЬ. Реакцию можно проводить примерно в течение 30 мин и остановить, например, никотинамидом. Можно использовать флуоресцентный тест определения активности НЬЛСУнабор бгид бйсоуегу (АК-500, ВЮМОЬ КекеагсЬ ЬаЬогаЮпек) для определения степени ацетилирования. Аналогичные тесты описаны ВШегтап е! а1., (2002), I. Вю1. СЬет., 277:45099. Степень модуляции сиртуина в тесте можно сравнить со степенью модуляции сиртуина в присутствии одного или более (внесенных по отдельности или одновременно) соединений, описанных в данном документе, которые могут служить в качестве позитивных или негативных контролей. Сиртуины для применения в тестах могут быть полноразмерными белками сиртуинами или их фрагментами. Поскольку, как было показано в данном документе, активирующие соединения взаимодействуют с Νконцом 8ГКТ1, то белки для применения в тестах включают Ν-концевые фрагменты сиртуинов, например аминокислоты примерно 1-176 или 1-255 8ГКТ1, аминокислоты примерно 1-174 или 1-252 8п2.

В одном варианте осуществления скриниговый тест включает (ί) контактирование сиртуина с тестируемым соединением и ацетилированным субстратом в условиях, подходящих для того, чтобы сиртуин деацетилировал субстрат в отсутствие тестируемого соединения и (ίί) определение степени ацетилирования субстрата, где низкая степень ацетилирования субстрата в присутствии тестируемого соединения по сравнению с отсутствием тестируемого соединения указывает на то, что тестируемое соединение стимулирует деацетилирование под действием сиртуина, в то время как высокая степень ацетилирования субстрата в присутствии тестируемого соединения по сравнению с отсутствием тестируемого соединения указывает на то, что тестируемое соединение ингибирует деацетилирование под действием сиртуина.

Способы идентификации средства, которое модулирует, например стимулирует, сиртуины в условиях 1п у1уо, могут включать (ί) контактирование клетки с тестируемым соединением и субстратом, который способен поступать в клетку, в присутствии ингибитора НЬАС класса I и класса II в условиях, подходящих для того, чтобы сиртуин деацетилировал субстрат в отсутствие тестируемого соединения и (ίί) определение степени ацетилирования субстрата, где низкая степень ацетилирования субстрата в присутствии тестируемого соединения по сравнению с отсутствием тестируемого соединения указывает на то, что тестируемое соединение стимулирует деацетилирование под действием сиртуина, в то время как более высокая степень ацетилирования субстрата в присутствии тестируемого соединения по сравнению с отсутствием тестируемого соединения указывает на то, что тестируемое соединение ингибирует деацетилирование под действием сиртуина. Предпочтительным субстратом является ацетилированный пептид, который также предпочтительно является флуорогенным, как дополнительно описано ниже. Способ может дополнительно включать лизирование клеток для определения уровня ацетилирования субстрата. Субстраты можно дополнительно добавить к клеткам в концентрации в пределах примерно от 1 мкМ до примерно 10 мМ, предпочтительно примерно от 10 мкМ до примерно 1 мМ, еще более предпочтительно примерно от 100 мкМ до примерно 1 мМ, например примерно 200 мкМ. Предпочтительным субстратом является ацетилированный лизин, например ε-ацетиллизин (Е1иог бе Ьук, ЕбЬ) или Е1иог бе Ьук-ЗШТЕ Предпочтительным ингибитором НИАС класса I и класса II является трихостатин А (Т8А), который можно использовать в концентрациях в пределах примерно от 0,01 до 100 мкМ, предпочтительно примерно от 0,1 до примерно 10 мкМ, например 1 мкМ. Инкубирование клеток с тестируемым соединением и субстратом можно проводить в течение примерно от 10 мин до 5 ч, предпочтительно в пределах примерно 1-3 ч. Поскольку Т8А ингибирует все НИАС класса I и класса II и с учетом того, что некоторые субстраты, например Е1иог бе Ьук, являются неактивным субстратом для 8ГК.Т2 и еще более неактивным субстратом для 8ГК.Т3-7, то такой тест можно использовать для идентификации модуляторов 8ГК.Т1 в условиях 1п У1Уо.

5. Фармацевтические композиции.

Модулирующие сиртуин соединения, описанные в данном документе, можно формулировать обычным образом с использованием одного или более физиологически приемлемых носителей или наполнителей. Например, модулирующие сиртуин соединения и их физиологически приемлемые соли и сольваты

- 24 018922 можно формулировать для введения, например, с помощью инъекции (например, подкожной, внутримышечной, внутрибрюшинной), ингаляцией или инсуффляцией (через рот или нос) или перорально, буккально, сублингвально, трансдермально, назально, парентерально или ректально. В одном варианте осуществления модулирующее сиртуин соединение можно применять местно, в области, где находятся клетки-мишени, т.е. в конкретной ткани, органе или жидкости (например, крови, спинно-мозговой жидкости и т.д.).

Модулирующие сиртуин соединения можно формулировать для различных способов введения, включая системное и местное или локальное введение. В целом способы и композиции можно найти в Кет1пд1оп'8 Рйагтассибса1 8с1спес5. Мсабс РиЫЕЫпд Со., ЕаЧоп ΡΑ. Для парентерального введения предпочтительной является инъекция, включая внутримышечную, внутривенную, внутрибрюшинную или подкожную инъекцию. Для инъекционного введения соединение можно формулировать в жидких растворах, предпочтительно в физиологически приемлемых буферах, таких как раствор Хэнкса или раствор Рингера. Кроме того, соединения можно формулировать в твердой форме и растворять или суспендировать непосредственно перед применением. Также включаются лиофилизированные формы.

Для перорального введения фармацевтические композиции могут находиться в форме, например, таблеток, лепешек или капсул, приготовленных обычными методами с фармацевтически приемлемыми наполнителями, такими как связующие вещества (например, прежелатизированный кукурузный крахмал, поливинилпирролидон или гидроксипропилметилцеллюлоза); наполнители (например, лактоза, микрокристаллическая целлюлоза или вторичный кислый фосфат кальция); скользящие вещества (например, стеарат магния, тальк или диоксид кремния); разрыхлители (например, картофельный крахмал или натрий-крахмалгликолят) или смачивающие вещества (например, лаурилсульфат натрия). Таблетки можно покрыть оболочками с использованием способов, известных в данной области. Жидкие препараты для приема внутрь могут находиться, например, в форме растворов, сиропов или суспензий или они могут находиться в виде сухого продукта, который восстанавливают в воде или других подходящих носителях перед применением. Такие жидкие препараты можно приготовить обычными методами с использованием фармацевтически приемлемых добавок, таких как суспендирующие вещества (например, сироп сорбита, производные целлюлозы или гидрогенизированные пищевые масла); эмульгаторы (например, лецитин и аравийская камедь); неводные растворители (например, атиондовое масло, эфиры жирных кислот, этиловый спирт или фракционированные растительные масла) и консерванты (например, метилили пропил-п-гидроксибензоаты или сорбиновая кислота). Также препараты могут содержать буферные соли, вкусовые вещества, красители и подсластители там, где это является подходящим. Препараты для перорального введения также можно соответственно формулировать с обеспечением контролируемого высвобождения активного соединения.

Для ингаляционного введения (например, доставки в дыхательные пути) модулирующие сиртуин соединения можно легко вводить в виде аэрозольного спрея из находящихся под давлением упаковок или распылителей с использованием подходящего пропеллента, например дихлордифторметана, трихлорфторметана, дихлортетрафторметана, диоксида углерода или других подходящих газов. В случае находящегося под давлением аэрозоля разовую лекарственную форму можно дозировать, обеспечив клапан для доставки отмеренного количества. Капсулы и картриджи, например, из желатина для применения в ингаляторе или инсуффляторе можно формулировать в виде порошковой смеси соединения и подходящей порошковой основы, такой как лактоза или крахмал.

Модулирующие сиртуин соединения можно формулировать для парентерального введения с помощью инъекции, например болюс-инъекцией или продолжительной инфузией. Композиции для инъекционного введения могут находиться в виде разовой лекарственной формы, например ампул, или многодозовых контейнерах с добавлением консерванта. Композиции могут находиться в таких формах, как суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных растворителях, и могут содержать вспомогательные формулирующие средства, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие вещества. Альтернативно, активный ингредиент может находиться в виде порошка для последующего восстановления подходящим растворителем, например стерильной непирогенной водой, перед применением.

Также модулирующие сиртуин соединения можно формулировать в виде композиций для ректального введения, таких как суппозитории или удерживающие клизмы, например, содержащие обычные основы для суппозиториев, такие как какао-масло или другие глицериды.

В дополнение к композициям, описанным выше, модулирующие сиртуин соединения также можно формулировать в виде препаратов-депо. Такие длительно действующие композиции можно вводить имплантацией (например, подкожно или внутримышечно) или внутримышечной инъекцией. Так, например, модулирующие сиртуин соединения можно формулировать с подходящими полимерными или гидрофобными веществами (например, в виде эмульсии в подходящем масле) либо ионообменными смолами, или в виде производных с низкой растворимостью, например, в виде слаборастворимой соли. Препараты с контролируемым высвобождением также включают пластыри.

В некоторых вариантах осуществления соединения, описанные в данном документе, можно формулировать для доставки в центральную нервную систему (ЦНС) (имеется обзор Всд1су, РНагтасо1оду &

- 25 018922 ^етарениск, 104: 29-45, (2004)). Обычные подходы для доставки лекарственных препаратов в ЦНС включают нейрохирургические стратегии (например, посредством внутрицеребральной инъекции или интрацеребровентрикулярной инфузии); молекулярные манипуляции со средством (например, посредством получения химерного гибридного белка, который содержит транспортный пептид с аффинностью к молекулам эндотелиальной клеточной поверхности в комбинации со средством, которое само по себе не способно проходить через ВВВ) для обеспечения одного из эндогенных транспортных путей ВВВ; фармакологические стратегии, направленные на повышение растворимости средства в липидах (например, посредством конъюгации водорастворимых агентов с носителями из липидов или холестерина) и кратковременное нарушение целостности ВВВ посредством гиперосмотического нарушения (в результате инфузии раствора маннита в сонную артерию или применения биологически активного вещества, такого как пептид ангиотензин).

Липосомы являются еще одной системой для доставки лекарственных препаратов, которые легко вводить инъекционно. Следовательно, в способе по изобретению активные соединения также можно вводить в виде липосомальной системы для доставки. Липосомы хорошо известны в данной области. Липосомы можно получить из различных фосфолипидов, таких как холестерин, стеариламин фосфатидилхолинов. Липосомы, подходящие для способа по изобретению, включают все типы липосом, в том числе не ограничиваясь этим, небольшие униламеллярные везикулы, крупные униламеллярные везикулы и мультиламеллярные везикулы.

Другим путем получения композиции, в частности раствора модулятора сиртуина, такого как ресвератрол или его производное, является применение циклодекстрина. Под циклодекстрином понимается α-, β- или γ-циклодекстрин. Циклодекстрины подробно описаны Ρίΐΐιη е! а1., в патенте США № 4727064, который включен в данный документ для сведения. Циклодекстрины являются циклическими олигомерами глюкозы; данные соединения образуют комплексы включения с любым лекарственным препаратом, молекула которого может подойти для полостей молекулы циклодекстрина для липофильных соединений.

Быстро распадающиеся или растворяющиеся лекарственные формы являются пригодными для быстрого всасывания, в частности, при буккальном и сублингвальном введении фармацевтически активных соединений. Быстро плавящиеся лекарственные формы являются полезными для пациентов, таких как пожилые люди и дети, которым трудно проглатывать обычные твердые лекарственные формы, такие как капсулы и таблетки. Кроме того, быстро плавящиеся лекарственные формы имеют провоцирующие недостатки, связанные, например, с жевательными лекарственными формами, когда период времени, в течение которого активное вещество остается в ротовой полости пациента, играет важную роль в определении степени маскировки вкуса и степени, до которой пациент может возражать против проглатывания твердых частиц активного вещества.

Фармацевтические композиции (включая косметические препараты) могут содержать примерно от 0,00001 до 100 мас.%, например от 0,001 до 10 или от 0,1 до 5 мас.%, одного или более модулирующих сиртуин соединений, описанных в данном документе.

В одном варианте осуществления модулирующее сиртуин соединение, описанное в данном документе, включают в композицию для местного применения, содержащую носитель для местного применения, которая обычно подходит для местного применения лекарственных препаратов и содержащая любое вещество, известное в данной области. Местный носитель можно выбрать таким образом, чтобы обеспечить композицию в желаемой форме, например в виде мази, лосьона, крема, микроэмульсии, геля, масла, раствора и тому подобного, и он может состоять из веществ природного или синтетического происхождения. Предпочтительно, чтобы выбранный носитель не оказывал отрицательного влияния на активное вещество или другие компоненты лекарственной формы для местного применения. Примеры подходящих носителей для композиций, предназначенных для местного применения, включают воду, спирты и другие нетоксичные растворители, глицерин, минеральное масло, силикон, вазелин, ланолин, жирные кислоты, растительные масла, парабены, воски и т.п.

Композиции могут представлять собой мази, лосьоны, кремы, микроэмульсии и гели без цвета и запаха.

Модулирующие сиртуин соединения можно включить в мази, которые обычно являются полутвердыми препаратами, которые, как правило, готовят на основе из вазелина или других производных вазелина. Конкретной основой для мази, которую следует использовать, известную специалистам в данной области, является такая, которая будет обеспечивать оптимальную доставку лекарственного препарата и предпочтительно будет также обеспечивать другие желаемые характеристики, например смягчение и т.п. В отношении других носителей или растворителей основа для мази должна быть инертной, стабильной, не раздражающей или не вызывающей аллергических реакций.

Модулирующие сиртуин соединения можно включить в лосьоны, которые обычно являются препаратами для нанесения на поверхность кожи без растирания и, как правило, представляют собой жидкие или полужидкие препараты, в которых твердые частицы, включающие активное вещество, находятся в водной или спиртовой основе. Обычно лосьоны представляют суспензии твердых частиц и могут содержать жидкую масляную эмульсию типа масло-в-воде.

- 26 018922

Модулирующие сиртуин соединения можно формулировать в виде кремов, которые обычно представляют вязкие жидкие или полутвердые эмульсии типа масло-в-воде или вода-в-масле. Основы для кремов смываются водой и содержат масляную фазу, эмульгатор и водную фазу. Обычно масляная фаза состоит из вазелина и жирного спирта, такого как цетиловый или стеариловый спирт; как правило, водная фаза, но это необязательно, превосходит по объему масляную фазу и обычно состоит из увлажняющего вещества. Эмульгатор в кремовых композициях, как поясняется в Реттд1оп'5. см. выше, обычно представляет неионогенное, анионогенное, катионогенное или амфотерное поверхностно-активное вещество.

Модулирующие сиртуин соединения можно включить в состав микроэмульсий, которые обычно являются термодинамически стабильными, изотропно чистыми дисперсиями двух несмешивающихся жидкостей, таких как масло и вода, стабилизированных межфазной пленкой из молекул поверхностноактивного вещества (ЕпсускреШа о£ РЬагтасеийса1 Тее1то1оду (Яете Уогк: Μа^се1 Эеккег, 1992, уо1ите 9).

Модулирующие сиртуин соединения можно включить в гелевые композиции, обычно представляющие собой полутвердые системы, на основе суспензий из небольших неорганических частиц (двухфазные системы) или крупных органических молекул, равномерно распределенных в жидком носителе (однофазные гели). Несмотря на то что обычно в гелях используется водный жидкий носитель, также можно применять спирты и масла в качестве жидкого носителя.

В композиции также можно включать другие активные вещества, например другие противовоспалительные препараты, анальгетики, противомикробные средства, противогрибковые препараты, антибиотики, витамины, антиоксиданты и солнцезащитные вещества, обычно присутствующие в солнцезащитных композициях, включая, не ограничиваясь этим, антранилаты, бензофеноны (особенно бензофенон-3), производные камфоры, циннаматы (например, октилметоксициннамат), дибензоилметаны (например, бутилметоксидибензоилметан), п-аминобензойную кислоту (РАВА) и ее производные, и салицилаты (например, октилсалицилат).

В некоторых композициях для местного применения активное вещество находится в количестве в пределах примерно от 0,25 до 75 вес.% к массе композиции, предпочтительно в пределах примерно от 0,25 до 30 вес.% к массе композиции, более предпочтительно в пределах примерно 0,5 до 15 вес.% к массе композиции и наиболее предпочтительно в пределах примерно 1,0 до 10 вес.% к массе композиции.

Заболевания глаз можно лечить или предотвращать, например, с помощью системной, местной или внутриглазной инъекции моделирующего сиртуин соединения или введением устройства для замедленного высвобождения, которое высвобождает моделирующее сиртуин соединение. Моделирующее сиртуин соединение, которое повышает уровень и/или активность белка сиртуина, можно вводить в фармацевтически приемлемом носителе для внутриглазного введения таким образом, чтобы соединение находилось в контакте с поверхностью глаза в течение достаточного периода времени для проникновения соединения в роговицу и внутренние области глаза, например в переднюю камеру, заднюю камеру, стекловидное тело, слезную жидкость, роговицу, радужную оболочку/цилиарное тело, хрусталик, собственно сосудистую оболочку/сетчатку и склеру. Фармацевтически приемлемый носитель для внутриглазного введения может представлять, например, мазь, растительное масло или инкапсулирующее вещество. Альтернативно, соединения по изобретению можно инъецировать непосредственно в стекловидное тело или слезную жидкость. В дополнительной альтернативе соединения можно вводить системно, например, внутривенной инфузией или инъекцией для лечения глаз.

Модулирующие сиртуин соединения, описанные в данном документе, можно хранить в бескислородной среде. Например, ресвератрол или его аналог можно приготовить в воздухонепроницаемой капсуле для перорального введения, например, такой как Сар§иде1 производства РПхег, 1ис.

Клетки, например, обработанные модулирующим сиртуин соединением в условиях ех у1уо, можно вводить способами для введения трансплантата субъекту, которые можно сопровождать, например, введением иммунодепрессанта, например циклоспорина А. Общие принципы составления лекарственных препаратов можно найти в Се11 ТНегару: 81ет Се11 Τ^аη8р1аηΐаΐ^ои, Оеие ТНегару аиб Се11и1аг [тишгкИНегару, О. Μо^8ίуп & V. 8Непбаи еб§, СатЬпбде Ишуегкйу Рге§8, 1996 и Нета1оро1ейс 81ет Се11 ТНегару, Ε.Ό. Ва11, 1. Ь181ег & Р. Ьате, СНигсНШ Ыутдйоие, 2000.

Токсичность и терапевтическая эффективность модулирующих сиртуин соединений можно определить с использованием стандартных фармацевтических методов в клеточных культурах или в опытах на экспериментальных животных. ЬП₅₀ является дозой, вызывающей гибель 50% особей в популяции. ЕЭ₅₀ представляет дозу, вызывающую терапевтический эффект у 50% особей в популяции. Соотношение токсической и терапевтической доз (ΕΌ5₀/ΕΌ₅₀) является терапевтическим индексом. Предпочтительными являются модулирующие сиртуин соединения с высоким терапевтическим индексом. Несмотря на то что можно использовать модулирующие сиртуин соединения, которые проявляют токсические побочные эффекты, необходимо тщательно спланировать систему для их доставки, чтобы направить соединения к месту пораженной ткани в целях сведения до минимума потенциальных повреждающих эффектов для незараженных клеток и тем самым снижения возможности проявления побочных эффектов.

Данные, полученные в тестах на клеточных культурах и в опытах на животных, можно использо

- 27 018922 вать для составления пределов дозировок для применения у людей. Дозы таких соединений могут находиться в пределах концентраций в крови, которые включают значения ΕΏ₅₀ с проявлением низкой токсичности или без нее. Дозы могут варьировать в данных пределах в зависимости от используемой лекарственной формы и применяемого пути введения. Для любого соединения терапевтически эффективную дозу первоначально можно установить в тестах на клеточных культурах. Значение дозы можно предварительно определить с использованием моделей на животных с достижением пределов концентраций в плазме крови, которые включают 1С₅₀ (т.е. концентрации тестируемого соединения, которая обеспечивает половинное от максимального подавление симптомов) по данным тестов на клеточных культурах. Такую информацию можно использовать для более точного определения подходящих доз у людей. Концентрацию в плазме крови можно определить, например, высокоэффективной жидкостной хроматографией.

6. Наборы.

Соединение настоящего изобретения может применяться в наборах, например наборах для терапевтических применений или наборах для модуляции продолжительности жизни клеток либо модуляции апоптоза. Набор может содержать одно или более модулирующих сиртуин соединений, например, в заранее определенных дозах. Набор может необязательно содержать устройства для контактирования клеток с соединениями и инструкции по применению. Устройства включают шприцы, стенты и другие устройства для введения модулирующего сиртуин соединения субъекту (например, в кровеносные сосуды субъекта) или нанесения на кожу субъекту.

Набор может содержать в отдельных резервуарах а) модулятор сиртуина по данному изобретению и Ь) другое лекарственное средство, описанное в настоящем описании.

Для практики настоящих способов будут применяться, если не указано иначе, обычные способы клеточной биологии, культивирования клеток, молекулярной биологии, биологии трансгенных организмов, микробиологии, рекомбинантной ДНК и иммунологии, которые известны специалистам в данной области. Такие методы подробно описаны в литературе; см., например, Мо1еси1аг С1ошп§ А ЕаЬога1огу Мапиа1, 2^пб Еб., еб. Ьу 8атЬгоок, Егйзсй апб МашаИз (Со1б 8рпп§ НагЬог ЕаЬога1огу Ргезз: 1989); ΏΝΑ С1опт§, Vο1итез I апб II (Ώ.Ν. СИоуег еб., 1985); О11§опис1еойбе 8уп1йез1з (М.1. 6аИ еб., 1984); МиШз е! а1., патент США № 4683195; Шскчс Ас1б НуЬпб17а1юп (Β.Ώ. Натез & 8.1. Н1§§1пз ебз., 1984); Тгапзспрйоп апб ТгапзЫюп (Β.Ώ. Натез & 8.1. Н1§дтз ебз., 1984); СиНиге ОГ Атта1 Се11з (Κ..Ι. ЕгезЬпеу, А1ап К. Е1зз, 1пс., 1987); 1ттоЬ1117еб Се11з апб Еп/утез (ΙΚΕ Ргезз, 1986); Β. РегЬа1, А Ргасбса1 Ошбе То Мо1еси1аг С1опт§, (1984); монографии МеШобз т Еп/уто1о§у (Асабетю Ргезз, 1пс., Ν.Υ.); Оепе ТгапзГег Vесΐο^з Еог МаттаИап Се11з (ЕН. МШег апб М.Р. Са1оз ебз., 1987, Со1б 8ргт§ НагЬог ЕаЬога1огу); МеШобз т Еп/уто1о§у, Vο1з. 154 апб 155 (Ав е! а1., ебз); 1ттипосйет1са1 МеШобз т Се11 апб Мо1еси1аг Вю1о§у (Мауег апб Аа1кег, ебз., Асабетю Ргезз, Еопбоп, 1987); НапбЬоок О£Ехрег1теп1а1 1ттипо1оду, Vο1итез Ι-ΐν (О.М. Шеи апб С.С. В1аскме!1, ебз., 1986); Машри1а1т§ 1йе Моизе ЕтЬгуо (Со1б 8ргт§ НагЬог ЕаЬога1огу Ргезз, Со1б 8ргт§ НагЬог, Ν.Υ., 1986).

Пояснение примерами.

В целом изобретение описано, однако для более полного понимания приводятся следующие примеры, которые приведены только в целях иллюстрации некоторых аспектов и вариантов осуществления настоящего изобретения и никоим образом не предназначены для ограничения изобретения.

Пример 1. Получение №(2-хлор-5-метилпиридин-3-ил)-2-нитробензамида

К раствору 5-амино-6-хлор-3-пиколина (9,54 г, 66,9 ммоль) в пиридине (200 мл) добавляли по каплям 2-нитробензоилхлорид (13,65 г, 73,6 ммоль) при 0°С. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре (18 ч). Затем смесь темного цвета разбавляли водой (1500 мл) и добавляли насыщенный раствор бикарбоната натрия до рН, равного 8. Осадок собирали фильтрованием, промывали водой (3x30 мл) и высушивали с получением ^(2-хлор-5-метилпиридин-3-ил)-2-нитробензамида в виде бледного твердого вещества (17,70 г, выход 91%).

Получение 6-метил-2-(2-нитрофенил)тиазоло[5,4-Ь]пиридина

Смесь №(2-хлор-5-метилпиридин-3-ил)-2-нитробензамида (5,0 г, 17,1 ммоль) и Р₂8₅ (7,6 г, 34,2 ммоль) в пиридине (50 мл) и п-ксилоле (200 мл) перемешивали при 140°С (20 ч). Растворитель удаляли в вакууме. Остаток очищали перекристаллизацией из Е1ОН с получением 6-метил-2-(2

- 28 018922 нитрофенил)тиазоло[5,4-Ь]пиридина в виде желтого твердого вещества (3,5 г, выход 75%). Получение 6-(бромметил)-2-(2-нитрофенил)тиазоло[5,4-Ь]пиридина

6-Метил-2-(2-нитрофенил)тиазоло[5,4-Ь]пиридин (2,9 г, 10,7 ммоль), Ν-бромсукцинимид (ΝΒ8, 1,91 г, 10,7 ммоль), СС1₄ (200 мл) и пероксид бензоила (0,021 г) объединяли в трехгорлой колбе (500 мл) в атмосфере аргона. Полученную желтую смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником (2 ч). Добавляли дополнительное количество ΝΒ8 (1,91 г) и пероксид бензоила (0,021 г). После кипячения с обратным холодильником еще в течение 2 ч вновь вносили ΝΒ8 (0,95 г) и пероксида бензоила (0,021 г) и смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение 3 ч. Смеси давали охладиться до комнатной температуры и концентрировали в вакууме с получением сырого 6(бромметил)-2-(2-нитрофенил)тиазоло[5,4-Ь]пиридина (4,0 г), который непосредственно использовали на следующей стадии.

Получение трет-бутил-4-((2-(2-нитрофенил)тиазоло[5,4-Ь]пиридин-6-ил)метил)пиперазин-1карбоксилата

Раствор 6-(бромметил)-2-(2-нитрофенил)тиазоло[5,4-Ь]пиридина (4,0 г), Вос-пиперазина (1,99 г, 10,7 ммоль), триэтиламина (Εΐ₃Ν) (1,5 мл, 10,7 ммоль) и ацетонитрила (100 мл) перемешивали при 50°С (4 ч) и затем при комнатной температуре (60 ч). Данные ТСХ показывали, что реакция завершалась. Смесь концентрировали в вакууме и очищали хроматографией на силикагеле (смесь петролейный эфир:этилацетат:Е£^=100:10:1) с получением трет-бутил-4-((2-(2-нитрофенил)тиазоло[5,4-Ь]пиридин-6ил)метил)пиперазин-1-карбоксилата в виде желтого твердого вещества (3,6 г, выход 74% с двух стадий).

Получение трет-бутил-4-((2-(2-аминофенил)тиазоло[5,4-Ь]пиридин-6-ил)метил)пиперазин-1карбоксилата

Смесь трет-бутил-4-((2-(2-нитрофенил)тиазоло[5,4-Ь]пиридин-6-ил)метил)пиперазин-1карбоксилата (2,13 г, 4,7 ммоль), ХН₄С1 (2,00 г, 37 ммоль), железного порошка (1,31 г, 23,5 ммоль), Н₂О (40 мл) и метанола (160 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч в атмосфере Ν₂. Реакционную смесь фильтровали, фильтрат концентрировали в вакууме и очищали хроматографией на силикагеле (смесь петролейный эфир:этилацетат:Е1^Ы=800:200:1) с получением трет-бутил-4-((2-(2аминофенил)тиазоло[5,4-Ь]пиридин-6-ил)метил)пиперазин-1-карбоксилата в виде желтого твердого вещества (1,63 г, выход 81%).

Промежуточные продукты анилины для соединений 1-6, 11-43, 45, 47-61, 65, 67-68, 72, 74-75, 77-88, 90, 92-122, 127-130 получали аналогично тому, как описано выше, с использованием соответствующих аминов.

Получение Ν-(2-(6-(пиперазин-1 -илметил)тиазоло [5,4-Ь] пиридин-2-ил)фенил)-3 -(1 Н-тетразол-5ил)бензамида

трет-Бутил-4-((2-(2-аминофенил)тиазоло[5,4-Ь]пиридин-6-ил)метил)пиперазин-1-карбоксилат (85 мг, 0,2 ммоль) растворяли в 3 мл ДМФА вместе с 3-(1Н-тетразол-5-ил)бензойной кислотой (38 мг, 0,2 ммоль), НАТи (114 мг, 0,3 ммоль) и ΌΙΕΑ (35 мл, 0,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 50°С (18 ч). Затем смесь разбавляли ЕЮАс (15 мл) и промывали водой (3x3 мл). Органический слой высушивали (Να₂8Ο₄) и концентрировали в вакууме с получением сырого трет-бутил 4-((2-(2-(3-(1Нтетразол-5-ил)бензамидо)фенил)тиазоло[5,4-Ь]пиридин-6-ил)метил)пиперазин-1-карбоксилата. Данное вещество растворяли в 5 мл 25% ТРА в СН₂С1₂ и выдерживали при комнатной температуре (18 ч). Реакционную смесь концентрировали в вакууме и полученный остаток очищали обратно-фазовой ВЭЖХ с получением 12 мг №(2-(6-(пиперазин-1-илметил)тиазоло[5,4-Ь]пиридин-2-ил)фенил)-3-(1Н-тетразол-5ил)бензамида в виде светло-желтого твердого вещества. ¹Н ЯМР (300 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆) δ 9,5 (ушир. с, 2Н), 7,5-9,1 (м, 10Н), 4,5 (ушир. с, 1Н), 3,5-4,0 (м, 10Н). МС (Ε8Ι) высчитано для С₂₅Н₂₃^О8 (т/ζ): 497,17; найдено: 498,2 (М+1)⁺.

Все соединения, приведенные в данном патенте, получали аналогично тому, как описано выше, с

- 29 018922 использованием соответствующих кислот. Продукты, которые не содержали Вос-защитную группу, не подвергались стадии снятия защиты с помощью ΤΡΆ.

Пример 2. Получение 1-метил-4-фенил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты /

Ν ,Р

Вг он

К перемешиваемому раствору метил-4-бром-1-метил-1Н-пиррол-2-карбоксилата (2,5 г, 11,5 ммоль) в ДМФА (35 мл) в атмосфере аргона последовательно добавляли Рд(РРИ₃)₄ (0,66 г, 0,58 ммоль) и фенил бороновую кислоту (3,46 г, 28,4 ммоль). Реакционную смесь нагревали с обратным холодильником при 70°С и добавляли №₂СО₃ (11 г, 104 ммоль), растворенный в воде (30 мл). Реакционную смесь нагревали до 110°С (14 ч), охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой (250 мл) и экстрагировали диэтиловым эфиром (3x250 мл). Объединенные органические слои высушивали и концентрировали в вакууме. Остаток очищали хроматографией на силикагеле (элюировали смесью петролейный эфир:этилацетат=40:1) с получением метил-1-метил-4-фенил-1Н-пиррол-2-карбоксилата в виде белого кристаллического твердого вещества (0,257 г).

Затем сложный эфир (0,26 г, 1,2 ммоль) объединяли с Ь1ОН/Н₂О (0,15 г, 3,6 ммоль) в ТГФ (5 мл),

СН₃ОН (5 мл) и Н₂О (2,5 мл) и перемешивали при 40°С (4 ч). Добавляли воду (25 мл) и смесь промывали □СМ (15 мл). Затем рН водной фазы доводили до 5-7 с использованием НС1 (1н. раствор). Воду удаляли и остаток растворяли в МеОН (100 мл) и затем фильтровали. Фильтрат концентрировали в вакууме с получением 1-метил-4-фенил-1Н-пиррол-2-карбоновой кислоты в виде белого твердого вещества (0,419 г).

Ή-ЯМР (СЭС13, 400 МГц): δ 4,01 (с, 3Н), 7,16 (д, 1=1,6 Гц, 1Н), 7,23 (т, 1=7,2 Гц, 1Н), 7,38 (м, 3Н), 7,53 (дд, 1=7,2, 8,4 Гц, 2Н).

Пример 3. Получение 2-фенилизоникотиновой кислоты

Вг о он

О он

2-Бромизоникотиновую кислоту (2,02 г, 10 ммоль) растворяли в ДМФА (80 мл) в атмосфере аргона.

Добавляли Рд(РРй₃)₄ (0,6 г, 0,52 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Затем добавляли №₂СО₃ (водный 2н. раствор, 40 мл) с последующим добавлением фенилбороновой кислоты (1,67 г, 13,7 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 95°С (18 ч), охлаждали при комнатной температуре и фильтровали через слой целита. Добавляли воду (80 мл) и смесь подкисля-

дукт перекристаллизовали из 2-метоксиэтанола с получением 2-фенилизоникотиновой кислоты (1,2 г). 'Н-ЯМР (ВМ8О-Х, 400 МГц): δ 7,51 (м, 3Н), 7,78 (д, 1=4,8 Гц, 1Н), 8,13 (т, 1=1,6 Гц, 2Н), 8,29 (с, 1н), 8,85 (д, 1=4,8 Гц, 1Н), 13,73 (ушир.с, 1Н).

Пример 4. Биологическая активность.

Анализ на основе масс-спектрометрии использовали для определения активности модуляторов 8ΙΚΤ1. При анализе на основе масс-спектрометрии использовали пептид, содержащий 20 аминокислотных остатков: Ас-ЕЕ-К (биотин)-Θ^8Τ88Н8К(Ас)N1е8ΤΕΘ-К(5ΤΜΒ)-ΕΕ-NН₂ (8Ε^ ΙΌ КО:1), где К(Ас) представляет остаток ацетилированного лизина и Ме представляет норлейцин. Пептид метили флуорофором 5ΤΜΚ (волна возбуждения 540/волна эмиссии 580) в С-конце. Последовательность субстратапептида основана на р53 с несколькими модификациями. Кроме того, остаток метионина, который обычно присутствует в последовательности, заменяли на норлейцин, поскольку метионин может быть чувствительным к окислению во время синтеза и очистки.

Масс-спектрометрию проводили следующим образом: 0,5 мкМ субстрата-пептида и 120 мкМ ЗНАД⁺ инкубировали с 10 нМ 8ΙΚΤ1 в течение 25 мин при 25°С в реакционном буфере (50 мМ Трисацетат, рН 8, 137 мМ КаС1, 2,7 мМ КС1, 1 мМ МдС1₂, 5 мМ ΌΤΤ, 0,05% В8А). Тестируемые соединения можно добавлять в реакционную смесь, как описано выше. Ген 8ΙΚΤ1 клонировали в вектор, содержащий Т7-промотор, и трансформировали в ВБ21(ОЕ3). Через 25 мин инкубации с 8ΙΚΤ1 добавляли 10 мкл 10% муравьиной кислоты для остановки реакции. Реакционные смеси герметично закрывали и замораживали для последующего проведения масс-спектрометрического анализа. Определение массы субстрата-пептида позволило точно установить степень ацетилирования (т.е. исходного вещества) по сравнению с деацетилированным пептидом (продуктом).

Контроль ингибирования активности сиртуина проводили добавлением 1 мкл 500 мМ никотинамида в качестве негативного контроля в начале реакции (например, позволяет определить максимальное ингибирование сиртуина). Контроль активации сиртуина проводили с использованием 10 нМ белка сиртуина с 1 мкл ДМСО вместо соединения для определения степени деацетилирования субстрата в данной временной точке в линейных пределах теста. Данная временная точка является такой же, что использо

- 30 018922 вали для тестируемых соединений, и в линейных пределах, конечная точка представляет изменение скорости.

Для описанного выше теста белок 8ΙΚΤ1 экспрессировали и очищали следующим образом. Ген 8ΙΚΤ1 клонировали в вектор, содержащий Т7-промотор, и трансформировали в ΒΕ21(ΌΕ3). Белок экспрессировали индукцией 1 мМ ΙΡΤΟ в виде гибридного белка с Ν-концевой Ηΐδ-меткой при 18°С в течение ночи и собирали центрифугированием при 30000 хд. Клетки лизировали лизоцимом в буфере для лизиса (50 мМ трис-НС1, 2 мМ трис-[2-карбоксиэтил]фосфина (ТСЕР), 10 мкМ ΖηΟ1₂, 200 мМ ΝαΟΊ) и затем обрабатывали ультразвуком в течение 10 мин для полного лизиса. Белок очищали на колонке N1ΝΤΑ (АшегзЕага) и объединяли фракции, содержащие чистый белок, концентрировали и пропускали через колонку для гель-хроматографии (Сефадекс 8200 26/60 в виде шариков). Собирали пик, содержащий растворимый белок, и пропускали через ионообменную колонку (Μοηο^). Элюирование в градиенте (200-500 мМ ΝαΟΊ) давало чистый белок. Данный белок концентрировали и диализовали против буфера для диализа (20 мМ трис-НС1, 2 мМ ТСЕР) в течение ночи. Белок разделяли на аликвотные порции и замораживали при -80°С до последующего применения.

Модулирующие сиртуин соединения, которые активировали 8ΙΚΤ1, идентифицировали с использованием теста, описанного выше, и они представлены ниже в табл. 3. Значения ΕΟ_1?5 представляют концентрацию тестируемого соединения, которая приводит к 150% активации 8ΙΚΤ1. ΝΤ означает, что соединение не было тестировано с использованием указанного теста. ΝΑ означает, что соединение не проявило активность в указанном тесте. Также в табл. 3 указаны проценты максимальной кратной актива ции.

Таблица 3

- 31 018922

3	497	1 ΥΌ ν ч _/ ,οΛζ о 0	1620	246
4	508.1	/^Ν^_/==\ )=0 ΗΝ Охсс/Чэ	504	321
5	508	ΗΝ 0^ ιτνχίλΛ ΧΥΥ-ΧΥ	665	281
6	508	ΥΥ у=° ΗΝ ΎΥίΥ,ΥΥ	746	274
7	579	, ΗΝ ΗΝ X < Υ\ / \ ΥνΧΥνμα	65	581
8	507	ΗΝ ην^Υ ίΓΝ<Χ\ _/\ ^νΧ5Α5+_?	340	471

- 32 018922

- 33 018922

- 34 018922

26	510	X νΝ\	о> \=м Я	Α )	455	192
ΗΝ /3 Α -ΑΑ	= 0 _/
27	510			/=\		913	185
			Ν=/	“V?	= 0
				ΗΝ
			Ν.	/8 Α
			ΑΧ	ΑΑ	я
28	480.2			ζ=Ν		3590	162
				~ν?	=ο
				ΗΝ
			.Ν. ίΓ	/-3 Α
		Η’ΟγΝ. СН3	XX	ΑΑ
29	519.2			Ο /=<	ο	462	378
				Η //
			ΗΝ '—
		ΗΝ^Ί X		>=\
			-Д·?	V/
30	526		ΖΛ	яя		986	142
			Ν+=/	ν/
			Ό	ΗΝ	=ο
			ίΓ	г5
		Е\^щ	χυ	ΑΑ	_}
31	511		χ>			1000	168
			\=Ν	~\_Α	= 0
				ΗΝ
			/Νχ (Г я	/5 Α
		Е‘ \^Νχ	χχ	ΑΑ	_}
32	530	Нзс1>	Α		815	162
				г	=0
				ΗΝ
			Ν	Ж Α
		Ε'	Αχ	-ΑΑ
33	564.2		Α~\	/=\		91	533
				~\_Α
					=ο
		( СН3		ΗΝ
			/Νχ. ιΓ Ά	δ\ Λ
			Αχ	-Αν
34	565.2		Α~\	/=\		281	492
			Χ=Ν	V?
		СЦ		=0
		( СН3		ΗΝ
		Я	Ν.	/-2 Α
		Ο»χ	Α>	-ΑΑ	_/
35	565.2			Ζ=Ν		554	234
				~ν^>
		η			=0
		Г СНз		ΗΝ
		N'1	Ν	-5 Α
		Ох	αΟ	-ΑΧ	_}

- 35 018922

36	506.1	Η ΟΝ ньж	/А /Ν.	Α -8 'Ν	_) Α° ΗΝ νχ	Соединение не тестировано	Соединение не тестировано
37	507.1		Αν			507	422
			Χ=Ν	α	Α
				Αθ
					ΗΝ
			/Ν4 Г Αγ	-3	Α=\
		Η ΗΝ^	ЛД	'Ν	αα
38	509		<Γ V			548	292
			^=Ν	ν	)
					Α°
				ΗΝ
			Ν <		/\
			ΧΧ-,Γ	Λα
39	528	НзСТ>	<		400	241
					>=Ο
				ΗΝ
		сА	ί)	3	/А
			ЛД	N	Λα
40	497		ΜΝ			182	397
			ΑΧ	ν_	)
					Αθ
				ΗΝ
		οΆ		3
				Λα
41	585.2	Η3θχ^Νχ СН3		α	652	275
		”4	νχ	^5,	' Α° Ν
		4^Ν·	Α^	1 /	Μα
42	566.2	СН3	χ		Α	656	212
		\=Ν
		ν	,Ν. ίΓ	<5'	Α° Ν
		ΑΝ·	ΑΑ	I <	Μα
43	499		π^Ν			215	236
			ЧА	Α	)
					Αο
				ΗΝ
			.Ν.	-3	/\
		р|С1к	λΧ	У 'Ν	Α
44	496		Ο-			397	603
			<
					>Ο
				ΗΝ
		ηνΆ	ΓΝ<Υ	3	Α\
				Ν	“Λα
45	554.2		ρ^Ν			144	569
		СН3	Α	Α	Α
		χΟ			Α°
		Γ			ΗΝ
		ΑΑ	,Ν. (Γ Ί	-3	Α=\
		Α	Χα	/λ 'Ν	ΑΑ

- 36 018922

- 37 018922

56	565.2	Γ--Ζ. \Э-О 0 *	ла ,Ν АО	гл V Л Ж	458	389
57	583.2		жд	/=\	41	>500
				—\χ //
		СН3		ы-\
			Е	}=о
				ΗΝ
			N	^3 Ад
			-АА^	Ж
58	565.2		ЛА	/=\	884	370
				~Άζ
		СН3
				у=°
		г		ΗΝ
		ЖЖ	N	<-8 У=\
		кА	ла	Ж
59	565.2		кА	/=\	492	279
			N 7	жж
		СН3	\2=/
		А		Ас
				ΗΝ
		Ж	ЬК	гк Ал
		А	хи	ДЖ?
60	492.2		х~\.	ЛА	144	477
				А //
			\=У	Ν—<
				)=О
				ΗΝ
			N	-5 Ад
			АД	Ж
61	510.2		ла	ЛА	78	>500
				А //
			\г=/	Ν—<
			Е	ДО
				ΗΝ
			.Ν.	3 Ад
		Жж	АД	нЖ

- 38 018922

62	497	)=0 ΗΝ ηνΆ ιΓΎ5\ Α\	592	231
63	482	и ω ζ Я 0 X	859	303
64	481	ΛΑ Ο ' /=° ΗΝ ηνΆ ίτν\	260	>500
65	483	η Ά ΗΝ ОЛХНэ	ΝΑ	100
66	483	0 Ν Ν Λο ΗΝ ΑΛΥαΤα ο υΧΜΧ*	819	336

- 39 018922

67	477	О 2=0 ΗΝ СНз ίίΥνΗ	495	322
68	482	лл о 2=о ΗΝ^	593	295
69	481	О )=о ΗΝ н,С^	687	>500
70	488	О=\ з~О 2=° ΗΝ ην'^χ <№\ /А ΜΧΙΛΛν/	2590	298
71	496	Ν==/ 7=° ΗΝ <\==^	1460	304
72	509	ΗΝ^	Соединение не активно	100

- 40 018922

73	508		о о	А ΗΝ У=\ γΗ?	2970	183
74	527	Ζ°		|| ''	421	236
			ж/	II
				γ=°
				ΗΝ
		Ο )	ι Ί	δ Лл
75	515			Π	Соединение	Соединение
				не	не
				γ	тестировано	тестировав
				Ο
				^/=°
				ΗΝ
		οΎ	< Ά	-5 \=Τ\
		к/ихх	О	-ЛА?
76	498		’?	/=\	2790	285
			V/
				>0
				ΗΝ
		ηνΎ	.Ν	Ж >=\
		клж	лм	Ж
ΊΊ	499			/=\	3920	204
			Ύ	Μ
			н	>0
				ΗΝ
			ί V	'δ Μ\
		к/Νχ/	М-	./л_?
78	542.1			Н3С	565	297
				οΑϊ
				ΗΝ δ-γγ.
				>=\ I ,1
		им	Ύν
79	528.1			. ΗΛ	1220	240
				5¾
			ΗΝ ж ж_/
80	529.1			н3с	Соединение	100
				ж	не активно
		ΗΝ З ЖЖ оХ <Νγ\ >л О
			γγ
81	556.2			Ж	Соединение	131
				Ο	не
				γ	активно
				Ο
				Н3С \=ο
		сн3		ΗΝ
		ΗνΛ	Ν	Λ\
		н3сЛ-м

- 41 018922

82	528.1	ΝΧ V	878	224
		Η Ο'Ν~ ΗΝ^	N^5 НзС^о ΗΝ .Ν 5 ΛΑΛΟ
83	501.1		N^0 У	Соединение не активно	100
		НзС^СН н-Α	Α НзсУ^о ΗΝ >Ν з 0.0/
84	501		Ν0Ν<^ ΗΝ ,Ν δ V, Ач^АХ	4270	166
85	586.2	0-0 Υ ί _ 0	СНз Ύ Ν .Ν 5 4= /000	16700	182
86	565.2	СН3 0	Яо ΗΝ 1ΛΝ^ν/	Соединение не активно	137
87	566.2	сн3 0	ΑΛ /Ν=Λ (М/ )=° ΗΝ /Ν, 3 М.0Л0	955	166
88	567.2	СН3	χΛ-γ%-0Η3 χ=ο ΗΝ <Ν<χ2 Уа А0А0	14	272
89	484		Г4)	235	239
		ηνΆ	х>снз /=° ΗΝ 5 Уа υχχΑ/

- 42 018922

90	495.2	ГА о )=° ΗΝ	190	221
91	487.3	А У ΗΝ ηνανΑΑ / Л	4410	333
92	441	А Чо ΗΝ СНз	2810	163
93	488.1	т V ΗΝ	510	236
94	463	ГА-· О / ° ΗΝ	150	182
95	466.1	ГА О /=Ό ΗΝ	160	252
96	481	ГА у=о ΗΝ	1060	162
97	481	АЭ ΗΝ ,Ν.,δ V. АГкАхАХ	3020	186

- 43 018922

- 44 018922

- 45 018922

- 46 018922

- 47 018922

131		СН3 А αν.	ЛА /Ν. У	СН3 Ν=Λ Ά До ΗΝ ,-з у=\ ДуД	106	500
132			ЛА	7СНз	215	500
				д Д
				Ν—\
				До
				ΗΝ
			Д.	-8 Ул.
		А-^Л	дд	-дАД
133			ЛА	/=\	90	500
		СН3
		Д	С1 /=о
		(		ΗΝ
		У	N	^5 Э=л
		Μυ	эи	ЛАД
134			ЛА	/=\	69	500
		СН3
		Л		До
		(		ΗΝ
		АЛ	/Ν. (Г А	^5 У=\
		Αν.	ДА	-УД
135			ЛА	/СН3 /Ν \	759	274
				А _Д
				Ν—\
				До
				ΗΝ
				3 У=\
		Αν^	дД	ЛАД
136		Е3С	ЛА	~\\ //	448	461
		СН3	\==/	Ν—\
		£		До
		(		ΗΝ
			N	^3 У\
		Αν.	ДД	'νΑ/
137		С1- СН3	ЛА	~А	214	448
		Д		До
				ΗΝ
		АЛ	N	δ А\
		Αν.	Ду	ДАД
138			ЛА		88	497
		СН3	дА
		/О	С1	До
				ΗΝ
		У	N	^з у=\
		Αν.	ДД	^ад
139			ЛА	/=\	230	457
		СНз		у
		г°	СЕз 7=°
		\		ΗΝ
		АЛ	.Ν	^5 У\
		Αν.	эи	АДД

- 48 018922

- 49 018922

150		ГЛ	67	267
	-Ау-СНз
				/ 0
				ΗΝ
		О N	,Ν. О	-3 Х=\ -ГЁЁ
151			О-	-А’м-еиз	591	170
				у=о
				ΗΝ
			,Ν. Г X	5 4=4
			1Д	ддэ
152			ч		321	>500
				Хл I ΝΗ
		СН3
		/°		4=°
		(		ΗΝ
		д-х	4	Г8\ ^Х Ρχντ
153				Ί	829	226
			х^	1 Х^Ч
				Т ΝΗ
				2=0
				ΗΝ
			Га	5 кх
			ДД
154			С	1	428	277
				1 о
				/=0
				ΗΝ
			Г V	-5 4=4
		Χ-Ν^	ДД	кУА
155					141	364
			к
		СН3		N=7
				/=°
		(		ΗΝ
		X	ιΓ 4	г5 кх
		Мх	дд
156			с	|1	674	443
			Ч/	X
				ΝΧ
				/=°
				ΗΝ
		?х	ДД	δ -ДА7

Эквивалентные варианты.

Настоящее изобретение среди прочего относится к активирующим сиртуин соединениям и способам их применения. Несмотря на то что обсуждались конкретные варианты осуществления настоящего изобретения, приведенное выше описание является иллюстративным и не ограничивающим. Специалистам в данной области очевидны многие вариации изобретения в свете настоящего описания. Полный объем изобретения следует определить при обращении к формуле изобретения наряду с полным объемом эквивалентных вариантов и описанием, вместе с вариациями.

Включение источников.

Все публикации и патенты, упомянутые в данном документе, включая пункты, перечисленные ниже, в полном объеме включены в данный документ для сведения, как если бы каждая отдельная публикация или патент специфически и индивидуально были включены для сведения. В случае конфликта настоящее изобретение, включая любые определения в данном документе, будет обеспечивать контролем.

Также включены для сведения в полном объеме полинуклеотидные и полипептидные последова

- 50 018922 тельности, которые имеют номер, совпадающий с номером в базе данных, которая имеется в Институте исследований генома (ТЮК) (\\л\л\\11цг.огц) и/или Национальном центре информации по биотехнологии ^СВЙ (\\\.псЬ1.п1т.п1й.§оу).

Также включены для сведения следующие публикации: РСТ ШО 2005/002672; 2005/002555 и 2004/016726.

Claims (13)

1. Соединение структурной формулы (II) или его соль, в которой К³ представляет 5-6-членный насыщенный азотсодержащий гетероцикл, возможно содержащий второй гетероатом, выбранный из азота или кислорода, необязательно замещенный одним или более заместителями, выбранными из С_гС₄-алкила, амино, галогена, метокси и метоксиС1-С₄-алкила.

2. Соединение по п.1, в котором К³ выбран из пиперазин-1-ила, 4-(метоксиэтил)пиперазин-1-ила, 3,5-диметилпиперазин-1-ила, морфолин-4-ила, пиперидин-1-ила, 4-аминопиперидин-1-ила, пирролидин1-ила и 3-фторпирролидин-1-ила.

3. Соединение по п.2, в котором К³ выбран из 4-(метоксиэтил)пиперазин-1-ила, морфолин-4-ила, пиперидин-1-ила и 4-аминопиперидин-1-ила.

4. Соединение по п.1, где соединение представлено структурной формулой

5. Соединение по п.1, где соединение представлено структурной формулой

6. Соединение по п.1, где соединение представлено структурной формулой

7. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания или нарушения, ассоциированного с белком сиртуином, содержащая соединение по одному из пп.1-6 и фармацевтически приемлемый носитель.

8. Способ лечения субъекта, страдающего или предрасположенного к резистентности к инсулину, метаболическому синдрому, диабету или его осложнениям, повышению чувствительности к инсулину, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, композиции по п.7.

9. Способ по п.8, в котором указанное соединение повышает по меньшей мере одно из уровня или активности белка сиртуина.

10. Способ по п.9, в котором указанное соединение повышает деацетилазную активность белка сиртуина.

11. Способ по п.9, в котором белок сиртуин является белком млекопитающих.

12. Способ по п.9, в котором белок сиртуин является человеческим ЗЮТТ

13. Способ по п.9, в котором соединение, по существу, не обладает одной или более из следующих активностей: ингибирование РВ-киназы, ингибирование альдоредуктазы, ингибирование тирозинкиназы, трансактивирование ЕСТК-тирозинкиназы, расширение коронарных сосудов или спазмолитическая