EA016911B1

EA016911B1 - Полиглутаминовые кислоты, функционализированные катионными и гидрофобными группами, и их применения, в частности терапевтические применения

Info

Publication number: EA016911B1
Application number: EA200901481A
Authority: EA
Inventors: Йу-Пинг Шан; Оливье Брейн; Сесиль Бонне Гонне
Original assignee: Фламель Текноложи
Priority date: 2007-05-03
Filing date: 2008-05-05
Publication date: 2012-08-30
Also published as: CN101663346B; CN101663346A; JP2010529214A; AU2008248604A1; BRPI0809208A2; FR2915748B1; US20090012028A1; IL201017A0; US8716217B2; EA200901481A1; AU2008248604B2; CA2683741A1; KR20100016280A; MX2009011813A; WO2008135563A1; EP2152782A1; IL201017A; ZA200906941B; NZ580906A; FR2915748A1

Abstract

Изобретение относится к новым биодеградируемым материалам на основе модифицированных полиаминокислот, используемым, в частности, для векторизации активного начала. Изобретение также направлено на новые композиции, включающие фармацевтические, косметические, диетические пищевые продукты или препараты для защиты растений, основанные на этих полиаминокислотах. Целью изобретения является предоставление нового полимерного материала, который может быть использован в качестве исходного продукта для векторизации активного начала и который удовлетворяет всем требованиям: биосовместимости, биодеградируемости, способности легко ассоциировать или растворять многочисленные активные начала и высвобождать эти активные начала in vivo. Эта цель достигается настоящим изобретением, которое связано с новыми полиглутаматами, модифицированными катионными группами, которые, если они могут быть депротонированы, имеют pK, равный или больший 7, и гидрофобными группами, содержащими от 8 до 30 атомов углерода. Такие полиглутаматы, модифицированные катионными группами, легко и рентабельно превращают в частицы для векторизации активных начал, причём эти частицы сами способны образовывать стабильные водные коллоидные суспензии. Такие модифицированные полиглутаматы имеют то преимущество, что они являются менее вязкими, чем другие аналогичные полимеры, в то же время сохраняя способность ассоциировать с белками, например с инсулином. Некоторые из них растворимы в воде при кислых pH и становятся нерастворимыми при физиологическом pH (7,4) и поэтому должны осаждаться при подкожном введении, в месте инъекции.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новым биодеградируемым материалам, содержащим сополиаминокислоты, применяемым при векторизации активного начала (АН).

Данное изобретение также направлено на получение новых фармацевтических, косметических композиций, композиций диетических пищевых продуктов или препаратов для защиты растений, содержащих эти модифицированные полиаминокислоты. Эти композиции могут относиться к типу, который делает возможным векторизацию АН, и предпочтительно доступны в форме эмульсий, мицелл, наночастиц, микрочастиц, гелей, имплантатов или плёнок.

Подходящие АН являются преимущественно биологически активными соединениями, которые могут быть введены в организм животного или человека при использовании перорального, парентерального, назального, глазного, подкожного, внутривенного, внутримышечного, внутрикожного, внутрибрюшинного, внутримозгового или трансбуккального способа и т.п.

АН, к которым изобретение относится в наибольшей степени, но без ограничений, представляют собой белки, гликопротеины, пептиды, полисахариды, липополисахариды, олиго- или полинуклеотиды и органические молекулы. Однако рассматриваются также косметические продукты или препараты для защиты растений, такие как гербициды, инсектициды, фунгициды и т. п.

Уровень техники

В области векторизации АН, в особенности медицинские АН, необходимо защитить их от разложения (гидролиза, ферментативного расщепления и т.п.), и/или контролировать скорость их выведения для поддержания терапевтического уровня в течение определённого периода времени, и/или транспортировать их (при их одновременной защите) к месту воздействия.

С этой целью изучено несколько типов полимеров и некоторые из них являются даже коммерчески доступными. Примеры таких полимеров включают в себя полимолочную кислоту, полимолочную/полигликолевую кислоту, полиоксиэтилен/полиоксипропилен, полиаминокислоты или полимеры полисахаридов. Эти полимеры используют в качестве исходных продуктов, например, для получения массивных имплантатов, микрочастиц, наночастиц, везикул, мицелл или гелей. Не говоря о том, что эти полимеры используют для получения таких систем, они также должны быть биосовместимыми, нетоксичными, неиммуногенными и рентабельными, и они должны быть способными легко выводиться из организма, т.е. должны быть биодеградируемыми. Что касается последнего аспекта, ещё важнее, чтобы биодеградация в организме приводила к образованию нетоксичных продуктов.

Ниже для иллюстрации известного уровня техники, относящегося к полимерам, используемым в качестве исходных продуктов для получения систем векторизации АН, упоминаются различные патенты, заявки на патент и научные статьи.

В патенте И8-В-4652441 описаны полилактидные микрокапсулы, инкапсулирующие гормон ЬН-КН. Эти микрокапсулы получают приготовлением эмульсии вода-масло-вода, содержащей водный внутренний слой, содержащий гормон, вещество (желатину), которое фиксирует последний, масляный полилактидный слой и водный внутренний слой (поливиниловый спирт). Выведение АН происходит за время более двух недель после подкожной инъекции.

В патенте И8-В-6153193 описаны композиции на основе амфифильных мицелл поли(оксиэтилен)/поли(оксипропилена) для векторизации противораковых агентов, например доксорубицина.

ΛΚίνοδΙιί с1 а1. (1. Соп1го11сб Кс1са5с. 1998, 54, 313-320) описывает пуллуланы, которым придают гидрофобность прививкой холестерина и которые образуют наночастицы в воде. Такие наночастицы, способные обратимо образовывать комплекс с инсулином, образуют стабильные коллоидные суспензии.

В патенте И8-В-4351337 описаны амфифильные сополиаминокислоты на основе лейцина и глутамата, которые могут быть использованы для получения имплантатов или микрочастиц для контролируемого выведения активных начал. Выведение активных начал может происходить в течение очень длительного периода времени в зависимости от скорости разложения полимера.

В патенте И8-В-4888398 описаны полимеры на основе полиглутамата или полиаспартата и необязательно полилейцина с алкилоксикарбонилметильными группами, расположенными статистически вдоль цепи полиаминокислотной цепи. Такие полиаминокислоты, модифицированные по боковым группам, например метоксикарбонилметильными группами, могут быть использованы в форме биодеградируемых имплантатов, включающих АН для замедленного высвобождения.

В патенте И8-В-5904936 описаны наночастицы, полученные из блок-сополимера полилейцин/полиглутамат, способные образовывать стабильные коллоидные суспензии и способные спонтанно присоединяться к биологически активным белкам, не вызывая их денатурации. Далее активные белки контролируемо выводятся ίη νίνο в течение длительного времени.

В патенте И8-В-5449513 описаны амфифильные блок-сополимеры, содержащие блок полиоксиэтилена и блок полиаминокислоты, например полиф-бензил-Ь-аспартат). Такие полиоксиэтилен/полибензиласпартатные сополимеры образуют мицеллы, способные инкапсулировать гидрофобные активные молекулы, например доксорубицин или индометацин.

- 1 016911

В заявке на патент νθ-Α-99/61512 описаны полилизины и полиорнитины с гидрофобной группой (пальмитиновая кислота, связанная с полилизином или -орнитином) и гидрофильной группой (полиоксиэтилен). Такие полимеры, например полилизин, модифицированный цепями полиоксиэтилена и пальмитоила, образуют в присутствии холестерина везикулы, способные инкапсулировать доксорубицин или ДНК. Эти полимеры на основе полилизинов являются катионными в физиологических условиях.

В заявке на патент ЕР-А-963758 описаны полиаминокислоты, функционализированные катионными группами. Такие полимеры способны образовывать комплексы с нуклеиновой кислотой и могут быть использованы в генной терапии. Катионные группы представляют собой аминопроизводные, не являющиеся производными аминокислот, и полиаминокислоты не содержат гидрофобных групп.

Уапд с1 а1. (ВюГесйпо1оду ЬеГГетк, 2005, 27, 977-982) описали полиаспартаты, функционализированные линейными алкильными группами и олигоаргининами. Такие полимеры образуют в воде наночастицы размером от 8 до 40 нм и способны интернализироваться клетками. Считают, что такие частицы могут быть использованы для векторизации гидрофобных молекул.

В этой же самой области заявитель описал в нескольких заявках на патент полимеры на основе полиглутамата (анионные полимеры) с близкими свойствами.

В заявке на патент νθ-Α-03/104303 описаны анионные полиаминокислоты, функционализированные α-токоферолом.

В заявке на патент ν0-Α-2004/013206 описаны анионные полиаминокислоты, содержащие гидрофобные группы, где такие группы связаны с полимерной цепью связью, содержащей две амидные функциональные группы, и в особенности с помощью лизина или орнитина в качестве спейсера.

В заявке на патент ν0-Α-2004/060968 описаны полиаминокислоты, функционализированные по меньшей мере одной олигоаминогруппой, входящей в состав лейцина, изолейцина, валина и/или фенилаланина.

В статье XV.С. 8йеп, Ааб-кепкйтуе бЕкошабоп ЬеЕуееп ро1у(1укше) апб ЫкГатте-тобШеб ро1у(д1иГатаГе) ак а тобе1 Гог бгид-ге1еакшд Ггот сатегк ίη епбокотек, ВюсЫт. Вюрйук. АсГа, 1034 (1), 122-124, 1990 описан полиглутамат, на 40% функционализированный гистамином. Однако в этом документе не описаны какие-либо гидрофобизованные производные исходного полиглутамата. Кроме того, описанный полимер осаждается при рН 4-5 и растворим при физиологических значениях рН. Единственное возможное применение может быть связано с образованием комплексов с рН-чувствительным полилизином. Такие комплексы образуются благодаря электростатическим взаимодействиям. В частности, при физиологических рН образуется комплекс полиглутамат-гистамин/полилизин, в то время как он распадается при рН 4-5, значения которых совпадают с рН внутри эндосомы.

Таким образом, даже несмотря на то что много технических растворов было разработано и описано в качестве прототипов для векторизации медицинских активных начал, трудно удовлетворить всем требованиям и необходимо усовершенствование. Более конкретно, настоящее изобретение относится к биодеградируемым полиаминокислотам, которые можно превратить в коллоидные нано- или микрочастицы для векторизации, которые могут легко подвергаться ассоциации с активными началами.

Раскрытие изобретения

В данном контексте одной из существенных целей настоящего изобретения является обеспечение новых амфифильных сополиглутаматов, содержащих как положительные заряды при нейтральных рН или рН, близких к нейтральности, так и гидрофобных групп в качестве подвешенных (или висящих) цепей.

Такие полимеры являются усовершенствованием относительно тех полимеров, которые описаны в патентах или заявках на патент, упомянутых выше, в терминах векторизации активного начала, например, терапевтического пептида или белка, ДНК, РНК или малой молекулы.

Другой целью настоящего изобретения является то, чтобы такие полимеры могли быть использованы при векторизации активных начал (АН) и оптимально удовлетворяли всем техническим условиям требований, а именно, в частности:

a) способность легко и рентабельно образовывать стабильные водные коллоидные суспензии, легко ассоциировать с многочисленными активными началами и выводить эти активные начала ίη у1уо;

b) биосовместимость;

c) биодеградируемость;

б) гидролитическая устойчивость.

Эта цель, наряду с другими, достигается в настоящем изобретении, которое относится к полиаминокислотам или их фармацевтически приемлемым солям, содержащим остатки глутаминовой кислоты, где каждый из нескольких остатков глутаминовой кислоты несёт подвешенную катионную группу, которая, если она может быть депротонирована, имеет рК_а, равный или больший 7, причём указанные катионные группы идентичны или отличаются друг от друга, и где каждый из других остатков глутаминовой кислоты несёт подвешенную гидрофобную группу ГГ (ОН), причём указанные гидрофобные группы (ГГ) идентичны или отличаются друг от друга.

- 2 016911

В следующем далее описании, за исключением особо указанных случаев, термин катионная группа обычно обозначает катионные группы, которые не могут быть депротонированы, и катионные группы, которые могут быть депротонированы и которые имеют рКа, равный или больший 7.

Подразумевается, что термин фармацевтически приемлемые соли полиаминокислоты согласно настоящему изобретению охватывает все полиаминокислоты с противоионами, связанными с ионизированными функциональными группами полимеров.

Подразумевается, что в следующем далее описании термин малая молекула означает молекулу молекулярной массы меньше 1 кДа.

За исключением особо указанных случаев алкильные группы содержат от 1 до 10 атомов углерода.

Таким образом, согласно настоящему изобретению каждый полиглутамат функционализирован множеством подвешенных катионных групп, которые являются идентичными или отличаются друг от друга и подвешенных гидрофобных групп (ГГ), которые являются идентичными или отличаются друг от друга.

В настоящем изобретении термин многообразие означает, что полиглутамат функционализирован по меньшей мере 1% катионных групп (молярный % по отношению к остаткам глутаминовой кислоты) и до 99%;

в среднем по меньшей мере двумя подвешенными гидрофобными группами (ГГ) на молекулу. Возможно, согласно настоящему изобретению полиглутаминовая кислота должна содержать помимо подвешенных гидрофобных групп (ГГ) гидрофобные группы (ГГ), которые присоединены по меньшей мере к одному концу цепей сополимера.

В настоящем изобретении выражение носить означает, что присоединённая группа является подвешенной, т. е. указанная группа является боковой группой по отношению к остаткам глутаминовой кислоты и является заместителем при функциональной карбонильной группе в γ-положении остатка глутаминовой кислоты, который несёт её.

Полиглутаматы настоящего изобретения также несут катионные группы. Такие группы предпочтительно присоединены к остаткам глутаминовой кислоты амидной или сложноэфирной связью.

Согласно альтернативному варианту осуществления настоящего изобретения каждый из других остатков глутаминовой кислоты может нести подвешенную неионизируемую группу, отличающуюся от гидрофобных групп (ГГ), причём указанные неионизируемые группы могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга. Такой подвешенной неионизируемой группой может быть, например, гидроксиэтиламиногруппа.

Согласно другому альтернативному варианту осуществления настоящего изобретения каждый из других остатков глутаминовой кислоты может нести также в γ-положении по отношению к карбонилу группу, которая является неионизируемой при нейтральном рН, отличную от гидрофобных групп (ГГ), причём указанные группы, неионизируемые при нейтральном рН, являются одинаковыми или отличаться друг от друга. Например, такая группа может иметь следующую формулу:

Н¹° в которой -В¹⁰ представляет собой -Н, -СО₂Н, сложный алкиловый эфир (предпочтительно -СООМе или -СООЕ1), -СН₂ОН, -С(=О)-ПН₂, -С( О)-\Н-СН_; или -С(=О)-Ы(СНз)₂.

Полиглутаматы, одновременно несущие катионные группы и гидрофобные группы и необязательно неионогенные группы (неионизируемые или неионизируемые при нейтральном рН), могут также содержать отрицательные заряды (при нейтральном рН), возникающие при ионизации подвешенных групп полиглутаминовой кислоты, которые не были функционализированы.

Заявитель разработал синтез нового семейства полимеров на основе полиглутамата, несущего катионные группы и функционализированного множеством гидрофобных групп, которые образуют стабильные коллоидные системы. Возможность приводить в соответствие заполнение полимера со степенью функционализации может оказаться очень эффективной для снижения вязкости полимера, для более легкой инъекции или более легкого применения на стадии разработки композиции;

обеспечения хорошей ассоциации с нейтральными, анионными или катионными началами.

Таким образом, полимеры настоящего изобретения могут быть анионными, катионными или нейтральными и способными ассоциировать с заряженными или незаряженными активными началами;

катионными при умеренно кислых рН (рН 4-5) и нейтральными или слабо заряженными при нейтральном рН. В этом случае такая зависимость от рН позволяет им после ассоциации с активным началом в растворе при рН 4-5 образовывать осадок в физиологической среде.

Кроме того, полимеры настоящего изобретения могут легко расщепляться в присутствии ферментов, что приводит к образованию нетоксичных катаболитов/метаболитов (аминокислот).

В рамках толкования изобретения и на протяжении настоящего документа термин ассоциация или ассоциировать, использованный для характеристики взаимоотношения между одним или более активных начал и модифицированными полиглутаматами, означает, что активное начало или активные начала связано(ы) или присоединено к полиглутамату(ам), в частности, за счёт гидрофобных взаимодействий и/или инкапсулировано полиглутаматом(ми).

Преимущественно полиаминокислоты согласно настоящему изобретению представляют собой гомополимеры Ь-глутамата или Ь-глутаминовой кислоты; предпочтительно в пределах полиаминокислоты эти остатки связаны по их карбоксильным группам в альфа-положении.

Катионные группы, которые могут быть использованы для функционализации звеньев глутамата, являются одинаковыми или отличаются друг от друга и имеют следующую общую формулу:

в которой X представляет собой О, ΝΗ;

Υ представляет собой независимо Η или СН₃;

Ζ^- представляет собой хлорид, сульфат, фосфат или ацетат;

Ь представляет собой линейные (С₂-С₆)алкилены, необязательно замещённые функциональной карбоксильной группой или их производные.

Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения катионные группы получаются из соединений, выбранных из группы, состоящей из лизина, орнитина, аргинина и их производных, холина, этаноламина (соединённых атомом кислорода), путресцина и агматина.

Производные лизина, орнитина, аргинина могут, например, представлять собой этиловые и метиловые эфиры, амиды и метилированные амиды.

Таким образом, катионные группы, которые могут быть использованы в настоящем изобретении, могут быть выбраны из следующей группы:

н н —N—С—СОКа (|н₂}₄

ΝΗ₃*,Ζ' н н —Ν—с—СОРа (сн₂)₃

ΝΗ

А ₊

ΗΝ ΝΗ₃ ,Ζ

Н Н —N—С—СОНа (сн₂)₃

ΝΗ₃ ^Ψ,Ζ· где На представляет собой гидрокси-, алкокси- или алкиламиногруппу, предпочтительно -ОМе, -ОЕ1, -ΝΗ₂, -Ν№Η₃ или -Ν(ί.’Η₃)₂;

Ζ^- представляет собой хлорид, сульфат, фосфат или ацетат, предпочтительно хлорид, или

-νη-((:η₂)₄-νη/,ζ·.

-ΝΗ-(σΗ2)4-ΝΗ-€(=ΝΗ)-ΝΗ₃ ⁺,Ζ·,

-О-(СН₂)₂-КЛСНз):,.2;

-ο-ΐΓΊΤτ-Νΐ-ί-Υ. ζ\ где Ζ^- представляет собой хлорид, сульфат, фосфат или ацетат, предпочтительно хлорид.

- 4 016911

Например, катионные группы, которые могут быть использованы в настоящем изобретении, могут иметь следующую формулу (где название исходных веществ указано под каждой группой):

амид амид лизина аргинина

или амидорнитина в которой Ка представляет собой гидрокси-, алкокси- или алкиламиногруппу, предпочтительно -ОМе, -ОЕ1, -ΝΗ₂, -\НСН_; или -Ν(ΟΗ₃)₂ группу.

Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения полиаминокислоты настоящего изобретения содержат по меньшей мере три гидрофобные группы (ГГ) на полимерную цепь.

Преимущественно по меньшей мере одна из гидрофобных групп ГГ входит в состав гидрофобного привитого фрагмента, содержащего по меньшей мере одну спейсерную связывающую группу (или единицу) (спейсер), при помощи которой гидрофобная группа ГГ присоединена к цепи полиглутамата (например, основной цепи полиглутамата). Такая связывающая группа может содержать по меньшей мере одну обычную ковалентную связь, и/или по меньшей мере одну амидную связь, и/или по меньшей мере одну сложноэфирную связь. Например, связывающая группа может относиться к группе, состоящей, в частности, из аминокислотных остатков, отличающихся от мономерного звена исходного полиглутамата, производных аминоспирта, производных полиамина (например, диамина), производных полиола (например, диола) и производных оксикислоты.

Прививка ГГ к цепи полиглутамата может включать в себя использование предшественников ГГ, которые могут быть присоединены к цепи полиглутамата.

Предшественники ГГ могут быть, на практике и без ограничений, выбраны из группы, состоящей из спиртов и аминов, причём такие соединения могут быть легко функционализированы специалистами в данной области техники. Прививка ГГ раскрыта более подробно в описании процесса получения модифицированных полиаминокислот согласно настоящему изобретению.

Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения гидрофобная группа ГГ гидрофобного привитого фрагмента содержит от 8 до 30 атомов углерода.

Такие гидрофобные группы ГГ преимущественно и тщательно выбраны из группы, состоящей из линейных или разветвлённых С₈-С₃₀-алкилов, которые необязательно могут содержать по меньшей мере одну ненасыщенную группу и/или по меньшей мере один гетероатом;

С8-С30-алкиларилов или арилалкилов, которые необязательно могут содержать по меньшей мере одну ненасыщенную группу и/или по меньшей мере один гетероатом; и

С8-С30-(поли)циклических соединений, которые необязательно могут содержать по меньшей мере одну ненасыщенную группу и/или по меньшей мере один гетероатом.

Связывающие группы, которые образуют вместе с ГГ гидрофобные привитые фрагменты, могут представлять собой ди-, три- или тетравалентные связывающие группы (действительно, даже пентавалентные и более). В случае двухвалентной связывающей группы гидрофобная связывающая группа содержит одну ГГ группу, в то время как трёхвалентная связывающая группа придаёт двойственную природу гидрофобной связывающей группе, другими словами, привитой фрагмент ведёт себя как ГГ, состоящий из двух ветвей. Примеры трёхвалентных связывающих групп включают в себя, но не ограничиваются, аминокислотные остатки, например глутаминовую кислоту, или остатки полиола, например глицерина. Таким образом, двумя подходящими, но неограничивающими примерами гидрофобных связывающих групп, содержащих двойные ГГ, являются диалкилглицерины и диалкилглутаматы.

Гидрофобные группы ГГ могут, например, быть получены из групп, выбранных из группы, состоящей из октанола, додеканола, тетрадеканола, гексадеканола, октадеканола, олеилового спирта, токоферо ла и холестерина.

Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения полиглутаматы согласно изобретению могут нести по меньшей мере одну привитую группу типа полиалкилен- (предпочтительно полиэтилен) гликоля, присоединённого к остатку глутамата.

Предпочтительно основная цепь полиглутамата согласно настоящему изобретению содержит звенья α-Ε-глутамата и/или α-Ь-глутаминовой кислоты.

- 5 016911

Ещё более предпочтительно полиглутаматы согласно настоящему изобретению имеют следующую формулу (I):

он

I в которой А независимо представлены

ΚΝΗ-группой, в которой К представляет собой Н, линейную С₂-С1₀- или разветвлённую Сз-Сш-алкильную или бензильную группу;

концевым аминокислотным остатком формулы

Н ₇ —ΝΗ—С--СОЙ⁷

I

К⁸ где -К⁷ представляет собой -ОН, -ОК⁹ или -ΝΗΚ¹⁰ и

К⁸, К⁹ и К¹⁰ независимо представляют собой Н, линейную С₂-С₁₀ или разветвлённую С₃- и С10-алкильную или бензильную группу;

В представляет собой обычную связь или двухвалентную, трёхвалентную или тетравалентную связывающую группу, предпочтительно выбранную из следующих групп:

-О-, -ΝΗ-, -№(С1-С₅-алкил)-, аминокислотного остатка (предпочтительно природной аминокислоты), диола, триола, диамина, триамина, аминоспирта или оксикислоты, содержащей 1-6 атомов углерода;

Ό представляет собой Н, линейную С₂-С₁₀ или разветвлённую С₃-С₁₀-ацильную группу или пироглутамат;

каждая из гидрофобных групп (ГГ) является независимо друг от друга группой, выбранной из линейного или разветвлённого С₈-С₃₀-алкилов, который может необязательно содержать по меньшей мере одну ненасыщенную группу и/или по меньшей мере один гетероатом (предпочтительно О, и/или Ν, и/или 8), или

С8-С30-алкиларилов или арилалкилов, которые могут необязательно содержать по меньшей мере одну ненасыщенную группу и/или по меньшей мере один гетероатом (предпочтительно О, и/или Ν, и/или 8), или

С8-С30-(поли)циклических соединений, которые могут необязательно содержать по меньшей мере одну ненасыщенную группу и/или по меньшей мере один гетероатом (предпочтительно О, и/или Ν, и/или 8);

предпочтительно эта группа выбрана из группы, состоящей из октанола, додеканола, тетрадеканола, гексадеканола, октадеканола, олеилового спирта, токоферола и холестерина, причём В связана напря мую.

К¹ является радикалом, выбранным из следующей группы формулы -νη-(οη₂)„-νη₃ ⁺, ζ;

где ν находится в диапазоне от 2 до 6, предпочтительно ν=4,

-ΝΗ-(ΟΙΙ₂)₄-ΝΗ-Ο(=ΝΙΙ)-Ν1ΐΛ Ζ', -ο-(εΗ₂)₂-ΝΗ₃ ⁺, ζ;

-о-(сн₂)₂->Г(снз)_3! ζ;

аминокислотного остатка или производного аминокислоты формулы

н в которой X представляет собой атом кислорода или -ΝΗ-;

К¹² представляет собой Н, линейную С₂-С₁₀ или разветвлённую С₃- и С₁₀-алкильную или бензиль ную группу;

- 6 016911

Я¹³ представляет собой -(СТ1₂)₄-МН₃ ζ;

-(С1-1з.)з-КП-С(=Ч1 Ιί-Ν( ι> ζ;

-(οη₂)₃-νη₃ ⁺ ζ;

где противоион Ζ^- является хлоридом, сульфатом, фосфатом или ацетатом, предпочтительно хлоридом;

Я³ представляет собой гидроксиэтиламиногруппу, алкиленгликоль, полиалкиленгликоль или группу формулы

К¹⁰ где -Я¹⁰ представляет собой -Н, -СО₂Н, сложные алкиловые эфиры (предпочтительно -СООМе или -СООЕ1), -СН₂ОН, -С(=О)-ИН₂, -С(О)-\Н-СН_; или -С(=О)-Ы(СНз)₂;

р, с.|. г и 8 являются положительными целыми числами;

(р)/(р+с|+г+8) определяется как молярная степень прививки гидрофобных групп (ГГ) и варьирует от 2 до 99 мол.% и предпочтительно от 5 до 50 мол.% при условии, что каждая цепь сополимера содержит в среднем по меньшей мере три гидрофобные привитые группы;

(с|)/(р+с|+г+8) определяется как молярная степень прививки катионных групп и варьирует от 1 до 99 мол.%;

(р+с.|+г+8) варьирует от 10 до 1000, предпочтительно от 30 до 500;

(г)/(р+с|+г+8) варьирует от 0 до 98 мол.%;

(8)/(р+с|+г+8) варьирует от 0 до 98 мол.%, и их фармацевтически приемлемые соли.

Предпочтительно гидрофобные группы (ГГ) и катионные группы расположены статистически как подвешенные группы.

В основном общую формулу (I), описанную выше, не следует рассматривать как описывающую исключительно блок-сополимеры, но также и статистические сополимеры или мультиблок-сополимеры.

Кроме того, предпочтительно, чтобы молярная степень прививки гидрофобных звеньев полиглутамата согласно настоящему изобретению находилась в диапазоне 2-99% и предпочтительно 5-50% при условии, что каждая полимерная цепь содержит в среднем по меньшей мере три гидрофобные привитые группы.

Соотношение (с|)/(р+с|+г+8) для полиглутамата согласно настоящему изобретению означает, что они могут содержать приблизительно от 1 до приблизительно 97 мол.% групп, содержащих катионный заряд.

Соотношение (8)/(р+с|+г+8) для полиглутамата согласно настоящему изобретению означает, что они могут быть анионными, нейтральными или катионными при нейтральных рН.

Согласно другому предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения полимеры согласно настоящему изобретению имеют молекулярную массу от 2000 до 200000 г/моль и предпочтительно от 5000 до 100000 г/моль.

Очевидно, настоящее изобретение также охватывает смеси модифицированных полиаминокислот, как было указано выше.

Стоит отметить, что полиглутаматы настоящего изобретения могут быть использованы в нескольких направлениях в зависимости от природы гидрофобных групп и катионных групп, а также от заряда и степени полимеризации полиглутамата. Способы образования полимера для инкапсулирования активного начала в различных формах, рассмотренные в настоящем изобретении, известны специалистам в данной области техники. Для дальнейших деталей см., например, несколько этих, особенно важных ссылок:

М1сто8рйеге8, М1стосар8и1е8 аиб Ь1ро8оте8; Уо1. 1. Ртератабои аиб Сйет1са1 Лрр11са1юи8, ебйеб Ьу Я. Лт8йабу, СЙИ8 Воок8, 1999. ΙδΒΝ: 0-9532187-1-6.

8и81ашеб-Яе1еа8е 1п)ес1аЫе Ртобис18, ебйеб Ьу 1. 8ешот апб М. Яабот8ку, 1п1егрйагт Рге88, 2000. ΙδΒΝ: 1-57491-101-5.

Со11о1ба1 Эгид Оейуегу 8у81ет8 ебйеб Ьу 1. Кгеи1ег, Магсе1 Эеккег, 1пс., 1994. ΙδΒΝ: 0-8247-9214-9.

НапбЬоок о! Рйаттасеибса1 Соп1то11еб Яе1еа8е Тесйпо1оду, ебйеб Ьу О.Ь. ^18е, Магсе1 Эеккег, 1пс., 2000. ΙδΒΝ: 0-8247-0369-3.

Полиглутаматы настоящего изобретения (в форме частиц или нет) могут легко ассоциировать с активными началами или их инкапсулировать, например белки, пептиды, ДНК, РНК или малые молекулы. Предпочтительным способом образования является способ, который описан в патенте ϋδ-Β-6630171, известный заявителю, который состоит в диспергировании сополимера в воде и инкубации раствора в присутствии активного начала (АН). Коллоидный раствор частиц векторизации, состоящий из полиглутамата согласно настоящему изобретению, может быть далее профильтрован через фильтр диаметром 0,2 мкм и затем непосредственно инъецирован пациенту.

- 7 016911

В тех случаях, когда полимер является катионным и растворимым при кислых рН благодаря избытку катионных зарядов и этот заряд частично или полностью нейтрализован при нейтральном рН, говорят, что такой полимер зависит от рН. Таким образом, такой тип полимеров может быть использован для формирования осадка после введения в подкожную ткань.

Следует понять, что остальные функциональные карбоксильные группы модифицированного полиглутамата являются или нейтральными (в форме СООН), или ионизированными (в форме аниона СОО^-), в зависимости от рН и состава. Таким образом, оба индекса ί) для остатков глутамата или глутаминовой кислоты, и) для полиглутаминовой кислоты или полиглутамата могут быть взаимозаменяемы. В водных растворах противоионами могут быть катионы металла, например натрия, кальция или магния, или органические катионы, такие как триэтаноламин, трис-(гидроксиметил)аминометан или полиамин, например полиэтиленимин. Если противоион является двухвалентным, он может образовывать соль с двумя замкнутыми одновалентными анионными группами.

Противоион катионных групп предпочтительно выбирают из группы, состоящей из хлорида, сульфата фосфата или ацетата. Если он является двухвалентным, противоион может образовывать соль с двумя замкнутыми одновалентными катионными группами. Таким образом, в настоящем описании термин фармацевтически приемлемые соли полимера объединяет все полимеры с противоионами, ассоциированными с ионизированными функциональными группами полимера. Полная или частичная нейтрализация зарядов может быть также предусмотрена для некоторых структур, в которых сосуществуют положительные и отрицательные заряды. Полимер, имеющий одинаковое число положительных зарядов и отрицательных зарядов, (изоэлектрическая точка) может существовать в отсутствие как противоаниона, так и противокатиона.

Сополимеры настоящего изобретения могут быть получены, например, при использовании способов, известных специалистам в данной области техники. Прежде всего, следует вспомнить, что наиболее часто используемая техника получения полиаминокислот α-типа основана на полимеризации ангидридов Ν-карбоксиаминокислот, НКА (ЫСЛ), описана, например, в статье Вюро1утег8, 1976, 15, 1869 и в работе Н.К. Кг1сйе1богГ. а1рйа-Атшо ас1б Ν-сагЬоху Апйубпбе аиб ге1а(еб Не1егосус1е§, 8ргтдег Уег1ад (1987). Производные НКА предпочтительно представляют собой Ж''А-С1и-О-К₃ (К₃=метил, этил или бензил). Полимеры впоследствии гидролизуют в условиях, подходящих для получения полимера в кислотной форме. Эти способы стимулированы описанием, приведённым в патенте ЕК-А-2801226, предос тавленным заявителю.

Некоторые полимеры, которые могут быть использованы согласно настоящему изобретению, например поли(а-Ь-глутаминовая кислота), поли(а-Э-глутаминовая кислота), поли(а-О,Ь-глутамат) и поли(у-Ь-глутаминовая кислота) различных молекулярных масс, коммерчески доступны.

Предпочтительно сополимеры настоящего изобретения могут быть синтезированы двумя способами. Во-первых, одновременно или последовательно к поли(Ь-глутаминовой кислоте) прививают катионную группу (например, аргининамид) и В-ГГ группу (например, додециламин). Эта реакция может протекать в растворителе, например ДМФ, ДМСО или НМП, согласно следующей схеме.

В вышеописанном механизме, когда с.| отличен от нуля, предшественник группы К¹, например этаноламин, присоединённый через азот, вводят при синтезе одновременно с катионной группой.

- 8 016911

В тех случаях, когда катионная группа содержит две функциональные аминогруппы, не различающиеся химически (например, линейный диамин), она может быть введена в форме, в которой одна из двух функциональных групп защищена. К вышеописанной схеме затем добавляют конечную стадию отщепления защитной группы.

Поли(Ь-глутаминовая кислота) может быть синтезирована путём, описанным в заявке на патент РК.-Л-2801226. В тех случаях, когда группа НВ-ГГ присоединена через сложноэфирную функциональную группу, проще сначала привить группу НВ-ГГ обычной реакцией конденсации с использованием карбодиимида, перед прививкой катионной группы.

о

В вышеописанном механизме, когда с.| от отличен нуля, предшественник группы К¹, например этаноламин, присоединённый через азот, вводят при синтезе одновременно с катионной группой.

Полимеризационные процессы и реакции конденсации являются обычными способами, хорошо известными специалистам в данной области техники (см., например, патенты или заявки на патент заявителя, упомянутые выше).

Эти способы будут понятнее при описании примеров.

Экспериментально обнаружено, что степень полимеризации определяется молярным отношением мономера к инициатору.

Конденсацию гидрофобной привитой группы с кислотной группой полимера легко осуществляют взаимодействием полиаминокислоты в присутствии карбодиимида в качестве конденсирующего агента и необязательно, катализатора, например 4-диметиламинопиридина, и в подходящем растворителе, например диметилформамиде (ДМФ), Ν-метилпирролидоне (НМП) или диметилсульфоксиде (ДМСО). Карбодиимидом является, например, дициклогексилкарбодиимид или диизопропилкарбодиимид. Для образования амидной связи могут быть также использованы конденсирующие агенты, например хлорформиаты (см., например, примеры конденсирующих агентов в работе Во4ап5/ку. Ρπηοίρία οί РерДбе δνηΐΐιαίδ. 8ргтдег Уег1ад, 1984). Степень прививки контролируют химически по стехиометрическому соотношению компонентов и реагентов или по времени проведения реакции. Гидрофобные привитые группы, функционализированные аминокислотами, отличными от входящих в состав полимера, получают обычным пептидным синтезом или прямой конденсацией в присутствии кислотных катализаторов. Эти способы хорошо известны специалистам в данной области техники.

В соответствии с другим его аспектом настоящее изобретение направлено на фармацевтические, косметические композиции, композиции диетических пищевых продуктов или препаратов для защиты растений, которые содержат по меньшей мере один полиглутамат, как описано выше, и, необязательно, по меньшей мере одно активное начало, которое может быть терапевтическим, косметическим, или быть активным началом композиции диетических пищевых продуктов или композиции для защиты растений.

Согласно преимущественному варианту осуществления настоящего изобретения активное начало ассоциирует с полиаминокислотой(ми), модифицированными катионной группой при помощи одной или нескольких связей, отличных от (а) ковалентной химической связи(ей).

- 9 016911

В частности, способы ассоциации одного или нескольких АН с модифицированными полиаминокислотами согласно настоящему изобретению описаны в патенте И8-В-6630171. Они состоят во включении по меньшей мере одного активного начала в жидкую среду, содержащую частицы векторизации ЧВ (УР), так, чтобы получилась коллоидная суспензия ЧВ, заряженных или ассоциированных с одним или несколькими активным началом(ами) (АН). Такое включение, которое приводит к захвату АН частицами векторизации (ЧВ), может быть осуществлено следующим образом:

растворением АН в воде и последующим добавлением ЧВ либо в форме коллоидной суспензии, либо в форме изолированных ЧВ (лиофилизата или осадка);

добавлением АН либо в растворе, либо в виде предварительно приготовленной рецептуры к коллоидной суспензии ЧВ, необязательно приготовленных во время использования диспергированием сухих ЧВ в подходящем растворителе, например воде.

Предпочтительно активное начало выбирают из группы, состоящей из белков, гликопротеинов, белков, связанных с одной или несколькими цепями полиалкиленгликоля [предпочтительно полиэтиленгликоля ПЭГ (РЕО): Пэгилированные белки], пептидов, полисахаридов, липосахаридов, олигонуклеотидов, полинуклеотидов и их смесей, и ещё более предпочтительно из подгруппы эритропоэтинов, например эпоэтина альфа, эпоэтина бета, дарбепоэтина, раффимера гемоглобина, их аналогов или их производных; окситоцина, вазопрессина, адренокортикотропного гормона, эпидермального фактора роста, тромбоцитарного стимулирующего фактора роста (ΡΌΟΕ), факторов, которые стимулируют гемопоэз и их смеси, антигенов крови, например альтеплазы, тенектеплазы, фактора У11(а) или VII; гемоглобина, цитохромов, альбуминов, пролактина, лулиберина, гормона, высвобождающего лютеинизирующий гормон (ЬНКН) и аналогов, например лейпролида, гозерелина, трипторелина, бусерелина или нафарелина; антагонистов ЬНКН, конкурентов ЬНКН, гормонов роста человека, свиньи или быка (СН§), релизингфактора гормонов роста, инсулина, соматостатина, глюкагона, интерлейкинов или их смесей (1Ь-2, 1Ь-11, 1Б-12), интерферонов, например интерферон альфа, альфа-2Ь, бета, бета-1а или гамма; гастрина, тетрагастрина, пентагастрина, урогастрона, секретина, кальцитонина, энкефалина, эндоморфинов, ангиотензинов, релизинг-гормона тиротропина (ТКН), фактора некроза опухоли (ΤΝΕ), ростового фактора нервов (ΝΟΕ), факторов роста, например беклапермина, трафермина, анцестима или ростового фактора кератиноцита, гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (О-С8Е), гранулоцитарного макрофагстимулирующего фактора (ОМ-С8Е), макрофагколониестимулирующего фактора (М-С8Е), гепариназы, морфогенетического белка кости (ВМР), 11ΛΝΡ. глюкагоноподобного пептида (ОЬР-1), УЕО-Е, рекомбинантного поверхностного антигена гепатита В (тНВкАд), ренина, цитокинов, брадикинина, бацитрацинов, полимиксинов, колистинов, тироцидина, грамицидинов, этанерцепта, имиглюцеразы, дротрекогина альфа, циклоспоринов и синтетических аналогов, фармацевтически активных модификаций и фрагментов ферментов, цитокинов, антител, антигенов и вакцин и антител, например ритуксимаба, инфликсимаба, трастузумаба, адалимумаба, омализумаба, тозитумомаба, эфализумаба и цетуксимаба.

Другими подходящими активными началами являются полисахариды (например, гепарин) и олигоили полинуктеотиды, ДНК, РНК, иРНК, антибиотики и живые клетки.

Другая категория подходящих активных начал содержит фармацевтически активные вещества, влияющие на центральную нервную систему, например рисперидон, зуклопентиксол, флуфеназин, перфеназин, флупентиксол, галоперидол, флуспирилен, кветиапин, клозапин, амисульприд, сульпирид, зипразидон и т.п.

Согласно альтернативной форме активное начало является гидрофобной, гидрофильной или амфифильной малой органической молекулой. В рамках толкования данного описания малой молекулой является, в частности, малая молекула небелковой природы.

Примеры АН, которые могут ассоциировать с полиаминокислотами согласно настоящему изобретению, находящимися или не находящимися в форме (нано- или микро)частиц, включают в себя, но не ограничиваются белки, например инсулин, интерфероны, гормоны роста, интерлейкины, эритропоэтины или цитокины;

пептиды, например леупролид или циклоспорин;

малые молекулы, например, принадлежащие к семейству антрациклинов, таксоидов или камфотецинов;

и их смеси.

Предпочтительно активное начало выбирают по меньшей мере из одного из следующих семейств активных веществ: агентов для лечения алкоголизма, агентов для лечения болезни Альцгеймера, анестетиков, агентов для лечения акромегалии, анальгетиков, противоастматических средств, агентов для лечения аллергий, противораковых агентов, противовоспалительных агентов, антикоагулянтов и антитромботических средств, антиконвульсантов, противоэпилептических средств, противодиабетических средств, противорвотных средств, противоглаукомных средств, антигистаминных средств, противоинфекционных средств, антибиотиков, противогрибковых средств, противовирусных средств, антипаркинсонических средств, антихолинергических средств, противокашлевых средств, ингибиторов карбоангидразы, сердечно-сосудистых агентов, гиполипедимических средств, антиаритмических средств, сосудорасши

- 10 016911 ряющих средств, антиангинальных средств, антигипотензивных средств, вазопротекторов, ингибиторов холинэстеразы, агентов для лечения нарушения центральной нервной системы, стимуляторов центральной нервной системы, контрацептивов, промоторов рождаемости, стимуляторов и ингибиторов родовой деятельности, агентов для лечения муковисцидоза, агонистов рецепторов допамина, агентов для лечения эндометриоза, агентов для лечения эректильных дисфункций, агентов для лечения фертильности, агентов для лечения желудочно-кишечных нарушений, иммуномодуляторов и иммунодепрессантов, агентов для лечения нарушений памяти, агентов для лечения мигрени, мышечных релаксантов, аналогов нуклеозидов, агентов для лечения остеопороза, парасимпатомиметиков, простагландинов, психотерапевтических агентов, успокаивающих средств, снотворных средств и транквилизаторов, нейролептиков, анксиолитиков, психостимуляторов, антидепрессантов, агентов для лечения дерматологических заболеваний, стероидов и гормонов, амфетаминов, анорексигенных средств, неанальгетических болеутоляющих средств, барбитуратов, бензодиазепинов, слабительных средств, психотропных средств и любых комбинаций этих продуктов.

Согласно одному из вариантов осуществления композиция настоящего изобретения находится в виде геля, раствора, эмульсии, мицелл, наночастиц, имплантатов, порошка, суспензии или плёнки.

Согласно одной из особенно предпочтительных форм, нагруженных или ненагруженных активным началом(ми), она является стабильной коллоидной суспензией частиц полиаминокислоты, и/или микрочастиц, и/или мицелл в водной или масляной фазе.

Микрочастицы могут быть получены различными способами, например коацервацией в присутствии агрегирующего агента (двухвалентных или трёхвалентных ионов или полиэлектролитов), осаждением путём изменения рН или ионной силы, экстракцией/упариванием или атомизацией.

В частности, композицией согласно настоящему изобретению может быть коллоидный раствор наночастиц в водной фазе при кислых рН, который осаждается при физиологических рН.

Преимущественно полиаминокислота настоящего изобретения, имеющая избыток катионных зарядов, может быть сконденсирована с анионным активным началом, например ДНК, фрагментом ДНК, РНК или олиго-РНК, в форме нано- или микрочастиц и эти частицы могут быть интернализированы в клетку.

Согласно другому варианту осуществления композиция настоящего изобретения находится в виде раствора в биологически совместимом растворителе и может быть инъецирована подкожно или внутримышечно или в опухоль.

Композиция согласно настоящему изобретению, поскольку она является фармацевтической композицией, может быть введена перорально, парентерально, назально, вагинально, офтальмологически, подкожно, внутривенно, внутримышечно, внутрикожно, внутрибрюшинно, внутрицеребрально или трансбуккально или через лёгкие.

Можно также ожидать, что композиция находится в виде раствора в биологически совместимом растворителе или в смеси биологически совместимых растворителей, способных инъецироваться подкожно или внутримышечно или в опухоль.

Согласно другому варианту осуществления композиция может необязательно содержать вспомогательное вещество для регулирования рН и/или осмолярности и/или для повышения стабильности (антиоксиданты) и/или в качестве противомикробного агента. Такие вспомогательные вещества хорошо известны специалистам в данной области техники (имеется ссылка в работе: 1п]ес1аЫе Эгид Осус1ортсп1. Р.К. Сир1а е1 а1., 1п1етрйатт Ргекк, Пепует, Со1ога6о, 1999).

Настоящее изобретение также направлено на способ получения лекарственных соединений, в частности, для перорального, назального, вагинального, офтальмологического, подкожного, внутривенного, внутримышечного, внутрикожного, внутрибрюшинного или внутрицеребрального введения, в котором активные начала таких лекарственных соединений могут представлять собой, в частности, белки, гликопротеины, белки, связанные с одной или несколькими цепями полиалкиленгликоля [например, полиэтиленгликоль ПЭГ (РЕС); далее этот термин будет использован как Пэгилированные белки], пептиды, полисахариды, липополисахариды, олигонуклеотиды, полинуклеотиды и гидрофобные, гидрофильные и амфифильные органические молекулы; и/или питательных веществ; и/или косметических продуктов или продуктов для защиты растений; где способ состоит, главным образом, в использовании по меньшей мере одной полиаминокислоты, как описано выше, и/или композиции, описанной выше.

Настоящее изобретение также относится к терапевтическому способу лечения, состоящему в основном во введении композиции, как описано в настоящем сообщении, перорально, парентерально, назально, вагинально, офтальмологически, подкожно, внутривенно, внутримышечно, внутрикожно, внутрибрюшинно, внутрицеребрально или трансбуккально или через лёгкие.

Согласно отдельной альтернативной форме настоящего изобретения этот терапевтический способ лечения состоит в основном в применении композиции, как это описано выше, в виде раствора в биологически совместимом растворителе и затем может быть инъецирована подкожно или внутримышечно или в опухоль, предпочтительно так, чтобы она образовывала осадок на месте инъекции.

- 11 016911

Настоящее изобретение будет легче понять, и его преимущества и альтернативные варианты осуществления будут яснее проявляться из рассмотрения примеров, которые приведены ниже и которые описывают синтез полимеров настоящего изобретения, их превращения в АН-содержащую систему векторизации (стабильную водную коллоидную суспензию) и демонстрируют способность такой системы ассоциировать с белком с образованием фармацевтической композиции.

Пример 1. Синтез полимера (1).

Примеры

ΝΗ

Индексы и группы: Т=О,Ь-а-токоферол, р=8=11, с.|=198.

г поли(глутаминовой кислоты) со степенью полимеризации (СП), равной 220, содержащей ста тически привитый рацемический α-токоферол (5%), растворяют в 125 мл НМП при 80°С. Этот раствор охлаждают до 0°С и добавляют 8,7 мл изобутилхлорформиата, а затем 7,35 мл Ν-метилморфолина. Эту реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 15 мин. Одновременно 24,67 г аргининамиддигидрохлорида суспендируют в 308 мл НМП и добавляют 14,7 мл триэтиламина. Полученную суспензию перемешивают при 20°С в течение нескольких минут, а затем охлаждают до 0°С. Затем добавляют молочную суспензию активированного полимера к такой суспензии и реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 2 ч и затем при 20°С в течение ночи. После добавления 2,1 мл 35%-ного раствора НС1, а затем 100 мл воды реакционную смесь приливают по каплям к 1,6 л воды. Полученный раствор диафильтруют против 8 объёмов водного солевого раствора (0,9%), а затем 4 объёмов воды и концентрируют до объёма, приблизительно равного 250 мл. Процентное содержание привитого аргининамида, определённое по данным протонного ЯМР в Э₂О. равно 90%.

Пример 2. Синтез полимера (2).

3,5 г полиглутаминовой кислоты со СП, равной 120, содержащей статически привитый рацемический α-токоферол (5%), растворяют в 70 мл НМП при 80°С. Этот раствор охлаждают до 0°С и добавляют 3,2 г изобутилхлорформиата, а затем 2,37 г Ν-метилморфолина. Эту реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 10 мин. Одновременно 4,62 г №трет-бутилоксикарбонил-1,4-бутандиамин (БОК (ВОС)-путресцин) растворяют в 9 мл НМП, а затем охлаждают до 0°С. Молочную суспензию активированного полимера затем добавляют к этому раствору и реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 2 ч и затем при 20°С в течение ночи. После добавления 0,7 мл 35%-ного раствора НС1 реакцион

- 12 016911 ную смесь приливают по каплям к 317 мл воды. рН полученного раствора доводят до 7,4 при помощи 1Ν раствора гидроксида натрия, а затем диализуют против водного солевого раствора (0,9%), а затем воды. Полученную суспензию лиофилизуют, что приводит к получению 4,1 г белого порошка. Этот порошок повторно растворяют в ТГФ и раствор перемешивают при 20°С в течение 2 ч, а затем приливают по каплям к остатку воды, в то время как рН доводят приблизительно до 7 при помощи 1Ν раствора гидроксида натрия. Полученный раствор диафильтруют против 8 объёмов водного солевого раствора (0,9%), а затем 4 объёмов воды, и концентрируют до объёма приблизительно равного 50 мл. Процентное содержание привитого БОК-путресцина, определённое по данным протонного ЯМР в И₂О, равно 90%.

Пример 3. Синтез полимера 3.

Индексы и группы: Т=И,Ь-а-токоферол, р=11, ц=88, 8=22 ; г=99.

г полиглутаминовой кислоты со СП, равной 220, содержащей статически привитый рацемический α-токоферол (5%), растворяют в 125 мл НМП при 80°С. Этот раствор охлаждают до 0°С и добавляют 9,1 мл изобутилхлорформиата, а затем 7,71 мл Ν-метилморфолина. Эту реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 15 мин. Одновременно 8,2 г аргининдигидрохлорида суспендируют в 103 мл НМП и добавляют 9,31 мл триэтиламина. К полученной суспензии также добавляют 1,6 мл этаноламина и затем перемешивают при 20°С в течение нескольких минут, а затем охлаждают до 0°С. Молочную суспензию активированного полимера затем добавляют к этой суспензии и реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 2 ч. Добавляют 1,2 мл этаноламина и затем перемешивание проводят при 20°С в течение ночи. После добавления 2,1 мл 35%-ного раствора НС1, а затем 200 мл воды реакционную смесь приливают по каплям к 700 мл воды, в то время как рН доводят до 7,4. Полученный раствор подвергают диафильтрации против 8 объёмов водного солевого раствора (0,9%), а затем 4 объёмов воды и концентрируют до объёма, приблизительно равного 250 мл. Процентное содержание привитого аргининамида и привитого этаноламина, определённых по данным протонного ЯМР в И₂О, равн соответственно 40 и 45%.

Пример 4. Синтез полимера (4).

Индексы и группы: Т=И,Ь-а-токоферол, р=6, ц=59, 8=3, г=52.

г полиглутаминовой кислоты со СП, равной 220, содержащей статически привитый рацемический α-токоферол (5%), растворяют в 63 мл НМП при 80°С. Этот раствор охлаждают до 0°С и добавляют 4,3 мл изобутилхлорформиата, а затем 3,7 г Ν-метилморфолина. Эту реакционную смесь перемешивают

- 13 016911 при 0°С в течение 10 мин. Одновременно 3,15 г №трет-бутилоксикарбонил-1,4-бутанамин (БОКпутресцин) растворяют в 39 мл НМП и затем охлаждают до 0°С. Этот раствор добавляют к молочной суспензии активированного полимера и реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 2 ч. Добавляют 2 мл этаноламина и затем перемешивание проводят при комнатной температуре в течение ночи. После добавления 1,04 мл 35%-ного раствора НС1 реакционную смесь приливают по каплям к 407 мл воды. рН полученной суспензии доводят до 7,4 1Ν раствором гидроксида натрия, а затем её диализуют (предельная отсекаемая молекулярная масса равна 1 кДа) против водного солевого раствора (0,9%), а затем воды. Полученную суспензию лиофилизуют, что приводит к образованию белого порошка. Этот порошок вновь растворяют в 100 мл ТФА и раствор перемешивают при 20°С в течение 1 ч 15 мин, а затем приливают по каплям к остатку воды (500 мл), в то время как рН доводят приблизительно до 7 при помощи 1Ν раствора гидроксида натрия. После добавления 600 мл этанола полученный раствор дифильтруют против 8 объёмов водного солевого раствора (0,9%), а затем 4 объёма воды и концентрируют до объёма, приблизительно равного 100 мл. Процентное содержание привитого БОК-путресцина и привитого этаноламина, определённое по данным протонного ЯМР в Ό₂Θ, равно соответственно 49 и 43%.

Пример 5. Синтез полимера (5).

Индексы и группы: Т=П,Ь-а-токоферол, р=5, ц= 83, 5=12.

Примерно 300 мл концентрированного раствора концентрации 48 мг/г получают способом, подобным тому, который был использован для синтеза полимера (1), исходя из 10 г полиглутаминовой кислоты со СП, равной 100, содержащей статически привитый рацемический α-токоферол (5%) из 9,6 г изобутилхлорформиата, из 7,7 мл Ν-метилморфолина, из 24,7 г аргининамиддигидрохлорида и из 14,7 мл триэтиламина. Процентное содержание привитого аргининамида, определённое по данным протонного ЯМР в Ό₂Θ, равно 83%.

Пример 6. Синтез полимера (6).

Индексы и группы: Т=П,Ь-а-токоферол, р=11, д=62, 5=147.

Примерно 250 мл концентрированного раствора концентрации 43 мг/г получают способом, подобным тому, который был использован для синтеза полимера (1), исходя из 10 г полиглутаминовой кислоты со СП, равной 220, содержащей статически привитый рацемический α-токоферол (5%), из 2,9 г изо

- 14 016911 бутилхлорформиата, из 2,2 мл Ν-метилморфолина, из 4,93 г аргининамиддигидрохлорида и из 3,3 мл триэтиламина. Процентное содержание привитого аргининамида, определённое по данным протонного ЯМР в И₂О, равно 28%.

Пример 7. Синтез полимера (7).

Индексы и группы: Т=И,Ь-а-токоферол, р=11, с|=62, 5=7, г=48.

Примерно 200 мл концентрированного раствора концентрации 43 мг/г получают способом, подобным тому, который был использован для синтеза полимера (3), исходя из 10 г полиглутаминовой кислоты со СП, равной 100, содержащей статически привитый рацемический α-токоферол (5%), из 9,58 г изобутилхлорформиата, из 7,7 мл Ν-метилморфолина, из 8,22 г аргининамиддигидрохлорида, из 2,86 г этаноламина и из 5,1 мл триэтиламина. Процентное содержание аргининамида и этаноламина, определённое по данным протонного ЯМР в И₂О, равно соответственно 40 и 48%.

Пример 8. Синтез полимера (8).

Индексы и группы: Т=П,Ь-а-токоферол, р=11, д=139, 5=70.

Примерно 200 мл концентрированного раствора концентрации 51 мг/г получают способом, подобным тому, который был использован для синтеза полимера (1), исходя из 10 г полиглутаминовой кислоты со СП, равной 220, содержащей статически привитый рацемический α-токоферол (5%), из 6,39 г изобутилхлорформиата, из 5,1 мл Ν-метилморфолина, из 13,16 г аргининамид дигидрохлорида и из 7,5 мл триэтиламина. Процентное содержание привитого аргининамида, определённое по данным протонного ЯМР в И₂О, равно 63%.

- 15 016911

Пример 9. Синтез полимера (9).

Индексы и группы: Т=Э.Ь-а-токоферол. р=11. с.|=121. 8=88.

г полиглутаминовой кислоты со СП. равной 220. содержащей статически привитый рацемический α-токоферол (5%). растворяют в 63 мл НМП при 80°С. Этот раствор охлаждают до 0°С и добавляют

2.38 мл изобутилхлорформиата. а затем 2.02 мл Ν-метилморфолина. Эту реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 15 мин. Одновременно 4.93 г аргининамиддигидрохлорида суспендируют в 62 мл НМП и добавляют 2.8 мл триэтиламина. Полученную суспензию перемешивают при 20°С в течение нескольких минут и затем охлаждают до 0°С. Затем молочную суспензию активированного полимера добавляют к этой суспензии и реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 2 ч. а затем при 20°С в течение 4 ч. После добавления 1.04 мл 35%-ного раствора НС1. а затем 50 мл воды реакционную смесь приливают по каплям к 500 мл водного раствора кислоты (рН 3). поддерживая рН приблизительно при 3-4 при помощи 1Ν раствора НС1. Полученный раствор подвергают диафильтрованию против 8 объёмов водного солевого раствора (0.9%). а затем 4 объёма воды и концентрируют до объёма. приблизительно равного 250 мл. Процентное содержание привитого аргининамида. определённое по данным протонного ЯМР в Э₂О. равно 55%.

Пример 10. Синтез полимера (10).

Индексы и группы: Т=Э.Ь-а-токоферол. р=11. с.|=88. 8=73. г=48.

г полиглутаминовой кислоты со СП. равной 220. содержащей статически привитый рацемический α-токоферол (5%). растворяют в 125 мл НМП при 80°С. Этот раствор охлаждают до 0°С и добавляют 5.6 мл изобутилхлорформиата. а затем 4.8 мл Ν-метилморфолина. Эту реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 15 мин. Одновременно 7.4 г аргининамиддигидрохлорида суспендируют в 93 мл НМП и затем добавляют 4.7 мл триэтиламина и 1.2 мл этаноламина. Полученную суспензию перемешивают при 20°С в течение нескольких минут и затем охлаждают до 0°С. Затем молочную суспензию активированного полимера добавляют к этой суспензии и реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 2 ч. а затем при 20°С в течение ночи. После добавления 2.07 мл 35%-ного раствора НС1. а затем 200 мл воды реакционную смесь вливают по каплям в 670 мл воды. подкисленной НС1 до рН 3. поддерживая рН приблизительно при 3 при помощи 1Ν раствора НС1. Полученный раствор подвергают диафильтрации против 8 объёмов водного солевого раствора (0.9%). а затем 4 объёмов воды и концентри

- 16 016911 руют до объёма, приблизительно равного 250 мл. Процентное содержание привитого аргининамида и привитого этаноламина, определённое по данным протонного ЯМР в И₂О, равно соответственно 40 и 22%.

Сравнительный пример 11.

Соединение С1, нефункционализированное катионной группой.

Соединение С1 для сравнения является предшественником (в его анионной форме) полиглутамата, модифицированного катионной группой, т. е. полиглутамата со СП, равной 220, содержащего статически привитый рацемический α-токоферол (5%). Это соединение получают способом, описанным в заявке на изобретение \УО-Л-03/104303.

Пример 12. Изучение ассоциации с инсулином.

Готовят водный раствор, содержащий 10 мг полимера на 1 мл при рН 7,4 и 200 международных единиц инсулина (7,4 мг). Растворы оставляют инкубироваться при комнатной температуре в течение 2 ч, и свободный инсулин отделяют от связанного инсулина ультрафильтрацией (отсекаемая молекулярная масса равна 100 кДа, 15 мин при 10000 С при 18°С). Далее свободный инсулин, извлечённый из фильтрата, анализируют ВЭЖХ (жидкостной хроматографией высокого разрешения) и определяют количество связанного инсулина. Результаты приведены в табл.1.

Таблица 1

Полимер	% ассоциации
3	100%
6	96%
8	100%
С1	99%

Эти результаты показывают, что полимеры настоящего изобретения могут прочно связываться с инсулином с образованием коллоидных суспензий с размерами частиц, превышающих 100 кДа, и степени ассоциации с инсулином очень высоки. Показано, что в сравнении с полимерами С1 наличие катали тического количества заряженных групп не уменьшает степени ассоциации инсулина.

Пример 13. Измерение вязкости (мПа-с) при сдвиге водного раствора концентрации 29 мг/г при градиенте скорости, равном 10 с^-1.

Пример	С1	3	6	8	10
Вязкость	4720	6.6	4.5	5.8	4.7

Эти результаты показывают, что полимеры настоящего изобретения имеют заметно меньшую вязкость в сравнении со сравнительным полимером С1, который не содержит боковых катионных групп.

Пример 14. Изучение растворимости как функции рН.

Эти результаты показывают, что некоторые полимеры настоящего изобретения (примеры 9 и 10) обнаруживают, что растворимость зависит от рН, что в отличие от соединения С1 позволяет им входить в состав рецептуры с активным началом при умеренно кислых рН (рН 4) и образовывать осадок при физиологических рН (рН приблизительно равен 7).

Полимер	рН=4	Физиологический рН
1	Растворим	Растворим
2	Растворим	Растворим
3	Растворим	Растворим
4	Растворим	Растворим
5	Растворим	Растворим
6	Нерастворим	Растворим
7	Растворим	Растворим
8	Растворим	Растворим
9	Растворим	Нерастворим
10	Растворим	Нерастворим
С1	Нерастворим	Растворим

Пример 15. Изучение связывания терапевтической РНК.

Процессы ассоциации полимер/РНК в водном растворе проходят при добавлении увеличивающихся количеств полимеров (1), (3) (два примера полимеров согласно настоящему изобретению, которые являются главным образом катионными при рН 7,4) или С1 при фиксированных количествах 1433-нуклеотидной терапевтической РНК. Такие смеси инкубируют в течение 2 ч при 37°С и затем анализируют в условиях 1%-ного агарозного гель-электрофореза в денатурирующих условиях (обнаружение РНК при помощи этидийбромида). Индивидуальную РНК используют в качестве положительного контроля целостности. Инкубированную РНК с коммерческой РНКазой используют в качестве контроля на деградированную РНК.

- 17 016911

Эти результаты показывают, что, когда изучаемую РНК инкубируют с полимерами (1) или (3), количество РНК, которое мигрирует в соответствии с ожидаемыми размерами при электрофорезе, постепенно уменьшается с увеличением количества используемого полимера и исчезает выше определённой величины, причём другие полосы не появляются.

В отличие от этого, в смеси, содержащей компонент С1, количество мигрирующей РНК не меняется даже при большом избытке полимера.

Во-вторых, добавляемое к РНК количество полимера (1) или (3) позволяет полностью связать РНК (условия, при которых РНК больше не видно на ожидаемой калибровке геля), и эти смеси инкубируют в течение 2 ч при 37°С. Через 2 ч при 37°С к этим смесям добавляют увеличивающиеся количества соединения С1 и проводят новую инкубацию в течение 16 ч при 37°С.

Полученные смеси анализируют 1%-ным электрофорезом в агарозном геле в денатурирующих условиях (обнаружение РНК этидийбромидом).

Эти результаты показывают, что при ожидаемом размере увеличение количества РНК коррелирует с количеством полимера С1, добавляемого к смеси РНК/полимер (1) или (3).

Эти результаты показывают, что некоторые полимеры согласно настоящему изобретению, полностью катионные при рН 7.4, могут связываться с модельной РНК, содержащей 1433 нуклеотида и что эта ассоциация с полностью анионным полимером обратима. Кроме того, входящая в состав композиции РНК не деградирует.

Пример 16. Изучение скрещивания модельного олигонуклеотида с клеточной мембраной.

В среде Орй-МЕМ®, не содержащей эмбриональной сыворотки телёнка, олигонуклеотиды РНК, состоящие из 30 оснований с меченым Су3, смешивают с некоторым количеством полимера (3) или (7), близким к минимальному количеству, необходимому для полного связывания олигонуклеотида. Такую смесь вводят в контакт с гепатокарциномными клетками человека Ний-7, выращенными на 24-луночном планшете с 25000 клеток/лунке. Через 4 ч после инкубации клеток при 37°С, 5% СО₂ добавляют среду ΌМЕМ с 20%-ным содержанием эмбриональной сыворотки телёнка (ЕС8), так, чтобы конечная концентрация ЕС8 была равна 10%. Через 24 ч после инкубации с олигонуклеотид/полимерной смесью клетки промывают, их мембраны метят биотинилированным конканавалином и затем клетки фиксируют в течение 3 мин параформальдегидом при 3,7%.

После двух промываний РВ8 буфером клетки инкубируют с ΌΑΡΙ (ядерной ДНК) в течение 10 мин, промывают 3 раза РВ8 и затем инкубируют с А1ехаЕ1иог®488 - меченым стрептавидином, при помощи которого обнаруживают биотинилированный конканавалин.

Клетки анализируют конфокальной микроскопией.

Локализация клеток возможна по наблюдению за А1ехаЕ1иог®488 - окрашенным стрептавидином, при помощи которого обнаруживают биотинилированный конканавалин.

Локализация клеток возможна при наблюдении их мембран, окрашенных А1ехаЕ1иог®488 и их ядер, окрашенных ΌΑΡΙ.

Захват Су3-меченого олигонуклеотида клеткой проявляется по флуоресценции Су3 (возбуждение при 550 нм, эмиссия при 570 нм).

Эти результаты показывают, что Су3-меченый олигонуклеотид обнаружен в цитоплазме клеток Ний-7, когда эти клетки инкубируют в присутствии олигонуклеотида и полимера (3) или (7). Для сравнения, когда олигонуклеотид инкубируют один или с полимером С1, в клетках не обнаруживают Су3меченого олигонуклеотида.

Claims

1. Полиаминокислота, содержащая остатки глутаминовой кислоты, где некоторые остатки глутаминовой кислоты несут боковую катионную группу, которая, если она может быть депротонирована, имеет рК_а, большее или равное 7, причём указанные катионные группы являются одинаковыми или различными и соответствуют следующей формуле:

в которой X представляет собой О, ΝΗ;

Υ представляет собой независимо Н или ί.Ή₃;

Ζ представляет собой хлорид, сульфат, фосфат или ацетат;

Ь представляет собой линейный (С₂-С₆)алкилен, необязательно замещённый функциональной карбоксильной группой -СОКа, где Ка представляет собой гидрокси, алкокси или аминоалкильную группу; или выбраны из группы радикалов формулы где Ка представляет собой гидрокси-, алкокси- или аминоалкильную группу; Ζ^- представляет собой хлорид, сульфат, фосфат или ацетат;

или

-ΝΗ-(ΟΗ₂)4-ΝΗ-ε(=ΝΗ)-ΝΗ3⁺, Έ, где Ζ^- представляет собой хлорид, сульфат, фосфат или ацетат, а другие остатки глутаминовой кислоты несут боковые гидрофобные группы (ΟΗ), которые являются одинаковыми или различными и выбраны из группы, состоящей из линейных или разветвлённых С8-С30-алкилов, которые необязательно могут содержать по меньшей мере одну ненасыщенную углерод-углеродную группу и/или по меньшей мере один гетероатом, выбранный из О, Ν и 8;

С₈-С₃₀-алкиларилов или арилалкилов, которые необязательно могут содержать по меньшей мере одну ненасыщенную углерод-углеродную группу и/или по меньшей мере один гетероатом, выбранный из О, Ν и 8; и

С8-С30-(поли)циклических соединений, которые необязательно могут содержать по меньшей мере одну ненасыщенную углерод-углеродную группу и/или по меньшей мере один гетероатом, выбранный из О, Ν и 8, а также ее фармацевтически приемлемые соли.

2. Полиаминокислота по п.1, где боковые катионные группы формулы выбраны из следующей группы радикалов:

где Ка представляет собой гидрокси-, алкокси- или аминоалкильную группу; Ζ^- представляет собой хлорид, сульфат, фосфат или ацетат, или

-ΝΗ-(εΗ₂)₄-ΝΗ₃ ⁺ Ζ,

-О-ССИЫз-^СНЭзГ,

-О-(сн₂)₂-кн₃ ⁺ζ, где Ζ^- представляет собой хлорид, сульфат, фосфат или ацетат.

3. Полиаминокислота по п.1 или 2, которая является катионной при ρΗ 4-5 и нейтральной или слабо заряженной при нейтральных значениях ρΗ.

4. Полиаминокислота по п.1 или 2, где боковые катионные группы привиты к остаткам глутаминовой кислоты через амидную или сложноэфирную связь.

5. Полиаминокислота по любому из предыдущих пунктов, которая состоит из Ь-глутамата или гомополимеров Ь-глутаминовой кислоты, присоединённых к полиаминокислоте по её карбоксильным

- 19 016911 группам в альфа-положении.

6. Полиаминокислота по любому из предыдущих пунктов, которая содержит в среднем по меньшей мере три гидрофобные группы (СН) на полимерную цепь.

7. Полиаминокислота по любому из предыдущих пунктов, где другие остатки глутаминовой кислоты несут боковые неионизируемые группы, отличающиеся от гидрофобных групп (СН), причём указанные неионизируемые группы могут быть одинаковыми или различными.

8. Полиаминокислота по п.7, где указанной неионизируемой группой является гидроксиэтиламиногруппа.

9. Полиаминокислота по любому из предыдущих пунктов, где другие остатки глутаминовой кислоты несут группу, которая является неионизируемой при нейтральных рН, отличную от гидрофобных групп (СН), причём указанные группы, неионизируемые при нейтральных рН, являются одинаковыми или различными.

10. Полиаминокислота по п.9, где неионизируемая группа, которая является неионизируемой при нейтральных рН, имеет следующую формулу:

к’° в которой -В¹⁰ представляет собой -Н, -СО₂Н, остаток сложного алкилового эфира, -СН₂ОН, -С(=О)-ИН₂, -С(=О)-ИН-СН₃ или -С(=О)-Ы(СН₃)₂.

11. Полиаминокислота по любому из предыдущих пунктов, которая несёт по меньшей мере одну привитую полиалкиленовую группу, присоединённую к остатку глутаминовой кислоты.

12. Полиаминокислота по любому из предыдущих пунктов, которая имеет следующую формулу:

в которой А независимо представляет собой

ΒΝΉ-группу, где В представляет собой Н, линейную С₂-С₁₀- или разветвлённую С₃-С₁₀-алкильную или бензильную группу, концевой аминокислотный остаток формулы

Н 7 —ΝΗ—С СОК⁷ к^а в которой -В⁷ представляет собой -ОН, -ОВ⁹ или -ΝΉΒ¹⁰,

В⁸, В⁹ и В¹⁰ независимо представляют собой Н, линейную С₂-С₁₀- или разветвлённую С₃- и С₁₀-алкильную или бензильную группу;

В представляет собой простую связь или двухвалентную, трёхвалентную или четырёхвалентную связывающую группу, выбранную из следующих групп:

-О-, -ΝΉ-, ^(СТ-Сб-алкил)-, аминокислотного остатка, диола, триола, диамина, триамина, аминоспирта или гидроксикислоты, содержащей 1-6 атомов углерода;

Ό представляет собой Н, линейную С₂-С₁₀- или разветвлённую С₃-С₁₀-ацильную группу или пироглутамат;

каждая из гидрофобных групп (СН) является независимо друг от друга группой, выбранной из линейного или разветвлённого С8-С30-алкила, который может необязательно содержать по меньшей мере одну ненасыщенную углерод-углеродную группу и/или по меньшей мере один гетероатом, выбранный из О, N и 8, или

С8-С30-алкиларила или арилалкила, который может необязательно содержать по меньшей мере одну ненасыщенную углерод-углеродную группу и/или по меньшей мере один гетероатом, выбранный из О, Ν, 8, или

С8-С30-(поли)циклического соединения, которое может необязательно содержать по меньшей мере одну ненасыщенную углерод-углеродную группу и/или по меньшей мере один гетероатом, выбранный

- 20 016911 из О, N и 8;

В¹ является группой, имеющей одну из следующих формул: -ЫН-ССНг^-МН/ Ζ, где ν находится в диапазоне 2-6, или является аминокислотным остатком или производным аминокислоты формулы в которой X представляет собой атом кислорода или -ΝΉ-;

В¹² представляет собой Н, линейную С₂-С₁₀- или разветвлённую С₃- и С1₀-алкильную или бензильную группу;

В¹³ представляет собой где противоион Ζ^- является хлоридом, сульфатом, фосфатом или ацетатом;

В³ представляет собой гидроксиэтиламиногруппу, алкиленгликоль, полиалкиленгликоль или группу формулы где -В¹⁰ представляет собой -Н, -СО₂Н, остаток сложного алкилового эфира, -СН₂ОН, -С(=О)-№Н₂, -С(=О)-НН-СН₃ или -С(=О)-Ы(СН₃)2;

р, с.|. г и к являются положительными целыми числами;

(р)/(р+д+т+к) определяется как молярная степень прививки гидрофобных групп (ОН) и варьирует от 2 до 99 мол.% при условии, что каждая цепь сополимера содержит в среднем по меньшей мере три гидрофобные привитые группы;

(с|)/(р+с|+г+к) определяется как молярная степень прививки катионных групп и варьирует от 1 до 99 моль.%;

(р+д+т+к) варьирует от 10 до 1000;

(т)/(р+д+г+к) варьирует от 0 до 98 мол.%;

(к)/(р+д+т+к) варьирует от 0 до 98 мол.%, или её фармацевтически приемлемая соль.

13. Косметическая композиция, включающая в себя по меньшей мере одну полиаминокислоту, содержащую остатки глутаминовой кислоты, модифицированные катионными группами, по любому из пп.1-12.

14. Диетическая композиция, включающая в себя по меньшей мере одну полиаминокислоту, содержащую остатки глутаминовой кислоты, модифицированные катионными группами, по любому из пп.1-12.

15. Композиция препаратов для защиты растений, включающая в себя по меньшей мере одну полиаминокислоту, содержащую остатки глутаминовой кислоты, модифицированные катионными группами, по любому из пп.1-12.

16. Фармацевтическая композиция, включающая в себя по меньшей мере одну полиаминокислоту, содержащую остатки глутаминовой кислоты, модифицированные катионными группами, по любому из пп.1-12.

17. Композиция по п.16, содержащая по меньшей мере одно активное начало.

18. Композиция по п.17, где активное начало ассоциировано с полиаминокислотой(ми), содержащей остатки глутаминовой кислоты, модифицированные катионными группами, одной или более связями, отличными от ковалентных химических связей.

19. Композиция по любому из пп.16-18, где активное начало выбрано из группы, состоящей из ДНК, фрагмента ДНК, РНК и олиго-РНК.

20. Композиция по любому из пп.16-19, представляющая собой коллоидную суспензию наночастиц, и/или микрочастиц, и/или мицелл полиаминокислоты, содержащей остатки глутаминовой кислоты, мо- 21 016911 дифицированные катионными группами, в водной или масляной фазе.

21. Композиция по п.20, в которой суспензия представляет собой коллоидный раствор наночастиц в водной фазе при кислых рН, которые осаждаются при физиологических значениях рН.

22. Способ получения лекарственного средства для перорального, назального, пульмонального, вагинального, офтальмологического, подкожного, внутривенного, внутримышечного, внутрикожного, внутрибрюшинного или внутрицеребрального введения, причём активным началом лекарственного средства являются белки, гликопротеины, белки, связанные с одной или несколькими цепями полиалкиленгликоля, пептиды, полисахариды, липосахариды, олигонуклеотиды, полинуклеотиды и гидрофобные, гидрофильные или амфифильные низкомолекулярные органические соединения, который предусматривает использование по меньшей мере одной полиаминокислоты по любому из пп.1-12 и/или композиции по любому из пп.16-21.