EA016199B1 - Соединения и композиции как ингибиторы активирующей канал протеазы - Google Patents

Abstract

В изобретении приведены соединения и содержащие их фармацевтические композиции, которые применимы для модулирования активирующих канал протеаз, и способы применения таких соединений для лечения, улучшения протекания или предупреждения патологического состояния, связанного с активирующей канал протеазой, включая, но не ограничиваясь только ими, простазин, PRSS22, TMPRSS11 (например, TMPRSS11B, TMPRSS11E), TMPRSS2, TMPRSS3, TMPRSS4 (MTSP-2), матриптазу (MTSP-1), CAP2, САР3, трипсин, катепсин А и нейтрофильную эластазу.

Description

Простазин является трипсиноподобной серинпротеазой, которая содержится в различных тканях млекопитающих. Он является закрепленной на мембране протеазой, которая экспрессируется на внеклеточной мембране клеток, но которая также может выделяться в жидкости организма, такой как сперма, моча и жидкость, находящаяся на поверхности дыхательных путей. Простазин (РР888) вместе с протеазами, такими как матриптаза, САР2, САР3, трипсин, РЕ8822, ТМРВ8811. катепсин А и нейтрофильная эластаза, могут стимулировать активность чувствительного к амилориду эпителиального натриевого канала (Е№1С). Ингибирование этих ферментов может включать изменения переноса ионов в эпителии и тем самым влиять на равновесие переноса через эпителиальные мембраны. Например, полагают, что ингибирование САР в почках стимулирует диурез, тогда как ингибирование САР в дыхательных путях стимулирует выведение слизи и мокроты из легких. Поэтому ингибирование САР в почках можно использовать терапевтически для лечения гипертензии. Ингибирование САР в дыхательных путях предупреждает накопление выделений из органов дыхания, которые в противном случае могут привести к вторичным бактериальным инфекциям у пациента.

Описание изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям, фармацевтическим композициям и способам применения таких соединений для модулирования активирующих канал протеаз (САР). Например, соединения и композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, можно использовать для модулирования простазина, РВ8822, ТМРВ8811 (например, ТМРВ8811В, ТМРВ8811Е), ТМРВ882, ТМРВ883, ТМРЕ884 (МТ8Р-2), матриптазы (МТ8Р-1), САР2, САР3, трипсина, катепсина А и нейтрофильной эла стазы.

Одним объектом настоящего изобретения являются соединения формулы (1)

или их фармацевтически приемлемые соли, в которой О-(СВ₂)р-Я² обозначает заместитель в любом положении кольца А;

обозначает 5-12-членное моноциклическое или конденсированное карбоциклическое кольцо, гетероциклическое кольцо, содержащее Ν, О и/или 8, арильное или гетероарильное кольцо при условии, что 1 не обозначает триазолил;

(СК₂)„

В обозначает ^{к у} н I или (СВ₂)_к-К⁵;

Υ обозначает связь, -8О₂-, -ΝΗί'Ό- или -О-(СО)-;

В¹ обозначает галоген, -(ΟΒ2)ΓΝΒ⁶Β⁷, -^Β2)_ΓΝΒ^=ΝΒ)-ΝΒ⁶Β⁷, -(СВЩ-С^В)^^⁷,

-С(О)-(СΒ₂)₁-NΒ⁶Β⁷, -(СΒ2)1-NΒ-8О2Β⁶, -(СΒ2)₁-NΒ-С(О)-Β⁶, -(СΒ2)1-8О2NΒ⁶Β⁷, или -^Β^ι-ΘΒ⁶, или необязательно замещенные С1-С6-алкоксигруппу, С1-С₆-алкил, С₂-С₆-алкенил или С₂-С₆-алкинил или необязательно замещенное карбоциклическое кольцо, гетероциклическое кольцо, арил или гетероарил;

Β³ обозначает С1-С6-алкил, С2-С6-алкенил, С2-С6-алкинил или -(ΟΒ2)ι-Β⁵; альтернативно, ΝΗ-Υ-Β³ вместе образуют ΝΗ2;

Β², Β⁴ и Β⁵ независимо обозначают необязательно замещенное 5-12-членное карбоциклическое кольцо, гетероциклическое кольцо, арил или гетероарил или

Β⁴ обозначает Н, С1-С₆-алкил, С₂-С₆-алкенил, С₂-С₆-алкинил или -ΟΒ= , где Р обозначает С или Ν и кольцо Е вместе с Р образует необязательно замещенное 5-12-членное моноциклическое или конденси рованное кольцо;

Β⁶ и Β⁷ независимо обозначают Н, С1-С6-алкил, С2-С6-алкенил, С2-С6-алкинил или -(ΟΒ2)ρΒ⁵; каждый Β обозначает Н или С1-С6-алкил, С₂-С₆-алкенил или С₂-С₆-алкинил;

равно 0-6;

к, т, η и р независимо равны 1-6;

х равно 0-4;

- 1 016199 при условии, что К⁴ обозначает пиперидинил, если ΝΗ-Υ -К³ вместе образуют ΝΗ²; и также при условии, что К⁵ обозначает пиперидинил, если В обозначает (СК₂)_к-К⁵.

В приведенной выше формуле (1) 1 может обозначать тиофенил, тиазолил, фенил, пиридил, индазо лил, пиперидинил или пирролидинил.

В других примерах К² может обозначать фенил или циклогексил, каждый из которых необязательно может содержать в качестве заместителей галоген, §О₂(С1-С₆-алкил) или необязательно замещенный С₁-С₆-алкил или С₁-С₆-алкоксигруппу, такие как необязательно галогенированный С₁-С₆-алкил или С₁ -С₆-алкоксигруппа.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (2)

в которой К² и 1 независимо обозначают необязательно замещенный 6-членный арил;

К³ обозначает С₁-С₆-алкил, С₂-С₆-алкенил, С₂-С₆-алкинил или -(СК₂)_ГК⁵ или

ΝΗ-Υ-К³ вместе образуют ΝΗ₂;

каждый К в (СК₂) обозначает Н или С₁-С₆-алкил и т, η и р независимо равны 1-2.

В приведенных выше формулах (1) и (2) Υ может обозначать связь, §О₂ или -О-(СО)-.

В других примерах К¹ обозначает галоген, С1-С6-алкил, СР3, ОСР3, фенил, -(СК2)1-НЕ⁶К⁷, -(СК+-С(\К)-\К'К . -С(О)-(СК;)-\К⁶К . -(СК;)-\К-8О;К⁶. -(СК2)^К-С(О)-К⁶, -(СК;).-8О;\К'К или -(СК₂)₁-ОК⁶, где каждый 1 равен 0-1; и К, К⁶ и К⁷ независимо обозначают Н или С1-С₆-алкил.

В приведенных выше формулах (1) и (2) К⁴ может обозначать необязательно замещенное 5-6членное карбоциклическое кольцо, гетероциклическое кольцо, арил, гетероарил или -СК= Θ , где Р обозначает С или N и кольцо Е вместе с Р образует необязательно замещенное 5-6-членное моноциклическое кольцо. Например, К⁴ может обозначать необязательно замещенный пиперидинил, циклогексил, А-СН=/ ) -£-ΟΗ=ν ΝΗ фенил, \—/ или ^е \—/ .

В предпочтительных примерах К³ в формуле (2) обозначает С1-С₆-алкил или необязательно замещенный бензил. В некоторых примерах Υ обозначает §О₂. В других примерах К⁴ обозначает необязательно замещенный пиперидинил. В других примерах 1 и К² независимо обозначают необязательно замещенный фенил. Например, 1 может быть замещен с помощью 1-3 К¹ (т.е. когда х равно 1-3) и К² необязательно может быть замещен галогеном.

Другим объектом настоящего изобретения являются фармацевтические композиции, включающие соединение формулы (1) или (2) и фармацевтически приемлемый инертный наполнитель.

Настоящее изобретение также относится к способам модулирования активирующей канал протеазы, включающим введение в систему или млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения, описывающегося формулой (1) или (2), или его фармацевтически приемлемых солей или фармацевтических композиций и тем самым проведение модулирования указанной активирующей канал протеазы.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу ингибирования активирующей канал протеазы, включающему введение в систему клеток или ткани или млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения, описывающегося формулой (1) или (2) или его фармацевтически приемлемых солей или фармацевтических композиций; где указанной активирующей канал протеазой является простазин, РК8822, ТМРК8811 (например, ТМРК8811В, ТМРК8811Е), ТМРК882, ТМРК883, ТМРК884 (МТ8Р-2), матриптаза (МТ8Р-1), САР2, САР3, трипсин, катепсин А или нейтрофильная эластаза, и тем самым ингибирование указанной активирующей канал протеазы. В предпочтительных примерах настоящее изобретение относится к способу ингибирования простазина.

Другим объектом настоящего изобретения является способ улучшения протекания или лечения патологического состояния, опосредуемого активирующей канал протеазой, включающий введение в систему клеток или ткани или млекопитающему эффективного количества соединения, описывающегося формулой (1) или (2), или его фармацевтически приемлемых солей или фармацевтических композиций и необязательно в комбинации со вторым терапевтическим средством; где указанной активирующей канал протеазой является простазин, РК8822, ТМРК8811 (например, ТМРК8811В, ТМРК8811Е), ТМРК882, ТМРК883, ТМРК884 (МТ8Р-2), матриптаза (МТ8Р-1), САР2, САР3, трипсин, катепсин А или нейтрофильная эластаза, и тем самым лечение указанного патологического состояния.

- 2 016199

Кроме того, настоящее изобретение относится к соединениям формулы (1) или (2), предназначенным для применения для лечения патологического состояния, опосредуемого активирующей канал протеазой. Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (1) или (2) необязательно в комбинации со вторым терапевтическим средством для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения патологического состояния, опосредуемого активирующей канал протеазой.

В предпочтительных примерах соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, можно использовать для лечения патологического состояния, опосредуемого простазином. В одном варианте осуществления второе терапевтическое средство может представлять собой противовоспалительное, бронхолитическое, антигистаминное, противокашлевое средство, антибиотик или ДНКазу и его вводят до, одновременно или после соединения формулы (1) или (2). В некоторых примерах соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, вводят в эпителиальные клетки бронхов, предпочтительно в эпителиальные клетки бронхов человека.

Примеры патологических состояний, протекание которых можно улучшать или которые можно лечить с использованием соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются только ими, патологическое состояние, связанное с перемещением жидкости через переносящие ионы эпителии или с накоплением слизи и мокроты на тканях органов дыхания, или с их комбинацией. В некоторых примерах патологическим состоянием, которое можно опосредовать с использованием соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, является муковисцидоз, первичная цилиарная дискинезия, карцинома легких, хронический бронхит, хроническое обструктивное заболевание легких, астма или инфекция дыхательных путей.

Определения

Алкил означает фрагмент и структурный элемент других групп, например галогензамещенного алкила и алкоксигруппы, и он может обладать линейной или разветвленной цепью. Необязательно замещенный алкил, алкенил или алкинил при использовании в настоящем изобретении может быть необязательно галогенирован (например, СР₃) или содержащиеся в нем один или большее количество атомов углерода могут быть замещены или заменены гетероатомом, таким как ΝΚ, О или 3 (например, -ОСН₂СН₂О-, алкилтиолы, тиоалкоксигруппа, алкиламины и т.п.).

Арил означает моноциклическое или конденсированное бициклическое ароматическое кольцо, содержащее атомы углерода. Например, арил может представлять собой фенил или нафтил. Арилен означает двухвалентный радикал, образованный из арильной группы.

Гетероарил при использовании в настоящем изобретении является таким, как определенный выше арил, в котором один или большее количество элементов кольца представляет собой гетероатом. Примеры гетероарилов включают, но не ограничиваются только ими, пиридил, индолил, индазолил, хиноксалинил, хинолинил, бензофуранил, бензопиранил, бензотиопиранил, бензо[1,3]диоксол, имидазолил, бензоимидазолил, пиримидинил, фуранил, оксазолил, изоксазолил, триазолил, тетразолил, пиразолил, тиенил и т. п.

Карбоциклическое кольцо при использовании в настоящем изобретении означает насыщенное или частично ненасыщенное моноциклическое, конденсированное бициклическое или мостиковое полициклическое кольцо, содержащее атомы углерода, которые необязательно могут быть замещены, например, с помощью =0. Примеры карбоциклических колец включают, но не ограничиваются только ими, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклопропилен, циклогексанон и т.п.

Гетероциклическое кольцо при использовании в настоящем изобретении является таким, как определенное выше карбоциклическое кольцо, в котором один или большее количество кольцевых атомов углерода представляет собой гетероатом. Например, гетероциклическое кольцо может содержать Ν, О, 3, -Ν=, -3-, -3(0), -3(0)₂- или -ΝΚ-, где В может обозначать водород, С₁-С₄-алкил или защитную группу. Примеры гетероциклических колец включают, но не ограничиваются только ими, морфолиновую группу, пирролидинил, пирролидинил-2-он, пиперазинил, пиперидинил, пиперидинилон, 1,4-диокса-8азаспиро[4,5]дец-8-ил и т.п.

Если не указано иное, то, когда заместитель указан как необязательно замещенный, это означает, что заместитель представляет собой группу, которая может быть замещена одной или большим количеством групп, по отдельности и независимо выбранных из группы, включающей, например, необязательно галогенированный алкил, алкенил, алкинил, алкоксигруппу, алкиламиногруппу, алкилтиогруппу, алкинил, амидную группу, аминогруппу, включая моно- и дизамещенные аминогруппы, арил, арилоксигруппу, арилтиогруппу, карбонил, карбоциклил, цианогруппу, циклоалкил, галоген, гетероалкил, гетероалкенил, гетероалкинил, гетероарил, гетероциклил, гидроксигруппу, изоцианатную группу, изотиоцианатную группу, меркаптогруппу, нитрогруппу, О-карбамил, Ν-карбамил, О-тиокарбамил, Ν-тиокарбамил, С-амидную группу, Ν-амидную группу, 3-сульфонамидную группу, Ν-сульфонамидную группу, С-карбоксигруппу, О-карбоксигруппу, пергалогеналкил, перфторалкил, силил, сульфонил, тиокарбонил, тиоцианатную группу, тригалогенметансульфонил и их производные, содержащие защитные группы. Защитные группы, которые могут образовывать соединения, защищенные по указанным выше заместителям, известны специалистам в данной области техники и описаны в литературе, в таких публи

- 3 016199 кациях, как Огеепе апб ХУиК РгсИеебуе Огоирк ίη Огдаше 8уп1йе818, 3^гб Еб., ίοΐιη \УПеу & 8опк, Ναν Уогк, ΝΥ, 1999, и Коаепккц РгсИссПус Огоирк, ТЫете Уег1ад, Ναν Уогк, ΝΥ, 1994, которые во всей своей полноте включены в настоящее изобретение в качестве ссылки.

Термины совместное введение или комбинированное введение и т.п. при использовании в настоящем изобретении означают введение выбранных терапевтических средств одному пациенту и включают режимы лечения, при которых выбранные терапевтические средства необязательно вводят одним и тем же путем или в одно и то же время.

Термин фармацевтическая комбинация при использовании в настоящем изобретении означает препарат, который получен смешиванием или объединением более одного активного ингредиента и включает и фиксированные, и нефиксированные комбинации активных ингредиентов. Термин фиксированная комбинация означает, что активные ингредиенты, например соединение формулы (1) и дополнительное средство, оба, вводят пациенту одновременно в виде одного препарата или дозированной формы.

Термин нефиксированная комбинация означает, что активные ингредиенты, например соединение формулы (1) дополнительное средство, оба, вводят пациенту в виде отдельных препаратов одновременно, по отдельности или последовательно без наложения специальных ограничений по времени, и при таком введении в организме пациента создаются терапевтически эффективные уровни активных ингредиентов. Последнее также относится к смешанному лечению, например с введением 3 или большего количества активных ингредиентов.

Термин терапевтически эффективное количество означает количество соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, которое вызывает биологический или медицинский ответ в клетке, ткани, органе, системе, у животного или человека, который необходим исследователю, ветеринару, врачу или дру гому клиницисту.

Термин введение соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, следует понимать как доставку соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, включая пролекарство соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, индивидууму, нуждающемуся в лечении.

При использовании в настоящем изобретении термины лечение, лечить означают способ облегчения протекания или ослабление болезни и/или сопровождающих ее симптомов.

Простазин также можно назвать как активирующая канал протеаза человека (ЙСАР); активирующая канал протеаза-1 и РК888, МЕКРОР8 ГО 801.159.

Способы осуществления настоящего изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям, фармацевтическим композициям и способам применения таких соединений для модулирования активирующих канал протеаз (САР).

Одним объектом настоящего изобретения являются соединения формулы (1)

или их фармацевтически приемлемые соли, в которой О-(СК.₂)_р-К.² обозначает заместитель в любом положении кольца А;

обозначает 5-12-членное моноциклическое или конденсированное карбоциклическое кольцо, гетероциклическое кольцо, содержащее Ν, О и/или 8, арильное или гетероарильное кольцо, при условии, что 1 не обозначает триазолил;

Т (СК₂)_га

В обозначает *³~^γ“ΰ г или (СП^Х-К⁵;

Υ обозначает связь, -8Ο₂-, -ΝΗί.Ό- или -О-(СО)-;

К¹ обозначает галоген, -(СКУ-УКК , -(СК.₂)_ГМКС(=МК)4УК⁶К.⁷, -(СЮгС^НК)^⁶^⁷,

-С(ОнСКУ-\К'К , -(СК2)1-МК-8О2В⁶, -(СРДгНЕ-СЩуР⁶, -(СКуУОЛ'КК , или -(СКДрОК⁶, или необязательно замещенные С1-С₆-алкоксигруппу, С1-С₆-алкил, С₂-С₆-алкенил или С₂-С₆-алкинил, или необязательно замещенное карбоциклическое кольцо, гетероциклическое кольцо, арил или гетероарил;

К³ обозначает С1-С6-алкил, С2-С6-алкенил, С2-С6-алкинил или -(СК2)1-К⁵; альтернативно, ΝΗ-Υ-К³ вместе образуют ΝΗ2;

К², К⁴ и К⁵ независимо обозначают необязательно замещенное 5-12-членное карбоциклическое кольцо, гетероциклическое кольцо, арил или гетероарил или

К⁴ обозначает Н, С1-С₆-алкил, С₂-С₆-алкенил, С₂-С₆-алкинил или -СК= , где Р обозначает С или Ν и кольцо Е вместе с Р образуют необязательно замещенное 5-12-членное моноциклическое или конден сированное кольцо;

К⁶ и К⁷ независимо обозначают Н, С1-С₆-алкил, С₂-С₆-алкенил, С₂-С₆-алкинил или -(СК₂)₁-К⁵;

- 4 016199 каждый К обозначает Н или С₁-С₆-алкил, С₂-Сб-алкенил или С₂-С₆-алкинил;

равно 0-6;

к, т, η и р независимо равны 1-6;

х равно 0-4;

при условии, что К⁴ обозначает пиперидинил, если ΝΗ-Υ -К³ вместе образуют ΝΗ2; и также при условии, что К⁵ обозначает пиперидинил, если В обозначает (СК2)_к-К⁵.

В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (2)

в которой К² и 1 независимо обозначают необязательно замещенный 6-членный арил;

К³ обозначает С₁-С₆-алкил, С₂-С₆-алкенил, С₂-С₆-алкинил или -(СК₂)₁-К⁵ или

ΝΗ-Υ-К³ вместе образуют ΝΗ₂;

каждый К в (СК₂) обозначает Н или С₁-С₆-алкил и т, η и р независимо равны 1-2.

Альтернативно, к, т, η и р в приведенных выше формулах (1) и (2) могут независимо равняться 0-6. В предпочтительных примерах к в формуле (1) равно 2-3 и 1 обозначает гетероарил, такой как тиофенил. В других альтернативных вариантах осуществления Υ в формулах (1) и (2) может обозначать -СО-.

В каждой из приведенных выше формул 1 также может быть выбран из группы, включающей

где один или большее количество Ζ¹, Ζ², Ζ³, Ζ⁴, Ζ⁵, Ζ⁶ и Ζ⁷ обозначает гетероатом, выбранный из группы, включающей Ν, ΝΒ, О и 8, где К обозначает Н или С₁-С₆-алкил, и другие Ζ¹-Ζ⁷ обозначают СН.

В некоторых примерах по меньшей мере два из Ζ¹, Ζ², Ζ³, Ζ⁴, Ζ⁵, Ζ⁶ и Ζ⁷ обозначают гетероатом, выбранный из группы, включающей Ν, ΝΕ.. О и 8, где К обозначает Н или С₁-С₆-алкил, и другие Ζ¹-Ζ⁷ обозначают СИ.

В приведенных выше формулах (1) и (2), в которых каждый необязательно замещенный фрагмент может содержать в качестве заместителей галоген, =О, аминогруппу, гуанидинил, амидиновую группу, необязательно замещенную С₁-С₆-алкоксигруппу; С₁-С₆-алкил, С₂-С₆-алкенил или С₂-С₆-алкинил, каждый из которых необязательно может быть галогенирован или необязательно может содержать атом углерода, который может быть замещен или заменен посредством Ν, О или 8; СО₂К⁸, -О-(СК2)1-С(О)-К⁸; -(СК2)₁-К⁸, -(СК2)1-С(О)-К⁸ или -(СК2)₁-8О₂-К⁸; или их комбинации, где каждый К⁸ обозначает Н, С₁-С₆алкил или необязательно замещенное карбоциклическое кольцо, гетероциклическое кольцо, арил или гетероарил.

Настоящее изобретение также относится ко всем подходящим изотопозамещенным вариантам соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, или их фармацевтически приемлемым солям. Изотопозамещенный вариант соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, или его фармацевтически приемлемой соли определяется как такой, в котором по меньшей мере один атом заменен на атом, обладающий таким же атомным номером, но атомной массой, отличающейся от атомной массы, обычно обнаруживаемой в природе. Примеры изотопов, которые можно включать в соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, и их фармацевтически приемлемые соли, включают, но не ограничиваются только ими, изотопы водорода, углерода, азота и кислорода, такие как ²Н, ³Н, ¹³С, ¹⁴С, ¹⁵Ν, ¹⁷О, ¹⁸О, ³⁵8, ¹⁸Р и ³⁶С1. Некоторые изотопозамещенные варианты соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, и их фармацевтически приемлемых солей, например, такие, в которые включены радиоактивные изотопы, такие как ³Н или ¹⁴С, применимы в лекарственных средствах и/или для исследовании распределения в соответствующих тканях. В предпочтительных примерах изотопы ³Η и ¹⁴С можно использовать вследствие легкости их приготовления и обнаружения. В других примерах замещение изотопами, такими как ²Н, может обеспечить некоторые терапевтические преимущества, обусловленные большей метаболической стабильностью, например увеличением периода полувыведения ίη νίνο или уменьшением необходимой дозы. Изотопозамещенные варианты соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, или их фармацевтически приемлемые соли обычно можно получить по стандартным методикам с использованием соответствующих изотопозамещенных вариантов подходящих реагентов.

- 5 016199

Соединения и композиции, предлагаемые в настоящем изобретении, можно применять для модулирования активирующей канал протеазы. Примеры активирующих канал протеаз, которые можно модулировать с использованием соединений и композиций, предлагаемых в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются только ими, простазин, РК8822, ТМРК8811 (например, ТМРК8811В, ТМРК8811Е), ТМРВ882, ТМРВ883, ТМРВ884 (МТ8Р-2), матриптазу (МТ8Р-1), САР2, САР3, трипсин, катепсин А и нейтрофильную эластазу. Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, также могут ингибировать активность протеаз, которые стимулируют активность ионных каналов, таких как эпителиальный натриевый канал, и их можно использовать для лечения связанных с САР заболеваний.

Фармакология и применение.

Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, модулируют активность активирующей канал протеазы, в частности трипсиноподобных серинпротеаз, таких как простазин, и как таковые они применимы для лечения заболеваний или нарушений, при которых простазин, например, способствует патологии и/или симптоматике заболевания.

Заболевания, опосредуемые ингибированием активирующей канал протеазы, в частности трипсиноподобной серинпротеазой, такой как простазин, включают заболевания, связанные с регулированием объемов жидкостей, проходящих через эпителиальные мембраны. Например, объем жидкости, находящейся на поверхности дыхательных путей, является ключевым регулятором мукоцилиарного клиренса и поддержания легких в здоровом состоянии. Ингибирование активирующей канал протеазы будет стимулировать накопление жидкости на слизистой стороне эпителия дыхательных путей и тем самым стимулировать удаление слизи и предупреждать накопление слизи и мокроты на тканях дыхательных путей (включая дыхательные пути легких). Такие заболевания включают заболевания органов дыхания, такие как муковисцидоз, первичная цилиарная дискинезия, хронический бронхит, хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ), астма, инфекции дыхательных путей (острые и хронические; вирусные и бактериальные) и карцинома легких. Заболевания, опосредуемые ингибированием активирующих канал протеаз, также включают заболевания, не представляющие собой заболевания органов дыхания, которые связаны с аномальным регулированием перемещения жидкости через эпителий, возможно, включая аномальные физиологические характеристики защитных жидкостей, находящихся на их поверхности, например ксеростомию (сухость слизистой оболочки рта) или сухой кератоконъюнктивит (сухость слизистой оболочки глаз). Кроме того, регулирование ЕИаС посредством САР в почках можно использовать для стимулирования диуреза и тем самым вызывать гипотензивный эффект.

Хроническое обструктивное заболевание легких включает хронический бронхит или связанную с ним одышку, а также осложнение гиперреактивности дыхательных путей вследствие лечения другими лекарственными средствами, в частности применения другой ингаляционной лекарственной терапии. Настоящее изобретение также относится к лечению бронхита любого типа или генеза, включая, например, острый, арахиновый, катаральный, крупозный, хронический или гнойный туберкулезный бронхит.

Астма включает наследственную астму (неаллергическую) и приобретенную (аллергическую) астму, слабую, средней тяжести, тяжелую астму, бронхиальную астму, астму напряжения, профессиональную астму и астму, вызванную бактериальной инфекцией. Астма также включает патологическое состояние, называющееся бронхит младенцев, которое наблюдается у субъектов, например, в возрасте менее 4 или 5 лет, у которых наблюдается свистящее дыхание и которым поставлен или может быть поставлен диагноз бронхит младенцев, установившаяся категория пациентов, вызывающих большую обеспокоенность медиков, которых в настоящее время часто называют страдающими от зарождающейся астмы или ранней стадии астмы.

Применимость ингибитора активирующей канал протеазы, такого как ингибитор простазина, для лечения заболевания, опосредуемого ингибированием активирующей канал протеазы, можно исследовать путем определения ингибирующего воздействия ингибитора активирующей канал протеазы по методикам, описанным ниже, и по методикам, известным в данной области техники.

В соответствии с вышеизложенным настоящее изобретение также относится к способу предупреждения или лечения любого из заболеваний или нарушений, описанных выше, у субъекта, нуждающегося в таком лечении, и этот способ включает введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества соединения формулы (1) или (2) или его фармацевтически приемлемой соли. Для любого из указанных случаев применения необходимая доза меняется в зависимости от пути введения, конкретного подвергающегося лечению патологического состояния и необходимого эффекта (см. ниже Введение и фармацевтические композиции).

- 6 016199

Введение и фармацевтические композиции.

Обычно соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, вводят в терапевтически эффективных количествах посредством любого из обычных и приемлемых путей, известных в данной области техники, по отдельности или в комбинации с одним или большим количеством терапевтических средств.

Ингибиторы активирующей канал протеазы, предлагаемые в настоящем изобретении, также применимы в качестве совместно применяющихся терапевтических средств, предназначенных для использования в комбинации с другим лекарственным веществом. Например, ингибитор активирующей канал протеазы можно использовать в комбинации с противовоспалительным, бронхолитическим, антигистаминным или противокашлевым средством, антибиотиком или ДНКазой. Ингибитор активирующей канал протеазы и другое терапевтическое средство могут находиться в одной или разных фармацевтических композициях. Ингибитор активирующей канал протеазы можно смешать с другим терапевтическим средством в фиксированной фармацевтической композиции или можно вводить отдельно, до, одновременно или после другого терапевтического средства. Комбинацию можно использовать, в частности, для лечения муковисцидоза или обструктивных или воспалительных заболеваний дыхательных путей, таких как указанные выше в настоящем изобретении, например, в качестве средств, усиливающих терапевтическую активность таких лекарственных средств, или в качестве средств, обеспечивающих снижение необходимой дозы или ослабление возможных побочных эффектов таких лекарственных средств.

Подходящие противовоспалительные лекарственные средства включают стероиды, в частности глюкокортикостероиды, такие как будезонид, бекламетазон дипропионат, флутиказон пропионат, циклезонид или мометазонфуроат, или стероиды, описанные в АО 02/88167, АО 02/12266, АО 02/100879, АО 02/00679 (в частности, примеры 3, 11, 14, 17, 19, 26, 34, 37, 39, 51, 60, 67, 72, 73, 90, 99 и 101), АО 03/35668, АО 03/48181, АО 03/62259, АО 03/64445, АО 03/72592, АО 04/39827 и АО 04/66920; нестероидные агонисты глюкокортикоидного рецептора, такие как описанные в БЕ 10261874, АО 00/00531, АО 02/10143, АО 03/82280, АО 03/82787, АО 03/86294, АО 03/104195, АО 03/101932, АО 04/05229, АО 04/18429, АО 04/19935 и АО 04/26248; антагонисты ЬТВ4, такие как монтелукаст и зафирлукаст; ингибиторы РБЕ4, такие как циломиласт (АРИФЛО® 61ахо8тййК1ше), РОФЛУМИЛАСТ® (Вук Ои1беп),У-11294А (Иарр), ΒΑΥ19-8004 (Вауег), 8СН-351591 (8е11еппд-Р1о1щ11). АРОФИЛЛИН® (А1тгга11 Ртобеккатта), РБ189659/РБ168787 (Ратке-Баук), ААБ-12-281 (А§1а Меб1са), СБС-801 (Се1депе), 8е1С1Б(ТМ) СС-10004 (Се1депе), УМ554/ИМ565 (УетпаШ), Т-440 (ТапаЬе), КА-4490 (Куо^а Накко Коду о), и описанные в АО 92/19594, АО 93/19749, АО 93/19750, АО 93/19751, АО 98/18796, АО 99/16766, АО 01/13953, АО 03/104204, АО 03/104205, АО 03/39544, АО 04/000814, АО 04/000839, АО 04/005258, АО 04/018450, АО 04/018451, АО 04/018457, АО 04/018465, АО 04/018431, АО 04/018449, АО 04/019944, АО 04/019945, АО 04/045607 и АО 04/037805; и антагонисты аденозинового рецептора А2В, такие как описанные в АО 02/42298, которые во всей своей полноте включены в настоящее изобретение в качестве ссылки.

Подходящие бронхолитические лекарственные средства включают агонисты бета-2адренорецептора, такие как албутерол (салбутамол), метапротеренол, тербуталин, салметерол фенотерол, прокатерол, формотерол, кармотерол, или их фармацевтически приемлемые соли; и соединения (в свободной форме или в форме соли или сольвата) формулы (1), описанные в АО 00/75114, соединение формулы но он соединения формулы (1), описанные в АО 04/16601 (в свободной форме или в форме соли или сольвата), и соединения, описанные в ЕР 1440966, 1Р 05025045, АО 93/18007, АО 99/64035, И8 2002/0055651, АО 01/42193, АО 01/83462, АО 02/66422, АО 02/70490, АО 02/76933, АО 03/24439, АО 03/42160,

АО 03/42164, АО 03/72539, АО 03/91204, АО 03/99764, АО 04/16578, АО 04/22547, АО 04/32921,

АО 04/33412, АО 04/37768, АО 04/37773, АО 04/37807, АО 04/39762, АО 04/39766, АО 04/45618,

АО 04/46083 и АО 04/80964 или их фармацевтически приемлемые соли, которые во всей своей полноте включены в настоящее изобретение в качестве ссылки.

Подходящие бронхолитические лекарственные средства также включают антихолинергические или антимускариновые средства, в частности ипатропийбромид, окситропийбромид, тиотропиевые соли и СНЕ 4226 (СЫещ), и гликопирролат, а также описанные в ЕР 424021, И8 3714357, И8 5171744, АО 01/04118, АО 02/00652, АО 02/51841, АО 02/53564, АО 03/00840, АО 03/33495, АО 03/53966, АО 03/87094, АО 04/018422 и АО 04/05285, которые во всей своей полноте включены в настоящее изобретение в качестве ссылки.

- 7 016199

Подходящие обладающие двойным действием противовоспалительные и бронхолитические лекарственные средства включают обладающие двойным действием агонисты бета-2адренорецептора/антагонисты мускарина, такие как раскрытые в И8 2004/0167167, XVО 04/74246 и АО 04/74812.

Подходящие антигистаминные лекарственные средства включают цетиризингидрохлорид, ацетаминофен, клемастин фумарат, прометазин, лоратидин, деслоратидин, дифенгидрамин и фексофенадингидрохлорид, активастин, астемизол, азеластин, эбастин, эпинастин, мизоластин и тефенадин, а также раскрытые в 1Ρ 2004107299, АО 03/099807 и АО 04/026841, которые во всей своей полноте включены в настоящее изобретение в качестве ссылки.

Подходящие антибиотики включают макролидные антибиотики, например тобрамицин (ΤΟΒΙ™).

Подходящие терапевтические средства типа ДНКазы включают дорназу-альфа (ПУЛЬМОЗИМ™), а высокоочищенный раствор рекомбинантной дезоксирибонуклеазы I человека I (рчДНКазы), которая селективно расщепляет ДНК. Дорназу-альфа используют для лечения муковисцидоз.

Другими полезными комбинациями ингибиторов активирующей канал протеазы с противовоспалительными лекарственными средствами являются комбинации с антагонистами хемокиновых рецепторов, например ССК-1, ССК-2, ССК-3, ССК-4, ССК-5, ССК-6, ССК-7, ССК-8, ССК-9 и ССК-10, СХСК1, СХСК2, СХСК3, СХСК4, СХСК5, в особенности с антагонистами ССК-5, такими как выпускающиеся фирмой 8с11сппд-Р1о1щ11 антагонисты 8С-351125, 8СН-55700 и 8СН-Э, выпускающиеся фирмой Такеба антагонисты, такие как Ы-[[4-[[[6,7-дигидро-2-(4-метилфенил)-5Н-бензоциклогептен-8ил]карбонил]амино]фенил]метил]тетрагидро-П,П-диметил-2Н-пиран-4-аминийхлорид (ТАК-770), и антагонисты ССК-5, описанные в И8 6166037, АО 00/66558, АО 00/66559, АО 04/018425 и АО 04/026873, которые во всей своей полноте включены в настоящее изобретение в качестве ссылки.

Для лечения заболевания, опосредуемого ингибированием простазина, в контексте настоящего изобретения ингибитор активирующей канал протеазы, предлагаемый в настоящем изобретении, в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли, можно вводить в виде фармацевтических композиций любым обычным путем, в частности энтерально, например перорально, например в виде таблеток или капсул или в жидкой форме, парентерально, например в виде растворов или суспензий для инъекций, или назально, например в виде аэрозоля или другой распыляемой композиции с использованием подходящего устройства введения в нос, например назального распылительного устройства, такого как известные в данной области техники, или путем ингаляции, в особенности для использования с устройством типа небулайзер.

Ингибитор активирующей канал протеазы можно вводить в фармацевтической композиции вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем, такие композиции могут представлять собой сухие порошки, таблетки, капсулы и жидкости, а также растворы для инъекции, растворы для вливания или суспензии для ингаляции, которые можно приготовить с использованием других вспомогательных ингредиентов и методик, известных в данной области техники.

Дозировка ингибитора активирующей канал протеазы в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли может зависеть от различных факторов, таких как активность и длительность воздействия активного ингредиента, тяжесть подвергающегося лечению патологического состояния, путь введения, вид, пол, этническое происхождение, возраст и масса тела субъекта и/или конкретное патологическое состояние. Типичная суточная доза, например, для перорального введения теплокровному животному, в частности человеку, массой примерно 75 кг, по оценке составляет от примерно 0,7 до примерно 1400 мг, более предпочтительно от примерно 5 до примерно 200 мг.

Эту дозу можно вводить, например, в виде разовой дозы или нескольких разделенных доз, составляющих, например, от 5 до 200 мг.

Если композиция представляет собой аэрозольный препарат, то он может содержать в качестве пропеллента, например, гидрофторалкан (НЕА), такой как НЕА134а или НЕА227 или их смесь, и может содержать один или большее количество сорастворителей, известных в данной области техники, таких как этанол (до 20 мас.%), и/или одно или большее количество поверхностно-активных веществ, таких как олеиновая кислота или сорбитантриолеат, и/или одно или большее количество наполнителей, таких как лактоза. Если композиция представляет собой сухой порошкообразный препарат, то она может содержать, например, ингибитор активирующей канал протеазы, обладающий частицами диаметром до 10 мкм, необязательно совместно с разбавителем или носителем, таким как лактоза, обладающим желательным распределением частиц по размерам, и соединение, которое способствует защите от ухудшения характеристик продукта вследствие влажности, например стеарат магния. Если композиция представляет собой препарат для распыления, то она может содержать, например, ингибитор активирующей канал протеазы, растворенный или суспендированный в разбавителе, содержащем воду, сорастворитель, такой как этанол или пропиленгликоль, и стабилизатор, которым может являться поверхностно-активное вещество.

- 8 016199

В предпочтительных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к соединениям формулы (1) или (2) в пригодной для вдыхания форме, например в виде аэрозоля или другой распыляемой композиции или в виде вдыхаемого измельченного вещества, например в микронизированной форме. Настоящее изобретение также относится к предназначенному для вдыхания лекарственному средству, включающему соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, в пригодной для вдыхания форме вместе с устройством для ингаляции; и устройство для ингаляции, содержащее соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, в пригодной для вдыхания форме.

Способы получения соединений, предлагаемых в настоящем изобретении.

Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, можно получить по методикам, приведенным в примерах.

В описанных реакциях реакционноспособные функциональные группы, если они необходимы в конечном продукте (например, гидроксигруппа, аминогруппа, иминогруппа, тиогруппа или карбоксигруппа), чтобы избежать их нежелательного участия в реакциях, могут быть защищены с помощью защитных групп, известных в данной области техники. В соответствии со стандартной практикой можно использовать обычные защитные группы, например, см. Т.У. Сгееие апф Р.С.М. Уи1к ίη РгоЮсРус Сгоирк ίη Огдаше Сйетщфу, ίοΐιη УФеу апф 8опк, 1991.

Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, также можно получить в виде фармацевтически приемлемой соли присоединения с кислотой по реакции соединения в форме свободного основания с фармацевтически приемлемой неорганической или органической кислотой. Альтернативно, фармацевтически приемлемую соль присоединения с основанием соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, можно получить по реакции соединения в форме свободной кислоты с фармацевтически приемлемым неорганическим или органическим основанием. Альтернативно, соли соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, можно получить с использованием солей исходных веществ или промежуточных продуктов.

Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, в форме свободной кислоты или свободного основания можно получить из соответствующей соли присоединения с основанием или соли присоединения с кислотой соответственно. Например, соединение, предлагаемое в настоящем изобретении, в форме соли присоединения с кислотой можно превратить в соответствующее свободное основание путем обработки подходящим основанием (например, раствором гидроксида аммония, гидроксидом натрия и т.п.) Соединение, предлагаемое в настоящем изобретении, в форме соли присоединения с основанием можно превратить в соответствующую свободную кислоту путем обработки подходящей кислотой (например, хлористо-водородной кислотой и т.п.).

Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, в неокисленной форме можно получить из Ν-оксидов соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, путем обработки восстановительным реагентом (например, серой, диоксидом серы, трифенилфосфином, борогидридом лития, борогидридом натрия, трихлоридом, трибромидом фосфора и т. п.) в подходящем инертном органическом растворителе (например, ацетонитриле, этаноле, водном диоксане и т.п.) при температуре от 0 до 80°С.

Пролекарственные производные соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, можно получить по методикам, известным специалисту с общей подготовкой в данной области техники (дополнительные подробности см., например, в публикации 8аи1шег е! а1. (1994), Вюогдаше апф МеФюша1 С11ет151гу ЬеФегк, νοί. 4, р. 1985). Например, подходящие пролекарства можно получить по реакции не являющегося производным соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, с подходящим карбамилирующим реагентом (например, 1,1-ацилоксиалкилкарбанохлоридатом, паранитрофенилкарбонатом и т. п.).

Защищенные производные соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, можно получить по методикам, известным специалисту с общей подготовкой в данной области техники. Подробное описание методик, использующихся для образования защитных групп и их удаления, приведено в публикации Т.У. Сгеепе, Рго1есФпд Сгоирк ίη Огдаше Сйетщфу, 3^гф еФйюп, ίοΐιη УФеу апф 8опк, 1пе., 1999.

Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, обычно можно получить или сформировать способом, предлагаемым в настоящем изобретении, в виде сольватов (например, гидратов). Гидраты соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, обычно можно получить путем перекристаллизации из смеси водного/органического растворителей с использованием органических растворителей, таких как диоксан, тетрагидрофуран или метанол.

Соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, можно получить в виде отдельных стереоизомеров по реакции рацемической смеси соединения с оптически активным разделяющим реагентом с образованием пары диастереоизомерных соединений, с разделением диастереоизомеров и извлечением оптически чистых энантиомеров. Хотя разделение энантиомеров можно проводить с использованием ковалентных диастереоизомерных производных соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, предпочтительными являются диссоциирующие комплексы (например, кристаллические диастереоизомерные соли). Диастереоизомеры обладают разными физическими характеристиками (например, температурами плавления, температурами кипения, растворимостями, реакционными способностями и т. п.) и их можно легко разделить с использованием этих различий. Диастереоизомеры можно разделить с по- 9 016199 мощью хроматографии или по методикам разделения, основанных на различиях растворимостей. Затем оптически чистый энантиомер вместе с разделяющим реагентом извлекают по любой эффективной методике, которая не приводит к рацемизации. Более подробное описание методик, применимых для выделения стереоизомеров соединений из рацемической смеси, приведено в публикации 1еап 1асцнс5. Апбге Со11с1. 8атие1 Н. Убеп, Епапботегк, Касета!е8 и ВекоШИопк, 1о1ш Уйеу апб 8оп§, 1пс., 1981.

Можно заключить, что соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, можно получить так, как в качестве примеров описано в примерах, и соединения формул (1) и (2) можно получить способом, который включает:

(a) необязательное превращение соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, в фармацевтически приемлемую соль;

(b) необязательное превращение соли соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, в несолевую форму;

(c) необязательное превращение неокисленной формы соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, в фармацевтически приемлемый Ν-оксид;

(б) необязательное превращение Ν-оксида соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, в неокисленную форму;

(е) необязательное выделение отдельного изомера соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, из смеси изомеров;

(1) необязательное превращение не являющегося производным соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, в фармацевтически приемлемое пролекарственное производное и (д) необязательное превращение пролекарственного производного соединения, предлагаемого в настоящем изобретении, в его форму, не являющуюся производным.

Хотя получение исходных веществ специально не описано, эти соединения являются известными или их можно получить по методикам, аналогичным известным в данной области техники, или так, как описано в приведенных ниже примерах. Специалист в данной области техники должен понимать, что указанные выше превращения являются только примерами методик получения соединений, предлагаемых в настоящем изобретении, и что также можно использовать другие хорошо известные методики. Настоящее изобретение дополнительно поясняется, но не ограничивается приведенными ниже промежуточными продуктами (эталонные соединения) и примерами, которые иллюстрируют получение соединений, предлагаемых в настоящем изобретении.

Эталонное соединение 1

1-В: 4-Пиперидинэтанол (1-А) (5 г, 39,7 ммоль) растворяют в ТГФ (тетрагидрофуран) (120 мл). Добавляют триэтиламин (5,6 мл, 40 ммоль) и раствор охлаждают до 0°С. Добавляют Вос₂О (9,59 г, 44 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Растворитель удаляют в вакууме и неочищенный остаток растворяют в этилацетате (120 мл). Раствор промывают 0,1н. раствором НС1 (3x100 мл) и рассолом (1x100 мл), сушат над Мд§О₄, фильтруют и растворитель выпаривают в вакууме и получают соединение 1-В в виде прозрачного масла.

1-С: К раствору спирта 1-В (2,39 г, 10,42 ммоль) в ДХМ (дихлорметан) добавляют трихлоризоциануровую кислоту (2,66 г, 11,46 ммоль) и раствор перемешивают и выдерживают при 0°С, затем добавляют каталитическое количество ТЕМРО. После добавления смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение 1 ч и затем фильтруют через целит®. Органическую фазу промывают насыщенным водным раствором №₂СО₃, затем 1н. раствором НС1 и рассолом. Органический слой сушат (Мд§О₄) и растворитель выпаривают и получают соединение 1-С.

- 10 016199

Ή-ЯМР (СИС1₃, 400 МГц) δ 9,72 (1Н, 8), 4,07-4,01 (2Н, т), 2,70-2,57 (2Н, т), 2,35-2,31 (2Н, т), 2,051,94 (1Н, т), 1,64-1,46 (2Н, т), 1,39 (9Н, 8), 1,30-1,02 (2Н, т).

1-Ό: К раствору триметилового эфира СЬх-а-фосфоноглицина (2,8 г, 8,45 ммоль) в ТГФ при -78°С добавляют 1,1,3,3-тетраметилгуанидин (1,022 мл, 8,14 ммоль). Через 10 мин добавляют альдегид 1-С (1,76 г, 7,76 ммоль). Раствор помещают в баню со льдом и выдерживают при 0°С в течение 1 ч и затем раствору дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают в течение еще 1 ч. Раствор разбавляют с помощью Е1ОАс, промывают 1 М раствором ИаН8О₄, сушат (Мд8О₄) и концентрируют в вакууме. Остаток очищают с помощью флэш-хроматографии на силикагеле, элюируя смесью этилацетат/гексан от 0 до 100%, и получают соединение 1-Ό в виде белого твердого вещества.

МС (масс-спектрометрия) т/ζ 333,2 (М+1).

Ή-ЯМР (СИС1₃, 400 МГц) δ 7,35-7,33 (5Н, т), 6,63 (1Н, 1, 1=8 Гц), 6,30 (1Н, Ь8), 5,12 (2Н, 8), 4,104,04 (2Н, т), 3,73 (3Н, 8), 2,67-2,62 (2Н, т), 2,14 (2Н, 1, 1=6,8 Гц), 1,63-1,46 (3Н, т), 1,43 (9Н, 8), 1,14-1,06 (2Н, т).

1-Е: В реактор Парра в атмосфере азота помещают соединение 1-Ό (1 г, 2,31 ммоль) и МеОН (100 мл). Раствор 3 раза вакуумируют и продувают азотом, затем добавляют катализатор, (Е,К)-этилИиРНО8-Вй(СОИ)трифлат (30 мг, 0,04 ммоль). Смесь выдерживают в атмосфере водорода под давлением, равным 60 фунт-сила/дюйм², при комнатной температуре в течение 24 ч. Через 24 ч превращение в соединение 1-Е завершается с ЭИ (энантиомерный избыток) >99%, растворитель удаляют в вакууме и неочищенный продукт очищают с помощью хроматографии на силикагеле (гексаны/Е1ОАс).

1-Е: Промежуточный продукт 1-Е растворяют в МеОН. Раствор продувают азотом и добавляют Рб/уголь (5 вес.%, Иеди88а). Смесь помещают в атмосферу водорода под давлением, равным 50 фунтсила/дюйм², при комнатной температуре и встряхивают в течение 24 ч. Смесь продувают азотом и фильтруют через целит®. Отфильтрованный осадок промывают с помощью МеОН и объединенные органические растворы концентрируют в вакууме. Добавляют гексаны и затем смесь выпаривают для азеотропной отгонки оставшегося метанола и получают соединение 1-Е в виде масла, которое используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

МС т/ζ 201,4 (М+1 - Вос).

Ή-ЯМР (СИС1₃, 400 МГц) δ 4,06-3,97 (2Н, т), 3,63 (3Н, 8), 3,36-3,31 (1Н, т), 2,63-2,50 (2Н, т), 1,701,61 (1Н, т), 1,61-1,43 (3Н, т), 1,36 (3Н, 8), 1,55 (6Н, 8), 1,34-1,15 (3Н, т), 1,02-1,97 (2Н, т).

1-О: Неочищенное соединение 1-Е (0,6 г, 1,99 ммоль) растворяют в ТГФ (10 мл) и к раствору добавляют 2,4,6-коллидин (315 мг, 2,38 ммоль) и метансульфонилхлорид (0,170 мл, 2,19 ммоль) и перемешивают в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляют с помощью Е1ОАс (50 мл) и раствор промывают 1 М раствором №Н8О.-| (2x25 мл), рассолом (25 мл) и сушат (Мд8О₄). Растворитель удаляют в вакууме и неочищенный остаток очищают с помощью флэш-хроматографии, используя градиентный режим смеси гексанов и Е1ОАс, и получают соединение 1-О.

МС т/ζ 279,4 (М+1 - Вос).

Ή-ЯМР (СИС1₃, 400 МГц) δ 5,60-5,42 (1Н, т), 3,99-3,96 (3Н, т), 3,68 (3Н, 8), 2,86 (3Н, т), 2,60-2,54 (2Н, т), 1,79-1,77 (1Н, т), 1,60-1,45 (2Н, т), 1,35 (9Н, 8), 1,35-1,26 (3Н, т), 1,16-0,95 (2Н, т).

1-Н: Соединение 1-0 (0,70 г, 1,84 ммоль) растворяют в диоксане (7 мл) и добавляют ЫОН-Н₂О (232 мг, 5,55 ммоль), растворенный в воде (4 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч. Растворитель выпаривают и остаток разбавляют с помощью Е1ОАс (25 мл) и промывают 1н. раствором №Н8О₄ (25 мл) и рассолом (25 мл) и сушат (Мд8О₄). Растворитель удаляют в вакууме и неочищенный остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле (градиентный режим гексаны/Е1ОАс) и получают эталонное соединение 1 в виде белого твердого вещества.

МС т/ζ 265,4 (М+1 - Вос).

Ή-ЯМР (СИС1₃, 400 МГц) δ 8,97 (1Н, широкий 8), 5,44 (1Н, б, 1=8,8 Гц), 4,15-3,90 (3Н, т), 2,94 (3Н, 8), 2,77-2,55 (2Н, т), 1,88-1,87 (1Н, т), 1,78-1,58 (3Н), 1,42-1,37 (12Н, т), 1,16-0,94 (2Н, т).

Эталонное соединение 2

Вос

Промежуточный продукт 1-Е омыляют с помощью Ь1ОН-Н₂О по той же методике, которая использована для получения соединения 1-Н.

МС т/ζ 421,5 (М+1).

Ή-ЯМР (СИС1₃, 400 МГц) δ 9,75 (1Н, широкий 8), 7,26-7,41 (5Н, т), 5,39 (1Н, 8), 5,10 (2Н, 8), 4,414,34 (1Н, т), 4,46-4,03 (2Н, т), 2,68-2,61 (2Н, т), 1,94-1,82 (1Н, т), 1,78-1,53 (3Н, т), 1,44 (9Н, 8), 1,441,19 (3Н, т), 1,09-1,03 (2Н, т).

- 11 016199

Эталонное соединение 3

3-В: Соединение 3-А (2 г, 9,28 ммоль) объединяют с СВг₄ (4,46 г, 13,47 ммоль) и трифенилфосфином (3,28 г, 12,54 ммоль) в ТГФ (0,2 М) и раствор перемешивают в течение ночи. Затем реакционную смесь фильтруют и растворитель выпаривают. При медленном добавлении неочищенной смеси к большому объему эфира осаждается значительная часть трифенилфосфиноксида. После фильтрования и концентрирования остаток очищают с помощью хроматографии (градиентный режим ЕЮЛс:гексаны) и получают соединение 3-В.

¹Н-ЯМР (СЭС1₃, 400 МГц) δ 4,05-3,99 (1Н, т), 3,83-3,78 (1Н, т), 3,27-3,24 (2Н, т), 2,84-2,77 (1Н, т), 2,66-2,59 (1Н, т), 1,91-1,74 (2Н, т), 1,67-1,56 (1Н, т), 1,42 (9Н, 8), 1,32-1,20 (2Н, т).

3-С: Смесь соединения 3-В (1 г, 3,6 ммоль) и КСЫ (281 мг, 4,3 ммоль) в безводном ДМФ (20 мл) перемешивают при кипячении с обратным холодильником в течение ночи. Остаток растворяют в ЕЮЛс (50 мл), последовательно промывают 1н. раствором ХаНБО₄ (2x50 мл) и рассолом (2x50 мл) и сушат над Мд§О₄. Растворитель выпаривают и неочищенное вещество очищают с помощью хроматографии (градиентный режим ЕЮЛс:гексаны) и получают соединение 3-С в виде масла.

^!Н-ЯМР (СЭС1₃, 400 МГц) δ 3,83-3,78 (1Н, т), 3,78-3,69 (1Н, т), 2,87-2,73 (2Н, т), 2,28-2,15 (2Н, т), 1,84-1,72 (2Н, т), 1,61-1,52 (1Н, т), 1,42-1,15 (11Н, т).

3-Ό: К раствору соединения 3-С (750 мг, 3,34 ммоль) в ТГФ (20 мл) при -78°С добавляют ДИБАЛ (диизобутилалюминийгидрид) (1 М раствор в ТГФ, 5 мл). Этой смеси дают нагреться до комнатной температуры и ее перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь охлаждают до 0°С и последовательно добавляют воду (0,2 мл), 15% водный раствор ЫаОН (0,2 мл) и воду (0,5 мл). После добавления Мд§О₄ смесь энергично перемешивают и фильтруют. Выпаривание растворителей дает соединение 3-Ό в виде бесцветного масла. Это соединение используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

^!Н-ЯМР (СЭС1₃, 400 МГц) δ 3,78-3,67 (1Н, т), 3,67-3,64 (1Н, т), 2,81-2,71 (1Н, т), 2,71-2,50 (1Н, т), 2,24-2,09 (2Н, т), 1,79-1,66 (2Н, т), 1,56-1,48 (1Н, т), 1,39-1,13 (11Н, т).

3-Е: Это соединение получают из соединения 3-Ό по методикам, аналогичным тем, которые описаны для получения эталонного соединения 1-Ό.

3-Е: Это соединение получают из соединения 3-Е по методикам, аналогичным тем, которые описаны для получения эталонного соединения 1-Е.

3-О: Это соединение получают из соединения 3-Е по методикам, аналогичным тем, которые описаны для получения эталонного соединения 1-О.

3-Н: Это соединение получают из соединения 3-0 по методикам, аналогичным тем, которые описаны для получения эталонного соединения 1-Н.

4-В: Гидрохлорид этилового эфира Ό-гомофениланилина (5,00 г, 20,5 ммоль) и ДИЭА (8,7 мл, 51,25 ммоль) растворяют в ТГФ (100 мл) и перемешивают при комнатной температуре. По каплям добавляют мезилхлорид (1,67 мл, 21,52 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 6 ч. ТГФ выпаривают и неочищенный остаток растворяют в ЕЮЛс (100 мл), промывают водой (100 мл), 1н. раствором НС1 (2x100 мл) и рассолом (100 мл) и сушат (Мд§О₄). Растворитель удаляют в вакууме и неочищенное вещество очищают с помощью флэш-хроматографии (гексаны:Е1ОАс) и

- 12 016199 получают этиловый эфир.

4-С: Этиловый эфир 4-В растворяют в диоксане (50 мл) и перемешивают при комнатной температуре. Добавляют Ь1ОН-Н₂О (1,00 мг, 24 ммоль), растворенный в воде (20 мл), и реакционную смесь перемешивают до исчезновения этилового эфира (по данным ТСХ (тонкослойная хроматография) и ЖХМС (жидкостная хроматография масс-спектрометрия)). Растворитель удаляют в вакууме и неочищенное вещество подвергают распределению между ЕЮЛс (50 мл) и 1н. раствором НС1 (50 мл). Водный слой экстрагируют с помощью ЕЮЛс (2x50 мл) и объединенные органические фазы промывают 1 М раствором №1Н8О₄ (2x50 мл) и рассолом (50 мл) и сушат над Мд§О₄. Растворитель выпаривают и неочищенное вещество очищают с помощью флэш-хроматографии (градиентный режим Е1ОЛс:гексаны) и получают эталонное соединение 4 в виде белого порошкообразного вещества.

Эталонное соединение 5

сн_э

Вос-Э-гомофениланилин (1,0 г, 3,58 ммоль) растворяют в ТГФ (10 мл) и к суспензии ΝαΗ (60% дисперсия в минеральном масле; 10,0 ммоль) в тетрагидрофуране (12 мл), в течение 20 мин по каплям добавляют воду (18 мкл, 0,72 ммоль), поддерживая внутреннюю температуру равной 20°С. Смесь перемешивают при той же температуре в течение 10 мин и в течение 20 мин добавляют диметилсульфат (1,05 мл, 6,44 ммоль), поддерживая температуру равной 20°С. Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч, затем в течение 10 мин реакцию останавливают 30% раствором гидроксида аммония (6 мл), поддерживая внутреннюю температуру равной 20°С. Перемешивание продолжают в течение еще 1 ч (для обеспечения полного разложения диметилсульфата). Смесь разбавляют с помощью ЕЮЛс (20 мл) и водой (20 мл). Органический слой отделяют, промывают водой (10 мл), сушат (Мд§О₄) и выпаривают в вакууме и получают эталонное соединение 5 в виде белого твердого вещества.

Эталонное соединение 6

6-В: Гидрохлорид этилового эфира Ό-гомофениланилина (6-А) (25,0 г, 102,5 ммоль) растворяют в 10% водном растворе Е1ОН (500 мл). Добавляют каталитическое количество 5% Ρΐι/С и реакционную смесь помещают в атмосферу Н₂ (1000 фунт-сила/дюйм²), перемешивают и нагревают до 50°С. Через 18 ч реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, устройство подачи Н₂ отсоединяют и давление в реакторе доводят до атмосферного. Катализатор фильтруют через целит® и растворитель удаляют в вакууме и получают гидрохлорид этилового эфира Ό-гомоциклогексиланилина в виде белого порошкообразного вещества.

6-С: Это соединение получают из соединения 6-В по методикам, аналогичным тем, которые описаны для получения эталонного соединения 4-В.

6-Ό: Это соединение получают из соединения 6-С по методикам, аналогичным тем, которые описаны для получения эталонного соединения 4-С.

Эталонное соединение 7

7-А: В круглодонную колбу, содержащую ТГФ (60 мл) и воду (20 мл), добавляют гидрохлорид этилового эфира Ό-гомоциклогексиланилина (3,83 г, 18,0 ммоль) и №(бензилоксикарбонилокси)сукцинимид (СЬ/-О8и) (4,49 г, 18,0 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре и добавляют Е)^ (10,1 мл, 72,0 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Прозрачный раствор разбавляют с помощью ЕЮАс (200 мл) и промывают 1н. раствором НС1 (3x100 мл) и рассолом (1x100 мл) и сушат над Мд§О₄. Растворитель выпаривают в вакууме и получают искомый продукт в виде белого твердого вещества, которое используют без дополнительной очистки.

- 13 016199

7-В: Это соединение получают из соединения 7-А по методикам, аналогичным тем, которые описаны для получения эталонного соединения 4-С.

Эталонное соединение 8

8-В: Тонкоизмельченный ΚΌΗ (19,4 г, 0,346 моль) растворяют в ДМСО (диметилсульфоксид) и перемешивают при комнатной температуре в течение 20 мин и затем охлаждают до 0°С. №Вос-транс-4Гидрокси-Ь-пролин (Вос-Нур-ОН, 8-А) (10 г, 43,3 ммоль) растворяют в ДМСО (10 мл) и добавляют к смеси и реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение еще 10 мин. Затем добавляют 4-хлорбензилхлорид (33 г, 0,204 моль) и реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение еще 15 мин. После этого баню со льдом удаляют и реакционной смеси дают нагреться до комнатной температуры и перемешивают в течение 4 ч. Реакционную смесь выливают в воду (300 мл) и реакционный сосуд промывают еще одной аликвотой воды (300 мл).

Объединенный водный слой экстрагируют эфиром (2x300 мл) и эфирный экстракт отбрасывают. Водный слой подкисляют до рН 2,3 с помощью 87% Н₃РО₄ и затем экстрагируют эфиром (3x300 мл). Объединенные эфирные экстракты промывают водой (2x400 мл) и рассолом (2x400 мл) и затем сушат над Мд8О₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток очищают с помощью хроматографии на силикагеле, элюируя смесью Е1ОЛс/гексаны (градиентный режим от 0 до 100%), и получают соединение

8-В в виде прозрачного масла.

МС т/ζ 256,1 (М+1 - Вос).

Ή-ЯМР (ДМСО-Э₆, 400 МГц) δ 7,39-7,31 (4Н, т), 4,52-4,40 (2Н, т), 4,16-4,10 (2Н, т), 3,48-3,41 (2Н, т), 2,40-2,30 (1Н, т), 2,03-1,94 (1Η, т), 1,39-1,34 (9Н, т).

8-С: К соединению 8-В добавляют раствор ТФК (трифторуксусная кислота) в дихлорметане (50/50) и смесь перемешивают до полного удаления группы Вос. Затем реакционную смесь концентрируют в вакууме и неочищенный остаток используют на следующей стадии без дополнительной очистки.

МС т/ζ 256,1 (М+1).

Ή-ЯМР (СЭС1₃, 400 МГц) δ 8,32 (1Н, широкий 8), 7,16-6,93 (4Н, т), 4,41-4,12 (4Н, т), 4,10-3,75 (2Н, т), 3,70-3,53 (1Η, т), 3,51-3,30 (1Η, т), 2,38-2,24 (1Η, т), 2,06-1,88 (1Н, т).

8-Ό: Промежуточный продукт 8-С растворяют в 200 мл раствора смеси 1,4-диоксан/Н₂О (1:1). Добавляют Ν;·ιΗίΌ₃ (17,9 г, 0,213 моль), затем Ртос-С1 (12 г, 46,3 ммоль). Смесь перемешивают в течение ночи. Затем раствор подкисляют 1н. раствором Ηί'Ί и осадок отфильтровывают и сушат (Мд8О₄) и получают соединение 8-Ό в виде белого твердого вещества.

Ή-ЯМР (СЭС1₃, 400 МГц) δ 8,11 (1Η, широкий 8), 7,77-7,66 (2Н, т), 7,58-7,52 (2Н, т), 7,42-7,21 (8Н, т), 4,54-4,26 (4Н, т), 4,24 (1Η, 1, 1=7,2 Гц), 4,23-4,10 (1Η, т), 3,69-3,61 (2Н, т), 2,50-2,38 (1Η, т), 2,24-2,12 (1Н, т).

Эталонное соединение 9

Для осуществления приведенной выше схемы реакций используют следующие реагенты:

(a) 8ОС12 (3,0 экв.), МеОН, 0°С, 100%;

(b) мезилхлорид (1,2 экв.), Ε1₃Ν (3,0 экв.), каталитическое количество ДМАП, ТГФ, 23°С, 79%;

(c) катализатор реакции обмена Ηονονά;·ι-ΟπΛ№ (8 мол.%), Ы-Вос-4-метиленпиперидин (3,0 экв.), ДХМ, 40°С, 51%;

(6) МОЩ диоксаны, Н₂О, 23°С, 100%.

- 14 016199

9-А: Ό-Аллилглицин (5,03 г, 43,73 ммоль, 1,0 экв.) суспендируют в метаноле (70 мл) в бане с водой и льдом. В течение 10 мин по каплям добавляют тионилхлорид (9,6 мл, 131,19 ммоль, 3,0 экв.). Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры и степень завершения реакции оценивают с помощью ЖХ/МС. Растворитель выпаривают и полученное белое твердое вещество, соединение 9-А, непосредственно используют на следующей стадии.

9-В: Гидрохлорид метилового эфира Ό-аллилглицина (9-А, 7,20 г, 43,73 ммоль), Εΐ₃Ν (18 мл, 131,19 ммоль, 3,0 экв.) и ДМАП (4-диметиламинопиридин) (10 мг, каталитическое количество) растворяют в ТГФ (110 мл) и перемешивают при комнатной температуре. По каплям добавляют мезилхлорид (4,0 мл, 52,48 ммоль, 1,2 экв.) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 6 ч. ТГФ выпаривают и неочищенный остаток растворяют в ЕЮАс (100 мл) и промывают водой (100 мл), 1н. раствором НС1 (2x100 мл) и рассолом (100 мл) и сушат (Мд30₄). Растворитель удаляют в вакууме и неочищенное вещество очищают с помощью флэш-хроматографии (гексаны:ЕЮАс) и получают соединение 9-В в виде желтого масла.

9-С: К соединению 9-В (2,15 г, 10,37 ммоль, 1,0 экв.) с помощью шприца добавляют безводный дихлорметан (10 мл, 0,1 М) и в атмосфере азота катализатор реакции метатезиса Ноуеуба-СгиЬЬк 2-го поколения, [(1,3-бис-(2,4,6-триметилфенил)-2-имидазолидинилиден)дихлор(о-изопропоксифенилметилен)рутений(11)дихлорид (510 мг, 0,815 ммоль, 8 мол.%)]. С помощью шприца добавляют №Вос-4метилетпиперидин (6 мл, 31,11 ммоль, 3,0 экв.) и к реакционному сосуду присоединяют обратный холодильник и смесь нагревают при 40°С в течение 12 ч. После окончания реакции по данным ЖХ/МС реакционную смесь непосредственно очищают с помощью системы автоматической очистки на силикагеле (0-100% этилацетат в гексанах) и получают соединение 9-С в виде темно-зеленого масла.

МС т/ζ 277,2 (М-Вос+1).

Эталонное соединение 9: Омыление соединения 9-С проводят по методике, описанной выше для получения эталонного соединения 4.

Эталонное соединение 10

Эталонное соединение 10 получают по методикам, аналогичным тем, которые описаны для получения эталонного соединения 8.

Пример 1

1-А: Загрузка смолы РАЬ: 5-Циано-2-метиламинотиофен (3 экв.) добавляют к раствору смолы (1 мэкв./г) в ДМФ (диметилформамид) в присутствии АсОН (8 экв.). Смесь встряхивают в течение 1 ч,

- 15 016199 затем добавляют №1Н(АсО)₃ (3 экв.) и смеси дают реагировать в течение ночи. Затем смолу промывают с помощью ДМФ (х2), ДХМ (х2), МеОН (х2) и ДХМ (х2).

1-В: Аминокислоту 8-Ό с защитной группой Ртос (3 экв.) добавляют к 200 мг смолы 1-А в ДМФ в присутствии НОВ! (1-гидроксибензотриазол) (3,5 экв.) и ДИК (диизопропилкарбодиимид) (3,5 экв.). Смесь встряхивают в течение 3 ч. Смолу промывают с помощью ДМФ (х2), ДХМ (х2), МеОН (х2) и ДХМ (х2).

1-С: Смолу встряхивают в течение 30 мин в 20% растворе пиперидина в ДМФ и промывают с помощью ДМФ (х2) и ДХМ (х2).

1-Ό: Аминокислоту вводят в реакцию сочетания со смолой 1-С по методике, аналогичной методике 1-В.

1-Е: Раствор гидроксиламингидрохлорида (40 экв.) и ДИЭА (диизопропилэтиламин) (40 экв.) в ДМФ добавляют к смоле 1-Ό и смесь встряхивают в течение ночи. Смолу промывают с помощью ДМФ (х2), ДХМ (х2), МеОН (х2) и ДХМ (х2).

1-Р: К раствору смолы 1-Е в ДХМ добавляют уксусный ангидрид (10 экв.). Смесь встряхивают в течение 2 ч и затем промывают с помощью ДХМ (х2), ДМФ (х2) и ДХМ (х2).

1-С. Смолу 1-Р промывают безводным ТГФ (х2). Затем в атмосфере азота добавляют раствор 8т1₂ (0,1 М в ТГФ). Смесь встряхивают в течение 2 ч и смолу промывают с помощью ДМФ (х2), МеОН (х2) ДМФ (х2) и ДХМ (х2).

1-Н: Конечное соединение 1-Н получают путем отщепления от смолы в присутствии раствора ТФК/ДХМ/Н₂О (45:45:10). Фильтрат концентрируют в вакууме, растворяют в ацетонитриле и очищают с помощью ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография) с обращенной фазой (градиентный режим Н₂О-АСЫ). После лиофилизации получают соль соединения 1-Н с ТФК в виде белого порошкообразного вещества.

МС т/ζ 639,5 (М+1).

Ή-ЯМР (С1);С\. 400 МГц) δ 9,30 (1Н, 8), 7,89 (1Н, 8), 7,72 (1Н, б, 1=4 Гц), 7,36-7,26 (4Н, т), 7,09 (1Н, б, 1=4 Гц), 6,06 (1Н, б, 1=8 Гц), 4,60-4,41 (5Н, т), 4,33-4,21 (1Н, т), 4,11-4,05 (1Н, т), 3,82-3,65 (2Н, т), 3,29-3,27 (2Н, т), 2,86 (3Н, 8), 2,86-2,76 (2Н, т), 2,46-2,36 (1Н, т), 2,15-2,07 (1Н, т), 1,75-1,68 (2Н, т), 1,63-1,46 (2Н, т), 1,46-1,31 (2Н, т), 1,31-1,27 (3Н, т).

Примеры 2-31.

Соединения примеров 2-31 синтезируют по методикам, аналогичным тем, которые описаны для синтеза соединения примера 1.

Пример 32

стадия Е

н₃с' Н

Реагент 32-А получают из бензиламина и смолы Ра1 по методикам, аналогичным тем, которые описаны для получения соединения примера 1-А. Промежуточный продукт 32-В получают из иммобилизированного соединения 32-А по методикам, аналогичным тем, которые описаны для получения соединения примера 1-В. Промежуточные продукты 32-С и 32-Ό получают из связанных с подложкой соединений 32-В и 32-С соответственно по методикам, аналогичным тем, которые описаны для получения со

- 16 016199 единений примеров 1-С и 1-Ό соответственно. Конечное соединение 32-Е получают путем отщепления соединения 32-Ό от смолы по методикам, аналогичным тем, которые описаны для получения соединения примера 1-Н.

Примеры 33-54.

Соединения примеров 33-54 синтезируют по методикам, аналогичным тем, которые описаны для синтеза соединения примера 32.

Пример 55

55-А: К раствору гидрохлорида метилового эфира 8-С (1,6 г, 5,2 ммоль), РуВОР (бензотриазол-1илокси-трис-(пирролидино)фосфонийгексафторфосфат) (3,79 г, 7,28 ммоль) и ДИЭА (2,7 мл, 15,6 ммоль) в ДХМ (50 мл) добавляют соединение 1-Н (1,9 г, 5,2 ммоль). Смесь перемешивают в течение ночи, затем промывают 1 М раствором ЫаН8О₄ (2x50 мл), насыщенным раствором ЫаНСО₃ (2x50 мл) и рассолом (1x50 мл). Органическую фазу сушат над Мд§0₄ и концентрируют в вакууме. Остаток очищают с помощью флэш-хроматографии (гексаны:Е1ОАс) и получают соединение 55-А в виде белого твердого вещества.

МС т/ζ 616,2 (М+1).

55-В: Метиловый эфир 55-А (2,2 г, 3,72 ммоль) растворяют в диоксане (20 мл) и перемешивают при комнатной температуре. Добавляют Ь1ОН-Н₂О (467 мг, 11,12 ммоль), растворенный в воде (50 мл), и реакционную смесь перемешивают до исчезновения метилового эфира (по данным ТСХ и ЖХМС). Раствор подкисляют с помощью добавления 1 М раствора ЫаН§0₄ и экстрагируют с помощью ЕЮАс (2x50 мл). Объединенные органические фазы промывают рассолом (50 мл) и сушат над Мд§О₄. Растворитель выпаривают и получают соединение 55-В в виде белого порошкообразного вещества.

МС т/ζ 602,2 (М+1).

Ή-ЯМР (СОС1₃, 400 МГц) δ 7,33 (2Н, б, 1=8,4 Гц ), 7,22 (2Н, б, 1=8,4 Гц ), 5,87 (1Н, б, 1=9,6 Гц ), 4,43-4,57 (4Н, т), 4,29-4,32 (1Н, т), 3,95-4,17 (4Н, т), 3,87-3,93 (1Н, т), 3,60-3,64 (1Н, т), 2,89 (3Н, 8), 2,58-2,64 (2Н, т), 2,45-2,51 (1Н, т), 2,15-2,51 (1Н, т), 1,48-1,70 (3Н, т), 1,44 (9Н, 8), 1,22-1,35 (2Н, т), 0,95-1,10 (2Н, т).

55-С: К раствору соединения 55-В (60 мг, 0,1 ммоль) в дихлорметане (10 мл) добавляют НАТи (2-(7-аза-1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуронийгексафторфосфат) (55 мг, 0,14 ммоль), ДИЭА (0,035 мл, 0,2 ммоль) и 2,5-дихлорбензиламин (23 мг, 0,13 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, затем последовательно промывают 1 М раствором ЫаН8О₄ (10 мл), насыщенным раствором ЫаНСО₃ (10 мл) и рассолом (10 мл). Раствор сушат над Мд§О₄, фильтруют, выпаривают и непосредственно используют на следующей стадии.

МС т/ζ 659,2 (М+1 - Вос).

55-Ό: К раствору соединения 55-С в ДХМ медленно добавляют 50% раствор ТФК в ДХМ. Смесь перемешивают в течение 30 мин, затем растворители выпаривают и остаток растворяют в ацетонитриле и очищают с помощью ВЭЖХ с обращенной фазой. После лиофилизации растворителей получают соль соединения 55-Ό с ТФК в виде белого порошкообразного вещества.

МС т/ζ 659,2 (М+1).

Ή-ЯМР (СОС1₃, 400 МГц) δ 9,30 (1Н, Ь8), 8,56 (1Н, Ь8), 7,31 (1Н, б, 1=2 Гц ), 7,07-7,27 (6Н, т), 5,88 (1Н, б, 1=8,4 Гц ), 4,26-4,57 (6Н, т), 3,93-4,02 (1Н, т), 3,77-3,86 (1Н, т), 3,47-3,86 (1Н, т), 3,21-3,34 (5Н, т), 2,74 (3Н, 8), 2,49-2,88 (4Н, т), 2,17-2,36 (2Н, т), 1,18-1,73 (9Н, т).

- 17 016199

Примеры 56-70.

Соединения примеров 56-70 синтезируют по методикам, аналогичным тем, которые описаны для синтеза соединения примера 55.

В таблице приведены соединения формулы (1), описанные в примерах 1-70.

	Структура	Физические характеристики МС (т/ζ), элементный анализ и Н ЯМР 400 МГц (ДМСО-ф,)
1	УДс! N ν УэХ °=;δ-Ν 0 НЭС Н	МС т/ζ 639,5 (М + 1); 'н ЯМР (СО3СЫ, 400 МГц) б 9,30 (1Н, в), 7,89 (1Н, з), 7,72 (1Н, 4, ί = 4 Гц), 7,36-7,26 (4Н, т), 7,09 (1Н, 4, ,Т = 4 Гц), 6,06 (1Н, 4,1 = 8 Гц), 4,60-4,41 (5Н, т), 4,33-4,21 (1Н, т), 4,11-4,05 (1Н, т), 3,82-3,65 (2Н, т), 3,29-3,27 (2Н, т), 2,86 (ЗН, з), 2,86-2,76 (2Н, т), 2,46-2,36 (1Н, т), 2,15-2,07 (1Н, т), 1,75-1,68 (2Н, т), 1,63-1,46 (2Н, т), 1,46-1,31 (2Н, т), 1,31-1,27 (ЗН, т).
2	п и ДУ’ Ч Чих 0;5-Ν О Н3С н	МС т/ζ 701,2 (М + 1); Анализ: Рассчитано для С34Н,цВтГц)МбО1]52 (3 ГФК): С, 39,13; Н, 3,96; Ν, 8,21; Найдено: С, 39,24; Н, 4,25; Ν, 8,21; 1Н ЯМР (СОзСИ, 400 МГц) δ 9,99 (1Н, з), 7,95-7,74 (2Н, т), 7,74 (1Н, 4,1 = 4 Гц), 7,42-7,32 (ЗН, т), 7,11 (1Н, 4,1 = 4 Гц), 6,13 (1Н, 4,1 = 8,4 Гц), 4,59-4,35 (5Н, т), 4,15-4,08 (1Н, т), 4,15-4,02 (ΙΗ, т), 3,84-3,68 (2Н, т), 3,31-3,28 (2Н, т), 2,87-2,79 (5Н, т), 2,45-2,38 (1Н, т), 2,18-2,10 (1Н, т), 1,76-1,69 (2Н, т), 1,69-1,49 (2Н, т), 1,49-1,39 (2Н, т), 1,39-1,29 (ЗН, т).
3	Р. 'Д\-Вг 0 Гу'н г'ЧЧ ΝΗ2 Οΐ3-Ν О Н3С Н	МС ηι/ζ 352 [(М + 1)/2]

- 18 016199

					МС т/ζ 683,1 (Μ + 1); Анализ: Рассчитано для СздЕЕцБгР^МбО] 182 (3 ТФК): С, 39,81; Н, 4,13; Ν, 8,19;
	н ЛУ				Найдено: С, 40,48; Н, 4,34; Ν, 8,46; ’н
				ЯМР (СО3СЫ, 400 МГц) δ 9,81 (ΙΗ, δ),
	<ί				7,92-7,77 (2Н, ш), 7,71 (ΙΗ, 4, Д = 4 Гц),
4		ί	Λ	ΝΗ	7,49 (2Н, 4,1 - 8,4 Гц), 7,23 (2Н, 4, Д = 8
	Ν'γ'*'		'3'	νη2	Гц), 7,08 (1Н, й, Д = 4 Гц), 6,16-6,02 (1Н,
	ο, -7 '>. 0				т), 4,55-4,43 (5Н, т), 4,28 (1Н, з), 4,12-
	н3с η				4,05 (1Н, т), 3,80-3,69 (2Н, т), 3,273,24 (2Н, т), 2,84-2,70 (5Н, т), 2,422,33 (1Н, т), 2,11-2,03 (1Н, т), 1,761,62 (2Н, т), 1,62-1,46 (2Н, т), 1,461,39 (2Н, т), 1,38-1,18 (ЗН, т).
					МС т/ζ 673,2 (М + 1); *Н ЯМР (СО3С1М, 400 МГц) δ 10,07 (1Н, з), 7,72 (1Н, 4, Д =
	α4				4 Гц), 7,63-7,55 (2Н, т), 7,52 (1 Η, а, 1 =
	η χΛ	-С1			2 Гц), 7,46 (2Н, 4, Д = 8 Гц), 7,37 (1Н,
	οΖ				44, Д = 8 Гц, 2 Гц), 7,14 (1Н, 4, Д = 4 Гц),
5			Λ-	ΝΗ	5,88 (1Н, 4, 1 = 9,2 Гц), 4,68-4,50 (4Н,
			νη2	т), 4,46 (1Н, 1, Д = 7,6 Гц), 4,38 (1Н, 5),
	_ ° >—0			4,18-4,05 (1Н, т), 3,86-3,73 (2Н, т),
	Οϊ·θ_θ				3,31-3,28 (2Н, т), 2,85-2,76 (5Н, т),
	Η3Ο Η				2,50-2,43 (1Н, т), 2,22-2,12 (1Н, т), 1,81-1,66 (2Н, т), 1,65-1,48 (2Н, т), 1,48-1,39 (2Н, т), 1,39-1,23 (ЗН, т).
	Ρ. η ЛЭ /ΝΛ ο	--С1
6	1 η <- ΝΛγΝ		МС т/ζ 657,2 (Μ + 1)
	η ° ο			νη2
	°*8-Ν 0 Н3С Η

- 19 016199

н₃с Η

МС т/ζ 619,3 (Μ + 1); ’н ЯМР (СОзСЫ, 400 МГц) δ 10,01 (1Н, а), 7,73 (ΙΗ, ά, Л = 4 Гц), 7,69-7,55 (2Н, т), 7,17-7,24 (4Н, т), 7,12 (1Н, Ф, 1 = 4 Гц), 5,97 (1Н, 4,1 = 9,2 Гц), 4,56-4,40 (5Н, т), 4,30 (1Н, ₅), 4,14-4,09 (1Н, т), 3,82-3,70 (2Н, т), 3,30-3,24 (2Н, т), 2,85-2,77 (5Н, т), 2,43-2,34 (1Н, т), 2,34 (ЗН, 8), 2,17-2,08 (1Н,т), 1,79-1,71 (2Н, т), 1,68-1,50 (2Н, т), 1,50-1,39 (2Н, т), 1,35-1,26 (ЗН, т).

МС т/ζ 672,7 (Μ + 1)

н₃с н

МС т/ζ 673,1 (М + 1); Анализ:

Рассчитано для Сз4Н4зС12Е91ЯбО1282 (3 ТФК, 1 Н₂О): С, 39,50; Н, 4,19; Ν, 8,13; Найдено: С, 39,54; Н, 4,30; Ν, 7,89; 'н ЯМР (СОзСЧ 400 МГц) δ 10,02 (1Н, з), 7,70 (ΙΗ, ά, Ί = 4 Гц), 7,51 (2Н, а, I = 8 Гц), 7,23 (1Н, аа, Л = 8 Гц, 2 Гц), 7,12 (1Н, а, ί = 4 Гц), 5,86-5,78 (1Н, ш), 4,594,39 (5Н, т), 4,34-4,29 <1Н, т), 4,134,02 (1Н, т), 3,84-3,65 (2Н, т), 3,343,23 (2Н, т), 2,88-2,76 (5Н, т), 2,452,36 (1Н, т), 2,7-2,07 (ΙΗ, т), 1,81-1,67 (2Н, т), 1,67-1,46 (2Н, т), 1,46-1,36 (2Н, т), 1,36-1,24 (ЗН, т).

- 20 016199

11	Α-α Η < _/ ж <Γ^ ν Ск и ху/н /=\ г Ν -γΝ 5 ΝΗ2 μ 0 0 Η	МС т/ζ 695,3 (Μ + 1); !Η ЯМР (Οϋ3σΝ, 400 МГц) δ 9,82 (1Η, в), 7,69 (ΙΗ, 4, Д = 4 Гц), 7,53-7,45 (2Η, т), 7,43-7,49 (9Н, т), 7,10 (ΙΗ, ά, Д = 4 Гц), 6,22-6,14 (1Н, т); 5,06-4,87 (2Н, т), 4,60-4,44 (5Н, т), 4,32-4,18 (2Н, т), 3,88-3,72 (2Н, т), 3,35-3,24 (2Н, т), 2,92-2,77 (2Н, т), 2,45-2,34 (ΙΗ, т), 2,24-2,11 (1Н, т), 1,86-1,51 (4Н, т), 1,50-1,21 (5Н, т).
12	/Г%-осе3 Η ν Ьж Н3С Η	МС т/ζ 689,2 (М + 1);); 1II ЯМР (СОзСИ, 400 МГц) δ 10,05 (1Н, в), 7,867,81 (ЗН, т), 7,43 (1Н, <1,1 = 4 Гц), 7,43 (2Н, 4, Д = 8 Гц), 7,29 (2Н, 4,1 = 8 Гц), 7,11 (1Н, 4, Д = 4 Гц), 6,13 (Ш, 4,1 = 9,2 Гц), 4,61-4,43 (5Н, т), 4,33 (1 Η, 5), 4,194,11 (1Н, т), 3,86-3,70 (2Н, т), 3,293,27 )2Н, т), 2,85 (ЗН, δ), 2,89-2,80 (2Н, т), 2,45-2,36 (1Н, т), 2,19-2,09 (1Н, т), 1,81-1,64 <2Н, т), 1,64-1,50 (2Н, т), 1,50-1,43 (2Н, ш), 1,43-1,30 (ЗН).
13	Ε. XVе Η л Ο Η Ο-/Η ο ° / +η 0 °=5-Ν Ο Н3С Η	МС т/ζ 641,2 (М + 1); *Н ЯМР (0Ο30Ν, 400 МГц) δ 9,79 (1Н, в), 7,80 (1Н, в), 7,73 (1Н, 4, Д = 4 Гц), 7,67-7,52 (2Н, т), 7,51-7,38 (1Н, т), 7,12 (1Н, 4, Д = 4 Гц), 7,02-6,93 (2Н, т), 6,03 (1Н, 4, Д = 9,2 Гц), 4,62-4,48 (4Н, т), 4,43 (1Н, 1, Д = 7,6 Гц), 4,34 (1Н, в), 4,15-4,09 (1Н, т), 3.86- 3,82 (2Н, т), 3,32-3,29 (2Н, т), 2.86- 2,80 (5Н, т), 2,44-2,34 (1Н, т), 2,19-2,10 (1Н, т), 1,83-1,70 )2Н, т), 1,70-1,50 (2Н, т), 1,50-1,34 (2Н, т), 1,34-1,25 (ЗН, т).
14	ρ\ Βγ Ζ-ΝΗ X СиХМн ’ / Τ 8 νη2 ο7? 0 Οΐ3-Ν 0 Η30 Η	МС т/ζ 703,1 (М+1)

- 21 016199

				МС ш/ζ 639,2 (Μ + 1); ’н ЯМР (СОзСИ,
				400 МГц) δ 9,48 (ΙΗ, з), 8,15 (ΙΗ, δ),
	И ζ-О'			7,84 (ΙΗ, 5), 7,62-7,59 (ΙΗ, т), 7,46-7,25
	Λ '			(6Η, т), 6,05 (ΙΗ, 4,1 = 8,8 Гц), 4,74-
15	ДД н	ίΧ	ΖΝΗ	4,09 (5Η, т), 4,32 (1Н, т), 4,14-4,09 (1Н,
4 У/'		νη2	т), 3,87-3,70 (2Н, т), 3,32-3,24 (2Н, т),
	Ο ° №. о °»8-Ν 0 н3с Η			2,91-2,78 (5Н, т), 2,49-2,36 (1Н, т), 2,16-2,08 (1Н, т), 1,83-1,68 (2Н, т), 1,67-1,51 (2Н, т), 1,49-1,41 (2Н, т), 1,38-1,29 (ЗН, т).
				МС т/ζ 695,3 (М + 1); ’н ЯМР (СОзСЫ,
	ο ]			400 МГц) δ 9,47 (1Н, з), 8,12 (1Н, з),
	γΓ	\=Д		7,83 (1Н, з), 7,70-7,67 (1Н, т),7,47 (1Н,
				з), 7,40-7,25 (9Н, т), 6,40 (1Н, 4, 3 = 6,8
16		н ?		Гц), 5,03-4,76 (2Н, т), 4,60-4,39 (5Н, т),
	νη£	4,32-4,18 (2Н, т), 3,35-3,24 (2Н, т),
			2,91-2,75 (2Н, т), 2,48-2,38 (1Н, т),
	'—Ο Η			2,17-2,05 (1Н, т), 1,81-1,52 (4Н, т), 1,52-1,97 (5Н, ш).
				МС т/ζ 640,2 (М + 1); Анализ: Рассчитано для СззН^ОРд^ОцЗз (3 ТФК): С, 40,35; Н, 4,21; N, 9,98;' '
	η ЛУ			Найдено: С, 40,39; Н, 4,10; Ν, 10,00; ’н
			ЯМР (СОзСИ, 400 МГц) б 9,80 (1Н, з),
	/ Λ ό			8,43 (1Н, з), 8,17-7,80 (2Н, т), 7,72-7,61
17	Д ДД Η	Ι>-	ΝΗ	1Н, т), 7,40-7,12 (4Н, т), 5,87 (1Н, 4,1
	\гЧ^ о Д ~V ° 0-5-ν 0 Н3С Η	-№%Γ	νη2	= 9,2 Гц), 4,64-4,43 (5Н, т), 4,34-4,25 (1Н, т), 4,14-4,05 (1Н, т), 3,86-3,70 (2Н, т), 3,37-3,23 (2Н, т), 2,90-2,77 (5Н, т), 2,49-2,38 (1Н, т), 2,18-2,05 (1Н, т), 1,81-1,67 (2Н, т), 1,66-1,49 (2Н, т), 1,49-1,37 (2Н, т), 1,35-1,19 (ЗН, т).
	К η ДД ί ϋ °	-Вг
18	ДД η	ΓΎ	“^νη2	МС т/ζ 682,4 (Μ + 1)
	4 \-\-Ν
	4 0 Οϊ3-Ν 0
	НаС Η

- 22 016199

19	/ГЛу-С!	ΝΗ ΝΗ£	МС т/ζ 637,2 (Μ + 1)
Η '--' /ΝΛ ς чФ °=3-Ν 0 +,0 Η	Η 0	гу
					МС т/ζ 664,2 (Μ + 1); ’н ЯМР (СО3СЫ,
		θ'	-Вг		400 МГц) δ 7,55-7,26 (8Η, т), 6,03-5,91
	/К гГ				(ΙΗ, т), 4,58-4,40 (ЗН, т), 4,39-4,23
				'^νη2	(ЗН, т), 4,09-4,04 (ЗН, т), 3,84-3,70
20	', Ν' ο ° сЛ °*3-Ν 0	Η	Μ	(2Н, т), 3,34-3,27 (2Н, т), 2,86-2,79
				(5Н, т), 2,46-2,38 (1Н, т), 2,14-2,06
				(1Н, т), 1,83-1,67 (2Н, т), 1,67-1,48
	Η30 Η				(2Н, т), 10,48-1,42 (2Н, т), 1,42-1,25 (ЗН, т).
	ό °-'	Ο	-С1
			νη2
21		ΙΛ	1 Π . ,Α^Ν		МС т/х(М + 1)
	0° ’4Ο	0
	Ог5-Ы 0 н3с Η
					МС т/ζ 611,3 (М + 1); Анализ: Рассчитано для СззНзгРД^бОц^ (2 ТФК, 2 Н2О): С, 43,93; Н, 5,99; Ν, 9,61; Найдено: С, 43,80; Н, 5,60; Ν, 9,17; ’н
	н г>			ЯМР (СО3С14, 400 МГц) δ 9,34(1 Н, з),
	/У <				7,87-7,81 (2Н, т), 7,72 (1Н, 4, Ч = 3,6
22	1 Й		,ΝΗ	Гц), 7,60-7,34 (2Н, т), 7,10 (1Н, з, Ч =
	4	3,2 Гц), 6,07-5,98 (1Н, т), 4,56-4,47 (2Н,
	О 4	0			т), 4,37 (1Н, 1, Ч = 7,6 Гц), 4,12-4,02
	°=5-Ν 0 Н3С Η				(2Н, т), 3,79-3,61 (2Н, т), 3,35-3,32 (2Н, т), 3,27-3,18 (2Н, т), 2,91-2,82 (5Н, т), 2,36-2,26 (1Н, т), 2,09-1,98 (1Н, т), 1,84-1,81 (2Н, т), 1,75-1,64 (6Н, т), 1,58-1,10 (ЮН, т), 0,95-0,83 (2Н, т).

- 23 016199

23	А	МС т/ζ 661,3 (Μ+ 1)
О., \г о θ -Ά °*8-Ν 0 Н3С Н	н Ο-νχ О	ХУ^'З	ын νη2
		-О	-С1
24	н ζΝΛ О	Ί н	ον	ΝΗ	МСт/г(М+ 1)
	Ν'	-О^м		νη2
	η2ν с	)
					МС т/ζ 683,2 (Μ + 1); ’н ЯМР (ΟΡ^Ν, 400 МГц) δ 10,19(1Η, β), 7,93 (2Η, 0, ί =
			0		8,4 Гц), 7,73 (ΙΗ, ά, 1 = 4 Гц), 7,58 (2Η,
		ГУ	^-сН3		ά, 1 = 8,4 Гц), 7,52-7,40 (2Η, т), 7,15
	о				(1Н, а, I = 4 Гц), 5,81-5,73 (1Н, т). 4,74-
25	н	ХУ	ΝΗ νη2	4,61 (2Н, т), 4,57 (2Н, 6,1 = 5,2 Гц), 4,46 (1Н, 1, 1 = 7,6 Гц), 4,39-4,34 (1Н,
	о		т), 4,15-4,06 (1Н, т), 3,86-3,26 (2Н, т),
	°'3~Ν О				3,35-3,26 (2Н, т), 3,09 (ЗН, в), 2,89-2,77
	Н3С к				(5Н, т), 2,49-2,39 (1Н, т), 2,22-2,11 (1Н, т), 1,82-1,70 (2Н, т), 1,77-1,50 (2Н, га), 1,50 (2Н, т), 1,38-1,21 (ЗН, т).
		О'	XI
	/О 0
26		н ч N	|Л-	ΝΗ	МС т/ζ 638,2 (Μ + 1)
	о Ά	0		νη2
	°=δ“Ν о Н3С н

- 24 016199

- 25 016199

32	Η ζΝΛ 0 α * 1 °=8- Н3С	Ε.	МС т/ζ 653,2 (Μ + 1)
0, - ГГ 7~к Ν 0 Η	Η 0	X)
		Ε4
	Η		ГУ	-Вг
		0			ХС|
33			Η		МС т/ζ 687,3 (М +1)
		- \τ	<-Ν4		ж
	Ο Α II °-δ-	Οο	0
	н3с	Η
		Ε4	ГУ	-Вг
	Η
		<5
34			Η			МС т/ζ 668,3 (Μ + 1)
		-, Ν''			Ото
	0 л 11 0-5-	-νΗ	0		Γ>ν
	Н3С	Η
	Й	Ρ4	О'	-Βί
	ς
35			Η		о	МС т/ζ 659,3 (Μ + 1)
		- Ν'			3
	Ο	λΑ	0
	°'5	Ν 0
	Н3С	Η
		г
	Η Ν-^		о	-Вг
	Ώ
36			1 н		гггр	МС т/ζ 671,2 (М+ 1)
		-> Ν			40
	ο		0
	0=3	-Ν 0
	н3с	Η

- 26 016199

37	Е, УЛг-Вг н 0.. Ъдрлэс ο=ϊ-/Α 0 Н3С н	МС т/ζ 689,2 (Μ + 1)
38	Е. УЛг-Вг N / Ч. О'-гг-^^М о ° хА_ ° р θ'δ-Ν 0 Н3С н	МС т/ζ 689,2 (Μ + 1)
39	Еч ЧЧу-Вг Н ч О¥чч1С| о ° /_Ч. 0 Ог8-Ы 0 н3с ’н	МС т/ζ 687,2 (М+ 1)
40	Е. УЧ-Вг N / ’Х Ч 0γ№.ΧΧρ3 ОдСгХо 0 Н3С н	МС т/ζ 721,3 (Μ + 1)
41	Е< <А-^БГ ч О^мЧСХ о θ ^А. о °^8-Ν О Н3С Н	МСт/ζ 667,3 (М+ 1)

- 27 016199

42	ΥΧ-Βί	МС т/ζ 683,3 (М +1)
Н г—-1 /ΝΛ о Ν> 0 л—У о^-г/чэ н3с н	н о	-''-ΌΟΗ,
	р\
	н	гу	-Вг
	Ν-_ /
	/ Д 0
43	У, Ν'	н	XI	МС т/ζ 737,3 (М+ 1)
	0 лУ. Г»^1’ ' Χχ Οώ3-Ν 0	0
	н,с н
	г
	н	ГУ	-Вг
ΑΑ	0 а			МС т/ζ 731.2 СМ + 1)
	Г V	н	уу
	η ° '—».	о	Вг
	НЭС н
	Е,
	н	Гу	-Вг
	Ν-~_ /
	/ Д 9
45		Н		МС т/ζ 667,3 (Μ + 1)
	У Ν'	УлМ.
	о Гх	О
	°=8-Ν 0
	Н3С н
	е.
	к	ГУ	-Вг
	/ Д 9
46		1 н	п	МС т/ζ 737,3 (Μ + 1)
	У, Ν	Γ,ν.
	°-ε-Ν о	О	ОСЕ3
	Н3С н

- 28 016199

	Ρχ Η	ГУ	Βγ
47	Лд Γ Н3С Η	Η 0	χ) СЕ3	МС т/ζ 721,3 (Μ + 1)
	ρ4 Η ζνΑ (Γ	θ'	Βγ
48	οΧ/Α> н3с Ή	.γί!. ο	χ) С1	МС т/ζ 687,3 (Μ + 1)
49	Ε4 Η /Ν~Λ Ο Ν' ο ° Ο*5~Ν Ο Η3Ο Η	θ' Η к-ьц ο	-Βγ гф Ρ	МС т/ζ 671,3 (М+ 1)
	Ρ4 Η ΖΝ-Λ С	θ'	-Βγ
50	<4-<·Λ н3с Ή	Сй. ο	С1	МС т/ζ 721,2 (М + 1)
	Ε4 6 г	ο	-Βγ
51		I Η 4.Ν	Хк	МСт/ζ 731,2 (Μ + 1)
	° УА Λ ιι * °*5“Ν 0 Н3С Η	ο

- 29 016199

52	Η ζΝΛ 0 ΓΊ 6 °β5- н3с	Ρχ ς ·> гЦ. Ν 0 Η	θ' Η χΝ Ο	Вг	3	^Р ''С!	МС т/ζ 705,3 (Μ + 1)
		Ρ4
	Η Ν-~,	οζ	θ'	Вг
53			Η		ΓΊι		МСт/ζ 701,3 (М + 1)
					ЧЗ1	^С1
	0 0*3-	/Λ	0
	Н3С	Η
	Η	Ε4	ΓΎ	-Вг
		<3
54			Η		Γ^Ίΐ		МСт/ζ 701,3 (М +1)
					кА	'οι
	0	/—	ο
	°=8-	-Η 0
	Н3С	Η
			θ'	-С1			МС т/ζ 659,2 (Μ + 1), ‘н ЯМР (СОС13,
	Η ζΝΆ	ο	С1		400 МГц) 6 9,30 (1Н, Ье), 8,56 (1Н, Ье), 7,31 (1 Η, ά, 1 = 2 Гц ), 7,07-7,27 (6Н, т),
55			Η		ό		5,88 (ΙΗ, ά, 1 = 8,4 Гц ), 4,26-4,57 (6Н,
	Ν'	>ΖΝ'·		кА		т), 3,93-4,02 (1Н, т), 3,77-3,86 (1Н, т),
	0 о-Д	г-ζ.	0		С1		3,47-3,86 (1Н, т), 3.21-3,34 (5Н, т),
	Н3С	-Ν Ο Η					2,74 (ЗН, з), 2,49-2,88 (4Н, т), 2,17-2,36
							(2Н, т), 1,18-1,73 (9Н, т).
	Η		Ο	-с
	/ΝΛ	οζ
56			1 η		с		МС т/ζ 625,2 (Μ + 1)
	-> Ν'			Ж/	ΌΙ
	0 °%5	-Ν^δ	ο
	н3с	Η

- 30 016199

	н ЛЭ	-С1
57	4 νλτν Ο^-ν^Α) 0 Н3С Η	ни?	МС т/ζ 620,2 (Μ + 1)
	Η Λ-Ο ζΝ~Λ ο.	-С1
58	λ7 ΛΊ η 4 \ΛγΝ Ο ° °*5-Ν 0 Н3С Η	1Ο^ΝΗ2	МС т/ζ 620,2 (Μ+ 1)
	η <Ό	-01 01
59	ΛΊ η 4 ыАЛ Ο- Лп ° °=5-Ν Ο Н3С Η	Λ	МС т/ζ 639,2 (Μ+1)
	Η Л> <ί	-С1 Ζ^ΝΗ
60	4 \ΛΥΝ 0-° 'Л 0 °'5-Ν θ Н3С Η	МС т/ζ 598,2 (Μ + 1)
	η л> ζΝΛ <Γ^	-С1
61	/~Ί η Α ν^υν л $ ° °«ε-Ν ο Н3С Η	ЛЛ Χ_^ΝΗ	МС т/ζ 612,2 (Μ + 1)

- 31 016199

62	ΖΊτ01 Η /АС ( ч, СМСА . 9 /—о ί, °=5~Ν 0 νΗ2 Ме Η	МС Ι11/Ζ 654,3 (М+ 1)
63	/%ГС1 Ο 0 А А, уОСА 0Д /~к 0 Р °=я-ц 0 Ме Н	МСго/ζ 643,2 (М+ 1)
64	ΓΊτ01 н /АА Ч СО.,АЗ ОД /А. 0 г Ог8-Ц 0 Ме Н	МС т/ζ 687,2 (Μ + 1)
65	АгС1 Н /-¼ / (С 0 А ч соси о° <4 ° 0=8-М 0 Ме И	МС т/ζ 669,2 (Μ + 1)
66	/Чга н <Ά. Л О ς А ч ^х^йси о4-/А ° 0 НН2 Ме Н	МС т/ζ 668,3 (Μ + 1)

- 32 016199

67	эй. 9 /-Л о Ч.-з'-сн °*3-Ν О N *СН3 Ме' Н Н °	МС т/ζ 732,3 (Μ + 1)
68	эй ί? Й О ЧА Οϊ:3-Ν О N Ме Ме Н Н	МС т/ζ 696,3 (Μ + 1)
69	А Й _ 2 йА о ОзЧ °=3-ν о □ νη2 Ме Н	МС т/ζ 704,2 (Μ + 1)
70	ойМ ° Чн Ме и	МС т/ζ 655,3 (М+ 1)

Анализы.

Применимость ингибитора активирующей канал протеазы, такого как ингибитор простазина, для лечения заболевания, опосредуемого ингибированием активирующей канал протеазы, можно исследовать путем определения ингибирующего воздействия ингибитора активирующей канал протеазы на: (1) нативную, выделенную, очищенную или рекомбинантную активирующую канал протеазу с помощью подходящего биохимического анализа по методике, описанной в публикации 8Ыр^ау е! а1., Вюсйеш1са1 апб Вюр11у81са1 Ве8еагсН Соттишса1гоп8. 2004; 324(2):953-63; и/или (2) перенос ионов через ионные каналы в подходящих изолированных клетках или в слитом эпителии по методикам, описанным в публикациях Впбде8 е! а1., Атепсап 1оигпа1 о£ Рйу81о1о§у Ьипд Се11 Мо1еси1аг Рйу81о1о§у. 2001; 281(1):Ь16-23 и Эопа1б8оп е! а1.; 1оита1 о£ Вю1ощса1 СНе1Ш81гу. 2002; 277(10):8338-45.

Биохимические исследования.

Рекомбинантный простазин человека и матриптазу и простазин морских свинок получают по методикам, описанным в публикации 8Ыр^ау е! а1., ВюсНет. апб Вюр11у8. Ве8. Соттип. 2004; 324(2):953-63. Рекомбинантные ферменты инкубируют в электролитном буфере, содержащем исследуемые соединения или растворитель в подходящем многолуночном планшете для исследований, таком как 96- или 384луночный планшет. Через определенный промежуток времени после смешивания фермента с соединением или растворителем к исследуемой смеси добавляют подходящий флуоресцентный пептидный субстрат. После расщепления субстрата активным ферментом усиливается флуоресценция (определяемого с помощью подходящего устройства считывания планшетов, регистрирующего флуоресценцию), и можно определить скорость преобразования субстрата (т.е. активность фермента) и тем самым ингибирующее воздействие любого исследуемого соединения. Эффективность исследуемых соединений выражают в виде концентрации, которая приводит к уменьшению активности фермента (К₁) на 50%.

Обычно соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, могут обладать значениями К₁, равными от 0,1 нМ до 5 мкМ. В некоторых примерах соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, могут обладать значениями К₁, равными от 0,1 до 500 нМ; от 0,1 до 50 нМ; от 0,1 до 5 нМ или от 0,1 до 0,5 нМ. В предпочтительных примерах соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, могут обладать значениями К₁, равными от 0,1 до 0,5 нМ; от 0,5 до 5 нМ; от 5 до 50 нМ; от 50 до 500 нМ или от 500 нМ до 5 мкМ. В других примерах соединения могут обладать значениями К₁, равными менее 0,1 нМ или более 5 мкМ.

- 33 016199

Перенос ионов через эпителий.

Эпителиальные клетки бронхов человека выращивают по методикам, описанным в публикации ЭапаЪау е! а1., Ат. I. РйузюБ Ьипд Се11 Мо1. РБузюБ 2002; 282(2):Б226-36. После протекания дифференциации до необходимой степени (через 14-21 день после образования границы раздела апикальная сторона-воздух) эпителиальные клетки в течение 90 мин обрабатывают растворителем, апротинином (200 мкг/мл) или исследуемым соединением. Затем эпителий помещают в камеры, как это описано в публикации Папаках е! а1., см. выше, поддерживая концентрацию растворителя, апротинина или исследуемого соединения на апикальной стороне эпителия. Затем измеряют ток короткого замыкания (ТКЗ) путем подключения к эпителию клемм, присоединенных к потенциалу 0 мВ. Затем путем нанесения амилорида (10 мкМ) на апикальную поверхность эпителия измеряют чувствительный к амилориду ТКЗ. Активность исследуемого соединения выражают в виде концентрации, которая приводит к уменьшению на 50% полного чувствительного к апротинину компонента ТКЗ, чувствительного к амилориду.

Обычно соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, могут обладать значениями 1С\₀, равными от 1 нМ до 10 мкМ. В некоторых примерах соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, могут обладать значениями 1С₅₀, равными от 1 нМ до 1 мкМ или более предпочтительно от 1 до 100 нМ. В других примерах соединения, предлагаемые в настоящем изобретении, могут обладать значениями 1С₅₀, равными от 100 нМ до 1 мкМ или от 1 до 10 мкМ. В других примерах соединения могут обладать значениями 1С₅₀, равными менее 1 нМ или более 10 мкМ.

Падение потеницала на трахее (т νΐνϋ).

Морских свинок анестезируют с помощью ингаляционного анестезирующего средства кратковременного действия, такого как галотан и Ν₂Θ. Во время кратковременной анестезии в трахею ротоглоточным путем вводят иглу для искусственного питания. Через находящуюся в трахее иглу в дыхательные пути вводят небольшой объем (50-200 мкл) растворителя или исследуемого соединения в подходящем разбавителе на водной основе. Животным дают восстановиться и остальные действия проводят амбулаторно.

Альтернативно, исследуемые соединения можно вводить животным в виде аэрозоля или сухого порошка. Через определенное время после введения животных хирургически анестезируют с использованием подходящего анестезирующего средства, такого как кетамин и ксилазин. Затем вскрывают трахею и в ее просвет вводят пластмассовый агаровый мостиковый электрод. Кроме того, в слои мышц шеи животного вводят электрод сравнения. Затем падение потеницала на трахее измеряют с помощью подходящего вольтметра с высоким входным сопротивлением, как это описано в публикации ТакайазЫ е! а1., Тох1со1 Арр1 Рйагтасо1. 1995; 131(1):31-6. Активность исследуемого соединения выражают в виде дозы, приводящей к уменьшению на 50% чувствительного компонента падения потеницала на трахее.

Следует понимать, что примеры и варианты осуществления, описанные в настоящем изобретении, приведены только для иллюстрации и что с их учетом специалисты в данной области техники могут предложить различные модификации и изменения и они должны быть включены в сущность и объем настоящего изобретения и объем прилагаемой формулы изобретения. Все публикации, патенты и заявки на патенты, цитированные в настоящем изобретении, включены в него в качестве ссылки для всех объектов.

Claims (25)

1. Соединение формулы (1) или его фармацевтически приемлемые соли, в которой О-(СК₂)_р-К² обозначает заместитель в любом положении кольца А;

I обозначает , пиридил или пиперидинил;

где один или более из Ζ¹, Ζ², Ζ³, Ζ⁴, Ζ⁵, Ζ⁶ и Ζ⁷ обозначает гетероатом, выбранный из Ν, ΝΚ, О или 8, а другие атомы Ζ¹-Ζ⁷ обозначают СН при условии, что I не обозначает триазолил;

В обозначает или (СК₂)_к-К⁵;

Υ обозначает связь, -8О₂-, ЖНСО- или -О-(СО)-;

- 34 016199

К¹ обозначает галоген, С1-С6-алкил, СЕ3, ОСЕ3, фенил, -(СК2)1-ЫК⁶К⁷, -(СК2)₁-С(=ИК)-ИК⁶К⁷, -С(О)-(СК2)1-ИК⁶К⁷, -(СК2)₁-ИК-§О₂К⁶, -(СК2)1-ИК-С(О)-К⁶, -(СК2)₁-§О₂ИК⁶К⁷ или -(СК₂)₁-ОК⁶;

К² обозначает фенил или циклогексил, каждый из которых является незамещенным или замещенным заместителем, выбранным из галогена, 8О₂(С_!-6алкила), незамещенного С_!-6алкила, галогенированного С1_-6алкила, незамещенного С1_-6алкоксила или галогенированного С1_-6алкоксила;

К³ обозначает С1-С₆-алкил, С₂-С₆-алкенил, С₂-С₆-алкинил или -(СК₂)₁-К⁵;

альтернативно, ИН-У-К³ вместе образуют ИН₂;

Я⁴ обозначает пиперидинил, циклогексил, фенил, °^Η==\ΖΖ> или ^СН=\У^1Н.

К⁵ обозначает арил или К⁵ обозначает пиперидинил, если В обозначает (СК₂)_к-К⁵;

К, К⁶ и К⁷ независимо обозначают Н или С1 -С₆-алкил;

к равно 2-3;

1 равно 0-1;

р равно 1;

т и п независимо равны 1-2;

х равно 0-3;

при условии, что К⁴ обозначает пиперидинил, если ИН-Υ -К³ вместе образуют ИН₂.

2. Соединение по п.1, в котором 1 обозначает тиофенил, тиазолил, фенил, пиридил, индазолил или пиперидинил.

3. Соединение по п.1, в котором Υ обозначает связь, -§О₂- или -О-(СО)-.

4. Соединение по п.1 формулы (2) в которой К² обозначает незамещенный фенил, фенил, замещенный галогеном, §О₂(С1_-6алкилом), незамещенным галогенированным С1_-6алкилом, замещенным галогенированным С1_-6алкилом или С1-6алкоксилом;

1 обозначает фенил;

К³ обозначает С1-С₆-алкил, С₂-С₆-алкенил, С₂-С₆-алкинил или -(СК₂)₁-К⁵ или

ΝΠ-Υ-К³ вместе образуют ИН₂;

каждый К в (СК2) обозначает Н или С1-С6-алкил;

т и п независимо равны 1-2;

р равно 1;

значения К¹, К⁴, К⁵, К, Υ и х определены в п.1;

или его фармацевтически приемлемые соли.

5. Соединение по п.4, в котором х равно 1-2.

6. Соединение по п.4, в котором Υ обозначает §О₂.

7. Соединение по п.4, в котором К² обозначает фенил или фенил, замещенный галогеном.

8. Соединение по п.4, в котором К³ обозначает С1-С₆-алкил или бензил.

9. Соединение по п.4, в котором К⁴ обозначает пиперидинил.

- 35 016199

10. Соединение по п.1, где указанное соединение выбрано из группы, состоящей из

- 36 016199

- 37 016199

- 38 016199 или его фармацевтически приемлемые соли.

11. Соединение по п.1, где указанное соединение выбрано из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемые соли.

12. Соединение по п.1, где указанное соединение выбрано из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемые соли.

13. Соединение по п.1, где указанное соединение выбрано из группы, состоящей из или его фармацевтически приемлемые соли.

14. Соединение по п.1, где указанное соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемые соли.

15. Соединение по п.1, где указанное соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемые соли.

- 39 016199

16. Соединение по п.1, где указанное соединение представляет собой или его фармацевтически приемлемые соли.

17. Фармацевтическая композиция, включающая соединение по любому из пп.1-16 в терапевтически эффективном количестве.

18. Соединение по любому из пп.1-16 или его фармацевтически приемлемые соли и второе терапевтическое средство, выбранное из противовоспалительного, бронхолитического, антигистаминного, противокашлевого средства, антибиотика и ДНКазы.

19. Применение соединений по любому из пп.1-16 для ингибирования активирующей канал протеазы в клетках или системе тканей или у млекопитающего, в котором указанная активирующая канал протеаза представляет собой простазин, матриптазу (МТ8Р-1) или трипсин.

20. Применение соединений по любому из пп.1-16 для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения патологического состояния, опосредуемого активирующей канал протеазой в системе клеток или тканей или у млекопитающего, и необязательно в комбинации со вторым терапевтическим средством, в котором указанная активирующая канал протеаза представляет собой простазин, матриптазу (МТ8Р-1) или трипсин.

21. Применение соединений по п.20, в котором указанное патологическое состояние связано с перемещением жидкости через переносящие ионы эпителии или с накоплением слизи и мокроты на тканях органов дыхания либо с их комбинацией.

22. Применение соединений по п.20, в котором указанным патологическим состоянием является муковисцидоз, первичная цилиарная дискинезия, карцинома легких, хронический бронхит, хроническое обструктивное заболевание легких, астма или инфекция дыхательных путей.

23. Применение соединений по п.20, в котором указанное второе терапевтическое средство представляет собой противовоспалительное, бронхолитическое, антигистаминное, противокашлевое средство, антибиотик или ДНКазу и вводится до, одновременно или после соединения по любому из пп.1-16.

24. Применение соединений по п.19 или 20, где указанная активирующая канал протеаза представляет собой простазин.

25. Применение соединений по п.19 или 20, где указанная система клеток или тканей включает эпителиальные клетки бронхов.

Евразийская патентная организация, ЕАПВ

Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2