TW200845981A

TW200845981A - Compounds and compositions as channel activating protease inhibitors

Info

Publication number: TW200845981A
Application number: TW097101044A
Authority: TW
Inventors: David C Tully; Arnab K Chatterjee; Agnes Vidal; Badry Bursulaya; Glen Spraggon
Original assignee: Irm Llc
Priority date: 2007-01-10
Filing date: 2008-01-10
Publication date: 2008-12-01
Also published as: MA31037B1; CL2008000060A1; HRP20110201T1; MX2009007476A; EA016199B1; KR20090087511A; SV2009003330A; NZ577939A; US20080176901A1; KR101084787B1; CU20090122A7; EA200900920A1; NO20092817L; RS51644B; AR064841A1; TN2009000294A1; EP2104535B9; HK1129860A1; AU2007342223B2; ATE493174T1

Description

200845981 九、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明大體上係關於通道活化蛋白酶（CAP)抑制劑。本申請案是有關2007年2月23曰申請之美國臨時申請案第 60/891，474號及2007年1月10曰申請之美國臨時申請案第 60/884,334號，該等案件之全文以引用的方式併入本文中。【先前技術】前列腺蛋白（Prostasin)為多種哺乳動物組織中存在之胰蛋白酶樣絲胺酸蛋白酶。其為表現於細胞之胞外膜上但亦可分泌於體液（諸如，精液、尿及氣管表面液體）中的膜錨定蛋白酶。前列腺蛋白（PRSS8)以及蛋白酶（諸如蛋白裂解酶（matriptase)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、PRSS22、 TMPRSS11、組織蛋白酶A及嗜中性白血球彈性蛋白酶）可刺激胺氯吡脒敏感性上皮鈉通道（ENaC)的活性。對此等酶之抑制可引發上皮離子輸送的改變，且因此引發經上皮膜之流體恆定性的改變。舉例而言，認為腎中之CAP抑制促進利尿，而氣管中之CAP抑制促進肺中黏液及痰液之清除。腎中之CAP抑制因此可在治療學上用於治療高血壓。氣管中之CAP抑制防止否則傾向於使患者易受第二細菌感染的呼吸道分泌停滯。【發明内容】本發明提供化合物、醫藥組合物及使用該等化合物調節通道活化蛋白酶（CAP)之方法。舉例而言，本發明之化合物及組合物可用於調節前列腺蛋白、PRSS22、 126869.doc 200845981 TMPRSS11(例如，TMPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、 TMPRSS3、TMPRSS4 (MTSP-2)、蛋白裂解酶（MTSP-1)、 CAP2、CAP3、胰蛋白酶、組織蛋白酶A及嗜中性白血球彈性蛋白酶。在一態樣中，本發明提供式（1)化合物：

(CR2)n—(R1)x (1) 或其醫藥學上可接受之鹽，其中： 0-(CR2)p-R2為環A上任何位置處的取代基； J為5-12員單環或稠合碳環、包含N、0及/或S之雜環；芳基或雜芳基環，其限制條件為J不為三唑基； B 為或（CR2)k_R5 ;

R3—Y—N Y為鍵、-S〇2_、-NHCO -或-O-(CO)-; R1為 i 基、-(CR2)rNR6R7、-(CR2)rNRC(=NR)-NR6R7、 -(CR2)rC(=NR)-NR6R7、-C(〇HCR2)rNR6R7、-(CR2)rNR-S02R6、…(CR2)rNR-C(0)-R6、-(CI^h-SChNR6!^7 或-(CR2)r 〇R6，或視情況經取代之烷氧基、Cw烷基、C2_6烯基或C：2·6炔基；或視情況經取代之碳環、雜環、芳基或雜芳 126869.doc 200845981 基； R為Cw烷基、C2 6烯基、C2 6炔基或_(CR2)i_r5 ; 或者NH-Υ-R3 —起形成nh2 ; R、R4及R5獨立地為視情況經取代之5_12員碳環、雜環、芳基或雜芳基；或R4為H、Cl_6烷基、c2_6烯基、ci6 ^ 炔基或〜CR==©，其中P為c或N且環£與1>一起形成視^ 況經取代之5-12員單環或稠合環； • 汉6及R7獨立地為H、C,-6烷基、C2·6烯基、C2·6炔基或 _(CR2)i-R5 ; 各R為Η或Cw烷基、c26烯基或c26炔基； 1 為 0-6 ; k、m、n&p獨立地為u ; X為 0-4 ; 其限制條件為當NH-Y-R3 —起形成NH2時，R4為哌啶基；且 • 另一限制條件為當B為（CR2)k-R5時，R5為哌啶基。在上述式（1)中，j可為噻吩基、噻唑基、苯基、吼啶基、吲唑基、哌啶基或吡咯啶基。在其他實施例中，R2可，為苯基或環己基，其各自可視情況經鹵基、S〇2(Cl-6烷基）、或視情況經取代之Cw烷基或Cw烷氧基（諸如視情況經鹵化之C〗·6烷基或c〗_6烧氧基)取代。在一實施例中，本發明提供式（2)化合物： 126869.doc 200845981

其中R及J獨立地為視情況經取代之6員芳基；

R3為c〗-6烷基、c2_6烯基、c2-6炔基或_(CR2)i-r5 ; 比 Y-R3—起形成NH2 ; (CR2)中各R為Η或Cw烷基；且 m、η及p獨立地為1-2。在上述式（1)及式（2)中，Υ可為一鍵、s〇2或-〇_(c〇)_。在其他實例中’ R1為鹵基、CK6烷基、CF3、OCF3、笨基、-(CR2)rNR6R7 、 -(CR2)rC(=NR)-NR6R7 、 -C(〇)· (CH-NW、-(CDi-NR-SChR6、-(cR2)rNR-C(0)-R6、 _(CR2)rS02NR6R7 或-(CR2)rOR6，其中各;且尺、r6 及R7獨立地為HSCu烷基。在上述式（1)及式（2)中，R4可為視情況經取代之5-6員碳環、雜環、芳基、雜芳基或一 CR=P^)，其中p為c或 N且環E與P —起形成視情況經取代之5-6員單環。舉例而言，R4可為視情況經取代之哌啶基、環己基、苯基、

126869.doc 200845981 在特疋實例t，式（2)中之R3為C]6貌基或視情況經取代之苯甲基。在-些實例_，Y4s〇2。在其他實例中，r4 為視情況經取代之哌啶基。在又其他實例中，；及尺2獨立地為視情況經取代之苯基。舉例而言，；可經^個尺】（亦即，其中X為1-3)取代且R2可視情況經齒基取代。在另-態樣中，本發明提供醫藥組合物，其包含式⑴ 或式（2)化合物及醫藥學上可接受之賦形劑。

本發明亦提供調節通道活化蛋白酶之方法，其包含向系統或:f乳動物投與治療有效量之式⑴或式(2)化合物，或藥子上可接叉之鹽或醫藥組合物，藉此調節該通道活化蛋白酶。貝她例中，本發明提供一種抑制通道活化蛋白酶之方=/、包3向細胞或組織系統或向哺乳動物投與治療有效：之式⑴或式(2)化合物，或其醫藥學上可接受之鹽或西樂組合物；#中該通道活化蛋白酶為前列腺蛋白、 PRSS22、TMPRSS11⑼如，TMpRssuB、TMpRssi、 ™pRSS2、™PRSS3、TMPRSS4 (mtsp_2)、蛋 (—)、CAP2、CAP3、騰蛋白酶、組織蛋白酶中性白金球彈性蛋白酶，藉此抑制該通道活化蛋白酶-。：特定實例中’本發明提供一種抑制前列腺蛋白之方法在另-態樣中’本發明提供一種改善蛋白酶介導之病、、兄沾士、t ^ ^逼居化 /的方法’其包含向細胞或組織系、統哺乳動物投與右崎旦4 4 hΛ ^ 、 >里之式（1)或式（2)化合物，或其醫上可接受之鹽或醫藥組合物，及視情況之第二治療口 126869.doc 200845981 中3通運活化蛋白酶為前列腺蛋白、pRSS22、 TMPRSS11(例如，TMPRSS11B、TMPRSS11E)、 TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4 (MTSP-2)、蛋白裂解酶 (MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、組織蛋白酶A或嗜中性白血球彈性蛋白酶，藉此治療該病況。

此外，本發明提供式（丨）或式化合物以用於治療由通暹活化蛋白酶介導之病況的方法。本發明亦提供式或式 (2)化合物以及視情況之第二治療劑之用途，其係用於製造供治療由通道活化蛋白酶介導之病況使用的藥物。在特定實例中，本發明化合物可用於治療前列腺蛋白介導之病況。在一實施例中，第二治療劑可為消炎劑、支氣管擴張劑、抗組胺劑、鎮咳劑、抗生素或DNase，且在式 (1)或式（2)化合物之前、同時或之後投與。在一些實例中，向支氣管上皮細胞，尤其人類支氣管上皮細胞投與本發明化合物。可使用本發明化合物改善或治療之病況的實例包括（但不限於）與流體經離子傳輸上皮之傳送或黏液及痰在呼吸組織中之累積或其組合有關之病況。在一此给办丨士 _ ^ 二灵1夕U甲，可使用本發明化合物介導之病況為囊腫性纖維化、原發性纖毛運動障礙、肺癌、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺^、哮喘或呼吸道感染。定義 π烷基η係指一種基團部分且作為其他基團（例如，經鹵基取代之烧基及烧氧基）之結構元件且可為直鏈或支^的: 126869.doc * 11 · 200845981 本文所用之視情況經取代之烷基、烯基或炔基可視情況經鹵化（例如，CF3)或可具有一或多個經雜原子（諸如nr、〇或s)取代或置換的碳（例如，_OCH2CH2〇_、烷基硫醇、硫烷氧基、烷基胺等）。 ’’芳基”係指含有碳原子之單環或稠合雙環芳族環。舉例而言，芳基可為苯基或萘基。"伸芳基"意謂由芳基衍生之二價基團。本文所用之”雜芳基"係如上文之芳基所定義，其中一或多個環成員為雜原子。雜芳基之實例包括(但不限於”比啶基、十朵基“引唾基、啥嗜琳基、啥琳基、苯并咬喃基、苯并旅喃基、料Μ基、苯并⑽二氧雜環戊稀、^嗤基、苯跑基、㈣、吱喊基…惡唾基、異嗔哇基、二唑基、四唑基、吡唑基、噻吩基等。 4文：用人Γ炭環，，係指含有碳原子之飽和或部分不飽和早壤、稠&雙環或橋式多環，其可視情況經（例代。碳環之實例包括(但不限於) 基、環己基、伸環内基、環己嗣等。衣丁基，戊本文所用之”雜環"係如上文之碳環所定義，夕個環碳為雜原子。舉例而言，雜環可含有Ν、、0=; N S S(〇)、,0)2-或-NR-，其中r可為氫基或保護基。雜環之實例包括（但不限於）嗎琳基、吼Z 基m各mu秦基、錢基、㈣基綱氧雜-8-氮雜-螺[4.5]癸_8_基等。，-一除非另外說明’否則#認為取代 % b /兄經取代” I26869.doc -12- 200845981 時，意謂取代基為可經一或多個個別地且獨立地選自(例如）以下基團之基團取代的基團：視情況經鹵化之烷基、炸基、快基、烧氧基、烧基胺基、烧硫基、快基、酿胺基、胺基（包括經單取代及二取代之胺基）、芳基、芳氧基、芳硫基、羰基、碳環、氰基、環烷基、鹵素、雜烷基、雜烯基、雜炔基、雜芳基、雜環基、羥基、異氰酸基、異硫氰酸基、巯基、硝基、0-胺甲醯基、N-胺甲醯基、0-硫代胺甲醯基、N-硫代胺曱醯基、C-醯胺基、N-醯胺基、S-磺醯胺基、N-磺醯胺基、C-羧基、0-羧基、全鹵烷基、全氟烷基、矽烷基、磺醯基、硫羰基、硫氰基、三鹵基甲磺醯基，及其經保護之化合物。可形成上述取代基之經保護化合物的保護基為熟習此項技術者所熟知且可見於諸如 Greene 及 Wuts， Protective Groups in Organic Synthesis，第 3 版，John Wiley & Sons，New York，NY， 1999，及 Kocienski，Protective Groups，Thieme Verlag，New York，NY，1994(其以引用的方式全部併入本文中）之參考文獻。本文所用之術語’’共投與”或"組合投與”或其類似術語意欲涵蓋所選擇治療劑向單個患者之投與，且意欲包括不必將該等藥劑藉由相同途徑投與或同時投與的治療方案。本文所用之術語"醫藥組合π係指由混合或組合活性成份獲得之產物且包括活性成份之固定及非固定組合。術語”固定組合π意謂活性成份（例如，式（1)化合物及輔劑）以單個實體或劑量形式同時向患者投與。術語’’非固定組合π意 126869.doc -13· 200845981 謂活性成份(例如，式⑴化合物及輔劑)以非特定時間限制作為單獨實體同時、共同抑或連續向患者投與，其中該投與在患者體内提供治療有效含量之活性成份。後者亦應= 於此合療法，例如三種或三種以上活性成份之投與。術語”治療有效量”意謂將在研究者、獸醫、醫生或其他臨床醫師所探究之細胞、組織、器官、系統、動物或人類體内引起生物或醫學反應的主題化合物之量。

應瞭解術語主題化合物之"投與，，意謂向需要治療之個體提供本發明化合物（包括本發明化合物之前藥）。本文所用之術語”治療”係指緩解或減輕疾病及/或其伴隨症狀之方法。術語”前列腺蛋白”亦可稱作：人類通道活化蛋白酶 (hCAP)，通道活化蛋白酶-1 ;及 PRSS8、MERPOPS iD SOI.159 。【實施方式】本發明提供化合物、醫藥組合物及使用該等化合物調節通道活化蛋白酶（CAP)之方法。在一態樣中，本發明提供式（1)化合物：

(CR2)p B

Η I N、(CR2)n—」一 (R、驭具西藥學上可接受之鹽，其 126869.doc -14- (1) 200845981 〇-(CR2)p-R2為環A上任何位置處的取代基； J為5 -12員單環或稠合碳環、包含N、〇及/或s之雜環；芳基或雜芳基環，其限制條件為j不為三唾基； B為

或（CR2)k-R5 ; Y為一鍵、-S02-、-NHCO-或-〇-(CO)_ ;

5 為基、-(CR2)rNR6R7、-(CR2)广 nrc(=nr)_ NR R、_(CR2)rC(=NR)-NR6R7、_C(〇卜(CR2)i-Nr6r7、 -(CR2)i-NR-S02R6 > -(CR2)rNR.C(〇).R6 , .(CR2)rS〇2NRV 或似2)K)R6 ’或視情驗取代之Ci 6絲基、。烧基、 c2-6婦基或c2_6块基；或視情況經取代之碳環、雜環、芳基或雜芳基； R3為c】-6烷基、c2_6烯基、。2 6炔基或似士以；或者NH-Y-R3 —起形成nh2 ; R2、R4及R5獨立料視情驗取代之5_ 環、蒡基或雜芳基；或R44H、e ^ < ,,A ^ ^ —X 1 Ul·6烷基、C2.6烯基、Cw 炔基或一CR=Pj)，其中p為乂丑衣E與P一起形成視情況經取代之5-12員單環或稠合環； R6及R7獨立地為Η、| r α 烷基、c2-6烯基、 -(CR2)rR5 ； 2-6 厌丞:¾ 各R為Η或Cl.6烧基、c26稀基或C26块基 1 為 0-6 ; 126869.doc -15- 200845981 k、m、η及p獨立地為κ ; χ為 0-4 ; 其限制條件為當NH-Y_R3 —起形成ΝΗ2時，R4為旅唆基；且另一限制條件為當B為（CR2)k-R5時，R5為哌啶基。在其他實施例中，本發明提供式化合物：

或NH- 其中R2及J獨立地為視情況經取代之6員芳基； R3為cU6烷基、c2_6烯基、c2_6炔基或_(CR2)i_r Y_R3—起形成NH2 ;

(CR2)中各R為η或Cl_6烷基；且 m、η及p獨立地為1-2。或者，上述式（1)及式（2)中之k、m、η及ρ可想* 1L ,^ 久P了獨立地為〇- 6。在特定實例中，式（1)中之]^為2-3且j為雜作方暴，诸如噻吩基。在其他替代實施例中，式（1)及式（2)中之γ可為_c〇。在上述各式中’ J亦可選自由以下基團組成之群· 126869.doc •16· 200845981

其中Z1、Z2、Z3、z4、Z5、Z6及Z7中之一或多者為選自 N、NR、O或S之雜原子，其中尺為11或Ci 6烷基，且其他 Ζ^Ζ7原子為CH。

在一些實例中，Ζ1、Ζ2、Ζ3、Ζ4、Ζ5、Ζ6及Ζ7中之至少兩者為選自N、NR、〇或s之雜原子，其中R*H或Ci6烷基，且其他Z、Z7原子為CH。在上述式（1)及式（2)中，其中各視情況經取代經以下基團取代：鹵基、=〇、胺基、胍基、甲脎基、視情況經取代之Cw烧氧基；Cl·6烷基、C2·6稀基或C26炔基，其各自可視情況經齒化或可視情況具有可經N、0或s置換或取代之碳；co2R8、_0_(CR2)1_C(0)_R8; _(CR2)1_R8、' -(CR2)1-C⑼n(CR2)rS〇2_R8;或其組合其中各汉8為 Η、C〗-6烷基或視情況經取代之碳環、雜環、芳基或雜基。 ^ 。…明化合物或其酉带字上可接受之鹽的所2適同位素變體。本發明化合物或其醫藥學上可數但原子質量盘自…子經具有相同原子序 …… 發現之原子質量不同之原子、可併入本發明化合物及其醫羊^ i ，的同位辛之垂，、请柰予上可接受之鹽中的“素之“列包括(但不限於)氫、碳心=、H、C、14c、15n、17〇、18〇、35s、、及 36c】。本發明化合物及其醫藥學 s叹 τ接文之鹽的某些同位素，諸如2H、3H丨乳及乳之同位 126869.doc -17- 200845981 素變體（例如，併入有諸如hswc之放射活性同位素之彼等者）適用於樂物及/或基質組織分布研究。在特定實例中，Η及14c同位素可因其易於製備及可偵測性而得以使用。在其他實例中，以諸如2H之同位素取代可產生由較大代谢穩定性導致的特定治療益處，諸如活體内半衰期增加或劑量需求減少。本發明化合物或其醫藥學上可接受之鹽

的同位素變體一般可藉由習知程序使用合適試劑的適當同位素變體製備。本發明化合物及組合物可適用於調節通道活化蛋白酶。可使用本發明化合物及組合物調節之通道活化蛋白酶之實例包括（但不限於）前列腺蛋白、pRSS22、(例如，丁MPRSS11B、TMPRSS11E)、TMPRSS2、TMPRSS3 ' TMPRSS4 (MTSP-2)、蛋白裂解酶（MTSIM)、CAp2、 CAP3、胰蛋白酶、組織蛋白酶a或嗜中性白血球彈性蛋白 _ °、本發明化合物亦可抑龍進離子通道（諸如上皮納通返）活性的蛋白酶之活性且可用於治療與⑽有關之疾病。藥理學及效用調節通道活化蛋白酶(尤其胰蛋白酶樣絲胺酸蛋白酶(諸如别列腺蛋白））之活性的本發明化合物適用於治療前列腺蛋白(例如)造成疾病之病變及/或症候之疾病或病症。 —由通道活化蛋白酶（尤其胰蛋白酶樣絲胺酸蛋白酶（諸如别列腺蛋"之抑制介導之疾病包括與經上皮膜之流體體 =控有關的疾病。舉例而言，氣管表面流體之體積為黏液纖毛清除及保持肺健康之關鍵調控子。通道活化蛋白酶 126869.doc -18- 200845981 液、生Γ 流體在氣管上皮黏膜側之累肖，藉此促進點矜且預防黏液及痰在呼吸組織（包括肺氣管）中之累總z等疾病包括呼吸疾病’諸如囊腫性纖維化、原發性 =動障礙、慢性支…、慢性阻塞性肺病 )孝％、呼吸道感染（急性及慢性；病毒性及細菌 2及肺癌。由通道活性蛋㈣之抑制介導之疾病亦包括 : °、疾病以外的疾病，其與經上皮之異常流體調控有 ’ ’或許涉及其表面上之保護性表面液體的異常生理學，乾症（口 [乾燥）或角膜結膜炎（乾眼症）。此外，腎 C之CAP凋控可用於促進利尿且藉此引發降血用。卜杈性阻塞性肺病包括慢性支氣管炎或與其有關之呼吸困難肺乳腫以及因為其他藥物治療（尤其其他吸入藥物仏療）而引起之氣管超反應性加重。本發明亦適用於治耗何類型或起源的支氣管炎，包括(例如)急性、花生性:、卡他性（Catarrhal)、S魯布性（⑽UPUS)、慢性或結核性管炎。水哮喘包括内源性（非過敏性）哮喘及外因性（過敏性广孝喘、輕度哮喘、中度哮喘、重度哮喘、支氣管哮喘、運動誘發性料、職業性哮喘及細g性感染後引發之哮喘。哮喘亦涵蓋稱作”幼兒氣喘症候群"之病況，其涉及展2氣# 症狀且經診斷或可診斷為"幼兒氣喘，，的小於4歲或5歲體’此為經確定之主要醫學關注的患者種類且通常鐘定為初始或早期哮喘。 1疋…、 126869.doc •19- 200845981 化ϋ =由通道活化蛋白酶之抑制介導之疾病的通道活 /抑制劑（諸如前列腺蛋白抑制劑）之適用 =:文所述之檢定及根據此項技術中已知之方法判= 、蛋白酶抑制劑的抑制作用來測試。、根據前述，本發明進一步提供—種預療之個體俨允从，尿而要该治體㈣的±賴狀任m❹症之方法，法“向該個體投與治療有效 μ方其醫藥學上可接…“ ⑴或式()化合物或所+ I丨旦又孤對於上述用途中的任一者而古，所吊Μ置將視投與模式、待治 ° 變化。（夂f… 縻之特疋病況及所要作用 (參見，，丨投與及醫藥組合物丨丨，下文）。投與及醫藥組合物 p :般而言，本發明化合物將以治療有效量經此項技術中已知的任何一般且可接受模、。中組合投與。 ^式早獨抑或與一或多種治療劑本發明之通道活化蛋白酶抑制劑亦適用齊組合使用的輔治療劑。舉例而言，通道活化蛋白酶= r與消炎治療劑、支氣管擴張治療劑、抗組胺治:= (亥冶療劑、抗生素或DNase治療劑組合使用。、甬二Ό :白:抑制劑:其他治療劑可處於同—或不同醫通運活化蛋白酶抑制劑可與其他治療劑以固定 :物形式混合’或其可在其他治療劑之前、同時或：後單 =广组合可(例如)作為該等藥物之治療活性增強：或作為降低该等藥物之所需劑量或潛在副作適用於治療囊腫性纖維化或阻塞式尤其私人注虱官疾病（諸 126869.doc -20 - 200845981 如上文所述之彼等者）。

合適消炎治療劑包括類固醇，尤其糖皮類固醇，諸如布地奈德（budesonide)、丙酸倍氯米松（beclamethasone dipropionate)、氟替卡松丙酸酯（fluticasone propionate)、環索奈德（ciclesonide)或糖酸莫美他松（mometasone furoate)，或國際專利申請案 WO 02/88167、WO 02/12266、 WO 02/100879、WO 02/00679(例如，實例 3、11、14、 17 、 19 、 26 、 34 、 37 、 39 、 51 、 60 、 67 、 72 、 73 、 90 、 99 及 101)、WO 03/35668、WO 03/48181、WO 03/62259、 WO 03/64445、WO 03/72592、WO 04/39827 及 WO 04/66920中所述之類固醇；非類固醇糖皮質激素受體促效劑，諸如 DE 10261874、WO 00/00531、WO 02/10143、 WO 03/82280、WO 03/82787、WO 03/86294、WO 03/104195、 WO 03/101932、WO 04/05229、WO 04/18429、WO 04/19935及WO 04/26248中所述之彼等者；LTD4拮抗劑，諸如孟魯司特（montelukast)及紮魯司特（zaflrlukast); PDE4抑制劑，諸如西洛司特（cilomilast，ARIFLO® GlaxoSmithKline) > ROFLUMILAST® (Byk Gulden) > V-11294A (Napp)、BAY19-8004 (Bayer)、SCH-35 1591 (Schering-Plough) 、 AROFYLLINE ⑧ （Almirall

Prodesfarma) ^ PD1 89659/PD168787 (Parke-Davis) ^ AWD-12-281 (Asta Medica)、CDC-801 (Celgene)、SelCID (TM) CC-10004 (Celgene)、VM554/UM565 (Vernalis)、T-440 (Tanabe)、KW-4490 (Kyowa Hakko Kogyo)，及 WO 126869.doc -21 - 200845981

92/19594、WO 93/19749、WO 93/19750、WO 93/19751、 WO 98/18796、WO 99/16766、WO 01/13953、WO 03/104204、 WO 03/104205 、WO 03/39544、WO 04/000814 、WO 04/000839、WO 04/005258、WO 04/018450、WO 04/018451、 WO 04/018457、WO 04/018465、WO 04/018431、WO 04/018449、WO 04/018450、WO 04/018451、WO 04/018457、 WO 04/018465、WO 04/019944、WO 04/019945、WO 04/045607及WO 04/037805中所揭示之彼等者；及腺苷A2B拮抗劑，諸如WO 02/42298中所述之彼等者，其各自以引用的方式全部併入本文中。合適支氣管擴張治療劑包括/3 - 2腎上腺素受體促效劑，諸如沙丁胺醇（albuterol，salbutamol)、間經異丙腎上腺素 (metaproterenol)、特普他林（terbutaline)、沙美特羅（salmeterol)、非諾特羅（fenoterol)、丙卡特羅（procaterol)、敦莫特羅 (formoterol)、卡莫特羅（carmoterol)或其醫藥學上可接受之鹽；及WO 00/75114中所述之式（1)化合物（游離形式或鹽形式或溶劑合物形式）、下式化合物：

(游離形式或鹽形式或溶劑合物形式）、及EP 1440966、JP 05025045 、 WO 93/18007 、 WO 99/64035 、 US

2002/0055651 、 WO 01/42193 、 WO 01/83462 、 WO I26869.doc •22- 200845981 02/66422、WO 02/ 70490、WO 02/76933、WO 03/24439、 WO 03/42160、WO 03/42164、WO 03/72539、WO 03/91204、WO 03/99764、WO 04/16578、WO 04/22547、 WO 04/32921、WO 04/33412、WO 04/37768、WO 04/37773、WO 04/37807、WO 04/39762、WO 04/39766、 WO 04/45618、WO 04/46083 及 WO 04/80964 之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其各自以引用的方式全部併入本文中。

合適支氣管擴張治療劑亦包括抗膽鹼劑或抗簟毒驗劑，尤其異丙托溴銨（ipratropium bromide)、氧托溴銨 (oxitropium bromide)、售托品鹽（tiotropium salt)及 CHF 4226 (Chiesi)，及格隆漠銨（glycopyrrolate)，但亦為 EP 424021、US 3714357、US 5171744、WO 01/04118、WO 02/00652、WO 02/5 1841、WO 02/53564、WO 03/00840、 WO 03/33495、WO 03/53966、WO 03/87094、WO 04/0 18422及WO 04/052 85中所述之彼等者，其各自以引用的方式全部併入本文中。合適雙效消炎及支氣管擴張治療劑包括雙效yS -2腎上腺素受體促效劑/蕈毒鹼拮抗劑，諸如US 2004/0167167、WO 04/74246及WO 04/748 12中所揭示之彼等者。合適抗組胺治療劑包括鹽酸西替利嗓（cetirizine hydrochloride)、乙醯胺苯 (acetaminophen)、富馬酸氯馬斯汀（clemastine fumarate)、非那根（promethazine)、氯雷他定（loratidine)、地氯雷他定（desloratidine)、苯海拉明 (diphenhydramine)及鹽酸非索那定（fexofenadine hydrochloride )、阿 126869.doc -23- 200845981 提瓦斯汀（activastine)、阿司咪哇（astemizole)、氮拉斯汀 (azelastine)、依巴斯汀（ebastine)、依匹斯汀（epinastine)、咪唑斯汀（mizolastine)及特非拉丁（tefenadine)以及JP 2004107299、WO 03/099807及 WO 04/026841 中所揭示之彼專者’其各自以引用的方式全部併入本文中。合適抗生素包括大環内酯抗生素，例如妥布黴素 (tobramycin，TOBITM) 〇合適DNase治療劑包括阿法鏈道酶（dornase alfa， PULMOZYME™)、選擇性裂解DNA之重組人類脫氧核糖核酸酶I(rhDNase)之高度純化溶液。阿法鏈道酶係用於治療囊腫性纖維化。通道活化蛋白酶抑制劑與消炎治療劑之其他適用組合為彼等與趨化因子受體之拮抗劑的組合，例如（：€11-1、（：€11-2、CCR-3、CCR_4、CCR-5、CCR-6、CCR-7、CCR-8、 CCR-9 及 CCR10、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、 CXCR5，尤其CCR-5拮抗劑，諸如Schering-Plough拮抗劑 SC-3 51125、SCH-5 5 700 及 SCH-D，Takeda拮抗劑，諸如氯化N-[[4-[[[6,7-二氫-2-(4-曱基-苯基）_5H-苯并-環庚烯-8-基]羰基]胺基]苯基；曱基]四氫-N，N-二甲基-2H-哌喃·4·銨 (ΤΑΚ-770)，及 US 6166037、WO 00/66558、WO 00/66559、WO 04/018425 及 WO 04/026873 中所述之 CCR-5 拮抗劑，其各自以引用的方式全部併入本文中。在根據本發明治療由前列腺蛋白之抑制介導之疾病時，游離形式或其醫藥學上可接受之鹽形式的本發明通道活化 126869.doc -24- 200845981 蛋白酶抑制劑可籍… 囊或液體形式（例如）、妙口 =田延徑投與，例如以錠劑、膠液形式非經腸投與，t口投與，例如以可注射溶液或懸浮形式使用適當鼻内傳V列如以氣溶膠或其他可霧化調配物知之彼等者、如鼻嘴霧’諸如此項技術中已通道活介1 尤其使用喷霧器）經鼻内投與。可接受之稀釋，酶抑制劑可以醫藥組合物形式與醫藥學上蜊或載劑一起投與。該

錠劑、膠囊及液妒，“ 奶j马私杨旱… 夜體但亦可為注射溶液、輸注溶液或吸入 : 其可使用此項技術中已知的其他調配成份及技術製備。 /予離形式或其醫藥學上可接受之鹽形式的通道活化蛋白酶抑制劑之劑量可視各種因素而定，諸如活性成份之活性及作用持續時、待治療病況之嚴重性、投與模式、個體之物種、性別、族源、年齡及體重及/或其個體病況。例如向溫血動物（尤其體重約為75 kg之人類）經口投與之典型母日4又與劑I經估异為約〇·7 mg至約1400 mg，更特定古之為約5 mg至約200 mg。彼劑量可（例如）以例如5 111§至 200 mg之單次劑量或若干分劑量投與。當組合物包含氣溶膠調配物時，其可含有（例如）氫_氣基-烷（HFA)推進劑，諸如HFA134a或HFA227或此等之混合物，且可含有此項技術中已知的一或多種辅溶劑（諸如乙醇（至多20重量％))及/或一或多種界面活性劑（諸如油酸或脫水山梨糖醇三油酸酯），及/或一或多種膨化劑（諸如乳糖）。當組合物包含乾粉調配物時’其可含有（例如）粒徑至 126869.doc •25- 200845981 多10微米之通道活化蛋白酶抑徑分布的稀釋劑或載劑( “之所要粒能免於因渴氣而劣化…隸)’及有助於保護產品效物包人，:、：合物(例如，硬脂酸鎂)。當組合劑（含3有㈣’其可含有（例如）溶解抑或懸浮於媒劑W 如乙^丙二醇之㈣似可為界面活性铋疋M)中的通道活化蛋白酶抑制劑。在特定實施例中，本發明蔣

⑵化人物，η 、吸入形式之式⑴或式 π Μ如為《I溶膠或其他可霧化組合物吸入顆粒（例如，微粉化）形式。本發明亦提供-種包ί可吸入形式之本發明化合物的可吸入藥物；一種包含可吸入形式之本發明化合物及吸入裝置的醫藥產品；及—種包含可吸入形式的本發明化合物之吸入裝置。製備本發明化合物之方法可根據實例中例示之程序製備本發明化合物。在所述反應中’最終產物中所要之反應性官能基（例如尹工基、胺基 '亞胺基、硫基或魏基）可使用此項技術中已知的保護基保護，從而避免其在反應中之非所要參與。可根據標準實踐使用習知保護基，例如參見T W· Greene 及 P. G. Μ· Wuts，"ρΓ〇_^ 心―in 〇哪士

Chemistry’，，John Wiley and Sons，1991。本發明化合物亦可藉由使游離鹼形式之化合物與醫藥學上可接受之無機或有機酸反應而製備為醫藥學上可接受之酸加成鹽。或者，可藉由使游離鹼形式之化合物與醫藥學上可接受之無機或有機鹼反應而製備本發明化合物之醫藥 126869.doc -26- 200845981 本發明化合物之鹽形式可製備。學上可接受之鹼加成鹽。或者，使用起始物質或中間物之鹽加以本發明化合物之游離酸或游離驗形式可分別由相應鹼加成鹽或酸加成鹽製備。舉例而言’酸加成鹽形式之本發明化合物可藉由以合適驗（例如’氫氧化銨溶液、氫氧^納及其類似物）處理而轉化為相應游離驗。驗加成鹽形式之本發明化合物可藉由以合適酸（例如，鹽酸等）處理而轉化為相應游離酸。

未氧化形式之本發明化合物可藉由在0。〇至8(rc下在人適惰性有機溶劑(例如，乙腈、乙醇、水性二嗯院或並：似物)中以還原劑(例如’硫、二氧化硫、三苯膦、删氫化鐘、硼氫化納、三氯化磷、三漠化鱗或其類似物）處理，從而由本發明化合物之义氧化物製備。本發明化合物之前藥衍生物可藉由—般技術者已知之方法（例如，進一步詳情參見Saulnier等人，（1994)， Bmorganic and Medicinal Chemistry Lett⑽第 *卷第 1 985頁）加以製備。舉例而言，適當前藥可藉由使本發明之未衍生化a物與合適胺基甲醯化劑（例如，氯甲酸1，1_醯氧基烷基酯、碳酸對硝基苯酯或其類似物）反應而加以製備。本發明化合物之經保護衍生物可藉由一般技術者已知之方式加以製備。適用於形成保護基及其移除之技術的詳細描述可見於T· w. Greene，"Protecting Groups in Organic istry 弟 3版，John Wiley and Sons，Inc.，1999 〇本發明化合物可在本發明方法期間便利地製備為或形成 126869.doc -27· 200845981 為洛劑合物（例如，水合物）。本發明化合物之水合物可藉由使用諸如戴奥辛（dioxin)、四氫咬σ南或甲醇之有機耗自水〖生/有機溶劑混合物再結晶而便利地製備。〃可藉由使化合物之外消旋混合物與鮮活性解析劑反應形成對非對映異構體化合#，使非對映異構體分離且回收光學純對映異構體，從而將本發明化合物製備為其個別立體異構體。儘管對映異構體之解析可使用本發明化人物之共價非對映異射u物進行，但可解離錯合物為較㈣ :::(例Γ非對映異構鹽)。非對映異構體具有不同物理 =1 ，、溶解度、反應性等）且可利用此解^易地分離。可藉由層析法或藉由基於不同溶又之分離/解析技術來分離非對映異構體。接著藉產生外消旋作用的任何實踐方里二纺析劑—起回收。適詩自化合物構體與解體異構體之技術的更詳細描述可見於物解析其立 c〇net，Sa則el η. Wilen，”E_ti〇m _ Jac物s，知 ^solutions·, John Wiley And s〇nS} 且式總之，本發明化合物可如實 ⑴及式⑺可藉由涉及以下之方法製傷：歹，不而製傷鹽⑷視情況將本發明化合物轉化為醫藥學上可接受之 (b)視情況將本發明化合物之鹽形 ⑷視情況將本發明化合物乂匕為非鹽形式；上可接受之N-氧化物； + b形式轉化為醫藥學 126869.doc -28- 200845981 ⑷視情況將本發明化合物之N_氧化物轉化為其非氧化形式； ⑷視情況自異構體混合物解析本發明化合物之個別異構體； ⑴視^ ;兄將本發明之非衍生化合物轉化為醫藥學上可接受之前藥衍生物；及 (g)視t青況將本發明化合物之前藥衍生物轉化為其非衍生形式。

就起始物質之產生未經特定描述而言，化合物為已知的或可類似於此項技術中已知或下文實例中所揭示之方法製備。熟f此項技術者將瞭解上述轉型僅為製備本發明化^ 物之代表方法，且可類似地使用其他熟知方法。本發明由以下中間物（參考化合物）及說明本發明化合物製備之實例進一步例示’但非限制。參考化合物1

126869.doc -29- 200845981 1-B .將 4-°辰咬乙醇（1-A)(5 g，39.7 mmol)溶解於 THF (120 mL)中。添加三乙胺（5 ·6 mL，40 mmol)且將溶液冷卻至〇 C。添加Boc20 (9.59 g，44 mmol)，且將反應物在室溫下攪拌隔夜。真空移除溶劑，且將粗殘餘物溶解於乙酸乙酉旨（120 mL)中。將溶液以〇·! n HCl(3xl00 mL)及鹽水 (1χ100 mL)洗膝，以MgS〇4乾燥，過濾且真空蒸發溶劑產生呈澄清油狀之1-B。 1-C. 將二氟異二聚氰酸（2.66 g，11.46 mmol)添加至醇1-B (2_39 g，1〇·42 mmol)於DCM中之溶液中，且將溶液在〇 C下授拌且保持於〇°c下，隨後添加催化量之tempo。添加後，將混合物溫至室溫且攪拌1小時，且接著在 Cel it e®上過濾。將有機相以飽和NkCO3水溶液、隨後以 IN HC1及鹽水洗滌。將有機層乾燥（MgS〇4)且蒸發溶劑產生l-C。1HNMR(CDCl3，400 MHz)δ9·72(lH，s)，4·07- 4.01(2H，m)，2.70-2.57(2H，m)，2.35-2.31(2H，m)，2.05-1·94 (1H，m)，1·64-1·46 (2H，m)，1.39 (9H，s)，1·3(Μ·〇2 (2Η，m) 〇 1-D :在-78°C下，向Cbz-α-膦酸基甘胺酸三甲酯（2·8 g， 8·45 mmol)於THF中之溶液中添加四甲基_胍（1〇22 ml，8.14 mmol)。10 分鐘後，添加醛 1-c 〇 76 g，7 76 mmol)。接著在〇°C下將溶液置於冰浴中歷時丨小時，且接著使其溫至室溫且再攪拌1小時。將溶液以Et〇Ac稀釋，以 1 M NaHS〇4洗滌，乾燥（MgSOj且真空濃縮。將殘餘物藉 126869.doc -30- 200845981

由使用乙酸乙酯/己烷0至100%之矽膠急驟層析法純化產生呈白色固體狀之 1_D。MS m/z 333·2 (M+l)，!H NMR (CDC13, 400 MHz) δ· 7.35-7.33 (5Η，m)，6.63 (1Η，t，J=8 Hz)，6.30 (1H，bs)，5.12 (2H，s)，4.10-4.04 (2H，m)，3.73 (3H，s)，2.67-2.62 (2H，m)，2.14(2H，t，J=6.8Hz)，1.63-1·46 (3H，m)，1.43 (9H，s)，1·14-1·06 (2H，m)。 1-E · 在氣氣下向帕爾容器（Parr vessel)中裝入i-D(l g， 2·3 1 mmol)及MeOH (1 〇〇 mL)。使溶液經受3次真空及氮氣鼓泡循環，且添加催化劑三氟曱磺酸（R，R卜乙基-DuPH〇s_ Rh (COD)(3 0 mg，0·04 mmol)。在室温下，將混合物置於 60 psi氫氣下歷時24小時。至ι-e之轉化在24小時後完成 (>99% e.e·)，真空移除溶劑，且將粗產物藉由矽膠層析法 (己烧/EtOAc)純化。 1-F :將中間物14溶解於MeOH中。將溶液以氮氣沖洗，且添加Pd/石反（5重量％，Degussa)。在室溫下，將混合物置於50 psi氫氣下且振盪24小時。將混合物以氮氣沖洗且經Celite⑧過濾。將濾餅以Me〇H洗滌，且將經合併之有機溶液真空濃縮。添加己烧且接著將其蒸發以使剩餘甲醇共沸，從而產生呈油狀之丨_F，接著不經進一步純化即將

其用於下一步驟中。MS 201.4 (M+1-Boc)，巾NMR (CDC135 400 MHz) δ. 4.06.3.97 (2Η5 m)? 3.63 (3Η? s)? 3.36^ 3·31 (1Η，m), 2.63-2.50 (2Η，m)，1.7(Μ.61 (1Η，m)，1·6ΐ. h43 (3H, m)’ 1·36 (3H，s)，1.55 (6H，s)，1·34-1·15 (3H，m)， 1.02-1.97 (2H，m)。 ’ 126869.doc -31 - 200845981 1-G :將粗 1-F(0·6 g，1·99 mmol)溶解於 THF (i〇 mL) 中，且將2,4,6-三甲基吡啶（3 15 mg，2.3 8 mmol)及甲碏醯氯（0_ 170 ml ’ 2.19 mmol)添加至溶液中且將其授拌2小時。將反應物以EtOAc (50 mL)稀釋，且將溶液以1 M NaHS〇4 (2x25 mL)、鹽水（25 mL)洗滌且乾燥（MgS〇4)。真空移除溶劑且將粗殘餘物藉由使用己烷與EtOAc梯度之急驟層析法純化產生 1-G。MS m/z 279·4 (M+l_Boc)，NMR (CDCI3，400 MHz) δ· 5·60_5·42 (1H，m)，3.99-3.96 (3H，m)， 3·68 (3H，s)，2.86 (3H，m)，2.60-2.54 (2H，m)，1.79-1,77 (1H，m)，1.60-1.45 (2H, m)，1.35 (9H，s)，1.35-1.26 (3H， m)，1·16-0·95 (2H，m) 〇 1-H : 將化合物1-G (0·70 g，1 _84 mmol)溶解於二嚼烧 (7 mL)中，且添加溶解於水（4 mL)中之LiOH.H20 (232

mg，5·55 mmol)。將反應混合物攪拌1小時。蒸發溶劑；且將殘餘物以EtOAc (25 mL)稀釋且以1 n NaHS04 (25 mL) 及鹽水（25 mL)洗滌且乾燥（MgSCU)。真空移除溶劑且將粗殘餘物藉由矽膠層析法（己烷/EtOAc梯度）純化產生呈白色固體狀之參考化合物1。MS m/z 265.4 (M+l-Boc)，NMR (CDC13，400 MHz) δ· 8.97 (1H，寬峰，s)，5.44 (1H，d， /=8.8 Hz)，4·15-3·90 (3H，m)，2·94 (3H，s)，2.77-2.55 (2H， ni)5 1.88- 1.87 (1H，m)，1.78-1.58 (3H)，1.42-1.37 (12H，m)5 1.16-0.94 (2H，m) 〇 -32- I26869.doc 200845981 參考化合物2

根據用於獲得化合物1-H之相同程序將中間物1-E以 LiOH.H2〇皂化。ms m/z 421.5 (M+1)，NMR (CDC13, 400 MHz) δ· 9.75 (1H，寬峰，s)，7·26-7·41 (5H，m)，5·39 (1H，s)，5·10 (2H，s)，4·41-4·34 (1H，m)，4·46-4·03 (2H，m)， 2.68-2.61 (2H，m)，1·94-1·82 (1H，m)，1.78-1.53 (3H，m)， 1·44 (9H，s)，1·44_1·19 (3H，m)，1.09-1.03 (2H，m)。參考化合物3

·將化合物 3-A (2 g，9 28 mm〇1)與 THF (〇·2 M)中之 CBr4 (4.46 g，13 47 mm〇1)及三笨膦（3·28 g，l2 54 合併’且將溶液授拌隔夜。接著將反應混合物過滤' 126869.doc -33 - 200845981 且条發〉谷劑。猎由將粗混合物緩慢添加至大體積之乙鱗中使大部分三苯膦氧化物沈澱。過濾且濃縮後，將殘餘物藉由層析法（EtOAc :己烷梯度）純化產生化合物3-：8。111-NMR (CDCls, 400 MHz) δ. 4.05-3.99 (1H5 m)5 3.83-3.78 (1Η，m)，3.27-3.24 (2Η，m)，2.84-2.77 (1Η，m)，2.66-2.59 (1H，m)，1.91-1.74 (2H，m)，1.67-1,56 (1H，m)，1.42 (9H， s)，1.32-1.20 (2H，m)。 3 C 1 將 3-B (1 g，3.6 mmol)及 KCN (281 mg，4.3 mmol)於無水DMF (20 mL)中之混合物在回流下擾拌隔夜。將殘餘物溶解於EtOAc (50 ml)中，以1 N NaHS04 (2x50 mL)及鹽水（2x50 mL)連續洗滌，且使其經MgS04乾燥。蒸發溶劑且將粗物質藉由層析法（Et〇Ac :己烷梯度）純化產生呈油狀之化合物3-C。W-NMR (CDC13，400 MHz) δ. 3.83-3.78 (1H，m)，3.78-3.69 (1H，m)，2·87-2·73 (2H，m)， 2·28-2·15 (2H，m)，1·84-1·72 (2H，m)，1·61-1·52 (1H，m)， 1.42-1.15 (11H，m) 〇 3-D ·在 _78。〇下，向 3-C (750 mg，3·34 mmol)於 THF (20 mL)中之溶液中添加DiBAL (THF中之1 M溶液，5 ml)。使此混合物達到室溫，且在室溫下攪拌丨小時。將混合物冷卻至0 C且連續添加水（〇·2 mL)，及i5% Na〇H水溶液（0.2 mL)及水（〇·5 mL)。添加MgS04後，將混合物劇烈攪拌且過濾。瘵發溶劑產生呈無色油狀之化合物3_D。不經進一步純化即將此化合物用於以下步驟中。 (CDC13, 400 MHz) δ· 3.78-3.67 (1H，m)，3.67-3.64 (1H，m)， 126869,doc -34- 200845981 2·81·2·71 (1H，m), 2·71·2·50 (1H，m)，2.24-2.09 (2H，m) 1·79·1·66 (2H，m)，1.56-1.48 (1H，m)，1.39-1.13 (11H，m)。 3-E : 使用與參考化合物1-D之製備所述方法類似之方法由3 -D製備此化合物。 3_F : 使用與參考化合物1-F之製備所述方法類似之方法由3-E製備此化合物。 3-G : 使用與參考化合物1-G之製備所述方法類似之方法由3-F製備此化合物。 3-H : 使用與參考化合物1-H之製備所述方法類似之方法由3 - G製備此化合物。參考化合物4

4-B : 將D-高苯丙胺酸乙酯鹽酸鹽（5.〇〇 g，2〇 5 mmol)及 DIEA (8·7 mL，51.25 mmol)溶解於 THF (1〇〇 mL) 中且將其在室溫下授拌。逐滴添加甲石黃酸氯（丨，67 mL， 21.52 mmol) ’且將反應物在室溫下授拌6小時。蒸發 THF，且將粗殘餘物溶解於EtOAc (100 mL)中，以水（1〇〇 mL)、1 N HC1 (2xl〇〇 mL)及鹽水（100 mL)洗丨條且乾燥 (MgSCU)。真空移除溶劑且將粗物質以急驟層析法（己烷： EtOAc)純化產生乙酯。 4-C ·將乙酯4-B溶解於二噁烷（5〇 mL)中且將其在室 I26869.doc -35- 200845981 溫下攪拌。添加溶解於水（2〇 mL)中之Li〇H.H20 (1.00 mg，24 mmol)，且攪拌反應物直至乙酯消失（藉由tlC及 LCMS判定）。真空移除溶劑且使粗物質在Et〇Ac (50 mL) 與1 N HC1 (50 mL)之間分溶。將水層以EtOAc (2x50 mL) 萃取，且將經合併之有機相以1 M NaHS04 (2x50 mL)及鹽水（50 mL)洗滌，且以MgSCU乾燥。蒸發溶劑且將粗物質藉由急驟層析法（EtOAc :己烷梯度）純化產生呈白色粉末狀之參考化合物4。參考化合物5

Boc — N、〇 CH3 將Boc-D-高苯丙胺酸（ι·〇 g，3.58 mmol)溶解於THF (10 mL)中’且將水（1 8 μΐ，0·72 mmol)經20分鐘之時段逐滴添加至NaH(礦物油中之60%分散液；10·〇 mmol)於四氫呋喃 (12 mL)中之懸浮液中，同時保持内部溫度為2〇。〇。將混合物在相同溫度下攪拌1 〇分鐘，且經2〇分鐘之時段添加硫酸二甲酷（1.05 mL ’ 6.44 mmol)，同時保持溫度為2〇°C。將反應物攪拌2小時，隨後以30%氫氧化銨（6 mL)經1〇分鐘之時段使反應終止，同時保持内部溫度為2(rc。繼續攪拌歷時又1小時（以確保完全消耗硫酸二甲酯）。將混合物以 EtOAc (20 mL)及水（20 mL)稀釋。將有機層分離，以水（10 mL)洗務’乾燥（MgS〇4)且真空蒸發產生呈白色固體狀之 126869.doc -36- 200845981 參考化合物5。參考化合物6

6-B ·· 將D-高苯丙胺酸乙酯鹽酸鹽（6_a)(25 〇 g，ι〇2 5 mmol)溶解於1〇% EtOH水溶液（500 mL)中。添加催化量之 5% Rh/C，且將反應物置於H2氣氛（1 〇〇〇 pSi)下，攪拌且加熱至5 0 C。1 8小時後，將反應物冷卻至室溫，移除％氣體供應，且使容器壓力為大氣壓。將催化劑經Celite⑧過濾，且真空移除溶劑產生呈白色粉末狀之D_高環己基丙胺酸乙酯鹽酸鹽。 6-C : 使用與參考化合物4·Β之製備所述方法類似之方法由6-Β製備此化合物。 6_D :使用與參考化合物4-C之製備所述方法類似之方法由6-C製備此化合物。參考化合物7

• 將D·高環己基丙胺酸乙酯鹽酸鹽（3.83 g，1 § 〇及N-(苯甲氧基羰氧基）琥珀醯亞胺（Cbz_〇Su)(4.49 126869.doc -37- 200845981 g，18.0 mmol)添加至含有thF (60 mL)及水（20 mL)之圓底燒瓶中。在室溫下攪拌混合物且添加Et3N (10.1 mL，72.0 mmol)，且將反應物在室溫下攪拌隔夜。將澄清溶液以

EtOAc (200 mL)稀釋且以 1 n HC1 (3x100 mL)及鹽水 (1x100 mL)洗滌且以MgS04乾燥。真空蒸發溶劑產生呈白色固體狀之所要產物，將其不經進一步純化而使用。 7-B : 使用與參考化合物4_C之製備所述方法類似之方法由7_A製備此化合物。參考化合物8

8-A 8-B 8-C 8-D

8-B ·將細粉狀KOH (19.4 g，0.346 mol)溶解於 DMSO 中且將其在室溫下攪拌20分鐘，且接著冷卻至。將沁

Boo及-4-經基脯胺酸（Boc-Hyp-〇H，8-A)(10 g，43.3 mmol)溶解於DMSO (10 mL)中且添加之，且將反應混合物在〇C下再攪拌1〇分鐘。接著，添加4-氯苯甲基氯（33 g，〇·204 m〇l)，且將反應混合物在〇它下再攪拌15分鐘。此後’移除冰浴且將反應混合物溫至室溫且攪拌4小時。將反應混合物傾入水（300 mL)中且將反應容器以額外等份之水（300 mL)沖洗。將經合併之水層以乙醚（2x3〇〇 mL)萃取且莱去。將水層以87% Η3P〇4酸化至pH 2.3且接著以乙醚 (3><3〇〇 rnL)卒取。將經合併之乙鍵萃取物以水（2X4〇〇 mL) 126869.doc • 38 - 200845981 及鹽水（2x400 mL)洗滌且使其經MgS〇4乾燥，過濾且真空濃縮。將殘餘物藉由使用EtOAc/己烷（梯度〇至ι〇〇%)之石夕膠層析法純化產生呈澄清油狀之化合物。Ms m/z 256.1 (M+KBoc); lU NMR (DMSO-D65 400 MHz) δ 7.39-7.31 (4H? m)? 4.52-4.40 (2H? m)5 4.16^4.10 (2H5 m)? 3.48- 3.41(2H5m)，2.40-2.30 (lH，m)，2.03-1.94 (lH，m)，l.39- 1.34 (9H，m) 〇

8-C ·將TFA於二氣甲烷（50/50)申之溶液添加至8-B中且將混合物授摔直至Boc完全移除。接著真空濃縮反應混合物，且不經進一步純化即將粗殘餘物用於下一步驟中。 MS m/z 256.1 (M+l); ^ NMR (CDC13j 400 MHz) δ. 8.32 OH ^ , s), 7.16-6.93 (4H, m), 4.41-4.12 (4H, m), 4-10-3.75 (2H, m), 3.70-3.53 (1H, m), 3.51-3.30 (1H, m), 2·38-2·24 (1H，m)，2.06-1.88 (1H，m)。

8-D ： mL溶液中

Fmoc-Cl (12 g 將中間物8-C溶解於二噁烷/H2〇 (1:1)之2〇〇。添加NaHC〇3 (17·9 g，〇·213叫，隨後添加 46·3 mmol)。將混合物攪拌隔夜接著將夜、IN HC1酸化，則等沈殿物過濾且乾燥產生呈白色固體狀之8-D。iH.nmr (CDCl3，彻ΜΗζ) δ 8 n (1H，寬峰，叭 7.77·7.66 (2H，m)，7 58_7 52 (2H，吨 7·42-7·2ΐ (8H, m), 4.54-4.26 (4H, m)5 4.24 (1H, t, /=7.2 Hz), 4.23-4.10 (in, m), 3.69-3.61 (2H, m), 2.50-2.38 (1H m)，2·24-2·12 (m5 m)。 ’ 126869.doc »39- 200845981 參考化合物9

上述反應流程之試劑及條件為：（a) Sod〗（3·〇當量）， MeOH，〇 C，100% ; (b)曱石黃醯氯（12 當量），Et3N (3 〇當里），催化劑 DMAP，THF，23。(：，79% ; (c) H0veyda_ Grubbs複分解催化劑（8莫耳％)，，B〇c_4-亞甲基哌啶（3〇當置），DCM，40°C，51% ;⑷ LiOH，二噁烷，H2〇， 23〇C，100%。 9·Α :在冰-水浴中，使D-烯丙基甘胺酸（5.03 g，43.73 mmol，i.o當量）在甲醇（7〇 mL)之懸浮液中漿化。經⑺分鐘逐滴添加亞硫醯氣（9.6 mL，131.19 mmol，3.0當量）。將反應物溫至室溫且藉由Lc/Ms判斷反應完全。蒸發溶劑且將所得白色固體9-A直接用於下一步驟中。 9·Β : 將D-烯丙基甘胺酸曱酯鹽酸鹽（9-Α，7.20 g， 43.73 mmol)、Et3N (18 mL，131·19 mmol，3.0 當量）及 DMAP (i〇 mg，催化劑）溶解於thf (no mL)中且將其在室 126869.doc •40- 200845981 溫下攪拌。逐滴添加甲磺醯氯（4.〇 mL，52.48 mmol，1.2 當量），且將反應物在室温下攪拌6小時。蒸發thF ;且將粗殘餘物溶解於EtOAc (100 mL)中，且以水（1〇〇 mL)、1N HC1 (2χ1〇〇 mL)及鹽水（1〇〇 mL)洗滌且乾燥（MgS〇4)。真空移除溶劑且將粗物質以急驟層析法（己烷：Et0Ac)純化產生呈黃色油狀之7 9-B。在氮氣氛下，經注射器將無水二氯甲烷（1 〇社，〇·1 M)添加至 9-Β (2·15 g，10.37 mmol，1·〇當量）及 Hoveyda-Gmbbs二代複分解催化劑[(1，3_雙_(2,4,6_三曱基苯基）-2-亞咪唑啶基）二氯（鄰異丙氧基苯基亞甲基）釕η二

乳化物（5 10 mg，0.815 _〇1，8莫耳％)]中。經注射器添加# Boc-4-亞甲基哌啶（6 mL，31 u咖〇1，3 〇當量）且使反應裝配回流冷凝器且將其加熱至4〇。〇歷時12小時。藉由 LC/MS判疋反應完全後，將反應混合物藉由自動石夕膠純化 (己烷中〇_1〇〇%乙酸乙醋)直接純化產生呈暗綠色油狀之9_ C。MS m/z 277.2 (M-Boc+1)。 ” 製備所述參考化合物9 :使用先前針對參考化合物*之之程序完成9 - C之皂化。參考化合物1 〇

Br OH

Q

126869.doc -41 - 200845981 使用與參考化合物考化合物1 〇。 8之製備所述方法類似之方法製備參實例1

H3c η 1^3 1-Α : PAL樹脂之裝載：在八…只（8當量）存在下，將5_ 氰基-2-甲胺基-噻吩（3當量）添加至樹脂（1 meq/g)於dMf中之溶液中。將混合物振盪1小時，隨後添加NaH (Ac〇)3 p 當夏）且使混合物反應隔夜。接著將樹脂以DMF (x2)、 DCM (x2)、MeOH (χ2)及 DCM (x2)洗滌。 126869.doc •42· 200845981 l-B : 在H0Bt (3.5當量）及DIC (3.5當量）存在下，將經

Fmoc保護之胺基酸8-D (3當量）添加至DMF中之200 mg樹脂1-A中。將混合物振盪3小時。將樹脂以DMF (χ2)、 DCM (x2)、MeOH (χ2)及 DCM (χ2)洗滌。 1-C : 將樹脂在20%哌啶於DMF中之溶液中振盪30分鐘，且以DMF (χ2)及DCM (χ2)洗滌。 1-D : 使用與1-Β相同之程序將胺基酸與樹脂1-(：偶合。

1-Ε : 將羥胺鹽酸鹽（40當量）及DIEA (40當量）於DMF 中之溶液添加至樹脂1-D中，且將混合物振盪隔夜。將樹脂以 DMF (x2)、DCM (x2)、MeOH (χ2)及 DCM (χ2)洗滌。 1-F · 向樹脂1-E於DCM中之溶液中添加乙酸酐（1〇當 $ )。將混合物振盪2小時，且接著以DCM (x2)、DMF (χ2) 及DCM (χ2)洗滌。 1-G : 將樹脂1-F以無水THF (χ2)洗滌，隨後在氮氣下

添加SmI2 (THF中0.1 Μ)溶液。將混合物振盪2小時，且將樹脂以 DMF (x2)、MeOH (x2)、DMF (χ2)及 DCM (χ2)洗滌。 1-H : 在丁卩八/001^1/1120 (45:45:10)溶液存在下自樹脂裂解後獲得最終化合物1-H。真空濃縮濾液，將其溶解於乙腈中且藉由逆相HPLC (H2〇-ACN梯度）將其純化。束乾後，獲得呈白色粉末狀之1-H之TFA鹽。MS m/z 639.5 (M+l); 】H-NMR (CD3CN，400 MHz) δ 9·30 (1H，s)，7·89 (1H，s)，7·72 (1H，d，Hz)，7.36-7.26 (4H，m)，7.09 (1H， 126869.doc -43 - 200845981 d5J=4Hz)，6.06(lH，d，/=8Hz)，4.60-4.41(5H，m)，4.33· 4.21 (1H? m)? 4.11-4.05 (1H? m), 3.82-3.65 (2H? m)? 3.29-3.27 (2H，m)，2·86 (3H，s)，2·86-2·76 (2H，m)，2,46-2.36 (1H，m)，2.15-2.07 (1H，m)，1.75-1.68 (2H，m)，1.63-1.46 (2H，m)，1.46-1.31 (2H，m)，1·31-1·27 (3H，m)。實例2-31 使用與實例1之合成所述方法類似之方法合成實例2-31。

實例32

Oy 步J

PAL-樹脂 32 A

使用與實例1-A之製備所述方法類似之方法由苯甲胺及 Pal樹脂製備試劑32-A。使用與實例1-B之製備所述方法類 126869.doc -44· 200845981 似之方法由固定化32_A製備中間物32_B。分別根據與實例 LC及U所述方法類似之方法，分別自與載體結合之仏b 、C製備中間物32_C&32_D。根據與實例之製備方

套類似之方4，藉由自樹脂裂解^七製備最終化合物A E 〇實例33-54 使用”貝例32之合成所述方法類似之方法合成實例33_ 54 〇 • 實例55

A · 將化合物1-H (1.9 g，5.2 mmol)添加至甲酉旨8-C 之HC1 鹽（1.6 g，5.2 mmol)、PyBOP (3.79 g，7.28 mmol)及 DIEA (2·7 mL，15·6 mmol)於DCM (50 mL)中之溶液中。將混合物攪拌隔夜，接著以1 M NaHS04溶液（2x50 mL)、 NaHC03飽和溶液（2x50 mL)及鹽水（1x50 mL)洗滌。將有 126869.doc -45- 200845981 機相經MgS〇4乾燥且真空濃縮。將殘餘物藉由急驟層析法 (己烷：EtOAc)純化，且獲得呈白色固體狀之化合物s5_ A 〇 MS m/z 616·2 (M+1) 〇 5S-B :將 f g旨 55-Α (2.2g，3.72 贿〇1)溶解於二嗔烧 (20 mL)中且將其在室溫下攪拌。添加溶解於水（5〇㈤二）中之U〇H.H2〇 (467 mg，n.12 mm0l)，且攪拌反應物直至甲酉旨消失（藉由TLC及LCMS判定）。藉由添加i m NaHS04使溶液酸化且以Et〇Ac (2x50 mL)萃取。將經合併之有機相以鹽水（50 mL)洗滌，且以MgS〇4乾燥。蒸發溶劑產生呈白

色粉末狀之化合物 55-B。MS m/z 602.2 (M+1); NMR (CDC13, 400 MHz) δ 7·33 (2H，d，J=8.4 Hz )，7.22 (2H5 d， J-8.4 Hz )，5.87 (1H，d，J=9.6 Hz )，4·43-4·57 (4H，m)， 4.29-4.32 (1H，m)，3.95-4.17 (4H，m)，3.87_3 93 (1H，m)， 3.60-3.64 (1H5 m)5 2.89 (3H5 s)? 2.58-2.64 (2H? m)? 2.45-2.51 (1H? m)? 2.15-2.51 (1H? m)5 1.48-1.70 (3H, m)5 i.44 (9H，s)，1·22-1·35 (2H，m)，〇·95-1·1〇 (2H，m)。 55-C :向化合物55-B (60 mg，o.i mmol)於二氣甲烷 (10 mL)中之溶液中添加HATU (55 mg，0.14 mmol)、DIEA (0.035 ml，0.2 mmol)及 2,5-二氣苯曱胺（23 mg，〇13 mmol)。將混合物在室溫下攪拌隔夜，接著以i M NaHS〇4 (10 ml)、NaHC03飽和溶液（i〇 mi)及鹽水（1() mi)連續洗條。將 >谷液經M g S Ο 4乾燥’過濾，蒸發且直接用於下一步驟中。MS m/z 659.2 (M+1-Boc)。 55-D :向55-cKDCM中之溶液中緩慢添加5〇% TFA於 126869.doc -46- 200845981 dcm中之溶液。將混合物攪拌3〇分鐘，接著蒸發溶劑且將殘餘物溶解於乙腈中且藉由逆相HPLC將其純化。將溶劑凍乾後，獲得呈白色粉末狀之化合物55_D之TFA鹽。Ms m/z 659.2 (Μ+l);巾 NMR (CDC135 400 MHz) δ 9·30 (1H， • bs)，8.56 (1H，bs)，7.31 (1H，d，J=2 Hz )，7.07-7.27 (6H， m)? 5.88 (1H5 d5 /=8.4 Hz )? 4.26-4.57 (6H5 m)5 3.93-4.02 (1H，m)，3.77-3.86 (1H，m)，3.47-3.86 (ih，m)，3.21-3.34 _ (5H? m)5 2.74 (3H5 s)5 2.49-2.88 (4H5 m)5 2.17-2.36 (2H5 m)，1.18-1.73 (9Ή，m) 〇實例55-70 使用與實例55之合成所述方法類似之方法合成實例56_ 70 〇表1展示如實例卜70所述之式（”化合物。表1 結構物理資料 MS (m/z)，元素分析，及1H NMR 400 MHz (DMSO〇 1 2 h3c η ---- MS m/z 639.5 (M+l); lU NMR (CD3CN? 400 MHz) δ 9·30 (1H，s)，7.89 (1H，s)，7.72 (1H，d，J=4 Hz)，7.36-7.26 (4H，m)，7.09 (m，d，J=4Hz)56.06 (lH5d，J=8Hz)，4.60-4.41 (5H, m)5 4.33-4.21 (1H5 m)5 4.11-4.05 (1H，m)，3.82-3.65 (2H，m)，3.29-3.27 (2H， m)? 2.86 (3H5 s)5 2.86-2.76 (2H, m), 2.46-2.36 (1H，m)，2.15-2.07 (1H，m)，1.75-1.68 (2H，m)5 1.63-1.46 (2H，m)5 1.46-1.31 (2H, m)，1.31-1.27 (3H，m)。 126869.doc •47- 200845981 結構物理資料 MS (m/z)，元素分析，及1H NMR 400 MHz (DMSO-4) 2 (S h3c η MS m/z 701.2 (M+l); CwH^BrFioNsOuSs (3 TEA)之分析計算值：C，39,13; H，3.96; N，8.21 ;實驗值：C，39.24; H，4·25; N， 8.21; lR NMR (CD3CN? 400 MHz) δ 9.99 (1H，s)，7.95-7.74 (2H，m)，7·74 (1H，d，J=4 Hz), 7.42-7.32 (3H，m)，7,11 (1H，d5 戶4 Hz), 6.13 (1H? d5 J=8.4 Hz), 4.59-4.35 (5H, m)5 4.15-4.08 (1H，m)，4.15-4.02 (1H，m)， 3.84-3.68 (2H? m)5 3.31-3.28 (2¾ m)5 2.87-2.79 (5H，m)，2.45-2.38 (1H，m)，2.18-2.10 (1H，m)，1.76-1 ·69 (2H，m)，1.69-1,49 (2H， m)5 1.49-1.39 (2H，m)，1.39-1.29 (3H，m)。 3 Λ 〇C^ H3C h MS m/z 352 [(M4-l)/2] 4 〇,S - N、〇 H3C h MS m/z 683.1 (M+l)); C34H4iBrF9N6011S2 (3 TFA)之分析計算值：C，39.81; H，4.13; N5 8.19 ;實驗值·· C，40.48; H，4,34; N， 8.46; lU NMR (CD3CN? 400 MHz) δ 9.81 (1H? s)? 7.92-7.77 (2H5 m)? 7.71 (1H5 d5 J=4 Hz)，7.49 (2H，d5 J=8.4 Hz)，7·23 (2H，d， J=8 Hz)，7.08 (1H，d5 J=4 Hz), 6.16-6.02 (iH, m)5 4.55-4.43 (5H? m)? 4.28 (1H? s)5 4.12-4.05 (1H9 m), 3.80-3.69 (2H? m)5 3.27-3.24 (2H，m)，2.84-2.70 (5Ή，m)，2.42-2.33 (1H, m)5 2.11-2.03 (1H? m)? 1.76-1.62 (2H, m)，1.62-1.46 (2H，m)5 1 ·46-1 ·39 (2H，m)， L38-1.18 (3H，m)。 5 °-S~N 〇 H3C h MS m/z 673.2 (M+l) ; NMR (CD3CN5 400 MHz) δ 10.07 (1H，s)，7,72 (1H，d，J=4 Hz), 7.63-7.55 (2H? m)5 7.52 (1H? d? J=2 Hz)，7·46 (2H，d，J=8 Hz), 7·37 (1H，dd， J=S HZ> 2 Hz)5 7.14 (1H? d5 J=4 Hz)? 5.88 (1H5 d5 J=92 Hz)? 4.68-4.50 (4H5 m)5 4.46 (1H，t5 /=7.6 Hz)，4·38 (1H，s)5 4.18-4.05 (1H，m)，3.86-3.73 (2H，m), 3.31-3.28 (2H5 m)，2.85-2.76 (5H，m)，2.50-2.43 (1H，m)5 2.22-2.12 (1H? m)3 L81-1.66 (2H? m)5 1.65-1.48 (2H, m)5 1.48-1.39 (2H5 m)5 1.39-1.23 (3H，m)。 126869.doc -48 - 200845981 結構物理資料 MS (m/z)，元素分析，及1H NMR 400 MHz (DMSO-办） 6 0,S-N 〇 h3c η MS m/z 657.2 (M+l) 7 Λ 〇-〇CH3 °-S-N 〇 h3c η MS m/z 619.3 (M+l) ; NMR (CD3CN? 400 MHz) δ 10.01 (1H5 s)? 7.73 (1H, d5 J=4 Hz)，7.69-7.55 (2H, m)，7.17-7.24 (4H，m)， 7.12 (1H，d，J=4 Hz)，5.97 (1H，d，/=9·2 Hz)，4.56-4.40 (5H，m)，4.30(lH，s)，4.14-4.09 (1H? m)? 3.82-3.70 (2H5 m)5 3.30-3.24 (2H，m)，2.85-2.77 (5H，m)，2.43-2.34 (1H， m)，2.34 (3H，s)，2.17-2.08 (1H? m), 1.79-1.71 (2H5 m), i.68-1.50 (2H? m)5 1.50-1.39 (2H，m)，1.35-1.26 (3H，m)。 8 Λ 〇^>CF3 h3c η MS m/z 672.7 (M+l) 9 Λ 〇C^ 〇,S-N 〇 h3c h MS m/z 640.2 (M+l) 10 λ Λ· 0,S-N 〇 h3c h MS m/z 673·1 (M+l); C34H43C12F9N6012S2 (3 TFA，1 H20)之分析計算值：C，39.50; H，4.19; N，8.13 ;實驗值：C，39,54; H， 4.30; N, 7.89; lU NMR (CD3CN? 400 MHz) δ 10·02 (1H，s)，7·70 (1H，d，J=4 Hz)，7.51 (2H，d，J=8 Hz)，7.23 (1H，dd，J=8 Hz，2 Hz)，7.12 (1H? d? J=4 Hz), 5.86-5.78 (1H? m)，4.59-4.39 (5H，m)5 4.34-4.29 (1H，m)5 4.13-4.02 (1H? m)5 3.84-3.65 (2H, m\ 3.34-3·23 (2H，m)，2.88-2.76 (5H，m)，2·45-2·36 (1H，m)，2.7-2.07 (1H，m)5 1.81-1.67 (2H， m)，1.67-1.46 (2H，m)5 1.46-1.36 (2H，m)， 1.36-1.24 (3H，m)。 126869.doc -49- 200845981 結構物理資料 MS (m/z)，元素分析，及1H NMR 400 MHz (DMS0‘） 11 〇^cl 〇νΗ^ 0 H MS m/z 695.3 (M+l); lU NMR (CD3CN? 400 MHz) δ 9.82 (1H5 s), 7.69 (1H5 d5 J=4 Hz)，7.53-7.45 (2H，m)，7.43-7.49 (9H，m)， 7.10 (1H5 d, J=4 Hz)5 6.22-6.14 (1H, m); 5.06-4.87 (2H5 m)5 4.60-4.44 (5H, m)5 4.32-4.18 (2H，m)，3.88-3.72 (2H，m)，3,35-3.24 (2H，m)，2.92-2,77 (2H，m)，2.45-2.34 (1H， m)5 2.24-2.11 (1H，m)，1.86-1.51 (4H，m)5 1.50-1.21 (5H，m)。 12 H fV〇CF3 〇 ^ 0,S_N、〇 h3c h MS m/z 689.2 (M+l);); !H NMR (CD3CN5 400 MHz) δ 10.05 (1H，s)，7.86-7.81 (3H， m)，7·43 (1H，d，Hz)，7.43 (2H，d，J=8 Hz)，7.29 (2H，d，J=8 Hz)，7.11 (1H，d，J=4 Hz)? 6.13 (1H? d? J=92 Hz), 4.61-4.43 (5H5 in), 4.33 (1H, s)5 4.19-4.11 (1H, m)5 3.86-3.70 (2H，m)，3.29-3.27 )2H，m)，2·85 (3H， s)，2.89-2.80 (2H，m)，2.45-2.36 (1H，m)， 2.19-2.09 (1H? m)? 1.81-1.64 (2H, m)? 1.64-1.50 (2H5 m)5 i.50-1.43 (2H? m)5 1.43-L30 (3H)。 13 〇>F 0,S-N、〇 h3c h MS m/z 641.2 (M+l); lU NMR (CD3CN5 400 MHz) δ 9.79 (1H，s)5 7.80 (1H，s)，7.73 (1H? d5 J=4 Hz), 7.67-7.52 (2H? m), 7.51-7.38(lH，m)，7.12(lH，d，J=4Hz)，7.02-6.93 (2H, m)5 6.03 (1H? d? J=9.2 Hz), 4.62-4.48 (4H，m)，4.43 (1H，W=7.6 Hz)，4.34 (1H5 s)5 4J5-4,09 (1¾ m)，3.86胃3.82 (2H， m)5 3.32-3.29 (2H? m)5 2.86-2.80 (5H? m)? 2.44-2.34 (1H? 2.19-2.10 (1H5 m), 1.83-1·70 )2H，m)，1.70-1.50 (2H，m)，1.50-1.34 (2H, m)，1.34-1.25 (3H，m)。 14 A>Br G cT 0,S-N 〇 h3c h MS m/z 703Λ (M+l) 126869.doc 50- 200845981 結構物理資料 MS (w/z)，元素分析，及1H NMR 400 MHz (DMS0‘） 15 〇,S-N 〇 h3c η MS m/z 639,2 (M+l); lU NMR (CD3CN5 400 MHz) δ 9.48 (1H，s)，8.15 (1H，s)，7.84 (1H，s)，7·62-7·59 (1H，m)，7.46-7.25 (6H， m)，6.05 (1H, d，《7=8.8 Hz)，4J4-4.09 (5H， m)5 4.32 (1H? m), 4.14-4.09 (1H5 m)? 3.87-3.70 (2H，m)，3.32-3.24 (2H，m)，2.91-2J8 (5H5 m), 2.49-2.36 (1H? m)? 2.16-2.08 (1H5 m)，1.83-1.68 (2H，m)5 1.67-1.51 (2H，m)， L49-1.41 (2H5m)5 1.38-L29(3H，m)。 16 0^c， X J^NH QvH、 NH2 ^-0 H MS m/z 695.3 (M+l); !H NMR (CD3CN5 400 MHz) δ 9,47 (1H，s)，8.12 (1H，s)5 7.83 (1H，s)，7,70-7.67 (1H，m)，7.47 (1H5 s)， 7.40-7.25 (9H5 m)5 6.40 (1H，d，J=6.8 Hz)， 5.03-4.76 (2H? m)? 4.60-4.39 (5H? m), 4.32-4.18 (2H? m)? 335-3.24 (2H, m)5 2.91-2.75 (2H，m)，2.48-2.38 (1H，m)，2.17-2.05 (1H， m)5 1.81-1.52 (4H，m)，1·52·1·97(5Η，ιη)。 17 6 q々 0,S-N 〇 h3c h MS m/z 640.2 (M+l); C33H41CIF9N7OHS2 (3 TFA)分析計算值：C，40.35; H，4.21; N， 9.98;實驗值:C，40·39; H，4.10; N，10.00; !H NMR (CD3CN9 400 MHz) δ 9.80 (1H? s)? 8.43 (1H? s)5 8.17-7.80 (2H5 m)? 7.72-7·61 1H，m)，7.40-7.12 (4H，m)，5.87 (1H， d，J=9.2 Hz)，4.64-4.43 (5H，m)，4·34·4.25 (1H，m)，4.14-4.05 (1H，m)，3.86-3.70 (2H， m)? 3.37-3.23 (2H, m)5 2.90-2.77 (5H? m)? 2.49-2.38 (1H? m)? 2.18-2.05 (1H? m)? L81-1.67 (2H, m)，1.66-1.49 (2H，m)，1.49-1.37 (2H，m)，1.35-1.19 (3H，m)。 18 Λ ^ 〇4-nT h3c h MS m/z 682.4 (M+l) 19 0^' 1 H3c h MS m/z 637,2 (M+l) 126869.doc -51 - 200845981 結構物理資料 MS (m/z)，元素分析，及1H NMR 400 MHz (DMSO-办） 20 〇^r\ 0 h3c h MS m/z 664.2 (M+l); !H NMR (CD3CN5 400 MHz) 6 7.55-7.26 (8H5 m)? 6.03-5.91 (1H，m)，4,58-4.40 (3H，m)5 4.39-4·23 (3H， m)，4.09-4.04 (3H，m)，3.84-3.70 (2H，m)， 3.34-3.27 (2H5 m)5 2.86-2.79 (5H? m\ 2.46-2.38 (1H, m)，2J4-2.06 (1H，m)，1.83-1.67 (2H? m)5 1.67-1.48 (2H? m)? 10.48-1.42 (2H? m)，1.42-1.25 (3H，m)。 21 义 <v XT o^l-N^o ° h3c h MS m/z (M+l) 22 (S ^ 0,S-N、〇 h3c h MS w/z 61L3 (M+l); C32H52F6N6OnS2 (2 TFA，2 H20)分析計算值：C，43.93; H, 5.99; N，9.61 ;實驗值：C，43.80; H，5·60; N, 9.17; lU NMR (CD3CN5 400 MHz) δ 9.34(1H5 s)? 7.87-7.81 (2H? m)3 7.72 (1H? d5 J=3.6 Hz)，7.60-7.34 (2H，m)，7.10 (1H，s， J=32 Hz)? 6.07-5.98 (1H? m)5 4.56-4.47 (2H5 m)? 4.37 (1H9 t, J=7.6 Hz), 4.12-4.02 (2H? m)5 3.79-3.61 (2H? m)? 3.35-3.32 (2H? m)，3.27-3.18 (2H，m)，2.91-2.82 (5H，m)， 2.36-2.26 (1H? m)? 2.09-1.98 (1H? m)5 1.84-1.81 (2H? m)? 1.75-1.64 (6H, m)? L58-L10 (1 OH, m)，0.95-0.83 (2H，m)。 23 0crS-N 〇 h3c h MS w/z 661.3 (M+l) 24 r〇r0' δ^ν^Η： H2N '〇 MS m/z (M+l) 126869.doc 52 · 200845981

結構物理資料 MS (m/z)，元素分析，及1H NMR 400 MHz (DMSO-办） 25 h3c h MS m/z 683.2 (M+l); }Η NMR (CD3CN? 400 MHz) δ 10.19(1H，s)5 7.93 (2H，d， /=8.4 Hz)，7·73 (1H，d，J=4 Hz)，7.58 (2H， d，J=8.4 Hz)，7,52-7.40 (2H，m)5 7.15 (1H， d3 J=4 Hz), 5.81-5.73 (1H, m)? 4.74-4.61 (2H，m)，4·57 (2H，d，J=5.2 Hz)，4.46 (lH,t， J=7.6 Hz)，4.39-4.34 (1H，m)，4.15-4.06 (1H5 m)? 3.86-3.26 (2H? m)5 3.35-3.26 (2H, m)? 3.09 (3H5 s)5 2.89-2.77 (5H? m)5 2.49-2.39 (1H，m)，2.22-2.11 (1H，m)，1.82-1.70 (2H，m)，1.77-1.50 (2H，m)，1.50 (2H，m)5 1.38-1.21 (3H，m)。 26 0,S-N 〇 h3c h MS m/z 638.2 (M+l) 27 ^ r〇ra x 〇4_nT nh2 h3c h MS m/z (M+l) 28 MS m/z (M+l) 29 r〇r^ ^-0 H MS m/z (M+l) 30 〇^C， Η3〇~Ν o H MS m/z 568.2 (M-fl) 126869.doc -53 - 200845981

結構物理資料 MS (m/z)，元素分析，及1H NMR 400 MHz (DMSO-成） 31 R oA>Br X JQ-NH2 h3c h MS ^/z 688.5 (M+l) 32 ^ QA>Br h3c h MS m/z 653.2 (M+l) 33 Λ 〇^>Br X ^ J〇rcl 4_nk0 〇 h3c h MS m/z 687.3 (M+l) 34 叭 A>Br 0 °h H »Ν^α °^S-N 〇 H3C h MS m/z 668.3 (M+l) 35 〇>B，乂 cv力 H3C h MS m/z 659.3 (M+l) 36 Λ 〇C^ 〇4-n^〇 ° h3c h MS m/z 671.2 (M+l) 126869.doc -54- 200845981

結構物理資料 MS (m/z)，元素分析，及1H NMR 400 MHz _S0‘） 37 QA>Br 义 j〇C h3c h MS w/z 689.2 (M+l) 38 〇^Br F 〇,S-N、〇 H3C h MS m/z 689.2 (M+l) 39 6 A 〇'!一r/Ά〇 h3c h MS m/z 687.2 (M+l) 40 K QA>Br 0,S-N、〇 H3C h MS m/z 721.3 (M+l) 41 6 > o^I-N^o ° h3c h MS m/z 667.3 (M+l) 42 乂 ^VJCi〇CH3 4—M>S h3c h MS m/z 683.3 (M+l) 126869.doc -55- 200845981

結構物理資料 MS (m/z)，元素分析，及1H NMR 400 MHz (DMSO-成） 43 Λ X^\ajCX0CFs 0,S-N、 ο h3c h MS m/z 737.3 (M+l) 44 6 4-nh01 T h3c h MS w/z 731.2 (M+l) 45 o Q>Br 0,S—N、〇 h3c’ h MS m/z 667.3 (M+l) 46 Λ 〇4-M,5 ^ h3c h MS m/z 737.3 (M+l) 47 6 A 4—l h3c h MS m/z 721.3 (M+l) 48 〇 >B， X C\^ h3c h MS m/z 687.3 (M+l) 126869.doc -56- 200845981

結構物理資料 MS (w/z)，元素分析，及1H NMR 400 MHz (DMSO-馬） 49 〇4-νΗΤ Τ h3c η MS m/z 671.3 (M+l) 50 « QA>Br Ο^Ι-Ν^Ο 0 C， h3c η MS m/z 721.2 (M+l) 51 h3c η MS m/z 731.2 (M+l) 52 Ο F 〇渺5 h3c η MS w/z 705.3 (M+l) 53 Λ ^ X^jOC, ο^ο 5 h3c η MS m/z 701.3 (M+l) 54 6 〇,S-N、〇 H3C h MSm/z70L3(M+l) 126869.doc -57- 200845981

結構物理資料 MS (m/z)，元素分析，及1H NMR 400 MHz (DMSOO 55 h3c η MS m/z 659.2 (M+l)，lB NMR (CDC135 400 MHz) δ 9.30 (1H，bs)，8·56 (1H，bs)5 7,31 (1H，d，J=2 Hz )，7.07-7.27 (6H，m)， 5.88 (1H，d，J=8.4 Hz )，4.26-4.57 (6H，m)5 3.93-4.02 (1H，m)， 3.77-3.86 (1H，m)， 3.47-3.86 (1H，m)，3.21-3.34 (5H，m)，2.74 (3H，s)，2.49-2.88 (4¾ m)，2.17-2.36 (2H， m)5 1.18-1.73 (9H，m)。 56 4-N“。五 h3c h MS m/z 625.2 (M+l) 57 b。气 C\-n^XX^nh2 4— h3c h MS m/z 620.2 (M+l) 58 Λ x Cv丄产2 h3c h MS m/z 620.2 (M+l) 59 6产Λ 。難1 T h3c h MS m/z 639.2 (M+l) 60 A oi^ X cv^NH 〇m 〇 h3c’ h MS m/z 598,2 (M+l) 126869.doc 58- 200845981

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檢定豬如 (1)天然、經分離、經純化或重組通道活化蛋白酶，使用合適生化檢定形式，使用Shipway等人；Biochemical and 療由ii、f ¥腺蛋白抑制劑之通道活化蛋白酶抑制劑對於治活化蛋白酶之抑制介導之疾病的適㈣可藉由測认u化蛋白酶抑制劑對以下各項之抑制作用而測試：

Biophysical Research Communications 2004； 324(2)-953 63 中所述之方法；及/或（2)合適經分離細胞或長滿上皮之離 126869.doc -60- 200845981 子通道/離子輸送功能，使用BHdges等人；AmeHcan J_al of Physiol〇gy 〜Cell Μ —。— 〇 2001; 281(1):L16、23 ; ’及 Donaldson 荨人；journai 〇f ㈣ Chemistry 2〇〇2; 27?⑽:8338_45 中所述之方法。生化檢定

根據撕㈣等人，Bi〇chem. and Biophys. Res. c_un 004’ 324(2).953-63中所述之方法產生重組人類前列腺蛋白及蛋白裂解_及豚鼠前列腺蛋白。將該等重組酶在合適之多孔檢定盤（諸如96孔或384孔盤）巾在含有測試化合物或媒劑之電解質緩衝液中培育。在將酶與化合物或媒劑混合後之限定時間時，向檢定混合物中添加合適螢光肽受質。隨著受質由活性酶分解’榮光（使用合適螢光盤讀取器量測）増加且可將受質轉換率(亦即’酶活性)定量且因此可將任何測試化合物之抑制活性定量。測試化合物之功效表示為引發酶活性50%衰減之濃度（Ki)。一般而言，本發明化合物可具有〇1 nM至5 μΜ之1值。在一些貫例中，本發明化合物可具有〇 J 1^至5〇〇 ηΜ ; o.l ΠΜ至 50 ηΜ; (Μ ηΜ至 5 ηΜ;或〇 J nMi〇 5 nMiKi 值。在特定貫例中，本發明化合物可具有〇丨nM至〇 5 nM ’ G.5 nM至 5 nM ; 5 nM至 5G nM ; 50 nM至 500 nM ;或 500 nM至5 μΜ之心值。在又其他實例中，化合物可具有小於〇·1 ηΜ或大於5 μΜ之Ki值。上皮離子輸送 126869.doc -61 - 200845981 根據 Danahay 等人，Am. J. Physiol. Lung Cell Mol_ Physiol. 2002; 282(2):L226-36中所述之方法培養人類支氣管上皮細胞。當合適分化時（建立頂部-空氣介面後14-2 1 天），將上皮細胞以媒劑、抑肽酶（200 pg/ml)抑或測試化合物處理90分鐘。接著如Danahay等人（上述文獻）中所述將上皮置於腔室中，在上皮頂側保持媒劑、抑肽酶或測試化合物之濃度。接著藉由將上皮電壓箝位至〇毫伏特來量測短路電流（ISC)。接著藉由將胺氯吡脒（10 μΜ)添加至上皮之頂面來量測胺氣吡脒敏感性ISC。將測試化合物之效能表示為引發胺氯吡脒敏感性ISC的總抑肽酶敏感性組份 5 0%抑制的濃度。一般而言，本發明化合物可具有1 nM至10 μΜ2Ι(：5〇值。在一些實例中，本發明化合物可具有丨11河至1 μΜ ; 或更特定言之1 ηΜ至100 〇河之1〇：50值.在又其他實例中，本發明化合物可具有100 11河至1 μΜ，或丨^^至1〇 ^河之 …”值。在又其他實例中，化合物可具有小於【ηΜ或大於 10 μΜ之 IC5G值。氣管電位差（活體内）使用短效吸入麻醉劑（諸如氟烷及心〇)將豚鼠麻醉。在短效麻醉時’、經由σ咽途徑將經口管飼針插人氣管中。插入氣管後’向氣管中裝入小體積（5〇侧μ1)之媒劑或測試化合物’其處於合適之以水性為主的稀釋劑中。接著，動 1勿：復且完全可走動。或者，可使用氣溶膠或乾粉給藥向動物投與測試化合物。在給藥後之限定時間時，使用合適 126869.doc -62- 200845981 麻醉劑（諸如氯胺酮（ketamine)及甲苯噻嗪（Xyiazine))將動物手術麻醉。接著使氣管曝露且將塑膠瓊脂橋電極插入氣管内腔中。亦將參考電極插入至動物頸部肌肉層中。接著如

Takahashi等人，Toxicol Appl Pharmacol· 1995; 131(1):31-6 _ 中所述使用合適高阻抗電壓計量測氣管電位差。測試化合物之效能表示為引發氣管電位差之敏感組份5〇%減少之劑 ’ 量。 ^ 應瞭解本文所述之實例及實施例僅為說明之目的，且熟習此項技術者根據其將建議各種修正或變化，且其包括2 本申請案之精神及範圍及所附申請專利範圍之範疇内。本文所引用之所有公開案、專利及專利申請案係出於所有目的以引用的方式併入本文中。

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Claims

200845981 十、申請專利範圍： 1 · 一種式（1)化合物： I (CR2)p 〇

Η I (CR2)n—J—(R1)x (1) 或其醫藥學上可接受之鹽，其中：

〇-(CR2)p-R2為環A上任何位置處的取代基； J為5-12員單環或稠合碳環、包含N、〇及/或8之雜環；芳基或雜芳基環，其限制條件為j不為三唑基； B為 (CR2)m R3—γ—Π

或（CR2)k-R5 ; Y為一鍵、_S02·、-NHCO-或-0-(C0)_ ;

二1 為 _ *、_(CR2)i-NR6R7 、-(CR2)rNRC(=NR)_ NR6R7、_(cr2)1_c(=nr)_nr6r7、_c(〇Hcr2) _nr6r7、 -(cwS〇2R6、_(CR2)rNR_c(〇)_R6、似2)i S〇观6r7 或-(CR2)r〇R6 ’或視情況經取代之Ci_6烧氧基、烧，、c2.6稀基或c26块I，·或視情況經取代之碳環、雜環、芳基或雜芳基； R為CN6烷基、c26烯基、c26炔基或_(cm5; 或者NH-Y-R3 —起形成nH2 ; R R及R獨立地為視情況經取代之5]2員碳環、雜 126869.doc 200845981 環、芳基或雜芳基；或R4為Η、c!-6烷基、C2-6烯基、c2_6 炔基或—CR==i0，其中P為c或N且環E與P一起形成視情況經取代之5-12員單環或稠合環； R及R獨立地為H、C!_6烧基、C2-6烯基、C2-6炔基或 -(CR2)rR5 ; 各R為Η或CN6烷基、c2_6烯基或C2_6炔基； 1 為〇 - 6 ; k、m、n&p獨立地為1-6 ; X為 0-4 ; 其限制條件為當NH-Y-R3 —起形成NH2時，R4為派咬基；且另一限制條件為當B為（CR2)k_R5時，R5為哌啶基。 2·如請求項1之化合物，其中j為噻吩基、噻唑基、苯基、比疋基、σ引嗤基、娘σ定基或σ比洛σ定基。 3·如請求項匕化合物，其中基、^烧基、π]、 3 苯基…（CR2)rNR6R7、-(cR2)rC〇NR)-NR6R7、 (°) (CR2)rNR6R7 , -(CR2)rNR-S02R6 . -(CR2)rNR. C(0)R、-(CR2)rS〇2NR6R7 或 _(CR2)r〇R6;其中各 1 ’且R、R6及R7獨立地為H或C〗_6烷基。 4·如^求項1之化合物，其中R2為苯基或環己基，其各自視h况經鹵基、S〇2(Ci·6烧基）或視情況經鹵化之^ 基或CK6烷氧基取代。 ^ 5·如味求項1之化合物，其中R4為視情況經取代之娘唆 126869.doc 200845981 基、環己基、苯基、_

6·如請求項1之化合物，其中Y為一鍵、8〇2或·◦•(cop 7·如請求項1之化合物，其中該化合物具式（2):

其中R2及J獨立地為視情況經取代之6員芳基； R3為Cw烷基、c2-6烯基、炔基或_(CR2)i-r5 ;或 NHH3 一起形成νη2 ; (CR2)中各R為η*(^·6烷基；且 m、η及ρ獨立地為1-2。其中R2及J獨立地為視情況經取代 8·如請求項7之化合物之本基。，其中X為1-3。，其中Υ為S02。 9·如請求項7之化合物， 10·如請求項7之化合物

11·如請求項7之化合物之苯甲基。

’其中R為視情況經取代之哌啶

其中該化合物係選自由以下各物 126869.doc 200845981 組成之群：

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126869.doc 200845981

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I26869.doc 200845981

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14. 一種醫藥組合物，其包含治療有效量之如請求項卜η中任一項之化合物。 15·種如明求項1-13中任一項之化合物之用途，其係用於抑制細胞或組織系統中或哺乳動物中之通道活化蛋白酶’其中該通道活化蛋白酶為前列腺蛋白（pr〇stasin)、 PRSS22、TMPRSS11(例如，TMPRSS11B ' TMPRSS11E)、 TMPRSS2、丁MPRSS3、TMPRSS4 (MTSP-2)、蛋白裂解酶（matriptase)(MTSP-l)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、組織蛋白酶A或嗜中性白血球彈性蛋白酶。 16 · 一種如請求項1-13中任一項之化合物之用途，其係用於製造供治療由細胞或組織系統中或哺乳動物中之通道活化蛋白酶介導之病況使用的藥物，且視情況與第二治療劑組合；其中該通道活化蛋白酶為前列腺蛋白、 126869.doc 200845981 PRSS22、TMPRSS11(例如，TMPRSS11B、TMPRSS11E)、 TMPRSS2、TMPRSS3、TMPRSS4 (MTSP-2)、蛋白裂解酶（MTSP-1)、CAP2、CAP3、胰蛋白酶、組織蛋白酶a 或嗜中性白血球彈性蛋白酶。 17.如請求項16之用途，其中該病況係與流體經離子傳輸上皮之傳送或黏液及痰在呼吸組織中之累積或其組合有關。

18·如請求項16之用途，其中該病況為囊腫性纖維化、原發性纖毛運動障礙、肺癌、慢性支氣管炎、慢性阻塞性肺病、哮喘或呼吸道感染。 19·如请求項16之用途，其中該第二治療劑為消炎劑、支氣管擴張劑、抗組胺劑、鎮咳劑、抗生素或DNase，且在如請求項1-13中任一項之化合物之前、同時或之後投與0 2 〇 ·如睛求項15或16之用i伞，甘击、苦、工用攻，其中讜通道活化蛋白酶為前列腺蛋白。 2 1 ·如請求項1 5或16之^ ^ 飞之用途，其中該細胞或該組織系統包含支氣管上皮細胞。 126869,doe •10- 200845981 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： φ 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： I (CR2),

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