EA012440B1 - Пептид, композиция на его основе для лечения патологий, связанных c воспалительными процессами - Google Patents

Пептид, композиция на его основе для лечения патологий, связанных c воспалительными процессами Download PDF

Info

Publication number
EA012440B1
EA012440B1 EA200702392A EA200702392A EA012440B1 EA 012440 B1 EA012440 B1 EA 012440B1 EA 200702392 A EA200702392 A EA 200702392A EA 200702392 A EA200702392 A EA 200702392A EA 012440 B1 EA012440 B1 EA 012440B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
group
peptide
replacement
amino acid
use according
Prior art date
Application number
EA200702392A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200702392A1 (ru
Inventor
Элан М. Фогелмэн
Мохамад Наваб
Original Assignee
Зе Риджентс Оф Зи Юнивесити Оф Кэлифонье
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Зе Риджентс Оф Зи Юнивесити Оф Кэлифонье filed Critical Зе Риджентс Оф Зи Юнивесити Оф Кэлифонье
Publication of EA200702392A1 publication Critical patent/EA200702392A1/ru
Publication of EA012440B1 publication Critical patent/EA012440B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/775—Apolipopeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/16—Central respiratory analeptics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06086—Dipeptides with the first amino acid being basic
    • C07K5/06095—Arg-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06104—Dipeptides with the first amino acid being acidic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0821—Tripeptides with the first amino acid being heterocyclic, e.g. His, Pro, Trp
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/1008—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1019—Tetrapeptides with the first amino acid being basic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1024—Tetrapeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)

Abstract

В настоящем изобретении представлены новые активные агенты (например, пептиды, маленькие органические молекулы, пары аминокислот и т.п.), пептиды, которые облегчают один или более симптомов атеросклероза и/или других патологий, характеризующихся воспалительной реакцией. В некоторых вариантах осуществления пептиды имеют сходство с G* амфипатической спиралью аполипопротеина J. Агенты имеют высокую стабильность, и их легко вводить пероральным путем.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Данное изобретение относится к области лечения атеросклероза и других состояний, характеризующихся воспалением и/или образованием различных окисленных молекул. В частности, данное изобретение имеет отношение к идентификации классов активных агентов, которые пригодны для перорального приема и которые облегчают один или более симптомов состояний, характеризующихся воспалительной реакцией и/или образованием различных окисленных молекул.
Сведения о предшествующем уровне техники
Введение статинов (например, Меуасог®, Ырйог® и т.п.) снизило уровень смертности от сердечного приступа и инсульта примерно на одну треть. Тем не менее, сердечный приступ и инсульт остаются основной причиной смерти и нетрудоспособности, особенно в Соединенных Штатах Америки и в западно-европейских странах. Сердечный приступ и инсульт являются результатом хронического воспалительного состояния, которое называют атеросклерозом.
В развитии сердечно-сосудистого заболевания участвует ряд причинных факторов, включая наследственную предрасположенность к заболеванию, пол, факторы, связанные с образом жизни, такие как курение и диета, возраст, гипертензия и гиперлипидемия, в том числе гиперхолестеринемия.
Некоторые из этих факторов, особенно гиперлипидемия и гиперхолестеринемия (высокие концентрации холестерина в крови) обусловливают существенный фактор риска, связанный с атеросклерозом.
Холестерин находится в крови в виде свободного и эстерифицированного холестерина в липопротеиновых частицах, обычно известных как хиломикроны, липопротеинах очень низкой плотности (ЛОНП), липопротеинах низкой плотности (ЛНП) и липопротеинах высокой плотности (ЛВП). На концентрацию общего холестерина в крови влияет (1) всасывание холестерина из пищеварительного тракта, (2) синтез холестерин из составляющих компонентов продуктов питания, таких как углеводы, белки, жиры и этанол, и (3) удаление холестерина из крови тканями, особенно печенью, и последующее превращение холестерина в желчные кислоты, стероидные гормоны и желчный холестерин.
На поддержание концентраций холестерина в крови влияют как генетические факторы, так и факторы окружающей среды. Генетические факторы включают концентрацию ферментов, лимитирующих скорость реакции, в биосинтезе холестерина, концентрацию рецепторов для липопротеинов низкой плотности в печени, концентрацию ферментов, лимитирующих скорость превращения холестеринов в желчные кислоты, уровни синтеза и секреции липопротеинов и пол субъекта. Факторы окружающей среды, влияющие на гемостаз концентрации холестерина в крови у человека, включают состав диеты, привычку к курению, физическую активность и применение ряда фармацевтических агентов. Переменные величины диеты включают количество и тип жира (насыщенных и полиненасыщенных жирных кислот), количество холестерина, количество и тип волокна и, возможно, количества витаминов, таких как витамин С и Ό, и минералов, таких как кальций.
Окисление липопротеина низкой плотности (ЛНП) играет важную роль в патогенезе атеросклероза. Показано, что липопротеин высокой плотности (ЛВП) способен защищать от окисления ЛНП, но в некоторых случаях обнаружено, что он ускоряет окисление ЛНП. Важные инициирующие факторы атеросклероза включают продукцию образованных из ЛНП окисленных фосфолипидов.
Нормальный ЛВП обладает способностью препятствовать образованию данных окисленных фосфолипидов, а также инактивировать данные окисленные фосфолипиды после того, как они образовались. Однако в некоторых условиях ЛВП можно превратить из противовоспалительной молекулы в провоспалительную молекулу, которая действительно способствует образованию данных окисленных фосфолипидов.
Как полагают, ЛВП и ЛНП действуют как часть врожденной иммунной системы (см. статью ЫауаЬ е1 а1. (2001) Лг1епо5с1ег. ТйгошЬ. Уазе. ΒίοΙ. 21:481-488). Генерация противовоспалительных ЛВП достигается с помощью амфипатических спиральных пептидов класса А, которые имитируют главный белок ЛВП, аполипопротеин А-Ι (аро А-Ι) (см., например, \¥О 02/15923).
Сущность изобретения
Данное изобретение представляет новые композиции и способы облегчения одного или более симптомов сосудистого состояния и/или состояния, характеризующегося воспалительной реакцией и/или состояния, характеризующегося образованием окисленных реакционных молекул в организме млекопитающего. Способы включают введение млекопитающему (например, нуждающемуся в этом человеку) одного или более активных агентов, например амфипатических спиральных пептидов класса А, ряда трипептидов, тетрапептидов, пентапептидов и пар аминокислот, некоторых пептидов Аро-1 (С*) и ряда маленьких органических молекул.
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение представляет пептид, который облегчает симптом атеросклероза, причем указанный пептид включает последовательность аминокислот или ретро-последовательность аминокислот пептида, включенного в перечень пептидов в любой из табл. 218 (например, табл. 4, 5 или 6 и т.д.). В некоторых вариантах осуществления пептид(ы), кроме того, включает защитную группу, связанную с амино- или карбоксильным концом. В некоторых вариантах осуществления пептиды включают первую защитную группу, связанную с аминоконцом, и вторую защитную группу, связанную с карбоксильным концом. В некоторых вариантах осуществления защитные
- 1 012440 группы могут быть независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из ацетила, амида и алкильных групп из 3-20 атомов углерода, Ртос, ТЬос, 9-флуоренацетильной группы, 1флуоренкарбоксильной группы, 9-флуоренкарбоксильной группы, 9-флуоренон-1-карбоксильной группы, бензилоксикарбонила, ксантила (Хап), тритила (Тй), 4-метилтритила (Мй), 4-метокситритила (Мт1), 4-метокси-2,3,6-триметилбензолсульфонила (М1г), мезитилен-2-сульфонила (Мй), 4,4-диметоксибензгидрила (МЬй), тозила (Ток), 2,2,5,7,8-пентеметилхроман-6-сульфонила (Ртс), 4-метилбензила (МсВ/1). 4-метоксибензила (МсОВ/1). бензилоксигруппы (ΒζΙΟ), бензила (Βζΐ), бензоила (Βζ), 3-нитро-2пиридинсульфенила (Ырук), 1-(4,4-диметил-2,6-диоксоциклогексилиден)этила (Обе), 2,6-дихлорбензила (2,6-ΌίΟ1-Βζ1), 2-хлорбензилоксикарбонила (2-Ο1-Ζ), 2-бромбензилоксикарбонила (2-Βγ-Ζ), бензилоксиметила (Вот), трет-бутоксикарбонила (Рос), циклогексилоксигруппы (сНхО), трет-бутоксиметила (Βит), трет-бутоксигруппы (ШиО), трет-бутила (Ши), ацетила и трифторацетила (ТРЛ).
В ряде вариантов осуществления пептид включает защитную группу, связанную с аминоконцом, и аминоконцевая защитная группа представляет собой защитную группу, выбранную из группы, состоящей из ацетила, пропеонила и алкила из 3-20 атомов углерода. В некоторых вариантах осуществления пептид включает защитную группу, связанную с карбоксильным концом, и защитная группа карбоксильного конца представляет собой амид. В некоторых вариантах осуществления пептид включает первую защитную группу, связанную с аминоконцом, причем защитная группа представляет собой защитную группу, выбранную из группы, состоящей из ацетила, пропеонила и алкила из 3-20 атомов углерода, и вторую защитную группу, связанную с карбоксильным концом, и карбоксильная концевая защитная группа представляет собой амид.
В различных вариантах осуществления одна или более аминокислот, составляющих пептид, являются Ό-аминокислотами. В различных вариантах осуществления все аминокислоты, составляющие пептид, представляют собой Ό-аминокислоты. Пептид(ы) необязательно можно смешивать/комбинировать с фармакологически приемлемым наполнителем. В некоторых вариантах осуществления наполнитель представляет собой наполнитель, пригодный дпя перорального введения млекопитающему.
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение представляет способы лечения сосудистого состояния и/или состояния, характеризующегося воспалительной реакцией, и/или состояния, харастеризующегося образованием окисленных реакционных молекул в организме млекопитающего. Способы, как правило, включают введение нуждающемуся в этом млекопитающему одного или более активных агентов, описанных в табл. 2-18 (например, табл. 4, 5 или 6 и т.п.), и/или маленькой органической молекулы, как описано в данном контексте, в количестве, достаточном для облегчения одного или более симптомов состояния. В некоторых вариантах осуществления активный агент представляет собой полипептид, включающий последовательность аминокислот 4Р (8ЕО ГО N0:5). В некоторых вариантах осуществления введение осуществляют путем, выбранным из группы, состоящей из пероральной инъекции, назальной инъекции, ректальной инъекции, внутрибрюшинной инъекции и внутрисосудистой инъекции, подкожной инъекции, чрескожной инъекции и внутримышечной инъекции. В некоторых вариантах осуществления активный агент вводят в сочетании с лекарственным средством, выбранным из группы, состоящей из ингибиторов СЕТР, РТУ720, Сертикана, ингибиторов ΌΡΡ4, блокаторов кальциевых каналов, производного или миметика либо антагониста АроА1, агонистов ΡΡΑΚ, стероидов, Гливек, блокаторов всасывания холестерина (Цетиа), виторина, любых блокаторов пути ренина-ангиотензина, антагониста рецептора ангиотензина II (Оюуап и т.п.), ингибиторов АСЕ, ингибиторов ренина, МК-антагониста и ингибитора альдостеронсинтазы, β-блокаторов, α-адренергических антагонистов, агониста ЬХК, агониста РХК, агониста захватывающего рецептора В1, агониста АВСА1, агониста адипонектинового рецептора или индукторов адипонектина, ингибитора стеароил-СоА-десатуразы I (8ΟΌΙ), ингибиторов синтеза холестерина (нестатинов), ингибитора диацилглицерол-ацилтрансферазы I (ΏΟΑΕΙ), ингибитора ацетил СоА-карбоксилазы 2, ингибитора ΡΑΗ, ингибитора ΕΡ-ΡΕΑ2, активатора ΟΕΡ-Ε активатора глюкокиназы, агониста ί'Β-Ε ингибитора/агента, разрушающего ΑΟΕ, ингибитора ΡΚΟ, антитромботических агентов/коагулянтов, аспирина, блокаторов рецептора ΑΌΡ, например Клопидигрела, ингибитора фактора Ха, ингибитора СΡIIЬ/IIIа, ингибитора фактора УПа, варфарина, низкомолекулярного гепарина, ингибитора тканевого фактора, противовоспалительных лекарственных средств: пробукола и его производного, например ΑΟ!-1067 и т.п., антагониста ССК2, антагониста СХ3СК1, антагониста ИЛ-Е нитратов и доноров N0, а также ингибиторов фосфодиэстеразы.
Кроме того, представлено применение пептида, содержащего последовательность аминокислот или ретро-последовательность аминокислот пептида, приведенного в табл. 4, 5 или 6, в лечении состояния, выбранного из группы, состоящей из образования атеросклеротических бляшек, образования атеросклеротических повреждений, инфаркта миокарда, инсульта, застойной сердечной недостаточности, функции артериол, заболевания артериол, заболевания артериол, ассоциированного со старением, заболевания артериол, ассоциированного с болезнью Альцгеймера, заболевания артериол, ассоциированного с хронической болезнью почек, заболевания артериол, ассоциированного с гипертензией, заболевания артериол, ассоциированного с деменцией вследствие множественных инфарктов, заболевания артериол, ассоциированного с субарахноидальным кровотечением, заболевания периферических сосудов, хронического обструктивного легочного заболевания (ί-ΌΡΩ), эмфиземы, астмы, идиопатического легочного фиброза,
- 2 012440 легочного фиброза, синдрома дыхательной недостаточности взрослых, остеопороза, болезни Педжета, кальциноза коронарной артерии, ревматоидного артрита, узелкового полиартерита, ревматической полимиалгии, красной волчанки, рассеянного склероза, грануломатоза Вегенера, васкулита центральной нервной системы (СЫ8У), синдрома Шегрена, склеродермы, полимиозита, воспалительной реакции СПИДа, бактериальной инфекции, грибковой инфекции, вирусной инфекции, паразитарной инфекции, гриппа, птичьего гриппа, вирусной пневмонии, синдрома эндотоксического шока, сепсиса, септического синдрома, травмы/раны, трансплантата органа, атеросклероза трансплантата, отторжения трансплантата, язвы роговицы, хронической/незаживающей раны, язвенного колита, реперфузионного повреждения (предупреждения и/или лечения), ишемического реперфузионного повреждения (предупреждения и/или лечения), повреждения спинного мозга (облегчающие эффекты), форм рака, миеломы/множественной миеломы, рака яичников, рака молочной железы, рака толстой кишки, рака костей, остеоартрита, воспалительной болезни кишки, аллергического ринита, кахексии, диабета, болезни Альцгеймера, имплантированного протеза, образования биопленок, болезни Крона, дерматита, острой и хронической экземы, псориаза, контактного дерматита, склеродермы, диабета типа I, диабета типа II, ювенильного диабета, предупреждения начала диабета, диабетической нефропатии, диабетической ретинопатии, эректильной дисфункции, макулярной дегенерации, рассеянного склероза, нефропатии, невропатии, болезни Паркинсона, заболевания периферических сосудов и менингита.
В еще одном варианте осуществления данное изобретение представляет применение пептида, содержащего последовательность аминокислот или ретро-последовательность аминокислот пептида, приведенного в табл. 4, 5 или 6, для изготовления лекарственного средства для лечения состояния, выбранного из группы, состоящей из образования атеросклеротических бляшек, образования атеросклеротических повреждений, инфаркта миокарда, инсульта, застойной сердечной недостаточности, функции артериол, заболевания артериол, заболевания артериол, ассоциированного со старением, заболевания артериол, ассоциированного с болезнью Альцгеймера, заболевания артериол, ассоциированного с хронической болезнью почек, заболевания артериол, ассоциированного с гипертензией, заболевания артериол, ассоциированного с деменцией вследствие множественных инфарктов, заболевания артериол, ассоциированного с субарахноидальным кровотечением, заболевания периферических сосудов, хронического обструктивного легочного заболевания (СОРИ), эмфиземы, астмы, идиопатического легочного фиброза, легочного фиброза, синдрома дыхательной недостаточности взрослых, остеопороза, болезни Педжета, кальциноза коронарной артерии, ревматоидного артрита, узелкового полиартерита, ревматической полимиалгии, красной волчанки, рассеянного склероза, грануломатоза Вегенера, васкулита центральной нервной системы (СИ8У), синдрома Шегрена, склеродермы, полимиозита, воспалительной реакции СПИДа, бактериальной инфекции, грибковой инфекции, вирусной инфекции, паразитарной инфекции, гриппа, птичьего гриппа, вирусной пневмонии, синдрома эндотоксического шока, сепсиса, септического синдрома, травмы/раны, трансплантата органа, атеросклероза трансплантата, отторжения трансплантата, язвы роговицы, хронической/незаживающей раны, язвенного колита, реперфузионного повреждения (предупреждения и/или лечения), ишемического реперфузионного повреждения (предупреждения и/или лечения), повреждений спинного мозга (облегчающие эффекты), форм рака, миеломы/множественной миеломы, рака яичников, рака молочной железы, рака толстой кишки, рака костей, остеоартрита, воспалительной болезни кишки, аллергического ринита, кахексии, диабета, болезни Альцгеймера, имплантированного протеза, образования биопленок, болезни Крона, дерматита, острой и хронической экземы, псориаза, контактного дерматита, склеродермы, диабета типа I, диабета типа II, ювенильного диабета, предупреждения начала диабета, диабетической нефропатии, диабетической ретинопатии, эректильной дисфункции, макулярной дегенерации, рассеянного склероза, нефропатии, невропатии, болезни Паркинсона, заболевания периферических сосудов и менингита.
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение представляет стент для доставки лекарственных средств в сосуд в теле. Стент, как правило, включает каркас стента, включающий множество образованных в нем резервуаров, и пептид, содержащий последовательность аминокислот или ретропоследовательность аминокислот пептида, приведенного в табл. 2-18 (например, в табл. 4, 5 или 6 и т.п.) и/или его инверсионную форму. В некоторых вариантах осуществления стент содержит пептид, включающий последовательность аминокислот 4Р (8ЕО Ш N0: 5) или его инверсионную форму. В некоторых вариантах осуществления активный агент содержится в полимере. В ряде вариантов осуществления каркас стента включает металлическую основу или полимерную основу. В некоторых вариантах осуществления основа каркаса стента включает материал, выбранный из группы, состоящей из нержавеющей стали, нитинола, тантала, сплав ΜΡ35Ν, платины, титана, подходящего биосовместимого сплава, подходящего биосовместимого полимера и их комбинации. Резервуар(ы), составляющий указанный стент, может в некоторых вариантах осуществления включать микропоры (например, имеющие диаметр приблизительно 20 мкм или меньше). В некоторых вариантах осуществления микропоры имеют диаметр, лежащий в интервале от приблизительно 20 до приблизительно 50 мкм. В различных вариантах осуществления микропоры имеют глубину в интервале от приблизительно 10 до приблизительно 50 мкм. В ряде вариантов осуществления микропоры проходят через каркас стента, имея отверстие на внутренней поверхности стента и отверстие на наружной поверхности стента. В различных вариантах осуществления стент,
- 3 012440 кроме того, может включать закрывающий слой, расположенный на внутренней поверхности каркаса стента, причем закрывающий слой покрывает по меньшей мере часть сквозных отверстий и обеспечивает барьерное свойство для контроля скорости выделения лекарственного средства из полимера с лекарственным средством из внутренней поверхности каркаса стента. В различных вариантах осуществления резервуары содержат каналы, проходящие вдоль наружной поверхности каркаса стента. В различных вариантах осуществления полимер включает первый слой полимера с первым лекарственным средством, имеющим первую фармацевтическую характеристику, и полимерный слой включает полимер со вторым лекарственным средством, имеющим вторую фармацевтическую характеристику. В ряде вариантов осуществления стент дополнительно содержит барьерный слой, находящийся между полимером, включающим активный агент. В различных вариантах осуществления с каркасом стента соединен катетер. В некоторых вариантах осуществления катетер может включать баллон, используемый для расширения стента. В некоторых вариантах осуществления катетер включает капсулу, которая втягивается, обеспечивая расширение стента.
Представлен также способ изготовления стента из полимера с лекарственным средством. Способ, как правило, заключается в получении каркаса стента, вырезании множества резервуаров в каркасе стента, нанесении композиции, содержащей один или более пептидов, содержащих последовательность аминокислот или ретро-последовательность аминокислот пептида, приведенного в любой из табл. 2-18, на по меньшей мере один резервуар и высушивание композиции. Способ может дополнительно включать нанесение полимерного слоя на высушенную композицию и высушивание полимерного слоя.
Данное изобретение также представляет способ лечения сосудистого состояния. Способ заключается в помещении стента, как описано выше, в сосуд в теле, расширении стента и выделении по меньшей мере одного активного агента (например, активного агента по любой из табл. 2-18) по меньшей мере из одной поверхности стента.
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение специально исключает один или более пептидов, описанных в патентах США №№ 6037323, 4643988, 6933279, 6930085, 6664230, 3767040, 6037323, патентных публикациях США 2005/0164950, 2004/0266671, 2004/0254120, 2004/0057871, 2003/0229015, 2003/0191057, 2003/0171277, 2003/0045460, 2003/0040505; публикациях РСТ АО 2002/15923, АО 1999/16408, АО 1997/36927 и/или в статье Оайег е! а1. (1992) Апепо8с1его818 апб ТйготЬо818, 12: 886-894, которые включены в данном контексте в виде ссылки.
Определения.
Термин лечить при использовании в контексте лечения, например патологии или заболевания, относится к ослаблению и/или устранению одного или более симптомов данной патологии или заболевания, и/или снижению скорости развития или тяжести одного или более симптомов данной патологии или заболевания, и/или предупреждению данной патологии или заболевания.
Термины выделенный, очищенный или биологически чистый, касательно выделенного полипептида, относятся к материалу, который в существенной мере или в основном свободен от компонентов, которые в норме сопровождают его, как обнаружено в его нативном состоянии. Касательно нуклеиновых кислот и/или полипептидов термин может относиться к нуклеиновым кислотам или полипептидам, которые более не фланкируются последовательностями, как правило, фланкирующими их в естественных условиях. Химически синтезированные полипептиды являются выделенными, поскольку их не обнаруживают в нативном состоянии (например, в крови, сыворотке и т.п.). В ряде вариантов осуществления, термин выделенный указывает на то, что полипептид не обнаруживают в естественном состоянии.
Термины полипептид, пептид и белок используют взаимозаменяемо в данном контексте в отношении полимера из аминокислотных остатков. Термины применяют к полимерам на основе аминокислот, в которых один или более остатков аминокислот представляет собой искусственный химический аналог соответствующей естественной аминокислоты, а также к естественным полимерам аминокислот.
Термин амфипатический спиральный пептид относится к пептиду, включающему по меньшей мере одну амфипатическую спираль (амфипатический спиральный домен). Некоторые амфипатические спиральные пептиды, соответствующие данному изобретению, могут включать две или более (например, 3, 4, 5 и т. п.) амфипатические спирали.
Термин амфипатическая спираль класса А относится к белковой структуре, которая образует αспираль, приводящую к сегрегации полярных и неполярных наружных поверхностей с положительно заряженными остатками, находящимися на разделе полярного и неполярного участков, и отрицательно заряженными остатками, находящимися в центре полярной наружной поверхности (см., например, статью 8едгез! е! а1. (1990) Рго!еш8: 81гис!иге, Рипсйоп, апб ОепеДсз 8:103-117).
Аполипопротеин 1 (аро 1) известен под множеством названий, включая кластерин, ТКРМ2, ОР80 и 8Р 40 (см., например, Ρη!ζ (1995) стр. 112 в монографии: С1и81епп: Ро1е ίη Уег1еЬга1е Эеуе1ортеп1. Рцпсйоп, апб Абар1а1юп (Кластерин - роль в развитии, функции и адаптации позвоночных животных) (под ред. Нагтопу 1АК), Р.С. Ьапбез, Оеогде!о^п, ТХ). Он был впервые описан как гетеродимерный гликопротеин и компонент секретируемых белков культивируемых клеток Сертоли крыс (см. статью К188щдег е! а1. (1982) Вю1 Рергоб; 27:233240). Транслируемый продукт представляет собой одноцепочечный белок-предшественник, который подвергается внутриклеточному расщеплению с образованием связан
- 4 012440 ных дисульфидом α-субъединицы молекулярной массы 34 кД и β-субъединицы молекулярной массы 47 кД (см., например, статью Со11агб аиб Спк\го1б (1987) Вюсбет., 26:3297-3303). Он ассоциирован с повреждением клетки, транспортом липидов, апоптозом и может участвовать в очистке клеточного дебриса, вызываемого повреждением или гибелью клетки. Показано, что кластерин связывается с рядом молекул с высокой аффинностью, в том числе с липидами, пептидами и белками и гидрофобным зондом 1анилин-8-нафталинсульфонатом (см. статью Вайеу е! а1. (2001) Вюсбет., 40:11828-11840).
Амфипатическая спираль класса О обнаружена в глобулярных белках и, вследствие этого, получила название класс О. Признаком данного класса амфипатической спирали является то, что он имеет случайное распределение положительно заряженных и отрицательно заряженных остатков на полярной наружной поверхности при наличии узкой неполярной наружной поверхности. Вследствие узкой неполярной наружной поверхности данный класс не ассоциируется с легкостью с фосфолипидом (см., например, статью 8едгек! е! а1. (1990) Рго!е1ик: 81гис!иге, Риисбои, апб Оеиебск. 8:103-117; см. также статью Егга1ит (1991) Рго!ешк: 81гис!иге, Риисбои апб Оеиебск, 9:79). Ряд заменяемых аполипопротеинов обладает аналогичными, но не идентичными с амфипатической спиралью О характеристиками. Подобно амфипатической спирали класса О данный другой класс имеет случайное распределение положительно и отрицательно заряженных остатков на полярной наружной поверхности. Однако, в противоположность амфипатической спирали класса О, которая имеет узкую неполярную наружную поверхность, данный класс имеет широкую неполярную наружную поверхность, которая позволяет данному классу с легкостью связывать фосфолипид, и данный класс обозначают О*, чтобы отличить его от класса О амфипатической спирали (см., например, статью 8едгек! е! а1. (1992) 1. Ыр1б Век., 33: 141-166; см. также раздел Аиаи!багат;баб е! а1. (1993) стр. 109-142 в монографии Тбе АтрЫра!Ыс Небх, под ред. Ераиб В.М., СВС Ргекк, Воса Ва!ои, Р1опба). Компьютерные программы для идентификации и классификации амфипатических спиральных доменов описаны в статье 1оиек е! а1. (1992) 1. Ыр1б Кек. 33: 287-296 и включают, но без ограничения перечисленным программу витков спирали (^НЕЕЬ или ^НЕЕЬ/δΝΟΚΚΕΕ), программу сети спирали (НЕЬ№Т, НЕ^NЕΤ/8NΟКΚЕ^, НЕ^NЕТ/Аид1е), программу для введения витков спирали (СОМВО или СΟМВΟ/8NΟКΚЕ^), программу для введения сетей спирали (СОМ№Т, СОМNЕΤ/8NΟКΚΕ^, СОМВО/8ЕЬЕСТ, СОМВО/№Т), консенсусную программу витков (ίΌΝ8ΡΝ8υ8. СΟN§ЕN§υ8/8NΟКΚΕ^) и т.п.
Термин облегчение при использовании в контексте облегчения одного или более симптомов атеросклероза относится к уменьшению, предупреждению или устранению одного или более симптомов, характерных для атеросклероза и/или ассоциированных патологий. Данное уменьшение включает, но без ограничения перечисленным, восстановление или удаление окисленных фосфолипидов, уменьшение образования и разрушение атеросклеротических бляшек, уменьшение числа клинических случаев, таких как сердечный приступ, стенокардия или инсульт, уменьшение гипертензии, снижение уровня биосинтеза воспалительного белка, снижение уровня холестерина в плазме и т.п.
Термин энантиомерные аминокислоты относится к аминокислотам, которые могут существовать по меньшей мере в двух формах, которые представляют собой не накладывающиеся одно на другое зеркальные изображения друг друга. Большинство аминокислот (за исключением глицина) являются энантиомерными и существуют в так называемой Ь-форме (Ь-аминокислота) или Ό-форме (Ό-аминокислота). Большинство природных аминокислот являются Ь-аминокислотами. Термины Ό-аминокислота и Ьаминокислота используют в отношении абсолютной конфигурации аминокислоты, а не определенного направления вращения плоско-поляризованного света. Использование в данном контексте соответствует стандартному использованию компетентными специалистами в области техники. Аминокислоты обозначают в данном контексте, используя стандартные 1-буквенные или трехбуквенные коды, например как обозначают в Стандарте 8Т.25 в Наиббоок Ои 1ибикбга1 Ргоребу 1иРогтабои аиб Поситеи1абои (Справочник по информации и документации промышленной собственности).
Термин защитная группа относится к химической группе, которая, будучи присоединенной к функциональной группе в аминокислоте (например, к боковой цепи, α-аминогруппе, α-карбоксильной группе и т. п.), блокирует или маскирует свойства данной функциональной группы. Предпочтительные аминоконцевые защитные группы включают, но без ограничения перечисленным, ацетильные или аминогруппы. Другие амино-концевые защитные группы включают, но без ограничения перечисленным, алкильные цепи как в жирных кислотах, пропеонил, формил и др. Предпочтительные карбоксильные концевые защитные группы включают, но без ограничения перечисленным, группы, которые формируют амиды или сложные эфиры.
Выражение защищает фосфолипид от окисления окисляющим агентом относится к способности соединения снижать уровень окисления фосфолипида (или количество образованного окисленного фосфолипида), когда данный фосфолипид контактирует с окисляющим агентом (например, пероксидом водорода, 13-(8)-НРООЕ, 15-(8)-НРЕТЕ, НРОИЕ, НРЕТЕ, 11()1)1: НЕТЕ и т.п.).
Термины липопротеин низкой плотности или ЛНП определяют в соответствии с обычным применением компетентными специалистами в данной области. Как правило, ЛНП относится к комплексу липид-белок, который, когда его выделяют ультрацентрифугированием, находится в интервале плотно
- 5 012440 сти а=1,019 - а=1,0бз.
Термины липопротеин высокой плотности или ЛВП определяют в соответствии с обычным применением компетентными специалистами в данной области. Как правило, ЛВП относится к комплексу липид-белок, который, когда его выделяют ультрацентрифугированием, находится в интервале плотности а=1,0бз - а=1,21.
Термин ЛВП группы I относится к липопротеину высокой плотности или его компонентам (например, аро А-Ι, параоксоназе, ацетилгидролазе фактора активации тромбоцитов и т.п.), которые восстанавливают окисленные липиды (например, в липопротеинах низкой плотности) или которые защищают окисленные липиды от окисления окисляющими агентами.
Термин ЛВП группы II относится к ЛВП, который дает пониженную активность или отсутствие активности при защите липидов от окисления или при репарации (например, восстановлении) окисленных липидов. Термин компонент ЛВП относится к компоненту (например, молекулам), который включает липопротеин высокой плотности (ЛВП). Анализы на ЛВП, который защищает липиды от окисления или который репарирует (например, восстанавливает окисленные липиды), также включают анализы на компоненты ЛВП (например, аро А-Ι, параоксоназу, ацетилгидролазу фактора активации тромбоцитов и т.п.), которые проявляют данную активность.
Термин человеческий пептид аро А-Ι'' относится к человеческому пептиду аро А-Ι полной длины, или к его фрагменту, или домену, включающим амфипатическую спираль класса А.
Термин реакция моноцитов, как используют в данном контексте, относится к активности моноцитов, характеризующей воспалительную реакцию, ассоциированную с образованием атеросклеротических бляшек. Реакция моноцитов характеризуется адгезией моноцитов к клеткам стенки сосуда (например, клеткам сосудистого эндотелия), и/или хемотаксисом в субэндотелиальное пространство, и/или дифференцировкой моноцитов в макрофаги.
Термин отсутствие изменения касательно количества окисленного фосфолипида означает отсутствие определяемого изменения, более предпочтительно отсутствие статистически значимого изменения (например, на доверительном уровне по меньшей мере 85%, предпочтительно по меньшей мере 90%, более предпочтительно по меньшей мере 95% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 98% или 99%). Отсутствие определяемого изменения может также относиться к анализам, в которых уровень окисленного фосфолипида изменяется, но не в такой степени, как в отсутствие белка(ов), описанного в данном контексте, или относительно других положительных или отрицательных контролей.
В данном контексте могут быть использованы следующие сокращения: РАРС: Ь-а-1-пальмитоил-2арахидоноил-кп-глицеро-3-фосфохолин; РОУРС: 1-пальмитоил-2-(5-оксовалерил)-§п-глицеро-3фосфохолин; Р6РС: 1-пальмитоил-2-глутарил-§п-глицеро-3-фосфохолин; РЕ1РС: 1-пальмитоил-2-(5,бэпоксиизопростан Е2)-§п-глицеро-3-фосфохолин; СйС18:2: холестериллинолеат; СйС18:2-ООН: холестериллинолеат гидропероксид; ЭМРС: 1,2-дитетрадеканоил-гас-глицерол-3-фосфохолин; РОЫ: параоксоназа; НРЕ: стандартизованное поле под большим увеличением; РАРС: Ь-а-1-пальмитоил-2-арахидоноилкп-глицеро-3-фосфохолин; ВЬ/б: С57ВЬ/б1; С3Н:С3Н/Не1.
Термин консервативная замена используют в отношении белков или пептидов, чтобы отразить замены аминокислот, которые существенно не изменяют активность (специфичность (например, в отношении липопротеинов)) или аффинность связывания (например, для липидов или липопротеинов) молекулы. Как правило, консервативные замены аминокислот включают замену одной аминокислоты другой аминокислотой с близкими химическим свойствами (например, зарядом или гидрофобностью). Каждая из следующих шести групп включает аминокислоты, которые представляют собой типичные консервативные замены друг для друга: 1) аланин (А), серин (8), треонин (Т); 2) аспарагиновая кислота (Ό), глутаминовая кислота (Е); 3) аспарагин (Ν), глутамин Ю); 4) аргинин (К), лизин (К); 5) изолейцин (I), лейцин (Ь), метионин (М), валин (V) и б) фенилаланин (Е), тирозин (Υ), триптофан (XV).
Термины идентичный или процент идентичности в контексте двух или более последовательностей нуклеиновых кислот или полипептидов относится к двум или более последовательностям или субпоследовательностям, которые одинаковы или имеют определенный процент остатков аминокислот или нуклеотидов, которые одинаковы при сравнении и выравнивании для получения максимального соответствия, как измеряют, используя один или следующих алгоритмов сравнения последовательностей или путем визуальной проверки. Касательно пептидов, соответствующих данному изобретению, идентичность последовательностей определяют для полной длины пептида.
При сравнении последовательностей, как правило, одна последовательность служит эталонной последовательностью, с которой сравнивают тест-последовательности. При использовании алгоритма сравнения последовательностей тест- и эталонную последовательности вводят в компьютер, если необходимо, задают координаты субпоследовательностей и задают параметры программы алгоритма последовательности. Затем алгоритм сравнения последовательностей рассчитывает процент идентичности последовательностей для тест-последовательности(ей) относительно эталонной последовательности на основе заданных параметров программы.
Можно провести оптимальное выравнивание последовательностей для сравнения, например, по средством алгоритма локальной гомологии, предложенного в статье 8тй11 & \Уа1сгшап. Λάν. Αρρί. Ма111. 2:482 (1981), посредством алгоритма выравнивания гомологии. предложенного в статье №ееб1етап & \Уип5с11. 1 Μοί. Βίοί. 48:443 (1970), посредством исследования методом аналогий, предложенным в статье Реагкоп &Ыршап (1988) Ргос. №111. Асаб. 8сЬ И8А 85:2444, с помощью компьютеризированных осуществлений данных алгоритмов (САР, ВЕ8ТР1Т, РА8ТА, и ТРА8ТА в пакете программ ХУйсощт Сепе1юк 8оП\саге Раскаде, Сепейск СотрШег Сгоир, 575 8с1епсе Όγ., Маб1коп, XVI) или путем визуальной проверки (см. в основном АикиЬе1 е! а1., выше).
Одним из примеров используемого алгоритма является Р1ЬЕиР. Р1ЬЕЦР обеспечивает выравнивание множества последовательностей из группы родственных последовательностей, используя прогрессивные попарные выравнивания, чтобы показать родство и процент идентичности последовательностей. Он также строит древо или дендрограмму, показывающую образование кластеров связей, используемых для создания выравнивания. В Р1ЬЕиР используют упрощение метода прогрессивного выравнивания, предложенного в статье Репд & ЭоойШе (1987) 1. Μοί. Ενοί. 35:351-360. Используемый метод аналогичен методу, описанному в статье Шддшк & 811агр (1989) САВ1О8 5:151-153. Программа может проводить выравнивание до 300 последовательностей, максимальной длины 5000 нуклеотидов или аминокислот каждая. Процедуру множественного выравнивания начинают с попарного выравнивания двух наиболее близких последовательностей, получая кластер их двух выровненных последовательностей. Затем данный кластер выравнивают со следующей наиболее близкой последовательностью или кластером выровненных последовательностей. Два кластера последовательностей выравнивают простым удлинением попарного выравнивания двух отдельных последовательностей. Конечные выравнивание получают серией постепенных попарных выравниваний. Программу осуществляют обозначением специфических последовательностей и координат их аминокислот или нуклеотидов на участках сравнения последовательностей и обозначением параметров программы. Например, эталонную последовательность можно сравнить с другими тест-последовательностями с целью определения родства по проценту идентичности последовательностей, используя следующие параметры: значение гэпа по умолчанию (3,00), значение длины гэпа по умолчанию (0,10) и взвешенные концевые гэпы.
Другим примером алгоритма, который подходит для определения процента идентичности последовательностей и близости последовательностей, является алгоритм ВЬА8Т, который описан в статье А118с1ш е! а1. (1990) 1. Μοί. Βίοί. 215:403-410. Программа для проведения анализов ВЬА8Т имеется в открытом доступе в №а!юпа1 СеШег ίοτ Β^οΐесйηο1οду 1п[огта1юп (Национальный центр информации в области биотехнологии) (111(р://\у\у\у.псЬ1.п1т. ιτίΠ^ον/). Данный алгоритм включает, во-первых, идентификацию часто встречающихся пар последовательностей (Н8Рк) посредством обнаружения коротких групп символов длины V в запрашиваемой последовательности, которые либо соответствуют, либо удовлетворяют некоторому значению Т положительно оцениваемого порога при выравнивании с группой символов такой же длины в последовательности базы данных. Т соответствует пороговому значению результата для соседних групп символов (см. статью АЙксШ е! а1., выше). Данные наиболее распространенные исходные соседние группы символов работают как затравки для начала поиска с целью обнаружения более длинных включающих их Н8Р. Затем наиболее распространенные группы символов удлиняют в обоих направлениях вдоль последовательности настолько, насколько может быть увеличено кумулятивное выравнивание. Кумулятивные показатели баллов рассчитывают, используя для нуклеотидных последовательностей параметры М (поощрительный балл для пары совпадающих остатков; всегда >0) и N (штрафной балл для несовпадающих остатков; всегда <0). Для последовательностей аминокислот используют матрицу баллов, чтобы рассчитать кумулятивный показатель баллов. Удлинение наиболее распространенных групп символов в каждом направлении прекращают, когда кумулятивный показатель баллов выравнивания снижается до количества X от своей максимально достигнутой величины; кумулятивный показатель баллов доходит до нуля или ниже вследствие накопления одного или более выравниваний остатков с отрицательным результатом или достигнут конец любой из последовательностей. Параметры алгоритма ВЬА8Т V, Т и X определяют чувствительность и скорость выравнивания. В программе ВЬА8Т№ (для нуклеотидных последовательностей) используют по умолчанию длину группы символов (V) 11, ожидание (Е) 10, М = 5, N = -4 и сравнение обоих нитей. Для последовательностей аминокислот в программе ВЬА8ТР используют по умолчанию длину группы символов (V) 3, ожидание (Е) 10 и матрицу баллов ВЬО8иМ62 (см. статью Неш^й & Неш^й (1989) Ргос. №а11. Асаб. 8ск И8А 89: 10915).
Кроме расчета процента идентичности последовательности алгоритм ВЬА8Т проводит также статистический анализ близости двух последовательностей (см., например, статью Кагйп &А118сйи1 (1993) Ргос. №111. Асаб. 8ск И8А, 90:5873-5787). Одной из единиц измерения близости, представляемой алгоритмом ВЬА8Т, является минимальная суммарная вероятность (Р(№)), которая представляет собой показатель вероятности, с которой могло бы случайно встречаться соответствие двух нуклеотидных или аминокислотных последовательностей. Например, считают, что нуклеиновая кислота близка эталонной последовательности, если минимальная суммарная вероятность при сравнении анализируемой нуклеиновой кислоты с эталонной нуклеиновой кислотой меньше чем приблизительно 0,1, более предпочтительно меньше чем приблизительно 0,01 и наиболее предпочтительно меньше чем приблизительно 0,001.
Выражение в сочетании с при использовании в отношении применения одного или более лекарст
- 7 012440 венного средства(в) с сочетании с одним или более активным агентом(ами), описанного в данном контексте, указывает на то, что лекарственное средство(а) и активный агент(ы) вводят так, чтобы было, по меньшей мере, некоторое перекрывание в их физиологической активности в отношении организма. Так, лекарственное средство(а) и активный агент(ы) можно вводить одновременно и/или последовательно. При последовательном введении может быть даже достаточно существенная задержка (например, минуты или даже часы или дни) перед введением второго средства настолько, чтобы первый введенный лекарственное средство/агент произвел некоторое физиологическое изменение в организме, когда вводят второй вводимый агент или он становится активным в организме.
Выражения прилежащие друг к другу в диаграмме витка спирали пептида или следующие друг за другом в диаграмме витка спирали пептида касательно остатков спирального пептида указывают на то, что в представлении витка спирали остатки, по-видимому, прилегают или следуют друг за другом, даже если они могут не прилегать или не следовать друг за другом в линейном пептиде. Так, например, остатки А, Е, К, V, К и Ε следуют друг за другом в диаграммах витка спирали, показанных на фиг. 17, даже если данные остатки не следуют друг за другом в линейном пептиде.
Перечень фигур
На фиг. 1 представлено сравнение эффекта Ό4Ρ (см. статью №саЬ. с1 а1. (2002) С1гси1а1юи, 105:290292) и пептида аро1 336, полученного из Ό-аминокислот (Ό-1336*), на предупреждение ЛНПиндуцированной активности хемотаксиса моноцитов ίη νίΐτο в эксперименте с соинкубированием. Данные представляют собой среднее ±8Ό числа мигрирующих моноцитов в 9 полях под большим увеличением микроскопа в культурах в четырех повторностях. (Ό-1336=Α^ΡΕΕΟΡΝΕΟΡΝ\νν8ΡΡΑΝΡΤΟΟΕΝΗ2, 8ЕО ΙΌ ΝΟ: 1).
На фиг. 2 показано предупреждение ЛНП-индуцированной активности хемотаксиса моноцитов путем предварительной обработки клеток стенки артерии Ό-1336 по сравнению с Ό-4Ρ. Данные представляют собой среднее ±8Ό числа мигрирующих моноцитов в 9 полях под большим увеличением микроскопа в культурах в четырех повторностях.
На фиг. 3 демонстрируется влияние миметиков пептида аро 1 на защитную способность ЛВП у мышей с отсутствием рецептора ЛНП. Значения представляют собой среднее ±8Ό числа мигрирующих моноцитов в 9 полях под большим увеличением микроскопа из каждой лунки при анализе в четырех повторностях.
На фиг. 4 показана защита от ЛНП-индуцированной активности хемотаксиса моноцитов с помощью ЛВП нулевых по аро Е мышей, получающих пероральные пептиды. Данные представляют собой среднее ±8Ό числа мигрирующих моноцитов в 9 полях под большим увеличением микроскопа из каждой лунки при анализе в четырех повторностях. Звездочки указывают достоверную разницу (р<0,05) по сравнению с мЛВП (мышиным ЛВП) без пептида.
На фиг. 5 показано влияние перорального миметика пептида аро А-1 и пептида аро1 на чувствительность ЛНП к окислению. Значения представляют собой среднее ±8Ό числа мигрирующих моноцитов в 9 полях под большим увеличением микроскопа в культурах из каждой лунки при анализе в четырех повторностях. Звездочки указывают достоверную разницу (р<0,05) по сравнению с ЛНП без пептида.
На фиг. 6 показано влияние перорального миметика пептида аро А-1 и пептида аро1 на защитную способность ЛВП. Значения представляют собой среднее ±8Ό числа мигрирующих моноцитов в 9 полях под большим увеличением микроскопа в культурах из каждой лунки при анализе в четырех повторностях. Звездочки указывают достоверную разницу (р<0,05) по сравнению с мЛВП без пептида.
На фиг. 7 показано влияние перорального миметика пептида аро А-1 и пептида аро1 на активность параоксоназы в плазме. Значения представляют собой среднее ±8Ό данных прочтения аликвот плазмы в четырех повторностях. Звездочки указывают достоверную разницу (р<0,05) по сравнению с контрольной плазмой без пептида.
На фиг. 8 показано влияние пероральных С* пептидов на защитную способность ЛВП у мышей ароЕ-/-. Значения представляют собой среднее ±8Ό данных, снятых с аликвот плазмы в четырех повторностях. Звездочки указывают достоверную разницу (р<0,05) по сравнению с контрольной плазмой без пептида.
На фиг. 9 показано влияние перорального пептида С*, 146-156, на защитную способность ЛВП у мышей АроЕ-/-.
На фиг. 10-12 показаны схемы витка спирали ряда пептидов, соответствующих данному изобретению.
Фиг. 10: ν;\νΑ'Ε -Ι)-4Ε; фиг. 11: ν3-Ό-4Ε; фиг. 12: ν2ν3Ε10-Ό-4Ε.
На фиг. 13 показано, что стандартный человеческий ЛНП (ЛНП) вводят в сокультуры стенки артерии человека без добавления или с добавлением человеческого ЛВП (+ контроль ЛВП), или с мышиным ЛВП, полученным от мышей с отсутствием ароЕ, получавших корм в течение суток (+ корм ЛВП), или получавших Ό-4Ρ в корме в течение суток (+ Ό4Ρ ЛВП), или получавших Ο5-Ό-4Ε в корме в течение суток (+ С5 ЛВП), или получавших С5, 10-Ό-4Ε в корме в течение суток (+ 5-10 ЛВП), или получавших С5, 11-Ό-4Ε в корме в течение суток (+ 5-11 ЛВП) и определяют полученную в результате активность хемо
- 8 012440 таксиса моноцитов, как описано ранее (см. статью №1таЬ с1 а1., (2002), С1гси1а1юп, 105:290-292).
На фиг. 14 показано, что пептиды, соответствующие данному изобретению, эффективно уменьшают симптомы диабета (например, уровень глюкозы в крови). У крыс ОЬсхс 2искег в возрасте 26 недель берут кровь, а затем лечат ежедневными внутрибрюшинными инъекциями Ω-4Ρ (5,0 мг/кг/день). Через 10 дней у крыс снова берут кровь и определяют уровни глюкозы и гидропероксидов липидов (ЬООН) в плазме. *р=0,027; **р=0,0017.
На фиг. 15 показано, что крысам ОЬеке 2искег в возрасте 16 недель делают инъекцию Э-4Р (5 мг/кг/день) в течение 1 недели, во время которой они подвергаются баллонному повреждению общей сонной артерии. Через две недели крыс умерщвляют и определяют соотношение интимальных сред.
На фиг. 16 демонстрируют, что продукт, полученный согласно схеме жидкофазного синтеза, является биологически очень активным в плане продукции ЛВП и пре-в-ЛВП, который ингибирует ЛНПиндуцированный хемотаксис моноцитов у мышей с отсутствием ароЕ. Мышей с отсутствием АроЕ кормят 5 мкг Ω-4Ε синтезированного, как описано выше (фрагмент), или мышам дают такое же количество мышиного корма без Э-4Е (корм). Через 20 ч после начала кормления у мышей берут кровь и их плазму фракционируют на ЕРЬС (жидкостная экспресс-хроматография белков). ЛНП (100 мкг ЛНП-холестерин) добавляют к сокультурам клеток стенки артерии человека в виде монокомпонента (ЛНП) или с контрольным человеческим ЛВП (контроль ЛВП) или с ЛВП (50 мкг ЛВП-холестерина) либо пост-ЛВП (пЛВП; пре-β ЛВП), полученных от мышей, которые получали (фрагмент) или не получали (корм) Ω-4Ε определяют полученную активность хемотаксиса моноцитов.
На фиг. 17 показано представление витка спирали 4Е и обратного (ретро) 4Е. Обратный 4Е представляет собой зеркальное отражение 4Е с соответствующими положениями аминокислот друг относительно друга и идентичными гидрофильными и гидрофобными внешними поверхностями.
На фиг. 18 показано сравнение воспалительного индекса Э-4Е относительно обратного Э-4Е
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
I. Способы лечения.
Активные агенты (например, пептиды, маленькие органические молекулы, пары аминокислот и т.п.), описанные в данном контексте, эффективны для ослабления одного или более симптомов и/или снижения скорости развития и/или тяжести одного или более симптомов, описанных в данном контексте. В частности, активные агенты (например, пептиды, маленькие органические молекулы, пары аминокислот и т.п.), описанные в данном контексте, эффективны для ослабления одного или более симптомов атеросклероза. Вне связи с определенной теорией полагают, что пептиды связывают затравочные молекулы, требующиеся для образования провоспалительных окисленных фосфолипидов, таких как Ох-РАРС, РОУРС, РОРС и РЕ1РС.
Кроме того, поскольку многие воспалительные состояния и/или другие патологии опосредованы, по меньшей мере частично, окисленными липидами, полагают, что пептиды, соответствующие данному изобретению, эффективны в облегчении состояний, которые характеризуются образованием биологически активных окисленных липидов. Кроме того, существует ряд других состояний, при которых активные агенты, описанные в данном контексте, по-видимому, являются эффективными.
Ниже описан ряд патологий, при которых активные агенты, описанные в данном контексте, повидимому, являются паллиативными и/или профилактическими.
А) Атеросклероз и ассоциированные патологии.
Обнаружено, что нормальный ЛВП ингибирует три стадии образования мягко окисленного ЛНП. В частности, продемонстрировано, что обработка человеческого ЛНП ίη νίίτο аро А-Ι или миметическим пептидом аро А-Ι (37рА) удаляет затравочные молекулы из ЛНП, который включает НРОЭЕ и НРЕТЕ. Данные затравочные молекулы требуются для сокультур человеческих клеток стенки артерии, чтобы они были способны окислять ЛНП и для того, чтобы ЛНП индуцировал продукцию активности хемотаксиса моноцитов клетками стенки артерии. Продемонстрировано также, что после инъекции мышам или инфузии человеку аро А-Ι ЛНП, выделенный у мышей или людей, добровольно участвующих в эксперименте, был устойчив к окислению человеческими клетками стенки артерий и не индуцировал активность хемотаксиса моноцитов в сокультурах клеток стенки артерии.
Защитную функцию различных активных агентов, соответствующих данному изобретению, иллюстрируют в различных родственных заявках (см., например, 09/645454, поданную 24 августа 2000 г., 09/896841, поданную 29 июля 2001 г., и \УО 02/15923 (РСТ/ϋδ 01/26497), поданную 29 июня 2001 г., см., например, фиг. 1-5 в \УО 02/15923. Фиг. 1, панели А, В, С и Э в \УО 02/15923 показывают связь 14С-Э-5Е с компонентами крови у мышей с отсутствием АроЕ). Продемонстрировано также, что ЛВП, выделенный у мышей, которые получали атерогенный корм и которым делали инъекцию РВ8 (забуференного фосфатом солевого раствора), не ингибировал окисление человеческого ЛНП и не подавлял ЛНПиндуцированную активность хемотаксиса моноцитов в человеческих сокультурах стенки артерии. Напротив, ЛВП, выделенный у мышей, которые получали атерогенный корм и которым делали инъекцию пептидов, описанных в данном контексте, был настолько же эффективен в плане ингибирования окисления человеческого ЛНП и предупреждения ЛНП-индуцированной активности хемотаксиса моноцитов в
- 9 012440 сокультурах, как нормальный человеческий ЛВП (см. фиг. 2А и 2В в заявке \¥О 02/15923). Кроме того, ЛНП, выделенный у мышей, которые получали атерогенный корм и которым делали ежедневную инъекцию РВ8, легче окислялся и легче индуцировал хемотаксическую активность моноцитов, чем ЛНП, выделенный у мышей, которые получали такой же корм, но которым делали инъекцию по 20 мкг пептида 5Р ежедневно. Ό-пептид, по-видимому, не является иммуногенным (см. фиг. 4 в заявке \¥О 02/15923).
Ответы ίη νίΐΓΟ человеческих клеток стенки артерии на ЛВП и ЛНП, выделенные у мышей, которые получали атерогенный корм и которым делали инъекцию пептида, соответствующего данному изобретению, согласуются с защитным действием, показанным данными пептидами ίη νίνο. Несмотря на близкие уровни общего холестерина, ЛНП-холестерина, ЛСП+ЛОНП-холестерина и пониженный уровень ЛВПхолестерина, как доли общего холестерина, животные, которые получают атерогенный корм и которым делают инъекцию пептида, имеют достоверно более низкие уровни повреждений (см. фиг. 5 в заявке \¥О 02/15923). Таким образом, пептиды, соответствующие данному изобретению, предупреждают развитие атеросклеротических повреждений у мышей, которые получают атерогенный корм.
Таким образом, в одном варианте осуществления данное изобретение представляет способы облегчения и/или предупреждения одного или более симптомов атеросклероза посредством введения одного или более активных агентов, описанных в данном контексте.
Отмечено также, что уровень с-реактивного белка, маркера воспаления, повышается при застойной сердечной недостаточности. Кроме того, при застойной сердечной недостаточности происходит накопление молекул реакционного кислорода и патологий сосудодвигательной функции. Вследствие своих эффектов предупреждения/снижения уровня образования различных окисленных молекул и/или вследствие своего эффекта улучшения вазореактивности и/или функции артериол (см. ниже) активные агенты, описанные в данном контексте, будут эффективными при лечении застойной сердечной недостаточности.
B) Симптомы, связанные с артериолами/сосудами.
Сосуды, более мелкие, чем даже самые маленькие артерии (т.е. артериолы) утолщаются, становятся нефункциональными и вызывают конечное повреждение органов в тканях настолько различных, как головной мозг и почка. Полагают, что активные агенты, описанные в данном контексте, могут действовать, улучшая структуру и функцию аретриол и/или замедляя скорость и/или тяжесть дисфункции артериол. Не будучи связанными конкретной теорией, полагают, что дисфункция аретриол является причинным фактором при различных нарушениях головного мозга и почек. Использование агентов, описанных в данном контексте, таким образом, дает возможность улучшения структуры и функции артериол и сохраняет функцию конечных органов, таких как головной мозг и почка.
Так, например, ожидают, что введение одного или более активных агентов, описанных в данном контексте, уменьшит один или более симптомов или замедлит развитие ил и тяжесть заболевания артериол, ассоциированного со старением, и/или болезнью Альцгеймера, и/или болезнью Паркинсона, и/или с деменцией вследствие множественных инфарктов и/или кровотечением и т.п. Аналогично ожидают, что введение одного или более агентов, описанных в данном контексте, ослабляет один или более симптомов и/или замедляет развитие и/или тяжесть хронической болезни почек и/или гипертензии.
Аналогично агенты, описанные в данном контексте, по-видимому, повышают вазореактивность. Вследствие улучшения вазорективности и/или функции артериол агенты, описанные в данном контексте, подходят для лечения периферического сосудистого заболевания, эректильной дисфункции и т.п.
C) Легочные симптомы.
Агенты, описанные в данном контексте, подходят для лечения ряда легочных показаний. Они включают, но без ограничения перечисленным, хроническое обструктивное легочное заболевание (СОРИ), эмфизему, легочное заболевание, астму, идиопатический легочный фиброз и т.п.
Ό) Облегчение симптома или состояния, ассоциированного с кальцинозом коронарной артерии и остеопорозом.
Кальциноз сосудов и остеопороз часто существуют совместно у одних и тех же пациентов (см. статьи ОисЫ е! а1. (1993) Αηη ΝΥ Асаб δα, 676: 297-307; Воикйпк апб Вескег (1972) ΙΑΜΑ, 219: 1307-1311; Вапкк е! а1. (1994) Еиг 1 СИп 1пуе51.. 24: 813-817; Багосйе е! а1. (1994) Сйп Вйеита!о1, 13: 611-614; ВгоиНк апб Карйо1а (1993) Епбосг Веди1, 27: 57-60; Ргуе е! а1. (1992) Вопе Мте., 19: 185-194; Вагепдо1!к е! а1. (1998) Са1с1Т Пккие 1п!., 62: 209-213; Вите!! апб Уаыкатап (2002) Апп Сйп Вюсйет., 39: 203-210). В статье Рагкаш! е! а1. (1997) АПепо8с1 ТктотЬ Уаке Вю1., 17: 680-687, продемонстрировано, что мягко окисленный ЛНП (МО-ЛНП) и биологически активные липиды в МО-ЛНП [т.е. окисленный 1-пальмитоил-2арахидоноил-кп-глицеро-3-фосфорилхолин (Ох-РАРС)], а также изопростан, 8-изопростагландин Е2, но не неокисленный фосфолипид (РАРС) или изопростан 8-изопростагландин Ρ2α индуцируют активность щелочной фосфатазы и остеобластную дифференцировку кальцифицирующихся сосудистых клеток (СУСк) ш уйго, но ингибируют дифференцировку костных клеток МС3Т3-Е1.
Остеон напоминает стенку артерии, в которой остеон находится в центре просвета с выстилкой из эндотелиальных клеток, окруженный субэндотелиальным пространством, включающим матрикс и клетки, подобные фибробластам, которые, в свою очередь, окружены преостеобластами и остеобластами, занимающими положение, аналогичное положению клеток гладкой мускулатуры в стенке артерии (!<!.).
- 10 012440
Трабекулярные костные остеобласты также находятся на границе субэндотелиальных пространств костного мозга (16.). В работе РагНат! е! а1. допускают, что липопротеины могут проходить через эндотелий артерий костей и откладываются в субэндотелиальном пространстве, где они могут подвергаться окислению как в коронарных артериях (16.). Основываясь на своих данных ίη νίίτο, авторы статьи предсказывают, что окисление ЛНП в субэндотелиальном пространстве артерий костей и в костном мозге привело бы к пониженной остеобластной дифференцировке и минерализации, которые участвовали бы в развитии остеопороза (16.). Гипотеза авторов статьи далее предсказывает, что уровни ЛНП будут положительно коррелировать с остеопорозом, также как с кальцинозом коронарных артерий (см. статью Ро111е е! а1. (2001) СагсЫаОоп. 104: 1927-1932), но уровни ЛВП будут отрицательно коррелировать с остеопорозом (см. статью РагНапи е! а1. (1997) Аг1епо8с1 ТНготЬ Уазе Βίο1, 17: 680-687).
Ιη νίίτο остеобластную дифференцировку линии клеток стромы костного мозга М2-10В4 ингибирует МО-ЛНП, но не нативный ЛНП (см. статью Раг11апи е! а1. (1999) 1 Вопе Мтег Кез., 14: 2067-2078). При культивировании клеток стромы костного мозга чувствительных к атеросклерозу мышей С57ВЬ/6 (ВЬ6), получающих корм с низким содержание жиров, имеется интенсивная остеогенная дифференцировка (Ι6.). Напротив, при культивировании клеток стромы костного мозга, выделенных у мышей после атерогенной диеты с высоким содержанием жиров, они не подвергаются остеогенной дифференцировке (Ι6.). Данное наблюдение является особенно важным, поскольку оно представляет возможное объяснение пониженного остеогенного потенциала клеток стромы костного мозга при развитии остеопороза (см. статью ЫиИаИ ап6 О1тЬ1е (2000) Вопе, 27: 177-184). Ιη νίνο снижение остеогенного потенциала сопровождается повышением адипогенеза в кости, пораженной остеопорозом (Ι6.).
Показано, что добавление Ό-4Ρ в питьевую воду мышей с отсутствием ароЕ в течение 6 недель резко повышает минеральную плотность трабекулярных костей и считают, что другие активные агенты, соответствующие данному изобретению, будут действовать аналогичным образом.
Данные авторов заявки показывают, что остеопороз можно рассматривать как атеросклероз кости. По-видимому, он является результатом действия окисленных липидов. ЛВП разрушает данные окисленные липиды и способствует остеобластной дифференцировке. Данные авторов показывают, что введение активного агента(ов), соответствующих данному изобретению, млекопитающему (например, в питьевой воде мышам с отсутствием ароЕ) приводит к резкому увеличению трабекулярной кости в течение нескольких недель.
Это показывает, что активные агенты, описанные в данном контексте, эффективны в плане ослабления одного или более симптомов остеопороза (например, подавления декальцификации) или для индукции рекальцификации кости, пораженной остеопорозом. Активные агенты используют также в качестве профилактических средств для предупреждения начала развития симптома(ов) остеопороза у млекопитающего (например, пациента с риском развития остеопороза).
Авторы заявки считают, что аналогичные механизмы являются причиной кальциноза коронарных артерий, например, кальцинозного аортального стеноза. Так, в ряде вариантов осуществления данное изобретение предусматривает применение активных агентов, описанных в данном контексте, для подавления или предупреждения симптома заболевания, такого как кальциноз коронарных артерий, кальцинозный аортальный стеноз, остеопороз и т.п.
Е) Воспалительные и аутоиммунные симптомы.
Хронические воспалительные и/или аутоиммунные состояния также характеризуются образованием ряда реакционных молекул кислорода и поддаются лечению с использованием одного или более активных агентов, описанных в данном контексте. Так, вне связи с определенной теорией полагают также, что активные агенты, описанные в данном контексте, эффективны профилактически или терапевтически в плане подавления начала развития и/или одного или более симптомов ряда других состояний, включая, но без ограничения перечисленным, ревматоидный артрит, красную волчанку, узелковый полиартериит, ревматическую полимиалгию, рассеянный склероз и т.п.
В ряде вариантов осуществления активные агенты используют для ослабления одного или более симптомов, вызываемых или ассоциированных с воспалительной реакцией при данных состояниях.
Кроме того, в ряде вариантов осуществления активные агенты используют для ослабления одного или более симптомов, вызываемых или ассоциированных с воспалительной реакцией, связанной со СПИДом.
Г) Инфекции/травма/трансплантаты.
Авторы заявки отмечают, что последствием инфекции гриппа и других инфекций является снижение активности параоксоназы и тромбоцит-активирующей ацетилгидролазы в ЛВП. Вне связи с определенной теорией авторы полагают, что в результате потери данных ферментных активностей ЛВП, а также в результате связывания прооксидантных белков с ЛВП во время ответа острой фазы ЛВП более неспособен препятствовать окислению ЛНП и более неспособен препятствовать ЛНП-индуцированному образованию активности хемотаксиса моноцитов эндотелиальными клетками. Авторы заявки отмечают, что у пациента, которому ежедневно инъецируют очень низкие дозы ряда агентов, соответствующих данному изобретению (например, 20 мкг/мышь), после инфекции вируса гриппа А уровни параоксоназы не снижаются и не происходит генерация биологически активных окисленных фосфолипидов выше ис
- 11 012440 ходного уровня. Это показывает, что 4Р, Ό4Ρ (и/или другие агенты, соответствующие данному изобретению) можно ввести (например, перорально или инъекцией) пациентам (в том числе, например, пациентам с диагностированной болезнью коронарной артерии во время инфекции гриппа или других событий, которые могут генерировать острую фазу воспалительной реакции, например, вследствие вирусной инфекции, бактериальной инфекции, травмы, трансплантата, различных аутоиммунных состояний и т.п.) и, таким образом, можно предупредить с помощью данного краткосрочного лечения повышенную вероятность сердечного приступа и инсульта, ассоциированных с патологиями, которые генерируют данные воспалительные состояния. Кроме того, с целью восстановления и/или поддержания уровней пароксоназы и/или активности моноцитов агент(ы), соответствующий данному изобретению, используют при лечении инфекции (например, вирусной инфекции, бактериальной инфекции, грибковой инфекции) и/или воспалительных патологий, ассоциированных с инфекцией (например, менингита) и/или травмы.
В ряде вариантов осуществления вследствие комбинированной противовоспалительной активности и противоинфекционной активности агенты, описанные в данном контексте, используют также при лечении раны или другой травмы, ослаблении неблагоприятных эффектов, ассоциированных с трансплантатом органа или ткани, и/или отторжении трансплантата органа или ткани и/или имплантированных протезов, и/или атеросклероза трансплантата, и/или образования биопленки. Кроме того, авторы считают, что Ь-4Р, Ό-4Ρ и/или другие агенты, описанные в данном контексте, также применимы для ослабления эффектов повреждений спинного мозга.
С) Диабет и ассоциированные с ним состояния.
Показано также, что различные активные агенты, описанные в данном контексте, показывают эффективность в плане уменьшения и/или предупреждения одного или более симптомов, ассоциированных с диабетом. Так, в различных вариантах осуществления данное изобретение представляет способы лечения (терапевтического и/или профилактического) диабета и ассоциированных патологий (например, диабета типа I, диабета типа II, ювенильного диабета, диабетической нефропатии, нефропатии, диабетической невропатии, диабетической ретинопатии и т. п.).
H) Рак.
ΝΡκΒ представляет собой фактор транскрипции, который в норме активируется в ответ на провоспалительные цитокины и который регулирует экспрессию более чем 200 генов. Многие линии опухолевых клеток показывают конститутивную активацию передачи сигнала ΝΡκΒ.
Различные исследования моделей на мышах опухолей кишки и молочной железы позволяют заключить, что активация пути ΝΡκΒ усиливает развитие опухоли и может действовать в основном на поздних стадиях онкогенеза (см., например, (2004) Се11 118: 285; (2004) I. Сйи. 1пус51.. 114: 569). Ингибирование передачи сигнала ΝΡκΒ подавляет развитие опухоли. Вне связи с конкретной теорией полагают, что механизмы данного подавления включают повышение уровня апоптоза опухолевых клеток, пониженный уровень экспрессии факторов роста опухолевых клеток, доставляемых окружающими клетками стромы, и/или исключение программы дедифференцировки опухолевых клеток, которая важна для инвазии/метастазов опухоли.
Вне связи с конкретной теорией считают, что введение одного или более активных агентов, описанных в данном контексте, будет ингибировать экспрессию, и/или секрецию, и/или активность ΝΡκΒ. Так, в некоторых вариантах осуществления данное изобретение представляет способы лечения патологии, характеризующейся повышенным уровнем ΝΡκΒ, посредством введения одного или более активных агентов, описанных в данном контексте. Так, в различных вариантах осуществления данное изобретение предусматривает ингибирование активации ΝΡκΒ, ассоциированной с раком, путем введения одного или более активных агентов, описанных в данном контексте, необязательно в комбинации с соответствующими терапевтическими средствами против рака.
I) Биохимическая активность.
Показано, что активный агент(ы), описанный в данном контексте, проявляет ряд специфических биологических активностей. Так, например, они повышают уровень гемоксигеназы 1, они повышают уровень внеклеточной супероксиддисмутазы, они уменьшают или препятствуют связыванию миелопероксидазы с ароАП, они уменьшают или препятствуют нитрозилированию тирозина в ароАП, они делают ЛВП противовоспалительным или более противовоспалительным, и они повышают уровень формирования циклинга пре-β ЛВП, они способствуют обратному транспорту холестерина, в частности, обратного транспорта из макрофагов, и они проявляют синергизм в отношении активности статинов. Активные агенты, описанные в данном контексте, можно, таким образом, вводить млекопитающему с целью стимуляции любой из данных активностей, например, чтобы лечить состояние/патологию, тяжесть и/или вероятность начала развития которой снижается с помощью одной или более данных активностей.
1) Ослабление симптома атеросклероза, ассоциированного с острой воспалительной реакцией.
Активные агенты, соответствующие данному изобретению, используют также в ряде контекстов. Например, авторами показано, что сердечно-сосудистые осложнения (например, атеросклероз, инсульт и т.п.) часто сопровождают или следуют за началом острой фазы воспалительной реакции, например, такой, которая ассоциирована с рецидивирующим воспалительным заболеванием, вирусной инфекцией
- 12 012440 (например, гриппом), бактериальной инфекцией, грибковой инфекцией, трансплантатом органа, раной или другой травмой и т. п.
Так, в ряде вариантов осуществления данное изобретение предусматривает введение одного или более активных агентов, описанных в данном контексте, пациенту из группы риска или имеющего острую воспалительную реакцию и/или находящегося в группе риска или имеющего симптом атеросклероза и/или ассоциированную патологию (например, инсульт).
Так, например, пациенту, имеющему или находящемуся в группе риска развития коронарной болезни можно профилактически ввести один или более активных агентов, соответствующих данному изобретению, в период распространения гриппа. Человека (или животное), подверженного рецидивирующему воспалительному состоянию, например, ревматоидному артриту, различным аутоиммунным заболеваниям и т.п., можно лечить одним или более агентами, описанными в данном контексте, с целью подавления или предупреждения развития атеросклероза или инсульта. Человека (или животное), получившего травму, например, острое повреждение, тканевый трансплантат и т.п., можно лечить полипептидом, соответствующим данному изобретению, с целью подавления или предупреждения развития атеросклероза или инсульта.
В ряде случаев данные способы будут приводить к диагнозу наличия или риска развития острой воспалительной реакции. Острая воспалительная реакция, как правило, включает изменения в метаболизме и регуляции генов в печени. Это представляет собой динамический гомеостатический процесс, который включает все основные системы организма в дополнение к иммунной, сердечно-сосудистой и центральной нервной системе. В норме ответ острой фазы продолжается только в течение нескольких дней, однако, в случаях хронического или рецидивирующего воспаления аберрантная продолжительность некоторых аспектов ответа острой фазы может играть роль в повреждении нижележащей ткани, которое сопровождает заболевание, и может также привести к дальнейшим осложнениям, например сердечно-сосудистым заболеваниям или заболеваниям, связанным с отложением белка, таким как амилоидоз.
Важным аспектом ответа острой фазы является радикально измененный профиль биосинтеза печени. В нормальных условиях печень синтезирует характерный набор белков плазмы в стабильных концентрациях. Многие из данных белков выполняют важные функции, и повышенные уровни в плазме данных реагентов острой фазы (АРК) или белков острой фазы (АРР) необходимы во время ответа острой фазы после воздействия стимулятора воспаления. Хотя большинство АРК синтезируются гепатоцитами, некоторые продуцируют другие типы клеток, в том числе моноциты, эндотелиальные клетки, фибробласты и адипоциты. Большинство АРК индуцируются на уровне, превышающем нормальные уровни от 50% до нескольких раз. Напротив, уровень основных АРК может возрастать до 1000 раз относительно нормальных уровней. Данная группа включает сывороточный амилоид А (8АА) и либо С-реактивный белок (СК) у человека, либо его гомолог у мышей, компонент сывороточного амилоида Р (8АР). Концентрации в плазме так называемых отрицательных АРК снижаются во время ответа острой фазы, создавая возможность повышения способности печени синтезировать индуцированные АРК.
В ряде вариантов осуществления ответ острой фазы или его риск оценивают измерением одного или более АРР. Измерение данных маркеров хорошо известно компетентным специалистам в области техники, и имеются коммерческие компании, которые проводят данное измерение (например, АСР, измеренный Сагбю1ес11 Бегуюез, ЬошзуШе, ΚΥ).
Κ) Другие симптомы.
В различных вариантах осуществления предусматривают, что активные агенты, описанные в данном контексте, используют при лечении (например, ослаблении и/или предупреждении) язв роговицы, отторжения эндотелия, болезни Крона, острого и хронического дерматита (включая, но без ограничения перечисленным, экзему и/или псориаз), макулярную дегенерацию, невропатию, склеродерму и язвенный колит.
Обзор показаний/состояний, при которых, как показано, активные агенты эффективны и/или считаются эффективными, представлены в табл. 1.
- 13 012440
Таблица 1
Обзор состояний, при которых активные агенты (например, Ό-4Ε) эффективны и/или считаются эффективными атеросклероз/симптомы/их последствия образование бляшек образование повреждений инфаркт миокарда инсульт застойная сердечная недостаточность сосудистая функция:
функции артериол заболевание артериол ассоциированное со старением ассоциированное с болезнью Альцгеймера ассоциированное с хронической болезнью почек ассоциированное с гипертензией ассоциированное с деменцией вследствие множественных инфарктов ассоциированное с субарахноидальным кровотечением заболевание периферических сосудов легочное заболевание хроническое обструктивное легочное заболевание (СОРЭ) эмфизема астма идиопатический легочный фиброз легочный фиброз синдром дыхательной недостаточности взрослых остеопороз болезнь Педжета кальциноз коронарной артерии аутоиммунные:
ревматоидный артрит узелковый полиартерит ревматическая полимиалгия красная волчанка рассеянный склероз грг1нуломатоз Вегенера васкулит центральной нервной системы (ΟΝ5ν) синдром Шегрена склеродерма полимиозИТ
- 14 012440
Воспалительная реакция СПИДа
Инфекции:
бактериальная грибковая вирусная паразитарная грипп птичий грипп вирусная пневмония синдром эндотоксического шока сепсис септический синдром (клинический синдром, при котором создается впечатление, что у пациента сепсис, но из крови не выделяются никакие организмы) травма/рана :
трансплантат органа атеросклероз трансплантата отторжение трансплантата язва роговицы хроническая/незаживающая рана язвенный колит реперфузионное повреждение (предупреждение и/или лечение) ишемическое реперфузионное повреждение (предупреждение и/или лечение) повреждения спинного мозга (облегчающие эффекты) формы рака миелома/множественная миелома рак яичников рак молочной железы рак толстой кишки рак костей
- 15 012440 остеоартрит воспалительная болезнь кишки аллергический ринит кахексия диабет болезнь Альцгеймера имплантированный протез образование биопленок болезнь Крона дерматит, острый и хронический экзема псориаз контактный дерматит склеродерма диабет и родственные состояния диабет типа I диабет типа II ювенильный диабет предупреждение начала диабета диабетическая нефропатия диабетическая невропатия диабетическая ретинопатия эректильная дисфункция макулярная дегенерация рассеянный склероз нефропатия невропатия болезнь Паркинсона заболевание периферических сосудов менингит
Специфические биологические активности:
повышение уровня гемоксигеназы 1 повышение уровня внеклеточной супероксиддисмутазы предупреждение отторжения эндотелия предупреждение связывания миелопероксидазы с ароА-1 предупреждение нитрозилирования тирозина в ароА-1 делают ЛВП противовоспалительным повышение уровня формирования пре-в ЛВП стимуляция обратного транспорта холестерина из макрофагов проявление синергизма в отношении активности статинов
Следует отметить, что состояния, перечисленные в табл. 1, рассматривают как иллюстративные, а не ограничивающие.
Ь) Введение.
Как правило, активный агент(ы) будут вводить нуждающемуся в этом млекопитающему (например, человеку). Данное млекопитающее, будет, как правило, включать млекопитающее (например, человека), имеющего или находящегося в группе риска развития одной или более патологий, описанных в данном контексте.
Активный агент(ы) можно вводить, как описано в данном контексте, согласно ряду стандартных
- 16 012440 способов, включая, но без ограничения перечисленным, инъекцию, суппозиторий, назальный спрей, имплантат с высвобождением в течение времени, чрескожный пластырь и т. п. В одном особенно предпочтительном варианте осуществления пептид(ы) применяют перорально (например, в виде сиропа, капсулы или таблетки).
Способы включают введение одного активного агента, соответствующего данному изобретению, или введение двух или более различных активных агентов. Активные агенты могут быть представлены как мономеры (например, в отдельных или комбинированных средствах) или в димерных, олигомерных или полимерных формах. В некоторых вариантах осуществления мультимерные формы могут включать ассоциированные мономеры (например, ионно или гидрофобно связанные), тогда как некоторые другие мультимерные формы включают ковалентно связанные мономеры (связанные непосредственно или через линкер).
Хотя изобретение описано в контексте применения для человека, оно также подходит для животных, например, для применения в ветеринарии. Таким образом, некоторые предпочтительные организмы включают, но без ограничения перечисленным, человека, приматов, отличных от человека, собак, лошадей, кошек, свиней, непарнокопытных, зайцеобразных и т. п.
Способы, соответствующие данному изобретению, не ограничены человеком или животными, отличными от человека, проявляющими один или более симптомов описанных в данном контексте патологий, но их используют в профилактическом контексте. Таким образом, активные агенты, соответствующие данному изобретению, можно ввести в организмы для предупреждения начала/развития одного или более симптомов, описанных в данном контексте патологий (например, атеросклероза, инсульта и т.п.). Особенно предпочтительными пациентами в данном контексте являются пациенты, проявляющие один или более факторов риска появления патологии. Так, например, в случае атеросклероза факторы риска включают семейный анамнез, гипертензию, ожирению, сильное злоупотребление алкоголем, курение, высокий уровень холестерина в крови, высокий уровень триглицеридов в крови, повышенный уровень ЛНП, ЛОНП (липопротеинов очень низкой плотности), ЛСП (липопротеинов средней плотности) или низкий уровень ЛВП, диабет или диабет в семейном анамнезе, высокий уровень липидов в крови, сердечный приступ, стенокардию или инсульт и т. п.
II. Активные агенты.
Для лечения одного или более показаний, обсуждаемых выше в данном контексте, подходит широкий круг активных агентов. Данные агенты включают, но без ограничения перечисленным, амфипатические спиральные пептиды класса А, миметики амфипатических спиральных пептидов класса А ароАЛ, содержащие ароматические или алифатические остатки в неполярной наружной поверхности, маленькие пептиды, включая пентапептиды, тетрапептиды, трипептиды, дипептиды и пары аминокислот, Аро-1 (О*-пептиды) и миметики пептидов, например, как описано ниже.
А) Амфипатические спиральные пептиды класса А.
В ряде вариантов осуществления активные агенты, предназначенные для применения в способе, соответствующем данному изобретению, включают амфипатические спиральные пептиды класса А, например, как описано в патенте США 6664230 и публикациях РСТ \УО 02/15923 и \УО 2004/034977. Обнаружено, что пептиды, включающие амфипатическую спираль класса А (пептиды класса А), кроме способности облегчать один или более симптомов атеросклероза эффективны также при лечении одного или более других показаний, описанных в данном контексте.
Пептиды класса А характеризуются образованием α-спирали, которая приводит к разделению полярных и неполярных остатков, формируя таким образом полярную и неполярную наружную поверхность с положительно заряженными остатками, находящимися на границе полярности-неполярности, и отрицательно заряженными остатками, находящимися в центре полярной наружной поверхности (см., например, статью Апап1Нагата1аН (1986) Мс111. Епхуто1. 128: 626-668). Отмечают, что четвертый экзон аро АЛ, уложенный в формате 3,667 остатков/виток, образует амфипатическую спиральную структуру класса А.
Один из пептидов класса А, обозначенный 18А (см., например, статью АиаиШагата1ай (1986) Мс111. Епхуток 128: 626-668) модифицируют, как описано в данном контексте, с образованием пептидов для перорального применения и высокоэффективных в плане подавления или предупреждения одного или более симптомов атеросклероза и/или других показаний, описанных в данном контексте. Вне связи с определенной теорией полагают, что пептиды, соответствующие данному изобретению, могут действовать ίη νίνο, возможно, собирая затравочную молекулу(ы), которая способствует окислению ЛНП.
Авторы заявки установили, что увеличение числа остатков РНе на гидрофобной наружной поверхности 18 А теоретически будет повышать аффинность к липидам, как показано с помощью расчетов, описанных в статье Ра1дипас11ап с1 а1. (1996) Айегю8с1его818, ТйготЬо818, & Уазси1аг Вю1оду 16: 328-338. Теоретически систематическая замена остатков в неполярной наружной поверхности 18А на РНе могла бы дать шесть пептидов. Пептиды с дополнительными 2, 3 и 4 РНе имели бы теоретические значения аффинности к липидам λ 13, 14 и 15 единиц, соответственно. Однако значения λ скачкообразно возрастают на четыре единицы, если число дополнительных РНе возрастает от 4 до 5 (до λ19 единиц). Увеличение
- 17 012440 числа РНе до 6 или 7 давало бы менее резкое увеличение (до 20 и 21 единиц λ соответственно).
Получают ряд данных пептидов класса А, в том числе пептид, обозначенный 4Р, Ό4Ρ, 5Р и Ό5Ρ и т.п. Различные пептиды класса А подавляют развитие повреждений у мышей, чувствительных к атеросклерозу. Кроме того, пептиды демонстрируют варьирующие, но существенные степени эффективности ослабления одного или более симптомов различных патологий, описанных в данном контексте. Ряд данных пептидов проиллюстрирован в табл. 2.
Таблица 2
Иллюстративные амфипатические спиральные пептиды класса А, предназначенные для применения в данном изобретении
Название пептида
Последовательность аминокислот
N0.
18А
2Р
ЗР
ЗЕ 14
4Р
5Г
6Р
7Р
О-И-Ь-К-А-Р-У-О-К-У-А-Е-К-Ь-К-Е-А'Р
Ас-С-И-Ь-К-А-Г-У-О-К-У-А-Е-К-Ь-К-Е-А-Р-ЫН2 АС-О-Н-Е-К-А-Е-У-О-К-У-А-Е-К-Ь-К-Е-А-Г-ИНг Αθ-Ο-Η-Ιι-Κ-Α-Ρ-Υ-ϋ-Κ-ν-Α-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-Α-Ρ-ΝΗ2 АС-О-Н-Р-К-А-Р-Υ-ϋ~Κ-ν-Α-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-Α-Ρ-ΝΉ2 АС-Г>-И-Е-К-А-Р-У-О-К-У-Е-Е-К-Г-К-Е-Е-Р-НН2 Ас-о-и-Ь-К-А-Р-У-О-К-Р-Р-Е-К-Р-К-Е-Р-Р-Р1Н2 Ασ-ϋ-Η-Ρ-Κ-Α-Ρ-Υ-ϋ-Κ-Ρ-Ρ-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-Ρ-Ρ“ΜΗ2 Ас-О-И-Ь-К-А*Р-Υ-ϋ-Κ-ν-Α-Ε-Κ-Ιΐ’Κ-Ε-Ρ-Ρ-ΝΗϊ АС-О-И-Ь-Κ-Α-Ρ-Υ-ϋ-Κ-ν-Ρ-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-Α-Ρ-ΝΗ2 Ас-П-И-Ь-К-А-Р-У-О-К-У-Р-Е-К-Ь-К-Е-Р-Р-ЫН2 Ас-С-И-Ь-К-А-Е-У-О-К-У-А-Е-К-Р-К-Е-Р-Р-ЫНа Ас-О-И-Ь-К-А-Р-У-Р-К-У-Р-Е-К-Р-К-Е-Р-Г-ИНг АС-Е-И-Ь-К-Ь-Г-У-Е-К-У-Ь-Е-К-Р-К-Е-А-Р-ЫН2 Ас-Е-И-Ъ-К-А-Р-У-Р-К-У-А-Е-К-Р-К-Е-А-Р-ЯНг Ас-Е-И-Ь-К-А-Г-У-Р-К-У-А-Е-К-Ь-К-Е-Р-Р-ИНг Ас-Е-И-Ь-К-А-Р-Υ-Ο-Κ-ν-Ρ-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-Α-Ρ-ΝΚϊ Ас-Е-К-Ь-К-А-Р-У-Р-К-У-Ρ-Ε-Κ-Ιι-Κ~Ε-Ρ-Ρ-ΝΗ2 Ас-Е-И-Ъ-К-А-Р-У-Р-К-У-А-Е-К-Р-К-Е-Р-Р-ЫН;, Ас-Е-И-Ь-К-А-Р-У-Р-К-У-Р-Е-К-Р-К-Е-Р-Г-ЫНг
АС-А-Р-У-Р-К-У-А-Е-К-Ь-К-Е-А-Р-НН2 АС-А-Р-У-Р-К-У-А-Е-К-Р-К-Е-А-Р-ЫН2 Ас-А-Р-Υ-Ρ-К-У-А-Е-К-Ε-Κ-Ε-Α-Ρ-ΝΗ2 Ασ-Α-Γ-Υ-Ρ-Κ-Γ-Ρ-Ε-Κ-Γ-Κ-Ε-Ρ-Ρ-ΝΗ2 Ас-А-Р-У-Р-К-Р-Р-Е-К-Г-К-Е-Р-Р-ИНг Αθ“Α-Ρ-Υ-ϋ-Κ-ν-Α-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-Α-Ρ-ΝΗ2 Ас-А-Р-Υ-Ώ-Κ-У-А-Е-К-Ь-К-Е-Ρ-Ρ-ΝΗ2 Ασ-Α-Ρ-Υ-ϋ-Κ-ν-Γ-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-Α-Ρ-ΝΗ2 Ασ-Α-Ρ-Υ-ϋ-Κ-ν-Ρ-Ε-Κ-Ι.-Κ-Ε-Ρ-Ρ-ΝΗ2 АС-А-Р-У-Р-К-У-А-Е-К-Р-К-Е-Р-Р-ЫНг АС-К-А-Р-У-Р-К-У-Р-Е-К-Р-К-Е-Р-ЫН2 Ас-Ъ-Р-У-Е-К-У-Ь-Е-К-Р-К-Е-А-Р-Жг Ас-А-Р-Υ·Ρ-Κ-ν-Α-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-Α-Ρ-ΝΗ2
Ασ-Α-Ρ-Υ-Ρ-Κ-ν-Α-Ε-Κ-Ε-Κ-Ε-Ρ-Ρ-ΝΗ2 АС-А-Р-Υ-Ρ-Κ-ν-Ρ-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-Α-Ρ-ΝΗ2
Ασ-Α-Ρ-ΥΌ-Κ-ν-Ρ-Ε-Κ-Ε-Κ-Ε-Ρ-Ρ-ΝΗί
АС-А-Р-У-Р-К-У-А-Е-К-Р-К-Е-Р-Р-НН2 Ас-А-Р-У-Р-Х-У-Ρ-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-Ρ-Ρ-ΝΗ, дс-Р-И-Ь-К-А-Ь-У-Р-К-У-А-Е-К-Ь-К-Е-А-Ь-МНг Ас-Р-М-Р-К-А-Р-У-Е-К-У-А-Е-К-Ь-К-Е-Р-Р-ЫН2 Αθ-Ρ-Μ-Ρ-Κ-Α-Γ-Υ·-Ε-Κ-Ρ-Ε-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-Ρ-Ρ-ΝΗ2 Ас-Е-Н-Ь-К-А-Ь-У-Е-К-У-А-Е-К-Ь-К-Е-А-Ь-ЫНг
Η
- 18 012440
Ас-Е-И-Ъ-К-Α-Ρ~Υ-Ε-К-V-А-Е-К-Е-К-Е-Α-Ρ~ΝΗ2 Ас-Е-И-Р-К-А-Р-У-Е-К-У-А-Е-К-Е-К-Е-Р-Р-йН2 АС-Е-И-Ιι-К-А-Р-Υ-Ε-Κ-У- Р-Е-К-Р-К-Е-Р-Г-ЙН2 Ас-Е-И-Ь-К-А-Р-У-Е-К-Р-Р-Е-К-Р-К-Е-Р-Р-ЙНг Ас-Е-И-Р-К-А-Р-У-Е-К-Р-Р-Е-К-Р-К-Е-Р-Р-ЙН2 АС-Р-Р-Ь-К-А-Н-У-Р-К-У-А-Е-К-Е-К-Е-А-И-йН2 Αα-Ε-Ρ-Ε-Κ-Α-Η-Υ-Ε-Κ-ν~Α-Ε-Κ-Ε-Κ-Ε-Α-νί-ΝΗ2 Ас-Р-Г-И-К-А-М-У-й-К-У-А-Е-К-Ь-К-Е-И-И-йНа Ас-Е-Р-Н-К-А-И-У-Е-К-У-А-Е-К-Е-К-Е-И-й-ИН2 Ас-Р-К-Ь-К-А-Е- У-О-К-У-Р-Е-М-А-К-Е-А-Е-КНг Ас-Р-К-И-К-А-У-У-Р-К-Р-А-Е-А-Р-К-Е-Р-Ь-ЙН2 Ас -Е - К-Й-К-А-Р-У-Е-К-У- Р-Е-И-А-К-Е-А-Р-ЙН2 Ас-Е-К-И-К-А-У-У-Е-К-Р-А-Е-А-Р-К-Е-Р-Ь-ЙНа ас-р-и-й-к-а-е-у-р~к-е-а-е-к~р-к~е-а-у-йн2 Ас-Е-К-М-К-А-У- Υ-Ε-Κ-Ρ-Α-Ξ-Α-Ρ-Κ~Ε-Ρ-Ε-ΝΗ2 Ас-Р~И-Е-К-А-Е-У-У-Р-К-У-Г-К-Е-К-Е-Р-Р-ЙН2 Ас-Е-И-Ь-К-А-Р-У-У-Е-К-У-Г-К-Ь-К-Е-Р-Р-ЙН2 Ае - Р-И-Ь-К.-А - Р - Υ-ϋ - К-V - А-Е-К - Е - К·-Е ~ А-Е-ЙНа АС-Е-Н-Ь-К-А-Е-У-Е-К-У-А-Е-К-Ъ-К-Е-А-Р-ЙН2 Ασ-Ρ-ΜΈ-Κ-Α-Ρ-Г-Р-Й-У-А-Е-К-Е-К-Е-А-Е-ЙНа Ас-Е-И-Ь-К-А-Р-У-Е-К-У-А-Е-К-Ь-К-Е-А-Р-ЙН2 АС-Р-И-Е-К-А-Р-У-Р-К-У-А-Е-В-Е-К-Е-А-Е-ЙНа Ас-Е-И-Ъ-К-А-Р-У-Е-К-У-А-Е-К-Е-К-Е-А-Р-ЙНг АС-Р-И-Е-К-А-Р-У-Р-К-У-А-Е-К-Е-В-Е-А-Г-ЙН2 Ас-Е-И-Ъ-К-А-Р-У-Е-К-У-А-Е-К-Ъ-В-Е-А-Р-ЙНг АС-Р-И-Е-К-А-Е-У-Р-Н.-У-А-Е-К-Е-К-Е-А~Г-ЙН2 Ас-Е-И-Й-К-А-Р-У-Е-Н-V-А-Е-К-Ъ-К-Е-А-Р-ЙНг Ас-Р-И-й-К-А-Р-У-Р-К-У-А-Е-К-Е-В-Е-А-Р-ЙНг АС-Е-И-Ъ-К-А-Е-У-Е-К-У-А-Е-К-Е-Е-Е-А-Е-ЙНа Ас-Р-И-Е-В-А-Р-У-Р-В-У-А-Е-К-Е-К-Е-А-Р-ЙНг Ас-Е-И-Е-Н-А-Р-У-Е-К-У-А-Е-К-й-К-Е-А-Р-ЙНг Ас-Р-И-Ь-К-А-Р-У-Р-К-У-А-Е-В-Е-В-Е-А-Е-ЙНг Ас-Е-И-Ъ-К-А-Р-У-Е-К-У-А-Е-В-Е-К-Е-А-Г-ЙНг АС-Р-И-Й-В-А-Г-У-Р-К-У-А-Е-В-Е-К-Е-А-Г-ЙН3 Ас-Е-И-Ъ-К-А-Р-У-Е-К-У-А-Е-В-Е-К-Е-А-Р-ЙН2 Р-Н-Е-К-А-Е-Υ-Ρ-К-У-А-Е-К-й-К-Е-А-Р-Р-Р-НЬ-К-А-Р-Υ - Р - К-V - А-Е - К-Е - К-Е-А-Р
Р-И-Ь-К-А-Р-У-Р-К-У-А-Е-К-й-К-Е-Г-Р-Р-Р-КЕ-К-А-Р-У-Р-К-У-А-Е-К-й-К-Е-Р-Г
Р-Н-Р-К-А-Р-У-Р-К-У-А-Е-К-Е-К-Е-А-Р-Р-Р-НΡ-Κ-Α-Ρ-Υ-Ρ-К-У-А-Е-К-й-К-Е-А-Р
Ρ-Κ-Ε-Κ-Α-Γ-Υ-Ρ-Κ-У-Р-Е-И-А-К-Е-А-Р-Р-Р-К-
- 19 012440
Ь-К-А-Р-У-Р-К-У-Р-Е-И-Ь-К-Е-А-Р
Р-К-И-К-А-У-У-О-К-Р-А-Е-А-Р-К-Е-Г-Ь-Р-Р-К-82
Н-К-А-У-Υ-Ρ-Κ-Ρ-Α-Ε-Α-Ρ-Κ-Ε-Γ-Ρ Ρ-Η-Ρ-Κ-Α-Ρ-Υ-Ρ-Κ-ν-Α-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-Α-Ρ-Ρ-Ρ-Η-83
Р-К-А-Р-У-Р-К-У-А-Е-К-Р-К-Е-А-Р Р-И-Ь-К-А-Р-У-У-Р-К-У-Г-К-Ь-К-Е-Г-Р-Р-Р-И-84
Ρ-Κ-Α-Ρ-ν-Υ-Ρ-К-У-Р-К-Ь-К-Е-Р-Р Р-Н-Ь-К-А-Р-У-Р-К-Р-А-Е-К-Р-К-Е-Г-Р^Р^Р-И-85
Ь-К-А-Е-У-Р-К-Е-А-Е-К-Р-К-Е-Г-Р
Ас-Е-И-Р-К-А-Р-У-Е-К-У-А-Е-К-Р-К-Е-А-Р-ИНг86
Ас-Р-Н-Ρ-Κ-Α-Ρ-Υ-Ρ’Κ-ν-Α-Ε-Κ-Ρ-ΝΗϊ87
Αθ-Ρ-Κ-Α-Ρ-Υ-Ρ-Κ-ν-Α-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-ΝΗ2
Αα-Ρ’Κ-Α-Ρ-Υ-Ε-Κ-ν-Α-Ε-Κ-Ρ-ΚΈ-ΝΗϊ89
ΝΜΑ-Ρ-Κ-Α-Ρ-Υ-Ρ-Κ-ν-Α-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-ΝΗ290
ΝΜΑ-Ρ-Κ-Α-Ρ-Υ-Ε-Κ-ν-Α-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-ΝΗ291
ΝΜΑ-Ρ-Ή-Ρ-Κ-Α-Ε-Υ-Ρ-Κ-ν-Α-Ε-Κ-Ε-Κ-Ε-Α-Ε-ΝΗ292
ΝΜΑ-Ε-Μ-Γ-Κ-Α-Ρ-Υ-Ε-Κ-ν-Α-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-Α-Ρ-ΝΗϊ93
ΜΜΑ-Α-Ρ-Υ-Ρ-Κ-ν-Α-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-Α-Ρ-ΝΗ294
ΝΜΑ-Ρ-Ή-Ρ-Κ-А-Ρ*Υ-Ρ-Κ-У-А-Е-К-Ρ-ΝΗ295
Ас-Р-Н-Ь-К-А-Р-У-Р-К-У-Р-Е-К-Р-К-Е-Р-Р-ИН296
ΝΜΑ-Р-И-Ь-К-А-Р-У-Р-К-У-Р-Е-К-Ρ-Κ-Ε-Ε-Ρ-ΝΗ2
Ас-Е-Н-Ь-К-А-Р-У-Е-К-У-Р-Е-К-Р-К-Е-Е-Г-МН297
ЫМА-Е-И-Ь-К-А~Р-У-Е-К-У-Е-Е-К-Г-К-Е-Е-Г-МН2
Ас-А-Р-У-Р-К-У-Р-Е-К-Р-К-Е-Р-Р-ЫН298
ΝΜΑ-Α-Ρ-Υ-Ρ-Κ-ν-Ρ-Ε-Κ-Ε-Κ-Ε-Γ-Ρ-ΝΗ2
Αα-Α-Ρ-Υ-Ε-Κ-ν--Ρ-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-Ρ-Ρ-ΝΗ299
ΝΜΑ-Α-Ρ-Υ-Ε-Κ-ν-Ρ-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-Ρ-Ρ-ΝΗ2
Ас-Р-К-Ь-К-А-Р-У-Р-К-У-Г-Е-К-Ρ-ΝΗ2Ю0
ΝΜΑ-Ρ-Η-Β-Κ-Α-Ε-Υ-Ρ-Κ-ν-Ρ-Ε-Κ-Γ-ΝΗ2
Ас-Е-И-Ъ-К-А-Р-У-Е-К-У-Р-Е-К-Р-йН2101
ΝΜΑ-Ε-«-Ι,-Κ-Α-ΡΎ-Ε-Κ-ν-Ρ-Ε-Κ-Ρ-ΝΗ2
Ас-Ъ-К-А-Р-У-Р-К-У-Е-Е-К-Е-К-Е-ЫНз102
ΝΜΑ-Ρ-Κ-Α-Γ-Υ-Ρ-Κ-ν-Ρ-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-ΝΗ2
Ас-Ь-К-А-Р-У-Е-К-У-Р-Е-К-Р-К-Е-ИНг1° __ΝΜΑ-Ιί-Κ-Α-Ρ-Υ-Ε-Κ-У-Ρ-Ε-Κ-Ρ-Κ-Ε-ΝΗ;__________________ 1 Линкеры подчеркнуты.
NМΑ означает Ν-метилантранилил.
В ряде предпочтительных вариантов осуществления пептиды включают варианты 4Р (8ΕΟ ГО N0: 5 в табл. 2), известного также как Ь-4Р, в котором все остатки являются аминокислотами Ь-формы, или Ό4Р, в котором один или более остатков являются аминокислотами Ό-формы. В любом из пептидов, описанных в данном контексте, С-конец и/или Ν-конец и/или внутренние остатки могут быть блокированы одной или более блокирующими группами, как описано в данном контексте.
Хотя различные пептиды, приведенные в табл. 2, проиллюстрированы ацетильной группой или Νметилантранилиловой группой, защищающей аминоконец, и амидной группой, защищающей карбоксильный конец, любая из данных защитных групп может быть удалена и/или заменена другой защитной группой, как описано в данном контексте. В особенно предпочтительных вариантах осуществления пептиды включают одну или более Ό-форм аминокислот, как описано в данном контексте. В ряде вариантов осуществления каждая аминокислота (например, каждая энантиомерная аминокислота) пептидов, приведенных в табл. 2, представляет собой Ό-форму аминокислоты.
Отмечают также, что табл. 2 является неполной. Используя описание, приведенное в данном контексте, можно рутинным образом получить подходящие амфипатические спиральные пептиды класса А (например, путем консервативных или полуконсервативных замен (например, Ό заменяют на Е), удлинений, делеций и т. п.). Так, например, в одном варианте осуществления используют укорочения любого одного или более пептидов, приведенных в данном контексте (например, пептидов, идентифицированных как 8Ε0 ГО ΝΟΝΟ: 2-20 и 39 в табл. 2). Так, например, 8Ε0 ГО N0:21 иллюстрирует пептид, включающий 14 аминокислот из С-конца 18А, содержащего одну или более Ό-аминокислот, тогда как 8Ε0 ГО
- 20 012440
ΝΟΝΟ:22-38 иллюстрируют другие укороченные варианты.
Подходят также более длинные пептиды. Данные более длинные пептиды могут полностью образовывать амфипатическую спираль класса А, или амфипатическая спираль (спирали) класса А может образовывать один или более доменов пептида. Кроме того, данное изобретение предусматривает мультимерные варианты пептидов (например, конкатемеры). Так, например, пептиды, иллюстрируемые в данном контексте, могут быть связаны друг с другом (непосредственно или через линкер (например, углеродный линкер или одну или более аминокислот) с одной или более промежуточных аминокислот). Иллюстративные полимерные пептиды включают 18А-Рго-18А и пептиды 8ЕС ГО ΝΟΝΟ:78-85, в ряде вариантов осуществления, включающих одну или более Ό-аминокислот, более предпочтительно, когда каждая аминокислота является Ό-аминокислотой, как описано в данном контексте, и/или имеет один или оба защищенных конца.
Следует также иметь в виду, что в дополнение к последовательностям пептидов, специально проиллюстрированных в данном контексте, данное изобретение предусматривает также ретро- и ретроинверсоформы каждого из данных пептидов. В ретроформах направление последовательности изменено на обратное. В инверсионных формах хиральность имеющихся аминокислот изменена на обратную (т.е. аминокислоты Ь-формы становятся аминокислотами Ό-формы и аминокислоты Ό-формы становятся аминокислотами Ь-формы). В ретроинверсоформе оба фактора, порядок и хиральность аминокислот изменены на обратные. Так, например ретроформа пептида 4Р (Ό^ΡΚΑΡΎΌΚνΑΕΚΡΚΕΑΡ, 8Еф ГО ΝΟ:5), в которой аминоконец находится на аспартате (Ό) и карбоксильный конец находится на фенилаланине (Ρ), имеет такую же последовательность, но аминоконец находится на фенилаланине и карбоксильный конец находится на аспартате (т.е. ΡΑΕΚΡΚΕΑνΚΌΎΡΑΚΡ^Ό, 8Еф ГО ΝΟ: 104). Когда пептид 4Ρ включает все Ь-аминокислоты, ретроинверсоформа будет иметь последовательность, показанную выше (8Еф ГО ΝΟ: 104), и включает все аминокислоты Ό-формы. Как проиллюстрировано на схемах витка спирали фиг. 17, 4Ρ и ретроинферсоформа (Κον-4Ρ) представляют собой зеркальные изображения друг друга с идентичным разделением полярной и неполярной наружных поверхностей с положительно заряженными остатками, находящимися на разделе полярного и неполярного участков, и отрицательно заряженными остатками, находящимися в центре полярной наружной поверхности. Данные зеркальные изображения одного и того же полимера аминокислот идентичны в плане сегрегации полярной и неполярной наружных поверхностей, находящихся на разделе полярного и неполярного участков, и отрицательно заряженными остатками, находящимися в центре полярной наружной поверхности. Так, 4Ρ и Кеу4Ρ являются энантиомерами друг друга. Для обсуждения ретро- и ретроинверсопептидов см., например, статью СНогеу апб Сообщай, (1995) Т1ЬТесЬ, 13: 439-445.
Когда делают ссылку на последовательность и специально не указывают ориентацию, последовательность можно рассматривать как представляющую последовательность аминокислот в аминокарбоксильной ориентации, ретроформе (т.е. последовательность аминокислот в карбоксиламиноориентации), ретроформе, в которой Ь-аминокислоты заменены Ό-аминокислотами или Ό-аминокислоты заменены Ь-аминокислотами, и ретроинверсоформе, в которой и порядок изменен на обратный и хиральность аминокислот изменена на обратную.
В) Миметики амфипатического спирального пептида класса А ароА-Е имеющие ароматические или алифатические остатки в неполярной наружной поверхности.
В ряде вариантов осуществления данное изобретение также представляет модифицированные амфипатические спиральные пептиды класса А. Некоторые предпочтительные пептиды включают один или более ароматических остатков в центре неполярной наружной поверхности, например, 3Ρ''π (как присутствуют в 4Ρ), один или более алифатических остатков в центре неполярной наружной поверхности, например, 3ΡΤπ, см., например, табл. 3. Вне связи с определенной теорией полагают, что центральные ароматические остатки на неполярной наружной поверхности пептида 3Ρ<2π, вследствие присутствия πэлектронов в центре неполярной наружной поверхности, позволяют молекулам воды проходить около алкильных цепей гидрофобных липидов пептидно-липидного комплекса, который, в свою очередь, обеспечивает вход реакционных молекул кислорода (таких как липидгидропероксиды), закрывая их от клеточной поверхности. Аналогично авторы заявки полагают, что пептиды с алифатическими остатками в центре неполярной наружной поверхности, например, 3ΡΤπ, будут действовать подобным образом, но не так эффективно, как 3Ρ<2π.
Предпочтительные пептиды будут превращать провоспалительный ЛВП в противовоспалительный ЛВП или делать противовоспалительный ЛВП более противовоспалительным, и/или снижать ЛНПиндуцированную хемотаксическую активность моноцитов, генерированную клетками стенки артерии, в равной мере или в большей степени, чем Ό4Ρ или другие пептиды, приведенные в табл. 2.
- 21 012440
Таблица 3 Примеры ряда предпочтительных пептидов
Название Последовательность Ю ΝΟ |’зРСг7| Ас^ОКАКТуУЛКРАЕАРКЕРЬ-ЫН:, 105 (3Ρ,π) Αο-ϋΚΕΚΑΡΥΟΚνΡΕΑΑΚΕΑΡ-ΝΗ2 106
С) Другие амфипатические спиральные пептиды класса А и некоторые спиральные пептиды класса Υ.
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение представляет также амфипатические спиральные пептиды класса А, которые имеют композицию аминокислот, идентичную одному или более вышеописанных амфипатических спиральных пептидов класса А. Так, например, в некоторых вариантах осуществления данное изобретение предусматривает пептиды, имеющие композицию аминокислот, идентичную 4Р. Так, в некоторых вариантах осуществления данное изобретение включает активные агенты, которые включают пептид, который состоит из 18 аминокислоты, причем 18 аминокислот состоят из 3 аланинов (А), 2 аспартатов (Ό), 2 глутаматов (Е), 4 фенилаланинов (Р), 4 лизинов (К), 1 валина (V), 1 триптофана (А) и 1 тирозина (Υ), и при этом пептид образует амфипатическую спираль класса А и защищает фосфолипид от окисления окисляющим агентом. В различных вариантах осуществления пептиды включают по меньшей мере один остаток Ό-аминокислоты, и в ряде вариантов осуществления пептиды включают все остатки аминокислот в Ό-форме. Ряд данных пептидов проиллюстрирован в табл. 4. Предусматривают также обратные (ретро), инверсионные, ретроинверсо- и кольцевые измененные формы данных пептидов.
Таблица 4 Иллюстративные амфипатические спиральные пептиды класса А длиной 18 аминокислот с композицией аминокислот, включающей 3 аланина (А), 2 аспартата (Ό), 2 глутамата (Е), 4 фенилаланина (Р), 4 лизина (К), 1 валин (V), 1 триптофан (А) и 1 тирозин (Υ)
Название Последовательность 8Е<3 ΙΟΝΟ
Аналоги [замена-О-Е]-4Е
Г замена 1-1-4Р Αο-ΕΑΡΚΑΡΎΕΚνΑΙ>ΚΡΚΒΑΡ-ΝΗ2 107
[ замена 1-2-4Г Г Αο-ΕΑΓΚΑΡΥϋΚνΑΟΚΡΚΕΑΡ-ΝΗ2 108
- 22 012440
[замена Ι)-Ε]·3-4Ρ Αε·ϋλνΡΚΛΡΥΕΚνΑρΚΓΚΕΑΡ-ΝΗ2 109
[ замена ϋ-Ε]·4-4Ρ Αο-ϋ1ΛΤΚΑΡΥΈΚνΑΕΚΡΚρΑΡ-ΝΗ2 110
[ν/-2,Ρ-3 обратные положения]
4Р-2 Αε-ΟΡν¥ΚΑΡΎΏΚνΑΕΚΡΚΕΑΡ-ΝΗ2 Ш
[ замена О-Е]-1-4Р-2 Αο-ΕΡνΚΑΡΥΕΚνΑΒΚΡΚΒΑΡ-ΝΗ2 112
[замена Ι1-Ε1-2-4Ρ-2 Αο-£ΡΐνΚΑΡΥυκνΑΟΚΡΚΕΑΡ-ΝΗ2 113
[замена 1>Е]-3-4Г-2 Αο-ΟΡν/ΚΑΡΥΕΚνΑΟΚΡΚΕΑΡ-ΝΗ2 114
[замена ϋ-Ε1-4-4Ρ-2 Αο-ΟΡλνΚΑΕΥΕΚνΑΕΚΡΚΒΑΡ-ΝΗ2 115
[Р-6 и Υ-7 обратные положения]
4Р-3 Αο-ΟίνΡΚΑΥΓΟΚνΑΕΚΡΚΕΑΡ-ΝΗϊ 116
[ замена ϋ-Ε]-1 -4Р-5 Α€-ΕλνΓΚΑΥΡ£ΚνΑΒΚΡΚΒΑΡ-ΝΗ2 117
[ замена О-Е]-2-4Р-5 Αο-ΕνΓΚΑΥΡϋΚνΑΒΚΕΚ£ΑΡ-ΝΗ2 118
[ замена ϋ-Ε1-3-4Ρ-5 Αο-Ολ¥ΡΚΑΥΓΕΚνΑΒΚΓΚΕΑΡ-ΝΗ2 119
[ замена ϋ-Ε1-4-4Γ-5 Αο-Ολ¥ΡΚΑΥΓΕΚ.νΑΕΚΡΚΟΑΓ-ΝΗ2 120
[Ύ-7 и 10ν обратные положения]
4Р-4 Αο-ΟϋνΡΚΑΓνΠΚΥΑΕΚΡΚΕΑΡ-ΝΗϊ 121
[ замена ϋ-ΕΙ-1 -4Г-4 Αο-ΕΐνΓΚΑΡνΕΚΥΑΡΚΡΚΒΑΡ-ΝΗ2 122
[замена ϋ-Ε1-2-4Ρ-4 Αβ-Ε\νΡΚΑΡνθΚΥΑΟΚΓΚ£ΑΡ-ΝΗ2 123
[замена 19-Е]-3-4Р-4 Α0-Ο\νΡΚΑΚνΕΚΥΑ»ΚΕΚΕΑΓ-ΝΗ2 124
[ замена О-Е1-4-4Р ΑβΌλ¥ΡΚΑΕνΕΚΥΑΕΚΓΚϋΑΓ-ΝΗ2 125
[ЧМО и ΑΊ1 обратные положения!
4-Р-5 Αο-Ο\νΓΚΑΓΥϋΚΑνΕΚΡΚΕΑΡ-ΝΗ2 126
[замена Ο-ΕΙ-1-4Ρ-5 Αο-ΕΐνΡΚΑΓΥΕΚΑνΒΚΡΚβΑΡ-ΝΗ2 127
[ замена ϋ-Ε|-2-4Ρ-5 Αο-Ε\νΡΚΑΡΥΏΚΑνθΚΡΚΕΑΡ-ΝΗ2 128
[ замена ϋΈ|-3-4Ρ-5 Αο-0\νΡΚΑΓΥΕΚΑν>ΚΡΚΕΑΡ-ΝΗ2 129
[ замена О-Е]-4“4Р-5 Αο-Ώ\νΡΚΑΓΥΕΚΑνΕΚΓΚΒΑΡ-ΝΗ2 130
[А-11 и Р 14обратные положения]
4Р-6 Αο-υν/ΕΚΑΓΥΟΚνΕΕΚΑΚΕΑΡ-ΝΕΡ 131
| заменаО-Е]-1-4Р-6 Αο-ΕΐνΡΚΑΕΎΕΚνΡΟΚΑΚ»ΑΡ-ΝΗ2 132
| замена ϋ-Ε]-2-4Ρ-6 Αο-Ε\νΡΚΑΓΥΠΚνΡΟΚΑΚΕΑΡ-ΝΗ2 133
[ замена ϋ-Ε]-3-4Ρ-6 Αο-ϋ1ΛΤΚΑΡΥΕΚνΓρΚΑΚΕΑΡ-ΝΗ2 134
[ замена О-Е]-4-4Р-б Αο-ϋΛνΡΚΑΡΥΕΚνΡΕΚΑΚΡΑΓ-ΝΙ12 135
[Р-14 и А-17обрятные положения}
4Р-7 Αβ-Ώ\νΡΚΑΡΥΠΚνΑΕΚΑΚΕ£Ρ-ΝΗ2 136
[ заменаП-Е]-1-4Р-7 Αϋ-ΕννΡΚΑΓΎΕΚνΑΙ>ΚΑΚΒΡΡ-ΝΗ2 137
[ замена О-Е1-2-4Р-7 Αο-ΕΐνΡΚΑΡΥΟΚνΑΟΚΑΚΕΡΡ-ΝΗ2 138
[ замена ϋ-Ε]-3-4Р-7 Αο-0\ΥΓΚΑΓΥΕΚνΑΟΚΑΚΕΓΡ-ΝΗ2 139
[ замена Э-Е1-4-4Р-7 Αο-θνΓΚΑΡΥΕΚνΑΕΚΑΚΒΡΡ-ΝΗ2 140
[А-17 и δ обратные положения]
4Р-8 Αο-Ολ¥ΓΚΑΡΥΏΚνΑΕΚΓΚΕΡΑ-ΝΗ2 141
[замена П-Е]-1-4Р-8 Αο-Ε9νΡΚΑΡΥΕΚνΑΒΚΓΚΒΡΑ-ΝΗ2 142
[ заменаО-Е1-2-4Р-8 Αο-ΕνΓΚΑΡΥΟΚνΑΟΚΓΚΕΡΑ-ΝΗ2 143
[замена О-Е]-3-4р-8 Αϋ-ϋ%ΤΚΑΓΥΕΚνΑΒΚΓΚΡ.ΡΑ-ΝΗ2 144
[замена ϋ-Ε]-4-4Ρ-8 Αο-θνΥΡΚΑΡΥΈΚνΑΕΚΡΚΟΡΑ-ΝΪΙ2 145
РЛ7-2 А* 17 обратные положения]
4Р-9 Αο-ΟΔΡΚΑΡΥΏΚνΑΕΚΡΚΕ^¥Ρ-ΝΗ2 146
[ замена О-В]-1-4Р-9 Αο-ΕΑΡΚΑΡΫΕΚνΑΡΚΡΚΟλνΡ-ΝΗ2 147
[ заменаО-Е]-2-4Р-9 Αο-ΕΑΡΚΑΡΥΏΚνΑΙ>ΚΓΚΕλνΡ-ΝΗ2 148
[ заменаО-Е]-3-4Р-9 Αο-ϋΑΡΚΑΡΥΕΚνΑ»ΚΡΚΕλνΡ-ΝΗ2 149
[ замена О-Е]-4-4Р-9 Αο-ΟΑΡΚΑΡΥΕΚ.νΑΕΚΓΚρ\νΡ-ΝΗ2 150
ρν~2 и А-11 обратные положения]
4Р-1С Αο-ϋΑΡΚΑΡΥΏΚνννΕΚΡΚΕΑΡ-ΝΗι 151
[ заменаО-Е]-1-4Р-Ю Αο-ΕΑΓΚΑΡΥΕΚνΤ¥ρΚΡΚΡΑΡ-ΝΗ2 152
- 23 012440
[замена Ώ*Ε]*2*4Ρ-10 Αο-ΕΑΓΚΑΡΥΏΚν%Τ>ΚΡΚΕΑΓ-ΝΗ2 153
ί замен* ϋ-Ε]-3-4Ρ-10 Αο-ϋΑΡΚΑΡΥΕΚν^Τ)ΚΡΚΕΑΡ-ΝΜ2 154
( замена ϋ-Ε1-4-4Ρ-10 Αε-ϋΑΕΚΑΕΥΕΚνν/ΕΚ3ΚΒΑΕ-ΝΗ2 155
[УЛ2 и Υ-7 обратные положения!
4Г-11 Αο-ϋΥΤΚΑΡ\νϋΚνΑΕΚΡΚΕΑΡ-ΝΗ2 156
Г замена ϋ-Ε]-1-4Ρ-11 Αο-ΕΥΡΚΑΡΨΕΚνΑβΚΡΚΒΑΓ-ΝΗ2 157
[ замена β-Ε]-2-4Ρ-Ι1 Αο-ΕΥΡΚΑΓ4Τ>ΚνΑΟΚΡΚΕΑΡ-ΝΗ2 158
Г замена ϋ-Ε]-3-4Γ-Ι1 Αε-ΟΥΡΚΑΡν,ΈΚνΑΙ>ΚΡΚΕΑΡ-ΝΗ2 159
Г зам4наЦ.Е^^р.ц Αε-ΟΥΡΚΑΡν-ΈΚνΑΕΚΪΚβΑί-ΝΗ2 160
[Р-3 и А~17обратныс положения!
4Р-12 Αο-ϋίνΑΚΑΡΥϋΚνΑΕΚΡΚΕΚΡ-ΝΗ! 161
[ замена ϋ-Ε]-1-4Ρ-12 Αο-ΕΨΑΚΑΡΥΕΚνΑβΚΡΚΟΡΡ-ΝΗ2 162
[ замена О-Е1-2-4Р-12 Ας-Ε1¥ΑΚΑΡΥϋΚνΑϋΚΡΚΕΡΡ-ΝΗ2 163
Г замена ϋ-Ε1-3-4Ρ-12 Αο-№¥ΑΚΑΡΥΕΚνΑΟΚΕΚΕΡΡ-ΝΗ2 164
[ замена О-Е]-4-4Р-12 Ασ-θν/ΑΚΑΕΥΕΚνΑΕΚΡΚΙ)ΕΕ-ΝΗ2 165
[Р-6 и Α·17 обратные положения!
4Р-13 Α€-ϋ\νΡΚΑΑΥΏΚνΑΕΚΡΚΕΕΡ-ΝΗ2 166
[ замена О-Е1-1-4Р-13 Αο-ΕΐνΡΚΑΑΥΕΚνΑΒΚΓΚΒΡΡ-ΝΗ2 167
[ замена П-Е]-2-4Р-13 Αο-ΕΨΡΚΑΑΥΌΚνΑϋΚΡΚΕΡΡ-ΝΗΣ 168
| замена О-Е1-3-4Р-13 Λ€-Ο\νΡΚΑΑΥΕΚνΑΟΚΓΚΕΡΡ-ΝΗ2 169
[ замена ϋ-Ε]-4-4Ρ-13 Α€-ϋν/ΡΚΑΑΥΕΚνΑΕΚΡΚ»ΡΡ-ΝΗ2 170
[Υ-7 и А-17обратные положение]
4Р-14 Αο-ϋλνΡΚΑΓΑΠΚνΑΕΚΡΚΕΥΡ-ΝΗ: 171
[ замена О-Е]-1-4Р-14 Αο-Ε1¥ΡΚΑΡΑΕΚνΑβΚΡΚΒΥΡ-ΝΗ2 172
[ замена ϋ-Ε]-2-4Ρ-14 Αο-Ε\νΡΚΑΡΑΙ>ΚνΑΟΚΡΚΕΥΡ-ΝΗ2 173
[ замена О-Е]-3-4Р-14 Α€-ΡλνΡΚΑΡΑΕΚνΑ»ΚΡΚΕΥΡ-ΝΗ2 174
Г ________ТЧ Τ7Ί Л ЛТ? λ - ηππτν аса υν'τ г α Ε·ΐΛτ?ντ4·ν/τ7 χτυπ η1 а 1\и~и*4~ы&гк τ гиспд лл/ ι 2-ΐ4ΐι^ 1 τ« 1 /
[У-10 и А-17>брятньге положения]
4Р-15 Αο-ϋΨΡΚΑΓΥϋΚΑΑΕΚΓΚΕνρ-ΝΗ2 176
[ замена ϋ-Ε]-1-4Ρ-15 Αο-ΕΧνΡΚΑΡΥΕΚΑΑΒΚΡΚΒνΓ-ΝΗ2 177
Г замена О“В]'2-4Р-15 Αο-ΕνΡΚΑΡΥΟΚΑΑΒΚΡΚΕν?-ΝΗ2 178
[ замена О-В]-3-4Р-15 Λο-θν/ΡΚΑΡΥΕΚΑΑΙ>ΚΡΚΕνΡ-ΝΗ2 179
[замена П*Е]-4-4Р-15 Αο-Ώ\νΡΚΑΡΥΕΚΑΛΕΚΡΚΒνΡ-ΝΙ12 180
[РЗ и Υ*7 обратные положения!
4Р-16 ΑεΌ'ΆΓΥΚΑΡΕΌΚνΑΕΚΓΚΕΑΡ-ΝΗί 181
[ замена ϋ-Ε]-1-4Ρ-16 Αο-Ε\νγΚΑΓΓΕΚνΑΒΚΓΚΟΑΡ-ΝΗ2 182
[ замена ϋ-Ε]-2-4Ρ-16 Ас-Εν/ΥΚΑΡΓϋΚνΑΟΚΓΚΕΑΡ-ΝΗ2 183
|· замена 13-Е]-3-4Е-16 Αο-ϋ\νΥΚΑΡΡΕΚνΑβΚΓΚΕΑΡ-ΝΡ12 184
[ замена Ώ-ΕΙ^^Ε-Ι6 ΑΕ-Π»ΥΚΑΡΡΕΚνΑΕΚΡΚΟΑΡ-ΝΗ2 185
[Г-3 н V-10 обратные положения]
4Р-17 Αε-Ο\^^ΚΑΡΎΌΚΕΑΕΚΡΚΕΑΓ-ΝΗ2 186
[ замена Р-Е]-1-4Р-17 Αο-ΕννΚΑΓΥΕΚΓΑβΚΡΚΙ>ΑΡ-ΝΗ2 187
[замена ϋ-Ε]-2-4Ρ-17 Ас-Εν/ νΚΑΓΥΏΚΡΑϋΚΡΚΕΑΡ-ΝΗ2 188
[ замена О-Е]-3~4Р*17 Αε-ΠΐννΚΑΓΥΕΚΡΑΒΚΓΚΕΑΓ-ΝΗ2 189
[ замена О-Е]-4-4Р-17 Αε-θννΚΑΓΥΈΚΡΑΕΚΡΚΒΑΡ-ΝΗ2 190
[Ύ-7 и Р-14-обратные положения]
4Р-18 Αο-ΟΐνΡΚΑΓΓΟΚνΑΕΚΥΚΕΑΡ-ΝΗ2 191
[замена О-Е]-1*4Р-18 Αο-ΕνΡΚΑΓΕΕΚνΑβΚΥΚΒΑΡ-ΝΗ2 192
[ замена ϋ-Ε]-2-4Ρ-18 Αο-Ε5¥ΡΚΑΡΡΟΚνΑΙ)ΚΥΚΕΑΡ-ΝΗ2 193
[ замена ϋ-Ε]-3-4Ρ-18 Αο-ΟΧνΒΚΑΡΡΕΚνΑΟΚΥΚΕΑΡ-ΝΗ2 194
[ замена О-Щ-ЗЛР-18 Αο-Π\νΡΚΑΓΡΕΚνΑΒΚΥΚΕΑΡ-ΝΗ2 195
[Υ-7 н Р-18 обратные положения!
4Р-19 Αε-ΟίνΡΚΑΡΕΡΚνΑΕΚΓΚΕΑΥ-ΝΗϊ 196
- 24 012440
[ замена ϋ-Ε]-1-4Ρ-19 Αϋ-ΕΑΓΚΑΡΡΕΚνΑΙ)ΚΕΚηΑΥ-ΝΗ2 197
[ замена В-Е1-2-4Р-19 Αο-Εν/ΡΚΑΡΡΟΚνΑϋΚΡΚΕΑΥ-ΝΗ2 198
[ замеиаВ-Е]-3-4Г-19 Αο-ϋλνΡΚΑΡΡΕΚνΑβΚΡΚΕΑΥ-ΝΗ2 199
[ згменаП-Е]-4-4Р-19 Αο-ΟΐνΡΚΑΡΡΕΚνΑΕΚ₽ΚΒΑΥ-ΝΗ2 200
[У-10 р ΡΊ8 обратные положения.
4Р-20 Αο-ϋλνΡΚΑΡΥΟΚΡΑΕΚΡΚΕΑν-ΝΉί 201
[ заменаО-Е]-1-4Р-20 Αο-Ε\νΡΚΑΡΥΕΚΡΑΙ)ΚΡΚΒΑν-ΝΗ2 202
[ замена 1}-Е]-2-4Р-20 Ας-Ε1ΛΤΚΑΓΥϋΚΓΑϋΚΡΚΕΑν-ΝΗ2 203
[ э;менаП-Е1-3-4Г-20 Αο-ΟλνΡΚΑΓΥΕΚΓΑΒΚΡΚΕΑν-ΝΗ2 204
ί замена 1>-Е]-4-4Г-20 Αο·0·\νΡΚΛΓΥΕΚΡΑΕΚΕΚΟΑν-ΝΗ2 205
{XV-2 и К13 обратные положения]
4Р-21 Αο-ηΚΡΚΑΡΥΟΚνΑΕΚΡλ¥ΕΑΡ-ΝΗ2 206
[ замена β-ΕΜ АГ-21 Αο-ΕΚΡΚΑΓΥΈΚνΛΒΚΡΧνυΑΓ-ΝΗ2 207
[ замена О-Е]-2-4р-21 Αο-ΕΚΓΚΑΡΥηΚνΑΒΚΓν/ΕΛΡ-ΝΗ2 208
[ замена ]>Е]-3-4р-21 Αο-ϋΚΡΚΑΡΥΕΚνΑ®ΚΡν/ΕΑΡ-ΝΗ2 209
[ замена О-Е] ААР-21 Αο-ϋΚΓΚΑΓΥΕΚνΑΕΚΓ3νθΑΓ-ΝΗ2 210
[IV-3, ГАЗ и К-2 4Р]
4Р-22 Ас-ϋΚνΡΚΑΡΥΏΚνΑΕΚΡΕΕΑΡ-ΝΗ; 211
[ замена ϋ-Ε]-1 АР-22 Α€-ΕΚ\νΚΑΓΥΕΚνΑΟΚΡΡηΑΡ-ΝΗ2 212
| замена. П-Е1-2-4Г-22 Αο-ΕΚΐνΚΑΡΥΟΚνΑΟΚΕΡΕΑΡ-ΝΗ2 213
[ з1менаО-Е]-3-4Р-22 Ас-ОКШКАР ΥΈΚ V ΑΙ1ΚΡΡΕΑΡ-ΝΗ2 214
[ эзмена О-Е1-4-4Г-22 Α£-ΟΚλνΚΑΓΥΕΚνΑΕΚΓΡϋΑΡ-ΝΗ2 215
[К-2, IV10, УАЗ]
4Р-23 Αο-ϋΚΡΚΑΡΥΙ>ΚΐνΑΕνΡΚΕΑΡ-ΝΗ2 216
[ Аналоги 1ммена-О-£]-4₽
[ замена П-Е]-1 АР-23 Αο-ΕΚΓΚΑΡΥΈΚ\νΑθνΡΚΒΑΓ-ΝΗ2 217
[ замена ϋ-ΕΙ-2 Ар-23 Αε-ΕΚΓΚΑΡΥΟΚ\νΑυνΓΚΕΑΡ-ΝΗ2 218
[ замена В-Е1-3-4Р-23 Αε-ΏΚΓΚΑΡΥΕΚ\νΑβνΡΚΕΑΡ-ΝΗ2 219
[ замела р-Е] ААР-23 Αο-ΠΚΓΚΑΡΥΕΚΐνΑΕνΡΚΟΑΡ-ΝΗ2 220
[К-2, РАЗ, IV-14 4Р]
4Р-24 Ас-ηΚΓΚΑΓΥϋΚνΑΕΡΤνΚΕΑΡ-ΝΗί 221
[ Аналоги (замена-О'Е)-4Р
[ -«мена 4р 24 Α9-ΕΚΡΚΑΓΥΕΚνΑΒΡ\νΚβΑΡ-ΝΗ2 222
[ замена ϋ-Ε]-2ΑΡ-24 Αβ-ΕΚΡΚΑΓΥϋΚνΑϋΡΧνΚΕΑΡ-ΝΗ2 223
[ замена О-Е1-3-4Р-24 Αο-ΟΚΡΚΑΓΥΕΚνΑΒΡΐνΚΕΑΡ-ΝΗ2 224
[ замена Р-Е] А АР-24 Αο-ΟΚΡΚΑΓΥ1ΚνΑΕΡνΚϋΑΡ-ΝΗ2 225
Обратные аналоги 4Р
Κ(:νΑΡ Αο-ΡΑΕΚΡΚΕΑνΚΟΥΡΑΚΡ\νΐ>-ΝΗ2 226
[ замена ϋ-Ε1-1-Κβν-4Ρ Αο-ΡΑΒΚΡΚΒΑνΚΕΥΡΑΚΡ\νΕ-ΝΗ2 227
рамена О-Е]-2-КсуАР Αο-ΡΑΟΚΕΚΕΑνΚΟΥΡΑΚΡν7Ε-ΝΗ2 228
[ замена ϋ-Ε]-3-ΚρνΑΡ Αο-ΡΑΕΚΡΚΟΑνΚΕΥΡΑΚΡ3¥0-ΝΗ2 229
[ рамена О-Е]-4-К.еУ'-4Е Ас-РАЕКЕК1>АУКОУРАКГТУЕ-МН2 230
[Д-2 и ЧУ«17обратные положения!
ΚβνΑΡ-1 Αο-ΡΧνΕΚΪΚΕΑνΚΕ>ΥΡΑΚΡΑΠ-ΝΗ2 231
[ замена Ρ-Ε]-1-Κβν-4Ρ-1 Αο-ΡΐνρΚΓΚΒΑνΚΕΥΕΑΚΡΑΕ-ΝΗ2 232
[ заменаС-Е]-2-Ксу-4Р-1 Αο-ΡΑΒΚΓΚΕΑνΚΟΥΡΑΚΡΐνΕ-ΝΗ2 233
[ замена ϋ-Ε[-3-Κ.ενΑΡ-1 Ас-ГАЕ ΚΡΚ»ΑνΚΕΥΡΑΚΡ1ΥΙ>-ΝΗ2 234
[ эаменл£).Е]-4-КеУ-4Р-1 Α€-ΡΑΕΚΡΚΙ>ΑνΚΕ>ΥΡΑΚΕΨΕ-ΝΗ2 235
[ замена Д-2 β Р-16]
КеуАР-2 Αο-ΡΓΕΚΓΚΕΑνΚΟΥΡΑΚΑΐνθ-ΝΗ2 236
[ замена ϋ-Ε1-1-Κβν-4Ρ-2 Αο-ΗΦΚΓΚΒΑνΚΕΥΡΑΚΑ\ν£-ΝΗ2 237
[ замена ϋ-Ε]-2-Κεν-4Ρ-2 Αο-ΡΡΒΚΓΚΕΑνΚΟΥΡΑΚΑ5¥Ε-ΝΗ2 238
[ замена ϋ-Ε]-3-ΚβνΑΡ-2 Αΰ-ΡΡΕΚΡΚΒΑνΚΕΥΡΑΚΑΧΥΌ-ΝΗ2 239
- 25 012440
[замена ρ.Ε]-4-Κβν-4Γ-2 Αο-ΡΓΕΚΕΚ£Α\ΤΟΥΡΑΚΛν/Ε-ΝΗ2 240
[ замена Р-5 и А-8] ...
Κβν-4Ρ-3 Αο-ΡΑΕΚΑΚΕΕνκθΥΡΑΚΓΨϋ-ΝΗ2 241
[ замена ϋ-Ε]-1-Κ.βν-4Ρ-3 Αο-ΓΑΒΚΑΚΒΡνΚΕΥΡΑΚΡΐνΕ-ΝΗ2 242
[ замен» ϋ-Ε]-2-Κβν-4Ρ-3 Αο-ΡΑΒΚΑΚΕΡνΚΟΥΡΑΚΡΐνΕ-ΝΗ2 243
Г зам ела О-Е1-3-К.СУ-4Р-3 Αο-ΕΑΕΚΑΚΒΡνΚΕΥΡΑΚΓν/0-ΝΗ2 244
[ замена ϋ-Ε]-4-Κβν-4Ρ·3 Αο-ΡΑΕΚΑΚΒΡνΚΟΥΡΑΚΡ\νΕ-ΝΗ2 245
[ замена А-8 и У9]
Ε.βν-4Ρ-4 Ас-РАЕКРКЕУАКОУРАКР1ТО-ЫН2 246
[ замена Ρ-Ε]*Ί*Κ.εν·4Ρ-4 Αε-ΡΑϋΚΡΚηνΑΚΕΥΡΑΚΡΐνΕ-ΝΗ2 247
[ замена Ε-Ε1-2~Εεν-4Ρ-4 Αϋ-ΡΑΒΚΓΚΕνΑΚΟΥΡΑΚΡ\¥Ε-ΝΗ2 248
рамена ϋ-Ε]-3-Κβν-4Ρ-4 Αε-ΡΑΕΚΡΚΒνΑΚΕΥΡΑΚΡΐνΠ-ΝΗ2 249
[ замена ϋ-Ε]-4-Κβν-4Ρ-4 Αο-ΡΑΕΚΓΚβνΑΚΟΥΡΑΚΡ'νΕ-ΝΗ2 250
[ замена У-910 Υ-12]
Κεν-4Ρ-5 Αο-ΡΑΕΚΓΚΕΑΧΚϋνΡΑΚΡ\νθ-ΝΗ2 251
[замена О-Е]-1-Кв Υ-4Ρ-5 Α9-ΡΑ2ΚΡΚΒΑΥΚΕνΡΑΚΓΐνΕ-ΝΗ2 252
[ замена Π-Ε]-2-Κβν-4Ρ-5 Αο-ΡΑΡΚΓΚΕΑΥΚϋνΡΑΚΡ\νΕ-ΝΗ2 253
рамена Ι)-Ε[-3-Β.βν-4Ρ-5 Αο-ΡΑΕΚΡΚΒΑΥΚΕνΡΑΚΓΐνθ-ΝΗ2 254
[ замена 1)-Ε]-4-Κον-4Ρ-5 Αε-ΡΑΕΚΡΚΙ)ΑΥΚΧ>νΡΑΚΡΛ¥Ε-ΝΗ2 255
[замена Υ-12 и Р-13]
Яеу-4Р-6 Αο-ΡΑΕΚΓΚΕΑνΚΟϊΎΑΚΓΐνΏ-ΝΗ2 256
[замена ϋ-Ε]-1-Κβν-4Ρ-6 Αο-ΡΑΒΚΓΚΒΑνΚ£ΡΥΑΚΡλ¥Ε-ΝΗ2 257
[ замена ϋ-Ε1-2-Κβν-4Ρ-6 Αθ-ΡΑβΚΡΚΕΑΥΚϋΡΥΑΚΡ\νΕ-ΝΗ2 258
[ замена ϋ-Ε]-3-Κβν-4Ρ-6 Αε-ΡΑΕΚΡΚί>ΑνΚΕΡΥΑΚΓ\νθ-ΝΗ2 259
[замена Ο-Ε]-4-Κβν-4Ρ-6 ΑοΡΑΕΚΡΚΒΑνΚΠΡΥΑΚΡ\νΕ-ΝΗ2 260
[ замена К-6 и %Ч7]
кеу-4г-7 Ας-ΡΑΕΚΡΥνΈΑνΚΟ ΥγΑΚγΚΏ-Νπ2 261
[ замена ϋ-Ε]-1 -Β.βν~4Ρ-7 Ας-ΡΑΙ>ΚΡνν'ϋΑνΚΕΥΡΑΚΡΚΕ-ΝΗ2 262
[ замена ϋ-Ε]-2-Κβν-4Ρ-7 Λ0-ΡΑηΚΡν,ΈΑνΚ0ΥΡΛΚΡΚΕ-ΝΗ2 263
[ замена Ο-Ε]-3-Β.εν-4Ρ-7 Ας-ΡΑΕΚΡ^Τ>ΑνΚΕΥΡΑΚΡΚΟ-ΝΗ2 264
[ замена β-Ε1-4-Κβν**4Ρ-7 Αο-ΡΑΕΚΈν/ϋΑνκΐ)ΥΓΑΚΓΚΕ-ΝΗ2 265
Г замена Р-1 в А-21
Κβν-4Ρ-8 Ас-ДЕЕКГКЕАУКГУРАКГ7Л>РШ2 266
[ замена О-Е]-1-Κβν-4Ρ-8 Αο-ΑΡβΚΡΚΒΑνΚΕΥΡΑΚΓ^ΤΕ-ΝΗ2 267
[ замена Ρ-Ε]-2-Κβν-4Ρ-8 Αο-ΑΡΒΚΡΚΕΑνΚϋΥΡΑΚΡΐνΕζΝΗ2 268
[ замена Ρ-Ε]-3-Κ.βν-4Γ-8 Αο-ΑΡΕΚΡΚΒΑνΚ£ΥΡΑΚΙΠ¥0-ΝΗ2 269
[ замена Ο-Ε1-4-Κ.εν-4Ρ-8 Α«-ΑΡΕΚΓΚΟΑνΚϋΥΡΑΚΡνΕ-ΝΗ2 270
|Έ”1 и ν-9 изменены |
Кеу-Р-9 Αο-ΥΑΕΚΡΚΕΑΡΚΙ>ΥΡΑΚΡν70-ΝΗ2 271
[замена ϋ-Ε]-1-Κδν-4Ρ-9 Αο-νΑΙ>ΚΓΚΒΑΡΚ1ΥΡΑΚΓ\¥Ε-ΝΗ2 272
[замена 0-Ε]-2-Ε.βν-4Ρ-9 Αο-νΑΙ>ΚΡΚΕΑΓΚϋΥΡΑΚΡνΕ-ΝΗ2 273
[ замена О-Е1-3“ВзСУ-4Р-9 Αο-νΑΕΚΡΚΒΑΓΚΕΥΡΑΚΡν/ϋ-ΝΗ2 274
[ замена Ρ-Ε]-4-Κβν-4Ρ-9 Αο-νΑΕΚΡΚΒΑΓΚΟΥΡΑΚΡ\νΕ-ΝΗ2 275
[Р-1 н Υ-12 изменены }
ЕеуЛР-10 Αο-ΧΑΕΚΡΚΕΑνΚΟΕΡΑΚΡ1ΛΌ-ΝΗ2 276
[ замена Ο-Ε]-1-Κβν-4Ρ-10 Αο-ΥΑβΚΓΚΒΑνΚΕΡΡΑΚΓνΕ-ΝΗ2 277
[замена О-Е[-2-К.еУ-4Р-Ю Αε-ΥΑΒΚΡΚΕΑνΚΏΡΡΑΚΡ\νΕ-Μ12 278
[ замена ϋ-Ε]-3-Κ.εν-4Ρ-10 Αο-ΥΑΕΚΡΚΒΑνΚ£ΡΡΑΚρ·\νϋ-ΝΗ2 279
Г замена Π-Ε]-4-Κ.βν-4Ρ-10 Αε-ΥΑΕΚΡΚδΑνΚΟΡΡΑΚΓ\νΕ-ΝΗ2 280
[р-1 н А-8 изменены ]
Κεν-4Ρ-11 Αο-ΑΑ£ΚΡΚΕΚνΚΟΥΓΑΚΡΧνΕ>-ΝΗ2 281
[ замена ϋ-Ε]-1 -Κ.βν-4Ρ-11 Αο-ΑΑΒΚΓΚΒΡνΚΕΥΡΑΚΚ\¥Ε-ΝΗ2 282
[ замена Ι?“Ε]“2-Κ.εν-4Ρ-11 Αϋ-ΑΑΒΚΡΚΡ.ΡνΚΟΥΡΑΚΓν/Ε-ΝΗ2 283
- 26 012440
[замена ϋ-Ε]-3’Κβν-4Ρ-11 ΑοΑΑ№ΡΚΗΡνΚΕΥΡΑΚΠνθ-ΝΗ2 284
замена Р-Е]-4-Кеу-4Р-1 1 Αο-ΑΑΕΚΓΚΙ>ΡνΚΓ>ΥΡΑΚΡΤνΕ-ΝΗ2 285
ГА-2 и Г-5 изменены ]
Κον-4Ρ-12 Αο-ΡίΈΚΑΚΕΑνΚΒ\ΤΑΚΡ\νυ-ΝΗ2 286
[ замена ϋ-Ε]-1-Κβν-4Ρ-12 Αο-ΡΡϋΚΑΚΟΑλ<ΚΕΥΕΑΚΓΧνΕ-ΝΗ2 287
[ замена Ε-Ε]-2-Κ.ον-4Ρ-12 Α«-ΡΡΟΚΑΚΕΑνΚΤ>ΥΡΑΚΡ%Έ-ΝΗ2 288
[ замена θ-Ε]-3-Εβν^Ρ-12 Αο-ΡΡΕΚΑΚρΑνΚΕνΤΑΚΕ'ΛΌ-ΝΗΖ 289
[ замена 1?-Е]-4-К.СУ-4Г-12 Αο-ΡΡΕΚΑΚΒΑνΚΙ)ΥΡΑΚΡΐνΕ-ΝΗ2 290
[А-2 “ Υ12 изменены
Κ.σν-4Ρ-13 Αο-ΡΥΕΚΓΚΕΑνΚΟΑΓΑΚΓν,ΤΟ-ΝΗ2 291
[ замена 1>-Е]-1 -Κβν-4Ρ-13 Αο-ΡΥΒΚΡΚ»ΑνΚΕΑΡΑΚΡΐνΕ-ΝΗ2 292
[ замена П-Е]-2-ЯеУ4Р-13 Α<>ΡΥΒΚΡΚΕΑνΚΟΑΡΑΚΓνΕ-ΝΗ2 293
[ замена ϋ-Ε]-3-Κβν-4Ρ-13 Αο-ΡΥΕΚΓΚΒΑνΚΕΑΡΑΚΡνϋ-ΝΗ2 294
[замена Г)-Е]-4-К.еу-4Р-13 Ас -ΡΥΕΚΡΚΟΑνΚΌАТАКЕλ¥Ε-ΝΗ2 295
[А-2 и У-9 изменены ]
Εεν-4Ρ-14 Αο-ΡνΕΚΡΚΕΑΑΚΓ>ΥΡΑΚΡνιΓϋ-ΝΗ2 296
[ замена Ο-Ε]-1-Κ.βν-4Ρ-14 ΑΓ-ίΛ^ΚΕΚΙ>ΑΑΚΕΥΡΑΚΤλΈ-ΝΗ2 297
[замена Ο-Ε1-2-Ηβν-4Ρ-14 Αο-ΓνθΚΡΚΕΑΑΚΡΎΡΑΚΓ\νΕ-ΝΗ2 298
[замена Ο-Ε]-3-Κ.βν-4Ρ-14 Αο-ΓνΕΚΓΚΒΑΑΚΕΥΡΑΚΡΛνΐ>-ΝΗ2 299
[замена Ο-Ε1-4-Κ.βν-4Ρ-14 Αο-ΡνΕΚΡΚβΑΑΚϋΥΡΑΚΡ^Έ-ΝΗ2 300
[Р-5 н Υ-12 изменены ]
Кеу-4Р-15 АС-РАЕКУКЕАУКОЕРАКР99Н-ИН2 301
[ замена ϋ-Ε1-1-Κ.εν-4Ρ-15 Αο-ΡΑΒΚΥΚβΑνΚΕΡΡΑΚΡν/Κ-ΝΗ2 302
[ замена ϋ-Ε]-2-Κ.βν-4Ρ-15 Αο-ΡΑΒΚΥΚΕΑΥΚϋΓΡΑΚΡ\νΕ-ΝΗ2 303
[ замена ϋ-Ε]-3-Κ.βν-4Ρ-15 Αο-ΡΑΕΚΥΚΒΑνΚΕΡΡΑΚ3Τνϋ·ΝΗ2 304
[замена 1>-Е]-4-Ксу-4Р-1 5 Αθ-ΡΑΕΚΥΚ»ΑνΚΡΡΡΑΚΓΑνΕ·ΝΗ2 305
Гт? 47 .. 17 Л ... 1 | Г “ V изменены 3
Κβν-4Γ-16 Ас-РАЕКУКЕАГКБУЕАКГ\ТО-№12 306
[ замена О-Е1-1 -Κβν-4Ρ-16 Αο-ΡΑΒΚνΚΗΑΡΚΕΥΡΑΚΡΛνΕ-ΝΗ2 307-
Г замена О-Е]*2-К.су-4Е-16 Αο-ΡΑΒΚνΚΕΑΓΚϋΥΓΑΚΓΐνΕ-ΝΗ2 308
[замена П-Е]-3-Ксу-4Р-16 Αο-ΡΑΕΚνΚΒΑΡΚΕΥΡΑΚΡνϋ-ΝΗ2 309
[ замена П-Е]-4-К.СУ-4Р-16 Αβ-ΡΑΕΚνΚΒΑΡΚϋΥΡΑΚΠνΕ-ΝΗ2 310
[А-8 и Υ-12 обратные положения]
КС1МР-17 Αο-ΡΑΕΚΡΚΕΥνΚΒΑΡΑΚΡλνη-ΝΗ2 311
[ замена ϋ-Ε1-1-Β.ΟΥ-4Ρ-17 Αο-ΡΑΒΚΡΚΒΥνΚΕΑΡΑΚΓΐνΕ-ΝΗ2 312
[замена 13-Е]-2-Ксу-4Р-17 ΑοΡΑ£ΚΓΚΈΥνΚΙ)ΑΡΑΚΓνΕιΝΗ2 313
Г имена Γ)-Ε]-3-Ηον-4Ρ-17 Αο-ΡΑΕΚΡΚ»ΥνΚΕΑΚΑΚΡ\νϋ-ΝΗ2 314
[ замена ]?-Е]-4-Ксу-4Р-17 Αο-ΡΑΕΚΓΚ»ΥνκυΑΡΑΚΓΐνΕ-ΝΗ2 315
ГУ-9 и р-13 изменены ]
Κβν-4Ρ-18 Αε-ΡΑΕΚΓΚΈΑΡ3ΦΥΥΑΚΓ\νΐ>-ΝΗ2 316
Г замена Ο-Ε1-1-Κβν-4Ρ-18 Ас-РАЮКРКВΑΡΚΕΤΟΑΚΡ\νΕ-ΝΗ2 317
[ замена Ο-Ε]-2-Εεν^Ρ-18 Ασ-ΡΑΗΚΡΚΕΑΕΚηΥνΑΚΡ\¥ΕζΝΗ2 318
[ замена ϋ-Ε]-3-Ιίβν^Ρ-18 Αε-ΡΑΕΚΕΚ»ΑΓΚΕΥνΑΚΕ1¥Ώ-ΝΗ2 319
[замена Ώ-Ε1'4-Ή.βν-4Ρ-18 Αο-ΡΑΕΚΓΚΟΑΓΚϋΥνΑΚΡν/Ε-ΝΗ2 320
[V 9 и Р-16 обратные положения]
Κεν-4Ρ-ΐ9 Αε-ΡΑΕΚΓΚΕΑΡΚΟΥΡΑΚνΐνη-ΝΗ2 321
[замена О-Е]-1-Н.су-4Р-19 Αο-ΡΑ£ΚΡΚΒΑΡΚΕΥΡΑΚντνΕ·ΝΗ2 322
[замена О-Е]-2-ЯвУ-4Р-19 Αε-ΡΑβΚΡΚΕΑΓΚΒΥΡΑΚ.ννΕ-ΝΗ2 323
[ замена О-Е1-3-КгУ-4Р-19 Αε-ΡΑΕΚΡΚΟΑΓΚΕΥΡΑΚν\νθ-ΝΗ2 324
замена ϋ-Ε1-4-Κον-4Ρ-19 ΑοΡΑΕΚΡΚΒΑΓΚΓΥΡΑΚνλνΕ-ΝΗ2 325
[Υ-12 и Р-16 изменены
Κβν-4Ρ-20 Αο-ΡΑΕΚΡΚΕΑνΚΙ)ΡΡΑΚΥ\νΏ-ΝΗ2 326
рйМейа ^.[.Цеу^Р-гО Ас-РАЮКРК»АУКЕРРАКТЙТЕ-19Н2 327
- 27 012440
[ замена Р-Е]’2-Кеу-4Е-20 Ας-ΡΑϋΚΡΚΕΑνκηΐ-ΡΑΚΥν/Ε-ΝΗ2 328
[ замена ϋ-Ε1-3·Κβν-4Ε-20 Ас-РАЕКРКЕАУКЕРРАКУ1¥О-МН2 329
[ замена ϋ-Ε]-4·Κβν-4Γ-20 Ас-РАЕКРКБАУКОГРАКУЗУЕ-КНг 330
ρν-Ι,Ρ-6 и К-17 Κεν 41’1
Κεν-4Ρ-2Ι Αο-3¥ΑΕΚΡΓΕΑνκθΥΡΑΚΕΚυ-ΝΗ2 331
[ «мем ϋ-Ε]-1-Κβν-4Ρ-7 Ас-ЗУ ΑΒΚΡΡΒΑνΚΕΥΡΑΚΡΚΕ-ΝΗ2 332
[ замена ϋΈ]-2’Κον-4Γ-7 Ас-ЗУ АЮКРРЕАХК1>¥РАКРКЕ-МН2 333
[ замена О-Е]-3-Кеу-4Е-7 Ас-ЗУ ΑΕΚΡΡΒΑνΚΙΥΡΑΚΡΚϋ-ΝΗ2 334
замена ]3-Е1-4-Кеу-4Р-7 Ас-ЗУ ΑΕΚΡΡΒΑνΚϋΥΡΑΚΡΚΕ-ΝΗ2 335
[ЗУ-5, Р-6 и К-17КеУ-4Р]
Кеу-4Р-22 Αϋ-ΡΑΕΚ%ΤΕΑνΚΒλΤΑΚΕΚϋ·ΝΗ2 336
[ замена ϋ-Ε]-1 -Кеу-4Р-22 Αο-ΡΑΒΚ\νΐΦΑνΚΕΥΡΑΚΡΚΕ-ΝΗ2 337
[ имена О-Е]-2-Кеу-4Г-22 Αε-ΡΑΒΚλνΡΕΑνΚΟΥΡΑΚΡΚΕ-ΝΓΕ 338
[ .-имена ϋ-Ε]-3-Ή.ον-4Γ-22 Ас-РАЕК 3¥ΓΒΑνΚΕΥΕΑΚΡΚϋ-ΝΗ2 339
[ замена О-Е]-4-Кеу-4Р-22 Αο-ΡΑΕΚ3¥ΓΒΑνΚϋΥΡΑΚΡΚΕ-ΝΗ2 340
ГУ-6, 1¥-9, К-17 Кеу-4Р]
Κβν-4Ρ-23 Αο-ΡΑΕΚΡνΕΑ\¥ΚΟΥΡΑΚΡΚΙ)-ΝΗ2 341
[ замена ϋ-Ε]-1-Κβν-4Ρ-23 Αο-ΡΑΟΚΓνθΑν/ΚΕΥΡΛΚΓΚΕ-ΝΗ2 342
[ замена ϋ-Ε]-2-Κεν-4Ρ-23 Ас-РАОКГУЕАУ/КОУРАКРК1>МН2 343
[ замена О-Е]-3-Кеу-4Р-23 Ас-РАЕКГУЮАЗУКЕУРАКГКЮ-МШ 344
[ замена О-Е]-4-КеУ-4Г-23 Ас-РАЕКРУЮАЗУКОУРАКРКЕ-Шг 345
[Υ-2, А-4, ЗУ-12, К-17 Кеу-4Р]
Ре ν Л Г-24 Αο-ΡΥΕΚΡΑΕΑνΚΓΛ¥ΡΑΚΡΚΙ)·ΝΗ2 346
[ замена О-Е]-1-Кеу-4Р-24 Αο-ΡΥΒΚΡΑϋΑνΚΕ3νΡΑΚΡΚΕ-ΝΗ2 347
[ замена О-Е]-2-К.еу-4Р-24 Ας-ΡΥΒΚΡΑΕΑνΚΟ'ΛΤΑΚΡΚΕ-ΝΗ2 348
I замена 1)-Е]-3-Кеу-4Р-24 Ας-ΡΥΕΚΓΑΒΑνΚΕ3¥ΡΑΚΡΚϋ-ΝΗ2 349
[ замена В-Е1-4-КвУ-4Р-24 Α€-ΡΥΕΟΑ»ΑνΚϋν/ΡΑΚΡΚΕ·ΝΗ2 350
Основываясь на схемах витков спирали на фиг. 17, можно легко идентифицировать биологически активные и эффективные пептиды. Так, например, следующие пептиды точно идентифицированы как активные: 3Р1, 3Р2, 4Р, их обратные (ретро) формы и их ретроинверсоформы. Так, в некоторых вариантах осуществления данное изобретение предусматривает активные агенты, включающие пептид, который имеет длину 18 аминокислот и образует амфипатическую спираль класса А, причем пептид имеет следующую композицию аминокислот: 2 аспартата, 2 глутамата, 4 лизина, 1 триптофан, 1 тирозин, не больше чем 1 лейцин, не больше чем 1 валин, не меньше чем 1 и не больше чем 3 аланина и 3-6 аминокислот из группы фенилаланин, α-нафталанин, β-нафталанин, гистидин, и включает либо 9, либо 10 аминокислот на полярной внешней поверхности в представлении витка спирали амфипатической спирали класса А, в том числе 4 аминокислоты с положительным зарядом при нейтральном рН с двумя положительно заряженными остатками, находящимися на разделе полярной и неполярной поверхностей, и двумя из четырех положительно заряженных остатков на полярной внешней поверхности, которые следуют друг за другом, и на неполярной внешней поверхности два из остатков аминокислот из группы фенилаланин, α-нафталанин, β-нафталанин, гистидин также следуют друг за другом, и 4 или больше аминокислот из данной группы находятся на неполярной внешней поверхности, кроме того, имеется по меньшей мере 2 остатка из данной группы, которые не следуют друг за другом.
В некоторых вариантах осуществления данное изобретение также представляет ряд амфипатических спиральных пептидов класса Υ, а также класса А. Амфипатические спиральные пептиды класса Υ известны компетентным специалистам в области техники (см., например, статьи 8едгек! е! а1. (1992) 1. Ь1р1б Кек. 33: 141-166; Огат апб Нетеске (2005) РЬукю1 Кет. 85: 1343-1372 и т.п.). В различных вариантах осуществления данные пептиды включают, но без ограничения перечисленным, пептид из 18 аминокислот, который формирует амфипатическую спираль класса А или амфипатическую спираль класса Υ, описанную формулой III (8Е0 Ш NО: 351)
ΟΧΧΚΥΧΧΟΚΧΥΟΚΧΚϋΥΧ III, в которой Ό независимо друг от друга представляют собой Акр или 61и; К независимо друг от друга представляют собой Ьук или Агд; X независимо друг от друга представляют собой Ьеи, погЬеи, Уа1, 11е, Тгр, РЬе, Туг, β-№1 или ос^а1, и все остатки X находятся на неполярной внешней поверхности (например, если смотреть на схему витка спирали) за исключением одного, который может находиться на полярной внешней поверхности между двумя остатками К; Υ независимо друг от друга представляют собой А1а, Ηίκ, 8ег, С1п, Акп или ТЬг неполярной внешней поверхности (например, если смотреть на схему витка спирали) и Υ независимо друг от друга представляют собой один А1а на полярной внешней поверхности, один Н1к, один 8ег, один С1п, один Акп или один ТЬг на полярной внешней поверхности (например, если смотреть на схему витка спирали), причем не более двух К следуют друг за другом (например, если смотреть на схему витка спирали), и при этом не больше чем 3 Ό следуют друг за другом (например, если смотреть на схему витка спирали) и четвертое Ό отделено от других Ό с помощью Υ. Иллюстративные пептиды такого рода, которые включают пептиды, содержащие гистидин и/или α- и/или β-нафталанин, показаны в табл. 5. Предусматривают также обратные (ретро-), инверсионные, ретро- 28 012440 инверсо- и кольцевые измененные формы данных пептидов.
Таблица 5
Иллюстрация различных аналогов пептидов класса А и/или класса Υ с Н1к, включенным в последовательность название пептида [А-5>Н] 4Р [А-5>Н, О-Е э«м«н*нямй]4Р [А-5>Н, Э-1>Е]4Р [А-5>Н, Р-8>Е]4-Г (А-5>Н, Ε-]2>ϋ] 4Р [Α-5>Η,Ε-16>ϋ]4Ρ [Ρ-3>Η,Α-5>Ρ] -4Ρ [Ρ·3>Η,Α-5>Ρ, Ρ-Ε замененный] -41’
Ас-ϋνΡΚΗΓΥϋΚνΑΕΚΡΚΕΑΡ-ΝΗ, Αε-ΕΑΤΚΗΓΥΕΚνΑΠΚΓΚυΑΓ-ΝΒ: Ас-Е%ТКНЕУЛКУАЕКЖЕАР-МН2 Αο-Ρ\νΓΚΗΡΥΕΚνΑΕΚΓΚΕΑΡ-ΝΗ2 Αο-ϋΑΤΚΗΙ-ΎϋΚνΑΒΚΡΚΕΑΡ-ΝΗΑε-Πν,ΤΚΗΓΥϋΚνΑΕΚΡ’ΚυΑΡ-ΝΗ: Αε-Πν,'ΗΚΕΡΥϋΚνΑΕΚΡΚΕΑΡ-ΝΙΡ Ас-ЕУ/НКРЕУЕКУАРКРКРАР-ИНг π>
Νθ
352
353
354
355
356
35?
35«
359 [Ρ-3>Η,Α-5>Ρ,Ρ-1>Ε] -4Ρ [Ρ-3>Η,Α-5>Ρ,ϋ-8>Ε] -4Ρ [Ρ-3>Η,Α-5>Ρ,Ε-12>Ρ] -4Ρ [Γ-3>Η,Α-5>Κ, Ε-16>ϋ] -4Ρ [Λ-5>Ρ,Ρ-6>Η]4Ρ [А-5>Р,Р-6>Н,Г)-Еэамененный)4Р [[Α-5>Ρ,Ρ-6>Η, ϋ-1>Ε]4Ρ [Α-5>Ρ3-6>Η, Ρ-8>Ε]4Ε [А-5>РД?-б>Н, Ε-Ι2>Ρ]4Ρ [Α-5>Ρ,Ρ-6>Η,Ε-16>Ρ]4Ρ [Α-5>ν. ν-10>Η]4Ρ [А-5>У, У-10>Н,П-Еааменеяный]4Р (Α-5>ν, ν-1ΟΗ,ϋ-1>Ε]4Ρ [Α-5>ν, ν-10>Η, ϋ-8>Ε] 4Ρ [Α-5>ν, ν-10>Η,Ε-12>0] 4Ρ [Α-5>ν, ν-10>Η,Ε16>Ω] 4Ρ [[Α-17>Η]4Γ [Α-17-41, Ρ-Ε замененный] 4Ρ [[Α-17>Η,Ρ-1>Ε]4Ρ [[Α-17>Η, ϋ-8>Ε]4Ρ []Α-17>Η,Ε-12>Ρ]4Ρ [|Α-17>Η, Ε16>ϋ]4Ρ [Α-17>Ρ,Ρ-18>Η]4Ρ [Α-17>Ε, Ρ-1 8>Η,Ρ-Ε замененный] 4Ρ [Α-17>Ρ, Ρ-Ι8>Η,Ρ-1>Ε] -4Ε [Α-17>Ρ,Ρ-18>Η] 4Ρ [Α-17>Ρ, Р-18>Η,Ρ-8>Ε] -4Ρ
ΓΛ 3 -7^.3? <- 1 Ο^ΤΙ ΤΞ' 1 Τ~\ 3 ·Γ / 1 , 3 -1 .1- и,1^- 1 ~Ι [Α-17>Ρ, Ρ-18>Η],Ε-16>ϋ]-4Ρ Κεν-4Ρ [Α-2>Η]Κον4Ρ Εβν-[Α-2>Η, ϋ>Ε]-4Ρ Κβν-[Α-2>Η, Ε>Ρ]4Ρ [Α-2>Η, Ρ-Ε замененный КСУ-4Р [Α-2>Η, Ε-3>Ρ]Κβν-4Ρ [Α-2>Η, Ε-7>Ρ]Κβν-4Ρ [Α-2>Η, Ρ-11>Ε]Κβν-4Ρ [Α-2>Η, ϋ-18>Ε]Κβν-4Ρ [Ρ-1>Η, Α-2>Ρ]Κεν-4Ρ [Ρ~1>Η, А-2>Р,Р-Езаменеиный]КеУ4Ρ
Αο-ΕλνΗΚΕΡΥΏΚνΑΕΚΡΚΕΑΡ-ΝΗί Ас-ΡΧνΗΐςΚΕΎΕΚνΛΕΚΡΚΕΑΡ-ΝΗ; Лс-РУ4НК1ТУРКУАРКРКЕЛР-МН2 Αο-ϋλνΗΚΡΡΥΟΚνΑΕΚΡΚΒΑΡ-ΝΗ2 Ас-РШРКЕНУРКУАЕКЕКЕ^-ЫНз Ас-ЕУ/РКГНУЕКУАРКРКРАГ-МР Αο-ΕΐνΡΚΓΗΥΡΚνΑΕΚΓΚΕΑΡ-ΝΗτ Ас-Р'ОТКЕНУЕКУАЕКГКЕАР-МЕ Αο·Ρ5¥ΓΚΓΗΥΡΚνΑΡΚΓΚΕΑΡ-ΝΗ, Αο-Ρ\νΡΚΓΗΥΡΚνΑΕΚ_ΡΚΡΑΡ-ΝΙΕ Αο-ΡΐνΡΚνΓΥΡΚΗΑΕΚΓΚΕΑΡ-ΝΗ2 Αο-ΕλνΓΚνΡΥΈΚΗΑΒΚΓΚβΑΡ-ΝΗ2 Αο-£>νΓΚγΡΥΡΚΗΑΕΚΡΚΕΑΡ-ΝΗ2 Αο-ϋντΚνΡΎΕΚΗΑΕΚΡΚΕΑΓ-ΝΗ2 Ас-О\\ТК¥РУПК11АрКГКЕАГ-МЬ ΑεΌΐνΡΚνΡΥΟΚΗΑΕΚΓΚρΑΡ-ΝΗ2 Αο-ϋ\νΕΚΑΓΥΟΚνΑΕΚΡΚΕΗΡ-ΝΗ2 Ас-ЕУ/ΡΚΑΡΥΈΚνΑΡΚΤΚΡΗΓ-ΝΗ. Αο-Ε\νΡΚΑΡΥΏΚνΑΕΚΡΚΕΗΡ-ΝΗ2 Αο-ϋ\νΡΚΑΡΥΕΚνΑΕΚΡΚΕΗΡ-ΝΗ2 Ас-О\УРКАР'УОКУАРКРКЕНР-КН2 Αϋ-ϋ\νΡΚΑΡ7Έ>ΚνΑΕΚΓΚΡΗΕ-ΝΗ2
Α<.-Ρ\νΡΚΑΡΥΏΚνΑΗΚΡ’ΚΕΕΗ-ΝΗ? Ас-ЕЗМГКАРУЕКУАРКРКРГН-КН, Ас-ΕΐνΓΚΑΡΥΟΚνΑΕΚΡΚΕΕΗ-ΝΗί Ас-Ον/ΡΚΑΓΥϋΚνΑΕΚΡΚΕΓΗ-ΝΗ, Ас-РУуТКАГУЕКУАЕКРКБГН-ЫН,
Λ.. Λ Τζν-'ΙΛΜΖΛΖ Λ τΖΙΖΓΖν'ΤΞΤΤΙΖΤ ХПЛ ηνι> γγ х гьги χ ил γ
Αο-ΡλνΡΚΑΓΥΡΚνΑΕΚΓΚΡΕΗ-ΝΗ^
Αο-ΡΛΕΚΡΚΕΑνΚΡΥΓΑΚΓν/Ρ-ΝΗ2
Αο-ΡΗΕΚΡΚΕΑνΚΡΥΡΑΚΓίνΡ-ΝΗ; Αο-ΡΗΕΚΕΚΕΑνΚΕΥΡΑΚΡΧνΕ-ΝΗ2 Αο-ΡΗΡΚΓΚΡΑνΚΡΥΡΑΚΡΧνΡ-ΝΗι Ас-ΡΗΡΚΓΚΡΑνΚΕΥΡΑΚΓλνΕ-ΝΗ, Αο-ΡΗΟΚΕΚΕΑνΚΟ¥ΡΑΚΓλνΡ-ΝΗ2 Αο-ΡΗΕΚΡΚΡΑνΚΡΥΡΑΚΕ3νϋ-ΝΗ2 Ας-ΡΗΕΚΡΚΕΑνΚΕΥΡΑΚΡ^Τ>-ΝΗ2 Αο-ΡΗΕΚΡΚΕΑνΚΡΎΡΑΚΡν/Ε-Ν1Ι2 Αο-ΗΓΕΚΡΚΕΑνΚΡΥΡΑΚΓλνΡ-ΝΗ, Αο-ΗΓΡΚΓΚΡΑνΚΕ’ΥΡΑΚΓλνΕ-ΝΗ,
360
361
362
363
364
365
366
367
368
369
370
371
372
373
374
375
376
377
378
379
380
381
382
383
384
385
386 «•ν ι
388
389
390
391
392
393
394
395
396
397
398
399 [Ρ-1>Η, Α-2>Γ, Ρ>Ε]Κβν-4Ρ [Ρ-1>Η, Α-2>Ρ,Ε-3>Ρ]Κεν-4Ρ [Ε-1>Η, Α-2>Ρ,Ε-7>Ρ]Κεν-4Ε [Ρ-1>Η, Α-2>Ρ,Ρ-11 >Ε]Κβν-4Ρ [Ρ-1>Η, Α-2>Ρ, Ρ-18>Ε]Κβν-4Γ [Α-2>Ρ, Ρ-5>Η] Κβν Ρ-4Γ [Α-2>Ρ, Γ-?>Η,Ρ -Езамевсялы й] К.С ν Ρ-4Ρ [Α-2>Ε, Ρ-5>Η, Ρ>Ε] ΕβνΡ-4Ρ [Α-2>Ρ, Ρ-5>Η,Ε>Ώ] Κβν Ρ-4Γ [Α-2>Ρ, Ρ-5>Η,Ε-3>Ρ] Κβν Ρ-4Ρ [Α-2>Ρ, Ε-5>Η,Ρ-11 >Ε] Κεν Ρ-4Ρ [Α-2>Ρ, Ρ-5>Η,Ρ-18>Ε] Ββν ϋ-4Ρ [Α-2>ν, ν ·9>Η] Кеу Ρ-4Ρ
Αο-ΗΡΕΚΓΚΕΑνΚΕΥΡΑΚΓ\νΕ-ΝΗ, Ас-ШФКРКЕАУКРУРАКРХУР-ЫНе Αο-ΕΠΈΚΓΚΡΑνΚΡΥΡΑΚΡνΓΡ-ΝΗι Αο-ΗΓΕΚΓΚΕΑνΚΕΥΡΑΚΕλνΡ-ΝΗι Λσ-ΗΓΕΚΡ’ΚΕΑνΚΡΎΤ.-ΧΚΡΧνΕ-ΝΙΕ Αε-ΓΡΈΚΗΚΕΑνΚΡΥΓΑΚΓ\νΡ-ΝΙΙ2 Ас-РГРКНКРАУКЕУРАКГЗУЕ-МН?
Ас-ЕЕЕКНКЕАУКЕЗТ.АКГ'Л'Е-М12 Лс-ΕΡ’ΡΚΗΚΡΑνΚΡΥΡΑΚΕΛνΡ-ΝΗ, Ас-РШКККЕАУКОУРАКР>ЛТ)-НН2 Αο-ΡΡΕΚΗΚΈΑνΚΕΥΓΑΚΙΑνΡ-ΝΗ2 Αο-ΡΓΕΚΗΚΕΑνΚΡΥΡΑΚΡ5¥Ε-ΝΗ2 Αε-ΡνΕΚΓΚΕΑΠΚΡΥΈΑΚΡν/Ρ-ΝΗ,
400
401
402
403
404
405
406
407
408
409
410
411
412
- 29 012440 [А'2>У, У-9>Н,Р~Езамененаь!й] Κ,βν Ρ-4Γ [Α-2>ν, ν-9>Η,ϋ>Ε] Ββν Ρ-4Ρ [Α-2>ν, ν-9>Η,Ε>ϋ] Κ,βν Ρ-4Ρ [Α-2>ν, ν-9>Η,Ε-3>ϋ] Κβν Ρ-4Ρ [Α-2>ν, ν-9>Η,Ε-7>ϋ] Κβν Ρ-4Ρ [Α-2>ν, У-9>Н,Р-11 >Ε] Κβν Ρ-4Ρ [Α-2>ν, ν-9>Η,ϋ-18>Ε] Κεν Ρ-4Ρ [Α-8>Η]Κβν-4Ρ {Α-8 >Н,Р-Еэамененный]1<сУ-4Р [Α-8>ΗΤ»Ε[Ββν-4Ρ [Α-8>Η,Ε>Ρ]Ββν-4Ρ [Α-ί>Η,Ε-3>ϋ]Κον-4Ρ [Α-8>Η, Ε-7>ϋ]Ββν-4Ρ [Α-8>Η, Ρ-11 >Ε]Ρβν-4Ρ [Α-ί>Η,Ρ-18>Ε]Κεν-4Ρ [Α-8>Ρ,Ρ-13>Η]Κβν-4Ρ [Α-8>Ε,Ρ· 13>Η,ϋ-Ε замененный] Εεν4Ρ [Α-8>Ρ,Γ-13>Η, Ε-3>Ρ]Κεν-4Ρ [Α-8>Ρ,Ρ-13>Η, Ε-7>Ρ]Κεν-4Ε [Α-8>Ρ,Ρ-13>Η, Ε>Ρ]Κεν-4Ρ [Α-8>Ρ,Ρ ·13>Η,ϋ>Ε]Κεν-4Γ [ Α-8>Ρ,Ρ 13>Η,ϋ-11 >Ε]Κεν-4Ρ [Α-8>Ρ,Ρ·13>Η, Ρ-18>Ε)Κεν-4Ρ [Α-8>Ρ, ΙΤ6>Η]Κβν.-4Ρ [Α-8>Γ, 1Ί6>Η,ϋ-Ε 1ЦМ.вН5нН ый]Кеу.-4Р [Α-8>Ρ, Γ16>Η,Ρ>Ε]Βεν.-4Ρ [Α-8>Ρ, Ρ16>Η, Ε>Ρ]Κβν.-4Ρ [Α-8>Ε, Ε16>Η,Ε-3>Ο]Εεν.-4Ρ [Α-Ι5>Ρ, Ρ16>Η,Ε-7>ϋ]Ββν.-4Ρ [Α-8>Ρ, Ρ16>Η,Ρ-11 >Ε]Κεν.-4Ρ [Α-8>Ρ, Ρ16>Η,Ρ-18>Ε]Κβν.-4Ρ
Αο-ΡνρΚΤΚΒΑΗΚΕΥΡΑΚΕν/Ε-ΝΗ2
Αο-ΡνΕΚΓΚΕΑΗΚΕΥΡΑΚΡνΕ-ΝΗ2 Ас-ΡνΡΚΡΚΡΑΗΚΡΥΓΑΚΡΧνΡ-ΝΗ, Αο-ΡνΡΚΡΚΕΑΗΚΡΥΡΑΚΡΙΥΡ-ΝΗ, Αε-ΡνΕΚΕΚρΑΗΚυ\Τ/\Κί'λ'Ο-ΝΗ2 Ас-руЕКГКЕАНКЕУРАКРХУР-ИНз Αο-ΡνΕΚΓΚΕΑΗΚΡΥΡΑΚΡΧνΕ-ΝΗ; Αο-ΡΑΕΚΡΚΕΗνΚΟΥΡΑΚΡλνΟ-ΝΗ; Ас-РАРКРКРНУКЕУРАКРТУЕ-ΝΗ, Αε-ΡΑΕΚΡΚΕΙΓ/ΚΕΥΡΑΚΡΑΈ-ΝΗ?
Αο-ΡΑ»ΚΡΚ£ΗνΚΡΥΓΑΚΡ1¥Ρ-ΝΗ2 Αο-ΡΑ»ΚΡΚΕΗνΚΡΥΕΑΚΡλ¥Ρ-ΝΗ2 Αο.ΡΑΕΚΡΚ^νΚϋΥΡΑΚΡ\νθ-ΝΗ2 Αο-ΡΑΕΚΡΚΕΗνΚΕΥΡΑΚΡ\¥υ-ΝΗ2 Αο-ΡΑΕΚΡΚΕΗνΚΟΥΡΑΚΡν/Ε-ΝΗ2 Αο-ΡΑΕΚΡΚΕΡνΚϋΥΗΑΚΡΤνη-ΝΗ2 Ас-РАЮКГКРЕУКЕУНАКРАУЕ-ЫНг
Αε-ΡΑΒΚΡΚΕΓνΚΏΥΗΑΚΡίνΟ-ΝΗ;
Αο-ΡΑΕΚΕΚΒΕνΚΟΥΗΑΚΡ^Ο-ΝΗ2 Ас-РА»КГКВГУКРУНАКР\¥П-Е1Нг Αο-ΡΑΕΚΓΚΕΓνΚΕΥΗΑΚΡ\νΕ-ΝΗ2 Αο-ΡΑΕΚΡΚΕΓνΚΕΥΗΑΚΡνζ5-ΝΗ2 Αε-ΡΑΕΚΡΚΕΓνΚΡΥΙΙΑΚΡΛνΕ-ΝΗ, Ас-ΡΑΕΚΡΚΕΓνΚΡΥΡΑΚΗΐνθ-ΝΗϊ Αο-ΡΑΡΚΕΚΡΕΥΚΕΥΡΑΚΗν/Ε-ΝΉ,
Ас-ΡΑΕΚΓΚΕΓνΚΕΥΡΑΚΗλνΕ-ΝΗ;
Αο-ΡΑ»ΚΡΚϋ£νΚΡΥΡΑΚΗ^¥ϋ-ΝΗ2 Αο-ΡΑΡΚΡΚΕΕνΚΟΥΡΑΚΗ^νΌ-ΝΗί Αο-ΡΑΕΚΡΚ№νΚΡΥΓΑΚΕΠνθ-ΝΗ2 Αο-ΡΑΕΚΡΚΕΕνΚΕΥΡΑΚ№νϋ-ΝΗ2 Αο-ΡΑΕΚΡΚΕΓνΚΠΥΡΑΚΗν/Ε-ΝΗ2
413
414
415
416
417
418
419
420
421
422
423
424
425
426
427
428
429
430
431
432
433
434
435
436
437
438
439
440
441
442
443
Примеры аналогов 4Ρ и Есу 4Ρ класса А с β-ΝρΗ.
Аналогично можно создать аналоги α-ΝρΡ. Аналогично вышеописанным аналогам Н18 можно включить в аналоги Νρΐι. Аналоги Ό>Ε, аналоги Ε>Ό и аналоги с изменением Ό-Ε представляют собой дополнительные возможности аналогично вышеописанным аналогам.
4ПрЬ [О-Е3ί ΜΐΗίΗΐιιιϋ]4Νρ11 [Ρ>Ε]4ΝρΕ [Ε>ϋ]4ΝρΕ [Ρ-1>Ε]4Νρ1ι [Ρ-8>Ε]4Νρ1ι [Ε-Ι2>Ρ]4ΝρΗ [Ε-16>Ρ]4Νρ1ι
Ас-РУ/КрЬКА14рЬТТ>КУАЕКМпЕКЕАКрЬ~КН2 444 Αο-Ελλ'ΝρΙιΚΆΝρίΥΕΚνΑΰΚΝρίΚΡΑΝρί-ΝΗΖ 445 Αε-Ε1¥Νρ1ιΚΑΝρΕΥΕΚνΑΕΚΜρ1ιΚΕΑΝρΕ··ΝΗ2 446 Αο-Ρν/ΝρΕΚΑΝρίΥΡΚν,ΑΡΚΝρΕΚΡ.ΑΝρά-ΝΗ? 447 А£-ЕТОрЬКАЛрЬУРКУАЕКМрЬКЕАЛрЬ.МН2 448 Αο-ΡΧνΝρ1ιΚΑΝρίΥΕΚνΑΕΚΝρ!ιΚΕΑΝρί-ΝΗ2 449 Αο-ΡΐνΝρ1ιΚΑΝρΙιΥ5κνΑΡΚΝρΙιΚΕΑΝρΕ-ΝΗ2 450 Αο-Ρ1¥ΝίρΙιΚΑΝρίΥΡΚνΑΕΚΝρΙιΚΡΑΝρΕ-ΝΗ2 451
Как описано выше для 4Νρ1ι. дают минимум 7 дополнительных аналогов для каждого из аналогов, приведенных ниже.
[Е-3,6 >ΝρΕ]4Ρ [Ρ-14,18>ΝρΕ]4Ρ [[Ε·3>ΝρΕ]4Ρ [Е-6>МрЬ]4Р [Ρ-14>Νρ1ι]4Ρ [Ρ-18>Νρ1ι]4Ρ
Αο·Ρ99ΝρΙιΚΑΝρΕΥΡΚνΑΕΚΕΚΕΑΓ·ΝΗ2
Αί-ΡλνΡΚΑΡΥΡΚνΑΕΚ>ίρΙιΚΕΑΝρΗ-ΝΉ2
Ας-Ρν/ΝΕΕΚ.ΑΡΎΡΚνΑΕΚΡΚΕΑΡ·ΝΗ2
Лс-РУ/1Т<А^УРКУАЕКГКЕАР-ИН2
Αϋ-Ρ¥/ΡΚΑΡΥΡΚνΑΕΚ£Β&ΚΕΑΓ-ΝΗ2
Αο-ΡΨΕΚΑΡΥΡΚνΑΕΚΕΚΕΑΝ^-ΝΗ2
452
453
454
455
456
457
Для каждого из описанных ниже аналогов возможны 7 дополнительных аналогов. как описано выше. на основе изменения Ό-Ε. Ό>Ε и Ε>Ό и аналогов с одним Ό или Е.
Κβν-4ΝρΕ [Ρ-3,6>ΝρΒ]Ββν 4Р [Р-13,1б]Кеу-4Р [Ρ-3>ΝρΕ]Ββν-4Γ [Ρ-6>ΝρΒ]Κεν-4Γ [Р-13>Νρ1ι[Κβν-4Ρ [Р-16>ΝρΕ]Ββν-4Ρ
Αο-Νρ1ιΑΕΚΝρ1ιΚΕΑνΚΡΥΝρ1>ΑΚΝρΕΐνΡ-ΝΗ2 Αο-ΝρΚ\ΕΚ74ρΕΚΕΑνΚΡΥΡΑΚΕ\νΡ-ΝΉ2 Αο-ΡΑΕΚΓΚΕΑνΚΡΥΝρΚΑΚΝρΒΨΡ-ΝΗ2
Ас-Нр11АЕКГКЕАУКРУРАКГ\УР-МН2
Ас-РАЕКИр11КЕАУКРУРАКР\УР-МН2
Ас-РАЕ ΚΓΚΕΑνΚΡΥΝη1ιΑΚΡννΡ-ΝΗ2
Αο-ΡΑΕΚΓΚΕΑνΚΡΥΡΑΚΝΕ&ΨΡ-ΝΗ2
458
459
460
461
462
463
464
- 30 012440
Для описанных ниже аналогов возможны дополнительные аналоги на основе инкорпорации Н1к или α-Νρ1 и β-Νρ1.
Для каждого из описанных ниже аналогов возможны дополнительные аналоги Н и Νρ1 с использованием вышеописанных примеров. Каждый аналог может дать 7 аналогов с изменениями, описанными в приведенных выше примерах.
Йеу-[Г»Е]-4Р Αο-ΡΑΕΚΕΚΕΑνΚΕΥΡΑΚΡν/Ε-ΝΗ2 465
Кеу-[Е>Б']4Р Αο-ΡΑυΚΡΚΒΑνΚΕ>ΥΡΑΚΡ\νϊ)-ΝΗ2 466
Кеу-В4-4Р Αο-ΡΑΕΚΡΚΕΑνΚΟΥΡΑΚΡνϋ-ΝΗ2 467
КсУ-Н6-41’ Α:-ΡΑΕΚΡΒΕΑνΚϋΥΡΑΚΓ\νϋ-ΝΗ2 468
Κβν-Κ10-4Р Αε-ΕΑΕΚΡΚΕΑνΚϋΥΕΑΚΓΐνϋ-ΝΗ2 469
Κβν-Κ14 -4Р Αο-ΡΑΕΚΓΚΕΑνΚΟΥΡΑ£Ρνϋ-ΝΗ2 470
Κβν-[ϋ>Ε]-4Ε Αο-ΡΑΕΚΓΚΕΑνΚΕΥΡΑΚΡΧνΕ-ΝΗ2 471
Κεν-[Ε>ϋ]4Ρ Αο-ΡΑΟΚΡΚΒΑνκΐ)ΥΡΑΚΡ4νϋ-ΝΗ2 472
Ββν-Β4-4Ρ Αε-ΡΑΕΚΡΚΕΑνΚΡΥΕΑΚΕν/ϋ-ΜΗ2 473
Κβν-Κ6-4Ρ Αο-ΡΑΕΚΡΚΕΑνΚϋΥΡΑΚΡ\νΠ-ΝΗ2 474
КСУ-К10-4Р Αϋ·ΡΑΕΚΓΚΕΑνΚϋΥΡΑΚΓΧνθ-ΝΗ2 475
Κ.βνΗ.14 -4Ρ Αο-ΡΑΕΚΓΚΕΑνΚΟΥΕΑΚΕ\νΕ)-ΝΗ2 476
Κβν-[Ο>Ε]-4Ρ Αο-ΡΑΕΚΡΚΕΑνΚΕΥΡΑΚΡνΕ-ΝΗ2 477
Κβν·[Ε>ϋ]4Ρ Αϋ-ΡΑηΚΡΚΒΑνΚΟΥΡΑΚΓ\νθ-ΝΗ2 478
Кеу-В4-4Р Αε-ΡΑΕΗΡΚΕΑνΚϋΥΡΑΚΡν/η-ΝΉ2 479
Йеу-К6-4Р Αε-ΡΑΕΚΓΚΕΑνΚϋΥΡΑΚΡΛνϋ-ΝΗ2 480
Кеу-К10-4Р Α6-ΡΑΕΚΡΚΕΑνΚΟΥΡΑΚΡλνϋ-ΝΗ2 481
Е.еу-К.14 -4Р Αο-ΡΑΕΚΓΚΕΑνΚΟΥΡΑΚΡΧνϋ-ΝΙβ 482
Веу-В4-4Р Α€-ΡΑΕΚΡΚΕΑνΚΟΥΡΑΚΡ№Ό-ΝΗ2 483
Кеу-Й6-4Р Αε-ΡΑΕΚΓΒΕΑνΚΟΥΡΑΚΡ\νθ-ΝΗ2 484
Всу-КЮ-4Е Α€-ΡΑΕΚΡΚΕΑνΚϋΥΡΑΚΡνΤ)-ΝΗ2 485
Веу-К.14 -4Р Αε-ΡΑΕΚΡΚΕΑνΚβΥΡΑΒΡΧνΟ-ΝΉΣ 486
Йеу-[Е»>Е]-4Е Αο-ΡΑΕΚΡΚΕΑνΚΕΥΡΑΚΓν/Ε-ΝΗ2 487
Кеу-[Е>1)]4Р Αο-ΓΑβΚΓΚ2ΑνΚϋΥΡΑΚΓ1ΑΊ)-ΝΗ2 488
Ке\-К4-4Р Αο-ΡΑΕΗΡΚΕΑνΚϋΥΡΑΚΡ\νθ-ΝΗ2 489
Кеу-Кб-4Р Αε-ΡΑΕΚΓΒΕΑνΚβΥΡΑΚΡν2Ώ-ΝΗ2 490
Ве\'-В10-4Р Αε-ΡΑΕΚΡΚΕΑνΚϋΥΕΑΚΓ%Τ)-ΝΗ2 491
Кеу-Й.14 -4Р Α€-ΡΑΕΚΡΚΕΑνΚϋΥΡΑΚΡ\νθ-ΝΗ2 492
йсуЗР-2 Αϋ-ΕΕΕΚΓΑΕΑΡΚΓΥνΑΚ\νΚΟ-ΝΉ2 493
КсуК4-ЗР-2 Αο-ΕΡΕΚΡΑΕΑΕΚΟΥνΑΚν/ΚΟ-ΝΗ2 494
КетВ10-ЗР2 Αο-ΕΡΕΚΡΑΕΑΡΚϋΥνΑΚνΚϋ-ΝΗ2 495
ΚονΚ15-3Ρ-2 Αο-ΕΓΕΚΓΑΕΑΡΚΟΥνΑΚ\νΚϋ-ΝΗ2 496
ΚβνΚ17-3Ρ-2 Αο-ΕΡΕΚΕΑΕΑΓΚβΥνΑΚνι’Βϋ-ΝΗ2 497
Ρεν[ϋ>Ε]3Ρ2 Αο-ΕΡΕΚΓΛΕΑΡΚΕΥνΑΚΧΥΚΕ-ΝΗΣ 498
Κβν[Ε>ϋ]3Ρ-2 Α€-ΕΡρΚΓΑΒΑΡΚυΥνΑΚΐνΚϋ-ΝΗ2 499
Κβν-[Ε3>ϋ]-3Ρ-2 Αο-ΕΡρΚΕΑΕΑΡΚϋΥνΑΚν/ΚΒ-ΝΗ2 500
Εεν-[Ε7>Ο]-3Ρ·2 Αο-ΕΡΕΚΡΑΡΑΡΚΟΥνΑΚΐνΚΙΧΝΗ2 501
- 31 012440
Κεν[Ε>11>Ε]3Ρ-2
Κβν-[Ώ18>Ε]3Ε-2
Κβν3Ρ-1
Ас-ЬРЕКРАЕАГКЕУУАКАКП-МН2
Αο-ΕΡΕΚΕΑΕΑΓΚΟΥνΑΚΑΚ£:ΝΗ2
Αο-ΓΑΕΚΑ1¥ΕΓνΚϋΥΕΑΚΕΚΒ-ΝΗ2
502
503
504
ΚβνΚ4-3Ρ-1
ΚβνΚ10-3Ρ-1
Κ.βνΚ.15-3Ρ-1
ΚβνΚ17-3Ρ-1
Κβν[Γ»Ε]3Ρ-1
Κεν[Ε>ϋ)3Ρ-1 Κεν[Ε3>Ο]-3Ρ-1 Κεν[Ε7>Ε>]3Ρ-1 Κβν-[ϋ11>Ε]3Ρ-1
Κβν-[Ώ18>Ε]3Ρ-1
Κεν-5Ρ'
Αο-ΡΑΕΗΑΑΕΡνΚΟΥΕΑΚΕΚΧ>-ΝΗ2 Αε-ΡΑΕΚΑ\νΕΡνΚ17ΥΡΑΚΧΚΧ>-ΝΗ2 Ас- РАЕКААЕРУКОУРАКЬКО-МН2 Αο-ΡΑΕΚΑΆΕΡνΚΟΎΈΑΚΙ_.ΗΟ-ΝΗ2 Ас- ΡΑΕΚΑΑΕΡνΚΕΥΡΑΚΕΚΕ-ΝΗ2 Αο-ΡΑΒΚΑΑϋΡνΚΟΥΡΑΚΕΚΟ-ΝΗ2 Ас- ΡΑβΚΑΑΕΡνΚΟΥΡΑΚΕΚΓ>-ΝΗ2 Ас- ΡΑΕΚΑΑΟΡνΚϋΥΡΑΚΕΚΟ-ΝΗ2 Ас- ΡΑΕΚΑΑΕΡνΚΕΥΡΑΚΕΚΟ-ΝΗ2 Ас- ΡΑΕΚΑΑΕΡνΚΟΥΡΑΚΕΚΕ-ΝΗ2 Αϋ-ΡΡΕΚΡΚΕΡνΚΟΥΡΑΚΕΧνΡ-ΝΗ2
505
506
507
508
509
510
511
512
513
514
515
Κον-[Ε»Ε]5Ρ
Κεν-[Ε>ϋ]5Ρ
Κβν-Κ4-5Ρ
Κον-Κ6-5Ρ
Κβν-Κ10-5Ρ
Κ.βν-Κ.Ι5-5Ρ
Κεν [Ε3>ϋ]-5Ρ Κβν-[Ε7>ϋ]5Ρ Κεν[Ο11>Ε]-5Ρ Κεν-[Ώ18>Ε]-5Ρ Κβν-5Ρ-2 Κβν-[Ο>Ε]-5Ρ-2 Κ©ν-[Ε>Ι3]-5Ρ-2 Κεν-[Ε3>Ο]-5Ρ-2 Κεν-[Ε7>Ο]-5Ρ-2 Κ.εν-[Ώ1]>Ε)-5Γ-2 Κβν-[Ο18>Ε]-5Ρ-2 Κσν-Κ4-5Ρ-2 Κβν-Κ6-5Ρ-2 Κ.βνΚ10-5Ρ-2 Кел-К16-5Р-2 Κ.βν-6Ρ ]ϊβν-[Ε>ϋ]-7Ρ Ι<βν-(Έ»Ε]-7Ε Κον-Κ4-7Γ
Κβν-Κ6-7Ρ
Κβν-Κ10-7Ρ
Ясу-К1 4-7Γ
ИеУ-[ЕЗ>О]-7р Κβν-[Ε7>ϋ]7Ρ Κβν-[Ό11>Ε]-7Ρ Κβν·|Τ)18>Ε]-7Ρ
Αο-ΡΡΕΚΡΚΕΕνΚ£ΥΡΑΚ1,ΑΕ-ΝΗ2 Αο-Ρ^ΚΡΚ2ΓνΚΕ>ΥΡΑΚ1.ΑΟ-ΝΗ2 Αο-ΡΡΕβΡΚΕΡνΚΟΥΡΑΚ1.ΑΟ-ΝΗ2 Αο-ΡΓΕΚΡΚΕΡνΚΟΥΡΑΚΧ.ΑΟ-ΝΗ2 Αο-ΡΡΕΚΡΚΕΡνΗΟΥΓΑΚΕΑΟ-ΝΗ2 Αο-ΕΡΕΚΈΚΕΤνΚΒΥΡΑΚΕΑΟ-ΝΗ2 Αε-ΕΡΙΙΚΡΚΕρνΚΡ ΥΕΑΚΙΛνϋ-ΝΗ2 Αε-ΡΡΕΚΡΚΙ)Ε·νΚΙ)ΥΡΑΚΕΑΟ-ΝΗ2 Αε-ΡΡΕΚΓΚΕΡνΚΈΥΓΑΚΧ\νϋ-ΝΗ2 Αε-ΓΓΕΚΤΚΕΕνΚΟΥΓΑΚΕ\νΕ-ΝΗ2 Αο-ΡΕΕΚΡΚΕΓνΚϋΥΡΑΚΕ\¥0-ΝΗ2 Αο-ΡΕΕΚΡΚΕΡνΚΕΥΡΑΚΡΐνΕ-ΝΗ2 Αο-ΡΕΒΚΡΚ£ΡνΚϋΥΡΑΚΡΐνϋ-ΝΗ2 Ас-РЬЮКРКЕРУКОУРАКЕ5УП-КН2 Αο-ΡΈΕΚηα>ΡνΚΧ>ΥΡΑΚΡΆϋ-ΝΗ2 Αο-ΡΕΕΚΡΚΕΡνΚΕΥΡΑΚΓ\νϋ-ΝΗ2 Αο-Ρ£ΕΚΓΚΕΡνΚΟΥΡΑΚΡ\νΕ-ΝΗ2 Αε-ΡΕΕΚΡΚΕΡΧΤΰΟΥΓ.ΑΚΕν(Τ>-ΝΗ2 Αε-ΕΕΕΚΓβΕΡνΚΟΥΡΑΚΓ'ΛΓΟ-Ν1Ι2 Αο-ΡΕΕΚΡΚΕΡνΚΟΥΡΑΚΡλ¥Β-ΝΗ2 Αε-ΡΕΕΚΡΚΕΡΥΤΚΟΥΡΑΚΡΆΤ>-ΝΗ2 Αο-ΡΕΕΚΓΚΕΕΕΚΙ>ΥΓΑΚΕΧνθ-ΝΗ2 Αε-Ρ'ΡΠΚΕΚΟΡΕΚΏΥΡΑΚΓΑΟ-,ΝΗΣ Αο-ΡΕΕΚΕΚΕΕΡΚΕΥΓΑΚΓΑΕ-Ν’Ρ{2 Ας-ΕΡΕΚΓΚΕΡ'ΡΚϋΥΡΑΚΓ\νθ-ΝΗ2 Αο-ΕΡΕΚΡβΕΡΡΚΟΥΓ.ΑΚΡΑνθ-ΝΗ2 Ас-ЕРЕКРКЕЕРКОУРАКГАО-КНг Αΰ-ΡΡΕΚΡ'Κ.ΕΕΓΚΟΥΕΑΒΕΑϋ-ΝΗ2 Ас-РРЛКРКЕРЕКОУРАКР\УО-ЯН2
Αο-ΕΓΕΚΓΚβΓΓΚΟΥΕΑΚΡΑϋ-ΝΗΣ
Αε-ΡΡΕΚΡΚΕΡΓΚΕΥΡ.ΑΚΡΑΟ-ΝΉ2
Λϋ-ΓΪΈΚΕΚΕΕΕΚϋΥΡΑΚΕΑΕ-ΝΗ2
516
517
518
519
520
521
522
523
524
525
526
527
528
529
530
531
532
533
534
535
536
537
574
575
576
577
578
579
580
581
582
583
Следует также отметить, что любой из пептидов, описанных в данном контексте, может включать неприродные аминокислоты в дополнение или вместо соответствующих природных аминокислот, идентифицированных в данном контексте. Данные модификации включают, но без ограничения перечисленным, ацетилирование, амидирование, формилирование, метилирование, сульфирование и т.п. Иллюстративные неприродные аминокислоты включают, но без ограничения перечисленным, орнитин, норлейцин, норвалин, Ν-метилвалин, 6-Ы-метиллизин, Ν-метилизолейцин, Ν-метилглицин, саркозин, инозин, алло- 32 012440 изолейцин, изодесмолизин, 4-гидроксипролин, 3-гидроксипролин, аллогидроксилизин, гидроксилизин, Ν-этиласпарагин, Ν-этилглицин, 2,3-диаминопропионовая кислота, 2,2'-диаминопропионовая кислота, десмозин, 2,4-диаминомасляная кислота, 2-аминопимелиновая кислота, 3-аминоизомасляная кислота, 2аминоизомасляная кислота, 2-аминогептановая кислота, 6-аминокапроновая кислота, 4-аминомасляная кислота, 2-аминомасляная кислота, β-аланин, 3-аминоадипиновая кислота, 2-аминоадипиновая кислота и т.п. В некоторых вариантах осуществления одна или более природных аминокислот пептидов, описанных в данном контексте, может быть заменена соответствующей неприродной аминокислотой (например, как описано выше). В некоторых вариантах осуществления данное изобретение предусматривает, в частности, использование модифицированных лизинов. Данные модификации включают, но без ограничения перечисленным, модификацию биотином е-лизинов и/или метилирование е-лизинов. Иллюстративный пептид, содержащий е -метилированные лизины, включает, но без ограничения перечисленным, Ас-О-^-Е-К(еСН3)2-А-Е-¥-О-К(еСН3)2-У-А-Е-К(еСН3)2-Е-К(еСН3)2-Е-А-Е-Ж(СН3)2 (8Е() II) N0:584) и Ас-П№ЕК(еСНз)2АРУВК(еСНз)2УАЕК(еСНз)2ЕК(еСНз)2ЕАЕ-МН(СН3) (8ЕО II) N0:585). Другие модифицированные аминокислоты включают, но без ограничения перечисленным, аналоги орнитина и аналоги гомоаминоаланина [вместо (СН2)4-NН2 для Ьу§ это может быть -(СН2)2-NН2 для Наа и -(СНа)3-NН2 для Оги] и т.п. Следует отметить, что данные модификации являются иллюстративными и не предназначены для ограничения. Иллюстративные аналоги 4Е, которые имеют модифицированные аминокислоты, показаны в табл. 6.
Таблица 6 Иллюстративные аналоги 4Е, которые включают модифицированные аминокислоты
εΝ-лимотил производное 4Р (εΝ'»™1™)
Αο-ϋ-ν-Ε-Κ(εΝ·^ϊ™)-Α*Γ-Υ-ϋ-Κ(εΝ·ΜΜ™Λ)-ν-Α-&Κ(εΝ·Λ™<»™ι)-ϊ'-Κ(εΝ- ДЯМ5ТЯЛ )-Ε-Α-Γ*ΝΗ2 586
Αε-0-ν·’-Ρ-Κ·(εΝ.-Ι™,.™,)-Α-Ε-Υ-Ο-Κ(ΕΝ-^0™Λ)-ν-Α-Ε-Κ(εΝ«^«™;Ι).Ε.Κ((εΝ- длметил )-ϊ’.-Α-Ρ*ΝΙΙ-Με 587
Αε-ϋ-1ΛΓ-Ρ-Κ4εΝ™<™η)-Α-Ρ-Υ-Ο-Κ(εΝ-™™»)-ν-Α-Ε-Κ(εΝ-*™<™π)-Ρ-Κ(εΝ™·™)-Ε-Α-Γ-Ν-№)2 588
εΝ-диметил -Ьуз производное 4Ρ (εΝ диэтпл)
Αο-ϋ-ΐν-Ρ-Κ(εΝ «”')- Α-Ρ-Υ-ϋ-Κ(εΝ«™ >ν-Α-Ε-Κ(εΝ »»·™^Ρ-Κ(έΝ д»»™,). Ε-Α-Ρ-1ΊΗ3 589
Λε-η-ν/-Γ-Κ(εΝί:ητκ„)-Α·Ρ-Υ-ϋ·Κ(εΝ'’'”’'Ο-ν·Α-Ε-Κ(εΝ.™·«»η)-Ρ-Κ(εΝΐ’τ^)Ε-Α-Γ-ΝΗ-Ε» 590
Αε-Ο-ν/-Ρ-Κ(εΝ ^^)-Α-Ρ-Υ-ϋ-Κ(εΝ .^->τ«τ)-ν-Α-Ε-Κ(3Ν>3™)-Ρ-Κ(εΝπ™). Ε-Α-Ρ-ΝΗ-(Ε1}2 591
εΝ- монометил 1-Еу$ производное 4Ρ (εΝ-Ме)
Αε-0-ν-Ρ-Κ(εΝ-Μβ)-Α-Ρ-Υ-Ο-Κ(εΝ-Με)-ν-Α-Ε-Κ(εΝ-Μβ)-Ρ-Κ(εΝ-Μβ)ε-α-ρ-νη2 592
Αε-Ο-λνΡ-Κ(εΝ-Μβ)-Α-Ρ-Υ-ϋ-Κ(εΝ-Μβ)-ν-Α-Ε-Κ(εΝ-Με)-Ρ-Κ(εΝ-Με)Е-А-Е-ХН-Ме 593
Ас-ОЛУ-Ρ-Κ(εΝ~Με)-Α-Ρ-Υ-Ο·Κ(εΝ-Με)-ν-Α-Ε-Κ(εΝ-Με)-Ρ-Κ.(εΝ-Μ«)Е-А-Р-К-(Мс)2 594
εΝ-εύτγΙΐΛ^ производное 4Ρ (εΝ-Εί)
Ас—Ο-Ψ-Ρ-Κ(εΝ-Ε0-Α-Ρ-Υ-Ο-Κ(εΝ-Εΐ>ν-Α-Ε-Κ(εΝ-Εΐ)-Ρ-Κ(εΝ-Εΐ)-ΕΑ-Ρ-ΝΗ2 595
Ас—ϋ-ν/-Ρ-Κ(εΝ-Ε()-Α-Ρ-Υ-Ο-Κ(εΝ-Εί)-ν-Α-Ε-Κ(εΝ-Ε1)-Ρ-Κ(εΝ-Εΐ)-ΕΑ-Ρ-ΝΗ-ΕΙ 596
Ас—Ο-νν-Ρ·Κ(εΝ-Εΐ)-Α-Ρ-Υ-Ο-Κ.(εΝ-Εΐ)-ν-Α-Ε-Κ(«Ν-Εί)-Ε-Κ.(εΝ-Εί)-ΕΑ-Ρ-ΝΗ-ΙΕΟϊ 597
ГомоЕуз аналоги 4Ρ <ЪК.) (-€Η2)5*ΝΗ2
Ас—0-ν/-Ρ-ΙιΚ-Α·Ρ-Υ-0-ΕΚ-ν·Α-Ε-ΙιΚ-Ρ-ΗΚ-Ε-Α-Ρ-ΝΗ2 598
Ас—ϋ-ΐν-Ρ-ΙιΚ(εΝ-«·ΜΕ™”)-Α-Ρ-Υ-Ο-1ιΚ(εΝ·»™ί™)-ν-Α-Ε-1ιΚ(εΝ·™=™»)-ΡάΚ(εΝ·®™««)-Ε-Α-Ρ-ΝΗϊ 599
Ас—ϋ-)ν-Ρ-ίιΚ(εΝ-Λ™ί™^-Α-Γ-Υ-Ο-1ιΚ(εΝ-·ΒΜ™π)-ν-Α-Ε-1ιΚ(εΝ.№.™)-ΡΚΚ(εΝ -№Μί™π)-Ε-Α-Ρ-Ν-(Με)2 600
Ас—0-\ν-Ρ-ήΚ(εΝΙ™^η)-Α-Ρ-ΥΌ-1ιΚ(εΝ·ΛΜ^.ν-Α-Ε-ΙιΚ(εΝ-'™'™’)-ΡΕΚ(εΝ ϊ«Μΐτ>]Λ}-Ε-Α-Ρ-ΝΗ-Μβ 601
Ас—1)-ν/-Ρ-ΗΚ(εΝ^™η)-Α-Ρ-Υ-0-)ιΚ(εΝ Η™)-ν-Α-Ε-ΕΚ(εΝ ΕΚ(εΝ^Β.™)-Ε-Α-Ρ-ΝΗ-Ε1 602
Αο-ϋ-\¥-Ε-ΕΚ(εΝ-Μβ)-Α-Ρ-Υ-Π-ΙιΚ(εΝ-Μβ)-ν-Α-Ε-1ιΚ(εΝ-Μβ)-ΡΗΚ(εΝ-Μο)-Ε-Α-Ρ-ΝΗ2 603
Αο-ϋ-ν/-Ρ-ΙιΚ(εΝ-Μ6)-Α-Ρ-Υ-Π-ΙιΚ(εΝ-Μβ)-ν-Α-Ε-ΕΚ(εΝ-Μο)-ΡΚΚ(εΝ-Μβ)-Ε-Α-Ρ-ΝΗ-Μβ 604
Αε-0Λν-Ρ-ΕΚ(εΝ-Μ«)-Α-Ρ-Υ-ϋ-1ιΚ(εΝ-Μ6)-ν-Α-Ε-ΙιΚ(εΝ-Μί)-ΡΕΚ(εΝ-Με)-Ε-Α-Ρ-Ν-(Μβ)ί 605
Ас—1)-ν/-Ρ-ΕΚ(εΝ-Εΐ)-Α-Ρ-Υ-Ο-ΙιΚ(εΝ-Εύ-ν-Α-Ε-ΙιΚ(εΝ-ΕίΡΡ- 606
- 33 012440
ΕΚ(εΝ-Ε()-Ε-Α-Ρ-ΝΗ2
Ас—Π-Ψ-Γ-ΗΚ.(εΝ-Εΐ)·Α-Ρ-Υ-Ο-1ιΚ(εΝ-Εΐ)-ν-Α-Ε-1ιΚ(εΝ-Εΐ)-Ρ1ιΚ(εΝ-Εί)-Ε-Α-Ρ-ΝΗ-Εΐ 607
Ас—Γ>-νν-Γ-1ιΚ(εΝ-Εΐ)-Α-Ρ-Υ-Ο-1ιΚ(εΝ-ΕΤ)-ν-Α-Ε-1ιΚ(εΝ-Εί)-ΡΚΚ-ίέΝ-ΕΟ-Ε-Α-Ρ-ΝΗ-ίΕΐ), 608
аналоги 4Г, в которых К замещено О (О=орнитин, -(СНз^-ЫНз)
Ас—ϋ-λν-Ε-Ο-Α-Ρ-Υ-ϋ-Ο-ν-Α-Ε-Ο-Ρ-Ο-Ε-Α-Γ-ΝΗ;, 609
Ас—ϋ-\ν-Ε-Ο(δΝ-ΕΗπκ)-Α-Γ-Υ-Ο-Ο(δΝ-ϋίιηβ)-ν-Α-Ε-Ο(δΝ-ϋίηΐ6)-Ρ-Ο(δΝϋίπιβ)-Ε-Α-Ρ -ΝΗ2 610
Ас—ϋ-\ν-Ρ-0(ΰΝ-ΒιηΐΓ)-Α-Ε-Υ-0-)(6Ν-0ϊιιιε)-ν-Α-Ε-0(6Ν-0ίπιβ)-Ρ-Ο(5Νϋϊιηε)-Ε-Α-Ρ-Ν-(Με)2 611
ΧεΤΤρ:νΖ-Ρ-Ο(δΝ-ϋ™ε)-Α-Ρ-Υ-0-0(6Ν-ϋύηβ)-ν-Α-Ε-Ο(δΝ-Οίπιβ)-Ρ-Ο(6Ν- ЕИте)-Р,-А-Р-1ЧН-Ме 612
Ас—0-Λ'-Ρ-0(6Ν·Ρί6ί)-Α·Ρ-Υ-0-0(δΝ-Ε>ίσΐ)-ν-Α-Ε-0(δΝ-ϋιεΐ)-Ρ-0(δΝϋίσΟ-Ε-Α-Ε-ΝΗ-Εΐ 613
Α<:-Ο-·Λ'-Ρ-Ο(6Ν-Μβ)-Α-Ρ-Υ-Ώ-Ο(6Ν-Μή-ν-Α·Ε-Ο(δΝ-Μβ)-Ρ-Ο(δΝ-Με)Ε-Α-Ρ-ΝΗ2 614
Α0-Ο-λν-Ρ-Ο(δΝ-Μβ)-Α-Ρ-Υ-ϋ-Ο(δΝ-Μ6)-ν-Α-Ε-Ο(ΘΝ-Μβ)-Ρ-Ο(δΝ-Μβ)Ε-Α-Ρ-ΝΗ-Ме 615
Α<:-Ο-ΐν-Ρ-Ο(δΝ-Μβ)-Α-Ρ-Υ-ϋ-Ο(δΝ-Με)-ν-Α-Ε-Ο(δΝ-Με)-Ρ-Ο(δΝ-Μ«)Ε-Α-Ρ-Ν-(Μβ)3 616
Ас—Ο-'ΛΓ-Ε-Ο(δΝ-Ε()-Α-Ρ-Υ-ϋ-Ο(δΝ-Ε0-ν-Α-Ε-Ο(δΝ-Εΐ)-Ρ-Ο(δΝ-Εΐ)-ΕΑ-Ρ-ΝΗί 617
Ас—Ο-ΐν-Ρ-Ο(δΝ-Εΐ)-Α-Ρ-Υ-Ο-Ο(δΝ-Εί)-ν-Α-Ε-Ο(δΝ-Ε0-Ρ-Ο(δΝ~Ε()-ΕΑ-Ρ-ΝΗ-ΕΙ 618
Α=—ϋ-ΐν-Γ-Ο(6Ν-Εί)-Α-Ρ-Υ-Ο-Ο(δΝ~Εΐ)-ν-Α-Ε-ΟάεΝ-Εΐ)-Ρ-Ο(δΝ-Εΐ)-ΕΑ·Ρ-ΝΗ·(ΕΙ)2 619
Подразумевается, что пептиды и модификации, показанные выше, являются иллюстративными и неограничивающими.
Ό) Пептиды меньшего размера.
Неожиданно обнаружено также, что ряд маленьких пептидов, состоящих минимум из трех аминокислот, предпочтительно (но не обязательно) с одной или более аминокислотами, являющейся Όстереоизомером аминокислоты, и имеющие гидрофобные домены для обеспечения взаимодействий липида с белком, и гидрофильные домены для обеспечения уровня растворимости в воде, также обладают существенными противовоспалительными свойствами и эффективны при лечении одной или более патологий, описанных в данном контексте. Маленькие пептиды, как правило, имеют длину в интервале от 2 аминокислот до приблизительно 15 аминокислот, более предпочтительно от приблизительно 3 аминокислот до приблизительно 10 или 11 аминокислот и наиболее предпочтительно от приблизительно 4 до приблизительно 8 или 10 аминокислот. В различных вариантах осуществления пептиды, как правило, характеризуются наличием гидрофобных концевых аминокислот или концевых аминокислот, которые делают гидрофобными присоединением одной или более гидрофобных защитных групп. Различные маленькие пептиды описаны в одновременно рассматриваемых заявках υ88Ν 10/649378, поданной 26 августа 2003 г., и υ88Ν 10/913800, поданной 6 августа 2004 г., и в заявке РСТ/и8 2004/026288.
В ряде вариантов осуществления пептиды могут быть охарактеризованы формулой I, см. ниже:
Χ'-Χ2-Χ3 η-Χ4 I (ЗЕО Ю N0:620), I в которой η означает 0 или 1, X1 представляет собой гидрофобную аминокислоту и/или несет гидрофобную защитную группу, X4 представляет собой гидрофобную аминокислоту и/или несет гидрофобную защитную группу и, когда η означает 0, X2 представляет собой кислую или основную аминокислоту, когда η означает 1, X2 и X3 независимо представляют собой кислую аминокислоту, основную аминокислоту, алифатическую аминокислоту или ароматическую аминокислоту, причем когда X2 представляет собой кислую аминокислоту, X3 представляет собой основную аминокислоту, алифатическую аминокислоту или ароматическую аминокислоту, когда X2 представляет собой основную аминокислоту; X3 представляет собой кислую аминокислоту, алифатическую аминокислоту или ароматическую аминокислоту, и когда X2 представляет собой алифатическую или ароматическую аминокислоту, X3 представляет собой кислую аминокислоту или основную аминокислоту.
Более длинные пептиды (например, до 10, 11 или 15 аминокислот) также рассматривают в объеме данного изобретения. Как правило, если более короткие пептиды (например, пептиды, соответствующие формуле I) характеризуются кислой, основной, алифатической или ароматической аминокислотой, более длинные пептиды характеризуются кислым, основным, алифатическим или ароматическим доменами, включающими две или более аминокислот данного типа.
1) Функциональные свойства активных маленьких пептидов.
В данном изобретении неожиданно обнаружено, что ряд физических свойств предсказывает спо
- 34 012440 собность маленьких пептидов (содержащих, например, менее 10 аминокислот, предпочтительно менее 8 аминокислот, более предпочтительно от приблизительно 3 до приблизительно 5 или 6 аминокислот), соответствующих данному изобретению, делать ЛВП более противовоспалительными и ослаблять атеросклероз и/или другие патологии, характеризующиеся воспалительной реакцией у млекопитающего. Физические свойства включают высокую растворимость в этилацетате (например, выше, чем приблизительно 4 мг/мл), и растворимость в водном буфере при рН 7,0. При контактировании фосфолипидов, таких как 1,2-димиристоил-§п-глицеро-3-фосфохолин (ОМРС), в водной среде особенно эффективные маленькие пептиды индуцируют или принимают участие в формировании частиц диаметром приблизительно 7,5 нм (±0,1 нм), и/или индуцируют либо принимают участие в формировании уложенных в стопу двухслойных структур при величине двухслойной структуры порядка 3,4-4,1 нм с расстоянием между двухслойными структурами в стопе приблизительно 2 нм и/или также индуцируют или принимают участие в формировании везикулярных структур размером приблизительно 38 нм. В ряде предпочтительных вариантов осуществления маленькие пептиды имеют молекулярную массу менее чем приблизительно 900 Да.
Так, в ряде вариантов осуществления данное изобретение рассматривает маленькие пептиды, которые облегчают один или более симптомов показания/патологии, описанных в данном контексте, например, воспалительного состояния, причем пептид(ы) имеют длину в интервале от приблизительно 3 до приблизительно 8 аминокислот, предпочтительно от приблизительно 3 до приблизительно 6 или 7 аминокислот и более предпочтительно от приблизительно 3 до приблизительно 5 аминокислот; растворимы в этилацетате в концентрации больше чем приблизительно 4 мг/мл; растворимы в водном буфере при 7,0; при контактировании с фосфолипидом в водной среде формируют частицы диаметром приблизительно 7,5 нм и/или формируют уложенные в стопу двухслойные структуры при величине двухслойной структуры порядка 3,4-4,1 нм с расстоянием между двухслойными структурами в стопе приблизительно 2 нм; имеют молекулярную массу меньше чем приблизительно 900 Да; превращают провоспалительный ЛВП в противовоспалительный ЛВП или делают противоспалительный ЛВП более противовоспалительным и не включают последовательность аминокислот Ьу5-Лгд-Л5р-8сг (8Еф ГО Ν0:751), особенно ту, в которой все ΕΛΈ-ΑΓ^-Αδρ и 8ег представляют собой Ь-аминокислоты. В ряде вариантов осуществления данные маленькие пептиды защищают фосфолипид от окисления окисляющим агентом.
Хотя данные маленькие пептиды не следует ограничивать таким образом, в ряде вариантов осуществления данные маленькие пептиды могут включать нижеописанные маленькие пептиды.
2) Трипептиды.
Обнаружено, что можно синтезировать ряд трипептидов (пептидов из 3 аминокислот), которые проявляют необходимые свойства, как описано в данном контексте (например, способность превращать провоспалительный ЛВП в противовоспалительный ЛВП, способность снижать ЛНП-индуцированную активность хемотаксиса моноцитов, генерируемую клетками стенки артерии, способность повышать уровень пре-β ЛВП и т.п.). В ряде вариантов осуществления пептиды характеризуются формулой I, в которой Ν означает нуль, представленной ниже как формула II:
Х1-Х2-Х4 II (ЗЕО ГО N0:621) в которой концевые аминокислоты (X1 и X4) являются гидрофобными либо вследствие гидрофобной боковой цепи, либо вследствие того, что боковая цепь либо С- и/или Ν-конец блокированы одной или более гидрофобными защитными группами (например, Ν-конец блокирован Вос-, Ρтос-, никотинилом и т.п. и С-конец блокирован (ίΒπ)-ΟΐΒπ и т.п.). В ряде вариантов осуществления аминокислота X2 является либо кислой (например, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота и т.п.) или основной (например, гистидин, аргинин, лизин и т.п.). Пептид может состоять из всех Ь-аминокислот или включать одну или более либо все Ό-аминокислоты.
Некоторые предпочтительные трипептиды, соответствующие данному изобретению, включают, но без ограничения перечисленным, пептиды, приведенные в табл. 7.
- 35 012440
Таблица 7 Примеры некоторых предпочтительных трипептидов, несущих гидрофобные блокирующие группы и как центральные аминокислоты кислые, основные аминокислоты или гистидин
X1
Вос-Ьу$(еВос) Вос-Ьуз(еВос) Вос-Тгр Вос-Тгр
Вос-РНе Вос-РЬе Вос-Ьуз(еВос) Вос-Ьуз(ЕВос) Вос-Ьуз(гВос) Вос-Ьуя(еВос) Вос-Ьу8(еВос) Вос-Ьу»(еВос) Вос-Ьеи
Вос-Ьеи
Ршос-Тгр Ртос-Ттр Ртос-Тгр Ртос-Тгр Вос-Ьуз(€Вос) Ршос-1ли Ргпос-Ьеи
Ртос-Ьеи Ршос-Ьеи Гтос-Ееи
Вос-С1и
Гто с- Ьу8(£ртос) Ртос-Тф Ртос-Тгр Ртос-РЪе
Нтос-РЪе
Вос-Тгр Вос-Тгр Ртос-Тгр Ртос-Тгр Вос-От(бВос) ΝίοοίΐηγΙ Ьуз(еВос) Νίοοίίηγΐ Ьуз(еВос) Ртос-Ьеи Ртос-Ьеи Ртос-Ъеи Ртос-погЬеи Ртос-погЬеи Ртос-погЬеи Етос-Ъуя(еВос) Ртос-Еу з(е В ос) Ртос-Ьу5(еВос) Ртос-Ьуя(еВос) Ртос-Ьуз(еВос) Ртос-Ьуз(еВос) Ртос-Ьу5(еВос) Ртос-Ьуз(еВос) Ртос-Ьу8(сРтос) Ртос- Ьу8(еРтос) Ртос- Еуз(еРтос) Ртос- Ьуя(Ертос) Ртос- ЬузСеЕтос) Ртос- Еуз(еГтос) Ртос- Еуз(еРтос)) Во с-Ьуз (еР тос) Вос-Еуя(еРтос) Вос-Ьуя(£Ртос) Вос-Ьуя(еРтос) Вос-От(5Ртос) Вос-От(5Ртос) Вос-Огп(5Ртос) Вос-От(5Ртос) Вос-Огп(бРтос) Ртос-Тгр Ртос-Тгр Ртос-Тгр Ртос-Тгр
X1 X1 X* 8Εί? ΙΡΝΟ
Агв 8ег(<Ви)-ОЙЗи 622
Агв ТЬх(гВи)-ОгВи 623
Ахв Пе-О/Ви 624
Агв Ьеи-О/Ви 625
Агв Не-ΟίΒυ 626
Агв Ееи-О/Ви 627
О1и Зег(гВи)-ОгВи 628
О1и Пп(/Ви)-О/Ви 629
Азр 8ег((Ви)-О1Ви 630
Аар П1г(®и)-О/Ви 631
Агв 8ег(гВи)-О(Ви 632
Агв Τ1ΐΓ(ίΒυ)-ΟίΒυ 633
С1и 5ег(/Ви)-О/Ви 634
С1и П1х(1Ви)-ОхВи 635
Агв 8егЦВи)-О1Ви 636
Азр 8ег(ГВи)-О(Ви 637
<31и 8ег(/Ви).О/Ви 638
Агв 8ег(гВи)-О/Ви 639
О1и Ьеи-ОхВи 640
Ахв 8ег(гВи)-ОгВи 641
Азр 8ет(йЗи)-ОхВи 642
О1и 8ег((Ви)-ОхВи 643
Агв 8ех(|Ви)-ОгВи 644
Ахв ТЬг(гВи)-ОгВи 645
Азр Тух(хВи)-ОхВи 646
Ахв 8ег(гВи)-О/Ви 647
Ахв Пе-ОгВи 648
Агв Ьеи-ОгВи 649
Ахв Пе-ОхВи 650
Ахв Ьеи-ОгВи 651
Αϊβ РЬе-ΟίΒν 652
Агв Туг-ОгВи 653
Ахв РЪе-ОгВи 654
Ахв Туг-ОгВи 655
Ахв 5ег(1Ви)-О/Ви 656
Ахв 8ег(ГВи)-ОгВи 657
Агв ТНг(хВи)-ОхВи 658
Азр ТНг( гВи) -О1Ви 659
О1и ТЬх(гВи)-О<Ви 660
Ахв ТНх(ГВи)-О1Ви 661
Ахв 5ег(7Ви)-О1Ви 662
Азр 8ег(хВи)-О1Ви 663
<л1и 8 ег(/Ви)-О1Ви 664
Агв 8ет(Жи)-О1Ви 665
Агв Т11П7Ви)-О£Ви 666
С1и 8ег(гВи)-О1Ви 667
О1и ТНг(1Ви)-О1Ви 668
Азр 8ег(хВи)-ОхВи 669
Азр ТЪг(Жи)-О1Ви 670
О1и Ьеи-О^м 671
Агв Ьеи-ОДОи 672
Агв ТЬг(хВи)-О1Ви 673
О1и 8ег(Жи)-СНВи 674
О1и Т11г(<Ви)-О(Ви 675
Азр 5ег(/Ви)-О1Ви 676
Азр ТЬг<7Ви)-О1Ви 677
Ахв 8ег(/Ви)-ОГВи 678
О1и Ъеи-СНВи 679
Азр аег(/Ви)-О1Ви 680
Азр ТЪг(Жи)-ОХВи 681
Агв ПиЧ7Ви)-ОхВи 682
О1и Ьеи-О/Яи 683
С1и 8 ег(Жи)-СНВи 684
Азр 8ег(Жи)-О1Ви 685
Азр ТЕг(Жи)-О1Ви 686
Агв ТИг(Жи)-О1Ви 687
О1и ТЬг(/Ви)-О1Ви 688
Азр Пе-ΟίΒυ 689
Агв Пе-СИВи 690
С1и 11е-О1Ви 691
Азр Ьеи-О1Ви 692
- 36 012440
Ртос-Тгр С1и Ιχυ-ΟΐΒυ 693
Ртос-РЬе Аар Пе-СМВи 694
Ртос-РЪе Авр Ьеи-СНВи 695
Ртос-РЬе О1и Ьеи-СМВи 696
Ртос-Тгр Аге РЬе-О1Ви 697
Ртос-Тгр С1и РЬе-О1Ви 698
Ртос-Тгр Авр РЪе-СИВо 699
Ртос-Тгр Авр Туг-СнВи 700
Ртос-Тгр Агв Туг-ОШи 701
Ртос-Тгр О1и Туг-ОШи 702
Ртос-Тгр Агв ТЬг(ГВ и)-СНВ и 703
Ртос-Тгр Аар ТЬг('Ви)-О<Ви 704
Ртос-Тгр О1и ТЬг(1Ви)-О1Ви 705
Вос-Рке Агв погЬеи-ОГВи 706
Вос-РЬе О1и погЬеи-ОШи 707
Ртос-РЬе Авр погЬеи-СМВи 708
Вос-С1и Ηίβ Туг(ЙВи)-ОгВи 709
Вос-Теи Ηίβ 5ег(7Ви)-О/Ви 710
Вос-Ьеи Ηίβ ТЬг((Ви)-О(Ви 711
Вос-Ьуз(еВос) Нк 5ег(7Ви)-ОгВи 712
Вос-Ьуз(сВос) Н18 Ткг(гВи)-ОгВи 713
Вос-Еуа(гВос) Ηίβ Ьеи-ОгВи 714
Вос-Ьув(еРтос) Н18 8ег(ГВи)- О® и 715
Вос-Ьуз(еРтос) Н18 1Ъг(гВи)-О®и 716
Вос-Ьу8(€ртос) ΗΪ8 Ъеи-О/Ви 717
Вос-От(бВос) Ηΐβ 8ег(/Ви)-О?Ви 718
Вос-От(бРтос) Н18 ТЪг(ГВи)-О1Ви 719
Вос-РЪс Ηίβ Не -ОгВи 720
Вос-РЬе Ηΐβ Ьеи-ОгВи 721
Вос-РЬе Н18 погЬеи-О1Ви 722
Вос-РЬе Туз Ьеи-ОгВи 723
Вос-Тгр Ηίβ Пе-ΟιΒιτ 724
Вос-Тгр Ηίβ Ьеи-О/Ви 725
Вос-Тгр Ηίβ РЬе-О/Ви 726
Вос-Тгр Ηίβ Туг-О/Ви 727
Вос-РЪе Ьув Ьеи-О/Ви 728
Ртос- Ьу5(еРтос) Ηίβ 8 ег(£Ви)-О® и 729
Гтос- Ьуз(еРтос) Ηίβ ТЬг(/Ви)-О1Ви 730
Ртос- Ьув(еРтос) Ηίβ Ьеи-ОгВи 731
Ртос-Ьеи Ηίβ 5ефВи)-О1Ви 732
Ртос-Ьеь Ηίβ ТЬг(/Ви)-О1Ви 733
Гтос-Ьуз(вВос) Ηίβ 5ег(1Ви)-О1Ви 734
Гтос-Ьуз(еВос) Ηίβ ТЬг(1Ви)-О1Ви 735
Ртос-Ьув(еВос) Ηίβ Ьеи-ОгВи 736
Ртос-Ьуз(ЕРтос) Ηίβ ЗеП/Ви)-ОгВи 737
ъ Ртос-ЬуЦеГтос) Ηίβ ТЬг(1Ви)-О1Ви 738
Ртос-погЬеи Ηίβ 5ег(/Ви)-О1Ви 739
Ртос-РЬе Ηίβ Пе-ОгВи 740
Ртос-РЬе Ηίβ Ьеи-ОгВи 741
Ртос-РЪе Ηίβ погЬеи-О1Ви 742
Ртос-Тгр Ηίβ 8еЩВи)-О(Ви 743
Ртос-Тгр Ηΐβ Пе-ОгВи 744
Ртос-Тгр Ηίβ Ьеи-ОгВи 745
Ртос-Тгр Ηίβ РЬс-ОгВи 746
Ртос-Тгр Ηίβ Гуг-О/Ви 747
Ртос-Тгр Ηίβ ТЬг(1Ви)-О1Ви 748
ЩсоЬпу) Ьуз(вВос) Ηίβ Зег(/Ви)-О/Ви 749
ΝίοοΙίηγΙ Ьуз(еВос) Ηίβ ТЪг(гВг1)-ОгВи 750
- 37 012440
Хотя пептиды, приведенные в табл. 7, проиллюстрированы с определенными защитными группами, следует отметить, что данные группы могут быть заменены другими защитными группами, как описано в данном контексте, и/или одна или более из показанных защитных групп могут быть исключены.
3) Маленькие пептиды с центральными кислыми и основными аминокислотами.
В ряде вариантов осуществления пептиды, соответствующие данному изобретению, имеют длину в интервале от четырех аминокислот до приблизительно десяти аминокислот. Концевые аминокислоты являются, как правило, гидрофобными либо вследствие гидрофобной боковой цепи, либо, поскольку концевые аминокислоты несут одну или более гидрофобных защитных групп, концевые аминокислоты (X1 и X4) являются гидрофобными, либо вследствие гидрофобной боковой цепи, либо, поскольку боковая цепь или С- и/или Ν-конец блокированы одной или более гидрофобных защитных групп (например, Νконец блокирован Βοс-, Ртοс-, никотинилом и т.п. и С-конец блокирован (1Вн)-О1Ви и т.п.). Как правило, центральная часть пептида включает основную аминокислоту и кислую аминокислоту (например, в тетрамере) или основной домен и/или кислый домен в более длинной молекуле.
Данные тетрамеры могут быть представлены формулой I, в которой X1 и X4 являются гидрофобными и/или несут гидрофобную защитную группу(ы), как описано в данном контексте, и X2 представляет собой кислую, тогда как X3 является основной, или X2 представляет собой основную, тогда как X3 является кислой аминокислотой. Пептид может состоять из всех Ь-аминокислот или включает одну или более либо все Ό-аминокислоты.
Некоторые предпочтительные варианты осуществления данного изобретения включают, но без ограничения перечисленным, пептиды, представленные в табл. 8.
Таблица 8 Иллюстративные примеры маленьких пептидов с центральными кислыми и основными аминокислотами
X' —Х^ X4 8ЕС}П) ΝΟ
Вос-Ьуз(зВос) Агв Азр 5ег(гВи)-СиВи 751
Вос-Ьуз(сВос) Агв Азр ТЬг(гВи)-О/Ви 752
Вос-Ттр Агй Азр Ие-О/Ви 753
Вос-Тгр Агв Азр Ьеи-О/Ви 754
Вос-РЬе Агв Азр Ьеи-ОгВи 755
Вос-РЬе Агв Азр Пе-О/Ви 756
Вос-РЬе Агв Азр норЬеи-0/Ви 757
Вос-РЬе Лг§ ΰΐυ норЬеи-О/Ви 758
Вос-РЬе Агв 61и Ие-О/Ви 759
Вос-РЬе Азр Ατβ Пе-О/Ви 760
Вос-РЬе О1и Агв Ие-ОгВи 761
Вос-РЬе Азр Агв Ьеи-ΟίΒυ 762
Вос-РЬе Аг§ О1и Беи-ОгВи 763
Вос-РЬе 61и Агв Беи-ОгВи 764
Вос-РЬе Азр Агв норБеи-О/Ви 765
Вос-РЬе С1и Агв норЬеи-ОгВи 766
Вос-Ьуз(сВос) О1и Агв Зег(?Ви)-О/Ви 767
Вос-Ьуз(сВос) 61и Агв ТЬг(гВи)-ОгВи 768
Вос-Ьуз(сВос) Азр Агв 8ег(;Ви)-О®и 769
Вос-Ьуз(зВос) Азр Агв ТЬг(гВи)-ОгВи 770
Вос-Ьуз(зВос) Агв <31и 8ег(гВи)-О/Ви 771
Вос-Ьуз(зВос) Агв О1и ТЬг(®и)-ОгВи 772
Вос-Ьеи О1и Агв 5ег((Ви)-ОгВи 773
- 38 012440
Всс-Ьеи О1и Агв ТЪг( ГВи) -ОгВи 774
Етос-Тгр Аге Азр 8ег(7Ви)-ОгВи 775
Ртос-Тгр Аар Агв 5ег(гВи)-ОгВи 776
Ртос-Тгр О1и Агв 8сг(7Ви)-ОгВи 777
Ртос-Тгр Аге О]и 8ег(7Ви)-ОгВи 778
Вос- Ьу»(еВ ос) ОШ Агв Ьеи-<??Ви 779
Ртос-Ьеи Аге Азр 5ег(гВи)-ОгВи 780
Ртос-Ьеи Азр Агв 8ег(гВи)-ОгВи 781
Ртос-Ьеи ОШ Агв 5ег(7Ви)-ОгВи 782
чРтос-Ьеи Аг® О1и 8ег(гВи)-ОгВи 783
Ртос-Ьеи Агв Азр ТИг(7Ви)-ОгВи 784
Вос-О1и Азр Агв Тут(/Ви)-ОгВи 785
Ртос-Ьуз(еРтос) Аге Азр 8ег(7Ви)-О®и 786
Ртос-Тгр Агв Азр 11е-ОгВи 787
Ртос-Тгр Агв Азр Ьеи-О/Ви 788
Ртос-РЬе Агв Азр 11е-О/Ви 789
Ртос-РЬс Агв Азр Ьеи-О/Ви 790
Вос-Тгр Ατβ Азр Рке-О/Ви 791
Вос-Тгр Агв Азр Туг-ОгВи 792
Рптос-Тгр Агв Азр РЬе-О/Ви 793
Ртос-Тгр Агв Азр Туг-О/Ви 794
Вос-От(6Вос) Агв О1и 8ег(/Ви)-ОгВи 795
№со<шу] Ьу8(еВос) Агв Азр 8ег(7Ви)-ОгВи 796
Νίοοίίηγΐ Ьуз(еВос) Агв Азр ТЪг(7Ви)-О?Ви 797
Ртос-Ьеи Азр Агв ТЬг(гВи)-О1Ви 798
Ртос-Ьеи С1и Агв ТЬг(/Ви)-О!Ви 799
Ртос-Ьеи Агв О1и ТЬг(гВи)-СНВи 800
Ртос-погЬеи Агв Азр 8ег(?Ви)- ОгВи 801
Ртос-погЬеи Азр Агв 8ег(гВи)-ОгВи 802
Ртос-погЬеи О1и Агв Зег(7Ви)-ОШи 803
Ртос-погЬеи Ατβ О1и 8ег(«Ви)-О1Ви 804
Ртос-Ьув(еВос) Агв Азр 8ег(ГВи)-ОШи 805
Рто с-Ьуз (εΒ ос) Агв Азр Ткг(гВи)-О1Ви 806
Ртос-Ьуз(еВос) О1и Агв 8ег(гВи)-ОгВи 807
Ртос-Ьуз(еВос) ОШ Агв Т11г(ГВи)-О1Ви 808
Ртос-Ьу8(еВос) Азр Агв 8ет(гВи)-ОгВи 809
Ртос-Ьуз(еВос) Азр Агв ТЬг(гВи)-ОсВи 810
Ртос- Ьуз(еВос) Агв О1и 8ег(7Ви)- ОШи 811
Ртос-Ьу8(еВос) Агв О1и Пхг(гВи)-ОШи 812
Ртос-Ьуз(еВос) О1и Агв Ьеи-ОГ^и 813
- 39 012440
Рхпос1_уз(еВос) Аге О1и Ьеи-ОгВи 814
Ртос-Ьуз(еРтос) Аг§ Азр ТЬг(гВи)-ОгВи 815
Ртос- Ε,γβ(εΡτηοε) О1и Аге 8ег(гВи)-О1Ви 816
Ртос- Еуз(еРтос) О1и Аге ТЪг(ГВи)-О1Ви 817
Ртос- Ьуз(еРтос) Азр Аге 8ег(гВи)-ОГВи 818
Ртос* Ьуз(еРтос) Азр Аге ТТхг(/Ви)-О1Ви 819
Ртос· Ьуз(еРтос) Аг® О1ч 8ег(гВи)-ОГВи 820
Ртос- Ьу5(еРтос) Агв 014 ТЪг(ГВи)-О1Ви 821
Ртос- Ьув(еРтос)) О1и Аге Ееи-О/ви 822
‘Вос-Ьуз(зРтос) Аг§ Азр 8ег(гВи)-О1Ви 823
Вос-1,уз(еРтос) Аге Азр ТЬг(хВи)ОгВи 824
Вос-Ι,уз(Ертос) О1и Аге 8ст(гВи)-ОЙВи 825
Вос-Еуз(Ертос) 014 Аге ТНг(хВи)-ОГВи 826
Вос-1,уз(еРтос) Азр Аге 8ег(ХВи)-ОГВи 827
Вос-Ьуз^еРтос) Азр Аге ТЬг(хВи)-ОГВи 828
Вос-Еуз(еРтос) Ατβ О1и 8ег(гВи)-ОГВи 829
Вос-Еуз(еРтос) Агв С1и ТЬг(гВи)-ОГВи 830
Вос-Еуз(еРтос) О1и Аге Ееи-О/Ви 831
Вос-От(бРтос) Аге С1и 8ег(гВи)-ОГВи 832
Вос- От(йРтос) О1и Аге Зег(гВи)-ОГВи 833
Вос-От(йРтос) Аге Азр Зег(гВи)-ОГВи 834
Вос-От(йРтос) Азр Аге 8ег(гВи)-ОГВи 835
Вос-От(5Ртос) Азр Аге ТЪг(гВи)-О1Ви 836
Вос-От(йРтос) Аге Азр ТЬг(ГВи)-СКВи 837
Вос-От(йРтос) О1и Аге ТТхг(гВи)-ОГВи 838
Вос-От(йРтос) Аге О1и ТЪг(ГВи)-О1Ви 839
Ртос-Тгр Азр Аге Пе-ОГВи 840
Ртос-Тгр Аге О1и Пе-ОГВи 841
Ртос-Тгр О1и Аге Пе-ОГВи 842
Ртос-Тгр Азр Аге Ьеи-ОГВи 843
Ртос-Тгр Аге О1и Ееи-ОГВи 844
Ртос-Тгр О1и Агв Ьеи-ОГВи 845
Ртос-РЬе Азр Аге Пе-ОГВи 846
Ртос-РЬе Аге 014 Пе-ОГВи 847
Ртос-РИе О1и Агв Пе-ОГВи 848
Ртос-РЬе Азр Аге Ьеи-ОгВи 849
Ртос-РЪе Аге О1и Ьеи-ОГВи 850
Ртос-РИе О1и Агв Ъеи-О1Ви 851
Ртос-Тгр Аге Азр РЬе-ОГВи 852
Ртос-Тгр Аге О1и РЬе-ОгВи 853
- 40 012440
Нгпос-Тгр О1и Аг§ РЬе-СНВи 854
Ртос-Тгр Аар Аг® Туг-ОИВи 855
Ртос-Тгр Аге <31и Туг-СНВи 856
Ртос-Тгр С1и Аг® Тут-О1Ви 857
Ртос-Тгр Аг® Азр ТЬг(гВи)-О1Ви 858
Ртос-Тгр Аар Ατβ ТЬг(7Ви)-О1Ви 859
Ртос-Тгр Аге σΐυ ТЬт(гВи)-О1Ви 860
Ртос-Тгр О1и Аг® ТЬг(гВи)-О1Ви 861
Ртос-РЬе Агд Азр норВеи -О1Ви 862
Ртос-РЬе АГ£ О1и норВеи -О1Ви 863
Вос-РЬе Вуз Авр Ъеи-О1Ви 864
Вос-РЬе Аар Вуз Веи-ОГВи 865
Вос-РЬе Вуз С1и Ъеи-СНВи 866
Вос-РЬе С!и Вуз Веи-ОгВи 867
Вос-РЬе Вуз Азр Пе-О1Ви 868
Вос-РЬе Аар Вуз Пе-ОсВи 869
Вос-РЬе Вуз С1и 11е-О1Ви 870
Вос-РЬе <Э1и Вуз Пе-СКВи 871
Вос-РЬе Вуз Азр норВеи -О1Ви 872
Вос-РЬе Аар Вуз норВеи -О1Ви 873
Вос-РЬе Вуз С1и норВеи -О1Ви 874
Вос-РЬе О1и Вуз норВеи -О1Ви 875
Вос-РЬе Ηίβ Азр Веи-О1Ви 876
Вос-РЬе Аар Ηϊβ Вси-О(Ви 877
Вос-РЬе Н<з О1и Ьеи-ОгВи 878
Вос-РЬе С1и ΗΪ3 Веи-О1Ви 879
Вос-РЬе Н»з Азр 11е-О1Ви 880
Вос-РЬе Аар ΗΪ5 Пе-ОгВи 881
Вос-РЬе ΗΪ3 С1и 11е-О1Ви 882
Вос-РЬе О1и ΗΪ3 Пе-ОШи 883
Вос-РЬе Ига Азр норВеи-ОНЗи 884
Вос-РЬе Аар ΗΪ& норВеи-ОШи 885
Вос-РЬе Н13 С1и норВеи -ОгВи 886
Вос-РЬе С1и Ηϊβ норВеи -О1Ви 887
Вос-Вуз(еВос) Вуз Азр 5ег(гВи)-О1Ви 888
Вос-Вуя(еВос) Аар Вуз 8ет(гВи)-ОгВи 889
Вос-Вуз(зВос) Ьуз С1и 5ег(гВи)-О1Ви 890
Вос-Вуз(зВос) С1и Вуз 8ег(гВи)-О1Ви 891
Вос-Ъуз(еВос) Ηί3 Азр Зег(гВи)-О1Ви 892
Вос-Ъуз(ЕВос) Азр Н13 5ег(гВи)-ОГВи 893
Вос-Еу9(еВос) ΗΪ3 С1и 8ег(7Ви)-О1Ви 894
Вос-Ьу5(еВос) С1и Н15 5ег(гВи)-О1Ви 895
Хотя пептиды, приведенные в табл. 8, проиллюстрированы с определенными защитными группами, следует отметить, что данные группы могут быть заменены другими защитными группами, как описано в данном контексте, и/или одна или более из показанных защитных группа могут быть исключены.
4) Маленькие пептиды, имеющие либо кислую, либо основную аминокислоту в центре вместе с центральной алифатической аминокислотой.
В ряде вариантов осуществления пептиды, соответствующие данному изобретению, имеют длину в интервале от четырех аминокислот до приблизительно десяти аминокислот. Концевые аминокислоты являются, как правило, гидрофобными либо вследствие гидрофобной боковой цепи, либо поскольку концевые аминокислоты несут одну или более гидрофобных защитных групп. Концевые аминокислоты (X1 и X4) являются гидрофобными либо вследствие гидрофобной боковой цепи, либо поскольку боковая цепь или С- и/или Ν-конец блокированы одной или более гидрофобными защитными группами (например, Ν-конец блокирован Вос-, Гтос-, никотинилом и т.п. и С-конец блокирован (1Ви)-О1Ви и т.п.). Как правило, центральная часть пептида включает основную или кислую аминокислоту и алифатическую аминокислоту (например, в 4-мере) либо основной домен или кислый домен и алифатический домен в более длинной молекуле.
Данные тетрамеры могут быть представлены формулой I, в которой X1 и X4 являются гидрофобными и/или несут гидрофобную защитную группу(ы), как описано в данном контексте, и X2 представляет собой кислую или основную, тогда как X3 является алифатической, или X2 представляет собой алифатическую, тогда как X3 является кислой или основной аминокислотой. Пептид может состоять из всех Ьаминокислот или включает одну или более либо все Ό-аминокислоты.
Некоторые предпочтительные пептиды, соответствующие данному изобретению, включают, но без ограничения перечисленным, пептиды, приведенные в табл. 9.
- 41 012440
Таблица 9
Примеры некоторых предпочтительных пептидов, имеющих либо кислую, либо основную аминокислоту в центре вместе с центральной алифатической аминокислотой
X1 X2 X3 X* 8Е(}10 N0
Ртос-Ьу8(еВос) Ьеи Аге 8ег(/Ви)-О1Ви 896
Ртос-Ьу5(еВос) Аг$ Ьеи 8ег(®и)-О1Ви 897
Ртос-Ьу$(еВос) Ьеи Аге ТЬг(гВи)-СИВи 898
Ртос-Ьуз(еВос) Аг® Ьеи Т11г(гВи)-О1Ви 899
Ртос-Ьуз(ЕВос) О1и Ьеи 8ег(ГВи)-ОШи 900
Рпюс-Ьу5(вВос) Ьеи С1и 8ег(гВи)-О1Ви 901
Ртос-Ьу8(еВос) 61и Ьеи ТЬг(/Ви)-О1Ви 902
Гтос-Ьу5(еВос) Ьеи <31и ТЬг(®и)-О1Ви 903
Рпюс- Ьу8(еРтос) Ьеи Аге 8ег((Ви)-СпВи 904
Ртос- Ьуз(еРтос) Ьеи Аг§ ТЬг(®и)-О1Ви 905
Ртос- Ьуз(еРтос) С1и Ьеи 5ег(гВи)-О1Ви 906
Рпюс- Ьуз(еРтос) О1и Ьеи ТЬг(/Ви)-О1Ви 907
Вос-Ьуз(Г1Тюс) О1и Не П1г(/Ви)-О1Ви 908
Вос-Ьуз(еР тос) Ьеи Аг6 8ег(гВи)-О£Ви 909
Вос-Ьуз(еРтос) Ьеи Аге ТЬг(/Ви)-О1Ви 910
Вос-Ьу5(£Ртос) О1и Ьеи 8ег(гВи)-О1Ви 911
Вос-Ьуз(Ерпюс) О1и Ьеи Ткг(/Ви)-О1Ви 912
Вос-Ьуа(еВос) Ьеи Аг® 8ег(гВи)-ОгВи 913
Вос-Ьу5(еВос) Аге РЬе Ткг(/Ви)-О1Ви 914
Вос-Ьуз(еВос) Ьеи аг8 ТЪг(гВи)-О1Ви 915
Вос-Ьу5(еВос) О1и Пе ТЬг(гВи) 916
Вос-Ьу8(еВос) О1и Уа1 ТЬгОВи) 917
Вос-Ьуя(еВос) О1и А1а ТЬг(/Ви) 918
Вос-Ьуз(еВос) О1и О1у ТЬг(?Ви) 919
В ос— Ьуз(еВос) О1и Ьеи 8ег((Ви)-О1Ви 920
Вос-Ьуз(ЕВос) О1и Ьеи ТИг(/Ви)-О1Ви 921
Хотя пептиды, приведенные в табл. 9, проиллюстрированы с определенными защитными группами, следует отметить, что данные группы могут быть заменены другими защитными группами, как описано в данном контексте, и/или одна или более из показанных защитных группа могут быть исключены.
5) Маленькие пептиды, имеющие либо кислую, либо основную аминокислоту в центре вместе с центральной ароматической аминокислотой.
В ряде вариантов осуществления маленькие пептиды, соответствующие данному изобретению, имеют длину в интервале от четырех аминокислот до приблизительно десяти аминокислот. Концевые аминокислоты являются, как правило, гидрофобными либо вследствие гидрофобной боковой цепи, либо поскольку концевые аминокислоты несут одну или более гидрофобных защитных групп, концевые аминокислоты (X1 и X4) являются гидрофобными либо вследствие гидрофобной боковой цепи, либо поскольку боковая цепь или С- и/или Ν-конец блокированы одной или более гидрофобных защитных групп (например, Ν-конец блокирован Вос-, Ртос-, никотинилом и т.п. и С-конец блокирован (1Вц)-О1Вц и т.п.). Как правило, центральная часть пептида включает основную или кислую аминокислоту и ароматическую аминокислоту (например, в 4-мере) или основной домен и/или кислый домен и ароматический домен в более длинной молекуле.
Данные тетрамеры могут быть представлены формулой I, в которой X1 и X4 являются гидрофобными и/или несут гидрофобную защитную группу(ы), как описано в данном контексте, и X2 представляет собой кислую или основную, тогда как X3 является ароматической, или X2 представляет собой ароматическую, тогда как X3 является кислой или основной аминокислотой. Пептид может состоять из всех Ьаминокислот или включает одну или более либо все Ό-аминокислоты. Пятимеры могут быть представлены минимальной модификацией формулы I, в которой X5 вводят, как показано в табл. 10, и где X5, как правило, является ароматической аминокислотой.
Некоторые предпочтительные пептиды, соответствующие данному изобретению, включают, но без ограничения перечисленным, пептиды, приведенные в табл. 10.
- 42 012440
Таблица 10
Примеры некоторых предпочтительных пептидов, имеющих либо кислую, либо основную аминокислоту в центре вместе с центральной ароматической аминокислотой
X1 х^· Х^ X4 ΝΟ
Ртос-Ьуз(сВос) Аг§ Тгр Туг(гВи)-О1Ви 922
Ртос-Еуз(еВос) Тгр Ате Туг((Ви)-О1Ви 923
Ртос-Ьуз(вВос) Аге Тут Тгр-О®ц 924
Ртос-Ьуз(еВос) Туг Аге Тф-О®и 925
ртос-1_уз(еВос) аг8 Тут Тф ТЪт(гВи)-О1Ви ' 926
Ртос-1_уз(£Вос) Аге Тут ТКг(1Ви)-О1Ви 927
Ртос-1_у5(еВое) Аге Тгр ТКг(/Ви)-О1Ви 928
Ртос- Еуз(еРтос) Аге Тгр Туг(1Ви)-О®и 929
Ртос- Руз(вРтос) Аге Тут Тф-О1Ви 930
Ртос- Еуз(еРтос) Ате Тут Тф ТЬг(/Ви)-О1Ви 931
Ртос- Ьуз(ЕРтос) Ате Тут ТТ1г(7Ви)-О(Ви 932
Ртос- Еуз(еРтос) Ате Тгр Τίιτ(ίΒυ)-Ο(Βϋ 933
Вос-Ьу8(вРтос) Ате Тгр Туг(7Ви)-О(Ви 934
Вос-Ьуз(еРтос) Аге Туг Тф-О1Ви 935
Вос-Ьуз(£ртос) Аге Тут Тф Т11г(гВг1)-О!Ви 936
Вос-Ьуз(гртос) Ате Туг ТЪг(1Ви)-О(Ви 937
Вос-Ьуз(еРтос) Ате Тгр ТНг(гВи)-СИВи 938
Вос-С1о Руз(вРтос) Аге Туг((Ви)-О1Ви 939
Вос-Ьуз(еВос) Аге Тгр Тут((Ви)-О1Ви 940
Вос-Ьуз(вВос) Ате Туг Τφ-ΟίΒυ 941
Вос-Ьуз(гВос) Ате Туг Тф Т11г(гВи)-О1Ви 942
Вос-Ьуз(еВос) Ате Туг ТЬг(гВи)-О1Ви 943
Вос-Ьуз(еВос) Ате РЬе ТЬт(/Ви)-О1Ви 944
ВооЬу5(вВос) Ате Тф ТЬг(гВи)-О1Ви 945
Хотя пептиды, приведенные в табл. 10, проиллюстрированы с определенными защитными группами, следует отметить, что данные группы могут быть заменены другими защитными группами, как описано в данном контексте, и/или одна или более из показанных защитных группа могут быть исключены.
6) Маленькие пептиды, имеющие в центре ароматические аминокислоты или ароматические аминокислоты, разделенные гистидином(ами).
В ряде вариантов осуществления пептиды, соответствующие данному изобретению, характеризуются π-электронами, которые находятся в центре молекулы, что дает возможность гидратации частицы и что позволяет пептидным частицам захватывать провоспалительные окисленные липиды, такие как гидропероксиды жирных кислот и фосфолипиды, которые включают продукт окисления арахидоновой кислоты в положении §п-2.
В ряде вариантов осуществления данные пептиды состоят минимум из 4 аминокислот и максимум из приблизительно 10 аминокислот, предпочтительно (но необязательно) с одной или более аминокислотами, представленными Ό-стереоизомером аминокислоты, с концевыми аминокислотами, являющимися гидрофобными либо вследствие гидрофобной боковой цепи, либо поскольку концевая аминокислота(ы) несет одну или более гидрофобных блокирующих групп, (например, Ν-конец блокирован Вос-, Ртос-, никотинилом и т.п. и С-конец блокирован группами (ΐΒιι)-ΟΐΒιι и т.п.). Вместо того чтобы иметь кислую или основную аминокислоту в центре, данные пептиды, как правило, имеют ароматическую аминокислоту в центре или имеют ароматические аминокислоты, разделенные гистидином, в центре пептида.
Некоторые предпочтительные пептиды, соответствующие данному изобретению, включают, но без ограничения данными пептидами, приведены в табл. 11.
- 43 012440
Таблица 11
Примеры пептидов, имеющих ароматические аминокислоты в центре или ароматические аминокислоты либо ароматические домены, разделенные одним или более гистидином
X1 X2 X3 X4 X5 8Е<2 Ю
N0
Вос-Ьуз(еВос) РЬе Тгр РЬе 8ег(®и)-О1Ви 946
Вос-Буз(гВос) РЬе Тгр РЬе ТЬг(®и)-О®и 947
Вос-Ьуз(еВос) РЬе Туг РЬе 8ег(гВи)-01Ви 948
Вос*Бу8(еВос) РЬе Туг РЬе ТИг(1Ви)-О1Ви 949
Вос-Еуз(гВос) РЬе Н13 РЬе 5ет(/Ви)-О®и 950
Вос-Буз(сВос) РЬе Н13 РЬе ТЬг(®и)-СпВи 951
Вос-Буз(сВос) Уа1 РЬе РЬе-Туг 8ег(гВи)-0сВи 952
№со1ту1-Бу8(еВос) РЬе Тгр РЬе 8ег(®и)-О®и 953
МсоЬву1-Буз(еВос) РЬе Тгр РЬе ТЬг(/Ви)-О1Ви 954
Νίοοίίηγ1Έγ8(εΒοε) РЬе Туг РЬе 8ег(/Ви)-О(Ви 955
ЬИсо1н1у1-Бу®(еВос) РЬе Туг РЬе ТЬт(/Ви)-О1Ви 956
№сойпу1-Буз(еВос) РЬе Ηίϋ РЬе 8ег(®и)-О®и 957
№со»1пу1-Буз(еВос) РЬе Н13 РЬе ТЬг(®и)-О®и 958
Вос-Беи РЬе Тгр РЬе ТЬг(®и)-04Ви 959
Вос-Беи РЬе Тгр РЬе 8ег(®и)-0®и 960
Хотя пептиды, приведенные в табл. 11, проиллюстрированы с определенными защитными группами, следует отметить, что данные группы могут быть заменены другими защитными группами, как описано в данном контексте, и/или одна или более из показанных защитных групп могут быть исключены.
7) Сводные данные по трипептидам и тетрапептидам.
Для внесения ясности ряд трипептидов и тетрапептидов, соответствующих данному изобретению, в основном суммированы в табл. 12.
Таблица 12 Общая структура некоторых пептидов, соответствующих данному изобретению
X1 X2 X3 X4
Гидрофобная боковая цепь или гидрофобная защитная группа(ы) Кислая или основная Гидрофобная боковая цепь или гидрофобная защитная группа(ы)
Гидрофобная боковая цепь ИЛИ гидрофобная защитная группа(ы) Основная Кислая Гидрофобная боковая цепь или гидрофобная защитная группа(ы)
Гидрофобная боковая цепь или гидрофобная защитная группа(ы) Кислая Основная Г идрофобная боковая цепь или гидрофобная защитная группа(ы)
Г идрофобная боковая цепь или гидрофобная защитная группа(ы) Кислая или основная Алифатическая Г идрофобная боковая цепь или гидрофобная защитная группа(ы)
Г идрофобная боковая цепь или гидрофобная защитная группа(ы) Алифатическая Кислая или основная Гидрофобная боковая цепь или гидрофобная защитная группа(ы)
- 44 012440
Гидрофобная боковая цепь или гидрофобная защитная группа(ы) Кислая или основная Ароматическая Г идрофобная боковая цепь или гидрофобная защитная группа(ы)
Гидрофобная боковая цепь или гидрофобная защитная группа(ы) Ароматическая Кислая или основная Г идрофобная боковая цепь или гидрофобная защитная группа(ы)
Г идрофобная боковая цепь или гидрофобная защитная группа(ы) Ароматическая Нгз Ароматическая Гидрофобная боковая цепь или гидрофобная защитная группа(ы)
Когда требуются более длинные пептиды, X2 и X3 могут представлять собой домены (например, участки из двух или более аминокислот определенного типа), а не отдельные аминокислоты. Табл. 12 предназначена для иллюстрации, а не для ограничения. Используя описание, приведенное в данном контексте, можно легко идентифицировать другие подходящие пептиды.
8) Парные аминокислоты и дипептиды.
В ряде вариантов осуществления данное изобретение относится к обнаружению того факта, что некоторые пары аминокислот, введенные в сочетании друг с другом или связанные с образованием дипептида, определяют одно или более свойств, описанных в данном контексте. Так, вне связи с определенной теорией, полагают, что когда вводят пары аминокислот в сочетании друг с другом, как описано в данном контексте, они способны участвовать или индуцировать образование мицелл ίη νίνο.
Считают, что, подобно другим маленьким пептидам, описанным в данном контексте, пары пептидов будут ассоциироваться ίη νίνο и демонстрировать физические свойства, включающие высокую растворимость в этилацетате (например, выше чем приблизительно 4 мг/мл), растворимость в водном буфере при рН 7,0. Как полагают, при контактировании фосфолипидов, таких как 1,2-димиристоил-5пглицеро-3-фосфохолин (ЭМРС), в водной среде, пары аминокислот индуцируют или принимают участие в формировании частиц диаметром приблизительно 7,5 нм (±0,1 нм), и/или индуцируют либо принимают участие в формировании уложенных в стопы двухслойных структур при величине двухслойной структуры порядка 3,4-4,1 нм с расстоянием между двухслойными структурами в стопе приблизительно 2 нм, и/или также индуцируют либо принимают участие в формировании везикулярных структур размером приблизительно 38 нм.
Более того, предполагают также, что пары аминокислот могут проявлять один или более из следующих физиологически соответствующих признаков.
1. Они превращают провоспалительный ЛВП в противовоспалительный ЛВП или делают противовоспалительный ЛВП более противовоспалительным.
2. Они снижают ЛНП-индуцированную активность хемотаксиса моноцитов, генерированную клетками стенки артерии.
3. Они стимулируют формирование и циклинг пре-β ЛВП.
4. Они повышают уровень ЛВП холестерина.
5. Они повышают активность параоксоназы ЛВП.
Пары аминокислот можно вводить как отдельные аминокислоты (вводимые последовательно или одновременно в комбинированном средстве) или они могут быть ковалентно связаны непосредственно или через линкер (например, ПЭГ-линкер, углеродный линкер, разветвленный линкер, линкер с прямой цепью, гетероциклический линкер, линкер, образованный из дериватизированного липида и т.п.). В ряде вариантов осуществления пары аминокислот ковалентно связаны посредством пептидной связи с образованием дипептида. В различных вариантах осуществления, хотя дипептиды будут, как правило, включать две аминокислоты, каждая из которых несет присоединенную защитную группу, данное изобретение предусматривает также дипептиды, в которых только одна из аминокислот несет одну или более защитных групп.
Пары аминокислот, как правило, включают аминокислоты, в которых каждая аминокислота присоединена по меньшей мере к одной защитной группе (например, к гидрофобной защитной группе, как описано в данном контексте). Аминокислоты могут находиться в Э- или Ь-форме. В ряде вариантов осуществления, в которых аминокислоты, включающие пары, не присоединены друг к другу, каждая аминокислота несет две защитные группы (как, например, молекулы 1 и 2 в табл. 13).
- 45 012440
Таблица 13 Иллюстративные пары аминокислот, соответствующие данному изобретению
Пара аминокислот/Дипситид
1. Вос-Аг£-О(Ви*
2. Вос-С1и-01Ви*
3. Вос-Рйс-Ατ^-ΟίΒυ* ♦
4. Вос-01и-Ьеи-01Ви* ♦
5. Вос- Ατβ-ΟΚι-ΟίΒυ** ♦
* Данный фрагмент, как правило, вводят в сочетании со второй аминокислотой.
** В ряде вариантов осуществления данные дииеитиды следует вводить в сочетании друг с другом.
*** В ряде вариантов осуществления данный пептид следует вводить в виде монотерапии или в комбинации с одним из других пептидов, описанных в данном контексте.
Подходящие пары аминокислот можно легко идентифицировать получением пары защищенных аминокислот и/или дипептида с последующим скринингом пар аминокислот/дипептида на один или более вышеописанных физических и/или физиологических признаков. В ряде вариантов осуществления в данном изобретении исключают пары аминокислот и/или дипептиды, включающие аспарагиновую кислоту и фенилаланин. В ряде вариантов осуществления в данном изобретении исключают пары аминокислот и/или дипептиды, в которых одна аминокислота представляет собой (-)-Ы-[(транс-4изопропилциклогексан)карбонил]-0 -фенилаланин (натеглинид).
В ряде вариантов осуществления аминокислоты, составляющие пару, независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из кислой аминокислоты (например, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты и т.п.), основной аминокислота (например, лизина, аргинина, гистидина и т.п.) и неполярной аминокислоты (например, аланина, валина, лейцина, изолейцина, пролина, фенилаланина, триптофана, метионина и т. п.). В ряде вариантов осуществления, когда одна аминокислота является кислой или основной, другая аминокислота является неполярной, и когда одна аминокислота представляет собой кислую или основную, другая аминокислота является неполярной. В ряде вариантов осуществления, когда одна аминокислота является кислой, другая аминокислота является основной и наоборот (см., например, табл. 14).
Аналогичные комбинации можно получить путем введения пар дипептидов. Так, например в ряде вариантов осуществления молекулы 3 и 4 в табл. 13 следует вводить в сочетании друг с другом.
Таблица 14
Некоторые обобщенные пары аминокислот/дипептиды.
Первая аминокислота Вторая аминокислота
1. Кислая Основная
2. Основная Кислая
3. Кислая Неполярная
4. Неполярная Кислая
5. Основная Неполярная
6. Неполярная Основная
Отмечают, что данные пары аминокислот/дипептиды предназначены для иллюстрации, а не ограничения. Используя описание, представленное в данном контексте, легко определить подходящие пары аминокислот/дипептиды.
Е) Αро I (С* пептиды).
Несомненно, в данном изобретении обнаружено, что пептиды, которые имитируют амфипатические спиральные домены аро I способны ослаблять один или более симптомов атеросклероза и/или других патологий, описанных в данном контексте. Аполипопротеин I имеет широкую неполярную наружную поверхность, называемую подобной глобулярному белку или С* амфипатическим спиральным доменам. Амфипатическая спираль класса С обнаружена в глобулярных белках и, вследствие этого, получила название класс С. Данный класс С амфипатической спирали характеризуется случайным распределением положительно заряженных и отрицательно заряженных остатков на полярной наружной поверхности при наличии узкой неполярной наружной поверхности. Вследствие узкой неполярной наружной поверхности данный класс с легкостью не ассоциируется с фосфолипидами. С* амфипатической спирали обладает аналогичными, но не идентичными с С амфипатической спиралью характеристиками. Подобно амфипатической спирали класса С пептиды класса С* имеют случайное распределение положительно и отрицательно заряженных остатков на полярной наружной поверхности. Однако в противоположность амфипа
- 46 012440 тической спирали класса О, которая имеет узкую неполярную наружную поверхность, данный класс имеет широкую неполярную наружную поверхность, которая позволяет данному классу с легкостью связывать фосфолипид, и данный класс обозначают О*, чтобы отличить его от амфипатической спирали класса О.
Ряд подходящих О* амфипатических пептидов описан в одновременно рассматриваемых заявках υ88Ν 10/120508, поданной 5 апреля 2002 г., υ88Ν 10/520207, поданной 1 апреля 2003 г., и заявке РСТ РСТ/ϋδ 03/09988, поданной 1 апреля 2003 г. Кроме того, ряд подходящих пептидов, соответствующих данному изобретению, которые относятся к О* амфипатическим спиральным доменам аро I, проиллюстрирован в табл. 15.
Таблица 15 Некоторые пептиды, предназначенные для применения в данном изобретении, относящиеся к О* амфипатическим спиральным доменам аро I
Последовательность аминокислот 8Ε(2 Ю ΝΟ
ЬЬЕрЬМЕрНТ^УЗКЕАКЬТрОЕ 961
962
ΝΕΕ0ΕΜ8Νρθ5ΚΥνΝΚΕ^ΝΑνΝθν 963
ΐρΝΑνΝΟνΚρίΚΤΕΙΕΚΤΝΕΕ 964
ККТЬЬ5КЬЕЕАККККЕОАЬНЕТКЕ5ЕТКЪКЕЬ 965
ΡσνΟΝΕΤΜΜΑΙΛνΕΕΟΚ 966
РСЬКОТСМКРУАКУСК 967
ЕСКРСЬКрТСМКРУАКУСК 968
ЬУОКрЬЕЕГЬ 969
МХОПЯГО&ЬЬЕН 970
ООТНМЬЭУМОО 971
Н8ВА85ЕЮЕЬР()О 972
ΡΓΕΕΜΙΗΕΑ(2ς>ΑΜΟΙ 973
ΡΤΕΓΙΚΕΟΟΟϋ 974
КМКЛрСОКСКЕ1Ь5У 975
РЗОАКЬККЕЬОЕЗЕрУАЕЕЬтаКУХЕЬЕКЗУр 976
ΕΕΕρΕΝΕρΡΝννδΕΕΑΝΕΤΕΟΕ 977
ϋφΥΥΕκνττνΑ 978
Р5СУТЕУУУКГРО8 979
ΡΚΓΜΕΤνΑΕΚΑΕΟΕΥΚΚΚΗΚΕ 980
Однако пептиды, соответствующие данному изобретению, не ограничены О*-вариантами аро I. Говоря в общем смысле, подходят также О*-домены практически из любого другого белка, предпочтительно из аро-белков. Особенную пригодность данных белков можно легко определить при использовании анализов на защитную активность (например, защиту ЛНП от окисления и т.п.), например, как проиллюстрировано в данном контексте в примерах. Некоторые особенно предпочтительные белки включают О* амфипатические спиральные домены или их варианты (например, консервативные замены и т.п.) белков, включая, но без ограничения перечисленным, аро А1, аро Αίν, аро Е, аро С11, аро С111 и т.п.
Некоторые предпочтительные пептиды, относящиеся к О* амфипатическим спиральным доменам, которые относятся к апопротеинам, отличным от аро I, проиллюстрированы в табл. 16.
Таблица 16 Некоторые пептиды, предназначенные для применения в данном изобретении, относящиеся к О* амфипатическим спиральным доменам, которые относятся к апопротеинам, отличным от аро I
Последовательность аминокислот | 8Е0 Ю ΝΟ
ννΟΚνΚΟΙΑΤνΥνονίΚΟΒΘΗΟΥνδαΕ (Относится к участку 8-33 аро ΑΙ) 981
νΑΤνΜννϋΥΕδΟΙ-δΝΝΑΚΕΑνΕΗ ЮК (Относится к участку 7-31 аро Αίν) 982
ΕΠ/νΕΙ_ΑΙ_ΟΑΕννθΥ[_ΗνννθΤΙ_5ΕθνθΕΕΙ_ (Относится к участку 25-51 аро Е) 983
ί880νΤ0Ε1_ΑΑΙ_Μ0ΕΤΜΚΕυΚΕ1_ΚΑΥΚ3ΕΙ_ΕΕ0Ι_Τ (Относится к участку 52-83 аро Е) 984
ΑΑΙ_5ΚΕΙ_ΟΑΑΟΑΡ1_ΘΑΟΜΕθνθΟΑΙ_ν (Относится к участку 91-116 аро Е) 985
νΒΙ_Α8ΗΙ_ΒΚΙΒΚΑΙ_Ι_Α0Α00Ι_0ΚΑΙΑ (Относится к участку 135-160 аро Е) 986
Ρ1_νΕϋΜ0Β0ν/Α(3Ι_νΕΚν0Α (267-285 аро Е.27) 987
ΜδΤΥΤΟΙΕΤΟΟνί-δνίΚ (Относится к участку 60-76 аро СП) 988
ИЗЕМООУМ КНАТКТАКОАЬЗб (Относится к участку 8-29 аро С1Н) 989
Дополнительные иллюстративные О* пептиды показаны в табл. 17.
- 47 012440
Таблица 17
Дополнительные иллюстративные О* пептиды
Пептид 5Е0ГО ΝΟ
АС’Ьуе-тгр-Ие-туг-нХв-ьеи-ткг-охи’вХу-Зег-тНг- Авр-ьеи-Агд-ТЬг-<31и-сэ1у-цн2 990
Ас-Ьув-Тгр-РЪе-Тух-Н18-Ьеи-Т11г-с31и-<31у-8ег-ТЬг- Аэр-Ьеи-Агд-Т11х,-С1и-О1у-ЛН2 991
Ас-Ъуе-тгр-ьеи-Туг-Н18-Ьеи-ТЬг-Э1и-<31у-Зезг-Т11г- А8р-Ьеи-Агд-ТЬг-С1и-С1у-КН2 992
Ас-Ьуе-Тгр-Уа1-1уг-Н1з-Ьеи-Т11г-С1и-<л1у-2ег-Т}1г- Аар-Ьеи-Агд-ТИг-<31и-С1у-ЫН2 993
Ас-Ьуэ-Туг-11е-Тгр-Н1в-Ьеи-Т11г-С1и-С1у-5вг-Т11г- Аер-Ьеи-Агд-Ткг-О1и-С1у-ЫНг 994
Ас-Ьуз-Тгр-11е-Туг-Н1а-РЬе-ТЬг-С31и-С1у-5ег-Т1,1г- А5р-Ьеи-Агд-ТЪг-С1и-С1у-МН2 995
Ас-Ьув’Тгр-Н1е’Туг-Н1з-11е-тпг-С1и-21у-Зег-тьг- Аер-ьеи-Агд-Тйг-СГи-СХу-ЦНг 996
Ас-Ьув-Тгр-Ъеи-Туг-н18-Уа1-тЬг-31и-а1у-2ег-тьг- А&р-Ьеи-Ахд-Т11Г-О1и-С31у-ЫН2 997
Ас-Ьу8-Тгр-Уа1-Туг-Н13-Туг-ТНг-С1и-С1у-5ег-Т11г- Аер-Ьеи-Агд-ТЬ.х-<31и-С1у-№2 998
Ас-Ьун-Туг-11е-Тгр-Н1з-Р11е-ТИ.г-е1и-<31у-Зег-ТЬг- Аер - 1>еи-Агд- Ткг-С1и-С1у-ЯНг 999
Ас-Ьуз-Туг-11е-Тгр-Н1з-11е-ТЬ.г-С1и-,С1у-8ег-ТЪг- Авр-Ьеи-Атд-ТНг-С1и-С1у-МН2 1000
Ас-Ьу»-Туг-11е’Тгр-Н1з-Уа1’ТЬг-<31и-С1у-8ег-ТЪг- Α«ιρ - ЬеиАг д - ТНг - О1и - С1 у - ЫН2 1001
Ас-Ьуа-Туг-Не-Тгр-Нхэ-Туг-ТЪг-СХи-ОХу-Зег-ТЛгАер-Ьеи-Агд-ТЬг-О1и-С1у’МН2 1002
Ас-Ьуз-РНе-11е-Тгр-Н18-Ьеи-ТИ1:-С1и-<31у-Зег-ТЪгАяр - 1>еи - Агд-ТЬг - С1и-01 у-ИН2 1003
Ас-Ьу8-Ьеи-11е“Тгр-Н18-Ьеи*ТЬ.г-С1и-С1у-Зег-ТЬг* Авр - Ьеи - Агд- ТЬг -С1и-С1у-ΝΗ2 1004
Ас-Ьуз-11е-11е-Тгр-Н1з-Ьеи-Т11г-01и-01у-8ег-тЬг- Аар - Ьеи - Агд - ткг - 01 и ~ С1 у - ЯН2 1005
Ае-Ьуз-Туг-Ие-Тгр-РНе-Ьеи-ТЪг-СХи-Шу-Зег-ТЪг- Авр-Ьеи-Агд-ТЬт-(51и-С1у-МНг 1006
Ас-1»уз-'Тгр-11е-Туг-Р11е-Ьеи-ТИг-31и-<31у-8ег-ТЬГ’ А8р-Ьеи-Агд-ТЬг-С1и-О1у-МН2 1007
Ас-Ьуэ-Тгр-11е-Туг-ьеи-Ъеи-ТЬг-(31и-<31у-8ег-ТЪг- Авр’1>еи’Агд-тЬг-01и-с1у’ЫН2 1008
Ас-Ьуз-Тгр-11е-Туг-Н1э-РЬе-Т11г-01и-<Э1у-зег-т11Г- Азр-ЬеИ’Агд’ТЪг-01и-’{31у-КН2 1009
Ас-Ьуз-Тгр-Ие-Туг-Нге-Туг-Ткг-С1и-С1у-Зег-ТЬг- 1010
А&р-Ьеи-Агд-ТНг-51и-01у-ЦНа
АС-Ъу8-Тгр-11е-Туг-Н1а-11е-ТЬг-<31и-(31у-Зег-ТЬг- Аэр-Ьеи -Агд-ТЪг-С1и-О1у-ИН2 1011
Ас-Ьув-Тгр-11е-Туг-Н1в-Ьеи-5ег-О1и-<31у-Зег-ТНг- Азр-Ъеи“Агд-ТЬ.г-(31и-С1у-МН2 1012
Ас-Ьуз-Тгр-11е-Туг-Н1а-Беи-ТЬг-Азр-01у-Зег-ТЬг- Аэр-1»еи-Агд-Т1гг-01и-31у-МНа 1013
Ас~Ьуб-Тгр-11е-Туг-Н1э~Бе,и-Т11Г-С»1и-С1у-Т11г-Зег- Азр-1геи-Агд-Т11Г-б1и-(31у-КН2 1014
Ас -Ьуз-Тгр-Ие-Туг-Нхз^Ьеи-ТИг-сХи-ОХу-Зег-ТКг□1и-Ьеи-Агд-ТЬг,-а1и-С!1у-ИН2 1015
Ас-Ьуз-Тгр-11е’Туг-Нхз’Ьеи-ТЬг-О1и-б1у-Зег-ТЬгАар-РНе-Ахд-Т11г-<31и-О1у-КН2 1016
Ас-Буэ-Тгр-11е-Туг-Н13-Ъеи-ТЬг-31и-а1у-5ег-ТЬгАар- Туг-Агд-ТЪг - Э1и -<Э1у-ΝΗ2 1017
Ас-Ьуз-Тгр-11е-Туг-Н1э-Беи-ТЬг-(31и-(31у-Зег-Т11г·- Азр-11<;-Агд-ТЬг-31и-С1у-ННа 1018
Ас -Ъуэ ••Тгр-11е-Туг-Н1з-Ьеи-ТЪг-С1и-С1у-5ег-ТЬгΑ8ρ-ν&]·-ΑΓ9-Τ1ϊΓ-Ο1\ι-ί31γ-ΝΗ2 1019
Ас-Був-Тгр-11е-Туг-Н1а-Беи-Т11г-С»1и-<31у-5ег-ТЬгАар-Беи-Буа-Тйг-<31и-С1у-ЛН2 1020
Ас-Буе -Тгр-11е-Туг-Н1я-Беи-Т11г-(31и-(31у-8ег-ТЬг- Азр-Ъеи-Агд-5ег“С1и-С1у-КНг 1021
Ас-Був -Тхр-Не-Туг-Шз-Ьеи-ТЬг-СЯи-СНу-Зег-ТНгАвр-Беи-Агд-ТЬг-Азр-С1у-ЫНа 1022
Ас-Буа -тгр-11е-Туг-Н1а-Беи-Т11Г-О1и-<31у-Зег-ТЬгΑβρ -11 е - 1>уз - Т11Г· - 61и - <31 у - ΝΗ2 1023
Ас-Буа-Тгр-Не-Туг-Нха-Беи-ТЬг-ОХи-'ЗХу-Зег-ТЬгАвр-I1е-Агд-Зег-С1и-О1у-ИН2 1024
Ас-Ьуз-Тгр-11е-Туг-Н1з-Ъеи-Т11г-<31и-<31у-Зег-ТЬгА8р-11е-Буа-Зег-<Э1и-<Э1у-ИН2 1025-
Ас-Був-Тгр-11е-Тух-Н13-Ъеи-ТЬг-в1и-О1у-8ег-ТИгА8р-11е-Ьув-Зег-Авр-О1у-ИНг 1026
Ас-Агд-Тгр-11е-Туг-Н13-Ъеи-ТЪг-<31и-О1у-Зег-ТНг- Азр-Ьеи-Агд-Т11г-б1и-151у-ПН2 1027
Ас-Агд-Тух-11е-Тгр-Н1е-Беи-ТНг-С1и-(Э1у-5ег-Т1п·- Аар-11е-Ахд-ТЪг-61и-61у-йН2 1028
Ас-Агд-Тгр-11е-Туг-Н1а-Ъеи-Т11г-а1и-61у-5ег-Т11гАвр - Не-Агд - ТИг - Аар - 61γ-ΝΗ3 1029
Ас-Агд-Тгр-11е-РЬе-Н1а-Беи-тЬг-<31и-О1у-5ег-ТЬгАвр-11е-Ахд-ТНг-61и-С1у-1Ша 1030
Ас-Агд-Тгр-11е-Туг-Н1а-Ьеи-Т11Г-(51и-(Э1у-8ег-ТЪг- Аер-Ьеи-Ьу8-ТЬг-<31и-е1у-ННа 1031
Ас-Агд-Тгр-Не-Туг-Ша-Ьеи-ТЪг-Авр-ОХу-Зег-Ткг- Азр-11е-Агд-ТИг-а1и-<31у-МН2 1032
Ас-Агд-Тгр-Не-Туг-Ша-Ьеи-ТЪг-Азр-СХу-Зег-ТЬгАар - ьеи-Агд-тИг-<Э1и-О1у-Кн2 юзз
Ас-Агд~Тгр-11е-Туг-Р11е-Ьеи-ТЬг-С1и-О1у-Зег-Т11гАэр - Т 1е - Атд- Ткг - <31и - (31у-ЫНа 1034
Ас-Агд-Тгр-11е-Туг-₽11е-Беи-ТЬг-С1и-(31у-Зег-Т11г- Адр-Ьеи-Агд~ТЬг-<31и-<31у-ЫН2 1035
Ас-Буя -Тгр-РЬе-Туг-Н1в-Ъеи-ТЬ1г-С?1и-(31у-Зег-Т11ГА8р-РЬе-Агд-П1г-С1и-С1у-11Н2 1036
Ас-Агд-Тгр-РЬе-Туг-Н1а-Беи-ТЬг-<31и-<31у-5ег-ТЬг- 1037
- 48 012440
Азр-Ьеи-Агд-ТЬг-С1и-(51у-МН2
Ас-Буа-Тгр-1Хе-РЬе-Н±а-Ьеи-ТЬг-ОХи-СХу-Зег-ТЬгАвр-1Хе-Агд-ТЬг-Аар-б1у-ИН2 1038
Ас-Агд-Тгр-11в-Туг-Н18-Ъеи-ТЬг-С1и-О1у-5ег-ТЬгАвр-11е-Агд-ТЬг-Авр-О1у-ЫН2 1039
Ас-Агд-Тгр-11е-Туг-Н13-Беи-ТЬг-С1и-01у-Зег-ТЬгАар-Беи- Аг д-ТЬг-Авр-С1у-ΝΗ2 1040
Ас-Буа -Тгр- 1Хе-Туг-Нхз-Беи-ТЬг-ОХи-<»Ху-Зег-ТЬгА9р-11е-Буз-ТЫ-С1и-а1у-11Н2 1041
Ас-Буз-Тгр-11е-Туг-Н18-Беи-ТЬг-С1и-С1у-Зег-ТЬгАзр-1Хе-Буз-Т11г-Аэр-С1у-МН2 1042
Ас-Ьу8-Тгр-11е-Туг-Н18-Ьеи-ТЬг-С1и-(31у-Зег-Т11гАэр-РЬе-Буз-ТЬг-С1и-С1у-МНа 1043
Ас-Ьуз-Тгр-1Хе-Туг-Н18-Ьеи-ТЬг-б1и-01у-8ег-ТЬгАзр-туг-ьуз-тНг-С1и-С1у-ын2 1044
Ас-Бу8-Тгр- Не-Туг-Ηΐβ-Беи-ТЬг-С1и-С1у-8ег-ТЬгАзр- 11е-Агд-ТНг-С31и-<31у-КНг 1045
Ас-Буа-Тгр-РЬе-Туг-Н1э-₽Ье-ТЬг-С1и-С1у-8ег-ТЬгАзр-Беи-Агд-ТНг-С1и-<31у-ИН2 1046
Ас-Агд-Тгр-РЬе-Туг-Н18-РЬе-ТЬг-С1и-СХу-8ег-ТЬгАвр-Беи-Агд-ТЬг-ОХи-<31у-НН3 1047
Ас - Був - Тгр - РЬе-Туг-Н18-РЬе-ТЬг-<Э1и-<Э1у-8ег-ТЬгАэр-РЬе -Агд -тЬг-О1и-О1у-ин2 1048
Ас-Буа -Тгр-РЬе-Туг-Н1а-РЬе-ТЬг-Авр-<ЗХу-8ег-ТЬгАвр-11е-Агд-ТЬг-<Э1и-<31у-МН3 1049
Ас~Агд-Тгр-РЬе-Туг-Н1з-РЬе-ТЬг-С1и-<31у-8ег-ТЬгА8р-Беи-Агд-ТЬг-С1и-(ЗХу-МНа 1050
Ас-Агд-Тгр-РЬе-Туг-Н18-РЬе-ТЬг-С1и-(31у-Зег-ТЬгАзр-РЬе-Агд-тЬг-01и-С1у-мна 1051
Ас-Агд-Тгр- РЬе-Туг-Н1а-РЬе-ТИг-<31и-<31у-8ег-ТЬгА8р-РЬе-Агд-ТЬг-Авр-С1у-ЦНа - 1052
Ас-О1и-Буз-Суз-Уа1-С1и-С1и-РЬе-Був-5ег-Беи-ТЬгЗег-Суэ-Ьеи-А8р-Зег-Буа-АХа-РЬе-КН2 1053
Ас-Азр-Буз-Суз-Уа1-<31и-С1и-РЬе-Був-Зег-Беи-тЬгЗег-Суз-Беи-А8р-8ег-Бу8-АХа-РЬе-ЫНг 1054
Ас-СХи-Буз-Суз-УаХ-Авр-СХи-РЬе-Був-Зег-Беи-ТЬг5ег-Суз-Беи-Азр-Зег-Був-А1а-РЬе-ЫН2 1055
Ас-<ЗХи-Ьу8-Суа-Уа1-<31и-Аар-РЬе-Ъув-Зег-Беи-ТЬгЗег-Суз-Беи-Азр-Зег-Був-АХа-РЬе-ИНг 1056
Ас-С51и-Агд-Суд-Уа1-С1и-СЯи-РЬе-Буз-8ег-Беи-ТЬг8еэг-сув-Беи-Авр-Зег-Бу8-А1а-РЬе-ин2 1057
Ас-Аар-Буа-Суэ-УаХ-Азр-Азр-РЬе-Буз-Зег-Ьеи-ТЬгЗег-Суз-Беи-Авр-Зег-Буз-А1а-РЬе-МН2 1058
Ас-Аар-Агд-Суз-УаХ-СХи-<31и-РЬе-Буэ-8ег-Беи-ТЬг8ег-Суа-Беи-Аер-5ег-Буз-А1а-РЬе-ЫН2 1059
Ас--<31и-Агд-Суэ-Уа1-А5р-А8р-РЬе-Буа-Зег-Бе«-ТЬг- 8ез:-Сув-Беи-А8р-8ег-Ьуз-АХа-РЬе-ЫН2 1060
Ас -С1и-Ьу8-Сув-Уа1-(31и-О1и-РЬе-Буз-8ег-РЬе-ТЬ1·Зег-Суз-Беи-Авр-Зег-Бу8-АХа-РЬе-ЫН3 1061
Ас-СЗХи-Ьуз-Суз-УаХ-СЯи-СХи-РЬе-Ьуа-Зег-Не-ТЬг- Зег-Суз-Ьеи-Адр-5ег-Буз-А1а-РЬе-ЫН2 1062
Ас-<ЭХи-Ьу8-Суз-УаХ-С1и-<ЗХи-РЬе-Був-5ег-УаХ-ТЬг- Зег-Сув-Беи-Азр-5ег-ьуэ-А1а-РЬе-ЫН2 1063
Ас-С1и-Агд-Су9-Уа1-С1и-О1и-РЬе-Буд-8ег-Туг-ТЬг- 1064
Зег- Суз - Беи-Аар - Зег- Був -А1а - РЬе -ΝΗ2
Ас-С1и-Агд-Суз-Уа1-С1и-С1и-РЬе-Буа-Зег-РЬе-ТЬг- Зег-Сув-Беи-Авр-Зег-Ьуз-АХа-РЬе-ЫНг 1065
Ас-<ЗХи-Агд-Сув-УаХ-СХи-<31и-РЬе-Буз-8ег-1Хе-ТЬг- Зег-Суэ-Беи-Азр-8ег-Буа-А1а-РЬе-ЫН2 1066
Ас-<ЗХи-Агд-Сув-Уа1-(31и-С1и-РЬе-Буз-Зег-УаХ-ТЬгЗег-Суз-Беи-Авр-8ег-Був-АХа-РЬе-ΝΗ2 1067
Ас-аХи-Агд-Суз-УаХ-ОХи-<31и-РЬе-Бу8-8ег~Туг-ТЬг- Зег-Суз-Беи-А8р-8ег-Бу8-АХа-РЬе-ЫН2 1068
Ас-е1и-Буз-Су8-УаХ-0Хи-СХи-РЬе-Бу8-Зег-РЬе-ТЬгТЬг-Суа-Беи-Авр-Зег-Буе-А1а-РЬе-ЫН2 1069
Ас-СХи-Бу8-Сув-УаХ-С1и-СХи-РЬе-Бу8-8ег-1Хе-ЗегЗег-Суз-Беи-А8р-Зег-Ьув-АХа-РЬе-ын2 1070
Ас-0Хи-Ьув-Суа-УаХ-<ЭХи-СХи-РЬе-Ьуз-Зег-Уа1-Зег- ТЬг-Суз-Беи-А8р-Зег-Ьуз-АХа-РЬе-НН2 1071
Ас-С1и-Бу8-Су8-Уа1-СХи-ОХи-РЬе-Буа-Зег-Туг-ТЬг- 5ег-Суз-Беи-Азр-Зег-Буз-АХа-РЬе-ЫН2 1072
Ас-<31и-Був-Суз-Уа1-СХи-О1и-РЬе-Буз-8ег~РЬе-ТЬг- ТЬг-Суэ-Беи-Азр-Зег-Буз-АХа-РЬе-НН2 1073
Ас-СХи-Ьуз-Суз-Уа1-<31и-С1и-РЬе-Був-8ег-РЬе-8егЗег-Суз-Беи-Аэр-Зег-Був-АХа-РЬе-ЫНг 1074
Ас-СХи-Буэ-Суз-Уа1-(ЗХи-О1и-РЬе-Бу8-8ег-РЬе-ТЬг- Зег-Суз-Беи-Азр-8ег-Був-А1а-РЬе-КН2 1075
Ас-С1и-Ьув~Су8-Уа1-СХи-{Э1и-РЬе-Ьуз-Зег-РЬе-ТЬг- Зег-Суз-Беи-Азр-Зег-Був-АХа-РЬе-ИНг 1076
Ас-О1и-Ьув-Суа-Уа1-СХи-С1и-РЬе-Бу8-Зег-РЬе-ТЬг- Зег-Сув-Беи-Аар-Зег-Буз-АХа-РЬе-ИНг 1077
Ас-СХи-Був-Суа-УаХ-О1и-ОХи-РЬе-Ьуа-Зег-РЬе-ТЬгЗег-Сув-РЬе-Авр-Зег-Ьуз-А1а-РЬе-МН2 1078
Ас-СХи-Був-Су8-Уа1-С1и-01и-РЬе-Буз-8ег-РЬе-ТЬг- Зег-Суз-₽Ье-СХи-Зег-Ьуз-А1а-РЬе-МН2 1079
Ас-6Хи-Буа-Су8-УаХ-СХи-СХи-РЬе-Бу8-Зег-РЬе-ТЬгЗег-Суз-Беи-ОХи-Зег-Бу8-АХа-РЬе-КН2 1080
Ас-<ЗХи-Був-Сув-Уа1-(31и-<ЗХи-РЬе-Ьу8-8ег-РЬе-ТЬг- 5ег-Суз-11е-Азр-Зег-Бу8-АХа-РЬе-МН2 1081
Ас-(ЗХи-Ьуз-Су8-Уа1-ОХи-О1и-Беи-Ъу8-Зег-РЬе-ТЬг- Зег-Су8-РЬе-Аар-Зег-Ьуз-АХа-РЬе-ЫН2 1082
Ас-Азр-Ьу8-Су8-Уа1-СХи-<31и-РЬе-Ьу8-Зег-РЬе-ТЬг- Зег-Суз-РЬе-Авр-Зег-Бу8-АХа-РЬе-ЫН2 1083
Ас-А8р-Буз-Су8-Уа1-ОХи-ОХи-РЬе-Був-Зег-РЬе-ТЬг8ег-Суа-РЬе-ОХи-Зег-Ьуз-АХа-РЬе-МН2 1084
Ас-е1и-Агд-Сув-Уа1-ОХи-<ЗХи-РЬе-Був-Зег-₽Ье-ТЬг- Зег-Суз-РЬе-Азр-Зег-Був-АХа-РЬе-МН2 1085
Ас-С1и-Ьув-Суз-РЬе-С1и-(31и-РЬе-Бу8-Зег-РЬе-ТЬг- Зег-Су8-РЬе-Азр-8ег-Ьуа-АХа-РЬе-КН2 1086
Ас-01и-Ьу8-Сув-РЬе-СХи-О1и-₽Ье-Ьу8-Зег-рЬе-ТЬг- Зег-Суа-РЬе-СХи-Зег-Був-АХа-РЬе-ЫНг 1087
Ас-С1и-Буа-Суе-УаХ-СХи-С1и-РЬе-Ьу8-8ег-РЬе-8ег- 8ег-Су8-РЬе-<ЗХи-Зег-Буз-А1а-РЬе-ЫН2 1088
Ас-<31и-Ьув-Суа-Уа1-<31и-<31и-РЬе-Бу8-8ег-РЬе-О1п- Зег-Суз-РЬе-Азр-Зег-Бу8-АХа-РЬе-ΝΗ2 1089
Ас-ОХи-Буз-Су8-РЬе-СХи-(51и-РЬе-Буз-Зег-РЬе-(ЗХп- Зег-Сув-РЬе-Аар-Зег-Буа-АХа-РЬе-ИНг 1090
Ас-СХи-Ьуз-Суз-УаХ-СХи-СХи-РЬе-Ьуа-СХп-РЬе-ТЬг- 1091
- 49 012440
Зег-Суз-РЬе-Азр-Зег-Ъуа-А1а-РНе-νή2
Ас-О1и.-Ьуд-Суа’Уа1-С1и-<31и-РЬе-Ьуэ-б1п-Ьеи-Т11гЗег-Суа - Ъеи-Авр -Зег-Ъуа - А1а- РЬе -ΝΗ2 1092
Ас-<31и.-Ьуз-Су8-РЬе-О1и-С1и-РЬе-Ьуа-8ег-РЬе-<31п5ег-Су8-Ьеи-А8р-Зег-Ъуа-А1а-РЬе-ЫН8 1093
Ас-С1и-Ьу8-Су8-Уа1-'Э1и-(31и-РЬе-Ьу8-<31п-РЬе-ТЬг- Зег-Суз-РЬе-Авр-Зег-Ъуэ-АХа-РЬе-МНг 1094
Ас-(31и-Ьуа-Суа-Уа1-С1и-б1и-РЬе-Ьу8-8ег-РЬе-ТЬг5ег-Суз-РЬе-<31и-5ег-Ьуз*А1а-РЬе-МН2 1095
Ас-С1и-Агд-Суз-РЬе-(31и-(31и-РЬе-Ьу8-Зег-РЬе-ТЬг- Зег-Суа-РЬе-Азр-5ег-Ъуз-А1а-РЬе-ИН2 1096
Ас-А8р-Ьув-Су8-РЬе-01и-С1и-РЬе-Ъу8-8ег-₽Ье-ТЬг- 3 е г - Суз - РЬе - Азр - Зег - Ьу5 - А1 а - РЬе - ΝΗ2 1097
Ас-<л1и-Агд-Суя-Уа1-(31и-<31и-РЬе-Ьуэ-Зег-Ъеи-ТЬгЗех-Су8-:Ьеи-«Э1и-8ег-Ъув~А1а-РЬе-]ЯН2 1098
Ас-<31и-Ьуэ-Суа-Уа1-31и-С1и-РЬе-Ъу8-Зег-Ъеи-ТЬг- Зег-Суа-Ьеи-Азр-Зег-Ъув-РЬе-РЬе-МНг 1099
Ас-<31и-Ьуз-Суз-РЬе-С1и-С1и- РЬе-Ьуэ-Зег- РЬе-ТЬх- Зег - Су э - РЬе - Аар -Зег-Ьув-РЬе - РЬе -ΝΗ2 1100
Ас-А8р-Ьуз-Суз-РЬе-С1и-(31и-РЬе-Ъув-Зег-РЬе-тЬг8 е г-Сув-Ъеи-Аар-Зег-Ъу 8-РЬе-РЬе-ΝΗ2 1101
Ас-Аяр-Ьуз-Суа-РЬе-С1и-С1и-РЬе-Ъуа-Зег-РЬе-ТЬгЗег-Сув-ъеи-бХи-Зег-ьув-РЬе-РЬе-ИНа 1102
Ас-А8р-Ъув-Суз-РЬе-О1и-О1и-Ьеи-Ъув-Зег-РЬе-ТЬг5ег-Сув-Ъеи-Авр-Зег-Ъув-РЬе-РЬе-ΝΗ2 1103
Ас-<31и-Агд-Су8-РЬе-О1и-О1и’₽Ье-Ъу8-Зег-РЬе-ТЬгЗег - су з-Ьеи-Аар-Зег-Ьуз-РЬе-РЬе-ΝΗ2 1104
Ас-С1и-Ъу8-А1а-Уа1-О1и-в1и-РЬе-Ъув-Зег-РЬе-ТЬгЗе г - Суз - ъеи - Азр - Зе г - Ьуэ - А1 а - РЬе - ΝΗ2 1105
Ас-А8р-Ъув-А1а-Уа1-б1и-О1и-₽Ье-Ъув-ЗеГ-РЬе-ТЬг- Зег-Суз -Ьеи-Авр-Зег- Ьув - РЬе - РЬе -ΝΗ2 1106'
Ас-С1и-Ъу8-А1а-Уа1-О1и-С1и-РЬе-Ьу8-Зег-РЬе-ТЬгЗег - А1а-Ъеи-Аар-Зег-Ьуз -А1а - РЬе -ΝΗ5 1107
Ас-А£|р-Ьу8-А1а-Уа1-<31и-С1и-РЬе-Ьув-5ег-РЬе-ТЬг- Зех-А1а-ъеи-Азр-Зег-ьуз-А1а-РЬе-НН2 1108
Ас-Азр-Агд-А1а-РЬе-<31и-(31и-РЬе-Ъу8-5ег-РЬе~ТЬг- Зег - СУ а - Ъеи - Авр - Зе г - Ьу в - РЬе - РЬе - ΝΗ3 1109
Ас-Ае1р-Атд-А1а-₽Ье-С1и-С31и-РЬе-Ъу8-Зег-РЬе-ТЬгЗег - А1а - Ъеи-Аар - Зе г - Ьуэ - РЬе - РЬе -ΝΗ2 1110
Ас-А£»р-Ъуэ-Суэ-РЬе-(31и-(31и“РЬе-Ъув-Зег-РЬе-ТЬгЗех - Суз - РЬе -<31и- Зе г - Ьуз - РЬе - РЬе -ΝΗ2 1111
Ас-<31и-Ъуе-Суз-Туг-СИи-<31и-РЬе-Ъу5-5ег-РЬе-ТЬг- Зег-Суз-Ъеи-Авр-Зе г-Ьуз-РЬе-РЬе-ΝΗ2 1112
Ас-Аяр-Ъу8-Сув”Тгр-С1и-31и-РЬе-Ъуд-Зег-РЬе-ТЬгЗех-Су8-Ъеи-Азр-Зег-Ьу8-РЬе-РЬе-νη2 1113
Ас-С1и-Ъу8-Су8-РЬе-О1и-01и-РЬе-Ьуз-Зег-Туг-ТЬгЗег-Суа-Ъеи-Аар-Зег-Ьуа-РЬе-РЬе-йНа 1114
Ас-61и-Ьув-С2ув-РЬе-С1и-<31и-РЬе-Ъу8-Зег-Тгр-ТЬгЗе г-Суа-Ьеи-Азр-Зе г-Ьуз-РЬе-РЬе-ΝΗ2 1115
Ас-<31и - Ъу а - Су в - Уа1 - <31 и-<31и - РЬе - Ъу а - Зег - Тгр - ТЬгЗе г - Суз - Ьеи-Авр- Зег - Ьуа - А1а - РЬе -ΝΗ2 1116
Ас-Аар-Ьуа-Суз-РЬе-С1и-О1и-РЬе-Ъув-Зег-Тгр-ТЬгЗе г - <2у а - Ъеи - Аар - Зег - Ъу 8 - А1 а - РЬе-ΝΗ2 1117
Другие подходящие пептиды включают, но без ограничения перечисленным, пептиды, приведенные в табл. 18.
Таблица 18 Иллюстративные пептиды, имеющие улучшенную гидрофобную основу
Название Последовательность 8Е0ГО N0
ν2λΥ3 А5ГЮ17-О4Р Ас-А5р-Уа1-Тгр-Ьуз-А1а-А1а-Туг-Азр-Ьу5- РЬе-А1а-С1и-Ьу5-РЬе-Ьуз-О1и-РЬе-РЬе-МН2 1118
ν2ν/3Ρ10-Ο-4Ε Ас-А5р-Уа1-Тгр-Ьуз-А1а-РЪе-Туг-АЕр-ЬузРЬе-А1а-С1и-Ъуз-РЬе-Ьу5'С1и-А1а-РЬе-НН2 1119
1¥3-П-4Г Ас-Азр-РЪе-Тгр-Ьуз-АЬ-РЬе-Туг-Азр-ЬузУа1-А1а-С1и-Ьу5-РЬе-Ьу5-О1и-А1а-Рке-МН2 1120
Пептиды, описанные в данной таблице (ν2^3Α5Ρ10,17-Ό-4Ρ; У2^3Р10-Э-4Р; ^3-Э-4Р), могут быть более активными, чем исходный Ό-4Ρ.
Дополнительные другие подходящие пептиды включают, но без ограничения перечисленным, Р1диметилтирозин-^-Α^д-ΡЬе-^уκ-Р2 (8Ε0 ГО N0: 1121) и Р1-диметилтирозин-Α^д-С1и-^еи-Ρ2, где Р1 и Р2 представляют собой защитные группы, как описано в данном контексте. В некоторых вариантах осуществления данные пептиды включают, но без ограничения перечисленным, Вос-диметилтирозин-^-Α^дΡ1κ-Ρλ'8(0ιΒι.ι) (8Ε0 ГО N0: 1122) и Вос-диметилтирозин-Α^д-С1и-^ие(ΟΐΒи) (8Ε0 ГО N0: 1123).
В ряде вариантов осуществления пептиды, соответствующие данному изобретению, включают пептиды, содержащие или состоящие из последовательности аминокислот ΕΑΕΎΗΑΚ (8Ε0 ГО N0: 1124), содержащей по меньшей мере одну Ό-аминокислоту и/или по меньшей мере одну или две концевые защитные группы. В ряде вариантов осуществления данное изобретение включает пептид, который облегчает один или более симптомов воспалительного состояния, причем пептид имеет длину в интервале от приблизительно 3 до приблизительно 10 аминокислот; включает последовательность аминокислот, причем последовательность, которая содержит кислые или основные аминокислоты, чередующиеся с ароматическими или гидрофобными аминокислотами; включает гидрофобные концевые аминокислоты или концевые аминокислоты, несущие гидрофобную защитную группу; не является последовательностью ΕΑΕΎΗΑΚ (8Ε0 ГО N0: 1125), включающей все Б-аминокислоты; причем пептид превращает провоспалительный ЛВП в противовоспалительный ЛВП и/или делает противовоспалительный ЛВП более проти
- 50 012440 вовоспалительным.
Следует отметить также, что перечень пептидов в таблице в данном контексте является неполным. Используя описание, приведенное в данном контексте, можно традиционным способом получить другие подходящие пептиды (например, путем консервативных или полуконсервативных замен (например, Ό заменяют на Е), удлинений, делеций и т.п.). Так, например, в одном варианте осуществления используют укорочения любого одного или более пептидов, идентифицированных δΕφ ГО ΝΟΝΟ: 961-989.
Подходят также более длинные пептиды. Такие более длинные пептиды могут полностью формировать амфипатическую спираль класса О или О*, или амфипатическая спираль (спирали) О может формировать один или более доменов пептида. Кроме того, данное изобретение предусматривает мультимерные варианты пептидов. Так, например, пептиды, иллюстрируемые в данных таблицах в данном контексте, могут быть связаны друг с другом (непосредственно или через линкер (например, углеродный линкер или одну или более аминокислот) с одной или более промежуточных аминокислот).
Подходящие линкеры включают, но без ограничения перечисленным, пролин (-Рго-), О1у48ег3 (δΕφ ГО N0: 1126) и т.п. Так, один иллюстративный мультимерный пептид, соответствующий данному изобретению, представляет собой (Ό-Ι336)-Ρ-(Ό-Ι336) (т.е. Αο-Ε-Ε-Ε-Ρ-Ε-Ν-Ε-Ρ-Ε-Ν-^-ν-8-Κ-Ε-Α-Ν-ΕΤ-Ρ-Ο-Ε-Ρ-Ε-Ε-Ε-Ρ-Ε-Ν-Ε-Ρ-Ε-Ν-^-ν-8-Κ-Ε-Α-Ν-Ε-Τ-Ρ-Ο-Ε-ΝΗ2, δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 1127).
Данное изобретение также предусматривает применение гибридных пептидов, включающих один или более О или О* амфипатических спиральных доменов и одну или более амфипатических спиралей класса А. Подходящие амфипатические спиральные пептиды класса Α описаны в публикации РСТ \ΥΟ 02/15923. Так, в качестве иллюстрации один из данных гибридных пептидов представляет собой (Ό1336)-Рго-(4Е) (т.е. Αο-Ε-Ε-Ε-Ρ-Ε-Ν-Ε-Ρ-Ε-Ν-^-ν-δ-Κ-Ε-Α-Ν-Ε-Τ-Ρ-Ο-Ε-Ρ-Ό-^-Ε-Κ-Α-Ε-Υ-Ό-Κ-ν-Α-ΕΚ-Ε-Κ-Ε-Α-Ε-ΝΗ2 δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 1128) и т.п.
Используя описание, представленное в данном контексте, компетентный специалист может традиционным способом модифицировать проиллюстрированные амфипатические спиральные пептиды, чтобы получить другие подходящие варианты аро I и/или амфипатические О и/или А спиральные пептиды, соответствующие данному изобретению. Например, можно сделать обычные консервативные или полуконсервативные замены (например, Е на Ό) имеющихся аминокислот. Эффект различных замен на аффинность к липиду полученного в результате пептида можно предсказать, используя вычислительный метод, описанный в статье Ра1дипасЕап е1 а1., (1996) Лг1епо5с1его515. ТйготЬо515, & ναδοιιΕπ Вю1оду 16: 328-338. Пептиды можно удлинить или укоротить настолько, чтобы сохранялась спиральная структура(ы) класса. Кроме того, могут быть проведены замены, чтобы сделать полученный в результате пептид более близким пептиду(ам), эндогенно продуцируемому определенным видом субъекта.
Хотя в предпочтительных вариантах осуществления в пептидах, соответствующих данному изобретению, используют природные аминокислоты или Ό-формы природных аминокислот, предусматривают также замены неприродными аминокислотами (например, метионинсульфоксидом, метионинметилсульфонием, норлейцином, е-аминокапроновой кислотой, 4-аминобутановой кислотой, тетрагидроизохинолон-3-карбоновой кислотой, 8-аминокаприловой кислотой, 4-аминомасляной кислотой, Бу5(Ме)трифторацетилом), α-аминоизомасляной кислотой и т.п.).
Новые пептиды можно разработать и/или оценить с использованием вычислительных методов. Компьютерные программы для идентификации и классификации амфипатических спиральных доменов хорошо известны компетентным специалистам в области техники и многие описаны в статье 1опе5 е1 а1. (11992) I. Είρίά Ке5. 33: 287-296. Данные программы включают, но не без ограничения перечисленным, программу витков спирали (^ΗΕΕΕ или ^ΗΕΕΕ/δΝΟΚΚΕΕ), программу сети спирали (ΗΕΕΝΕΤ, №ЬΝΕΤ/δΝΟΚΚΕΕ, ΗΕΕΝΕΤ/Αη§Κ), программу для введения витков спирали (ίΌΜΒΟ или ^ΜΒΟ/δΝΟΚΚΕΕ), программу для введения сетей спирали ^ΟΜΝΕΤ, ^ΜΝΕΤ/δΝΟΚΚΕΕ, СΟΜΒΟ/δΕ^ΕСΤ, ^ΜΒΟ/ΝΕΤ), консенсусную программу витков ^ΟΝδΕΝδυδ, №ΝδΕΝδυδ/δΝΟΚΚΕΕ) и т.п.
Ε) Блокирующие группы и Ό-остатки.
Хотя различные пептиды и/или пары аминокислот, описанные в данном контексте, могут быть показаны без защитных групп, в ряде вариантов осуществления (например, особенно для перорального применения), они могут нести одну, две, три, четыре или более защитных групп. Защитные группы могут быть связаны с С- и/или Ν-концом пептида(ов) и/или с одним или более внутренними остатками, составляющими пептид(ы) (например, может быть блокирована одна или более Κ-групп на составляющих аминокислотах). Так, например, в ряде вариантов осуществления любой из пептидов, описанных в данном контексте, может нести, например, ацетильную группу, защищающую аминоконец и/или амидную группу, защищающую карбоксильный конец. Одним из примеров данного дважды защищенного пептидаявляется Ас-^-^-Е-^-^-N-Е-^-Ε-N-’№-V-δ-Κ-^-Α-N-^-Т-^-Ο-Е-NΗ2 (δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 961 с блокирующими группами), причем любая или обе указанные защитные группы могут быть исключены и/или замещены другой защитной группой, как описано в данном контексте.
Вне связи с определенной теорией в данном изобретении обнаружено, что блокирование, особенно амино- и/или карбоксильного концов целевых пептидов, соответствующих данному изобретению, значи
- 51 012440 тельно улучшает пероральную доставку и существенно увеличивает период полувыведения в сыворотке.
Для данной цели подходит широкий круг защитных групп. Данные группы включают, но без ограничения перечисленным, ацетильную, амидную и алкильную группы, причем ацетильная и алкильная группы особенно предпочтительны для защиты Ν-конца и амидные группы предпочтительны для защиты карбоксильного конца. В ряде особенно предпочтительных вариантов осуществления защитные группы включают, но без ограничения перечисленным, алкильные цепи как в жирных кислотах, пропеонил, формил и другие. Особенно предпочтительные защитные группы карбоксила включают амиды, сложные эфиры и образующие простой эфир защитные группы. В одном из предпочтительных вариантов осуществления ацетильную группу используют для защиты аминоконца, и амидную группу используют для защиты карбоксильного конца. Данные блокирующие группы усиливают тенденции формирования спирали у пептидов. Некоторые особенно предпочтительные блокирующие группы включают алкильные группы различной длины, например, группы, имеющие формулу СН3-(СН2)п-СО-, в которой п находится в интервале от приблизительно 1 до приблизительно 20, предпочтительно от приблизительно 1 до приблизительно 16 или 18, более предпочтительно от приблизительно 3 до приблизительно 13 и наиболее предпочтительно от приблизительно 3 до приблизительно 10.
В ряде особенно предпочтительных вариантов осуществления защитные группы включают, но без ограничения перечисленным, алкильные цепи как в жирных кислотах, пропеонил, формил и другие. Особенно предпочтительные защитные группы карбоксила включают амиды, сложные эфиры и образующие простой эфир защитные группы. В одном из предпочтительных вариантов осуществления ацетильную группу используют для защиты аминоконца, и амидную группу используют для защиты карбоксильного конца. Данные блокирующие группы усиливают тенденции формирования спирали у пептидов. Некоторые особенно предпочтительные блокирующие группы включают алкильные группы различной длины, например группы, имеющие формулу СН3-(СН2)п-СО-, в которой п находится в интервале от приблизительно 3 до приблизительно 20, предпочтительно от приблизительно 3 до приблизительно 16, более предпочтительно от приблизительно 3 до приблизительно 13 и наиболее предпочтительно от приблизительно 3 до приблизительно 10.
Другие защитные группы включают, но без ограничения перечисленным, Рптос, третбутоксикарбонил (ΐ-ВОС), 9-флуоренацетильную группу, 1-флуоренкарбоксильную группу, 9флуоренкарбоксильную группу, 9-флуоренон-1-карбоксильную группу, бензилоксикарбонил, ксантил ^ап), тритил (Тй), 4-метилтритил (Μΐΐ), 4-метокситритил (Мт1), 4-метокси-2,3,6-триметилбензолсульфонил (Μϊγ), мезитилен-2-сульфонил (Μΐκ), 4,4-диметоксибензгидрил (ΜΜ), тозил ^οκ), 2,2,5,7,8-пентеметилхроман-6-сульфонил (Ртс), 4-метилбензил (ΜеΒζ1), 4-метоксибензил ^еОВ/^, бензилоксигруппу (В/1О), бензил (В/1), бензоил (В/), 3-нитро-2-пиридинсульфенил (Νργκ), 1-(4,4-диметил2,6-диоксоциклогексилиден)этил (Эбе), 2,6-дихлорбензил (2,6-диС1-Вг1), 2-хлорбензилоксикарбонил (201-Ζ), 2-бромбензилоксикарбонил (2-Вг-2), бензилоксиметил (Έοιη), циклогексилоксигруппу (сНхО), трет-бутоксиметил (Вит), трет-бутоксигруппу (1ВиО), трет-бутил (1Ви), ацетил (Ас) и трифторацетил (ТРА).
Защитные/блокирующие группы хорошо известны компетентным специалистам, так же, как и способы присоединения данных групп к соответствующему остатку(ам), составляющему пептиды, соответствующие данному изобретению, (см., например, Сгеепе е1 а1., (1991) РгсИесйте Группы ш Огдашс 8уп111ейк (Защитные группы в органическом синтезе), 2 изд., ШИп νίΗ.ν & δοι^, 1пс. 8οте^κеΐ, Ν.Γ). В одном из предпочтительных вариантов осуществления, например, ацетилирование осуществляют во время синтеза, когда пептид находится на смоле, при использовании уксусного ангидрида. Защита амидом может быть достигнута выбором подходящей смолы для синтеза. Во время синтеза пептидов, описанных в данном контексте в примерах, используют ппк ат1бе. После завершения синтеза все полупостоянные защитные группы на кислых бифункциональных аминокислотах, таких как Ак]э и С1и, и основной аминокислоте Ьук, гидроксиле Туг одновременно удаляют. Пептиды, высвобождаемые из данной смолы с помощью кислотной обработки, получают с Ν-концом, защищенным как ацетил, и карбоксилом, защищенным как ΝΠ2, при одновременном удалении всех остальных защитных групп.
В ряде особенно предпочтительных вариантов осуществления пептиды включают одну или более Ό-форм (правовращающих, а не левовращающих) аминокислот, как описано в данном контексте. В ряде вариантов осуществления по меньшей мере две энантиомерные аминокислоты, более предпочтительно по меньшей мере 4 энантиомерные аминокислоты и наиболее предпочтительно по меньшей мере 8 или 10 энантиомерных аминокислот представляют собой Ό-форму аминокислот. В ряде вариантов осуществления каждая вторая или даже каждая аминокислота (например, каждая энантиомерная аминокислота) пептидов, описанных в данном контексте, находится в Ό-форме аминокислоты.
В ряде вариантов осуществления по меньшей мере 50% энантиомерных аминокислот представляют собой Ό-форму, более предпочтительно по меньшей мере 80% энантиомерных аминокислот представляют собой Ό-форму и наиболее предпочтительно по меньшей мере 90% или даже все энантиомерные аминокислоты представляют собой Ό-форму аминокислот.
С) Миметики пептидов.
Помимо пептидов, описанных в данном контексте, предусматривают также пептидомиметики. Ана
- 52 012440 логи пептидов часто используют в фармацевтической промышленности как непептидные лекарственные средства со свойствами, аналогичными свойствам пептида-матрицы. Данные типы непептидного соединения обозначают термином миметики пептидов или пептидомиметики (см. статьи РаисНеге (1986) Айт. Эгид Кек. 15: 29; УеЬегаий Рге1йтдег (1985) ΉΝ8 стр.392 и Етаик е!а1. (1987) I. Мей. СНет. 30: 1229) и обычно создают с помощью компьютеризированного молекулярного моделирования. Миметики пептидов, которые структурно близки терапевтически используемым пептидам, могут быть использованы для получения эквивалентного терапевтического или профилактическогоэффекта.
Как правило, пептидомиметики структурно близки образцу полипептида (например, 8Е0 Ш NО: 5, приведенному в табл. 1), но имеют одну или более пептидных связей, необязательно замещенных связью, выбранной из группы, состоящей из -СН2РН-, -СН28-, -СН2-СН2-, -СН=СН- (цис- и транс-), -СОСН2-, -СН(ОН)СН2-, -СН28О- и т.п., способами, известными в области техники и, кроме того, описанными в следующих ссылках: 8ра!о1а (1983) стр. 267 в монографии СНеппкЦу аий ВюсНет1к!гу о£ Атто Ас1йк, Рерййек, аий Рго!етк (Химия и биохимия аминокислот, пептидов и белков), под ред. В. \етк!ет, Магсе1 Эеккег, Νονν Уогк; 8ра!о1а (1983) Уеда Эа1а 1(3) Рерййе ВаскЬоие МойШсайоик (Модификации пептидного скелета), (общий обзор); Мог1еу (1980) Тгеийк РНагт 8с1 стр. 463-468 (общий обзор); Нийкои е! а1. (1979) Ш! I Рер! Рю! Кек 14:177-185 (-СН2РТН-, СН2СН2-); 8ра!о1а е! а1. (1986) Ь1Ре 8ά 38: 1243-1249 (-СН2-8); Наии, (1982) I СНет 8ос Регкт Тгаик I 307-314 (-СН-СН-, цис- и транс-); А1тс.|1пк1 е! а1. (1980) I Мей СНет. 23: 1392-1398 (-СОСН2-), 1еиитдк-\Ы!е е! а1. (1982) ТеКаНейгои Ье!!. 23:2533 (-СОСН2-); 8/е1ке е! а1., Еигореаи Арр1и. ЕР 45665 (1982) СА: 97:39405 (1982) (-СН(ОН)СН2-); Но11айау е! а1. (1983) Те!гакейгои Ье!! 24: 4401-4404 (-С(ОН)СН2-) и НгиЬу (1982) ЫРе 8ά, 31:189-199 (-СН2-8-)).
Одной из особенно предпочтительных непептидных связей является -Ο^ΝΉ-. Данные миметики пептидов могут обладать существенными преимуществами относительно полипептидных вариантов осуществления, включая, например, более экономичное получение, повышенную химическую стабильность, улучшенные фармакологические свойства (период полувыведения, всасывание, активность, эффективность и т.п.), пониженную антигенность и др.
Кроме циклических превращений пептиды, описанные в данном контексте, или пептиды с ограничениями (в том числе циклизованные пептиды), включающие консенсусную последовательность или вариант, в существенной мере идентичный консенсусной последовательности, можно генерировать способами, известными в области техники (см. статью Ρί/о аий 61егаксН (1992) Аии. Кет. ВюсНет. 61: 387), например, путем введения внутренних остатков цистеина, способных формировать внутримолекулярные дисульфидные мостики, которые циклизуют пептид.
Н) Маленькие органические молекулы.
В ряде вариантов осуществления активные агенты, соответствующие данному изобретению, включают маленькие органические молекулы, например, как описано в одновременно рассматриваемой заявке υ88Ν 60/600925, поданной 11 августа 2004 г. В различных вариантах осуществления маленькие органические молекулы близки и в ряде случаев являются миметиками тетра- и пентапептидов, описанных одновременно в рассматриваемой заявке υ88Ν 60/649378, поданной 26 августа 2003 г., и υ88Ν 60/494449, поданной 11 августа.
Маленькие органические молекулы, соответствующие данному изобретению, как правило, имеют молекулярные массы меньше чем приблизительно 900 Да. Как правило, молекулы имеют высокую растворимость в этилацетате (например, в концентрациях, равных или превышающих 4 мг/мл), а также растворимы в водном буфере при рН 7,0.
Контактирование фосфолипидов, таких как 1,2-димиристоил-ки-глицеро-3-фосфохолин (ЭМРС), с маленькими органическими молекулами, соответствующими данному изобретению, в водной среде, как правило, приводит в результате к образованию частиц диаметром приблизительно 7,5 нм (±0,1 нм). Кроме того, часто образуются уложенные в стопу двухслойные структуры с размером двухслойной структуры порядка 3,4-4,1 нм при расстоянии между двухслойными структурами в стопе приблизительно 2 нм.
Часто также образуются везикулярные структуры размером приблизительно 38 нм. Более того, при введении молекул, соответствующих данному изобретению, млекопитающему, они делают ЛВП более противовоспалительным и облегчают один или более симптомов атеросклероза и/или других состояний, характеризующихся воспалительной реакцией.
Так, в ряде вариантов осуществления маленькая органическая молекула представляет собой молекулу, которая облегчает один или более симптомов патологии, характеризующейся воспалительной реакцией у млекопитающего (например, атеросклероза), причем маленькая молекула растворима в этилацетате в концентрации, превышающей 4 мг/мл, растворима в водном буфере при рН 7,0 и при контактировании с фосфолипидом в водной среде образует частицы диаметром приблизительно 7,5 нм и формирует частицы диаметром приблизительно 7,5 нм, а также образует уложенные в стопу двухслойные структуры с размером двухслойной структуры порядка 3,4-4,1 нм при расстоянии между двухслойными структурами в стопе приблизительно 2 нм и имеет молекулярную массу менее 900 Да.
В одном из вариантов осуществления молекула имеет формулу
- 53 012440
в которой Р1, Р2, Р3 и Р4 представляют собой независимо друг от друга выбранные гидрофобные защитные группы; К1 и К4 представляют собой независимо друг от друга выбранные группы К аминокислот; п, 1, х, у и ζ независимо друг от друга представляют собой 0 или 1, так что, когда оба, п и х, означают 0, К1 представляет собой гидрофобную группу, и когда оба, у и 1, означают 0, К4 представляет собой гидрофобную группу; К2 и К3 представляют собой кислые или основные группы при рН 7,0, так что когда К2 является кислой, К3 является основной, и когда К2 является основной, К3 является кислой; и К5, когда присутствует, выбрано из группы, состоящей из ароматической группы, алифатической группы, положительно заряженной группы или отрицательно заряженной группы. В ряде вариантов осуществления К2 или К3 представляют собой -(СН2)|-СООН, где .)=1, 2, 3 или 4 и/или -(ΓΉ^/ΝΗ^, где .)=1, 2, 3, 4 или 5, либо -^Η2)]ΝΗ^(=ΝΗ)-ΝΗ2, где п=1, 2, 3 или 4. В ряде вариантов осуществления К2, К3 и К5, если присутствуют, представляют собой группы К аминокислот. Так, например, в различных вариантах осуществления К2 и К3 независимо друг от друга представляют собой группу К аспарагиновой кислоты, группу К глутаминовой кислоты, группу К лизина, группу К гистидина или группу К аргинина (например, как показано в табл. 1).
В ряде вариантов осуществления К1 выбрано из группы, состоящей из группы К Ьуз, группы К Тгр, группы К Рйе, группы К Ьеи, группы К Огп или группы К потЬеи. В ряде вариантов осуществления К4 выбрано из группы, состоящей из группы К Бет, группы К Тйт, группы К 11е, группы К Ьеи, группы К потЬеи, группы К РНе или группы К Туг.
В различных вариантах осуществления х означает 1 и К5 представляет собой ароматическую группу (например, группу К Тгр).
В различных вариантах осуществления по меньшей мере одно из п, х, у и ί означает 1 и Р1, Р2, Р3 и Р4, если присутствуют, независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из полиэтиленгликоля (ПЭГ), ацетила, амида, алкильной группы из 3-20 атомов углерода, Ртос, 9-флуоренацетильной группы, 1-флуоренкарбоксильной группы, 9-флуоренкарбоксильной группы, 9-флуоренон-1-карбоксильной группы, бензилоксикарбонила, ксантила (Хап), тритила (Тй), 4-метилтритила (Мй), 4-метокситритила (Мт!), 4-метокси-2,3,6-триметилбензолсульфонила (М!г), мезитилен-2-сульфонила (М!з), 4,4диметоксибензгидрила (МЬй), тозила (Тоз), 2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-сульфонила (Ртс), 4метилбензила (МеВζ1), 4-метоксибензила (МеΟВζ1), бензилоксигруппы (Вζ1Ο), бензила (Βζ1), бензоила (Βζ), 3-нитро-2-пиридинсульфенила (Ыруз), 1-(4,4-диметил-2,6-диоксоциклогексилиден)этила (Эбе), 2,6дихлорбензила (2,6-диС1-Вг1), 2-хлорбензилоксикарбонила (2-С1-2), 2-бромбензилоксикарбонила (2-ВгΖ), бензилоксиметила (Вот), трет-бутоксикарбонила (Вос), циклогексилоксигруппы (сНхО), третбутоксиметила (Вит), трет-бутоксигруппы (1ВиО), трет-бутила (!Ви), пропиловой группы, бутиловой группы, пентиловой группы, гексиловой группы и трифторацетила (ТРА). В ряде вариантов осуществления Р1, если присутствует, и/или Р2, если присутствует, независимо выбраны из группы, состоящей из Вос-, Ртос- и никотинила, и/или Р3, если присутствует, и/или Р4, если присутствует, независимо выбраны из группы, состоящей из )Вн и О)Вн.
Хотя ряд защитных групп (Р1, Р2, Р3, Р4) приведен выше, следует учитывать, что данный перечень является иллюстративным, а не ограничивающим. В свете описаний, представленных в данном контексте, компетентному специалисту в данной области будет известен также ряд других защитных/блокирующих групп. Данные блокирующие группы можно выбрать, чтобы свести к минимуму разложение (например, для пероральной доставки фармацевтического средства), и/или для повышения всасывания/биодоступности (например, через поверхности слизистых оболочек при назальной доставке, ингаляционной терапии, ректальном введении) и/или для увеличения полупериода существования в сыворотке/плазме. В ряде вариантов осуществления защитные группы могут быть представлены как напол нитель или как компонент наполнителя.
В ряде вариантов осуществления ζ означает 0, и молекула имеет формулу
в которой Р1, Р2, Р3, Р4, К1, К2, К3, К4, п, х, у и ί такие, как описано выше.
- 54 012440
В ряде вариантов осуществления ζ означает 0, и молекула имеет формулу
в которой К1, К2, К3 и К4 такие, как описано выше.
В одном варианте осуществления молекула имеет формулу
В ряде вариантов осуществления, данное изобретение предусматривает маленькие молекулы, обладающие одним или более физическим и/или функциональным свойствами, описанными в данном контексте, и имеющие формулу
в которой Р1, Р2, Р3 и Р4 представляют собой независимо выбранные гидрофобные защитные группы, как описано выше, п, х и у независимо друг от друга означают 0 или 1; _), к и 1 независимо друг от друга означают 0, 1, 2, 3, 4 или 5 и К2 и К3 представляют собой кислые или основные группы при рН 7,0, так что когда К2 является кислой, К3 является основной, и когда К2 является основной, К3 является кислой. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления маленькая молекула растворима в воде, и маленькая молекула имеет молекулярную массу менее чем приблизительно 900 Да. В ряде вариантов осуществления п, х, у, _) и 1 означают 1, и к означает 4.
В ряде вариантов осуществления К2 и К3 представляют собой группы К аминокислот, например, как описано выше. В различных вариантах осуществления по меньшей мере одно из п, х и у означает 1 и Р1, Р2, Р3 и Р4, если присутствуют, независимо друг от друга представляют собой защитные группы, например, как описано выше. В ряде вариантов осуществления защитные группы, если присутствуют, независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из полиэтиленгликоля (ПЭГ), ацетила, амида, алкильной группы из 3-20 атомов углерода, Гтос, 9-флуоренацетильной группы, 1-флуоренкарбоксильной группы, 9-флуоренкарбоксильной группы, 9-флуоренон-1-карбоксильной группы, бензилоксикарбонила, ксантила (Xаη), тритила (Тй), 4-метилтритила (МП), 4-метокситритила (Мт!), 4-метокси-2,3,6-триметилбензолсульфонила (М!г), мезитилен-2-сульфонила (М!з), 4,4-диметоксибензгидрила (МЬН), тозила (Тоз), 2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-сульфонила (Ртс), 4-метилбензила (МеΒζ1), 4-метоксибензила (МеΟΒζ1), бензилоксигруппы (ΈζίΟ), бензила (Έζ1), бензоила (Έζ), 3-нитро-2-пиридинсульфенила (Νρν3), 1-(4,4диметил-2,6-диоксоциклогексилиден)этила (Э6е), 2,6-дихлорбензила (2,6-диС1-Βζ1), 2хлорбензилоксикарбонила (2-С1-2), 2-бромбензилоксикарбонила (2-Вг-2), бензилоксиметила (Вот), трет-бутоксикарбонила (Вос), циклогексилоксигруппы (сНхО), трет-бутоксиметила (Вит), третбутоксигруппы (!ВиО), трет-бутила (!Ви), пропиловой группы, бутиловой группы, пентиловой группы, гексиловой группы и трифторацетила (ТГА). В ряде вариантов осуществления Р1, если присутствует, и/или Р2, если присутствует, независимо выбраны из группы, состоящей из Вос-, Гтос- и никотинила, и/или Р3, если присутствует, и/или Р4, если присутствует, независимо выбраны из группы, состоящей из !Ви и О!Ви.
III. Функциональные анализы активных агентов.
Некоторые активные агенты, предназначенные для применения в способах, соответствующих данному изобретению, описаны в данном контексте с помощью различных формул (например, формулу I,
- 55 012440 см. выше) и/или определенных последовательностей. В ряде вариантов осуществления предпочтительные активные агенты, соответствующие данному изобретению, характеризуются одним или более из следующих функциональных признаков.
1. Они превращают провоспалительный ЛВП в противовоспалительный ЛВП или делают противовоспалительный ЛВП более противовоспалительным.
2. Они снижают ЛНП-индуцированную активность хемотаксиса моноцитов, генерированную клетками стенки артерии.
3. Они стимулируют формирование и циклинг пре-в-ЛВП.
4. Они стимулируют образование ЛВП холестерина.
5. Они повышают активность параоксоназы ЛВП.
Специфические агенты, раскрытые в данном контексте, и/или агенты, соответствующие различным формулам, описанным в данном контексте, при необходимости легко можно протестировать на одну или более из данных активностей.
Методы скрининга каждого из данных функциональных свойств хорошо известны компетентным специалистам в области техники. В частности, отмечают, что анализы на активность хемотаксиса моноцитов, ЛВП холестерин и активность параоксоназы ЛВП показаны в РСТ/И8 01/26497 (νΟ 2002/15923).
IV. Получение пептидов.
Пептиды, используемые в данном изобретении, можно химически синтезировать, используя стандартные методы химического синтеза пептидов, или, в частности, когда пептид не включает остатки Όаминокислот, можно рекомбинантно экспрессировать. В ряде вариантов осуществления даже пептиды, включающие остатки Ό-аминокислот, экспрессируют рекомбинантным образом. При рекомбинантной экспрессии полипептидов организм-хозяин (например, бактерию, растение, грибные клетки и т.п.) культивируют в среде, в которой одну или более аминокислот для организма представляют исключительно в Ό-форме. Тогда пептиды, экспрессируемые рекомбинантным образом в данной системе, включают данные Ό-аминокислоты.
В ряде предпочтительных вариантов осуществления пептиды химически синтезируют любым из числа методов жидко- или твердофазного синтеза пептидов, известных компетентным специалистам в области техники. Твердофазный синтез, в котором С-концевую аминокислоту последовательности присоединяют к нерастворимой основе с дальнейшим последовательным добавлением в последовательность остальных аминокислот, является предпочтительным методом химического синтеза полипептидов, соответствующих данному изобретению. Методы твердофазного синтеза хорошо известны компетентным специалистам в области техники и описаны, например, см. раздел Вагапу апб МегпПе1б (1963) Зойб-Рйаке Рерйбе 8уп1йе515 (Твердофазный синтез пептидов); стр. 3-284 в монографии Рерйбек: Апа1у515, 8уп1йе515, Вю1оду (Пептиды: анализ, синтез, биология), т. 2: 8рес1а1 Ме!йобк ш Рерйбе 8уп!йе515 (Специальные способы синтеза пептидов), часть А.; статью Метйе1б е1 а1. (1963) 1. Ат. Сйет. Зос, 85: 2149-2156 и монографию 81е\\ш1 е1 а1. (1984) 8ойб Рйаке Рерйбе Зуп1йе515 (Твердофазный синтез пептидов), 2 изд., Р1егсе Сйет. Со., Коск&гб, III.
В ряде вариантов осуществления пептиды синтезируют методом твердофазного синтеза пептидов с использованием бензгидриламиновой смолы (фирмы Весктап Вюргобис18, 0,59 ммоль ΝΗ2/γ смолы) в качестве твердой основы. Группу СООН концевой аминокислоты (например, трет-бутилкарбонил-Рйе) присоединяют к твердой основе через 4-(оксиметил)фенацетильную группу. Это более стабильная связь, чем принятая бензилэфирная связь, причем конечный пептид еще можно отщепить гидрированием. Для данной цели используют гидрирование с переносом при использовании муравьиной кислоты в качестве донора водорода. Подробные протоколы, используемые для синтеза пептидов и анализа синтезированных пептидов, описаны в малотиражном приложении, сопровождающем статью Апап!йагата1ай е1 а1. (1985) 1. Вю1. Сйет., 260(16): 10248-10255.
Отмечают, что в химическом синтезе пептидов, в частности, пептидов, включающих Όаминокислоты, синтез обычно дает ряд укороченных пептидов кроме требующегося продукта полной длины. Метод очистки (например, ВЭЖХ (высокоэффективная жидкостная хроматография), как правило, приводит в результате к потере значительного количества продукта полной длины.
В данном изобретении обнаружено, что в синтезе Ό-пептида (например, Ό-4) для предотвращения потери при очистке самой длинной формы можно провести диализ и использовать смесь, исключая, таким образом, последнюю очистку с помощью ВЭЖХ. Данная смесь теряет приблизительно 50% активности высокоочищенного продукта (например, на массу белкового продукта), но смесь содержит приблизительно в 6 раз больше пептида и, таким образом, имеет более высокую общую активность.
ν. Фармацевтические средства и устройства.
А) Фармацевтические средства.
Для осуществления способов, соответствующих изобретению, один или более активных агентов, представленных в данном изобретении, вводят, например, пациенту, у которого диагностирован один или более симптомов атеросклероза или который находится в группе риска развития атеросклероза и/или различных других патологий, описанных в данном контексте. Активный агент(ы) можно ввести в нативной форме или, при необходимости, в форме солей, сложных эфиров, амидов, пролекарственных
- 56 012440 форм, производных и т.п., при условии, что соль, сложный эфир, амид, пролекарственная форма или производное являются фармакологически приемлемыми, т. е. эффективными в настоящем способе. Соли, сложные эфиры, амиды, пролекарственные формы или производные активных агентов можно получить при использовании стандартных методов, известных компетентным специалистам в области химии органического синтеза и описанных, например, в работе МагсЬ (1992) Абтапсеб Огдашс СЬет1к!гу; Кеасйопк, МесЬашктк апб 81глс!иге (Достижения органической химии; реакции, механизмы и структура), 4 изд. Ν. Υ. ^11еу-1п!егкс1епсе.
Например, кислотно-аддитивные соли получают из свободного основания, используя принятую методику, которая, как правило, включает реакцию с подходящей кислотой. Как правило, основную форму лекарственного средства растворяют в полярном органическом растворителе, таком как метанол или этанол, и к нему добавляют кислоту. Полученная в результате соль либо осаждается либо может быть выделена из раствора добавлением менее полярного растворителя. Подходящие кислоты для получения кислотно-аддитивных солей включают как органические кислоты, например уксусную кислоту, пропионовую кислоту, гликолевую кислоту, пировиноградную кислоту, щавелевую кислоту, яблочную кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, малеиновую кислоту, фумаровую кислоту, винную кислоту, лимонную кислоту, бензойную кислоту, коричную кислоту, миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, салициловую кислоту и т.п., так и неорганические кислоты, например хлористо-водородную кислоту, бромисто-водородную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, фосфорную кислоту и т. п. Кислотно-аддитивную соль можно превратить обратно в свободное основание обработкой подходящим основанием. Особенно предпочтительными кислотно-аддитивными солями активных агентов в данном контексте являются соли галогенидов, такие как можно получить, используя хлористо-водородную и бромисто-водородную кислоты. Напротив, получение основных солей активных агентов, соответствующих данному изобретению, осуществляют аналогичным путем, используя фармацевтически приемлемое основание, такое как гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид аммония, гидроксид кальция, триметиламин или им подобные. Особенно предпочтительные основные соли включают соли щелочных металлов, например соль натрия, и соли меди.
Получение сложных эфиров, как правило, включает функционализацию гидроксильной и/или карбоксильной группы, которые могут присутствовать в молекулярной структуре лекарственного средства. Сложные эфиры, как правило, являются ацилзамещенными производными свободной спиртовой группы, т.е. группами, которые получены из карбоновых кислот формулы КСООН, в которой К представляет собой алкил и предпочтительно является низшим алкилом. Сложные эфиры можно при необходимости превратить обратно в свободные кислоты при использовании принятых методов гидрогенопиза или гидролиза.
Амиды и пролекарственные формы можно также получить при использовании методик, известных компетентным специалистам в области техники, или описанных в относящейся к данной проблеме литературе. Например, амиды можно получить из сложных эфиров с помощью подходящих аминных реагентов или они могут быть получены из ангидрида или кислого хлорида путем реакции с аммиаком или амином низшего алкила. Пролекарственные средства, как правило, получают ковалентным присоединением группы, которая в результате дает соединение, которое является терапевтически неактивным до тех пор, пока оно не модифицировано метаболической системой пациента.
Активные агенты, идентифицированные в данном контексте, используют для парентрального, наружного, перорального, назального (или иначе ингаляционного), ректального или местного введения, такого как аэрозольное или чрескожное, для профилактического и/или терапевтического лечения одной или более патологий/показаний, описанных в данном контексте (например, атеросклероза и/или его симптомов). Фармацевтические композиции можно ввести в ряде унифицированных дозированных форм в зависимости от способа введения. Подходящие унифицированные дозированные формы включают, но без ограничения перечисленным, порошки, таблетки, пилюли, капсулы, лепешки, суппозитории, пластыри, назальные спреи, инъекционные препараты, имплантируемые препараты с замедленным высвобождением, липидные комплексы и т.п.
Активные агенты, соответствующие данному изобретению, как правило, комбинируют с фармацевтически приемлемым носителем (наполнителем) с целью получения фармакологической композиции. Фармацевтически приемлемые носители могут включать одно или более физиологически приемлемых соединений, которые действуют, например, стабилизируя композицию либо повышая или снижая уровень всасывания активного агента(ов). Физиологически приемлемые соединения могут включать, например, углеводы, такие как глюкоза, сахароза или декстраны, антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или глутатион, хелатирующие агенты, низкомолекулярные белки, агенты, усиливающие защиту и всасывание, такие как липиды, композиции, которые уменьшают клиренс или гидролиз активных агентов, либо наполнители или другие стабилизаторы и/или буферы.
Другие физиологически приемлемые соединения включают увлажнители, эмульгаторы, разрыхлители или консерванты, которые, в частности, используют для предупреждения роста или действия микроорганизмов. Различные консерванты хорошо известны и включают, например, фенол и аскорбиновую кислоту. Компетентный специалист в данной области будет иметь в виду, что выбор фармацевтически
- 57 012440 приемлемого носителя(ей), включая физиологически приемлемое соединение, зависит, например, от пути введения активного агента(ов) и от специфических физико-химических характеристик активного агента(ов).
Наполнители предпочтительно стерильны и в основном свободны от нежелательных примесей. Данные композиции можно простерилизовать принятыми хорошо известными методами стерилизации.
При терапевтическом применении композиции, соответствующие данному изобретению, вводят пациенту, страдающему от одного или более симптомов одной или более патологий, описанных в данном контексте, или риска развития одной или более патологий, описанных в данном контексте, в количестве, достаточном для предупреждения, и/или лечения, и/или, по меньшей мере, частичного предупреждения или остановки развития заболевания и/или его осложнений. Количество, достаточное для осуществления этого, определяют как терапевтически эффективную дозу. Количества, эффективные для данного применения, будут зависеть от тяжести заболевания и общего состояния здоровья пациента. Однократные и многократные введения композиций можно применять в зависимости от дозы и частоты, которые требуются и переносятся пациентом. В любом случае композиция должна обеспечить достаточное количество активных агентов препаратов, соответствующих данному изобретению, для того, чтобы эффективно лечить (облегчать один или более симптомов) пациента.
Концентрация активного агента(ов) может широко варьировать и будет выбрана в основном, основываясь на объемах жидкости, вязкостях, массе тела и т.п. в соответствии с конкретным выбранным способом введения и нуждами пациента. Однако концентрации будут, как правило, выбирать так, чтобы обеспечить дозы, лежащие в интервале от приблизительно 0,1 или 1 мг/кг/день до приблизительно 50 мг/кг/день и иногда выше. Типичные дозы лежат в интервале от приблизительно 3 до приблизительно 3,5 мг/кг/день, предпочтительно от приблизительно 3,5 до приблизительно 7,2 мг/кг/день, более предпочтительно от приблизительно 7,2 до приблизительно 11,0 мг/кг/день и наиболее предпочтительно от приблизительно 11,0 до приблизительно 15,0 мг/кг/день. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления дозы лежат в интервале от приблизительно 10 до приблизительно 50 мг/кг/день. В ряде вариантов осуществления дозы лежат в интервале от приблизительно 20 до приблизительно 50 мг, принимаемых перорально два раза в день. Следует иметь в виду, что данные дозы можно варьировать с целью оптимизации терапевтической схемы для конкретного пациента или группы пациентов.
В ряде предпочтительных вариантов осуществления активные агенты, соответствующие данному изобретению, вводят перорально (например, в виде таблетки) или как инъекционный препарат согласно стандартным методам, хорошо известным компетентным специалистам в данной области. В других предпочтительных вариантах осуществления пептиды могут быть также доставлены через кожу с использованием чрескожных систем доставки лекарственных средств, т.е. чрескожных пластырей, причем активный агент(ы), как правило, содержатся в многослойной структуре, которая служит устройством для доставки лекарственного средства, предназначенного для прикрепления к коже. В данной структуре композиция лекарственного средства, как правило, содержится в слое или резервуаре, лежащем под верхним защитным слоем. Следует иметь в виду, что термин резервуар в данном контексте относится к количеству активного ингредиента(ов), которое в конечном счете доступно для доставки на поверхность кожи. Так, например, резервуар может включать активный ингредиент(ы) в адгезиве на защитном слое пластыря или в любом из ряда матриц различных составов, известных компетентным специалистам в области техники. Пластырь может включать один резервуар или может включать множество резервуаров.
В одном варианте осуществления резервуар включает полимерную матрицу фармацевтически приемлемого контактного адгезивного материала, который служит для прикрепления системы к коже во время доставки лекарственного средства. Примеры подходящих для контакта с кожей адгезивных материалов включают, но без ограничения перечисленным, полиэтилены, полисилоксаны, полиизобутилены, полиакрилаты, полиуретаны и т. п. Альтернативно содержащий лекарственное средство резервуар и адгезив, контактирующий с кожей, присутствуют в виде разделенных и отдельных слоев, причем адгезив лежит под резервуаром, который в данном случае может быть либо полимерной матрицей, как описано выше, либо он может представлять собой резервуар в виде жидкости или гидрогеля или может принимать какую-либо иную форму. Предпочтительно, когда защитный слой в данных многослойных структурах, который служит верхней поверхностью устройства, действует как основной структурный элемент пластыря и обеспечивает большую гибкость устройства. Предпочтительно, когда материал, выбранный для защитного слоя, является в существенной мере непроницаемым для активного агента(ов) и любых других присутствующих материалов.
Другие предпочтительные формы для наружной доставки лекарственного средства включают, но без ограничения перечисленным, мази и кремы. Мази представляют собой полутвердые препараты, как правило, на основе вазелина или других производных нефти. Кремы, содержащие выбранный активный агент, как правило, представляют собой вязкие жидкие или полутвердые эмульсии, часто либо масло в воде, либо вода в масле. Кремовые основы, как правило, смываются водой и включают масляную фазу, эмульгатор и водную фазу. Масляную фазу иногда также называемую внутренней фазой, обычно состоит из вазелина и жирного спирта, такого как цетиловый или стеариловый спирт, водная фаза обычно,
- 58 012440 но не обязательно превосходит масляную фазу по объему и в основном включает увлажнитель. Эмульгатор в кремовом препарате, как правило, представляет собой неионное, анионное, катионное или амфотерное поверхностно-активное вещество. Специфическая основа мази или крема, которую следует использовать, как будут иметь в виду компетентные специалисты в области техники, представляет собой основу, которая будет обеспечивать оптимальную доставку лекарственного средства. Что касается других носителей или наполнителей, то основа мази должна быть инертной, стабильной, нераздражающей и несенсибилизирующей.
В отличие от типичных пептидных препаратов, пептиды, соответствующие данному изобретению, включающие Ό-формы аминокислот, можно вводить даже перорально без защиты от протеолиза желудочной кислотой и т.п. Тем не менее, в ряде вариантов осуществления, доставку пептида можно усилить с помощью защитных наполнителей. Это, как правило, осуществляют либо комплексированием полипептида с композицией, делающей его устойчивым к кислотному и ферментативному гидролизу, либо упаковкой полипептида в соответствующим образом устойчивый наполнитель, такой как липосома. Средства защиты полипептидов для пероральной доставки хорошо известны в области техники (см., например, патент США 5391377, описывающий липидные композиции для пероральной доставки терапевтических агентов).
Увеличенный полупериод существования в плазме можно поддерживать с помощью систем упаковки белка с замедленным высвобождением. Данные системы с замедленным высвобождением хорошо известны компетентным специалистам в области техники. В одном из предпочтительных вариантов осуществления система доставки белков и пептидов на основе биоразлагаемых микросфер РгоЬеазе (см. статьи Тгасу (1998) Вю!есЬпо1. Ргод. 14: 108; 1оНпзоп е! а1. (1996), №1Шге Ме6. 2: 795; НегЬей е! а1. (1998), РНагшасеШ. Кез. 15, 357) представляет собой сухой порошок, состоящий из биоразрушаемых полимерных микросфер, включающих активный агент в полимерной матрице, который может быть составлен в виде сухого препарата с содержанием или без содержания других агентов.
Способ изготовления микросфер РгоЬеазе специально разработан для достижения высокой эффективности инкапсуляции при поддержании целостности активного агента. Способ состоит из (1) получения сублимационно высушенных частиц лекарственного средства из основной массы посредством распылительной сублимационной сушки раствора лекарственного средства со стабилизирующими наполнителями, (ίί) получения суспензии лекарственное средство-полимер с последующей ультразвуковой обработкой или гомогенизацией для уменьшения размера частиц лекарственного средства, (ш) получения замороженных микрочастиц, содержащих лекарственное средство-полимер, путем распыления в жидком азоте, (ίν) удаления растворителя полимера этанолом и (ν) фильтрования и вакуумной сушки для получения конечного продукта в виде сухого порошка. Полученный в результате порошок включает твердую форму активных агентов, которые гомогенно и стабильно диспергированы в пористых полимерных частицах. Полимер, наиболее часто используемый в способе, поли(лактид-со-гликолид) (ПЛГ), является как биосовместимым, так и биоразлагаемым.
Инкапсуляцию можно осуществить при низких температурах (например, -40°С). Во время инкапсуляции белок поддерживают в твердом состоянии в отсутствие воды, минимизируя, таким образом, вызываемую водой конформационную мобильность белка, предотвращая реакции разложения белка, которые включают воду в качестве реагента, и избегая возникновения границ раздела органических веществ и воды, на которых белки могут подвергаться денатурации. В предпочтительном способе используют растворители, в которых большинство белков нерастворимы, получая, таким образом, высокую эффективность инкапсуляции (например, больше чем 95%).
В другом варианте осуществления можно получить один или более компонентов раствора в виде концентрата, например, в контейнере для хранения (например, в предварительно измеренном объеме), готового для разведения, или в растворимой капсуле, готовой для добавления к объему воды.
Следует учитывать, что вышеупомянутые препараты и способы введения являются иллюстративными, а не ограничивающими. Следует иметь в виду, что, используя описание, представленное в данном контексте, можно легко разработать другие подходящие препараты и способы введения.
В) Препараты на основе липидов.
В ряде вариантов осуществления активные агенты, соответствующие данному изобретению, можно вводить в сочетании с одним или более липидами. Липиды можно ввести в состав в качестве наполнителя для защиты и/или усиления транспорта/всасывания активных агентов или их можно ввести отдельно.
Вне связи с какой-либо теорией, в данном изобретении обнаружено, что введение (например, пероральное введение) ряда фосфолипидов может в существенной мере повышать соотношения ЛВП/ЛНП. Кроме того, считают, что ряд фосфолипидов средней длины транспортируется способом, отличным от включенного в основной транспорт липидов. Так, совместное введение некоторых фосфолипидов средней длины с активными агентами, соответствующими данному изобретению, дает ряд преимуществ: они защищают активные агенты от разложения или гидролиза, они улучшают всасывание и, они улучшают соотношения ЛВП/ЛНП.
Из липидов могут быть сформированы липосомы, которые инкапсулируют активные агенты, соответствующие данному изобретению, и/или они могут быть комплексированы/смешаны с активными
- 59 012440 агентами и/или они могут быть ковалентно связаны с активными агентами. Методы получения липосом и инкапсулирующих агентов хорошо известны компетентным специалистам в области техники (см., например, статьи Майш апб Рарайаб)орои1о8 (1982) 1. Вю1. СНсш.. 257: 286-288; РараНаб|орон1о5 с1 а1. (1991) Ргос. Асаб. 8сЬ υ8Α, 88: 11460-11464; Пиану е! а1. (1992) Сапсег Век., 52:6774-6781; Ьаые е! а1. (1992) ЕЕВ8 Ьеб, 312: 255-258., и т.п.).
Предпочтительные фосфолипиды, предназначенные для применения в данных методах, включают жирные кислоты длиной в интервале от приблизительно 4 атомов углерода до приблизительно 24 атомов углерода в положениях кп-1 и кп-2. В ряде предпочтительных вариантов осуществления жирные кислоты являются насыщенными. В других предпочтительных вариантах осуществления жирные кислоты могут быть ненасыщенными. Различные предпочтительные жирные кислоты проиллюстрированы в табл. 19.
Таблица 19
Предпочтительные жирные кислоты в положении кп-1 и/или кп-2 предпочтительных фосфолипидов, предназначенные для введения активных агентов, описанных в данном контексте
Атом углерода Νο. Общепринятое название Название ИЮПАК*
3:0 Пропионоиловая Триановая
4:0 Бутаноиловая Тетрановая
Атом углерода Νο. Общепринятое название Название ИЮПАК*
5:0 Пентаноиловая Пентановая
6:0 Капроиловая Гексановая
7:0 Гептаноиловая Гептановая
8:0 Каприлоиловая Октановая
9:0 Нонаноиловая Нонановая
10:0 Каприловая Декановая
11:0 Ундеканоиловая Ундекановая
12:0 Лауроиловая Додекановая
13:0 Тридеканоиловая Тридекановая
14:0 Миристоиловая Тетрадекановая
15:0 Пентадеканоиловая Пентадека новая
16:0 Пальмитоиловая Гексадекановая
17:0 Нептадеканоиловая Гептадекановая
18:0 Стеароиловая Октадекановая
19:0 Нонадеканоиловая Нонадекановая
20:0 Арахидоиловая Эйкозановая
21:0 Гениэкозаноиловая Гениэкозановая
22:0 Бегеноиловая Докозановая
23:0 Т руцизаноиловая Трокозановая
24:0 Лигноцероиловая Тетракозановая
14:1 Миристелеоиловая (9-цис)
14.Ί Миристелаидоиловая (9-транс)
16:1 Пальмитолеоиловая (9-цис)
16:1 Пальмителаидоиловая (9-транс)
* - Международный союз теоретической и прикладной химии
Жирные кислоты в данных положениях могут быть одинаковыми или различными. Особенно предпочтительные фосфолипиды содержат фосфорилхолин в положении кп-3.
С) Специализированная доставка/устройства.
1. Стенты, выделяющие лекарственное средство.
Рестеноз, повторное закрытие ранее суженного, а затем дилатированного периферического или коронарного сосуда, встречается с существенной частотой (например, 20-50% отданных процедур) и зависит от ряда клинических и морфологических переменных величин. Рестеноз может начаться вскоре после процедуры ангиопластики, но обычно прекращается в конце приблизительно шести (6) месяцев.
- 60 012440
Современный метод, который разработан, адресован проблеме рестеноза во внутрисосудистых стентах. Стенты, как правило, являются устройствами, которые постоянно имплантированы (в расширенном виде) в коронарные и периферические сосуды. Цель данных стентов состоит в обеспечении длительной опоры или поддержки для больных (суженных) сосудов. Существует предположение о том, что если сосуд поддерживается изнутри, он не закроется и не подвергнется рестенозу.
Известные конструкции стентов включают, но без ограничения перечисленным, одноволоконные проволочные спиральные стенты (см., например, патент США 4969458); спаянные металлические каркасы (см., например, патенты США 4733665 и 4776337), тонкостенные металлические цилиндры с осевыми прорезями, сформированными по окружности (см., например, патенты США 4733665, 4739762, 4776337 и т. п.). Известные материалы конструкций, предназначенные для использования в стентах включают, но без ограничения перечисленным, полимеры, органические волокна и биосовместимые металлы, такие как нержавеющая сталь, золото, серебро, тантал, титан и сплавы с памятью формы, такие как нитинол.
Для дальнейшего предупреждения рестеноза стенты могут быть покрыты и/или пропитаны одним или более фармацевтическим агентом, например, лекарственными средствами с контролируемым высвобождением, для ингибирования пролиферации клеток, ассоциированной с рестенозом. Наиболее часто данные выделяющие лекарственное средство стенты создают для доставки различных противораковых лекарственных средств (цитотоксинов).
Однако вследствие своей активности ослабления воспалительных реакций, восстановления или удаления окисленных липидов и/или других окисленных молекул, ингибирования активности хемотаксиса макрофагов и т.п., активные агенты, описанные в данном контексте, хорошо подходят для предупреждения рестеноза. Так, в ряде вариантов осуществления данное изобретение предусматривает стенты, включающие один или более активных агентов, описанных в данном контексте, покрывающих поверхность и/или находящихся в полостях или микрополостях в поверхности стента.
В ряде вариантов осуществления активные агенты находятся в биосовместимых матрицах (например, в биосовместимых полимерах, таких как уретан, силикон и т.п.). Подходящие биосовместимые материалы описаны, например, в патентных публикациях США 20050084515, 200500791991, 20050070996 и т.п. В различных вариантах осуществления полимеры включают, но без ограничения перечисленным, силиконово-уретановый сополимер, полиуретан, феноксиэтиленвинилацетат, поликапролактон, поли(лактид-со-гликолид), полилактид, полисульфон, эластин, фибрин, коллаген, хондроитинсульфат, биосовместимый полимер, биостабильный полимер, биоразлагаемый полимер.
Так, в ряде вариантов осуществления данное изобретение представляет стент для доставки лекарственных средств в сосуд в организме. Стент, как правило, содержит каркас стента, включающий множество сформированных в нем резервуаров. Резервуары, как правило, включают активный агент и/или полимер, содержащий активный агент, находящийся в резервуаре и/или нанесенный на поверхность стента. В различных вариантах осуществления стент имеет металлическую основу или полимерную основу. Некоторые предпочтительные материалы стентов включают, но без ограничения перечисленным, нержавеющую сталь, нитинол, тантал, сплав МР35Н платину, титан, подходящий биосовместимый сплав, подходящий биосовместимый полимер и/или их комбинацию.
В различных вариантах осуществления, когда стент содержит поры (например, резервуары), данные поры могут включать микропоры (например, имеющие диаметр в интервале от приблизительно 10 до приблизительно 50 мкм, предпочтительно приблизительно 20 мкм или меньше). В различных вариантах осуществления микропоры имеют глубину в интервале от приблизительно 10 до приблизительно 50 мкм. В различных вариантах осуществления микропоры проходят через каркас стента, имея отверстие на внутренней поверхности стента и отверстие на наружной поверхности стента. В ряде вариантов осуществления стент может необязательно включать закрывающий слой, расположенный на внутренней поверхности каркаса стента, причем закрывающий слой покрывает по меньшей мере часть сквозных отверстий в стенте и обеспечивает барьерное свойство для контроля скорости выделения активного агента(ов) из полимера из внутренней поверхности каркаса стента. В ряде вариантов осуществления резервуары содержат каналы, проходящие вдоль наружной поверхности каркаса стента. Стент необязательно может иметь множество слоев полимера, причем разные слои полимера несут различные активные агент(ы) и/или другие лекарственные средства.
В ряде вариантов осуществления стент необязательно включает адгезивный слой, находящийся между каркасом стента и полимером. Подходящие адгезивные слои включают, но без ограничения перечисленным, полиуретан, фенокси, поли(лактид-согликолид)-, полилактид, полисульфон, поликапролактон, стимулятор адгезии и/или их комбинацию.
Кроме стентов активные агенты могут покрывать или содержаться в практически любом имплантируемом медицинском устройстве, сформированном для имплантации во внесосудистом и/или внутри сосудистом положении.
Представлены также способы изготовления стента, содержащего полимер с лекарственным средством. Способы включают получение каркаса стента, вырезание множества резервуаров в каркасе стента, например, с помощью мощного лазера, нанесение одного или более активных агентов и/или полимера с лекарственным средством по меньшей мере на один резервуар, высушивание полимера с лекарственным
- 61 012440 средством, нанесение слоя полимера на высушенный полимер с лекарственным средством и высушивание слоя полимера. Активный агент(ы) и/или полимер(ы) можно нанести любым удобным методом, включая, но без ограничения перечисленным, распыление, погружение, окрашивание, нанесение кистью и распределение.
Представлены также способы лечения сосудистого состояния и/или состояния, характеризующегося воспалительной реакцией и/или состоянием, характеризующимся образованием окисленных реакционных молекул. Способы, как правило, включают помещение стента или другого имплантируемого устройства, как описано выше, в организм (например, внутри сосуда в организме) и выделение, по меньшей мере, активного агента по меньшей мере из одной поверхности имплантата.
2. Импрегнированные имплантаты и трансплантаты.
Сосудистые имплантаты могут быть классифицированы либо как биологические, либо как синтетические. Существует два обычно используемых типа биологические имплантата. Аутоимплантат представляет собой имплантат, взятый из другой области пациента. В хирургии периферических сосудов, тем не менее, наиболее часто используемые данные имплантаты представляют собой длинную подкожную вену. Их можно использовать ш кйи с клапанами, хирургически разрушенными посредством внутрипросветной удаляющей вальвулотомии.
Альтернативно, вену можно удалить и поставить обратно, но это, как правило, приводит к образованию различия между размером анастамоза артерии и вены. В торакальной хирургии использование внутренней артерии млекопитающего для шунтирования коронарной артерии является другим примером аутоимплантата. Аллотрансплантат представляет собой трансплантат, полученный у другого животного того же вида. Поддерживаемую во внешней среде пуповинную вену редко используют, но она представляет собой пример данного трансплантата.
Синтетические трансплантаты чаще всего делают из дакрона или политетарфторэтилена (РТРЕ). Дакроновые трансплантаты часто используют в аортальной и аорто-подвздошной хирургии. Ниже паховой связки результаты по всем синтетическим трансплантатам превосходят результаты, полученные с использованием венозных трансплантатов. Подходящая вена не всегда доступна, и в данном случае обычно используют РТРЕ. Он может быть использован в сочетании с веной как композитный трансплантат. Гиперплазию неоинтимы на дистальном анастамозе можно уменьшить введением сегмента вены либо как манжеты Миллара, либо как лоскута Тейлора с целью увеличения срока существования трансплантатов в открытом состоянии.
Самые распространенные осложнения, связанные с использованием сосудистых трансплантатов, включают окклюзию трансплантата, инфекцию транплантата, истинный и ложный аневризмы в области анастамоза, дистальную эмболизацию и эрозию в прилежащих структурах, например аортокишечную фистулу. Многие из данных состояний связаны с воспалительной реакцией, миграцией макрофагов с областью и/или образованием молекул реакционного кислорода (например, окисленных липидов). Для уменьшения данных осложнений трансплантат (синтетический или биологический) может быть пропитан или иным образом покрыт одним или более активными агентами, описанными в данном контексте.
Кроме того, следует учитывать, что другие имплантируемые ткани или материалы могут быть аналогичным образом пропитаны или покрыты одним или более активными агентами, соответствующими данному изобретению. Так, например, в некоторых вариантах осуществления данное изобретение предусматривает применение пропитанных нитей для сведения к минимуму воспаления, и/или инфекции, и/или отторжения ткани.
3. Подкожные матрицы.
В некоторых вариантах осуществления один или более активных агентов, описанных в данном контексте, вводят в виде монотерапии или в комбинации с другими терапевтическими средствами, как описано в данном контексте, в имплантируемых (например, подкожных) матрицах.
Главная проблема со стандартным дозированием лекарственных средств состоит в том, что обычная доставка лекарственных средств приводит к быстрому выбросу лекарства во время дозирования с последующим быстрым выведением лекарственного средства из организма. Большинство побочных эффектов лекарственного средства проявляются во время фазы выброса при его высвобождении в кровотоке. Во-вторых, период, в течение которого лекарственное средство находится в кровотоке на терапевтических уровнях очень короткий, большинство средств используются и выводятся в течение короткого выброса.
Лекарственные средства (например, активные агенты, описанные в данном контексте), погруженные в различные материалы матриц для замедленного высвобождения, дают возможность решить данные проблемы. Лекарственные средства, погруженные, например, в полимерные гранулы или полимерные пластинки, имеют ряд преимуществ. Во-первых, большинство систем обеспечивает медленное высвобождение лекарственного средства, создавая, таким образом, постоянное выделение в организм доз, дающих низкие уровни лекарственного средства. Это, как правило, предупреждает побочные эффекты, ассоциированные с высокими уровнями выбросов нормальных инъекционных или имеющих в основе пилюли лекарственных средств. Во-вторых, поскольку данные полимеры можно сделать так, чтобы высвобождение происходило в течение часов-месяцев, период терапевтического действия лекарственного
- 62 012440 средства заметно увеличивается. Часто путем смешивания одних и тех же компонентов полимера в различных соотношениях можно получить полимеры с различными скоростями разложения, обеспечивая значительную гибкость в зависимости от используемого агента. Низкая скорость высвобождения лекарственного средства предпочтительна для людей, которые испытывали бы неудобство, пользуясь схемой регулярного дозирования, такие как пожилые люди, но это также является усовершенствованием, обеспечивающим легкость применения, которое может оценить каждый. Большинство полимеров можно сделать так, чтобы они разлагались и выводились организмом в течение времени, чтобы они не оставались в организме после терапевтического периода.
Другое преимущество доставки лекарственного средства на основе полимера состоит в том, что полимеры часто могут стабилизировать или солюбилизировать белки, пептиды и другие большие молекулы, которые были бы в ином случае непригодны для применения в качестве лекарственных средств. Наконец, многие смеси лекарственное средство/полимер можно помещать непосредственно в область заболевания, обеспечивая специфическую направленность лекарственного средства, когда это требуется без потери эффекта первого прохождения лекарственного средства. Это безусловно эффективно для лечения головного мозга, в который часто не проходят лекарственные средства, которые не могут преодолеть гематоэнцефалический барьер.
Ряд систем имплантируемых матриц (замедленное высвобождение) известен компетентным специалистам и легко может быть адаптирован для применения с одним или более активными агентами, описанными в данном контексте. Подходящие системы с замедленным высвобождением включают, но без ограничения перечисленным Ке-Ое1®, δ^2Οе1® и Ο1^βΟ5ρΗе^е® фирмы Μас^оΜеά, РгоЬеаке® и Μеά^5Ο^Ь® фирмы Α1ке^те5, Расйтег®п О11айе1® ХУаГег фирмы ОийГогй РкагтасеиЕсак, имплантат Эигок фирмы Α1ζφ акустические биосферы фирмы Рот! Вютейюа1, капсулу 1п!екйе фирмы δс^ηί^ρйа^та, 1пс. и т.п.
4. Другие специальные системы доставки.
Другие специальные системы доставки включают, но без ограничения перечисленным аэрозоль для полости рта на липидной основе, который обеспечивает всасывание лекарственных средств через слизистые оболочки полости рта, разработанный фирмой Оепегех Вю!есйпо1оду, пероральную систему всасывания через слизистую оболочку (ΟΤδ™) фирмы Α^δίΗ Согр., ингаляционный сухой порошок и технологию пульмосфер 1пЪа1е ^етареийся, систему легочной доставки лекарственных средств ΑΕΚχΚ фирмы Αιπάί^, механизм ΑΙΚ фирмы Л1ке^те8 и т.п.
Другой подход к доставке, разработанный фирмой Л1ке^те8. представляет собой систему, направленную на применение в геронтологии и педиатрии, среди двух групп, для которых прием пилюль часто осложен, которая известна как метод приема лекарственного средства маленькими глотками (ΌδΤ). Лекарство помещают в устройство в виде соломинки для питья, предохраняемое от падения фильтрами на обоих концах. Пациент просто должен пить прозрачную жидкость (воду, сок, газированный напиток) через соломинку. Лекарственное средство растворяется в жидкости, когда она проходит через него, и поглощается пациентом. Фильт поднимается к верхней части соломинки, когда используется все лекарство. Преимущество данного метода состоит в том, что его легко использовать, жидкость часто маскирует вкус лекарственного средства и лекарственное средство предварительно растворяется для более эффективного всасывания.
Следует отметить, что данные варианты применения и системы доставки предназначены для иллюстрации, а не ограничения. При использовании представленных в данном контексте описаний компетентным специалистам в области техники будут известны другие варианты применения и системы доставки.
νΙ. Дополнительные фармакологически активные агенты.
Комбинированные активные агенты.
В различных вариантах осуществления предусматривают применение комбинаций из двух или более активных описанных агентов при лечении различных патологий/показаний, описанных в данном контексте. Применение комбинаций активных агентов может изменить фармакологическую активность, биодоступность и т.п.
В порядке иллюстрации отмечают, что Ό-4Ε быстро связывается с пре-в-ЛВП и ЛВП и затем быстро выводится из кровотока (он практически не определяется через 6 ч после пероральной дозы), тогда как О-[113-122]аро1 медленно связывается с пре-в-ЛВП и в меньшей степени с ЛВП, но остается связанным с данными фракциями ЛВП в течение по меньшей мере 36 ч. ΕΡΕΕ связывается с ЛВП, и только ЛВП, но остается определяемым в ЛВП значительно дольше, чем Ό-4Ε (т.е. он определяется в ЛВП через 48 ч после однократной пероральной дозы у мышей). В некоторых вариантах осуществления данное изобретение таким образом представляет комбинации, например, данных трех пептидов для уменьшения количества, для снижения стоимости продукции и/или для оптимизации схемы дозирования, терапевтического профиля и т. п. В некоторых вариантах осуществления комбинации активных агентов, описанных в данном контексте, можно просто совместно ввести и/или добавить вместе с получением одного фармацевтического средства. В некоторых вариантах осуществления различные активные агенты могут быть
- 63 012440 комплексированы друг с другом (например. посредством связывания водорода) с образованием комплексов активных агентов. которые более эффективны. чем исходные агенты.
Использование дополнительных фармакологически активных материалов.
Дополнительные фармакологически активные материалы (т. е. лекарственные средства) можно доставить в сочетании с одним или более активных агентов. описанных в данном контексте. В ряде вариантов осуществления данные агенты включают. но без ограничения перечисленным. агенты. которые снижают риск атеросклеротических явлений и/или их осложнений. Данные агенты включают. но без ограничения перечисленным. β-блокаторы. комбинации β-блокаторов и тиазидных диуретиков. статины. аспирин. ингибиторы асе. ингибиторы рецепторов асе (АЯВ) и т.п.
Обнаружено. что добавление низкой дозы активного агента (например. Ό-4Ρ) (1 мкг/мл) в питьевую воду мышей с отсутствием ароЕ в течение 24 ч не улучшает в существенной степени функцию ЛВП (см.. например. родственную заявку υδδΝ 10/423830. поданную 25 апреля 2003 г.. которая включена в данном контексте в виде ссылки). Кроме того. добавление 0.05 мг/мл аторвастатина или правастатина в виде монотерапии в питьевую воду мышей с отсутствием ароЕ в течение 24 ч не улучшает функцию ЛВП. Однако. когда 1 мкг/мл Ό-4Ρ добавляют в питьевую воду вместе в 0.05 мг/мл аторвастатина или правастатина. имеется существенное улучшение функции ЛВП. В действительности провоспалительный ЛВП мышей с отсутствием ароЕ становится противовоспалительным как 350 мкг/мл нормального ЛВП человека (Р. ЛВП см.. например. родственную заявку υδδΝ 10/423830).
Таким образом дозы Ό-4Ρ в виде монотерапии или статинов в виде монотерапии. которые сами по себе не обладают эффектом в отношении функции ЛВП. при совместном применении действуют синергически. Когда Ό-4Ρ и статин совместно дают мышам с отсутствием ароЕ. их провоспалительный ЛВП в концентрации 50 мкг/мл ЛВП-холестерина становится таким же эффективным. как нормальный человеческий ЛВП в концентрации 350 мкг/мл ЛВП-холестерина в плане предотвращения воспалительной реакции. индуцируемой действием ΗΡΘΌΕ при окислении РАРС в сокультурах клеток стенки артерии человека.
Так. в некоторых вариантах осуществления данное изобретение представляет способы повышения активности статинов. Способы. как правило. включают введение одного или более активных агентов. описанных в данном контексте. в сочетании. как описано в данном контексте. с одним или более статинов. Активные агенты достигают синергического действия статина и агента(ов) в плане облегчения одного или более симптомов атеросклероза. В данном контексте статины можно вводить в существенно более низких дозах. избегая тем самым различных побочных эффектов (например. ослабления мышц). ассоциированных с использованием статинов в высоких дозах. и/или существенного повышения противовоспалительных свойств статинов в любой заданной дозе.
Подходящие статины включают. но без ограничения перечисленным. правастатин (Праваксол/Вп81о1-Муег8 8ди1ЬЬ). симвастатин (Зокор/Мегск). ловастатин (Мевакор/Мегск) и т.п.
В различных вариантах осуществления активный агент(ы). описанный в данном контексте. вводят в сочетании с одним или более β-блокаторов.
Подходящие β-блокаторы включают. но без ограничения перечисленным. кардиоселективные средства (селективные β-1-блокаторы). например ацебутолол (Сектрал™). атенолол (Тенормин™). бетаксолол (Керлон™). бисопролол (Цебета™). метопролол (Лопрессор™) и т.п. Подходящие неселективные блокаторы (в равной степени блокируют β1 и β2) включают. но без ограничения перечисленным. картеолол (Картрол™). надолол (Коргард™). пенбутолол (Леватол™). пиндолол (Вискен™). пропранолол (Индерал™). тимолол (Блокадрен™). лабеталол (Нормодин™. Трандат™) и т.п.
Подходящие комбинации β-блокатора и диуретика тиазида включают. но без ограничения перечисленным. Лопрессол НСТ. ΖΙΛΟ. Теноретик. Корзид. Тимолид. Индерал ЬА 40/25. Индерид. Нормозид и т. п.
Подходящие ингибиторы все включают. но без ограничения перечисленным. каптоприл (например. Капотен™ фирмы 8ди1ЬЬ). беназеприл (например. Лотензин™ фирмы ΝοναΟίδ). эналаприл (например. Вазотек™ фирмы Мегск). фосиноприл (например. Моноприл™ фирмы Вг181о1-Муег8). лизиноприл (например. Принивил™ фирмы Мегск или Зестрил™ фирмы АзЯа^епеса). квинаприл (например. Аккуприл™ фирмы Рагке-Эау18). рамиприл (например. Алтак™ фирмы НоесРз! Мапои Яои88е1. Ктд РРагтасеиБсак). имидаприл. периндоприл. эрбумин (например. Ацеон™ фирмы ЯРопе-Ро1епс Яогег). трандолаприл (например. Мавик™ фирмы Кпо11 РРагтасеиБса1) и т. п. Подходящие АЯВ8 (Блокаторы рецептора Асе) включают. но без ограничения перечисленным. лосартан (например. Козаар™ Фирмы Мегск). ирбесартан (например. Авапро фирмы 8апой). кандесартан (например. Атаканд фирмы Аз1га Мегск). валсартан (например. Диован™ фирмы №уаг1к) и т.п.
В различных вариантах осуществления один или более агентов. описанных в данном контексте. вводят с одним или более лекарственных средств. перечисленных ниже.
Так. в некоторых вариантах осуществления один или более активных агентов вводят в сочетании с ингибиторами белка переноса холестерилового эфира (СЕТР) (например. торсетрапибом. РГТ-705. СР529414) и/или ингибиторами ацил-СоА:холестерин О-ацилтрансферазы (АСАТ) (например. авасимибом
- 64 012440 (С1-1011), СР 113818, Р-1394 и т.п.) и/или иммуномодуляторами (например, РТУ720 (агонистом рецептора сфингозин-1-фосфата), таломидом (талидомидом), имураном (азатиоприном), копаксоном (глатимерацетатом), Сегйсап® (эверолимусом), №ογ;ι1® (циклоспорином) и т.п.) и/или ингибиторами дипептидилпептидазы-4 (ЭРР4) (например, 2-пирролидинкарбонитрилом, 1-[[[2-[(5-циано-2-пиридинил)амино] этил] амино] ацетилом], см. также патентную публикацию США 2005-0070530) и/или блокаторами кальциевых каналов (например, адалат, адалат СС, калан, калан 8К, карден, кардицем, кардицем СО, кардицем δΡ, дилакор-XЯ, динацирк, изоптин, изоптин δΡ, нимотоп, норваск, плендил, прокардиа, прокардиа ΥΠ васкор, верелан) и/или агонисты активируемого пролифератором пероксисом рецептора (РРАК) для, например, α-, γ-, δ-рецептором (например, азелаоил РАР, 2-бромгексадекановая кислота, циглитизон, клофибрат, 15-дезокси^12,14-простагландин 12, фенофибрат, Ртοс-^еи-ОН, СV1929, СV7647, 8(δ)гидрокси-(5Ζ,9Ε,IIΖ,14Ζ)-эйкозатетраеновая кислота (8(8)-НЕТЕ), лейкотриен В4, ЬУ-171883 (томелакаст), простагландин А2, простагландин 12, тетрадецилтиоуксусная кислота (ТТА), троглитазон (С8-045), νΥ-14643 (пириниксовая кислота)) и т.п.
В некоторых вариантах осуществления один или более активных агентов вводят в сочетании с фибратами (например, клофибрат (атромид), гемфиброцил (лопид), фенофибрат (трикор) и т.п.), связывающие агенты на основе желчных кислот (например, холестриамид, колестипол и т.п.), блокаторы всасывания холестерина (например, эцетимиб (Цетиа) и т.п.), виторин (комбинация эцетимиба/симвастатина) и/или стероиды, варфарин и/или аспирин и/или ингибиторы/антагонисты Всг-АЬ1 (например, гливек (иматиниб мезилат), АММ107, 8Т1571 (ССР57148В), ОN 012380, Р^X225 и т.п.) и/или блокаторы пути ренин-ангиотензина (например, лосартан (Козаар®), валсартан (ОЮ'ап®), ирбесартан (Ανаρ^ο®), кандесартан (А1асанб®) и т.п.) и/или агонисты рецептора ангиотензина II (например, лосартан (Козаар), валсартан (ОЮ'ап), ирбесартан (Ανаρ^ο), кандесартан (А!асапб) и телмисартан (Μ^са^б^κ) и т.п.) и/или ингибиторы РКС (например, калфостин С, хелеритрин хлорид хелеритрин, хлорид, Си-бис-3,5диизопропилсалицилат, эбселен, рецетор ЕСР (фактора роста эритроцитов) (человеческий) (651-658) (Νмиристоилированный), 6ο 6976, Н-7 дигидрохлорид, 1-О-гексадецил-2-О-метил-гас-глицерин, гексадецил-фосфохолин (С16:0); милтефозин, гиперицин, мелиттин (натуральный), меллитин (синтетический), ΜΕ-7, гидрохлорид, ΜΕ-9, гидрохлорид, пальмитоил-ЭЬ-карнитин, гидрохлорид, протеинкиназа С (1931), протеинкиназа С (19-36), кверцетин дигидрат, Ό-эритросфингозин (выделенный), Ό-эритросфингозин (синтетический), сфингозин, Ν,Ν-диметил, Ό-эритросфингозина хлорид, Ν,Ν,Νтриметилстауроспорин, бизиндолилмалеимид I, С-6203 и т.п.).
В некоторых вариантах осуществления один или более активных агентов вводят в сочетании с ΑροΑ1, производными и/или агонистами АроА-1 (например, ΑροΑ1 милано, см., например, патентные публикации США 20050004082, 20040224011, 20040198662, 20040181034, 20040122091, 20040082548, 20040029807, 20030149094, 20030125559, 20030109442, 20030065195, 20030008827 и 20020071862, а также патенты США 6831105, 6790953, 6773719, 6713507, 6703422, 6699910, 6680203, 6673780, 6646170, 6617134, 6559284, 6506879, 6506799, 6459003, 6423830, 6410802, 6376464, 6367479, 6329341, 6287590, 6090921, 5990081 и т.п.), ингибиторами ренина (например, 8РР630 и 8РР635, 8РР100, алискиреном и т.п.) и/или антагонистом ΜΚ (например, спиронолактоном, альдостеронглюкуронидом и т.п.) и/или ингибиторами альдостеронсинтазы и/или α-адренергическими антагонистами (например, А^те!® (метилдопой), Сагбига® (доксацозином), Сакфгек®; Саιаρ^еκ-ΤΤ8®; ^и^ас1οнΤΜ (клонидином), П1Ьепгу1те® (феноксибензамином), Нукх^® (Гуанадрелом), Ну1пп® (терацозином), ΜίιηρίΌΚΚ® (працозином), Тепех® (гуанфацином), гуанабенцем, фентоламином, резерпином и т.п.) и/или агонистами печеночного рецептора X (ΈΚΡ) (например, Т0901317, СV3965, АТЕ829, ацетил-подокарпического димера (АРЭ) и т.п.) и/или агонистами рецептора фарнесоида Х (например, 6ν4064, 6а-этил-хенодезоксихолевой кислотой (6-ЕСЭСА), Т0901317 и т.п.) и/или ингибиторами активатора плазминогена-1 (РАН) (см., например, ингибиторов РАЕН на основе оксима, см. также патент США 5639726 и т.п.) и/или низкомолекулярным гепарином и/или ингибиторами/агентами, расщепляющими АСЕ (например, бенфотиамином, аминогуанидином, пиридоксамином, тенилсетамом, пимаджедином и т.п.) и/или блокаторами рецептора АЭР (например, клопидогрелом, ΑΖ^6140 и т.п.) и/или агонистами ΑΒСΑI и/или агонистами фагоцитарного рецептора В1 и/или агонистом адипонектинового рецептора или индукторов адипонектина и/или ингибиторами стеароил-СоА-десатуразы I (80Ό1) и/или ингибиторами синтеза холестерина (нестатинами) и/или ингибиторами диацилглицеролацилтрансферазы I (ПСАН) и/или ингибиторами ацетил-СоАкарбоксилазы 2 и/или ингибиторами ЬР-РЬА2 и/или СЕРП и/или активатором глюкокиназы и/или агонистами СВ4 и/или антитромботическими агентами/свертывающими агентами и/или ингибиторами фактора Ха и/или ингибиторами СРПЬ/Ша и/или ингибиторами фактора УПа и/или ингибиторами тканевого фактора и/или противовоспалительными лекарственными средствами и/или пробуколом и производными (например АСЫ067 и т.п.) и/или антагонистами ССР2 и/или антагонистами 0X30^1 и/или антагонистами ГС-1 и/или нитратами и донорами NО и/или ингибиторами фосфодиэстеразы и т.п.
IX. Наборы для облегчения одного или более симптомов.
В другом варианте осуществления данное изобретение представляет наборы для облегчения одного или более симптомов атеросклероза или для профилактического лечения пациента (человека или живот
- 65 012440 ного) с риском развития атеросклероза или для лечения либо профилактики одного или более других состояний, описанных в данном контексте. Предпочтительно, когда наборы включают контейнер, содержащий один или более активных агентов, описанных в данном контексте. Активный агент(ы) может быть представлен в дозированной лекарственной форме (например, суппозитории, таблетке, таблетке в виде капсулы, пластыре и т.п.) и/или могут быть необязательно скомбинированы с одним или более фармацевтически приемлемых наполнителей.
Набор может необязательно дополнительно включать один или более других агентов, используемых при лечении состояния/патологии, представляющих интерес. Данные агенты включают, но без ограничения перечисленным, β-блокаторы, вазодилататоры, аспирин, статины, ингибиторы асе или ингибиторы рецепторов асе (АКБ) и т.п., например, как описано выше.
Кроме того, наборы необязательно включают этикетки и/или инструкционные материалы, представляющие указания (т.е. протоколы) по практической реализации способов или применения терапевтических средств или профилактических средств, соответствующих данному изобретению. Предпочтительные инструкционные материалы описывают применение одного или более полипептидов, соответствующих данному изобретению, для ослабления одного или более симптомов атеросклероза (или других патологий, описанных в данном контексте) и/или предупреждения возникновения или усиления одного или более данных симптомов у пациента с риском развития атеросклероза (или других патологий, описанных в данном контексте). В инструкционных материалах могут быть также необязательно описаны предпочтительные дозы/терапевтическая схема, противопоказания и т. п.
Хотя инструкционные материалы, как правило, включают написанные или напечатанные материалы, они ими не ограничены. Любой носитель, способный хранить данные инструкции и связывать с ними конечного пользователя, предусмотрен данным изобретением. Данный носитель включают, но без ограничения перечисленным, электронные носители информации (например, магнитные диски, кассеты, картриджи, чипы), оптические носители (например, компакт-диски) и т.п. Данные средства могут включать адреса сайтов Интернета, которые представляют данные инструкционные материалы.
Примеры
Следующие примеры предлагают для иллюстрации, но не ограничения заявленного изобретения. Пример 1. Применение пептидов, близких Аро1, для опосредования симптомов атеросклероза. Предупреждение ЛНП-индуцированной активности хемотаксиса моноцитов.
На фиг. 1 проиллюстрировано сравнение влияния Ό-4Ε (см. Апап1йагата1ай е1 а1. (2002) С1гси1а1юп, 105: 290-292) с влиянием пептида аро1, полученного из Ό-аминокислот (Ό-1336, Ас-Ь-Ь-Е-Р-Ь-Ν-Ε-Ρ-ΕΝ-ν-ν-8-Κ-Ε-Α-Ν-Ε-Τ-Ρ-6-Ε-ΝΗ2, 8ЕО Ш ΝΟ: 1129) на предупреждение ЛНП-индуцированной активности хемотаксиса моноцитов ш νίΐΐΌ при совместном инкубировании. Эндотелиальные клетки аорты человека инкубируют только со средой (без добавлений), с контрольным человеческим ЛНП (200 мкг белка/мл) или контрольным человеческим ЛНП вместе с контрольным человеческим ЛВП (350 мкг белка ЛВП/мл). Ό-1336 или Ό-4Ε добавляют в другие лунки в интервале концентраций, как указано, вместе с контрольным человеческим ЛНП (200 мкг белка/мл). После инкубирования в течение ночи проводят анализ супернатантов на активность хемотаксиса моноцитов. Как показано на фиг. 1, концентрация ш νΐΐΐΌ варианта пептида аро1, которая предупреждает ЛНП-индуцированную активность хемотаксиса моноцитов человеческими клетками стенки артерии, составляет в 10-25 раз меньше, чем концентрация, требующаяся для пептида Ό-4Ε.
Предупреждение ЛНП-индуцированной активности хемотаксиса моноцитов посредством предварительной обработки клеток стенки артерии Ό-1336.
На фиг. 2 проиллюстрировано сравнение эффекта Ό-4Ε с эффектом Ό-1336 на предупреждение ЛНП-индуцированной активности хемотаксиса моноцитов при предварительном инкубировании. Эндотелиальные клетки аорты человека предварительно инкубируют с Ό-1336 или Ό-4Ε в концентрации 4, 2 и 1 мкг/мл для Ό1336 или 100, 50, 25 и 12,5 мкг/мл для Ό-4Ε в течение 6 ч. Затем культуры промывают и инкубируют только со средой (без добавлений) или с контрольным человеческим ЛНП (200 мкг белка/мл) или с контрольным человеческим ЛНП вместе с контрольным человеческим ЛВП (350 мкг белка ЛВП/мл) в качестве контролей анализа. В лунки, предварительно обработанные пептидами, вносят контрольный человеческий ЛНП в концентрации 200 мкг белка/мл. После инкубирования в течение ночи супернатанты анализируют на хемотаксическую активность моноцитов.
Как показано на фиг. 2, вариант пептида Аро1 является в 10-25 раз более активным в предотвращении окисления ЛНП клетками стенки артерии ш νίΙΐΌ.
Влияние миметиков пептида аро1 на защитную способность ЛВП у мышей с отсутствием рецептора ЛНП.
Ό-4Ε, обозначаемый как Р, или пептид аро1, полученный из Ό-аминокислот (Ό-1336, обозначаемый как 1), добавляют в питьевую воду мышей с отсутствием рецептора ЛНП (4/группу) в концентрациях 0,25 или 0,5 мг/мл питьевой воды. Через 24 или 48 ч у мышей берут кровь и выделяют их ЛВП и тестируют на способность защищать от ЛНП-индуцированной активности хемотаксиса моноцитов. Контроли анализов включают лунки с культурой, в которые не вводят липопротеины (без добавления), или вводят контрольный человеческий ЛНП в виде монокомпонента (обозначают как ЛНП, 200 мкг холестери
- 66 012440 на/мл), или контрольный ЛНП + контрольный человеческий ЛВП (обозначают как + ЛВП, 350 мкг ЛВП холестерина). Для тестирования мышиного ЛВП в культуры клеток стенки артерии добавляют контрольный ЛНП вместе с мышиным ЛВП (+Ρ ЛВП или +1 ЛВП). Мышиный ЛВП добавляют в концентрации 100 мкг холестерина/мл соответственно. После обработки либо Ό-4Ρ, либо Ό-Ι336 мышиный ЛВП в концентрации 100 мкг/мл обладает такой же активностью, как контрольный человеческий ЛВП в концентрации 350 мкг/мл в плане предупреждения индукции контрольным ЛНП продукции клетками стенки артерии активности хемотаксиса моноцитов. Причина разницы между относительными дозами, требующимися для пептида Ό-Ι336, сравнительно с Ό-4Ρ ш т11го и ш т1то может быть связана с растворимостью пептидов в воде, и авторы заявки считают, что, если провести измерения при достижении одинаковой растворимости, пептиды Ό-Ι будут значительно более активны т1то, так же, как ш νίΙΐΌ.
Защита от ЛНП-индуцированной активности хемотаксиса моноцитов с помощью ЛВП, выделенного у мышей с отсутствием ароЕ, получающих пероральные пептиды.
На фиг. 4 показано влияние перорального миметика пептида ароАЛ и пептида аро1 на защитную способность ЛВП. Мыши с отсутствием АроЕ (4/группу) получают Ό-4Ρ (обозначают как Ρ) в концентрациях 50, 30, 20, 10, 5 мг/мл питьевой воды или пептид аро1 (обозначают как I) в концентрациях 50, 30 или 20 мг/мл питьевой воды. Через 24 ч собирают кровь, фракционируют плазму с помощью РРЬС, и фракции, содержащие ЛНП (мышиный ЛНП обозначают как мЛНП), и фракции, содержащие ЛВП (обозначают как мЛВП), раздельно объединяют и определяют защитную способность ЛВП в отношении окисления ЛНП, как устанавливают по ЛНП-индуцированной активности хемотаксиса моноцитов. В контролях анализа в лунки с культурой не вносят липопротеины (без добавлений), вносят мЛНП в виде монокомпонента (в концентрации 200 мкг холестерина/мл) или мЛНП + стандартный нормальный человеческий ЛВП (обозначают как Конт. чЛВП, в концентрации 350 мкг ЛВП холестерина/мл).
Для тестирования мышиного ЛВП, мЛНП вместе с мышиным ЛВП (+Ρ мЛВП или +1 мЛВП) добавляют в культуры клеток стенки артерии. ЛВП, выделенный у мышей, которые не получают никакого пептида в питьевой воде, обозначают как мЛВП без пептида. Мышиный ЛВП используют в концентрации 100 мкг холестерина/мл. После получения Ό-4Ρ или ЭЛ336 мышиный ЛВП в концентрации 100 мкг/мл так же активен, как нормальный человеческий ЛВП в концентрации 350 мкг/мл. Как показано на фиг. 4, при добавлении в питьевую воду пептид ЭЛ так же активен, как Ό-4Ρ в плане повышения защитной способности ЛВП у мышей с отсутствием ароЕ.
Способность ЛНП, выделенного у мышей с отсутствием ароЕ, получающих пероральные пептиды, индуцировать активность хемотаксиса моноцитов.
На фиг. 5 показано влияние перорального миметика пептида ароА-1 и пептида аро1 на чувствительность ЛНП к окислению. Мыши с отсутствием АроЕ (4/группу) получают в питьевой воде Ό-4Ρ (обозначают как Ρ) в концентрациях 50, 30, 20, 10, 5 мг/мл питьевой воды или пептид аро1 (Ό-Ι336, получают из Ό-аминокислот и обозначают как I) в концентрациях 50, 30 или 20 мг/мл питьевой воды. Через 24 ч собирают кровь у мышей, показанных на фиг. 4, фракционируют плазму с помощью ΡΡ^С, и фракции, содержащие ЛНП (мышиный ЛНП обозначают как мЛНП), объединяют и определяют чувствительность ЛНП к окислению, как устанавливают по ЛНП-индуцированной активности хемотаксиса моноцитов. В контролях анализа в лунки с культурой не вносят липопротеины (без добавлений), вносят мЛНП в виде монокомпонента (в концентрации 200 мкг холестерина/мл) или мЛНП + стандартный нормальный человеческий ЛВП (обозначают как Конт. чЛВП, в концентрации 350 мкг ЛВП холестерина/мл).
Мышиный ЛНП, мЛНП, выделенный у мышей, получающих Ό-4Ρ (Ρ мЛНП) или тех, которые получают пептид аро1 (I мЛНП), добавляют в культуры клеток стенки артерии. ЛНП, выделенный у мышей, которые не получают никакого пептида в питьевой воде, обозначают как ЛНП без пептида.
Как показано на фиг. 5, при добавлении в питьевую воду ЭЛ336 немного более активен, чем Ό-4Ρ в плане превращения ЛНП, выделенного у мышей с отсутствием ароЕ, устойчивым к окислению человеческими клетками стенки артерии, как устанавливают по индукции активности хемотаксиса моноцитов.
Защита от окисления фосфолипидов и индукции активности хемотаксиса моноцитов с помощью ЛВП, полученного у мышей с отсутствием ароЕ, получающих пероральные пептиды.
На фиг. 6 показано влияние перорального миметика пептида ароА-1 и пептида аро1 на защитную способность ЛВП. Мыши с отсутствием АроЕ (4/группу) получают в питьевой воде Ό-4Ρ (обозначают как Ρ) в концентрациях 50, 30, 20, 10, 5 мг/мл питьевой воды или пептид аро1 (Ό-Ι336, получают из Όаминокислот и обозначают как I) в концентрациях 50, 30 или 20 мг/мл питьевой воды. Через 24 ч у мышей собирают кровь, фракционируют плазму с помощью ΡΡ^С, и фракции, содержащие ЛВП (обозначают как мЛВП), объединяют и определяют защитную способность ЛВП к окислению РАРС, как устанавливают по индукции активности хемотаксиса моноцитов. Для контроля анализа в лунки с культурой не вносят липопротеины (без добавлений), вносят фосфолипид РАРС в концентрации 20 мкг/мл + НРОЭЕ в концентрации 1,0 мкг/мл или РАРС+НРОЭЕ + стандартный нормальный человеческий ЛВП (в концентрации 350 мкг ЛВП холестерина/мл и обозначают как Конт. чЛВП).
Для тестирования мышиного ЛВП, РАРС+НРОЭЕ совместно в мышиным ЛВП (+Ρ мЛВП или +1 мЛВП) добавляют к культуры клеток стенки артерии. ЛВП, полученный от мышей, которые не получают никакого пептида в питьевой воде, обозначают как мЛВП без пептида. Мышиный ЛВП используют в
- 67 012440 концентрации 100 мкг холестерина/мл.
Данные, представленные на фиг. 6, показано, что при добавлении в питьевую воду Ό-Ι336 настолько же активен, как О-4Р, вызывая ингибирование посредством ЛВП окисления фосфолипида РАРС окислителем НРОЭЕ в совместной культуре человеческой стенки артерии, как измеряют по генерации активности хемотаксиса моноцитов.
Влияние перорального миметика пептида ароА-1 и пептида ароб на активность параоксоназы в плазме у мышей.
На фиг. 7 показано влияние перорального миметика пептида ароА-1 и пептида ароб на активность параоксоназы в плазме у мышей. Мыши с отсутствием АроЕ (4/группу) получают О-4Р, обозначаемый как Р, в концентрациях 50, 10,5 или 0 мкг/мл питьевой воды или пептид ароб (Ό-Ι336, полученный из Όаминокислот и обозначаемый как I) в концентрациях 50, 10 или 5 мкг/мл питьевой воды. Через 24 ч собирают кровь и анализируют плазму на активность РОМ. Данные результаты демонстрируют, что при добавлении в питьевую воду Ό-Ι336 по меньшей мере так же активен, как зЭ-4Е в плане повышения активности параоксоназы у мышей с отсутствием ароЕ.
Пример 2. Пероральные С* пептиды повышают защитную способность ЛВП у мышей с недостаточностью ароЕ.
Самок мышей с недостаточностью ароЕ в возрасте 4 месяцев (п=4/группу) лечат С* пептидами, имеющими следующие последовательности аминокислот. Пептид 113-122 = Ас-Ь V С К О Ь Е Е Р Ε-ΝΗ2 (8ЕС) ΙΌ 1130), пептид 336-357 = Ас-Ь Ь Е О Ь Ν Е О Р Ν А V 8 К Ь А Ν Ь Т О С Ε-ΝΗ2 (8ЕС) ГО 1131) и пептид 377-390 = Ас-Р 8 С V Т Е V V V К Ь Р Ό 8-ΝΗ2 (8ЕЕ) ГО 1132).
Каждая мышь получает 200 мкг пептида через желудочный зонд. Через 4 ч берут кровь, отделяют плазму, фракционируют липопротеины и анализируют ЛВП (в концентрации 25 мкг/мл) на защитную способность от окисления ЛНП (в концентрации 100 мкг/мл) в культурах человеческих клеток стенки артерии. Данные показаны на фиг. 8. Пептид проявляет существенную ЛНП-защищающую способность у мышей.
В другом эксперименте самок мышей с недостаточностью ароЕ в возрасте 4 месяцев (п=4/группу) лечат С* пептидом из 11 аминокислот 146-156 последовательности: Ас-Р О Т Н М Ь Ό V М О Ό-ΝΗ2 (8ЕР ГО NΟ: 1133). Мыши получают пептид в питьевой воде в указанных концентрациях (см. фиг. 9). Через 18 ч берут кровь, отделяют плазму, фракционируют липопротеины и анализируют ЛВП (в концентрации 50 мкг холестерина/мл) на защитную способность от окисления РАРС (в концентрации 25 мкг/мл)+НРООЕ (в концентрации 1,0 мкг/мл) в культурах человеческих клеток стенки артерии. Контроли анализа включают без добавлений, РАРС + НРОЭЕ и РАРС + НРОЭЕ с добавлением контрольного ЛВП (обозначают как + ЛВП). Данные представлены как среднее ± 8Ό (стандартная ошибка) числа мигрирующих моноцитов в девяти полях микроскопа под большим увеличением в культурах в трех повторностях. Звездочки показывают достоверность на уровне р<0,05 относительно контроля в виде воды (0 мкг/мл).
Пример 3. Жидкофазные химические методы синтеза пептидов.
В ряде вариантов осуществления химические методы жидкофазного синтеза представляют более экономичные средства синтеза пептидов, соответствующих данному изобретению.
До настоящего изобретения синтез, как правило, проводили, используя химические методы твердофазного синтеза. Твердофазный синтез пептидов, состоящих менее чем из 9 аминокислот значительно более экономичен, чем твердофазный синтез пептидов из более чем 9 аминокислот. Синтез пептидов из более чем 9 аминокислот приводит в результате к существенной потере материала вследствие физической диссоциации удлиняющейся цепи аминокислот со смолы. Твердофазный синтез пептидов, включающих меньше чем 9 аминокислот, значительно более экономичен, поскольку в данном случае потеря удлиняющейся цепи со смолы относительно меньше.
В ряде вариантов осуществления жидкофазный синтез работает путем превращения синтеза миметического пептида ароА-Ι из 18 аминокислот, 4Р (и других подобных пептидов) из полностью твердофазного синтеза в либо полностью жидкофазный синтез, либо в комбинацию твердофазного синтеза трех цепей, включающих, например, 6 аминокислот каждая с последующей сборкой трех цепей в растворе. Это обеспечивает значительно более экономичный общий синтез. Данный способ легко модифицировать, когда пептиды имеют длину не 18 аминокислот. Так, например, 15-мер можно синтезировать путем твердофазного синтеза трех 5-меров с последующей сборкой трех цепей в растворе. 14-мер можно синтезировать посредством твердофазного синтеза двух 5-меров и одного 4-мера с последующей сборкой трех цепей с растворе и т. п.
А) Краткое изложение протокола синтеза.
Иллюстративная схема синтеза пептида Э4Р (АсГО-А-Р-К-А-Р-УГО-КА-А-Е-К-Р-К-Е-А-Р-МН2) (8ЕР ГО NΟ: 13) приведена в табл. 20 (схема и выходы, полученные при синтезе, показаны в табл. 20).
- 68 012440
Таблица 20
Иллюстративная схема жидкофазного синтеза
Методы, используемые в синтезе О4Р
Синтез Смола Ртос-амино- кислота Связывающий агент Конечная масса смолы (г) Масса неочищенного пептида (г) Выход (%} Масса чистого пептида (мг) выход (%}
Стадийный Ршк АтЮе 6 эквивалентов нвти/новт 4 2,0 500
твердофазный (1 ммоль}
1,8 г 86 25
Стадийный Ншк АтЮе 2 эквивалента ою/новт 3,9 2,0 450
твердофазный (1 ммоль)
1,8 г 86 22,5
Связывание Втк Аггис1е нвти/новт 3,3 1.0 100
фрагментов (1 ммоль)
(6+6+6) 1,8 г 43 ,ΐθ
Синтез фрагментов Р4Е Фрагмент 1 (2ΗΝ-ΚΡΚΕΑΡ (ЗЕО Ю N0 630} на смоле ппк агп!0е (К и Е защищены соответствующим образом)
Фрагмент 2 С1-ТгТ-смол 6 эквивалентов 11 2,2 неочи-
6 остатков а (5 ммоль) нвти/новт щенный
Стадийный 6,5 г защищенный
твердофазный
Ртос-¥(Ви1}-й(Ви1}-К(Вос)-у-А-Е(Ви1)-СООН (5ЕО ίϋ N0:1135)
Фрагмент 2 6 С1-ТгТ-смол 6 эквивалентов НВТи/НОВТ 10 1,8 неочи-
остатков а (5 ммоль) щенный
Стадийный 6,5 г защищенный
твердофазный 32 Ас-0(ВШ}-«/-Р-К(Вос)-А-Р-СО0Н (ЗЕО Ю N0:1136)
Синтез в жидкой фазе с использованием фрагментов, полученных твердофазным методом.
Фрагмент 1 Смола УУапд. С-концевой гексапептид (подвергнут аммонолизу}. Выход количественный. ННг-К(Вос)-Р-К(Вос)-Е(Ви1)-А-Р-Смола У/апд (5Е0 Ю N0:1137) ΝΗ2-Κ(Βοο}-Ρ-Κ(Βοο}-Ε(ΒιΛ)-Α-Ρ-00-ΝΗ2 (ЗЕО Ю N0:1138}
Фрагмент 2 из вышеописанного связывают с фрагментом 1 в ДМФ (диметилформамиде), используя ϋΙΟ/ΗΟΒΤ.
ΡΓηοο·Υ(ΒιιΙ}-0(ΒιιΙ)-Κ(Βρο}·ν·Α-Ε(ΒιιΙ)-Κ(Βοο)-Ρ-Κ(Βοο)·Ε{Βιι1}-Ε-Οο-ΝΗ2 (ЗЕО Ю ΝΟ 1139) пептид из 12 остатков характеризуют как свободный пептид после удаления защитных групп. Выход составляет 50%
Етос: из вышеописанного пептида из 12 остатков удаляют пиперидином в ДМФ (20%. После сушки пептид связывают с фрагментом 3, используя ОС1/НОВТ в ДМФ.
Ас-О(Ви0-У¥-Р-К(Вос)-А-Р-¥(Би!)-О(Ьи1)-К(Вос)-\/-А-Е(Ви1)-К(Вос)-Р-К(Вос)-Е(Ви1)-А-РСО-НН2 (ЗЕО 10 N0:1140) Защищенный пептид получают с количественным выходом Защитные группы удаляют, используя смесь ТРА (трифторуксусной кислоты) (60%}, фенола (5%), тиоанизопа (5%), воды )5%), триизопропилсилана (ΤΙ6, 5%) при перемешивании в течение 90 мин. Осаждают эфиром и очищают ВЭЖХ на колонке С-4 НР1 С. Выход составляет 25%.
В) Детали протокола синтеза.
1) Способ конденсации фрагментов для синтеза Ό-4Ρ.
Фрагменты, синтезированные для конденсации фрагментов на твердой фазе, представляют собой
- 69 012440
Фрагмент 1: Ас-О(ОВи1)-\Л/-Е-К(вВос)-А-Р-СООН (ЗЕО Ю ΝΟ: 1141);
Фрагмент 2:Етос-У(ОВи1)-0(ОВи1)-К(еВос)-7-А-Е(ОВи1)-СООН (ЗЕО Ю N0:1142) и
ФрагментЗ Ртос-К(еВос)Е-К(еВос)-Е(ОВи1)-А-Е-смолаЯ|пкатгс1е (ЗЕО Ю N0:1143).
Фрагмент 1 оставляют на смоле с целью получения конечного амида пептида после обработки ТЕА.
Для того чтобы синтезировать фрагмент 1, Ртос-РЬе (1,2 экв.) добавляют к хлортритиловой смоле (№га В1осЬет, замещение 1,3 ммоль/г, используют 5 ммоль или 6,5 г) в присутствии 6 экв. ΩΙΕΛ в ДМФ: дихлорметане (1:1) и перемешивают в течение 4 ч. Избыток функциональности на смоле закрывают метанолом в присутствии дихлорметана и Э1ЕА. После удаления Ртос- добавляют Ртоспроизводные аминокислот (2 экв.), используя реагенты НОВ1/НВТИ, как описано выше. Конечный продукт, Ртос-О(ОВи!)-^-Р-К(еВос)-А-Р-хлортритиловую смолу, обрабатывают агентом, снимающим блокирование Ртос, и ацетилируют 6 экв. уксусного ангидрида в присутствии диизопропилэтиламина. Полученный в результате продукт Ас-О(ОВи!)-^-Р-К(еВос)-А-Р-смолу обрабатывают смесью трифторэтанолуксусная кислота-дихлорметан (2:2:6, 10 мл/г смолы) в течение 4 ч при комнатной температуре. После удаления смолы фильтрованием растворитель удаляют азеотропной отгонкой с н-гексаном под вакуумом. Масс-спектральным анализом определяют, что остаток (1,8 г) представляет собой АсП(ОВи!)-^-Р-К(еВос)-А-Р-СООН (8Ер ΙΌ 1144).
Фрагмент 2, Ртос^(ОВи!)-О(ОВи!)-К(еВос)-У-А-Е(ОВи!)-СООН (8 ЕС) ΙΌ ΝΘ:1145), получают, используя способ, описанный для фрагмента 1. Конечный выход составляет 2,2 г.
Фрагмент 3. Для получения фрагмента используют 0,9 г (0,5 ммоль) смолы К1пк ат1бе (№га ВюсЬет). Смолу Кгпк ат1бе обрабатывают 20% пиперидином в дихлорметане в первый раз в течение 5 мин и во второй раз в течение 15 мин (реагенты, деблокирующие Ртос). 1,2 экв. Ртос-РЬе конденсируют, используя конденсирующие агенты НОВ1/НВТИ (2 экв. в присутствии нескольких капель диизопропилэтиламина) (конденсация аминокислот). Деблокирование и конденсацию остальных аминокислот продолжают, чтобы получить Ртос-К(еВос)Р-К(еВос)-Е(ОВи!)-А-Р-смола ппк ат1бе (8Е0 ΙΌ NО: 1146). Ртос отщепляют и смолу с пептидом К(еВос)Р-К(еВос)-Е(ОВи!)-А-Р-смола ппк ат1бе (8Е0 ΙΌ NО: 1146) используют для конденсации фрагментов, как описано ниже.
Фрагмент 2 в ДМФ добавляют к фрагменту 3 (1,2 экв.) с использованием метода НОВ!-НВТИ в присутствии Э1ЕА в течение ночи. После промывания смолы ДМФ и деблокирования Ртос- фрагмент 1 (1,2 экв.) добавляют к смоле с додекапептидом с использованием метода НОВ!-НВТИ в течение ночи.
Смолу с конечным пептидом (3,3 г) обрабатывают смесью ТРА-фенол-триизопропилсилантиоанизол-вода (80:5:5:5) в течение 1,5 ч (10 мл реагента/г смолы). Смолу отфильтровывают и раствор разводят 10 объемами эфира. Осажденный пептид выделяют центрифугированием и дважды промывают эфиром. 1 г неочищенного пептида подвергают очистке с помощью ВЭЖХ с получением 100 мг пептида.
2) Идентификация пептида.
Пептид идентифицируют масс-спектральными методами и методами аналитической ВЭЖХ.
Как показано на фиг. 16, продукт, полученный согласно схеме жидкофазного синтеза, обладает высокой биологической активностью в плане образования ЛВП и пре-в-ЛВП, которые ингибируют индуцированный ЛНП хемотаксис моноцитов у мышей с отсутствием аро Е. Мышам с отсутствием аро Е скармливают 5 мкг Ω-4Ε, синтезированного, как описано выше (фрагмент), или мышам дают такое же количество сухого корма без Э-4Р (корм). Через 12 ч после кормления у мышей берут кровь и их плазму фракционируют с помощью РРЬС. ЛНП (100 мкг ЛНП-холестерина) добавляют к сокультурам клеток стенки артерии человека в виде монокомпонента (ЛНП) или с контрольным ЛВП человека (контроль ЛВП) или с ЛВП (50 мкг ЛВП-холестерина) или пост-ЛВП (пЛВП; пре-в-ЛВП), полученного от мышей, которые получают (фрагмент) или не получают (корм) О-4Р, и определяют полученную активность хемотаксиса моноцитов.
Пример 4. Сравнение активности Э-4Р и обратного (ретро-) Э-4Р.
Как показано на фиг. 18, биологические активности Э-4Р и обратного КЭ-4Р существенно различаются. Самкам мышей с отсутствием аро Е через желудочный зонд вводят 0, 3, 6, 12 или 25 мкг Э-4Р или обратного Э-4Р в 100 мг воды. Через 7 ч получают кровь и фракционируют плазму с помощью РРЬС. Стандартный контрольный ЛНП человека добавляют к клеткам стенки артерии человека в концентрации 100 мкг ЛНП-холестерина/мл (ЛНП). Полученную в результате активность хемотаксиса моноцитов нормализуют относительно 1,0. Такой же ЛНП в той же концентрации добавляют к клеткам стенки артерии человека вместе с ЛВП в концентрации 50 мкг ЛВП-холестерина/мл, полученного от здорового человека (чЛВП) или от мышей с отсутствием аро Е, которые получают дозу Э-4Р или обратного О-4Р, как пока
- 70 012440 зано на оси X. Полученную в результате активность хемотаксиса моноцитов нормализуют относительно данного значения для ЛНП, добавленного без ЛВП. Полученное в результате значение представляет собой коэффициент воспаления ЛВП. Показанные результаты представляют собой среднее ± 8Ό для данных по трем отдельным экспериментам.
Понятно, что примеры и варианты осуществления, описанные в данном контексте, служат только для иллюстративных целей и что различные модификации или изменения в их свете будет предполагаться компетентными специалистами в области техники и должны быть включены в сущность и содержание данной заявки и объем прилагаемой формулы изобретения. Все публикации, патенты и патентные заявки, приведенные в данном контексте, включены, таким образом, в виде ссылки во всей своей полноте и для всех целей.

Claims (28)

1. Применение Ό- или Ь-пептида, включающего последовательность аминокислот или ретропоследовательность аминокислот, приведенную в таблицах описания под номерами 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 15, 16 или 18, для облегчения по меньшей мере одного симптома у млекопитающего при лечении состояния, выбранного из группы, включающей рестеноз, эмфизему, болезнь Педжета, гранулематоз Вегенера, васкулит центральной нервной системы, синдром Гужеро-Шегрена, язву роговицы, неспецифический язвенный колит, реперфузионное повреждение, ишемическое реперфузионное повреждение, рак, остеоартрит, воспалительную болезнь кишечника, аллергический ринит, кахексию, болезнь Крона, дерматит, астму, эректильную дисфункцию и дегенерацию желтого пятна.
2. Применение по п.1, в котором дерматит выбран из группы, включающей экзему, псориаз и контактный дерматит.
3. Применение по п.1, в котором рак выбран из группы, включающей миелому/множественную миелому, рак яичников, рак молочной железы, рак толстой кишки и рак костей.
4. Применение Ό- или Ь-пептида, включающего последовательность аминокислот или ретропоследовательность аминокислот, приведенную в табл. описания под номерами 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 18, для облегчения по меньшей мере одного симптома у млекопитающего при лечении состояния, выбранного из группы, включающей болезнь Паркинсона и заболевание периферических сосудов.
5. Применение по любому из пп.1-4, в котором указанный пептид включает последовательность аминокислот, выбранную из группы, включающей Ό^ΡΚΑΡΥΏΚνΑΕΚΡΚΕΑΡ (8ЕО ΙΌ N0:5) и РАЕКΡΚΕΑνΚΌΎΡΑΚΡ^Ό (81 ΐθ ΙΌ N0:104).
6. Применение по любому из пп.1-5, в котором указанный пептид дополнительно включает защитную группу, связанную с амино- или карбоксильным концом.
7. Применение по любому из пп.1-5, в котором указанный пептид дополнительно включает связанную с аминоконцом первую защитную группу и связанную с карбоксильным концом вторую защитную группу.
8. Применение по п.7, в котором первая и вторая защитные группы выбраны независимо друг от друга из группы, включающей ацетил, амид и алкильные группы из 3-20 атомов углерода, Ртос, ТЬос, 9флуоренацетильную группу, 1-флуоренкарбоксильную группу, 9-флуоренкарбоксильную группу, 9флуоренон-1-карбоксильную группу, бензилоксикарбонил, ксантил (Хап), тритил (Тй), 4-метилтритил (Мй), 4-метокситритил (Мт!), 4-метокси-2,3,6-триметилбензолсульфонил (М!г), мезитилен-2-сульфонил (М!к), 4,4-диметоксибензгидрил (МЬй), тозил (Ток), 2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-сульфонил (Ртс), 4метилбензил (МеВх1), 4-метоксибензил (Ме0Вх1), бензилоксигруппу (Βζ10), бензил (Βζ1), бензоил (Βζ), 3-нитро-2-пиридинсульфенил (Νργκ), 1-(4,4-диметил-2,6-диоксоциклогексилиден)этил (Ибе), 2,6дихлорбензил (2,6-Όία-Βζ1), 2-хлорбензилоксикарбонил (2-С1-2), 2-бромбензилоксикарбонил (2-Βγ-Ζ), бензилоксиметил ^от), трет-бутоксикарбонил Шос), циклогексилоксигруппу (сНх0), третбутоксиметил (Βαηι), трет-бутоксигруппу (Ши0), трет-бутил (Ши), ацетил (Ас) и трифторацетил (ТРА).
9. Применение по любому из пп.1-8, в котором указанный пептид включает связанную с аминоконцом защитную группу, выбранную из группы, включающей ацетил, пропеонил и алкил из 3-20 атомов углерода.
10. Применение по п.9, в котором указанный пептид включает связанную с карбоксильным концом защитную группу, представляющую собой амид.
11. Применение по п.9, в котором указанный пептид включает связанную с аминоконцом первую защитную группу, выбранную из группы, включающей ацетил, пропеонил и алкил из 3-20 атомов углерода и связанную с карбоксильным концом вторую защитную группу, представляющую собой амид.
12. Применение по любому из пп.1-11, в котором указанный пептид смешивается с фармацевтически приемлемым наполнителем.
13. Применение по п.12, в котором указанный наполнитель пригоден для перорального введения млекопитающему.
14. Применение Ό- или Ь-пептида, включающего последовательность аминокислот или ретропоследовательность аминокислот, приведенную в таблицах описания под номерами 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,
- 71 012440
10, 11, 15, 16 или 18, в качестве компонента для получения лекарственного средства для облегчения по меньшей мере одного симптома у млекопитающего при лечении состояния, выбранного из группы, включающей рестеноз, эмфизем, болезнь Педжета, гранулематоз Вегенера, васкулит центральной нервной системы, синдром Гужеро-Шегрена, язву роговицы, неспецифический язвенный колит, реперфузионное повреждение, ишемическое реперфузионное повреждение, рак, остеоартрит, воспалительную болезнь кишечника, аллергический ринит, кахексию, болезнь Крона, дерматит, астму, эректильную дисфункцию и дегенерацию желтого пятна.
15. Применение по п.14, в котором дерматит выбран из группы, включающей экзему, псориаз и контактный дерматит.
16. Применение по п.14, в котором рак выбран из группы, включающей миелому/множественную миелому, рак яичников, рак молочной железы, рак толстой кишки и рак костей.
17. Применение Ό- или Ь-пептида, включающего последовательность аминокислот или ретропоследовательность аминокислот, приведенную в табл. описания под номерами 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 18, в качестве компонента для получения лекарственного средства для облегчения по меньшей мере одного симптома у млекопитающего при лечении состояния, выбранного из группы, включающей болезнь Паркинсона и заболевание периферических сосудов.
18. Применение по любому из пп.14-17, в котором указанный пептид включает последовательность аминокислот, выбранную из группы, включающей Ό^ΕΚΑΡΥΟΚνΑΕΚΕΚΕΑΡ (δΕφ ΙΌ ΝΟ:5) и ΕΑΕΚΕΚΕΑνΚΌΥΕΑΚΡ^Ό (δΕΟ ΙΌ ΝΟ:104).
19. Применение по любому из пп.14-18, в котором указанный пептид дополнительно включает защитную группу, связанную с амино- или карбоксильным концом.
20. Применение по любому из пп.14-18, в котором указанный пептид дополнительно включает связанную с аминоконцом первую защитную группу и связанную с карбоксильным концом вторую защитную группу.
21. Применение по п.20, в котором первая и вторая защитные группы выбраны независимо друг от друга из группы, включающей ацетил, амид и алкильные группы из 3-20 атомов углерода, Εтос, ТОос, 9флуоренацетильную группу, 1-флуоренкарбоксильную группу, 9-флуоренкарбоксильную группу, 9флуоренон-1-карбоксильную группу, бензилоксикарбонил, ксантил (Хап), тритил (Τή), 4-метилтритил (Μίί), 4-метокситритил (ΜιηΙ), 4-метокси-2,3,6-триметилбензолсульфонил (Μϊγ), мезитилен-2-сульфонил (Μΐ8), 4,4-диметоксибензгидрил (ΜΝι), тозил ^ок), 2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-сульфонил (Ртс), 4метилбензил (ΜеΒζ1), 4-метоксибензил (ΜеΟΒζ1), бензилоксигруппу (Βζ1Ο), бензил (Βζ1), бензоил (Βζ), 3-нитро-2-пиридинсульфенил ^рук), 1-(4,4-диметил-2,6-диоксоциклогексилиден)этил (Ме), 2,6дихлорбензил (2,6-Όία-Βζ1), 2-хлорбензилоксикарбонил (2-С1-2), 2-бромбензилоксикарбонил (2-Βγ-Ζ), бензилоксиметил (Е1от), трет-бутоксикарбонил (Бос), циклогексилоксигруппу (οΗχΟ), третбутоксиметил (Βαηι), трет-бутоксигруппу (ίΒυΟ), трет-бутил (Ши), ацетил (Ас) и трифторацетил (ΤΕΑ).
22. Применение по любому из пп.1-21, в котором указанный пептид включает связанную с аминоконцом защитную группу, выбранную из группы, включающей ацетил, пропеонил и алкил из 3-20 атомов углерода.
23. Применение по п.22, в котором указанный пептид включает связанную с карбоксильным концом защитную группу, представляющую собой амид.
24. Применение по п.22, в котором указанный пептид включает связанную с аминоконцом первую защитную группу, выбранную из группы, включающей ацетил, пропеонил и алкил из 3-20 атомов углерода, и связанную с карбоксильным концом вторую защитную группу, представляющую собой амид.
25. Применение по любому из пп.1-24, в котором указанный пептид смешивается с фармацевтически приемлемым наполнителем.
26. Применение по п.25, в котором указанный наполнитель пригоден для перорального введения млекопитающему.
27. Композиция, включающая Ό- или Ь-пептид, включающий последовательность аминокислот или ретропоследовательность аминокислот, приведенную в таблицах описания под номерами 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 15, 16 или 18, и агент, выбранный из группы, включающей ингибитор СЕТР, ΕΤΥ720, сертикан, ингибиторы ОРР4, агонист ЬХК, агонист ΕΧΚ, агонист АВСА1, агонист СВ-1 и ингибитор ΡΚС.
28. Композиция по п.27, в которой указанный пептид включает последовательность аминокислот, выбранную из группы, включающей ^\VΕI<ЛΕΥ^I<VЛΕI<ΕI<ΕЛΕ (δΕΟ ΙΌ ΝΟ:5) и ΕЛΕΚΡΚΕΑVΚ^ΥΕΑΚΕ^Ό (δΕΟ ΙΌ ΝΟ:104).
EA200702392A 2005-04-29 2006-04-18 Пептид, композиция на его основе для лечения патологий, связанных c воспалительными процессами EA012440B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US67643105P 2005-04-29 2005-04-29
US69749505P 2005-07-07 2005-07-07
PCT/US2006/014839 WO2006118805A2 (en) 2005-04-29 2006-04-18 Peptides and peptide mimetics to treat pathologies characterized by an inflammatory response

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200702392A1 EA200702392A1 (ru) 2008-04-28
EA012440B1 true EA012440B1 (ru) 2009-10-30

Family

ID=37308461

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200702392A EA012440B1 (ru) 2005-04-29 2006-04-18 Пептид, композиция на его основе для лечения патологий, связанных c воспалительными процессами
EA200900786A EA200900786A1 (ru) 2005-04-29 2006-04-18 Пептид в качестве лекарственного средства и способ лечения патологий, связанных с воспалительными процессами, посредством пептида

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200900786A EA200900786A1 (ru) 2005-04-29 2006-04-18 Пептид в качестве лекарственного средства и способ лечения патологий, связанных с воспалительными процессами, посредством пептида

Country Status (17)

Country Link
US (1) US20100227825A1 (ru)
EP (3) EP1890715A4 (ru)
JP (1) JP2008539235A (ru)
KR (1) KR20080007491A (ru)
AU (1) AU2006242651B2 (ru)
BR (1) BRPI0610983A2 (ru)
CA (1) CA2607483A1 (ru)
EA (2) EA012440B1 (ru)
EC (1) ECSP077829A (ru)
IL (1) IL186959A0 (ru)
MA (1) MA29488B1 (ru)
MX (1) MX2007013430A (ru)
NO (1) NO20076022L (ru)
NZ (2) NZ580954A (ru)
SG (1) SG173373A1 (ru)
TN (1) TNSN07396A1 (ru)
WO (1) WO2006118805A2 (ru)

Families Citing this family (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7199102B2 (en) * 2000-08-24 2007-04-03 The Regents Of The University Of California Orally administered peptides synergize statin activity
US7723303B2 (en) * 2000-08-24 2010-05-25 The Regents Of The University Of California Peptides and peptide mimetics to treat pathologies characterized by an inflammatory response
WO2012047930A2 (en) 2010-10-04 2012-04-12 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for treatment of gynecologic cancers
KR20070089996A (ko) 2004-12-06 2007-09-04 더 리전트 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 세동맥의 구조 및 기능의 개선 방법
WO2008021088A2 (en) 2006-08-08 2008-02-21 The Regents Of The University Of Californina Salicylanilides enhance oral delivery of therapeutic peptides
AU2014200542B2 (en) * 2007-05-11 2016-08-25 Rowan University Methods of treatment and prevention of neurodegenerative diseases and disorders
KR101730290B1 (ko) * 2007-05-11 2017-04-25 토마스 제퍼슨 유니버시티 신경변성 질환 및 장애의 치료 및 예방 방법
AU2008296478B9 (en) * 2007-08-28 2015-03-19 The Uab Research Foundation Synthetic apolipoprotein E mimicking polypeptides and methods of use
US7985728B1 (en) 2007-09-20 2011-07-26 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Sustained release of Apo A-I mimetic peptides and methods of treatment
US7985727B1 (en) 2007-09-20 2011-07-26 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Apo A-I mimetic peptides and methods of treatment
US9173890B2 (en) 2007-09-20 2015-11-03 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Sustained release of Apo A-I mimetic peptides and methods of treatment
US8575107B2 (en) 2008-01-22 2013-11-05 Compugen Ltd. Clusterin derived peptide
WO2010020822A1 (en) * 2008-08-19 2010-02-25 University Of Patras Therapy for apolipoprotein-induced hypertriglyceridemia
WO2010049103A1 (en) * 2008-10-31 2010-05-06 Eth Zurich Soluble truncated apom proteins and medical uses thereof
CN102753576A (zh) * 2009-09-30 2012-10-24 首尔大学教产学协力团 载脂蛋白a-1模拟肽以及包含其的用于治疗高血脂及高血脂相关疾病的治疗剂
CA2846865A1 (en) * 2011-08-29 2013-03-07 The Regents Of The University Of California Use of hdl-related molecules to treat and prevent proinflammatory conditions
US9539300B2 (en) 2012-03-31 2017-01-10 The Regents Of The University Of California Modulating disease through genetic engineering of plants
KR102017026B1 (ko) * 2013-01-10 2019-09-02 (주) 수파드엘릭사 염증 또는 알러지의 예방 또는 치료용 약학 조성물 및 염증 또는 알러지 개선용 화장료 조성물
BR112017001860A2 (pt) 2014-07-31 2018-02-27 Uab Research Foundation peptídeo sintético, composição farmacêutica, métodos, regime de dosagem, e, anticorpo monoclonal
KR20170141692A (ko) * 2015-05-01 2017-12-26 알리스타 파마슈티컬즈, 인크. 안구 장애를 치료하기 위한 아디포넥틴 펩티드모방체
CN114621318A (zh) * 2015-05-12 2022-06-14 加利福尼亚大学董事会 用于炎症和纤维化的肽治疗
CN108778307A (zh) 2015-12-18 2018-11-09 泰伦基国际有限公司 一种预防和治疗糖尿病肾病的方法
WO2018063796A1 (en) 2016-09-28 2018-04-05 The Regents Of The University Of California Ezetimibe-associated apoa-1 mimetic peptides showing enhanced synergism
US10426817B2 (en) 2017-01-24 2019-10-01 Macregen, Inc. Treatment of age-related macular degeneration and other eye diseases with apolipoprotein mimetics
CA3075471C (en) * 2017-09-15 2024-02-20 Kine Sciences Co., Ltd. Use of peptides as therapeutic agent for autoimmune diseases and bone diseases
GB2576705A (en) * 2018-08-17 2020-03-04 E Miller Norman Improvements in or relating to organic material
CN111796098B (zh) * 2020-05-29 2021-06-01 中国科学院武汉病毒研究所 诊断新冠肺炎由重症转危重症的血浆蛋白标志物、检测试剂或检测工具

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001299364A (ja) * 1999-12-27 2001-10-30 Takeda Chem Ind Ltd 新規タンパク質およびそのｄｎａ
WO2002015923A1 (en) * 2000-08-24 2002-02-28 The Regents Of The University Of California Orally administered peptides to ameliorate atherosclerosis
US20030171277A1 (en) * 2000-08-24 2003-09-11 The Regents Of The University Of California Orally administered peptides to ameliorate atherosclerosis
JP2004067583A (ja) * 2002-08-06 2004-03-04 Sumitomo Pharmaceut Co Ltd 新規ペプチド誘導体

Family Cites Families (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US651842A (en) * 1899-08-18 1900-06-19 James Thomas Ford Friction-clutch.
US3767040A (en) 1971-03-01 1973-10-23 Minnesota Mining & Mfg Pressure-sensitive polyurethane adhesives
US4155913A (en) * 1973-02-08 1979-05-22 Hoffmann-La Roche Inc. Thienotriazolodiazepine derivatives
NO812612L (no) 1980-08-06 1982-02-08 Ferring Pharma Ltd Enzym-inhibitorer.
HU185263B (en) * 1981-06-12 1984-12-28 Richter Gedeon Vegyeszet Process for producing peptides effective on the immuncontroll analogous with the tp5
CH661438A5 (it) * 1984-04-09 1987-07-31 Seuref Ag Composizioni farmaceutiche ad azione antianossica e metabolica cerebrale.
US4643988A (en) 1984-05-15 1987-02-17 Research Corporation Amphipathic peptides
US4733665C2 (en) 1985-11-07 2002-01-29 Expandable Grafts Partnership Expandable intraluminal graft and method and apparatus for implanting an expandable intraluminal graft
US4969458A (en) 1987-07-06 1990-11-13 Medtronic, Inc. Intracoronary stent and method of simultaneous angioplasty and stent implant
NZ229004A (en) * 1988-05-19 1993-09-27 Immunobiology Res Inst Inc Tetrapeptides having t cell helper acitivity
US5480869A (en) * 1990-01-09 1996-01-02 The Regents Of The University Of California Anti-inflammatory peptide analogs and treatment to inhibit vascular leakage in injured tissues
AU662885B2 (en) * 1990-06-07 1995-09-21 Scripps Research Institute, The APO AI polypeptides, antibodies, and immunoassays
GB9022788D0 (en) 1990-10-19 1990-12-05 Cortecs Ltd Pharmaceutical formulations
SE9103701D0 (sv) 1991-12-13 1991-12-13 Kabi Pharmacia Ab Apolipoprotein
ATE171192T1 (de) * 1992-06-12 1998-10-15 Innogenetics Nv Peptide und proteine, verfahren zur ihren herstellung und die verwendung als cholesterol- annehmer
US5344822A (en) * 1992-08-12 1994-09-06 The Rogosin Institute Methods useful in endotoxin prophylaxis and therapy
WO1994004563A1 (en) * 1992-08-14 1994-03-03 Shino-Test Corporation PEPTIDES CONTAINING RESPECTIVE AMINO ACID SEQUENCES SELECTED FROM AMONG THOSE OF LIPOPROTEIN(a) AND APOLIPOPROTEIN(a), ANTIBODIES RESPECTIVELY RECOGNIZING THESE AMINO ACID SEQUENCES, AND METHOD OF ASSAYING WITH THESE ANTIBODIES
CA2150371C (en) * 1992-12-11 2002-09-17 Dov Borovsky Materials and methods for control of pests
US5721138A (en) * 1992-12-15 1998-02-24 Sandford University Apolipoprotein(A) promoter and regulatory sequence constructs and methods of use
US5746223A (en) 1996-10-11 1998-05-05 Williams; Kevin Jon Method of forcing the reverse transport of cholesterol from a body part to the liver while avoiding harmful disruptions of hepatic cholesterol homeostasis
US6773719B2 (en) 1994-03-04 2004-08-10 Esperion Luv Development, Inc. Liposomal compositions, and methods of using liposomal compositions to treat dislipidemias
US5635599A (en) * 1994-04-08 1997-06-03 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Fusion proteins comprising circularly permuted ligands
US5595973A (en) * 1994-09-12 1997-01-21 Biomeasure Incorporated Protection of hemopoietic cells during chemotherapy or radiotherapy
US5639726A (en) 1994-09-30 1997-06-17 The Regents Of The University Of Michigan Peptide mediated enhancement of thrombolysis methods and compositions
SE9500778D0 (sv) 1995-03-03 1995-03-03 Pharmacia Ab Process for producing a protein
US6717031B2 (en) * 1995-06-07 2004-04-06 Kate Dora Games Method for selecting a transgenic mouse model of alzheimer's disease
US5912014A (en) * 1996-03-15 1999-06-15 Unigene Laboratories, Inc. Oral salmon calcitonin pharmaceutical products
AU710061B2 (en) * 1996-03-29 1999-09-09 Dario Boffelli Amphipathic molecules as cholesterol and other lipid uptake inhibitors
SE9603068D0 (sv) 1996-08-23 1996-08-23 Pharmacia & Upjohn Ab Process for purifying a protein
SE9603303D0 (sv) 1996-09-11 1996-09-11 Pharmacia & Upjohn Ab Process for purifying a protein
US6555651B2 (en) * 1997-10-09 2003-04-29 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Ligand binding site of rage and uses thereof
PT1493439E (pt) * 1997-04-02 2012-01-10 Brigham & Womens Hospital Meio de avaliação do perfil de risco de um indivíduo para uma doença aterosclerótica
US6696545B1 (en) * 1997-04-11 2004-02-24 Sangstat Medical Corporation Cytomodulating lipophilic peptides for modulating immune system activity and inhibiting inflammation
US6273913B1 (en) * 1997-04-18 2001-08-14 Cordis Corporation Modified stent useful for delivery of drugs along stent strut
EP0873687B2 (fr) * 1997-04-24 2006-04-26 Chemoxal Sa Composition désinfectante et fongicide à base d'acide péracétique et d'un oxyde d'amine
US6635623B1 (en) * 1997-06-13 2003-10-21 Baylor College Of Medicine Lipoproteins as nucleic acid vectors
US6383808B1 (en) * 2000-09-11 2002-05-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibition of clusterin expression
US6046166A (en) * 1997-09-29 2000-04-04 Jean-Louis Dasseux Apolipoprotein A-I agonists and their use to treat dyslipidemic disorders
US6004925A (en) * 1997-09-29 1999-12-21 J. L. Dasseux Apolipoprotein A-I agonists and their use to treat dyslipidemic disorders
US6037323A (en) 1997-09-29 2000-03-14 Jean-Louis Dasseux Apolipoprotein A-I agonists and their use to treat dyslipidemic disorders
US6287590B1 (en) * 1997-10-02 2001-09-11 Esperion Therapeutics, Inc. Peptide/lipid complex formation by co-lyophilization
US6191151B1 (en) * 1997-11-12 2001-02-20 Howard M. Zik Therapy for herpes neurological viral conditions utilizing 1,4-dihydropyridine calcium channel blockers
US20030077641A1 (en) * 1998-03-11 2003-04-24 Laskowitz Daniel T. Methods of suppressing microglial activation and systemic inflammatory responses
US6303619B1 (en) * 1998-03-12 2001-10-16 University Of Virginia Meta-substituted acidic 8-phenylxanthine antagonists of A3 human adenosine receptors
US6846636B1 (en) * 1998-05-15 2005-01-25 American National Red Cross Methods and compositions for HDL holoparticle uptake receptor
US6019739A (en) * 1998-06-18 2000-02-01 Baxter International Inc. Minimally invasive valve annulus sizer
US6228989B1 (en) * 1998-11-13 2001-05-08 The Regents Of The University Of California Peptide substrates phosphorylated by P21-activated protein kinase
AU3116800A (en) * 1998-12-11 2000-06-26 Research Foundation Of The State University Of New York, The Compositions and methods for altering cell migration
US7544772B2 (en) * 2001-06-26 2009-06-09 Biomarck Pharmaceuticals, Ltd. Methods for regulating inflammatory mediators and peptides useful therein
EP1204626B1 (en) 1999-04-01 2008-01-16 Esperion Therapeutics Inc. Ether compounds, compositions, and uses thereof
US6849714B1 (en) * 1999-05-17 2005-02-01 Conjuchem, Inc. Protection of endogenous therapeutic peptides from peptidase activity through conjugation to blood components
US6887470B1 (en) * 1999-09-10 2005-05-03 Conjuchem, Inc. Protection of endogenous therapeutic peptides from peptidase activity through conjugation to blood components
GB9911689D0 (en) * 1999-05-19 1999-07-21 Medical Res Council Refolding method
US6727063B1 (en) * 1999-09-10 2004-04-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Single nucleotide polymorphisms in genes
CA2387799A1 (en) * 1999-11-02 2001-05-10 Human Genome Sciences, Inc. 19 human secreted proteins
US20030040505A1 (en) 2000-03-31 2003-02-27 The Regents Of The University Of California Synthetic phospholipids to ameliorate atherosclerosis and other inflammatory conditions
US6596544B1 (en) 2000-03-31 2003-07-22 The Regents Of The University Of California Functional assay of high-density lipoprotein
US6444681B1 (en) * 2000-06-09 2002-09-03 The Ohio State University Research Foundation Methods and compositions for treating Raynaud's Phenomenon and scleroderma
US6680203B2 (en) 2000-07-10 2004-01-20 Esperion Therapeutics, Inc. Fourier transform mass spectrometry of complex biological samples
DE60128475T2 (de) * 2000-07-25 2008-02-07 Merck & Co., Inc. N-substituierte indole mit anwendung in der behandlung von diabetes
US7723303B2 (en) * 2000-08-24 2010-05-25 The Regents Of The University Of California Peptides and peptide mimetics to treat pathologies characterized by an inflammatory response
US7199102B2 (en) * 2000-08-24 2007-04-03 The Regents Of The University Of California Orally administered peptides synergize statin activity
US7166578B2 (en) * 2000-08-24 2007-01-23 The Regents Of The University Of California Orally administered peptides synergize statin activity
US7148197B2 (en) 2000-08-24 2006-12-12 The Regents Of The University Of California Orally administered small peptides synergize statin activity
CA2425678A1 (en) 2000-10-11 2002-04-18 Jean-Louis H. Dasseux Sulfoxide and bis-sulfoxide compounds and compositions for cholesterol management and related uses
CA2425311C (en) 2000-10-11 2011-06-14 Esperion Therapeutics, Inc. Ketone compounds and compositions for cholesterol management and related uses
JP2004532799A (ja) 2000-10-11 2004-10-28 エスペリオン セラピューティクス，インコーポレイテッド コレステロール管理および関連用途のためのスルフィド化合物およびジスルフィド化合物ならびにそれらを含む組成物
AU2002213137A1 (en) 2000-10-11 2002-04-22 Esperion Therapeutics, Inc. Ether compounds and compositions for cholesterol management and related uses
US20040122091A1 (en) 2000-10-11 2004-06-24 Esperion Therapeutics, Inc. Sulfoxide and bis-sulfoxide compounds and compositions for cholesterol management and related uses
WO2002059077A1 (fr) * 2001-01-26 2002-08-01 Takeda Chemical Industries, Ltd. Derivés aminoéthanol
JP2002226457A (ja) * 2001-02-02 2002-08-14 Ajinomoto Co Inc 新規シスチン誘導体及び炎症因子活性化抑制剤
US6815426B2 (en) * 2001-02-16 2004-11-09 E. I. Du Pont De Nemours And Company Angiogenesis-inhibitory tripeptides, compositions and their methods of use
US7217785B2 (en) * 2001-05-09 2007-05-15 The Regents Of The University Of California Cysteine-containing peptides having antioxidant properties
MXPA04002848A (es) 2001-09-28 2005-06-06 Esperion Therapeutics Inc Prevencion y tratamiento de restenosis por administracion local de medicamento.
US20030125260A1 (en) * 2001-10-31 2003-07-03 Fortuna Haviv Tetra-and pentapeptides having antiangiogenic activity
US7308303B2 (en) * 2001-11-01 2007-12-11 Advanced Bionics Corporation Thrombolysis and chronic anticoagulation therapy
US20050154046A1 (en) * 2004-01-12 2005-07-14 Longgui Wang Methods of treating an inflammatory-related disease
US7582670B2 (en) * 2001-12-13 2009-09-01 Natrogen Therapeutics, Inc. Methods of treating an inflammatory-related disease
AU2003202737A1 (en) * 2002-02-28 2003-09-09 Koninklijke Philips Electronics N.V. Method for controlling the mode of an electronic application
US6930085B2 (en) 2002-04-05 2005-08-16 The Regents Of The University Of California G-type peptides to ameliorate atherosclerosis
EP2298810A3 (en) * 2002-07-19 2011-08-03 Abbott Biotechnology Ltd Treatment of TNF alpha related disorders
WO2004050037A2 (en) * 2002-12-04 2004-06-17 Agennix Incorporated Lactoferrin in the reduction of circulating cholesterol, vascular inflammation, atherosclerosis and cardiovascular disease
AU2004208850A1 (en) * 2003-02-04 2004-08-19 University Of Connecticut Health Center Immunogenic CD91 ligand-antigenic molecule complexes and fusion proteins
US8088404B2 (en) 2003-03-20 2012-01-03 Medtronic Vasular, Inc. Biocompatible controlled release coatings for medical devices and related methods
US20050070996A1 (en) 2003-04-08 2005-03-31 Dinh Thomas Q. Drug-eluting stent for controlled drug delivery
US7291590B2 (en) * 2003-06-12 2007-11-06 Queen's University At Kingston Compositions and methods for treating atherosclerosis
US7790736B2 (en) 2003-08-13 2010-09-07 Takeda Pharmaceutical Company Limited Dipeptidyl peptidase inhibitors
WO2005055810A2 (en) * 2003-12-05 2005-06-23 The Cleveland Clinic Foundation Risk markers for cardiovascular disease
BRPI0513402A (pt) * 2004-07-16 2008-05-06 Tufts College miméticos de apolipoproteìna a1 e usos dos mesmos
JP2008513479A (ja) * 2004-09-16 2008-05-01 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア アテローム性動脈硬化症および他の病理を改善するためのｇ型ペプチドおよび他の薬剤
KR20070089996A (ko) * 2004-12-06 2007-09-04 더 리전트 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 세동맥의 구조 및 기능의 개선 방법
US20080293639A1 (en) * 2005-04-29 2008-11-27 The Regents Of The University Of California Peptides and peptide mimetics to treat pathologies characterized by an inflammatory response
WO2006128056A2 (en) * 2005-05-26 2006-11-30 Metabasis Therapeutics, Inc. Novel phosphinic acid-containing thyromimetics
US8101565B2 (en) * 2007-09-20 2012-01-24 Abbott Cardiovascular Systems Inc. Sustained release of Apo A-I mimetic peptides and methods of treatment

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001299364A (ja) * 1999-12-27 2001-10-30 Takeda Chem Ind Ltd 新規タンパク質およびそのｄｎａ
WO2002015923A1 (en) * 2000-08-24 2002-02-28 The Regents Of The University Of California Orally administered peptides to ameliorate atherosclerosis
US20030171277A1 (en) * 2000-08-24 2003-09-11 The Regents Of The University Of California Orally administered peptides to ameliorate atherosclerosis
JP2004067583A (ja) * 2002-08-06 2004-03-04 Sumitomo Pharmaceut Co Ltd 新規ペプチド誘導体

Also Published As

Publication number Publication date
EA200702392A1 (ru) 2008-04-28
EA200900786A1 (ru) 2009-10-30
EP2368561A1 (en) 2011-09-28
NO20076022L (no) 2008-01-28
NZ580954A (en) 2011-05-27
MX2007013430A (es) 2008-03-19
BRPI0610983A2 (pt) 2010-08-10
KR20080007491A (ko) 2008-01-21
IL186959A0 (en) 2008-02-09
JP2008539235A (ja) 2008-11-13
WO2006118805A3 (en) 2007-06-07
EP1890715A4 (en) 2009-10-28
WO2006118805A9 (en) 2007-01-18
SG173373A1 (en) 2011-08-29
AU2006242651B2 (en) 2013-05-16
CA2607483A1 (en) 2006-11-09
WO2006118805A2 (en) 2006-11-09
TNSN07396A1 (en) 2009-03-17
NZ563187A (en) 2010-05-28
EP2368561B1 (en) 2013-12-04
EP2269623A1 (en) 2011-01-05
MA29488B1 (fr) 2008-05-02
US20100227825A1 (en) 2010-09-09
EP1890715A2 (en) 2008-02-27
AU2006242651A1 (en) 2006-11-09
ECSP077829A (es) 2008-02-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA012440B1 (ru) Пептид, композиция на его основе для лечения патологий, связанных c воспалительными процессами
RU2448977C2 (ru) Обладающий способностью облегчать по меньшей мере один симптом воспалительного состояния пептид, содержащая его фармацевтическая композиция и способ лечения атеросклероза с их помощью
US8048851B2 (en) Peptides and peptide mimetics to treat pathologies characterized by an inflammatory response
JP4361809B2 (ja) アテローム性硬化症を改善するｇ−タイプペプチド
JP4205713B2 (ja) アテローム性動脈硬化症を改善する経口投与ペプチド
KR101185609B1 (ko) 아포리포단백질 ａ１ 미메틱 및 이의 용도
US8568766B2 (en) Peptides and peptide mimetics to treat pathologies associated with eye disease
US20080293639A1 (en) Peptides and peptide mimetics to treat pathologies characterized by an inflammatory response
IL185959A (en) Additions to the radio link protocol to reduce boot time for reading data
MXPA06001743A (es) Peptidos pequenos administrados oralmente que sinergizan la actividad de la estatina.
US20100240598A1 (en) Peptides and peptide mimetics to inhibit the onset and/or progression of fibrotic and/or pre-fibrotic pathologies
WO2011031460A2 (en) Novel anti-inflammatory peptides that bind oxidized phospholipids

Legal Events

Date Code Title Description
PC4A Registration of transfer of a eurasian patent by assignment
TK4A Corrections in published eurasian patents
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU