JP2008513479A - アテローム性動脈硬化症および他の病理を改善するためのｇ型ペプチドおよび他の薬剤 - Google Patents

Abstract

本発明は、炎症性応答によって特徴決定されるアテローム性動脈硬化症および／または他の病理の１つ以上の徴候を改善する新規なペプチドおよび他の薬剤を提供する。特定の実施形態において、このペプチドは、アポリボタンパク質ＪのＧ^*両親媒性へリックスに類似する。このペプチドは高度に安定であり、経口経路をへて容易に投与される。

Description

本発明は、アテローム性動脈硬化症の分野に関する。特に、本発明は、経口投与が可能であり、かつ炎症性応答によって特徴決定されるアテローム性動脈硬化症または他の病理の徴候の１つ以上を改善するペプチドのクラスの同定に関連する。

スタチン（例えば、メバコール（Ｍｅｖａｃｏｒ）（登録商標）、リピトール（Ｌｉｐｉｔｏｒ）（登録商標））の導入は、心臓発作および脳卒中からの死亡率を約３分の１減少させてきた。しかし、心臓発作および脳卒中は、特に米国および西欧諸国においては、死亡および身体障害の主な原因のままである。心臓発作および脳卒中は、アテローム性動脈硬化症と呼ばれる慢性炎症性状態の結果である。

原因となる要因の複数が心臓血管疾患の発生に関係しており、これには、疾患に対する遺伝的な素因、性別、喫煙および食事のような生活様式の要因、年齢、高血圧、および高コレステロール血症を含む高脂血症が含まれる。これらの要因のいくつか、特に高脂血症および高コレステロール血症（高い血中コレステロール濃度）は、アテローム性動脈硬化症と関連する大きなリスク要因を提供する。

コレステロールは、キロミクロン、超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）、および高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）として一般的に知られる、リポタンパク質粒子中の遊離のおよびエステル化されたコレステロールとして血中に存在する。血中の総コレステロールの濃度は、（１）消化管からのコレステロールの吸収、（２）炭水化物、タンパク質、脂肪およびエタノールのような食事中の成分からのコレステロールの合成、ならびに（３）組織、とりわけ肝臓による血液からのコレステロールの除去、およびそれに続く胆汁酸、ステロイドホルモン、および胆汁性コレステロールへのコレステロールの転換によって影響される。

血中コレステロール濃度の維持は、遺伝的要因および環境的要因の両方によって影響される。遺伝的要因には、コレステロール生合成の律速段階酵素の濃度、肝臓中の低密度リポタンパク質についての受容体の濃度、コレステロールの胆汁酸への転換についての律速段階酵素の濃度、リポタンパク質の合成および分泌の速度、ならびに人の性別が含まれる。ヒトにおける血中コレステロール濃度の恒常性に影響を与える環境要因には、食事の組成、喫煙の頻度、身体的活動、および種々の医学的薬剤の使用が含まれる。食事の変動要素には、脂肪（飽和脂肪酸およびポリ飽和脂肪酸）の量および型、コレステロールの量、繊維の量および型、ならびにおそらく、ビタミンＣおよびＤのようなビタミン、およびカルシウムのようなミネラルの量が含まれる。

低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）の酸化は、アテローム性動脈硬化症の病理に強く関係付けられてきた。高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）は、ＬＤＬ酸化に対して保護することが可能であることが見い出されてきたが、ある例においては、ＬＤＬ酸化を加速することが見い出されてきた。アテローム性動脈硬化症における重要な開始因子には、ＬＤＬ由来の酸化リン脂質の産生が含まれる。

通常のＨＤＬは、これらの酸化リン脂質の形成を阻害する能力を有し、また一旦それらが形成されると、これらの酸化リン脂質を不活性化する能力を有する。しかし、ある環境下では、ＨＤＬは、抗炎症性分子から、これらの酸化リン脂質の形成を実際に促進する炎症誘発性分子に転換し得る。

ＨＤＬおよびＬＤＬは、生得的な免疫系の一部であることが示唆されてきた（Ｎａｖａｂら、（２００１）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｅ Ｂｉｏｌ．２１：４８１−４８８）。抗炎症性ＨＤＬの生成は、ＨＤＬの主要なタンパク質、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ（アポＡ−Ｉ）を模倣するクラスＡ両親媒性へリックス性ペプチドを用いて達成されてきた（例えば、ＷＯ０２／１５９２３を参照のこと）。

本発明は、アテローム性動脈硬化症、および他の炎症性状態、例えば、関節リウマチ、エリテマトーデス、結節性多発性動脈炎、骨粗鬆症、アルツハイマー病およびＡ型インフルエンザのようなウイルス性疾患の徴候を改善するための新規な組成物および方法を提供する。

特定の実施形態において、本発明は、アテローム性動脈硬化症もしくは炎症性応答と関連する他の病理の徴候を改善する「単離された」ポリペプチド、および／またはこのようなポリペプチドを含む組成物を提供する。

従って、ある実施形態において、本発明は、炎症性状態の１つ以上の徴候を改善するペプチドを提供し、ここで、このペプチドは、アミノ酸配列ＬＡＥＹＨＡＫ（配列番号２）またはＫＡＨＹＥＡＬ（配列番号６３８）を含み；そしてこのペプチドは、少なくとも１個のＤアミノ酸および／または少なくとも１個の保護基を含む。特定の実施形態において、このペプチドは、Ｄアミノ酸および／または１個以上の保護基（例えば、各末端における保護基）を含む。種々の実施形態において、この保護基は、アミド、炭素数３〜２０個のアルキル基、Ｆｍｏｃ、ｔ−ｂｏｃ、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルホニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロへキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔ−ＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、アセチル（Ａｃ）、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、へキシル基、Ｎ−メチルアントラニリル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびトリフルオロアセチル（ＴＦＡ）からなる群からの１個以上の保護基を含む。

特定の実施形態において、本発明は、炎症性状態の１つ以上の徴候を改善するペプチドを提供し、ここでこのペプチドは：約３個から１０個までのアミノ酸の長さの範囲であり；１個または２個の芳香族アミノ酸、疎水性アミノ酸、または電荷を有さない極性アミノ酸と、該極性アミノ酸と交互に存在する酸性または塩基性のアミノ酸とを含むアミノ酸配列を含み；疎水性末端アミノ酸、または、疎水性保護基を有する末端アミノ酸を含み；すべてのアミノ酸がＬアミノ酸である配列ＬＡＥＹＨＡＫ（配列番号２）ではなく；ここでこのペプチドは炎症誘発性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに転換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより抗炎症性にする。このペプチドは、例えば、上記に記載されるように、１個以上のＤアミノ酸および／または１個以上の保護基を選択的に含むことができる。

種々の実施形態において、本発明は、炎症性状態の１つ以上の徴候を改善するペプチドを提供し、ここでこのペプチドは、例えば、表３または１４において見い出されるペプチド、またはそのコンカテマーのアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、このペプチドは少なくとも１個のＤアミノ酸を含み、特定の実施形態において、このペプチドはすべてのアミノ酸がＤアミノ酸である。種々の実施形態において、ペプチドは、付加的にまたは代替的に、少なくとも１個の保護基（例えば、各末端における保護基）を含む。特定の適切な保護基には、アミド、炭素数３〜２０個のアルキル基、Ｆｍｏｃ、ｔ−ｂｏｃ、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルホニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロへキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、アセチル（Ａｃ）、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、へキシル基、Ｎ−メチルアントラニリル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、トリフルオロアセチル（ＴＦＡ）などを含むがこれらに限定されない。

特定の実施形態において、本発明は、炎症性状態の１つ以上の徴候を改善するペプチドを提供し、ここで：このペプチドは、ＤＭＴ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（配列番号１）、ＤＭＴ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ（配列番号２）、Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＤＭＴ（配列番号３）、およびＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−ＤＭＴ（配列番号４）からなる群より選択されるアミノ酸配列を含み、ここでＤＭＴはジメチルチロシンである。また、このペプチドは、少なくとも１個のＤアミノ酸および／または、例えば、上記に記載されるような少なくとも１個の保護基を含むことができる。特定の実施形態において、このペプチドは、Ｂｏｃジメチルチロシン−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＯｔＢｕ）（配列番号５）またはＢｏｃジメチルチロシン−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ（ＯｔＢｕ）（配列番号６）である。

本発明はまた、本明細書に記載される活性薬剤（例えば、ペプチド、有機分子など）のいずれか、および薬学的に受容可能な賦形剤を含む薬学的製剤を意図する。特定の実施形態において、活性薬剤はペプチドであり、このペプチドは時限放出製剤として製剤化される。特定の実施形態において、この製剤は、単位投薬量製剤として製剤化される。特定の実施形態において、この製剤は、経口投与、鼻投与、直腸投与、腹腔内注射、静脈内注射、皮下注射、経皮的投与、吸入投与、および筋肉内注射からなる群より選択される経路による投与のために製剤化される。

本発明はまた、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、哺乳動物における炎症に対する急性期応答と関連する冠状動脈合併症、または糖尿病のような状態の治療または予防のための方法を提供し、ここで、この方法は、本明細書に記載される１種以上の活性薬剤（例えば、ペプチド）をその必要がある哺乳動物に投与する工程を含む。特定の実施形態において、この活性薬剤は、薬学的に受容可能な賦形剤（例えば、経口投与のために適切な賦形剤）中にあり、および／または単位投薬量製剤として製剤化することができる。種々の実施形態において、投与する工程は、経口投与、鼻投与、直腸投与、腹腔内注射、静脈内注射、皮下注射、経皮的投与、および筋肉内注射からなる群より選択される経路によって活性薬剤を投与することを包含する。種々の実施形態において、哺乳動物は、アテローム性動脈硬化症の徴候を１つ以上有すると診断され、および／または脳卒中もしくはアテローム性動脈硬化症のリスクを有すると診断され、および／または炎症に対する急性期応答に関連する冠状動脈合併症を有するかもしくはそのリスクがあり、および／または再狭窄を有するかもしくはそのリスクがあり、および／または糖尿病を有するかもしくはそのリスクを有する哺乳動物（例えば、ヒト）である。

アテローム性動脈硬化症、再狭窄、哺乳動物における炎症に対する急性期応答と関連する冠状動脈合併症、および糖尿病からなる群より選択される状態の治療における使用のために、本明細書に記載されるような活性薬剤（例えば、ペプチド）もまた提供される。特定の実施形態において、本発明は、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、哺乳動物における炎症に対する急性期応答と関連する冠状動脈合併症、および糖尿病からなる群より選択される状態の治療的または予防的処置のための医薬の製造における、本明細書に記載されるような活性薬剤（例えば、ペプチド）の使用を提供する。

特定の実施形態において、本発明はまた、身体中の血管に薬物を送達するためのステントを提供し、このステントは、その中に形成された複数のリザーバを備えるステントフレームワーク、ならびに本明細書において（例えば、表１〜１５において）記載される１種以上の活性薬剤および／またはこのリザーバ中に配置される本明細書に記載される有機低分子を含む。種々の実施形態において、この活性薬剤は４Ｆ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むペプチドである。種々の実施形態において、この活性薬剤はポリマー中に含まれる。特定の実施形態において、ステントフレームワークは金属基材またはポリマー基材（例えば、ステンレス鋼、ニチノール、タンタル、ＭＰ３５Ｎ合金、白金、チタン、適切な生体適合性合金、適切な生体適合性ポリマー、およびこれらの組み合わせのような材料）の１つを含む。リザーバは、選択的に、微小孔を備えることができ、そしてある実施形態において、この微小孔は、存在する場合、約２０ミクロン以下の直径を有する。種々の実施形態において、この微小孔は、存在する場合、約２０ミクロン〜約５０ミクロンの範囲の直径を有する。種々の実施形態において、この微小孔は、存在する場合、約１０〜約５０ミクロンの範囲の深さを有する。種々の実施形態において、この微小孔は、ステントの内部表面上の開口部およびステントの外部表面上の開口部を備えるステントフレームワークを貫通して伸びる。特定の実施形態において、このステントはさらに、ステントフレームワークの内部表面上に配置され、前記貫通微小孔の少なくとも一部を覆うキャップ層を備え、これはステントフレームワークの内部表面からの薬物ポリマー中の薬物の溶出速度を制御するためのバリア特性を提供する。特定の実施形態において、リザーバは、ステントフレームワークの外部表面に沿ったチャネルを備える。特定の実施形態において、ポリマーは、本発明に従う第１の活性薬剤を含む第１の薬物ポリマーの第１の層を含み、ポリマー層は、活性薬剤または他の医薬を有する第２の薬物ポリマーを含む。種々の実施形態において、バリア層は、活性薬剤を含むポリマー間に、またはポリマー層の表面上に配置することができる。種々の実施形態において、カテーテルはステントフレームワークに連結される。このカテーテルは、選択的に、ステントを広げるための手段、例えば、ステントを広げるために使用されるバルーン、ステントの拡張を可能にするために収納されるシースなどを備えることができる。

本発明はまた、薬物−ポリマーステントを製造する方法を提供し、この方法は、ステントフレームワークを提供する工程；ステントフレームワーク中の複数のリザーバを切断する工程；少なくとも１つのリザーバに本明細書に記載の活性薬剤を１つ以上含む組成物を適用する工程；および組成物を乾燥させる工程を含む。この方法はさらに、選択的に、乾燥した組成物にポリマー層を適用する工程；および該ポリマー層を乾燥させる工程をさらに含むことができる。

特定の実施形態において、本発明は、血管状態を治療する方法を提供し、この方法は、身体の血管中にステント（本明細書に記載されるようなもの）を配置する工程；ステントを拡張する工程；およびこのステントの少なくとも表面から少なくとも１種の活性薬剤を溶出する工程を含む。

本明細書に記載される種々のペプチドを合成する方法もまた提供される。特定の実施形態において、本発明は、ペプチドを合成する方法を提供し、この方法は：このペプチドの少なくとも３個の異なるペプチドフラグメントサブ配列を提供する工程；およびこのペプチドを形成するために、液相中でこのペプチドフラグメントサブ配列を連結する工程を含む。特定の実施形態において、このペプチドの長さは、アミノ酸６〜３７個の範囲にある。特定の実施形態において、このペプチドの長さは１８残基である。特定の実施形態において、このペプチドはクラスＡ両親媒性へリックスを含む。種々の実施形態において、このペプチドは、アミノ酸配列Ｄ−Ｗ−Ｆ−Ｋ−Ａ−Ｆ−Ｙ−Ｄ−Ｋ−Ｖ−Ａ−Ｅ−Ｋ−Ｆ−Ｋ−Ｅ−Ａ−Ｆ（配列番号１３）を含む。種々の実施形態において、３個すべてのペプチドフラグメントサブ配列の各々の長さがアミノ酸６個である。種々の実施形態において、３個のペプチドフラグメントサブ配列は、配列：Ｄ−Ｗ−Ｆ−Ｋ−Ａ−Ｆ（配列番号６４１）、Ｙ−Ｄ−Ｋ−Ｖ−Ａ−Ｅ（配列番号６４２）、およびＫ−Ｆ−Ｋ−Ｅ−Ａ−Ｆ（配列番号６４３）を有する。特定の実施形態において、ペプチドはすべてのアミノ酸がＤアミノ酸である。

定義
「単離された」、「精製された」または「生物学的に純粋な」という用語は、単離されたポリペプチドに言及する場合には、ポリペプチドがそのネイティブな状態で見い出されるときに通常ポリペプチドに付随する成分を実質的または本質的に含まない物質をいう。核酸および／またはポリペプチドに関しては、この用語は、天然でそれらに典型的には隣接する配列によってもはや隣接されていない核酸またはポリペプチドをいうことができる。化学合成されたポリペプチドは、それらがネイティブ状態（例えば、血液、血清など）において見い出されないので、「単離されている」。特定の実施形態において、「単離された」という用語は、ポリペプチドが天然で見い出されないことを示す。

「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを示す目的で交換可能に使用される。これらの用語は、天然に存在するアミノ酸ポリマーと同様に、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工の化学アナログであるアミノ酸ポリマーに適用される。

「両親媒性へリックスペプチド」という用語は、少なくとも１個の両親媒性へリックス（両親媒性ヘリックスドメイン）を含むペプチドをいう。本発明の特定の両親媒性ヘリックスペプチドは、２個以上（例えば、３個、４個、５個など）の両親媒性ヘリックスを含むことができる。

「クラスＡ両親媒性ヘリックス」という用語は、極性−非極性表面に存在する正に荷電した残基および極性表面の中心に存在する負に荷電した残基を有する、極性表面および非極性表面の分離を生じるα−ヘリックスを形成するタンパク質構造をいう（例えば、Ｓｅｇｒｅｓｔら（１９９０）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ８：１０３−１１７を参照のこと）。

「アポリポタンパク質Ｊ」（ａｐｏＪ）は、クラスタリン、ＴＲＰＭ２、ＧＰ８０、およびＳＰ４０，４０を含む種々の名称により知られている（Ｆｒｉｔｚ（１９９５）Ｐｐ １１２ Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ：Ｒｏｌｅ ｉｎ Ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ａｄａｐｔａｔｉｏｎ（Ｈａｒｍｏｎｙ ＪＡＫ Ｅｄ．），Ｒ．Ｇ．Ｌａｎｄｅｓ，Ｇｅｏｒｇｅｔｏｗｎ，ＴＸ，）。これは、ヘテロダイマー性糖タンパク質および培養したラットセルトリ細胞の分泌タンパク質の成分として記載された（Ｋｉｓｓｉｎｇｅｒら（１９８２）Ｂｉｏｌ Ｒｅｐｒｏｄ；２７：２３３２４０）。翻訳された生成物は、ジスルフィド結合した３４ｋＤａαサブユニットおよび４７ｋＤａβサブユニットへの細胞内切断を受ける一本鎖前駆体タンパク質である（ＣｏｌｌａｒｄおよびＧｒｉｓｗｏｌｄ（１８７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２６：３２９７−３３０３）。これは、細胞傷害、脂質輸送、アポトーシスと関連付けられてきており、これは、細胞傷害または細胞死によって引き起こされる細胞細片のクリアランスに関与する可能性がある。クラスタリンは、脂質、ペプチド、およびタンパク質を含む高い親和性を有する種々の分子、ならびに疎水性プローブ１−アニリノ−８−ナフタレンスルホン酸に結合することが示されてきた（Ｂａｉｌｅｙら（２００１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．，４０：１１８２８−１１８４０）。

クラスＧ両親媒性ヘリックスは球状タンパク質であるので、名称クラスＧである。このクラスの両親媒性ヘリックスの特徴は、これが、狭い非極性表面を有する極性表面上で、正に荷電した残基および負に荷電した残基のランダムな分布を有することである。この狭い非極性表面のために、このクラスは、リン脂質とは容易に結合はしない（Ｓｅｇｒｅｓｔら（１９９０）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ．８：１０３−１１７を参照のこと；Ｅｒｒａｔｕｍ（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，９：７９もまた参照のこと）。いくつかの交換可能なアポリポタンパク質は、Ｇ両親媒性ヘリックスに類似しているが同一ではない特徴を有する。クラスＧ両親媒性ヘリックスと類似して、この他のクラスは、極性表面上の正に荷電した残基および負に荷電した残基のランダムな分布を有する。しかし、狭い非極性表面を有するＧ両親媒性ヘリックスとは対照的に、このクラスは、このクラスをリン脂質に容易に結合させる広い非極性表面を有し、このクラスは、Ｇクラスの両親媒性ヘリックスと区別するためにＧ^*と呼ばれる（Ｓｅｇｒｅｓｔら（１９９２）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．，３３：１４１−１６６を参照のこと；Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｐｐ．１０９−１４２ Ｔｈｅ Ａｍｐｈｉｐａｔｈｉｃ Ｈｅｌｉｘ，Ｅｐａｎｄ，Ｒ．Ｍ．Ｅｄ ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａもまた参照のこと）。両親媒性ヘリックスドメインを同定および分類するためのコンピュータプログラムは、Ｊｏｎｅｓら（ｌ９９２）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．３３：２８７−２９６によって記載されており、これには、ホイール（ｗｈｅｅｌ）プログラム（ＷＨＥＥＬまたはＷＨＥＥＬ／ＳＮＯＲＫＥＬ）、ヘリックスネット（ｈｅｌｉｃａｌ ｎｅｔ）プログラム（ＨＥＬＮＥＴ，ＨＥＬＮＥＴ／ＳＮＯＲＫＥＬ，ＨＥＬＮＥＴ／Ａｎｇｌｅ）、ヘリックスホイールの付加のためのプログラム（ＣＯＭＢＯまたはＣＯＭＢＯ／ＳＮＯＲＫＥＬ）、ヘリックスネットの付加のためのプログラム（ＣＯＭＮＥＴ、ＣＯＭＮＥＴ／ＳＮＯＲＫＥＬ、ＣＯＭＢＯ／ＳＥＬＥＣＴ、ＣＯＭＢＯ／ＮＥＴ）、コンセンサスホイールプログラム（ＣＯＮＳＥＮＳＵＳ、ＣＯＮＳＥＮＳＵＳ／ＳＮＯＲＫＥＬ）などが含まれるがこれらに限定されない。

「改善する」という用語は、「アテローム性動脈硬化症の１つ以上の徴候を改善する」ことに関して使用される場合、アテローム性動脈硬化症および／または関連する病理に特徴的な１つ以上の徴候の減少、予防、または排除をいう。このような減少には、酸化したリン脂質の減少または排除、アテローム硬化性プラーク形成または破裂の減少、心臓発作、狭心症、または脳卒中のような臨床的事象の減少、高血圧の減少、炎症性タンパク質生合成の減少、血漿コレステロールの減少などが含まれるがこれらに限定されない。

「エナンチオマー性アミノ酸」という用語は、互いに重ね合わせることができない少なくとも２つの型で存在することができるアミノ酸をいう。大部分のアミノ酸（グリシン以外）はエナンチオマー性であり、いわゆるＬ型（Ｌアミノ酸）またはＤ型（Ｄアミノ酸）で存在する。大部分の天然に存在するアミノ酸は「Ｌ」アミノ酸である。「Ｄ」アミノ酸および「Ｌ」アミノ酸という用語は、平面偏光の特定の回転の方向であるよりはむしろ、アミノ酸の絶対配置をいうために使用される。本明細書における用法は、当業者による標準的な用法と一致する。アミノ酸は、例えば、ｔｈｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ Ｏｎ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎにおける標準ＳＴ．２５において指定されるように、標準的な１文字または３文字の符号を使用して本明細書で指定される。

「保護基」という用語は、アミノ酸中の官能基（例えば、側鎖、アルファアミノ基、アルファカルボキシル基など）に結合される場合に、その官能基の特性をブロックまたはマスクする化学基をいう。好ましいアミノ末端保護基には、アセチル基またはアミノ基が含まれるがこれらに限定されない。他のアミノ末端保護基には、脂肪酸、プロペオニル、ホルミルおよびその他におけるようなアルキル鎖が含まれるがこれらに限定されない。好ましいカルボキシ末端保護基には、アミドまたはエステルを形成する基が含まれるがこれらに限定されない。

「酸化剤による酸化からリン脂質を保護する」という語句は、リン脂質が酸化剤（例えば、過酸化水素、１３−（Ｓ）−ＨＰＯＤＥ、１５−（Ｓ）−ＨＰＥＴＥ、ＨＰＯＤＥ、ＨＰＥＴＥ、ＨＯＤＥ、ＨＥＴＥなど）と接触されるときに、リン脂質の酸化の速度（または産生された酸化したリン脂質の量）を減少させる化合物の能力をいう。

「低密度リポタンパク質」または「ＬＤＬ」という用語は、当業者の一般的な用法に従って定義される。一般的に、ＬＤＬは、超遠心分離によって単離されるときにｄ＝１．０１９〜ｄ＝１．０６３の密度範囲で見い出される脂質−タンパク質複合体をいう。

「高密度リポタンパク質」または「ＨＤＬ」という用語は、当業者の一般的な用法に従って定義される。一般的に、ＨＤＬは、超遠心分離によって単離されるときにｄ＝１．０６３〜ｄ＝１．２１の密度範囲で見い出される脂質−タンパク質複合体をいう。

「グループＩ ＨＤＬ」という用語は、酸化される脂質を減少する（例えば、低密度りぽたんぱく質において）か、または酸化剤による酸化から酸化される脂質を保護する高密度リポタンパク質またはその成分（例えば、アポＡ−Ｉパラオキソナーゼ、血漿板活性化因子アセチルヒドロラーゼなど）を有する。

「グループＩＩ ＨＤＬ」という用語は、脂質を酸化から保護する際に、または酸化した脂質を修復する（例えば、還元する）際に、活性の減少または活性がないことを提供するＨＤＬをいう。

「ＨＤＬ成分」という用語は、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）を含む成分（分子）をいう。酸化から脂質を保護するかまたは修復する（例えば、酸化される脂質を減少する）ＨＤＬについてのアッセイはまた、このような活性を示すＨＤＬの成分（例えば、アポＡ−Ｉ、パラオキソナーゼ、血小板活性化因子アセチルヒドロラーゼなど）についてのアッセイを含む。

「ヒトアポＡ−Ｉペプチド」という用語は、全長ヒトアポＡ−Ｉペプチド、またはクラスＡ両親媒性ヘリックスを含むヒトアポＡ−Ｉペプチドのフラグメントもしくはドメインをいう。

「単球反応」とは、本明細書で使用される場合、アテローム硬化性プラーク形成と関連する「炎症性応答」に特徴的な単球活性をいう。単球反応は、血管壁の細胞（例えば、血管内皮の細胞）への単球の接着、および／または内皮下空間への走化性、および／またはマクロファージへの単球の分化によって特徴決定される。

「変化の非存在」という用語は、酸化されるリン脂質の量に対して言及する場合、検出可能な変化の欠如、より好ましくは、統計学的に有意な変化（例えば、少なくとも８５％、好ましくは少なくとも９０％、より好ましくは少なくとも９５％、および最も好ましくは少なくとも９８％または９９％の信頼水準）の欠如をいう。検出可能な変化の非存在はまた、酸化されるリン脂質レベルが変化するが、本明細書に記載されるタンパク質の非存在、または他のポジティブ対照区もしくはネガティブ対照区に関して同程度ではないアッセイをいうことができる。

以下の略号が本明細書で使用される。ＰＡＰＣ：Ｌ−α−１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＰＯＶＰＣ：１−パルミトイル−２−（５−オキソバレリル）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＰＧＰＣ：１−パルミトイル−２−グルタリル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＰＥＩＰＣ：１−パルミトイル−２−（５，６−エポキシイソプロスタン Ｅ₂）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＣｈＣ１８：２：リノレン酸コレステリル；ＣｈＣ１８：２−ＯＯＨ：リノレン酸コレステリルヒドロペルオキシド；ＤＭＰＣ：１，２−ジテトラデカノイル−ｒａｃ−グリセロール−３−ホスホコリン；ＰＯＮ：パラオキソナーゼ；ＨＰＦ：標準高倍率視野；ＰＡＰＣ：Ｌ−α−１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン；ＢＬ／６：Ｃ５７ＢＬ６Ｊ；Ｃ３Ｈ：Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ。

保存性置換という用語は、分子の活性（特異性（例えば、リポタンパク質について））または結合親和性（例えば、脂質またはリポタンパク質について）を実質的に変化させないアミノ酸置換を反映するようなタンパク質またはペプチドに対する言及において使用される。典型的には、保存性アミノ酸置換は、１つのアミノ酸を、類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を有する別のアミノ酸への置換を含む。以下の６つのグループは、各々互いへの保存性置換であるアミノ酸を含む：１）アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；および６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）。

「同一の」または「同一性」パーセントという用語は、２つ以上の核酸またはポリペプチドの配列の状況において、以下の配列比較アルゴリズムの１つまたは目視の検査を使用して測定されるように、比較されかつ最大の一致のために整列される場合に、同じであるか、または同じであるアミノ酸残基またはヌクレオチドの特定のパーセンテージを有する２つ以上の配列またはサブ配列をいう。本発明のペプチドに関して、配列同一性は、ペプチドの全長にわたって決定される。

配列比較のために、典型的には、１つの配列は参照配列として働き、試験配列がそれに対して比較される。配列比較アルゴリズムを使用するとき、試験配列および参照配列はコンピュータに入力され、必要な場合、サブ配列座標が指定され、そして配列アルゴリズムプログラムパラメーターが指定される。次いで、配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムパラメーターに基づいて、参照配列と比較して、試験配列について配列同一性パーセントを計算する。

比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所的相同性アルゴリズムによって、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アラインメントアルゴリズムによって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：２４４４の類似性の検索方法によって、これらのアルゴリズムのコンピュータによる遂行（ｔｈｅ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）によって、または目視の検査によって（一般的には、Ａｕｓｕｂｅｌら、前出を参照のこと）実行することができる。

有用なプログラムの１つの例はＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰは、関連性および配列性パーセント同一性を示すために、進行性の対のアラインメントを使用して、関連した配列の群から複数の配列アラインメントを作製する。これは、アラインメントを作製するために使用されるクラスター性の関連性を示すツリーまたは樹状図（ｄｅｎｄｏｇｒａｍ）をプロットする。ＰＩＬＥＵＰは、ＦｅｎｇおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ（１９８７）Ｊ．ＭｏＩ．Ｅｖｏｌ．３５：３５１−３６０の進行性アラインメント法の単純化を使用する。使用される方法は、ＨｉｇｇｉｎｓおよびＳｈａｒｐ（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ ５：１５１−１５３によって記載される方法に類似する。このプログラムは、各々が５，０００ヌクレオチドまたはアミノ酸の最大長である、３００個までの配列を整列させることができる。複数のアラインメント手順は、２つの最も類似の配列の対のアラインメントのクラスターを産生する。次いで、このクラスターは、次の最も関連する配列または整列された配列のクラスターに対して整列される。配列の２つのクラスターは、２つの個々の配列の対のアラインメントの単純な伸長によって整列される。最終的なアラインメントは、一連の進行性の対のアラインメントによって達成される。このプログラムは、特定の配列および配列比較の領域のためにそれらの核酸またはヌクレオチドの座標を指定することによって、ならびにプログラムのパラメーターを指定することによって実行される。例えば、参照配列は、以下のパラメーター：デフォルトギャップ重み（３．００）、デフォルトギャップ長重み（０．１０）、および重みを付けた末端ギャップを使用して、他の試験配列に対して比較して、配列同一性関係性パーセントを決定することができる。

配列同一性および配列類似性のパーセントを決定するために適切なアルゴリズムの別の例は、ＢＬＡＳＴアルゴリズムであり、これは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０において記載されている。ＢＬＡＳＴ分析を実行するためのソフトウェアは、ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を通して公的に利用可能である。このアルゴリズムは、データベース配列中の同じ長さのワードとともに整列された場合に、ある正の値の閾値スコアＴと一致するかまたはこれを満足する、問い合わせ配列における長さＷの短いワードを同定することによって、高い得点の配列対（ＨＳＰ）を最初に同定する工程を含む。Ｔは、隣接ワードスコア閾値（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、前出）と呼ばれる。これらの初期の隣接ワードヒットは、これらを含むより長いＨＳＰを見い出すための検索を開始するための種として働く。次いで、ワードヒットは、累積的なアラインメントスコアが増加することができる限り、各配列に沿って２つの方向で伸長される。累積的スコアは、ヌクレオチド配列については、パラメーターＭ（一致した残基の対についての報酬スコア；常に＞０）およびＮ（ミスマッチ残基についてのペナルティースコア；常に＜０）を使用して計算される。アミノ酸配列については、スコアリングマトリックスが累積スコアを計算するために使用される。各方向でのワードヒットの伸長は、以下の場合に停止される：累積的アラインメントスコアが最終取得値よりＸ量だけ下降するとき；１つ以上の負に点数付けされる残基のアラインメントの蓄積に起因して、累積的アラインメントスコアが０以下になるとき；またはいずれかの末端に到達するとき。ＢＬＡＳＴアルゴリズムのパラメーターＷ、Ｔ、およびＸは、アラインメントの感度および速度を決定する。ＢＬＡＳＴＮプログラム（ヌクレオチド配列用）は、１１のワード長（Ｗ）、１０の予測値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝４、および両方の鎖の比較をデフォルトとして使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプログラムは、３のワード長（Ｗ）、１０の予測値（Ｅ）、およびＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックスをデフォルトとして使用する（ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ８９：１０９１５）。

配列同一性パーセントを計算することに加えて、ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの配列間の類似性の統計学的分析を実行する（例えば、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：５８７３−５７８７を参照のこと）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの尺度は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチドまたはアミノ酸の配列間の一致が偶然に存在する確率の表示を提供する。例えば、核酸は、参照核酸に対する試験核酸の比較における最小合計確率が、約０．１未満、より好ましくは約０．０１未満、および最も好ましくは約０．００１未満である場合に、参照配列に対して類似であると見なされる。

特定の実施形態において、本発明は、アテローム性動脈硬化症または炎症性応答によって特徴決定される他の状態の徴候を軽減する際に有効である多数の活性薬剤（例えば、ペプチドおよび／または特定の有機低分子）の同定に関連する。組み合わせた１種の活性薬剤または２種以上の活性薬剤の投与は、炎症誘発性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに転換するため、または抗炎症性ＨＤＬをより抗炎症性にするために有効であると考えられている。特定の実施形態において、このような「転換」は、パラオキソナーゼ活性の増加によって特徴決定される。

特定の両親媒性ヘリックスペプチド、例えば、本明細書に記載されるクラスＡおよびクラスＧ^*ペプチドが、本明細書に記載される他の薬剤と同様に、抗炎症性特性を有すること、およびアテローム性動脈硬化症または炎症性応答によって特徴決定される他の病理（例えば、関節リウマチ、エリテマトーデス、結節性多発性動脈炎、および骨粗鬆症）の調光を媒介することは驚くべき発見であった。

特定の実施形態において、ペプチドは、ペプチドの極性表面上に分布した電荷を有する残基（正に荷電した残基および／または負に荷電した残基）を有し、ならびに広い非極性表面（球状タンパク質様、Ｇ^*と呼ばれる）を有する両親媒性ヘリックスペプチドアナログである。このような両親媒性ヘリックスＧ^*ドメインは、アポＪおよび特定の他のアポタンパク質（例えば、アポＭ、アポＡＩ、アポＡＩＶ、アポＥ、アポＣＩＩ、アポＣＩＩＩなど、しかし典型的にはアポＡ−ＩＩまたはアポＣ−Ｉではない）に特徴的である。

特定の実施形態において、本明細書のペプチドは、クラスＡ両親媒性ヘリックスを含むかまたはクラスＡ両親媒性ヘリックスからなり、そして本明細書に記載される特定の修飾されたクラスＡ両親媒性ヘリックスペプチドは、活性および／または血清半減期を改善する、分子の疎水性表面の変化を有する。

特定の実施形態において、本発明のペプチドは、少なくとも１つのジメチルチロシンを含む小さなペプチドである。１つ以上の保護基および／または１つ以上のＤ残基を含むアミノ酸配列ＬＡＥＹＨＡＫ（配列番号８）を含むかまたはこれを含有する小さなペプチドもまた提供される。特定の小さなペプチドは、芳香族性アミノ酸または疎水性アミノ酸と、該アミノ酸と交互に存在する酸性アミノ酸または塩基性アミノ酸とを含む。前述のペプチドは、すべてＬ残基を含む配列ＬＡＥＹＨＡＫ（配列番号８）を除外する。

種々の実施形態において、本発明のペプチドは、好ましくは、約６個または１０個のアミノ酸から約１００個のアミノ酸の長さ、より好ましくは約１０個から約６０個または８０個のアミノ酸配列の長さ、および最も好ましくは約１０個、１５個または２０個のアミノ酸から約４０個または５０個のアミノ酸配列の長さの範囲である。特定の実施形態において、このペプチドは、約６個または１０個から約３０個または約４０個までの長さの範囲である。本発明の特定の特に好ましいペプチドは、約４０％よりも高い、好ましくは約５０％または６０％よりも高い、より好ましくは約７０％または８０％よりも高い、および最も好ましくは約９０％または９５％よりも高い（例えば、問題のペプチドと同じ長さにわたって、約１０〜約４０アミノ酸の長さの範囲である）、アポＪまたはそのフラグメントとの配列同一性を示す。

このようなペプチドが、特に、１つ以上のＤ型アミノ酸を含む場合に、対応するＬ型ペプチドの生物学的活性を保持することは本発明の驚くべき発見であった。さらに、これらのペプチドは、経口的に送達される場合でさえ、インビボ活性を示す。これらのペプチドは、上昇した血清半減期、およびアテローム性動脈硬化症の１つ以上の徴候を軽減または予防／阻害する能力を示す。

本発明者らは、通常のＨＤＬが、穏やかに酸化されたＬＤＬの形成における３つの段階を阻害することを発見した。これらの研究において（ＷＯ０２／１５９２３を参照のこと）、本発明者らは、アポＡ−ＩまたはアポＡ−Ｉ模倣ペプチド（３７ｐＡ）とともにインビトロでヒトＬＤＬを処理することが、ＨＰＯＤＥおよびＨＰＥＴＥを含んだＬＤＬから種分子を除去することを実証した。これらの種分子は、ＬＤＬを酸化することが可能であるヒト動脈壁細胞の同時培養のために必要とされ、およびＬＤＬが動脈壁細胞に単球走化性活性を産生するように誘導するために必要とされた。本発明者らはまた、マウスへのアポＡ−Ｉの注射後、またはヒトへの注入後に、マウスまたはヒトボランティアから単離されたＬＤＬは、ヒト動脈壁細胞による酸化に対して抵抗性であり、かつ動脈壁細胞同時培養物中で単球走化性活性を誘導しなかったことを実証した。

特定の理論に束縛されることはないが、本発明者らは、本発明の活性薬剤が、ＰＣＴ公開ＷＯ２００２／１５９２３において記載されるアポＡ−Ｉ模倣物の活性に類似の様式で機能すると考えている。特に、本発明は、ＨＤＬの抗炎症性特性を増加させることによって、部分的に機能することが考えられる。特に、本発明者らは、本発明のペプチドが、ＬＤＬ酸化のために必要であるＬＤＬ中の種分子を結合し、次いで、種分子を遠くに運び、そこで最終的に排出されると考えている。

本発明者らは、Ｄアミノ酸から合成されたアポＡＩ模倣物ペプチドの経口投与が、血漿またはＨＤＬのコレステロール濃度の変化とは独立して、マウスにおけるアテローム性動脈硬化症を劇的に減少することを実証してきた。アポＡ−Ｉ模倣物の作用と類似して、本発明者らは、Ｄアミノ酸から合成されるアポＪの両親媒性ヘリックスドメインを模倣する合成ペプチド、および本明細書に記載される他のペプチドが、経口的にまたは注射を含む他の経路によって与えることができ、アテローム性動脈硬化症および他の慢性炎症性状態を改善すると考えている。

特定の実施形態において、本発明のペプチドは、すべてＬ型のアミノ酸を含むことができる。しかし、１個以上のＤ型アミノ酸、好ましくはすべてＤ型アミノ酸（すべてのエナンチオマー性アミノ酸がＤ型である）を含むペプチドが経口投与を介してより有効な送達を提供し、かつ循環中でより安定である。特に好ましいペプチドは、一方または両方の末端がブロックされている（例えば、Ｎ末端アセチル化され、Ｃ末端アミド化されている）。

本発明のペプチドの保護機能は実施例１に例証される。ヒト動脈壁細胞によるＬＤＬ誘導性単球走化性活性を阻害するために必要である新規なクラスのペプチドのインビトロ濃度は、アポＡ−Ｉ模倣物（Ｄ４Ｆ）について必要である濃度の１０〜２５倍低い（図１においてＤＪ３３６をＤ４Ｆに対して比較する）。同様に、プレインキュベーションにおいて、本発明のペプチドは、動脈壁によるＬＤＬ酸化を妨害する際に１０〜２５倍強力であった（表２においてＤＪ３３６をＤ４Ｆに対して比較する）。図３において示されるように、ＤＪ３３５がＬＤＬ受容体ヌルマウスに経口的に与えられたときに、ＬＤＬ誘導性単球走化性活性を阻害する際にＨＤＬをより保護的にする上で、ＤＪ３３５はＤ４Ｆと本質的に同程度に有効であった。

図４は、飲用水に加えたときに、本発明のペプチド（ＤＪ３３６）が、アポＥヌルマウスにおけるＨＤＬ保護能力を増強する際にＤ４Ｆと同程度に強力であったことを実証する。図５は、単球走化性活性の誘導によって測定されるように、アポＥヌルマウスからのＬＤＬをヒト動脈壁細胞による酸化に対して抵抗性にする際に、飲用水に加えたときに、本発明のペプチド（ＤＪ３３６）が、Ｄ４Ｆよりもわずかに強力であったことを実証する。図６は、単球走化性活性の生成によって測定されるように、ＨＤＬがヒト動脈壁同時培養物中の酸化剤ＨＰＯＤＥによってリン脂質ＰＡＰＣの酸化を阻害することを引き起こす際に、飲用水に加えたときに、ＤＪ３３６が、Ｄ４Ｆと同程度に強力であったことをことを実証する（試験系の説明については、Ｎａｖａｂら（２００１）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．４２：１３０８−１３１７を参照のこと）。図７は、飲用水に加えたときに、ＤＪ３３６が、アポＥヌルマウスのパラオキシナーゼ活性を増加する際に、Ｄ４Ｆと少なくとも同程度に強力であったことを実証する。

前述を考慮して、ある実施形態において、本発明は、アテローム性動脈硬化症および／または炎症性応答と関連する（によって特徴決定される）病理の１つ以上の徴候を改善および／または予防するための方法を提供する。この方法は、典型的には、本発明の１つ以上のペプチドまたは他の活性薬剤（またはこのようなペプチドの模倣物）を、生物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトに投与する工程を含む。これらの薬剤は、本明細書に記載されるように、注射、坐剤、鼻スプレー、時限放出移植物、経皮パッチなどを含むがこれらに限定されない、多数の標準的な方法のいずれかに従って投与することができる。１つの特に好ましい実施形態において、ペプチドは、経口的に（例えば、シロップ、カプセル、または錠剤として）投与される。

本発明はヒトにおける使用に関して記載されるが、これはまた、動物のために、例えば、獣医学的な使用のために適切である。従って、好ましい生物には、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ科、ウマ科、ネコ科、ブタ、有蹄動物、ウサギ（ｌａｒｇｏｍｏｒｐｈ）などが含まれるがこれらに限定されない。

本発明の方法は、アテローム性動脈硬化症の１つ以上の徴候（例えば、高血圧、プラークの形成および破裂、心臓発作、狭心症、もしくは脳卒中のような臨床的事象の減少、高レベルの血漿コレステロール、高レベルの低密度リポタンパク質、高レベルの超低密度リポタンパク質、または炎症性タンパク質など）を示すヒトまたは非ヒト動物に限定されず、予防的状況においてもまた有用である。従って、本発明のペプチド（またはその模倣物）は、アテローム性動脈硬化症の１つ以上の徴候の発症／進行を予防するために生物に投与されてもよい。この状況において特に好ましい被験体は、アテローム性動脈硬化症のための１つ以上のリスク要因（例えば、家族歴、高血圧、肥満、高アルコール消費、喫煙、高血中コレステロール、高血中トリグリセリド、血中ＬＤＬ、ＶＬＤＬ、ＩＤＬの上昇、もしくは低ＨＤＬ、糖尿病もしくは糖尿病の家族歴、高血中脂質、心臓発作、狭心症または脳卒中）を示す被験体である。

本発明のアテローム性動脈硬化症阻害ペプチドの使用の方法に加えて、本発明はまた、ペプチドそれ自体、特に経口送達のための医薬として製剤化されたペプチド、およびアテローム性動脈硬化症の１つ以上の徴候の治療および／または予防のためのキットを提供する。

Ｉ．治療の方法
本明細書に記載される活性薬剤（例えば、ペプチド、有機低分子、アミノ酸対など）は、１つ以上の症状を軽減するため、ならびに／または本明細書に記載される１つ以上の徴候の発症の速度および／もしくは重篤度を減少するために有効である。特に、本明細書に記載される活性薬剤（例えば、ペプチド、有機低分子、アミノ酸対など）は、アテローム性動脈硬化症の１つ以上の徴候を軽減するために有効である。特定の理論に束縛されることはないが、これらのペプチドは、Ｏｘ−ＰＡＰＣ、ＰＯＶＰＣ、ＰＧＰＣ、およびＰＥＩＰＣのような炎症誘発性の酸化されたリン脂質の形成のために必要とされる「種分子」を結合すると考えられている。

加えて、多くの炎症性状態および／または他の病理が、少なくとも部分的に酸化された脂質によって媒介されるので、本発明者らは、本発明のペプチドが、生物学的に活性な酸化された脂質の形成によって特徴決定される状態を改善する際に有効であると考えている。加えて、本明細書に記載された活性薬剤が有効であるようである、多数の他の状態が存在している。

本明細書に記載の活性薬剤が緩和的および／または予防的であるようである、多数の病理が以下に記載される。

Ａ）アテローム性動脈硬化症および関連する病理
本発明者らは、通常のＨＤＬが、穏やかに酸化されたＬＤＬの形成における３つの段階を阻害することを発見した。特に、本発明者らは、アポＡ−ＩまたはアポＡ−Ｉ模倣ペプチド（３７ｐＡ）とともにインビトロでヒトＬＤＬを処理することが、ＨＰＯＤＥおよびＨＰＥＴＥを含んだＬＤＬから種分子を除去することを実証した。これらの種分子は、ＬＤＬを酸化することが可能であるヒト動脈壁細胞の同時培養のために必要とされ、およびＬＤＬが動脈壁細胞に単球走化性活性を産生するように誘導するために必要とされた。本発明者らはまた、マウスへのアポＡ−Ｉの注射後、またはヒトへの注入後に、マウスまたはヒトボランティアから単離されたＬＤＬは、アポＡ−Ｉの注射／注入後にヒト動脈壁細胞による酸化に対して抵抗性であり、かつ動脈壁細胞同時培養物中で単球走化性活性を誘導しなかったことを実証した。

本発明の種々の活性薬剤の保護的機能は、種々の関連する出願において例証されている（例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ２００２／１５９２３およびＷＯ２００４／０３４９７７などを参照のこと）。ＷＯ２００２／１５９２３の図１のパネルＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、アポＥヌルマウス中の血液成分との¹⁴Ｃ−Ｄ−５Ｆの結合を示す。アテローム生成的な食餌を与えられ、かつＰＢＳを注射されたマウスからのＨＤＬは、ヒトＬＤＬの酸化を阻害することに失敗し、ヒト動脈壁同時培養物中でＬＤＬ誘導性単球走化性活性を阻害することに失敗することもまた実証された。対照的に、アテローム生成的な食餌を与えられ、かつ本明細書に記載されるペプチドを毎日注射されたマウスからのＨＤＬは、通常のヒトＨＤＬと同程度に、ヒトＬＤＬ酸化を阻害する際に、および同時培養物中のＬＤＬ誘導性単球走化性活性を阻害する際に有効であった（ＷＯ０２／１５９２３の図２Ａおよび２Ｂ）。加えて、アテローム生成的な食餌を与えられ、かつ毎日ＰＢＳを注射されたマウスから取られたＬＤＬは、同じ食餌を与えられたが、毎日２０μｇのペプチド５Ｆを注射されたマウスから取られたＬＤＬよりも、より容易に酸化され、かつより容易に単球走化性活性を誘導した。Ｄペプチドは、免疫原性であるようには見られなかった（ＷＯ０２／１５９２３の図４）。

アテローム生成的な食餌を与えられ、かつ本発明に従うペプチドを注射されたマウスからのＨＤＬおよびＬＤＬに対するヒト動脈壁細胞のインビトロ応答は、インビボでこのようなペプチドによって示される保護的作用を一致している。総コレステロールのパーセントと同様のレベルの総コレステロール、ＬＤＬ−コレステロール、ＩＤＬ＋ＶＬＤＬ−コレステロール、および低ＨＤＬ−コレステロールにも関わらず、アテローム生成的な食餌を与えられ、かつペプチドを注射された動物は、有意により低い病変スコアを有した（ＷＯ０２／１５９２３の図５）。従って、本発明のペプチドは、アテローム生成的な食餌を与えられたマウス中のアテローム硬化性病変の進行を妨害した。

従って、ある実施形態において、本発明は、本明細書に記載される１種以上の活性薬剤を投与することによって、アテローム性動脈硬化症の１つ以上の徴候を改善および／または予防するための方法を提供する。

Ｂ）冠状動脈カルシウム沈着および骨粗鬆症と関連する徴候または状態の軽減
血管カルシウム沈着および骨粗鬆症は、しばしば同じ被験体に共存する（Ｏｕｃｈｉら（１９９３）Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．，６７６：２９７−３０７；ＢｏｕｋｈｒｉｓおよびＢｅｃｋｅｒ（１９７２）ＪＡＭＡ，２１９：１３０７−１３１１；Ｂａｎｋｓら（１９９４）Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．，２４：８１３−８１７；Ｌａｒｏｃｈｅら（１９９４）Ｃｌｉｎ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，１３：６１１−６１４；ＢｒｏｕｌｉｋおよびＫａｐｉｔｏｌａ（１９９３）Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｇｕｌ．，２７：５７−６０；Ｆｒｙｅら（１９９２）Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅ．，１９：１８５−１９４；Ｂａｒｅｎｇｏｌｔｓら（１９９８）Ｃａｌｃｉｆ Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｔ．，６２：２０９−２１３；ＢｕｒｎｅｔｔおよびＶａｓｉｋａｒａｎ（２００２）Ａｎｎ Ｃｌｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍ．，３９：２０３−２１０）。Ｐａｒｈａｍｉら（１９９７）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｅ Ｂｉｏｌ．，１７：６８０−６８７は、酸化されていないリン脂質（ＰＡＰＣ）またはイソプロスタン８−イソプロスタグランジンＦ₂αではなく、穏やかに酸化されたＬＤＬ（ＭＭ−ＬＤＬ）およびＭＭ−ＬＤＬ中の生物学的に活性な脂質［すなわち、酸化された１−パルミトイル−２−アラキドノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン）（Ｏｘ−ＰＡＰＣ）］、ならびにイソプロスタン、８−イソプロスタグランジンＥ₂が、アルカリホスファターゼ活性およびインビトロでのカルシウム沈着血管細胞（ＣＶＣ）の骨芽細胞分化を誘導したが、ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１骨細胞の分化を阻害したことを実証した。

骨単位は、骨単位がマトリックスおよび線維芽細胞様細胞を含む内皮下空間によって取り囲まれる内皮細胞−裏打ち内腔上に集中しているという点で動脈壁に類似し、これは次には、動脈壁中の平滑筋細胞に類似する位置を占める前骨芽細胞および骨芽細胞によって取り囲まれる（同上）。骨梁骨芽細胞はまた、骨髄内皮下空間との界面である（同上）。Ｐａｒｈａｍｉらは、リポタンパク質が骨動脈の内皮を横切ることができ、およびこれらが冠状動脈中におけるように酸化を受けることができる内皮下空間に沈着できることを仮定した（同上）。これらのインビトロデータに基づいて、彼らは、骨動脈の内皮下空間および骨髄におけるＬＤＬ酸化が、骨粗鬆症に寄与する骨芽細胞分化およびミネラル化の減少をもたらすことを予測した（同上）。彼らの仮説はさらに、骨粗鬆症が冠状動脈のカルシウム沈着を伴うので、ＬＤＬレベルが骨粗鬆症と正の相関を有するが（Ｐｏｈｌｅら（２００１）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０４：１９２７−１９３２）、ＨＤＬレベルが骨粗鬆症と負の相関を有することを予測した（Ｐａｒｈａｍｉら（１９９７）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌ Ｔｈｒｏｍｂ Ｖａｓｃ Ｂｉｏｌ．，１７：６８０−６８７）。

インビトロで、骨髄間質細胞細胞株Ｍ２−１０Ｂ４の骨芽細胞分化は、ＭＭ−ＬＤＬによって阻害されたが、ネイティブＬＤＬによっては阻害されなかった（Ｐａｒｈａｍｉら（１９９９）Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎｅｒ Ｒｅｓ．，１４：２０６７−２０７８）。低脂肪飼料食餌を与えられたアテローム性動脈硬化症感受性Ｃ５７ＢＬ／６（ＢＬ６）マウスからの骨髄間質細胞を培養したとき、強固な骨形成分化が存在した（同上）。対照的に、高脂肪のアテローム生成的な食餌後にマウスから取られた骨髄間質細胞が培養されたとき、これらは骨形成分化を受けなかった（同上）。この観察は、骨粗鬆症の発症における骨髄間質細胞の骨形成潜在性の減少のために可能な説明を提供するので、特に重要である（ＮｕｔｔａｌｌおよびＧｉｍｂｌｅ（２０００）Ｂｏｎｅ，２７：１７７−１８４）。インビボでの骨形成潜在性の減少は、骨粗鬆症の骨中での脂肪生成の増加に付随する（同上）。

アポＥヌルマウスの飲用水に６週間Ｄ−４Ｆを加えることは、骨梁の骨ミネラル密度を劇的に増加することが見い出され、そして本発明の他の活性薬剤が同様に作用すると考えられている。

本発明者らのデータは、骨粗鬆症が、「骨のアテローム性動脈硬化症」と見なすことができることを示す。これは、酸化された脂質の作用の結果であるように見える。ＨＤＬは、これらの酸化された脂質を破壊し、骨芽細胞の分化を促進する。本発明者らのデータは、本発明の活性薬剤を哺乳動物に投与すること（例えば、アポＥヌルマウスの飲用水中で）が、わずか数週間で骨梁を劇的に増加する。

これは、本明細書に記載された活性薬剤が骨粗鬆症の１つ以上の徴候を軽減するために（例えば、脱灰を阻害するために）、または骨粗鬆症の骨の再カルシウム沈着を誘導するために有用であることを示す。これらの活性薬剤は、哺乳動物（例えば、骨粗鬆症のリスクを有する患者）における骨粗鬆症の徴候の発症を予防するための予防薬としてもまた有用である。

本発明者らは、類似のメカニズムが冠状動脈カルシウム沈着の原因、例えば、石灰沈着性大動脈狭窄であると考えている。従って、特定の実施形態において、本発明は、冠状動脈カルシウム沈着、石灰沈着性大動脈狭窄、骨粗鬆性などのような疾患の徴候を阻害または予防するために、本明細書に記載される活性薬剤の使用を意図する。

Ｃ）炎症性徴候および自己免疫性徴候
慢性炎症および／または自己免疫状態もまた、多数の活性酸素種の形成によって特徴決定され、および本明細書に記載される１つ以上の活性薬剤を使用する治療に対して受け入れ可能である。従って、特定の理論に束縛されることはないが、本発明者らはまた、関節リウマチ、エリテマトーデス（ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｕｓ）、結節性多発性動脈炎、リウマチ性多発筋痛、エリテマトーデス（ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ）、多発性硬化症などを含むがこれらに限定されない、種々の他の状態の発症および／または１つ以上の徴候を軽減するために、本明細書に記載される活性薬剤が予防において、または治療において有用であると考えている。

特定の実施形態において、活性薬剤は、これらの状態における炎症性応答によって引き起こされ、またはこれらに付随する１つ以上の徴候を軽減する際に有用である。

また、特定の実施形態において、活性薬剤は、ＡＩＤＳに付随する炎症性応答によって引き起こされる１つ以上の徴候、またはこれらに付随する１つ以上の徴候を軽減する際に有用である。

Ｄ）感染／外傷／移植
本発明者らは、インフルエンザ感染および他の感染の結果が、ＨＤＬ中のパラオキソナーゼおよび血小板活性化アセチルヒドロラーゼ活性の減少であることを観察した。特定の理論に束縛されないが、本発明者らは、これらのＨＤＬ酵素活性の損失の結果として、およびまた、ＨＤＬとのプロ酸化剤タンパク質の結合の結果として、急性期応答の間に、ＨＤＬがもはやＬＤＬ酸化を妨害せず、および内皮細胞による単球走化性活性のＬＤＬ誘導性の産生を妨害することがもはや不可能であると考えている。

本発明者らは、Ａ型インフルエンザウイルスでの感染後に、毎日本発明の特定の薬剤の非常に低い投薬量（例えば、マウスについては２０マイクログラム）を注射された被験体において、パラオキソナーゼレベルが低下せず、かつ生物学的に活性な酸化されたリン脂質がバックグラウンドよりも上に生成されなかったことを観察した。このことは、４Ｆ、Ｄ４Ｆ（および／または本発明の他の薬剤）が、患者（例えば、インフルエンザ感染、または、例えば、ウイルス感染、細菌感染、外傷、移植、種々の自己免疫状態に起因する、急性炎症性応答を生成する可能性がある他の事象の間に、既知の冠状動脈疾患を有する患者を含む）に投与すること（例えば、経口的にまたは注射によって）ができることを示し、従って、本発明者らは、このような炎症性状態を生成する病理と関連する心臓発作および脳卒中の発生の増加を、この短い期間の処置によって妨害することができる。

加えて、パラオキソナーゼ（ｐａｒｏｘｏｎａｓｅ）レベルおよび／または単球活性を回復することによって、本発明の薬剤は、感染（例えば、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染）、および／または感染に付随する炎症性病理（例えば、髄膜炎）、および／または外傷の治療において有用である。

特定の実施形態において、抗炎症性活性および抗感染性活性の組み合わせのために、本明細書に記載される薬剤はまた、創傷または他の外傷の治療において有用であり、器官もしくは組織移植、および／または器官もしくは組織移植拒絶、および／または移植されたプロテーゼ、および／または移植アテローム性動脈硬化症、および／またはバイオフィルム形成と関連する有害な作用を軽減する。加えて、本発明者らは、Ｌ−４Ｆ、Ｄ−４Ｆ、および／または本明細書に記載される他の薬剤もまた、脊髄損傷の効果を軽減する際に有用であると考えている。

Ｅ）糖尿病および付随する状態
本明細書に記載される種々の活性薬剤がまた、糖尿病に関連する１つ以上の徴候を減少および／または予防する際に効力を示すことが観察されてきた。従って、種々の実施形態において、本発明は、糖尿病および関連する病理（例えば、ｉ型糖尿病、ｉｉ型糖尿病、若年発症糖尿病、糖尿病性腎症、腎症、糖尿病性腎症、糖尿病性網膜症など）を処置する（治療的および／または予防的に）方法を提供する。

Ｆ）再狭窄の阻害
本発明の活性薬剤が、例えば、バルーン血管形成術後の再狭窄を阻害するために有効であることもまた、本明細書で実証される。従って、例えば、図１３は、頸動脈のバルーン損傷に対するクラスＡ両親媒性ヘリックスペプチドＤ４Ｆの効果を示す。１６週齢の肥満ズッカーラット（Ｚｕｃｋｅｒ Ｒａｔｓ）に、これらが総頸動脈のバルーン損傷を受けた時点で１週間、Ｄ−４Ｆ（５ｍｇ／ｋｇ／日）を１週間注射した。２週間後、ラットを屠殺し、内膜中膜比率を測定した。図１３に示されるように、再狭窄は、処理した動物において減少する。

従って、特定の実施形態において、本発明は、再狭窄を減少／予防するための、本発明に記載の１つ以上の活性薬剤の投与を意図する。これらの薬剤は、全身的に投与することができ（例えば、経口的に、注射によってなど）、またはこれらは、例えば、薬物溶出ステントの使用によって、および／もしくは単に血管形成術手順の間の局所的投与によって、局所的に送達することができる。

Ｇ）急性炎症性応答と関連するアテローム性動脈硬化症の徴候の軽減
本発明の活性薬剤はまた、多数の状況において有用である。例えば、本発明者らは、心臓血管合併症（例えば、アテローム性動脈硬化症、脳卒中など）が、頻繁に、急性期炎症性応答の発症に付随するか、またはその後に続くこと、例えば、再発性の炎症性疾患、ウイルス感染（例えば、インフルエンザ）、細菌感染、真菌感染、臓器移植、創傷または他の外傷などに付随するものを観察してきた。

従って、特定の実施形態において、本発明は、急性炎症性応答のリスクを有するかもしくはそれを被っており、ならびに／またはアテローム性動脈硬化症および／もしくは関連する病理（例えば、脳卒中）の徴候のリスクを有するかもしくはそれを被っている被験体に、本明細書に記載される１種以上の活性薬剤を投与することを意図する。

従って、例えば、インフルエンザの季節の間に、冠状動脈疾患を有するか、またはそのリスクを有する人は、本発明の１種以上の活性薬剤を予防的に投与されてもよい。再発性炎症状態、例えば、関節リウマチ、種々の自己免疫疾患などの人（または動物）は、アテローム性動脈硬化症または脳卒中の発症を軽減または予防するために、本明細書に記載される１種以上の薬剤で処置することができる。外傷、例えば、急性損傷、組織移植などの人（または動物）被験体は、アテローム性動脈硬化症または脳卒中の発症を軽減するために、本発明のポリペプチドで処置することができる。

特定の例において、このような方法は、急性炎症性応答の発生またはそのリスクの診断を伴う。急性炎症性応答は、典型的には、肝臓における代謝および遺伝子調節の変化を含む。これは、免疫、心臓血管および中枢神経系に加えて、身体の主要な系のすべてを含む動的な恒常性プロセスである。通常、急性期応答は数日間のみ続くが；慢性または再発性炎症の場合において、急性期応答のいくつかの局面の異常な継続は、疾患に付随する根底にある組織損傷に寄与する可能性があり、そしてまた、さらなる合併症、例えば、心臓血管疾患、またはアミロイドーシスのようなタンパク質沈着疾患に導く可能性がある。

急性期応答の１つの重要な局面は、肝臓の根本的に変化した生合成プロフィールである。通常の状況下では、肝臓は、定常状態濃度において特徴的な範囲の血漿タンパク質を合成する。これらのタンパク質の多くは重要な機能を有し、これらの急性期反応物（ＡＰＲ）または急性期タンパク質（ＡＰＰ）の高い血漿レベルが、炎症性刺激後の急性期応答の間に必要とされる。大部分のＡＰＲは肝細胞によって合成されるが、あるものは、単球、内皮細胞、線維芽細胞および脂肪細胞を含む他の細胞型によって産生される。大部分のＡＰＲは、５０％から通常レベルの数倍上までの間で誘導される。対照的に、主要なＡＰＲは、通常レベルの１０００倍上まで増加することができる。このグループは、血清アミロイドＡ（ＳＡＡ）、およびヒトにおけるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）またはマウスにおけるそのホモログ、血清アミロイドＰ成分（ＳＡＰ）のそのホモログのいずれかを含む。いわゆるネガティブＡＰＲは、肝臓が誘導されたＡＰＲを合成する能力の増加を可能にするために、急性期応答の間に血漿濃度が減少される。

特定の実施形態において、急性期応答またはリスクは、それゆえに、１種以上のＡＰＰを測定することによって評価される。このようなマーカーを測定することは当業者に公知であり、このような測定を提供する営利企業が存在する（例えば、ＡＧＰはＣａｒｄｉｏｔｅｃｈ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＫＹによって測定される）。

ＩＩ．活性薬剤
広範な種々の活性薬剤が、本明細書で議論される１つ以上の徴候の治療のために適切である。これらの薬剤には、クラスＡ両親媒性ヘリックスペプチド、非極性表面に芳香族残基または脂肪族残基を有するアポＡ−ＩのクラスＡ両親媒性ペプチド模倣物、ペンタペプチド、テトラペプチド、トリペプチド、ジペプチドおよびアミノ酸の対を含む小さなペプチド、アポ−Ｊ（Ｇ^*ペプチド）、ならびにペプチド模倣物が、例えば、以下に記載されるように含まれるがこれらに限定されない。

Ａ）クラスＡ両親媒性ヘリックスペプチド
特定の実施形態において、本発明の方法における使用のための活性化薬剤には、例えば、米国特許第６，６６４，２３０号、ならびにＰＣＴ公開ＷＯ０２／１５９２３およびＷＯ２００４／０３４９７７に記載されるようなクラスＡ両親媒性ヘリックスペプチドが含まれる。クラスＡ両親媒性ヘリックスを含むペプチド（「クラスＡペプチド」）が、アテローム性動脈硬化症の１つ以上の徴候を軽減可能であることに加えて、本明細書に記載される他の１つ以上の症状の治療において有用であることが発見された。

クラスＡペプチドは、極性残基および非極性残基の分離を生じるαヘリックスの形成によって特徴決定され、それによって、極性−非極性界面に存在する正に荷電した残基、および極性表面の中心に存在する負に荷電した残基を有する、極性表面および非極性表面を形成する（例えば、Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ（１９８６）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ，１２８：６２６−６６８を参照のこと）。アポＡ−Ｉの第４エキソンは、３．６６７残基／ターンに折りたたまれたときに、クラスＡ両親媒性ヘリックス構造を生じることが注目される。

１８Ａと呼ばれる、１つのクラスＡペプチド（例えば、Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ（１９８６）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ，１２８：６２６−６６８を参照のこと）は、アテローム性動脈硬化症および／または本明細書に記載される他の症状の１つ以上の徴候を阻害または予防する際に、経口投与可能であり、かつ高度に有効であるペプチドを産生するために、本明細書に記載されるように修飾された。特定の理論によって束縛されることはないが、本発明のペプチドは、ＬＤＬの酸化を軽減する種分子を拾い上げることによって、インビボで作用することが可能であると考えられている。

本発明者らは、１８Ａの疎水性表面上のＰｈｅ残基の数を増加させることが、Ｐａｌｇｕｎａｃｈａｒｉら（１９９６）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ，＆ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １６：３２８−３３８によって記載される計算によって算定されるように、脂質親和性を理論的に増加させることを究明した。理論的には、１８Ａの非極性表面における残基のＰｈｅでの系統的置換が、６個のペプチドを生じ得る。さらなる２個、３個および４個のＰｈｅを有するペプチドは、それぞれ、１３単位、１４単位、および１５単位の理論的な脂質親和性（λ）を有する。しかし、さらなるＰｈｅが４個から５個まで増加された場合には、λ値は４単位跳ね上がる（１９λまで）。６個または７個までの増加は、より少ない劇的な増加を生じる（それぞれ、２０λ単位および２１λ単位）。

４Ｆ、Ｄ４Ｆ、５Ｆ、およびＤ５Ｆと呼ばれるペプチドなどを含む、多数のこれらのクラスＡペプチドが作製された。種々のクラスＡペプチドは、アテローム性動脈硬化症感受性マウスにおける病変発生を阻害した。加えて、これらのペプチドは、本明細書に記載される種々の病理の１つ以上の徴候を軽減する際に、変動するが、有意な程度の効力を示す。多数のこのようなペプチドを表１に図示する。

表１．本発明における使用のためのクラスＡ両親媒性ヘリックスペプチド

¹リンカーに下線を付す。
ＮＭＡはＮ−メチルアントラニリルである。

特定の好ましい実施形態において、これらのペプチドは、すべての残基がＬ型アミノ酸であるＬ−４Ｆ、または１つ以上の残基がＤ型アミノ酸であるＤ−４Ｆとしても知られる、４Ｆ（表１の配列番号１３）のバリエーションを含む。本明細書に記載されるペプチドのいずれかにおいて、Ｃ末端、および／またはＮ末端、および／または内部の残基は、本明細書に記載されるような１つ以上のブロッキング基でブロックすることができる。

表１の種々のペプチドが、アミノ末端を保護するアセチル基またはＮメチルアントラニリル基、およびカルボキシル末端を保護するアミド基で例証されるが、これらの保護基のいずれかは、除外されてもよく、および／または本明細書に記載されるような別の保護基で置換されてもよい。特に好ましい実施形態において、これらのペプチドは、本明細書に記載されるような１つ以上のＤ型アミノ酸を含む。特定の実施形態において、表１のペプチドのすべてのアミノ酸（例えば、すべてのエナンチオマー性アミノ酸）がＤ型アミノ酸である。

表１が完全に包括的ではないこともまた注目される。本明細書に提供される教示を使用して、他の好適なクラスＡ両親媒性ヘリックスペプチドを定常作業として産生することができる（例えば、保存性または半保存性置換（例えば、ＤをＥによって置き換える）、伸長、欠失などによって）。従って、例えば、１つの実施形態は、本明細書に示されるいずれかの１つ以上のペプチド（例えば、表１において配列番号１０〜２８および４７によって同定されるペプチド）の短縮型を利用する。従って、例えば、配列番号２９は、１つ以上のＤアミノ酸を含む、１８ＡのＣ末端からの１４アミノ酸を含むペプチドを例証するのに対して、配列番号３０〜４６は他の短縮型を例証する。

より長いペプチドもまた適切である。このようなより長いペプチドは、クラスＡ両親媒性ヘリックスを完全に形成してもよく、またはクラスＡ両親媒性ヘリックスは、ペプチドの１つ以上のドメインを形成することができる。加えて、本発明は、これらのペプチドのマルチマーバージョン（例えば、コンカテマー）を意図する。従って、例えば、本明細書に例証されるペプチドは、一緒に連結されることができる（直接的に、または１つ以上の介在性アミノ酸を有するリンカー（例えば、炭素リンカー、または１つ以上のアミノ酸）を通して）。例示的なポリマー性ペプチドには、１８Ａ−Ｐｒｏ−１８Ａおよび配列番号８６〜９３のペプチドが含まれ、特定の実施形態において、１つ以上のＤアミノ酸を含み、より好ましくは、本明細書に記載されるように、すべてのアミノ酸がＤアミノ酸であり、および／または一方もしくは両方の末端が保護されている。

Ｂ）非極性表面に芳香族残基または脂肪族残基を有する、アポＡ−Ｉの他のクラスＡ両親媒性ヘリックスペプチド模倣物
特定の実施形態において、本発明はまた、修飾されたクラスＡ両親媒性ヘリックスペプチドを提供する。特定の好ましいペプチドは、非極性表面の中心に１個以上の芳香族残基、例えば、３Ｆ^Cπ（４Ｆ中に存在する）を取り込み、または非極性表面の中心に１個以上の脂肪族残基、例えば、３Ｆ^Iπを有する。例えば、表２を参照のこと。特定の理論に束縛されることはないが、本発明者らは、ペプチド３Ｆ^Cπの非極性表面上の中心の芳香族残基が、非極性表面の中心におけるπ電子の存在に起因して、ペプチド−脂質複合体の疎水性脂質アルキル鎖の近くを水分子が透過することを可能にし、これは次には、活性酸素種（例えば、脂質過酸化物）が入ることを可能にし、細胞表面からこれらを遮蔽すると考えている。同様に、本発明者らはまた、非極性表面の中心における脂肪族残基を有するペプチド、例えば、３Ｆ^Iπが、同様に作用するが、３Ｆ^Cπと全く同程度に有効ではないと考えている。

好ましいペプチドは、炎症誘発性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに転換し、もしくは抗炎症性ＨＤＬをより抗炎症性にし、および／または表１に示されるＤ４Ｆまたは他のペプチド以上に、動脈壁細胞によって生成されるＬＤＬ誘導性単球走化性活性を減少する。

表２．特定の好ましいペプチドの例

他の好適なクラスＡペプチドは、改善された疎水性表面を有することによって特徴決定される。このようなペプチドの例は表３に示される。

表３．改善された疎水性相を有する例示的なペプチド

ここに記載されるペプチド（Ｖ２Ｗ３Ａ５Ｆ１０、１７−Ｄ−４Ｆ；Ｖ２Ｗ３Ｆ１０−Ｄ−４Ｆ；Ｗ３−Ｄ−４Ｆ）は、もともとのＤ−４Ｆよりも強力であり得る。

Ｃ）より小さなペプチド
アミノ酸のＤ−立体異性体である１つ以上のアミノ酸を優先的に（しかし必須ではなく）有する最小限３個のアミノ酸からなり、かつ脂質タンパク質相互作用を可能にするための疎水性ドメイン、およびある程度の水溶性を許容するための神聖性ドメインを保有する特定の小さなペプチドもまた、有意な抗炎症性特性を保有し、かつ本明細書に記載される１つ以上の病理を治療する際に有用であることもまた驚くべき発見であった。この「小さなペプチド」は、典型的には、２アミノ酸〜約１５アミノ酸、より好ましくは約３アミノ酸〜約１０または１１アミノ酸、および最も好ましくは約４〜約８または１０アミノ酸の長さの範囲である。種々の実施形態において、これらのペプチドは、典型的には、１つ以上の疎水的「保護基」の結合によって疎水性にされた、疎水性末端アミノ酸または末端アミノ酸を有することによって特徴決定される。種々の「小さなペプチド」は、同時係属出願である、２００３年８月２６日に出願されたＵＳＳＮ１０／６４９，３７８、２００４年８月６日に出願されたＵＳＳＮ１０／９１３，８００、およびＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２６２８８に記載されている。

特定の実施形態において、これらのペプチドは、以下の一般式Ｉによって表される。

一般式Ｉ Ｘ¹−Ｘ²−Ｘ³ｎ−Ｘ⁴

ここで、ｎは０または１であり、Ｘ¹は疎水性アミノ酸であり、および／または疎水性保護基を保有し、Ｘ⁴は疎水性アミノ酸であり、および／または疎水性保護基を保有し；そしてｎが０である場合、Ｘ²は酸性アミノ酸または塩基性アミノ酸であり；ｎが１である場合：Ｘ²およびＸ³は独立して酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸、脂肪族アミノ酸、または芳香族アミノ酸であり、その結果、Ｘ²が酸性アミノ酸である場合；Ｘ³は塩基性アミノ酸、脂肪族アミノ酸、または芳香族アミノ酸であり；Ｘ²が塩基性アミノ酸である場合；Ｘ³は、酸性アミノ酸、脂肪族アミノ酸、または芳香族アミノ酸であり；そしてＸ²が脂肪族アミノ酸または芳香族アミノ酸である場合；Ｘ³は酸性アミノ酸または塩基性アミノ酸である。

より長いペプチド（例えば、１０個、１１個、または１５個までのアミノ酸）もまた、本発明の範囲内で意図される。典型的には、より短いペプチド（例えば、一般式Ｉに従うペプチド）は、酸性アミノ酸、塩基性アミノ酸、脂肪族アミノ酸、または芳香族アミノ酸によって特徴決定され、より長いペプチドは、２つ以上のその型のアミノ酸を含む酸性ドメイン、塩基性ドメイン、脂肪族ドメイン、または芳香族ドメインによって特徴決定される。

１）活性を有する小さなペプチドの機能的特性
ＨＤＬをより抗炎症性にするため、ならびに哺乳動物における炎症性応答によって特徴決定されるアテローム性動脈硬化症および／または他の病理を軽減するための本発明の小さなペプチド（例えば、１０アミノ酸未満、好ましくは８アミノ酸未満、より好ましくは約３個から約５個までのアミノ酸）の能力を、多数の物理的特性が予測することは本発明の驚くべき発見であった。これらの物理的特性には、酢酸エチル中の高い溶解性（例えば、約４ｍｇ／ｍＬより高い）、およびｐＨ７．０での水性緩衝液中の溶解性が含まれる。１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）のようなリン脂質を接触させる際に、水性環境中で、特に有効な小さなペプチドは、およそ７．５ｎｍ（±０．１ｎｍ）の直径を有する粒子の形成を誘導するかもしくはそれに関与し、および／またはおよそ２ｎｍの重なりの二重層間の間隔を有する、３．１〜４．１ｎｍのオーダーの二重層の寸法を有する重なり合った二重層の形成を誘導するかもしくはそれに関与し、および／またはおよそ３８ｎｍのベシクル構造を誘導するかもしくはそれに関与する。特定の好ましい実施形態において、この小さなペプチドは、約９００Ｄａ未満の分子量を有する。

従って、特定の実施形態において、本発明は、本明細書に記載される症状／病理の１つ以上の徴候を改善する小さなペプチドを意図し、ここでこのペプチドは：約３個〜約８個のアミノ酸、好ましくは約３個〜約６個、または７個のアミノ酸、およびより好ましくは、約３個〜約５個のアミノ酸の長さの範囲であり；約４ｍｇ／ｍＬよりも高い濃度で酢酸エチルに溶解性であり；ｐＨ７．０の水性緩衝液に溶解性であり；水性環境中でリン脂質と接触される場合に、およそ７．５ｎｍの直径を有する粒子を形成し、および／またはおよそ２ｎｍの重なりの二重層間の間隔を有する３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二重層寸法を有する重なり合った二重層を形成し；約９００ダルトン未満の分子量を有し；炎症誘発性ＨＤＬから抗炎症性ＨＤＬに転換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより抗炎症性にし；そして、とりわけ、Ｌｙｓ−Ａｒｇ−ＡｓｐおよびＳｅｒはすべてＬアミノ酸であるアミノ酸配列Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ（配列番号２４９）を有さない。特定の実施形態において、これらの小さなペプチドは、酸化剤による酸化に対して、リン脂質を保護する。

これらの小さなペプチドは限定される必要はないが、特定の実施形態において、これらの小さなペプチドは、以下に記載される小さなペプチドを含むことができる。

２）トリペプチド
本明細書に記載されるような所望の特性（例えば、炎症誘発性ＨＤＬから抗炎症性ＨＤＬに転換する能力、動脈壁細胞によって生成されるＬＤＬ誘導性単球走化性活性を減少する能力、プレベータＨＤＬを増加する能力など）を示す特定のトリペプチド（３アミノ酸ペプチド）を合成することができることが発見された。特定の実施形態において、これらのペプチドは、Ｎが０である場合の一般式Ｉによって特徴決定され、これは以下の一般式ＩＩとして示される：

一般式ＩＩ Ｘ¹−Ｘ²−Ｘ⁴

ここで、末端アミノ酸（Ｘ¹およびＸ⁴）は、疎水性側鎖、あるいは側鎖またはＣ末端および／もしくはＮ末端が１つ以上の疎水性保護基でブロックされていること（例えば、Ｎ末端は、Ｂｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル−などでブロックされ、そしてＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕなどでブロックされる）のいずれかのために疎水性である。特定の実施形態において、Ｘ²アミノ酸は、酸性であるか（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸など）または塩基性であるか（例えば、ヒスチジン、アルギニン、リジンなど）のいずれかである。これらのペプチドは、すべてＬアミノ酸であることが可能であり、または１つ以上もしくはすべてのアミノ酸がＤアミノ酸である。

本発明の特定の好ましいトリペプチドには、表４に示されるペプチドが含まれるがこれらに限定されない。

表４．疎水性ブロッキング基、および酸性、塩基性、またはヒスチジンの中心アミノ酸を保有する本発明の特定の好ましいトリペプチドの例。

表４のペプチドは特定の保護基を用いて例示されるが、これらの基は、本明細書に記載されるような他の保護基で置換されてもよく、そして／または１つ以上の示される保護基が除外され得ることが注目される。

３）中心に酸性または塩基性のアミノ酸を有する小さなペプチド
特定の実施形態において、本発明のペプチドは、４アミノ酸から約１０アミノ酸の範囲である。末端アミノ酸は、典型的には、疎水性側鎖のため、または末端アミノ酸が、１つ以上の疎水性保護基を保有するためのいずれかのために疎水性である。末端アミノ酸（Ｘ¹およびＸ⁴）は、疎水性側鎖、あるいは側鎖またはＣ末端および／もしくはＮ末端が１つ以上の疎水性保護基でブロックされていること（例えば、Ｎ末端は、Ｂｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル−などでブロックされ、そしてＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕなどでブロックされる）のいずれかのために疎水性である。典型的には、ペプチドの中心部分は、塩基性アミノ酸および酸性アミノ酸（例えば、４マーで）、またはより長い分子中の塩基性ドメインおよび／もしくは酸性ドメインを含む。

これらの４マーは一般式Ｉによって表され得、ここで、Ｘ¹およびＸ⁴は疎水性であり、および／または本明細書に記載されるような疎水性保護基を保有し、Ｘ²が酸性であるのに対してＸ³が塩基性であり、またはＸ²が塩基性であるのに対してＸ³が酸性である。このペプチドは、すべてＬアミノ酸であり得、または１つ以上もしくはすべてＤアミノ酸を含み得る。

本発明の特定の好ましいものは、表５に示されるペプチドを含むがこれらに限定されない。

表５．中心の酸性アミノ酸および塩基性アミノ酸を有する小さなペプチドの具体例。

表５のペプチドは特定の保護基とともに例示されるが、これらの基は、本明細書に記載されるような他の保護基で置換されてもよく、および／または１つ以上の示される保護基が除外可能であることが注目される。

４）中心の脂肪族アミノ酸とともに中心に酸性アミノ酸または塩基性アミノ酸のいずれかを有する小さなペプチド
特定の実施形態において、本発明のペプチドは、４アミノ酸から約１０アミノ酸の範囲である。末端アミノ酸は、典型的には、疎水性側鎖のため、または末端アミノ酸が、１つ以上の疎水性保護基を保有するためのいずれかのために疎水性である。末端アミノ酸（Ｘ¹およびＸ⁴）は、疎水性側鎖、あるいは側鎖またはＣ末端および／もしくはＮ末端が１つ以上の疎水性保護基でブロックされていること（例えば、Ｎ末端は、Ｂｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル−などでブロックされ、そしてＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕなどでブロックされる）のいずれかのために疎水性である。典型的には、ペプチドの中心部分は、塩基性アミノ酸もしくは酸性アミノ酸および脂肪族アミノ酸（例えば、４マーで）、またはより長い分子中の塩基性ドメインもしくは酸性ドメインおよび脂肪族ドメインを含む。

これらの４マーは一般式Ｉによって表され得、ここで、Ｘ¹およびＸ⁴は疎水性であり、および／または本明細書に記載されるような疎水性保護基を保有し、Ｘ²が酸性もしくは塩基性であるのに対してＸ³が脂肪族であり、またはＸ²が脂肪族であるのに対してＸ³が酸性もしくは塩基性である。このペプチドは、すべてＬアミノ酸であり得、または１つ以上もしくはすべてＤアミノ酸を含み得る。

本発明の特定の好ましいペプチドは、表６に示されるペプチドを含むがこれらに限定されない。

表６．中心の脂肪族アミノ酸とともに、中心に酸性アミノ酸または塩基性アミノ酸のいずれかを有する特定の好ましいペプチドの例。

表６のペプチドは特定の保護基とともに例示されるが、これらの基は、本明細書に記載されるような他の保護基で置換されてもよく、および／または１つ以上の示される保護基が除外可能であることが注目される。

５）中心の芳香族アミノ酸とともに中心に酸性アミノ酸または塩基性アミノ酸のいずれかを有する小さなペプチド
特定の実施形態において、本発明の「小さな」ペプチドは、４アミノ酸から約１０アミノ酸までの範囲である。末端アミノ酸は、典型的には、疎水性側鎖のため、または末端アミノ酸が、１つ以上の疎水性保護基を保有するためのいずれかのために疎水性である。末端アミノ酸（Ｘ¹およびＸ⁴）は、疎水性側鎖、あるいは側鎖またはＣ末端および／もしくはＮ末端が１つ以上の疎水性保護基でブロックされていること（例えば、Ｎ末端は、Ｂｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル−などでブロックされ、そしてＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕなどでブロックされる）のいずれかのために疎水性である。典型的には、ペプチドの中心部分は、塩基性アミノ酸および酸性アミノ酸および芳香族アミノ酸（例えば、４マーで）、またはより長い分子中の塩基性ドメインもしくは酸性ドメインおよび芳香族ドメインを含む。

これらの４マーは一般式Ｉによって表され得、ここで、Ｘ¹およびＸ⁴は疎水性であり、および／または本明細書に記載されるような疎水性保護基を保有し、Ｘ²が酸性もしくは塩基性であるのに対してＸ³が芳香族であり、またはＸ²が芳香族であるのに対してＸ³が酸性もしくは塩基性である。このペプチドは、すべてＬアミノ酸であり得、または１つ以上もしくはすべてＤアミノ酸を含み得る。５マーは一般式Ｉのわずかな改変によって表すことができ、ここで、Ｘ⁵は表７に示されるように挿入され、Ｘ⁵は、典型的には、芳香族アミノ酸である。

本発明の特定の好ましいペプチドは、表７に示されるペプチドを含むがこれらに限定されない。

表７．中心の芳香族アミノ酸とともに、中心に酸性アミノ酸または塩基性アミノ酸のいずれかを有する特定の好ましいペプチドの例。

表７のペプチドは特定の保護基とともに例示されるが、これらの基は、本明細書に記載されるような他の保護基で置換されてもよく、および／または１つ以上の示される保護基が除外可能であることが注目される。

６）芳香族アミノ酸または中心のヒスチジンによって分離される芳香族アミノ酸を有する小さなペプチド
特定の実施形態において、本発明のペプチドは、分子の中心に露出したπ電子によって特徴決定され、これは、粒子の水和を可能にし、かつ脂肪酸過酸化物およびｓｎ−２位におけるアラキドン酸の酸化生成物を含むリン脂質のような炎症誘発性酸化脂質を、ペプチド粒子が捕捉することを可能にする。

特定の実施形態において、これらのペプチドは、最小で４アミノ酸および最大で約１０アミノ酸からなり、優先的には（必須ではなく）、Ｄ立体異性体のアミノ酸である１つ以上のアミノ酸を有し、末端アミノ酸が、疎水性側鎖のため、または末端アミノ酸が１つ以上の疎水性ブロッキング基を保有するためのいずれかのために疎水性である（例えば、Ｎ末端は、Ｂｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、ニコチニル−などでブロックされ、そしてＣ末端は（ｔＢｕ）−ＯｔＢｕなどでブロックされる）。中心に酸性アミノ酸または塩基性アミノ酸を有する代わりに、これらのペプチドは、一般的に、中心に芳香族アミノ酸を有し、またはペプチドの中心でヒスチジンによって分離される芳香族アミノ酸を有する。

本発明の特定の好ましいペプチドは、表８に示されるペプチドを含むがこれらに限定されない。

表８．中心の芳香族アミノ酸または１つ以上のヒスチジンによって分離される芳香族アミノ酸もしくは芳香族ドメインを有するペプチドの例。

表８のペプチドは特定の保護基とともに例示されるが、これらの基は、本明細書に記載されるような他の保護基で置換されてもよく、および／または１つ以上の示される保護基が除外可能であることが注目される。

７）トリペプチドおよびテトラペプチドの要約
明瞭化のために、本発明のトリペプチドおよびテトラペプチドは、表９において以下で一般的に要約される。

表９．本発明の特定のペプチドの一般構造

より長いペプチドが所望される場合、Ｘ²およびＸ³は、個々のアミノ酸であるよりはむしろ、ドメイン（例えば、特定の型の２つ以上のアミノ酸の領域）を表すことができる。表９は、例示であって限定を意図するものではない。本明細書に提供される教示を使用して、他の好適なペプチドを容易に同定することができる。

８）対となっているアミノ酸およびジペプチド
特定の実施形態において、本発明は、互いとともに投与され、またはジペプチドを形成するために連結される特定のペプチド対が、本明細書に記載される特性を有するという発見に関連する。従って、特定の理論に束縛されることをはないが、アミノ酸対が、互いとともに投与される場合、本明細書に記載されるように、これらは、インビボでミセルの形成に関与することが可能であるか、またはそれを誘導することが可能であると考えられる。

本明細書に記載される他の小さなペプチドと同様に、ペプチド対はインビボで結合し、酢酸エチル中での高い溶解性（例えば、約４ｍｇ／ｍＬよりも高い）、ｐＨ７．０の水性緩衝液中での溶解性を含む物理的特性を呈すると考えられる。１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）のようなリン脂質を接触させる際に、水性環境中で、アミノ酸対は、およそ７．５ｎｍ（±０．１ｎｍ）の直径を有する粒子の形成を誘導するかもしくはそれに関与し、および／またはおよそ２ｎｍの重なりの二重層間の間隔を有する、３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二重層の寸法を有する重なり合った二重層の形成を誘導するかもしくはそれに関与し、および／またはおよそ３８ｎｍのベシクル構造を誘導するかもしくはそれに関与すると考えられる。

その上に、アミノ酸対は、以下の生理学的に関連する特性の１つ以上を示すことができるとさらに考えられる：

１．炎症誘発性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに転換し、または抗炎症性ＨＤＬをより抗炎症性にする；

２．動脈壁細胞によって生成されるＬＤＬ誘導性単球走化性活性を減少する；

３．プレ−β ＨＤＬの形成およびサイクリングを刺激する；

４．ＨＤＬコレステロールを上昇させる；および／または

５．ＨＤＬパラオキソナーゼ活性を増加させる。

該アミノ酸対は、別々のアミノ酸として投与することが可能であり（例えば、組み合わせ製剤中で、逐次的にまたは同時に投与される）、またはこれらは、直接的にまたはリンカー（例えば、ＰＥＧリンカー、炭素リンカー、分枝リンカー、直鎖リンカー、複素環リンカー、誘導体脂質から形成されたリンカーなど）を通して共有結合的に連結することができる。特定の実施形態において、アミノ酸対は、ペプチド結合を通して共有結合的に連結され、ジペプチドを形成する。種々の実施形態において、ジペプチドは、典型的には、結合した保護基を各々保有する２つのアミノ酸を含むが、本発明はまた、アミノ酸の１つのみが１つ以上の保護基を保有するジペプチドを意図する。

アミノ酸対は、典型的には、各アミノ酸が、少なくとも１つの保護基（例えば、本明細書に記載されるような疎水性保護基）に結合されるアミノ酸を含む。このアミノ酸は、Ｄ型またはＬ型であり得る。特定の実施形態において、対を含むアミノ酸が互いに対して結合されない場合、各アミノ酸は、２つの保護基を保有する（例えば、表１０における分子１および２のようなもの）。

表１０．本発明の例示的なアミノ酸対

^*これは、典型的には、第２のアミノ酸とともに投与される。
^**特定の実施形態において、これらのジペプチドは互いとともに投与される。
^***特定の実施形態において、このペプチドは、単独で、または本明細書に記載される他のペプチドの１つと組み合わせてのいずれかで投与される。

適切なアミノ酸対は、対の保護されたアミノ酸および／またはジペプチドを提供すること、および次いで、上記の物理的および／または生理学的な特性の１つ以上について、アミノ酸対／ジペプチドをスクリーニングすることによって、容易に同定することができる。特定の実施形態において、本発明は、アスパラギン酸およびフェニルアラニンを含む、アミノ酸対および／またはジペプチドを除外する。特定の実施形態において、本発明は、１つのアミノ酸が（−）−Ｎ−［（トランス−４−イソプロピルシクロヘキサン）カルボニル］−Ｄ−フェニルアラニン（ナテグリニド）であるアミノ酸対および／またはジペプチドを除外する。

特定の実施形態において、対を含むアミノ酸は、酸性アミノ酸（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸など）、塩基性アミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジンなど）、および非極性アミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニンなど）からなる群より独立して選択される。特定の実施形態において、第１のアミノ酸が酸性または塩基性である場合、第２のアミノ酸は非極性であり、第２のアミノ酸が酸性または塩基性である場合、第１のアミノ酸は非極性である。特定の実施形態において、第１のアミノ酸が酸性である場合、第２のアミノ酸は塩基性であり、その逆もまた同様である（例えば、表１１を参照のこと）。

同様の組み合わせは、ジペプチドの対を投与することによって得ることができる。従って、例えば、特定の実施形態において、表１０における分子３または４は、互いとともに投与される。

表１１．特定の一般化されたアミノ酸対／ジペプチド

これらのアミノ酸対／ジペプチドは、例示的であり、かつ限定ではないことが注目される。本明細書に提供される教示を使用して、他の好適なアミノ酸対／ジペプチドは容易に決定することができる。

Ｄ）アポ−Ｊ（Ｇ ^* ペプチド）
アポＪ（例えば、種々のアポ−Ｍ誘導体）の両親媒性ヘリックスドメインを模倣するペプチドが、動脈壁細胞による酸化に対してＬＤＬを保護する際に、およびヒト動脈壁細胞によるＬＤＬの酸化から生じるＬＤＬ誘導性単球走化性活性を減少する際に特に有効であること、ならびにアテローム性動脈硬化症および／または本明細書に記載される他の病理の１つ以上の徴候を軽減可能であることが本発明の発見であったことは確実である。

アポリポタンパク質Ｊは、球状タンパク質様、またはＧ^*両親媒性ヘリックスドメインと呼ばれる広い非極性表面を保有する。クラスＧ両親媒性ヘリックスは球状タンパク質、従って、名称クラスＧ中で見い出される。この両親媒性ヘリックスのクラスは、狭い非極性表面を伴う極性表面上の正に荷電した残基および負に荷電した残基のランダムな分布によって特徴決定される。狭い非極性表面のために、このクラスは、リン脂質と容易に結合しない（Ｓｅｇｒｅｓｔら（１９９０）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ．８：１０３−１１７を参照のこと；Ｅｒｒａｔｕｍ（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，９：７９もまた参照のこと）。いくつかの交換可能なアポリポタンパク質は、Ｇ両親媒性ヘリックスと類似するが同一ではない特徴を保有する。クラスＧ両親媒性ヘリックスに類似して、この他のクラスは、極性表面上に正に荷電した残基および負に荷電した残基のランダムな分布を保有する。しかし、狭い非極性表面を有するクラスＧ両親媒性ヘリックスとは対照的に、このクラスは、このクラスをリン脂質に容易に結合させる広い非極性表面を有し、このクラスは、Ｇクラス両親媒性ヘリックスと区別するためにＧ^*と呼ばれる（Ｓｅｇｒｅｓｔら（１９９２）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．，３３：１４１−１６６を参照のこと；Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈら（１９９３）１０９−１４２頁、Ｉｎ Ｔｈｅ Ａｍｐｈｉｐａｔｈｉｃ Ｈｅｌｉｘ，Ｅｐａｎｄ，Ｒ．Ｍ．編 ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａもまた参照のこと）。

多数の好適なＧ^*両親媒性ペプチドが、同時係属出願である、２００２年４月５日に出願されたＵＳＳＮ１０／１２０，５０８、２００３年４月１日に出願されたＵＳＳＮ１０／５２０，２０７、および２００３年４月１日に出願されたＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ０３／０９９８８に記載されている。加えて、アポＪのＧ^*両親媒性ヘリックスドメインに関連する本発明の種々の適切なペプチドは、表１２に例示される。

表１２．アポＪのＧ^*両親媒性ヘリックスドメインに関連する本発明における使用に好適なペプチド

しかし、本発明のペプチドは、アポＪのＧ^*改変体に限定されない。一般的に言えば、本質的に任意の他のタンパク質、好ましくはアポタンパク質からのＧ^*ドメインもまた適切である。このようなタンパク質の特定の適切性は、例えば、実施例において本明細書で例示されるように、保護活性（例えば、酸化からのＬＤＬの保護など）についてのアッセイを使用して容易に決定することができる。いくつかの特に好ましいタンパク質には、タンパク質のＧ^*両親媒性ヘリックスドメインまたはその改変体（例えば、保存性置換など）が含まれ、これには、アポＡＩ、アポＡＩＶ、アポＥ、アポＣＩＩ、アポＣＩＩＩなどが含まれるがこれらに限定されない。

アポＪ以外のアポタンパク質に関連するＧ^*両親媒性ヘリックスドメインに関連する特定の好ましいペプチドは、表１３に例示される。

表１３．アポＪ以外のアポタンパク質に関連するＧ^*両親媒性ヘリックスドメインに関連する、本発明における使用のためのペプチド

Ｅ）アポ−Ｍから誘導されるＧ ^* ペプチド
本発明の方法において有効であることが見い出された他のＧ^*ペプチドには、アポ−Ｍから誘導されたＧ^*ペプチドが含まれるがこれに限定されない。

表１４．Ｇ^*ペプチドの例示

好適なペプチドには他に、表１５のペプチドが含まれるがこれらに限定されない。

表１５．改善された疎水性相を有するペプチドの例示

本明細書に記載されるペプチド（Ｖ２Ｗ３Ａ５Ｆ１０、１７−Ｄ−４Ｆ；Ｖ２Ｗ３Ｆ１０−Ｄ−４Ｆ；Ｗ３−Ｄ−４Ｆ）は、元来のＤ−４Ｆよりも強力であり得る。

なお好適なペプチドには他に、以下が含まれるがこれらに限定されない：Ｐ¹−ジメチルチロシン−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−Ｐ²（配列番号１）およびＰ¹−ジメチルチロシン−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐ²（配列番号２）、ここで、Ｐ１およびＰ２は、本明細書に記載されるような保護基である。特定の実施形態において、これらのペプチドには、Ｂｏｃジメチルチロシン−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＯｔＢｕ）（配列番号５）およびＢｏｃジメチルチロシン−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ（ＯｔＢｕ）（配列番号６）が含まれるがこれらに限定されない。

特定の実施形態において、本発明のペプチドは、少なくとも１つのＤアミノ酸を含み、および／または少なくとも１つまたは２つの末端保護基を含む、アミノ酸配列ＬＡＥＹＨＡＫ（配列番号８）を含むか、それからなる８ペプチドを含む。特定の実施形態において、本発明は、炎症性状態の１つ以上の徴候を改善するＡペプチドを含み、ここでこのペプチドは、約３個から約１０個までの長さのアミノ酸の範囲であり；芳香族アミノ酸または疎水性アミノ酸、及び、該アミノ酸と交互に存在する酸性アミノ酸または塩基性アミノ酸を含むアミノ酸配列を含み；疎水性末端アミノ酸、または、疎水性保護基を保有する末端アミノ酸を含み；すべてのアミノ酸がＬアミノ酸である配列ＬＡＥＹＨＡＫ（配列番号８）ではなく；ここでこのペプチドは、炎症誘発性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに転換し、および／または抗炎症性ＨＤＬをより抗炎症性にする。

ここで、上記表中に列挙されるペプチドは完全に包括的なものではないことに注意されたい。本明細書に提供される教示を使用して、他の好適なペプチドを定常作業として産生することができる（例えば、保存性または半保存性置換（例えば、ＤをＥによって置き換える）、伸長、欠失などによって）。従って、例えば、１つの実施形態は、配列番号４５９〜４８７によって同定されるいずれかの１つ以上のペプチドの短縮型を利用する。

より長いペプチドもまた好適である。このようなより長いペプチドは、クラスＧまたはＧ^*両親媒性ヘリックスを完全に形成してもよく、またはＧ両親媒性ヘリックスは、ペプチドの１つ以上のドメインを形成することができる。加えて、本発明は、これらのペプチドのマルチマーバージョンを意図する。従って、例えば、本明細書の表で例証されるペプチドは、一緒に連結されることができる（直接的に、または１つ以上の介在性アミノ酸を有するリンカー（例えば、炭素リンカー、または１つ以上のアミノ酸）を通して）。適切なリンカーには、プロリン（−Ｐｒｏ−）、Ｇｌｙ₄Ｓｅｒ₃（配列番号６２２）などが含まれるがこれらに限定されない。例えば、このようなポリマー性ペプチドとしては、（Ｄ−Ｊ３３６）−Ｐ−（Ｄ−Ｊ３３６）（すなわち、Ａｃ−Ｌ−Ｌ−Ｅ−Ｑ−Ｌ−Ｎ−Ｅ−Ｑ−Ｆ−Ｎ−Ｗ−Ｖ−Ｓ−Ｒ−Ｌ−Ａ−Ｎ−Ｌ−Ｔ−Ｑ−Ｇ−Ｅ−Ｐ−Ｌ−Ｌ−Ｅ−Ｑ−Ｌ−Ｎ−Ｅ−Ｑ−Ｆ−Ｎ−Ｗ−Ｖ−Ｓ−Ｒ−Ｌ−Ａ−Ｎ−Ｌ−Ｔ−Ｑ−Ｇ−Ｅ−ＮＨ₂、配列番号６２３）などが挙げられる。

本発明はまた、１つ以上のＧまたはＧ^*両親媒性ヘリックスドメイン、および１つ以上のクラスＡ両親媒性ヘリックスを含む「ハイブリッド」の使用を意図する。適切なクラスＡ両親媒性ヘリックスペプチドは、ＰＣＴ公開ＷＯ０２／１５９２３に記載されている。例えば、このような「ハイブリッド」ペプチドとしては、（Ｄ−Ｊ３３６）−Ｐｒｏ−（４Ｆ）（すなわち、Ａｃ−Ｌ−Ｌ−Ｅ−Ｑ−Ｌ−Ｎ−Ｅ−Ｑ−Ｆ−Ｎ−Ｗ−Ｖ−Ｓ−Ｒ−Ｌ−Ａ−Ｎ−Ｌ−Ｔ−Ｑ−Ｇ−Ｅ−Ｐ−Ｄ−Ｗ−Ｆ−Ｋ−Ａ−Ｆ−Ｙ−Ｄ−Ｋ−Ｖ−Ａ−Ｅ−Ｋ−Ｆ−Ｋ−Ｅ−Ａ−Ｆ−ＮＨ₂、配列番号６２４）などが挙げられる。

本明細書に提供される教示を使用して、当業者は、本発明の他の好適なアポＪ改変体、および／または両親媒性Ｇヘリックスペプチド、および／または両親媒性Ａヘリックスペプチドを産生するために、例示された両親媒性ヘリックスペプチドを定常作業として修飾することができる。例えば、定常作業である保存性または半保存性置換（例えば、Ｄの代わりにＥを置換して用いる）は、既存のアミノ酸を用いて成すことができる。得られるペプチドの脂質親和性に対する種々の置換の効果は、Ｐａｌｇｕｎａｃｈａｒｉら（１９９６）Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ，＆ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １６：３２８−３３８によって記載されるコンピュータ方法を使用して予測することができる。これらのペプチドは、クラスヘリックス構造が保存される限り、長くすることができ、または短くすることができる。加えて、置換は、得られるペプチドを、被験体種によって内因性に産生されるペプチドに対してより類似させるように行うことができる。

また、好ましい実施形態において、本発明のペプチドは、天然に存在するアミノ酸、または天然に存在するアミノ酸のＤ型を利用し、天然に存在しないアミノ酸（例えば、メチオニンスルホキシド、メチオニンメチルスルホニウム、ノルロイシン、イプシロン−アミノカプロン酸、４−アミノブタン酸、テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、８−アミノカプリル酸、４−アミノ酪酸、Ｌｙｓ（Ｎ（イプシロン）−トリフルオロアセチル）、α−アミノイソ酪酸など）での置換もまた考えられる。

新規なペプチドは、コンピュータ方法を使用して設計および／または評価することができる。両親媒性ヘリックスドメインを同定および分類するためのコンピュータプログラムは当業者に周知であり、多くがＪｏｎｅｓら（１９９２）Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．３３：２８７−２９６によって記載されている。このようなプログラムには、ホイール（ｗｈｅｅｌ）プログラム（ＷＨＥＥＬまたはＷＨＥＥＬ／ＳＮＯＲＫＥＬ）、ヘリックスネット（ｈｅｌｉｃａｌ ｎｅｔ）プログラム（ＨＥＬＮＥＴ，ＨＥＬＮＥＴ／ＳＮＯＲＫＥＬ，ＨＥＬＮＥＴ／Ａｎｇｌｅ）、ヘリックスホイールの付加のためのプログラム（ＣＯＭＢＯまたはＣＯＭＢＯ／ＳＮＯＲＫＥＬ）、ヘリックスネットの付加のためのプログラム（ＣＯＭＮＥＴ、ＣＯＭＮＥＴ／ＳＮＯＲＫＥＬ、ＣＯＭＢＯ／ＳＥＬＥＣＴ、ＣＯＭＢＯ／ＮＥＴ）、コンセンサスホイールプログラム（ＣＯＮＳＥＮＳＵＳ、ＣＯＮＳＥＮＳＵＳ／ＳＮＯＲＫＥＬ）などが含まれるがこれらに限定されない。

Ｅ）ブロッキング基およびＤ残基
本明細書に記載される種々のペプチド対および／またはアミノ酸対は、保護基を有さないことが示されるかもしれないが、特定の実施形態において（例えば、特に経口投与のために）、これらは、１個、２個、３個、４個、またはそれ以上の保護基を保有することができる。これらの保護基は、ペプチドのＣ末端および／もしくはＮ末端に、ならびに／またはそのペプチドを含む１つ以上の内部残基に連結することができる（例えば、構成要素のアミノ酸上の１つ以上のＲ基をブロックすることができる）。従って、例えば、特定の実施形態において、本明細書に開示される任意のペプチドは、例えば、アミノ末端を保護するアセチル基、および／またはカルボキシル基を保護するアミド基を保有することができる。このような「二重保護ペプチド」の１つの例は、Ａｃ−Ｌ−Ｌ−Ｅ−Ｑ−Ｌ−Ｎ−Ｅ−Ｑ−Ｆ−Ｎ−Ｗ−Ｖ−Ｓ−Ｒ−Ｌ−Ａ−Ｎ−Ｌ−Ｔ−Ｑ−Ｇ−Ｅ−ＮＨ₂（ブロッキング基を伴う配列番号４５９）であり、これらの保護基のいずれか、またはその両方を除外することができ、および／または本明細書に記載される別の保護基で置換することができる。

特定の理論に束縛されることはないが、特に、対象のペプチドのアミノ末端および／またはカルボキシ末端の遮断が、経口送達を大きく改善し、血清半減期を有意に改善することは本発明の発見であった。

広範な多数の保護基が、この目的に好適に使用できる。このような基には、Ｎ末端保護のために特に好ましい、アセチル基、アミド基、ならびにアセチル基およびアルキル基を有するアルキル基、ならびにカルボキシル末端保護のために好ましいアミド基が含まれるがこれらに限定されない。特定の特に好ましい実施形態において、保護基には、脂肪酸におけるようなアルキル鎖、プロペオニル、ホルミル、およびその他が含まれるがこれらに限定されない。特に好ましいカルボキシル保護基には、アミド、エステル、およびエーテル形成保護基が含まれる。１つの好ましい実施形態において、アセチル基がアミノ末端を保護するために使用され、アミド基がカルボキシル末端を保護するために使用される。これらのブロッキング基は、ペプチドのヘリックス形成傾向を増強する。特定の特に好ましいブロッキング基には、種々の長さのアルキル基、例えば、式ＣＨ₃−（ＣＨ₂）_n−ＣＯ−を有する基が含まれ、ここでｎは約１から約２０まで、好ましくは約１から約１６または１８まで、より好ましくは約３から約１３まで、最も好ましくは約３から約１０までの範囲である。

特定の特に好ましい実施形態において、保護基には、脂肪酸におけるようなアルキル鎖、プロペオニル、ホルミル、およびその他が含まれるがこれらに限定されない。特に好ましいカルボキシル保護基には、アミド、エステル、およびエーテル形成保護基が含まれる。１つの好ましい実施形態において、アセチル基がアミノ末端を保護するために使用され、アミド基がカルボキシル末端を保護するために使用される。これらのブロッキング基は、ペプチドのヘリックス形成傾向を増強する。特定の特に好ましいブロッキング基には、種々の長さのアルキル基、例えば、式ＣＨ₃−（ＣＨ₂）_n−ＣＯ−を有する基が含まれ、ここでｎは３から約２０まで、好ましくは約３から約１６まで、より好ましくは約３から約１３まで、最も好ましくは約３から約１０までの範囲である。

他の保護基には、以下が含まれるがこれらに限定されない：Ｆｍｏｃ、ｔ−ブトキシカルボニル（ｔ−ＢＯＣ）、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルホニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロへキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔ−ＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、アセチル（Ａｃ）、およびトリフルオロアセチル（ＴＦＡ）。

保護／ブロッキング基は、本発明のペプチドを含む適切な残基にこのような基を連結する方法として当業者に周知である（例えば、Ｇｒｅｅｎｅら（１９９１）Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第２版，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｓｏｍｅｒｓｅｔ，Ｎ．Ｊ．を参照のこと）。１つの好ましい実施形態において、例えば、アセチル化は、ペプチドが樹脂上に存在するときに、無水酢酸を使用する合成の間に達成される。アミド保護は、合成のための適切な樹脂の選択によって達成することができる。実施例における本明細書に記載されるペプチドの合成の間に、リンクアミド樹脂を使用した。合成の完了後に、ＡｓｐおよびＧｌｕのような酸性二官能性アミノ酸および塩基アミノ酸Ｌｙｓ、Ｔｙｒのヒドロキシル上の半永久的な保護基は、すべて同時に除去される。酸性処理を使用してこのような樹脂から遊離されるペプチドは、アセチルとして保護されたｎ−末端およびＮＨ₂として保護されたカルボキシルを用いて、ならびに他のすべての保護基の同時除去を用いて得られる。

特定の特に好ましい実施形態において、ペプチドは、本明細書に記載されるような１つ以上のＤ型（左旋性でなくむしろ右旋性）アミノ酸を含む。特定の実施形態において、少なくとも２つのエナンチオマー性アミノ酸、より好ましくは少なくとも４個のエナンチオマー性アミノ酸、および最も好ましくは少なくとも８個または１０個のエナンチオマー性アミノ酸が「Ｄ」型アミノ酸である。特定の実施形態において、本明細書に記載されるペプチドの１つおき、またはすべてのアミノ酸でさえが（例えば、すべてのエナンチオマー性アミノ酸）がＤ型アミノ酸である。

特定の実施形態において、少なくとも５０％のエナンチオマー性アミノ酸が「Ｄ」型、より好ましくは、少なくとも８０％のエナンチオマー性アミノ酸が「Ｄ」型、そして最も好ましくは、少なくとも９０％のエナンチオマー性アミノ酸が「Ｄ」型アミノ酸である。

Ｆ）ペプチド模倣物
本明細書に記載されるペプチドに加えて、ペプチド模倣物が意図される。ペプチドアナログは、鋳型ペプチドの特性と類似した特性を有する非ペプチドアナログとして、製薬産業において一般的に使用されている。これらの型の非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣物」または「ペプチド類似物」と呼ばれており（Ｆａｕｃｈｅｒｅ（１９８６）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．１５：２９；ＶｅｂｅｒおよびＦｒｅｉｄｉｎｇｅｒ（１９８５）ＴＩＮＳ ３９２頁；ならびにＥｖａｎｓら（１９８７）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３０：１２２９）、コンピュータ化された分子モデリングの補助を伴って通常開発される。治療的に有用なペプチドに対して構造的に類似するペプチド模倣物は、等価な治療的または予防的効果を産生するために使用されてもよい。

一般的に、ペプチド模倣物は、１つのパラダイムポリペプチド（例えば、表１に示される配列番号５）に対して構造的に類似しているが、当該分野において公知の方法、および以下の参考文献：Ｓｐａｔｏｌａ（１９８３）２６７頁 Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓ，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｂ．Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ編，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，；Ｓｐａｔｏｌａ（１９８３）Ｖｅｇａ Ｄａｔａ １（３）Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｂａｃｋｂｏｎｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ，（一般的概説）；Ｍｏｒｌｅｙ（１９８０）Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ４６３−４６８頁（一般的概説）；Ｈｕｄｓｏｎら（１９７９）Ｉｎｔ Ｊ Ｐｅｐｔ Ｐｒｏｔ Ｒｅｓ １４：１７７−１８５（−ＣＨ₂ＮＨ−、ＣＨ₂ＣＨ₂−）；Ｓｐａｔｏｌａら（１９８６）Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ ３８：１２４３−１２４９（−ＣＨ₂−Ｓ）；Ｈａｎｎ，（１９８２）Ｊ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ Ｉ ３０７−３１４（−ＣＨ−ＣＨ−、シスおよびトランス）；Ａｌｍｑｕｉｓｔら（１９８０）Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ．２３：１３９２−１３９８（−ＣＯＣＨ₂−）；Ｊｅｎｎｉｎｇｓ−Ｗｈｉｔｅら（１９８２）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２３：２５３３（−ＣＯＣＨ₂−）；Ｓｚｅｌｋｅら Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ａｐｐｌｎ．ＥＰ ４５６６５（１９８２）ＣＡ：９７：３９４０５（１９８２）（−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₂−）；Ｈｏｌｌａｄａｙら（１９８３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ ２４：４４０１−４４０４（−Ｃ（ＯＨ）ＣＨ₂−）；およびＨｒｕｂｙ（１９８２）Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ，３１：１８９−１９９（−ＣＨ₂−Ｓ−））においてさらに記載される方法によって、−ＣＨ₂ＮＨ−、−ＣＨ₂Ｓ−、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス）、−ＣＯＣＨ₂−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ₂−、−ＣＨ₂ＳＯ−などからなる群より選択される結合によって選択的に置換される１つ以上のペプチド結合を有する。

１つの特に好ましい非ペプチド結合は−ＣＨ₂ＮＨ−である。このようなペプチド模倣物は、例えば、より経済的な製造、より高い化学的安定性、増強された薬理学的特性（半減期、吸収、効力など）、抗原性の減少、およびその他を含む、ポリペプチドの実施形態を超えた顕著な利点を有する可能性がある。

加えて、コンセンサス配列または実質的に同一のコンセンサス配列のバリエーションを含む、本明細書に記載されるペプチドの環状並べ換えまたは束縛されたペプチド（環状ペプチドを含む）は、当該分野において公知の方法（ＲｉｚｏおよびＧｉｅｒａｓｃｈ（１９９２）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７）によって；例えば、ペプチドを環状化する分子内ジスルフィド架橋を形成可能である内部システイン残基を加えることによって生成されてもよい。

Ｇ）有機低分子
特定の実施形態において、本発明の活性薬剤は、例えば、２００４年８月１１日に出願された、同時係属出願ＵＳＳＮ６０／６００，９２５に記載される有機低分子を含む。種々の実施形態において、この有機低分子は、同時係属出願である、２００３年８月２６日に出願されたＵＳＳＮ１０／６４９，３７８、および８月１１日に出願されたＵＳＳＮ６０／４９４，４４９において記載されているテトラペプチドおよびペンタペプチドに類似し、そして特定の場合において、これらの模倣物である。

本発明の有機低分子は、典型的には、約９００ダルトン未満の分子量を有する。典型的には、これらの分子は、酢酸エチルに高度に溶解性であり（例えば、４ｍｇ／ｍＬの濃度で）、そしてまた、ｐＨ７．０の水性緩衝液中で溶解性である。

水性環境中で本発明の有機低分子と、１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）のようなリン脂質を接触させることは、典型的には、およそ７．５ｎｍ（±０．１ｎｍ）の直径を有する粒子の形成を生じる。加えて、重なり合った二重層は、しばしば、３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二重層の寸法で形成され、重なり中の二重層間の間隔はおよそ２ｎｍである。およそ３８ｎｍのベシクル構造もまた、しばしば形成される。さらに、本発明の分子が哺乳動物に投与されるとき、これらは、ＨＤＬをより抗炎症性にし、アテローム性動脈硬化症および／または炎症性応答によって特徴決定される他の状態の１つ以上の徴候を軽減する。

従って、特定の実施形態において、有機低分子は、哺乳動物における炎症性応答によって特徴決定される病理（例えば、アテローム性動脈硬化症）の１つ以上の徴候を改善するものであり、ここで、この低分子は、４ｍｇ／ｍＬ以上の濃度で酢酸エチルに溶解性であり、ｐＨ７．０の水性緩衝液に溶解性であり、そして水性環境中でリン脂質と接触されたときに、およそ７．５ｎｍの直径を有する粒子を形成し、かつ３．４〜４．１ｎｍのオーダーの二重層の寸法で重なり合った二重層を形成し、重なり中の二重層間の間隔はおよそ２ｎｍであり、９００ダルトン未満の分子量を有する。

特定の実施形態において、この分子は、化学式：

を有し、ここで、Ｐ¹、Ｐ²、Ｐ³、およびＰ⁴は、独立して選択される疎水性保護基であり；Ｒ¹およびＲ⁴は、独立して選択されるＲ基であり；ｎ、ｉ、ｘ、ｙ、およびｚは、独立して０または１であり、その結果、ｎおよびｘが両方とも０であるときには、Ｒ¹は疎水性基であり、そしてｙおよびｉが両方とも０であるときには、Ｒ⁴は疎水性基であり；Ｒ²およびＲ³は、ｐＨ７．０で酸性基または塩基性基であり、その結果、Ｒ²が酸性であるときには、Ｒ³は塩基性であり、そしてＲ²が塩基性であるときには、Ｒ³は酸性であり；ならびにＲ⁵は、存在する場合、芳香族基、脂肪族基、正に荷電した基、または負に荷電した基から選択される。特定の実施形態において、Ｒ²またはＲ³は（ＣＨ₂）ｊ−ＣＯＯＨ、ここでｊ＝１、２、３、もしくは４であり、および／または−（ＣＨ₂）ｊ−ＮＨ₂、ここでｊ＝１、２、３、４、もしくは５であり、または−（ＣＨ₂）ｊ−ＮＨ−Ｃ（＝ＮＨ）−ＮＨ₂、ここでｊ＝１、２、３、もしくは４である。特定の実施形態において、Ｒ²、Ｒ³、およびＲ⁵は、存在する場合、アミノ酸Ｒ基である。従って、例えば、種々の実施形態において、Ｒ²およびＲ³は、独立して、アスパラギン酸Ｒ基、グルタミン酸Ｒ基、リジンＲ基、ヒスチジンＲ基、またはアルギニンＲ基である（例えば、表１に例示される）。

特定の実施形態において、Ｒ¹は、Ｌｙｓ Ｒ基、Ｔｒｐ Ｒ基、Ｐｈｅ Ｒ基、Ｌｅｕ Ｒ基、Ｏｒｎ Ｒ基、またはｎｏｒＬｅｕ Ｒ基からなる群より選択される。特定の実施形態において、Ｒ⁴は、Ｓｅｒ Ｒ基、Ｔｈｒ Ｒ基、Ｉｌｅ Ｒ基、Ｌｅｕ Ｒ基、ｎｏｒＬｅｕ Ｒ基、Ｐｈｅ Ｒ基、またはＴｙｒ Ｒ基からなる群より選択される。

種々の実施形態において、ｘは１であり、Ｒ⁵は芳香族基（例えば、Ｔｒｐ Ｒ基）である。

種々の実施形態において、ｎ、ｘ、ｙ、およびｉの少なくとも１つは１であり、Ｐ¹、Ｐ²、Ｐ³、およびＰ⁴は、存在する場合、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、アセチル、アミド、炭素数３〜２０個のアルキル基、ｆｍｏｃ、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルホニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロへキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、ｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、へキシル基、およびトリフルオロアセチル（ＴＦＡ）からなる群より独立して選択される。特定の実施形態において、Ｐ¹は、存在する場合、および／もしくは、Ｐ²は、存在する場合、Ｂｏｃ−、Ｆｍｏｃ−、およびニコチニルからなる群より独立して選択され、ならびに／または、Ｐ³は、存在する場合、および／もしくは、Ｐ⁴は、存在する場合、ｔＢｕおよびＯｒＢｕからなる群より独立して選択される。

多数の保護基（Ｐ¹、Ｐ²、Ｐ³、Ｐ⁴）が上記で例示されるが、このリストは、例示であることを意図するものであって、限定を意図するものではない。本明細書に提供される教示に鑑みて、多数の他の保護／ブロッキング基もまた、当業者に公知である。このようなブロッキング基は、消化を最小化するため（例えば、経口医薬送達のため）、および／または取り込み／生物学的利用能を増加するため（例えば、鼻送達、吸入治療、直腸投与において粘膜表面を通して）、および／または血清／血漿半減期を増加するために、選択することができる。特定の実施形態において、保護基は、賦形剤として、または賦形剤の成分として提供することができる。

特定の実施形態において、ｚは０であり、この分子は化学式：

を有し、ここで、Ｐ¹、Ｐ²、Ｐ³、Ｐ⁴、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、ｎ、ｘ、ｙ、およびｉは上記と同様である。

特定の実施形態において、ｚは０であり、この分子は化学式：

を有し、ここで、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、およびＲ⁴は上記と同様である。

ある実施形態において、この分子は、化学式：

を有する。

特定の実施形態において、本発明は、本明細書に記載される物理的特性および／または機能的特性の１つ以上を有する低分子を意図し、かつ化学式：

を有し、ここで、Ｐ¹、Ｐ²、Ｐ³、およびＰ⁴は、上記のような独立して選択された疎水性保護基であり、ｎ、ｘ、およびｙは、独立して、０または１であり；ｊ、ｋ、および１は、独立して、０、１、２、３、４、または５であり；そしてＲ２およびＲ３は、ｐＨ７．０において酸性基または塩基性基であり、その結果、Ｒ²が酸性のとき、Ｒ³は塩基性であり、そしてＲ²が塩基性のとき、Ｒ³は酸性である。特定の好ましい実施形態において、この低分子は水溶性であり；そしてこの低分子は、約９００ダルトン未満の分子量を有する。特定の実施形態において、ｎ、ｘ、ｙ、ｊ、およびｌは１であり；かつｋは４である。

特定の実施形態において、Ｐ¹および／またはＰ²は芳香族保護基である。特定の実施形態において、Ｒ²およびＲ³はアミノ酸Ｒ基、例えば、上記のようなものである。種々の実施形態において、ｎ、ｘ、およびｙの少なくとも１つは１であり、Ｐ¹、Ｐ²、Ｐ³、およびＰ⁴は、存在する場合、独立して、例えば、上記のような保護基であり、以下からなる群より選択される：ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、アセチル、アミド、炭素数３〜２０個のアルキル基、Ｆｍｏｃ、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルホニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタ。

ＩＩＩ．活性薬剤の機能的アッセイ
本発明の方法における使用のための特定の活性薬剤は、種々の化学式によって（例えば、上記の一般式Ｉ）および／または特定の配列によって本明細書に記載される。特定の実施形態において、本発明の好ましい活性薬剤は、以下の機能的特徴の１つ以上によって特徴決定される：

１．炎症誘発性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに転換し、または抗炎症性ＨＤＬをより抗炎症性にする；

２．動脈壁細胞によって生成されるＬＤＬ誘導性単球走化性活性を減少する；

３．プレ−β ＨＤＬの形成およびサイクリングを刺激する；

４．ＨＤＬコレステロールを上昇させる；および／または

５．ＨＤＬパラオキソナーゼ活性を増加させる。

本明細書に開示される特異的薬剤、および／または本明細書に記載される種々の化学式に対応する薬剤は、所望のように、これらの活性の１つ以上について容易に試験することができる。

これらの機能的特性の各々についてのスクリーニングの方法は、当業者に周知である。特に、単球走化性活性、ＨＤＬコレステロール、およびＨＤＬパラオキソナーゼ活性についてのアッセイは、ＰＣＴ／ＵＳＯｌ／２６４９７（ＷＯ２００２／１５９２３）に例示されていることが注目される。

ＩＶ．ペプチドの調製
本発明において使用されるペプチドは、標準的なペプチド化学合成技術を使用して化学合成することができ、または、ペプチドが「Ｄ」アミノ酸残基を含まない場合には、組換え的に発現させることができる。特定の実施形態において、「Ｄ」アミノ酸残基を含むペプチドでさえ、組換え的に発現される。ポリペプチドが組換え的に発現される場合、宿主生物（例えば、細菌、植物、真菌細胞など）は、１種以上のアミノ酸がＤ型で独占的に生物に供給される環境中で培養される。次いで、このような系の中で組換え発現されたペプチドは、これらのＤアミノ酸を取り込む。

特定の好ましい実施形態において、ペプチドは、当業者に公知である多数の液相または固相のペプチド合成技術のいずれかによって化学合成される。配列のＣ末端アミノ酸が不溶性支持体に結合され、続いて配列中の残りのアミノ酸の連続的付加を行う固相合成は、本発明のポリペプチドの化学合成のための好ましい方法である。固相合成のための技術は当業者に周知であり、例えば、ＢａｒａｎｙおよびＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９６３）Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；３−２８４頁 Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｂｉｏｌｏｇｙ．Ｖｏｌ．２：Ｓｐｅｃｉａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ＰｅｐｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐａｒｔ Ａ．；Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄら（１９６３）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，８５：２１４９−２１５６、およびＳｔｅｗａｒｔら（１９８４）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ ｅｄ．Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，Ｉ１１によって記載されている。

特定の実施形態において、ペプチドは、固相支持体としてベンズヒデリルアミン樹脂（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ、ＮＨ₂ ０．５９ｍｍｏｌ／樹脂ｇ）を使用する固相ペプチド合成手順によって合成される。ＣＯＯＨ末端アミノ酸（例えば、ｔ−ブチルカルボニル−Ｐｈｅ）を、４−（オキシメチル）フェナセチル基を通して固相支持体に結合される。これは、従来的なベンジルエステル結合よりも安定な結合であり、さらに、完成したペプチドは、水素化によってなお切断可能である。水素供与体としてギ酸を使用する転移水素化（ｔｒａｎｓｆｅｒ ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｉｏｎ）をこの目的のために使用する。ペプチド合成および合成したペプチドの分析のために使用する詳細なプロトコールは、Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈら（１９８５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６０（１６）：１０２４８−１０２５５に付随する小冊子に記載されている。

ペプチド、特にＤアミノ酸を含むペプチドの化学合成において、合成は、所望の全長生成物に加えて、多数の短縮型のペプチドを通常合成することが注目される。精製プロセス（例えば、ＨＰＬＣ）は、典型的には、有意な量の全長生成物の損失を生じる。

Ｄペプチド（例えば、Ｄ−４）の合成において、最長型を精製する際に損失を防ぐために、混合物を透析および使用することができ、それによって最終のＨＰＬＣ精製を除外することは本発明の発見であった。このような混合物は、高度精製された生成物の抗力の約５０％（例えば、タンパク質生成物の重量あたり）を喪失するが、この混合物は、約６倍多くのペプチドを含み、従って、より高い全体活性を含む。

特定の実施形態において、ペプチド合成は、液相ケミストリー単独を利用して、または固相ケミストリーと組み合わせて実施される。１つのアプローチにおいて、最終的なペプチドは、２つ以上のサブ配列を合成することによって調製され（例えば、固相ケミストリーまたは液相ケミストリーを使用する）、次いで、液相合成においてサブ配列を結合させる。４Ｆ配列（配列番号１３）の溶液は実施例に図示される。これを行うために、３つの６アミノ酸ペプチド（サブ配列）を最初に調製する。次いで、これらのサブ配列を溶液中で連結して、完全な４Ｆペプチドを形成する。

Ｖ．薬学的製剤およびデバイス
Ａ）薬学的製剤
本発明の方法を実行するために、本発明の１つ以上の活性薬剤が、アテローム性動脈硬化症の徴候を１つ以上有するか、またはアテローム性動脈硬化症もしくは本明細書に記載される種々の他の病理のリスクを有すると診断された個体に投与される。この活性薬剤は、「ネイティブな」型で投与することができ、または所望の場合、塩、エステル、アミド、プロドラッグ、もしくは誘導体が薬理学的に適切である場合、すなわち、本発明の方法において有効であるならば、塩、エステル、アミド、プロドラッグ、誘導体などの型で投与することができる。活性薬剤の塩、エステル、アミド、プロドラッグ、もしくは誘導体は、有機合成化学の分野の当業者に公知である標準的な手順を使用して調製することができ、かつ例えば、Ｍａｒｃｈ（１９９２）Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ；Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，４ｔｈ Ｅｄ．Ｎ．Ｙ．Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅに記載されている。

例えば、酸付加塩は、典型的には適切な酸との反応を含む、従来的な方法論を使用して、遊離の塩基から調製される。一般的に、塩基型の薬物は、メタノールまたはエタノールのような極性有機溶媒に溶解され、酸がそこに加えられる。得られる酸は、沈殿するか、またはより極性が少ない溶媒の付加によって溶液にすることができるかのいずれかである。酸付加塩を調製するために適切な酸には、有機酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸など、ならびに、無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの両方が含まれる。酸付加塩は、適切な塩基を用いる処理によって、遊離の塩基に再転換されてもよい。本発明における活性薬剤の特に好ましい酸付加塩は、塩酸または臭化水素酸を使用して調製され得るハロゲン化塩である。逆に、本発明の活性薬剤の塩基性塩の調製は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、トリメチルアミンなどのような薬学的に受容可能な塩を使用して、同様の様式で調製される。特に好ましい塩基性塩には、アルカリ金属塩、例えば、ナトリウム塩および銅塩が含まれる。

エステルの調製は、典型的には、薬物の分子構造中に存在し得るヒドロキシル基および／またはカルボキシル基の官能基化を含む。エステルは、典型的には、遊離のアルコール基、すなわち、化学式ＲＣＯＯＨのカルボン酸、ここでＲはアルキル、好ましくは低級アルキルであるアシル置換誘導体から誘導される部分のアシル置換誘導体である。エステルは、所望の場合、従来的な水素化分解または加水分解の手順を使用することによって、遊離の酸に再転換することができる。

アミドおよびプロドラッグはまた、当業者に公知であるか、または関連文献に記載される技術を使用して調製可能である。例えば、アミドは、適切なアミン反応物を使用して、エステルから調製されてもよく、またはアミドは、アンモニアもしくは低級アルキルアミンとの反応によって、無水物もしくは酸塩化物から調製されてもよい。プロドラッグは、典型的には、個体の代謝系によって修飾されるまで治療的に不活性である化合物を生じる部分の共有結合的な結合によって調製される。

本発明で同定される活性薬剤は、局所的な（ｔｏｐｉｃａｌ）、経口的な、鼻からの（もしくはさもなくば吸入される）、直腸の、または局部的な（ｌｏｃａｌ）投与、例えば、エアロゾルにより、もしくは経皮的な投与のために有用であり、あるいは、本明細書に記載される１つ以上の病理／徴候（例えば、アテローム性動脈硬化症および／またはその徴候）の予防的および／または治療的な処置のために有用である。薬学的組成物は、投与の方法に依存して、種々の単位剤形で投与することができる。適切な単位剤形には、散剤、錠剤、丸薬、カプセル、ロゼンジ、坐剤、パッチ、鼻スプレー、注射液、移植可能持続放出製剤、脂質複合体などが含まれるがこれらに限定されない。

本発明の活性薬剤は、典型的には、薬学的に受容可能なキャリア（賦形剤）と合わされて、薬学的組成物を形成する。薬学的に受容可能なキャリアは、例えば、組成物を安定化するため、または活性薬剤の吸収を増加もしくは減少するために作用する、１種以上の薬学的に受容可能な化合物を含むことができる。生理学的に受容可能な化合物は、例えば、グルコース、スクロース、またはデキストランのような炭水化物、アスコルビン酸またはグルタチオンのような抗酸化剤、キレート剤、低分子量タンパク質、脂質のような保護および取り込みの増強剤、活性薬剤のクリアランスまたは加水分解を減少する組成物、または賦形剤もしくは他の安定剤、および／または緩衝剤を含むことができる。

他の生理学的に受容可能な化合物には、湿潤剤、乳化剤、分散剤、または微生物の増殖もしくは作用を妨害するために特に有用である保存剤が含まれる。種々の保存剤が周知であり、これには、例えば、フェノールおよびアスコルビン酸が含まれる。当業者は、薬学的に受容可能な化合物を含む薬学的に受容可能なキャリアの選択が、例えば、活性薬剤の投与の経路、および活性薬剤の特定の生理化学的特徴に依存することを認識する。

賦形剤は、好ましくは滅菌状態であり、一般的には、望ましくない物質を含まない。これらの化合物は、従来的な、周知の滅菌技術によって滅菌されてもよい。

治療的適用において、本発明の組成物は、本明細書に記載される１つ以上の病理の１つ以上の徴候に苦しむか、または本明細書に記載される１つ以上の病理のリスクを有する患者に、疾患および／もしくはその合併症を予防および／もしくは治癒するため、または疾患および／もしくはその合併症を少なくとも部分的に予防または停止するために十分な量で投与される。これを達成するために十分な量は、「治療有効用量」として定義される。この使用のために有効な量は、疾患の重篤度および患者の健康の一般的状態に依存する。組成物の単回または複数回の投与は、患者によって必要とされ、および許容される投薬量および頻度に依存して投与されてもよい。任意の事象において、組成物は、患者を有効に治療する（１つ以上の徴候を改善する）ために、本明細書の製剤の活性薬剤の十分な量を提供するべきである。

活性薬剤の濃度は広範に変動することができ、選択される投与の特定の様式および患者の必要性に従って、液体の量、粘度、体重などに主として基づいて選択される。しかし、濃度は、典型的には、約０．１または１ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲の投薬量、および時折それ以上を提供するように選択される。典型的な投薬量は、約３ｍｇ／ｋｇ／日〜約３．５ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは約３．５ｍｇ／ｋｇ／日〜約７．２ｍｇ／ｋｇ／日、より好ましくは約７．２ｍｇ／ｋｇ／日〜約１１．０ｍｇ／ｋｇ／日、および最も好ましくは約１１．０ｍｇ／ｋｇ／日〜約１５．０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。特定の好ましい実施形態において、投薬量は、約１０ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。特定の実施形態において、投薬量は、経口的に１日に２回与えられる、約２０ｍｇ／ｋｇ／日〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日である。このような投薬量は、特定の被験体または被験体の群における治療レジメンを最適化するように変化されてもよいことが認識される。

特定の好ましい実施形態において、本発明の活性薬剤は、経口的に投与され（例えば、錠剤を介して）または当業者に周知である標準的な方法に従って、注射液として投与される。他の好ましい実施形態において、ペプチドはまた、従来的な経皮的薬物送達系、すなわち、経皮「パッチ」を使用して、皮膚を通して送達されてもよく、ここで、活性薬剤は、典型的には、皮膚に貼られる薬物送達デバイスとして働く積層構造中に含まれる。このような構造において、薬物組成物は、典型的には、上部の裏打ち層の根底にある１つの層、すなわち「リザーバ」に含まれる。「リザーバ」という用語は、この状況において、最終的な皮膚の表面への送達のために利用可能である「活性成分」の量をいうことが認識される。従って、例えば、「リザーバ」は、パッチの裏打ち層上の粘着剤、または当業者に公知である種々の異なるマトリックス製剤のいずれかにおける活性成分を含んでもよい。このパッチは、単一のリザーバを含んでもよく、または複数のリザーバを含んでもよい。

ある実施形態において、リザーバは、薬物送達の間にこの系を皮膚に貼るために働く薬学的に受容可能な接触付着材料のポリマーマトリックスを含む。適切な皮膚接触付着材料の例には、ポリエチレン、ポリシロキサン、ポリイソブチレン、ポリアクリレート、ポリウレタンなどが含まれるがこれらに限定されない。代替的に、薬物含有リザーバおよび皮膚接触付着剤は、別々の区別できる層として存在し、リザーバの根底にある付着剤は、この場合には、上記のようなポリマーマトリックスであり得、または液体もしくはハイドロゲルリザーバであり得、またはいくつかの他の型を取ってもよい。デバイスの上部表面として働くこれらの積層中の裏打ち層は、好ましくは、「パッチ」の主要な構造エレメントとして機能し、その柔軟性の大半をデバイスに提供する。裏打ち層のために選択される材料は、好ましくは、活性薬剤および存在する他の物質に対して実質的に不浸透性である。

局所的薬物送達のための他の好ましい製剤には、軟膏およびクリームが含まれるがこれらに限定されない。軟膏は、典型的には、ワセリンまたは他の石油誘導体に基づく半固体調製物である。選択された活性薬剤を含むクリームは、典型的には、粘性の液体または半固体エマルジョン、しばしば、水中油または油中水のいずれかである。クリームベースは、典型的には水洗浄可能であり、油相、乳化剤、および水相を含む。時折、「内部」相とも呼ばれる油相は、一般的に、ワセリンおよびセチルアルコールのような脂肪アルコールからなり；水相は、通常、しかし必須ではなく、体積が油相を超えており、一般的には湿潤剤を含む。クリーム製剤中の乳化剤は、一般的に、非イオン性、アニオン性、カチオン性、または両性の界面活性剤である。使用される特定の軟膏またはクリームベースは、当業者によって認識されるように、最適な薬物送達を提供するものである。他のキャリアまたは媒体を用いる場合、軟膏ベースは、不活性、安定、非刺激性、かつ非敏感性であるべきである。

典型的なペプチド製剤とは異なり、Ｄ型アミノ酸を含む本発明のペプチドは、胃酸などによるタンパク質分解に対する保護なしで、経口的でさえ投与することができる。それにも関わらず、特定の実施形態において、ペプチド送達は、保護的な賦形剤の使用によって増強することができる。これは、典型的には、ポリペプチドを組成物と複合体化させて、酸性および酵素的加水分解に対して抵抗性にすることによって、またはポリペプチドを、リポソームのような適切に抵抗性であるキャリア中にパッケージングすることによってのいずれかで、達成することができる。経口送達のためにポリペプチドを保護する手段は、当該分野において周知である（例えば、治療剤の経口送達のための脂質組成物を記載している米国特許第５，３９１，３７７号を参照のこと）。

血清半減期の上昇は、持続放出タンパク質「パッケージング」系の使用によって維持することができる。このような持続放出系は当業者に周知である。１つの好ましい実施形態において、タンパク質およびペプチドのためのプロリース（ＰｒｏＬｅａｓｅ）生物分解性ミクロスフェア送達系（Ｔｒａｃｙ（１９９８）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．１４：１０８；Ｊｏｈｎｓｏｎら（１９９６），Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．２：７９５；Ｈｅｒｂｅｒｔら（１９９８），Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．１５，３５７）は、他の薬剤とともに、または他の薬剤を伴わずに乾燥製剤として化合物とされ得る、ポリマーマトリックス中に活性製剤を含む生物分解可能なポリマー性ミクロスフェアからなる乾燥粉末である。

プロリースミクロスフェア製造プロセスは、活性製剤の完全性を維持しながら、高いカプセル化効率を達成するように詳細に設計された。このプロセスは以下からなる（ｉ）安定化賦形剤を有する薬物溶液を噴霧凍結乾燥することによって、バルクからの凍結乾燥した薬物粒子の調製、（ｉｉ）薬物−ポリマー懸濁物の調製、続いて薬物粒子サイズを減少するための超音波処理または均質化、（ｉｉｉ）液体窒素への噴霧による、凍結した薬物−ポリマーミクロスフェアの製造、（ｉｖ）エタノールを用いてのポリマー溶媒の抽出、および（ｖ）濾過および最終的な乾燥粉末生成物を製造するための真空乾燥。得られた粉末は固体型の活性薬剤を含み、これは、多孔性ポリマー粒子中に均質かつ強固に分散される。このプロセスにおいて最も一般的に使用されるポリマー、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）は、生体適合性と生物分解性の両方である。

カプセル化は、低温（例えば−４０℃）で達成することができる。カプセル化の間、タンパク質は、水の非存在下で固体状態で維持され、従って、水で誘導されるタンパク質のコンホメーション的な移動性を最小化し、反応剤として水を含むタンパク質分解反応を妨害し、そしてタンパク質が変性を受ける可能性がある有機相−水相の界面を回避する。好ましいプロセスは、大部分のタンパク質が不溶性である溶媒を使用し、従って、高いカプセル化効率を生じる（例えば、９５％より高い）。

別の実施形態において、溶液の１種以上の成分は、例えば、希釈のために使用可能である、保存容器（例えば、あらかじめ測定した体積）中で、または一定量の水に加えるために使用可能である溶解性カプセル中で、「濃縮物」として提供することができる。

前述の製剤および投与方法は、例示を意図するものであって限定を意図しない。本明細書に提供される教示を使用して、他の好適な製剤および投与の様式が容易に工夫することが可能であることが認識される。

Ｂ）脂質ベースの製剤
特定の実施形態において、本発明の活性薬剤は、１種以上の脂質とともに投与される。この脂質は、活性薬剤の輸送／取り込みを保護／増強するために賦形剤として製剤化することができ、またはこれらは別々に投与することができる。

特定の理論に束縛されることはないが、特定のリン脂質の投与（例えば、経口投与）がＨＤＬ／ＬＤＬ比率を有意に増加できるということは本発明の発見であった。加えて、特定の中鎖リン脂質が、一般的な脂質輸送に含まれるものとは異なったプロセスによって輸送されると考えられている。従って、本発明の活性薬剤との特定の中鎖リン脂質の同時投与は、多数の利点を付与する。これらは消化または加水分解から活性薬剤を保護し、これらは取り込みを改善し、そしてこれらはＨＤＬ／ＬＤＬ比率を改善する。

脂質は、本発明の活性薬剤をカプセル化するリポソームに形成されることができ、および／またはこれらは、活性薬剤と複合体化／混合することができ、および／またはこれらは、活性薬剤に共有結合的に連結することができる。リポソームを作製し、試薬をカプセル化する方法は当業者に周知である（例えば、ＭａｒｔｉｎおよびＰａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ（１９８２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５７：２８６−２８８；Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓら（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃＬ ＵＳＡ，８８：１１４６０−１１４６４；Ｈｕａｎｇら（１９９２）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５２：６７７４−６７８１；Ｌａｓｉｃら（１９９２）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ，３１２：２５５−２５８などを参照のこと）。

これらの方法における使用のための好ましいリン脂質は、ｓｎ−１位およびｓｎ−２位において炭素数約４個から約２４個の脂肪酸を有する。特定の好ましい実施形態において、脂肪酸は飽和している。他の好ましい実施形態において、脂肪酸は不飽和であり得る。種々の好ましい脂肪酸は表１６に例証される。

表１６．本発明に記載される活性薬剤の投与のための好ましいリン脂質のｓｎ−１位および／またはｓｎ−２位における好ましい脂肪酸

これらの位置における脂肪酸は、同じであり得、または異なり得る。特に好ましいリン脂質は、ｓｎ−３位にホスホリルコリンを有する。

ＶＩ．投与
典型的には、活性薬剤は、その必要がある哺乳動物（例えば、ヒト）に投与される。このような哺乳動物は、典型的には、本明細書に記載される１つ以上の病理を有するか、またはそのリスクを有する哺乳動物（例えば、ヒト）を含む。

活性薬剤は、本明細書に記載されるように、注射、坐剤、鼻スプレー、時限放出移植物、経皮パッチなどを含むがこれらに限定されない多数の標準的な方法のいずれかに従って投与することができる。１つの特に好ましい実施形態において、ペプチドは、経口的に投与される（例えば、シロップ、カプセル、または錠剤として）。

本発明は、本発明の単独の活性薬剤の投与、または２つ以上の異なる活性薬剤の投与を含む。この活性薬剤は、モノマーとして（例えば、別々の製剤中で、または組み合わせた製剤中で）、またはダイマー型、オリゴマー型、またはポリマー型として提供することができる。特定の実施形態において、マルチマー型は、結合した（例えば、イオン的または疎水的に結合した）モノマーを含んでもよいが、特定の他のマルチマー型は、共有結合した（直接結合したか、またはリンカーを通して結合した）モノマーを含む。

本発明は、ヒトにおける使用のために説明されているが、これはまた、動物のため、例えば、獣医学的な用途のために適切である。従って、特定の好ましい生物には、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ科、ウマ科、ネコ科、ブタ、有蹄動物、ウサギ（ｌａｒｇｏｍｏｒｐｈ）などが含まれるがこれらに限定されない。

本発明の方法は、本明細書に記載される病理の徴候の１つ以上を示すヒトまたは非ヒト動物においてのみならず、予防的状況においてもまた有用である。本発明の活性薬剤を、本発明に記載される病理（例えば、アテローム性動脈硬化症、脳卒中など）の１つ以上の徴候の開始／発生を予防するために生物に投与することができる。この状況における特に好ましい被験体は、病理についての１つ以上のリスク要因を示す被験体である。例えば、アテローム性動脈硬化症の場合において、リスク要因には、家族歴、高血圧、肥満、高アルコール消費、喫煙、高血中コレステロール、高血中トリグリセリド、血中ＬＤＬ、ＶＬＤＬ、ＩＤＬの上昇、もしくは低ＨＤＬ、糖尿病もしくは糖尿病の家族歴、高血中脂質、心臓発作、狭心症または脳卒中などが含まれる。

ＶＩＩ． 薬物溶出ステント
以前に狭窄し、続いて拡張した末梢または冠状動脈の血管の再閉鎖である再狭窄は、顕著な頻度で起こり（例えば、これらの手順の２０〜５０％）、多数の臨床的および形態学的な変数に依存する。再狭窄は、血管形成術手順の直後に開始する可能性があるが、しかし通常は、ほぼ６ヶ月の末には終わる。

再狭窄の問題に取り組むために開発された最近の技術は、血管内ステントである。ステントは、典型的には、冠状動脈または末梢の血管において永続的に移植される（拡張される）デバイスである。これらのステントの目的は、疾患を有する（狭窄した）血管のための長期的な「足場」または支持体を提供することである。血管が内側から支持されるならば、閉塞せず、または再狭窄しないという理論が存在する。

既知のステント設計には、単一フィラメントワイヤコイルステント（例えば、米国特許第４，９６９，４５８号を参照のこと）；溶接金属ケージ（例えば、米国特許第４，７３３，６６５号および同第４，７７６，３３７号を参照のこと）；外周に形成された軸スロットを有する薄壁金属円筒（例えば、米国特許第４，７３３，６６５号、同第４，７３９，７６２号、同第４，７７６，３３７号などを参照のこと）が含まれるがこれらに限定されない。ステントにおける使用のための既知の構成材料には、ポリマー、有機繊維および生体適合性金属、例えば、ステンレス鋼、金、銀、タンタル、チタン、およびニチノールのような形状記憶合金が含まれるがこれらに限定されない。

再狭窄をさらに予防するために、ステントは、再狭窄と関連する細胞増殖を阻害するために、例えば、制御放出製剤中の１種以上の医薬で、被覆および／または含浸することができる。最も一般的なこのような「薬物−溶出」ステントは、種々の癌薬物（細胞毒）を送達するように設計される。

しかし、炎症性応答を軽減すること、酸化脂質および／または他の酸化種を減少および／または除去すること、マクロファージ走化性活性を阻害することなどにおけるそれらの活性のために、本明細書に記載の活性薬剤は、再狭窄を予防するために十分に適している。従って、特定の実施形態において、本発明は、表面上に被覆され、および／またはステントの表面における腔または微小腔に保持される本明細書に記載される１種以上の本明細書に記載される活性薬剤を有するステントを意図する（例えば、図１８Ａおよび１８Ｂを参照のこと）。

特定の実施形態において、活性薬剤は、生体適合性マトリックス（例えば、生体適合性ポリマー、例えば、ウレタン、シリコーンなど）の中に含まれる。適切な生体適合性材料は、例えば、米国特許出願２００５００８４５１５、２００５００７９１９９１、２００５００７０９９６などに記載されている。種々の実施形態において、ポリマーには、シリコーン−ウレタンコポリマー、ポリウレタン、フェノキシ、エチレン酢酸ビニル、ポリカプロラクトン、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）、ポリラクチド、ポリスルホン、エラスチン、フィブリン、コラーゲン、コンドロイチン硫酸、生体適合性ポリマー、生物安定ポリマー、生物分解性ポリマーが含まれるがこれらに限定されない。

従って、特定の実施形態において、本発明は、身体中の血管に薬物を送達するためのステントを提供する。このステントは、典型的には、その中に形成された複数のリザーバを含むステントフレームワークを備える。これらのリザーバは、典型的には、活性薬剤、ならびに／またはリザーバ中に配置されおよび／もしくはステントの表面上に被覆された活性薬剤含有ポリマーを含む。種々の実施形態において、このステントは、金属ベースまたはポリマーベースである。特定の好ましいステント材料には、ステンレス鋼、ニチノール、タンタル、ＭＰ３５Ｎ合金、白金、チタン、適切な生体適合性合金、適切な生体適合性ポリマー、およびこれらの組み合わせが含まれるがこれらに限定されない。

種々の実施形態において、このステントが孔（例えば、リザーバ）を備える場合、これらの孔は微小孔（例えば、約１０から約５０μｍ、好ましくは約２０μｍ以下の範囲の直径を有する）を含むことができる。種々の実施形態において、この微小孔は、約１０μｍ〜約５０μｍの範囲の深さを有する。種々の実施形態において、この微小孔は、ステントの内部表面上の開口部およびステントの外部表面上の開口部を備えるステントフレームワークを貫通して伸びる。特定の実施形態において、このステントは、選択的に、ステントフレームワークの内部表面上に配置され、前記貫通微小孔の少なくとも一部を覆うキャップ層を備え、これはステントフレームワークの内部表面からの薬物ポリマー中の薬物の溶出速度を制御するためのバリア特性を提供する。種々の実施形態において、このリザーバは、ステントフレームワークの外部表面に沿ったチャネルを備える。このステントは、任意に、ポリマーの異なる層が異なる活性薬剤および／または他の薬物を有する、ポリマーの複数の層を備えることができる。

特定の実施形態において、このステントは、選択的に、ステントフレームワークとポリマーの間に配置された付着層を備える。適切な付着層は、ポリウレタン、フェノキシ、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）−ポリラクチド、ポリスルホン、ポリカプロラクトン、付着促進剤、および／またはこれらの組み合わせを含むがこれらに限定されない。

ステントに加えて、活性薬剤は、血管外および／または血管内の位置における移植のために構成された本質的に任意の移植可能な医療デバイスの上を被覆することができ、またはその中に含めることができる。

以下を含む、薬物−ポリマーステントを製造する方法もまた提供される。この方法は、ステントフレームワークを提供する工程；例えば、高出力レーザーを使用して、ステントフレームワーク中の複数のリザーバを切断する工程；少なくとも１つのリザーバに１種以上の活性薬剤および／または薬物ポリマーを適用する工程；薬物ポリマーを乾燥させる工程；乾燥した薬物ポリマーにポリマー層を適用する工程；ならびにポリマー層を乾燥させる工程を含む。活性薬剤および／またはポリマーは、噴霧、浸漬、塗布、ブラシかけおよび調剤を含むがこれらに限定されない任意の便利な方法によって適用することができる。

血管の状態、および／または炎症性応答によって特徴決定される状態、および／または酸化した反応種の形成によって特徴決定される状態を治療する方法もまた提供される。これらの方法は、典型的には、身体中に（例えば、身体の血管中に）上記のようなステントまたは他の移植可能なデバイスを配置する工程、および移植物の少なくとも１つの表面から少なくとも活性薬剤を溶出する工程を含む。

ＶＩＩＩ． ペプチドの取り込みの促進
すべてＬアミノ酸のペプチド（例えば、他の点では本発明のペプチドの配列を有する）がＤ型（すなわち、本発明のペプチド）とともに投与される場合、Ｄ型ペプチドの取り込みが促進されることもまた、本発明の驚くべき発見であった。従って、特定の実施形態において、本発明は、本発明の方法におけるＤ型およびＬ型のペプチドの組み合わせの使用を意図する。Ｄ型ペプチドおよびＬ型ペプチドは、異なるアミノ酸配列を有することができ、しかし、好ましい実施形態においては、これらは、両方とも、本明細書に記載されるペプチドのアミノ酸配列を有し、そしてさらにより好ましい実施形態においては、これらは同じアミノ酸配列を有する。

本発明の両親媒性ヘリックスペプチドのコンカテマーもまた、アテローム性動脈硬化症の１つ以上の徴候を軽減する際に有効であることもまた、本発明の発見であった。これらのコンカテマーを含むモノマーは、直接一緒に連結することができ、またはリンカーによって結合することができる。特定の実施形態において、リンカーは、アミノ酸リンカー（例えば、プロリン）またはペプチドリンカー（例えば、Ｇｌｙ₄Ｓｅｒ₃、配列番号６２５）である。特定の実施形態において、コンカテマーは２マー、より好ましくは３マー、さらにより好ましくは４マー、および最も好ましくは５マー、８マーまたは１０マーである。上記に示されるように、このコンカテマーは、ＰＣＴ公開ＷＯ２００２／１５９２３に記載されるようなアポＡ−Ｉ改変体と組み合わせた、本明細書に記載されるようなＧ^*関連両親媒性ヘリックスを含むことができる。

ＩＸ． 薬理学的に活性である添加的薬剤
さらに添加的に、薬理学的に活性な薬剤を、主要な活性薬剤、例えば、本発明のペプチドとともに送達させてもよい。ある実施形態において、このような薬剤には、アテローム性動脈硬化症の事象および／またはその合併症のリスクを減少する薬剤が含まれるがこれらに限定されない。これらの薬剤には、ベータ遮断薬、ベータ遮断薬およびチアジド系利尿薬の組み合わせ、スタチン、アスピリン、ａｃｅ阻害剤、ａｃｅ受容体阻害剤（ＡＲＢ）などが含まれるがこれらに限定されない。

好適なベータ遮断薬には、心選択性遮断薬（心選択性ベータ１遮断薬）、例えば、アセブトロール（セクトラル（Ｓｅｃｔｒａｌ）（商標））、アテノロール（テノルミン（Ｔｅｎｏｒｍｉｎ）（商標））、ベータキソロール（ケルロン（Ｋｅｒｌｏｎｅ）（商標））、ビソプロロール（ゼベータ（Ｚｅｂｅｔａ）（商標））、メトプロロール（ロプレッサー（Ｌｏｐｒｅｓｓｏｒ）（商標））などが含まれるがこれらに限定されない。好適な非選択的遮断薬（ベータ１およびベータ２を等しく遮断する）には、カルテオロール（カルトロール（Ｃａｒｔｏｒｏｌ）（商標））、ナドロール（コルガード（Ｃｏｒｇａｒｄ）（商標））、ペンブトロール（レバトール（Ｌｅｖａｔａｌ）（商標））、ピンドロール（ビスケン（Ｖｉｓｋｅｎ）（商標））、プロプラノロール（インデラル（Ｉｎｄｅｒａｌ）（商標））、チモロール（ブロックアドレン（Ｂｌｏｃｋａｄｒｅｎ）（商標））、ラベタロール（ノルモダイン（Ｎｏｒｍｏｄｙｎｅ）（商標）、トランデート（Ｔｒａｎｄａｔｅ）（商標））などが含まれるがこれらに限定されない。

好適なベータ遮断薬チアジド系利尿薬の組み合わせには、ロプレッサー（Ｌｏｐｒｅｓｓｏｒ）ＨＣＴ、ＺＩＡＣ、テノレティック（Ｔｅｎｏｒｅｔｉｃ）、コルジド（Ｃｏｒｚｉｄｅ）、テモリド（Ｔｉｍｏｌｉｄｅ）、インダラル（Ｉｎｄｅｒａｌ）ＬＡ ４０／２５、インデリド（Ｉｎｄｅｒｉｄｅ）、ノルモジド（Ｎｏｒｍｏｚｉｄｅ）などが含まれるがこれらに限定されない。

好適なスタチンには、プラバスタチン（プラバコール（Ｐｒａｖａｃｈｏｌ）／ブリストール（Ｂｒｉｓｔｏｌ）−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、シンバスタチン（ゾコール（Ｚｏｃｏｒ）／Ｍｅｒｃｋ）、ロバスタチン（メバコール（Ｍｅｖａｃｏｒ）／Ｍｅｒｃｋ）などが含まれるがこれらに限定されない。

好適なａｃｅ阻害剤には、以下が含まれるがこれらに限定されない：カプトプリル（例えば、Ｓｑｕｉｂｂによるカポテン（Ｃａｐｏｔｅｎ）（商標））、ベナゼプリル（例えば、Ｎｏｖａｒｔｉｓによるロテンシン（Ｌｏｔｅｎｓｉｎ）（商標））、エナラプリル（例えば、Ｍｅｒｃｋによるバソテック（Ｖａｓｏｔｅｃ）（商標））、フォシノプリル（ｆｏｓｉｎｏｐｒｉｌ）（例えば、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓによるモノプリル（Ｍｏｎｏｐｒｉｌ）（商標））、リシノプリル（例えば、Ｍｅｒｃｋによるプリニビル（Ｐｒｉｎｉｖｉｌ）（商標）またはＡｓｔｒａ−Ｚｅｎｅｃａによるゼストリル（Ｚｅｓｔｒｉｌ）（商標））、キナプリル（例えば、Ｐａｒｋｅ−Ｄａｖｉｓによるアキュプリル（Ａｃｃｕｐｒｉｌ）（商標））、ラミプリル（例えば、Ｈｏｅｃｈｓｔ Ｍａｒｉｏｎ Ｒｏｕｓｓｅｌ， Ｋｉｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによるアトレース（Ａｌｔａｃｅ）（商標））、イミダプリル、ペリンドプリルエルビウム（例えば、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒによるエースオン（Ａｃｅｏｎ）（商標））、トランドラプリル（例えば、Ｋｎｏｌｌ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌによるマビック（Ｍａｖｉｋ）（商標））など。好適なＡＲＢＳ（Ａｃｅ受容体遮断薬）には、ロサルタン（例えば、Ｍｅｒｃｋによるコザール（Ｃｏｚａａｒ）（商標））、イルベサルタン（ｉｒｂｅｓａｒｔａｎ）（例えば、Ｓａｎｏｆｉによるアバプロ（Ａｖａｐｒｏ）（商標））、カンデサルタン（ｃａｎｄｅｓａｒｔａｎ）（例えば、Ａｓｔｒａ Ｍｅｒｃｋによるアタカンド（Ａｔａｃａｎｄ）（商標））、バルサルタン（例えば、Ｎｏｖａｒｔｉｓによるジオバン（Ｄｉｏｖａｎ）（商標））などが含まれるがこれらに限定されない。

Ｘ． アテローム性動脈硬化症の１つ以上の徴候の改善のためのキット
別の実施形態において、本発明は、アテローム性動脈硬化症の１つ以上の徴候の改善のため、またはアテローム性動脈硬化症についてのリスクを有する被験体（ヒトまたは動物）の予防的処置のため、または本明細書に記載される他の状態の１つ以上の治療もしくは予防のためのキットを提供する。このキットは、好ましくは、本発明の活性薬剤の１つ以上を含む容器を含む。この活性薬剤は、単位投薬量製剤（例えば、坐剤、錠剤、カプレット、パッチなど）の中で提供することができ、および／または１つ以上の薬学的に受容可能な賦形剤と選択的に組み合わされてもよい。

このキットは、選択的に、心臓病および／またはアテローム性動脈硬化症の治療のために使用される１つ以上の薬剤をさらに含む。このような薬剤には、例えば、上記のような、ベータ遮断薬、血管拡張薬、アスピリン、スタチン、ａｃｅ阻害剤、またはａｃｅ受容体阻害剤（ＡＲＢ）などが含まれるがこれらに限定されない。

加えて、このキットは、選択的に、本発明の方法の実施、または「治療薬」もしくは「予防薬」の使用のための指示書（すなわち、プロトコール）を提供する、ラベルおよび／または指示的資料を含む。好ましい指示的資料は、アテローム性動脈硬化症の１つ以上の徴候を軽減するため、および／またはアテローム性動脈硬化症のリスクを有する個体にそのような徴候の１つ以上の発症または増加を予防するため、および／または炎症性応答によって特徴決定される病理の１つ以上の徴候を軽減するための本発明の１種以上のポリペプチドの使用を説明する。これらの指示的資料はまた、選択的に、好ましい投薬量／治療的レジメ、回数の指示（ｃｏｕｎｔｅｒ ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）などを教示してもよい。

この指示的資料は、典型的には、書かれた資料または印刷された資料を含むが、このようなものに限定されない。このような指示を記憶し、およびこれらを末端のユーザに伝達することが可能である任意の媒体が本発明によって意図される。このような媒体には、電子保存媒体（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学的媒体（例えば、ＣＤ ＲＯＭ）などが含まれるがこれらに限定されない。このような媒体は、このような指示的資料を提供するインターネットサイトへのアドレスを含んでもよい。

以下の実施例は、特許請求される発明を例証するために提供されるものであり、これを限定するために提供されるものではない。

実施例１
アテローム性動脈硬化症の徴候を媒介するためのアポＪ関連ペプチドの使用
Ａ） ＬＤＬ誘導性単球走化性活性の阻害
図１は、同時インキュベーションにおけるインビトロでのＬＤＬ誘導性単球走化性活性の阻害に対する、Ｄアミノ酸から作られたアポＪペプチド（Ｄ−Ｊ３３６、Ａｃ−Ｌ−Ｌ−Ｅ−Ｑ−Ｌ−Ｎ−Ｅ−Ｑ−Ｆ−Ｎ−Ｗ−Ｖ−Ｓ−Ｒ−Ｌ−Ａ−Ｎ−Ｌ−Ｔ−Ｑ−Ｇ−Ｅ−ＮＨ₂、配列番号１３）の効果との、Ｄ−４Ｆ （Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２００２；１０５：２９０−２９２）の効果の比較を図示する。ヒト大動脈内皮細胞を、培地単独とともに（添加なし）、対照区ヒトＬＤＬとともに（２００μｇタンパク質／ｍｌ）、または対照区ヒトＬＤＬ＋対照区ヒトＨＤＬ（３５０μｇタンパク質／ｍｌ）とともにインキュベートした。対照区ヒトＬＤＬ（２００μｇタンパク質／ｍｌ）に加えて、Ｄ−Ｊ３３６またはＤ−４Ｆを、示されるような濃度範囲で他のウェルに加えた。一晩のインキュベーション後、上清を、単球走化性活性についてアッセイした。図１に示されるように、ヒト動脈壁細胞によるＬＤＬ誘導性の単球走化性活性を阻害するアポＪ改変体ペプチドのインビトロ濃度は、Ｄ−４Ｆペプチドについて必要とされる濃度よりも１０〜２５倍低い。

Ｂ） Ｄ−Ｊ３３６での動脈壁細胞の前処理によるＬＤＬ誘導性単球走化性活性の阻害
図２は、プレインキュベーションにおけるＬＤＬ誘導性単球走化性活性の阻害に対する、Ｄ−Ｊ３３６とのＤ−４Ｆの効果の比較を図示する。ヒト大動脈内皮細胞を、Ｄ−Ｊ３３６またはＤ−４Ｆとともに、ＤＪ３３６については４、２、および１μｇ／ｍｌで、またはＤ−４Ｆについては、１００、５０、２５、および１２．５μｇ／ｍｌで、６時間プレインキュベートした。次いで、培養物を洗浄し、そして培地単独とともに（添加なし）、対照区ヒトＬＤＬとともに（２００μｇタンパク質／ｍｌ）、またはアッセイ対照区として、対照区ヒトＬＤＬ＋対照区ヒトＨＤＬ（３５０μｇＨＤＬタンパク質／ｍｌ）とともにインキュベートした。ペプチドと前処理したウェルは、２００μｇタンパク質／ｍｌで、対照区ヒトＬＤＬを受容した。一晩のインキュベーション後、上清を、単球走化性活性についてアッセイした。

図２に図示されるように、アポＪ改変体ペプチドは、動脈壁細胞によるＬＤＬ酸化をインビトロで阻害する際に、１０〜２５倍強力であった。

Ｃ） ＬＤＬ受容体ヌルマウスにおけるＨＤＬ保護能力に対するアポＪペプチド模倣物の効果
Ｆと称するＤ−４Ｆ、またはＤアミノ酸から作られたアポＪペプチド（Ｄ−Ｊ３３６、Ｊと称する）を、飲用水ｍｌあたり０．２５または０．５ｍｇで、ＬＤＬ受容体ヌルマウス（グループあたり４匹）の飲用水に加えた。２４時間または４８時間後、マウスから血液を収集し、これらのＨＤＬを単離し、そしてＬＤＬ誘導性単球走化性活性に対して保護するそれらの能力について試験した。アッセイ対照区は、リポタンパク質を受容していない培養ウェル（添加なし）、または対照区ヒトＬＤＬ単独を受容した培養ウェル（ＬＤＬと称する、２００μｇコレステロール／ｍｌ）、または対照区ＬＤＬ＋対照区ヒトＨＤＬを受容した培養ウェル（＋ＨＤＬと称する、３５０μｇ ＨＤＬコレステロール）を含んだ。マウスＨＤＬを試験するために、対照区ＬＤＬを、マウスＨＤＬと一緒に動脈壁細胞培養物に加えた（＋Ｆ ＨＤＬまたは＋Ｊ ＨＤＬ）。マウスＨＤＬは、それぞれ、１００μｇコレステロール／ｍｌで加えた。Ｄ−４ＦまたはＤ−Ｊ３３６のいずれかでの処理後、１００μｇ／ｍｌのマウスＨＤＬは、動脈壁細胞が単球走化性活性を産生するように誘導することから対照区ＬＤＬを妨害する際に、３５０μｇ／ｍｌの対照区ヒトＨＤＬと同程度に活性であった。インビトロおよびインビボにおける、Ｄ−４Ｆと比較したＤ−Ｊ３３６ペプチドのために必要とされる相対的な用量の間の矛盾の理由は、水中でのペプチドの溶解性に関連する可能性があり、本発明者らは、等しい溶解度を達成するために測定が行われる場合には、Ｄ−Ｊペプチドは、これらがインビトロにおけるものと同様に、インビボにおいてはるかにより活性であると考える。

Ｄ） 経口ペプチドを与えたアポＥヌルマウスからのＨＤＬによる、ＬＤＬ誘導性単球走化性活性に対する保護
図４は、ＨＤＬ保護能力に対する経口アポＡ−１ペプチド模倣物およびアポＪの効果を図示する。アポＥヌルマウス（グループあたり４匹）に、飲用水ｍｌあたり５０、３０、２０、１０、５μｇのＤ−４Ｆ（Ｆと称する）または飲用水ｍｌあたり５０、３０もしくは２０μｇのアポＪペプチド（Ｊと称する）を供給した。２４時間後、血液を収集し、血漿をＦＰＬＣによって分画し、ＬＤＬを含む画分（マウスＬＤＬについてｍＬＤＬと称する）およびＨＤＬを含む画分（ｍＨＤＬと称する）を別々にプールし、そしてＬＤＬ誘導性単球走化性活性によって測定されるような、ＬＤＬ酸化に対するＨＤＬ保護能力を測定した。アッセイ対照区のために、培養ウェルは、リポタンパク質を受容せず（添加なし）、ｍＬＤＬ単独（２００μｇコレステロール／ｍｌ）を受容し、またはｍＬＤＬ＋標準正常ヒトＨＤＬ（対照区ｈ ＨＤＬと称する、３５０μｇ ＨＤＬコレステロール／ｍｌ）を受容した。

マウスＨＤＬを試験するために、ｍＬＤＬは、マウスＨＤＬとともに（＋Ｆ ｍＨＤＬまたは＋Ｊ ｍＨＤＬ）、動脈壁細胞培養に加えた。それらの飲用水中でいかなるペプチドも受容しなかったマウスからのＨＤＬは、ペプチドなしｍＨＤＬと称する。マウスＨＤＬは１００μｇコレステロール／ｍｌで使用した。Ｄ−ＦまたはＤ−Ｊ３３６を受容した後、１００μｇ／ｍｌのマウスＨＤＬは、３５０μｇ／ｍｌの正常ヒトＨＤＬと同程度の活性であった。図４に示されるように、飲用水に加えられたとき、Ｄ−Ｊペプチドは、アポＥヌルマウスにおけるＨＤＬ保護能力を増強する際に、Ｄ−４Ｆと同程度に強力であった。

Ｅ） ペプチドを経口投与されたアポＥヌルマウスから得られたＬＤＬが単球走化性活性を誘導する能力
図５は、酸化に対するＬＤＬの感受性に対する経口アポＡ−１ペプチド模倣物およびアポＪペプチドの効果を図示する。アポＥヌルマウス（グループあたり４匹）に、飲用水中で、飲用水ｍｌあたり５０、３０、２０、１０、５μｇのＤ−４Ｆ（Ｆと称する）または飲用水ｍｌあたり５０、３０もしくは２０μｇのアポＪペプチド（Ｄアミノ酸から作られたＤ−Ｊ３３６、Ｊと称する）を供給した。２４時間後、図４に示されるようにマウスから血液を収集し、血漿をＦＰＬＣによって分画し、ＬＤＬを含む画分（マウスＬＤＬについてｍＬＤＬと称する）をプールし、そして単球走化性活性の誘導によって測定されるような、酸化に対するＬＤＬの感受性を測定した。アッセイ対照区のために、培養ウェルは、リポタンパク質を受容せず（添加なし）、ｍＬＤＬ単独（２００μｇコレステロール／ｍｌ）を受容し、またはｍＬＤＬ＋標準正常ヒトＨＤＬ（対照区ｈ ＨＤＬと称する、３５０μｇ ＨＤＬコレステロール／ｍｌ）を受容した。

Ｄ−４Ｆを受容したマウスからのマウスＬＤＬ、ｍＬＤＬ（Ｆ ｍＬＤＬ）、またはアポＪペプチドを受容したマウスからのｍＬＤＬ（Ｊ ｍＬＤＬ）を、動脈壁細胞培養に添加した。飲用水中でいかなるペプチドも受容しなかったマウスからのＬＤＬは、ペプチドなしＬＤＬと称する。

図５に示されるように、飲用水に加えられたとき、Ｄ−Ｊ３３６は、単球走化性活性の誘導によって決定したところ、アポＥヌルマウスからのＬＤＬを、ヒト動脈壁細胞による酸化に対して抵抗性にする際に、Ｄ−４Ｆよりもわずかに強力であった。

Ｆ） 経口ペプチドを与えられたアポＥヌルマウスから得られたＨＤＬによる、リン脂質酸化および単球走化性活性の誘導に対する保護
図６は、ＨＤＬの保護能力に対する経口アポＡ−１ペプチド模倣物およびアポＪペプチドの効果を図示する。アポＥヌルマウス（グループあたり４匹）に、飲用水ｍｌあたり５０、３０、２０、１０、５μｇのＤ−４Ｆ（Ｆと称する）または飲用水ｍｌあたり５０、３０もしくは２０μｇのアポＪペプチド（Ｄアミノ酸から作られたＤ−Ｊ３３６、Ｊと称する）を供給した。２４時間後、血液を収集し、血漿をＦＰＬＣによって分画し、ＨＤＬを含む画分（ｍＨＤＬと称する）をプールし、さらに、単球走化性活性の誘導によって測定される、ＰＡＰＣ酸化に対するＨＤＬ保護能力を測定した。アッセイ対照区のために、培養ウェルは、リポタンパク質を受容せず（添加なし）、２０μｇ／ｍｌのリン脂質ＰＡＰＣ＋１．０μｇ／ｍｌのＨＰＯＤＥを受容し、またはＰＡＰＣ＋ＨＰＯＤＥプラス標準正常ヒトＨＤＬ（３５０μｇ ＨＤＬコレステロール／ｍｌ、＋対照区ｈ ＨＤＬと称する）を受容した。

マウスＨＤＬを試験するために、ＰＡＰＣ＋ＨＰＯＤＥは、マウスＨＤＬ（＋Ｆ ｎＨＤＬまたは＋Ｊ ｍＨＤＬ）と一緒に、動脈壁細胞培養に加えた。それらの飲用水中でいかなるペプチドも受容しなかったマウスからのＨＤＬは、「ペプチドなしｍＨＤＬ」と称する。マウスＨＤＬは１００μｇコレステロール／ｍｌで使用した。

図６に示されるデータは、飲用水に加えられたとき、Ｄ−Ｊ３３６は、単球走化性活性の生成によって決定したところ、ヒト動脈壁同時培養における酸化剤ＨＰＯＤＥによるリン脂質ＰＡＰＣの酸化をＨＤＬが阻害することを引き起こす際に、Ｄ−４Ｆと同程度に強力であったことを示す。

Ｇ） マウスにおける血漿パラオキソナーゼ活性に対する経口アポＡ−１ペプチド模倣物およびアポＪペプチドの効果
図７は、マウスにおける血漿パラオキソナーゼ活性に対する経口アポＡ−１ペプチド模倣物およびアポＪペプチドの効果を示す。アポＥヌルマウス（グループあたり４匹）に、飲用水ｍｌあたり５０、１０、５もしくは０μｇのＦと称するＤ−４Ｆまたは飲用水ｍｌあたり５０、１０もしくは５μｇのアポＪペプチド（Ｄアミノ酸から作られたＤ−Ｊ３３６、Ｊと称する）を供給した。２４時間後、血液を収集し、血漿をＰＯＮ１活性についてアッセイした。これらのデータは、飲用水に加えられたとき、Ｄ−Ｊ３３６は、アポＥヌルマウスのパラオキソナーゼ活性を増加させる際に、少なくともＤ−４Ｆと同程度に強力であったことを実証する。

実施例２
経口Ｇ ^* ペプチドはアポＥ欠損マウスにおいてＨＤＬ保護能力を増加する
雌性４ヶ月齢アポＥ欠損マウス（グループあたりｎ＝４）を、以下のアミノ酸配列を有するＧ^*ペプチドで処理した。ペプチド１１３−１２２：Ａｃ−ＬＶＧＲＱＬＥＥＦＬ−ＮＨ₂（配列番号６２６）、ペプチド３３６−３５７：Ａｃ−ＬＬＥＱＬＮＥＱＦＮＷＶＳＲＬＡＮＬＴＱＧＥ−ＮＨ₂（配列番号６２７）、およびペプチド３７７−３９０：Ａｃ−ＰＳＧＶＴＥＶＶＶＫＬＦＤＳ−ＮＨ₂（配列番号６２８）。

各マウスは、胃管チューブにより２００μｇのペプチドを受容した。４時間後、血液を入手し、血漿を分離し、リポタンパク質を分画し、そしてＨＤＬ（ｍｌあたり２５μｇ）を、ヒト動脈壁細胞の培養中でのＬＤＬ（ｍｌあたり１００μｇ）の酸化に対する保護能力についてアッセイした。データを図８に示す。このペプチドは、マウスにおける顕著なＨＤＬ保護能力を与えた。

別の実験において、雌性４ヶ月齢アポＥ欠損マウス（グループあたりｎ＝４）を、配列：Ａｃ−ＱＱＴＨＭＬＤＶＭＱＤ−ＮＨ₂（配列番号６２９）を有する１１アミノ酸Ｇ^*ペプチド１４６−１５６で処理した。マウスは、このペプチドを、それらの飲用水中で、示された濃度で受容した（図９を参照のこと）。１８時間後、血液を入手し、血漿を分離し、リポタンパク質を分画し、そしてＨＤＬ（ｍｌあたり５０μｇコレステロール）を、ヒト動脈壁細胞の培養中でのＰＡＰＣ（ｍｌあたり２５μｇ）＋ＨＰＯＤＥ（ｍｌあたり１．０μｇ）の酸化に対する保護能力についてアッセイした。アッセイ対照区は、添加なし、ＰＡＰＣ＋ＨＰＯＤＥ、およびＰＡＰＣ＋ＨＰＯＤＥプラス対照区ＨＤＬ（＋ＨＤＬと称する）を含んだ。データは、３連の培養物中の９個の高倍率視野中の移動した単球の数の平均＋／−ＳＤである。星印は、水対照区（０μｇ／ｍｌ）に対してｐ＜０．０５のレベルの有意差を示す。

実施例３
ペプチド合成のための液相ケミストリー
特定の実施形態において、液相合成ケミストリーは、より経済的な、本発明のペプチドを合成する手段を提供する。

本発明より以前には、合成は、典型的には、すべて固相合成ケミストリーを使用して実施された。９アミノ酸未満のペプチドの固相合成は、９アミノ酸より大きなアミノ酸のペプチドの固相合成よりもはるかにより経済的である。９アミノ酸より大きなアミノ酸のペプチドの合成は、樹脂からの伸長しているアミノ酸鎖の物理的解離に起因して、顕著な材料の損失を生じる。９アミノ酸未満を含むペプチドの固相合成は、樹脂からの伸長している鎖の損失が比較的少ないので、はるかにより経済的である。

特定の実施形態において、液相合成は、１８アミノ酸アポＡ−Ｉ模倣物ペプチド、４Ｆ（および他の関連するペプチド）の合成を、すべて固相合成から、すべて液相合成に、または例えば、６アミノ酸を各々含む３つの鎖の固相合成、その後の溶液中でのその３つの鎖の集合体の組み合わせのいずれかに転換することによって機能する。これは、はるかにより経済的な全体の合成を提供する。この手順は、ペプチドが１８アミノ酸の長さではない場合に容易に修飾される。従って、例えば、１５マーは、３つの５マーの固相合成、その後の溶液中でのその３つの鎖の集合体によって合成することができる。１４マーは、２つの５マーおよび１つの４マーの固相合成、その後の溶液中でのこれらの鎖の集合体、などによって合成することができる。

Ａ． 合成プロトコールの要約
ペプチドＤ４Ｆ（Ａｃ−Ｄ−Ｗ−Ｆ−Ｋ−Ａ−Ｆ−Ｙ−Ｄ−Ｋ−Ｖ−Ａ−Ｅ−Ｋ−Ｆ−Ｋ−Ｅ−Ａ−Ｆ−ＮＨ₂、（配列番号１３）の合成のための例示的なスキームを表１７に例示する。合成のためのスキームおよび収率を表１７に示す。

表１７． 例示的な液相合成スキーム

Ｂ） 合成プロトコールの詳細
１） Ｄ−４Ｆを合成するためのフラグメント縮合手順
フラグメント縮合のために固相上で合成されたフラグメントは以下である：

フラグメント１：Ａｃ−Ｄ（ＯＢｕｔ）−Ｗ−Ｆ−Ｋ（εＢｏｃ）−Ａ−Ｆ−ＣＯＯＨ（配列番号６３７）；

フラグメント２：Ｆｍｏｃ−Ｙ（ＯＢｕｔ）−Ｄ（ＯＢｕｔ）−Ｋ（εＢｏｃ）−Ｖ−Ａ−Ｅ（ＯＢｕｔ）−ＣＯＯＨ（配列番号６３８）； および

フラグメント３ Ｆｍｏｃ−Ｋ（εＢｏｃ）Ｆ−Ｋ（εＢｏｃ）−Ｅ（ＯＢｕｔ）−Ａ−Ｆ−リンクアミド樹脂（配列番号６３９）。

フラグメント１は、ＴＦＡ処理後に最終的なペプチドアミドを得るために樹脂上に残した。

フラグメント１を合成するために、Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ（１．２等量）を、ＤＭＦ：ジクロロメタン（１：１）中の６等量のＤＩＥＡの存在下で、クロロトリチル樹脂（Ｎｏｖａ Ｂｉｏｃｈｅｍ、１．３ｍｍｏｌ／ｇ 置換基、５ｍｍｏｌまたは６．５ ｇを使用した）に加え、４時間攪拌した。樹脂上の過度の官能基を、ジクロロメタンおよびＤＩＥＡの存在下で、メタノールでキャップした。Ｆｍｏｃの除去後、Ｆｍｏｃアミノ酸誘導体（２等量）を、上記のようにＨＯＢｔ／ＨＢＴＵ試薬を使用して加えた。最終的なＦｍｏｃ−Ｄ（ＯＢｕｔ）−Ｗ−Ｆ−Ｋ（εＢｏｃ）−Ａ−Ｆクロロトリチル樹脂を、Ｆｍｏｃデブロッキング剤で処理し、ジイソプロピルエチルアミンの存在下で、６等量の無水酢酸でアセチル化した。得られるＡｃ−Ｄ（ＯＢｕｔ）−Ｗ−Ｆ−Ｋ（εＢｏｃ）−Ａ−Ｆ−樹脂を、トリフルオロエタノール−酢酸−ジクロロメタン（２：２：６、１０ｍｌ／レジンｇ）の混合物で、室温で４時間処理した。濾過による樹脂の除去後、溶媒を、ｎ−ヘキサンとの真空下での共沸蒸留（ａｚｉｏｔｒｏｐｉｃ ｄｉｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ）によって除去した。残渣（１．８ｇ）を、質量スペクトル分析によって、Ａｃ−Ｄ（ＯＢｕｔ）−Ｗ−Ｆ−Ｋ（εＢｏｃ）−Ａ−Ｆ−ＣＯＯＨ（配列番号６４０）であることを決定した。

フラグメント２、Ｆｍｏｃ−Ｙ（ＯＢｕｔ）−Ｄ（ＯＢｕｔ）−Ｋ（εＢｏｃ）−Ｖ−Ａ−Ｅ（ＯＢｕｔ）−ＣＯＯＨ（配列番号６４１）を、フラグメント１について記載された手順を使用して得た。最終収率は２．２ｇであった。

フラグメント３。０．９ｇ（０．５ｍｍｏｌ）のリンクアミド樹脂（Ｎｏｖａ Ｂｉｏｃｈｅｍ）をフラグメントを得るために使用した。リンクアミド樹脂を、ジクロロメタン中の２０％ピペリジン（ｐｉｐｅｔｉｄｉｎｅ）で、５分間１回、２回目には１５分間処理した（Ｆｍｏｃデブロッキング試薬）。１．２等量のＦｍｏｃ−Ｐｈｅを、縮合試薬ＨＯＢｔ／ＨＢＴＵ（数滴のジイソプロピルエチルアミンの存在下で２等量）を使用して縮合した（アミノ酸縮合）。Ｆｍｏｃ−Ｋ（εＢｏｃ）Ｆ−Ｋ（εＢｏｃ）−Ｅ（ＯＢｕｔ）−Ａ−Ｆ−リンクアミド樹脂（配列番号６４２）を得るために、残りのアミノ酸のデブロッキングおよび縮合を継続した。Ｆｍｏｃを切断し、ペプチド樹脂Ｋ（εＢｏｃ）Ｆ−Ｋ（εＢｏｃ）−Ｅ（ＯＢｕｔ）−Ａ−Ｆ−リンクアミド樹脂（配列番号６４２）を、以下に記載されるようなフラグメント縮合のために使用した。

ＤＭＦ中のフラグメント２を、ＤＩＥＡの存在下で、ＨＯＢｔ−ＨＢＴＵ手順を使用して、一晩、フラグメント３（１．２等量）に加えた。ＤＭＦを用いての樹脂の洗浄後、デブロッキングＦｍｏｃ−フラグメント１（１．２等量）を、ＨＯＢｔ−ＨＢＴＵ手順を使用して、一晩、ドデカペプチド樹脂に加えた。

最終的なペプチド樹脂（３．３ｇ）を、ＴＦＡ−フェノール−トリイソプロピルシラン−チオアニソール−水（８０：５：５：５）の混合物で、１．５時間処理した（１０ｍｌの試薬／樹脂ｇ）。この樹脂を濾過し、溶液を１０体積のエーテルで希釈した。沈殿したペプチドを遠心分離によって単離し、エーテルで２回洗浄した。１ｇの粗ペプチドをＨＰＬＣ精製に供し、１００ｍｇのペプチドを得た。

２） ペプチドの特徴決定
ペプチドは、質量スペクトル法および分析用ＨＰＬＣ法によって同定した。

図１４Ａ〜１４Ｌは、得られるペプチドの純度を実証する。図１５は、得られるペプチドがマウスにおいて生物学的に活性であることを実証する。

実施例４
アポ−Ｍから誘導されたＧ ^* ペプチドはパラオキソナーゼ（Ｐａｒｏｘｙｎａｓｅ）活性を増加する
４ヶ月齢の雌性アポＥヌルマウス（グループあたりｎ＝４）に、腹腔内注射によって、１０μｇ／マウスのスクランブルＤ−４Ｆ（非活性対照区ペプチド）もしくはＤ−４Ｆを、またはＬアミノ酸から合成された５０μｇ／マウスのペプチドＡｃ−ＫＷＩＹＨＬＴＥＧＳＴＤＬＲＴＥＧ−ＮＨ₂（配列番号６４３）（Ｌ−アポＭ）のいずれかを投与した。マウスは、２または６時間後に採血し、それらのＨＤＬをＦＰＬＣによって単離し、そしてＨＤＬ中のパラオキソナーゼ活性を決定し、Ｘ軸上にプロットした。他の４ヶ月齢の雌性アポＥヌルマウス（グループあたりｎ＝４）に、胃への胃管栄養法によって、Ｌ−アミノ酸から合成された１００μｇ／マウスのペプチドＡｃ−ＫＷＩＹＨＬＴＥＧＳＴＤＬＲＴＥＧ−ＮＨ₂（配列番号６４３）（Ｌ−アポＭ）を投与した（胃管栄養法によるＬ−アポＭ）。マウスは６時間後に採血し、それらのＨＤＬをＦＰＬＣによって単離し、そしてＨＤＬ中のパラオキソナーゼ活性を決定し、Ｘ軸上にプロットした。

図１６に示されるように、Ｌ−アミノ酸から合成され、Ｎ末端とＣ末端の両方でブロックされ、そして腹腔内注射または胃管栄養法によって投与された、残基９９〜１１５に対応するアポＭからの配列の投与は、アポＥヌルマウス中でパラオキソナーゼ活性を増加した。

実施例５
ＬＡＥＹＨＡＫ（配列番号８）ペプチドの活性
すべてＤアミノ酸から合成された５ｍｇのペプチドＬＡＥＹＨＡＫ（配列番号８）を、４匹のカニクイザルの各々に、胃管チューブによって、２．０ｍＬの水中で投与し、続いて２．０ｍｌの水を洗浄として用いる。６時間後、サルを採血し、それらの血漿を迅速タンパク質液体クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）によって分画し、ヒト動脈壁細胞培養中で試験した。

図１７のパネルＡに示されるように、１００μｇ／ｍＬのＬＤＬコレステロールの濃度での正常ヒトＬＤＬ（ｈＬＤＬ）の細胞への添加は、単球走化性活性の産生を生じ、これを図のｙ軸にプロットする。また、パネルＡにおいて示されるように、１００μｇ／ｍＬのＬＤＬコレステロールの濃度の正常ｈＬＤＬと一緒での、５０μｇ／ｍＬのＨＤＬコレステロールの濃度の正常ヒトＨＤＬ（ｈＨＤＬ）の細胞の添加は、有意により低い単球走化性活性を生じた。

図１７のパネルＢにおいて示されるように、時間０（すなわち、ペプチドの投与の前）において与えられた５０μｇ／ｍＬのＨＤＬコレステロールの濃度でのサルＨＤＬと一緒での、１００μｇ／ｍＬのＬＤＬコレステロールの濃度でのｈＨＤＬの細胞への添加は、単球走化性活性を減少しなかった。しかし、パネルＢに示されるように、同じ濃度であるがペプチドの投与の６時間後に与えられたサルＨＤＬの添加は、単球走化性活性を有意に減少した。パネルＣに示されるように、１００μｇ／ｍＬのＬＤＬコレステロールの濃度でのペプチドの投与の前（時間０）のサルＬＤＬの細胞への添加は、パネルＡにおける同じ濃度のｈＬＤＬの添加よりも有意により高い単球走化性活性を生じた。またパネルＣに示されるように、ペプチドの投与の６時間後に与えられた同じ濃度のサルＬＤＬの細胞への添加は、有意により低い単球走化性活性を生じた。

本明細書に記載される実施例および実施形態は例示目的のみのためであること、ならびに、それらに鑑みた種々の改変または変更が当業者に対して示唆され、かつ本願の精神および本文ならびに添付の特許請求の範囲の中に含まれることが理解される。本明細書に引用されるすべての刊行物、特許、および特許出願は、すべての目的のために、それらの全体が参照により本明細書に援用される。

関連出願の相互参照
本願は、その全体がすべての目的のために参照により本明細書に援用される、２００４年９月１６日に出願された米国特許出願第６０／６１０，７１１号の優先権および利益を主張する。

米国連邦政府によって資金援助された研究開発の下でなされた発明に対する権利に関する言及
本研究は、米国国立衛生研究所の国立心臓血液肺研究所（ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｈｅａｒｔ Ｂｌｏｏｄ Ｌｕｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）からの補助金番号：ＨＬ３０５６８によって部分的に援助された。米国政府は、本発明において特定の権利を有し得る。

図１は、同時インキュベーション実験におけるインビトロＬＤＬ−誘導性単球走化性活性の阻害に対する、Ｄ４Ｆ（Ｎａｖａｂら（２００２）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１０５：２９０−２９２）およびＤアミノ酸から作られたアポＪペプチド３３６（Ｄ−Ｊ３３６^*）の効果の比較を示す。データは、四連の培養物中の９個の高倍率視野における移動した単球の数の平均±ＳＤである（Ｄ−Ｊ３３６＝Ａｃ−ＬＬＥＱＬＮＥＱＦＮＷＶＳＲＬＡＮＬＴＱＧＥ−ＮＨ₂、配列番号７）。 図２は、Ｄ−４Ｆと比較した場合の、Ｄ−Ｊ３３６を用いる動脈壁細胞の前処理によるＬＤＬ−誘導性単球走化性活性の阻害を図示する。データは、四連の培養物中の９個の高倍率視野における移動した単球の数の平均±ＳＤである。 図３は、ＬＤＬ受容体ヌルマウスにおけるＨＤＬ保護能力に対するアポＪペプチド模倣物の効果を図示する。値は、四連のアッセイウェルの各々からの９個の高倍率視野における移動した単球の数の平均±ＳＤである。 表４は、経口ペプチドを与えたアポＥヌルマウスからのＨＤＬによるＬＤＬ−誘導性単球走化性活性に対する保護を図示する。値は、四連のアッセイウェルの各々からの９個の高倍率視野における移動した単球の数の平均±ＳＤである。星印は、ペプチドなしｍＨＤＬと比較した場合の有意差（ｐ＜０．０５）を示す。 図５は、酸化に対するＬＤＬ感受性に対する、経口アポＡ−１ペプチド模倣物およびアポＪペプチドの効果を図示する。値は、四連のアッセイウェルの各々からの９個の高倍率視野における移動した単球の数の平均±ＳＤである。星印は、ペプチドＬＤＬなしと比較した場合の有意差（ｐ＜０．０５）を示す。 図６は、ＨＤＬ保護能力に対する、経口アポＡ−１ペプチド模倣物およびアポＪペプチドの効果を図示する。値は、四連のアッセイウェルの各々からの９個の高倍率視野における移動した単球の数の平均±ＳＤである。星印は、ペプチドなしｍＨＤＬと比較した場合の有意差（ｐ＜０．０５）を示す。 図７は、血漿パラオキソナーゼ活性に対する、経口アポＡ−１ペプチド模倣物およびアポＪペプチドの効果を図示する。値は、四連の血漿アリコートからの読み取りの平均±ＳＤである。星印は、ペプチドなしの対照区血漿と比較した場合の有意差（ｐ＜０．０５）を示す。 図８は、アポＥ−／−マウスにおけるＨＤＬ保護能力に対する経口Ｇ^*ペプチドの効果を示す。値は、四連の血漿アリコートからの読み取りの平均±ＳＤである。星印は、ペプチドなしの対照区血漿と比較した場合の有意差（ｐ＜０．０５）を示す。 図９は、アポＥ−／−マウスにおけるＨＤＬ保護能力に対する経口Ｇ^*ペプチド、１４６−１５６の効果を示す。 図１０Ａ〜１０Ｃは、本発明の特定のペプチドのヘリックスホイール図を図示する。図１０Ａ：Ｖ²Ｗ³Ａ⁵Ｆ^10,17−Ｄ−４Ｆ；図１０Ｂ：Ｗ³−Ｄ−４Ｆ；図１０Ｃ：Ｖ²Ｗ³Ｆ¹⁰−Ｄ−４Ｆ。 図１０Ａ〜１０Ｃは、本発明の特定のペプチドのヘリックスホイール図を図示する。図１０Ａ：Ｖ²Ｗ³Ａ⁵Ｆ^10,17−Ｄ−４Ｆ；図１０Ｂ：Ｗ³−Ｄ−４Ｆ；図１０Ｃ：Ｖ²Ｗ³Ｆ¹⁰−Ｄ−４Ｆ。 図１０Ａ〜１０Ｃは、本発明の特定のペプチドのヘリックスホイール図を図示する。図１０Ａ：Ｖ²Ｗ³Ａ⁵Ｆ^10,17−Ｄ−４Ｆ；図１０Ｂ：Ｗ³−Ｄ−４Ｆ；図１０Ｃ：Ｖ²Ｗ³Ｆ¹⁰−Ｄ−４Ｆ。 標準的なＬＤＬ（ＬＤＬ）は、何も伴わずに（添加なし）、またはヒトＨＤＬとともに（＋対照区ＨＤＬ）、または飼料を一晩与え（＋飼料ＨＤＬ）、もしくは試料中のＤ−４Ｆを一晩与え（＋Ｄ４Ｆ ＨＤＬ）、もしくは試料中のＧ５−Ｄ−４Ｆを一晩与え（＋Ｇ５ ＨＤＬ）、もしくは試料中のＧ５，１０−Ｄ−４Ｆを一晩与え（＋５−１０ ＨＤＬ）、もしくは試料中のＧ５，１１−Ｄ−４Ｆを一晩与えた（＋５−１１ ＨＤＬ）、アポＥヌルマウスからのマウスＨＤＬとともに、ヒト動脈壁共培養物に加え、そして得られる単球走化性活性を、以前に記載されたように測定した（Ｎａｖａｂ Ｍ，Ａｎａｎｔｈａｒａｍａｉａｈ，ＧＭ，Ｈａｍａ Ｓ，Ｇａｒｂｅｒ ＤＷ，Ｃｈａｄｄｈａ Ｍ，Ｈｏｕｇｈ Ｇ，Ｌａｌｌｏｎｅ Ｒ，Ｆｏｇｅｌｍａｎ ＡＭ．Ｏｒａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ａｐｏ Ａ−Ｉ ｍｉｍｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ｆｒｏｍ Ｄ−ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｄｒａｍａｔｉｃａｌｌｙ ｒｅｄｕｃｅｓ ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ ｉｎ ｍｉｃｅ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｆ ｐｌａｓｍａ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２００２；１０５：２９０−２９２）。 図１２は、本発明のペプチドが糖尿病の徴候（血中グルコース）を軽減する際に有効であることを示す。２６週齢の肥満ズッカーラット（Ｚｕｃｋｅｒ Ｒａｔｓ）を出血させ、次いで、毎日Ｄ−４Ｆの腹腔内注射（５．０ｍｇ／ｋｇ／日）で処理した。１０日後、ラットを再度出血させ、血漿グルコースおよび脂質ペルオキシド（ＬＯＯＨ）を測定した。^*ｐ＝０．０２７；^**ｐ＝０．００１７。 図１３は、頸動脈のバルーン損傷に対するＤ４Ｆの効果を例示する。肥満ズッカーラットに、これらが、総頸動脈のバルーン損傷を受けた時点で１週間の間、Ｄ−４Ｆ（５ｍｇ／ｋｇ／日）注射した。２週間後、ラットを屠殺し、内膜中膜比率を測定した。 溶液相化学において産生される種々の化合物の純度を実証するデータを提供する。 溶液相化学において産生される種々の化合物の純度を実証するデータを提供する。 溶液相化学において産生される種々の化合物の純度を実証するデータを提供する。 溶液相化学において産生される種々の化合物の純度を実証するデータを提供する。 溶液相化学において産生される種々の化合物の純度を実証するデータを提供する。 溶液相化学において産生される種々の化合物の純度を実証するデータを提供する。 溶液相化学において産生される種々の化合物の純度を実証するデータを提供する。 溶液相化学において産生される種々の化合物の純度を実証するデータを提供する。 溶液相化学において産生される種々の化合物の純度を実証するデータを提供する。 溶液相化学において産生される種々の化合物の純度を実証するデータを提供する。 溶液相化学において産生される種々の化合物の純度を実証するデータを提供する。 図１５は、溶液相合成スキームの生成物が、アポＥヌルマウスにおけるＬＤＬ−誘導性単球走化性を阻害するＨＤＬおよびプレ−ベータＨＤＬを産生する際に非常に生物学的に活性であることを実証する。アポＥヌルマウスは、上記のように合成された５マイクログラムのＤ−４Ｆを与えられ（フラグメント）、またはこのマウスは、Ｄ−４Ｆを含まない同じ量のマウス飼料を与えられた（飼料）。給餌を開始した２４時間後に、マウスを出血させ、それらの血漿をＦＰＬＣ上で分画した。ＬＤＬ（１００マイクログラムＬＤＬ−コレステロール）を、単独で（ＬＤＬ）、あるいは対照区ヒトＨＤＬとともに（対照区ＨＤＬ）、またはＤ−４Ｆを受容し（フラグメント）もしくは受容していない（飼料）マウスからの、ＨＤＬ（５０マイクログラムＨＤＬ−コレステロール）もしくはポスト−ＨＤＬ（ｐＨＤＬ；プレベータＨＤＬ）とともに、ヒト動脈壁細胞の同時培養物に加え、そして産生された単球走化性活性を測定した。 図１６は、ＨＤＬパラオキソナーゼ活性に対する本発明の種々のペプチドの効果を図示する。 図１７は、単球走化性活性に対するＬＡＥＹＨＡＫ（配列番号８）ペプチドの効果を図示する。^*ｐ＜０．００１＋ｈＨＤＬ対ｈＬＤＬ；^**ｐ＜０．００１ ペプチド６時間後＋サルＨＤＬ対＋サルＨＤＬ時間０；^***ｐ＜０．００１ ペプチド６時間後＋サルＬＤＬ対＋サルＬＤＬ時間０；¶ ｐ＜０．００１＋サルＬＤＬ時間０対ｈＬＤＬ。 図１８Ａおよび１８Ｂは、本発明に従うステントの１つの実施形態を図示する。図１８Ａは、ステントフレームワーク１８２０を備える薬物−ポリマーステント１８００を概略的に図示し、これは、フレームワークの中に形成された複数のリザーバ１８３０、および薬物ポリマー上に配置される選択的なポリマー層とともに本明細書に記載される１種以上の活性薬剤（例えば、４Ｆ、Ｄ４Ｆなど）を含む薬物ポリマー１８４０を含む。図１８Ｂは、ステントフレームワーク１８７０、ステントフレームワーク中に形成された複数のリザーバ１８９０、ポリマー層を有する薬物ポリマー１８８０、およびステントフレームワーク１８８０に連結されたカテーテル１０４０を含む血管制御処理システム１８５０を概略的に図示する。カテーテル１８６０は、ステントを拡張するために使用されるバルーン、またはステントの拡張を可能にするために収納される鞘を備えてもよい。薬物ポリマー１８８０は、本明細書に記載される１種以上の活性薬剤を含む。ポリマー層は、バリア層、キャップ層、または別の薬物ポリマーを選択的に含むことができる。このポリマー層は、各活性薬剤について制御された薬物−溶出特性を提供する。薬物溶出とは、薬物ポリマー１８８０から外側への活性薬剤の移動をいう。この溶出は、薬物ポリマーから排出される生物活性薬剤の全体量として測定され、典型的には、マイクログラムのような重量の単位またはステントの末梢領域あたりの重量で測定される。

Claims (100)

1. アミノ酸配列ＬＡＥＹＨＡＫ（配列番号８）またはＫＡＨＹＥＡＬ（配列番号６４４）を含み；かつ
   少なくとも１個のＤアミノ酸および／または少なくとも１個の保護基を含む、
   炎症性状態の１つ以上の徴候を改善するペプチド。
2. 少なくとも１個のアミノ酸がＤアミノ酸である、請求項１に記載のペプチド。
3. すべてのアミノ酸がＤアミノ酸である、請求項２に記載のペプチド。
4. 少なくとも１個の保護基を含む、請求項１に記載のペプチド。
5. 各末端に少なくとも１個の保護基を含む、請求項４に記載のペプチド。
6. 前記保護基が、アミド、炭素数３〜２０個のアルキル基、Ｆｍｏｃ、ｔ−ｂｏｃ、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルホニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロへキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、アセチル（Ａｃ）、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、へキシル基、Ｎ−メチルアントラニリル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびトリフルオロアセチル（ＴＦＡ）からなる群より選択される保護基である、請求項４に記載のペプチド。
7. 少なくとも１個の保護基を含む、請求項３に記載のペプチド。
8. 各末端に少なくとも１個の保護基を含む、請求項３に記載のペプチド。
9. 炎症性状態の１つ以上の徴候を改善するペプチドであって、
   約３アミノ酸から約１０アミノ酸までの長さの範囲であり；
   １個または２個の芳香族アミノ酸、疎水性アミノ酸、または電荷を有さない極性アミノ酸と、該極性アミノ酸と交互に存在する酸性または塩基性のアミノ酸とを含むアミノ酸配列を含み；
   疎水性末端アミノ酸、または、疎水性保護基を有する末端アミノ酸を含み；
   すべてのアミノ酸がＬアミノ酸である配列ＬＡＥＹＨＡＫ（配列番号８）ではなく；プロ炎症性ＨＤＬを抗炎症性ＨＤＬに転換するか、または抗炎症性ＨＤＬをより抗炎症性にする
   ことを特徴とする該ペプチド。
10. 表３または１４に見い出されるペプチドまたはそのコンカテマーのアミノ酸配列を含む、炎症性状態の１つ以上の徴候を改善するペプチド。
11. 少なくとも１個のアミノ酸がＤアミノ酸である、請求項１０に記載のペプチド。
12. すべてのアミノ酸がＤアミノ酸である、請求項１１に記載のペプチド。
13. 少なくとも１個の保護基を含む、請求項１０に記載のペプチド。
14. 各末端に少なくとも１個の保護基を含む、請求項１３に記載のペプチド。
15. 前記保護基が、アミド、炭素数３〜２０個のアルキル基、Ｆｍｏｃ、ｔ−ｂｏｃ、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルホニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロへキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔ−ＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、アセチル（Ａｃ）、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、へキシル基、Ｎ−メチルアントラニリル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびトリフルオロアセチル（ＴＦＡ）からなる群より選択される保護基である、請求項１３に記載のペプチド。
16. 少なくとも１個の保護基を含む、請求項１２に記載のペプチド。
17. 各末端に少なくとも１個の保護基を含む、請求項１６に記載のペプチド。
18. 炎症性状態の１つ以上の徴候を改善するペプチドであって：
    ＤＭＴ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（配列番号１）、ＤＭＴ−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ（配列番号２）、Ｌｙｓ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＤＭＴ（配列番号３）、およびＬｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｒｇ−ＤＭＴ（配列番号４）からなる群より選択され、ここでＤＭＴはジメチルチロシンであるアミノ酸配列を含む、該ペプチド。
19. 少なくとも１個のアミノ酸がＤアミノ酸である、請求項１８に記載のペプチド。
20. すべてのアミノ酸がＤアミノ酸である、請求項１９に記載のペプチド。
21. 前記ＡｒｇがＤアミノ酸である、請求項１８に記載のペプチド。
22. 各末端に少なくとも１個の保護基を含む、請求項２１に記載のペプチド。
23. 保護基が、アミド、炭素数３〜２０個のアルキル基、Ｆｍｏｃ、ｔ−ｂｏｃ、９−フルオレンアセチル基、１−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレンカルボン酸基、９−フルオレン−１−カルボン酸基、ベンジルオキシカルボニル、キサンチル（Ｘａｎ）、トリチル（Ｔｒｔ）、４−メチルトリチル（Ｍｔｔ）、４−メトキシトリチル（Ｍｍｔ）、４−メトキシ−２，３，６−トリメチル−ベンゼンスルホニル（Ｍｔｒ）、メシチレン−２−スルホニル（Ｍｔｓ）、４，４−ジメトキシベンズヒドリル（Ｍｂｈ）、トシル（Ｔｏｓ）、２，２，５，７，８−ペンタメチルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）、４−メチルベンジル（ＭｅＢｚｌ）、４−メトキシベンジル（ＭｅＯＢｚｌ）、ベンジルオキシ（ＢｚｌＯ）、ベンジル（Ｂｚｌ）、ベンゾイル（Ｂｚ）、３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル（Ｎｐｙｓ）、１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロへキシリデン）エチル（Ｄｄｅ）、２，６−ジクロロベンジル（２，６−ＤｉＣｌ−Ｂｚｌ）、２−クロロベンジルオキシカルボニル（２−Ｃｌ−Ｚ）、２−ブロモベンジルオキシカルボニル（２−Ｂｒ−Ｚ）、ベンジルオキシメチル（Ｂｏｍ）、シクロヘキシルオキシ（ｃＨｘＯ）、ｔ−ブトキシメチル（Ｂｕｍ）、ｔ−ブトキシ（ｔ−ＢｕＯ）、ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、アセチル（Ａｃ）、プロピル基、ブチル基、ペンチル基、へキシル基、Ｎ−メチルアントラニリル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびトリフルオロアセチル（ＴＦＡ）からなる群より選択される保護基である、請求項２１に記載のペプチド。
24. 少なくとも１個の保護基を含む、請求項１９に記載のペプチド。
25. 各末端に少なくとも１個の保護基を含む、請求項２４に記載のペプチド。
26. Ｂｏｃジメチルチロシン−Ｄ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ＯｔＢｕ）（配列番号５）およびＢｏｃジメチルチロシン−Ａｒｇ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ（ＯｔＢｕ）（配列番号６）からなる群より選択される、請求項１８に記載のペプチド。
27. 前記炎症性状態がアテローム性動脈硬化症である、請求項９、１、１０、および１８のいずれかに記載のペプチド。
28. 請求項９〜２６のいずれかに記載のペプチドおよび薬学的に受容可能な賦形剤を含む薬学的製剤。
29. ペプチドが時限放出製剤中にある、請求項２８に記載の薬学的製剤。
30. 単位投薬量製剤として製剤化される、請求項２８に記載の薬学的製剤。
31. 経口投与のために製剤化される、請求項２８に記載の薬学的製剤。
32. 経口投与、鼻投与、直腸投与、腹腔内注射、静脈内注射、皮下注射、経皮的投与、吸入投与、および筋肉内注射からなる群より選択される経路による投与のために製剤化される、請求項２８に記載の薬学的製剤。
33. 請求項９〜２６のいずれかに記載のペプチドの１つ以上を哺乳動物に投与する工程を含む、哺乳動物中のアテローム性動脈硬化症の徴候を改善する方法。
34. 前記ペプチドが薬学的に受容可能な賦形剤中にある、請求項３３に記載の方法。
35. 前記ペプチドが経口投与のために適切な薬学的に受容可能な賦形剤中にある、請求項３３に記載の方法。
36. 前記ペプチドが単位投薬量製剤として投与される、請求項３３に記載の方法。
37. 前記投与する工程が、経口投与、鼻投与、直腸投与、腹腔内注射、静脈内注射、皮下注射、経皮的投与、および筋肉内注射からなる群より選択される経路によって前記ペプチドを投与することを包含する、請求項３３に記載の方法。
38. 前記哺乳動物がアテローム性動脈硬化症の徴候を１つ以上有すると診断されている哺乳動物である、請求項３３に記載の方法。
39. 前記哺乳動物が脳卒中またはアテローム性動脈硬化症のリスクを有すると診断されている哺乳動物である、請求項３３に記載の方法。
40. 前記哺乳動物がヒトである、請求項３３に記載の方法。
41. 前記哺乳動物が非ヒト哺乳動物である、請求項３３に記載の方法。
42. 哺乳動物における炎症に対する急性期応答と関連する冠状動脈合併症を軽減または予防する方法であって、前記冠状動脈合併症がアテローム性動脈硬化症の徴候であり、前記方法が、該急性期応答を有するか、または前記急性期応答のリスクを有する哺乳動物に、請求項１〜２７のいずれか１項に記載のポリペプチド、または請求項９〜２６のいずれかに記載のペプチドの１つ以上を投与する工程を含む、該方法。
43. 前記ペプチドが薬学的に受容可能な賦形剤中にある、請求項４２に記載の方法。
44. 前記ペプチドが経口投与のために適切な薬学的に受容可能な賦形剤中にある、請求項４２に記載の方法。
45. 前記ペプチドが単位投薬量製剤として投与される、請求項４２に記載の方法。
46. 前記投与する工程が、経口投与、鼻投与、直腸投与、腹腔内注射、静脈内注射、皮下注射、経皮的投与、および筋肉内注射からなる群より選択される経路によって前記ペプチドを投与することを包含する、請求項４２に記載の方法。
47. 前記哺乳動物がアテローム性動脈硬化症の徴候を１つ以上有すると診断されている哺乳動物である、請求項４２に記載の方法。
48. 前記哺乳動物が脳卒中またはアテローム性動脈硬化症のリスクを有すると診断されている哺乳動物である、請求項４２に記載の方法。
49. 前記哺乳動物がヒトである、請求項４２に記載の方法。
50. 前記哺乳動物が非ヒト哺乳動物である、請求項４２に記載の方法。
51. 哺乳動物における糖尿病の徴候を改善する方法であって、請求項９〜２６のいずれかに記載のペプチドの１つ以上を該哺乳動物に投与する工程を含む、方法。
52. 前記ペプチドが薬学的に受容可能な賦形剤中にある、請求項５１に記載の方法。
53. 前記ペプチドが経口投与のために適切な薬学的に受容可能な賦形剤中にある、請求項５１に記載の方法。
54. 前記ペプチドが単位投薬量製剤として投与される、請求項５１に記載の方法。
55. 前記投与する工程が、経口投与、鼻投与、直腸投与、腹腔内注射、静脈内注射、皮下注射、経皮的投与、および筋肉内注射からなる群より選択される経路によって前記ペプチドを投与することを包含する、請求項５１に記載の方法。
56. 前記哺乳動物がアテローム性動脈硬化症の徴候を１つ以上有すると診断されている哺乳動物である、請求項５１に記載の方法。
57. 前記哺乳動物が脳卒中またはアテローム性動脈硬化症のリスクを有すると診断されている哺乳動物である、請求項５１に記載の方法。
58. 前記哺乳動物がヒトである、請求項５１に記載の方法。
59. 前記哺乳動物が非ヒト哺乳動物である、請求項５１に記載の方法。
60. 哺乳動物における再狭窄を阻害する方法であって、表１〜１５に記載される１種以上のペプチドであるより活性な薬剤および／または本明細書に記載される有機低分子を該哺乳動物に投与する工程を含む、方法。
61. 前記ペプチドが４Ｆ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含む、請求項６０に記載の方法。
62. 前記ペプチドが薬学的に受容可能な賦形剤中にある、請求項６０に記載の方法。
63. 前記ペプチドが経口投与のために適切な薬学的に受容可能な賦形剤中にある、請求項６０に記載の方法。
64. 前記ペプチドが単位投薬量製剤として投与される、請求項６０に記載の方法。
65. 前記投与する工程が、経口投与、鼻投与、直腸投与、腹腔内注射、静脈内注射、皮下注射、経皮的投与、および筋肉内注射からなる群より選択される経路によって前記ペプチドを投与することを包含する、請求項６０に記載の方法。
66. 前記哺乳動物がアテローム性動脈硬化症の徴候を１つ以上有すると診断されている哺乳動物である、請求項６０に記載の方法。
67. 前記哺乳動物が脳卒中またはアテローム性動脈硬化症のリスクを有すると診断されている哺乳動物である、請求項６０に記載の方法。
68. 前記哺乳動物がヒトである、請求項５１に記載の方法。
69. 前記哺乳動物が非ヒト哺乳動物である、請求項５１に記載の方法。
70. 哺乳動物におけるアテローム性動脈硬化症、再狭窄、炎症に対する急性期応答と関連する冠状動脈合併症、および糖尿病からなる群より選択される状態の治療における使用のための請求項９〜２６のいずれか１項に記載のペプチド。
71. 哺乳動物における、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、炎症に対する急性期応答と関連する冠状動脈合併症、および糖尿病からなる群より選択される状態の治療的または予防的処置のための医薬の製造における請求項９〜２６のいずれか１項に記載のペプチドの使用。
72. 身体中の血管に薬物を送達するためのステントであって：その中に形成された複数のリザーバを備えるステントフレームワーク、ならびに表１〜１５に記載される１種以上の活性薬剤および／または該リザーバ中に配置される本明細書に記載される有機低分子を含む、ステント。
73. 前記活性薬剤が４Ｆ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むペプチドである、請求項７２に記載のステント。
74. 前記活性薬剤がポリマー中に含まれる、請求項７２に記載のステント。
75. 前記ステントフレームワークが金属基材またはポリマー基材の１つを含む、請求項７２に記載のステント。
76. 前記ステントフレームワーク基材が、ステンレス鋼、ニチノール、タンタル、ＭＰ３５Ｎ合金、白金、チタン、適切な生体適合性合金、適切な生体適合性ポリマー、およびこれらの組み合わせからなる群より選択される材料を含む、請求項７２に記載のステント。
77. リザーバが微小孔を備える、請求項７２に記載のステント。
78. 前記微小孔が約２０ミクロン以下の直径を有する、請求項７７に記載のステント。
79. 前記微小孔が約２０ミクロン〜約５０ミクロンの範囲の直径を有する、請求項７７に記載のステント。
80. 前記微小孔が約１０〜約５０ミクロンの範囲の深さを有する、請求項７７に記載のステント。
81. 前記微小孔が約５０ミクロンの深さを有する、請求項７７に記載のステント。
82. 前記微小孔が、ステントの内部表面上の開口部およびステントの外部表面上の開口部を備える前記ステントフレームワークを貫通して伸びる、請求項７７に記載のステント。
83. 前記ステントフレームワークの内部表面上に配置されたキャップ層であって、該キャップ層が、前記貫通微小孔の少なくとも一部を覆い、かつ前記ステントフレームワークの内部表面からの薬物リマー中の薬物の溶出速度を制御するためのバリア特性を提供することを特徴とする、請求項７７に記載のステント。
84. 前記リザーバが前記ステントフレームワークの外部表面に沿ったチャネルを備える、請求項７２に記載のステント。
85. 前記ポリマーが第１の薬学的特徴を有する第１の薬物ポリマーの第１の層を含み、前記ポリマー層が第２の薬学的特徴を有する第２の薬物ポリマーを含む、請求項７４に記載のステント。
86. 前記活性薬剤を含む前記ポリマー間に配置されるバリア層をさらに含む、請求項７４に記載のステント。
87. 前記ステントフレームワークに連結されたカテーテルをさらに備える、請求項７２に記載のステント。
88. 前記カテーテルが、前記ステントを広げるために使用されるバルーンを備える、請求項８７に記載のステント。
89. 前記カテーテルが、前記ステントの拡張を可能にするために収納される鞘を備える、請求項８７に記載のステント。
90. 薬物−ポリマーステントを製造する方法であって：ステントフレームワークを提供する工程；前記ステントフレームワーク中の複数のリザーバを切断する工程；少なくとも１つのリザーバに本明細書に記載の活性薬剤を１種以上含む組成物を適用する工程；および該組成物を乾燥させる工程を含む、方法。
91. ポリマー層を乾燥した組成物に適用する工程；および該ポリマー層を乾燥させる工程をさらに含む、請求項９０に記載の方法。
92. 血管状態を治療する方法であって：
    身体の血管中に請求項７２に記載のステントを配置する工程；
    前記ステントを拡張する工程；および
    前記ステントの少なくとも表面から少なくとも１種の活性薬剤を溶出する工程
    を含む、該方法。
93. ペプチドを合成する方法であって：
    前記ペプチドの少なくとも３個の異なるペプチドフラグメントサブ配列を提供する工程；および
    液相中で前記ペプチドフラグメントサブ配列を連結して、前記ペプチドを形成する工程
    を含む、該方法。
94. 前記ペプチドの長さがアミノ酸６〜３７個の範囲にある、請求項９３に記載の方法。
95. 前記ペプチドの長さが１８残基である、請求項９３に記載の方法。
96. 前記ペプチドがクラスＡ両親媒性へリックスを含む、請求項９３に記載の方法。
97. 前記ペプチドがアミノ酸配列Ｄ−Ｗ−Ｆ−Ｋ−Ａ−Ｆ−Ｙ−Ｄ−Ｋ−Ｖ−Ａ−Ｅ−Ｋ−Ｆ−Ｋ−Ｅ−Ａ−Ｆ（配列番号１３）を含む、請求項９３に記載の方法。
98. ３個すべての前記ペプチドフラグメントサブ配列の各々の長さがアミノ酸６個である、請求項９７に記載の方法。
99. 前記３個のペプチドフラグメントサブ配列が、配列：Ｄ−Ｗ−Ｆ−Ｋ−Ａ−Ｆ（配列番号６４５）、Ｙ−Ｄ−Ｋ−Ｖ−Ａ−Ｅ（配列番号６４６）、およびＫ−Ｆ−Ｋ−Ｅ−Ａ−Ｆ（配列番号６４７）を有する、請求項９７に記載の方法。
100. 前記ペプチドのすべてのアミノ酸がＤアミノ酸である、請求項９７に記載の方法。

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