MXPA06001743A - Peptidos pequenos administrados oralmente que sinergizan la actividad de la estatina. - Google Patents

Peptidos pequenos administrados oralmente que sinergizan la actividad de la estatina.

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Abstract

Esta invencion proporciona peptidos novedosos que aminoran uno o mas sintomas de la aterosclerosis; los peptidos son altamente estables y se administran facilmente via una ruta oral; los peptidos son efectivos para estimular la formacion y la ciclizacion de particulas similares a la lipoproteina de densidad alta pre-beta y/o para fomentar el transporte y la destoxificacion de los lipidos; esta invencion tambien proporciona un metodo para rastrear un peptido en un mamifero; ademas, los peptidos inhiben la osteoporosis; cuando se administran con una estatina, los peptidos mejoran la actividad de la estatina, permitiendo que la estatina sea utilizada a dosis significativamente menores y/o causan que las estatinas sean significativamente mas antiinflamatorias a cualquier dosis dada.

Description

PEPTIDOS PEQUEÑOS ADMINISTRADOS ORALMENTE QUE SINERGIZAN LA ACTIVIDAD DE LA ESTATINA REFERENCIA CRUZADA A LAS SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud es una continuación en parte de la USSN 10/649,378, presentada en Agosto 26, 2003, la cual reclama el beneficio de, y la prioridad de la USSN 60/494,449, presentada en Agosto 11, 2003, todas las cuales se incorporan en la presente como referencia en su totalidad para todos los propósitos.
DECLARACION DE LOS DERECHOS SOBRE LAS INVENCIONES HECHAS BAJO INVESTIGACION Y DESARROLLO PATROCINADOS FEDERALMENTE Este trabajo fue apoyado por las Subvenciones HL30568 y HL34343 del Servicio de Salud Pública de los Estados Unidos y el Instituto Nacional de Corazón, Pulmón y Sangre. El Gobierno de los Estados Unidos de América puede tener ciertos derechos sobre esta invención.
CAMPO DE LA INVENCION Esta invención se relaciona con el campo de la aterosclerosis. En particular, esta invención pertenece a la identificación de una clase de péptidos que son oralmente administrables, y que mejoran uno o más síntomas de la aterosclerosis.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION La enfermedad cardiovascular es una causa principal de morbilidad y mortalidad, particularmente en los Estados Unidos y en los países de Europa Occidental. Varios factores causales están implicados en el desarrollo de la enfermedad cardiovascular, incluyendo la predisposición hereditaria a la enfermedad, el género, los factores del estilo de vida tales como fumar y la dieta, la edad, hipertensión e hiperlipidemiá, incluyendo la hipercolesterolemia. Varios de estos factores, particularmente la hiperlipidemiá y la hipercolesteremia (altas concentraciones de colesterol en la sangre), proporcionan un factor de riesgo significativo asociado con la aterosclerosis. El colesterol está presente en la sangre como colesterol libre y esterificado dentro de las partículas de lipoproteína, comúnmente conocidas como quilomicrones, lipoproteínas de densidad muy baja (VLDL), lipoproteínas de densidad baja (LDL), y lipoproteínas de densidad alta (HDL).
La concentración del colesterol total en la sangre está influenciada por (1) la absorción del colesterol desde el tracto digestivo, (2) la síntesis del colesterol a partir de los constituyentes de la dieta, tales como carbohidratos, proteínas, grasas y etanol, y (3) la eliminación del colesterol de la sangre por ios tejidos, especialmente el hígado, y la conversión subsiguiente del colesterol a los ácidos biliares, hormonas esteroides y colesterol biliar. El mantenimiento de las concentraciones del colesterol en la sangre está influenciado por factores genéticos y ambientales. Los factores genéticos incluyen la concentración de las enzimas que limitan la velocidad en la biosíntesis del colesterol, la concentración de los receptores para las lipoproteínas de densidad baja en el hígado, la concentración de las enzimas que limitan la velocidad para la conversión de los ácidos biliares del colesterol, las velocidades de síntesis y la secreción de las lipoproteínas y el género de la persona. Los factores ambientales que influencian la hemostasis de la concentración del colesterol en la sangre en los humanos, incluyen la composición de la dieta, la incidencia de fumadores, la actividad física, y el uso de una variedad de agentes farmacéuticos. Las variables de la dieta incluyen la cantidad y el tipo de grasa (ácidos grasos saturados y poliinsaturados), la cantidad de colesterol, la cantidad y el tipo de fibra, y tal vez las cantidades de vitaminas tales como la vitamina C y D y minerales tales como el calcio. Los estudios epidemiológicos muestran una correlación inversa de los niveles de la lipoproteína de densidad alta (HDL) y la apolipoproteína (apo) A-I con la aparición de eventos ateroscleróticos (Wilson et al. (1988) Arteriesclerosis 8:737-741). La inyección de la HDL en conejos alimentados con una dieta aterogénica, ha mostrado inhibir la formación de lesiones ateroscleróticas (Badimon et al. (1990) J. Clin. Invest. 85:1234-1241). La apo A-l humana ha sido el objeto de un estudio intenso debido a sus propiedades antiaterogénicas. Las apolipoproteínas intercambiables, incluyendo la apo A-l, poseen dominios que se asocian con los lípidos (Brouillette y Anantharamaiah (1995) Biochim. Biophys. Acta 1256:103-129; Segrest et al. (1974) FEBS Letí. 38:247-253). Se ha postulado que la apo A-l posee ocho secuencias 22méricas que se repiten en cascada, la mayoría de las cuales tiene el potencial de formar estructuras helicoidales anfipáticas de la clase A (Segrest et al. (1974) FEBS Letí. 38:247-253). Las características de la hélice anfipática de la clase A incluyen la presencia de residuos cargados positivamente en la interfaz polar-no polar y residuos cargados negativamente en el centro de la cara polar (Segrest et al. (1974) FEBS Lett. 38:247-253; Segrest et al. (1990) Proteins: Structure, Function, and Genetics 8:103-117). La apo A-l ha mostrado asociarse en gran medida con los fosfolípidos para formar complejos y para fomentar la descarga del colesterol de las células enriquecidas con colesterol. El suministro y mantenimiento de los niveles en suero de la apo A-l para mitigar de manera efectiva uno o más síntomas de la aterosclerosis, hasta ahora, ha probado ser difícil de alcanzar.
BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION Esta invención proporciona péptidos y pares de aminoácidos novedosos, la administración de los cuales mitiga uno o más de los síntomas de la aterosclerosis y de otras condiciones inflamatorias, tales como artritis reumatoide, lupus eritematoso, poliarteritis nodosa, osteoporosis, enfermedad de Aízheimer, falla congestiva cardiaca, disfunción endotelial, dolencias virales tales como influenza A, y enfermedades tales como esclerosis múltiple. En ciertas modalidades, fue un descubrimiento de esta invención que los péptidos que comprenden una hélice anfipática de clase A, cuando se formulan con residuos de aminoácidos "D" y/o que tienen términos amino y carboxilo protegidos, pueden administrarse oralmente a un organismo, son captados y suministrados fácilmente al suero, y son efectivos para mitigar uno o más síntomas de la aterosclerosis. En ciertas modalidades, los péptidos pueden formularse con todos los residuos de aminoácidos "L" y son todavía efectivos, particularmente cuando se administran mediante rutas diferentes a la administración oral. También fue un descubrimiento que los péptidos "pequeños" (por ejemplo, que varían en longitud de aproximadamente tres aminoácidos a aproximadamente 11 aminoácidos), que tienen aminoácidos terminales hidrofóbicos o aminoácidos terminales vueltos hidrofóbicos por uno o más grupos hidrofóbicos de bloqueo y que tienen aminoácidos internos ácidos y/o básicos y/o alifáticos y/o aromáticos, como se describe en la presente, son también capaces de mitigar uno o más síntomas de la aterosclerosis u otras patologías caracterizadas por una respuesta inflamatoria. Los péptidos y/o los pares de aminoácidos de esta invención son típicamente efectivos para estimular la formación y la ciclización de partículas similares a la lipoproteína de densidad alta pre-beta y/o para fomentar el transporte y la destoxificación de los lípidos. Los péptidos y/o los pares de aminoácidos descritos en la presente, también son efectivos para prevenir el inicio o inhibir o eliminar uno o más de los síntomas de la osteoporosis. También fue un descubrimiento sorprendente que los péptidos y/o pares de aminoácidos, pueden utilizarse para mejorar (por ejemplo, mejorar sinérgicamente) la actividad de las estatinas y/o el Ezetimibe u otros inhibidores de la captación del colesterol, permitiendo por lo tanto el uso de las estatinas o los inhibidores de la captación del colesterol a dosificaciones menores y/o causar que las estatinas o los inhibidores de la captación del colesterol sean significativamente más antiinflamatorios a cualquier dosis dada. En ciertas modalidades, esta invención proporciona péptidos o una combinación de péptidos y/o pares de aminoácidos, que aminoran uno o más síntomas de una condición inflamatoria (por ejemplo, aterosclerosis, artritis reumatoide, lupus eritematoso, poliarteritis nodosa, osteoporosis, enfermedad de Altzheimer, una dolencia viral, asma, diabetes, etc.). Ciertos péptidos preferidos varían en longitud de 3 a aproximadamente 5 aminoácidos; son solubles en acetato de etilo a una concentración mayor que aproximadamente 4 mg/mL; son solubles en un amortiguador acuoso a pH 7.0; cuando se ponen en contacto con un fosfolípido en un medio acuoso, forman partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm y/o forman bicapas apiladas con una dimensión de la bicapa del orden de 3.4 a 4.1 nm con una separación entre las bicapas en la pila de aproximadamente 2 nm; tienen un peso molecular menor que aproximadamente 900 daltons; convierten la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hacen la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria; y no tienen la secuencia de aminoácidos Lys-Arg-Asp-Ser (SEQ ID NO: 238), en la cual Lys-Arg-Asp y Ser son todos aminoácidos L. En ciertas modalidades, estos péptidos protegen un fosfolípido (por ejemplo, 1-palmitoil-2-araquidonoil-sn-glicero-3-fosforilcolina (PAPC), 1-estearoil-2-araquidonoil-sn-glicero-3-fosforilcol¡na (SAPC)), y 1-estearoil-2-araquidonil-sn-glicero-3-fosforiletanolamina (SAPE). En ciertas modalidades, estos péptidos pueden incluir, de manera no exclusiva, cualquiera de los péptidos pequeños descritos en la presente. En ciertas modalidades, esta invención proporciona péptidos o una combinación de péptidos y/o pares de aminoácidos, que aminoran uno o más síntomas de una condición inflamatoria (por ejemplo, aterosclerosis, artritis reumatoide, lupus eritematoso, poliarteritis nodosa, osteoporosis, enfermedad de Altzheimer, una dolencia viral, asma, diabetes, etc.). Ciertos péptidos preferidos están caracterizados por la fórmula: X -X2-X3n-X4, en donde n es 0 ó 1 ; X1 es un aminoácido hidrofóbico y/o porta un grupo hidrofobico protector; X4 es un aminoácido hidrofobico y/o porta un grupo hidrofobico protector; y, cuando n es 0, X2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de un aminoácido ácido, un aminoácido básico, y una histidina; y, cuando n es 1: X2 y X3 son de manera independiente un aminoácido ácido, un aminoácido básico, un aminoácido alifático, o un aminoácido aromático tal que cuando X2 es un aminoácido ácido; X3 es un aminoácido básico, un aminoácido alifático, o un aminoácido aromático; cuando X2 es un aminoácido básico; X3 es un aminoácido ácido, un aminoácido alifático, o un aminoácido aromático; y cuando X2 es un aminoácido alifático o aromático, X3 es un aminoácido ácido, o un aminoácido básico. Ciertos péptidos preferidos convierten la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hacen la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria. En ciertas modalidades, el péptido no tiene la secuencia de aminoácidos Lys-Arg-Asp-Ser (SEQ ID NO: 238), en la cual Lys, Arg, Asp y Ser son todos aminoácidos L. Los péptidos de esta invención incluyen péptidos de acuerdo con la fórmula anterior, y/o péptidos que comprenden un péptido de la fórmula anterior y/o concatámeros de tales péptidos. En ciertas modalidades, X1 y X4 se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de alanina (Ala), valina (Val), leucina (Leu), ¡soleucina (lie), prolina (Pro), fenilalanina (Phe), triptofano (Trp), metionina (Met), serina (Ser), que porta un grupo hidrofobico protector, beta-naftil alanina, alfa-naftil alanina, norleucina, ciclohexilalanina, treonina (Thr), que porta un grupo hidrofobico protector, tirosina (Tyr), que porta un grupo hidrofóbico protector, lisina (Lys), que porta un grupo hidrofóbico protector, arginina (Arg), que porta un grupo hidrofóbico protector, ornitina (Orn), que porta un grupo hidrofóbico protector, ácido aspártico (Asp), que porta un grupo hidrofóbico protector, cisteína (Cys), que porta un grupo hidrofóbico protector, y ácido glutámico (Glu), que porta un grupo hidrofóbico protector. En ciertas modalidades, el péptido es un trímero (es decir, n es 0). En ciertos trímeros, X1 es Glu, Leu, Lys, Orn, Phe, Trp o norLeu; X2 es ácido (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico, etc.), o básico (por ejemplo, lisina, arginina, histidina, etc.) y X4 es Ser, Thr, lie, Leu, Trp, Tyr, Phe, o norleu. En ciertas modalidades, el péptido comprende la secuencia de aminoácidos de un péptido listado en el Cuadro 3. En ciertas modalidades, el péptido es un trímero protegido como se muestra en el Cuadro 3. En ciertas modalidades, n es 1 y el péptido es o comprende un tetrámero, en el cual X2 y X3 son de manera independiente un aminoácido ácido o un aminoácido básico, tal que cuando X2 es un aminoácido ácido, X3 es un aminoácido básico y cuando X2 es un aminoácido básico, X3 es un aminoácido ácido. X1 y X4 pueden incluir, aminoácidos seleccionados de manera independiente, por ejemplo, como se indicó anteriormente. En ciertas modalidades, X2 y X3 se seleccionan de manera independiente de Asp, Glu, Lys, Arg y His. En ciertas modalidades, el péptido comprende la secuencia de aminoácidos de un péptido listado en el Cuadro 4. En ciertas modalidades, el péptido es un tetrámero protegido como se muestra en el Cuadro 4.
En aún otra modalidad, n es 1 y el péptido es o comprende un tetrámero en el cual X2 y X3 son de manera independiente, un aminoácido ácido, uno básico o uno alifático con uno de X2 o X3 es un aminoácido ácido o básico, tal que cuando X2 es un aminoácido ácido o básico, X3 es un aminoácido alifático; y cuando X3 es un aminoácido ácido o básico, X2 es un aminoácido alifático. X1 y X4 pueden incluir, aminoácidos seleccionados de manera independiente, por ejemplo, como se indicó anteriormente. En ciertas modalidades, X2 y X3 se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de Asp, Glu, Lys, Arg, His e lie, de manera más preferida, del grupo que consiste de Asp, Arg, Leu y Glu. En ciertas modalidades, el péptido comprende la secuencia de aminoácidos de un péptido listado en el Cuadro 5. En ciertas modalidades, el péptido es un tetrámero protegido como se muestra en el Cuadro 5. En otra modalidad, n es 1 y el péptido es o comprende un tetrámero en el cual X2, X3 son de manera independiente, un aminoácido ácido, uno básico o uno aromático, con uno de X2 o X3 que es un aminoácido ácido o básico, tal que cuando X2 es un aminoácido ácido o básico, X3 es un aminoácido aromático; y cuando X3 es un aminoácido ácido o básico, X2 es un aminoácido aromático. X1 y X4 pueden incluir, aminoácidos seleccionados de manera independiente, por ejemplo, como se indicó anteriormente. En ciertas modalidades, X2 y X3 se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de Asp, Arg, Glu, Trp, Tyr, Phe y Lys. En ciertas modalidades, el péptido comprende la secuencia de aminoácidos de un péptido listado en el Cuadro 6. En ciertas modalidades, el péptido es un tetrámero protegido como se muestra en el Cuadro 6. Esta invención también proporciona péptidos que son o comprenden un pentámero (5-mero), caracterizado por la fórmula: X -X2-X3-X -X5, en donde X1 es un aminoácido hidrofóbico y/o porta un grupo hidrofóbico protector; X5 es un aminoácido hidrofóbico y/o porta un grupo hidrofóbico protector; y X2, X3 y X4 son aminoácidos aromáticos seleccionados de manera independiente o histidina; y el péptido convierte la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hace la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria. En ciertas modalidades, X1 y X5 se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de alanina (Ala), valina (Val), leucina (Leu), isoleucina (He), prolina (Pro), fenilalanina (Phe), triptofano (Trp), metionina (Met), fenilalanina (Phe), triptofano (Trp), metionina (Met), serina (Ser), que porta un grupo hidrofóbico protector, beta-naftil alanina, alfa-naftil alanina, norleucina, ciclohexilalanina, treonina (Thr), que porta un grupo hidrofóbico protector, tirosina (Tyr), que porta un grupo hidrofóbico protector, lisina (Lys), que porta un grupo hidrofóbico protector, arginina (Arg), que porta un grupo hidrofóbico protector, ornitina (Orn), que porta un grupo hidrofóbico protector, ácido aspártico (Asp), que porta un grupo hidrofóbico protector, cisteína (Cys), que porta un grupo hidrofóbico protector, y ácido glutámico (Glu), que porta un grupo hidrofóbico protector. En ciertas modalidades X2, X3, y X4 se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de Phe, Val, Trp, Tyr y His. En ciertas modalidades, el péptido comprende la secuencia de aminoácidos de un péptido listado en el Cuadro 7. En ciertas modalidades, el péptido es un tetrámero protegido como se muestra en el Cuadro 7. Esta invención también proporciona péptidos más largos que aminoran uno o más síntomas de una condición inflamatoria. En ciertas modalidades, el péptido varía en longitud de 5 a 11 aminoácidos; los aminoácidos terminales son aminoácidos hidrofóbicos y/o portan grupos hidrofóbicos protectores; los aminoácidos no terminales forman al menos un dominio ácido y al menos un dominio básico; y el péptido convierte la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hace la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria. En ciertas modalidades, el péptido varía en longitud de 5 a 11 aminoácidos; los aminoácidos terminales son aminoácidos hidrofóbicos y/o portan grupos hidrofóbicos protectores; los aminoácidos no terminales forman al menos un dominio ácido o un dominio básico, y al menos un dominio alifático; y el péptido convierte la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hace la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria. En otras modalidades, el péptido varía en longitud de 5 a 11 aminoácidos; los aminoácidos terminales son aminoácidos hidrofóbicos y/o portan grupos hidrofóbicos protectores; los aminoácidos no terminales forman al menos un dominio ácido o un dominio básico, y al menos un dominio aromático; y el péptido convierte la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hace la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria.
En aún otras modalidades, el péptido varía en longitud de 6 a 11 aminoácidos; los aminoácidos terminales son aminoácidos hidrofóbicos y/o portan grupos hidrofóbicos protectores; los aminoácidos no terminales forman al menos un dominio aromático o dos o más dominios aromáticos separados por una o mas histidinas; y el péptido convierte la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hace la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria. Esta invención también proporciona péptidos que aminoran uno o más síntomas de una condición inflamatoria y que comprenden una o más hélices anfipáticas. Así, esta invención incluye un péptido o un concatámero de un péptido que varía en longitud de aproximadamente 10 a aproximadamente 30 aminoácidos, de manera preferida, de aproximadamente 18 a aproximadamente 30 aminoácidos; que comprende al menos una hélice anfipática de la clase A; que comprende uno o más aminoácidos alifáticos o aromáticos en el centro de la cara no polar de la hélice anfipática; que protege un fosfolípido contra la oxidación por un agente oxidante; y que no es el péptido D-18A. En ciertas modalidades, el péptido comprende la secuencia de aminoácidos de un péptido listado en el Cuadro 2 o el Cuadro 12. En ciertas modalidades, el péptido es un tetrámero protegido como se muestra en el Cuadro 2 o el Cuadro 12. En ciertas modalidades, los péptidos de esta invención protegen un fosfolípido (por ejemplo, 1-palmitoil-2-araquidonoiI-sn-glicero-3-fosforilcolina (PAPC), 1-estearoil-2-araquidonoil-sn-glicero-3-fosfor¡lcolina (SAPC)), 1 -estearoil-2-araquidonil-sn-glicero-3-fosforiletanolamina (SAPE)) contra la oxidación por un agente oxidante (por ejemplo, 13(S)-HPODE, 15(S)-HPETE, HPODE, HPETE, HODE, HETE, etc.). Cualquiera de los péptidos descritos en la presente, puede portar uno o más grupos hidrofóbicos protectores en el aminoácido amino terminal (por ejemplo, X1) y/o el aminoácido carboxilo terminal (por ejemplo, X4, X5, etc.). Los grupos protectores pueden unirse a los términos amino o carboxilo y/o a una cadena lateral (grupo R) del aminoácido. Los grupos protectores pueden acoplarse directamente (por ejemplo, a través de un enlace covalente) o acoplarse indirectamente (por ejemplo, a través de un enlazante). Los grupos hidrofóbicos protectores preferidos incluyen, de manera no exclusiva t-butoxicarbonilo (Boc), Fmoc, nicotinilo, OtBu, un grupo benzoilo, un acetilo (Ac), un carbobenzoxi, un éster metílico, etílico, propílico, butílico, pentílico, hexílico, un N-metil antranililo, y un alquilo de 3 a 20 carbonos, amida, un grupo alquilo de 3 a 20 carbonos, un grupo 9-fluorenacetilo, un grupo 1-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorenon-1-carboxílico, benciloxicarbonilo (también llamado carbobenzoxi, mencionado anteriormente), Xantilo (Xan), Trifilo (Trt), 4-metiltritilo (Mtt), 4-metoxitritilo (Mmt), 4-metoxi-2,3l6-trimetil-bencensulfoniio (Mtr), Mesitilen-2-sulfonilo (Mts), 4,4-dimetoxibenzhidrilo (Mbh), Tosilo (Tos), 2,2,5,7, 8-pentametil croman-6-sulfonilo (Pmc), 4-metilbencilo (MeBzl), 4-metoxibencilo (MeOBzl), Benciloxi (BzlO), Bencilo (Bzl), Benzoilo (Bz), 3-nitro-2-piridinsulfenilo (Npys), 1-(4,4-dimetil-2,6-d¡oxociclohex¡liden)et¡lo (Dde), 2,6-diclorobencilo (2,6-DiCI-Bzl), 2-clorobenciloxicarbonilo (2-CI-Z), 2-bromobenciloxicarbonilo (2-Br-Z), benciloximetilo (Bom), ciclohexi!oxi (cHxO), t-butoximetilo (Bum), t-butoxi (tBuO), t-Butilo (tBu), trifluoroacetilo (TFA), éster 4[N-{1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)-3-metildibutil)-amino}bencilico (ODmab), éster a-alílico (OAII), éster 2-feniüsopropílico (2-PhiPr), 1-[4,4-dimetil-2,6-dioxiciclohex-1-il-iden)etilo (Dde), y lo similar. En ciertas modalidades, el grupo hidrofóbico protector se selecciona del grupo que consiste de Boc, Fmoc, nicotinilo y OtBu. En ciertas modalidades, el término N del péptido está bloqueado con un grupo protector seleccionado del grupo que consiste de Boc-, Fmoc- y Nicotinilo- y/o el término C del péptido está bloqueado con un grupo protector seleccionado del grupo que consiste de tBu y OtBu. Los péptidos pueden también, opcionalmente, incluir al menos un aminoácido D. En ciertas modalidades, los péptidos incluyen una pluralidad de aminoácidos D o pueden comprender incluso todos los aminoácidos D. En ciertas modalidades, el péptido comprende alternar aminoácidos D y L. Los péptidos también pueden ser todos aminoácidos de la forma L. Los péptidos pueden estar aislados (por ejemplo, sustanciaimente puros), secos o en solución, y/o combinarse con un excipiente farmacológicamente aceptable. En ciertas modalidades, el péptido está mezclado con un excipiente farmacológicamente aceptable adecuado para la administración oral a un mamífero (por ejemplo, un humano o un mamífero no humano). El péptido puede proporcionarse como una formulación unitaria en un excipiente farmacéuticamente aceptable y/o como una formulación de liberación temporal.
Los péptidos también pueden acoplarse a una o más biotinas (por ejemplo, directamente, a través de un enlazante, y/o a través de la cadena lateral de aminoácidos). En ciertas modalidades, la biotina está acoplada a una lisina (Lys). En ciertas modalidades, esta invención también proporciona pares de aminoácidos que aminoran uno o más síntomas de una condición inflamatoria. El par de aminoácidos comprende típicamente un primer aminoácido que porta al menos un grupo protector; y un segundo aminoácido que porta al menos grupo protector; en donde el primer aminoácido y el segundo aminoácido son diferentes especies de aminoácidos, y en donde el par de aminoácidos convierte la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hace la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria. En varias modalidades, el par de aminoácidos, cuando se ponen en contacto con un fosfolípido en un medio acuoso, forma partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm y forma bicapas apiladas con una dimensión de la bicapa del orden de 3.4 a 4.1 nm, con una separación entre las bicapas en la pila de aproximadamente 2 nm. En ciertas modalidades, el primer y segundo aminoácidos se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de un aminoácido ácido, un aminoácido básico, y un aminoácido no polar. En ciertas modalidades, el primer aminoácido es ácido o básico, y el segundo aminoácido es no polar, o el primer aminoácido es no polar y el segundo aminoácido es ácido o básico. En ciertas modalidades, ambos aminoácidos son ácidos o básicos. El primer y segundo aminoácidos pueden, opcionalmente, estar acoplados covalentemente, por ejemplo, directamente o a través de un enlazante. En ciertas modalidades, los aminoácidos se unen a través de un enlace peptídico, formando por lo tanto un dipéptido. En ciertas modalidades, el primer aminoácido y el segundo aminoácido se mezclan juntos, pero no se enlazan de manera covalente. Los grupos protectores incluyen, de manera no exclusiva, cualquiera de los grupos protectores descritos en la presente. En ciertas modalidades, el primer aminoácido está bloqueado con un grupo protector seleccionado del grupo que consiste de Boc-, Fmoc- y nicotinilo-, y el segundo aminoácido está bloqueado con un grupo protector seleccionado del grupo que consiste de tBu y OtBu. En ciertas modalidades, cada aminoácido porta al menos dos grupos protectores. En ciertas modalidades, cada aminoácido está bloqueado con un primer grupo protector seleccionado del grupo que consiste de Boc-, Fmoc- y nicotinilo-, y un segundo grupo protector seleccionado del grupo que consiste de tBu y OtBu. En ciertas modalidades, cada aminoácido está bloqueado con un Boc y un OtBu. En varias modalidades, el par de aminoácidos forma un dipéptido seleccionado del grupo que consiste de Phe-Arg, Glu-Leu y Arg-Glu. En ciertas modalidades, el par de aminoácidos forma un dipéptido seleccionado del grupo que consiste de Boc-Arg-OtBu, Boc-Glu-OtBu, Boc-Phe-Arg-OtBu, Boc-Glu-Leu-OtBu y Boc-Arg-Glu-OtBu. Esta invención también proporciona una formulación farmacéutica que comprende uno o más de los péptidos y/o pares de aminoácidos descritos en la presente, y un excipiente farmacéuticamente aceptable. Típicamente, los péptidos y/o pares de aminoácidos están presentes en una dosis efectiva. Los péptidos y/o pares de aminoácidos, también pueden proporcionarse como una formulación de liberación temporal y/o como una formulación de dosificación unitaria. En ciertas modalidades, la formulación se formula para la administración oral. En ciertas modalidades, la formulación se formula para la administración mediante una ruta seleccionada del grupo que consiste de administración oral, inhalación (por ejemplo, administración nasal, inhalación oral, etc.), administración rectal, inyección intraperitoneal, inyección intravascular, inyección subcutánea, administración transcutánea, administración por inhalación, inyección intramuscular y lo similar. También se proporciona un equipo que comprende un recipiente que contiene uno o más de los péptidos y/o pares de aminoácidos descritos en la presente, y material con instrucciones que enseñan el uso de los péptidos y/o pares de aminoácidos, en el tratamiento de una patología caracterizada por inflamación (por ejemplo, aterosclerosis, artritis reumatoide, lupus eritematoso, poliarteritis nodosa, asma, osteoporosis, enfermedad de Altzheimer, una dolencia viral, etc.). Esta invención también proporcionar un método para mitigar (por ejemplo, reducir o eliminar), uno o más síntomas de la aterosclerosis en un mamífero (humano o un mamífero no humano). El método involucra típicamente administrar al mamífero una cantidad efectiva de uno o más de los péptidos y/o pares de aminoácidos descritos en la presente. El péptido y/o el par de aminoácidos, puede administrarse en un excipiente farmacéuticamente aceptable (por ejemplo, para la administración oral) y puede opcionalmente, administrarse en conjunto (por ejemplo, antes, después o simultáneamente) con un lípido. La administración puede comprender administrar el péptido y/o el par de aminoácidos, mediante una ruta seleccionada del grupo que consiste de administración oral, inhalación (por ejemplo, administración nasal, inhalación oral, etc.), administración rectal, inyección intraperitoneal, inyección intravascular, inyección subcutánea, administración transcutánea e inyección intramuscular. En ciertas modalidades, el mamífero es un mamífero diagnosticado como que tiene uno o más síntomas de la aterosclerosis. En ciertas modalidades, el mamífero es un mamífero diagnosticado como que está en riesgo de apoplejía o aterosclerosis. En otra modalidad, esta invención proporciona un método para mitigar uno o más síntomas de una patología inflamatoria (por ejemplo, aterosclerosis, artritis reumatoide, lupus eritematoso, poliarteritis nodosa, osteoporosis, esclerosis múltiple, diabetes, asma, enfermedad de Altzheimer, una dolencia viral, etc.). El método involucra típicamente administrar al mamífero una cantidad efectiva de uno o más de los péptidos y/o pares de aminoácidos, descritos en la presente. El péptido y/o el par de aminoácidos, puede administrarse en un excipiente farmacéuticamente aceptable (por ejemplo, para la administración oral) y puede, opcionalmente, administrarse en conjunto (por ejemplo, antes, después o simultáneamente) con un lípido.
La administración puede comprender administrar el péptido y/o los pares de aminoácidos, mediante una ruta seleccionada del grupo que consiste de administración oral, inhalación, administración rectal, inyección intraperitoneal, inyección intravascular, inyección subcutánea, administración transcutánea e inyección intramuscular. En ciertas modalidades, el mamífero es un mamífero diagnosticado como que tiene uno o más síntomas de una patología inflamatoria. En ciertas modalidades, el mamífero es un mamífero diagnosticado como que está en riesgo de la patología inflamatoria. Los péptidos y/o los pares de aminoácidos de esta invención, también actúan sinergísticamente con las estatinas y/o con un inhibidor selectivo de la captación del colesteroi (por ejemplo, Ezetimibe). El método involucra típicamente coadministrar con la estatina y/o el inhibidor de la captación del colesteroi, una cantidad efectiva de uno o más de los péptidos descritos en la presente. En ciertas modalidades, la estatina se selecciona del grupo que consiste de cerivastatina, atorvastatina, simvastatina, pravastatina, fluvastatina, lovastatina, rosuvastatina y pitavastatina. El péptido puede administrarse antes, después o simultáneamente con al estatina y/o el inhibidor de la captación del colesteroi. El péptido y/o la estatina y/o el inhibidor de la captación del colesteroi, pueden administrarse como una formulación de dosificación unitaria. En ciertas modalidades, la administración comprende administrar el péptido y/o la estatina mediante una ruta seleccionada del grupo que consiste de la administración oral, administración nasal, administración rectal, inyección intraperitoneal, inyección intravascular, inyección subcutánea, administración transcutánea e inyección intramuscular. El mamífero incluye, de manera no exclusiva, un mamífero diagnosticado como que tiene uno o más síntomas de aterosclerosis o diagnosticado como que está en riesgo de apoplejía o aterosclerosis. Esta invención también proporciona un método para mitigar uno o más síntomas asociados con la aterosclerosis en un mamífero. El método involucra típicamente administrar una estatina y/o un inhibidor selectivo de la captación del colesteroi; y una cantidad efectiva de uno o más péptidos y/o pares de aminoácidos, descritos en la presente, en donde la cantidad efectiva de la estatina y/o el inhibidor de la captación del colesteroi es menor que la cantidad efectiva de una estatina o un inhibidor de la captación del colesteroi administrados sin los péptidos y/o pares de aminoácidos. En ciertas modalidades, la cantidad efectiva de los péptidos y/o pares de aminoácidos, es menor que la cantidad efectiva del péptido y/o pares de aminoácidos, administrados sin la estatina y/o el inhibidor de la captación del colesteroi. En ciertas modalidades, la estatina se selecciona del grupo que consiste de cerivastatina, atorvastatina, simvastatina, pravastatina, fluvastatina, lovastatina, rosuvastatina y pitavastatina. El péptido puede administrarse antes, después o simultáneamente con la estatina y/o el inhibidor de la captación del colesteroi. El péptido y/o el par de aminoácidos y/o la estatina y/o el inhibidor de la captación del colesteroi pueden administrarse como una formulación de dosificación unitaria. En ciertas modalidades, la administración comprende administrar el péptido y/o el par de aminoácidos y/o la estatina mediante una ruta seleccionada del grupo que consiste de administración oral, inhalación, administración rectal, inyección intraperitoneal, inyección intravascular, inyección subcutánea, administración transcutánea e inyección intramuscular. El mamífero incluye, de manera no exclusiva, un mamífero diagnosticado como que tiene uno o más síntomas de aterosclerosis o diagnosticado como que está en riesgo de apoplejía o aterosclerosis. El mamífero incluye, de manera no exclusiva, un mamífero diagnosticado como que tiene uno o más síntomas de aterosclerosis o diagnosticado como que está en riesgo de apoplejía o aterosclerosis. En aún otra modalidad, esta invención proporciona un método para reducir o inhibir uno o más síntomas de la osteoporosis en un mamífero. El método involucra típicamente administrar al mamífero uno o más péptidos y/o pares de aminoácidos descritos en la presente, en donde el péptido y/o par de aminoácidos, se administra en una concentración suficiente para reducir o eliminar uno o más síntomas de la osteoporosis. En ciertas modalidades, los péptidos y/o pares de aminoácidos, se administran en una concentración suficiente para reducir o eliminar la descalcificación de un hueso. En ciertas modalidades, los péptidos y/o pares de aminoácidos se administran en una concentración suficiente para inducir la recalcificación de un hueso. Los péptidos y/o los pares de aminoácidos pueden combinarse con un excipiente farmacológicamente aceptable (por ejemplo, un excipiente adecuado para la administración oral a un mamífero).
En ciertas modalidades, los métodos y/o péptidos de esta invención excluyen cualesquiera de uno o más péptidos descritos en la WO 97/36927 y/o las Patentes de E.U.A. 6,037,323 y/o 6,376,464 y/o 6753,313 y/o en Garber et al. (1992) Arteriesclerosis and Thrombosis, 12:886-894. En ciertas modalidades, esta invención excluye cualesquiera de uno o más péptidos descritos en la Patente de E.U.A. 4,643,988 y/o en Garber et al (1992), que se sintetizaron con todos los aminoácidos enantioméricos siendo aminoácidos L o se sintetizaron con aminoácidos D, en donde los péptidos son grupos de bloqueo. En ciertas modalidades, esta invención excluye los péptidos que tienen la fórmula A1-B1-B2-C1-D-B3-B4-A2-C2-B5-B6-A3-C3-B7-C4-A -B8-B9 (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: 1), en donde A t A2, A3 y A4 son de manera independiente ácido aspártico o ácido glutámico, u homólogos o análogos de los mismos; B-i, B2, B3, B4, B5, B6, B7, B8 y B9 son de manera independiente triptofano, fenilalanina, alanina, leucina, tirosina, isoleucina, valina o a-naftilalanina, u homólogos o análogos de los mismos; C1 , C2, C3 y C-4 son de manera independiente lisina o arginina, y D es serina, treonina, alanina, glicina, histidina, u homólogos o análogos de los mismos; con la condición de que, cuando Ai y A2 son ácido aspártico, A3 y A4 son ácido glutámico, B2 y Bg son leucina, B3 y B7 son fenilalanina, B4 es tirosina, B5 es valina, B6, Be y D son alanina, y C1, C2, C3 y C4 son lisina, B, no es triptofano. En ciertas modalidades, aunque esta invención puede excluir uno o más de los péptidos descritos anteriormente, el péptido de la SEQ ID NO: 8 (4F o D4F), se incluirá de manera expresa.
En ciertas modalidades, esta invención excluye cualesquiera de uno o más péptidos en la WO 97/36927 y/o las variantes D de los mismos. Las modalidades particulares excluyen uno o más de los siguiente: apoproteína A, apoproteína A-1 , apoproteína A-2, apoproteína A4, apoproteína B, apoproteína B-48, apoproteína ?-10?, apoproteína C, apoproteína C-1 , apoproteína C-2, apoproteína C-3, apoproteína D, apoproteína E, como se describe en la WO 97/36927. En ciertas modalidades, también se excluyen cualesquiera de uno o más péptidos descritos en la Patente de E.U.A. 6,037,323 y/o las variantes D de los mismos. Las modalidades particulares excluyen los compuestos agonistas de la apo A-l que comprenden (i) un péptido de 18 a 22 residuos o un análogo peptídico que forma una hélice alfa anfifática en la presencia de lípidos, que comprende la fórmula: X9-Xio-Xi Xi2-Xi3- i4-Xi5- i6- i7-Xi8- 2) (SEQ ID NO: 2), en donde X es Pro (P), Ala (A), Gly (G), Asn (N), Gln (Q) o D-Pro (p); X2 es un aminoácido alifático; X3 es Leu (L); X4 es un aminoácido ácido; X= es Leu (L) o Phe (F); XS es Leu (L) o Phe (F); X7 es un aminoácido básico; Xs es un aminoácido ácido; Xg es Leu (L) o Trp (W); 10 es Leu (L) o Trp (W); X-H es un aminoácido ácido o Asn (N); X12 es un aminoácido ácido; X13 es Leu (L), Trp (W) o Phe (F); X es un aminoácido básico o Leu (L); X15 es Gln (Q) o Asn (N); X 6 es un aminoácido básico; X17 es Leu (L); X18 es un aminoácido básico; Z1 es H2N- o RC(O)NH-; Z2 es -C(O)NRR, -C(O)OR o -C(O)OH o una sal de los mismos; cada R es de manera independiente -H, alquilo de (C-i-Ce), alquenilo de (CrC6), alquinilo de (d-Ce), ariio de (C5-C20), alcarilo de (C6-C26), heteroarilo de 5-20 miembros 0 alqheteroarilo de 6-26 miembros o un péptido de 1 a 4 residuos o un análogo peptídico en el cual uno o más enlaces entre los residuos 1-7 son de manera independiente una amida sustituida, un isóstero de una amida o un mimético de una amida; y cada "-" entre los residuos X1 hasta X18 designa de manera independiente un enlace amida, un enlace de amida sustituida, un isóstero de una amida o un mimético de una amida; o (ii) una forma alterada de fórmula (I), en la cual al menos uno de los residuos Xi, X3> X4, ?d, d, 7, ?d, X9, Xl0> Xl1, Xl2> Xl3, Xl4. Xl5> Xl6, Xl7 O X-|8 está sustituido de manera conservadora con otro residuo y/o las variantes D de los mismos. En ciertas modalidades, esta invención excluye los péptidos que tienen la secuencia Lys-Arg-Asp-Ser (SEQ ID NO: 238), y en ciertas modalidades, esta invención excluye los péptidos que tienen la secuencia Lys-Arg-Asp-Ser (SEQ ID NO: 238), en la cual Lys-Arg-Asp y Ser son todos aminoácidos L. En ciertas modalidades, los péptidos de esta invención muestran menos que 38%, de manera preferida menos que aproximadamente 35%, de manera más preferida menos que aproximadamente 30% o menos que aproximadamente 25% de actividad de activación LCAT, como se mide por los ensayos proporcionados en la Patente de E.UA. 6,376,464.
Definiciones Los términos "polipéptido", "péptido" y "proteína", se utilizan de manera indistinta en la presente para referirse a un polímero de residuos de aminoácidos. Los términos se aplican a polímeros de aminoácidos en los cuales uno o más residuos de aminoácidos es un análogo químico artificial de un aminoácido natural correspondiente, así como polímeros de aminoácidos naturales. El término "hélice anfipática de la clase A", se refiere a una estructura de proteína que forma una hélice a que produce una segregación de las caras polar y no polar con los residuos cargados positivamente que residen en la ¡nterfaz polar-no polar y los residuos cargados negativamente que residen en el centro de la cara polar (véase, por ejemplo, "Segrest et al. (1990) Proteins: Structure, Function, and Genetics 8:103-117). El término "aminorar", cuando se utiliza con respecto a "aminorar uno o más síntomas de la aterosclerosis", se refiere a una reducción, prevención o eliminación de uno o más síntomas característicos de la aterosclerosis y/o patologías asociadas. Tal reducción incluye, de manera no exclusiva, la reducción o eliminación de los fosfolípidos oxidados, unas reducción en la formación y ruptura de la placa aterosclerótica, una reducción en los eventos clínicos tales como ataque cardiaco, angina o apoplejía, una disminución en la hipertensión, una disminución en la biosíntesis de la proteína inflamatoria, reducción en el colesterol en plasma y lo similar. "Aminorar uno o más síntomas de la aterosclerosis", puede referirse también a mejorar el flujo sanguíneo a los lechos vasculares afectados por la aterosclerosis. El término "aminoácidos enantioméricos", se refiere a aminoácidos que pueden existir en al menos dos formas que son imágenes especulares que no se pueden superponer una con respecto a la otra. La mayoría de los aminoácidos (excepto la glicina), son enantioméricos y existen en la llamada forma L (aminoácido L) o la forma D (aminoácido D). Los aminoácidos más naturales son los aminoácidos "L". Los términos "aminoácido D" y "aminoácido L" se utilizan para referirse a la configuración absoluta del aminoácido, más que a la dirección de rotación particular de la luz polarizada en el plano. El uso en la presente es consistente con el uso estándar por aquellos con experiencia en la técnica. El término "grupo protector", se refiere a un grupo químico que, cuando se une a un grupo funcional en un aminoácido (por ejemplo, una cadena lateral, un grupo amino alfa, un grupo carboxilo alfa, etc.), bloquea o enmascara las propiedades de ese grupo funcional. Los grupos protectores amino terminales preferidos incluyen, de manera no exclusiva, acetilo o grupos amino. Otros grupos protectores amino terminales incluyen, de manera no exclusiva, cadenas de alquilo como en los ácidos grasos, propionilo, formüo y otros. Los grupos protectores carboxilo terminales preferidos incluyen, de manera no exclusiva, grupos que forman amidas o ésteres. El término "grupos de protección de la cadena lateral", se refiere a grupos protectores que protegen/bloquean una cadena lateral (es decir, un ? grupo R) de un aminoácido. Los grupos protectores de la cadena lateral incluyen, de manera no exclusiva, grupos protectores de amino, grupos protectores de carboxilo y grupos protectores de hidroxilo tales como grupos protectores de éteres de arilo y guanidina, tales como nitro, tosilo, etc. La frase "proteger un fosfolípido de la oxidación por un agente oxidante", se refiere a la capacidad de un compuesto para reducir la velocidad de oxidación de un fosfolípido (o la cantidad del fosfolípido oxidado producido), cuando el fosfolípido se pone en contacto con un agente oxidante (por ejemplo, peróxido de hidrógeno, 13-(S)-HPODE, 15-(S)-HPETE, HPODE, HPETE, HODE, HETE, etc.). Los términos "lipoproteína de densidad baja" o "LDL", se definen de acuerdo con el uso común de aquellos con experiencia en la técnica. Generalmente, LDL se refiere al complejo lípido-proteína que cuando se aisla mediante ultracentrifugación, se encuentra en el intervalo de densidad d = 1.019 a d = 1.063. Los términos "lipoproteína de densidad alta" o "HDL", se definen de acuerdo con el uso común de aquellos con experiencia en la técnica. Generalmente, "HDL" se refiere al complejo lípido-proteína, el cual, cuando se aisla mediante ultracentrifugación se encuentra en el intervalo de d = 1.063 a d = 1.21. El término "HDL del Grupo I", se refiere a una lipoproteína de densidad alta o componentes de la misma (por ejemplo, apo A-I, paraoxonasa, factor que activa las plaquetas acetilhidrolasa, etc.), que reduce los lípidos oxidados (por ejemplo, en las lipoproteínas de densidad baja), o que protegen los lípidos oxidados de la oxidación por los agentes oxidantes. El término "HDL del Grupo II", se refiere a una HDL que ofrece actividad reducida o ninguna actividad para proteger los lípidos de la oxidación o en la reparación (por ejemplo, reducción), de los lípidos oxidados. El término "componente de HDL", se refiere a un componente (por ejemplo, moléculas), que comprende una lipoproteína de densidad alta (HDL). Los ensayos para la HDL que protegen los lípidos de la oxidación o que reparan (por ejemplo, reducen los lípidos oxidados), también incluyen ensayos para los componentes de la HDL (por ejemplo, apo A-I, paraoxonasa, factor que activa las plaquetas acetilhidrolasa, etc.), que muestran tal actividad. El término "péptido apo A-I humano", se refiere a un péptido apo A-l humano de longitud completa o un fragmento o dominio del mismo, que comprende una hélice anfipática de la clase A. Una "reacción monocítica" como se utiliza en la presente, se refiere a la actividad del monocito característica de la "respuesta inflamatoria" asociada con la formación de la placa aterosclerótica. La reacción monocítica está caracterizada por la adhesión del monocito a las células de la pared vascular (por ejemplo, células del endotelio vascular), y/o la quimiotaxis en el espacio subendotelial, y/o la diferenciación de los monocitos en macrófagos y/o la quimiotaxis del monocito como se mide ¡n vitro (por ejemplo, utilizando una cámara de neurosonda).
El término "ausencia de cambio", cuando se refiere a la cantidad de fosfoiípido oxidado, se refiere a la falta de un cambio detectable, de manera más preferida, a la falta de un cambio estadísticamente significativo (por ejemplo, al menos a un nivel de confianza del 85%, de manera preferida al menos del 90%, de manera más preferida al menos del 95%, y de manera más preferida al menos del 98% o 99%). La ausencia de un cambio detectable puede referirse también a ensayos en los cuales en nivel del fosfoiípido oxidado cambia, pero no tanto como en la ausencia de las proteínas descritas en la presente o con referencia a otros controles positivos o negativos. Las siguientes abreviaturas se utilizan en la presente: PAPC: L- -1-palmitoil-2-araquidonoil-sn-glicero-3-fosfocolina, POVPC: 1-palmitoil-2-(5-oxovaleril)-sn-glicero-3-fosfocolina; PGPC: 1-palm¡toil-2-glutaril-sn-glicero-3-fosfocolina; PEIPC: 1-palmitoil-2-(5,6-epoxiisoprostan E2)-sn-glicero-3-fosfocolina; ChC18:2: lenoleato de colesterilo; ChC18:2-OOH: hidroperóxido de linoleato de colesterilo; DMPC: 1 ,2-ditetradecanoil-rac-glicerol-3-fosfocolina; PON: paraoxonasa; HPF: Campo de alta potencia estandarizado; PON: paraoxonasa; BU6: C57BL/6J; C3H:C3H/HeJ. El término "sustitución conservadora", se utiliza con referencia a las proteínas o péptidos para reflejar las sustituciones de aminoácidos que no alteran sustancialmente la actividad (especificidad (por ejemplo, para las lipoproteínas)), o afinidad de unión (por ejemplo, para los lípidos o lipoproteínas)) de la molécula. Típicamente, las sustituciones conservadoras de aminoácidos involucran la sustitución de un aminoácido por otro aminoácido con propiedades químicas similares (por ejemplo, carga o hidrofobicidad). Los siguientes seis grupos contienen cada uno aminoácidos que son sustituciones conservadoras típicas unas con respecto a las otras: 1) Alanina (A), Serina (S), Treonina (T); 2) Acido aspártico (D), Acido glutámico (E); 3) Asparagina (N), Glutamina (Q); 4) Arginina (R), Usina (K); 5) Isoleucina (I), Leucina (L), Metionina (M), Valina (V); y 6) Fenilalanina (F), Tirosina (Y), Triptofano (W). Los términos "idéntica" o porcentaje de "identidad" en el contexto de dos o más secuencias de ácidos nucleicos o polipéptidos, se refiere a dos o más secuencias o subsecuencias que son las mismas o tienen un porcentaje específico de residuos de aminoácidos o nucieótidos que son los mismos, cuando se comparan y alinean para una correspondencia máxima, como se mide utilizando uno de los siguientes algoritmos de comparación de la secuencia o mediante inspección visual. Con respecto a los péptidos de esta invención, la identidad de la secuencia se determina con respecto a la longitud completa del péptido. Para la comparación de la secuencia, típicamente una secuencia actúa como una secuencia de referencia, con la cual se comparan las secuencias de prueba. Cuando se utiliza un algoritmo de comparación de la secuencia, las secuencias de prueba y de referencia se introducen en una computadora, se designan las coordenadas de la subsecuencia, si es necesario, y se designan los parámetros del programa del algoritmo de la secuencia. El algoritmo de comparación de la secuencia calcula a continuación el por ciento de identidad de la secuencia para las secuencias de prueba con relación a la secuencia de prueba, basándose en los parámetros designados del programa. La alineación óptima de las secuencias para la comparación puede realizarse, por ejemplo, mediante el algoritmo de homología local de Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981), mediante ei algoritmo de alineación por homología de Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970), mediante la búsqueda del método de similitud de Pearson & Lipman (1988) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 85:2444, mediante las implementaciones computarizadas de estos algoritmos (GAP, BESTFIT, FASTA y TFASTA en el Paquete de Programas para Genética Wisconsin, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wl), o mediante inspección visual (véase, generalmente Ausubel et al., supra). Un ejemplo de un algoritmo útil es PILEUP. PILEUP crea una alineación múltiple de la secuencia a partir de un grupo de secuencias relacionadas utilizando alineaciones progresivas, apareadas, para mostrar la relación y el por ciento de identidad de la secuencia. También gráfica un árbol o dendograma que muestra las relaciones de acumulación utilizadas para crear la alineación. PILEUP utiliza una simplificación del método de alineación progresiva de Feng & Doolittle (1987) J. Mol. Evol. 35:351-360. El método utilizado es similar al método descrito por Higgins & Sharp (1989) CABIOS 5:151-153. El programa puede alinear hasta 300 secuencias, cada una con una longitud máxima de 5,000 nucleótidos o aminoácidos. El procedimiento de alineación múltiple empieza con la alineación apareada de las dos secuencias más similares, produciendo una acumulación de dos secuencias alineadas. Esta acumulación se alinea a continuación con la siguiente secuencia más relacionada o con la acumulación de las secuencias alineadas. Dos acumulaciones de secuencias se alinean mediante una simple extensión de la alineación apareada de dos secuencias individuales. La alineación final se alcanza mediante una serie de alineaciones progresivas, apareadas. El programa se corre designando las secuencias específicas y sus coordenadas de aminoácidos o nucleótidos para las regiones de comparación de la secuencia y designando los parámetros del programa. Por ejemplo, una secuencia de referencia puede compararse con otras secuencias de prueba para determinar la relación del por ciento de identidad de la secuencia, utilizando los siguientes parámetros: ponderación predeterminada del hueco (3.00), ponderación predeterminada de la longitud del hueco (0.10), y huecos de extremo ponderados. Otro ejemplo de un algoritmo que es adecuado para determinar el por ciento de identidad de la secuencia y la similitud de la secuencia es el algoritmo BLAST, el cual se describe en Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-4 0. El programa para realizar los análisis BLAST está disponible al público a través del Centro Nacional de Información de Biotecnología (httpJ/www.ncbi. nlm.nih.gov/). Este algoritmo involucra identificar primero los pares de la secuencia con una alta calificación (HSP), identificando palabras cortas de longitud W en la secuencia de consulta, que pueden corresponder o satisfacer alguna calificación T con un umbral con un valor positivo, alineada con la palabra de la misma longitud en una secuencia de la base de datos. T se refiere al umbral de la calificación de la palabra en la vecindad (Altschul et al, supra). Estos aciertos iniciales en la palabra en la vecindad actúan como semillas para iniciar las búsquedas para encontrar HSP más largos que las contengan. Los aciertos de la palabra se extienden a continuación en ambas direcciones a lo largo de cada secuencia, tanto como pueda incrementarse la calificación de la alineación acumulativa. Las calificaciones acumulativas se calculan utilizando, para las secuencias nucleotídicas, los parámetros M (calificación de recompensa para un par de residuos coincidentes; siempre > 0) y N (calificación de penalización para los residuos que no coinciden; siempre < 0). Para las secuencias de aminoácidos, se utiliza una matriz de calificación para calcular la calificación acumulativa. La extensión de los aciertos de la palabra en cada dirección se detiene cuando: la calificación de la alineación acumulativa cae la cantidad X desde su valor máximo alcanzado; la calificación acumulativa va a cero o más abajo, debido a la acumulación de una o más alineaciones de residuos con calificación negativa; o se alcanza el extremo de cualquier secuencia. Los parámetros del algoritmo BLAST W, T y X, determinan la sensibilidad y la velocidad de la alineación. El programa BLASTN (para secuencias nucleotídicas), utiliza como valores predeterminados una longitud de la palabra (W) de 11 , una expectativa (E) de 10, = 5, N = -4, y una comparación de ambas hebras. Para las secuencias de aminoácidos, el programa BLASTP utiliza como valores predeterminados una longitud de la palabra (W) de 3, una expectativa (E) de 10, y la matriz de calificación BLOSUM62 (véase, Henikoff & Henikoff (1989) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89:10915). Además de calcular el por ciento de identidad de la secuencia, el algoritmo BLAST también realiza un análisis estadístico de la similitud entre dos secuencias (véase, por ejemplo, Karlin & Altschul (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 90:5873-5787). Una medida de la similitud proporcionada por el algoritmo BLAST es la probabilidad de la suma más pequeña (P (N)), que proporciona una indicación de la probabilidad mediante la cual ocurriría por casualidad una coincidencia entre dos secuencias nucleotídicas o de aminoácidos. Por ejemplo, un ácido nucleico se considera similar a una secuencia de referencia si la probabilidad de la suma más pequeña en una comparación del ácido nucleico de prueba con respecto al ácido nucleico de referencia es menor que aproximadamente 0.1 , de manera más preferida, menor que aproximadamente 0.01 , y de manera más preferida, menor que aproximadamente 0.001. El término "péptido D-18A", se refiere a un péptido que tiene la secuencia: D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F (SEQ ID NO: 3), en donde todos los aminoácidos enantioméricos son aminoácidos de la forma D. El término "coadministrar" o "administración concurrente", cuando se utiliza, por ejemplo, con respecto a un péptido de esta invención y otro agente activo (por ejemplo, una estatina), se refiere a la administración del péptido y el agente activo, de manera que ambos pueden alcanzar simultáneamente un efecto fisiológico. Los dos agentes, sin embargo, no necesitan administrarse juntos. En ciertas modalidades, la administración de un agente puede preceder la administración del otro, sin embargo, tal coadministración resulta típicamente en que ambos agentes están presentes simultáneamente en el cuerpo (por ejemplo, en el plasma), a una fracción significativa (por ejemplo, 20% o mayor, de manera preferida 30% o 40% o mayor, de manera más preferida 50% o 60% o mayor, de manera más preferida 70% u 80% o 90% o mayor) de su máxima concentración en suero para cualquier dosis dada. El término "destoxificar", cuando se utiliza con respecto a los lípidos, LDL o HDL, se refiere a la eliminación de algunos o todos los lípidos oxidantes y/o los lípidos oxidados. Así, por ejemplo, la captación de todos o algunos HPODE y/o HPETE (ambos hidroperóxidos de ácidos grasos), evitará o reducirá la entrada de estos peróxidos en las LDL y por lo tanto, evitará o reducirá la oxidación de la LDL. El término "partículas similares a una lipoproteína de densidad alta pre-beta", se refiere típicamente a partículas que contienen colestero! que también contienen apoA-l y que son más pequeñas y relativamente deficientes en lípidos en comparación con la proporción lípido:proteína en la mayoría de las partículas de HDL. Cuando el plasma se separa mediante FPLC, estas "partículas similares a la lipoproteína de densidad alta pre-beta", se encuentran en las fracciones de FPLC que contienen partículas más pequeñas que aquéllas en el principal pico de la HDL y se localizan a la derecha de la HDL en un cromatograma FPLC, como se muestra en la solicitud relacionada USSN 10/423,830. La frase "transporte inverso de lípidos y destoxificación", se refiere a la eliminación de los lípidos incluyendo el colesterol, otros esteróles, incluyendo esteróles oxidados, fosfolípidos, agentes oxidantes y fosfolípidos oxidados de los tejidos tales como las arterias y el transporte fuera de estos tejidos periféricos a los órganos en donde pueden destoxificarse y excretarse, tal como la excreción por el hígado en la bilis y la excreción por los ríñones en la orina. La destoxificación también se refiere a evitar la formación y/o destruir los fosfolípidos oxidados como se explicó en la presente. El término "muestra biológica" como se utiliza en la presente, se refiere a cualquier muestra obtenida a partir de un organismo viviente o de un organismo que ha muerto. Los ejemplos de muestras biológicas incluyen fluidos corporales, especímenes de tejido, células y líneas celulares tomadas de un organismo (por ejemplo, un humano o un mamífero no humano). El término "amida" cuando se refiere a un grupo hidrofóbico protector o a un grupo hidrofóbico de bloqueo, incluye una amida simple a metilamida o etilamida. El término también incluye alquil amidas tales como CO-NH-R, en donde R es metilo, etilo, etc. (por ejemplo, hasta 7, de manera preferida 9, de manera más preferida 11 ó 13 carbonos). El término "péptido D", se refiere a un péptido en el cual uno o más de los aminoácidos enantioméricos que comprenden el péptido son aminoácidos de la forma D. En ciertas modalidades, una pluralidad de los aminoácidos enantioméricos son aminoácidos de la forma D. En ciertas modalidades, al menos la mitad de los aminoácidos enantioméricos son aminoácidos de la forma D. En ciertas modalidades, el péptido comprende alternar los aminoácidos de la forma D y L. En ciertas modalidades, todos los aminoácidos enantioméricos son aminoácidos de la forma D. El término "péptido L", se refiere a un péptido en el cual todos los aminoácidos (aminoácidos enantioméricos) son aminoácidos de la forma L. Un péptido que "convierte la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hace la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria", se refiere a un péptido que cuando se administra a un mamífero (por ejemplo, un humano, una rata, un ratón, etc.), o cuando se utiliza en un ensayo ex vivo apropiado (por ejemplo, como se describe en la presente), convierte la HDL a una HDL que reduce o bloquea la oxidación de los lípidos por un agente oxidante (por ejemplo, como se describe en la USSN 6,596,544), y/o que tiene actividad incrementada de la paraoxonasa, y/o que disminuye la actividad quimiotáctica del monocito inducida por la LDL, generada por las células de la pared arterial, en comparación con la HDL en un ensayo de control (por ejemplo, la HDL de un animal o ensayo de control administrada a una dosis menor del péptido o un animal o ensayo de control negativo que carece del péptido). La alteración de la HDL (conversión de no protectora a protectora o incremento en la actividad protectora), es de manera preferida un cambio detectable. En las modalidades preferidas, el cambio es un cambio estadísticamente significativo, por ejemplo, como se determina utilizando cualquier prueba estadística adecuada para el conjunto de datos proporcionados (por ejemplo, prueba t, análisis de varianza (ANOVA), técnicas semiparamétricas, técnicas no paramétricas (por ejemplo, Prueba de Wilcoxon Mann-Whitney, Prueba de Rangos Con Signos de Wilcoxon, Prueba de Signos, Prueba de Kruskal-Wallis, etc.). De manera preferida, el cambio estadísticamente significativo es significativo a un nivel de confianza de al menos 85%, de manera más preferida al menos del 90%, aún de manera más preferida al menos del 95%, y de manera más preferida al menos del 98% o 99%. En ciertas modalidades, el cambio es al menos un cambio del 10%, de manera preferida al menos un cambio del 20%, de manera más preferida al menos un cambio del 50% y de manera más preferida al menos un cambio del 90%. La frase "en conjunto con", cuando se utiliza en la presente, por ejemplo, con referencia a la administración de dos aminoácidos que comprenden un par de aminoácidos, con referencia al uso de combinaciones de péptidos de esta invención, con referencia al uso de péptidos/pares de aminoácidos de esta invención con otros agentes farmacológicamente activos (por ejemplo, una o más estatinas), y lo similar, indica que los dos (o más) agentes se administran de manera que existe al menos algún traslape cronológico en su actividad fisiológica en el organismo. Así, los dos o más agentes pueden administrarse simultánea y/o secuencialmente. En la administración secuencial, puede haber incluso algún retraso sustancial (por ejemplo, minutos o incluso horas o días), antes de la administración del segundo agente, siempre que el primer agente administrado haya ejercido una alteración fisiológica en el organismo cuando el segundo agente administrado se administre o se vuelva activo en el organismo.
BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS La Figura 1 ilustra un esquema de síntesis para la síntesis en fase de solución de los péptidos de acuerdo con esta invención. La Figura 2 ilustra el procedimiento para sintetizar un tetrapéptido utilizando el procedimiento expuesto en la Figura 1. La Figura 3 muestra que la preincubación (pretratamiento), pero no la coincubación (Co-inc) de Boc-Lys(Boc)-Arg-Asp-Ser(tBu)-OtBu (sintetizado a partir de todos los aminoácidos D) (SEQ ID NO: 238 en el Cuadro 4), inhibió la actividad quimiotáctica del monocito inducida por la LDL producida por las células de la pared arterial humana (HAEC). Las células se preincubaron con 125 pg/ml, 250 gg/ml, o 500 pg/ml del péptido, el péptido se eliminó a continuación y se agregó la LDL a 100 µg/ml de colesterol con medio fresco, o las mismas concentraciones del péptido se agregaron junto con la LDL y se determinó la actividad quimiotáctica del monocito. La Figura 4 muestra que la adición del tetrapéptido descrito en la Figura 3 al agua potable de ratones apoE nulos, convirtió la HDL y las fracciones FPLC post-HDL de proinflamatorias a antiinflamatorias, similares al D-4F. El tetrapéptido o D-4F se agregaron al agua potable de los ratones (n = 4 para cada condición), a una concentración de 5 pg/ml durante 18 horas. Los ratones se sangraron y sus lipoproteínas se separaron mediante FPLC. Se agregó un control de LDL humana a 100 pg/mi de Colesterol (LDL) o no se agregó (Sin Adición) a los cocultivos de la pared de la arteria humana, o se agregó junto con la HDL a 50 pg/ml de un sujeto de control humano normal (+HDL Control) o HDL a 50 pg/ml de ratones apoE nulos que recibieron agua potable sin el péptido (+HDL Control del Agua), o recibieron el tetrapéptido (+HDL D-Tetra) o D-4F (+HDL D4F) o las fracciones FPLC post-HDL de ratones apoE nulos que no recibieron el péptido (+ post-HDL Control del Agua) o de ratones que recibieron el tetrapéptido (+post-HDL D-Tetra) o recibieron D-4F (+post-HDL D4F), se agregaron a 20 pg/ml junto con la LDL humana de control a 100 pg/ml de Colesterol. Después de 8 horas, los sobrenadantes se probaron para la actividad quimiotáctica del monocito. La Figura 5 muestra que los ratones apoE nulos que recibieron el tetrapéptido D o D-4F en su agua potable tuvieron una LDL que induce menos actividad quimiotáctica del monocito. La LDL de las fracciones de FPLC de los ratones descritos en la Figura 4, se agregó a los cocultivos a 100 pg/ml. Después de 8 horas, los sobrenadantes se probaron para la actividad quimiotáctica del monocito. La Figura 6 muestra que la SEQ ID NO: 258 del Cuadro 4 (designada D- 1 en la figura), cuando se sintetiza a partir de todos los aminoácidos D o D-4F dada oralmente, vuelve la HDL antiinflamatoria en ratones apoE nulos, pero un péptido que contiene los mismos aminoácidos D como en D-4F, pero arreglados en una secuencia revuelta, que evita la unión de los lípidos, no lo hace. Quinientos microgramos de la SEQ ID NO: 258 sintetizada a partir de aminoácidos D (D-11) o 500 pg de D-4F (D-4F) o 500 g de D-4F revuelto (Péptido Revuelto), se instilaron vía un tubo en el estómago de ratones apoE nulos hembra, de 3 meses (n = 4), y los ratones se sangraron 20 minutos (20 minutos después de la alimentación con sonda) o 6 horas más tarde (6 horas después de la alimentación con sonda). El plasma se separó y la HDL se aisló mediante FPLC. Los cultivos de las células endoteliales aórticas humanas recibieron el medio solo (Sin Adición/Controles del Ensayo), LDL normal humana estándar a 100 pm/mL de colesterol sin (LDL/Controles del Ensayo) o junto con la HDL humana de control estándar (LDL + HDL Control/Controles del Ensayo) a 50 pg/mL de colesterol, o la LDL humana de control a 100 pg/mL de colesterol se agregó con HDL de ratón a 50 pg/mL de colesterol, obtenida de ratones que recibieron el péptido D-4F revuelto (LDL + HDL del Péptido Revuelto), o D-4F (LDL + HDL D-4F) o la SEQ ID NO: 258 hecha a partir de todos los aminoácidos D (LDL+ HDL D-11). Los cultivos se incubaron durante 8 horas. Los sobrenadantes se probaron a continuación para la actividad quimiotáctica del monocito. Los valores son la media +/-SD del número de monocitos que migraron en los 9 campos de alta potencia. * indica p<0.001. La Figura 7 muestra que los ratones apoE nulos que recibieron D-4F o la SEQ ID NO: 258 del Cuadro 4, sintetizada a partir de aminoácidos D (designada D-11) (pero no de ratones que recibieron D-4F revuelto), tienen LDL que induce menos actividad quimiotáctica del monocito. La LDL de las fracciones de FPLC de los ratones descritos en la Figura 6, se agregó a los cultivos a 100 pg/ml. Después de 8 horas, los sobrenadantes se probaron para la actividad quimiotáctica del monocito. * indica p<0.001 , ** indica p<0.01. La Figura 8 muestra que la HDL se convirtió de proinflamatoria a antiinflamatoria después de la adición de la SEQ ID NO: 238 en el Cuadro 4, sintetizada de aminoácidos D (designada D-1) al alimento de ratones apoE nulos (200 pg/gm de alimento durante 18 horas). Controles del Ensayo: Sin Adición, sin adición a los cocultivos; LDL, se agregó una LDL humana control estándar a los cocultivos; + HDL Control, se agregó HDL humana normal control a los cocultivos. LDL del Alimento, LDL de los ratones que recibieron el alimento solo; +HDL Autóloga del Alimento, la HDL de los ratones que recibieron el Alimento solo, se agregó junto con la LDL de estos ratones; +HDL Autóloga D-1 , la HDL de los ratones que recibieron el péptido se agregó junto con la LDL de estos ratones a los cocultivos y se determinó la actividad quimiotáctica del monocito. La Figura 9 muestra que el tetrapéptido (SEQ ID NO: 258 en el Cuadro 4), fue diez veces más potente que la SEQ ID NO: 238 ¡n vitro. El tetrapéptido se agregó o no se agregó en una preincubación a los cocultivos de las células de pared de la arteria humana a 100, 50, 25 ó 12.5 pg/mL y se incubaron durante 2 horas. A continuación se lavaron los cultivos. Algunos pozos recibieron entonces el medio solo (Sin Adición). Los otros pozos recibieron LDL humana normal estándar a 100 9/??? de colesterol (LDL) o recibieron esta LDL junto con una HDL humana de control estándar (LDL + HDL Control) a 50 pg/mL de colesterol, y se incubaron durante 8 horas. Los sobrenadantes del cultivo se probaron a continuación para la actividad quimiotáctica del monocito. Los valores son la media +/-SD del número de monocitos que migraron en 9 campos de alta potencia. Los pozos que recibieron el tetrapéptido en la preincubación de 2 horas a las concentraciones indicadas anteriormente, seguido por la adición de LDL a 100 pg/mL de colesterol, se indican en la figura (LDL + tetrapéptido, en pg/ml). La Figura 10 muestra que las SEQ ID NOS: 243, 242 y 256 del Cuadro 4 (designadas Seq No. 5, Seq No. 6 y Seq No. 9, respectivamente en la figura), convirtieron la HDL proinflamatoria de ratones apoE nulos a HDL antiinflamatoria. Se inyectaron intraperitonealmente ratones apo E nulos hembra de dos meses (n = 4 por tratamiento), que ayunaron durante 18 horas, con tetrapéptidos L a 20 pg de péptido/ratón con el vehículo de suero fisiológico (Vehículo de Suero Fisiológico). Dos horas más tarde, la sangre se recolectó del seno retroorbital bajo anestesia suave con Isofluorina. El plasma se separó y la HDL se aisló mediante FPLC. A continuación se determinaron las propiedades inflamatorias/antiinflamatorias de la HDL. Los cultivos de células endoteliales aórticas humanas recibieron el medio solo (Sin Adición), LDL humana normal estándar a 100 gm/mL de colesterol sin (LDL) o junto con HDL humana de control estándar (LDL +HDL Control) a 50 ggm/mL de colesterol, o LDL humana control estándar a 100 pgm/mL de colesterol con HDL de ratón a 50 pgm/mL de colesterol, obtenida de los ratones que recibieron los tetrapéptidos o el vehículo de suero fisiológico (LDL +HDL de ratones inyectados intraperitonealmente). Los cultivos se incubaron durante 8 horas. Los sobrenadantes se probaron a continuación para la actividad qüimiotáctica del monocito. Los valores son la media +/-SD del número de monocitos que migraron en 9 campos de alta potencia. La Figura 11 muestra que la SEQ ID NO: 258 del Cuadro 4 (designada S-11 en la Figura), convierte la HDL proinflamatoria de ratones apoE nulos a HDL antiinflamatoria mejor que la SEQ ID NO: 254 y la SEQ ID NO: 282 (designada S-7 y S-35, respectivamente en la Figura). Se inyectaron intraperitonealmente ratones apo E nulos hembra de dos meses (n = 4 por tratamiento), que ayunaron durante 18 horas, con S-7 o S-11 o S-35, a 20 pg de péptido/ratón o se inyectaron con el vehículo de suero fisiológico (Vehículo de Suero Fisiológico). Dos horas más tarde, sangre se recolectó del seno retroorbital bajo anestesia suave con Isofluorina. El plasma se separó y la LDL y la HDL se aislaron mediante FPLC. A continuación se determinaron las propiedades inflamatorias/antiinflamatorias de la HDL. Los cultivos de células endoteliales aórticas humanas recibieron el medio solo (Sin Adición/Controles del Ensayo), LDL humana normal estándar a 100 pgm/mL de colesterol sin (LDL/Controles del Ensayo) o junto con HDL humana de control estándar (HDL + Control/Controles del Ensayo) a 50 pgm/mL de colesterol, o LDL de ratón a 100 pgm/mL de colesterol con HDL de ratón a 50 pgm/mL de colesterol, obtenida de los ratones que recibieron S7 o S11 o S35 (LDL + HDL S-7, LDL + HDL S-11, LDL + HDL S-35, respectivamente), o el vehículo del suero fisiológico (LDL +HDL del Suero Fisiológico)). Los cultivos se incubaron durante 8 horas. Los sobrenadantes se probaron a continuación para la actividad quimiotáctica del monocito. Los valores son la media +/-SD del número de monocitos que migraron en 9 campos de alta potencia. *p<0.001. Figura 12. La LDL de las fracciones de FPLC de los ratones descritos en la Figura 11 se agregó a las células a 100 Mg/ml. Después de 8 horas, los sobrenadantes se probaron para la actividad quimiotáctica del monocito. Los Controles del Ensayo son como se describen en la Figura 11. LDL de Suero Fisiológico, LDL de ratones inyectados con el vehículo del suero fisiológico; LDL S-7, LDL de los ratones inyectados con la SEQ ID NO: 254 del Cuadro 4, como se describe en la Figura 11; LDL S-11 , LDL de los ratones inyectados con la SEQ ID NO: 258 del Cuadro 4, como se describe en la Figura 11; S-35, LDL de los ratones inyectados con la SEQ ID NO: 282, como se describe en la Figura 9. # p<0.001. La Figura 13 muestra los niveles en plasma del Amiloide A en suero (SAA) después de la inyección de los péptidos. Los niveles en plasma de SAA se midieron 24 horas después de la inyección de los péptidos descritos en las Figuras 11 y 12. * p < 0. 00 . La Figura 14 muestra que la SEQ ID NO: 258 del Cuadro 4, cuando se sintetizó a partir de todos los aminoácidos L y dada oralmente, convierte la HDL proinflamatoria de los ratones apoE nulos a HDL antünflamatoria. A ratones apoE nulos hembra de 3 meses (n = 4), se les dieron 200 microgramos en el agua del péptido descrito en la SEQ ID NO: 258 del Cuadro 4, la cual se sintetizó a partir de todos los aminoácidos L (designada S-11 en la figura). El péptido o el agua sin el péptido se administraron mediante un tubo estomacal y los ratones se sangraron 4 horas más tarde. A un segundo grupo de cuatro ratones se les dio acceso a alimento estándar para ratón en forma de polvo y que contiene 200 microgramos de la S- , la cual se sintetizo de todos los aminoácidos L y se agregaron por 1.0 gramos del alimento en polvo para ratón en un total de 4 gramos de alimento en polvo para ratón que contiene un total de 800 microgramos del péptido para la jaula de cuatro ratones, o se les dio el mismo alimento en polvo para ratón sin el péptido. El alimento estuvo disponible a los ratones durante la noche y en la mañana el alimento se consumió y los ratones se sangraron. El plasma se separó y la HDL se aisló mediante FPLC. A continuación se determinaron las propiedades inflamatorias/antiinflamatorias de la HDL. Los cultivos de células endoteliales aórticas humanas recibieron el medio solo (Sin Adición/Controles del Ensayo), LDL humana normal estándar a 100 gm/mL de colesterol sin (LDL/Controles del Ensayo) o junto con la HDL humana de control estándar (LDL + HDL Control/Controles del Ensayo) a 50 pgm/mL de colesterol, o LDL humana control a 100 pgm/mL de colesterol con HDL de ratón a 50 gm/mL de colesterol, obtenida de ratones que no recibieron el péptido (LDL + HDL Sin Péptido) o L-S-11 (LDL+HDL L-S-11) mediante un tubo en el estómago (Mediante alimentación con sonda gástrica) o en el alimento del ratón (Dieta el polvo). Los cultivos se incubaron durante 8 horas. Los sobrenadantes se probaron a continuación para la actividad quimiotáctica del monocito. Los valores son la media +/-SD del número de monocitos que migraron en 9 campos de alta potencia. p<0.001. La Figura 15 muestra que la L-S-11 , cuando se sintetiza a partir de todos los aminoácidos L y se da oralmente, incrementa la actividad en plasma de la paraoxonasa. El plasma de los ratones descritos en la Figura 14, se probó para la actividad de la paraoxonasa (Actividad de PON, la cual se muestra en la figura como Unidades por 500 µ? de plasma). Sin péptido, ratones que recibieron agua o alimento solo sin el péptido. L-S-11 , ratones a los que se les dieron 200 microgramos en agua o alimento del péptido descrito como la SEQ ID NO: 256 del Cuadro 4, como se describió en la Figura 14. P<0.001. La Figura 16 muestra que la SEQ ID NO: 238 (designada D-1) y la SEQ ID NO: 258 (designada D-11), del Cuadro 4, cuando se sintetizan de todos los aminoácidos D y se dan oralmente, vuelven la HDL antiinflamatoria en ratones apoE nulos, pero la SEQ ID NO: 238, cuando se sintetiza de todos los aminoácidos L (L-1) y dada oralmente no lo hace. A ratones apoE nulos hembra, de 3 meses (n = 4), se les dio acceso a alimento estándar para ratón en forma de polvo y que contiene 0.5 miligramos de cada péptido agregado por 1.0 gramos de alimento en polvo para ratón en un total de 4 gramos de alimento en polvo para ratón que contiene un total de 2.0 miligramos del péptido para la jaula de cuatro ratones, o se les dio el mismo alimento en polvo para ratón sin el péptido. El alimento estuvo disponible a los ratones durante 24 horas, tiempo en el cual el alimento se consumió y los ratones se sangraron. El plasma se separó y la HDL se aisló mediante FPLC. Los cultivos de células endoteliales aórticas humanas recibieron el medio solo (Sin Adición/Controles del Ensayo), LDL humana normal estándar a 100 pgm/mL de colesterol sin (LDL/Controles del Ensayo) o junto con la HDL humana de control estándar (LDL+ HDL Control/Controles del Ensayo) a 50 gm/mL de colesterol, o LDL humana control a 100 pgm/mL de colesterol se agregó con HDL de ratón a 50 gm/mL de colesterol, obtenida de ratones que no recibieron péptido (LDL+ HDL Sin Péptido) o la SEQ ID NO: 238 hecha a partir de todos los aminoácidos L (LDL+ HDL L-1), o la SEQ ID NO: 238 hecha a partir de todos los aminoácidos D (LDL+HDL D-1) o la SEQ ID NO: 258 hecha a partir de todos los aminoácidos D (LDL+HDL D- 1). Los cultivos se incubaron durante 8 horas. Los sobrenadantes se probaron a continuación para la actividad quimiotáctica del monocito. Los valores son la media +/-SD del número de monocitos que migraron en 9 campos de alta potencia. * indica p<0.01 y ** indica p<0.001. La Figura 17 muestra que la SEQ ID NO: 238 (D-1) y la SEQ ID NO: 258 (D-1 ) del Cuadro 4, cuando se sintetizan de todos los aminoácidos D y dada oralmente, vuelven la HDL antiinflamatoria y reducen la actividad quimiotáctica del monocito inducida por la LDL en ratones apoE nulos, pero la SEQ ID NO: 238, cuando se sintetiza a partir de todos los aminoácidos L y dada oralmente, no lo hace. El plasma de los ratones descritos en la Figura 16 se separó, y la HDL y la LDL se aislaron mediante FPLC. Los cultivos de células endoteliales aórticas humanas recibieron el medio solo (Sin Adición/Controles del Ensayo), LDL humana normal estándar a 100 pgm/mL de colesterol sin (LDIJControles del Ensayo) o junto con HDL humana de control estándar (LDL+HDL Control/Controles del Ensayo) a 50 gm/mL de colesterol, o LDL autóloga de ratón a 100 pgm/mL de colesterol sola (mLDL) o con HDL de ratón a 50 gm/mL de colesterol, obtenida de los ratones que no recibieron péptido (mLDL+ HDL Sin Péptido), o la SEQ ID NO: 238 hecha a partir de todos los aminoácidos L (mLDL+HDL L- ), o la SEQ ID NO: 238, hecha a partir de todos los aminoácidos D (mLDL+ HDL D- ) o la SEQ ID NO: 258, hecha a partir de todos los aminoácidos D (mLDL+HDL D-11). Los cultivos se incubaron durante 8 horas. Los sobrenadantes se probaron a continuación para la actividad quimiotáctica del monocito. Los valores son la media +/-SD del número de monocitos que migraron en 9 campos de alta potencia. * indica p<0.05, ** indica p<0.01 y *** indica p<0.001. La Figura 18 muestra que la SEQ ID NO: 258 del Cuadro 4, sintetizada a partir de todos los aminoácidos D (D-11), cuando se da oralmente a ratones, eleva las concentraciones del colesterol de la HDL mientras que cuando se da oralmente la SEQ ID NO: 238 sintetizada a partir de aminoácidos L o D (L-1 o D-1 , respectivamente), oralmente, no lo hace. Se determinaron las concentraciones en plasma del colesterol de la HDL de los ratones que se describen en las Figuras 16 y 17. HDL Sin Péptido, colesterol de la HDL en plasma en ratones que no recibieron péptido; HDL L-1 HDL, colesterol de la HDL en plasma en ratones que recibieron la SEQ ID NO: 238, sintetizada a partir de aminoácidos L; HDL D-1 , colesterol de la HDL en plasma en ratones que recibieron la SEQ ID NO: 238, sintetizada a partir de aminoácidos D; HDL D-11, colesterol de la HDL en plasma en ratones que recibieron la SEQ ID NO: 258, sintetizada a partir de aminoácidos D. *indica p<0.001. La Figura 19 muestra que la SEQ ID NO: 258 del Cuadro 4 sintetizada a partir de todos los aminoácidos D (D-11), cuando se da oralmente a ratones, elevó la actividad de la paraoxonasa (PON) de la HDL, mientras que cuando se da oralmente la SEQ ID NO: 238, sintetizada de aminoácidos L o D (L-1 , D-1, respectivamente), no lo hace. Se determinó la actividad de la paraoxonasa en la HDL descrita en la Figura 18. Los valores son la actividad por 500 microlitros de plasma. *indica p<0.001. La Figura 20 muestra que la pravastatina y D-4F actúan sinergísticamente para reducir las lesiones aórticas, como se determina en preparaciones en la superficie en ratones apoE nulos. A ratones apoE nulos hembra de cinco semanas se les dio en su agua potable ninguna adición (control de agua), pravastatina 50 pg/ml, pravastatina 20 pg/ml o D-4F 2 pg/ml, o D-4F 5 pg/ml, o pravastatina (PRAVA) 20 pg/ml, junto con D-4F 2 pg/ml, o pravastatina (PRAVA.) 50 pg/ml junto con D-4F 5 pg/ml. Después de 1 semanas, los ratones se sacrificaron y las lesiones se determinaron en las preparaciones aórticas en la superficie.
La Figura 21 muestra que la pravastatina y el D-4F actúan sínergísticamente para reducir las lesiones del seno aórtico en ratones apoE nulos. A los ratones apoE nulos hembra de cinco semanas, se les dio en su agua potable ninguna adición (control del agua), pravastatina 50 ig/m\, pravastatina 20 pg/ml o D-4F 2 pf/ml, o D-4F 5 g/ml, o pravastatina (P) 50 g/ml, junto con D-4F 5 pg/ml, o pravastatina (P) 20 pg/ml, junto con D-4F 2 g/ml. Después de 1 1 semanas, los ratones se sacrificaron y se determinaron las lesiones del seno aórtico. La Figura 22 muestra que D-4F y la SEQ ID NO: 242 y la SEQ ID NO: 258 del Cuadro 4, reducen dramáticamente las hidroperoxidasas de los lípidos de la lipoproteína en ratones apoE nulos. Cincuenta pg/gm de la SEQ ID NO: 242 (D-198 en el dibujo) o la SEQ ID NO: 258 (D-203 en el dibujo) o D-4F (los péptidos se sintetizaron de todos los aminoácidos D), se agregaron al alimento de los ratones apoE nulos o los ratones continuaron alimentándose sin adiciones (Ninguno). Dieciocho horas más tarde los ratones se sangraron, su plasma se fraccionó mediante FPLC y se determinó el contenido de hidroperóxido del lípido (LOOH) de sus lipoproteínas de densidad baja (LDL) y lipoproteínas de densidad alta (HDL). *¡ndica p<0.01. La Figura 23 muestra la solubilidad de los péptidos en acetato de etilo. SEQ ID NO 254: Boc-Lys(eBoc)-Glu-Arg-Ser(tBu)-OtBu; y SEQ ID NO 258: Boc-Lys(eBoc)-Arg-Glu-Ser(tBu)-OtBu. También se muestra la solubilidad en acetato de etilo de la SEQ ID NO: 250.
Figura 24, la SEQ ID NO: 258 forma partículas de 7.5 nm cuando se mezclan con DMPC en un medio acuoso. A 1 mg/ml de una suspensión de DMPC en suero fisiológico amortiguado con fosfato (PBS), se le agregó desoxicolato ai 10% hasta que la DMPC se disolvió. Se agregó la SEQ ID NO: 258 o la SEQ ID NO: 254 (DMPC:péptido; 1 :10; peso:peso), y la mezcla de reacción se dializó. Después de la diálisis, la solución permaneció transparente con la SEQ ID NO: 258, pero estaba turbia después de que el desoxicolato se eliminó mediante diálisis en el caso de la SEQ ID NO: 254. La figura es una microfotografía electrónica preparada con tinción negativa y a una amplificación de 147, 420x. Las flechas indican que las partículas de la SEQ ID NO: 258 miden 7.5 nm (aparecen como pequeñas partículas blancas). Figura 25, la SEQ ID NO: 258 es agregada a DMPC en un medio acuoso, forma partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm (grandes abiertas), y bicapas de lípido-péptido apiladas (flecha rayada grande) (las flechas pequeñas apuntan a las líneas blancas en la pila cilindrica de discos) con una dimensión de la bicapa del orden de 3.4 a 4.1 nm, con una separación entre las bicapas (líneas negras entre las líneas blancas en la pila de discos) de aproximadamente 2 nm. Las condiciones y amplificaciones son las mismas como se describen en la Figura 24. La Figura 26 muestra que el péptido de la SEQ ID NO: 258, agregado a la DMPC en un medio acuoso, forma bicapas apiladas de lípido-péptido (flecha rayada), y estructuras vesiculares de aproximadamente 38 nm (flechas blancas).
La Figura 27 muestra que la DMPC en un medio acuoso sin la SEQ ID NO: 258, no forma partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm, o bicapas apiladas de lípido-péptido, ni estructuras vesiculares de aproximadamente 38 nm. Las vesículas de DMPC mostradas son de 12.5-14 nm. Las condiciones y las amplificaciones son las mismas como se describió en la Figura 24. La Figura 28 muestra un modelo molecular del péptido de la SEQ ID NO: 254, en comparación con el péptido de la SEQ ID NO: 258. El rojo representa moléculas de oxígeno, el azul representa moléculas de nitrógeno^ el gris representa moléculas de carbono y el blanco representa moléculas de hidrógeno. Las Figuras 29A a 29D muestran un modelo molecular de llenado del espacio de la SEQ ID NO: 254, en comparación con la SEQ ID NO: 258. Las flechas en este modelo molecular de llenado del espacio, identifican las porciones polares y no polares de las moléculas. El código de color es el mismo que en la Figura 28. Las Figuras 30A a 30D ilustran cadenas principales peptídicas (en las figuras 30C y 30D), para las orientaciones dadas en los paneles superiores. La Figura 31 muestra modelos moleculares de la SEQ ID NO: 254 en comparación con la SEQ ID NO: 258, que identifican los grupos Ser(tBu)-OtBu. El código de color es como en la Figura 28.
La Figura 32 muestra modelos moleculares de la SEQ ID NO: 254 en comparación con la SEQ ID NO 258, que identifican varios grupos de bloqueo. El código de color es como en la Figura 28. La Figura 33 muestra que la SEQ ID NO: 258 (pero no la SEQ ID NO: 254), vuelve la HDL apoE nula antiinflamatoria. La Figura 34 muestra que la SEQ ID NO: 258, pero no la SEQ ID NO: 254, disminuye de manera significativa la aterosclerosis de la raíz aórtica en ratones apoE nulos. La calificación de la lesión de la raíz aórtica (seno aórtico), se determinó en los ratones apoE nulos descritos en la Figura 33. El número de ratones en cada grupo se muestra (n =) en la parte inferior de la figura y una sección representativa para cada grupo se muestra en la parte superior de la figura. Las Figuras 35A y 35B muestran que la SEQ ID NO: 258, pero no la SEQ ID NO: 254, disminuye de manera significativa la aterosclerosis aórtica en preparaciones en la superficie en ratones apoE nulos. El por ciento de superficie aórtica que contiene lesiones ateroscleróticas se determinó en preparaciones en la superficie en los ratones apoE nulos descritos en la Figura 33. El número de ratones en cada grupo se muestra (n =) en la parte inferior del panel izquierdo y una aorta representativa para los ratones alimentados con alimento solo o con alimento suplementado con la SEQ ID NO: 258, se muestra en el panel derecho. La Figura 36 muestra que la SEQ ID NO: 250 sintetizada a partir de todos los aminoácidos L, disminuye de manera significativa la aterosclerosis. Los ratones apoE nulos (20 por grupo), se mantuvieron con una dieta con alimento (Alimento), o con alimento suplementado con alimento con 200 pg/gm de la SEQ ID NO: 250 (250), sintetizada a partir todos los aminoácidos L. Después de 12 semanas, los ratones se sacrificaron y se determinó el % del Area Superficial Aórtica con Lesiones en preparaciones en la superficie. * p = 0.012.
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Esta invención pertenece al descubrimiento de que los péptidos sintéticos diseñados para imitar el motivo helicoidal anfipático de la clase A (Segrest et al. (1990) Proteins: Structure, Function, and Genetics 8:103-1 7), son capaces de asociarse con los fosfolípidos, y exhibir muchas propiedades biológicas similares a la apo-A-l humana. En particular, fue un descubrimiento de esta invención que cuando tales péptidos se formulan utilizando aminoácidos D, los péptidos muestran vidas medias en suero dramáticamente elevadas, y particularmente cuando los términos amino y/o carboxi se bloquean, incluso pueden administrarse oralmente. También fue un descubrimiento sorprendente que estos péptidos pueden estimular la formación y la ciclización de las partículas similares a la lipoproteína de densidad alta pre-beta. Además, los péptidos son capaces de mejorar/sinergizar el efecto de las estatinas, permitiendo que las estatinas se administren a dosificaciones significativamente menores o que sean 7 significativamente más antiinflamatorias a cualquier dosis dada. También se descubrió que los péptidos descritos en la presente pueden inhibir y/o prevenir y/o tratar uno o más síntomas de la osteoporosis. Los péptidos también pueden incrementar la HDL pre-beta; y/o incrementar la actividad de la paroxinasa de la HDL. Además, fue un descubrimiento sorprendente de esta invención que tales péptidos de la forma D retienen la actividad biológica del péptido de la forma L correspondiente. Los estudios animales in vivo que utilizan tales péptidos de la forma D, mostraron un suministro oral efectivo, una vida media en suero elevada, y la capacidad de mitigar o prevenir/inhibir uno o más síntomas de la aterosclerosis. Fue también un descubrimiento sorprendente que ciertos péptidos pequeños que consisten de un mínimo de dos aminoácidos, o pares de aminoácidos solos, de manera preferida (pero no necesariamente) con uno más de los aminoácidos siendo el estereoisómero D del aminoácido, y que poseen dominios hidrofóbicos para permitir las interacciones lípido-proteína, y dominios hidrofílicos para permitir un grado de solubilidad en agua, también poseen propiedades antiinflamatorias significativas. Sin estar apegados a una teoría particular, se cree que los péptidos o pares de aminoácidos, descritos en la presente, se unen a las "moléculas de siembra" requeridas para la formación de los fosfolípidos oxidados proinflamatorios tales como Ox-PAPC, POVPC, PGPC y PEIPC. Puesto que muchas condiciones inflamatorias están mediadas, al menos en parte por los lípidos oxidados, creemos que los péptidos o pares de aminoácidos de esta invención, son efectivos para aminorar las condiciones que se sabe o se sospecha se deben a la formación de lípidos oxidados biológicamente activos. Estas incluyen, de manera no exclusiva, aterosclerosis, artritis reumatoide, lupus eritematoso, poliarteritis nodosa, esclerosis múltiple, asma, diabetes, enfermedad de Alzheimer y osteoporosis. Los "péptidos pequeños" varían típicamente en longitud de 2 ó 3 aminoácidos a aproximadamente 15 aminoácidos, de manera más preferida de aproximadamente 4 aminoácidos a aproximadamente 10 u 11 aminoácidos, y de manera más preferida de aproximadamente 4 a aproximadamente 8 ó 10 aminoácidos. Los péptidos están caracterizados típicamente por tener aminoácidos terminales hidrofóbicos o aminoácidos terminales vueltos hidrofóbicos por la unión de uno o más grupos hidrofóbicos "protectores". Las estructuras internas de los péptidos se describen con más detalle en la presente. Además, fue un hallazgo sorprendente de esta invención que varias propiedades físicas predicen la capacidad de los péptidos pequeños (por ejemplo, menores que 10 aminoácidos, de manera preferida, menores que 8 aminoácidos, de manera más preferida de aproximadamente 2 ó 3 a aproximadamente 5 ó 6 aminoácidos), o pares de aminoácidos de esta invención, de volver la HDL más antiinflamatoria y mitigar la aterosclerosis y/u otras patologías caracterizadas por una respuesta inflamatoria en un mamífero. Las propiedades físicas incluyen alta solubilidad en acetato de etilo (por ejemplo, mayor que aproximadamente 4 mg/mL), y una solubilidad en un amortiguador acuoso a pH 7.0. Tras poner en contacto los fosfolípidos tales como la 1 ,2-Dimiristoil-sn-g!icero-3-fosfocolina (DMPC) en un medio acuoso, los péptidos pequeños particularmente efectivos, forman partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm (± 0.1 nm), y/o forman bicapas apiladas con una dimensión de la bicapa del orden de 3.4 a 4.1 nm, con una separación entre las bicapas en la pila de aproximadamente 2 nm, y/o también forman estructuras vesiculares de aproximadamente 38 nm. En ciertas modalidades preferidas, los péptidos pequeños, o pares de aminoácidos, tienen un peso molecular de menos que aproximadamente 900 Da. 1. Estimulación de la formación y ciclización de las partículas similares a la lipoproteína de densidad alta pre-beta El transporte inverso del colesterol se considera importante para prevenir la acumulación de los lípidos que predisponen a la aterosclerosis (Shah et al. (2001) Circulafíon, 103:3047-3050). Muchos han creído que el lípido de consecuencia es el colesterol. Nuestro laboratorio ha mostrado que los lípidos clave son fosfolípidos oxidados que inician la respuesta inflamatoria en la aterosclerosis (Navab et al. (2001) Arterioscler Thromb Vasc Biol., 21(4):481-488; Van Lenten et al. (001) Trends Cardiovasc Med, 11 :155-161; Navab M et al. (200 ) Circulafíon, 104:2386-2387). Esta respuesta inflamatoria también es responsable probablemente de la erosión o ruptura de la placa que conduce al ataque cardiaco y a la apoplejía. Los niveles de colesterol de la HDL están correlacionados de manera inversa con el riesgo para el ataque cardiaco y la apoplejía (Downs et al. (1998) JAMA 279:1615-1622; Gordon et al. (1977) Am J Mecí., 62:707-714; Castelli et al. (1986) JAMA, 256:2835-2838). La HDL pre-beta se considera generalmente la fracción de HDL más activa para fomentar el transporte inverso del colesterol (por ejemplo, capta el colesterol de los tejidos periféricos, tales como las arterias y lo transporta al hígado para la excreción en la bilis; véase, Fielding and Fielding (2001) Biochim Biophys Acta, 1533(3):175-189). Sin embargo, los niveles de HDL pre-beta pueden incrementarse debido a una falla de la HDL pre-beta ser ciclizada en la HDL alfa emigrante madura, por ejemplo, deficiencia o inhibición de LCAT (O'Connor et al. (1998) J Lipid Res, 39:670-678). Se han reportado altos niveles de HDL pre-beta en pacientes con enfermedad de la arteria coronaria (Miida et al. (1996) Clin Chem., 42: 992-1995). Además, se ha encontrado que los hombres tienen niveles mayores de HDL pre-beta que las mujeres, pero el riesgo de los hombres para una enfermedad cardiaca coronaria es mayor que para las mujeres (O'Connor et al. (1998) J Lipid Res., 39:670-678). Así, las mediciones estáticas de los niveles de HDL pre-beta mismos, no son necesariamente predictivas del riesgo para la enfermedad de la arteria coronaria. Sin embargo, la ciclización del colesterol a través de la HDL pre-beta hacia la HDL madura, se considera universalmente como protectora contra la aterosclerosis (Fielding and Fielding (2001) Biochim Biophys Acta, 1533(3): 175-189). Además, hemos demostrado que la eliminación de los lípidos oxidados de las células de la pared arterial a través de esta trayectoria, protege contra la oxidación de la LDL. A pesar de las velocidades de absorción relativamente bajas cuando se administran oralmente, los péptidos de esta invención (por ejemplo, D-4F), fueron altamente activos. En los estudios de ratones Apo-E nulos a los que se les administró oralmente D-4F, determinamos que 20 minutos después de la absorción del intestino, el. D-4F forma partículas pequeñas similares a la HDL pre-beta que contienen cantidades relativamente altas de apoA-l y paraoxonasa. En realidad, la estimación de la cantidad de la apoA-l en estas partículas similares a la HDL pre-beta mediante Western blots, y la comparación de la cantidad de apoA-l a la cantidad de D-4F en estas partículas (determinada mediante radiactividad o LC-MRM), sugiere que puesto que el D-4F se absorbe desde el intestino, actúa como un catalizador causando la formación de esas partículas similares a la HDL pre-beta. Esta pequeña cantidad de D-4F derivada intestinalmente, parece reclutar cantidades de apoA-l, paraoxonasa y colesterol en esas partículas, que son algunos órdenes de magnitud mayores que la cantidad de D-4F (véase, por ejemplo, Navab et al. (2004) Circulation, 109:r120-r125). Así, después de la absorción, D-4F, y otros péptidos o pares de aminoácidos de esta invención, reclutan rápidamente cantidades relativamente grandes de apoA-l y paraoxonasa para formar partículas similares a la HDL pre-beta, las cuales son muy probablemente las partículas más potentes para fomentar tanto el transporte inverso del colesterol, como para destruir los lípidos oxidados biológicamente activos. Creemos que la formación de estas partículas y su rápida incorporación subsiguiente en HDL madura, explica probablemente la reducción dramática en la aterosclerosis que observamos en los ratones nulos para el receptor de la LDL en una dieta Occidental y en ratones apoE nulos en una dieta con alimento independiente de los cambios en el colesterol o el colesterol de la HDL en plasma (Id.). Así, en una modalidad, esta invención proporciona métodos para estimular la formación y la ciclización de las partículas similares a la lipoproteína de densidad alta pre-beta, mediante la administración de uno o más péptidos, o pares de aminoácidos, como se describe en la presente. Los péptidos, o pares de aminoácidos, pueden fomentar por lo tanto el transporte de lípidos y la destoxificación.
II. Mitigación de un síntoma de la aterosclerosis Descubrimos que la HDL normal inhibe tres pasos en la formación de la LDL oxidada ligeramente. En esos estudios (véase, la solicitud copendiente USSN 09/541 ,468, presentada en Marzo 31 , 2000), demostramos que tratando la LDL humana in vitro con apo A-l o con un péptido mimético de la apo A-l (37pA), se eliminaron las moléculas de siembra de la LDL que incluyen HPODE y HPETE. Estas moléculas de siembra se requieren para que los cocultivos de las células de pared arterial humana sean capaces de oxidar la LDL y para que la LDL induzca a las células de la pared arterial para producir la actividad quimiotáctica del monocito. También demostramos que después de la inyección de apo A-l en ratones o la infusión en humanos, la LDL aislada de los ratones o voluntarios humanos después de la inyección/infusión de apo A-l, fue resistente a la oxidación por las células de pared arterial y no indujo la actividad quimiotáctica del monocito en los cocultivos de las células de la pared arterial. La función protectora de ciertos péptidos de esta invención se ilustra en las solicitudes originales (09/645,454, presentada en Agosto 24, del 2000, 09/896,841, presentada en Junio 29, del 2001 , y la WO 02/15923 (PCT/US01/26497), presentada en Junio 29, del 2001 , véase, por ejemplo, las Figuras 1-5 en la WO 02/15923. La Figura 1, paneles A, B, C y D en la WO 02/15923, muestran la asociación de 14C-D-5F con los componentes sanguíneos en un ratón ApoE nulo. También se demuestra que la HDL de los ratones que se alimentaron con una dieta aterogénica y se inyectaron con PBS, fallaron en inhibir la oxidación de la LDL humana y fallaron en inhibir la actividad quimiotáctica del monocito inducida por la LDL en los cocultivos de la pared de la arteria humana. En contraste, la HDL de ratones alimentados con una dieta aterogénica e inyectados diariamente con los péptidos descritos en la presente, fueron tan efectivos para inhibir la oxidación de la LDL humana y prevenir la actividad quimiotáctica del monocito inducida por la LDL en los cocultivos como la HDL humana normal (Figuras 2A y 2B en la WO 02/ 5923). Además, la LDL tomada de los ratones alimentados con la dieta aterogénica e inyectados diariamente con PBS, fue oxidada más fácilmente e indujo más fácilmente la actividad quimiotáctica del monocito que la LDL tomada de los ratones alimentados con la misma dieta, pero inyectados con 20 g diariamente del péptido 5F. El péptido D no parece ser inmunogénico (Figura 4 en la WO 02/15923). Las respuestas in vitro de las células de la pared de la arteria humana a la HDL y la LDL de los ratones alimentados con la dieta aterogénica e inyectados con un péptido de acuerdo con esta invención, son consistentes con la acción protectora mostrada por tales péptidos in vivo. A pesar de los niveles similares del colesterol total, el colesterol de la LDL, el colesterol de IDL+VLDL, y el colesterol de la HDL menor, como un porcentaje del colesterol total, los animales alimentados con la dieta aterogénica e inyectados con el péptido, tuvieron calificaciones de la lesión significativamente menores (Figura 5 en la WO 02/ 5923). Los péptidos evitaron así la progresión de las lesiones ateroscleróticas en los ratones alimentados con una dieta aterogénica. Así, en una modalidad, esta invención proporciona métodos para aminorar y/o prevenir uno o más síntomas de la aterosclerosis y/u otras condiciones caracterizadas por una respuesta inflamatoria.
III. Mitigación de un síntoma de la aterosclerosis asociado con una respuesta inflamatoria aguda Los péptidos, o pares de aminoácidos de esta invención, también son útiles en varios contextos. Por ejemplo, observamos que las complicaciones cardiovasculares (por ejemplo, aterosclerosis, apoplejía, etc.), acompañan o siguen frecuentemente al inicio de una respuesta inflamatoria de fase aguda. Tal respuesta inflamatoria de fase aguda con frecuencia está asociada con una enfermedad inflamatoria recurrente (por ejemplo, lepra, tuberculosis, lupus eritematoso sistémico y artritis reumatoide), una infección viral (por ejemplo, influenza), una infección bacteriana, una infección micótica, un transplante de órgano, una herida u otro trauma, una prótesis implantada, una biopelícula y lo similar. Fue un descubrimiento sorprendente de esta invención que la administración de uno o más de los péptidos descritos en la presente, puede reducir o prevenir la formación de fosfolípidos oxidados durante o después de una respuesta de fase aguda, y por lo tanto mitigar o eliminar las complicaciones cardiovasculares asociadas con tal condición. Así, por ejemplo, demostramos que una consecuencia de la infección por influenza, es la disminución de la paraoxonasa y la actividad de la acetilhidrolasa que activa las plaquetas en la HDL. Sin estar apegados a alguna teoría en particular, creemos que, como resultado de la pérdida de estas actividades enzimáticas de la HDL y también como resultado de la asociación de las proteínas prooxidantes con la HDL durante la respuesta de fase aguda, la HDL no es capaz ya de evitar la oxidación de la LDL y no fue capaz ya de evitar la producción inducida por la LDL de la actividad quimiotáctica del monocito por las células endoteliales. Observamos que en un sujeto inyectado con dosificaciones muy bajas de los polipéptidos de esta invención (por ejemplo, 20 microgramos para ratones), diariamente después de la infección con el virus de la influenza A, los niveles de paraoxonasa no cayeron y los fosfolípidos oxidados biológicamente activos no se generaron más allá del fondo. Esto indica que el D-4F (y/u otros péptidos de esta invención), puede administrarse (por ejemplo, oralmente o mediante inyección) a pacientes con enfermedad de la arteria coronaria conocida, durante la infección por influenza u otros eventos que pueden generar una respuesta inflamatoria de fase aguda (por ejemplo, debido a una infección viral, infección bacteriana, trauma, transplante, varias condiciones autoinmunes, etc.), y por lo tanto podemos evitar mediante este tratamiento a corto plazo la incidencia incrementada de ataque cardiaco y apoplejía, asociada con las patologías que generan tales estados inflamatorios. Así, en ciertas modalidades, esta invención contempla administrar uno o más de los péptidos, o pares de aminoácidos de esta invención, a un sujeto con riesgo de, o que sufre de una respuesta inflamatoria aguda y/o con riesgo de, o que sufre de un síntoma de la aterosclerosis. Así, por ejemplo, a una persona que tiene o que está en riesgo de una enfermedad coronaria, puede administrársele de manera profiláctica un polipéptido, o un par de aminoácidos de esta invención, durante la temporada de gripe. Una persona (o animal) sometido a una condición inflamatoria recurrente, por ejemplo, artritis reumatoide, varias enfermedades autoinmunes, etc., puede tratarse con un polipéptido de esta invención, para mitigar o prevenir el desarrollo de aterosclerosis o apoplejía. Una persona (o animal), sometida a trauma, por ejemplo, lesión aguda, transplante de tejido, etc., puede tratarse con un polipéptido de esta invención para mitigar el desarrollo de la aterosclerosis o apoplejía. En ciertos casos, tales métodos implicarán un diagnóstico de la aparición o riesgo de una respuesta inflamatoria aguda. La respuesta inflamatoria aguda típicamente involucra alteraciones en el metabolismo y la regulación genética en el hígado. Es un proceso homeostático dinámico que involucra todos los sistemas principales del cuerpo, además del sistema inmune, cardiovascular y nervioso central. Normalmente, la respuesta de fase aguda dura únicamente unos pocos días; sin embargo, en los casos de inflamación crónica o recurrente, una continuación aberrante de algunos aspectos de la respuesta de fase aguda puede contribuir al daño del tejido subyacente que acompaña la enfermedad, y puede conducir también a complicaciones adicionales, por ejemplo, enfermedades cardiovasculares o enfermedades de deposición de proteínas tales como amiioidosis. Un aspecto importante de la respuesta de fase aguda es el perfil biosintético alterado radicalmente del hígado. Bajo circunstancias normales, el hígado sintetiza una gama característica de proteínas en el plasma a concentraciones en estado estacionario. Muchas de estas proteínas tienen funciones importantes y se requieren niveles en plasma más altos de estos reactivos de fase aguda (APR) o proteínas de fase aguda (APP), durante la respuesta de fase aguda que sigue a un estímulo inflamatorio. Aunque la mayoría de los APR se sintetizan por los hepatocitos, algunos se producen por otros tipos de células, incluyendo los monocitos, las células endoteliales, los fibroblastos y los adipocitos. La mayoría de los APR se inducen entre 50% y varias veces sobre los niveles normales. En contraste, los APR principales pueden incrementarse hasta 1000 sobre los niveles normales. Este grupo incluye el amiloide A en suero (SAA) y la proteína C reactiva (CRP) en humanos o su homólogo en ratones, el componente amiloide P en suero (SAP). Los llamados APR negativos están disminuidos en la concentración en plasma durante la respuesta de fase aguda para permitir un incremento en la capacidad del hígado para sintetizar los APR inducidos. En ciertas modalidades, la respuesta de fase aguda, o el riesgo de la misma, se evalúa midiendo una o más APP. La medición de tales marcadores es bien conocida por aquellos con experiencia en la técnica, y existen compañías comerciales que proporcionan tal medición (por ejemplo, AGP medida por Cardiotech Services, Louisville, KY).
IV. Sinergización de la actividad de las estatinas También se descubrió que agregando una dosificación baja de D-4F (1 g/ml) al agua potable de ratones apoE nulos durante 24 horas, no mejoró de manera significativa la función de la HDL (véase, por ejemplo, la solicitud relacionada USSN 10/423,830). Además, agregando 0.05 mg/ml de atorvastatina o pravastatina sola al agua potable de los ratones apoE nulos durante 24 horas, no mejoró la función de la HDL. Sin embargo, cuando se agregó 1 Mg/ml de D-4F al agua potable junto con 0.05 mg/ml de atorvastatina o pravastatina, hubo una mejora significativa en la función de la HDL. En realidad, la HDL apoE nula proinflamatoria se volvió tan antiinflamatoria como 350 yg/ml de HDL humana normal (h, HDL, véase, por ejemplo, la solicitud relacionada USSN 10/423,830). Así, las dosis de D-4F solo, o las estatinas solas, las cuales por sí mismas no tienen efecto en la función de la HDL, cuando se dieron juntas, actuaron sinergísticamente. Cuando el D-4F y una estatina se dieron juntos a ratones apo E nulos, su HDL proinflamatoria a 50 pg/ml de colesterol de la HDL, se volvió tan efectiva como la HDL humana normal a 350 g/ml del colesterol de la HDL para prevenir la respuesta inflamatoria inducida por la acción de HPODE que oxida a PAPC en los cocultivos de las células de la pared de la arteria humana. Así, en ciertas modalidades, esta invención proporciona métodos para mejorar la actividad de las estatinas. Los métodos involucran generalmente administrar uno o más péptidos o pares de aminoácidos, como se describe en la presente, de manera concurrente con una o más estatinas. El D-4F u otros péptidos similares como se describe en la presente, logran una acción sinergística entre la estatina y los péptidos orales para aminorar la aterosclerosis. En este contexto, las estatinas pueden administrarse a dosificaciones significativamente menores, evitando por lo tanto varios efectos laterales dañinos (por ejemplo, emaciación muscular), asociados con el uso de estatinas a dosificaciones altas y/o las propiedades antiinflamatorias de las estatinas a cualquier dosis dada se mejoran de manera significativa.
V. Inhibición/tratamiento de la osteoporosis.7 La calcificación vascular y la osteoporosis con frecuencia coexisten en los mismos sujetos (Ouchi et al. (1993) Ann NY Acad Sci., 676:297-307; Boukhris y Becker (1972) JAMA, 219:1307-1311; Banks et al. (1994) Eur J Clin Invest, 24:813-817; Laroche et al. (1994) Clin Rheumatol., 13:611-614; Broulik y Kapitola (1993) Endocr Regul., 27:57-60; Frye et al. (1992) Bone Mine., 19:185-194; Barengolts et al. (1998) Calcif Tissue Int., 62:209-213; Burnett y Vasikaran (2002) Ann Clin Biochem., 39:203-210. Parhami et al. (1997) Arterioscl Thromb Vasc Bioi, 17:680-687, demostró que la LDL oxidada ligeramente (MM-LDL) y los lípidos biológicamente activos en la MM-LDL [es decir, 1-palmitoil-2-araquidonoil-sn-glicero-3-fosforilcolina oxidada) (Ox-PAPC)], así como el isoprostano, 8-¡so prostaglandin E2, pero no el fosfolípido no oxidado (PAPC) o el isoprostano, 8-iso prostaglandin F2a, indujeron la actividad de la fosfatasa alcalina y la diferenciación osteoblástica de las células vasculares calcificantes (CVC) ¡n vitro, pero inhibieron la diferenciación de las células óseas MC3T3-E1. El osteón se parece a la pared arterial en que el osteón está centrado en una abertura recubierta con células endoteliales rodeada por un espacio subendotelial que contiene células similares a la matriz y al fibroblasto, las cuales a su vez, están rodeadas por preosteoblastos y osteoblastos que ocupan una posición análoga a las células del músculo liso en la pared arterial (Id.). Los osteoblastos del hueso trabecular también forman una interfaz con los espacios subendoteliales de la médula ósea (Id.). Parhami et al., postularon que las lipoproteínas podrían atravesar el endotelio de las arterias óseas y depositarse en el espacio subendotelial, en donde podrían experimentar la oxidación como en las arterias coronarias (Id.). Basándose en sus datos in vitro, predijeron que la oxidación de la LDL en el espacio subendotelial de las arterias óseas y en la médula ósea, podría conducir a una diferenciación osteoblástica reducida y a mineralización que contribuiría a la osteoporosis (Id.). Sus hipótesis predijeron además que los niveles de LDL estarían correlacionados de manera positiva con la osteoporosis, como lo están con la calcificación coronaria (Pohle et al. (2001) Circulation, 104:1927-1932), pero que los niveles de HDL estarían correlacionados de manera negativa con la osteoporosis (Parhami et al. (1997) ArterioscI Thromb Vasc Biol. , 17:680-687). In vitro, la diferenciación osteoblástica de la línea celular estromal de la médula M2-10B4, se inhibió por la MM-LDL, pero no por la LDL nativa (Parhami et al. (1999) J Bone Miner Res., 14:2067-2078). Cuando las células estromales de la médula de ratones C57BL 6 (BL6) susceptibles a aterosclerosis con una dieta con alimento bajo en grasas se cultivaron, hubo una robusta diferenciación osteogénica (Id.). En contraste, cuando las células estromales de la médula tomadas de los ratones después de una dieta aterogénica alta en grasas, se cultivaron, no experimentaron diferenciación osteogénica (Id.). Esta observación es particularmente importante puesto que proporciona una explicación posible para el potencial osteogénico disminuido de las células estromales de la médula en el desarrollo de la osteoporosis (Nuttall y Gimble (2000) Bone, 27:177-184). In vivo, la disminución en el potencial osteogénico está acompañado por un incremento en la adipogénesis en el hueso osteoporótico (Id.). Se encontró que agregando el D-4F al agua potable de ratones apoE nulos durante 6 semanas, se incrementó dramáticamente la densidad mineral ósea trabecular, y se cree que otros péptidos de esta invención actuarán de manera similar. Nuestros datos indican que la osteoporosis puede considerarse como una "aterosclerosis del hueso". Parece ser el resultado de la acción de lípidos oxidados. La HDL destruye estos lípidos oxidados y fomenta la diferenciación osteoblástica. Nuestros datos indican que la administración de los péptidos de esta invención a un mamífero (por ejemplo, en el agua potable de los ratones apoE nulos), incrementó dramáticamente el hueso trabecular en sólo cuestión de semanas. Esto indica que los péptidos, o pares de aminoácidos, descritos en la presente, son útiles para mitigar uno o más síntomas de la osteoporosis (por ejemplo, para inhibir la descalcificación), o para inducir la recalcificación de un hueso osteoporótico. Los péptidos también son útiles como profilácticos para evitar el inicio de los síntomas de la osteoporosis en un mamífero (por ejemplo, un paciente con riesgo de osteoporosis).
Creemos que mecanismos similares son una causa de la calcificación coronaria, por ejemplo, estenosis aórtica calcificada. Así, en ciertas modalidades, esta invención contempla el uso de los péptidos, o pares de aminoácidos, descritos en la presente, para inhibir o prevenir un síntoma de una enfermedad tal como la calcificación coronaria, la estenosis aórtica calcificada, osteoporosis y lo similar.
VI. Otras indicaciones Sin estar apegados a una teoría particular, también creemos que los péptidos, o pares de aminoácidos descritos en la presente son útiles profiláctica o terapéuticamente para mitigar el inicio y/o uno o más síntomas de una variedad de otras condiciones incluyendo, de manera no exclusiva, polimialgia reumática, poliarteritis nodosa, escleroderma, lupus eritematoso, esclerosis múltiple, fibrosis pulmonar idiopática, enfermedad pulmonar obstructiva crónica (por ejemplo, asma), Enfermedad de Alzheimer, SIDA y diabetes. Típicamente, los péptidos serán útiles para mitigar un síntoma causado por o asociado con una respuesta inflamatoria en estas condiciones.
VII. Administración del péptido/par de aminoácidos Los métodos de esta invención involucran típicamente administrar a un organismo, de manera preferida un mamífero, de manera más preferida un humano, uno o más de los péptidos, o pares de aminoácidos de esta invención (o miméticos de tales péptidos, o pares de aminoácidos).
Los péptidos o pares de aminoácidos, pueden administrarse, como se describe en la presente, de acuerdo con cualquiera de varios métodos estándar incluyendo, de manera no exclusiva, inyección, supositorio, inhalación (por ejemplo, rocío nasal, inhalación oral, etc.), implante de liberación temporal, parche transdérmico y lo similar. En una modalidad particularmente preferida, los péptidos se administran oralmente (por ejemplo, como un jarabe, cápsula, polvo, cápsula de gelatina o tableta). Los métodos pueden involucrar la administración de un solo péptido o un par de aminoácidos de esta invención, o la administración de dos o más diferentes péptidos o pares de aminoácidos. Los péptidos, o pares de aminoácidos, pueden proporcionarse como monómeros o en forma diméricas, oligoméricas o poliméricas. En ciertas modalidades, las formas multiméricas pueden comprender monómeros asociados (por ejemplo, enlazados iónica o hidrofóbicamente), mientras que ciertas otras formas multiméricas comprenden monómeros enlazados de manera covalente (enlazados directamente o a través de un enlazante). Aunque la invención se describe con respecto al uso en humanos, también es adecuada para el uso en animales, por ejemplo, para uso veterinario. Así, los organismos preferidos incluyen, de manera no exclusiva, humanos, primates no humanos, caninos, equinos, felinos, porcinos, ungulados, lagomorfos y lo similar. Los métodos de esta invención no están limitados a humanos o animales no humanos que muestren uno o más síntomas de aterosclerosis (por ejemplo, hipertensión, formación y ruptura de la placa, reducción en los eventos clínicos tales como ataque cardiaco, angina o apoplejía, altos niveles de colesterol en plasma, altos niveles de lipoproteína de densidad baja, altos niveles de lipoproteína de densidad muy baja, o proteínas inflamatorias tales como CRP, etc.), sino que son útiles en un contexto profiláctico. Así, los péptidos de esta invención, o pares de aminoácidos, (o miméticos de los mismos), pueden administrarse a organismos para evitar el inicio/desarrollo de uno o más síntomas de la aterosclerosis y/o de las otras indicaciones descritas en la presente. Los sujetos particularmente preferidos en este contexto, son sujetos que muestran uno o más factores de riesgo para la aterosclerosis (por ejemplo, historial familiar, hipertensión, obesidad, alto consumo de alcohol, fumadores, alto colesterol en la sangre, altos triglicéridos en la sangre, altas LDL, VLDL, IDL, o HDL baja en sangre, diabetes, o un historial familiar de diabetes, altos lípidos en la sangre, ataque cardiaco, angina o apoplejía, etc.), y/o una de las otras condiciones descritas en la presente. En ciertas modalidades, los péptidos, o pares de aminoácidos de esta invención, también pueden administrarse para estimular la formación y la ciclización de las partículas similares a la lipoproteína de densidad alta pre-beta y/o para fomentar el transporte inverso de lípidos y la destoxificación. Los péptidos, o pares de aminoácidos, también son útiles para la administración en conjunto con estatinas, en donde mejoran (por ejemplo, sinergizan) la actividad de la estatina a dosificaciones administradas típicamente y/o permiten que las estatinas se administren a dosificaciones más bajas. Además, los péptidos, o pares de aminoácidos, pueden administrarse para reducir o eliminar uno o más síntomas de la osteoporosis y/o diabetes, y/o cualquiera de las otras condiciones descritas en la presente, y/o para evitar/inhibir el inicio de uno o más síntomas de la osteoporosis y/o cualquiera de las otras indicaciones descritas en la presente.
VIII. Ciertos péptidos preferidos v su preparación A) Péptidos helicoidales antipáticos de la clase A Fue un descubrimiento de esta invención que los péptidos que comprenden una hélice antipática de la clase A ("péptidos de la clase A"), son capaces de mitigar uno o más síntomas de la aterosclerosis. Los péptidos de la clase A están caracterizados por la formación de una hélice a que produce una segregación de residuos polares y no polares, formando por lo tanto una cara polar y una no polar con los residuos cargados positivamente que residen en la interfaz polar-no polar y lo residuos cargados negativamente que residen en el centro de la cara polar (véase, por ejemplo, Anantharamaiah (1986) Meth. Enzymol, 128:626-668). Nótese que el cuarto exón de la apo A-I, cuando se dobla en 3,667 residuos/espira, produce una estructura helicoidal anfipática de la clase A.
Un péptido de la clase A particularmente preferido, designado como 18A (véase, por ejemplo, Anantharamaiah (1986) Meth. Enzymol, 128:626-668), se modificó como se describe en la presente para producir péptidos administrados oralmente y altamente efectivos para inhibir o prevenir uno o más síntomas de la aterosclerosis. Sin estar apegados a una teoría en particular, se cree que los péptidos de esta invención pueden actuar in vivo captando las moléculas de siembra que mitigan la oxidación de la LDL. Determinamos que al incrementar el número de residuos de Phe en la cara hidrofóbica de 18A, se incrementaría teóricamente la afinidad lipídica, como se determina por el cálculo descrito por Palgunachari et al. (1996) Aríeriosclerosis, Thrombosis, & Vascular Biology 16:328-338. Teóricamente, una sustitución sistemática de los residuos en la cara no polar de 18A con Phe, podría producir seis péptidos. Los péptidos con 2, 3 y 4 Phe adicionales teóricamente tendrían valores de afinidad lipídica (?) de 13, 14 y 15 unidades, respectivamente. Sin embargo, los valores de ? saltaron cuatro unidades si el Phe adicional se incrementó de 4 a 5 (a 19 unidades ?). El incremento a 6 ó 7 Phe, produciría un incremento menos dramático (a 20 y 21 unidades ?, respectivamente). Por lo tanto, elegimos 5 Phe adicionales (y por lo tanto la designación de los péptidos como 5F). En una modalidad particularmente preferida, el péptido 5F se bloqueó en que el residuo amino terminal estaba acetilado y el residuo carboxilo terminal estaba amidado. El nuevo análogo del péptido de la clase A, 5F, inhibió el desarrollo de lesiones en ratones susceptibles a la aterosclerosis. El nuevo análogo peptídico, 5F, se comparó con la apo A-l de ratón (MoA-l), para la eficacia en inhibir la aterosclerosis inducida por la dieta en estos ratones, utilizando dosificaciones del péptido basadas en el estudio de Levine et al. (Levine et al. (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 90:12040-12044). También se produjeron varios otros péptidos de la clase A y mostraron grados variables, pero significativos en la eficacia para mitigar uno o más síntomas de la aterosclerosis. Varios de tales péptidos se ¡lustran en el Cuadro 1.
CUADRO 1 Miméticos ilustrativos de la hélice antipática de Apo A-l para utilizarse en esta invención Nombre Secuencia de aminoácidos SEQ ID del NO.
Péptido 18A D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F 4 2F Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D- -V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2 5 3F Ac-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2 6 3F14 Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2 7 F Ac-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E- -F-K-E-A-F-NH2 8 5F Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 9 6F Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 10 7F Ac-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 11 Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-NH2 12 Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-A-F-NH2 13 Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-L-K-E-F-F-NH2 14 Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-F-F-NH2 5 Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 16 Ac-E-W-L-K-L-F-Y-E-K-V-L-E-K-F-K-E-A-F-NH2 17 Ac-E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2 18 Ac-E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-NH2 19 Ac-E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-A-F-NH2 20 Ac-E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-L-K-E-F-F-NH2 21 Ac-E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-F-F-NH2 22 Ac-E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 23 Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2 24 Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-N H2 25 Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2 26 Ac-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 27 Ac-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 28 Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-N H2 29 Ac-A-F-Y-D- -V-A-E-K-L-K-E-F-F-NH2 30 Ac-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-A-F-NH2 31 5 Ac-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-L-K-E-F-F-NH2 32 Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-F-F-NH2 33 Ac-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-NH2 34 Ac-L-F-Y-E-K-V-L-E-K-F-K-E-A-F-NH2 35 Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-N H2 36 Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-NH2 37 Ac-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-A-F-N H2 38 Ac-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-L-K-E-F-F-NH2 39 Ac-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-F-F-NH2 40 Ac-A-F-Y-D- -V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 41 10 Ac-D-W-L-K-A-L-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-L-NH2 42 Ac-D-W-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-NH2 43 Ac-D-W-F-K-A-F-Y-E-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 44 Ac-E-W-L-K-A-L-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-A-L-N H2 45 Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-N H2 46 Ac-E-W-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-NH2 47 Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 48 Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 49 Ac-E-W-F-K-A-F-Y-E-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 50 Ac-D-F-L-K-A-W-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-W-NH2 51 15 Ac-E-F-L-K-A-W-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-A-W-NH2 52 Ac-D-F-W-K-A-W-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-W-W-N H2 53 Ac-E-F-W-K-A-W-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-W-W-NH2 54 Ac-D-K-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-W-A-K-E-A-F-NH2 55 Ac-D-K-W-K-A-V-Y-D-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L-NH2 56 Ac-E-K-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-W-A-K-E-A-F-NH2 57 Ac-E-K-W-K-A-V-Y-E-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L-NHz 58 Ac-D-W-L-K-A-F-V-D-K-F-A-E-K-F- -E-A-Y-NH2 59 Ac-E-K-W-K-A-V-Y-E-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L-NH2 60 Ac-D-W-L-K-A-F-V-Y-D-K-V-F-K-L-K-E-F-F-NH2 61 20 Ac-E-W-L-K-A-F-V-Y-E-K-V-F-K-L-K-E-F-F-NH2 62 Ac-D-W-L-R-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2 63 Ac-E-W-L-R-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2 64 Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-R-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2 65 Ac-E-W-L- -A-F-Y-E-R-V-A-E-K-L- -E-A-F-NH2 66 Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH2 67 Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH2 68 Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-R-E-A-F-NH2 69 Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-R-E-A-F-NH2 70 Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-R-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH2 71 Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-R-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH2 72 Ac-D-W-L-R-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-R-E-A-F-NH2 73 Ac-E-W-L-R-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-R-E-A-F-NH2 74 Ac-D-W-L-R-A-F-Y-D-R-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2 75 Ac-E-W-L-R-A-F-Y-E-R-V-A-E-K-L-K-E-A-F-NH2 76 Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-R-L-R-E-A-F-NH2 77 Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-R-L-R-E-A-F~NH2 78 Ac-D-W-L-R-A-F-Y-D-K-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH2 79 Ac-E-W-L-R-A-F-Y-E-K-V-A-E-R-L-K-E-A-F-NH2 80 D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F^D-W- 81 L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F^D-W- 82 L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F D-W-F-K-A-F-Y-D- -V-A-E-K-L-K-E-A-F^D-W- 83 F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F D-K-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-W-A-K-E-A-F^D-K- 84 L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-W-L-K-E-A-F D-K-W-K-A-V-Y-D-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L^D-K- 85 W-K-A-V-Y-D-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-FzPzD-W- 86 F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F D-W-L-K-A-F-V-Y-D-K-V-F-K-L-K-E-F-F^D-W- 87 L-K-A-F-V-Y-D-K-V-F-K-L-K-E-F-F D-W-L-K-A-F-Y-D-K-F-A-E-K-F-K-E-F-F^D-W- 88 L-K-A-F-Y-D-K-F-A-E-K-F-K-E-F-F Ac-E-W-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2 89 Ac-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-NH2 90 Ac-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-NH2 91 Ac-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-F-K-E-NH2 92 NMA-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-NH2 93 NMA-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-F-K-E-NH2 94 N A-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2 95 NMA-E-W-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2 96 NMA-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH2 97 N A-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-NH2 98 Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 99 NMA-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 00 NMA-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 Ac-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 101 NMA-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 Ac-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 102 NMA-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F-NH2 Ac-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-NH2 103 NMA-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-NH2 Ac-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-NH2 104 NMA-E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-NHz Ac-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-NH2 105 NMA-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E- -F-K-E-NH2 Ac-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-N H2 106 NMA-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-NH2 1Los enlazantes están subrayados. NMA es N-Metil Antranililo.
En ciertas modalidades preferidas, los péptidos incluyen variaciones de 4F (SEQ ID NO: 8 en el Cuadro 1) o D-4F, en donde uno o ambos ácidos aspárticos (D), están reemplazados por ácido glutámico (E). También están contemplados los péptidos (por ejemplo, 4F o D-4F), en donde 1 , 2, 3 ó 4 aminoácidos están suprimidos del término carboxilo y/o 1 , 2, 3 ó 4 aminoácidos están suprimidos del término carboxilo y/o uno o ambos ácidos aspárticos (D), están reemplazados por ácido glutámico (E). En cualquiera de los péptidos descritos en la presente, el término N puede bloquearse y marcarse utilizando una porción de mantilo (por ejemplo, N-metilantranililo). Aunque varios péptidos del Cuadro 1, se ilustran con un grupo acetilo o un grupo N-metilantranililo que protege el término amino y un grupo amida que protege el grupo carboxilo, cualquiera de estos grupos protectores puede eliminarse y/o sustituirse con otro grupo protector como se describió en la presente. En las modalidades particularmente preferidas, los péptidos comprenden uno o más aminoácidos de forma D como se describe en la presente. En ciertas modalidades, cada aminoácido (por ejemplo, cada aminoácido enantiomérico) de los péptidos del Cuadro 1, es un aminoácido de la forma D. También se nota que el Cuadro 1 no es completamente inclusivo. Utilizando las enseñanzas proporcionadas en la presente, pueden producirse de manera rutinaria otros péptidos helicoidales antipáticos de la clase A adecuados (por ejemplo, mediante sustituciones conservadoras o semiconservadoras (por ejemplo, D reemplazado por E), extensiones, supresiones y lo similar). Así, por ejemplo, una modalidad utiliza truncamientos de cualquiera de uno o más de los péptidos mostrados en la presente (por ejemplo, los péptidos identificados por las SEQ ID Nos: 5-23 y 42 en el Cuadro 1). Así, por ejemplo, la SEQ ID NO: 24, ilustra un péptido que comprende 14 aminoácidos del término C de 18A, que comprende uno o más aminoácidos D, mientras que las SEQ ID NOS: 25-41 ilustran otros truncamientos. Los péptidos más largos también son adecuados. Tales péptidos más largos pueden formar completamente una hélice antipática de la clase A, o la hélice anfipática de la clase A (hélices), puede formar uno o más dominios del péptido. Además, esta invención contempla versiones multiméricas de los péptidos. Así, por ejemplo, los péptidos ilustrados en la presente pueden acoplarse juntos (directamente o a través de un enlazante (por ejemplo, un enlazante de carbono, o uno o más aminoácidos), con uno o más aminoácidos intervinientes). Los péptidos poliméricos ilustrativos incluyen 18A-Pro-18A y los péptidos de las SEQ ID NOS: 81-88, en ciertas modalidades que comprenden uno o más aminoácidos D, de manera más preferida, con cada aminoácido que es un aminoácido D, como se describe en la presente, y/o que tienen uno o ambos términos protegidos.
B) Otros péptidos helicoidales antipáticos de la clase A míméticos de apoA-l, que tienen residuos aromáticos o alifáticos en la cara no polar En ciertas modalidades, esta invención también proporciona péptidos helicoidales antipáticos de la clase A modificados. Ciertos péptidos preferidos incorporan uno o más residuos aromáticos en el centro de la cara no polar, por ejemplo, 3FClt, (como están presente en 4F), o con uno o más residuos alifáticos en el centro de la cara no polar, por ejemplo, 3Fl7t. Sin estar apegados a alguna teoría particular, creemos que los residuos aromáticos centrales de la cara no polar del péptido 3FClt, debido a la presencia de los electrones p en el centro de la cara no polar, permiten que las moléculas de agua penetren cerca de las cadenas de alquilo del lípido hidrofóbico del complejo péptido-lípido, lo cual a su vez permitiría la entrada de las especies del oxígeno reactivo (tales como hidroperoxidos lipidíeos), protegiéndolos de la superficie celular. De manera similar, también creemos que los péptidos con residuos alifáticos en el centro de la cara no polar, por ejemplo, 3FI,C, actuarán de manera similar, pero no tan efectivamente como 3FC*. Los péptidos preferidos convertirán la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o harán la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria, y/o disminuirán la actividad quimiotáctica del monocito inducida por la LDL generada por las células de la pared arterial igual o mayor que el D4F u otros péptidos mostrados en el Cuadro 1. Los péptidos que muestras esta actividad son útiles para aminorar la aterosclerosis y otras condiciones inflamatorias, tales como artritis reumatoide, lupus eritematoso, poliarteritis nodosa, osteoporosis, enfermedad de Alzheimer, falla congestiva cardiaca, disfunción endotelial y dolencias virales tales como influenza A y enfermedades tales como esclerosis múltiple.
CUADRO 2 Ejemplos de ciertos péptidos preferidos Nombre Secuencia SEQ ID NO (3FC") Ac-DKWKAVYDKFAEAFKEFL-NH2 107 (3Fk) Ac-DKLKAFYDKVFEWAKEAF-NH2 108 C) Péptidos más pequeños También fue un descubrimiento sorprendente que ciertos péptidos pequeños que consisten de un mínimo de tres aminoácidos, de manera preferida (pero no necesariamente) con uno o más de los aminoácidos siendo el estereoisómero D del aminoácido, y que poseen dominios hidrofóbicos para permitir las interacciones lípido-proteína, y dominios hidrofílicos para permitir un grado de solubilidad en agua, también poseen propiedades antiinflamatorias significativas. Sin estar apegados a una teoría particular, se cree que los péptidos unen las "moléculas de siembra" requeridas para la formación de los fosfolípidos oxidados proinflamatorios, tales como Ox-PAPC, POVPC, PGPC y PEIPC. Puesto que muchas condiciones inflamatorias están mediadas al menos en parte por lípidos oxidados, creemos que los péptidos de esta invención son efectivos para aminorar las condiciones que se sabe o sospecha que se deben a la formación de lípidos oxidados biológicamente activos. Estas incluyen, de manera no exclusiva, aterosclerosis, artritis reumatoide, lupus eritematoso, poliarteritis nodosa, enfermedad pulmonar, asma, esclerosis múltiple, enfermedad de Alzheimer, diabetes y osteoporosis. Los "péptidos pequeños" varían típicamente en longitud de 3 aminoácidos a aproximadamente 15 aminoácidos, de manera más preferida de aproximadamente 4 aminoácidos a aproximadamente 10 u 11 aminoácidos, y de manera más preferida de aproximadamente 4 a aproximadamente 8 ó 10 aminoácidos. Los péptidos están caracterizados típicamente por tener aminoácidos terminales hidrofóbicos o aminoácidos terminales vueltos hidrofóbicos por la unión de uno o más grupos hidrofóbicos "protectores". En ciertas modalidades, los péptidos pueden caracterizarse por la Fórmula I, siguiente: en donde, n es 0 ó 1, X1 es un aminoácido hidrofóbico y/o porta un grupo hidrofóbico protector, X4 es un aminoácido hidrofóbico y/o porta un grupo hidrofóbico protector; y cuando n es 0: X2 es un aminoácido ácido o básico; cuando n es 1 : X2 y X3 son de manera independiente un aminoácido ácido, un aminoácido básico, un aminoácido aüfático o un aminoácido aromático tal que cuando X2 es un aminoácido ácido; X3 es un aminoácido básico, un aminoácido aüfático o un aminoácido aromático; cuando X2 es un aminoácido básico; X3 es un aminoácido ácido, un aminoácido aüfático, o un aminoácido aromático; y cuando X2 es un aminoácido aüfático o aromático, X3 es un aminoácido ácido o un aminoácido básico. Los péptidos más largos (por ejemplo, hasta 10, 11 ó 15 aminoácidos), también están contemplados dentro del alcance de esta invención. Típicamente, en donde los péptidos más cortos (por ejemplo, los péptidos de acuerdo con la fórmula I), están caracterizados por un aminoácido ácido, básico, aüfático o aromático, los péptidos más largos están caracterizados por dominios ácidos, básicos, alifáticos o aromáticos, que comprenden dos o más aminoácidos de ese tipo. 1) Propiedades funcionales de los péptidos pequeños activos Fue un hallazgo sorprendente de esta invención que varias propiedades físicas predicen la capacidad de los péptidos pequeños (por ejemplo, menos que 10 aminoácidos, de manera preferida menos que 8 aminoácidos, de manera más preferida de aproximadamente 3 a aproximadamente 5 ó 6 aminoácidos) de esta invención, para volver la HDL más antiinflamatoria y para mitigar la aterosclerosis y/u otras patologías caracterizadas por una respuesta inflamatoria en un mamífero. Las propiedades físicas incluyen alta solubilidad en acetato de etilo (por ejemplo, mayor que aproximadamente 4 mg/mL), y la solubilidad en amortiguador acuoso a pH 7.0. Tras poner en contacto los fosfolípidos tales como la 1,2-Dimiristoil-sn-gricero-3-fosfocolina (DMPC) en un medio acuoso, los péptidos pequeños particularmente efectivos, inducen o participan en la formación de partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm (± 0.1 nm), y/o inducen o participan en la formación de bicapas apiladas con una dimensión de la bicapa del orden de 3.4 a 4.1 nm, con una separación entre las bicapas en la pila de aproximadamente 2 nm, y/o también inducen o participan en la formación de estructuras vesiculares de aproximadamente 38 nm. En ciertas modalidades preferidas, los péptidos pequeños tienen un peso molecular de menos que aproximadamente 900 Da. Así, en ciertas modalidades, esta invención contempla péptidos pequeños que aminoran uno o más síntomas de una condición inflamatoria, en donde los péptidos: varían en longitud de aproximadamente 3 a aproximadamente 8 aminoácidos, de manera preferida, de aproximadamente 3 a aproximadamente 6 ó 7 aminoácidos, y de manera más preferida de aproximadamente 3 a aproximadamente 5 aminoácidos; son solubles en acetato de etilo a una concentración mayor que aproximadamente 4 mg/mL; son solubles en amortiguador acuoso a pH 7.0; cuando se ponen en contacto con un fosfolípido en un medio acuoso, forman partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm y/o forman bicapas apiladas con una dimensión de la bicapa del orden de 3.4 a 4.1 nm, con una separación entre las bicapas en la pila de aproximadamente 2 nm; tienen un peso molecular menor que aproximadamente 900 daltons; convierten la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hacen la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria; y no tienen la secuencia de aminoácidos Lys-Arg-Asp-Ser (SEQ ID NO: 238), en la cual Lys-Arg-Asp y Ser son todos aminoácidos L. En ciertas modalidades, estos péptidos pequeños protegen al fosfolípido contra la oxidación por un agente oxidante. Aunque estos péptidos pequeños no necesitan ser limitados, en ciertas modalidades, estos péptidos pequeños pueden incluir los péptidos pequeños descritos a continuación. 2) Tripéptidos Se descubrió que ciertos tripéptidos (péptidos de 3 aminoácidos), que pueden sintetizarse, muestran propiedades deseables como se describe en la presente (por ejemplo, la capacidad de convertir la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria, la capacidad de disminuir la actividad quimiotácttca del monocito inducida por la LDL generada por las células de la pared arterial, la capacidad para incrementar la HDL pre-beta, etc.). En ciertas modalidades, los péptidos están caracterizados por la fórmula I, en donde N es cero, mostrada a continuación como la Fórmula II: X1-X2-X4 II en donde los aminoácidos de extremo (X1 y X4), son hidrofóbicos ya sea debido a una cadena lateral hidrofóbica o debido a que la cadena lateral o los términos C y/o N están bloqueados con uno o más grupos hidrofóbicos protectores (por ejemplo, el término N está bloqueado con Boc-, Fmoc-, Nicotinilo-, etc., y el término C está bloqueado con (tBu)-OtBu, etc.). En ciertas modalidades, el aminoácido X2 es ya sea ácido (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico, etc.), o básico (por ejemplo, histidina, arginina, Usina, etc.). El péptido puede ser de todos los aminoácidos L o incluir uno o más o todos los aminoácidos D. Ciertos tripéptidos preferidos de esta invención incluyen, de manera no exclusiva, los péptidos mostrados en el Cuadro 3.
CUADRO 3 Ejemplos de ciertos tripéptidos preferidos que portan grupos hidrofóbicos de bloqueo y aminoácidos centrales ácidos, básicos o de histidina X1 X2 X3 X4 SEQ ID NO Boc-Lys(sBoc) Arg Ser(tBu)-OtBu 109 Boc-Lys(sBoc) Arg Thr(tBu)-OtBu 110 Boc-Trp Arg He-OtBu 111 Boc-Trp Arg Leu-OtBu 112 Boc-Phe Arg Me-OtBu 113 Boc-Phe Arg Leu-OtBu 114 Boc-Lys(sBoc) Glu Ser(tBu)-OtBu 115 Boc-Lys(sBoc) Glu Thr(tBu)-OtBu 116 Boc-Lys(sBoc) Asp Ser(tBu)-OtBu 117 Boc-Lys(sBoc) Asp Thr(tBu)-OtBu 118 Boc-Lys(8Boc) Arg Ser(tBu)-OtBu 119 Boc-LysfeBoc) Arg Thr(tBu)-OtBu 120 Boc-Leu Glu Ser(tBu)-OtBu 121 Boc-Leu Glu Thr(tBu)-OtBu 122 Fmoc-Trp Arg Ser(tBu)-OtBu 123 Fmoc-Trp Asp Ser(tBu)-OtBu 124 Fmoc-Trp Glu Ser(tBu)-OtBu 125 Fmoc-Trp Arg Ser(tBu)-OtBu 126 Boc-Lys(sBoc) Glu Leu-OtBu 127 Fmoc-Leu Arg Ser(tBu)-OtBu 128 Frnoc-Leu Asp Ser(tBu)-OtBu 129 Fmoc-Leu Glu Ser(tBu)-OtBu 130 Fmoc-Leu Arg Ser(tBu)-OtBu 131 Fmoc-Leu Arg Thr(tBu)-OtBu 132 Boc-Glu Asp Tyr(tBu)-OtBu 133 Fmoc-Lys(sFmoc) Arg Ser(tBu)-OtBu 134 Fmoc-Trp Arg He-OtBu 135 Fmoc-Trp Arg Leu-OtBu 136 Fmoc-Phe Arg Me-OtBu 137 Fmoc-Phe Arg Leu-OtBu 138 Boc-Trp Arg Phe-OtBu 139 Boc-Trp Arg Tyr-OtBu 140 Fmoc-Trp Arg Phe-OtBu 141 Fmoc-Trp Arg Tyr-OtBu 142 Boc-Orn(5Boc) Arg Ser(tBu)-OtBu 143 Nicotinil Lys(sBoc) Arg Ser(tBu)-OtBu 144 Nicotinil Lys(sBoc) Arg Thr(tBu)-OtBu 145 Fmoc-Leu Asp Thr(tBu)-OtBu 146 Fmoc-Leu Glu Thr(tBu)-OtBu 147 Fmoc-Leu Arg Thr(tBu)-OtBu 148 Fmoc-norLeu Arg Ser(tBu)-OtBu 149 Fmoc-norLeu Asp Ser(tBu)-OtBu 150 Fmoc-norLeu Glu Ser(tBu)-OtBu 151 Fmoc-Lys(sBoc) Arg Ser(tBu)-OtBu 152 Fmoc-Lys(sBoc) Arg Thr(tBu)-OtBu 153 Fmoc-Lys(8Boc) Glu Ser(tBu)-OtBu 154 Fmoc-Lys(sBoc) Glu Thr(tBu)-OtBu 155 Fmoc-Lys(sBoc) Asp Ser(tBu)-OtBu 156 Fmoc-Lys(sBoc) Asp Thr(tBu)-OtBu 157 Fmoc-Lys(sBoc) Glu Leu-OtBu 158 Fmoc-Lys(sBoc) Arg Leu-OtBu 159 Fmoc-Lys(sFmoc) Arg Thr(tBu)-OtBu 160 Fmoc-Lys(sFmoc) Glu Ser(tBu)-OtBu 161 Fmoc-Lys(sFmoc) Glu Thr(tBu)-OtBu 162 Fmoc-Lys(sFmoc) Asp Ser(tBu)-OtBu 163 Fmoc-Lys(sFmoc) Asp Thr(tBu)-OtBu 164 Fmoc-Lys(sFmoc) Arg Ser(tBu)-OtBu 165 Fmoc-Lys(sFmoc) Glu Leu-OtBu 166 Boc-Lys(sFmoc) Asp Ser(tBu)-OtBu 167 Boc-Lys(sFmoc) Asp Thr(tBu)-OtBu 168 Boc-Lys(sFmoc) Arg Thr(tBu)-OtBu 169 Boc-LysfcFmoc) Glu Leu-OtBu 170 Boc-Om(6Fmoc) Glu Ser(tBu)-OtBu 171 Boc-Orn(6Fmoc) Asp Ser(tBu)-OtBu 172 Boc-Orn(6Fmoc) Asp Thr(tBu)-OtBu 173 Boc-Orn(8Fmoc) Arg Thr(tBu)-OtBu 174 Boc-Orn(8Fmoc) Glu Thr(tBu)-OtBu 175 Fmoc-Trp Asp He-OtBu 176 Fmoc-Trp Arg lie-OtBu 177 Fmoc-Trp Glu lle-OtBu 178 Fmoc-Trp Asp Leu-OtBu 179 Fmoc-Trp Glu Leu-OtBu 180 Fmoc-Phe Asp lle-OtBu 181 Fmoc-Phe Asp Leu-OtBu 182 Fmoc-Phe Glu Leu-OtBu 183 Fmoc-Trp Arg Phe-OtBu 184 Fmoc-Trp G!u Phe-OtBu 185 Fmoc-Trp Asp Phe-OtBu 186 Fmoc-Trp Asp Tyr-OtBu 187 Fmoc-Trp Arg Tyr-OtBu 188 Fmoc-Trp Glu Tyr-OtBu 189 Fmoc-Trp Arg Thr(tBu)-OtBu 190 Fmoc-Trp Asp Thr(tBu)-OtBu 191 Fmoc-Trp Giu Thr(tBu)-OtBu 192 Boc-Phe Arg norLeu-OtBu 193 Boc-Phe Glu norLeu-OtBu 194 Fmoc-Phe Asp norLeu-OtBu 195 Boc-Glu His Tyr(tBu)-OtBu 196 Boc-Leu His Ser(tBu)-OtBu 97 Boc-Leu His Thr(tBu)-OtBu 198 Boc-Lys(sBoc) His Ser(tBu)-OtBu 199 Boc-Lys(sBoc) His Thr(tBu)-OtBu 200 Boc-Lys(sBoc) His Leu-OtBu 201 Boc-Lys(eFmoc) His Ser(tBu)-OtBu 202 Boc-Lys(8Fmoc) His Thr(tBu)-OtBu 203 Boc-Lys(sFmoc) His Leu-OtBu 204 Boc-Orn(6Boc) His Ser(tBu)-OtBu 205 Boc-Orn(6Fmoc) His Thr(tBu)-OtBu 206 Boc-Phe His ile-OtBu 207 Boc-Phe His Leu-OtBu 208 Boc-Phe His norLeu-OtBu 209 Boc-Phe Lys Leu-OtBu 210 Boc-Trp His lle-OtBu 211 Boc-Trp His Leu-OtBu 212 Boc-Trp His Phe-OtBu 213 Boc-Trp His Tyr-OtBu 214 Boc-Phe Lys Leu-OtBu 215 Fmoc-LysfeFmoc) His Ser(tBu)-OtBu 216 Fmoc-Lys(sFmoc) His Thr(tBu)-OtBu 217 Fmoc-LysfeFmoc) His Leu-OtBu 218 Fmoc-Leu His Ser(tBu)-OtBu 219 Fmoc-Leu His Thr(tBu)-OtBu 220 Fmoc-Lys(sBoc) His Ser(tBu)-OtBu 221 Fmoc-Lys(sBoc) His Thr(tBu)-OtBu 222 Fmoc-Lys(sBoc) His Leu-OtBu 223 Fmoc-LysfeFmoc) His Ser(tBu)-OtBu 224 Fmoc-Lys(sFmoc) His Thr(tBu)-OtBu 225 Fmoc-norLeu His Ser(tBu)-OtBu 226 Fmoc-Phe His lle-OtBu 227 Fmoc-Phe His Leu-OtBu 228 Fmoc-Phe His norLeu-OtBu 229 Fmoc-Trp His Ser(tBu)-OtBu 230 Fmoc-Trp His He-OtBu 231 Fmoc-Trp His Leu-OtBu 232 Fmoc-Trp His Phe-OtBu 233 Fmoc-Trp His Tyr-OtBu 234 Fmoc-Trp His Thr(tBu)-OtBu 235 Nicotinil Lys(sBoc) His Ser(tBu)-OtBu 236 Nicotinil Lys(sBoc) His Thr(tBu)-OtBu 237 Aunque los péptidos del Cuadro 3 se ilustran con grupos protectores particulares, nótese que estos grupos pueden sustituirse con otros grupos protectores como se describe en la presente y/o uno o más de los grupos protectores mostrados pueden eliminarse. r 3) Péptidos pequeños con aminoácidos centrales ácidos v básicos En ciertas modalidades, los péptidos de esta invención, varían de cuatro aminoácidos a aproximadamente diez aminoácidos. Los aminoácidos terminales son típicamente hidrofóbicos debido a una cadena lateral hidrofóbica o debido a que los aminoácidos terminales portan uno o más grupos hidrofóbicos protectores, los aminoácidos de extremo (X1 y X4), son hidrofóbicos debido a una cadena lateral hidrofóbica, o debido a que la cadena lateral o los términos C y/o N están bloqueados con uno o más grupos hidrofóbicos protectores (por ejemplo, el término N está bloqueado con Boc-, Fmoc-, Nicotinilo-, etc., y el término C está bloqueado con (tBu)-OtBu, etc.). Típicamente, la porción central del péptido comprende un aminoácido básico y un aminoácido ácido (por ejemplo, en un 4 mero) o un dominio básico y/o un dominio ácido en una molécula más larga. Estos cuatro meros, pueden representarse mediante la Fórmula I, en la cual X1 y X4 son hidrofóbicos y/o portan grupos hidrofóbicos protectores como se describe en la presente, y X2 es ácido, mientras que X3 es básico o X2 es básico, mientras que X3 es ácido. El péptido puede ser de todos los aminoácidos L o incluir uno o más o todos los aminoácidos D. Ciertos péptidos preferidos de esta invención incluyen, de manera no exclusiva, los péptidos mostrados en el Cuadro 4.
CUADRO 4 Ejemplos ilustrativos de péptidos pequeños con aminoácidos centrales ácidos v básicos x< X2 X3 X4 SEQ ID NO Boc-Lys(sBoc) Arg Asp Ser(tBu)-OtBu 238 Boc-Lys(sBoc) Arg Asp Thr(tBu)-OtBu 239 Boc-Trp Arg Asp lle-OtBu 240 Boc-Trp Arg Asp Leu-OtBu 241 Boc-Phe Arg Asp Leu-OtBu 242 Boc-Phe Arg Asp lle-OtBu '243 Boc-Phe Arg Asp norLeu-OtBu 244 Boc-Phe Arg Glu norLeu-OtBu 245 Boc-Phe Arg Glu lle-OtBu 246 Boc-Phe Asp Arg lle-OtBu 247 Boc-Phe Glu Arg lle-OtBu 248 Boc-Phe Asp Arg Leu-OtBu 249 Boc-Phe Arg Glu Leu-OtBu 250 Boc-Phe Glu Arg Leu-OtBu 251 Boc-Phe Asp Arg norLeu-OtBu 252 Boc-Phe Glu Arg norLeu-OtBu 253 Boc-Lys(EBoc) Glu Arg Ser(tBu)-OtBu 254 Boc-Lys(sBoc) Glu Arg Thr(tBu)-OtBu 255 Boc-Lys(sBoc) Asp Arg Ser(tBu)-OtBu 256 Boc-Lys(sBoc) Asp Arg Thr(tBu)-OtBu 257 Boc-Lys(sBoc) Arg Glu Ser(tBu)-OtBu 258 Boc-Lys(sBoc) Arg Glu Thr(tBu)-OtBu 259 Boc-Leu Glu Arg Ser(tBu)-OtBu 260 Boc-Leu Glu Arg Thr(tBu)-OtBu 261 Fmoc-Trp Arg Asp Ser(tBu)-OtBu 262 Fmoc-Trp Asp Arg Ser(tBu)-OtBu 263 Fmoc-Trp Glu Arg Ser(tBu)-OtBu 264 Fmoc-Trp Arg Glu Ser(tBu)-OtBu 265 Boc-Lys(sBoc) Glu Arg Leu-OtBu 266 Fmoc-Leu Arg Asp Ser(tBu)-OtBu 267 Fmoc-Leu Asp Arg Ser(tBu)-OtBu 268 Fmoc-Leu Glu Arg Ser(tBu)-OtBu 269 Fmoc-Leu Arg Glu Ser(tBu)-OtBu 270 Fmoc-Leu Arg Asp Thr(tBu)-OtBu 271 Boc-Glu Asp Arg Tyr(tBu)-OtBu 272 Fmoc-Lys(EFmoc) Arg Asp Ser(tBu)-OtBu 273 Fmoc-Trp Arg Asp lle-OtBu 274 Fmoc-Trp Arg Asp Leu-OtBu 275 Fmoc-Phe Arg Asp lle-OtBu 276 Fmoc-Phe Arg Asp Leu-OtBu 277 Boc-Trp Arg Asp Phe-OtBu 278 Boc-Trp Arg Asp Tyr-OtBu 279 Fmoc-Trp Arg Asp Phe-OtBu 280 Fmoc-Trp Arg Asp Tyr-OtBu 281 Boc-Orn(6Boc) Arg Glu Ser(tBu)-OtBu 282 Nicotinil Lys(sBoc) Arg Asp Ser(tBu)-OtBu 283 Nicotinil Lys(sBoc) Arg Asp Thr(tBu)-OtBu 284 Fmoc-Leu Asp Arg Thr(tBu)-OtBu 285 Fmoc-Leu Glu Arg Thr(tBu)-OtBu 286 Fmoc-Leu Arg Glu Thr(tBu)-OtBu 287 Fmoc-norLeu Arg Asp Ser(tBu)-OtBu 288 Fmoc-norLeu Asp Arg Ser(tBu)-OtBu 289 Fmoc-norLeu Glu Arg Ser(tBu)-OtBu 290 Fmoc-norLeu Arg Glu Ser(tBu)-OtBu 291 Fmoc-Lys(sBoc) Arg Asp Ser(tBu)-OtBu 292 Fmoc-Lys(sBoc) Arg Asp Thr(tBu)-OtBu 293 Fmoc-Lys Boc) Glu Arg Ser(tBu)-OtBu 294 Fmoc-Lys(sBoc) Glu Arg Thr(tBu)-OtBu 295 Fmoc-Lys(sBoc) Asp Arg Ser(tBu)-OtBu 296 Fmoc-Lys(sBoc) Asp Arg Thr(tBu)-OtBu 297 Fmoc-Lys(sBoc) Arg Glu Ser(tBu)-OtBu 298 Fmoc-Lys(sBoc) Arg Glu Thr(tBu)-OtBu 299 Fmoc-Lys(sBoc) Glu Arg Leu-OtBu 300 Fmoc-Lys(sBoc) Arg Glu Leu-OtBu 301 Fmoc-Lys(sFmoc) Arg Asp Thr(tBu)-OtBu 302 Fmoc-LysfeFmoc) Glu Arg Ser(tBu)-OtBu 303 Fmoc-Lys(sFmoc) Glu Arg Thr(tBu)-OtBu 304 Fmoc-LysfeFmoc) Asp Arg Ser(tBu)-OtBu 305 Fmoc-LysfeFmoc) Asp Arg Thr(tBu)-OtBu 306 Fmoc-Lys(sFmoc) Arg Glu Ser(tBu)-OtBu 307 Fmoc-Lys(sFmoc) Arg Glu Thr(tBu)-OtBu 308 Fmoc-Lys(sFmoc) Glu Arg Leu-OtBu 309 Boc-Lys(sFmoc) Arg Asp Ser (tBu)-OtBu 310 Boc-Lys( Fmoc) Arg Asp Thr(tBu)-OtBu 311 Boc-Lys(sFmoc) Glu Arg Ser(tBu)-OtBu 312 Boc-Lys(sFmoc) Glu Arg Thr(tBu)-OtBu 313 Boc-Lys(sFmoc) Asp Arg Ser(tBu)-OtBu 314 Boc-Lys(sFmoc) Asp Arg Thr(tBu)-OtBu 315 Boc-Lys(sFmoc) Arg Glu Ser(tBu)-OtBu 316 Boc-Lys(sFmoc) Arg Glu Thr(tBu)-OtBu 317 Boc-Lys(sFmoc) Glu Arg Leu-OtBu 318 Boc-Orn(6Fmoc) Arg Glu Ser(tBu)-OtBu 319 Boc-Orn(6Fmoc) Glu Arg Ser(tBu)-OtBu 320 Boc-Orn(óFmoc) Arg Asp Ser(tBu)-OtBu 321 Boc-Orn(6Fmoc) Asp Arg Ser(tBu)-OtBu 322 Boc-Orn(5Fmoc) Asp Arg Thr(tBu)-OtBu 323 Boc-Orn(6Fmoc) Arg Asp Thr(tBu)-OtBu 324 Boc-Orn(6Fmoc) Glu Arg Thr(tBu)-OtBu 325 Boc-Orn(6Fmoc) Arg Glu Thr(tBu)-OtBu 326 Fmoc-Trp Asp Arg lle-OtBu 327 Fmoc-Trp Arg Glu lle-OtBu 328 Fmoc-Trp Glu Arg He-OtBu 329 Fmoc-Trp Asp Arg Leu-OtBu 330 Fmoc-Trp Arg Glu Leu-OtBu 331 Fmoc-Trp Glu Arg Leu-OtBu 332 Fmoc-Phe Asp Arg lie-OtBu 333 Fmoc-Phe Arg Glu He-OtBu 334 Fmoc-Phe Glu Arg Ne-OtBu 335 Fmoc-Phe Asp Arg Leu-OtBu 336 Fmoc-Phe Arg Glu Leu-OtBu 337 Fmoc-Phe Glu Arg •Leu-OtBu 338 Fmoc-Trp Arg Asp Phe-OtBu 339 Fmoc-Trp Arg Glu Phe-OtBu 340 Fmoc-Trp Glu Arg Phe-OtBu 341 Fmoc-Trp Asp Arg Tyr-OtBu 342 Fmoc-Trp Arg Glu Tyr-OtBu 343 Fmoc-Trp Glu Arg Tyr-OtBu 344 Fmoc-Trp Arg Asp Thr(tBu)-OtBu 345 Fmoc-Trp Asp Arg Thr(tBu)-OtBu 346 Fmoc-Trp Arg Glu Thr(tBu)-OtBu 347 Fmoc-Trp Glu Arg Thr(tBu)-OtBu 348 Fmoc-Phe Arg Asp norLeu-OtBu 349 Fmoc-Phe Arg Glu norLeu-OtBu 350 Boc-Phe Lys Asp Leu-OtBu 351 Boc-Phe Asp Lys Leu-OtBu 352 Boc-Phe Lys Glu Leu-OtBu 353 Boc-Phe Glu Lys Leu-OtBu 354 Boc-Phe Lys Asp Ile-OtBu 355 Boc-Phe Asp Lys lle-OtBu 356 Boc-Phe Lys Glu Ile-OtBu 357 Boc-Phe Glu Lys Ue-OtBu 358 Boc-Phe Lys Asp norLeu-OtBu 359 Boc-Phe Asp Lys norLeu-OtBu 360 Boc-Phe Lys Glu norLeu-OtBu 361 Boc-Phe Glu Lys norLeu-OtBu 362 Boc-Phe His Asp Leu-OtBu 363 Boc-Phe Asp His Leu-OtBu 364 Boc-Phe His Glu Leu-OtBu 365 Boc-Phe Glu His Leu-OtBu 366 Boc-Phe His Asp Ne-OtBu 367 Boc-Phe Asp His lle-OtBu 368 Boc-Phe His Glu Ne-OtBu 369 Boc-Phe Glu His lle-OtBu 370 Boc-Phe His Asp norLeu-OtBu 371 Boc-Phe Asp His norLeu-OtBu 372 Boc-Phe His Glu norLeu-OtBu 373 Boc-Phe Glu His norLeu-OtBu 374 Boc-Lys(sBoc) Lys Asp Ser(tBu)-OtBu 375 Boc-LysfeBoc) Asp Lys Ser(tBu)-OtBu 376 Boc-LysfeBoc) Lys Glu Ser(tBu)-OtBu 377 Boc-Lys(sBoc) Glu Lys Ser(tBu)-OtBu 378 Boc-Lys(sBoc) His Asp Ser(tBu)-OtBu 379 Boc-Lys(sBoc) Asp His Ser(tBu)-OtBu 380 Boc-Lys(eBoc) His Glu Ser(tBu)-OtBu 381 Boc-Lys(sBoc) Glu His Ser(tBu)-OtBu 382 Aunque los péptidos del Cuadro 4 se ilustran con grupos protectores particulares, nótese que estos grupos pueden sustituirse con otros grupos protectores como se describe en la presente y/o uno o más de los grupos protectores mostrados pueden eliminarse. 4) Péptidos pequeños que tienen aminoácidos ácidos o básicos en el centro junto con un aminoácido alifátíco central En ciertas modalidades, los péptidos de esta invención, varían de cuatro aminoácidos a aproximadamente diez aminoácidos. Los aminoácidos terminales son típicamente hidrofóbicos debido a una cadena lateral hidrofóbica o debido a que los aminoácidos terminales portan uno o más grupos hidrofóbicos protectores, los aminoácidos de extremo (X1 y X4), son hidrofóbicos debido a una cadena lateral hidrofóbica, o debido a que la cadena lateral o los términos C y/o N están bloqueados con uno o más grupos hidrofóbicos protectores (por ejemplo, el término N está bloqueado con Boc-, Fmoc-, Nicotinilo-, etc., y el término C está bloqueado con (tBu)-OtBu, etc.). Típicamente, la porción central del péptido comprende un aminoácido básico o ácido y un aminoácido alifático (por ejemplo, en un 4 mero) o un dominio básico o un dominio ácido y un dominio alifático en una molécula más larga. Estos cuatro meros, pueden representarse mediante la Fórmula I, en la cual X1 y X4 son hidrofóbicos y/o portan grupos hidrofóbicos protectores como se describe en la presente, y X2 es ácido o básico, mientras que X3 es alifático o X2 es alifático, mientras que X3 es ácido o básico. El péptido puede ser de todos los aminoácidos L o incluir uno o más o todos los aminoácidos D. Ciertos péptidos preferidos de esta invención incluyen, de manera no exclusiva, los péptidos mostrados en el Cuadro 5.
CUADRO 5 Ejemplos de ciertos péptidos preferidos que tienen aminoácidos ácidos o básicos en el centro, ¡unto con un aminoácido alifático central X2 X3 X4 SEQ ID NO Fmoc-LysfeBoc) Leu Arg Ser(tBu)-OtBu 383 Fmoc-Lys(sBoc) Arg Leu Ser(tBu)-OtBu 384 Fmoc-Lys(sBoc) Leu Arg Thr(tBu)-OtBu 385 Frnoc-Lys(sBoc) Arg Leu Thr(tBu)-OtBu 386 Fmoc-Lys(sBoc) Glu Leu Ser(tBu)-OtBu 387 Frnoc-Lys(sBoc) Leu Glu Ser(tBu)-OtBu 388 Fmoc-Lys(sBoc) Glu Leu Thr(tBu)-OtBu 389 Fmoc-Lys(sBoc) Leu Glu Thr(tBu)-OtBu 390 Frnoc-LysfeFmoc) Leu Arg Ser(tBu)-OtBu 391 Frnoc-Lys(sFmoc) Leu Arg Thr(tBu)-OtBu 392 Fmoc-Lys(sFmoc) Glu Leu Ser(tBu)-OtBu 393 Fmoc-Lys(sFmoc) Glu Leu Thr(tBu)-OtBu 394 Boc-Lys(Fmoc) Glu lie Thr(tBu)-OtBu 395 Boc-Lys(sFmoc) Leu Arg Ser(tBu)-OtBu 396 Boc-Lys(sFmoc) Leu Arg Thr(tBu)-OtBu 397 Boc-Lys(sFmoc) Glu Leu Ser(tBu)-OtBu 398 Boc-LysfeFmoc) Glu Leu Thr(tBu)-OtBu 399 Boc-Lys(eBoc) Leu Arg Ser(tBu)-OtBu 400 Boc-Lys(sBoc) Arg Phe Thr(tBu)-OtBu 401 Boc-Lys(sBoc) Leu Arg T r(tBu)-OtBu 402 Boc-Lys(sBoc) Glu lie Thr(tBu) 403 Boc-Lys(sBoc) Glu Val Thr(tBu) 404 Boc-Lys(sBoc) Glu Ala Thr(tBu) 405 Boc-Lys(sBoc) Glu Gly Thr(tBu) 406 Boc-Lys(sBoc) Glu Leu Ser(tBu)-OtBu 407 Boc-Lys(sBoc) Glu Leu Thr(tBu)-OtBu 408 Aunque los péptidos del Cuadro 5 se ilustran con grupos protectores particulares, nótese que estos grupos pueden sustituirse con otros grupos protectores como se describe en la presente y/o uno o más de los grupos protectores mostrados pueden eliminarse. 5) Péptidos pequeños que tienen un aminoácido ácido o básico en el centro ¡unto con un aminoácido aromático central En ciertas modalidades, los péptidos de esta invención, varían de cuatro aminoácidos a aproximadamente diez aminoácidos. Los aminoácidos terminales son típicamente hidrofóbicos debido a una cadena lateral hidrofóbica o debido a que los aminoácidos terminales portan uno o más grupos hidrofóbicos protectores, los aminoácidos de extremo (X1 y X4), son hidrofóbicos debido a una cadena lateral hidrofóbica, o debido a que la cadena lateral o los términos C y/o N están bloqueados con uno o más grupos hidrofóbicos protectores (por ejemplo, el término N está bloqueado con Boc-, Fmoc-, Nicotinilo-, etc., y el término C está bloqueado con (tBu)-OtBu, etc.). Típicamente, la porción central del péptido comprende un aminoácido básico o ácido y un aminoácido aromático (por ejemplo, en un 4 mero) o un dominio básico o un dominio ácido y un dominio aromático en una molécula más larga. Estos cuatro meros, pueden representarse mediante la Fórmula I, en la cual X1 y X4 son hidrofóbicos y/o portan grupos hidrofóbicos protectores como se describe en la presente, y X2 es ácido o básico, mientras que X3 es aromático o X2 es aromático, mientras que X3 es ácido o básico. El péptido puede ser de todos los aminoácidos L o incluir uno o más o todos los aminoácidos D. Los cinco meros pueden representarse mediante una modificación menor de la Fórmula I, en la cual X5 se inserta como se muestra en el Cuadro 6, y en la cual X5 es típicamente un aminoácido aromático.
Ciertos péptidos preferidos de esta invención incluyen, de manera no exclusiva, los péptidos mostrados en el Cuadro 6.
CUADRO 6 Ejemplos de ciertos péptidos preferidos que tienen un aminoácido ácido o básico en el centro, junto con un aminoácido aromático central X1 X* X3 Xs X4 SEQ ID NO Fmoc-Lys Boc) Arg Trp Tyr(tBu)-OtBu 409 Fmoc-LysfeBoc) Trp Arg Tyr(tBu)-OtBu 410 Fmoc-Lys(sBoc) Arg Tyr Trp-OtBu 41 1 Fmoc-Lys(sBoc) Tyr Arg Trp-OtBu 412 Fmoc-LysfeBoc) Arg Tyr Trp Thr(tBu)-OtBu 413 Fmoc-Lys(sBoc) Arg Tyr Thr(tBu)-OtBu 414 Fmoc-Lys(sBoc) Arg Trp Thr(tBu)-OtBu 415 Fmoc-Lys(sFmoc) Arg Trp Tyr(tBu)-OtBu 416 Fmoc-Lys(EFmoc) Arg Tyr Trp-OtBu 417 Fmoc-Lys(sFmoc) Arg Tyr Trp Thr(tBu)-OtBu 418 Fmoc-Lys(sFmoc) Arg Tyr Thr(tBu)-OtBu 419 Fmoc-Lys(sFmoc) Arg Trp Thr(tBu)-OtBu 420 Boc-Lys(sFmoc) Arg Trp Tyr(tBu)-OtBu 421 Boc-Lys(gFmoc) Arg Tyr Trp-OtBu 422 Boc-LysfcFmoc) Arg Tyr Trp Thr(tBu)-OtBu 423 Boc-Lys(sFmoc) Arg Tyr Thr(tBu)-OtBu 424 Boc-Lys(sFmoc) Arg Trp Thr(tBu)-OtBu 425 Boc-Glu Lys(eFmoc) Arg Tyr(tBu)-OtBu 426 Boc-Lys(sBoc) Arg Trp Tyr(tBu)-OtBu 427 Boc-Lys(sBoc) Arg Tyr Trp-OtBu 428 Boc-Lys(sBoc) Arg Tyr Trp Thr(tBu)-OtBu 429 Boc-Lys(sBoc) Arg Tyr Thr(tBu)-OtBu 430 Boc-Lys(sBoc) Arg Phe Thr(tBu)-OtBu 431 Boc-Lys(sBoc) Arg Trp Thr(tBu)-OtBu 432 Aunque los péptidos del Cuadro 6 se ilustran con grupos protectores particulares, nótese que estos grupos pueden sustituirse con otros grupos protectores como se describe en la presente y/o uno o más de los grupos protectores mostrados pueden eliminarse. 6) Péptidos pequeños que tienen aminoácidos aromáticos o aminoácidos aromáticos separados por histidina en el centro En ciertas modalidades, los péptidos de esta invención están caracterizados por electrones p que están expuestos en el centro de la molécula, los cuales permiten la hidratación de la partícula, y que permiten que las partículas del péptido atrapen los lípidos oxidados proinflamatorios, tales como los hidroperóxidos de ácido graso y los fosfolípidos que contienen un producto de oxidación del ácido araquidónico en la posición sn-2. En ciertas modalidades, estos péptidos consisten de un mínimo de 4 aminoácidos y un máximo de aproximadamente 10 aminoácidos, de manera preferida (pero no necesariamente), con uno o más de los aminoácidos siendo el estereoisómero D del aminoácido, con los aminoácidos de extremo siendo hidrofóbicos debido a una cadena lateral hidrofóbica o debido a que los aminoácidos terminales portan uno o más grupos hidrofóbicos de bloqueo (por ejemplo, un termino N bloqueado con Boc-, Fmoc-, Nicotinilo- y lo similar, y un término C bloqueado con grupos (tBu)-OtBu y lo similar). En lugar de tener un aminoácido ácido o básico en el centro, estos péptidos tienen generalmente un aminoácido aromático en el centro, o tienen aminoácidos aromáticos separados por histidina en el centro del péptido.
Ciertos péptidos preferidos de esta invención incluyen, de manera no exclusiva, los péptidos mostrados en el Cuadro 7.
CUADRO 7 Ejemplos de péptidos que tienen aminoácidos aromáticos en el centro o aminoácidos aromáticos o dominios aromáticos separados por una o más histidinas X X2 X3 X4 Xs SEQ ID NO Boc-Lys(sBoc) Phe Trp Phe Ser(tBu) -OtBu 433 Boc-Lys(eBoc) Phe Trp Phe Thr(tBu) -OtBu 434 Boc-Lys(sBoc) Phe Tyr Phe Ser(tBu) -OtBu 435 Boc-Lys(sBoc) Phe Tyr Phe Thr(tBu) -OtBu 436 Boc-Lys(sBoc) Phe His Phe Ser(tBu) -OtBu 437 Boc-Lys(eBoc) Phe His Phe Thr(tBu) -OtBu 438 Boc-LysfeBoc) Val Phe Phe-Tyr Ser(tBu) -OtBu 439 Nicotinil-Lys(sBoc) Phe Trp Phe Ser(tBu; -OtBu 440 N icotinyl-Lys(sBoc) Phe Trp Phe Thr(tBu) -OtBu 441 Nicotinyl-Lys(sBoc) Phe Tyr Phe Ser(tBu) -OtBu 442 Nicotinyl-LysfcBoc) Phe Tyr Phe Thr(tBu) -OtBu 443 Nicotinyl-LysfcBoc) Phe His Phe Ser(tBu) -OtBu 444 Nicotinyl-Lys^Boc) Phe His Phe Thr(tBu) -OtBu 445 Boc-Leu Phe Trp Phe Thr(tBu) -OtBu 446 Boc-Leu Phe Trp Phe Ser(tBu) -OtBu 447 Aunque los péptidos del Cuadro 7 se ilustran con grupos protectores particulares, nótese que estos grupos pueden sustituirse con otros grupos protectores como se describe en la presente y/o uno o más de los grupos protectores mostrados pueden eliminarse. 7) Breve descripción de los tripéptidos y los tetrapéptidos Por claridad, varios tripéptidos y tetrapéptidos de esta invención generalmente a continuación en el Cuadro 8.
CUADRO 8 Estructura general de ciertos péptidos de esta invención cadena lateral Acido o Básico cadena lateral hidrofóbica o hidrofóbica o grupos grupos hidrofóbicos hidrofóbicos protectores protectores cadena lateral Básico Acido cadena lateral hidrofóbica o hidrofóbica o grupos grupos hidrofóbicos hidrofóbicos protectores protectores cadena lateral Acido Básico cadena lateral hidrofóbica o hidrofóbica o grupos grupos hidrofóbicos hidrofóbicos protectores protectores cadena lateral Acido o Básico Alifático cadena lateral hidrofóbica o hidrofóbica o grupos grupos hidrofóbicos hidrofóbicos protectores protectores cadena lateral Alifático Acido o Básico cadena lateral hidrofóbica o hidrofóbica o grupos grupos hidrofóbicos hidrofóbicos protectores protectores cadena lateral Acido o Básico Aromático cadena lateral hidrofóbica o hidrofóbica o grupos grupos hidrofóbicos hidrofóbicos protectores protectores cadena lateral Aromático Acido o Básico cadena lateral hidrofóbica o hidrofóbica o grupos grupos hidrofóbicos hidrofóbicos protectores protectores cadena lateral Aromático His Aromático cadena lateral hidrofóbica o hidrofóbica o grupos grupos hidrofóbicos hidrofóbicos protectores protectores En donde se desean péptidos más largos, X2 y X3 pueden representar dominios (por ejemplo, regiones de dos o más aminoácidos del tipo especificado), más que aminoácidos individuales. El Cuadro 8 pretende ser ilustrativo y no limitante. Utilizando las enseñanzas proporcionadas en la presente, pueden identificarse fácilmente otros péptidos adecuados. 8) Aminoácidos apareados y dipéptidos En ciertas modalidades, esta invención pertenece al descubrimiento de que ciertos pares de aminoácidos, administrados en conjunto uno o con el otro o enlazados a una forma de dipéptido, tienen una o más de las propiedades descritas en la presente. Así, sin estar apegados a una teoría particular, se cree que cuando los pares de aminoácidos se administran en conjunto uno con el otro, como se describe en la presente, son capaces de participar en, o inducir ia formación de micelas in vivo. De manera similar a los otros péptidos pequeños descritos en la presente, se cree que los pares de péptidos se asociarán ¡n vivo, y demuestran propiedades físicas que incluyen alta solubilidad en acetato de etilo (por ejemplo, mayor que aproximadamente 4 mg/mL), solubilidad en amortiguador acuoso a pH 7.0. Tras poner en contacto los fosfolípidos tales como la 1,2-Dimiristoil-sn-glicero-3-fosfocolina (DMPC) en un medio acuoso, se cree que los pares de aminoácidos inducen o participan en la formación de partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm (± 0.1 nm), y/o inducen o participan en la formación de bicapas apiladas con una dimensión de la bicapa del orden de 3.4 a 4.1 nm, con una separación entre las bicapas en la pila de aproximadamente 2 nm, y/o también inducen o participan en la formación de estructuras vesiculares de aproximadamente 38 nm. Además, se cree también que los pares de aminoácidos pueden presentar una o más de las siguientes propiedades fisiológicamente relevantes: 1. Convierten la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hacen la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria; 2. Disminuyen la actividad quimiotáctica del monocito inducida por la LDL generada por las células de la pared arterial; 3. Estimulan la formación y ciclización de la HDL pre-ß; 4. Elevan el colesterol de la HDL; y/o 5. Incrementan la actividad de la paraoxonasa de la HDL. Los pares de aminoácidos pueden administrarse como aminoácidos separados (administrados secuencial o simultáneamente, por ejemplo, en una formulación combinada), o pueden acoplarse covalentemente de manera directa o a través de un enlazante (por ejemplo, un enlazante de PEG, un enlazante de carbono, un enlazante ramificado, un enlazante de cadena lineal, un enlazante heterocíclico, un enlazante formado de un lípido derivado, etc.). En ciertas modalidades, los pares de aminoácidos están enlazados covalentemente a través de un enlace peptídico para formar un dipéptido. En varias modalidades, aunque los dipéptidos comprenderán típicamente dos aminoácidos, cada uno que porta un grupo protector unido, esta invención también contempla dipéptidos en donde sólo uno de los aminoácidos porta uno o más grupos protectores. Los pares de aminoácidos comprenden típicamente aminoácidos en donde cada aminoácido está unido a al menos un grupo protector (por ejemplo, un grupo hidrofóbico protector, como se describe en la presente). Los aminoácidos pueden estar en la forma D o en la forma L. En ciertas modalidades, en donde los aminoácidos que comprenden los pares no están unidos uno con el otro, cada aminoácido porta dos grupos protectores (por ejemplo, tal como las moléculas 1 y 2 en el Cuadro 9).
CUADRO 9 Pares de aminoácidos ilustrativos de esta invención Par de aminoácido/dipéptido 1. Boc-Arg-OtBu* . Boc-Glu-OtBu* . Boc-Phe-Arg-OtBu** . Boc-Glu-Leu-OtBu** . Boc-Arg-Glu-OtBu*** *Esto típicamente se administraría con un segundo aminoácido. *?? ciertas modalidades, estos dipéptidos se administrarían en conjunto uno con el otro. *** En ciertas modalidades, este péptido se administraría ya sea solo o en combinación con uno de los otros péptidos descritos en la presente.
I Los pares adecuados de aminoácidos pueden identificarse fácilmente proporcionando el par de aminoácidos protegidos y/o un dipéptido, y a continuación, seleccionando el par de aminoácidos/dipéptido para una o más de las propiedades físicas y/o fisiológicas descritas anteriormente. En ciertas modalidades, esta invención excluye los pares de aminoácidos y/o dipéptidos que comprenden ácido aspártico y fenilalanina. En ciertas modalidades, esta invención excluye los pares de aminoácidos y/o dipéptidos en los cuales un aminoácido es la (-)-N-[(trans-4-isopropilciclohexan)carbonil]-D-fenilalanina (nateglinida). En ciertas modalidades, los aminoácidos que comprenden el par, se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de un aminoácido ácido (por ejemplo, ácido aspártico, ácido glutámico, etc.), un aminoácido básico (por ejemplo, lisina, arginina, histidina, etc.), y un aminoácido no polar (por ejemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, triptofano, metionina, etc.). En ciertas modalidades, en donde el primer aminoácido es ácido o básico, el segundo aminoácido es no polar y en donde el segundo aminoácido es ácido o básico, el primer aminoácido es no polar. En ciertas modalidades, en donde el primer aminoácido es ácido, el segundo aminoácido es básico, y viceversa (véase, por ejemplo, el Cuadro 10). Pueden obtenerse combinaciones similares administrando pares de dipéptidos. Así, por ejemplo, en ciertas modalidades, las moléculas 3 y 4 en el Cuadro 9, se administrarían en conjunto una con la otra.
CUADRO 10 Ciertos pares peptídicos generalizados Primer aminoácido Segundo aminoácido 1. Acido Básico 2. Básico Acido 3. Acido No polar 4. No polar Acido 5. Básico No polar 6. No polar Básico Nótese que estos pares de aminoácidos/dipéptidos, pretenden ser ilustrativos y no limitantes. Utilizando las enseñanzas proporcionadas en la presente, pueden determinarse fácilmente otros pares de aminoácidos/dipéptidos.
D) Otras modificaciones de los péptidos Fue un descubrimiento sorprendente que los péptidos descritos en la presente, particularmente cuando incorporan uno o más aminoácidos D, retienen su actividad y pueden también administrarse oralmente. Además, esta administración oral resultó en una captación relativamente eficiente y una vida media en suero significativa, proporcionando por lo tanto un método eficaz para mitigar uno o más síntomas de la aterosclerosis u otras patologías caracterizadas por un proceso inflamatorio. Utilizando las enseñanzas proporcionadas en la presente, alguien con experiencia puede modificar de manera rutinaria los péptidos ilustrados, para producir otros péptidos similares de esta invención. Por ejemplo, pueden hacerse sustituciones de rutina conservadoras o semiconservadoras (por ejemplo, E por D) a los aminoácidos existentes. El efecto de varias sustituciones en la afinidad lipídica del péptido resultante puede predecirse utilizando el método computacional descrito por Palgunachari et al. (1996) Arteriosclerosis, Thrombosis, & Vascular Biology 16:328-338. Los péptidos pueden alargarse o acortarse siempre que se conserve la estructura de la hélice a de la clase A. Además, pueden hacerse sustituciones para volver el péptido resultante más similar a los péptidos producidos de manera endógena por las especies objeto. En ciertas modalidades, los péptidos de esta invención comprenden las formas "D" de los péptidos descritos en la Patente de E.U.A. 4,643,988, de manera más preferida, las formas "D" que tienen uno o ambos términos acoplados a grupos protectores. En ciertas modalidades, al menos 50% de los aminoácidos enantioméricos son de la forma "D", de manera más preferida, al menos 80% de los aminoácidos enantioméricos son de la forma "D", y de manera más preferida, al menos 90% o incluso todos los aminoácidos enantioméricos son aminoácidos de la forma "D". Aunque en ciertas modalidades, los péptidos de esta invención utilizan aminoácidos naturales o las formas D de aminoácidos naturales, también están contempladas sustituciones con aminoácidos no naturales (por ejemplo, sulfóxido de metionina, metionin metilsulfonio, norleucina, ácido epsilon-aminocaproico, ácido 4-aminobutanoico, ácido tetrahidroisoquinolin-3- carboxílico, ácido 8-aminocaprílico, ácido 4-aminobutírico, Lys(N(epsilon)-trifluoroacetilo), ácido a-aminoisobutírico y lo similar). Además de los péptidos descritos en la presente, también están contemplados en la presente los peptidomiméticos. Los análogos peptídicos se utilizan en la presente en la industria farmacéutica como fármacos no peptídicos con propiedades análogas a aquéllas del péptido patrón. Estos tipos de compuestos no peptídicos se denominan "miméticos peptídicos" o "peptidomiméticos" (Fauchere (1986) Adv. Drug Res. 15:29; Veber y Freidinger (1985) TINS p. 392; y Evans et al. (1987) J. Med. Class. 30:1229), y se desarrollan usualmente con la ayuda de modelado molecular computarizado. Los miméticos peptídicos que son estructuralmente similares a los péptidos terapéuticamente útiles, pueden utilizarse para producir un efecto terapéutico o profiláctico equivalente. Generalmente, los peptidomiméticos son estructuralmente similares a un polipéptido paradigma (por ejemplo, 4F, SEQ ID NO: 258, descrita en la presente), pero tienen uno o más enlaces peptídicos reemplazados opcionalmente por un enlace seleccionado del grupo que consiste de: -CH2NH-, -CH2S-, -CH2-CH2-, -CH=CH- (cis y trans), -COCH2-, -CH(OH)CH2-, -CH2SO-, etc., mediante los métodos conocidos en la técnica, y descritos además en las siguientes referencias: Spatola (1983) p. 267 en Chemistry and Biochemistry of Amino Acids, Peptides, and Proteins, B. Weinstein, eds., Marcel Dekker, New York,; Spatola (1983) Vega Data 1 (3) Peptide Backbone Modifications. (revisión general); Morley (1980) Trends Pharm Sci pp. 463-468 (revisión general); Hudson et al. (1979) Int J Pept Prot Res 14:177-185 (-CH2NH-, CH2CH2-); Spatola et al. (1986) Life Sci 38:1243-1249 (-CH2-S); Hann, (1982) J Chem Soc Parkin Trans 1307-314 (-CH-CH-, cis y trans); Almquist et al. (1980) J Med Chem. 23:1392-1398 (-COCH2-); Jennings-White et al. (1982) Tetrahedron Lett. 23:2533 (-COCH2-); Szelke, M. et al., European Appln. EP 45665 (1982) CA: 97:39405 (1982) (-CH(OH)CH2-); Holladay et al. (1983) Tetrahedron Lett 24:4401-4404 (-C(OH)CH2-); y Hruby (1982) Life Sci., 31 :189-199 (-CH2-S-)). Un enlace no peptídico particularmente preferido es -CH2NH-. Tales miméticos peptídicos pueden tener ventajas significativas con respecto a las modalidades polipeptídicas, incluyendo, por ejemplo: producción más económica, mayor estabilidad química, propiedades farmacológicas mejoradas (vida media, absorción, potencia, eficacia, etc.), antigenicidad reducida y otras. Además, las permutaciones circulares de los péptidos descritos en la presente o los péptidos restringidos (incluyendo los péptidos ciclizados) que comprende una secuencia de consenso o una variación de la secuencia de consenso sustancialmente idéntica, pueden generarse mediante métodos conocidos en la técnica (Rizo y Gierasch (1992) Ann. Rev. Biochem. 61 :387); por ejemplo, agregando residuos de cisteína internos, capaces de formar puentes intramoleculares de disulfuro que ciclan el péptido.
IX. Ensayos funcionales de ios péptidos Ciertos péptidos de esta invención se describen en la presente mediante varias fórmulas (por ejemplo, la Fórmula I anterior) y/o mediante secuencias particulares. En ciertas modalidades, sin embargo, los péptidos preferidos de esta invención están caracterizados por una o más de las siguientes propiedades funcionales: 1. Convierten la HDL proinflamatoria a la HDL antünflamatoria o hacen la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria; 2. Disminuyen la actividad quimiotáctica del monocito inducida por la LDL generada por las células de la pared arterial; 3. Estimulan la formación y la ciclización de la HDL pre-ß; 4. Elevan el colesterol de la HDL; y/o 5. Incrementan la actividad de la paraoxonasa de la HDL. Los péptidos específicos descritos en la presente, y/o los péptidos que corresponden a las varias fórmulas descritas en la presente, pueden probarse fácilmente para una o más de estas actividades conforme se desee. Los métodos para seleccionar cada una de estas propiedades funcionales, son bien conocidos por aquellos con experiencia en la técnica. Además, tales selecciones se ilustran en la presente en los Ejemplos. En particular, nótese que los ensayos para la actividad quimiotáctica del monocito, el colesterol de la HDL y la actividad de la paraoxonasa de la HDL se ilustran en la PCT/US01/26497 (WO 02/15923). Los ensayos para determinar las propiedades inflamatorias y/o antiinflamatorias de la HDL se realizaron como se describe a continuación.
A) Determinación de las propiedades inflamatorias/antiinflamatorias de la HDL 1) Ensayo de la actividad quimiotáctíca del monocito (MCA) Se prepararon lipoproteínas, cocultivos de la pared de la arteria humana y monocitos, y se determinó la actividad quimiotáctica del monocito (MCA) como se describió previamente (Van Lenten et al. (2002) Circulation, 106:1127-1132). La inducción de la MCA mediante la LDL control estándar, se determinó en la ausencia o presencia de la HDL objeto. Los valores en la ausencia de la HDL se normalizaron a 1.0. Los valores mayores que 1.0 después de la adición de la HDL, indicaron HDL proinflamatoria; los valores menores que 1.0 indicaron HDL antijnflamatoria. 2) Ensayo libre de células El ensayo libre de células fue una modificación de un método publicado previamente9, utilizando PEIPC como un agente que induce la fluorescencia. De manera breve, la HDL se aisló mediante el método de sulfato de dextrano. Se disolvió el "reactivo del colesterol de la HDL" de Sigma (No. de Catálogo 352-3), que contiene sulfato de dextrano y iones de magnesio en agua destilada (10.0 mg/ml). Cincuenta microlitos de solución de sulfato de dextrano se mezclaron con 500 µ? del plasma de prueba, y se incubaron a temperatura ambiente durante 5 minutos y se centrifugaron posteriormente a 8,000 g durante 10 minutos. El sobrenadante que contiene la HDL se utilizó en los experimentos después de la determinación del colesterol, utilizando un equipo de ensayo del colesterol (No. de Catálogo 2340-200, Thermo DMA Company, Arlington, TX). Reportamos previamente (Navab et al. (2001) J Lipid Res, 1308-1317), que la HDL aislada mediante este método, inactiva los fosfolípidos bioactivos a un grado similar en comparación con la HDL que se ha aislado mediante métodos ultracentrífugos convencionales. Para determinar las propiedades inflamatorias/antiinflamatorias de las muestras de HDL de pacientes y controles, se utilizó el cambio en la intensidad de la fluorescencia como resultado de la oxidación de la DCFH por PEIPC en ausencia o presencia de la HDL de prueba. DCFH-DA se disolvió en metanol fresco a 2.0 mg/ml y se incubó a temperatura ambiente y protegió de la luz durante 30 minutos, resultando en la liberación de DCFH. El ensayo se adaptó para analizar un gran número de muestras con un lector de placas. Se utilizaron para este propósito placas de microtitulación de poliestireno, negras, de fondo plano (Microfluor2, No. de Catálogo 14-245-176, Fisher). Diez µ? de solución de PEIPC (concentración final de 50 pg/ml), y 90 µ? de sobrenadante de sulfato de dextrano que contiene HDL (concentración final de 10 pg/ml de colesterol), se colocaron como alícuotas en placas de microtitulación y se mezclaron. A continuación, las placas se incubaron a 37°C en un rotador durante 1.0 horas.
A continuación, se agregaron diez µ? de solución de DCFH (0.2 mg/ml) a cada pozo, se mezclaron e incubaron durante 2 horas adicionales a 37°C con rotación. La fluorescencia se determinó posteriormente con un lector de placas (Spectra Max, Gemini XS; Molecular Devices) a una longitud de onda de excitación de 485 nm y una longitud de onda de emisión de 530 nm y un corte de 515 nm con la sensibilidad del fotomultiplicador ajustada a "media". Los valores para la variabilidad intra e interensayo fueron de 5.3 ± 1.7% y 7.1 ± 3.2%, respectivamente. Los valores en la ausencia de la HDL se normalizaron a 1.0. Los valores mayores que 1.0 después de la adición de la HDL de prueba, indicaron HDL proinflamatoria; los valores menores que 1.0, indicaron HDL antiinflamatoria. 3) Otros procedimientos Los niveles en plasma de la interleucina-6 (IL-6) y el factor a de necrosis del tumor (TNF-a), se determinaron mediante métodos publicados previamente (Scheidt-Nave et al. (2001) J Clin Endocrinol Metab., 86:2032-2042; Piguet et al. (1987) J Experiment Mee/., 166, 1280-1289). El colesterol total, los triglicéridos, el colesterol de la LDL, el colesterol de la HDL y la glucosa en plasma, se determinaron como se describió previamente (Navab et al. (1997) J Clin Invest, 99:2005-2019), utilizando equipos (Sigma), y los niveles de hs-CRP (Rifai et al. (1999) Clin Chem., 45:2136-2141) se determinaron utilizando un inmunoensayo de enzima intercalada de Immunodiagnostik (ALPCO Diagnostics, Windham, NH). La significancia estadística se determinó con un modelo I de ANOVA, y la significancia se definió como un valor de p < 0.05. 4) Selección de las propiedades físicas de los péptidos pequeños Fue un hallazgo sorprendente de esta invención, que varias propiedades físicas predicen la capacidad de los péptidos pequeños (por ejemplo, menos que 10 aminoácidos, de manera preferida, menos que 8 aminoácidos, de manera más preferida de aproximadamente 3 a aproximadamente 5 ó 6 aminoácidos) de esta invención, para volver la HDL más antiinflamatoria y para mitigar la aterosclerosis y/u otras patologías caracterizadas por una respuesta inflamatoria en un mamífero. Como se explicó en la presente, las propiedades físicas incluyen alta solubilidad en acetato de etilo (por ejemplo, mayor que aproximadamente 4 mg/mL), y solubilidad en amortiguador acuoso a pH 7.0. Tras poner en contacto los fosfolípidos tales como la 1 ,2-Dímiristoil-sn-glicero-3-fosfocolina (D PC) en un medio acuoso, los péptidos pequeños particularmente efectivos, forman partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm (± 0.1 nm), y/o forman bicapas apiladas con una dimensión de la bicapa del orden de 3.4 a 4.1 nm, con una separación entre las bicapas en la pila de aproximadamente 2 nm, y/o también forman estructuras vesiculares de aproximadamente 38 nm. En ciertas modalidades preferidas, los péptidos pequeños tienen un peso molecular de menos que aproximadamente 900 Da.
Virtualmente cualquier péptido pequeño puede seleccionarse fácilmente para una o más de estas propiedades, por ejemplo, como se describe en la presente en el Ejemplo 3. En realidad, pueden producirse fácilmente bibliotecas combinatorias de péptidos pequeños que contienen más que aproximadamente 104 ó 05, de manera más preferida más que aproximadamente 106 ó 107, y de manera más preferida más que aproximadamente 108 ó 109 péptidos pequeños, utilizando métodos bien conocidos por aquellos con experiencia en la técnica. Las bibliotecas peptídicas pueden ser bibliotecas aleatorias, o de manera alterna, en ciertas modalidades, las bibliotecas comprenderán péptidos pequeños hechos de acuerdo con una o más de las fórmulas proporcionadas en la presente. Las bibliotecas peptídicas pueden seleccionarse entonces fácilmente, por ejemplo, utilizando métodos de selección de alto desempeño para una o más de las propiedades físicas descritas anteriormente. Los péptidos positivos para la prueba en estos ensayos, probablemente tienen la capacidad de volver la HDL más antiinflamatoria y de mitigar la aterosclerosis y/u otras patologías caracterizadas por una respuesta inflamatoria en un mamífero. Nótese que los métodos de selección anteriores son meramente ilustrativos, y no pretenden ser limitantes. Utilizando las enseñanzas proporcionadas en la presente, pueden proporcionarse fácilmente otros ensayos para las propiedades funcionales deseadas de los péptidos.
X. Preparación del péptido A) Métodos generales de síntesis Los péptidos utilizados en esta invención pueden sintetizarse químicamente utilizando técnicas de síntesis química estándar de péptidos o, particularmente en donde el péptido no comprende residuos de aminoácidos "D", el péptido puede expresarse de manera recombinante fácilmente. En donde los polipéptidos "D" se expresan de manera recombinante, puede cultivarse un organismo hospedero (por ejemplo, células de bacterias, plantas, hongos, etc.), en un medio en donde uno o más de los aminoácidos se proporcionan al organismo exclusivamente en una forma D. Los péptidos expresados de manera recombinante en tal sistema, incorporan a continuación esos aminoácidos D. En ciertas modalidades, los aminoácidos D pueden incorporarse en los péptidos expresados de manera recombinante utilizando amino acil-tARN sintetasas modificadas que reconocen los aminoácidos D. En ciertas modalidades preferidas, los péptidos se sintetizan químicamente mediante cualquiera de varias técnicas de síntesis de péptidos en fase fluida o sólida, conocidas por aquellos con experiencia en la técnica. La síntesis en fase sólida en la cual el aminoácido C terminal de la secuencia está unida a un soporte insoluble, seguido por la adición secuencial de los aminoácidos restantes en la secuencia, es un método preferido para la síntesis química de los polipéptidos de esta invención. Las técnicas para la síntesis en fase sólida son bien conocidas para aquellos con experiencia en la técnica, y se describen, por ejemplo, por Barany y Merrifield (1963) Solid-Phase Peptide Synthesis; pp. 3-284 en The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology. Vol. 2: Special Methods in Peptide Synthesis, Parí A.; Merrifield et al. (1963) J. Am. Chem. Soc, 85:2149-2156, y Stewart et al. (1984) Solid Phase Peptide Synthesis, 2a ed. Pierce Chem. Co., Rockford, III. En una modalidad, los péptidos se sintetizan mediante el procedimiento de síntesis peptídica en fase sólida, utilizando una resina de benzhidrilamina (Beckman Bioproducts, 0.59 mmoles de Ní g de resina) como el soporte sólido. El aminoácido terminal COOH (por ejemplo, t-butilcarbonil-Phe), se une al soporte sólido a través de un grupo 4-(oximetil)fenacetilo. Este es un enlace más estable que el enlace de éster bencílico convencional, aunque el péptido terminado puede escindirse aún mediante hidrogenación. La hidrogenación por transferencia utilizando ácido fórmico como el donador de hidrógeno se utiliza para este propósito. Los protocolos detallados utilizados para la síntesis peptídica y los análisis de los péptidos sintetizados, se describen en un minisuplemento impreso que acompaña a Anantharamaiah et al. (1985) J. Biol. Chem., 260(16): 10248-10255. Nótese que en la síntesis química de los péptidos, particularmente los péptidos que comprenden aminoácidos D, la síntesis usualmente produce varios péptidos truncos, además del producto de longitud completa deseado. El procedimiento de purificación (por ejemplo, HPLC), resulta típicamente en la pérdida de una cantidad significativa del producto de longitud completa. Fue un descubrimiento de esta invención que, particularmente en la síntesis de un péptido D (por ejemplo, D-4), con el fin de evitar la pérdida en la purificación de la forma más larga, uno puede dializar y utilizar la mezcla, y eliminar por lo tanto la última purificación mediante HPLC. Tal mezcla pierde aproximadamente 50% de la potencia del producto altamente purificado (por ejemplo, por peso de producto de proteína), pero la mezcla contiene aproximadamente 6 veces más péptidos y por lo tanto mayor actividad total.
B) Incorporación de los aminoácidos de forma D Los aminoácidos D pueden incorporarse en una o más posiciones en el péptido, simplemente utilizando un residuo de aminoácidos derivado de una forma D en la síntesis química. Los residuos de la forma D para la síntesis peptídica en fase sólida, están comercialmente disponibles de varios proveedores (véase, por ejemplo, Advanced Chem Tech, Louisville; Nova Biochem, San Diego; Sigma, St Louis; Bachem California Inc., Torrance, etc.). Los aminoácidos de la forma D pueden omitirse completamente o incorporarse en cualquier posición en el péptido como se desee. Así, por ejemplo, en ciertas modalidades, el péptido puede comprender un solo aminoácido D, mientras que en otras modalidades, el péptido comprende al menos dos, generalmente al menos tres, más generalmente al menos cuatro, aún más generalmente al menos cinco, de manera preferida al menos seis, de manera más preferida al menos siete y de manera más preferida al menos ocho aminoácidos D. En las modalidades particularmente preferidas, esencialmente cada tercer aminoácido (enantiomérico) es un aminoácido de la forma D. En ciertas modalidades al menos 90%, de manera preferida al menos 90%, de manera más preferida al menos 95% de los aminoácidos enantioméricos son aminoácidos de la forma D. En una modalidad particularmente preferida, esencialmente cada aminoácido enantiomérico es un aminoácido de la forma D.
C) Métodos de síntesis en fase de solución En ciertas modalidades, los péptidos de esta invención pueden sintetizarse fácilmente utilizando métodos de fase en solución. Uno de tales esquemas de síntesis se ilustra en las Figuras 1 y 2. En este esquema, A, B, C y D representan aminoácidos en el péptido deseado. X representa un grupo protector -amino permanente. Y representa un grupo protector a-carboxilo permanente. Las letras m y n representan grupos protectores de la cadena lateral si los aminoácidos N y C terminales poseen grupos funcionales en la cadena lateral. Los grupos protectores de la cadena lateral o y p son grupos protectores que pueden eliminarse mediante un tratamiento, tal como hidrogenación por transferencia catalítica, utilizando formiato de amonio como el donador de hidrógeno (Anantharamaiah y Sivanandaiah (1977) Chem Soc. Perkin Trans. 490:1-5; y Babiker et al. (1978) J. Org. Chem. 44:3442-3444), bajo las condiciones (neutras) en las cuales los grupos protectores de la cadena lateral m y p y los grupos protectores -amino y oc-carboxilo son estables. HOBT-HBTU representa reactivos de condensación bajo los cuales se observa una racemización mínima. Al aminoácido activado X-A(m) en presencia de hexafluorofosfato de 1-hidroxibenzotr¡azol-2(H-Benzotriazol-1-il)-1 ,1 ,3,3-tetrametilamonio (HOBT-HBTU) y una pequeña cantidad de una amina terciaria, tal como diisopropiletilamina (DIEA) en DMF, se le agregaron 2 equivalentes de sal de DIEA de H2N-B(n)-COO", y se agitó durante la noche a temperatura ambiente. La reacción se dejó terminar con respecto al ácido carboxílico activado, utilizando un exceso de aminoácido en el cual el a-amino está libre y el carboxilo está temporalmente protegido como la sal de DIEA. La mezcla de reacción se acidifica utilizando ácido cítrico acuoso (10%) y se extrajo con acetato de etilo. En este procedimiento, el aminoácido libre permanece en el ácido cítrico. Después de lavar el acetato de etilo con agua, el ácido libre dipeptídico protegido N terminal, se extrae con una solución de bicarbonato de sodio al 5% y se acidifica. El ácido libre del dipéptido se extrajo con acetato de etilo, la capa orgánica se secó (Na2S04), y el solvente se evaporó para obtener el ácido libre del dipéptido. El tripéptido se obtiene también de una manera similar haciendo reaccionar el ácido libre del dipéptido con un aminoácido protegido de manera adecuada, en el cual el -amino está libre y el carboxilo está protegido temporalmente como una sal de DIEA. Para obtener el tetrapéptido, el aminoácido protegido con carboxilo de manera adecuada, se condensó utilizando HOBT-HBTU. Puesto que el tetrapéptido final es un péptido protegido, la mezcla de reacción después de la condensación se tomó en acetato de etilo y se lavó de manera extensa con bicarbonato acuoso (5%) y ácido cítrico (5%), y a continuación con agua. Estos lavados eliminarán el exceso de ácido libre y base libre y los reactivos de condensación. A continuación, el péptido protegido se precipita utilizando acetato de etilo (o éter), y éter de petróleo. El péptido libre protegido se somete a continuación a una hidrogenación por transferencia catalítica en la presencia de negro de paladio (negro Pd), preparado recientemente utilizando formiato de amonio como el donador de hidrógeno. Esta reacción puede llevarse a cabo en una condición casi neutra que no afecta así los grupos protectores de la cadena lateral, sensibles al ácido. Este procedimiento eliminará los grupos protectores en los aminoácidos B y C. Un ejemplo de este procedimiento se da a continuación utilizando la síntesis de la SEQ ID NO: 256. Nótese que este esquema de reacción pretende ser ilustrativo y no limitante. Utilizando las enseñanzas proporcionadas en la presente, otros esquemas de reacción adecuados serán conocidos por aquellos con experiencia en la técnica.
D) Grupos protectores En ciertas modalidades, uno o más grupos R en los aminoácidos constituyentes y/o los aminoácidos terminales, se bloquean con un grupo protector, de manera más preferida, un grupo hidrofóbico protector. Sin estar apegados a una teoría en particular, fue un descubrimiento de esta invención que el bloqueo, particularmente de los términos amino y/o carboxilo de los péptidos objeto de esta invención, mejora en gran medida el suministro oral e incrementa de manera significativa la vida media en suero. Una amplia gama de grupos protectores son adecuados para este propósito. Tales grupos incluyen, de manera no exclusiva, grupos acetilo, amida y alquilo con los grupos acetilo y alquilo siendo particularmente preferidos para la protección N terminal, y los grupos amida siendo preferidos para la protección carboxilo terminal. En ciertas modalidades, los grupos de bloqueo pueden actuar adicionalmente como una marca detectable (por ejemplo, N-metil antranililo). En ciertas modalidades particularmente preferidas, los grupos protectores incluyen, de manera no exclusiva, cadenas de alquilo tales como ácidos grasos, propionilo, formilo y otros. Los grupos protectores de carboxilo particularmente preferidos incluyen amidas, ésteres y grupos protectores que forman éter. En una modalidad preferida, se utiliza un grupo acetilo para proteger el término amino y se utiliza un grupo amida para proteger el término carboxilo. Estos grupos de bloqueo mejoran las tendencias para formar hélices de los péptidos. Ciertos grupos de bloqueo particularmente preferidos, incluyen grupos alquilo de varias longitudes, por ejemplo, grupos que tienen la fórmula: CH3-(CH2)n-CO-, en donde n varía de aproximadamente 3 a aproximadamente 20, de manera preferida de aproximadamente 3 a aproximadamente 16, de manera más preferida de aproximadamente 3 a aproximadamente 3, y de manera aún más preferida de aproximadamente 3 a aproximadamente 10. Otros grupos protectores incluyen, de manera no exclusiva N-rnetil antranililo, Fmoc, t-butoxicarbonilo (t-BOC), un grupo 9-fluorenacetilo, un grupo 1 -fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorenon-1-carboxílico, benciloxicarbonilo, Xantilo (Xan), Tritilo (Trt), 4-metiltritilo (Mtt), 4-metoxitritilo (Mmt), 4-metoxi-2,3,6-trimetil-bencensulfonilo (Mtr), Mesitilen-2-sulfonilo (Mts), 4,4-dimetoxibenzhidrilo (Mbh), Tosilo (Tos), 2,2,5,7,8-pentametil croman-6-sulfonilo (Pmc), 4-metilbencilo (MeBzl), 4-metoxibencilo (MeOBzl), Benciloxi (BzlO), Bencilo (Bzl), Benzoilo (Bz), 3-nitro-2-piridinsulfenilo (Npys), 1-(4,4-dimetil-2,6-diaxociclohexiliden)etilo (Dde), 2,6-diclorobencilo (2,6-DiCI-Bzl), 2-clorobenciloxicarbonilo (2-CI-Z), 2-bromobenciloxicarbonilo (2-Br-Z), Benciloximetilo (Bom), ciclohexiloxi (cHxO), t-butoximetilo (Bum), t-butoxi (tBuO), t-Butilo (tBu), Acetilo (Ac) y Trifluoroacetiio (TFA). Los grupos protectores/de bloqueo, son bien conocidos por aquellos con experiencia, así como los métodos para acoplar tales grupos a los residuos apropiados que comprenden los péptidos de esta invención (véase, por ejemplo, Greene et al., (1991) Proteciive Groups in Organic Synthesis, 2a ed., John Wiley & Sons, Inc. Somerset, N. J.). En una modalidad preferida, por ejemplo, la acetilación se logra durante la síntesis cuando el péptido está sobre la resina, utilizando anhídrido acético. La protección con amida puede lograrse mediante la selección de una resina apropiada para la síntesis. Durante la síntesis de los péptidos descritos en la presente en los ejemplos, se utilizó la resina de amida rink. Después de la terminación de la síntesis, los grupos protectores semipermanentes en los aminoácidos bifuncionales ácidos tales como Asp y GIu y los aminoácidos básicos Lys, hidroxilo de Tyr, se eliminan simultáneamente. Los péptidos liberados de tal resina utilizando el tratamiento ácido, salen con el término n protegido como acetilo y el carboxilo protegido como H2 y con la eliminación simultánea de todos los otros grupos protectores.
XI. Mejora de la captación/disponibilidad oral del péptido A) Uso de los aminoácidos D También fue un descubrimiento sorprendente de esta invención que cuando un péptido con todos los aminoácidos L (por ejemplo, que tiene de otra manera la secuencia de los péptidos de esta invención), se administra en conjunto con la forma D (es decir, un péptido de esta invención), la captación del péptido de la forma D se incrementa. Así, en ciertas modalidades, esta invención contempla el uso de combinaciones de péptidos en la forma D y la forma L en los métodos de esta invención. El péptido en la forma D y el péptido en la forma L pueden tener diferentes secuencias de aminoácidos, sin embargo, en las modalidades preferidas, ambos tienen secuencias de aminoácidos de los péptidos descritos en la presente, y en las modalidades aún más preferidas, tienen la misma secuencia de aminoácidos. También fue un descubrimiento de esta invención que los concatámeros de los péptidos de hélice anfipática de la clase A de esta invención, también son efectivos para mitigar uno o más síntomas de la aterosclerosis. Los monómeros que comprenden los concatámeros pueden acoplarse directamente juntos o unirse mediante un enlazante. En ciertas modalidades, el enlazante es un enlazante de aminoácido (por ejemplo, una prolina), o un enlazante peptídico (por ejemplo, Gly4Ser3) (SEQ ID NO: 448). En ciertas modalidades, el concatámero es un 2 mero, de manera más preferida un 3 mero, aún de manera más preferida un 4 mero, y de manera aún más preferida un 5 mero, 8 mero, 10 mero o 15 mero.
B) Alternando aminoácidos D y L Se descubrió que alternando los esterioisoformos de los aminoácidos en el centro del péptido, se permitiría la hidratación de la partícula y se permitiría mejor que las partículas peptídicas atraparan los lípidos oxidados proinflamatorios, tales como los hidroperóxidos de ácidos grasos y los fosfolípidos que contienen un producto de oxidación de ácido araquidónico en la posición sn-2. Así, en ciertas modalidades, los péptidos descritos en la presente, pueden sintetizarse para comprender de 4 aminoácidos a 10-15 aminoácidos, de manera preferida (pero no necesariamente), con los aminoácidos centrales (no terminales), siendo estereoisómeros D y L alternados de los aminoácidos. Los aminoácidos terminales pueden ser hidrofóbicos debido a una cadena lateral hidrofóbica o debido a que los aminoácidos portan grupos hidrofóbicos de bloqueo como se describe en la presente (por ejemplo, un término N está bloqueado con Boc-, Fmoc-, Nicotinilo- y lo similar, y el término C está bloqueado con (tBu)-OtBu y lo similar. Los ejemplos de tales péptidos se ¡lustran en el Cuadro 11.
CUADR0 11 Ciertos ejemplos de péptidos que contienen residuos D y L alternados en la región central Secuencia SEQ ID NO Boc-Lys(8Boc)-D-Arg-L-Asp-Ser(tBu)-OtBu 449 Boc-Lys(sBoc)-L-Arg-D-Asp-Ser(tBu)-OtBu/ 450 Nótese que aunque las secuencias de aminoácidos específicas se ¡lustran en el Cuadro 11 , pueden utilizarse aminoácidos D y L alternados en cualquiera de los péptidos descritos en la presente.
C) Péptidos derivados de biotina En ciertas modalidades, cualquiera de los péptidos descritos en la presente puede unirse (acoplarse covalentemente de manera directa o indirecta a través de un enlazante) a una o más biotinas. La biotina interactúa con el transportador multivitamínico intestinal dependiente del sodio, y facilita por lo tanto la captación y la biodisponibilidad de los péptidos administrados oralmente. La biotina puede acoplarse directamente o acoplarse a través de un enlazante o a través de una cadena lateral de un aminoácido, mediante cualquiera de varios medios convenientes, conocidos por aquellos con experiencia en la técnica. En ciertas modalidades, la biotina se une a los grupos amino de la lisina. Varios péptidos acoplados a la biotina se ilustran en el Cuadro 12.
CUADRO 12 Ejemplos de ciertos péptidos preferidos Secuencia SEQ ID NO Ac-Asp-Trp-Phe-Lys(s-biotin)-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys(s-biotina)- 451 Val-Ala-Glu-Lys(8-biotin)-Phe-Lys(e-biotin)-Glu-Ala-Phe-NH2 Ac-Asp-Trp-Phe-Lys(8-biot¡n)-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys(s-biotina)- 452 Val-Ala-Glu-Lys(s-biot¡n)-Phe-Lys-Glu-Ala-Phe-NH2 Ac-Asp-Trp-Phe-Lys-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys(E-biotina)-Val-Ala-Glu- 453 Lys(s-biotin)-Phe-Lys(s-biotin)-Glu-Ala-Phe-NH2 Ac-Asp-Trp-Phe-Lys(s-biotin)-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys-Val-Ala-Glu- 454 Lys(s-biotina)-Phe-Lys(s-biotina)-Glu-Ala-Phe-NH2 Ac-Asp-Trp-Phe-Lys(s-biotina)-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys(8-biotina)- 455 Val-Ala-Glu-Lys-Phe-Lys(s-biotina)-Glu-Ala-Phe-NH2 Ac-Asp-Trp-Phe-Lys(s-biotina)-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys-Val-Ala-Glu- 456 Lys-Phe-Lys(s-biotina)-Glu-AIa-Phe-NH2 Ac-Asp-Trp-Phe-Lys(8-biotina)-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys(8-biotina)- 457 Val-Ala-Glu-Lys-Phe-Lys-Glu-Ala-Phe-NH2 Ac-Asp-Trp-Phe-Lys-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys-Val-Ala-Glu-Lys(8- 458 biotina)-Phe-Lys(s-biotina)-Glu-Ala-Phe-NH2 Ac-Asp-Trp-Phe-Lys-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys(8-biotin)-Val-Ala-Glu- 459 Lys-Phe-l_ys8-biotina)-Glu-Ala-Phe-NH2 Ac-Asp-Trp-Phe-Lys-AIa-Phe-Tyr-Asp-Lys(s-biotina)-Val-Ala-Glu- 460 Lys(8-biotina)-Phe-Lys-Glu-Ala-Phe-NH2 Ac-Asp-Trp-Phe-Lys(s-biotina)-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys-Val-Ala-Glu- 461 Lys(s-biotina)-Phe-Lys-Glu-Ala-Phe-NH2 Ac-Asp-Trp-Phe-Lys(s-biotina)-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys-Val-Ala-Glu- 462 Lys-P e-Lys-GIu-Ala-P e-NH2 Ac-Asp-Trp-Phe-Lys-Ala-P e-Tyr-Asp-Lys(8-biotina)-Val-Ala-Glu- 463 Lys-Phe-Lys-Glu-Ala-Phe-NH2 Ac-Asp-Trp-Phe-Lys-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys-Val-Ala-Glu-Lys(s- 464 biotina)-Phe-Lys-Glu-Ala-Phe-NH2 Ac-Asp-Trp-Phe-Lys-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys-Val-Ala-Glu-Lys-Phe- 465 Lys(s-biotina)-Glu-Ala-Phe-NH2 XII. Formulaciones farmacéuticas Con el fin llevar a cabo los métodos de la invención, uno o más péptidos, o pares de aminoácidos, o miméticos peptídicos de esta invención se administran, por ejemplo, a un individuo diagnosticado como que tiene uno o más síntomas de la aterosclerosis, o como que está en riesgo de aterosclerosis. Los péptidos, o pares de aminoácidos o miméticos peptídicos, pueden administrarse en la forma "nativa" o si se desea, en la forma de sales, ésteres, amidas, profármacos, derivados y lo similar, con la condición de que la sal, éster, amida, profármaco o derivado sea farmacológicamente adecuado, es decir, efectivo en el método presente. Las sales, ésteres, amidas, profármacos y otros derivados de los agentes activos pueden prepararse utilizando los procedimientos estándar conocidos por aquellos con experiencia en la técnica de la química orgánica sintética y se describen, por ejemplo, por March (1992) Advanced Organic Chemistry; Reactions, Mechanisms and Structure, 4a Ed. N. Y. Wiley-lnterscience. Por ejemplo, las sales de adición de ácido se preparan a partir de la base libre utilizando métodos convencionales, que involucran típicamente la reacción con un ácido adecuado. Generalmente, la forma de la base del fármaco se disuelve en un solvente orgánico polar tal como metanol o etanol, y el ácido se agrega a la misma. La sal resultante se precipita o puede llevarse fuera de la solución mediante la adición de un solvente menos polar. Los ácidos adecuados para preparar las sales de adición de ácido, incluyen ácidos orgánicos, por ejemplo, acido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido málico, ácido masónico, ácido succínico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido mandélico, ácido metansulfónico, ácido etansulfónico, ácido p-toluensulfónico, ácido salicílico y lo similar, así como ácidos inorgánicos, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y lo similar. Una sal de adición de ácido puede reconvertirse a la base libre mediante el tratamiento con una base adecuada. Las sales de adición de ácido particularmente preferidas de los agentes activos de la presente, son sales de haluro, de manera que pueden prepararse utilizando los ácidos clorhídrico o bromhídrico. De manera inversa, la preparación de las sales básicas de los péptidos o miméticos se hace de una manera similar utilizando una base farmacéuticamente aceptable tal como hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, hidróxido de amonio, hidróxido de calcio, trimetilamina o lo similar. Las sales básicas particularmente preferidas incluyen sales de metal alcalino, por ejemplo, sal de sodio y sales de cobre. La preparación de ésteres involucra típicamente la funcionalización de los grupos hidroxilo y/o carboxilo, que pueden estar presentes dentro de la estructura molecular del fármaco. Los ésteres son típicamente derivados sustituidos con acilo de los grupos alcohol libres, es decir, porciones que se derivan de ácidos carboxílicos de la fórmula RCOOH, en donde R es alquilo, y de manera preferida es un alquilo inferior. Los ésteres pueden reconvertirse a los ácidos libres, si se desea, utilizando procedimientos convencionales de hidrogenólisis o hidrólisis. Las amidas y profármacos también pueden prepararse utilizando técnicas conocidas por aquellos con experiencia en la técnica, o descritas en la literatura pertinente. Por ejemplo, las amidas pueden prepararse a partir de ésteres, utilizando reactivos de amina adecuados, o pueden prepararse a partir de un anhídrido o de un cloruro ácido mediante la reacción con amoniaco o una alquil amina inferior. Los profármacos se preparan típicamente mediante la unión covalente a una porción que resulta en un compuesto que es terapéuticamente inactivo hasta que se modifica por el sistema metabólico del individuo. Los péptidos, o pares de aminoácidos, o miméticos identificados en la presente, son útiles para administración parenteral, tópica, oral, nasal (o inhalada de otra manera), rectal o local, tal como mediante aerosol o transdérmicamente, para el tratamiento profiláctico y/o terapéutico de la aterosclerosls y/o síntomas de la misma, y/o para una o más de las otras indicaciones identificadas en la presente. Las composiciones farmacéuticas pueden administrarse en una variedad de formas de dosificación unitarias, dependiendo del método de administración. Las formas de dosificación unitaria adecuadas incluyen, de manera no exclusiva polvos, tabletas, pildoras, cápsulas, grageas, supositorios, parches, rocíos nasales, inyectables, formulaciones implantables de liberación sostenida, complejos lipidíeos, etc. Los péptidos, y/o pares de aminoácidos, y/o miméticos peptídicos de esta invención se combinan típicamente con un portador farmacéuticamente aceptable (excipiente), para formar una composición farmacológica. Los portadores farmacéuticamente aceptables pueden contener uno o más compuestos fisiológicamente aceptables que actúan, por ejemplo, para estabilizar la composición o para incrementar o disminuir la absorción de los agentes activos. Los compuestos fisiológicamente aceptables pueden incluir, por ejemplo, carbohidratos, tales como glucosa, sucrosa o dextranos, antioxidantes, tales como ácido ascórbico o glutationa, agentes quelantes, proteínas de bajo peso molecular, mejoradores de la protección y la captación, tales como lípidos, composiciones que reducen la eliminación o la hidrólisis de los agentes activos o excipientes u otros estabilizantes y/o amortiguadores.
Otros compuestos fisiológicamente aceptables incluyen agentes humectantes, agentes emulsificantes, agentes de dispersión o conservadores que son particularmente útiles para evitar el crecimiento o acción de los microorganismos. Varios conservadores son bien conocidos e incluyen, por ejemplo, fenol y ácido ascórbico. Alguien con experiencia en la técnica apreciará que la elección de los portadores farmacéuticamente aceptables, incluyendo un compuesto fisiológicamente aceptable depende, por ejemplo, de la ruta de administración de los agentes activos y de las características fisicoquímicas particulares de los agentes activos. Los excipientes son de manera preferida estériles y generalmente están libres de materia indeseable. Estas composiciones pueden esterilizarse mediante técnicas de esterilización convencionales, bien conocidas. En las aplicaciones terapéuticas, las composiciones de esta invención se administran a un paciente que sufre de uno o más síntomas de la aterosclerosis o con riesgo de aterosclerosis en una cantidad suficiente para curar, o al menos evitar o detener parcialmente la enfermedad y/o sus complicaciones. Una cantidad adecuada para lograr esto, se define como una "dosis terapéuticamente efectiva". Las cantidades efectivas para este uso dependerán de la severidad de la enfermedad y del estado general de la salud del paciente. Las administraciones sencillas o múltiples de las composiciones pueden administrarse dependiendo de la dosificación y de la frecuencia conforme se requiera y tolere por el paciente. En cualquier caso, la composición proporcionará una cantidad suficiente de los agentes activos de la formulación de esta invención, para tratar de manera efectiva (aminorar uno o más síntomas) al paciente. La concentración del péptido, o par de aminoácidos, o mimético, puede variar ampliamente, y se seleccionará principalmente basándose en los volúmenes de fluido, viscosidad, peso corporal y lo similar, de acuerdo con el modo particular de administración seleccionado y las necesidades del paciente. Las concentraciones, sin embargo, se seleccionarán típicamente para proporcionar dosificaciones que varían de aproximadamente 0.1 ó 1 mg/kg/día a aproximadamente 50 mg/kg/día y algunas veces más altas. Las dosificaciones típicas varían de aproximadamente 3 mg/kg/día a aproximadamente 3.5 mg/kg/día, de manera preferida, de aproximadamente 3.5 mg/kg/día a aproximadamente 7.2 mg/kg/día, de manera más preferida, de aproximadamente 7.2 mg/kg/día a aproximadamente 1.0 mg/kg/día, y de manera aún más preferida de aproximadamente 11.0 mg/kg/día a aproximadamente 15.0 mg/kg/día. En ciertas modalidades preferidas, las dosificaciones varían de aproximadamente 10 mg/kg/día a aproximadamente 50 mg/kg/día. Se apreciará que tales dosificaciones pueden variar para optimizar un régimen terapéutico en un sujeto particular o grupo de sujetos. En ciertas modalidades preferidas, los péptidos, y/o los pares de aminoácidos, y/o los miméticos peptídicos de esta invención, se administran oralmente (por ejemplo, vía una tableta) o como un inyectable de acuerdo con los métodos estándar bien conocidos por aquellos con experiencia en la técnica. En otras modalidades preferidas, los péptidos, o pares de aminoácidos, también pueden suministrarse a través de la piel utilizando sistemas transdérmicos convencionales de suministro del fármaco, es decir, "parches" transdérmicos, en donde los agentes activos están contenidos típicamente dentro de una estructura laminada que sirve como un dispositivo de suministro del fármaco a ser fijado en la piel. En tal estructura, la composición del fármaco está contenida típicamente en una capa, o "depósito" subyacente a una capa de soporte superior. Se apreciará que el término "depósito" en este contexto, se refiere a una cantidad de "ingredientes activos" que está disponible finalmente para el suministro a la superficie de la piel. Así, por ejemplo, el "depósito" puede incluir los ingredientes activos en un adhesivo sobre una capa de soporte del parche, o en cualquiera de una variedad de diferentes formulaciones de matriz, conocidas por aquellos con experiencia en la técnica. El parche puede contener un solo depósito, o puede contener múltiples depósitos. En una modalidad, el depósito comprende una matriz polimérica de un material adhesivo por contacto farmacéuticamente aceptable, que sirve para fijar ei sistema a la piel durante el suministro del fármaco. Los ejemplos de materiales adhesivos por contacto para la piel adecuados incluyen, de manera no exclusiva, polietilenos, polisiloxanos, poliisobutilenos, poiiacrilatos, poliuretanos y lo similar. De manera alterna, el depósito que contiene el fármaco y el adhesivo por contacto para la piel están presentes como capas separadas y distintas con el adhesivo por debajo del depósito, el cuai, en este caso, puede ser una matriz polimérica como se describió anteriormente, o puede ser un depósito de líquido o hidrogel, o puede tomar alguna otra forma. La capa de soporte en estos laminados, que sirve como la superficie superior del dispositivo, funciona de manera preferida como un elemento estructural primario del "parche" y proporciona al dispositivo mucha de su flexibilidad. El material seleccionado para la capa de soporte es de manera preferida, sustancialmente impermeable a los agentes activos y a cualesquier otros materiales que estén presentes. Otras formulaciones preferidas para el suministro tópico del fármaco incluyen, de manera no exclusiva, ungüentos y cremas. Los ungüentos son preparaciones semisólidas, que están basadas típicamente en petrolato u otros derivados de petróleo. Las cremas que contienen el agente activo seleccionado son típicamente emulsiones líquidas o semisólidas viscosas, con frecuencia aceite en agua o agua en aceite. Las bases para crema son típicamente lavables con agua, y contienen una fase oleosa, un emulsificante y una fase acuosa. La fase oleosa, también llamada algunas veces la fase "interna", está comprendida generalmente de petrolato y un alcohol graso, tal como alcohol cetílico o estearílico; la fase acuosa usualmente, aunque no necesariamente, excede a la fase oleosa en volumen, y generalmente contiene un humectante. El emulsificante en una formulación de crema es generalmente un tensioactivo no iónico, aniónico, catiónico o anfotérico. La base para el ungüento o la crema específica a ser utilizada, como se apreciará por aquellos con experiencia en la técnica, es una que proporcionará el suministro óptimo del fármaco. Como con otros portadores o vehículos, la base para el ungüento debe ser inerte, estable, no irritante y no sensibilizante. A diferencia de las formulaciones peptídicas típicas, los péptidos, o pares de aminoácidos de esta invención que comprenden los aminoácidos de la forma D, pueden administrarse incluso oralmente, sin protección contra la proteólisis por el ácido estomacal, etc. Sin embargo, en ciertas modalidades, el suministro del péptido puede mejorarse por el uso de excipientes protectores. Esto se logra típicamente, ya sea mediante la complejación del polipéptido con una composición para volverlo resistente a la hidrólisis acida y enzimática o empacando el polipéptido en un portador resistente de manera apropiada, tal como un liposoma. Los medios para proteger los polipéptidos del suministro oral son bien conocidos en la técnica (véase, por ejemplo, la Patente de E.U.A. 5,391 ,377, que describe composiciones lipídicas para el suministro oral de agentes terapéuticos).
A) Formulaciones de liberación sostenida La vida media en suero elevada puede mantenerse mediante el uso de sistemas de "empaque" de la proteína de liberación sostenida. Tales sistemas de liberación sostenida son bien conocidos por aquellos con experiencia en la técnica. En una modalidad preferida, el sistema de suministro de microesferas biodegradables ProLease para proteínas y péptidos (Tracy (1998) Biotechnol. Prog. 14:108; Johnson et al. (1996), Nature Med. 2:795; Herbert et al. (1998), Pharmaceut. Res. 15, 357), un polvo seco compuesto de microesferas poliméricas biodegradables que contienen la proteína en una matriz polimérica, que puede combinarse como una formulación seca con o sin otros-agentes. El procedimiento de fabricación de las microesferas ProLease se diseñó específicamente para lograr una alta eficiencia de encapsulación de la proteína, mientras que se mantiene la integridad de la proteína. El procedimiento consiste de (i) la preparación de partículas de proteínas secadas por congelación de la proteína a granel mediante secado por congelación por aspersión de la solución del fármaco con excipientes estabilizantes, (ii) la preparación de una suspensión de fármaco-polímero seguido por la sonicación u homogeneización para reducir el tamaño de la partícula del fármaco, (¡ii) la producción de las microesferas de fármaco-polímero congeladas mediante atomización en nitrógeno líquido, (iv) la extracción del solvente polimérico con etanol, y (v) la filtración y secado a vacío para producir el producto en polvo seco final. El polvo resultante contiene la forma sólida de la proteína, la cual se dispersa de manera homogénea y rígida dentro de las partículas poliméricas porosas. El polímero más utilizado comúnmente en el procedimiento, el poli(láctida-co-glicólido) (PLG), es tanto biocompatible como biodegradable. La encapsulación puede lograrse a bajas temperaturas (por ejemplo, -40°C). Durante la encapsulación, la proteína se mantiene en el estado sólido en la ausencia de agua, reduciendo así al mínimo la movilidad conformacional inducida por el agua de la proteína, evitando las reacciones de degradación de la proteína, que incluyen agua como un reactivo, y evitando las interfases orgánicas-acuosas, en donde las proteínas pueden experimentar desnaturalización. Un procedimiento preferido utiliza solventes en los cuales la mayoría de las proteínas son insolubles, proporcionando así altas eficiencias de encapsulación (por ejemplo, mayores que el 95%). En otra modalidad, uno o más componentes de la solución pueden proporcionarse como un "concentrado", por ejemplo, en un recipiente de almacenamiento (por ejemplo, en un volumen premedido), listo para la disolución, o en una cápsula soluble lista para la adición a un volumen de agua.
B) Formulaciones combinadas En ciertos casos, uno o más péptidos, y/o pares de aminoácidos de esta invención, se administran en conjunto con uno o más agentes activos (por ejemplo, estatinas, bloqueadores beta, inhibidores de la ACE, lípidos, etc.). Los dos agentes (por ejemplo, el péptido y la estatina), pueden administrarse simultánea o secuencialmente. Cuando se administran secuencialmente, los dos agentes se administran de manera que ambos alcanzan una concentración fisiológicamente relevante durante un periodo de tiempo similar (por ejemplo, de manera que ambos agentes son activos en algún tiempo común).
En ciertas modalidades, ambos agentes se administran simultáneamente. En tales casos, puede ser conveniente proporcionar ambos agentes en una sola formulación combinada. Esto puede lograrse mediante una variedad de métodos bien conocidos por aquellos con experiencia en la técnica. Por ejemplo, en una formulación de tableta, la tableta puede comprender dos capas, una capa que comprende, por ejemplo, las estatinas, y la otra capa que comprende, por ejemplo, los péptidos. En una cápsula de liberación temporal, la cápsula puede comprender dos conjuntos de perlas de liberación temporal, una para los péptidos y una que contiene las estatinas. Las formulaciones y métodos de administración anteriores pretenden ser ilustrativos y no limitantes. Se apreciará que utilizando las enseñanzas proporcionadas en la presente, pueden considerarse fácilmente otras formulaciones y modos de administración adecuados.
XIII. Agentes farmacológicamente activos adicionales Los agentes farmacológicamente activos adicionales pueden suministrarse junto con los agentes activos primarios, por ejemplo, los péptidos, o pares de aminoácidos, de esta invención. En una modalidad, tales agentes incluyen, de manera no exclusiva, agentes que reducen el riesgo de eventos ateroscleróticos y/o complicaciones de los mismos. Tales agentes incluyen, de manera no exclusiva, bloqueadores beta, combinaciones diuréticas de bloqueadores beta y tiazida, estatinas, aspirina, inhibidores de la ace, inhibidores del receptor de la ace (ARB), y lo similar.
A) Estatinas Fue un descubrimiento sorprendente que la administración de uno o más péptidos de esta invención, "concurrentemente" con una o más estatinas, mejora sinergísticamente el efecto de las estatinas. Esto es, las estatinas pueden alcanzar una eficacia similar a una dosificación menor, obviando por lo tanto los efectos laterales adversos potenciales (por ejemplo, emaciación muscular), asociados con estos fármacos y/o causar que las estatinas sean de manera significativa, más antiinflamatorias a cualquier dosis dada. El principal efecto de las estatinas es disminuir los niveles de colesterol de la LDL, y disminuyen el colesterol de la LDL más que cualesquier otros tipos de fármacos. Las estatinas generalmente inhiben una enzima, la H G-CoA reductasa, la cual controla la velocidad de la producción del colesterol en el cuerpo. Estos fármacos típicamente disminuyen el colesterol haciendo más lenta la producción de colesterol y al incrementar la capacidad del hígado para eliminar el colesterol de la LDL que ya está en la sangre. Las grandes reducciones en el colesterol total y en el de la LDL producidas por estos fármacos, parecen resultar en grandes reducciones en los ataques cardiacos y en las muertes por enfermedades cardiacas. Gracias a su registro con seguimiento en estos estudios y su capacidad para disminuir el colesterol de la LDL, las estatinas se han vuelto los fármacos más frecuentemente prescritos cuando una persona necesita una medicina que disminuya el colesterol. Los estudios que utilizan estatinas han reportado niveles de colesterol de la LDL 20 a 60 por ciento menores en pacientes con estos fármacos. Las estatinas también reducen los niveles elevados de triglicéridos y producen un incremento modesto en colesterol de la HDL. Recientemente se ha apreciado que las estatinas tienen propiedades antünflamatorias que pueden no estar relacionadas directamente con el grado de disminución lipídica alcanzado. Por ejemplo, se ha encontrado que las estatinas disminuyen los niveles en plasma del marcador inflamatorio CRP, de manera relativamente independiente de los cambios en los niveles lipidíeos en plasma. Se ha encontrado que esta actividad antiinflamatoria de las estatinas es más o menos importante para predecir la reducción en los eventos clínicos inducidos por las estatinas que el grado de disminución de la LDL. Las estatinas se dan usualmente en una sola dosis en la comida de la tarde o al momento de acostarse. Estas medicaciones se dan con frecuencia en la tarde para tomar ventaja del hecho de que el cuerpo produce más colesterol en la noche que durante el día. Cuando se combinan con los péptidos descritos en la presente, el régimen de tratamiento combinado del péptido/estatina también se dará típicamente en la tarde. Las estatinas adecuadas son bien conocidas por aquellos con experiencia en la técnica. Tales estatinas incluyen, de manera no exclusiva atorvastatina (Lipitor®, Pfizer), simvastatina (Zocor®, Merck, pravastatina (Pravachol®), Bristol-Myers Squib®, fluvastatina (Lescol®, Novartis), lovastatina (Mevacor®, Merck), rosuvastatina (Crestor®, Astra Zeneca), y Pitavastatina (Sankyo), y lo similar.
La dosificación combinada de estatina/péptido puede optimizarse de manera rutinaria para cada paciente. Típicamente, las estatinas muestran resultados después de varias semanas, con un efecto máximo en 4 a 6 semanas. Antes del tratamiento combinado con una estatina y uno de los péptidos descritos en la presente, el médico obtendrá pruebas de rutina para iniciar una estatina, incluyendo los niveles de colesterol de la LDL y el colesterol de la HDL. Además, el médico también medirá las propiedades antünflamatorias de la HDL del paciente y determinará los niveles de CRP con un ensayo de alta sensibilidad. Después de aproximadamente 4 a 6 semanas de tratamiento combinado, el médico repetirá típicamente estas pruebas y ajustará la dosis de las medicaciones para alcanzar una disminución lipídica máxima y una actividad antiinflamatoria máxima.
B) Inhibidores de la absorción del colesterol En ciertas modalidades, uno o más péptidos y/o pares de aminoácidos, de esta invención, se administran a un sujeto en conjunto con uno o más inhibidores de la absorción del colesterol. Los péptidos pueden administrarse antes, después o simultáneamente con el inhibidor de la absorción del colesterol. En el último caso, el inhibidor de la absorción del colesterol puede proporcionarse como una formulación separada o como una formulación combinada con uno o más de los péptidos. Los inhibidores de la absorción del colesterol son bien conocidos por aquellos con experiencia en la técnica. Un importante inhibidor de la absorción del colesterol es el Ezetimibe, también conocido como 1-(4-fluorofenil)-3(R)-[3-(4-fluorofenil)-3(S)-hidroxipropil]-4(S)-(4-hidroxifenil)-2-azetidinona (disponible de Merck). El Ezetimibe reduce el colesterol en la sangre inhibiendo la absorción del colesterol por el intestino delgado.
C) Bloqueadores Beta Los bloqueadores beta adecuados incluyen, de manera no exclusiva, cardioseiectivos (bloqueadores beta 1 selectivos), por ejemplo, acebutolol (Sectral™), atenolol (Tenormin™), betaxolol (Kerlone™), bisoprolol (Zebeta™), metoprolol (Lopressor™), y lo similar. Los bloqueadores no selectivos adecuados (bloqueador beta 1 y beta 2 igualmente) incluyen, de manera no exclusiva, carteolol (Cartrol™), nadolol (Corgard™), penbutolol (Levatol™), pindolol (Visken™), carvedilol, (Coreg™), propranolol (Inderal™), timolol (Blockadren™), labetalol (Normodyne™, Trandate™), y lo similar. Las combinaciones diuréticas de bloqueador beta tiazida adecuadas incluyen, de manera no exclusiva, Lopressor HCT, ZlAC, Tenoretic, Corzide, Timolide, Inderal LA 40/25, Inderide, Normozide, y lo similar.
D) Inhibidores de la ACE Los inhibidores de la ace adecuados incluyen, de manera no exclusiva, captopril (por ejemplo, Capoten™ por Squibb), benazepril (por ejemplo, Lotensin™ por Novartis), enalapril (por ejemplo, Vasotec™ por Merck), fosinopril (por ejemplo, Monopril por Bristol-Myers), lisinopril (por ejemplo, Prinivil™ por Merck o Zestril™ por Astra-Zeneca), quinapril (por ejemplo, Accupril™ por Parke-Davis), ramipril (por ejemplo, Altace™ por Hoechst Marión Roussel, King Pharmaceuticals), imidapril, perindopril erbumina (por ejemplo, Aceon™ por Rhone-Polenc Rorer), trandolapril (por ejemplo, Mavik™ por Knoll Pharmaceutical), y lo similar. Los ARBS adecuados (Bloqueadores del Receptor de la Ace) incluyen de manera no exclusiva, losarían (por ejemplo, Cozaar™ por Merck), irbesartan (por ejemplo, Avapro™ por Sanofi), candesartan (por ejemplo, Atacand™ por Astra Merck), valsarían (por ejemplo, Diván™ por Novartis), y lo similar.
E) Formulaciones basadas en lípidos En ciertas modalidades, los péptidos y/o pares de aminoácidos, de esta invención, se administran en conjunto con uno o más lípidos. Los lípidos pueden formularse como un agente activo y/o como un excipiente para proteger y/o mejorar el transporte/captación de los péptidos o pueden administrarse de manera separada. Sin estar apegados a alguna teoría en particular, fue un descubrimiento de esta invención que la administración (por ejemplo, administración oral) de ciertos fosfolípidos puede incrementar de manera significativa las relaciones HDL/LDL. Además, se cree que ciertos fosfolípidos de longitud media son transportados por un procedimiento diferente que aquél involucrado en el transporte lipídico en general. Así, la coadministración de ciertos fosfolípidos de longitud media con los péptidos de esta invención, confiere varias ventajas: Protege a los fosfolípidos de la digestión o hidrólisis, mejoran la captación peptídica, y mejoran las relaciones HDULDL. Los lípidos pueden formarse en liposomas que encapsulan los polipéptidos de esta invención y/o pueden simplemente complejarse/mezclarse con los polipéptidos. Los métodos para hacer los liposomas y encapsular los reactivos son bien conocidos por aquellos con experiencia en la técnica (véase, por ejemplo, Martin and Papahadjopoulos (1982) J. Biol. Chem., 257: 286-288; Papahadjopoulos et al. (1991) Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 88: 460-11464; Huang et al. (1992) Cáncer Res. , 52: 6774-6781 ; Lasic et al. (1992) FEBS Lett., 312: 255-258., y lo similar). Los fosfolípidos preferidos para utilizarse en estos métodos tienen ácidos grasos que varían de aproximadamente 4 carbonos a aproximadamente 24 carbonos en las posiciones sn-1 y sn-2. En ciertas modalidades preferidas, los ácidos grasos son saturados. En otras modalidades preferidas, los ácidos grasos pueden ser no saturados. Varios ácidos grasos preferidos se ilustran en el Cuadro 13.
CUADRO 13 Acidos grasos preferidos en la posición sn-1 y/o sn-2 de los fosfolípidos preferidos para la administración de los polipéptidos D Carbono No. Nombre Común Nombre IUPAC 3:0 Propionoilo Trianoico 4:0 Butanoilo Tetranoico 5:0 Pentanoilo Pentanoico 6:0 Caproilo Hexanoico 7:0 Heptanoilo Heptanoico 8:0 CapriloNo Octanoico 9:0 Nonanoilo Nonanoico 10:0 Caprilo Decanoico 11 :0 Undecanoilo Undecanoico 12:0 Lauroilo Dodecanoico 13:0 Tridecanoilo Tridecanoico 14:0 Míristoilo Tetradecanoico 15:0 Pentadecanoilo Pentadecanoico 16:0 Palmitoilo Hexadecanoico 17:0 Heptadecanoilo Heptadecanoico 18:0 Estearoilo Octadecanoico 19:0 Nonadecanoilo Nonadecanoico 20:0 Araquidoilo Eicosanoico 21 :0 Heniecosanoilo Heniecosanoico 22:0 Behenoilo Docosanoico 23:0 Trucisanoilo Trocosanoico 24:0 Lignoceroilo Tetracosanoico 14:1 Miristoleoilo (9-cis) 14:1 Miristelaidoilo (9-trans) 16:1 Palmitoleoilo (9-cis) 16:1 Palmitelaidoilo (9-trans) Los ácidos grasos en estas posiciones pueden ser los mismos o diferentes. Los fosfolípidos particularmente preferidos tienen fosforiicolina en la posición sn-3.
XIV. Equipos En otra modalidad, esta invención proporciona equipos para aminorar uno o más síntomas de la aterosclerosis y/o para el tratamiento profiláctico de un sujeto (humano o animal) en riesgo de aterosclerosis y/o para estimular la formación y la ciclización de las partículas similares a la lipoproteína de densidad alta pre-beta y/o para inhibir uno o más de los síntomas de la osteoporosis. Los equipos comprenden, de manera preferida un recipiente que contiene uno o más de los péptidos y/o pares de aminoácidos y/o miméticos peptídicos de esta invención. El péptido y/o los pares de aminoácidos y/o el mimético peptídico puede proporcionarse en una formulación de dosificación unitaria (por ejemplo, supositorio, tableta, capsula oblonga, parche, etc.) y/o puede combinarse opcionalmente con uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables. El equipo puede, opcionalmente, comprender uno o más de otros agentes utilizados en el tratamiento de la enfermedad cardiaca y/o la aterosclerosis. Tales agentes incluyen, de manera no exclusiva, bloqueadores beta, vasodilatadores, aspirina, estatinas, inhibidores de la ace o inhibidores del receptor de la ace (ARB) y lo similar, por ejemplo, como se describió anteriormente. En ciertas modalidades preferidas, los equipos incluyen además, una estatina (por ejemplo, cerivastatina, atorvastatina, simvastatina, pravastatina, fluvastatina, lovastatina, rosuvastatina, pitavastatina, etc.) ya sea formulada de manera separada o en una formulación combinada con los péptidos. Típicamente, la dosificación de una estatina en tal formulación puede ser menor que la dosificación de una estatina prescrita típicamente sin el péptido sinergístico. Además, los equipos incluyen opcionalmente etiquetas y/o materiales con instrucciones que proporcionan direcciones (es decir, protocolos) para la práctica de los métodos o el uso de los "terapéuticos" o "profilácticos" de esta invención. Los materiales con instrucciones describen el uso de uno o más polipéptidos y/o pares de aminoácidos, de esta invención, para mitigar uno o más síntomas de la aterosclerosis y/o para evitar el inicio o el incremento de uno o más de tales síntomas en un individuo con riesgo de aterosclerosis y/o para estimular la formación y ciclización de partículas similares a la lipoproteína de densidad alta pre-beta y/o para inhibir uno o más síntomas de osteoporosis y/o mitigar uno o más síntomas de una patología caracterizada por una respuesta inflamatoria. Los materiales con instrucciones pueden mostrar también, opcionalmente, las dosificaciones/régimen terapéutico preferidos, las contraindicaciones y lo similar. Aunque los materiales con instrucciones comprenden típicamente materiales escritos o impresos, no están limitados a los mismos. Cualquier medio capaz de almacenar tales instrucciones y de comunicarlas a un usuario final, está contemplado por esta invención. Tales medios incluyen, de manera no exclusiva, medios de almacenamiento electrónico (por ejemplo, discos magnéticos, cintas, cartuchos, microcomponentes), medios ópticos (por ejemplo, CD ROM), y lo similar. Tales medios pueden incluir direcciones para sitios en Internet que proporcionen tales materiales con instrucciones.
EJEMPLOS Los siguientes ejemplos se ofrecen para ilustrar, y no limitar, la invención reclamada.
EJEMPLO 1 Evaluación de los péptidos pequeños para mediar los síntomas de la Aterosclerosis y otras patologías inflamatorias Los péptidos miméticos de la apo A-l descritos en la presente (véase, por ejemplo, el Cuadro 1) exhiben propiedades antiaterogénicas similares a la apo A-l en que eliminan las "moléculas de siembra" (por ejemplo, fosfolípidos oxidados tales como Ox-PAPC, POVPC, PGPC, y PEIPC, etc.), necesarios para que las células de la pared arterial oxiden la LDL y son similares a la apo A-l en que aminoraron la aterosclerosis en modelos de ratón. Los péptidos miméticos de la apo A-l (por ejemplo, D-4F, SEQ ID NO: 8), difieren de la apo A-l en que también son activos en una coincubación similar a la apo J (véase, por ejemplo, la USSN 10/120,508 y la PCT/US03/09988). Estos péptidos generalmente no tienen una homología de la secuencia sustancial con la apo A-I, pero tienen homología en su estructura helicoidal y en su capacidad para unirse a los lípidos. Los péptidos más pequeños descritos en la presente (véase, por ejemplo, los Cuadros 4-7 en la presente) son similares a la apoA-l nativa en que evitan la oxidación de la LDL y la actividad quimiotáctica del monocito inducida por la LDL en una preincubacion con células de la pared arterial, pero no en una coincubación (véase, por ejemplo, la Figura 3). El péptido descrito en la Figura 3 también fue activo in vivo (Figura 4). El tetrapéptido o D-4F (SEQ ID NO: 8) se agregó a 5 µg/ml al agua potable o no se agregó al agua potable de ratones apoE nulos (un modelo con ratones de la aterosclerosis humana). Después de 18 horas, los ratones se sangraron y sus lipoproteínas se aislaron mediante FPLC. La adición de las fracciones que contienen la HDL madura o las fracciones de la FPLC después de estas fracciones en donde se esperaría la HDL pre-beta (partículas que salen de la columna de FPLC justo antes del pico principal de la HDL; post-HDL) de ratones que recibieron agua potable sin el péptido, incrementó la actividad quimiotáctica del monocito inducida por una LDL control agregada a un cocultivo de las células de la pared arterial humana (Figura 4). En contraste, la adición de la HDL o las fracciones de la FPLC post-HDL de los ratones que recibieron el tetrapéptido o D-4F en su agua potable, disminuyó de manera significativa la actividad quimiotáctica del monocito inducida por la LDL, indicando que el tetrapéptido y el D-4F convirtieron estas lipoproteínas de un estado proinflamatorio a uno antiinflamatorio (Figura 4).
Como se muestra en la Figura 5, la LDL tomada de los ratones que recibieron el tetrapéptido o el D-4F, indujo de manera significativa menos actividad quimiotáctica del monocito que la LDL de ratones que no recibieron los péptidos, confirmando la actividad biológica del tetrapéptido D administrado oralmente. La Figura 6 demuestra que la HDL tomada 20 minutos o 6 horas después de la SEQ ID NO: 258 del Cuadro 4, sintetizada de aminoácidos D, que se instiló en los estómagos de los ratones apoE nulos mediante un tubo estomacal, se convirtió de proinflamatoria a antiinflamatoria y fue similar a aquélla de los ratones que recibieron el D-4F y fue bastante diferentes de los ratones que recibieron un péptido con los mismos aminoácidos D como en el D-4F, pero arreglados en tal manera que se evita la formación de una hélice anfipática de la clase A, y por lo tanto, volviendo al péptido incapaz de unirse a los lípidos (D-4F revuelto). La Figura 7 demuestra que a 20 minutos como a 6 horas después de la administración oral del D-4F o la SEQ ID NO: 258 sintetizada de aminoácidos D, la LDL de ratón fue menos capaz, de manera significativa, de inducir la actividad quimiotáctica del monocito, en comparación con la LDL tomada de ratones que recibieron el péptido D-4F revuelto. La Figura 8 demuestra que la adición de la SEQ ID NO: 238 en el Cuadro 4 (sintetizada de todos los aminoácidos D) al alimento de los ratones apoE nulos durante 18 horas, convirtió la HDL proinflamatoria de ratones apoE nulos a HDL antiinflamatoria.
La Figura 9 demuestra que in vitro, la SEQ ID NO: 258 en el Cuadro 4 fue diez veces más potente que la SEQ ID NO: 238. Como se muestra en la Figura 3, la SEQ ID NO: 238 a 125 µg/ml fue sólo ligeramente efectiva, mientras que como se muestra en la Figura 9, la SEQ ID NO: 258 fue altamente efectiva a 12.5 g ml en una preincubación in vitro. Los experimentos mostrados en la Figura 10 demuestran que la SEQ ID NO: 243, SEQ ID NO: 242, y SEQ ID NO: 256 del Cuadro 4, también fueron capaces de convertir la HDL proinflamatoria de ratones apoE nulos a HDL antiinflamatoria. La actividad de los péptidos particulares de esta invención es dependiente de las sustituciones de aminoácidos particulares, como se muestra en las Figuras 1 , 12 y 13. La SEQ ID NO: 254 es idéntica a la SEQ ID NO: 258, excepto que las posiciones de los aminoácidos de arginina y ácido glutámico están invertidas en la secuencia (es decir, la SEQ ID NO: 254 es Boc-Lys(sBoc)-Glu-Arg-Ser(tBu)-OtBu, mientras que la SEQ ID NO: 258 es Boc-Lys(sBoc)-Arg-Glu-Ser(tBu)-OtBu). Como un resultado de este aparentemente cambio menor, la SEQ ID NO: 254 es sustancialmente menos efectiva en estos ensayos que la SEQ ID NO: 258. Los experimentos descritos en las Figuras 11 y 12 demuestran que la SEQ ID NO: 258 del Cuadro 4 fue más efectiva para convertir la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria y en volver la LDL menos capaz de inducir la actividad quimiotáctica del monocito que la SEQ ID NO: 254 o la SEQ ID NO: 282. El Amiloide A en Suero (SAA) es un reactivo positivo en fase aguda en ratones, que es similar a la Proteína C Reactiva (CRP) en los humanos. Los datos en la 13 indican que este reactivo de fase aguda se redujo de manera significativa en el plasma después de la inyección de la SEQ ID NO: 258 y a un grado menor, no significativo, después de la inyección de la SEQ ID NO: 254 y 282. La Figura 14 demuestra que el péptido descrito en el Cuadro 4 como la SEQ ID NO: 258, cuando se sintetiza de todos los aminoácidos L y se da oralmente a ratones apoE nulos, convirtió la HDL proinflamatoria a antiinflamatoria e incrementó la actividad de la paraoxonasa en el plasma (Figura 15). Las Figuras 16, 17, 18 y 19 demuestran que el péptido descrito en el Cuadro 4, como la SEQ ID NO: 258, cuando se sintetiza de todos los aminoácidos D y dada oralmente a ratones apoE nulos, volvió la HDL antiinflamatoria (Figuras 16 y 17), reduciendo la actividad quimiotáctica del monocito inducida por la LDL (Figura 17) e incrementando el colesterol de la HDL en plasma (Figura 18) e incrementando la actividad de la paraoxonasa de la HDL (Figura 19). Estos datos también muestran que la SEQ ID NO: 238, cuando se sintetiza de todos los aminoácidos L y dada oralmente a ratones apoE nulos, no altera de manera significativa las propiedades inflamatorias de la HDL (Figuras 16 y 17), altera de manera significativa la actividad quimiotáctica del monocito inducida por la LDL (Figura 17), ni altera de manera significativa las concentraciones en plasma del colesterol de la HDL (Figura 18), ni altera de manera significativa la actividad de la paraoxonasa de la HDL (Figura 19). Además, estos datos muestran que cuando la SEQ ID NO: 238 del Cuadro 4 se sintetizó de todos los aminoácidos D y se dio oralmente a ratones apoE nulos, la HDL se volvió antiinflamatoria (Figuras 16 y 17), y redujo la actividad quimiotáctica del monocito inducida por la LDL (Figura 17), pero ningún cambio fue tan dramático como con la SEQ ID NO: 258. Además, a diferencia de la SEQ ID NO: 258, la SEQ ID NO: 238 del Cuadro 4, cuando se sintetiza de todos los aminoácidos D, no elevó las concentraciones en plasma del colesterol de la HDL (Figura 18) y no incrementó la actividad de la paraoxonasa de la HDL (Figura 19). Concluimos que la SEQ ID NO: 238 del Cuadro 4, cuando se sintetiza de aminoácidos L, no es efectiva cuando se da oralmente, pero es efectiva cuando se sintetiza de aminoácidos D, pero es sustancialmente menos efectiva que la SEQ ID NO: 258. Los datos presentados en la presente demuestran que la SEQ ID NO: 238, cuando se sintetiza de todos los aminoácidos L y es dada oralmente, generalmente es inefectiva, y cuando se sintetiza de todos los aminoácidos D, aunque es efectiva, es sustancialmente menos efectiva que la misma dosis de la SEQ ID NO: 258 sintetizada de todos los aminoácidos D, cuando se administra oralmente.
EJEMPLO 2 Los péptidos sinergizan la actividad de la estatina Las Figuras 20 y 21 muestran una sinergia muy dramática entre una estatina (pravastatina) y el D-4F en la aminoración de la aterosclerosis en ratones apoE nulos. Se sabe que los ratones son resistentes a las estatinas. Los ratones que recibieron pravastatina en su agua potable a 20 µg/ml consumieron una dosis de pravastatina igual a 175 mg por día para un humano de 70 Kg y los ratones que recibieron pravastatina en su agua potable a 50 µg/ml, consumieron una dosis de pravastatina igual a 437.5 mg por día para un humano de 70 Kg. Como se muestra en las Figuras 20 y 21 , estas dosis muy altas de pravastatina no fueron efectivas APRA aminorar las lesiones ateroscleróticas en los ratones apoE nulos. Como se muestra en las Figuras 20 y 21 , la adición del D-4F solo al agua potable de los ratones apoE nulos a concentraciones de 2 µ /m\ o 5 ug/ml, no redujo las lesiones ateroscleróticas. Estas dosis de D-4F serían equivalentes a las dosis de 17.5 mg por día y 43.75 mg por día, respectivamente, para un humano de 70 Kg. De manera notable, como se muestra en las Figuras 20 y 21 , la adición de las mismas concentraciones de pravastatina y D-4F junto con el agua potable de los ratones apoE nulos, anuló esencialmente la aterosclerosis en estos ratones. Esto indica un grado muy alto de sinergia entre una estatina (pravastatina) y el D-4F.
La Figura 22 muestra que la SEQ ID NO. 198 y la SEQ ID NO. 203 del Cuadro 4 fueron igualmente efectivas o incluso más efectivas que el D-4F en reducir el contenido de hidroperóxido lipídico de la LDL y la HDL en ratones apoE nulos. Estos datos son consistentes en que el D-4F y los péptidos descritos en esta solicitud actúan en parte secuestrando las "moléculas de siembra" necesarias para que la LDL induzca la reacción aterosclerótica inflamatoria. Tomados junto con los datos mostrados en las Figuras 3 a 19, es muy probable que los péptidos descritos en esta solicitud (por ejemplo, SEQ ID NO: 250, 198 y SEQ ID NO: 258 del Cuadro 4), sean tanto o más efectivos que el D-4F para aminorar la aterosclerosis.
EJEMPLO 3 Propiedades físicas de las moléculas orgánicas pequeñas novedosas (peso molecular <900 daltons) que predicen la capacidad para volver la HDL más antiinflamatoria v mitigar la aterosclerosis en un mamífero Fue un hallazgo sorprendente de esta invención que varias propiedades físicas predicen la capacidad de los péptidos pequeños de esta invención de volver la HDL más antiinflamatoria y de mitigar la aterosclerosis y/u otras patologías caracterizadas por una respuesta inflamatoria en un mamífero. Las propiedades físicas incluyen alta solubilidad en acetato de etilo (por ejemplo, mayor que aproximadamente 4 mg/mL), y solubilidad en amortiguador acuoso a pH 7.0. Tras poner en contacto los fosfolípidos tales como la 1,2-Dimiristoil-sn-glicero-3-fosfocoI¡na (DMPC), en un medio acuoso, los péptidos pequeños particularmente efectivos forman partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm (+ 0.1 nm), y/o forman bicapas apiladas con una dimensión de la bicapa del orden de 3.4 a 4.1 nm con una separación entre las bicapas en la pila de aproximadamente 2 nm, y/o también forman estructuras vesiculares de aproximadamente 38 nm. En ciertas modalidades preferidas, los péptidos pequeños tienen un peso molecular de menos que aproximadamente 900 Da. El efecto predictivo de estas propiedades físicas se ilustra mediante la comparación de dos secuencias: SEQ ID NO 254: Boc-Lys(eBoc)-Glu-Arg-Ser(tBu)-OtBu; y SEQ ID NO 258: Boc-Lys(£Boc)-Arg-Glu-Ser(tBu)-OtBu. Para evaluar la solubilidad en acetato de etilo, cada péptido se pesó y se agregó a un tubo de centrífuga y se agregó acetato de etilo (grado HPLC; residuo después de la evaporación <0.0001%), para dar una concentración de 10 mg/mL. Los tubos se sellaron, se sometieron a un vórtice y se mantuvieron a temperatura ambiente durante 30 minutos con un vórtice cada 10 minutos. Los tubos se centrifugaron a continuación durante 5 minutos 10,000 rpm y el sobrenadante se retiró a un tubo previamente pesado. El acetato de etilo se evaporó bajo argón y los tubos se pesaron para determinar la cantidad del péptido que estaba contenido en el sobrenadante. El por ciento del péptido agregado originalmente que se disolvió en el sobrenadante se muestra en el eje Y. Los datos son la media ± S.D. El control representa los tubos tratados de manera simulada; la SEQ ID NO 254 y la SEQ ID NO 258 se sintetizaron ambas de todos los aminoácidos D; la SEQ ID NO 250 se sintetizó de todos los aminoácidos L. Como se muestra en la Figura 23, la SEQ ID NO 258 es muy soluble en acetato de etilo, mientras que la SEQ ID NO 254 no lo es (ambas sintetizadas de todos los aminoácidos D). Además, los datos en la Figura 23 demuestran que la SEQ ID NO 250 [Boc-Phe-Arg-Glu-Leu-OtBu] (sintetizada de todos los aminoácidos L) es también muy soluble en acetato de etilo. A 1 mg/ml de una suspensión de DMPC en suero fisiológico amortiguado con fosfato (PBS), se le agregó desoxicolato al 10% hasta que se disolvió la DMPC. Se agregaron los péptidos, SEQ ID NO 258 o SEQ ID NO 254, (DMPC:péptido; 1:10; peso:peso) y la mezcla de reacción se dializó. Después de la diálisis, la solución permaneció clara con la SEQ ID NO 258, pero estaba turbia después de que se eliminó el desoxicolato mediante diálisis, en el caso de la SEQ ID NO 254. Las Figuras 24-26 demuestran que cuando la SEQ ID NO 258 se agregó a DMPC en un medio acuoso, se formaron partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm, se formaron bicapas lipídicas apiladas con una dimensión de la bicapa del orden de 3.4 a 4.1 nm, con una separación entre las bicapas en la pila de aproximadamente 2 nm, y también se formaron estructuras vesiculares de aproximadamente 38 nm. En particular, la Figura 24 muestra una micrografía electrónica preparada con tinción negativa y una amplificación de 147, 420x. Las flechas indican las partículas de la SEQ ID NO 258 que miden 7.5 nm (aparecen como pequeñas partículas blancas). Como se ilustra en la Figura 25, un péptido que comprende la SEQ ID NO 258 agregada a DMPC en un medio acuoso, forma partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm (flechas blancas), y bicapas apiladas de lípido-péptido (flechas rayadas apuntando a las líneas blancas en la pila cilindrica de discos) con una dimensión de la bicapa del orden de 3.4 a 4.1 nm, con una separación entre las bicapas (líneas negras entre las líneas blancas en la pila de discos) de aproximadamente 2 nm. La Figura 26 muestra que el péptido de la SEQ ID NO 258 agregado a DMPC en un medio acuoso, forma bicapas apiladas de lípido-péptido (flecha rayada) y estructuras vesiculares de aproximadamente 38 nm (flechas blancas). La Figura 27 muestra que la DMPC en un medio acuoso sin la SEQ ID NO 258 no forma partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm, o bicapas apiladas de lípido-péptido, ni estructuras vesiculares de aproximadamente 38 nm. El péptido de la SEQ ID NO 254 (que difiere del péptido de la SEQ ID NO 258 sólo en el orden de la arginina y el ácido glutámico con respecto a los términos amino y carboxi del péptido), no forma partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm, o bicapas apiladas de lípido-péptido, ni estructuras vesiculares de aproximadamente 38 nm bajo las condiciones como se describen en la Figura 24 (datos no mostrados). Así, el orden de la arginina y el ácido glutámico en el péptido, alteró dramáticamente su capacidad para interactuar con la DMPC y esto se predijo por la solubilidad en acetato de etilo (es decir, el péptido de la SEQ ID NO 258 fue altamente soluble en acetato de etilo y formó partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm, y bicapas apiladas de lípido-péptido, así como estructuras vesiculares de aproximadamente 38 nm, mientras que el péptido de la SEQ ID NO 254 fue poco soluble en acetato de etilo y no formó estas estructuras bajo las condiciones descritas en la Figura 24). Además del protocolo descrito en la Figura 24, se obtuvieron también resultados similares si la suspensión de DMPC en PBS se agregó al péptido de la SEQ ID NO 258 (DMPC:péptido; 1 :10; peso:peso) o al péptido de la SEQ ID NO 254 (DMPC:péptido; 1 : 0; peso:peso) y la mezcla se recicló entre justo por encima de la temperatura de transición de la DMPC (justo por encima de 50°C) y la temperatura ambiente, cada hora durante varios ciclos y a continuación se dejó a temperatura ambiente durante 48 horas (datos no mostrados). Las propiedades físicas del péptido de la SEQ ID NO 258 (pero no el péptido de la SEQ ID NO 254), indican que este péptido tiene propiedades antipáticas (es decir, es altamente soluble en acetato de etilo, es también soluble en amortiguador acuoso a pH 7.0 [datos no mostrados], e interactúa con la DMPC como se describió anteriormente). Fue un hallazgo sorprendente de esta invención que los péptidos que son altamente solubles en acetato de etilo, y también son solubles en amortiguador acuoso a 7.0, interactuaron con la DMPC para formar complejos lípido-péptido que son notablemente similares a las partículas nacientes de HDL formadas por la interacción de las células con apoA-l (Forte, et al. (1993) J. Lipid Res. 34: 317-324). El Cuadro 13 compara la interacción de la apoA-l humana libre de lípidos con las células CHO-C19 in vitro, con la interacción de la SEQ ID NO 258 con la DMPC, como se indica en las Figuras 4-7 anteriores.
CUADRO 13 Comparación de la interacción del péptido de la SEQ ID NO 258 con DMPC como se indica en las Figuras 24-27 anteriores, con la interacción de la apoA-l humana libre de lípidos que interactúa con las células CHO- C-19. como se describe en Forte et al. (1993) J. Lipid Res. 34: 317-324 Propiedad ApoA-l/Células SEQ ID NO 258/DMPC Característica Prominente Partículas discoidales Bicapas apiladas en apiladas en una forma cilindrica formación enrollada Dimensión de la bicapa 4.6 mm 3.4-4.1 mm Separación entre las 1.9 mm 2.0 mm partículas discoidales/bicapas Tamaño de las "Partículas 7.3 mm 7.5 mm Nacientes de HDL" Estructuras vasculares 34.7 mm 38 mm Así, los péptidos pequeños descritos en la presente son altamente solubles en acetato de etilo y también son solubles en amortiguadores acuosos a pH 7.0, interactúan con los lípidos (DMPC) similares a la apoA-l, que tiene un peso molecular de 28,000 Daltons.
Los modelos moleculares mostrados en las Figuras 28-32 demuestran las características espaciales de la SEQ ID NO 254 en comparación con la SEQ ID NO 258. Los modelos moleculares mostrados en las Figuras 28-32 indican que tanto el péptido de la SEQ ID NO 254 como el péptido de la SEQ ID NO 258, contienen porciones polares y no polares en cada molécula, pero hay diferencias espaciales en el arreglo de los componentes polares y no polares de las dos moléculas. Como resultado de las diferencias en el arreglo espacial de las moléculas, hay diferencias en la solubilidad de las dos moléculas en acetato de etilo (Figura 23) y en su interacción con la DMPC (Figuras 24-27). Los datos en las Figuras 33 a 35B demuestran que las propiedades físicas del péptido de la SEQ ID NO 254 versus el péptido de la SEQ ID NO 258, predicen la capacidad de estas moléculas de volver la HDL antiinflamatoria y de mitigar la aterosclerosis, cuando se dan oralmente a un mamífero. No se les dio a ratones hembra apoE nulos a la edad de 8 semanas adiciones a su dieta (Alimento) o recibieron 200 µg/gm de alimento de la SEQ ID NO 254 (+254) o 200 g/gm de alimento de la SEQ ID NO 258 (+258), ambas sintetizadas a partir de todos los aminoácidos D. Después de 15 semanas, los ratones se sangraron y su plasma fraccionado mediante FPLC y su HDL (mHDL) se probaron en un cocultivo de células de la pared arterial humana. Se agregó LDL humana estándar (a 100 µg mL de colesterol de la LDL) sola (LDL) o no se agregó (sin adición) o se agregó con 50 µg mL de HDL humana normal (hHDL) o 50 µg/mL de HDL de ratón (mHDL) a cocultivos de la pared arterial humana y la actividad quimiotáctica del monocito resultante se determinó y gráfico en el eje Y. La Figura 33 muestra que la HDL de ratones apoE nulos se volvió antiinflamatoria después de que los ratones se alimentaron con la SEQ ID NO 258 pero no después de la SEQ ID NO 254. Como se muestra en la Figura 34, el péptido de la SEQ ID NO 258, pero no el péptido de la SEQ ID NO 254, redujo de manera significativa la aterosclerosis en la raíz aórtica (seno aórtico) de los ratones apoE nulos descritos anteriormente. Las Figuras 35A y 35B demuestran que la SEQ ID NO 258 pero no la SEQ ID NO 254, también disminuyó de manera significativa la aterosclerosis en preparaciones en la superficie de las aortas. La Figura 23 demuestra que la solubilidad en acetato de etilo de la SEQ ID NO 250 sintetizada de todos los aminoácidos L (véase la Figura 23 anterior) predice de manera exacta la capacidad de esta molécula de aminorar la aterosclerosis en ratones apoE nulos. Así, las propiedades físicas de estos péptidos pequeños predicen de manera exacta la capacidad de los péptidos para aminorar la aterosclerosis en ratones apoE nulos. Mostramos así que los péptidos pequeños, típicamente con pesos moleculares de menos que aproximadamente 900 Daltons, que son altamente solubles en acetato de etilo (mayor que aproximadamente 4 mg/mL), y que también son solubles en amortiguador acuoso a pH 7.0, y que cuando de ponen en contacto con fosfolípidos tales como la 1 ,2-Dimiristoil-sn- i glicero-3-fosfocolina (DMPC), en un medio acuoso, forman partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm, y/o forman bícapas apiladas con una dimensión de la bicapa del orden de 3.4 a 4.1 nm, con una separación entre las bicapas en la pila de aproximadamente 2 nm, y/o también forman estructuras vesiculares de aproximadamente 38 nm, cuando se administran a un mamífero, vuelven la HDL más antiinflamatona y mitigan uno o más síntomas de la aterosclerosis y otras patologías caracterizadas por una respuesta inflamatoria. Se entiende que los ejemplos y las modalidades descritas en la presente son para propósitos ilustrativos únicamente y que se sugerirán varias modificaciones o cambios a la luz de los mismos, a las personas con experiencia en la técnica, y que se incluyen dentro del espíritu y sustancia de esta solicitud y el alcance de las reivindicaciones anexas. Todas las publicaciones, patentes y solicitudes de patente citadas en la presente, se incorporan como referencia en su totalidad para todos los propósitos.

Claims (1)

  1. NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES 1.- Un péptido que aminora uno o más síntomas de una condición inflamatoria, en donde el péptido: varía en longitud de 3 a aproximadamente 5 aminoácidos; es soluble en acetato de etilo a una concentración mayor que aproximadamente 4 mg/mL; es soluble en un amortiguador acuoso a pH 7.0; cuando se pone en contacto con un fosfolípido en un medio acuoso, forma partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm y forma bicapas apiladas con una dimensión de la bicapa del orden de 3.4 a 4.1 nm con una separación entre las bicapas en la pila de aproximadamente 2 nm; tiene un peso molecular menor que aproximadamente 900 daltons; convierte la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hace la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria; y no tiene la secuencia de aminoácidos Lys-Arg-Asp-Ser (SEO. ID NO: 238), en la cual Lys-Arg-Asp y Ser son todos aminoácidos L. 2. - El péptido de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado además porque el péptido protege un fosfolípido contra la oxidación por un agente oxidante. 3. - El péptido de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque el agente oxidante se selecciona del grupo que consiste de peróxido de hidrógeno, 13(S)-HPODE, 15(S)-HPETE, HPODE, HPETE, HODE y HETE. 4. - El péptido de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque el fosfolípido se selecciona del grupo que consiste de 1-palmitoil-2-araquidonoil-sn-glicero-3-fosforilcolina (PAPC), 1-estearoil-2-araqu¡donoil-sn-glicero-3-fosforilcolina (SAPC) y 1-estearoil-2-araquidonil-sn-glicero-3-fosforiletanolamina (SAPE). 5. - Un péptido que aminora uno o más síntomas de una condición inflamatoria, el péptido tiene la fórmula: X1-X2-X3n-X4, en donde: n es 0 ó 1 ; X1 es un aminoácido hidrofóbico y/o porta un grupo hídrofóbíco protector; X4 es un aminoácido hidrofóbico y/o porta un grupo hidrofóbico protector; y cuando n es 0: X2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de un aminoácido ácido, un aminoácido básico, y una histidina; cuando n es 1: X2 y X3 son de manera independiente un aminoácido ácido, un aminoácido básico, un aminoácido alifático o un aminoácido aromático, de manera que cuando X2 es un aminoácido ácido; X3 es un aminoácido básico, un aminoácido alifático o un aminoácido aromático; cuando X2 es un aminoácido básico; X3 es un aminoácido ácido, un aminoácido alifático, o un aminoácido aromático; y cuando X2 es un aminoácido alifático o aromático, X3 es un aminoácido ácido o un aminoácido básico; el péptido convierte la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hace la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria; y el péptido no tiene la secuencia de aminoácidos Lys-Arg- Asp-Ser (SEQ ID NO: 238), en la cual Lys-Arg-Asp y Ser son todos aminoácidos L. 6.- El péptido de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque n es 0. 7.- El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque X1 y X4 se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de alanina (Ala), valina (Val), leucina (Leu), isoleucina (lie), prolina (Pro) fenilalanina (Phe), triptofano (Trp), metionina ( et), serina (Ser), que porta un grupo hidrofóbico protector, beta-naftil alanina, alfa-naftil alanina, norleucina, ciclohexilalanina, treonina (Thr), que porta un grupo hidrofóbico protector, tirosina (Tyr), que porta un grupo hidrofóbico protector, lisina (Lys), que porta un grupo hidrofóbico protector, arginina (Arg), que porta un grupo hidrofóbico protector, ornitina (Orn), que porta un grupo hidrofóbico protector, ácido aspártico (Asp), que porta un grupo hidrofóbico protector, cisteína (Cys), que porta un grupo hidrofóbico protector, y ácido glutámico (Glu), que porta un grupo hidrofóbico protector. 8. - El péptido de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque: X1 se selecciona del grupo que consiste de Glu, Leu, Lys, Orn, Phe, Trp y norLeu; X2 se selecciona del grupo que consiste de Asp, Arg y Glu; y X4 se selecciona del grupo que consiste de Ser, Thr, He, Leu, Trp, Tyr, Phe y norLeu. 9. - El péptido de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque X1 se selecciona del grupo que consiste de Glu, Leu, Lys, Om, Phe, Trp y norLeu; X2 se selecciona del grupo que consiste de Lys, Arg y His; y X4 se selecciona del grupo que consiste de Asp, Arg y Glu. 10.- El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque X1 porta un grupo hidrofóbico protector. 11.- El péptido de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque el grupo hidrofóbico protector se selecciona del grupo que consiste de polietilenglicol (PEG), t-butoxicarbonilo (Boc), Fmoc, nicotinilo, OtBu, un grupo benzoilo, un acetilo (Ac), un carbobenzoxi, un éster metílico, etílico, propílico, butílico, pentíiico, hexílico, un N-metil antranililo, y un alquilo de 3 a 20 carbonos, amida, un grupo alquilo de 3 a 20 carbonos, un grupo 9-fluorenacetilo, un grupo 1-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorenon-1-carboxílico, benciloxicarbonilo (también llamado carbobenzoxi, mencionado anteriormente), Xantilo (Xan), Tritilo (Trt), 4-metiltritilo (Mtt), 4-metoxitritilo (Mmt), 4-metoxi-2,3,6-trimetil-bencensulfonilo (Mtr), Mesitilen-2-sulfonilo (Mts), 4,4-dimetoxibenzhidrilo (Mbh), Tosilo (Tos), 2,2,5, 7,8-pentametil croman-6-sulfonilo (Pmc), 4-metilbencilo (MeBzl), 4-metoxibencilo (MeOBzl), Benciloxi (BzlO), Bencilo (Bzl), Benzoilo (Bz), 3-nitro-2-piridinsu!fenilo (Npys), 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)etilo (Dde), 2,6-diclorobencilo (2,6-DiCI-Bzl), 2-clorobenciloxicarbonilo (2-CI-Z), 2-bromobenciloxicarbonilo (2-Br-Z), benciloximetilo (Bom), ciclohexiloxi (cHxO), t-butoximetilo (Bum), t-butoxi (tBuO), t-Butilo (tBu), trifluoroacetilo (TFA), éster 4[N-{1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociciohexiliden)-3-metildibutil)-amino}bencíl¡co (ODmab), éster -alílico (OAII), éster 2-fenilisopropílico (2-PhiPr), 1-[4,4-dimetil-2,6-dioxic¡clohex-1-il-¡den)etilo (Dde). 12. - El péptido de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado además porque el grupo hidrofóbico protector se selecciona del grupo que consiste de Boc, Fmoc, nicotinilo y OtBu. 13. - El péptido de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque X4 porta un grupo hidrofóbico protector. 14. - El péptido de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado además porque el grupo hidrofóbico protector se selecciona del grupo que consiste de polietilenglicol (PEG), t-butoxicarbonilo (Boc), Fmoc, nicotinilo, OtBu, un grupo benzoilo, un acetilo (Ac), un carbobenzoxi, un éster metílico, etílico, propílico, butílico, pentílico, hexílico, un N-metil antranililo, y un alquilo de 3 a 20 carbonos, amida, un grupo alquilo de 3 a 20 carbonos, un grupo 9-fluorenacetilo, un grupo 1-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorenon-1-carboxílico, benciloxicarbonilo (también llamado carbobenzoxi, mencionado anteriormente), Xantilo (Xan), Trifilo (Trt), 4-metiltritilo (Mtt), 4-metoxitritilo (Mmt), 4-metoxi-2,3,6-trimetil-bencensulfonilo (Mtr), Mesitilen-2-sulfonilo (Mts), 4,4-dimetoxibenzhidrilo (Mbh), Tosilo (Tos), 2,2,5,7,8-pentametil croman-6-sulfonilo (Pmc), 4-metilbencilo (MeBzl), 4-metoxibencilo (MeOBzl), Benciloxi (BzlO), Bencilo (Bzl), Benzoilo (Bz), 3-nitro-2-piridinsulfenilo (Npys), 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)etilo (Dde), 2,6-diclorobencilo (2,6-DiCI-Bzl), 2-clorobenciloxicarbonilo (2-CI-Z), 2-bromobenciloxicarbonilo (2-Br-Z), benciloximetilo (Bom), ciclohexiloxi (cHxO), t-butoximetilo (Bum), t-butoxi (tBuO), t-Butilo (tBu), trifluoroacetilo (TFA), éster 4[N-{1-(4,4-dimetil-2,6-dioxoc¡clohex¡l¡den)-3-metildibutil)-amino}bencílico (ODmab), éster a-alílico (QAII), éster 2-fenilisopropíl¡co (2-PhiPr), 1-[4,4-dimetil-2,6-dioxiciclohex-1-il-iden)etilo (Dde). 15.- El péptido de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado además porque el término N del péptido está bloqueado con un grupo protector seleccionado del grupo que consiste de Boc-, Fmoc- y Nicotinilo-. 16.- El péptido de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado además porque el término C del péptido está bloqueado con un grupo protector seleccionado del grupo que consiste de tBu y OtBu. 17. - El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque el péptido comprende la secuencia de aminoácidos de un péptido en el Cuadro 3. 18. - El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque el péptido es un péptido del Cuadro 3. 19 - El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque el péptido comprende al menos un aminoácido D. 20.- El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque el péptido comprende todos los aminoácidos D. 21. - El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque el péptido comprende alternar aminoácidos D y L. 22. - El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque el péptido comprende todos los aminoácidos L. 23. - El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque el péptido está mezclado con un excipiente farmacológicamente aceptable. 24. - El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque el péptido está mezclado con un excipiente farmacológicamente aceptable adecuado para la administración oral a un mamífero. 25. - El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque el polipéptido se proporciona como una formulación unitaria en un excipiente farmacéuticamente aceptable. 26. - El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque el polipéptido se proporciona como una formulación de liberación temporal. 27. - El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque el péptido protege un fosfolípido contra la oxidación por un agente oxidante. 28. - El péptido de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado además porque el agente oxidante se selecciona del grupo que consiste de peróxido de hidrógeno, 13(S)-HPODE, 15(S)-HPETE, HPODE, HPETE, HODE y HETE. 29. - El péptido de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado además porque el fosfolípido se selecciona del grupo que consiste de 1-palmitoil-2-araquidonoil-sn-glicero-3-fosforilcolina (PAPC), 1-estearoil-2-araquidonoil-sn-glicero-3-fosforilcolina (SAPC), 1 -estearoil-2-araquidonil-sn-glicero-3-fosforiletanolamina (SAPE). 30. - El péptido de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado además porque el péptido está acoplado a una biotina. 31.- El péptido de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque: n es 1; y X2 y X3 son de manera independiente un aminoácido ácido o un aminoácido básico, de manera que cuando X2 es un aminoácido ácido, X3 es un aminoácido básico y cuando X2 es un aminoácido básico, X3 es un aminoácido ácido. 32.- El péptido de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado además porque X1 y X4 se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de alanina (Ala), valina (Val), leucina (Leu), isoleucina (lie), prolina (Pro), fenilalanina (Phe), triptofano (Trp), metionina (Met), serina (Ser), que porta un grupo hidrofóbico protector, beta-naftil alanina, alfa-naftil alanina, norleucina, ciclohexilalanina, treonina (Thr), que porta un grupo hidrofóbico protector, tirosina (Tyr), que porta un grupo hidrofóbico protector, lisina (Lys), que porta un grupo hidrofóbico protector, arginina (Arg), que porta un grupo hidrofóbico protector, omitina (Orn), que porta un grupo hidrofobico protector, ácido aspártico (Asp), que porta un grupo hidrofobico protector, cisteína (Cys), que porta un grupo hidrofobico protector, y ácido glutámico (Glu), que porta un grupo hidrofobico protector. 33. - El péptido de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado además porque X2 y X3 se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de Asp, Glu, Lys, Arg y His. 34. - El péptido de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado además porque X2 y X3 se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de Asp, Arg y Glu. 35.- El péptido de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado además porque X1 porta un grupo hidrofobico protector. 36.- El péptido de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado además porque el grupo hidrofobico protector se selecciona del grupo que consiste de polietilenglicol (PEG), t-butoxicarbon¡lo (Boc), Fmoc, nicotinilo, OtBu, un grupo benzoilo, un acetilo (Ac), un carbobenzoxi, un éster metílico, etílico, propílico, butílico, pentílico, hexílico, un N-metil antranililo, y un alquilo de 3 a 20 carbonos, amida, un grupo alquilo de 3 a 20 carbonos, un grupo 9-fluorenacetilo, un grupo 1-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorenon-1-carboxílico, benciloxicarbonilo (también llamado carbobenzoxi, mencionado anteriormente), Xantilo (Xan), Trifilo (Trt), 4-metiltritilo (Mtt), 4-metoxitritilo (Mmt), 4-metoxi-2,3,6-trimetil-bencensulfonilo (Mtr), Mesitilen-2-sulfonilo (Mts), 4,4-dimetoxibenzhidrilo (Mbh), Tosilo (Tos), 2,2,5,7,8-pentametil croman-6-sulfonilo (Pmc), 4- metilbencilo (MeBzl), 4-metoxibenciIo (MeOBzl), Benciloxi (BzlO), Bencilo (Bzl), Benzoilo (Bz), 3-nitro-2-piridinsulfenilo (Npys), 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)etilo (Dde), 2,6-diclorobencilo (2,6-DiCI-Bzl), 2-clorobenciloxicarbonilo (2-CI-Z), 2-bromobenciloxicarboniIo (2-Br-Z), benciloximetilo (Bom), ciclohexiloxi (cHxO), t-butoximetilo (Bum), t-butoxi (tBuO), t-Butilo (tBu), trifluoroacetilo (TFA), éster 4[N-{1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)-3-metildibutil)-amino}bencíl¡co (ODmab), éster -alílico (OAII), éster 2-fenilisopropílico (2-PhiPr), 1-[4,4-dimetil-2,6-dioxiciclohex-1-il-iden)etilo (Dde). 37.- El péptido de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado además porque el grupo hidrofóbico protector se selecciona del grupo que consiste de Boc, Fmoc, nicotinilo y OtBu. 38.- El péptido de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado además porque X4 porta un grupo hidrofóbico protector. 39.- El péptido de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado además porque el grupo hidrofóbico protector se selecciona del grupo que consiste de polietilenglicol (PEG), t-butoxicarbonilo (Boc), Fmoc, nicotinilo, OtBu, un grupo benzoilo, un acetilo (Ac), un carbobenzoxi, un éster metílico, etílico, propílico, butílico, pentílico, hexílico, un N-metil antraniliio, y un alquilo de 3 a 20 carbonos, amida, un grupo alquilo de 3 a 20 carbonos, un grupo 9-fluorenacetilo, un grupo 1-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorenon-1-carboxílico, benciloxicarbonilo (también llamado carbobenzoxi, mencionado anteriormente), Xantilo (Xan), Tritilo (Trt), 4-metiltritilo (Mtt), 4-metoxitritilo (Mmt), 4-metoxi-2,3,6-trimetil-bencensulfonilo (Mtr), Mesitilen-2-sulfonilo (Mts), 4,4-dimetoxibenzhidrilo (Mbh), Tosilo (Tos), 2,2,5,7,8-pentametil croman-6-sulfonilo (Pmc), 4-metilbencilo ( eBzl), 4-metoxibencilo (MeOBzl), Benciloxi (BzlO), Bencilo (Bzl), Benzoilo (Bz), 3-nitro-2-piridinsulfenilo (Npys), 1-(4,4-dimetii-2,6-dioxociclohexiliden)eti!o (Dde), 2,6-diclorobencilo (2,6-DiCI-Bzl), 2-clorobenciloxicarbonilo (2-CI-Z), 2-bromobenciloxicarbonilo (2-Br-Z), benciloximetilo (Bom), ciclohexiloxi (cHxO), t-butoximetilo (Bum), t-butoxi (tBuO), t-Butilo (tBu), trifluoroacetilo (TFA), éster 4[N-{1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)-3-metildibut¡I)-amino}bencílico (ODmab), éster -alílico (OAII), éster 2-fenilisopropílico (2-PhiPr), l-^-dimetil^.e-dioxicidohex-l-il-¡den)et¡Io (Dde). 40 - El péptido de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado además porque el término N del péptido está bloqueado con un grupo protector seleccionado del grupo que consiste de Boc-, Fmoc- y Nicotinilo- 41 - El péptido de conformidad con la reivindicación 35, caracterizado además porque el término C del péptido está bloqueado con un grupo protector seleccionado del grupo que consiste de tBu y OtBu. 42.- El péptido de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado además porque el péptido comprende la secuencia de aminoácidos de un péptido en el Cuadro 4. 43. - El péptido de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado además porque el péptido es un péptido del Cuadro 4. 44. - El péptido de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado además porque el péptido comprende al menos un aminoácido D. 45. - El péptido de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado además porque el péptido comprende todos los aminoácidos D. 46. - El péptido de conformidad con la reivindicación 31 , caracterizado además porque el péptido comprende alternar aminoácidos D y L. 47. - El péptido de conformidad con la reivindicación 31 , caracterizado además porque el péptido comprende todos los aminoácidos L. 48. - El péptido de conformidad con la reivindicación 31 , caracterizado además porque el péptido está mezclado con un excipiente farmacológicamente aceptable. 49. - El péptido de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado además porque el péptido está mezclado con un excipiente farmacológicamente aceptable adecuado para la administración oral a un mamífero. 50.- El péptido de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado además porque el polipéptido se proporciona como una formulación unitaria en un excipiente farmacéuticamente aceptable. 51. - El péptido de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado además porque el polipéptido se proporciona como una formulación de liberación temporal. 52. - El péptido de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado además porque el péptido protege un fosfolípido contra la oxidación por un agente oxidante. 53. - El péptido de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado además porque el péptido está acoplado a una biotina. 54. - El péptido de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque: n es 1 ; y X2, X3 son de manera independiente, un aminoácido ácido, uno básico o uno alifático con uno de X2 o X3 que es un aminoácido ácido o básico, tal que: cuando X2 es un aminoácido ácido o básico, X3 es un aminoácido alifático; y cuando X3 es un aminoácido ácido o básico, X2 es un aminoácido alifático. 55.- El péptido de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado además porque X1 y X4 se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de alanina (Ala), valina (Val), leucina (Leu), isoleucina (He), prolina (Pro), fenilalanina (Phe), triptofano (Trp), metionina (Met), serina (Ser), que porta un grupo hidrofóbico protector, beta-naftil alanina, alfa-naftil alanina, norleucina, ciclohexilalanina, treonina (Thr), que porta un grupo hidrofóbico protector, tirosina (Tyr), que porta un grupo hidrofóbico protector, lisina (Lys), que porta un grupo hidrofóbico protector, arginina (Arg), que porta un grupo hidrofóbico protector, ornitina (Orn), que porta un grupo hidrofóbico protector, ácido aspártico (Asp), que porta un grupo hidrofóbico protector, cisteína (Cys), que porta un grupo hidrofóbico protector, y ácido glutámico (GIu), que porta un grupo hidrofóbico protector. 56. - El péptido de conformidad con la reivindicación 55, caracterizado además porque X2 y X3 se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de Asp, Arg, Lys, Leu, lie y GIu. 57. - El péptido de conformidad con la reivindicación 55, caracterizado además porque X1 porta un grupo hidrofóbico protector. 58. - El péptido de conformidad con la reivindicación 57, caracterizado además porque el grupo hidrofóbico protector se selecciona del grupo que consiste de polietilenglicol (PEG), t-butoxicarbonilo (Boc), Fmoc, nicotinilo, OtBu, un grupo benzoilo, un acetilo (Ac), un carbobenzoxi, un éster metílico, etílico, propílíco, butílico, pentíüco, hexílico, un N-metil antranililo, y un alquilo de 3 a 20 carbonos, amida, un grupo alquilo de 3 a 20 carbonos, un grupo 9-fluorenacetilo, un grupo 1-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorenon-1-carboxílico, benciloxicarbonilo (también llamado carbobenzoxi, mencionado anteriormente), Xantilo (Xan), Tritilo (Trt), 4-metiltritilo (Mtt), 4-metoxitritilo (Mmt), 4-metoxi-2,3,6-trimetil-bencensulfonilo (Mtr), Mesitilen-2-sulfoniIo (Mts), 4,4-dimetoxibenzhidrilo (Mbh), Tosilo (Tos), 2,2,5,7,8-pentametil croman-6-sulfonilo (Pmc), 4-metilbencilo (MeBzl), 4-metoxibencilo (MeOBzl), Benciloxi (BzlO), Bencilo (Bzl), Benzoilo (Bz), 3-nitro-2-piridinsulfenilo (Npys), 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)etilo (Dde), 2,6-diclorobencilo (2,6-DiCI-Bzl), 2- clorobenciloxicarbonilo (2-CI-Z), 2-bromobenciIoxicarbonilo (2-Br-Z), benciloximetilo (Bom), ciclohexiloxi (cHxO), t-butoximetilo (Bum), t-butoxi (tBuO), t-Butilo (tBu), trifluoroacetilo (TFA), éster 4[N-{1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohex¡l¡den)-3-metildibut¡l)-amino}bencílico (ODmab), éster c-alílico (OAII), éster 2-fenilisopropílico (2-PhiPr), 1-[4,4-dimetil-2,6-dioxiciclohex-1-il-iden)etilo (Dde). 59.- El péptido de conformidad con la reivindicación 57, caracterizado además porque el grupo hidrofóbico protector se selecciona del grupo que consiste de Boc, Fmoc, nicotinilo y OtBu. 60.- El péptido de conformidad con la reivindicación 57, caracterizado además porque X4 porta un grupo hidrofóbico protector. 61.- El péptido de conformidad con la reivindicación 60, caracterizado además porque el grupo hidrofóbico protector se selecciona del grupo que consiste de polietilenglicol (PEG), t-butoxicarbonilo (Boc), Fmoc, nicotinilo, OtBu, un grupo benzoilo, un acetilo (Ac), un carbobenzoxi, un éster metílico, etílico, propílico, butílico, pentílico, hexílico, un N-metil antranililo, y un alquilo de 3 a 20 carbonos, amida, un grupo alquilo de 3 a 20 carbonos, un grupo 9-fluorenacetilo, un grupo 1-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorenon-1-carboxílico, benciloxicarbonilo (también llamado carbobenzoxi, mencionado anteriormente), Xantilo (Xan), Trifilo (Trt), 4-metiltritilo (Mtt), 4-metoxitritilo (Mmt), 4-metoxi-2,3,6-trimetil-bencensulfonilo (Mtr), Mesitilen-2-sulfonilo (Mts), 4,4-dimetoxibenzhidrilo (Mbh), Tosilo (Tos), 2,2,5,7,8-pentametil croman-6-sulfonilo (Pmc), 4- metilbencilo (MeBzl), 4-metoxibencilo (MeOBzl), Benciloxi (BzlO), Bencilo (Bzl), Benzoilo (Bz), 3-nitro-2-piridinsulfenilo (Npys), 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)etilo (Dde), 2,6-diclorobencilo (2,6-DiCI-Bzl), 2-clorobenciloxicarbonilo (2-CI-Z), 2-bromobenciloxicarboniIo (2-Br-Z), benciloximetilo (Bom), ciclohexiloxi (cHxO), t-butoximetilo (Bum), t-butoxi (tBuO), t-Butilo (tBu), trifluoroacetilo (TFA), éster 4[N-{1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)-3-metildibutil)-am¡no}bencílico (ODmab), éster a-alílico (OAII), éster 2-fen¡l¡sopropíl¡co (2-PhiPr), 1-[4,4-dimetil-2,6-dioxiciclohex-1-il-iden)etilo (Dde). 62.- El péptido de conformidad con la reivindicación 57, caracterizado además porque el término N del péptido está bloqueado con un grupo protector seleccionado del grupo que consiste de Boc-, Fmoc- y Nicotinilo- 63. - El péptido de conformidad con la reivindicación 57, caracterizado además porque el término C del péptido está bloqueado con un grupo protector seleccionado del grupo que consiste de tBu y OtBu. 64. - El péptido de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado además porque el péptido comprende la secuencia de aminoácidos de un péptido en el Cuadro 5. 65.- El péptido de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado además porque el péptido es un péptido del Cuadro 5. 66. - El péptido de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado además porque el péptido comprende al menos un aminoácido D. 67. - El péptido de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado además porque el péptido comprende todos los aminoácidos D. 68. - El péptido de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado además porque el péptido comprende alternar aminoácidos D y L. 69. - El péptido de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado además porque el péptido comprende todos los aminoácidos L. 70. - El péptido de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado además porque el péptido está mezclado con un excipiente farmacológicamente aceptable. 71. - El péptido de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado además porque el péptido está mezclado con un excipiente farmacológicamente aceptable adecuado para la administración oral a un mamífero. 72. - El péptido de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado además porque el polipéptido se proporciona como una formulación unitaria en un excipiente farmacéuticamente aceptable. 73. - El péptido de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado además porque el polipéptido se proporciona como una formulación de liberación temporal. 74. - El péptido de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado además porque el péptido protege un fosfolípido contra la oxidación por un agente oxidante. 75. - El péptido de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado además porque el péptido está acoplado a una biotina. 76. - El péptido de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque: n es 1 ; y X2, X3 son de manera independiente, un aminoácido ácido, uno básico o uno aromático, con uno de X2 o X3 que es un aminoácido ácido o básico, tal que: cuando X2 es un aminoácido ácido o básico, X3 es un aminoácido aromático; y cuando X3 es un aminoácido ácido o básico, X2 es un aminoácido aromático. 77. - El péptido de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado además porque X1 y X4 se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de alanina (Ala), valina (Val), leucina (Leu), isoleucina (lie), prolina (Pro), fenilalanina (Phe), triptofano (Trp), metionina (Met), serina (Ser), que porta un grupo hidrofóbico protector, beta-naftil alanina, alfa-naftil alanina, norleucina, ciclohexilalanina, treonina (Thr), que porta un grupo hidrofóbico protector, tirosina (Tyr), que porta un grupo hidrofóbico protector, lisina (Lys), que porta un grupo hidrofóbico protector, arginina (Arg), que porta un grupo hidrofóbico protector, ornitina (Orn), que porta un grupo hidrofóbico protector, ácido aspártico (Asp), que porta un grupo hidrofóbico protector, cisteína (Cys), que porta un grupo hidrofóbico protector, y ácido glutámico (Glu), que porta un grupo hidrofóbico protector. 78. - El péptido de conformidad con la reivindicación 77, caracterizado además porque X2 y X3 se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de Asp, Arg, Glu, Trp, Tyr, Phe y Lys. 79. - El péptido de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado además porque X1 porta un grupo hidrofóbico protector. 80. - El péptido de conformidad con la reivindicación 79, caracterizado además porque el grupo hidrofóbico protector se selecciona del grupo que consiste de polietilenglicol (PEG), t-butoxicarbonilo (Boc), fmoc, nicotinilo, OtBu, un grupo benzoilo, un acetilo (Ac), un carbobenzoxi, un éster metílico, etílico, propílico, butílico, pentílico, hexílico, un N-metil antranililo, y un alquilo de 3 a 20 carbonos, amida, un grupo alquilo de 3 a 20 carbonos, un grupo 9-fluorenacetilo, un grupo 1-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorenon-1-carboxílico, benciloxicarbonilo (también llamado carbobenzoxi, mencionado anteriormente), Xantilo (Xan), Trifilo (Trt), 4-metiltritilo (Mtt), 4-metoxitritilo (Mmt), 4-metoxi-2,3,6-trimetil-bencensulfonilo (Mtr), mesitiien-2-sulfonilo (Mts), 4,4-dimetoxibenzhidrilo (Mbh), Tosilo (Tos), 2,2,5,7,8-pentametil croman-6-sulfonilo (Pmc), 4-metilbencilo ( eBzl), 4-metoxibencilo (MeOBzl), Benciloxi (BzlO), Bencilo (Bzl), Benzoilo (Bz), 3-nitro-2-piridinsulfenilo (Npys), 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)etilo (Dde), 2,6-diclorobencilo (2,6-DiCI-Bzl), 2-clorobenciloxicarbonilo (2-CI-Z), 2-bromobenciloxicarbonilo (2-Br-Z), benciloximetilo (Bom), ciclohexiloxi (cHxO), t-butoximetilo (Bum), t-butoxi (tBuO), t-Butilo (tBu), trifluoroacetilo (TFA), éster 4[N-{1-(4,4-dimetil-2,6- dioxociclohexiliden)-3-metildibut¡l)-am¡no}bencílico (ODmab), éster a-alílico (OAII), éster 2-fenil¡sopropílico (2-PhiPr), 1-[4,4-dimetil-2,6-dioxicicIohex-1-il-iden)etilo (Dde). 81. - El péptido de conformidad con la reivindicación 79, caracterizado además porque el grupo hidrofobico protector se selecciona del grupo que consiste de Boc, Fmoc, nicotinilo y OtBu. 82. - El péptido de conformidad con la reivindicación 79, caracterizado además porque X4 porta un grupo hidrofobico protector. 83. - El péptido de conformidad con la reivindicación 82, caracterizado además porque el grupo hidrofobico protector se selecciona del grupo que consiste de polietilenglicol (PEG), t-butoxicarbonilo (Boc), Fmoc, nicotinilo, OtBu, un grupo benzoilo, un acetilo (Ac), un carbobenzoxi, un éster metílico, etílico, propílico, butílico, pentílico, hexílico, un N-metil antranililo, y un alquilo de 3 a 20 carbonos, amida, un grupo alquilo de 3 a 20 carbonos, un grupo 9-fluorenacetilo, un grupo 1-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorenon-1-carboxílico, benciloxicarbonilo (también llamado carbobenzoxi, mencionado anteriormente), Xantilo (Xan), Tritilo (Trt), 4-metiltritilo (Mtt), 4-metoxitritilo (Mmt), 4-metoxi-2,3,6-trimetil-bencensulfonilo ( tr), esitilen-2-sulfonilo (Mts), 4,4-dimetoxibenzhidrilo (Mbh), Tosilo (Tos), 2,2,5,7,8-pentametil croman-6-sulfonilo (Pmc), 4-metilbencilo (MeBzI), 4-metoxibencilo (MeOBzl), Benciloxi (BzlO), Bencilo (Bzl), Benzoilo (Bz), 3-nitro-2-piridinsulfenilo (Npys), 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)etilo (Dde), 2,6-diclorobencilo (2,6-DiCI-Bzl), 2- clorobenciloxicarboniio (2-CI-Z), 2-bromobenc¡loxicarbon¡Io (2-Br-Z), benciloximetilo (Bom), ciclohexiloxi (cHxO), t-butoximetilo (Bum), t-butoxi (tBuO), t-Butilo (tBu), trifluoroacetilo (TFA), éster 4[N-{1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)-3-metildibutil)-amino}bencilico (ODmab), éster a-alílico (OAII), éster 2-fenil¡sopropíl¡co (2-PhiPr), 1-[4,4-dimetil-2,6-dioxicicIohex-1-il-iden)etilo (Dde). 84. - El péptido de conformidad con la reivindicación 79, caracterizado además porque el término N del péptido está bloqueado con un grupo protector seleccionado del grupo que consiste de Boc-, Fmoc- y Nicotinilo- 85. - El péptido de conformidad con la reivindicación 79, caracterizado además porque el término C del péptido está bloqueado con un grupo protector seleccionado del grupo que consiste de tBu y OtBu. 86. - El péptido de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado además porque el péptido comprende la secuencia de aminoácidos de un péptido en el Cuadro 6. 87. - El péptido de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado además porque el péptido es un péptido del Cuadro 6. 88. - El péptido de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado además porque el péptido comprende al menos un aminoácido D. 89. - El péptido de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado además porque el péptido comprende todos los aminoácidos D. 90.- El péptido de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado además porque el péptido comprende alternar aminoácidos D y L. 91- El péptido de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado además porque el péptido comprende todos los aminoácidos L. 92. - El péptido de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado además porque el péptido está mezclado con un excipiente farmacológicamente aceptable. 93. - El péptido de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado además porque el péptido está mezclado con un excipiente farmacológicamente aceptable adecuado para la administración oral a un mamífero. 94. - El péptido de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado además porque el polipéptido se proporciona como una formulación unitaria en un excipiente farmacéuticamente aceptable. 95. - El péptido de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado además porque el polipéptido se proporciona como una formulación de liberación temporal. 96. - El péptido de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado además porque el péptido protege un fosfolípido contra la oxidación por un agente oxidante. 97. - El péptido de conformidad con la reivindicación 76, caracterizado además porque el péptido está acoplado a una biotina. 98. - Un péptido que aminora uno o más síntomas de una condición inflamatoria, el péptido tiene la fórmula: X -X2-X3-X4-X5, en donde: X1 es un aminoácido hidrofóbico y/o porta un grupo hidrofóbico protector; X5 es un aminoácido hidrofóbico y/o porta un grupo hidrofóbico protector; y X2, X3, y X4 son aminoácidos aromáticos o histidina seleccionados de manera independiente; y el péptido convierte la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hace la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria. 99. - El péptido de conformidad con la reivindicación 98, caracterizado además porque X1 y X5 se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de alanina (Ala), valina (Val), leucina (Leu), ¡soleucina (lie), prolina (Pro), fenilalanina (Phe), triptofano (Trp), metionina (Met), fenilalanina (Phe), triptofano (Trp), metionina (Met), serina (Ser), que porta un grupo hidrofóbico protector, beta-naftil alanina, alfa-naftil alanina, norleucina, ciclohexilalanina, treonina (Thr), que porta un grupo hidrofóbico protector, tirosina (Tyr), que porta un grupo hidrofóbico protector, lisina (Lys), que porta un grupo hidrofóbico protector, arginina (Arg), que porta un grupo hidrofóbico protector, ornitina (Orn), que porta un grupo hidrofóbico protector, ácido aspártico (Asp), que porta un grupo hidrofóbico protector, cisteína (Cys), que porta un grupo hidrofóbico protector, y ácido glutámico (Glu), que porta un grupo hidrofóbico protector. 100. - El péptido de conformidad con la reivindicación 99, caracterizado además porque X2, X3, y X4 se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de Phe, Val, Trp, Tyr y His. 101. - El péptido de conformidad con la reivindicación 98, caracterizado además porque X1 porta un grupo hidrofóbico protector. 102. - El péptido de conformidad con la reivindicación 101, caracterizado además porque el grupo hidrofóbico protector se selecciona del grupo que consiste de polietllenglicol (PEG), t-butoxicarbonilo (Boc), Fmoc, nicotinilo, OtBu, un grupo benzoilo, un acetilo (Ac), un carbobenzoxi, un éster metílico, etílico, propílico, butílico, pentílico, hexílico, un N-metil antranililo, y un alquilo de 3 a 20 carbonos, amida, un grupo alquilo de 3 a 20 carbonos, un grupo 9-fluorenacetilo, un grupo 1-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorenon-1-carboxílico, benciloxicarbonilo (también llamado carbobenzoxi, mencionado anteriormente), Xantilo (Xan), Tritilo (Trt), 4-metiltritilo (Mtt), 4-metoxitritilo (Mmt), 4-metoxi-2,3,6-trimetil-bencensulfonilo (Mtr), Mesitilen-2-sulfonilo (Mts), 4,4-dimetoxibenzhidrilo (Mbh), Tosilo (Tos), 2,2,5,7,8-pentametil croman-6-sulfonilo (Pmc), 4-metilbencilo (MeBzl), 4-metoxibencilo (MeOBzl), Benciloxi (BzlO), Bencilo (Bzl), Benzoilo (Bz), 3-nitro-2-piridinsulfenilo (Npys), 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)etilo (Dde), 2,6-diclorobencilo (2,6-DiCI-Bzl), 2-clorobenciloxicarbonilo (2-CI-Z), 2-bromobenciloxicarbonilo (2-Br-Z), benciloximetilo (Bom), ciclohexiloxi (cHxO), t-butoximetilo (Bum), t-butoxi (tBuO), t-Butilo (tBu), trifluoroacetilo (TFA), éster 4[N-{1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexil¡den)-3-metildibutil)-amino}bencílico (ODmab), éster a-alíiico (OAII), éster 2-fenilisopropílico (2-PhiPr), 1-[4,4-dimetil-2,6-dioxiciclohex-1-il-iden)etilo (Dde). 103. - El péptido de conformidad con la reivindicación 101, caracterizado además porque el grupo hidrofóbico protector se selecciona del grupo que consiste de Boc, Fmoc, nicotinilo y OtBu. 104. - El péptido de conformidad con la reivindicación 101, caracterizado además porque X5 porta un grupo hidrofóbico protector. 105. - El péptido de conformidad con la reivindicación 104, caracterizado además porque el grupo hidrofóbico protector se selecciona del grupo que consiste de polietilenglicol (PEG), t-butoxicarbonilo (Boc), Fmoc, nicotinilo, OtBu, un grupo benzoilo, un acetilo (Ac), un carbobenzoxi, un éster metílico, etílico, propílico, butílico, pentílico, hexílico, un N-metil antranililo, y un alquilo de 3 a 20 carbonos, amida, un grupo alquilo de 3 a 20 carbonos, un grupo 9-fluorenacetilo, un grupo 1 -fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorenon-1-carboxílico, benciloxicarbonilo (también llamado carbobenzoxi, mencionado anteriormente), Xantilo (Xan), Tritilo (Trt), 4-metiltritilo (Mtt), 4-metoxitritilo (Mmt), 4-metoxi-2,3,6-trimetil-bencensulfonilo (Mtr), Mesitilen-2-sulfonilo (Mts), 4,4-dimetoxibenzhidrilo (Mbh), Tosilo (Tos), 2,2,5,7,8-pentametil croman-6-sulfonilo (Pmc), 4-metilbencilo (MeBzl), 4-metoxibencilo (MeOBzl), Benciloxi (BzlO), Bencilo (Bzl), Benzoilo (Bz), 3-nitro-2-piridinsulfeniIo (Npys), 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)etilo (Dde), 2,6-diclorobencilo (2,6-DiCI-Bzl), 2-clorobenciloxicarbonilo (2-CI-Z), 2-bromobenciloxicarbonilo (2-Br-Z), benciloximetilo (Bom), ciclohexiloxi (cHxO), t-butoximetilo (Bum), t-butoxi (tBuO), t-Butilo (tBu), trifluoroacetilo (TFA), éster 4[N-{1-(4,4-dimetil-2,6- dioxoc¡clohexiiiden)-3-met¡ldibut¡l)-am¡no}bencílico (ODmab), éster a-alíl¡co (OAII), éster 2-feniiisopropílico (2-PhiPr), 1-[4,4-dimet¡l-2,6-dioxic¡ciohex-1-¡l-iden)et¡lo (Dde). 106.- El péptido de conformidad con la reivindicación 98, caracterizado además porque el término N del péptido está bloqueado con un grupo protector seleccionado del grupo que consiste de Boc-, Fmoc- y Nicotinilo-. 107 - El péptido de conformidad con la reivindicación 98, caracterizado además porque el término C del péptido está bloqueado con un grupo protector seleccionado del grupo que consiste de tBu y OtBu. 108. - El péptido de conformidad con la reivindicación 98, caracterizado además porque el péptido comprende la secuencia de aminoácidos de un péptido en el Cuadro 7. 109. - El péptido de conformidad con la reivindicación 98, caracterizado además porque el péptido es un péptido del Cuadro 7. 110. - El péptido de conformidad con la reivindicación 98, caracterizado además porque el péptido comprende al menos un aminoácido D. 111. - El péptido de conformidad con la reivindicación 98, caracterizado además porque el péptido comprende todos los aminoácidos D. 112 - El péptido de conformidad con la reivindicación 98, caracterizado además porque el péptido comprende alternar aminoácidos D y L. 113. - El péptido de conformidad con la reivindicación 98, caracterizado además porque el péptido comprende todos los aminoácidos L. 114. - El péptido de conformidad con la reivindicación 98, caracterizado además porque el péptido está mezclado con un excipiente farmacológicamente aceptable. 115. - El péptido de conformidad con la reivindicación 98, caracterizado además porque el péptido está acoplado a una biotina. 116. - Un péptido que aminora uno o más síntomas de una condición inflamatoria, en donde el péptido: varía en longitud de 5 a 11 aminoácidos; los aminoácidos terminales son aminoácidos hidrofóbicos y/o portan grupos hidrofóbicos protectores; los aminoácidos no terminales forman al menos un dominio ácido y al menos un dominio básico; y el péptido convierte la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hace la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria. 117.- Un péptido que aminora uno o más síntomas de una condición inflamatoria, en donde el péptido: varía en longitud de 5 a 11 aminoácidos; los aminoácidos terminales son aminoácidos hidrofóbicos y/o portan grupos hidrofóbicos protectores; los aminoácidos no terminales forman al menos un dominio ácido o un dominio básico, y al menos un dominio alifático; y el péptido convierte la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hace la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria. 118.- Un péptido que aminora uno o más síntomas de una condición inflamatoria, en donde el péptido: varía en longitud de 5 a 11 aminoácidos; los aminoácidos terminales son aminoácidos hidrofóbicos y/o portan grupos hidrofóbicos protectores; los aminoácidos no terminales forman al menos un dominio ácido o un dominio básico, y al menos un dominio aromático; y el péptido convierte la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hace la HDL antiinflamatoria más antiínflamatoria. 119. - Un péptido que aminora uno o más síntomas de una condición inflamatoria, en donde el péptido: varía en longitud de 6 a 11 aminoácidos; los aminoácidos terminales son aminoácidos hidrofóbicos y/o portan grupos hidrofóbicos protectores; los aminoácidos no terminales forman al menos un dominio aromático o dos o más dominios aromáticos separados por una o mas histidinas; y el péptido convierte la HDL proinflamatoria a la HDL antiinflamatoria o hace la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria. 120. - Un par de aminoácidos que aminoran uno o más síntomas de una condición inflamatoria, en donde el par de aminoácidos comprende: un primer aminoácido que porta al menos un grupo protector; y un segundo aminoácido que porta al menos un grupo protector; en donde el primer aminoácido y el segundo aminoácido son diferentes especies de aminoácidos, y en donde el par de aminoácidos convierte la HDL proinflamatoria a la HDL antiínflamatoria o hace la HDL antiinflamatoria más antiinflamatoria. 2 .- El par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 120, caracterizado además porque el par de aminoácidos, cuando se pone en contacto con un fosfolípido en un medio acuoso, forma partículas con un diámetro de aproximadamente 7.5 nm y forma bicapas apiladas con una dimensión de la bicapa del orden de 3.4 a 4.1 nm, con una separación entre las bicapas en la pila de aproximadamente 2 nm. 122. - El par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 120, caracterizado además porque el primer y segundo aminoácidos se seleccionan de manera independiente del grupo que consiste de un aminoácido ácido, un aminoácido básico y un aminoácido no polar. 123. - El par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 122, caracterizado además porque el primer aminoácido es ácido o básico y el segundo aminoácido es no polar, o el primer aminoácido es no polar y el segundo aminoácido es ácido o básico. 124. - El par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 122, caracterizado además porque ambos aminoácidos son ácidos. 125. - El par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 122, caracterizado además porque ambos aminoácidos son básicos. 126.- El par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 120, caracterizado además porque el par de aminoácidos está acoplado covalentemente junto directamente o a través de un enlazante. 127. - El par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 126, caracterizado además porque los aminoácidos se unen a través de un enlace peptídico, formando por lo tanto un dipéptido. 128. - El par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado además porque el par de aminoácidos se mezcla junto, pero no se enlaza de manera covalente. 129. - El par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 120, caracterizado además porque el grupo protector se selecciona del grupo que consiste de polietilenglicol (PEG), t-butoxicarbonilo (Boc), Fmoc, nicotinilo, OtBu, un grupo benzoilo, un acetilo (Ac), un carbobenzoxi, un éster metílico, etílico, propílico, butílico, pentílico, hexílico, un N-metil antranililo, y un alquilo de 3 a 20 carbonos, amida, un grupo alquilo de 3 a 20 carbonos, un grupo 9-fluorenacetilo, un grupo 1 -fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorencarboxílico, un grupo 9-fluorenon-1-carboxílico, benciloxicarbonilo (también llamado carbobenzoxi, mencionado anteriormente), Xantilo (Xan), Tritilo (Trt), 4-metiltritilo (Mtt), 4-metoxitritilo (Mmt), 4-metoxi-2,3,6-trimetil-bencensulfonilo (Mtr), Mesitilen-2-sulfonilo (Mts), 4,4-dimetoxibenzhidrilo (Mbh), Tosilo (Tos), 2,2,5,7,8-pentametiI croman-6-sulfonilo (Pmc), 4-metilbencilo (MeBzl), 4-metoxibencilo ( eOBzl), Benciloxi (BzlO), Bencilo (Bzl), Benzoilo (Bz), 3-nitro-2-piridinsulfenilo (Npys), 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)etilo (Dde), 2,6-diclorobencilo (2,6-DiCI-Bzl), 2-clorobenciloxicarbonilo (2-CI-Z), 2-bromobenciloxicarbonilo (2-Br-Z), benciloximetilo (Bom), ciclohexiloxi (cHxO), t-butoximetilo (Bum), t-butox¡ (tBuO), t-Butilo (tBu), trifluoroacetilo (TFA), éster 4[N-{1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)-3-metildibutil)-amino}bencílico (ODmab), éster a-alílico (OAII), éster 2-fenilisopropílico (2-PhiPr), 1-[4,4-dimetil-2,6-dioxiciclohex-1-il-iden)etilo (Dde). 130. - El par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 120, caracterizado además porque el primer aminoácido está bloqueado con un grupo protector seleccionado del grupo que consiste de Boc-, Fmoc- y nicotinilo-, y el segundo aminoácido está bloqueado con un grupo protector seleccionado del grupo que consiste de tBu y OtBu. 131- El par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 128, caracterizado además porque cada aminoácido porta al menos dos grupos protectores. 132.- El par de aminoácidos en donde cada aminoácido está bloqueado con un primer grupo protector seleccionado del grupo que consiste de Boc-, Fmoc- y nicotinilo-, y un segundo grupo protector seleccionado del grupo que consiste de tBu y OtBu. / 33.- El par de aminoácidos en donde cada aminoácido está bloqueado con un Boc y un OtBu. 134.- El par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 120, caracterizado además porque el par de aminoácidos forma un dipéptido seleccionado del grupo que consiste de Phe-Arg, Glu-Leu y Arg-Glu. 135.- El par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 120, caracterizado además porque el par de aminoácidos forma un dipéptido seleccionado del grupo que consiste de Boc-Arg-OtBu, Boc-Glu-OtBu, Boc-Phe-Arg-OtBu, Boc-Glu-Leu-OtBu y Boc-Arg-Glu-OtBu. 136.- Una formulación farmacéutica que comprende: uno o más péptidos de conformidad con las reivindicaciones 1, 5, 6, 31 , 54, 76, 98, 116, 117 y 119, o un par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 120; y un excipiente farmacéuticamente aceptable. 137. - La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 136, caracterizada además porque el péptido está presente en una dosis efectiva. 138. - La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 136, caracterizada además porque el péptido está en una formulación de liberación temporal. 139. - La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 136, caracterizada además porque la formulación se formula como una formulación de dosificación unitaria. 140.- La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 136, caracterizada además porque la formulación se formula para la administración oral. 141. - La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 136, caracterizada además porque la formulación se formula para la administración mediante una ruta seleccionada del grupo que consiste de administración oral, inhalación, administración rectal, inyección intraperitoneal, inyección intravascular, inyección subcutánea, administración transcutánea, administración por inhalación e inyección intramuscular. 142. - Un equipo que comprende: un recipiente que contiene uno o más de los péptidos de conformidad con las reivindicaciones 1, 5, 6, 31 , 54, 76, 98, 116, 117 y 119, o un par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 120; y materiales con instrucciones que enseñan el uso de los péptidos o pares de aminoácidos, en el tratamiento de una patología caracterizada por inflamación. 143. - El equipo de conformidad con la reivindicación 142, caracterizado además porque la patología es una patología seleccionada del grupo que consiste de aterosclerosis, artritis reumatoide, lupus eritematoso, poliarteritis nodosa, osteoporosis, enfermedad de Altzheimer, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma, esclerosis múltiple, diabetes y una dolencia viral. 144. - El uso del péptido de conformidad con las reivindicaciones 1, 5, 6, 31, 54, 76, 98, 116, 117 y 119, o un par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 120, para preparar un medicamento para mitigar uno o más síntomas de la aterosclerosis en un mamífero. 145. - El uso que se reclama en la reivindicación 144, en donde el péptido es un excipiente farmacéuticamente aceptable. 146.- El uso que se reclama en la reivindicación 144, en donde el péptido es administrable en conjunto con un lípido. 147 - El uso que se reclama en la reivindicación 144, en donde el péptido es un excipiente farmacéuticamente aceptable adecuado para la administración oral. 148.- El uso que se reclama en la reivindicación 44, en donde el péptido es administrable como una formulación de dosificación unitaria. 149.- El uso que se reclama en la reivindicación 144, en donde el péptido es administrable mediante una ruta seleccionada del grupo que consiste de administración oral, inhalación, administración rectal, inyección intraperitoneal, inyección intravascular, inyección subcutánea, administración transcutánea e inyección intramuscular. 150. - El uso que se reclama en la reivindicación 144, en donde el mamífero es un mamífero diagnosticado como que tiene uno o más síntomas de la aterosclerosis. 151. - El uso que se reclama en la reivindicación 144, en donde el mamífero es un mamífero diagnosticado como que está en riesgo de apoplejía o aterosclerosis. 152.- El uso que se reclama en la reivindicación 144, en donde el mamífero es un humano. 153. - El uso que se reclama en la reivindicación 144, en donde el mamífero es un mamífero no humano. 154. - El uso del péptido de conformidad con las reivindicaciones 1 , 5, 6, 31 , 54, 76, 98, 116, 117 y 119, o un par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 120, para preparar un medicamento para mitigar uno o más síntomas de una patología inflamatoria en un mamífero. 155. - El uso que se reclama en la reivindicación 154, en donde la patología inflamatoria es una patología seleccionada del grupo que consiste de aterosclerosis, artritis reumatoide, lupus eritematoso, poliarteritis nodosa, osteoporosis, enfermedad de Altzheimer, esclerosis múltiple, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, asma, diabetes, y una dolencia viral. 156. - El uso que se reclama en la reivindicación 154, en donde el péptido es un excipiente farmacéuticamente aceptable. 157. - El uso que se reclama en la reivindicación 154, en donde el péptido es administrable en conjunto con un lípido. 158.- El uso que se reclama en la reivindicación 154, en donde el péptido es un excipiente farmacéuticamente aceptable adecuado para la administración oral. 159.- El uso que se reclama en la reivindicación 154, en donde el péptido es administrable como una formulación de dosificación unitaria. 160.- El uso que se reclama en la reivindicación 154, en donde dicho péptido es administrable mediante una ruta seleccionada del grupo que consiste de administración oral, inhalación, administración rectal, inyección intraperitoneal, inyección intravascular, inyección subcutánea, administración transcutánea e inyección intramuscular. 161.- El uso que se reclama en la reivindicación 154, en donde el mamífero es un mamífero diagnosticado como que está en riesgo de apoplejía. 162.- El uso que se reclama en la reivindicación 54, en donde el mamífero es un humano. 163.- El uso que se reclama en la reivindicación 154, en donde el mamífero es un mamífero no humano. 164.- El uso del péptido de conformidad con las reivindicaciones 1 , 5, 6, 31 , 54, 76, 98, 116, 117 y 119, o un par de aminoácidos de conformidad con ia reivindicación 120m, y una estatina, para preparar un medicamento para mejorar la actividad de una estatina en un mamífero. 165. - El uso que se reclama en la reivindicación 164, en donde la estatina se selecciona del grupo que consiste de cerivastatina, atorvastatina, simvastatina, pravastatina, fluvastatina, lovastatina, rosuvastatina y pitavastatina. 166. - El uso que se reclama en la reivindicación 164, en donde el péptido es administrable de manera simultánea con la estatina. 167. - El uso que se reclama en la reivindicación 164, en donde el péptido es administrable antes de la estatina. 168. - El uso que se reclama en la reivindicación 164, en donde el péptido es administrable después de la estatina. 169. - El uso que se reclama en la reivindicación 64, en donde el péptido y/o la estatina es administrable como una formulación de dosificación unitaria. 170. - El uso que se reclama en la reivindicación 164, en donde dicho péptido y/o dicha estatina es administrable mediante una ruta seleccionada del grupo que consiste de administración oral, inhalación, administración rectal, inyección intraperitoneal, inyección intravascular, inyección subcutánea, administración transcutánea e inyección intramuscular. 171. - El uso que se reclama en la reivindicación 164, en donde el mamífero es un mamífero diagnosticado como que tiene uno o más síntomas de la aterosclerosis. 172. - El uso que se reclama en la reivindicación 164, en donde el mamífero es un mamífero diagnosticado como que está en riesgo de apoplejía o aterosclerosis. 173. - El uso que se reclama en la reivindicación 164, en donde el mamífero es un humano. 174. - El uso que se reclama en la reivindicación 164, en donde el mamífero es un mamífero no humano. 175. - El uso de una cantidad efectiva de una estatina; y una cantidad efectiva de un péptido de conformidad con las reivindicaciones , 5, 6, 31, 54, 76, 98, 116, 117 y 119, o un par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 120; para preparar un medicamento para mitigar uno o más síntomas asociados con aterosclerosis en un mamífero, en donde la cantidad efectiva de la estatina es menor que la cantidad efectiva de una estatina administrada sin el péptido. 176.- El uso que se reclama en la reivindicación 175, en donde la cantidad efectiva del péptido es menor que la cantidad efectiva del péptido administrada sin la estatina. 177. - El uso que se reclama en la reivindicación 175, en donde la estatina se selecciona del grupo que consiste de cerivastatina, atorvastatina, simvastatina, pravastatina, fluvastatina, lovastatina, rosuvastatina y pitavastatina. 178. - El uso que se reclama en la reivindicación 175, en donde el péptido es administrable de manera simultánea con la estatina. 179. - El uso que se reclama en la reivindicación 175, en donde el péptido es administrable antes de la estatina. 180. - El uso que se reclama en la reivindicación 175, en donde el péptido es administrable después de la estatina. 181. - El uso que se reclama en la reivindicación 175, en donde el péptido y/o la estatina es administrable como una formulación de dosificación unitaria. 182. - El uso que se reclama en la reivindicación 175, en donde el medicamento es administrable. 183. - El uso que se reclama en la reivindicación 175, en donde el medicamento es administrable mediante una ruta seleccionada del grupo que consiste de administración oral, inhalación, administración rectal, inyección intraperitoneal, inyección intravascular, inyección subcutánea, administración transcutánea, administración por inhalación e inyección intramuscular. 184. - El uso que se reclama en la reivindicación 175, en donde el mamífero es un mamífero diagnosticado como que tiene uno o más síntomas de la aterosclerosis. 185. - El uso que se reclama en la reivindicación 175, en donde el mamífero es un mamífero diagnosticado como que está en riesgo de apoplejía o aterosclerosis. 186. - El uso que se reclama en la reivindicación 175, en donde el mamífero es un humano. 187. - El uso que se reclama en la reivindicación 175, en donde el mamífero es un mamífero no humano. 188. - Una formulación farmacéutica, la formulación comprende: una estatina y/o Ezetimibe; y un péptido o un concatámero de un péptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1, 5, 6, 31, 54, 76, 98, 116, 1 7 y 9, o un par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 120. 189. - La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 188, caracterizada además porque el péptido y/o la estatina están presentes en una dosis efectiva. 190.- La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 189, caracterizada además porque la cantidad efectiva de la estatina es menor que la cantidad efectiva de la estatina administrada sin el péptido. 191- La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 189, caracterizada además porque la cantidad efectiva del péptido es menor que la cantidad efectiva del péptido administrada sin la estatina. 192. - La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 189, caracterizada además porque la cantidad efectiva del Ezetimibe es menor que la cantidad efectiva del Ezetimibe administrada sin el péptido. 193. - La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 189, caracterizado además porque la cantidad efectiva del péptido es menor que la cantidad efectiva del péptido administrada sin el Ezetimibe. 194. - La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 188, caracterizada además porque la estatina se selecciona del grupo que consiste de cerivastatina, atorvastatina, simvastatina, pravastatina, fluvastatina, lovastatina, rosuvastatina y pitavastatina. 195. - La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 188, caracterizada además porque el Ezetimibe, la estatina y/o el péptido están en una formulación de liberación temporal. 196.- La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 188, caracterizada además porque la formulación se formula como una formulación de dosificación unitaria. 197. - La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 188, caracterizada además porque la formulación es formulada para la administración oral. 198. - La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 188, caracterizada además porque la formulación se formula para la administración mediante una ruta seleccionada del grupo que consiste de administración oral, inhalación, administración rectal, inyección intraperitoneal, inyección intravascular, inyección subcutánea, administración transcutánea, administración por inhalación e inyección intramuscular. 199. - La formulación farmacéutica de conformidad con la reivindicación 188, caracterizada además porque la formulación comprende uno o más fosfolípidos. 200. - El uso de uno o más péptidos de conformidad con las reivindicaciones 1 , 5, 6, 31, 54, 76, 98, 116, 7 y 119, o un par de aminoácidos de conformidad con la reivindicación 120, para preparar un medicamento para reducir o inhibir uno o más síntomas de osteoporosis en un mamífero. 201. - El uso que se reclama en la reivindicación 200, en donde el péptido es administrable en una concentración suficiente para reducir o eliminar la descalcificación de un hueso. 202. - El uso que se reclama en la reivindicación 200, en donde el péptido es administrable en una concentración suficiente para inducir la recalcificación de un hueso. 203.- El uso que se reclama en la reivindicación 200, en donde el péptido se mezcla con un excipiente farmacológicamente aceptable. 204.- El uso que se reclama en la reivindicación 200, en donde el péptido se mezcla con un excipiente farmacológicamente aceptable adecuado para la administración oral a un mamífero.
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