JP4205713B2 - アテローム性動脈硬化症を改善する経口投与ペプチド - Google Patents
アテローム性動脈硬化症を改善する経口投与ペプチド Download PDFInfo
- Publication number
- JP4205713B2 JP4205713B2 JP2005304531A JP2005304531A JP4205713B2 JP 4205713 B2 JP4205713 B2 JP 4205713B2 JP 2005304531 A JP2005304531 A JP 2005304531A JP 2005304531 A JP2005304531 A JP 2005304531A JP 4205713 B2 JP4205713 B2 JP 4205713B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- peptides
- ldl
- mice
- hdl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/775—Apolipopeptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
- A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
- A61P31/08—Antibacterial agents for leprosy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Virology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Zoology (AREA)
Description
Segrest et al. (1990) Proteins: Structure, Function and Genetics 8:103-117)。アポA−Iはリン脂質に強く結合し、複合体を形成しコレステロールに富む細胞からコレステロールの流出を促進させることが示された。アポA−Iの配送および血清レベルの維持が、なぜ1つまたは2つ以上のアテローム性硬化症の症状を効果的に緩和するのかは、これまで明らかではなかった。
ウィルソンら、アーテリオスクレロシス(1988)、8巻737−741ページ(Wilson et al.(1988) Arteriosclerosis 8:737-741) セグレストら、プロテインズ:ストラクチャーファンクションアンドジェネティクス(1990)8巻103−117ページ(Segrest et al. (1990) Proteins: Structure, Function and Genetics 8:103-117)
本出願は、USSN09/896841号(2001年6月29日出願)の部分継続出願であり、前記はさらにUSSN09/645454号(2000年8月24日出願)の部分継続出願である。前記両出願は参照により本明細書に含まれる。
本研究は米国公衆衛生局および米国立循環器研究所(National Heart, Lung and Blood Institute)のグラントHL30568およびHL34343により補助を受けた。米国政府は本発明に関して一定の権利を有する。
D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F- (配列識別番号2), D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L,K-E-A-F- (配列識別番号3), D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F- (配列識別番号4), D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F- (配列識別番号5), D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F- (配列識別番号6), D-W-L-K-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F- (配列識別番号7), D-W-F-K-A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F- (配列識別番号8), D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F- (配列識別番号9), D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-A-F- (配列識別番号10), D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-L-K-E-F-F- (配列識別番号11), D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-F-F- (配列識別番号12), D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F- (配列識別番号13), E-W-L-K-L-F-Y-E-K-V-L-E-K-F-K-E-A-F- (配列識別番号14), E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F- (配列識別番号15), E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F- (配列識別番号16), E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-A-F- (配列識別番号17), E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-L-K-E-F-F- (配列識別番号18), E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-F-F- (配列識別番号19), E-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F- (配列識別番号20), A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F- (配列識別番号21), A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F- (配列識別番号22), A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F- (配列識別番号23), A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F- (配列識別番号24), A-F-Y-D-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F- (配列識別番号25), A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-(配列識別番号26), A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F- (配列識別番号27), A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-A-F- (配列識別番号28), A-F-Y-D-K-V-F-E-K-L-K-E-F-F- (配列識別番号29), A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-F-F- (配列識別番号30), K-A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F- (配列識別番号31), L-F-Y-E-K-V-L-E-K-F-K-E-A-F-
(配列識別番号32), A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F- (配列識別番号33), A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F- (配列識別番号34), A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-A-F-(配列識別番号35), A-F-Y-D-K-V-F-E-K-L-K-E-F-F- (配列識別番号36), A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-F-F- (配列識別番号37), A-F-Y-D-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F- (配列識別番号38), D-W-L-K-A-L-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-L- (配列識別番号39), D-W-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-(配列識別番号40), D-W-F-K-A-F-Y-E-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F- (配列識別番号41), E-W-L-K-A-L-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-A-L- (配列識別番号42), E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F- (配列識別番号43), E-W-F-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F- (配列識別番号44), E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-K-F-K-E-F-F- (配列識別番号45), E-W-L-K-A-F-Y-E-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F- (配列識別番号46), E-W-F-K-A-F-Y-E-K-F-F-E-K-F-K-E-F-F- (配列識別番号47), D-F-L-K-A-W-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-W- (配列識別番号48), E-F-L-K-A-W-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-A-W- (配列識別番号49), D-F-W-K-A-W-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-W-W- (配列識別番号50), E-F-W-K-A-W-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-W-W- (配列識別番号51), D-K-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-W-A-K-E-A-F-(配列識別番号52), D-K-W-K-A-V-Y-D-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L- (配列識別番号53), E-K-L-K-A-F-Y-E-K-V-F-E-W-A-K-E-A-F- (配列識別番号54), E-K-W-K-A-V-Y-E-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L-(配列識別番号55), D-W-L-K-A-F-V-D-K-F-A-E-K-F-K-E-A-Y- (配列識別番号56), E-K-W-K-A-V-Y-E-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L- (配列識別番号57), D-W-L-K-A-F-V-Y-D-K-V-F-K-L-K-E-F-F-(配列識別番号58), E-W-L-K-A-F-V-Y-E-K-V-F-K-L-K-E-F-F- (配列識別番号59), D-W-L-R-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F- (配列識別番号60), E-W-L-R-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-(配列識別番号61), D-W-L-K-A-F-Y-D-R-V-A-E-K-L-K-E-A-F- (配列識別番号62), E-W-L-K-A-F-Y-E-R-V-A-E-K-L-K-E-A-F- (配列識別番号63), D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-R-L-K-E-A-F-(配列識別番号64), E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-R-L-K-E-A-F- (配列識別番号65), D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-R-E-A-F- (配列識別番号66), E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-R-E-A-F-(配列識別番号67), D-W-L-K-A-F-Y-D-R-V-A-E-R-L-K-E-A-F- (配列識別番号68), E-W-L-K-A-F-Y-E-R-V-A-E-R-L-K-E-A-F- (配列識別番号69), D-W-L-R-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-R-E-A-F- (配列識別番号70), E-W-L-R-A-F-Y-E-K-V-A-E-K-L-R-E-A-F- (配列識別番号71), D-W-L-R-A-F-Y-D-R-V-A-E-K-I-K-E-A-F- (配列識別番号72), E-W-L-R-A-F-Y-E-R-V-A-E-K-L-K-E-A-F- (配列識別番号73), D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-R-L-R-E-A-F- (配列識別番号74), E-W-L-K-A-F-Y-E-K-V-A-E-R-L-R-E-A-F- (配列識別番号75), D-W-L-R-A-F-Y-D-K-V-A-E-R-L-K-E-A-F- (配列識別番号76), E-W-L-R-A-F-Y-E-K-V-A-E-R-L-K-E-A-F- (配列識別番号77), D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-P-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F- (配列識別番号78), D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F-P-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-F-F- (配列識別番号79), D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F-P-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-L-K-E-A-F- (配列識別番号80),D-K-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-W-A-K-E-A-F-P-D-K-L-K-A-F-Y-D-K-V-F-E-W-L-K-E-A-F- (配列識別番号81), D-K-W-K-A-V-Y-D-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L-P-D-K-W-K-A-V-Y-D-K-F-A-E-A-F-K-E-F-L- (配列識別番号82), D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-P-D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F- (配列識別番号83), D-W-L-K-A-F-V-Y-D-K-V-F-K-L-K-E-F-F-P-D-W-L-K-A-F-V-Y-D-K-V-F-K-L-K-E-F-F- (配列識別番号84), D-W-L-K-A-F-Y-D-K-F-A-E-K-F-K-E-F-F-P-D-W-L-K-A-F-Y-D-K-F-A-E-K-F-K-E-F-F- (配列識別番号85) から選ばれる、1つまたは2つ以上の以下のアミノ酸配列、その切端形、その多量体(例えば好ましくは2量体から3量体、4量体、5量体、8量体または10量体の範囲である)、その配列の保存的置換、および/またはアミノ酸類似体を含む前記配列を含む。
“ポリペプチド”、“ペプチド”および“タンパク質”という用語は、本明細書ではアミノ酸残基ポリマーを指すために互換的に用いられる。前記用語は、天然に存在するアミノ酸ポリマーと同様に、1つまたは2つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工的化学的類似体であるアミノ酸にも適用される。
USA 85:2444(1988))、これらアルゴリズムのコンピューターによる実行(GAP,
BESTFIT, FASTAおよびTFASTA(Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI))、または目視による精査(一般的には上掲書(Ausubel et al.)を参照されたい)。
本発明は、クラスA両親媒性らせんモチーフに類似するようにデザインした合成ペプチド(Segrest et al. Proteins: Structure, Function, and Genetics 8:103-117(1990))はリン脂質と結合し、ヒトアポA−Iと同様な多くの生物学的特性を示すことができるという発見に関する。特に、前記ペプチドがDアミノ酸を用いて製剤化されるとき、前記ペプチドは劇的な血中半減期の増加を示し、特にアミノ末端および/またはカルボキシ末端を封鎖されたときは経口的にすら投与することができるというのが、本発明の発見である。
本発明のアテローム性硬化症抑制ペプチドはまた他の多くの場合に有用である。特に、我々は心脈管系合併症(例えばアテローム性硬化症、卒中発作など)はしばしば急性期炎症反応の開始を伴い、またはこれに付随することを見出した。前記のような急性炎症反応はしばしば、再発性炎症疾患(例えば癩、結核、全身性紅斑性狼瘡および慢性関節リウマチ)、ウイルス感染(例えばインフルエンザ)、細菌感染、真菌感染、器官移植、創傷もしくは他の外傷、人工器官、バイオフィルムなどに付随する。
我々はまた、冠状動脈石灰沈着および骨粗しょう症の原因として酸化脂質を特定した。さらにまた、特定の理論に拘束されないが、我々は、石灰化大動脈狭窄の病理発生に同じメカニズムが存在すると考えている。
好ましいペプチド
クラスAペプチドはアテローム性硬化症の1つまたは2つ以上の症状を緩和することができるということは本発明の発見であった。クラスAペプチドは、極性残基および非極性残基の分離をもたらすα−らせんを形成し、それによって極性−非極性境界に陽性に荷電した残基を位置し、さらに極性表面の中心に陰性に荷電した残基を位置する極性および非極性表面を形成することを特徴とする(例えば以下を参照されたい:Anantharamaiah, Meth. Enzymol., 128:626-668(1986))。アポA−Iの4番目のエクソンは、3.667残基/ターンに折り畳まれるときクラスA両親媒性らせん構造を生じることは特筆されよう。
& Gierasch (1992) Ann. Rev. Biochem. 61:387)によって、例えばペプチドを環状化させる分子内ジスルフィド架橋を形成することができる内部システイン残基の付加によって生成することができる。
本発明で用いられるペプチドは、標準的な化学的ペプチド合成技術を用いて化学的に合成するか、または、特にペプチドが“D”アミノ酸残基を含まない場合は組換えによって発現される。ポリペプチドが組換えによって発現される場合、1つまたは2つ以上のアミノ酸がもっぱらD型で前記生物に提供される環境下で、ホスト生物(例えば細菌、植物、真菌細胞など)を培養すると、組換えによって発現されたペプチドはしたがって前記Dアミノ酸を含んでいる。
Peptide Synthesis, Part A.;Merrifield et al.(1963) J. Am. Chem. Soc. 85:2149-2156;Stewart et al.(1984) Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed.
Pierce Chem. Co., Rockford, Ill.。
Dアミノ酸は、化学合成でD型誘導アミノ酸残基を用いることによってペプチド内の1つまたは2つ以上の位置に簡単に取り込まれる。固相ペプチド合成のためのD型アミノ酸残基は多数の供給元から市販されている(例えば、Advanced Chem Tech, Louisville; Nova Biochem, San Diego; Sigma, St Louis; Bachem California Inc., Torranceなど)。D型アミノ酸はペプチド内の任意の位置に所望のように取り込ませることができる。したがって例えば、ある実施態様では、ペプチドはただ1つのD−アミノ酸を含み、一方、別の実施態様では、ペプチドは少なくとも2つ、一般的には少なくとも3つ、より一般的には少なくとも4つ、もっとも一般的には少なくとも5つ、好ましくは少なくとも6つ、より好ましくは少なくとも7つ、さらにもっとも好ましくは少なくとも8つのDアミノ酸を含む。特に好ましい実施態様では、実質的に(鏡像異性)アミノ酸1つおきにD型アミノ酸が存在する。ある種の実施態様では、少なくとも90%、好ましくは少なくとも90%、より好ましくは少なくとも95%の鏡像異性アミノ酸がD型アミノ酸である。特に好ましいある実施態様では、基本的に全ての鏡像異性アミノ酸がD型アミノ酸である。
ある種の実施態様では、構成アミノ酸および/または末端アミノ酸の1つまたは2つ以上のR基は保護基で封鎖されている。特定の理論に拘束されないが、本発明のペプチドの特にアミノ末端および/またはカルボキシル末端の封鎖は経口投与による薬剤送達を極めて改善し、さらに血中半減期を顕著に高めるということは本発明の発見であった。
全てがLアミノ酸のペプチド(例えばその他の点では本発明のペプチドの配列を有するもの)をD型(すなわち本発明のペプチド)と一緒に投与したとき、前記D型ペプチドの取り込みが増加するということもまた、本発明の驚くべき発見であった。したがって、ある種の実施態様では、本発明は、D型およびL型ペプチドを組み合わせて本発明の方法で用いることを含む。前記D型ペプチドおよびL型ペプチドは異なるアミノ酸配列を有することができるが、好ましい実施態様では、それらはともに本明細書に記載するペプチドのアミノ酸配列を有し、さらに好ましい実施態様では、それらは同じアミノ酸配列を有する。
本発明の方法を実施するために、本発明の1つもしくは2つ以上のペプチドまたはペプチド摸倣体を、例えばアテローム性硬化症の1つまたは2つ以上の症状を有すると診断されたか、またはアテローム性硬化症のおそれがあると診断された個体に投与する。前記ペプチドまたはペプチド摸倣体はその“元々の形態”で投与してもよいし、所望の場合には塩、エステル、アミド、プロドラッグ、誘導体などの形態で投与してもよい。ただし、前記塩、エステル、アミド、プロドラッグまたは誘導体は薬理学的に適切であること、すなわち本方法で有効であることを条件とする。活性物質の塩、エステル、アミド、プロドラッグ、および他の誘導体は、合成有機化学分野の業者にとって周知であり、さらに例えば下記文献に記載されている標準的な方法を用いて製造することができる:March (1992) Advanced Organic Chemistry; Reactions, Mechanism and Structure, 4th Ed. NY. Wiley-Interscience。
ある種の実施態様では、本発明のペプチドは1つまたは2つ以上の脂質と一緒に投与される。前記脂質は、ペプチドの保護および/または輸送/取込みの強化のための賦形剤として製剤化してもよいし、または前記脂質は別々に投与してもよい。
88:11460-11464; Huang et al.(1992) Cancer Res., 52:6774-6781; Lasic et al.(1992) FEBS Lett., 312:255-258など)。
表2:Dポリペプチドの投与に好ましいリン脂質のsn−1および/またはsn−2位の好ましい脂肪酸
追加的な薬理学的に活性な物質は、前記主要活性物質、例えば本発明のペプチドとともに送達することができる。ある実施態様では、そのような活性な物質にはアテローム性硬化症および/またはその合併症発生のおそれを減少させる物質が含まれるが、ただしこれに限定されない。前記物質には、ベータブロッカー、ベータブロッカーとチアジド利尿剤の組み合わせ、スタチン、アスピリン、ACEインヒビター、ACEレセプターインヒビター(ARB)などが含まれるが、ただしこれらに限定されない。
別の実施態様では、本発明は、アテローム性硬化症の1つまたは2つ以上の症状を改善するか、またはアテローム性硬化症のおそれがある対象(ヒトまたは動物)を予防的に処置するキットを提供する。前記キットは、好ましくは、本発明の1つまたは2つ以上のペプチドまたはペプチド摸倣体を収納した容器を含む。前記ペプチドまたはペプチド摸倣体は個別投薬形態(例えば座薬、錠剤、カプセル、パッチなど)で提供することができ、および/または場合によって1つまたは2つ以上の医薬的に許容できる賦形剤と結合させてもよい。
いくつかの合成クラスAペプチド類似体が、ヒトアポA−Iの多くの特性と類似する特性をin vitroで提示することが示された。本実施例では、両親媒性が強化された新規なペプチド(5F)が、アテローム性硬化症誘発飼料を与えたC57BL/6Jマウスに20μg/日で16週間腹腔内に注射された。マウスアポA−I(MoAI)(50μg/日)またはリン酸緩衝食塩水(PBS)注射をコントロールとして他のマウスに実施した。総血中コレステロールレベルおよびリポタンパク質プロフィルは前記処置群とコントロール群とで顕著には相違しなかったが、ただし5FまたはMoAIを投与したマウスでは、高密度リポタンパク質(HDL)−コレステロールは、総コレステロールのパーセントとして計算したとき低かった。
ペプチド
ペプチド5F(Ac−18A[AspTrpLeuLysAlaPheTyrAspLysValPheGluLysPheLysGluPhePhe]−NH2)を固相ペプチド合成によって合成した(例えば以下を参照されたい:Anantharamaiah & Garber (1996) Meth. Enzymol. 263:267-282; Palgunachari et al.(1996) Arteriosclerosis, Thrombosis & Vascular Biology 16:328-338)。前記合成ペプチドの純度は分析用HPLCおよびイオンスプレー質量分析法によって確定した。前記ペプチドは蒸留水に対して透析し、使用前に凍結乾燥させた。
Meth. Enzymol. 263:267-282)。
雌のC57BL/6Jマウス(Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME)を用いて全実験を行った。マウスは6週齢で購入し、食餌実験は8週齢のマウスを用いて開始した。代謝回転実験では体重が20から22グラムのマウスを用いた。全ての動物実験は、当該大学(University of Alabama, Birmingham)の動物管理および使用委員会(Institutional Animal Care and Use Committee)の事前検査を受け承認された。
5Fペプチド、MoAIおよびヒトアポA−Iを文献(Bilheimer et al.(1972) Biochim. Biophys. Acta 260:212-221)の方法によって125Iで標識した。マウスに改変トーマス・ハートロフト(Thomas-Hartroft)アテローム性硬化症誘発飼料(#TD88051; Teklad, Madison, WI)を4週間与え、この時点で200μLのリン酸緩衝食塩水(PBS)に溶解したペプチドまたはタンパク質の毎日の腹腔注射を開始した。MoAIまたはヒトアポA−I(50μg/動物)を注射した動物、5F(20μg/動物)を注射した動物は本消長動態実験では絶食させず、血液サンプルはキシラジン:ケタミン麻酔下で後眼窩洞から注射後15、30、45分後、および1、1.5、2、3、4、6、8、12および24時間後に採取した。
マウスは6週齢で入手し、任意に20匹の群に分け(ただし処置を与えられないネガティブコントロール群は10匹)、標準的なげっ歯類の固形飼料を与えた。8週齢で、処置群に改変トーマス・ハートロフトアテローム性硬化症誘発飼料(#TD88051; Teklad, Madison, WI)を与え、注射を開始した。前記飼料は4℃で保存し、脂質の酸化を最小限にするために製造日より3ヶ月を過ぎないものを使用した。動物に毎日16週間腹腔内注射を施した(週末および休日を含む)。各群の20匹のマウスに200μLのPBS(ポジティブコントロールとして)または200μLのPBS中の5F(20μg)または200μLのPBS中のMoAI(50μg)を毎日注射した。
組織学的評価は文献の方法(Paigen et al.(1990) Arteriosclerosis 10:316-323)にいくつかの改変を加えて実施した。簡単に記せば、心臓をリン酸緩衝ホルムアルデヒド溶液中で少なくとも1週間固定した。心臓の下部2/3を除去し、残りの組織をOCT媒質体(Tissue-Tek, Miles Inc., Elkhart, IN)中で凍結し、−20℃で低温槽中で切片を作製した。大動脈根の開始部について20μm毎の切片をスライド上に確保し、観察した。続いて切片をさらに600μm分採集するか、または大動脈の横断切片が円形化し弁の尖頭がもはや明瞭でなくなるまで切片を採集した。スライドをオイルレッドOで染色し、さらにヘマトキシリンで対比染色した。染色した病巣の横断面積を80μm離れた連続切片で画像分析(SigmaScan Pro, SPSS Scientific, Chicago, IL)で測定し、平均病巣面積を各大動脈洞について400μm(5枚のスライド)の長さにわたって決定し、最大平均病巣面積を示した。
ヒト動脈壁細胞の混合培養、単球の単離、健常なヒトドナーの血漿から超遠心沈澱によるリポタンパク質の単離およびマウス血漿からFPLCによるリポタンパク質の単離、並びに脂質過酸化水素および単球走化性活性の測定は、標準的な方法にしたがって実施した。全ての参加対象者は、UCLAヒト対象保護委員会(UCLA Human Subjects Protection Committee)によって承認されたインフォームドコンセントを示した。マウスリポタンパク質を混合培養でテストするためのプロトコルはまた以下のように実施した:簡単に記せば、アテローム性硬化症誘発飼料を与え、さらに賦形剤(PBS)またはペプチド5F(20μg/マウス/日)を注射したマウスの血漿からLDLおよびHDLをFPLCによって単離した。混合培養は、ヒトLDL(200μg/mLのLDLタンパク質)、またはマウスLDL(200μg/mL)、またはヒトLDL(200μg/mL)+ヒトHDL(350μg/mLのHDLタンパク質)もしくはマウスHDL(300μg/mL)、またはマウスHDL(300μg/mL)単独で処理した。前記混合培養を上記添加物とともにまたは上記添加物を含まずに8時間37℃で10%のリポタンパク質欠損血清(LPDS)の存在下でインキュベートした。上清を採集し、アウエルバッハ脂質過酸化水素同等物について分析した。続いて混合培養を洗浄し、血清またはLPDSを含まない新しい培養液でさらに8時間インキュベートした。この調整培養液を採集し、単球走化性活性について分析した。
血漿コレステロールリポタンパク質プロフィルは、我々が最近開発したCLiP法(Garber et al.(2000) J. Lipid Res. 41:1020-1026)を用いて測定した。簡単に記せば、5から10μLの血漿を1回のスーパーローズ(Superose)6(Pharmacia, Piscataway NJ)カラムを用いて分析した。カラムの直ぐ後でコレステロール試薬をT字型混合装置から導入し、溶出剤:試薬混合物はポストカラム反応コイルに入れた。溶出剤混合物中のコレステロール含有量は分光光度法によって500nmで検出し、検出値はコンピュータに採集した。得られたプロフィルは成分ピークに分解し、ピークフィット(PeakFit, SPss Science, Chicago, IL)を用いて相対面積を分析した。総コレステロールに対する絶対コレステロール値および各成分ピークは、既知の値をもつコントロールサンプルとの比較によって決定した。いくつかの事例では、分画を採集し放射能活性の分布を決定した。CLip法は、プールしたサンプルを使用することなく個々のマウスサンプルを分析することを可能にした。
ペプチドを毎日注射することによって何らかの免疫反応をマウスで誘発するか否かを決定するために、器官採集時にマウスから採取した血漿(16日間の毎日の注射の後)を用いて間接ELISA力価測定(Engvall (1980) Meth. Enzymol. 70:419-439)を実施した。注射に用いたペプチドまたはMoAI(10μg/mL)でプレートを被覆し、一晩インキュベートした。0.05%のTween20を含むホウ酸緩衝食塩水(pH8.2)で完全に洗浄し、緩衝液(ホウ酸緩衝液中の0.1%ゼラチンおよび0.1%BSA)で1時間ブロックした後、200μLの希釈マウス血漿(1:100希釈)サンプルをホウ酸緩衝食塩水で段階的に1:1で希釈した。マウスIgGに対するビオチン付加ヤギ抗体(0.1μg/mL)を続いてウェルに添加し、さらにSA−HRP(ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ)で1時間処理し、さらにABTSおよび過酸化物を基質として用いて反応を進行させた。抗原/抗体のそれぞれの添加後には、プレートを一晩室温でインキュベートし、さらに0.05%のTween20を含むホウ酸緩衝食塩水(pH8.2)で完全に洗浄し、次の添加の前に1時間緩衝液(ホウ酸緩衝液中の0.1%ゼラチンおよび0.1%BSA)でブロックした。
処置群を2テール(two-tailed)t−検定または変数の一方向分析(この場合データは正常に分布していた)によって比較するか、または階層上の変数(variance on ranks)の一方向分析(SigmaStat; SPSS Science, Chicago, IL)によって比較した。インプット速度およびアウトプット速度が等しくないと仮定するファーストオーダー・ワンコンパートメント・キネティックモデル(PKAnalyst;
MicroMath Scientific Software, Salt Lake City, UT)へのあてはめによって、ペプチドまたはタンパク質の代謝回転の消長動態を分析した。
消長動態実験
腹腔内注射の後、マウスの血漿からペプチド5F並びにヒトおよびマウスのアポA−Iが浄化除去される動態は表3に要約されている。
ヒトおよびマウスアポA−Iは、5Fペプチドと比較して非常に長いクリアランスを示した。ヒトアポA−Iおよび5Fは、マウスアポA−Iよりもピーク血漿レベルまでの時間が長かったが、ただし達成されたピークレベルはほぼ類似していた(ヒトアポA−Iは他の物質よりも高いピークレベルに達した)。カラムクロマトグラフィーによる血漿サンプルの分析によって、ペプチド5FおよびアポA−I(ヒトおよびマウスの両方)は血漿リポタンパク質(特にHDLサイズ領域の粒子)と結合することが示された(図6)。5Fの注射後1.5時間のペプチド放射能活性のHDL:VLDL比は4.19±0.58(n=3、p<0.05)であった。同様な結果が5Fの注射後5時間で見出された(6.44±1.10、p<0.02)。注射されたペプチドは開始時3%未満の遊離125IをTCA沈澱によって示した。しかしながら注射後1.5時間で、全溶出放射能活性のパーセントとして表される血漿中の遊離125Iの放射能活性は5Fについて増加し26.9±9.4%で、5時間で34.4±4.8%であった。これは、リポタンパク質およびリポタンパク質結合ペプチドの予想されたクリアランスを示している。遊離ヨウ素による1.5時間から5時間の放射能活性の増加速度は、注射から1.5時間までのそれよりも小さく、おそらく腹腔内での開始時の顕著なペプチド分解を示唆しているのであろう。
長期間の食餌実験中に理由が不明の原因によって死亡したマウスは3匹のみであった。前記動物のうち2匹はMoAIを与えられ、1匹は5Fペプチドを与えられた。器官採取時には全体的な形態学的相違は群の間で認められなかった。肝臓はアテローム性硬化症誘発飼料を与えられた全ての動物で増大したが、肝重量においても体重の百分率として表される肝重量においても群間で相違は認められなかった(表4)。アテローム性硬化症誘発飼料を与えた全動物(PBS注射動物を含む)の体重は、固形飼料を与えたコントロールよりも軽かった(表4)。
前記ペプチドに対する抗体の存在について、16週の注射期間の終了時に採取した血液サンプルを調べた。ペプチド5FまたはMoAI(データは示されていない)に対する抗体は検出されなかった。一連の動物に注射していないペプチドでELISAプレートを被覆した交差実験で得られた結果は、抗体の有無について前記直接的測定で示された結果と本質的に同一であった(データは示していない)。
CLip法で決定した総コレステロール値およびリポタンパク質コレステロール値は表3に示されている。総コレステロール値の正確さは手作業でのコレステロールアッセイ(Cholesterol 1000; Sigma, St.Louis, MO)によって確認された(データは示されていない)。総コレステロール値またはリポタンパク質分画コレステロール値について処置群の間に顕著な相違は認められなかった。しかしながら、リポタンパク質分画を総コレステロールのパーセントとして表した場合(表5)、HDL−コレステロールは、PBS群と比較して5F群およびMOAI群で極めて低い百分率を構成した。
*2テールt検定によりPBS群と比較した場合p<0.05またはそれ未満。
我々は最近、正常なHDLは穏やかに酸化されたLDLの生成で3つの工程を抑制することを発見した。これらの実験(同時係属出願USSN09/541,468; 2000年3月31日出願)で、我々は、ヒトLDLをin vitroでアポA−IまたはアポA−I摸倣ペプチド(37pA)で処理することによって、LDLからHPODEおよびHPETEを含むシーディング分子が除去されることを示した。これらのシーディング分子は、ヒト動脈壁細胞の混合培養がLDLを酸化する能力をもつために、さらにLDLに動脈壁細胞の単球走化性活性の産生を誘発させるために必要であった。我々はまた、アポA−Iのマウスへの注射後またはヒトへの輸液後に前記マウスまたはヒト実験協力者から単離したLDLはヒト動脈壁細胞による酸化に抵抗性を有し、さらに動脈壁細胞混合培養で単球の走化性活性を誘発しないことを示した。図7は、アテローム性硬化症誘発飼料を与え、さらにPBSを注射した本実験のマウスから得たHDLは、ヒトLDLの酸化を抑制することができず(図7A)、さらにヒト動脈壁混合培養でLDL誘発単球走化性活性を抑制できない(図7B)ことを示している。対照的に、アテローム性硬化症誘発飼料を与え、さらにペプチド5Fを注射したマウスのHDLは、正常なヒトHDLと同程度に、ヒトLDLの酸化の抑制および混合培養でのLDL誘発単球走化性活性の防止に有効であった。図7はまた、アテローム性硬化症誘発飼料を与え、さらにPBSを毎日注射したマウスから採取したLDLは、同じ飼料を与えたが20μgのペプチド5Fを毎日注射したマウスから採取したLDLよりも容易に酸化され、より容易に単球走化性活性を誘発することを示している。いずれのリポタンパク質で処理した動脈壁細胞にも細胞毒性は観察されなかった(データは示されていない)。同様な結果が3つの別個の実験(データは示されていない)の全てで得られた。
平均病巣横断面面積は図8に提示されている。予想したように、通常のマウスの固形飼料を与えた群では病巣は観察されなかった(データは示されていない)。以前に報告されたように(Paigen et al.(1990) Arteriosclerosis 10:316-323)、病巣面積における顕著なばらつきがアテローム性硬化症誘発飼料を与えた全ての群で観察された。しかしながら、2テールt−検定(p<0.002)で解析するか、または階層上の変数(variance on ranks)の一方向分析(p<0.001;平均病総面積の分布が正常でないために決定した)で解析するかに関係なく、5Fを注射した動物は、PBS注射動物よりも顕著に小さな平均病巣を有していた。MoAI注射では、PBS注射と比較して病巣面積に相違は出現せず、病巣面積は、t−検定(p<0.002)および階層上の変数の一方向分析(p<0.001)の両方で5F注射動物の場合よりも顕著に大きかった。
クラスA両親媒性らせんモチーフに類似するようにデザインした合成ペプチドはリン脂質と結合することができ、ヒトアポA−Iに類似する多くの生物学的特性を示すことを以前に我々は明らかにした(3、8、10、14、15、20)。我々はまた、前記ペプチドが動物の静脈内に投与されたとき、それらは血漿リポタンパク質と結合することを示した(11)。本実験は、理論的脂質親和性が高められた新規なペプチド5Fは、抗アテローム性硬化症の特性を有するという仮説を立証するために考案した。
Dペプチドの有効性
本実施例は本発明のDペプチドの有効性を明示する。ヒト大動脈壁混合培養を、培養液単独(図では、LDL、無細胞または細胞有り、LDL無し)、健常対象者由来コントロールLDL250μg/mL(図ではLDL)およびLDL+健常対象者由来コントロールHDL350μg/mL(図では+HDL)とともにインキュベートした。他の混合培養はコントロールLDLと、種々の量の(横座標に示したμg)のD−2FもしくはL−2F(左から3番目の図、2F)、またはD−37pAもしくはL−37pA(右側の最後の図、37pA)とともにインキュベートした。データは4つの混合培養から得た値の平均±SDを示す。HDLおよびペプチド添加の値は、p<0.01のレベルでLDL単独(左側の最初の図)の場合といずれも顕著な相違を示した。
クラスA両親媒性らせんペプチドの物理化学的および生物学的特性に対する疎水性増加の影響
略語リスト
Ac2O=無水酢酸;アポA−I=アポリポたんぱく質A−I;BSA=ウシ血清アルブミン;CAD=冠状動脈疾患;CD=円偏光二色性;DMPC=ジミリストイルホスファチジルコリン;DiPoPE=ジ(16:1)パルミトオレオイルホスファチジルエタノールアミン;DSC=示差走査熱分析(Differential Scanning Calorimetry);EDTA=エチレンジアミンテトラ酢酸;EPC=卵黄ホスファチジルコリン;FMOC=フルオリニルメチルオキシカルボニル;GdnHCl=塩酸グアニジン;HAEC=ヒト大動脈内皮細胞;HASMC=ヒト大動脈平滑筋細胞;HBTU=2−(H−ベンゾトリアゾール−1−イル)−1,1,3,3−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート;HDL=高密度リポタンパク質;HPLC=高速液体クロマトグラフィー;LCAT=レシチンコレステロールアシルトランスフェラーゼ;MCP−1=単球走化性タンパク質−1;M−CSF=マクロファージコロニー刺激因子;MLV=多層(multilamellar)小胞;NMM=N−メチルモルフォリン;PBS=リン酸緩衝食塩水;PIPES=ピペラジン−N,N’−ビス[2−エタンスルホン酸];RP−HPLC=逆相高速液体クロマトグラフィー;TFA=トリフルオロ酢酸
要約
我々は最近、両親媒性が増強されたクラスA両親媒性ペプチド5Fは、食餌誘発性アテローム性硬化症からマウスを防御することを示した。我々は、現に存在する極性アミノ酸を系統的にフェニルアラニンで置換することによって、アテローム性硬化症抑制に関する物理的および機能的特性に対する一連のクラスA両親媒性ペプチド同族体(5Fを含む)の疎水性増強の影響を調査した。前記ペプチドは、配列Ac−D−W−L−K−A−F−Y−D−K−V−A−E−K−L−K−E−A−F−NH2(配列識別番号:1、Ac−18A−NH2または2F)を基にして以下のとおりであった:3F3(Ac−F318A−NH2)、3F14(Ac−F1418A−NH2)、4F(Ac−F3,1418A−NH2)、5F(Ac−F11,14,1718A−NH2)、6F(Ac−F10,11,14,1718A−NH2)、および7F(Ac−F3,10,11,14,1718A−NH2)。水への溶解度、HPLC保持時間、卵黄PC単層膜中への浸透に対する排除圧(exclusion pressure)、および卵黄PC可溶化速度の測定によってペプチド4Fと5Fの間で突然疎水性が増加することが明らかになった。これは、リン脂質との結合能力増加を伴った。ペプチド6Fと7Fは影響がより少なく、これらのペプチドで脂質との相互作用の促進に対する疎水性増強の限界を示唆した。脂質親和性における前記の顕著な増強にもかかわらず、これらのペプチドは、血漿酵素、レシチン:コレステロールアシルトランスフェラーゼ(LCAT)の活性化においてアポA−Iよりも有効性は低かった。すなわち、5FがLCATをもっとも強く活性化し、それはアポA−Iの80%であった。ペプチド4F、5Fおよび6Fは、LDL誘発単球走化性活性の抑制に等しく有効であった。これらの実験は、ペプチド−ペプチドおよびペプチド−脂質相互作用間の適切なバランスが、両親媒性ペプチドの最適な生物学的活性に要求されることを示している。これらの実験は、アテローム性硬化症抑制能力が強化された小型アポA−I摸倣体のデザインのための理論的根拠を提供する。
高密度リポタンパク質およびアポA−I(HDLの主要なタンパク質構成成分)の血漿レベルは、冠状動脈疾患と反比例する(Sprecher et al.(1993) Arterioscler. Thromb. 13:495-504; Philips et al.(1993) Circulation 88:2762-2770)。ヒトアポA−Iは243残基のタンパク質で、22量体の両親媒性らせんリピートを8つ含み、前記リピートの大半はクラスAモチーフを有することが示された(Segrest et al.(1990) Proteins 8:103-117; Anantharamaiah et al.(1993) pp.109-142, "The Amphipathic Helix (R.M. Epand ed.), CRC Press, Boca Raton, FL)。クラスA両親媒性らせんは特徴的な電荷分布を有する。すなわち、それらは、αらせんの極性/非極性境界に陽性荷電アミノ酸集団を、さらに極性面の中心に陰性荷電残基を有する(Segrest et al.(1990) Proteins 8:103-117; Anantharamaiah et al.(1993) pp.109-142, "The Amphipathic Helix (R.M. Epand ed.), CRC Press, Boca Raton, FL; Segrest et al.(1992) J. Lipid Res. 33:141-166)。前記ユニークな二次構造モチーフは、アポA−Iの脂質結合特性に寄与していると説明されている(Segrest et al.(1990) Proteins 8:103-117)。クラスA両親媒性らせんの合成類似体に関する多くの実験が前記の考えを支持した(Segrest er al.(1994) Adv. Prot. Chem., 45:303-369; Brouillette & Anantharamaiah (1995) Biochim. Biophys. Acta 1256:103-129)。
Natl. Acad. Sci. USA, 94:12291-12296; Segrest et al.(2000) Current Opin. Lipidol. 11:105-115)。このモデルでは、アポA−Iの2つの分子は頭−尾結合のダイマー形で配列され、1つのモノマーが互いに相互作用してアポA−Iの脂質結合構造を安定化させる。
J. Biol. Chem. 270:1602-1611)。
Acta 1256:103-1291; Epand et al.(1987) J. Biol. Chem. 262:9389-9396)は、このペプチドの疎水性の増加は、その脂質親和性およびアポA−I類似特性を増加させることを示した。合成ペプチド5F(両親媒性が増強されたAc−18A−NH2の類似体)は食餌誘発性アテローム性硬化症をマウスで抑制することが示された(例えば実施例1および2を参照されたい)。しかしながら、ペプチド2Fは、C57BL6マウスでは食餌誘発病巣形成を顕著には抑制しなかった(Garber et al.(1999) Circulation 100:I538)。18Aダイマーペプチドの実験は、ペプチド−ペプチド結合の増加はペプチド:脂質結合を低下させることを示した(Mishra et al.(1995) J. Biol. Chem. 270:1602-1611)。
ペプチド合成
ペプチドは、自動固相合成装置(PS3 Protein Technologies, Woburn, MA)を用いて固相法によって合成した。FMOC−アミノ酸をリンクアミド樹脂(0.536mEq/g)(Peninsula Laboratories, Inc. Belmont, CA)とHBTUおよびNMMの存在下で結合させ、N−末端を無水酢酸でアセチル化した。アニソール(1%)、メルカプトエタノール(0.1%)およびトリプトファン(ペプチド樹脂の重量の20%)の存在下で、ジクロロメタン中の70%のTFAを用いてペプチドを固相支持体から切断し、VYDACC−4(22mm×25cm、粒子サイズ10μm)逆相HPLC(RP−HPLC)カラム上で、水に25%から58%の0.1%TFA含有アセトニトリルのグラディエント(22分)を用い4.8mL/分の流速で66分かけて精製した。ペプチドの純度は、C18カラム(VYDAC、4.6mm×25cm、5μm)およびアセトニトリル−水(0.1%TFA含有)の25%から58%の直線グラディエントを用い33分かけて分析用RP−HPLCによって確認し、さらに質量分析によって確認した。
CDスペクトルはAVIV・62DS分光偏光計で文献(Mishra et al.(1994) J. Biol. Chem. 269:7185-7191)にしたがって記録した。簡単に記せば、通過窓の長さが0.1cmのセルを用いてスペクトルを得て、測定値は、260nmから190nmまで1nm毎に25℃で採取した。全てのCDスペクトルは4つのスキャンを合算することによって平均化したシグナルであった。基準線は修正し凹凸を無くした。PBS(pH7.4)中のペプチド溶液は11μMの濃度で用いた。ペプチド−DMPC複合体(1:20 mol:mol)を用いて、これらペプチドのらせんに対するペプチド結合の影響を決定した。これら複合体は、適切な容積のペプチド溶液をDMPC多層小胞に添加することによって調製した。DMPC多層小胞は以下のようにして調製した:既知量の脂質をエタノールに溶解し、希薄な窒素流の下でゆっくり蒸発させることによって溶媒を除去した。残留溶媒は脂質フィルムを真空下に一晩保存することによって除去した。適切な容積のPBS(pH7.4)を薄い脂質フィルムに添加して、要求される最終濃度のDPMCを得た。脂質−ペプチド複合体は必要な容積のペプチド溶液を添加することによって調製し、20:1の脂質:ペプチドモル比を得た。これらペプチドの溶解度が小さいので、11μMのペプチド濃度を用いた。222nmの平均残基楕円率、[θ]MRE(deg.cm2.dmol-1)は以下の等式を用いて計算した:
[θ]MRE=MRW[θ]/10cl
式中、MRWはペプチドの平均残基重量であり、θは度で表した観察された楕円率であり、cはg/mLで表したペプチドの濃度であり、lはセンチメートルで表したセルの観察窓の長さである。ペプチドのパーセントらせん度は、Morrisettら(Biochemistry 12:1290-1299(1973))が記載した以下の等式から概算した:
%αらせん度=([θ]222+3000)/(36000+3000)
式中、[θ]222は222nmでの平均残基楕円率である。
DSC実験は、マイクロカルMC−2走査熱分析計(MicroCal, Inc., Amherst, MA)を用い、DMPCについては走査速度20℃/時間で、DiPoPEについては走査速度37℃/時間で文献(Mishra et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:7185-7191)に記載された方法を用いて実施した。既知量のリン脂質をクロロホルムに溶解した。サンプル1組について、ペプチドをメタノールに溶解し、クロロホルム/メタノール(2:1、v:v)中のDiPoPEの溶液に添加した。純粋な脂質サンプルおよび脂質とペプチドの有機溶液の両方について、溶媒をゆっくりとした窒素流の下で除去した。残留溶媒は真空下で除去した。緩衝液(DMPC用はpH7.4、PBS、DiPoPE用はpH7.4、20mMPIPES,1mMEDTA,150mMNaClおよび0.002%NaN3)単独、または固有の脂質/ペプチドモル比を提供するために緩衝溶液中の既知濃度のペプチドを前記乾燥フィルムに添加し、さらに室温で30分ボルテックスミキサーで水和させた。DMPCの場合は、スキャンの間に60分の平衡化時間を含む4つの連続スキャンを実施した。DSCサーモグラムは、マイクロカル社(MicroCal Inc., Amherst, MA)が提供するソフトおよびオリジン(Origin)バージョン5.0を用いて分析した。
単層排除圧(monolayer exclusion pressure)測定は、脂質−水境界面に対するペプチドの親和性を提供し、PhillipsとKrebsの方法(Phillips & Krebs (1986) Methods Enzymol. 128:387-403; Ibdah et al.(1989) Biochim. Biophys. Acta 1004:300-308)に従った。卵黄ホスファチジルコリン(EPC)の不溶性単層膜をテフロン(登録商標)皿内の空気−水境界面に室温で広げて5−45dyn/cmの最初の表面圧(πi)を提供した。1.5Mの塩酸グアニジンを含むPBS中のペプチド溶液を下相に注意深く注入し、50μg/dLの最終濃度を提供した。塩酸グアニジンをサブフェース中で1mM以下の最終濃度に希釈して、ペプチドを再生させた。サブフェースを持続的に攪拌しEPC単層膜の表面圧の増加(Δπ)を定常値が得られるまで記録した。ペプチドがもはやEYPC単層膜に進入しない最初の表面圧(πi),すなわち排除圧(πe)は、πi対Δπ直線回帰適合をΔπ=0dyn/cmに外挿することによって計算した。
これらペプチドと卵黄ホスファチジルコリンとの結合は、文献(Mishra et al.(1994) J. Biol. Chem. 269:7185-7191)に記載されたように、SLM8000C光子計測スペクトロフルオロメーターを用いて直角光散乱により、EPC多層小胞の分解を追跡することによって決定した。EPCMLVは、EPC(Avanti
Polar, AL)の溶液を窒素下で蒸発させ、さらに脂質フィルムをリン酸緩衝食塩水(pH7.4)で水和させることによって調製した。105μMのEPCおよび等モル量のペプチドを含むサンプルを25℃で維持し、持続的に攪拌した。濁り度の清澄化を30分モニターした。EPC小胞の完全な溶解は、最終濃度1mMのTritonX−100の添加によって達成された。
LCATを新鮮な血中脂肪値正常血漿から文献(Albers et al.(1986) MethodsEnzymol. 129:763-783)の方法にいくつかの改変を加えて単離した。血漿密度を1.21g/mLに調節し、175000gで24時間遠心した。LCAT含有分画をアフィ−ゲル(Affi-Gel)ブルークロマトグラフィーに、続いてDE−52クロマトグラフィーに付した。トリス緩衝液(10mM、pH7.6)中の75から200mMのNaClグラディエントを用いてLCATをDE−52カラムから溶出させた。SDS−PAGEの結果、ヒトアポA−Iが夾雑していない90%を越える純度の酵素であると分かった。
微量の7α−3Hコレステロールを含む卵黄PC/コレステロール(90:20モル/モル)をブランソン250ソニケーターで12分超音波処理し、小さい単層小胞を作製して基質を調製した。前記基質(50μL)を5μgのペプチドまたはヒトアポA−Iおよび50μLのBSA(40μg/mL)とともに1時間37℃でインキュベートした。総容積を150μLまで増やした。1時間インキュベートした後、100μLのLCATを添加し、37℃で1時間インキュベートし、さらにシリカ片上に10μLを滴下することによって反応を停止させた。ヘキサン:クロロホルム(2:1v/v)混合物中でシリカ片の薄層クロマトグラフィーによって、コレステロールとコレステリルエステルを分離させた。コレステロールおよびコレステリルオレエート標準物は、3%の酢酸第二銅、8%のリン酸緩衝液中にTLCプレートを浸漬し加熱することによって可視化した。標準物の位置を用いて前記プレートを2つに切断し、この2つの部分をパッカードトリカーブ(Tri Carb)4530中でシンチレーション液で計測した。全反応を3組ずつ実施した。ペプチドによるLCATの活性化は、アポA−Iによる全活性化の百分率で表される。
非変性PAGEおよびSDS−PAGEはLaemmliの方法(Nature 227:680-685(1970))を用いて実施した。プリメードノベックス(Premade Novex)ゲルを用い、さらにゲルはクーマシーブルーで染色してタンパク質バンドを特定した。
ヒト動脈壁細胞の混合培養、単球の単離、健常者ドナー血漿からの超遠心沈澱による、またはマウス血漿からのFPLCによるリポタンパク質の単離、並びに脂質ペルオキシドおよび単球走化性活性の測定は、文献の記載にしたがって実施した(Navab et al.(1991) J. Clin. Invest. 88:2039-2046; Navab et al.(1977) J. Clin. Invest. 99:2005-2019)。簡単に記せば、LDLおよびHDLをヒト血漿からHavelら(J. Clin. Invest. 43:1345-1353(1955))の方法によって単離した。ヒト大動脈内皮細胞(HAEC)および平滑筋細胞(HASMC)を文献(Navab et al.(1991) J. Clin. Invest. 88:2039-2046)に記載にされたように単離した。マイクロタイタープレートを0.1%のゼラチンで37℃で一晩処理した。HASMCを1×105細胞/cm2の密集成長した密度で添加した。細胞を2日間培養し、このとき細胞はウェルの表面全体を覆い、かなりの量の細胞外マトリックスを産生していた。続いてHAECを2×105細胞/cm2で添加して増殖させ、2日間で密集成長したHAECの完全な単層培養が形成された。全ての実験で、HAECおよび同一個体由来のHASMCを4代から6代の継代レベルで用いた。単球は健常なドナーから文献(Fogelman et al.(1988) J. Lipid Res. 29:1243-1247)に記載されたように単離した。混合培養は天然のLDL(250μgタンパク質/mL)で処理するか、またはHDL(350μgタンパク質/mL)もしくはペプチドの存在下で8時間処理した。続いて前記混合培養を洗浄し、メディウム199でさらに8時間インキュベートした。得られた混合培養上清を文献(Navab et al.(1997) J. Clin. Invest. 99:2005-2019)の記載にしたがって単球走化性活性についてアッセイした。
ペプチドの分析
表6は、合成した種々の18A類似体の配列を示す。ペプチドAc−18A−NH2(前記は2つのPhe残基を6位および18位(境界面のリジン残基の近く)に有する)は2Fと称される。2つの3Fペプチド、3F3または3F14を合成した。前記ペプチドでは、3位および14位のLeu(両方とも非極性面の中心に存在する)がそれぞれPheによって置換されている。ペプチド4Fは、非極性面の中心に2つのPheを有し、これは2つの中心部のLeu残基が置換された結果である。ペプチドの置換(3Fから7F)は表6に示されている。Phe残基の数が増加するにつれて、非極性面上の残基当たりの理論的疎水性が、ペプチド2Fに対する2.05から7Fに対する3.15に増加する。
2疎水性は非極性面上の残基当たりの疎水性として表されている。
3理論的脂質親和性は文献(Palgunachari et al.(1996) Arterioscler. Thromb.
Vasc. Biol. 16:328-338)の記載に示されているように計算した。
2保持時間は、水にアセトニトリル25%−58%(33分)のグラディエント(0.1%TFA含有)を用いVydacC18カラムから溶出したペプチドについて得られた時間である。
3溶解度はPBS中で決定された。
4これらの測定の再現性は±1dyn/cmである。
ペプチドの二次構造は円偏光二色性分光分析によって決定した。表8は、PBS中およびDMPC存在下でのペプチドのパーセントらせんを示している。PBS中では、同族体2F、4F、5F、6Fおよび7Fは、3F3および3F14よりも高いらせんパーセントを有する(表8)。5F、6Fおよび7FはPBSに難溶であるので、CD実験は11μMのペプチド(それらが完全に溶解する濃度)を用いて実施した。ペプチド2Fは、溶液中の5Fに匹敵する55%らせんを示した。6Fおよび7Fは両方ともわずかに高いらせん(それぞれ67%および58%)を示し、4Fはわずかに低かった(45%)。3Fペプチドは両方ともはるかに低いらせんを示した(〜20%)。しかしながら、DMPCへの結合は、6Fを除いて全てのペプチドのらせんを顕著に増加させた(表8)。脂質環境下では、2F、5Fおよび7Fは高いらせん含有量(68%から76%)を示した。ペプチド3F3および3F14はPBS中ではらせん含有量は非常に少ないが、脂質環境下では顕著ならせんの増加があった(3F3については約22%から42%に、3F14については19%から55%に増加)。ペプチド6Fおよび4Fのらせんは、脂質の存在下でもそれほど変化しなかった。しかしながら、これらのペプチドはなお2Fおよび5Fペプチドよりもらせん的でなかった。CDの結果は、Pheによる置換の増加に関してペプチドのらせん形成に系統的な変化は存在しないことを示唆している。ペプチド2Fおよび5Fは溶液中およびリン脂質の存在下で最大らせんを示した。
表8:水性環境および脂質環境下でのFペプチドのらせん形成
DMPC及びDiPoPEを用いたDSCの研究
DMPCの多層小胞の鎖溶融遷移に対するこれら18A類似体の影響をペプチド−脂質混合物(脂質/ペプチドモル比100:1)を用いて調べた。表9は、ペプチドの存在下および非存在下でのDMPCの鎖溶融遷移の遷移温度並びにエンタルピーを示す。純粋な脂質は13℃で予備遷移を、23℃で主要な鎖溶融遷移を示す。DMPCへのペプチドの添加は、ゲルから液晶への遷移の拡大、および遷移エンタルピーの低下をもたらした(表9)。予備遷移はいずれのペプチドの存在下でも認められなかった。調べたペプチドの中で2F、3F3、5Fおよび6Fが遷移エンタルピーを最も大きく減少させた(表9)。いずれのペプチドも遷移温度の変化は0.2℃を越えなかった。
単層の排除圧(πe)は、ペプチドがもはやEPC単層膜に侵入できない表面圧である。πeの値はペプチドの理論的脂質親和性を反映する。Fペプチドの排除圧はPhe残基の数が増加するにつれ増加する(表7)。ここで調べた全てのペプチドが、アポA−Iおよび親ペプチド18Aよりも高い排除圧を有していた。πeの値は2Fから4Fへと(38から40dyn/cm)徐々に増加した。これは37pA(プロリンが間に入った18Aのタンデムリピート)について観察された範囲内である。排除圧値は5F、6Fおよび7Fについて顕著に増加した(40から45dyn/cm)。排除圧によって決定されたように、5F、6Fおよび7F同族体は、EPC単層膜と類似の相互反応能力を有することは明白である。表7に挙げたFペプチドは、HPLC保持時間および単層膜排除圧について類似傾向を有し、4Fと5Fの間で急激な増加を示すことは興味深い。
図16で認められるように、アポA−I(EPCMLVを清澄化できない)と異なり、全てのペプチドがEPCMLVを清澄化することができた。3Fの2つの同族体ペプチドはEPCMLVの清澄化でもっとも有効性が低かった。同族体ペプチド2F、5F、6Fおよび7Fは全てEPCMLVを同程度に清澄化した。ペプチド4Fは、EPCMLVをもっとも効果的に清澄化し、活性はTritonX−100のそれと類似していた。EPCMLVの濁り度の50%クリアランスのための時間もまた4F同族体でもっとも短かった。ペプチド7Fは50%クリアランスの達成のためにもっとも長時間を要し、これは、最初のラグ時間(〜300秒)のためであった(図16)。前記はおそらく、EPCMLVと相互作用する前に自己結合した7F分子が分解し、それらを可溶化させる必要性があるからであろう。同族体2F、5Fおよび6Fによって示されたより遅いクリアランス速度もまた、これらペプチドの高い自己結合が原因であるかもしれない。
これらのペプチドの血漿酵素LCATを活性化する能力を、基質として卵黄PC−コレステロール小胞を用いLCAT反応の最初の粘度を測定することによって決定した(図17)。LCAT活性化は、アポA−Iによる活性化(これを100%とする)との比較で表される。20μg/mLのペプチドおよびアポA−IによるLCATの活性化は図4に示されている。この濃度では、アポA−Iはいずれのペプチドよりも良好にLCATを活性化する。ここで調べたペプチドの中では、しかしながら5Fが最良の活性化物質である(アポA−Iの80%)。LCAT活性化に関するかぎり、3F3および3F14は同様な活性化能力を有している。したがって、それらは1本の棒線で表した(図17)。
LDLをヒト動脈壁混合培養系とともにインキュベートしたとき、LDLは内皮下腔に捕捉され、酸化されて生物学的に活性な脂質を生じる。これらの脂質は単球走化性を誘発する。したがって、混合培養単球走化性は、生物学的に活性な脂質の生成についての十分に確立されたアッセイである。走化性の抑制は “シーディング分子”の除去と正比例することが示された。前記シーディング分子は、単球走化性タンパク質1(MCP−1)の分泌(Navab et al.(2000) J. Lipid Res. 41:1481-1494; Navab et al.(2000) J. Lipid Res. 41:1495-1508)および分化因子、マクロファージコロニー刺激因子(M−CSF)の分泌に必要である。図18は、ペプチドとインキュベートした後のLDLが作用の変動を表すことを示し、LDLの走化性特性は同族体4F、5Fおよび6Fによりもっとも減少する。ペプチド3Fは、2Fおよび7Fと比較して全く有効性がなく、2Fおよび7Fは、4F、5Fおよび6Fよりも有効性は低かった。
クラスA両親媒性らせんペプチド類似体の疎水性増加によるその物理化学的特性および脂質結合特性に対する影響
本明細書で調べたペプチドは親ペプチド18Aの同族体である。非極性面上の残基当たりの計算による疎水性(改変GESスケールによる(Palgunachari et al.(1996) Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 16:328-338))は、Phe残基の数が増すにつれ増加する。疎水性におけるこの増加(表6)は、理論的な脂質親和性、Λにおいて再現される(上掲書)。しかしながら、Λ値は、2Fから4Fまで徐々に増加し(13.03から14.59)、さらに突然14.59(4Fの場合)から19.07(5Fの場合)の値に増加する。Λが徐々に増加するのが5Fの後に6Fおよび7Fに対する値で再び観察される(表6)。これは、Ac−18A−NH2の3位および14位のLeuがPheで置換されたことによる。Pheは、非極性面の疎水性のわずかな増加をもたらし、したがって2つの3F類似体および4FのΛ値にわずかな増加が生じる。同族体5F、6Fおよび7Fでは、しかしながら、LeuからPheへの置換の他に、11位および17位のAlaもまたPheで置換され、Λ値の顕著な増加がもたらされる(表6)。AlaはLeuよりも疎水性が小さく、さらにLeuはPheよりも疎水性が小さいので、AlaからPheへの置換は、LeuからPheへの置換よりも、得られたペプチドにおいて疎水性および理論的脂質親和性に大きな変化をひき起こす。
LCATの活性化は複雑な過程であり、脂質の親和性に左右されるだけではなく、両親媒性らせんタンパク質と酵素LCATとの相互作用にも依存する(Jonas (2000) Biochim. Biophys. Acta 1529:245-256)。前記の記述と合致して、LCATを活性化する能力は同族体ペプチドについて異なることが見出された。ペプチド5Fは最大のLCAT活性化能を示し、これは、表7に示した物理的特性と一致する(表7では、卵黄PC−水境界面での排除圧値を含む急激な増加が4Fから5Fで認められた)。ペプチド6Fおよび7Fは5Fほど効果的ではないという事実は、これらペプチドの水への低い溶解度によって反映されるように、ペプチド:ペプチド相互作用の増加(前記増加はペプチド:脂質またはペプチド:LCAT相互作用を許容しない)によって説明することができるであろう。これらの結果は、18Aダイマーに関する我々の以前の観察と合致する。以前の観察では、ダイマー18A−18A(36A)におけるペプチドの自己結合の強化は、18A−Pro−18Aペプチドと比較して脂質と相互作用する能力を低下させた(Jonas (2000) Biochim. Biophys. Acta 1529:245-256)。前記ペプチドによるLCATの活性化はアポA−Iのそれと匹敵したが、アポA−Iと前記の全てのペプチドはEPCに対して異なる反応性を有するので(図16)、それらは違った態様で基質と相互作用するということは留意されねばならない。同様な観察がChungらによって報告された。彼らは、合成ペプチド18A−Pro−18AおよびアポA−Iは異なる態様でEPCと相互作用することを示した(Chung et al.(1985) J. Biol. Chem. 260:10256-10262)。
我々が報告したように(Navab et al.(2000) J. Lipid Res. 41:1481-1494; Navab et al.(2000) J. Lipid Res. 41:1495-1508)、“シーディング分子”の除去はペプチドの両親媒性度に左右されるので、我々はこれらペプチドのLDL誘発単球走化性抑制能力を調べた。このアッセイでは、一方向変数分析を基にして、ペプチド4F、5Fおよび6F(100μg/mLレベル)は、顕著かつ類似するLDL誘発走化性の抑制を示した。同族体2Fはある程度の抑制活性を示し、(その理由は不明であるが)、類似体ペプチド3Fは抑制を示さずLDL単独と類似していた。これらの結果は、ペプチド3Fは脂質過酸化水素を除去できない(データは示されていない)という事実およびEPCMLVを清澄化する能力が低いことと一致した。ペプチド7Fは、ペプチド4F、5Fおよび6Fより顕著に有効性が低かった(P<0.001)。7Fの能力の低下はまた前記ペプチドの自己結合の増強によって説明できる(自己結合の増強はEPCMLVの清澄化実験で観察されたように脂質との相互作用能力を低下させる)。これらの結果はあらためて、ペプチドの疎水性が自己結合に与える影響間に存在する微妙なバランスがアポA−I摸倣特性に決定的な影響を与えることを示している。
ペプチドD−4Fは、急性炎症性反応時にパロキシナーゼレベルを維持し、酸化リン脂質生成を阻害する
我々は、インフルエンザAウイルスのマウス鼻腔内点滴によって惹起されるHDLの抗炎症性特性の時間依存性低下は接種後7から9日で最大に達することを観察した。選択した接種量はウイルス血症をひき起こさない量で、したがって、惹起される変化はウイルスによって直接ひき起こされるものではなく、ウイルス感染に対するホストの全身反応によって誘発される炎症状態によるものであった。前記の反応は生来の免疫系の一部分であり、急性期反応として知られている。
D−アミノ酸から合成されたアポA−I摸倣ペプチドの経口投与はマウスのアテローム性硬化症を劇的に減少させる
DまたはLアミノ酸から合成されたアポA−I摸倣ペプチドは、動脈壁細胞による酸化に対して低密度リポタンパク質(LDL)を防御するためにin vitroで有効であった。しかしながら、前記ペプチドをLDLレセプター欠損マウスに経口的に与え、そのHDLを単離し、LDLを酸化から保護する能力をin vitroで調べたとき、D−アミノ酸から合成されたペプチドのみが有効であった。D−アミノ酸から合成されたペプチドは血液循環中で安定であり、高密度リポタンパク質(HDL)の分画から見出された。Lアミノ酸から合成されたペプチドは急速に分解され尿中に排泄された。D−4Fとして知られるD−アミノ酸から合成されたペプチドを1日に2回経口的に、西洋風食餌を与えたLDLレセプター欠損マウスに投与したとき、病巣は79%減少した。アポE欠損マウスの飲料水に添加したとき、D−4Fは病巣を84%以上減少させた。我々は、D−アミノ酸から合成したアポA−I摸倣ペプチドの経口投与は、アテローム性硬化症および酸化脂質によってひき起こされる他の慢性炎症性疾患の予防および治療に有用であると結論した。
HDL−コレステロール濃度はアテローム性硬化を示す冠状動脈疾患の危険性と反比例する(Miller & Miller (1975) Lancet, 1:16-19)。アポA−I(HDLの主要なアポリポタンパク質)の輸液(Badimon et al.(1990) J. Clin. Invest. 85:1234-1241)または遺伝子導入による発現(Plump et al.(1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91:9607-9611)は、動物モデルでアテローム性硬化症を防御できることが示された。アポA−Iがアテローム性硬化症の進行を防御するメカニズムは、逆コレステロール輸送(Shah et al.(2001) Circulation, 103:3047-3050)およびLDLの酸化に必要な低レベルの酸化脂質(“シーディング分子”)の除去(Navab et al.(2000) J. Lipid Res. 41:1481-1494; Navab et al.(2000) J. Lipid Res. 41:1495-1508; Navab et al.(2001) Arteriosclerosis Thromb. Vasc. Biol. 21:481-488)を含むのではないかと考えられている。クラスA両親媒性らせんペプチド類似体は、LDLの酸化に必要な“シーディング分子”の除去(Navab et al.(2000) J. Lipid Res. 41:1481-1494; Navab et al.(2000) J. Lipid Res. 41:1495-1508)を含むアポA−Iのいくつかのin vitroでの特性に類似する特性を有することが示された。前記には、。クラスA両親媒性らせんペプチドの腹腔内投与は、血漿コレステロールレベルに変化を生じないで食餌誘発アテローム性硬化症からマウスを保護することが最近示された(Garber
et al.(2001) J. Lipid Res. 42:545-552)。病巣の減少に、in vitroでのLDLの酸化を抑制するHDLの能力の顕著な改善が付随していた(上掲書)。これまで、アポA−IおよびアポA−I摸倣ペプチドを薬理的物質として用いる場合の主要な制限は、非経口ルートによる投与の必要性であった。
マウス
C57BL/6J系の雌のLDLレセプター欠損マウスまたはアポE欠損マウスをジャクソンラボラトリー(Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME)から購入した。LDLレセプター欠損マウスは、プリナ固形飼料(Purina chow diet, Ralston Purina Co.)で4週齢まで飼育し、その時点で西洋風食餌(Western diet, Tekland, Madison, WI, diet#88137)に切り替え6週間用いた。アポE欠損マウスは実験を通してプリナ固形飼料で飼育した。LDLレセプター欠損マウスは、経管投与によって1日に2回テストペプチドまたは担体コントロールを、図の説明文に示された期間投与された。4週齢で、アポE欠損マウスの幾匹かの飲料水に図の説明文に示した濃度でテストペプチドを添加し、アポE欠損マウスには固形飼料を続けた。
LDLおよびHDLは、インフォームド・コンセントを得た後で実験協力者から、および上記に記したようにマウスから文献(Navab et al.(2000) J. Lipid Res. 41:1481-1494; および本明細書実施例)の記載にしたがって単離した。
以前に述べたように(上掲書)、ヒト大動脈内皮細胞および平滑筋細胞を単離し培養した。HDLの存在下および非存在下でのLDLの細胞性酸化は以前に述べたように(上掲書)決定した。ヒト血液単球はインフォームド・コンセントを得た後で単離し、単球走化性活性は以前に記載(5)されたように決定した。
アポA−I摸倣体ペプチドは以前に記載(11)されたように合成したが、ただしいくつかの事例では、ペプチドの各アミノ酸は該当アミノ酸のD型立体異性体であった。前記ペプチドは、Ac−D−W−L−K−A−F−Y−D−K−V−A−E−K−L−K−E−A−F−NH2(配列識別番号:1)(Ac−18A−NH2または2F)をベースにしている。2Fまたは2Fの類似体を用いてここに報告する実験に用いた。前記2F類似体の一次アミノ酸配列は以下のとおりであった:Ac−D−W−F−K−A−F−Y−D−K−V−A−E−K−F−K−E−A−F−NH2(配列識別番号:5、4Fとも称される)。L−アミノ酸から合成したペプチドはL(例えばL−4F)と称され、D−アミノ酸から合成したペプチドはD(例えばD−4F)と称される。いくつかの事例では、前記ペプチドはIODO−BEAD試薬(Pierce, Rockford, IL)を用い、製造元の推奨にしたがってヨウ素化した。D−4FとともにまたはD−4Fを用いないで、L−α−1−パルミトイル−2−オレイル−sn−グリセロ−3−ホスホコリン(Avanti Polar Lipids, Alabaster, AL)から作製したリポソームは、製造元の推奨にしたがって製造した。完全なペプチドのマウス血漿からの抽出および検出は、逆相HPLCを用い文献(Garber et al.(1992) Arterioscler. Thromb. 12:886-894)の記載にしたがって実施した。
リポタンパク質のタンパク質(Navab et al.(2000) J. Lipid Res. 41:1481-1494)およびコレステロール(Van Lenten et al.(2000) Circulation 103:2283-2288)の含有量、並びに統計分析は、P<0.05と規定される有意差で、文献(Van Lenten et al.(2001) Circulation 103:2283-2288)の記載にしたがって実施した。
In vitroでは、L−2FおよびD−2Fは、両者とも等しくLDLの酸化およびヒト大動脈壁細胞混合培養でのLDL誘発単球走化性活性をブロックすることができた(データは示していない)。しかしながらin vivoでは図22Aに示したように、経口投与の後、D−4Fのみが血液循環中で無傷のままであり、HDL保護能力を強化し(図22B)、LDL誘発単球走化性活性を低下させることができた(図22C)。125I−L−4Fまたは125I−D−4Fの経口投与後2時間で、L−4Fを投与されたマウスの尿は、D−4Fを与えられたマウスの場合の約15倍の放射能活性を示した(データは示されていない)。
これまではアポA−IおよびアポA−I摸倣体ペプチドを薬剤として使用することには非経口的投与の必要性から制限があった。本実験でのアテローム性硬化症病巣の目ざましい減少は、血中総コレステロールに顕著な変化が存在しないにもかかわらず生じた。D−4Fを投与されたマウスではHDL−コレステロールレベルはわずかに高くなったが、この相違は統計的な有意差に達しなかった。本明細書に提示した実験は、D−アミノ酸で合成したアポA−I摸倣体ペプチドの経口投与は、アテローム性硬化症および他の酸化脂質によって惹起される慢性炎症性疾患の予防および治療に有用であろうということを示唆している。
Claims (3)
- アテローム性動脈硬化症の症状を改善するペプチドであって、前記ペプチドが、 D−W−F−K−A−F−Y−D−K−V−A−E−K−F−K−E−A−F− (配列識別番号5),のアミノ酸配列からなり、鏡像異性アミノ酸の全てが“L”アミノ酸であり、前記ペプチドは酸化物質による酸化からリン脂質を保護する、前記アテローム性動脈硬化症の症状を改善するペプチドであって、前記ペプチドが、アミノ末端に結合したアセチル保護基およびカルボキシル末端に結合したアミド保護基をさらに含む、ペプチド。
- 前記酸化物質が、過酸化水素、13(S)−HPODE、15(S)−HPETE、HPODE、HPETE、HODEおよびHETEから成る群から選択される請求項1に記載のペプチド。
- 前記リン脂質が、1−パルミトイル−2−アラキドノイル−sn−グリセロ−3−ホスホリルコリン(PAPC)、1−ステアロイル−2−アラキドノイル−sn−グリセロ−3−ホスホリルコリン(SAPC)、1−ステアロイル−2−アラキドニル−sn−グリセロ−3−ホスホリルエタノールアミン(SAPE)から成る群から選択される請求項1に記載のペプチド。
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US09/645,454 US6664230B1 (en) | 2000-08-24 | 2000-08-24 | Orally administered peptides to ameliorate atherosclerosis |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2002520844A Division JP3822167B2 (ja) | 2000-08-24 | 2001-08-23 | アテローム性動脈硬化症を改善する経口投与ペプチド |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006220831A Division JP4364222B2 (ja) | 2000-08-24 | 2006-08-14 | アテローム性動脈硬化症を改善する経口投与ペプチド |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006056899A JP2006056899A (ja) | 2006-03-02 |
JP4205713B2 true JP4205713B2 (ja) | 2009-01-07 |
Family
ID=24589089
Family Applications (6)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2002520844A Expired - Lifetime JP3822167B2 (ja) | 2000-08-24 | 2001-08-23 | アテローム性動脈硬化症を改善する経口投与ペプチド |
JP2005304531A Expired - Lifetime JP4205713B2 (ja) | 2000-08-24 | 2005-10-19 | アテローム性動脈硬化症を改善する経口投与ペプチド |
JP2006220831A Expired - Lifetime JP4364222B2 (ja) | 2000-08-24 | 2006-08-14 | アテローム性動脈硬化症を改善する経口投与ペプチド |
JP2007118451A Withdrawn JP2007277250A (ja) | 2000-08-24 | 2007-04-27 | アテローム性動脈硬化症を改善する経口投与ペプチド |
JP2007250264A Pending JP2008150358A (ja) | 2000-08-24 | 2007-09-26 | アテローム性動脈硬化症を改善する経口投与ペプチド |
JP2010203789A Expired - Lifetime JP5241790B2 (ja) | 2000-08-24 | 2010-09-10 | アテローム性動脈硬化症を改善する経口投与ペプチド |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2002520844A Expired - Lifetime JP3822167B2 (ja) | 2000-08-24 | 2001-08-23 | アテローム性動脈硬化症を改善する経口投与ペプチド |
Family Applications After (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006220831A Expired - Lifetime JP4364222B2 (ja) | 2000-08-24 | 2006-08-14 | アテローム性動脈硬化症を改善する経口投与ペプチド |
JP2007118451A Withdrawn JP2007277250A (ja) | 2000-08-24 | 2007-04-27 | アテローム性動脈硬化症を改善する経口投与ペプチド |
JP2007250264A Pending JP2008150358A (ja) | 2000-08-24 | 2007-09-26 | アテローム性動脈硬化症を改善する経口投与ペプチド |
JP2010203789A Expired - Lifetime JP5241790B2 (ja) | 2000-08-24 | 2010-09-10 | アテローム性動脈硬化症を改善する経口投与ペプチド |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US6664230B1 (ja) |
EP (3) | EP2198877B1 (ja) |
JP (6) | JP3822167B2 (ja) |
CN (6) | CN1911439A (ja) |
AT (2) | ATE464060T1 (ja) |
AU (4) | AU8673201A (ja) |
CA (3) | CA2718348C (ja) |
CY (1) | CY1110204T1 (ja) |
DE (2) | DE60144543D1 (ja) |
DK (1) | DK1318828T3 (ja) |
EA (2) | EA009528B1 (ja) |
ES (2) | ES2438779T3 (ja) |
HK (2) | HK1110011A1 (ja) |
IL (3) | IL154545A0 (ja) |
PT (1) | PT1318828E (ja) |
WO (1) | WO2002015923A1 (ja) |
Families Citing this family (86)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8568766B2 (en) * | 2000-08-24 | 2013-10-29 | Gattadahalli M. Anantharamaiah | Peptides and peptide mimetics to treat pathologies associated with eye disease |
US7148197B2 (en) * | 2000-08-24 | 2006-12-12 | The Regents Of The University Of California | Orally administered small peptides synergize statin activity |
US7723303B2 (en) * | 2000-08-24 | 2010-05-25 | The Regents Of The University Of California | Peptides and peptide mimetics to treat pathologies characterized by an inflammatory response |
US7144862B2 (en) * | 2000-08-24 | 2006-12-05 | The Regents Of The University Of California | Orally administered peptides to ameliorate atherosclerosis |
US7199102B2 (en) * | 2000-08-24 | 2007-04-03 | The Regents Of The University Of California | Orally administered peptides synergize statin activity |
US7166578B2 (en) * | 2000-08-24 | 2007-01-23 | The Regents Of The University Of California | Orally administered peptides synergize statin activity |
US6664230B1 (en) * | 2000-08-24 | 2003-12-16 | The Regents Of The University Of California | Orally administered peptides to ameliorate atherosclerosis |
US6930085B2 (en) | 2002-04-05 | 2005-08-16 | The Regents Of The University Of California | G-type peptides to ameliorate atherosclerosis |
DE10222234A1 (de) * | 2002-05-16 | 2003-11-27 | Roche Diagnostics Gmbh | Kontroll- und Kalibrationsmaterial für Blutgerinnungstests |
US20090011974A1 (en) * | 2002-10-30 | 2009-01-08 | Bocharov Alexander V | Scavenger Receptor B1 (Cla-1) Targeting for the Treatment of Infection, Sepsis and Inflammation |
EP1599173B1 (en) * | 2002-11-13 | 2017-02-22 | The Uab Research Foundation | Synthetic single domain polypeptides mimicking apolipoprotein e and methods of use |
AU2004233333A1 (en) * | 2003-04-22 | 2004-11-04 | Avanir Pharmacueticals | Mediators of reverse cholesterol transport for the treatment of hypercholesterolemia |
US20050159362A1 (en) * | 2003-04-22 | 2005-07-21 | Sircar Jagadish C. | Mediators of reverse cholesterol transport for the treatment of hypercholesterolemia |
GB0311081D0 (en) * | 2003-05-14 | 2003-06-18 | Btg Internat Limted | Treatment of neurodegenerative conditions |
US7964641B2 (en) * | 2003-08-18 | 2011-06-21 | Btg International Limited | Treatment of neurodegenerative conditions |
AU2004296829A1 (en) | 2003-12-05 | 2005-06-23 | The Cleveland Clinic Foundation | Risk markers for cardiovascular disease |
GB0329958D0 (en) | 2003-12-24 | 2004-01-28 | Univ Manchester | Treatment of viral infections |
GB0404374D0 (en) | 2004-02-27 | 2004-03-31 | Univ Manchester | Treatment of bacterial infections |
CA2776927C (en) * | 2004-04-15 | 2014-08-12 | Athera Biotechnologies Ab | Phosphorylcholine conjugates and corresponding antibodies |
PL1750862T3 (pl) * | 2004-06-04 | 2011-06-30 | Teva Pharma | Kompozycja farmaceutyczna zawierająca irbesartan |
CA2568543A1 (en) * | 2004-06-09 | 2005-12-29 | Avanir Pharmaceuticals | Mediators of reverse cholesterol transport for the treatment of hypercholesterolemia |
PE20050986A1 (es) * | 2004-06-09 | 2006-02-03 | Avanir Pharmaceuticals | Derivados heterociclicos mediadores del transporte inverso de colesterol |
MXJL06000070A (es) * | 2004-06-09 | 2007-04-10 | Avanir Pharmaceuticals | Pequenas moleculas para el tratamiento de hipercolesterolemia y enfermedades relacionadas. |
WO2006020040A2 (en) * | 2004-07-16 | 2006-02-23 | Trustees Of Tufts College | Apolipoprotein a1 mimetics and uses thereof |
US20060173067A1 (en) * | 2004-08-11 | 2006-08-03 | The Regents Of The University Of California | Small molecules for the treatment of atherosclerosis |
WO2006020498A2 (en) | 2004-08-11 | 2006-02-23 | The Cleveland Clinic Foundation | Therapeutic agents and methods for cardiovascular disease |
RU2448977C2 (ru) * | 2004-09-16 | 2012-04-27 | Зе Риджентс Оф Зи Юнивесити Оф Кэлифонье | Обладающий способностью облегчать по меньшей мере один симптом воспалительного состояния пептид, содержащая его фармацевтическая композиция и способ лечения атеросклероза с их помощью |
WO2006053754A1 (en) * | 2004-11-19 | 2006-05-26 | Novartis Ag | COMBINATIONS OF ANTI-ATHEROSCLEROTIC PEPTIDES AND AN mTOR INHIBITING AGENT AND THEIR METHODS OF USE |
GB0425932D0 (en) * | 2004-11-25 | 2004-12-29 | Btg Int Ltd | Structured phospholipids |
AU2005314043A1 (en) * | 2004-12-06 | 2006-06-15 | The Regents Of The University Of California | Methods for improving the structure and function of arterioles |
GB0504333D0 (en) * | 2005-03-02 | 2005-04-06 | Btg Int Ltd | Treatment of cytokine dysregulation |
GB0504362D0 (en) * | 2005-03-02 | 2005-04-06 | Btg Int Ltd | Cytokine modulators |
US8206750B2 (en) | 2005-03-24 | 2012-06-26 | Cerenis Therapeutics Holding S.A. | Charged lipoprotein complexes and their uses |
US20080293639A1 (en) * | 2005-04-29 | 2008-11-27 | The Regents Of The University Of California | Peptides and peptide mimetics to treat pathologies characterized by an inflammatory response |
EP2269623A1 (en) | 2005-04-29 | 2011-01-05 | The Regents of The University of California | Peptides and peptide mimetics to treat pathologies characterized by an inflammatory response |
GR1005428B (el) * | 2005-05-27 | 2007-02-01 | Χαραλαμπος Αλεξοπουλος | Συνθετικα λιποπεπτιδια με αντιαθηρογονο δραση, που εμποδιζουν την οξειδωση της λιποπρωτεϊνης χαμηλης πυκνοτητας (ldl) και αναστελλουν την απενεργοποιηση του ενζυμου της paf ακετυλοϋδρολασης (paf-ah) |
GB0513096D0 (en) * | 2005-06-28 | 2005-08-03 | Strathclyde | Treatment of microbial infections |
WO2007055873A2 (en) * | 2005-11-04 | 2007-05-18 | Avanir Pharmaceuticals | Process for the manufacture of peptide facilitators of reverse cholesterol transport |
US8440695B2 (en) * | 2005-11-09 | 2013-05-14 | St Jude Children's Research Hospital | Use of chloroquine to treat metabolic syndrome |
CN101489577B (zh) * | 2006-06-01 | 2013-10-16 | 蒙特利尔心脏病学研究所 | 治疗心瓣膜病的方法和化合物 |
US20080227686A1 (en) * | 2006-06-16 | 2008-09-18 | Lipid Sciences, Inc. | Novel Peptides that Promote Lipid Efflux |
US20080206142A1 (en) * | 2006-06-16 | 2008-08-28 | Lipid Sciences, Inc. | Novel Peptides That Promote Lipid Efflux |
EP2041174A2 (en) * | 2006-06-16 | 2009-04-01 | Lipid Sciences, Inc. | Novel peptides that promote lipid efflux |
CA2659655A1 (en) * | 2006-08-08 | 2008-02-21 | Alan M. Fogelman | Salicylanilides enhance oral delivery of therapeutic peptides |
US20080138284A1 (en) * | 2006-09-26 | 2008-06-12 | Lipid Sciences, Inc. | Novel Peptides That Promote Lipid Efflux |
ES2377329T3 (es) * | 2006-12-13 | 2012-03-26 | The Regents Of The University Of California | Mediadores selectivos y potentes del flujo de salida de colesterol |
US20080268038A1 (en) * | 2007-04-26 | 2008-10-30 | Wolfe Robert R | Compositions and Approaches for Increasing Diet Induced Thermogenesis, Inducing Weight Loss and Maintaining Muscle Mass and Strength |
AU2008275170A1 (en) * | 2007-07-09 | 2009-01-15 | Novartis Ag | Preserving secondary peptide structure |
US8557767B2 (en) | 2007-08-28 | 2013-10-15 | Uab Research Foundation | Synthetic apolipoprotein E mimicking polypeptides and methods of use |
DK2195331T3 (da) | 2007-08-28 | 2014-02-03 | Uab Research Foundation | Syntetiske polypeptider, der efterligner apolipoprotein e, og anvendelsesmetoder |
MX337147B (es) * | 2007-08-30 | 2016-02-15 | Curedm Group Holdings Llc | Composiciones y metodos para utilizar peptidos proislet y sus analogos. |
CN107080845A (zh) * | 2007-12-11 | 2017-08-22 | 科达治疗公司 | 受损伤口愈合的组合物和治疗 |
US20110020242A1 (en) * | 2007-12-12 | 2011-01-27 | Gang Zheng | High-density lipoprotein-like peptide-phospholipid scaffold ("hpps") nanoparticles |
WO2010014830A2 (en) * | 2008-07-30 | 2010-02-04 | Cosmix Therapeutics Llc | Peptide therapeutics that bind vegf and methods of use thereof |
ITTO20080894A1 (it) * | 2008-12-02 | 2010-06-03 | Bioindustry Park Del Canavese S P A | Uso dell'aptoglobina, peptidi leganti l'aptoglobina, polimeri contenenti gli stessi e loro uso |
SI2396017T1 (sl) | 2009-02-16 | 2015-12-31 | Cerenis Therapeutics Holding Sa | Mimika apolipoproteina A-1 |
US20120270771A1 (en) * | 2009-09-30 | 2012-10-25 | Snu R&Db Foundation | Apolipoprotein a-1 mimic peptides, and therapeutic agent for treating hyperlipidemia and diseases related to hyperlipidemia comprising same |
WO2011044545A2 (en) | 2009-10-09 | 2011-04-14 | Sigalov Alexander B | Methods and compositions for targeted imaging |
DK2385374T4 (en) | 2010-05-05 | 2018-04-30 | Zora Biosciences Oy | LIPIDOMICS BIOMARKERS FOR ATHEROSCLEROSIS AND CARDIOVASCULAR DISEASE |
WO2011161062A2 (en) * | 2010-06-20 | 2011-12-29 | Zora Biosciences Oy | Lipidomic biomarkers for identification of high-risk coronary artery disease patients |
WO2012108990A2 (en) * | 2011-02-07 | 2012-08-16 | Indiana University Research And Technology Corporation | Peptide-phospholipid conjugates |
CN103443123B (zh) | 2011-02-07 | 2020-05-29 | 塞勒尼斯医疗控股公司 | 脂蛋白复合物及其制备和用途 |
US9539300B2 (en) | 2012-03-31 | 2017-01-10 | The Regents Of The University Of California | Modulating disease through genetic engineering of plants |
US10894098B2 (en) | 2012-04-09 | 2021-01-19 | Signablok, Inc. | Methods and compositions for targeted imaging |
MX364626B (es) * | 2012-11-06 | 2019-05-03 | Les Hopitaux Univ De Geneve | Péptidos miméticos. |
WO2014152776A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | Uab Research Foundation | Apolipoprotein mimetics and uses thereof |
US10017551B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-07-10 | The Regents Of The University Of California | Peptides having reduced toxicity that stimulate cholesterol efflux |
EP2989120A4 (en) | 2013-04-25 | 2017-04-19 | Carmel-Haifa University Economic Corp. | Synthetic anti-inflammatory peptides and use thereof |
EP2853259A1 (en) | 2013-09-30 | 2015-04-01 | Université Pierre et Marie Curie (Paris 6) | Reconstituted high density lipoproteins composition and uses thereof |
RU2016144908A (ru) | 2014-05-02 | 2018-06-05 | Серени Терапеутикс Холдинг Са | Маркеры hdl-терапии |
EP3189069A4 (en) * | 2014-07-31 | 2018-03-07 | UAB Research Foundation | Apoe mimetic peptides and higher potency to clear plasma cholesterol |
EP3319980B8 (en) | 2015-07-10 | 2021-11-03 | Peptinovo Biopharma Inc. | Formulations for improving the efficacy of hydrophobic drugs |
CN105061579B (zh) * | 2015-08-18 | 2018-08-28 | 北京大学人民医院 | 脂多糖结合蛋白在制备类风湿关节炎相关药物中的应用 |
WO2018002673A1 (en) | 2016-07-01 | 2018-01-04 | N4 Pharma Uk Limited | Novel formulations of angiotensin ii receptor antagonists |
CA3032229A1 (en) | 2016-07-27 | 2018-02-01 | Hartis-Pharma Sa | Therapeutic combinations to treat red blood cell disorders |
WO2018063796A1 (en) | 2016-09-28 | 2018-04-05 | The Regents Of The University Of California | Ezetimibe-associated apoa-1 mimetic peptides showing enhanced synergism |
US10426817B2 (en) | 2017-01-24 | 2019-10-01 | Macregen, Inc. | Treatment of age-related macular degeneration and other eye diseases with apolipoprotein mimetics |
CN115427064A (zh) | 2020-04-16 | 2022-12-02 | 阿比奥尼克斯制药公司 | 使用基于脂质结合蛋白的复合物治疗急性病况的方法 |
US20240000948A1 (en) | 2020-10-01 | 2024-01-04 | Abionyx Pharma Sa | Methods for treating eye diseases using lipid binding protein-based complexes |
RU2760498C1 (ru) * | 2021-02-09 | 2021-11-25 | Вахтанг Владимирович Гобеджишвили | Способ прогнозирования развития избыточного рубцеобразования у больных после проктологической операции |
EP4322746A1 (en) | 2021-04-15 | 2024-02-21 | Abionyx Pharma SA | Use of lipid binding protein-based complexes in organ preservation solutions |
WO2023168350A2 (en) * | 2022-03-03 | 2023-09-07 | University Of Maryland, Baltimore | Synthetic amphipathic helical peptides and treatment methods using synthetic amphipathic helical peptides |
WO2023194797A1 (en) | 2022-04-06 | 2023-10-12 | Abionyx Pharma Sa | Methods for treating eye diseases using lipid binding protein-based complexes |
WO2023194798A1 (en) | 2022-04-06 | 2023-10-12 | Abionyx Pharma Sa | Methods for treating leukocytosis, endothelial dysfunction and carditis using lipid binding protein-based complexes |
WO2023237927A2 (en) | 2022-06-10 | 2023-12-14 | Abionyx Pharma Sa | Methods for treating hyperinflammatory conditions using lipid binding protein -based complexes |
WO2023237935A2 (en) | 2022-06-10 | 2023-12-14 | Abionyx Pharma Sa | Methods for treating acute conditions using lipid binding protein-based complexes |
Family Cites Families (30)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3767040A (en) | 1971-03-01 | 1973-10-23 | Minnesota Mining & Mfg | Pressure-sensitive polyurethane adhesives |
US4155913A (en) | 1973-02-08 | 1979-05-22 | Hoffmann-La Roche Inc. | Thienotriazolodiazepine derivatives |
NO812612L (no) | 1980-08-06 | 1982-02-08 | Ferring Pharma Ltd | Enzym-inhibitorer. |
US4643988A (en) | 1984-05-15 | 1987-02-17 | Research Corporation | Amphipathic peptides |
US5182261A (en) * | 1989-07-13 | 1993-01-26 | The Rockefeller University | Modified transforming growth factor alpha oligopeptides and pharmaceutical compositions thereof |
AU662885B2 (en) | 1990-06-07 | 1995-09-21 | Scripps Research Institute, The | APO AI polypeptides, antibodies, and immunoassays |
GB9022788D0 (en) | 1990-10-19 | 1990-12-05 | Cortecs Ltd | Pharmaceutical formulations |
US5646119A (en) * | 1991-11-01 | 1997-07-08 | Periodontix, Inc. | D-amino acid histatin-based peptides as anti-fungal and anti-bacterial agents |
SE9103701D0 (sv) * | 1991-12-13 | 1991-12-13 | Kabi Pharmacia Ab | Apolipoprotein |
US5733879A (en) * | 1992-06-12 | 1998-03-31 | N.V. Innogenetics, S.A. | Peptides and proteins, process for their preparation and their use as cholesterol acceptors |
US5344822A (en) * | 1992-08-12 | 1994-09-06 | The Rogosin Institute | Methods useful in endotoxin prophylaxis and therapy |
US5733549A (en) | 1992-08-14 | 1998-03-31 | Shino-Test Corporation | Peptides including amino acid sequences selected from lipoprotein (a) and apolipoprotein (a), antibodies recognizing these amino acid sequences, and methods of determination using these antibodies |
US5721138A (en) | 1992-12-15 | 1998-02-24 | Sandford University | Apolipoprotein(A) promoter and regulatory sequence constructs and methods of use |
JP3926839B2 (ja) * | 1993-09-14 | 2007-06-06 | エピミューン,インコーポレイティド | 万能dr−結合性ペプチドを用いる免疫応答の改変 |
US6169073B1 (en) * | 1995-02-16 | 2001-01-02 | Bayer Corporation | Peptides and peptidomimetics with structural similarity to human p53 that activate p53 function |
WO1997009048A1 (en) | 1995-09-09 | 1997-03-13 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Use of a thienotriazolodiazepine to increase apolipoprotein a-i levels |
US5912014A (en) | 1996-03-15 | 1999-06-15 | Unigene Laboratories, Inc. | Oral salmon calcitonin pharmaceutical products |
CA2249459A1 (en) * | 1996-03-29 | 1997-10-09 | Dario Boffelli | Amphipathic molecules as cholesterol and other lipid uptake inhibitors |
US6200955B1 (en) * | 1996-06-11 | 2001-03-13 | Commonwealth Biotechnologies, Inc. | Heparin binding peptides |
US6156727A (en) * | 1996-09-05 | 2000-12-05 | Uab Research Foundation | Anti-atherosclerotic peptides and a transgenic mouse model of antherosclerosis |
US6696545B1 (en) * | 1997-04-11 | 2004-02-24 | Sangstat Medical Corporation | Cytomodulating lipophilic peptides for modulating immune system activity and inhibiting inflammation |
IN185761B (ja) | 1997-05-13 | 2001-04-28 | Council Scient Ind Res | |
US6004925A (en) * | 1997-09-29 | 1999-12-21 | J. L. Dasseux | Apolipoprotein A-I agonists and their use to treat dyslipidemic disorders |
US6037323A (en) | 1997-09-29 | 2000-03-14 | Jean-Louis Dasseux | Apolipoprotein A-I agonists and their use to treat dyslipidemic disorders |
US6046166A (en) * | 1997-09-29 | 2000-04-04 | Jean-Louis Dasseux | Apolipoprotein A-I agonists and their use to treat dyslipidemic disorders |
US6518412B1 (en) * | 1997-09-29 | 2003-02-11 | Jean-Louis Dasseux | Gene therapy approaches to supply apolipoprotein A-I agonists and their use to treat dyslipidemic disorders |
US6287590B1 (en) * | 1997-10-02 | 2001-09-11 | Esperion Therapeutics, Inc. | Peptide/lipid complex formation by co-lyophilization |
WO1999047566A1 (en) | 1998-03-17 | 1999-09-23 | The Uab Research Foundation | Synthetic peptides that enhance ldl uptake |
CA2338022C (en) * | 1998-07-30 | 2013-05-28 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Inhibitors of hiv membrane fusion |
US6664230B1 (en) | 2000-08-24 | 2003-12-16 | The Regents Of The University Of California | Orally administered peptides to ameliorate atherosclerosis |
-
2000
- 2000-08-24 US US09/645,454 patent/US6664230B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-06-29 US US09/896,841 patent/US6933279B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-23 DE DE60144543T patent/DE60144543D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-23 AT AT01966198T patent/ATE464060T1/de active
- 2001-08-23 ES ES10002402.5T patent/ES2438779T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-23 CN CNA2006101006706A patent/CN1911439A/zh active Pending
- 2001-08-23 EA EA200501744A patent/EA009528B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-08-23 CA CA2718348A patent/CA2718348C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-23 CA CA002420222A patent/CA2420222C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-23 EP EP10002402.5A patent/EP2198877B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-23 CA CA2639651A patent/CA2639651C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-23 DE DE60141842T patent/DE60141842D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-23 AU AU8673201A patent/AU8673201A/xx active Pending
- 2001-08-23 EP EP07007775A patent/EP1864675B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-23 CN CNA2006101006674A patent/CN1931358A/zh active Pending
- 2001-08-23 ES ES01966198T patent/ES2342258T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-23 PT PT01966198T patent/PT1318828E/pt unknown
- 2001-08-23 IL IL15454501A patent/IL154545A0/xx active IP Right Grant
- 2001-08-23 DK DK01966198.2T patent/DK1318828T3/da active
- 2001-08-23 AU AU2001286732A patent/AU2001286732B2/en not_active Expired
- 2001-08-23 CN CN200610100669.3A patent/CN1931359B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-23 CN CN2006101006689A patent/CN1943781B/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-23 CN CNB018172806A patent/CN1224419C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-23 CN CN200510103876A patent/CN100579984C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-23 AT AT07007775T patent/ATE506958T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-08-23 JP JP2002520844A patent/JP3822167B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-23 EP EP01966198A patent/EP1318828B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-08-23 WO PCT/US2001/026497 patent/WO2002015923A1/en active Application Filing
- 2001-08-23 EA EA200300289A patent/EA006488B1/ru not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-02-19 IL IL154545A patent/IL154545A/en unknown
- 2003-10-29 HK HK08104243.9A patent/HK1110011A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2003-10-29 HK HK03107790.4A patent/HK1055400A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-10-19 JP JP2005304531A patent/JP4205713B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2006
- 2006-01-06 AU AU2006200035A patent/AU2006200035B2/en not_active Expired
- 2006-08-14 JP JP2006220831A patent/JP4364222B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-04-27 JP JP2007118451A patent/JP2007277250A/ja not_active Withdrawn
- 2007-09-26 JP JP2007250264A patent/JP2008150358A/ja active Pending
-
2009
- 2009-07-03 AU AU2009202705A patent/AU2009202705C1/en not_active Expired
-
2010
- 2010-05-31 IL IL206114A patent/IL206114A/en active IP Right Grant
- 2010-07-14 CY CY20101100656T patent/CY1110204T1/el unknown
- 2010-09-10 JP JP2010203789A patent/JP5241790B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4205713B2 (ja) | アテローム性動脈硬化症を改善する経口投与ペプチド | |
US7144862B2 (en) | Orally administered peptides to ameliorate atherosclerosis | |
JP4361809B2 (ja) | アテローム性硬化症を改善するg−タイプペプチド | |
AU2001286732A1 (en) | Orally administered peptides to ameliorate atherosclerosis | |
RU2448977C2 (ru) | Обладающий способностью облегчать по меньшей мере один симптом воспалительного состояния пептид, содержащая его фармацевтическая композиция и способ лечения атеросклероза с их помощью | |
AU2007237157B2 (en) | Peptides that ameliorate atherosclerosis |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060214 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20060510 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20060515 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060814 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20060926 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070123 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20070308 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20070330 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20080207 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20080207 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20080811 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20080811 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20081016 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20111024 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4205713 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121024 Year of fee payment: 4 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20121024 Year of fee payment: 4 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131024 Year of fee payment: 5 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term |