JP2001299364A - 新規タンパク質およびそのｄｎａ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】新規タンパク質、そのＤＮＡおよびその製造法
の提供。 【解決手段】本発明のタンパク質およびそれをコードす
るＤＮＡは、例えば、リウマチ、糖尿病、微生物感染
症、ＨＩＶ感染、慢性Ｂ型肝炎、炎症性疾患、皮膚炎、
関節炎、自己免疫疾患、移植片対宿主病、喘息、敗血
症、骨疾患、癌などの疾病の治療・予防剤として使用す
ることができる。また、本発明のタンパク質は、本発明
のタンパク質の活性を促進もしくは阻害する化合物また
はその塩のスクリーニングのための試薬として有用であ
る。さらに、本発明のタンパク質に対する抗体は、本発
明のタンパク質を特異的に認識することができるので、
被検液中の本発明のタンパク質の定量などに使用するこ
とができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規なタンパク質に
関する。詳しくは、新規なＩＬ−１レセプターアンタゴ
ニストタンパク質に関する。

【０００２】

【従来の技術】生体は、細胞間または組織間で、互いに
情報伝達をすることにより、発生、分化、増殖、恒常性
の維持などの統合の取れた調節を行っている。多くの場
合、タンパク性因子がそれらの仲立ちをしている。例え
ば、免疫系、造血系に関与する分泌性因子（液性因子）
が数多く見いだされていて、それらはサイトカインと呼
ばれている。リンホカイン、モノカイン、インターフェ
ロン、コロニー刺激因子、腫瘍壊死因子などがこれらに
含まれる。インターロイキン１（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉ
ｎ−１、以下ＩＬ−１と略す）は古くからその存在につ
いては知られており、内因性発熱物質、リンパ球活性化
因子、肝細胞刺激因子、破骨細胞活性化因子、ヘモポエ
チンＩなど種々の名称で呼ばれてきた。１９８４年から
１９８５年にかけてそのｃＤＮＡが単離され、異なる遺
伝子に由来する２種類のＩＬ−１（ＩＬ−１α，ＩＬ−
１β）の存在が明らかにされた（ネイチャー（Nature）
３１５巻、ｐ６４１−６４７（１９８５））。ＩＬ−１
α、ＩＬ−１β両者の生物活性はほとんど同じで、いず
れかに特異的な生物活性は知られていない。ＩＬ−１は
種々の細胞から産生され、その作用は炎症反応をはじめ
として、免疫系、神経系、内分泌系、造血系など、広範
囲にわたって多様な生物活性を有するサイトカインとし
て知られている。そのため、疾患との関わりも大きく、
例えばリウマチや糖尿病、微生物感染、ＨＩＶ感染、慢
性Ｂ型肝炎などをはじめとして、感染や炎症を伴う多く
の疾病において炎症反応のメディエーターとしてＩＬ−
１産生の昂進がみられる一方で、外傷時や住血吸虫感
染、全身性紅斑性狼瘡などではＩＬ−１産生の抑制がみ
られる。このようなＩＬ−１の生物活性はその受容体Ｉ
Ｌ−１レセプターを介して発揮されるが、ＩＬ−１レセ
プターには、１９８８年から１９９１年にかけてクロー
ニングされた分子量８０ｋＤａのタイプＩと分子量６８
ｋＤａのタイプＩＩの２つのレセプターが知られ（サイ
エンス(Science)２４１巻、５８５−５８９頁(1988）、
ザ・エンボ・ジャーナル（The EMBO Journal）１０巻、
２８２１−２８３２頁（1991））、各発現細胞と細胞内
領域の構造上の大きな相違から、その機能的な違いが認
められている。またＩＬ−１βに特異的に結合する可溶
性レセプター（ｓＩＬ−１レセプター）の存在も明らか
にされている（フェブス・レターズ（FEBS Letters）２
６０巻、２１３−２１６頁（1990））。一方、それ自身
は生物活性を持たないが、ＩＬ−１レセプターに結合し
てＩＬ−１レセプターとＩＬ−１の結合を特異的に阻害
するＩＬ−１レセプターアンタゴニスト（ＩＬ−１ Ｒ
ｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ；以下、ＩＬ−
１ｒａと略す）があり、その遺伝子が１９９０年にクロ
ーニングされている(ネイチャー(Nature)３４３巻、３
４１−３４６頁（1990）)。また、１９９１年にはＩＬ
−１ｒａと同一遺伝子に由来するがＩＬ−１ｒａの分泌
シグナル配列の欠損した非分泌型ＩＬ−１ｒａのｃＤＮ
Ａも２種クローニングされており、ＩＬ−１ｒａおよび
非分泌型ＩＬ−１ｒａは、それぞれ細胞外及び細胞内の
ＩＬ−１活性調節を行う因子と考えられている(Proc. N
atl. Acad. Sci. USA 88巻、p3681-3685 (1991)、アニ
ュアル・レビュー・オブ。イムノロジー(Annual Review
of Immunology)１６巻、p27-55 (1998))。また、ＩＬ
−１の活性を阻害するＩＬ−１ｒａを種々の病態モデル
動物に投与すると、種々の炎症が抑えられる。例えば、
ＬＰＳ（リポポリ多糖）による敗血症ショックを防止し
たり、組織への炎症細胞浸潤や浮腫、壊死などを抑制す
る(ネイチャー(Nature）３４８巻、５５０−５５２頁
（１９９０））他、ＩＬ−１ｒａは、急性骨髄性白血病
細胞からのＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−６の産生な
らびに細胞増殖を阻害する。これらＩＬ−１ｒａによる
動物モデルの結果は、ヒトにおける敗血症、リウマチ様
関節炎、慢性関節炎、移植片対宿主病、喘息、骨髄性白
血病など各種疾患におけるＩＬ−１レセプターアンタゴ
ニストの効果を期待させるものであり、将来の新しい治
療薬の芽として、より有効なＩＬ−１レセプターアンタ
ゴニスト活性を有する物質の登場が望まれていた。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、生物学、医
学、獣医学などに利用可能な新規タンパク質、その部分
ペプチド、またはそれらの塩、組換えベクター、形質転
換体、該タンパク質の製造法、該タンパク質または部分
ペプチドを含有する医薬、および該タンパク質などに対
する抗体を提供することを目的とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ヒト生体内
で発現している新規な塩基配列を有するｃＤＮＡを発見
することに成功し、それにコードされるタンパク質がＩ
Ｌ−１レセプターアンタゴニストタンパク質であること
を見出した。本発明者らは、これらの知見に基づいて、
さらに検討を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、 （１）配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と同一ま
たは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質
またはその塩、 （２）上記（１）記載のタンパク質の部分ペプチドまた
はその塩、 （３）上記（１）記載のタンパク質または上記（２）記
載の部分ペプチドをコードする塩基配列を有するＤＮＡ
を含有するＤＮＡ、 （４）配列番号：２で表される塩基配列を有する上記
（３）記載のＤＮＡ、 （５）配列番号：３で表わされるアミノ酸配列と同一ま
たは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質
またはその塩、 （６）上記（５）記載のタンパク質の部分ペプチドまた
はその塩、 （７）上記（５）記載のタンパク質または上記（６）記
載の部分ペプチドをコードする塩基配列を有するＤＮＡ
を含有するＤＮＡ、 （８）配列番号：４で表される塩基配列を有する上記
（７）記載のＤＮＡ、 （９）上記（１）もしくは上記（５）記載のタンパク質
または上記（２）もしくは上記（６）記載の部分ペプチ
ドをコードするＤＮＡを含有する組換えベクターで形質
転換された形質転換体を培養し、該タンパク質または該
部分ペプチドを生成せしめることを特徴とする、上記
（１）もしくは上記（５）記載のタンパク質または上記
（２）もしくは上記（６）記載の部分ペプチドまたはそ
の塩の製造法、 （１０）上記（１）もしくは上記（５）記載のタンパク
質または上記（２）もしくは上記（６）記載の部分ペプ
チドまたはその塩に対する抗体、 （１１）上記（１）もしくは上記（５）記載のタンパク
質または上記（２）もしくは上記（６）記載の部分ペプ
チドまたはその塩を用いることを特徴とする、上記
（１）もしくは上記（５）記載のタンパク質または上記
（２）もしくは上記（６）記載の部分ペプチドまたはそ
の塩の活性を促進または阻害する化合物またはその塩の
スクリーニング方法、 （１２）上記（１）もしくは上記（５）記載のタンパク
質または上記（２）もしくは上記（６）記載の部分ペプ
チドまたはその塩を含有してなる、上記（１）もしくは
上記（５）記載のタンパク質または上記（２）もしくは
上記（６）記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促
進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング
用キット、 （１３）上記（１１）記載のスクリーニング方法または
上記（１２）記載のスクリーニング用キットを用いて得
られうる、上記（１）もしくは上記（５）記載のタンパ
ク質または上記（２）もしくは上記（６）記載の部分ペ
プチドまたはその塩の活性を促進または阻害する化合物
またはその塩、 （１４）上記（１１）記載のスクリーニング方法または
上記（１２）記載のスクリーニング用キットを用いて得
られうる、上記（１）もしくは上記（５）記載のタンパ
ク質または上記（２）もしくは上記（６）記載の部分ペ
プチドまたはその塩の活性を促進または阻害する化合物
またはその塩を含有してなる医薬、 （１５）上記（１０）記載の抗体を含有してなる診断
剤、 （１６）上記（１）もしくは上記（５）記載のタンパク
質または上記（２）もしくは上記（６）記載の部分ペプ
チドまたはその塩を含有してなる医薬、 （１７）リウマチ、糖尿病、微生物感染症、ＨＩＶ感
染、慢性Ｂ型肝炎、炎症性疾患、皮膚炎、関節炎、自己
免疫疾患、移植片対宿主病、喘息、敗血症、骨疾患また
は癌の治療・予防剤である上記（１６）記載の医薬、 （１８）上記（１）もしくは上記（５）記載のタンパク
質または請求項２もしくは請求項６記載の部分ペプチド
またはその塩を投与することを特徴とするリウマチ、糖
尿病、微生物感染症、ＨＩＶ感染、慢性Ｂ型肝炎、炎症
性疾患、皮膚炎、関節炎、自己免疫疾患、移植片対宿主
病、喘息、敗血症、骨疾患または癌の治療・予防方法な
どを提供する。

【０００５】さらには、本発明は、 （１９）配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質
的に同一のアミノ酸配列が、配列番号：１で表わされる
アミノ酸配列と約５０％以上（好ましくは約６０％以
上、さらに好ましくは約７０％以上、より好ましくは約
８０％以上、特に好ましくは約９０％以上、最も好まし
くは約９５％以上）の相同性を有するアミノ酸配列であ
る上記（１）記載のタンパク質またはその塩、 （２０）配列番号：３で表わされるアミノ酸配列と実質
的に同一のアミノ酸配列が、配列番号：３で表わされる
アミノ酸配列と約５０％以上（好ましくは約６０％以
上、さらに好ましくは約７０％以上、より好ましくは約
８０％以上、特に好ましくは約９０％以上、最も好まし
くは約９５％以上）の相同性を有するアミノ酸配列であ
る上記（５）記載のタンパク質またはその塩、 （２１）配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と実質
的に同一のアミノ酸配列が、配列番号：１で表わされ
るアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１
〜３０個程度）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、
配列番号：１で表わされるアミノ酸配列に１または２個
以上（好ましくは、１〜３０個程度）のアミノ酸が付加
したアミノ酸配列、配列番号：１で表わされるアミノ
酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜３０個
程度）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸
配列、またはそれらを組み合わせたアミノ酸配列であ
る上記（１）記載のタンパク質またはその塩、 （２２）配列番号：３で表わされるアミノ酸配列と実質
的に同一のアミノ酸配列が、配列番号：３で表わされ
るアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１
〜３０個程度）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、
配列番号：３で表わされるアミノ酸配列に１または２個
以上（好ましくは、１〜３０個程度）のアミノ酸が付加
したアミノ酸配列、配列番号：３で表わされるアミノ
酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜３０個
程度）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸
配列、またはそれらを組み合わせたアミノ酸配列であ
る上記（５）記載のタンパク質またはその塩、 （２３）上記（１）もしくは上記（５）記載のタンパク
質または上記（２）もしくは上記（６）記載の部分ペプ
チドをコードするＤＮＡを含有する組換えベクター、 （２４）上記（２３）記載の組換えベクターで形質転換
させた形質転換体などを提供する。さらに本発明は、分
子量マーカー、組織マーカー、染色体マッピング、遺伝
病の同定、プライマー、プローブの設計などの基礎研究
に利用できるのみならず、がん転移阻害、がん転移の検
出、細胞の分化増殖の調節、サイトカインの誘導、血管
新生調節、造血調節、血液凝固調節、感染症、代謝調
節、創傷火傷治癒、抗炎症、遺伝子治療などの分野で、
治療または予防目的で、利用できる可能性がある。

【０００６】

【発明の実施の形態】本発明の配列番号：１または配列
番号：３で表わされるアミノ酸配列と同一もしくは実質
的に同一のアミノ酸配列を有するタンパク質（以下、本
発明のタンパク質と称する）は、胎児を含むヒトや温血
動物（例えば、モルモット、ラット、マウス、ニワト
リ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サルなど）の細胞
（例えば、肝細胞、脾細胞、神経細胞、グリア細胞、膵
臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、ランゲルハン
ス細胞、表皮細胞、上皮細胞、内皮細胞、繊維芽細胞、
繊維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロフ
ァージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満
細胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球、樹状細胞）、
巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨
細胞、乳腺細胞、もしくは間質細胞、またはこれら細胞
の前駆細胞、幹細胞もしくはガン細胞など）もしくはそ
れらの細胞が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の
各部位（例、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、
視床下部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊髄、下垂体、
胃、膵臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨
髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小
腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、唾液腺、末梢血、前立
腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、軟骨、関節、骨格筋
などに由来するタンパク質であってもよく、組換えタン
パク質であってもよく、合成タンパク質であってもよ
い。

【０００７】配列番号：１または配列番号：３で表わさ
れるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列として
は、それぞれ配列番号：１または配列番号：３で表わさ
れるアミノ酸配列と約５０％以上、好ましくは約６０％
以上、さらに好ましくは約７０％以上、より好ましくは
約８０％以上、特に好ましくは約９０％以上、最も好ま
しくは約９５％以上の相同性を有するアミノ酸配列など
が挙げられる。本発明の配列番号：１または配列番号：
３で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸
配列を有するタンパク質としては、例えば、前記の配列
番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ酸配列
と実質的に同一のアミノ酸配列を有し、配列番号：１ま
たは配列番号：３で表わされるアミノ酸配列を有するタ
ンパク質と実質的に同質の性質を有するタンパク質など
が好ましい。実質的に同質の性質としては、例えば、Ｉ
Ｌ−１レセプターアンタゴニスト作用などが挙げられ
る。実質的に同質とは、それらの性質が定性的に同質で
あることを示す。したがって、アンタゴニスト作用など
の性質が同等（例、約０．１〜１００倍、好ましくは約
０．５〜１０倍、より好ましくは０．５〜２倍）である
ことが好ましいが、これらの性質の程度、タンパク質の
分子量などの量的要素は異なっていてもよい。本発明の
タンパク質またはその塩として、好ましくは、配列番
号：１で表わされるアミノ酸配列と同一または実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその塩
である。

【０００８】また、本発明のタンパク質としては、例え
ば、配列番号：１または配列番号：３で表わされるア
ミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜３
０個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましく
は数（１〜５）個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配
列、配列番号：１または配列番号：３で表わされるア
ミノ酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜３０
個程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは
数（１〜５）個）のアミノ酸が付加したアミノ酸配列、
配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ
酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜３０個程
度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数
（１〜５）個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、
配列番号：１または配列番号：３で表わされるアミノ
酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜３０個
程度、好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数
（１〜５）個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換された
アミノ酸配列、またはそれらを組み合わせたアミノ酸
配列を含有するタンパク質などのいわゆるムテインも含
まれる。上記のようにアミノ酸配列が挿入、欠失または
置換されている場合、その挿入、欠失または置換の位置
としては、特に限定されないが、配列番号：１で表され
るアミノ酸および配列番号：３で表わされるアミノ酸配
列に共通するアミノ酸配列以外の位置などが挙げられ
る。

【０００９】本明細書におけるタンパク質は、ペプチド
標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端
がＣ末端（カルボキシル末端）である。配列番号：１で
表わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質をはじめ
とする、本発明のタンパク質は、Ｃ末端が通常カルボキ
シル基（−ＣＯＯＨ）またはカルボキシレート(−ＣＯ
Ｏ^-）であるが、Ｃ末端がアミド（−ＣＯＮＨ₂）または
エステル（−ＣＯＯＲ）であってもよい。ここでエステ
ルにおけるＲとしては、例えば、メチル、エチル、ｎ−
プロピル、イソプロピルもしくはｎ−ブチルなどのＣ
_1-6アルキル基、例えば、シクロペンチル、シクロヘキ
シルなどのＣ_3-8シクロアルキル基、例えば、フェニ
ル、α−ナフチルなどのＣ_6-12アリール基、例えば、ベ
ンジル、フェネチルなどのフェニル−Ｃ_1-2アルキル基
もしくはα−ナフチルメチルなどのα−ナフチル−Ｃ
_1-2アルキル基などのＣ_7-14アラルキル基のほか、経口
用エステルとして汎用されるピバロイルオキシメチル基
などが用いられる。本発明のタンパク質がＣ末端以外に
カルボキシル基（またはカルボキシレート）を有してい
る場合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化さ
れているものも本発明のタンパク質に含まれる。この場
合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステ
ルなどが用いられる。さらに、本発明のタンパク質に
は、Ｎ末端のアミノ酸残基（例、メチオニン残基）のア
ミノ基が保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基など
のＣ_1-6アルカノイルなどのＣ_1-6アシル基など）で保護
されているもの、生体内で切断されて生成するＮ末端の
グルタミン残基がピログルタミン酸化したもの、分子内
のアミノ酸の側鎖上の置換基（例えば−ＯＨ、−ＳＨ、
アミノ基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ
基など）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチ
ル基などのＣ_1-6アルカノイル基などのＣ_1-6アシル基な
ど）で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したい
わゆる糖タンパク質などの複合タンパク質なども含まれ
る。本発明のタンパク質の具体例としては、例えば、配
列番号：１で表わされるアミノ酸配列を有するヒト由来
のタンパク質、配列番号：３で表わされるアミノ酸配列
を有するヒト由来のタンパク質などが用いられる。

【００１０】本発明のタンパク質の部分ペプチドとして
は、前記した本発明のタンパク質の部分ペプチドであっ
て、好ましくは、前記した本発明のタンパク質と同様の
性質を有するものであればいずれのものでもよい。例え
ば、本発明のタンパク質の構成アミノ酸配列のうち少な
くとも５個以上、好ましくは２０個以上、さらに好まし
くは３０個以上、より好ましくは５０個以上、最も好ま
しくは８０個以上のアミノ酸配列を有するペプチドなど
が用いられる。ここで、「実質的に同質の性質」とは、
前記と同意義を示す。また、本発明の部分ペプチドは、
そのアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、
１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）個）の
アミノ酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に１また
は２個以上（好ましくは、１〜２０個程度、より好まし
くは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜５）
個）のアミノ酸が付加し、または、そのアミノ酸配列に
１または２個以上（好ましくは、１〜２０個程度、より
好ましくは１〜１０個程度、さらに好ましくは数（１〜
５）個）のアミノ酸が挿入され、または、そのアミノ酸
配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜１０個程
度、より好ましくは数個、さらに好ましくは１〜５個程
度）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されていてもよ
い。

【００１１】また、本発明の部分ペプチドはＣ末端が通
常カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）またはカルボキシレー
ト（−ＣＯＯ^-）であるが、Ｃ末端がアミド（−ＣＯＮ
Ｈ₂）またはエステル（−ＣＯＯＲ）であってもよい。
また、本発明の部分ペプチドがＣ末端以外にカルボキシ
ル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カ
ルボキシル基がアミド化またはエステル化されているも
のも本発明のタンパク質に含まれる。この場合のエステ
ルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用
いられる。さらに、本発明の部分ペプチドには、Ｎ末端
のアミノ酸残基（例、メチオニン残基）のアミノ基が保
護基で保護されているもの、Ｎ端側が生体内で切断され
生成したグルタミン残基がピログルタミン酸化したも
の、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基
で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆ
る糖ペプチドなどの複合ペプチドなども含まれる。本発
明の部分ペプチドは抗体作成のための抗原として用いる
ことができるので、必ずしも本発明のタンパク質が有す
る活性を有する必要はない。

【００１２】本発明のタンパク質または部分ペプチドの
塩としては、生理学的に許容される酸（例、無機酸、有
機酸）や塩基（例、アルカリ金属塩）などとの塩が用い
られ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好まし
い。この様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩
酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機
酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マ
レイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚
酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン
酸）との塩などが用いられる。本発明のタンパク質、部
分ペプチドまたはその塩は、前述したヒトや温血動物の
細胞または組織から自体公知のタンパク質の精製方法に
よって製造することもできるし、後述するタンパク質を
コードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養すること
によっても製造することができる。また、後述のペプチ
ド合成法に準じて製造することもできる。ヒトや哺乳動
物の組織または細胞から製造する場合、ヒトや哺乳動物
の組織または細胞をホモジナイズした後、酸などで抽出
を行ない、該抽出液を逆相クロマトグラフィー、イオン
交換クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーを組
み合わせることにより精製単離することができる。

【００１３】本発明のタンパク質、部分ペプチドまたは
そのアミド体、またはその塩の合成には、通常市販のタ
ンパク質合成用樹脂を用いることができる。そのような
樹脂としては、例えば、クロロメチル樹脂、ヒドロキシ
メチル樹脂、ベンズヒドリルアミン樹脂、アミノメチル
樹脂、４−ベンジルオキシベンジルアルコール樹脂、４
−メチルベンズヒドリルアミン樹脂、ＰＡＭ樹脂、４−
ヒドロキシメチルメチルフェニルアセトアミドメチル樹
脂、ポリアクリルアミド樹脂、４−（２’，４’−ジメ
トキシフェニル−ヒドロキシメチル）フェノキシ樹脂、
４−（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃアミ
ノエチル）フェノキシ樹脂などを挙げることができる。
このような樹脂を用い、α−アミノ基と側鎖官能基を適
当に保護したアミノ酸を、目的とするタンパク質の配列
通りに、自体公知の各種縮合方法に従い、樹脂上で縮合
させる。反応の最後に樹脂からタンパク質を切り出すと
同時に各種保護基を除去し、さらに高希釈溶液中で分子
内ジスルフィド結合形成反応を実施し、目的のタンパク
質もしくは部分ペプチドまたはそれらのアミド体を取得
する。上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、タンパ
ク質合成に使用できる各種活性化試薬を用いることがで
きるが、特に、カルボジイミド類がよい。カルボジイミ
ド類としては、ＤＣＣ、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカル
ボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノ
プロリル）カルボジイミドなどが用いられる。これらに
よる活性化にはラセミ化抑制添加剤（例えば、ＨＯＢ
ｔ， ＨＯＯＢｔ）とともに保護アミノ酸を直接樹脂に
添加するかまたは、対称酸無水物またはＨＯＢｔエステ
ルあるいはＨＯＯＢｔエステルとしてあらかじめ保護ア
ミノ酸の活性化を行なった後に樹脂に添加することがで
きる。

【００１４】保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用
いられる溶媒としては、タンパク質縮合反応に使用しう
ることが知られている溶媒から適宜選択されうる。例え
ば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド，Ｎ，Ｎ−ジメチル
アセトアミド，Ｎ−メチルピロリドンなどの酸アミド
類、塩化メチレン，クロロホルムなどのハロゲン化炭化
水素類、トリフルオロエタノールなどのアルコール類、
ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類、ピリジ
ン，ジオキサン，テトラヒドロフランなどのエーテル
類、アセトニトリル，プロピオニトリルなどのニトリル
類、酢酸メチル，酢酸エチルなどのエステル類あるいは
これらの適宜の混合物などが用いられる。反応温度はタ
ンパク質結合形成反応に使用され得ることが知られてい
る範囲から適宜選択され、通常約−２０℃〜５０℃の範
囲から適宜選択される。活性化されたアミノ酸誘導体は
通常１.５〜４倍過剰で用いられる。ニンヒドリン反応
を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合には保護基
の脱離を行なうことなく縮合反応を繰り返すことにより
十分な縮合を行なうことができる。反応を繰り返しても
十分な縮合が得られないときには、無水酢酸またはアセ
チルイミダゾールを用いて未反応アミノ酸をアセチル化
することによって、後の反応に影響を与えないようにす
ることができる。

【００１５】原料のアミノ基の保護基としては、例え
ば、Ｚ、Ｂｏｃ、ｔ−ペンチルオキシカルボニル、イソ
ボルニルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキ
シカルボニル、Ｃｌ−Ｚ、Ｂｒ−Ｚ、アダマンチルオキ
シカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホ
ルミル、２−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニル
ホスフィノチオイル、Ｆｍｏｃなどが用いられる。カル
ボキシル基は、例えば、アルキルエステル化（例えば、
メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｔ−ブチル、シク
ロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロ
オクチル、２−アダマンチルなどの直鎖状、分枝状もし
くは環状アルキルエステル化）、アラルキルエステル化
（例えば、ベンジルエステル、４−ニトロベンジルエス
テル、４−メトキシベンジルエステル、４−クロロベン
ジルエステル、ベンズヒドリルエステル化）、フェナシ
ルエステル化、ベンジルオキシカルボニルヒドラジド
化、ｔ−ブトキシカルボニルヒドラジド化、トリチルヒ
ドラジド化などによって保護することができる。セリン
の水酸基は、例えば、エステル化またはエーテル化によ
って保護することができる。このエステル化に適する基
としては、例えば、アセチル基などの低級（Ｃ_1-6）ア
ルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイル基、ベンジ
ルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基などの炭
酸から誘導される基などが用いられる。また、エーテル
化に適する基としては、例えば、ベンジル基、テトラヒ
ドロピラニル基、t-ブチル基などである。チロシンのフ
ェノール性水酸基の保護基としては、例えば、Ｂｚｌ、
Ｃｌ₂−Ｂｚｌ、２−ニトロベンジル、Ｂｒ−Ｚ、ｔ−
ブチルなどが用いられる。ヒスチジンのイミダゾールの
保護基としては、例えば、Ｔｏｓ、４−メトキシ−２，
３，６−トリメチルベンゼンスルホニル、ＤＮＰ、ベン
ジルオキシメチル、Ｂｕｍ、Ｂｏｃ、Ｔｒｔ、Ｆｍｏｃ
などが用いられる。

【００１６】原料のカルボキシル基の活性化されたもの
としては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エ
ステル〔アルコール（例えば、ペンタクロロフェノー
ル、２，４，５−トリクロロフェノール、２，４−ジニ
トロフェノール、シアノメチルアルコール、パラニトロ
フェノール、ＨＯＮＢ、Ｎ−ヒドロキシスクシミド、Ｎ
−ヒドロキシフタルイミド、ＨＯＢｔ）とのエステル〕
などが用いられる。原料のアミノ基の活性化されたもの
としては、例えば、対応するリン酸アミドが用いられ
る。保護基の除去（脱離）方法としては、例えば、Ｐｄ
−黒あるいはＰｄ-炭素などの触媒の存在下での水素気
流中での接触還元や、また、無水フッ化水素、メタンス
ルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオ
ロ酢酸あるいはこれらの混合液などによる酸処理や、ジ
イソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピペリ
ジン、ピペラジンなどによる塩基処理、また液体アンモ
ニア中ナトリウムによる還元なども用いられる。上記酸
処理による脱離反応は、一般に約−２０℃〜４０℃の温
度で行なわれるが、酸処理においては、例えば、アニソ
ール、フェノール、チオアニソール、メタクレゾール、
パラクレゾール、ジメチルスルフィド、１，４−ブタン
ジチオール、１，２−エタンジチオールなどのようなカ
チオン捕捉剤の添加が有効である。また、ヒスチジンの
イミダゾール保護基として用いられる２，４−ジニトロ
フェニル基はチオフェノール処理により除去され、トリ
プトファンのインドール保護基として用いられるホルミ
ル基は上記の１，２−エタンジチオール、１，４−ブタ
ンジチオールなどの存在下の酸処理による脱保護以外
に、希水酸化ナトリウム溶液、希アンモニアなどによる
アルカリ処理によっても除去される。

【００１７】原料の反応に関与すべきでない官能基の保
護ならびに保護基、およびその保護基の脱離、反応に関
与する官能基の活性化などは公知の基または公知の手段
から適宜選択しうる。タンパク質のアミド体を得る別の
方法としては、例えば、まず、カルボキシ末端アミノ酸
のα−カルボキシル基をアミド化して保護した後、アミ
ノ基側にペプチド（タンパク質）鎖を所望の鎖長まで延
ばした後、該ペプチド鎖のＮ末端のα−アミノ基の保護
基のみを除いたタンパク質とＣ末端のカルボキシル基の
保護基のみを除去したタンパク質とを製造し、この両タ
ンパク質を上記したような混合溶媒中で縮合させる。縮
合反応の詳細については上記と同様である。縮合により
得られた保護タンパク質を精製した後、上記方法により
すべての保護基を除去し、所望の粗タンパク質を得るこ
とができる。この粗タンパク質は既知の各種精製手段を
駆使して精製し、主要画分を凍結乾燥することで所望の
タンパク質のアミド体を得ることができる。タンパク質
のエステル体を得るには、例えば、カルボキシ末端アミ
ノ酸のα−カルボキシル基を所望のアルコール類と縮合
しアミノ酸エステルとした後、タンパク質のアミド体と
同様にして、所望のタンパク質のエステル体を得ること
ができる。

【００１８】本発明の部分ペプチドまたはその塩は、自
体公知のペプチドの合成法に従って、あるいは本発明の
タンパク質を適当なペプチダーゼで切断することによっ
て製造することができる。ペプチドの合成法としては、
例えば、固相合成法、液相合成法のいずれによっても良
い。すなわち、本発明の部分ペプチドを構成し得る部分
ペプチドもしくはアミノ酸と残余部分とを縮合させ、生
成物が保護基を有する場合は保護基を脱離することによ
り目的のペプチドを製造することができる。公知の縮合
方法や保護基の脱離としては、例えば、以下の〜に
記載された方法が挙げられる。 M. Bodanszky および M.A. Ondetti、ペプチド・シン
セシス (Peptide Synthesis), Interscience Publisher
s, New York (1966年) SchroederおよびLuebke、ザ・ペプチド(The Peptid
e), Academic Press, NewYork (1965年) 泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株)
（1975年） 矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 タン
パク質の化学IV、 205、(1977年) 矢島治明監修、続医薬品の開発、第14巻、ペプチド合
成、広川書店 また、反応後は通常の精製法、例えば、溶媒抽出・蒸留
・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィー
・再結晶などを組み合わせて本発明の部分ペプチドを精
製単離することができる。上記方法で得られる部分ペプ
チドが遊離体である場合は、公知の方法あるいはそれに
準じる方法によって適当な塩に変換することができる
し、逆に塩で得られた場合は、公知の方法あるいはそれ
に準じる方法によって遊離体または他の塩に変換するこ
とができる。

【００１９】本発明のタンパク質をコードするＤＮＡと
しては、前述した本発明のタンパク質をコードする塩基
配列を含有するものであればいかなるものであってもよ
い。また、ゲノムＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃ
ＤＮＡ、合成ＤＮＡのいずれでもよい。ライブラリーに
使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミ
ド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよ
い。また、前記した細胞・組織よりtotalＲＮＡまたは
ｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて直接Reverse Tran
scriptase Polymerase Chain Reaction（以下、ＲＴ-Ｐ
ＣＲ法と略称する）によって増幅することもできる。本
発明のタンパク質をコードするＤＮＡとしては、例え
ば、配列番号：２で表わされる塩基配列を含有するＤ
ＮＡ、または配列番号：２で表わされる塩基配列とハイ
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配
列を有し、本発明のタンパク質と実質的に同質の性質
（例、ＩＬ−１レセプターアンタゴニスト作用など）を
有するタンパク質をコードするＤＮＡ、配列番号：４
で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番
号：４で表わされる塩基配列とハイストリンジェントな
条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明の
タンパク質と実質的に同質の性質（例、ＩＬ−１レセプ
ターアンタゴニスト作用など）を有するタンパク質をコ
ードするＤＮＡ、であれば何れのものでもよい。

【００２０】配列番号：２または配列番号：４で表わさ
れる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブ
リダイズできるＤＮＡとしては、例えば、それぞれ配列
番号：２または配列番号：４で表わされる塩基配列と約
６０％以上、好ましくは約７０％以上、さらに好ましく
は約８０％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤ
ＮＡなどが用いられる。ハイブリダイゼーションは、自
体公知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレ
キュラー・クローニング（Molecular Cloning）2nd（J.
Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Press, 1
989）に記載の方法などに従って行なうことができる。
また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用
説明書に記載の方法に従って行なうことができる。より
好ましくは、ハイストリンジェントな条件に従って行な
うことができる。ハイストリンジェントな条件とは、例
えば、ナトリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは
約１９〜２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましく
は約６０〜６５℃の条件を示す。より具体的には、配列
番号：１で表わされるアミノ酸配列を有するタンパク質
をコードするＤＮＡとしては、配列番号：２で表わされ
る塩基配列を有するＤＮＡなどが、配列番号：３で表わ
されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードするＤ
ＮＡとしては、配列番号：４で表わされる塩基配列を有
するＤＮＡなどが用いられる。

【００２１】本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡ
としては、前述した本発明の部分ペプチドをコードする
塩基配列を含有するものであればいかなるものであって
もよい。また、ゲノムＤＮＡ、前記した細胞・組織由来
のｃＤＮＡ、合成ＤＮＡのいずれでもよい。本発明の部
分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、例えば、配
列番号：２で表わされる塩基配列を有するＤＮＡの部分
塩基配列を有するＤＮＡ、または配列番号：２で表わさ
れる塩基配列とハイストリンジェントな条件下でハイブ
リダイズする塩基配列を有し、本発明のタンパク質と実
質的に同質の性質を有するタンパク質をコードするＤＮ
Ａの部分塩基配列を有するＤＮＡ、配列番号：４で表
わされる塩基配列を有するＤＮＡの部分塩基配列を有す
るＤＮＡ、または配列番号：４で表わされる塩基配列と
ハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩
基配列を有し、本発明の実質的に同質の性質を有するタ
ンパク質をコードするＤＮＡの部分塩基配列を有するＤ
ＮＡなどが用いられる。配列番号：２または配列番号：
４で表わされる塩基配列とハイブリダイズできるＤＮＡ
は、前記と同意義を示す。ハイブリダイゼーションの方
法およびハイストリンジェントな条件は前記と同様のも
のが用いられる。

【００２２】本発明のタンパク質または部分ペプチド
（以下、これらをコードするＤＮＡのクローニングおよ
び発現の説明においては、これらを単に本発明のタンパ
ク質と略記する）を完全にコードするＤＮＡのクローニ
ングの手段としては、本発明のタンパク質の部分塩基配
列を有する合成ＤＮＡプライマーを用いてＰＣＲ法によ
って増幅するか、または適当なベクターに組み込んだＤ
ＮＡを本発明のタンパク質の一部あるいは全領域をコー
ドするＤＮＡ断片もしくは合成ＤＮＡを用いて標識した
ものとのハイブリダイゼーションによって選別すること
ができる。ハイブリダイゼーションの方法は、例えば、
モレキュラー・クローニング（MolecularCloning）2nd
（J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Lab. Pres
s, 1989）に記載の方法などに従って行なうことができ
る。また、市販のライブラリーを使用する場合、添付の
使用説明書に記載の方法に従って行なうことができる。
ＤＮＡの塩基配列の変換は、ＰＣＲや公知のキット、例
えば、Ｍｕｔａｎ^TM−Ｓｕｐｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓ（宝
酒造（株））、Ｍｕｔａｎ^TM−Ｋ（宝酒造（株））など
を用いて、ＯＤＡ−ＬＡ ＰＣＲ法、Ｇｕｐｐｅｄ ｄ
ｕｐｌｅｘ、やＫｕｎｋｅｌ法などの自体公知の方法あ
るいはそれらに準じる方法に従って行なうことができ
る。クローン化されたタンパク質をコードするＤＮＡは
目的によりそのまま、または所望により制限酵素で消化
したり、リンカーを付加したりして使用することができ
る。該ＤＮＡはその５’末端側に翻訳開始コドンとして
のＡＴＧを有し、また３’末端側には翻訳終止コドンと
してのＴＡＡ、ＴＧＡまたはＴＡＧを有していてもよ
い。これらの翻訳開始コドンや翻訳終止コドンは、適当
な合成ＤＮＡアダプターを用いて付加することもでき
る。本発明のタンパク質の発現ベクターは、例えば、
（イ）本発明のタンパク質をコードするＤＮＡから目的
とするＤＮＡ断片を切り出し、（ロ）該ＤＮＡ断片を適
当な発現ベクター中のプロモーターの下流に連結するこ
とにより製造することができる。

【００２３】ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミ
ド（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１２，ｐ
ＵＣ１３）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ１１
０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミド
（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファージなどのバ
クテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウイル
ス，バキュロウイルスなどの動物ウイルスなどの他、ｐ
Ａ１−１１、ｐＸＴ１、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳ
Ｖ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどが用いられる。本発明で
用いられるプロモーターとしては、遺伝子の発現に用い
る宿主に対応して適切なプロモーターであればいかなる
ものでもよい。例えば、動物細胞を宿主として用いる場
合は、ＳＲαプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、Ｈ
ＩＶ・ＬＴＲプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＨＳ
Ｖ-ＴＫプロモーターなどが挙げられる。これらのう
ち、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）プロモーター、Ｓ
Ｒαプロモーターなどを用いるのが好ましい。宿主がエ
シェリヒア属菌である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌ
ａｃプロモーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰLプロ
モーター、ｌｐｐプロモーター、Ｔ７プロモーターなど
が、宿主がバチルス属菌である場合は、ＳＰＯ１プロモ
ーター、ＳＰＯ２プロモーター、ｐｅｎＰプロモーター
など、宿主が酵母である場合は、ＰＨＯ５プロモータ
ー、ＰＧＫプロモーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨ
プロモーターなどが好ましい。宿主が昆虫細胞である場
合は、ポリヘドリンプロモーター、Ｐ１０プロモーター
などが好ましい。

【００２４】発現ベクターには、以上の他に、所望によ
りエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加
シグナル、選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以
下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場合がある）などを含有
しているものを用いることができる。選択マーカーとし
ては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（以下、ｄｈｆｒ
と略称する場合がある）遺伝子〔メソトレキセート（Ｍ
ＴＸ）耐性〕、アンピシリン耐性遺伝子（以下、Ａｍｐ
^rと略称する場合がある）、ネオマイシン耐性遺伝子
（以下、Ｎｅｏ^rと略称する場合がある、Ｇ４１８耐
性）等が挙げられる。特に、ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイ
ニーズハムスター細胞を用いてｄｈｆｒ遺伝子を選択マ
ーカーとして使用する場合、目的遺伝子をチミジンを含
まない培地によっても選択できる。また、必要に応じ
て、宿主に合ったシグナル配列を、本発明のタンパク質
のＮ端末側に付加する。宿主がエシェリヒア属菌である
場合は、ＰｈｏＡ・シグナル配列、ＯｍｐＡ・シグナル
配列などが、宿主がバチルス属菌である場合は、α−ア
ミラーゼ・シグナル配列、サブチリシン・シグナル配列
などが、宿主が酵母である場合は、ＭＦα・シグナル配
列、ＳＵＣ２・シグナル配列など、宿主が動物細胞であ
る場合には、インシュリン・シグナル配列、α−インタ
ーフェロン・シグナル配列、抗体分子・シグナル配列な
どがそれぞれ利用できる。このようにして構築された本
発明のタンパク質をコードするＤＮＡを含有するベクタ
ーを用いて、形質転換体を製造することができる。

【００２５】宿主としては、例えば、エシェリヒア属
菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞な
どが用いられる。エシェリヒア属菌の具体例としては、
例えば、エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１
２・ＤＨ１〔プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル
・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユー
エスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），６０巻，１
６０(１９６８)〕，ＪＭ１０３〔ヌクイレック・アシッ
ズ・リサーチ，（Nucleic Acids Research），９巻，３
０９(１９８１)〕，ＪＡ２２１〔ジャーナル・オブ・モ
レキュラー・バイオロジー（Journal of MolecularBiol
ogy）〕，１２０巻，５１７(１９７８)〕，ＨＢ１０１
〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー，４
１巻，４５９(１９６９)〕，Ｃ６００〔ジェネティック
ス（Genetics），３９巻，４４０(１９５４)〕などが用
いられる。バチルス属菌としては、例えば、バチルス・
サブチルス（Bacillus subtilis）ＭＩ１１４〔ジー
ン，２４巻，２５５(１９８３)〕，２０７−２１〔ジャ
ーナル・オブ・バイオケミストリー（Journal of Bioch
emistry），９５巻，８７(１９８４)〕などが用いられ
る。酵母としては、例えば、サッカロマイセス セレビ
シエ（Saccharomyces cerevisiae）ＡＨ２２，ＡＨ２２
Ｒ^-，ＮＡ８７−１１Ａ，ＤＫＤ−５Ｄ，２０Ｂ−１
２、シゾサッカロマイセス ポンベ（Schizosaccharomy
ces pombe）ＮＣＹＣ１９１３，ＮＣＹＣ２０３６、ピ
キア パストリス（Pichia pastoris）ＫＭ７１などが
用いられる。

【００２６】昆虫細胞としては、例えば、ウイルスがＡ
ｃＮＰＶの場合は、夜盗蛾の幼虫由来株化細胞（Spodop
tera frugiperda cell；Ｓｆ細胞）、Ｔｒｉｃｈｏｐｌ
ｕｓｉａ ｎｉの中腸由来のＭＧ１細胞、Ｔｒｉｃｈｏ
ｐｌｕｓｉａ ｎｉの卵由来のＨｉｇｈ ＦｉｖｅＴＭ細
胞、Ｍａｍｅｓｔｒａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ由来の細胞
またはＥｓｔｉｇｍｅｎａ ａｃｒｅａ由来の細胞など
が用いられる。ウイルスがＢｍＮＰＶの場合は、蚕由来
株化細胞（Bombyx mori N 細胞；ＢｍＮ細胞）などが用
いられる。該Ｓｆ細胞としては、例えば、Ｓｆ９細胞
（ATCC CRL1711）、Ｓｆ２１細胞（以上、Vaughn, J.L.
ら、イン・ヴィボ（In Vivo）,13, 213-217,(1977)）な
どが用いられる。昆虫としては、例えば、カイコの幼虫
などが用いられる〔前田ら、ネイチャー（Nature），３
１５巻，５９２(１９８５)〕。動物細胞としては、例え
ば、サル細胞ＣＯＳ−７（ＣＯＳ７），Ｖｅｒｏ，チャ
イニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ細胞と略
記），ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイニーズハムスター細胞
ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ（ｄｈｆｒ^-）細胞と略記），マ
ウスＬ細胞，マウスＡｔＴ−２０，マウスミエローマ細
胞，ラットＧＨ３，ヒトＦＬ細胞などが用いられる。エ
シェリヒア属菌を形質転換するには、例えば、プロシー
ジングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・
サイエンジイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Nat
l. Acad. Sci. USA），６９巻，２１１０(１９７２)や
ジーン（Gene），１７巻，１０７(１９８２)などに記載
の方法に従って行なうことができる。

【００２７】バチルス属菌を形質転換するには、例え
ば、モレキュラー・アンド・ジェネラル・ジェネティッ
クス（Molecular & General Genetics），１６８巻，１
１１(１９７９)などに記載の方法に従って行なうことが
できる。酵母を形質転換するには、例えば、メソッズ・
イン・エンザイモロジー（Methods in Enzymology），
１９４巻，１８２−１８７（１９９１）、プロシージン
グズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイ
エンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Ac
ad. Sci. USA），７５巻，１９２９(１９７８）などに
記載の方法に従って行なうことができる。昆虫細胞また
は昆虫を形質転換するには、例えば、バイオ／テクノロ
ジー（Bio/Technology）,6, 47-55(1988)）などに記載
の方法に従って行なうことができる。動物細胞を形質転
換するには、例えば、細胞工学別冊８ 新細胞工学実験
プロトコール．２６３−２６７（１９９５）（秀潤社発
行）、ヴィロロジー（Virology），５２巻，４５６(１
９７３)に記載の方法に従って行なうことができる。こ
のようにして、タンパク質をコードするＤＮＡを含有す
る発現ベクターで形質転換された形質転換体を得ること
ができる。宿主がエシェリヒア属菌、バチルス属菌であ
る形質転換体を培養する際、培養に使用される培地とし
ては液体培地が適当であり、その中には該形質転換体の
生育に必要な炭素源、窒素源、無機物その他が含有せし
められる。炭素源としては、例えば、グルコース、デキ
ストリン、可溶性澱粉、ショ糖など、窒素源としては、
例えば、アンモニウム塩類、硝酸塩類、コーンスチープ
・リカー、ペプトン、カゼイン、肉エキス、大豆粕、バ
レイショ抽出液などの無機または有機物質、無機物とし
ては、例えば、塩化カルシウム、リン酸二水素ナトリウ
ム、塩化マグネシウムなどが挙げられる。また、酵母エ
キス、ビタミン類、生長促進因子などを添加してもよ
い。培地のｐＨは約５〜８が望ましい。

【００２８】エシェリヒア属菌を培養する際の培地とし
ては、例えば、グルコース、カザミノ酸を含むＭ９培地
〔ミラー（Miller），ジャーナル・オブ・エクスペリメ
ンツ・イン・モレキュラー・ジェネティックス（Journa
l of Experiments in Molecular Genetics），４３１−
４３３，Cold Spring Harbor Laboratory, New York１
９７２〕が好ましい。ここに必要によりプロモーターを
効率よく働かせるために、例えば、３β−インドリルア
クリル酸のような薬剤を加えることができる。宿主がエ
シェリヒア属菌の場合、培養は通常約１５〜４３℃で約
３〜２４時間行ない、必要により、通気や撹拌を加える
こともできる。宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常
約３０〜４０℃で約６〜２４時間行ない、必要により通
気や撹拌を加えることもできる。宿主が酵母である形質
転換体を培養する際、培地としては、例えば、バークホ
ールダー（Burkholder）最小培地〔Bostian, K. L.
ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー
（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），７７巻，４５０５
(１９８０)〕や０.５％カザミノ酸を含有するＳＤ培地
〔Bitter, G. A. ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナ
ショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・
ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. USA），８
１巻，５３３０（１９８４）〕が挙げられる。培地のｐ
Ｈは約５〜８に調整するのが好ましい。培養は通常約２
０℃〜３５℃で約２４〜７２時間行ない、必要に応じて
通気や撹拌を加える。宿主が昆虫細胞または昆虫である
形質転換体を培養する際、培地としては、Grace's Inse
ct Medium（Grace, T.C.C.,ネイチャー（Nature）,195,
788(1962)）に非動化した１０％ウシ血清等の添加物を
適宜加えたものなどが用いられる。培地のｐＨは約６．
２〜６．４に調整するのが好ましい。培養は通常約２７
℃で約３〜５日間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加
える。宿主が動物細胞である形質転換体を培養する際、
培地としては、例えば、約５〜２０％の胎児牛血清を含
むＭＥＭ培地〔サイエンス（Science），１２２巻，５
０１(１９５２)〕，ＤＭＥＭ培地〔ヴィロロジー（Viro
logy），８巻，３９６(１９５９)〕，ＲＰＭＩ １６４
０培地〔ジャーナル・オブ・ザ・アメリカン・メディカ
ル・アソシエーション（The Journal of the American
Medical Association）１９９巻，５１９(１９６
７)〕，１９９培地〔プロシージング・オブ・ザ・ソサ
イエティ・フォー・ザ・バイオロジカル・メディスン
（Proceeding ofthe Society for the Biological Medi
cine），７３巻，１(１９５０)〕などが用いられる。ｐ
Ｈは約６〜８であるのが好ましい。培養は通常約３０℃
〜４０℃で約１５〜６０時間行ない、必要に応じて通気
や撹拌を加える。以上のようにして、形質転換体の細胞
内、細胞膜または細胞外に本発明のタンパク質を生成せ
しめることができる。

【００２９】上記培養物から本発明のタンパク質を分離
精製するには、例えば、下記の方法により行なうことが
できる。本発明のタンパク質を培養菌体あるいは細胞か
ら抽出するに際しては、培養後、公知の方法で菌体ある
いは細胞を集め、これを適当な緩衝液に懸濁し、超音
波、リゾチームおよび／または凍結融解などによって菌
体あるいは細胞を破壊したのち、遠心分離やろ過により
タンパク質の粗抽出液を得る方法などが適宜用いられ
る。緩衝液の中に尿素や塩酸グアニジンなどのタンパク
質変性剤や、トリトンＸ−１００^TMなどの界面活性剤が
含まれていてもよい。培養液中にタンパク質が分泌され
る場合には、培養終了後、それ自体公知の方法で菌体あ
るいは細胞と上清とを分離し、上清を集める。このよう
にして得られた培養上清、あるいは抽出液中に含まれる
タンパク質の精製は、自体公知の分離・精製法を適切に
組み合わせて行なうことができる。これらの公知の分
離、精製法としては、塩析や溶媒沈澱法などの溶解度を
利用する方法、透析法、限外ろ過法、ゲルろ過法、およ
びＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法などの主
として分子量の差を利用する方法、イオン交換クロマト
グラフィーなどの荷電の差を利用する方法、アフィニテ
ィークロマトグラフィーなどの特異的親和性を利用する
方法、逆相高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性の
差を利用する方法、等電点電気泳動法などの等電点の差
を利用する方法などが用いられる。

【００３０】かくして得られるタンパク質が遊離体で得
られた場合には、自体公知の方法あるいはそれに準じる
方法によって塩に変換することができ、逆に塩で得られ
た場合には自体公知の方法あるいはそれに準じる方法に
より、遊離体または他の塩に変換することができる。な
お、組換え体が産生するタンパク質を、精製前または精
製後に適当なタンパク修飾酵素を作用させることによ
り、任意に修飾を加えたり、ポリペプチドを部分的に除
去することもできる。タンパク修飾酵素としては、例え
ば、トリプシン、キモトリプシン、アルギニルエンドペ
プチダーゼ、プロテインキナーゼ、グリコシダーゼなど
が用いられる。かくして生成する本発明のタンパク質ま
たはその塩の存在は、特異抗体を用いたエンザイムイム
ノアッセイやWestern blottingなどにより測定すること
ができる。

【００３１】本発明のタンパク質、部分ペプチドまたは
その塩に対する抗体は、本発明のタンパク質、部分ペプ
チドまたはその塩を認識し得る抗体であれば、ポリクロ
ーナル抗体、モノクローナル抗体の何れであってもよ
い。本発明のタンパク質、部分ペプチドまたはその塩
（以下、抗体の説明においては、これらを単に本発明の
タンパク質と略記する）に対する抗体は、本発明のタン
パク質を抗原として用い、自体公知の抗体または抗血清
の製造法に従って製造することができる。 〔モノクローナル抗体の作製〕 （ａ）モノクロナール抗体産生細胞の作製 本発明のタンパク質は、温血動物に対して投与により抗
体産生が可能な部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤と
ともに投与される。投与に際して抗体産生能を高めるた
め、完全フロイントアジュバントや不完全フロイントア
ジュバントを投与してもよい。投与は通常２〜６週毎に
１回ずつ、計２〜１０回程度行われる。用いられる温血
動物としては、例えば、サル、ウサギ、イヌ、モルモッ
ト、マウス、ラット、ヒツジ、ヤギ、ニワトリが挙げら
れるが、マウスおよびラットが好ましく用いられる。モ
ノクローナル抗体産生細胞の作製に際しては、抗原で免
疫された温血動物、例えばマウスから抗体価の認められ
た個体を選択し最終免疫の２〜５日後に脾臓またはリン
パ節を採取し、それらに含まれる抗体産生細胞を同種ま
たは異種動物の骨髄腫細胞と融合させることにより、モ
ノクローナル抗体産生ハイブリドーマを調製することが
できる。抗血清中の抗体価の測定は、例えば、後記の標
識化タンパク質と抗血清とを反応させたのち、抗体に結
合した標識剤の活性を測定することにより行なうことが
できる。融合操作は既知の方法、例えば、ケーラーとミ
ルスタインの方法〔ネイチャー（Nature)、256、495 (1
975)〕に従い実施することができる。融合促進剤として
は、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）やセン
ダイウィルスなどが挙げられるが、好ましくはＰＥＧが
用いられる。

【００３２】骨髄腫細胞としては、例えば、ＮＳ−１、
Ｐ３Ｕ１、ＳＰ２／０、ＡＰ−１などの温血動物の骨髄
腫細胞が挙げられるが、Ｐ３Ｕ１が好ましく用いられ
る。用いられる抗体産生細胞（脾臓細胞）数と骨髄腫細
胞数との好ましい比率は１：１〜２０：１程度であり、
ＰＥＧ（好ましくはＰＥＧ１０００〜ＰＥＧ６０００）
が１０〜８０％程度の濃度で添加され、２０〜４０℃、
好ましくは３０〜３７℃で１〜１０分間インキュベート
することにより効率よく細胞融合を実施できる。モノク
ローナル抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングには
種々の方法が使用できるが、例えば、タンパク質抗原を
直接あるいは担体とともに吸着させた固相（例、マイク
ロプレート）にハイブリドーマ培養上清を添加し、次に
放射性物質や酵素などで標識した抗免疫グロブリン抗体
（細胞融合に用いられる細胞がマウスの場合、抗マウス
免疫グロブリン抗体が用いられる）またはプロテインＡ
を加え、固相に結合したモノクローナル抗体を検出する
方法、抗免疫グロブリン抗体またはプロテインＡを吸着
させた固相にハイブリドーマ培養上清を添加し、放射性
物質や酵素などで標識したタンパク質を加え、固相に結
合したモノクローナル抗体を検出する方法などが挙げら
れる。モノクローナル抗体の選別は、自体公知あるいは
それに準じる方法に従って行なうことができる。通常Ｈ
ＡＴ（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）を
添加した動物細胞用培地で行なうことができる。選別お
よび育種用培地としては、ハイブリドーマが生育できる
ものならばどのような培地を用いても良い。例えば、１
〜２０％、好ましくは１０〜２０％の牛胎児血清を含む
ＲＰＭＩ １６４０培地、１〜１０％の牛胎児血清を含
むＧＩＴ培地（和光純薬工業（株））あるいはハイブリ
ドーマ培養用無血清培地（ＳＦＭ−１０１、日水製薬
（株））などを用いることができる。培養温度は、通常
２０〜４０℃、好ましくは約３７℃である。培養時間
は、通常５日〜３週間、好ましくは１週間〜２週間であ
る。培養は、通常５％炭酸ガス下で行なうことができ
る。ハイブリドーマ培養上清の抗体価は、上記の抗血清
中の抗体価の測定と同様にして測定できる。

【００３３】（ｂ）モノクロナール抗体の精製 モノクローナル抗体の分離精製は、自体公知の方法、例
えば、免疫グロブリンの分離精製法〔例、塩析法、アル
コール沈殿法、等電点沈殿法、電気泳動法、イオン交換
体（例、ＤＥＡＥ）による吸脱着法、超遠心法、ゲルろ
過法、抗原結合固相あるいはプロテインＡあるいはプロ
テインＧなどの活性吸着剤により抗体のみを採取し、結
合を解離させて抗体を得る特異的精製法〕に従って行な
うことができる。

【００３４】〔ポリクローナル抗体の作製〕本発明のポ
リクローナル抗体は、それ自体公知あるいはそれに準じ
る方法に従って製造することができる。例えば、免疫抗
原（タンパク質抗原）自体、あるいはそれとキャリアー
タンパク質との複合体をつくり、上記のモノクローナル
抗体の製造法と同様に温血動物に免疫を行ない、該免疫
動物から本発明のタンパク質に対する抗体含有物を採取
して、抗体の分離精製を行なうことにより製造すること
ができる。温血動物を免疫するために用いられる免疫抗
原とキャリアータンパク質との複合体に関し、キャリア
ータンパク質の種類およびキャリアーとハプテンとの混
合比は、キャリアーに架橋させて免疫したハプテンに対
して抗体が効率良くできれば、どの様なものをどの様な
比率で架橋させてもよいが、例えば、ウシ血清アルブミ
ンやウシサイログロブリン、ヘモシアニン等を重量比で
ハプテン１に対し、約０．１〜２０、好ましくは約１〜
５の割合でカプルさせる方法が用いられる。また、ハプ
テンとキャリアーのカプリングには、種々の縮合剤を用
いることができるが、グルタルアルデヒドやカルボジイ
ミド、マレイミド活性エステル、チオール基、ジチオビ
リジル基を含有する活性エステル試薬等が用いられる。
縮合生成物は、温血動物に対して、抗体産生が可能な部
位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とともに投与され
る。投与に際して抗体産生能を高めるため、完全フロイ
ントアジュバントや不完全フロイントアジュバントを投
与してもよい。投与は、通常約２〜６週毎に１回ずつ、
計約３〜１０回程度行なわれる。ポリクローナル抗体
は、上記の方法で免疫された温血動物の血液、腹水な
ど、好ましくは血液から採取することができる。抗血清
中のポリクローナル抗体価の測定は、上記の抗血清中の
抗体価の測定と同様にして測定できる。ポリクローナル
抗体の分離精製は、上記のモノクローナル抗体の分離精
製と同様の免疫グロブリンの分離精製法に従って行なう
ことができる。

【００３５】本発明のタンパク質または部分ペプチドを
コードするＤＮＡ（以下、アンチセンスＤＮＡの説明に
おいては、これらのＤＮＡを本発明のＤＮＡと略記す
る）に相補的な、または実質的に相補的な塩基配列を有
するアンチセンスＤＮＡとしては、本発明のＤＮＡに相
補的な、または実質的に相補的な塩基配列を有し、該Ｄ
ＮＡの発現を抑制し得る作用を有するものであれば、い
ずれのアンチセンスＤＮＡであってもよい。本発明のＤ
ＮＡに実質的に相補的な塩基配列とは、例えば、本発明
のＤＮＡに相補的な塩基配列（すなわち、本発明のＤＮ
Ａの相補鎖）の全塩基配列あるいは部分塩基配列と約７
０％以上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約
９０％以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有
する塩基配列などが挙げられる。特に、本発明のＤＮＡ
の相補鎖の全塩基配列うち、本発明のタンパク質のＮ末
端部位をコードする部分の塩基配列（例えば、開始コド
ン付近の塩基配列など）の相補鎖と約７０％以上、好ま
しくは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、最
も好ましくは約９５％以上の相同性を有するアンチセン
スＤＮＡが好適である。これらのアンチセンスＤＮＡ
は、公知のＤＮＡ合成装置などを用いて製造することが
できる。

【００３６】以下に、本発明のタンパク質、部分ペプチ
ドまたはそれらの塩（以下、本発明のタンパク質と略記
する場合がある）、本発明のタンパク質または部分ペプ
チドをコードするＤＮＡ（以下、本発明のＤＮＡと略記
する場合がある）、本発明のタンパク質、部分ペプチド
またはその塩に対する抗体（以下、本発明の抗体と略記
する場合がある）、およびアンチセンスＤＮＡの用途を
説明する。

【００３７】（１）本発明のタンパク質は、組織または
細胞特異的に発現しているため、組織または細胞マーカ
ーとして使用することができる。すなわち組織・細胞の
分化、病態、癌の転移などの検出のためのマーカーとし
て有用である。また、対応するレセプター（例えばＩＬ
−１レセプターなどであって、これに限るものではな
い。）、結合タンパク質などの分取にも利用できる。さ
らに、自体公知のハイスループットスクリーニングのた
めのパネルにして、生物活性を調べるのに利用できる。
また、染色体マッピングを行い、遺伝病の研究にも利用
できる。 （２）本発明のタンパク質が関与する各種疾病の治療・
予防剤 本発明のタンパク質などは、生体内でＩＬ−１レセプタ
ーアンタゴニストとして存在するため、本発明のタンパ
ク質などまたは本発明のＤＮＡなどに異常があったり、
欠損している場合あるいは発現量が異常に減少または高
進している場合、例えば、リウマチ、糖尿病、微生物感
染症、ＨＩＶ感染（エイズ）、慢性Ｂ型肝炎、炎症性疾
患（例、慢性炎症、急性炎症）、皮膚炎、関節炎（例、
リウマチ様関節炎、慢性関節炎）、自己免疫疾患、移植
片対宿主病、喘息、敗血症、骨疾患、癌（例、骨髄性白
血病など）などの種々の疾病が発症する。したがって、
本発明のタンパク質および本発明のＤＮＡは、例えば、
リウマチ、糖尿病、微生物感染症、ＨＩＶ感染（エイ
ズ）、慢性Ｂ型肝炎、炎症性疾患（例、慢性炎症、急性
炎症）、皮膚炎、関節炎（例、リウマチ様関節炎、慢性
関節炎）、自己免疫疾患、移植片対宿主病、喘息、敗血
症、骨疾患、癌（例、骨髄性白血病など）などの種々の
疾病の治療・予防剤などの医薬として使用することがで
きる。例えば、生体内において本発明のタンパク質など
が減少あるいは欠損しているために、細胞における情報
伝達が十分に、あるいは正常に発揮されない患者がいる
場合に、（イ）本発明のＤＮＡを該患者に投与し、生体
内で本発明のタンパク質を発現させることによって、
（ロ）細胞に本発明のＤＮＡを挿入し、本発明のタンパ
ク質を発現させた後に、該細胞を患者に移植することに
よって、または（ハ）本発明のタンパク質を該患者に投
与することなどによって、該患者における本発明のタン
パク質の役割を十分に、あるいは正常に発揮させること
ができる。本発明のＤＮＡを上記の治療・予防剤として
使用する場合は、該ＤＮＡを単独あるいはレトロウイル
スベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルス
アソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクタ
ーに挿入した後、常套手段に従って、ヒトまたは温血動
物に投与することができる。本発明のＤＮＡは、そのま
まで、あるいは摂取促進のための補助剤などの生理学的
に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子銃やハイド
ロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与でき
る。本発明のタンパク質を上記の治療・予防剤として使
用する場合は、少なくとも９０％、好ましくは９５％以
上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９
％以上に精製されたものを使用するのが好ましい。

【００３８】本発明のタンパク質は、例えば、必要に応
じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マ
イクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もし
くはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、
または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用でき
る。例えば、本発明のタンパク質を生理学的に認められ
る担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、
結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求さ
れる単位用量形態で混和することによって製造すること
ができる。これら製剤における有効成分量は指示された
範囲の適当な用量が得られるようにするものである。錠
剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤とし
ては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガン
ト、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースの
ような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸
などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのよう
な潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味
剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような
香味剤などが用いられる。調剤単位形態がカプセルであ
る場合には、前記タイプの材料にさらに油脂のような液
状担体を含有することができる。注射のための無菌組成
物は注射用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、
椰子油などのような天然産出植物油などを溶解または懸
濁させるなどの通常の製剤実施に従って処方することが
できる。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩
水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、
Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウム
など）などが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えば、ア
ルコール（例えば、エタノールなど）、ポリアルコール
（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコ
ールなど）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソル
ベート８０^TM、ＨＣＯ−５０など）などと併用してもよ
い。油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが挙
げられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジル
アルコールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例え
ば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液など）、無
痛化剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカイ
ンなど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリ
エチレングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジル
アルコール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合
してもよい。調製された注射液は、通常、適当なアンプ
ルに充填される。本発明のＤＮＡが挿入されたベクター
も上記と同様に製剤化され、通常、非経口的に使用され
る。

【００３９】このようにして得られる製剤は、安全で低
毒性であるので、例えば、ヒトまたは温血動物（例え
ば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、トリ、ヒツ
ジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジ
ーなど）に対して投与することができる。本発明のタン
パク質の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートな
どにより差異はあるが、例えば、炎症性疾患の治療目的
で本発明のタンパク質を経口投与する場合、一般的に成
人（６０ｋｇとして）においては、一日につき該タンパ
ク質を約１ｍｇ〜１０００ｍｇ、好ましくは約１０〜５
００ｍｇ、より好ましくは約１０〜２００ｍｇ投与す
る。非経口的に投与する場合は、該タンパク質の１回投
与量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例
えば、炎症性疾患の治療目的で本発明のタンパク質を注
射剤の形で成人（体重６０ｋｇとして）に投与する場
合、一日につき該タンパク質を約１〜１０００ｍｇ程
度、好ましくは約１〜２００ｍｇ程度、より好ましくは
約１０〜１００ｍｇ程度を患部に注射することにより投
与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ
当たりに換算した量を投与することができる。

【００４０】（３）疾病に対する医薬候補化合物のスク
リーニング 本発明のタンパク質は生体内でＩＬ−１レセプターアン
タゴニストとして存在するため、本発明のタンパク質の
機能を促進する化合物またはその塩は、例えば、リウマ
チ、糖尿病、微生物感染症、ＨＩＶ感染（エイズ）、慢
性Ｂ型肝炎、炎症性疾患（例、慢性炎症、急性炎症）、
皮膚炎、関節炎（例、リウマチ様関節炎、慢性関節
炎）、自己免疫疾患、移植片対宿主病、喘息、敗血症、
骨疾患、癌（例、骨髄性白血病など）などの治療・予防
剤などの医薬として使用できる）。一方、本発明のタン
パク質の機能を阻害する化合物またはその塩は、本発明
のタンパク質の産生過剰に起因する疾患の治療・予防剤
などの医薬として使用できる。したがって、本発明のタ
ンパク質は、本発明のタンパク質の機能を促進または阻
害する化合物またはその塩のスクリーニングのための試
薬として有用である。すなわち、本発明は、本発明のタ
ンパク質、その部分ペプチドまたはその塩を用いること
を特徴とする本発明のタンパク質、その部分ペプチドま
たはその塩の機能を促進する化合物もしくはその塩（以
下、促進剤と略記する場合がある）、または本発明のタ
ンパク質、その部分ペプチドまたはその塩の機能を阻害
する化合物（以下、阻害剤と略記する場合がある）のス
クリーニング方法を提供する。本発明のスクリーニング
用キットは、本発明のタンパク質、部分ペプチドまたは
その塩を含有するものである。

【００４１】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
は、例えば、ペプチド、タンパク、非ペプチド性化合
物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植物抽出
液、動物組織抽出液、血漿などから選ばれた化合物であ
り、本発明のタンパク質の機能を促進または阻害する化
合物である。該化合物の塩としては、前記した本発明の
タンパク質の塩と同様のものが用いられる。

【００４２】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物を上述の治療
・予防剤として使用する場合、常套手段に従って実施す
ることができる。例えば、前記した本発明のタンパク質
を含有する医薬と同様にして、例えば必要に応じて糖衣
を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカ
プセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ
以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸
濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。この
ようにして得られる製剤は安全で低毒性であるので、例
えば、ヒトまたは温血動物（例えば、マウス、ラット、
ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、トリ、ネコ、イ
ヌ、サル、チンパンジーなど）に対して投与することが
できる。該化合物またはその塩の投与量は、その作用、
対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はある
が、例えば、炎症性疾患の治療の目的で本発明のタンパ
ク質の機能を促進する化合物を経口投与する場合、一般
的に成人（体重６０ｋｇとして）においては、一日につ
き該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．
０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与
する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与
量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例え
ば、炎症性疾患の治療の目的で本発明のタンパク質の機
能を促進する化合物を注射剤の形で通常成人（６０ｋｇ
として）に投与する場合、一日につき該化合物を約０．
０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程
度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射
により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、
６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
一方、本発明のタンパク質の機能を阻害する化合物を経
口投与する場合、一般的に成人（体重６０ｋｇとして）
においては、一日につき該化合物を約０.１〜１００ｍ
ｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約
１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合
は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などに
よっても異なるが、本発明のタンパク質の機能を阻害す
る化合物を注射剤の形で通常成人（６０ｋｇとして）に
投与する場合、一日につき該化合物を約０．０１〜３０
ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好
ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与
するのが好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当
たりに換算した量を投与することができる。

【００４３】（３）本発明のタンパク質、その部分ペプ
チドまたはその塩の定量 本発明のタンパク質に対する抗体（以下、本発明の抗体
と略記する場合がある）は、本発明のタンパク質を特異
的に認識することができるので、被検液中の本発明のタ
ンパク質の定量、特にサンドイッチ免疫測定法による定
量などに使用することができる。すなわち、本発明は、
（ｉ）本発明の抗体と、被検液および標識化された本発
明のタンパク質とを競合的に反応させ、該抗体に結合し
た標識化された本発明のタンパク質の割合を測定するこ
とを特徴とする被検液中の本発明のタンパク質の定量
法、および（ii）被検液と担体上に不溶化した本発明の
抗体および標識化された本発明の別の抗体とを同時ある
いは連続的に反応させたのち、不溶化担体上の標識剤の
活性を測定することを特徴とする被検液中の本発明のタ
ンパク質の定量法を提供する。

【００４４】また、本発明のタンパク質に対するモノク
ローナル抗体（以下、本発明のモノクローナル抗体と称
する場合がある）を用いて本発明のタンパク質の定量を
行なえるほか、組織染色等による検出を行なうこともで
きる。これらの目的には、抗体分子そのものを用いても
よく、また、抗体分子のＦ(ａｂ')₂ 、Ｆａｂ'、あるい
はＦａｂ画分を用いてもよい。本発明の抗体を用いる本
発明のタンパク質の定量法は、 特に制限されるべきも
のではなく、被測定液中の抗原量（例えば、タンパク質
量）に対応した抗体、抗原もしくは抗体−抗原複合体の
量を化学的または物理的手段により検出し、これを既知
量の抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算
出する測定法であれば、いずれの測定法を用いてもよ
い。例えば、ネフロメトリー、競合法、イムノメトリッ
ク法およびサンドイッチ法が好適に用いられるが、感
度、特異性の点で、後述するサンドイッチ法を用いるの
が特に好ましい。標識物質を用いる測定法に用いられる
標識剤としては、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光
物質、発光物質などが用いられる。放射性同位元素とし
ては、例えば、〔¹²⁵Ｉ〕、〔¹³¹Ｉ〕、〔³Ｈ〕、〔¹⁴
Ｃ〕などが用いられる。上記酵素としては、安定で比活
性の大きなものが好ましく、例えば、β−ガラクトシダ
ーゼ、β−グルコシダーゼ、アルカリフォスファター
ゼ、パーオキシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用い
られる。蛍光物質としては、例えば、フルオレスカミ
ン、フルオレッセンイソチオシアネートなどが用いられ
る。発光物質としては、例えば、ルミノール、ルミノー
ル誘導体、ルシフェリン、ルシゲニンなどが用いられ
る。さらに、抗体あるいは抗原と標識剤との結合にビオ
チン−アビジン系を用いることもできる。

【００４５】抗原あるいは抗体の不溶化に当っては、物
理吸着を用いてもよく、また通常タンパク質あるいは酵
素等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用
いる方法でもよい。担体としては、アガロース、デキス
トラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポリスチレ
ン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹脂、ある
いはガラス等が挙げられる。サンドイッチ法においては
不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検液を反応
させ（１次反応）、さらに標識化した別の本発明のモノ
クローナル抗体を反応させ（２次反応）たのち、不溶化
担体上の標識剤の活性を測定することにより被検液中の
本発明のタンパク質量を定量することができる。１次反
応と２次反応は逆の順序に行っても、また、同時に行な
ってもよいし時間をずらして行なってもよい。標識化剤
および不溶化の方法は前記のそれらに準じることができ
る。また、サンドイッチ法による免疫測定法において、
固相用抗体あるいは標識用抗体に用いられる抗体は必ず
しも１種類である必要はなく、測定感度を向上させる等
の目的で２種類以上の抗体の混合物を用いてもよい。本
発明のサンドイッチ法による本発明のタンパク質の測定
法においては、１次反応と２次反応に用いられる本発明
のモノクローナル抗体は、本発明のタンパク質の結合す
る部位が相異なる抗体が好ましく用いられる。すなわ
ち、１次反応および２次反応に用いられる抗体は、例え
ば、２次反応で用いられる抗体が、本発明のタンパク質
のＣ端部を認識する場合、１次反応で用いられる抗体
は、好ましくはＣ端部以外、例えばＮ端部を認識する抗
体が用いられる。

【００４６】本発明のモノクローナル抗体をサンドイッ
チ法以外の測定システム、例えば、競合法、イムノメト
リック法あるいはネフロメトリーなどに用いることがで
きる。競合法では、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体
に対して競合的に反応させたのち、未反応の標識抗原
(Ｆ）と、抗体と結合した標識抗原（Ｂ）とを分離し
（Ｂ／Ｆ分離）、Ｂ，Ｆいずれかの標識量を測定し、被
検液中の抗原量を定量する。本反応法には、抗体として
可溶性抗体を用い、Ｂ／Ｆ分離をポリエチレングリコー
ル、前記抗体に対する第２抗体などを用いる液相法、お
よび、第１抗体として固相化抗体を用いるか、あるい
は、第１抗体は可溶性のものを用い第２抗体として固相
化抗体を用いる固相化法とが用いられる。イムノメトリ
ック法では、被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の
標識化抗体に対して競合反応させた後固相と液相を分離
するか、あるいは、被検液中の抗原と過剰量の標識化抗
体とを反応させ、次に固相化抗原を加え未反応の標識化
抗体を固相に結合させたのち、固相と液相を分離する。
次に、いずれかの相の標識量を測定し被検液中の抗原量
を定量する。また、ネフロメトリーでは、ゲル内あるい
は溶液中で抗原抗体反応の結果生じた不溶性の沈降物の
量を測定する。被検液中の抗原量が僅かであり、少量の
沈降物しか得られない場合にもレーザーの散乱を利用す
るレーザーネフロメトリーなどが好適に用いられる。

【００４７】これら個々の免疫学的測定法を本発明の定
量方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の
設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の
条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて本発
明のタンパク質の測定系を構築すればよい。これらの一
般的な技術手段の詳細については、総説、成書などを参
照することができる。例えば、入江 寛編「ラジオイム
ノアッセイ〕（講談社、昭和４９年発行）、入江 寛編
「続ラジオイムノアッセイ〕（講談社、昭和５４年発
行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（医学書院、昭
和５３年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第
２版）（医学書院、昭和５７年発行）、石川栄治ら編
「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年
発行）、「Methods in ENZYMOLOGY」Vol. 70(Immunochem
ical Techniques(Part A))、 同書 Vol. 73(Immunochem
ical Techniques(Part B))、 同書 Vol. 74(Immunochem
ical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunochem
ical Techniques(Part D:Selected Immunoassays))、
同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E:Mono
clonal Antibodies and General Immunoassay Method
s))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part
I:Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodie
s))(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照する
ことができる。以上のようにして、本発明の抗体を用い
ることによって、本発明のタンパク質を感度良く定量す
ることができる。さらには、本発明の抗体を用いて本発
明のタンパク質の濃度を定量することによって、本発明
のタンパク質の濃度の減少が検出された場合、例えば、
リウマチ、糖尿病、微生物感染症、ＨＩＶ感染（エイ
ズ）、慢性Ｂ型肝炎、炎症性疾患（例、慢性炎症、急性
炎症）、皮膚炎、関節炎（例、リウマチ様関節炎、慢性
関節炎）、自己免疫疾患、移植片対宿主病、喘息、敗血
症、骨疾患、癌（例、骨髄性白血病など）などの疾病で
ある、または将来罹患する可能性が高いと診断すること
ができる。また、本発明の抗体は、体液や組織などの被
検体中に存在する本発明のタンパク質を検出するために
使用することができる。また、本発明のタンパク質を精
製するために使用する抗体カラムの作製、精製時の各分
画中の本発明のタンパク質の検出、被検細胞内における
本発明のタンパク質の挙動の分析などのために使用する
ことができる。

【００４８】（５）遺伝子診断剤 本発明のＤＮＡは、例えば、プローブとして使用するこ
とにより、ヒトまたは温血動物（例えば、ラット、マウ
ス、モルモット、ウサギ、トリ、ヒツジ、ブタ、ウシ、
ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）における
本発明のタンパク質またはその部分ペプチドをコードす
るＤＮＡまたはｍＲＮＡの異常（遺伝子異常）を検出す
ることができるので、例えば、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡ
の損傷、突然変異あるいは発現低下や、該ＤＮＡまたは
ｍＲＮＡの増加あるいは発現過多などの遺伝子診断剤と
して有用である。本発明のＤＮＡを用いる上記の遺伝子
診断は、例えば、自体公知のノーザンハイブリダイゼー
ションやＰＣＲ−ＳＳＣＰ法（ゲノミックス（Genomic
s），第５巻，８７４〜８７９頁（１９８９年）、プロ
シージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オ
ブ・サイエンシイズ・オブ・ユーエスエー（Proceeding
s ofthe National Academy of Sciences of the United
States of America），第８６巻，２７６６〜２７７０
頁（１９８９年））、 ＤＮＡマイクロアレイなどによ
り実施することができる。例えば、ノーザンハイブリダ
イゼーション、 ＤＮＡマイクロアレイにより発現低下
が検出された場合やＰＣＲ−ＳＳＣＰ法、ＤＮＡマイク
ロアレイによりＤＮＡの突然変異が検出された場合は、
例えば、リウマチ、糖尿病、微生物感染症、ＨＩＶ感染
（エイズ）、慢性Ｂ型肝炎、炎症性疾患（例、慢性炎
症、急性炎症）、皮膚炎、関節炎（例、リウマチ様関節
炎、慢性関節炎）、自己免疫疾患、移植片対宿主病、喘
息、敗血症、骨疾患、癌（例、骨髄性白血病など）であ
る可能性が高いと診断することができる。

【００４９】（６）アンチセンスＤＮＡを含有する医薬 本発明のＤＮＡに相補的に結合し、該ＤＮＡの発現を抑
制することができるアンチセンスＤＮＡは、生体内にお
ける本発明のタンパク質または本発明のＤＮＡの機能を
抑制することができるので、例えば、本発明のタンパク
質などの発現過多に起因する疾患の治療・予防剤として
使用することができる。上記アンチセンスＤＮＡを上記
の治療・予防剤として使用する場合、前記した本発明の
ＤＮＡを含有する各種疾病の治療・予防剤と同様にして
実施することができる。例えば、該アンチセンスＤＮＡ
を用いる場合、該アンチセンスＤＮＡを単独あるいはレ
トロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、アデ
ノウイルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適
当なベクターに挿入した後、常套手段に従って、ヒトま
たは哺乳動物（例、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウ
シ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して経口的または非経
口的に投与することができる。該アンチセンスＤＮＡ
は、そのままで、あるいは摂取促進のために補助剤など
の生理学的に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子
銃やハイドロゲルカテーテルのようなカテーテルによっ
て投与できる。あるいは、エアロゾル化して吸入剤とし
て気管内に投与することもできる。該アンチセンスＤＮ
Ａの投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどに
より差異はあるが、例えば、本発明のアンチセンスＤＮ
Ａを吸入剤として気管内に局所投与する場合、一般的に
成人（体重６０ｋｇ）においては、一日につき該アンチ
センスＤＮＡを約０．１〜１００ｍｇ投与する。さら
に、該アンチセンスＤＮＡは、組織や細胞における本発
明のＤＮＡの存在やその発現状況を調べるための診断用
オリゴヌクレオチドプローブとして使用することもでき
る。

【００５０】（７）本発明の抗体を含有する医薬 本発明のタンパク質の活性を中和する作用を有する本発
明の抗体は、例えば、本発明のタンパク質などの発現過
多に起因する疾患の治療・予防剤などの医薬として使用
することができる。本発明の抗体を含有する上記疾患の
治療・予防剤は、そのまま液剤として、または適当な剤
型の医薬組成物として、ヒトまたは哺乳動物（例、ラッ
ト、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルな
ど）に対して経口的または非経口的に安全に投与するこ
とができる。投与量は、投与対象、対象疾患、症状、投
与ルートなどによっても異なるが、例えば、、本発明の
抗体を１回量として、通常０.０１〜２０ｍｇ／ｋｇ体
重程度、好ましくは０.１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重程度、
さらに好ましくは０.１〜５ｍｇ／ｋｇ体重程度を、１
日１〜５回程度、好ましくは１日１〜３回程度、静脈注
射により投与するのが好都合である。他の非経口投与お
よび経口投与の場合もこれに準ずる量を投与することが
できる。症状が特に重い場合には、その症状に応じて増
量してもよい。本発明の抗体は、それ自体または適当な
医薬組成物として投与することができる。上記投与に用
いられる医薬組成物は、本発明の抗体と薬理学的に許容
され得る担体、希釈剤もしくは賦形剤とを含むものであ
る。かかる組成物は、経口または非経口投与に適する剤
形として提供される。すなわち、例えば、経口投与のた
めの組成物としては、固体または液体の剤形、具体的に
は錠剤（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、丸
剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤を含
む）、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などがあげられる。か
かる組成物は自体公知の方法によって製造され、製剤分
野において通常用いられる担体、希釈剤もしくは賦形剤
を含有するものである。例えば、錠剤用の担体、賦形剤
としては、乳糖、でんぷん、蔗糖、ステアリン酸マグネ
シウムなどが用いられる。

【００５１】非経口投与のための組成物としては、例え
ば、注射剤、坐剤などが用いられ、注射剤は静脈注射
剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉注射剤、点滴注射剤
などの剤形を包含する。かかる注射剤は、自体公知の方
法に従って、例えば、上記抗体またはその塩を通常注射
剤に用いられる無菌の水性もしくは油性液に溶解、懸濁
または乳化することによって調製する。注射用の水性液
としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補
助薬を含む等張液などが用いられ、適当な溶解補助剤、
例えば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコー
ル（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコー
ル）、非イオン界面活性剤〔例、ポリソルベート８０、
ＨＣＯ−５０（polyoxyethylene（５０mol）adduct of
hydrogenated castor oil）〕などと併用してもよい。
油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いら
れ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアル
コールなどを併用してもよい。調製された注射液は、通
常、適当なアンプルに充填される。直腸投与に用いられ
る坐剤は、上記抗体またはその塩を通常の坐薬用基剤に
混合することによって調製される。上記の経口用または
非経口用医薬組成物は、活性成分の投与量に適合するよ
うな投薬単位の剤形に調製されることが好都合である。
かかる投薬単位の剤形としては、錠剤、丸剤、カプセル
剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが例示され、それぞ
れの投薬単位剤形当たり通常５〜５００ｍｇ、とりわけ
注射剤では５〜１００ｍｇ、その他の剤形では１０〜２
５０ｍｇの上記抗体が含有されていることが好ましい。
なお前記した各組成物は、上記抗体との配合により好ま
しくない相互作用を生じない限り他の活性成分を含有し
てもよい。

【００５２】（８）ＤＮＡ転移動物 本発明は、外来性の本発明のタンパク質をコードするＤ
ＮＡ（以下、本発明の外来性ＤＮＡと略記する）または
その変異ＤＮＡ（本発明の外来性変異ＤＮＡと略記する
場合がある）を有する非ヒト哺乳動物を提供する。すな
わち、本発明は、（１）本発明の外来性ＤＮＡまたはそ
の変異ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物、（２）非ヒト哺
乳動物がゲッ歯動物である第（１)記載の動物、（３）ゲ
ッ歯動物がマウスまたはラットである第（２）記載の動
物、および（４）本発明の外来性ＤＮＡまたはその変異
ＤＮＡを含有し、哺乳動物において発現しうる組換えベ
クターを提供するものである。本発明の外来性ＤＮＡま
たはその変異ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物（以下、本
発明のＤＮＡ転移動物と略記する）は、未受精卵、受精
卵、精子およびその始原細胞を含む胚芽細胞などに対し
て、好ましくは、非ヒト哺乳動物の発生における胚発生
の段階（さらに好ましくは、単細胞または受精卵細胞の
段階でかつ一般に８細胞期以前）に、リン酸カルシウム
法、電気パルス法、リポフェクション法、凝集法、マイ
クロインジェクション法、パーティクルガン法、ＤＥＡ
Ｅ−デキストラン法などにより目的とするＤＮＡを転移
することによって作出することができる。また、該ＤＮ
Ａ転移方法により、体細胞、生体の臓器、組織細胞など
に目的とする本発明の外来性ＤＮＡを転移し、細胞培
養、組織培養などに利用することもでき、さらに、これ
ら細胞を上述の胚芽細胞と自体公知の細胞融合法により
融合させることにより本発明のＤＮＡ転移動物を作出す
ることもできる。

【００５３】非ヒト哺乳動物としては、例えば、ウシ、
ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモッ
ト、ハムスター、マウス、ラットなどが用いられる。な
かでも、病体動物モデル系の作成の面から個体発生およ
び生物サイクルが比較的短く、また、繁殖が容易なゲッ
歯動物、とりわけマウス（例えば、純系として、Ｃ５７
ＢＬ／６系統，ＤＢＡ２系統など、交雑系として、Ｂ６
Ｃ３Ｆ₁系統，ＢＤＦ₁系統，Ｂ６Ｄ２Ｆ₁系統，ＢＡＬ
Ｂ／ｃ系統，ＩＣＲ系統など）またはラット（例えば、
Ｗｉｓｔａｒ，ＳＤなど）などが好ましい。哺乳動物に
おいて発現しうる組換えベクターにおける「哺乳動物」
としては、上記の非ヒト哺乳動物の他にヒトなどが挙げ
られる。本発明の外来性ＤＮＡとは、非ヒト哺乳動物が
本来有している本発明のＤＮＡではなく、いったん哺乳
動物から単離・抽出された本発明のＤＮＡをいう。本発
明の変異ＤＮＡとしては、元の本発明のＤＮＡの塩基配
列に変異（例えば、突然変異など）が生じたもの、具体
的には、塩基の付加、欠損、他の塩基への置換などが生
じたＤＮＡなどが用いられ、また、異常ＤＮＡも含まれ
る。該異常ＤＮＡとしては、異常な本発明のタンパク質
を発現させるＤＮＡを意味し、例えば、正常な本発明の
タンパク質の機能を抑制するタンパク質を発現させるＤ
ＮＡなどが用いられる。本発明の外来性ＤＮＡは、対象
とする動物と同種あるいは異種のどちらの哺乳動物由来
のものであってもよい。本発明のＤＮＡを対象動物に転
移させるにあたっては、該ＤＮＡを動物細胞で発現させ
うるプロモーターの下流に結合したＤＮＡコンストラク
トとして用いるのが一般に有利である。例えば、本発明
のヒトＤＮＡを転移させる場合、これと相同性が高い本
発明のＤＮＡを有する各種哺乳動物（例えば、ウサギ、
イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウス
など）由来のＤＮＡを発現させうる各種プロモーターの
下流に、本発明のヒトＤＮＡを結合したＤＮＡコンスト
ラクト（例、ベクターなど）を対象哺乳動物の受精卵、
例えば、マウス受精卵へマイクロインジェクションする
ことによって本発明のＤＮＡを高発現するＤＮＡ転移哺
乳動物を作出することができる。

【００５４】本発明のタンパク質の発現ベクターとして
は、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミ
ド、酵母由来のプラスミド、λファージなどのバクテリ
オファージ、モロニー白血病ウィルスなどのレトロウィ
ルス、ワクシニアウィルスまたはバキュロウィルスなど
の動物ウイルスなどが用いられる。なかでも、大腸菌由
来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミドまたは酵母由
来のプラスミドなどが好ましく用いられる。上記のＤＮ
Ａ発現調節を行なうプロモーターとしては、例えば、
ウイルス（例、シミアンウイルス、サイトメガロウイル
ス、モロニー白血病ウイルス、ＪＣウイルス、乳癌ウイ
ルス、ポリオウイルスなど）に由来するＤＮＡのプロモ
ーター、各種哺乳動物（ヒト、ウサギ、イヌ、ネコ、
モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来の
プロモーター、例えば、アルブミン、インスリンＩＩ、
ウロプラキンＩＩ、エラスターゼ、エリスロポエチン、
エンドセリン、筋クレアチンキナーゼ、グリア線維性酸
性タンパク質ク、グルタチオンＳ−トランスフェラー
ゼ、血小板由来成長因子β、ケラチンＫ１，Ｋ１０およ
びＫ１４、コラーゲンＩ型およびＩＩ型、サイクリック
ＡＭＰ依存タンパク質キナーゼβＩサブユニット、ジス
トロフィン、酒石酸抵抗性アルカリフォスファターゼ、
心房ナトリウム利尿性因子、内皮レセプターチロシンキ
ナーゼ（一般にＴｉｅ２と略される）、ナトリウムカリ
ウムアデノシン３リン酸化酵素（Ｎａ，Ｋ−ＡＴＰａｓ
ｅ）、ニューロフィラメント軽鎖、メタロチオネインＩ
およびＩＩＡ、メタロプロティナーゼ１組織インヒビタ
ー、ＭＨＣクラスＩ抗原（Ｈ−２Ｌ）、Ｈ−ｒａｓ、レ
ニン、ドーパミンβ−水酸化酵素、甲状腺ペルオキシダ
ーゼ（ＴＰＯ）、ポリペプチド鎖延長因子1α（ＥＦ−
１α）、βアクチン、αおよびβミオシン重鎖、ミオシ
ン軽鎖１および２、ミエリン基礎タンパク質、チログロ
ブリン、Ｔｈｙ−１、免疫グロブリン、Ｈ鎖可変部（Ｖ
ＮＰ）、血清アミロイドＰコンポーネント、ミオグロビ
ン、トロポニンＣ、平滑筋αアクチン、プレプロエンケ
ファリンＡ、バソプレシンなどのプロモーターなどが用
いられる。なかでも、全身で高発現することが可能なサ
イトメガロウイルスプロモーター、ヒトポリペプチド鎖
延長因子１α（ＥＦ−１α）のプロモーター、ヒトおよ
びニワトリβアクチンプロモーターなどが好適である。

【００５５】上記ベクターは、ＤＮＡ転移哺乳動物にお
いて目的とするメッセンジャーＲＮＡの転写を終結する
配列（一般にターミネターと呼ばれる）を有しているこ
とが好ましく、例えば、ウィルス由来および各種哺乳動
物由来の各ＤＮＡの配列を用いることができ、好ましく
は、シミアンウィルスのＳＶ４０ターミネターなどが用
いられる。その他、目的とする外来性ＤＮＡをさらに高
発現させる目的で各ＤＮＡのスプライシングシグナル、
エンハンサー領域、真核ＤＮＡのイントロンの一部など
をプロモーター領域の５’上流、プロモーター領域と翻
訳領域間あるいは翻訳領域の３’下流 に連結すること
も目的により可能である。該翻訳領域は転移動物におい
て発現しうるＤＮＡコンストラクトとして、前記のプロ
モーターの下流および所望により転写終結部位の上流に
連結させる通常のＤＮＡ工学的手法により作製すること
ができる。受精卵細胞段階における本発明の外来性ＤＮ
Ａの転移は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞のす
べてに存在するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出
動物の胚芽細胞において、本発明の外来性ＤＮＡが存在
することは、作出動物の後代がすべて、その胚芽細胞お
よび体細胞のすべてに本発明の外来性ＤＮＡを保持する
ことを意味する。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこ
の種の動物の子孫はその胚芽細胞および体細胞のすべて
に本発明の外来性ＤＮＡを有する。

【００５６】本発明の外来性正常ＤＮＡを転移させた非
ヒト哺乳動物は、交配により外来性ＤＮＡを安定に保持
することを確認して、該ＤＮＡ保有動物として通常の飼
育環境で継代飼育することが出来る。受精卵細胞段階に
おける本発明の外来性ＤＮＡの転移は、対象哺乳動物の
胚芽細胞および体細胞の全てに過剰に存在するように確
保される。ＤＮＡ転移後の作出動物の胚芽細胞において
本発明の外来性ＤＮＡが過剰に存在することは、作出動
物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発
明の外来性ＤＮＡを過剰に有することを意味する。本発
明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫はそ
の胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性ＤＮＡ
を過剰に有する。導入ＤＮＡを相同染色体の両方に持つ
ホモザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配す
ることによりすべての子孫が該ＤＮＡを過剰に有するよ
うに繁殖継代することができる。本発明の正常ＤＮＡを
有する非ヒト哺乳動物は、本発明の正常ＤＮＡが高発現
させられており、内在性の正常ＤＮＡの機能を促進する
ことにより最終的に本発明のタンパク質の機能亢進症を
発症することがあり、その病態モデル動物として利用す
ることができる。例えば、本発明の正常ＤＮＡ転移動物
を用いて、本発明のタンパク質の機能亢進症や、本発明
のタンパク質が関連する疾患の病態機序の解明およびこ
れらの疾患の治療方法の検討を行なうことが可能であ
る。また、本発明の外来性正常ＤＮＡを転移させた哺乳
動物は、遊離した本発明のタンパク質の増加症状を有す
ることから、本発明のタンパク質に関連する疾患に対す
る治療薬のスクリーニング試験にも利用可能である。

【００５７】一方、本発明の外来性異常ＤＮＡを有する
非ヒト哺乳動物は、交配により外来性ＤＮＡを安定に保
持することを確認して該ＤＮＡ保有動物として通常の飼
育環境で継代飼育することが出来る。さらに、目的とす
る外来ＤＮＡを前述のプラスミドに組み込んで原科とし
て用いることができる。プロモーターとのＤＮＡコンス
トラク卜は、通常のＤＮＡ工学的手法によって作製する
ことができる。受精卵細胞段階における本発明の異常Ｄ
ＮＡの転移は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞の
全てに存在するように確保される。ＤＮＡ転移後の作出
動物の胚芽細胞において本発明の異常ＤＮＡが存在する
ことは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細
胞の全てに本発明の異常ＤＮＡを有することを意味す
る。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の
子孫は、その胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の異
常ＤＮＡを有する。導入ＤＮＡを相同染色体の両方に持
つホモザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配
することによりすべての子孫が該ＤＮＡを有するように
繁殖継代することができる。本発明の異常ＤＮＡを有す
る非ヒト哺乳動物は、本発明の異常ＤＮＡが高発現させ
られており、内在性の正常ＤＮＡの機能を阻害すること
により最終的に本発明のタンパク質の機能不活性型不応
症となることがあり、その病態モデル動物として利用す
ることができる。例えば、本発明の異常ＤＮＡ転移動物
を用いて、本発明のタンパク質の機能不活性型不応症の
病態機序の解明およびこの疾患を治療方法の検討を行な
うことが可能である。また、具体的な利用可能性として
は、本発明の異常ＤＮＡ高発現動物は、本発明のタンパ
ク質の機能不活性型不応症における本発明の異常タンパ
ク質による正常タンパク質の機能阻害（dominant negat
ive作用）を解明するモデルとなる。また、本発明の外
来異常ＤＮＡを転移させた哺乳動物は、遊離した本発明
のタンパク質の増加症状を有することから、本発明のタ
ンパク質の機能不活性型不応症に対する治療薬スクリー
ニング試験にも利用可能である。

【００５８】また、上記２種類の本発明のＤＮＡ転移動
物のその他の利用可能性として、例えば、 組織培養のための細胞源としての使用、 本発明のＤＮＡ転移動物の組織中のＤＮＡもしくはＲ
ＮＡを直接分析するか、またはＤＮＡにより発現された
タンパク質組織を分析することによる、本発明のタンパ
ク質により特異的に発現あるいは活性化するタンパク質
との関連性についての解析、 ＤＮＡを有する組織の細胞を標準組織培養技術により
培養し、これらを使用して、一般に培養困難な組織から
の細胞の機能の研究、 上記記載の細胞を用いることによる細胞の機能を高
めるような薬剤のスクリーニング、および 本発明の変異タンパク質を単離精製およびその抗体作
製などが考えられる。 さらに、本発明のＤＮＡ転移動物を用いて、本発明のタ
ンパク質の機能不活性型不応症などを含む、本発明のタ
ンパク質に関連する疾患の臨床症状を調べることがで
き、また、本発明のタンパク質に関連する疾患モデルの
各臓器におけるより詳細な病理学的所見が得られ、新し
い治療方法の開発、さらには、該疾患による二次的疾患
の研究および治療に貢献することができる。また、本発
明のＤＮＡ転移動物から各臓器を取り出し、細切後、ト
リプシンなどのタンパク質分解酵素により、遊離したＤ
ＮＡ転移細胞の取得、その培養またはその培養細胞の系
統化を行なうことが可能である。さらに、本発明のタン
パク質産生細胞の特定化、アポトーシス、分化あるいは
増殖との関連性、またはそれらにおけるシグナル伝達機
構を調べ、それらの異常を調べることなどができ、本発
明のタンパク質およびその作用解明のための有効な研究
材料となる。さらに、本発明のＤＮＡ転移動物を用い
て、本発明のタンパク質の機能不活性型不応症を含む、
本発明のタンパク質に関連する疾患の治療薬の開発を行
なうために、上述の検査法および定量法などを用いて、
有効で迅速な該疾患治療薬のスクリーニング法を提供す
ることが可能となる。また、本発明のＤＮＡ転移動物ま
たは本発明の外来性ＤＮＡ発現ベクターを用いて、本発
明のタンパク質が関連する疾患のＤＮＡ治療法を検討、
開発することが可能である。

【００５９】（９）ノックアウト動物 本発明は、本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳
動物胚幹細胞および本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳
動物を提供する。すなわち、本発明は、（１）本発明の
ＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞、
（２）該ＤＮＡがレポーター遺伝子（例、大腸菌由来の
β−ガラクトシダーゼ遺伝子）を導入することにより不
活性化された第（１）項記載の胚幹細胞、（３）ネオマ
イシン耐性である第（１）項記載の胚幹細胞、（４）非
ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第（１）項記載の胚幹
細胞、（５）ゲッ歯動物がマウスである第（４）項記載
の胚幹細胞、（６）本発明のＤＮＡが不活性化された該
ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物、（７）該ＤＮＡがレポ
ーター遺伝子（例、大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ
遺伝子）を導入することにより不活性化され、該レポー
ター遺伝子が本発明のＤＮＡに対するプロモーターの制
御下で発現しうる第（６）項記載の非ヒト哺乳動物、
（８）非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第（６）項記
載の非ヒト哺乳動物、（９）ゲッ歯動物がマウスである
第（８）項記載の非ヒト哺乳動物、および（１０）第
（７）項記載の動物に、試験化合物を投与し、レポータ
ー遺伝子の発現を検出することを特徴とする本発明のＤ
ＮＡに対するプロモーター活性を促進または阻害する化
合物またはその塩のスクリーニング方法を提供する。

【００６０】本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺
乳動物胚幹細胞とは、該非ヒト哺乳動物が有する本発明
のＤＮＡに人為的に変異を加えることにより、ＤＮＡの
発現能を抑制するか、もしくは該ＤＮＡがコードしてい
る本発明のタンパク質の活性を実質的に喪失させること
により、ＤＮＡが実質的に本発明のタンパク質の発現能
を有さない（以下、本発明のノックアウトＤＮＡと称す
ることがある）非ヒト哺乳動物の胚幹細胞（以下、ＥＳ
細胞と略記する）をいう。非ヒト哺乳動物としては、前
記と同様のものが用いられる。本発明のＤＮＡに人為的
に変異を加える方法としては、例えば、遺伝子工学的手
法により該ＤＮＡ配列の一部又は全部の削除、他ＤＮＡ
を挿入または置換させることによって行なうことができ
る。これらの変異により、例えば、コドンの読み取り枠
をずらしたり、プロモーターあるいはエキソンの機能を
破壊することにより本発明のノックアウトＤＮＡを作製
すればよい。本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺
乳動物胚幹細胞（以下、本発明のＤＮＡ不活性化ＥＳ細
胞または本発明のノックアウトＥＳ細胞と略記する）の
具体例としては、例えば、目的とする非ヒト哺乳動物が
有する本発明のＤＮＡを単離し、そのエキソン部分にネ
オマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子を
代表とする薬剤耐性遺伝子、あるいはｌａｃＺ（β−ガ
ラクトシダーゼ遺伝子）、ｃａｔ（クロラムフェニコー
ルアセチルトランスフェラーゼ遺伝子）を代表とするレ
ポーター遺伝子等を挿入することによりエキソンの機能
を破壊するか、あるいはエキソン間のイントロン部分に
遺伝子の転写を終結させるＤＮＡ配列（例えば、polyＡ
付加シグナルなど）を挿入し、完全なメッセンジャーＲ
ＮＡを合成できなくすることによって、結果的に遺伝子
を破壊するように構築したＤＮＡ配列を有するＤＮＡ鎖
（以下、ターゲッティングベクターと略記する）を、例
えば相同組換え法により該動物の染色体に導入し、得ら
れたＥＳ細胞について本発明のＤＮＡ上あるいはその近
傍のＤＮＡ配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼ
ーション解析あるいはターゲッティングベクター上のＤ
ＮＡ配列とターゲッティングベクター作製に使用した本
発明のＤＮＡ以外の近傍領域のＤＮＡ配列をプライマー
としたＰＣＲ法により解析し、本発明のノックアウトＥ
Ｓ細胞を選別することにより得ることができる。

【００６１】また、相同組換え法等により本発明のＤＮ
Ａを不活化させる元のＥＳ細胞としては、例えば、前述
のような既に樹立されたものを用いてもよく、また公知
EvansとKaufmaの方法に準じて新しく樹立したものでも
よい。例えば、マウスのＥＳ細胞の場合、現在、一般的
には１２９系のＥＳ細胞が使用されているが、免疫学的
背景がはっきりしていないので、これに代わる純系で免
疫学的に遺伝的背景が明らかなＥＳ細胞を取得するなど
の目的で例えば、Ｃ５７ＢＬ／６マウスやＣ５７ＢＬ／
６の採卵数の少なさをＤＢＡ／２との交雑により改善し
たＢＤＦ₁マウス（Ｃ５７ＢＬ／６とＤＢＡ／２との
Ｆ₁）を用いて樹立したものなども良好に用いうる。Ｂ
ＤＦ₁マウスは、採卵数が多く、かつ、卵が丈夫である
という利点に加えて、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを背景に持
つので、これを用いて得られたＥＳ細胞は病態モデルマ
ウスを作出したとき、Ｃ５７ＢＬ／６マウスとバックク
ロスすることでその遺伝的背景をＣ５７ＢＬ／６マウス
に代えることが可能である点で有利に用い得る。また、
ＥＳ細胞を樹立する場合、一般には受精後３.５日目の
胚盤胞を使用するが、これ以外に８細胞期胚を採卵し胚
盤胞まで培養して用いることにより効率よく多数の初期
胚を取得することができる。また、雌雄いずれのＥＳ細
胞を用いてもよいが、通常雄のＥＳ細胞の方が生殖系列
キメラを作出するのに都合が良い。また、煩雑な培養の
手間を削減するためにもできるだけ早く雌雄の判別を行
なうことが望ましい。ＥＳ細胞の雌雄の判定方法として
は、例えば、ＰＣＲ法によりＹ染色体上の性決定領域の
遺伝子を増幅、検出する方法が、その１例として挙げる
ことができる。この方法を使用すれば、従来、核型分析
をするのに約１０⁶個の細胞数を要していたのに対し
て、１コロニー程度のＥＳ細胞数（約５０個）で済むの
で、培養初期におけるＥＳ細胞の第一次セレクションを
雌雄の判別で行なうことが可能であり、早期に雄細胞の
選定を可能にしたことにより培養初期の手間は大幅に削
減できる。

【００６２】また、第二次セレクションとしては、例え
ば、Ｇ−バンディング法による染色体数の確認等により
行うことができる。得られるＥＳ細胞の染色体数は正常
数の１００％が望ましいが、樹立の際の物理的操作等の
関係上困難な場合は、ＥＳ細胞の遺伝子をノックアウト
した後、正常細胞（例えば、マウスでは染色体数が２ｎ
＝４０である細胞）に再びクローニングすることが望ま
しい。このようにして得られた胚幹細胞株は、通常その
増殖性は大変良いが、個体発生できる能力を失いやすい
ので、注意深く継代培養することが必要である。例え
ば、ＳＴＯ繊維芽細胞のような適当なフィーダー細胞上
でＬＩＦ（１−１００００U/ml）存在下に炭酸ガス培養
器内（好ましくは、５％炭酸ガス、９５％空気または５
％酸素、５％炭酸ガス、９０％空気）で約３７℃で培養
するなどの方法で培養し、継代時には、例えば、トリプ
シン／ＥＤＴＡ溶液（通常０.００１−０.５％トリプシ
ン／０.１−５ｍＭ ＥＤＴＡ、好ましくは約０.１％ト
リプシン／１ｍＭ ＥＤＴＡ）処理により単細胞化し、
新たに用意したフィーダー細胞上に播種する方法などが
とられる。このような継代は、通常１−３日毎に行なう
が、この際に細胞の観察を行い、形態的に異常な細胞が
見受けられた場合はその培養細胞は放棄することが望ま
れる。ＥＳ細胞は、適当な条件により、高密度に至るま
で単層培養するか、または細胞集塊を形成するまで浮遊
培養することにより、頭頂筋、内臓筋、心筋などの種々
のタイプの細胞に分化させることが可能であり〔M. J.
Evans及びM. H. Kaufman, ネイチャー（Nature）第292
巻、154頁、1981年；G. R. Martin プロシーディング
ス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス
・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.）第7
8巻、7634頁、1981年；T. C. Doetschmanら、ジャーナ
ル・オブ・エンブリオロジー・アンド・エクスペリメン
タル・モルフォロジー、第87巻、27頁、1985年〕、本発
明のＥＳ細胞を分化させて得られる本発明のＤＮＡ発現
不全細胞は、インビトロにおける本発明のタンパク質の
細胞生物学的検討において有用である。本発明のＤＮＡ
発現不全非ヒト哺乳動物は、該動物のｍＲＮＡ量を公知
方法を用いて測定して間接的にその発現量を比較するこ
とにより、正常動物と区別することが可能である。該非
ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものが用いられ
る。

【００６３】本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物
は、例えば、前述のようにして作製したターゲッティン
グベクターをマウス胚幹細胞またはマウス卵細胞に導入
し、導入によりターゲッティングベクターの本発明のＤ
ＮＡが不活性化されたＤＮＡ配列が遺伝子相同組換えに
より、マウス胚幹細胞またはマウス卵細胞の染色体上の
本発明のＤＮＡと入れ換わる相同組換えをさせることに
より、本発明のＤＮＡをノックアウトさせることができ
る。本発明のＤＮＡがノックアウトされた細胞は、本発
明のＤＮＡ上またはその近傍のＤＮＡ配列をプローブと
したサザンハイブリダイゼーション解析またはターゲッ
ティングベクター上のＤＮＡ配列と、ターゲッティング
ベクターに使用したマウス由来の本発明のＤＮＡ以外の
近傍領域のＤＮＡ配列とをプライマーとしたＰＣＲ法に
よる解析で判定することができる。非ヒト哺乳動物胚幹
細胞を用いた場合は、遺伝子相同組換えにより、本発明
のＤＮＡが不活性化された細胞株をクローニングし、そ
の細胞を適当な時期、例えば、８細胞期の非ヒト哺乳動
物胚または胚盤胞に注入し、作製したキメラ胚を偽妊娠
させた該非ヒト哺乳動物の子宮に移植する。作出された
動物は正常な本発明のＤＮＡ座をもつ細胞と人為的に変
異した本発明のＤＮＡ座をもつ細胞との両者から構成さ
れるキメラ動物である。該キメラ動物の生殖細胞の一部
が変異した本発明のＤＮＡ座をもつ場合、このようなキ
メラ個体と正常個体を交配することにより得られた個体
群より、全ての組織が人為的に変異を加えた本発明のＤ
ＮＡ座をもつ細胞で構成された個体を、例えば、コート
カラーの判定等により選別することにより得られる。こ
のようにして得られた個体は、通常、本発明のタンパク
質のヘテロ発現不全個体であり、本発明のタンパク質の
ヘテロ発現不全個体同志を交配し、それらの産仔から本
発明のタンパク質のホモ発現不全個体を得ることができ
る。卵細胞を使用する場合は、例えば、卵細胞核内にマ
イクロインジェクション法でＤＮＡ溶液を注入すること
によりターゲッティングベクターを染色体内に導入した
トランスジェニック非ヒト哺乳動物を得ることができ、
これらのトランスジェニック非ヒト哺乳動物に比べて、
遺伝子相同組換えにより本発明のＤＮＡ座に変異のある
ものを選択することにより得られる。

【００６４】このようにして本発明のＤＮＡがノックア
ウトされている個体は、交配により得られた動物個体も
該ＤＮＡがノックアウトされていることを確認して通常
の飼育環境で飼育継代を行なうことができる。さらに、
生殖系列の取得および保持についても常法に従えばよ
い。すなわち、該不活化ＤＮＡの保有する雌雄の動物を
交配することにより、該不活化ＤＮＡを相同染色体の両
方に持つホモザイゴート動物を取得しうる。得られたホ
モザイゴート動物は、母親動物に対して、正常個体１，
ホモザイゴート複数になるような状態で飼育することに
より効率的に得ることができる。ヘテロザイゴート動物
の雌雄を交配することにより、該不活化ＤＮＡを有する
ホモザイゴートおよびヘテロザイゴート動物を繁殖継代
する。本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物
胚幹細胞は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を
作出する上で、非常に有用である。また、本発明のＤＮ
Ａ発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のタンパク質によ
り誘導され得る種々の生物活性を欠失するため、本発明
のタンパク質の生物活性の不活性化を原因とする疾病の
モデルとなり得るので、これらの疾病の原因究明及び治
療法の検討に有用である。

【００６５】（９ａ）本発明のＤＮＡの欠損や損傷など
に起因する疾病に対して治療・予防効果を有する化合物
のスクリーニング方法 本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のＤ
ＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病〔例、リウマチ、
糖尿病、微生物感染症、ＨＩＶ感染（エイズ）、慢性Ｂ
型肝炎、炎症性疾患（例、慢性炎症、急性炎症）、皮膚
炎、関節炎（例、リウマチ様関節炎、慢性関節炎）、自
己免疫疾患、移植片対宿主病、喘息、敗血症、骨疾患、
癌（例、骨髄性白血病など）など〕に対して治療・予防
効果を有する化合物のスクリーニングに用いることがで
きる。すなわち、本発明は、本発明のＤＮＡ発現不全非
ヒト哺乳動物に試験化合物を投与し、該動物の変化を観
察・測定することを特徴とする、本発明のＤＮＡの欠損
や損傷などに起因する疾病に対して治療・予防効果を有
する化合物またはその塩のスクリーニング方法を提供す
る。該スクリーニング方法において用いられる本発明の
ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物としては、前記と同様の
ものが挙げられる。試験化合物としては、例えば、ペプ
チド、タンパク、非ペプチド性化合物、合成化合物、発
酵生産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、
血漿などが挙げられ、これら化合物は新規な化合物であ
ってもよいし、公知の化合物であってもよい。具体的に
は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を、試験化
合物で処理し、無処理の対照動物と比較し、該動物の各
器官、組織、疾病の症状などの変化を指標として試験化
合物の治療・予防効果を試験することができる。試験動
物を試験化合物で処理する方法としては、例えば、経口
投与、静脈注射などが用いられ、試験動物の症状、試験
化合物の性質などにあわせて適宜選択することができ
る。また、試験化合物の投与量は、投与方法、試験化合
物の性質などにあわせて適宜選択することができる。

【００６６】本発明のスクリーニング方法を用いて得ら
れる化合物は、上記した試験化合物から選ばれた化合物
であり、本発明のタンパク質の欠損や損傷などによって
引き起こされる疾患〔例、リウマチ、糖尿病、微生物感
染症、ＨＩＶ感染（エイズ）、慢性Ｂ型肝炎、炎症性疾
患（例、慢性炎症、急性炎症）、皮膚炎、関節炎（例、
リウマチ様関節炎、慢性関節炎）、自己免疫疾患、移植
片対宿主病、喘息、敗血症、骨疾患、癌（例、骨髄性白
血病など）など〕に対して治療・予防効果を有するの
で、該疾患に対する安全で低毒性な治療・予防剤などの
医薬として使用することができる。さらに、上記スクリ
ーニングで得られた化合物から誘導される化合物も同様
に用いることができる。該スクリーニング方法で得られ
た化合物は塩を形成していてもよく、該化合物の塩とし
ては、生理学的に許容される酸（例、無機酸、有機酸）
や塩基（例アルカリ金属）などとの塩が用いられ、とり
わけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様
な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リン
酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例え
ば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン
酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安
息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との
塩などが用いられる。該スクリーニング方法で得られた
化合物またはその塩を含有する医薬は、前記した本発明
のタンパク質を含有する医薬と同様にして製造すること
ができる。このようにして得られる製剤は、安全で低毒
性であるので、例えば、ヒトまたは哺乳動物（例えば、
ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、
ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与する
ことができる。該化合物またはその塩の投与量は、対象
疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、
例えば、炎症性疾患の治療目的で該化合物を経口投与す
る場合、一般的に成人（体重６０ｋｇとして）において
は、一日につき該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、好ま
しくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜
２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該化合
物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異
なるが、例えば、炎症性疾患の治療目的で該化合物を注
射剤の形で通常成人（６０ｋｇとして）に投与する場
合、一日につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、
好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約
０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好
都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算
した量を投与することができる。

【００６７】（９ｂ）本発明のＤＮＡに対するプロモー
ターの活性を促進または阻害する化合物をスクリーニン
グ方法 本発明は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に、
試験化合物を投与し、レポーター遺伝子の発現を検出す
ることを特徴とする本発明のＤＮＡに対するプロモータ
ーの活性を促進または阻害する化合物またはその塩のス
クリーニング方法を提供する。上記スクリーニング方法
において、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物とし
ては、前記した本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物
の中でも、本発明のＤＮＡがレポーター遺伝子を導入す
ることにより不活性化され、該レポーター遺伝子が本発
明のＤＮＡに対するプロモーターの制御下で発現しうる
ものが用いられる。試験化合物としては、前記と同様の
ものが挙げられる。レポーター遺伝子としては、前記と
同様のものが用いられ、β−ガラクトシダーゼ遺伝子
（ｌａｃＺ）、可溶性アルカリフォスファターゼ遺伝子
またはルシフェラーゼ遺伝子などが好適である。本発明
のＤＮＡをレポーター遺伝子で置換された本発明のＤＮ
Ａ発現不全非ヒト哺乳動物では、レポーター遺伝子が本
発明のＤＮＡに対するプロモーターの支配下に存在する
ので、レポーター遺伝子がコードする物質の発現をトレ
ースすることにより、プロモーターの活性を検出するこ
とができる。

【００６８】例えば、本発明のタンパク質をコードする
ＤＮＡ領域の一部を大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ
遺伝子（ｌａｃＺ）で置換している場合、本来、本発明
のタンパク質の発現する組織で、本発明のタンパク質の
代わりにβ−ガラクトシダーゼが発現する。従って、例
えば、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−
ガラクトピラノシド（Ｘ−ｇａｌ）のようなβ−ガラク
トシダーゼの基質となる試薬を用いて染色することによ
り、簡便に本発明のタンパク質の動物生体内における発
現状態を観察することができる。具体的には、本発明の
タンパク質欠損マウスまたはその組織切片をグルタルア
ルデヒドなどで固定し、リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢ
Ｓ）で洗浄後、Ｘ−ｇａｌを含む染色液で、室温または
３７℃付近で、約３０分ないし１時間反応させた後、組
織標本を１ｍＭ ＥＤＴＡ／ＰＢＳ溶液で洗浄すること
によって、β−ガラクトシダーゼ反応を停止させ、呈色
を観察すればよい。また、常法に従い、ｌａｃＺをコー
ドするｍＲＮＡを検出してもよい。

【００６９】上記スクリーニング方法を用いて得られる
化合物またはその塩は、上記した試験化合物から選ばれ
た化合物であり、本発明のＤＮＡに対するプロモーター
活性を促進または阻害する化合物である。該スクリーニ
ング方法で得られた化合物は塩を形成していてもよく、
該化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、
無機酸）や塩基（例、有機酸）などとの塩が用いられ、
とりわけ生理学的に許容される酸付加塩が好ましい。こ
の様な塩としては、例えば、無機酸（例えば、塩酸、リ
ン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例
えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン
酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安
息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との
塩などが用いられる。本発明のＤＮＡに対するプロモー
ター活性を促進する化合物またはその塩は、本発明のタ
ンパク質の発現を促進し、該タンパク質の機能を促進す
ることができるので、例えば、リウマチ、糖尿病、微生
物感染症、ＨＩＶ感染（エイズ）、慢性Ｂ型肝炎、炎症
性疾患（例、慢性炎症、急性炎症）、皮膚炎、関節炎
（例、リウマチ様関節炎、慢性関節炎）、自己免疫疾
患、移植片対宿主病、喘息、敗血症、骨疾患、癌（例、
骨髄性白血病など）などの疾病に対する安全で低毒性な
治療・予防剤などの医薬として有用である。さらに、上
記スクリーニングで得られた化合物から誘導される化合
物も同様に用いることができる。

【００７０】該スクリーニング方法で得られた化合物ま
たはその塩を含有する医薬は、前記した本発明のタンパ
ク質またはその塩を含有する医薬と同様にして製造する
ことができる。このようにして得られる製剤は、安全で
低毒性であるので、例えば、ヒトまたは哺乳動物（例え
ば、ラット、マウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブ
タ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与
することができる。該化合物またはその塩の投与量は、
対象疾患、投与対象、投与ルートなどにより差異はある
が、例えば、炎症性疾患の治療目的で本発明のＤＮＡに
対するプロモーター活性を促進する化合物を経口投与す
る場合、一般的に成人（体重６０ｋｇとして）において
は、一日につき該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、好ま
しくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜
２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該化合
物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによっても異
なるが、例えば、炎症性疾患の治療目的で本発明のＤＮ
Ａに対するプロモーター活性を促進する化合物を注射剤
の形で通常成人（６０ｋｇとして）に投与する場合、一
日につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好まし
くは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１
〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合で
ある。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量
を投与することができる。一方、例えば、本発明のＤＮ
Ａに対するプロモーター活性を阻害する化合物を経口投
与する場合、一般的に成人（体重６０ｋｇとして）にお
いては、一日につき該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、
好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．
０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場合は、該
化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患などによって
も異なるが、本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性
を阻害する化合物を注射剤の形で通常成人（６０ｋｇと
して）に投与する場合、一日につき該化合物を約０．０
１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程
度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射
により投与するのが好都合である。他の動物の場合も、
６０ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
このように、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物
は、本発明のＤＮＡに対するプロモーターの活性を促進
または阻害する化合物またはその塩をスクリーニングす
る上で極めて有用であり、本発明のＤＮＡ発現不全に起
因する各種疾患の原因究明または予防・治療薬の開発に
大きく貢献することができる。

【００７１】本明細書および図面において、塩基やアミ
ノ酸などを略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ
Commission on Biochemical Nomenclature による略号
あるいは当該分野における慣用略号に基づくものであ
り、その例を下記する。またアミノ酸に関し光学異性体
があり得る場合は、特に明示しなければＬ体を示すもの
とする。 ＤＮＡ ：デオキシリボ核酸 ｃＤＮＡ ：相補的デオキシリボ核酸 Ａ ：アデニン Ｔ ：チミン Ｇ ：グアニン Ｃ ：シトシン ＲＮＡ ：リボ核酸 ｍＲＮＡ ：メッセンジャーリボ核酸 ｄＡＴＰ ：デオキシアデノシン三リン酸 ｄＴＴＰ ：デオキシチミジン三リン酸 ｄＧＴＰ ：デオキシグアノシン三リン酸 ｄＣＴＰ ：デオキシシチジン三リン酸 ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸 ＥＤＴＡ ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム

【００７２】 Ｇｌｙ ：グリシン Ａｌａ ：アラニン Ｖａｌ ：バリン Ｌｅｕ ：ロイシン Ｉｌｅ ：イソロイシン Ｓｅｒ ：セリン Ｔｈｒ ：スレオニン Ｃｙｓ ：システイン Ｍｅｔ ：メチオニン Ｇｌｕ ：グルタミン酸 Ａｓｐ ：アスパラギン酸 Ｌｙｓ ：リジン Ａｒｇ ：アルギニン Ｈｉｓ ：ヒスチジン Ｐｈｅ ：フェニルアラニン Ｔｙｒ ：チロシン Ｔｒｐ ：トリプトファン Ｐｒｏ ：プロリン Ａｓｎ ：アスパラギン Ｇｌｎ ：グルタミン ｐＧｌｕ ：ピログルタミン酸

【００７３】また、本明細書中で繁用される置換基、保
護基および試薬を下記の記号で表記する。 Ｍｅ ：メチル基 Ｅｔ ：エチル基 Ｂｕ ：ブチル基 Ｐｈ ：フェニル基 ＴＣ ：チアゾリジン−４（Ｒ）−カルボキサミド基 Ｔｏｓ ：ｐ−トルエンスルフォニル ＣＨＯ ：ホルミル Ｂｚｌ ：ベンジル Ｃｌ₂−Ｂｚｌ ：２，６−ジクロロベンジル Ｂｏｍ ：ベンジルオキシメチル Ｚ ：ベンジルオキシカルボニル Ｃｌ−Ｚ ：２−クロロベンジルオキシカルボニル Ｂｒ−Ｚ ：２−ブロモベンジルオキシカルボニル Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル ＤＮＰ ：ジニトロフェニル Ｔｒｔ ：トリチル Ｂｕｍ ：ｔ−ブトキシメチル Ｆｍｏｃ ：Ｎ−９−フルオレニルメトキシカルボニル ＨＯＢｔ ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール ＨＯＯＢｔ ：３,４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ− １,２,３−ベンゾトリアジン ＨＯＮＢ ：1-ヒドロキシ-5-ノルボルネン-2,3-ジカルボキシイミド ＤＣＣ ：Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド

【００７４】本願明細書の配列表の配列番号は、以下の
配列を示す。 〔配列番号：１〕本発明のヒト由来タンパク質（ＶＨ１
０１２８７）のアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：２〕 配列番号：１で表わされるアミノ酸配列を有する本発明
のヒト由来タンパク質をコードするＤＮＡの塩基配列を
示す。 〔配列番号：３〕本発明のヒト由来タンパク質（ＶＨ１
０１２９０）のアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：４〕 配列番号：２で表わされるアミノ酸配列を有する本発明
のヒト由来タンパク質をコードするＤＮＡの塩基配列を
示す。 〔配列番号：５〕後述の実施例１で使用したオリゴＤＮ
Ａの塩基配列を示す。 〔配列番号：６〕後述の実施例１で使用したオリゴＤＮ
Ａの塩基配列を示す。 〔配列番号：７〕後述の実施例２で使用したオリゴＤＮ
Ａの塩基配列を示す。 〔配列番号：８〕後述の実施例２で使用したオリゴＤＮ
Ａの塩基配列を示す。 〔配列番号：９〕後述の実施例３で使用するオリゴＤＮ
Ａの塩基配列を示す。 〔配列番号：１０〕後述の実施例３で使用するオリゴＤ
ＮＡの塩基配列を示す。 〔配列番号：１１〕後述の実施例４で使用するオリゴＤ
ＮＡの塩基配列を示す。 〔配列番号：１２〕後述の実施例４で使用するオリゴＤ
ＮＡの塩基配列を示す。

【００７５】後述の実施例２で得られた形質転換体Ｅｓ
ｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＤＨ５α／ｐＴＢＮ５
は、２０００年１月１８日から発酵研究所（ＩＦＯ）に
寄託番号 ＩＦＯ １６３５５として、２０００年２月２
日から通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所
（ＮＩＢＨ）に寄託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−７０１８と
してそれぞれ寄託されている。

【実施例】以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具体
的に説明するが、本発明はそれに限定されるものではな
い。なお、大腸菌を用いての遺伝子操作法は、モレキュ
ラー・クローニング（Molecular cloning）に記載され
ている方法に従った。 実施例１ ＶＨ１０１２８７タンパク質をコードするｃＤＮＡ の
クローニング 本発明のＶＨ１０１２８７タンパク質をコードするｃＤ
ＮＡは以下のようなＰＣＲ法により取得する。 配列番号：５で表されるオリゴＤＮＡ（ＡＴＧＣＡＧＧ
ＣＡＧＡＴＣＣＴＧＧＡＧＧＧＡＧＴＡＧＴＣＡ）をセ
ンス鎖プライマーとして、配列番号：６で表されるオリ
ゴＤＮＡ（ＣＴＡＣＣＡＧＣＴＣＴＧＴＴＣＡＡＡＧＴ
ＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＡＣ）をアンチセンス鎖プライマ
ーとして各々２５ｐｍｏｌ、Ｐｒｅｍｉｘ Ｔａｑ
^TM（Ｅｘ Ｔａｑ^TM Ｖｅｒｓｉｏｎ）（宝酒造
（株））１０μｌ、鋳型ＤＮＡとしてＨｕｍａｎ ｍｕ
ｌｔｉｐｌｅ ｔｉｓｓｕｅ ｃＤＮＡ（ＭＴＣ ^TM）ｐ
ａｎｅｌｓ、（クロンテック（株））の各組織別ｃＤＮ
Ａ溶液１μｌを含む混合液２０μｌを調製し、サーマル
サイクラー（ＧｅｎｅＡｍｐ^R ＰＣＲｓｙｓｔｅｍ
ｍｏｄｅｌ ９７００（パーキンエルマー社））を用い
て、最初に９４℃で1分間置いた後、９４℃で１０秒、
７２℃で３分を１サイクルとして５サイクル、続いて９
４℃で１０秒、７０℃で３分を１サイクルとして５サイ
クル、続いて９４℃で１０秒、６８℃で３分を１サイク
ルとして２５サイクル各反応を繰り返し、さらに６８
℃、５分で伸長反応させるプログラムでＰＣＲ反応を行
う。反応終了液を２．０％アガロースゲルを用いて電気
泳動後エチジウムブロマイド染色し、分子量マーカー換
算で０．５ｋｂ付近の位置にＰＣＲ反応で増幅されたＤ
ＮＡに対応するバンドを確認する。次にキアクィックゲ
ルエキストラクションキット（キアゲン社）を用いて該
ＤＮＡ断片を回収し、塩基配列を決定する為にｐＣＲ^R
２．１−ＴＯＰＯ（インビトロジェン社）を用いてＴＡ
クローニングし、該プラスミドを大腸菌ＤＨ５α株のコ
ンピテントセルに導入する。アンピシリン含有ＬＢ寒天
培地上で出現するアンピシリン耐性形質転換株のコロニ
ーの中から外来ＤＮＡ断片が挿入がされていたプラスミ
ドを保持していたクローンを選択し、該プラスミドＤＮ
Ａ、ｐＴＢＮ４を調製する。挿入ＤＮＡの塩基配列を決
定するため、ｐＴＢＮ４を鋳型ＤＮＡ、２種（ＰＲＭ−
００７、ＰＲＭ−００８）の市販プライマーＤＮＡ（東
洋紡績（株））をシーケンスプライマーとし、ＡＢＩ
ＰＲＩＳＭ^R ＢｉｇＤｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ Ｃｙ
ｃｌｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ＦＳ Ｒｅａｄｙ Ｒｅａ
ｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（パーキンエルマー社）を用いたシ
ーケンス反応を添付資料の条件にしたがって、サーマル
サイクラー（ＧｅｎｅＡｍｐ^R ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ ｍ
ｏｄｅｌ ９７００（パーキンエルマー社））で行った
後、該反応試料をＤＮＡシーケンサーＡＢＩ ＰＲＩＳ
Ｍ ^R ３７７（パーキンエルマー社）で分析する。その
結果、ｐＴＢＮ４には、公知のタンパク質とは全く相同
性がない配列番号：１で表される１６９個のアミノ酸か
らなる新規ＶＨ１０１２８７タンパク質をコードする配
列番号：２で表される５０７塩基の塩基配列からなるオ
ープンリーディングフレーム（Open reading frame）を
含むＤＮＡ断片が含まれる（図１）。コードされるＶＨ
１０１２８７タンパク質は、公知のタンパク質に相同性
の高いものは見あたらず、図３に示すヒトＩＬ−１レセ
プターアンタゴニストタンパク質との相同性はアミノ酸
レベルで４０％である。

【００７６】実施例２ ＶＨ１０１２９０タンパク質をコードする ｃＤＮＡ の
クローニング 本発明のＶＨ１０１２９０タンパク質をコードするｃＤ
ＮＡは以下のようなＰＣＲ法により取得した。 配列番号：７で表されるオリゴＤＮＡ（ＡＴＧＧＡＡＡ
ＡＡＧＣＡＴＴＧＡＡＡＡＴＴＧＡＣＡＣＡＣＣＴＣ
Ａ）をセンス鎖プライマーとして、配列番号：８で表さ
れるオリゴＤＮＡ（ＴＴＡＡＡＡＣＡＧＣＡＴＡＧＴＴ
ＡＡＣＣＣＡＡＡＧＴＣＡＧＴＡＧＴＧＴ）をアンチセ
ンス鎖プライマーとして各々２５ｐｍｏｌ、Ｐｒｅｍｉ
ｘ Ｔａｑ^TM（Ｅｘ Ｔａｑ^TM Ｖｅｒｓｉｏｎ)（宝酒
造（株））１０μl、鋳型ＤＮＡとしてＨｕｍａｎ ｍ
ｕｌｔｉｐｌｅ ｔｉｓｓｕｅ ｃＤＮＡ （ＭＴ
Ｃ^TM）ｐａｎｅｌｓ、（クロンテック（株））の各組織
別ｃＤＮＡ溶液 １μlを含む混合液２０μlを調製し、
サーマルサイクラー（ＧｅｎｅＡｍｐ^R ＰＣＲ ｓｙｓ
ｔｅｍ ｍｏｄｅｌ ９７００（パーキンエルマー
社））を用いて最初に９４℃で1分間置いた後、９４℃
で１０秒、 ７２℃で３分を１サイクルとして５サイク
ル、続いて９４℃で１０秒、７０℃で３分を１サイクル
として５サイクル、続いて９４℃で１０秒、６８℃で３
分を１サイクルとして２５サイクル各反応を繰り返し、
さらに６８℃、５分で伸長反応させるプログラムでＰＣ
Ｒ反応を行った。反応終了液を２．０％アガロースゲル
を用いて電気泳動後エチジウムブロマイド染色し、分子
量マーカー換算で０．５kb付近の位置にＰＣＲ反応で増
幅されたＤＮＡに対応するバンドを確認した。次にキア
クィックゲルエキストラクションキット（キアゲン社）
を用いて該ＤＮＡ断片を回収し、塩基配列を決定する為
にｐＣＲ^R２．１−ＴＯＰＯ（インビトロジェン社）を
用いてＴＡクローニングし、該プラスミドを大腸菌ＤＨ
５α株のコンピテントセルに導入した。アンピシリン含
有LB寒天培地上で出現するアンピシリン耐性形質転換株
のコロニーの中から外来ＤＮＡ断片が挿入されていたプ
ラスミドを保持していたクローンを選択し、該プラスミ
ドＤＮＡ、ｐＴＢＮ５を調製した。挿入ＤＮＡの塩基配
列を決定するため、ｐＴＢＮ５を鋳型ＤＮＡ、２種（Ｐ
ＲＭ−００７、ＰＲＭ−００８）の市販プライマーＤＮ
Ａ（東洋紡績（株））をシーケンスプライマーとし、Ａ
ＢＩ ＰＲＩＳＭ^R ＢｉｇＤｙｅ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ
ＣｙｃｌｅＳｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ＦＳ Ｒｅａｄｙ Ｒ
ｅａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（パーキンエルマー社）を用い
たシーケンス反応を添付資料の条件にしたがって、サー
マルサイクラー（ＧｅｎｅＡｍｐ^R ＰＣＲ ｓｙｓｔｅ
ｍ ｍｏｄｅｌ ９７００（パーキンエルマー社））で行
った後、該反応試料をＤＮＡシーケンサーＡＢＩ ＰＲ
ＩＳＭ^R ３７７（パーキンエルマー社）で分析した。そ
の結果、ｐＴＢＮ５には、 公知のタンパク質とは全く
相同性がない配列番号：３で表される１５８個のアミノ
酸からなる新規ＶＨ１０１２９０タンパク質をコードす
る配列番号：４で表される４７４塩基の塩基配列からな
るオープンリーディングフレーム（Open reading fram
e）を含むＤＮＡ断片が含まれていた（図２）。コード
されるＶＨ１０１２９０タンパク質は、公知のタンパク
質に相同性の高いものは見あたらず、図３に示すヒトＩ
Ｌ−１ｒａおよび実施例１記載のＶＨ１０１２８７タン
パク質との相同性はアミノ酸レベルでそれぞれ２８％、
２７％であった。こうして得られたプラスミドｐＴＢＮ
５を大腸菌ＤＨ５αに導入し、形質転換体Ｅｓｃｈｅｒ
ｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＤＨ５α／ｐＴＢＮ５を得た。

【００７７】実施例３ ＶＨ１０１２８７−ＦＬＡＧ融合タンパク質のＣＯＳ７
細胞での発現とその検出 以下の要領で、ＶＨ１０１２８７とＦＬＡＧエピトープ
ペプチドの融合タンパク質のＣＯＳ７細胞での発現とそ
の検出を行う。まず実施例１で得たＶＨ１０１２８７を
コードするｃＤＮＡの塩基配列 に基づき、２種のプラ
イマーＤＮＡを化学合成する。一つは５’−ＣＧＡＡＴ
ＴＣＣＣＡＣＣＡＴＧＣＡＧＧＣＡＧＡＴＣＣＴＧＧＡ
ＧＧＧＡＧＴＡＧＴＣ−３’（配列番号：９）であり、
これは制限酵素ＥｃｏＲＩ認識部位を含むアンカー配列
を５’末端側に持つ＋１〜＋２８（翻訳開始部位を＋１
とする）までのセンス配列を含むオリゴＤＮＡである。
もう一つは５’−ＧＴＡＣＡＧＴＣＧＡＣＣＣＡＧＣＴ
ＣＴＧＴＴＣＡＡＡＧＴＡＡＡＡＣＴＴＧＧＴＡ−３’
（配列番号：１０）であり、これは制限酵素ＳａｌＩ認
識部位を含むアンカー配列の３’側に＋４８０〜＋５０
７ までのアンチセンス配列がつながった配列を有する
オリゴＤＮＡである。実施例１に記載のプラスミドｐＴ
ＢＮ４を鋳型としてこれら２種のプライマーＤＮＡおよ
びＴａｋａｒａ ＬＡ Ｔａｑ（宝酒造）を用い、サーマ
ルサイクラーＧｅｎｅＡｍｐ^TM ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍ
９７００（パーキンエルマー社）にて、最初９８℃で３
０秒間置いた後、９８℃で１０秒、５５℃で２０秒、７
２℃で２分を１反応サイクルとして２５サイクル増幅反
応を繰返し、最後に７２℃で５分間伸長反応を行う。得
られたＤＮＡ断片を精製後、制限酵素ＥｃｏＲＩとＳａ
ｌＩで末端消化の後再精製し、動物細胞用発現ベクター
ｐＣＡＮ６１８ＦＬＡＧのＥｃｏＲＩ、ＳａｌＩ部位へ
挿入、連結する。ｐＣＡＮ６１８ＦＬＡＧは、プラスミ
ドベクターｐＣＡＮ６１８に由来し、選択マーカーとし
てのネオマイシン耐性遺伝子を持つと共に、目的タンパ
ク質をコードするＤＮＡ断片をそのクローニング部位で
あるＥｃｏＲＩ、ＳａｌＩ部位に挿入することでサイト
メガロウイルスの極初期遺伝子エンハンサーとその下流
のβ−アクチンプロモーター制御下で該タンパク質を発
現させることができるのみならず、ＳａｌＩ部位直後に
存在する８アミノ酸のＦＬＡＧエピトープ配列（Ａｓｐ
−Ｔｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−
Ｌｙｓ）をコードする塩基配列と終止コドンに読み取り
枠を合わせることで該目的タンパク質をＦＬＡＧ融合タ
ンパク質として発現させることも可能である。上述のＰ
ＣＲクローニングＤＮＡ断片のｐＣＡＮ６１８ＦＬＡＧ
への挿入もＶＨ１０１２８７全長とＦＬＡＧエピトープ
の融合タンパク質（間にＶａｌを１残基挿む）を発現す
る目的で行い、その結果、発現ベクタープラスミドｐＶ
Ｈ２８７−Ｆを得る。次に、ＣＯＳ７細胞１．２×１０
⁵細胞を６穴プレートを用いて、１０％牛胎児血清（Ｆ
ＢＳ）を含むダルベッコ変法最小培地（ＤＭＥＭ）で２
４時間培養し、この細胞に上記の発現プラスミドｐＶＨ
２８７−Ｆ（１ウェルあたり０．４μｇ）をリポフェク
トアミン（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）を用いて導入する。導
入２４時間後上記の新しい培地に交換し、さらに５時間
後にＦＢＳ不含有Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲ
Ｌ）に換えて３６時間培養後、その培養上清と細胞抽出
液を得る。細胞抽出液は細胞を生理食塩を含むリン酸緩
衝液（ＰＢＳ）で２回洗浄後、トリスＳＤＳサンプル緩
衝液で溶解抽出し、一方、培養上清は限外濾過（分子量
３０００カット）で適宜濃縮後、等容のトリスＳＤＳサ
ンプル緩衝液と混合する。これらのサンプルを熱処理後
１５％−２５％ ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルで電
気泳動し、さらにそのゲルからＰＶＤＦ膜上（Ａｍｅｒ
ｓｈａｍｐｈａｒｍａｃｉａ ｂｉｏｔｅｃｈ社）に転
写する。次に該ＰＶＤＦ膜をブロックエース（雪印乳
業）で１時間ブロッキングし、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ
２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔ）中で抗ＦＬＡＧモノ
クローナル抗体（１０μｇ／ｍｌ；Ｋｏｄａｋ社）と２
時間反応させる。ＰＢＳ−Ｔで３回洗浄後、ＰＢＳ−Ｔ
中で、西洋ワサビ過酸化酵素標識抗マウスＩｇＧヤギ抗
体（Ａｍｅｒｓｈａｍｐｈａｒｍａｃｉａ ｂｉｏｔｅ
ｃｈ社；５０００倍希釈）と１時間反応する。ＰＢＳ−
Ｔで５回洗浄後、ＥＣＬｐｌｕｓ発色キット（Ａｍｅｒ
ｓｈａｍ ｐｈａｒｍａｃｉａ ｂｉｏｔｅｃｈ社）お
よびＥＣＬ ｆｉｌｍ（Ａｍｅｒｓｈａｍ ｐｈａｒｍ
ａｃｉａ ｂｉｏｔｅｃｈ社）を用いて該融合タンパク
質に対応する化学発光を検出する。また、該融合タンパ
ク質の精製は、上述したＣＯＳ７細胞への遺伝子導入実
験をスケールアップし、大量調製した該培養上清、また
はＲＩＰＡ緩衝液（１５０ｍＭ ＮａＣｌ，１％ Ｎｏ
ｎｉｄｅｔ Ｐ−４０（ＮＰ−４０），０．１％ＳＤ
Ｓ，０．５％ デオキシコール酸ナトリウム，４０ｍＭ
トリス塩酸（ｐＨ７．５））を用いた細胞粗抽出液より
抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体Ｍ２（シグマ社）をカラ
ムに結合したアフィニティクロマトグラフィーにて行
い、かくして得られた目的タンパク質は各種生物活性の
検定に用いる。

【００７８】実施例４ ＶＨ１０１２９０−ＦＬＡＧ融合タンパク質のＣＯＳ７
細胞での発現とその検出 以下の要領で、ＶＨ１０１２９０とＦＬＡＧエピトープ
ペプチドの融合タンパク質のＣＯＳ７細胞での発現とそ
の検出を行う。まず実施例２で得たＶＨ１０１２９０を
コードするｃＤＮＡの塩基配列に基づき、２種のプライ
マーＤＮＡを化学合成する。一つは５’−ＣＧＡＡＴＴ
ＣＣＣＡＣＣＡＴＧＧＡＡＡＡＡＧＣＡＴＴＧＡＡＡＡ
ＴＴＧＡＣＡＣＡＣ−３’（配列番号：１１）であり、
これは制限酵素ＥｃｏＲＩ認識部位を含むアンカー配列
を５’末端側に持つ＋１〜＋２８（翻訳開始部位を＋１
とする）までのセンス配列を含むオリゴＤＮＡである。
もう一つは５’−ＧＴＡＣＡＧＴＣＧＡＣＡＡＡＣＡＧ
ＣＡＴＡＧＴＴＡＡＣＣＣＡＡＡＧＴＣＡＧＴＡ−３’
（配列番号：１２）であり、これは制限酵素ＳａｌＩ認
識部位を含むアンカー配列の３’側に＋４４７〜＋４７
４までのアンチセンス配列がつながった配列を有するオ
リゴＤＮＡである。実施例２で得たプラスミドｐＴＢＮ
５を鋳型としてこれら２種のプライマーＤＮＡおよびＴ
ａｋａｒａＬＡ Ｔａｑ（宝酒造）を用い、サーマルサ
イクラーＧｅｎｅＡｍｐ^TM ＰＣＲｓｙｓｔｅｍ ９７０
０（パーキンエルマー社）にて、最初９８℃で３０秒間
置いた後、９８℃で１０秒、５５℃で２０秒、７２℃で
２分を１反応サイクルとして２５サイクル増幅反応を繰
返し、最後に７２℃で５分間伸長反応を行う。得られた
ＤＮＡ断片を精製後、制限酵素ＥｃｏＲＩとＳａｌＩで
末端消化の後再精製し、動物細胞用発現ベクターｐＣＡ
Ｎ６１８ＦＬＡＧのＥｃｏＲＩ、ＳａｌＩ部位へ挿入、
連結する。ｐＣＡＮ６１８ＦＬＡＧは、プラスミドベク
ターｐＣＡＮ６１８に由来し、選択マーカーとしてのネ
オマイシン耐性遺伝子を持つと共に、目的タンパク質を
コードするＤＮＡ断片をそのクローニング部位であるＥ
ｃｏＲＩ 、ＳａｌＩ部位に挿入することでサイトメガ
ロウイルスの極初期遺伝子エンハンサーとその下流のβ
−アクチンプロモーター制御下で該タンパク質を発現さ
せることができるのみならず、ＳａｌＩ部位直後に存在
する８アミノ酸のＦＬＡＧエピトープ配列（Ａｓｐ−Ｔ
ｙｒ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ａｓｐ−Ｌｙ
ｓ）をコードする塩基配列と終止コドンに読み取り枠を
合わせることで該目的タンパク質をＦＬＡＧ融合タンパ
ク質として発現させることも可能である。上述のＰＣＲ
クローニングＤＮＡ断片のｐＣＡＮ６１８ＦＬＡＧへの
挿入もＶＨ１０１２９０全長とＦＬＡＧエピトープの融
合タンパク質（間にＶａｌを１残基挿む）を発現する目
的で行い、その結果、発現ベクタープラスミドｐＶＨ２
９０−Ｆを得る。次にＣＯＳ７細胞１．２×１０⁵細胞
を６穴プレートを用いて、１０％牛胎児血清（ＦＢＳ）
を含むダルベッコ変法最小培地（ＤＭＥＭ）で２４時間
培養し、この細胞に上記の発現プラスミドｐＶＨ２９０
−Ｆ（１ウェルあたり０．４μｇ）をリポフェクトアミ
ン（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）を用いて導入する。導入２４
時間後上記の新しい培地に交換し、さらに５時間後にＦ
ＢＳ不含有Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）に
換えて３６時間培養後、その培養上清と細胞抽出液を得
る。細胞抽出液は細胞を生理食塩を含むリン酸緩衝液
（ＰＢＳ）で２回洗浄後、トリスＳＤＳサンプル緩衝液
で溶解抽出し、一方、培養上清は限外濾過（分子量 ３
０００カット）で適宜濃縮後、等容のトリスＳＤＳサン
プル緩衝液と混合する。これらのサンプルを熱処理後１
５％−２５％ ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルで電気
泳動し、さらにそのゲルからＰＶＤＦ膜上（Ａｍｅｒｓ
ｈａｍｐｈａｒｍａｃｉａ ｂｉｏｔｅｃｈ社）に転写
する。次に該ＰＶＤＦ膜をブロックエース（雪印乳業）
で１時間ブロッキングし、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２
０を含むＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔ）中で抗ＦＬＡＧモノクロ
ーナル抗体（１０μｇ／ｍｌ；Ｋｏｄａｋ社）と２時間
反応させる。ＰＢＳ−Ｔで３回洗浄後、ＰＢＳ−Ｔ中
で、西洋ワサビ過酸化酵素標識抗マウスＩｇＧヤギ抗体
（Ａｍｅｒｓｈａｍｐｈａｒｍａｃｉａ ｂｉｏｔｅｃ
ｈ社；５０００倍希釈）と１時間反応する。ＰＢＳ−Ｔ
で５回洗浄後、ＥＣＬｐｌｕｓ発色キット（Ａｍｅｒｓ
ｈａｍ ｐｈａｒｍａｃｉａ ｂｉｏｔｅｃｈ社）およ
びＥＣＬ ｆｉｌｍ（Ａｍｅｒｓｈａｍ ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ ｂｉｏｔｅｃｈ社）を用いて該融合タンパク質
に対応する化学発光を検出する。また、該融合タンパク
質の精製は上述したＣＯＳ７細胞への遺伝子導入実験を
スケールアップし、大量調製した該培養上清、またはＲ
ＩＰＡ緩衝液（１５０ｍＭ ＮａＣｌ， １％ Ｎｏｎ
ｉｄｅｔ Ｐ−４０（ＮＰ−４０），０．１％ ＳＤ
Ｓ，０．５％ デオキシコール酸ナトリウム，４０ｍＭ
トリス塩酸（ｐＨ７．５））を用いた細胞粗抽出液よ
り抗ＦＬＡＧモノクローナル抗体Ｍ２（シグマ社）をカ
ラムに結合したアフィニティクロマトグラフィーにて行
い、かくして得られた目的タンパク質は各種生物活性の
検定に用いる。

【００７９】

【発明の効果】本発明のタンパク質およびそれをコード
するＤＮＡは、例えば、リウマチ、糖尿病、微生物感染
症、ＨＩＶ感染（エイズ）、慢性Ｂ型肝炎、炎症性疾患
（例、慢性炎症、急性炎症）、皮膚炎、関節炎（例、リ
ウマチ様関節炎、慢性関節炎）、自己免疫疾患、移植片
対宿主病、喘息、敗血症、骨疾患、癌（例、骨髄性白血
病など）などの疾病の治療・予防剤として使用すること
ができる。また、本発明のタンパク質は、本発明のタン
パク質の活性を促進もしくは阻害する化合物またはその
塩のスクリーニングのための試薬として有用である。さ
らに、本発明のタンパク質に対する抗体は、本発明のタ
ンパク質を特異的に認識することができるので、被検液
中の本発明のタンパク質の定量などに使用することがで
きる。

【００８０】

【配列表】 <110> Takeda Chemical Industries, Ltd. <120> Novel Protein and its Production <130> B00362 <150> JP 11-369975 <151> 1999-12-27 <150> JP 2000-045125 <151> 2000-02-17 <160> 12 <210> 1 <211> 169 <212> PRT <213> Human <400> 1 Met Gln Ala Asp Pro Gly Gly Ser Ser His Ser Gly Lys Ile Ile Cys 1 5 10 15 Met Gly Gln Phe Pro Ile Phe Glu Ser Phe Val Arg Ile Lys Tyr Ala 20 25 30 Asp Gln Lys Ala Leu Tyr Thr Arg Asp Gly Gln Leu Leu Val Gly Asp 35 40 45 Pro Val Ala Asp Asn Cys Cys Ala Glu Lys Ile Cys Ile Leu Pro Asn 50 55 60 Arg Gly Leu Ala Arg Thr Lys Val Pro Ile Phe Leu Gly Ile Gln Gly 65 70 75 80 Gly Ser Arg Cys Leu Ala Cys Val Glu Thr Glu Glu Gly Pro Ser Leu 85 90 95 Gln Leu Glu Asp Val Asn Ile Glu Glu Leu Tyr Lys Gly Gly Glu Glu 100 105 110 Ala Thr Arg Phe Thr Phe Phe Gln Ser Ser Ser Gly Ser Ala Phe Arg 115 120 125 Leu Glu Ala Ala Ala Trp Pro Gly Trp Phe Leu Cys Gly Pro Ala Glu 130 135 140 Pro Gln Gln Pro Val Gln Leu Thr Lys Glu Ser Glu Pro Ser Ala Arg 145 150 155 160 Thr Lys Phe Tyr Phe Glu Gln Ser Trp 165 169 <210> 2 <211> 507 <212> DNA <213> Human <400> 2 ATGCAGGCAG ATCCTGGAGG GAGTAGTCAC TCGGGGAAAA TCATCTGCAT GGGTCAATTT 60 CCCATTTTTG AAAGTTTCGT AAGAATTAAA TATGCAGACC AGAAGGCTCT ATACACAAGA 120 GATGGCCAGC TGCTGGTGGG AGATCCTGTT GCAGACAACT GCTGTGCAGA GAAGATCTGC 180 ATACTTCCTA ACAGAGGCTT GGCCCGCACC AAGGTCCCCA TTTTCCTGGG GATCCAGGGA 240 GGGAGCCGCT GCCTGGCATG TGTGGAGACA GAAGAGGGGC CTTCCCTACA GCTGGAGGAT 300 GTGAACATTG AGGAACTGTA CAAAGGTGGT GAAGAGGCCA CACGCTTCAC CTTCTTCCAG 360 AGCAGCTCAG GCTCCGCCTT CAGGCTTGAG GCTGCTGCCT GGCCTGGCTG GTTCCTGTGT 420 GGCCCGGCAG AGCCCCAGCA GCCAGTACAG CTCACCAAGG AGAGTGAGCC CTCAGCCCGT 480 ACCAAGTTTT ACTTTGAACA GAGCTGG 507 <210> 3 <211> 158 <212> PRT <213> Human <400> 3 Met Glu Lys Ala Leu Lys Ile Asp Thr Pro Gln Gln Gly Ser Ile Gln 1 5 10 15 Asp Ile Asn His Arg Val Trp Val Leu Gln Asp Gln Thr Leu Ile Ala 20 25 30 Val Pro Arg Lys Asp Arg Met Ser Pro Val Thr Ile Ala Leu Ile Ser 35 40 45 Cys Arg His Val Glu Thr Leu Glu Lys Asp Arg Gly Asn Pro Ile Tyr 50 55 60 Leu Gly Leu Asn Gly Leu Asn Leu Cys Leu Met Cys Ala Lys Val Gly 65 70 75 80 Asp Gln Pro Thr Leu Gln Leu Lys Glu Lys Asp Ile Met Asp Leu Tyr 85 90 95 Asn Gln Pro Glu Pro Val Lys Ser Phe Leu Phe Tyr His Ser Gln Ser 100 105 110 Gly Arg Asn Ser Thr Phe Glu Ser Val Ala Phe Pro Gly Trp Phe Ile 115 120 125 Ala Val Ser Ser Glu Gly Gly Cys Pro Leu Ile Leu Thr Gln Glu Leu 130 135 140 Gly Lys Ala Asn Thr Thr Asp Phe Gly Leu Thr Met Leu Phe 145 150 155 158 <210> 4 <211> 474 <212> DNA <213> Human <400> 4 ATGGAAAAAG CATTGAAAAT TGACACACCT CAGCAGGGGA GCATTCAGGA TATCAATCAT 60 CGGGTGTGGG TTCTTCAGGA CCAGACGCTC ATAGCAGTCC CGAGGAAGGA CCGTATGTCT 120 CCAGTCACTA TTGCCTTAAT CTCATGCCGA CATGTGGAGA CCCTTGAGAA AGACAGAGGG 180 AACCCCATCT ACCTGGGCCT GAATGGACTC AATCTCTGCC TGATGTGTGC TAAAGTCGGG 240 GACCAGCCCA CACTGCAGCT GAAGGAAAAG GATATAATGG ATTTGTACAA CCAACCCGAG 300 CCTGTGAAGT CCTTTCTCTT CTACCACAGC CAGAGTGGCA GGAACTCCAC CTTCGAGTCT 360 GTGGCTTTCC CTGGCTGGTT CATCGCTGTC AGCTCTGAAG GAGGCTGTCC TCTCATCCTT 420 ACCCAAGAAC TGGGGAAAGC CAACACTACT GACTTTGGGT TAACTATGCT GTTT 474 <210> 5 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 5 ATGCAGGCAG ATCCTGGAGG GAGTAGTCA 29 <210> 6 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 6 CTACCAGCTC TGTTCAAAGT AAAACTTGGT AC 32 <210> 7 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 7 ATGGAAAAAG CATTGAAAAT TGACACACCT CA 32 <210> 8 <211> 35 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 8 TTAAAACAGC ATAGTTAACC CAAAGTCAGT AGTGT 35 <210> 9 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 9 CGAATTCCCA CCATGCAGGC AGATCCTGGA GGGAGTAGTC 40 <210> 10 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 10 GTACAGTCGA CCCAGCTCTG TTCAAAGTAA AACTTGGTA 39 <210> 11 <211> 40 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 11 CGAATTCCCA CCATGGAAAA AGCATTGAAA ATTGACACAC 40 <210> 12 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 12 GTACAGTCGA CAAACAGCAT AGTTAACCCA AAGTCAGTA 39

【００８１】

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明のＶＨ１０１２８７タンパク質をコード
するＤＮＡの塩基配列および該塩基配列から推定される
アミノ酸配列を示す。

【図２】本発明のＶＨ１０１２９０タンパク質をコード
するＤＮＡの塩基配列および該塩基配列から推定される
アミノ酸配列を示す。

【図３】ＶＨ１０１２８７タンパク質、ＶＨ１０１２９
０タンパク質およびヒトＩＬ−１ｒａタンパク質との相
同性を示す。図中、IL-1ra.pro は、ヒトＩＬ−１ｒａ
タンパク質を、Vh101287.pro は、ＶＨ１０１２８７タ
ンパク質を、Vh101290.pro は、ＶＨ１０１２９０タン
パク質をそれぞれ示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 11/06 Ａ６１Ｐ 19/02 ４Ｈ０４５ 17/00 19/08 19/02 29/00 19/08 31/00 29/00 31/04 31/00 31/18 31/04 35/00 31/18 37/02 35/00 Ｃ０７Ｋ 14/47 37/02 16/18 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｎ 1/15 16/18 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 1/21 21/08 5/10 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｐ 21/02 33/50 Ｚ 21/08 33/53 Ｄ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/50 Ａ６１Ｋ 37/02 33/53 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ Ｆターム(参考） 2G045 AA24 AA34 AA35 AA40 BB20 CB01 DA12 DA13 DA14 DA36 DA77 FB02 FB03 4B024 AA01 AA11 BA26 BA44 CA04 DA01 DA02 DA05 DA11 EA04 GA11 4B064 AG04 AG27 CA19 CC24 DA03 DA13 4B065 AA01X AA57X AA87X AA93Y AB01 AC14 BA02 CA24 CA25 CA44 CA46 4C084 AA02 AA06 AA07 AA17 BA01 BA08 BA22 BA23 BA24 CA25 CA53 CA56 CA59 DA59 NA14 ZA592 ZA752 ZA892 ZA962 ZB072 ZB112 ZB152 ZB262 ZB322 ZB332 ZB352 ZC352 ZC422 ZC552 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 CA40 DA02 DA76 EA20 EA50 FA72 FA74

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】配列番号：１で表わされるアミノ酸配列と
   同一または実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン
   パク質またはその塩。
2. 【請求項２】請求項１記載のタンパク質の部分ペプチド
   またはその塩。
3. 【請求項３】請求項１記載のタンパク質または請求項２
   記載の部分ペプチドをコードする塩基配列を有するＤＮ
   Ａを含有するＤＮＡ。
4. 【請求項４】配列番号：２で表される塩基配列を有する
   請求項３記載のＤＮＡ。
5. 【請求項５】配列番号：３で表わされるアミノ酸配列と
   同一または実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン
   パク質またはその塩。
6. 【請求項６】請求項５記載のタンパク質の部分ペプチド
   またはその塩。
7. 【請求項７】請求項５記載のタンパク質または請求項６
   記載の部分ペプチドをコードする塩基配列を有するＤＮ
   Ａを含有するＤＮＡ。
8. 【請求項８】配列番号：４で表される塩基配列を有する
   請求項７記載のＤＮＡ。
9. 【請求項９】請求項１もしくは請求項５記載のタンパク
   質または請求項２もしくは請求項６記載の部分ペプチド
   をコードするＤＮＡを含有する組換えベクターで形質転
   換された形質転換体を培養し、該タンパク質または該部
   分ペプチドを生成せしめることを特徴とする、請求項１
   もしくは請求項５記載のタンパク質または請求項２もし
   くは請求項６記載の部分ペプチドまたはその塩の製造
   法。
10. 【請求項１０】請求項１もしくは請求項５記載のタンパ
    ク質または請求項２もしくは請求項６記載の部分ペプチ
    ドまたはその塩に対する抗体。
11. 【請求項１１】請求項１もしくは請求項５記載のタンパ
    ク質または請求項２もしくは請求項６記載の部分ペプチ
    ドまたはその塩を用いることを特徴とする、請求項１も
    しくは請求項５記載のタンパク質または請求項２もしく
    は請求項６記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促
    進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニング
    方法。
12. 【請求項１２】請求項１もしくは請求項５記載のタンパ
    ク質または請求項２もしくは請求項６記載の部分ペプチ
    ドまたはその塩を含有してなる、請求項１もしくは請求
    項５記載のタンパク質または請求項２もしくは請求項６
    記載の部分ペプチドまたはその塩の活性を促進または阻
    害する化合物またはその塩のスクリーニング用キット。
13. 【請求項１３】請求項１１記載のスクリーニング方法ま
    たは請求項１２記載のスクリーニング用キットを用いて
    得られうる、請求項１もしくは請求項５記載のタンパク
    質または請求項２もしくは請求項６記載の部分ペプチド
    またはその塩の活性を促進または阻害する化合物または
    その塩。
14. 【請求項１４】請求項１１記載のスクリーニング方法ま
    たは請求項１２記載のスクリーニング用キットを用いて
    得られうる、請求項１もしくは請求項５記載のタンパク
    質または請求項２もしくは請求項６記載の部分ペプチド
    またはその塩の活性を促進または阻害する化合物または
    その塩を含有してなる医薬。
15. 【請求項１５】請求項１０記載の抗体を含有してなる診
    断剤。
16. 【請求項１６】請求項１もしくは請求項５記載のタンパ
    ク質または請求項２もしくは請求項６記載の部分ペプチ
    ドまたはその塩を含有してなる医薬。
17. 【請求項１７】リウマチ、糖尿病、微生物感染症、ＨＩ
    Ｖ感染、慢性Ｂ型肝炎、炎症性疾患、皮膚炎、関節炎、
    自己免疫疾患、移植片対宿主病、喘息、敗血症、骨疾患
    または癌の治療・予防剤である請求項１６記載の医薬。
18. 【請求項１８】請求項１もしくは請求項５記載のタンパ
    ク質または請求項２もしくは請求項６記載の部分ペプチ
    ドまたはその塩を投与することを特徴とするリウマチ、
    糖尿病、微生物感染症、ＨＩＶ感染、慢性Ｂ型肝炎、炎
    症性疾患、皮膚炎、関節炎、自己免疫疾患、移植片対宿
    主病、喘息、敗血症、骨疾患または癌の治療・予防方
    法。