JP2002365287A - 糖尿病治療薬のスクリーニング方法 - Google Patents
糖尿病治療薬のスクリーニング方法Info
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- JP2002365287A JP2002365287A JP2001362534A JP2001362534A JP2002365287A JP 2002365287 A JP2002365287 A JP 2002365287A JP 2001362534 A JP2001362534 A JP 2001362534A JP 2001362534 A JP2001362534 A JP 2001362534A JP 2002365287 A JP2002365287 A JP 2002365287A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 糖尿病治療薬のスクリーニング方法などの提
供 【解決手段】 ＩＲＡＰ結合タンパク質への結合活性を
有するタンパク質（ＰＦＮＩＩＬなど）を用いることを
特徴とする糖尿病治療薬のスクリーニング方法など。 【効果】 ＩＲＡＰ結合タンパク質への結合活性を有す
るタンパク質（ＰＦＮＩＩＬなど）は、本発明のタンパ
ク質とＩＲＡＰ結合タンパク質（ＭＤ３６など）との結
合を阻害する化合物のスクリーニングのための試薬とし
て有用である。ＩＲＡＰ結合タンパク質への結合活性を
有するタンパク質（ＰＦＮＩＩＬなど）は、本発明のタ
ンパク質とＩＲＡＰ結合タンパク質（ＭＤ３６など）と
の結合を阻害する化合物は、例えば高血糖症、糖尿病
（特にＩＩ型糖尿病など）などの疾病の予防・治療剤と
して有用である。
供 【解決手段】 ＩＲＡＰ結合タンパク質への結合活性を
有するタンパク質（ＰＦＮＩＩＬなど）を用いることを
特徴とする糖尿病治療薬のスクリーニング方法など。 【効果】 ＩＲＡＰ結合タンパク質への結合活性を有す
るタンパク質（ＰＦＮＩＩＬなど）は、本発明のタンパ
ク質とＩＲＡＰ結合タンパク質（ＭＤ３６など）との結
合を阻害する化合物のスクリーニングのための試薬とし
て有用である。ＩＲＡＰ結合タンパク質への結合活性を
有するタンパク質（ＰＦＮＩＩＬなど）は、本発明のタ
ンパク質とＩＲＡＰ結合タンパク質（ＭＤ３６など）と
の結合を阻害する化合物は、例えば高血糖症、糖尿病
（特にＩＩ型糖尿病など）などの疾病の予防・治療剤と
して有用である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、インスリン・レス
ポンシブ・アミノペプチダーゼ（ＩＲＡＰ）もしくはグ
ルコーストランスポーター４に結合するタンパク質であ
る配列番号：１０で表されるアミノ酸配列と同一もしく
は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質も
しくはその塩に対して、結合活性を有する配列番号：３
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩など
を用いた、高血糖症または糖尿病の予防・治療剤のスク
リーニング方法、該スクリーニング方法で得られうる化
合物などに関する。
ポンシブ・アミノペプチダーゼ（ＩＲＡＰ）もしくはグ
ルコーストランスポーター４に結合するタンパク質であ
る配列番号：１０で表されるアミノ酸配列と同一もしく
は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質も
しくはその塩に対して、結合活性を有する配列番号：３
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩など
を用いた、高血糖症または糖尿病の予防・治療剤のスク
リーニング方法、該スクリーニング方法で得られうる化
合物などに関する。
【０００２】
【従来の技術】血糖値はインスリンの作用により、骨格
筋ならびに脂肪組織におけるグルコースの取り込みによ
り調節される。糖尿病ではこの作用の低下が原因で高血
糖が持続することにより生じる。グルコースが細胞へ取
り込まれるのはグルコーストランスポーター（糖輸送担
体）と呼ばれる膜タンパク質の介在が必要である。グル
コーストランスポーターには現在ＧＬＵＴ１−９の９種
類のものが知られているが(Bell et al., J. Biol. Che
m., 268, 3352-3356, 1993; Olson & Pessin, Annu. Re
v. Nutr. 16, 235-256, 1996; Ibberson et al., J. Bi
ol. Chem., 275,4607-4612, 2000; Doege et al., J. B
iol. Chem., 275, 16275-16280, Phay, et al., Genomi
cs, 66, 217-220, 2000)、これらのうちインスリンによ
る糖輸送活性に強く関わるのは、骨格筋、脂肪組織での
発現が主に見られるＧＬＵＴ４である(Fukumoto et a
l., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 85, 5434-5438, 19
88;Birnbaum et al., Cell, 57, 305-315, 1989)。通
常、ＧＬＵＴ４は細胞内ではＧＬＵＴ４小胞体と呼ばれ
る細胞内小胞に存在しているが、血糖上昇時は、インス
リンの作用によりこれが細胞膜へ移行（トランスロケー
ション）されることにより糖取り込みを促進すると考え
られている (Bell et al., Diabetes Care, 13, 198-20
8, 1990; Czech et al., Trends. Biochem. Sci., 17,
197-201, 1992)。このＧＬＵＴ４小胞体移行の分子メカ
ニズムを明らかにするためＧＬＵＴ４それ自身のみなら
ずＧＬＵＴ４小胞体を構成する他のタンパク質を同定す
ることが行われてきた。現在のところＧＬＵＴ４小胞体
を構成する分子として、ＶＡＭＰｓ（vesicle-associat
ed membrane proteins; Cain et al., J. Biol. Chem.,
267, 11681-11684, 1992）、ＳＣＡＭＰｓ（secretory
component-associated membrane proteins; Thoidis e
t al, J. Biol. Chem., 268, 11691-11696, 1993;Lauri
e et al., J. Biol. Chem, 268, 19110-19117, 199
3）、phosphatidylinositol 4-kinase（Del Vecchio &
Pilch, J. Biol. Chem, 266, 13278-13283, 1991）、低
分子量ＧＴＰ結合タンパク質Ｒａｂ４（Cormont et a
l., J. Biol. Chem., 268, 19491-19497, 1993）等の他
に、ＩＲＡＰ（insulin-responsive aminopeptidase; K
andror & Pilch, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91, 80
17-8021, 1994, Kandror et al., J. Biol. Chem. 269,
30777-30780, 1994, Keller et al,J. Biol. Chem., 2
70, 23612-23618, 1995）が知られている。ＩＲＡＰは
ｇｐ１６０あるいはｖｐ１６５とも呼ばれる一回膜貫通
型の膜タンパク質で、細胞内オルガネラではＧＬＵＴ４
小胞体に局在している。タンパク質構造的には、アミノ
末端（Ｎ末端）の１０９アミノ酸が細胞質内ドメイン
で、続いて２２アミノ酸の膜貫通ドメイン、さらにカル
ボキシ末端（Ｃ末端）の７８５アミノ酸からなる細胞外
ドメインから構成される（Kandror & Pilch, Proc. Nat
l. Acad. Sci. USA, 91, 8017-8021, 1994; Keller et
al., J. Biol. Chem., 270, 23612-23618, 1995）。細
胞外ドメインは亜鉛依存性のプロテアーゼ（アミノペプ
チダーゼ）でありその酵素活性が確認されている（Kand
ror et al., J. Biol. Chem. 269, 30777-30780, 199
4）。これらのドメインのうち、Ｎ末端側ドメイン（細
胞質側ドメイン）に相当するペプチドを細胞内へ注入す
るとＧＬＵＴ４小胞体の細胞表面への移行が生じること
から、ＧＬＵＴ４小胞体を細胞内へ引き留めているため
の、ＩＲＡＰに結合するタンパク質の存在が予想されて
いる（Walters et al., J. Biol. Chem, 272, 23323-23
327, 1997）。
筋ならびに脂肪組織におけるグルコースの取り込みによ
り調節される。糖尿病ではこの作用の低下が原因で高血
糖が持続することにより生じる。グルコースが細胞へ取
り込まれるのはグルコーストランスポーター（糖輸送担
体）と呼ばれる膜タンパク質の介在が必要である。グル
コーストランスポーターには現在ＧＬＵＴ１−９の９種
類のものが知られているが(Bell et al., J. Biol. Che
m., 268, 3352-3356, 1993; Olson & Pessin, Annu. Re
v. Nutr. 16, 235-256, 1996; Ibberson et al., J. Bi
ol. Chem., 275,4607-4612, 2000; Doege et al., J. B
iol. Chem., 275, 16275-16280, Phay, et al., Genomi
cs, 66, 217-220, 2000)、これらのうちインスリンによ
る糖輸送活性に強く関わるのは、骨格筋、脂肪組織での
発現が主に見られるＧＬＵＴ４である(Fukumoto et a
l., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 85, 5434-5438, 19
88;Birnbaum et al., Cell, 57, 305-315, 1989)。通
常、ＧＬＵＴ４は細胞内ではＧＬＵＴ４小胞体と呼ばれ
る細胞内小胞に存在しているが、血糖上昇時は、インス
リンの作用によりこれが細胞膜へ移行（トランスロケー
ション）されることにより糖取り込みを促進すると考え
られている (Bell et al., Diabetes Care, 13, 198-20
8, 1990; Czech et al., Trends. Biochem. Sci., 17,
197-201, 1992)。このＧＬＵＴ４小胞体移行の分子メカ
ニズムを明らかにするためＧＬＵＴ４それ自身のみなら
ずＧＬＵＴ４小胞体を構成する他のタンパク質を同定す
ることが行われてきた。現在のところＧＬＵＴ４小胞体
を構成する分子として、ＶＡＭＰｓ（vesicle-associat
ed membrane proteins; Cain et al., J. Biol. Chem.,
267, 11681-11684, 1992）、ＳＣＡＭＰｓ（secretory
component-associated membrane proteins; Thoidis e
t al, J. Biol. Chem., 268, 11691-11696, 1993;Lauri
e et al., J. Biol. Chem, 268, 19110-19117, 199
3）、phosphatidylinositol 4-kinase（Del Vecchio &
Pilch, J. Biol. Chem, 266, 13278-13283, 1991）、低
分子量ＧＴＰ結合タンパク質Ｒａｂ４（Cormont et a
l., J. Biol. Chem., 268, 19491-19497, 1993）等の他
に、ＩＲＡＰ（insulin-responsive aminopeptidase; K
andror & Pilch, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91, 80
17-8021, 1994, Kandror et al., J. Biol. Chem. 269,
30777-30780, 1994, Keller et al,J. Biol. Chem., 2
70, 23612-23618, 1995）が知られている。ＩＲＡＰは
ｇｐ１６０あるいはｖｐ１６５とも呼ばれる一回膜貫通
型の膜タンパク質で、細胞内オルガネラではＧＬＵＴ４
小胞体に局在している。タンパク質構造的には、アミノ
末端（Ｎ末端）の１０９アミノ酸が細胞質内ドメイン
で、続いて２２アミノ酸の膜貫通ドメイン、さらにカル
ボキシ末端（Ｃ末端）の７８５アミノ酸からなる細胞外
ドメインから構成される（Kandror & Pilch, Proc. Nat
l. Acad. Sci. USA, 91, 8017-8021, 1994; Keller et
al., J. Biol. Chem., 270, 23612-23618, 1995）。細
胞外ドメインは亜鉛依存性のプロテアーゼ（アミノペプ
チダーゼ）でありその酵素活性が確認されている（Kand
ror et al., J. Biol. Chem. 269, 30777-30780, 199
4）。これらのドメインのうち、Ｎ末端側ドメイン（細
胞質側ドメイン）に相当するペプチドを細胞内へ注入す
るとＧＬＵＴ４小胞体の細胞表面への移行が生じること
から、ＧＬＵＴ４小胞体を細胞内へ引き留めているため
の、ＩＲＡＰに結合するタンパク質の存在が予想されて
いる（Walters et al., J. Biol. Chem, 272, 23323-23
327, 1997）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】ＩＲＡＰ結合タンパク
質のタンパク質間相互作用を応用した血糖低下作用を有
する化合物のスクリーニング方法、該スクリーニング方
法によって得られうる化合物などについては、現在のと
ころ知られておらず、該スクリーニング方法、該スクリ
ーニング方法によって得られうる化合物（高血糖症また
は糖尿病の予防・治療薬）を提供することが課題であ
る。
質のタンパク質間相互作用を応用した血糖低下作用を有
する化合物のスクリーニング方法、該スクリーニング方
法によって得られうる化合物などについては、現在のと
ころ知られておらず、該スクリーニング方法、該スクリ
ーニング方法によって得られうる化合物（高血糖症また
は糖尿病の予防・治療薬）を提供することが課題であ
る。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、酵母two-hy
brid法（Fields & Strenglanz, Trends Genet., 10, 28
6-292, 1994; Brent &Finley, Annu. Rev. Genet., 31,
663-704, 1997）を用いて、新規ＩＲＡＰ結合タンパク
質としてＭＤ３６（特開2001-238685号、WO01/46413
号；配列番号：１０で表されるアミノ酸配列を有するタ
ンパク質）を見出している。更に、本発明者らは、 ＩＲＡＰ結合タンパク質（ＭＤ３６）が、構造的に
は、Formin familyの機能不明タンパク質であるＦＨＯ
Ｓに７８ｂｐの挿入配列があるスプライシング・バリア
ント（splicing variant）であること（特開2001-23868
5号、WO01/46413号）、 Formin familyのタンパク質は一般的にプロリン・リ
ッチなドメインを持ち、いくつかのタンパク質はアクチ
ン結合タンパク質であるプロフィリンＩ（Profilin I）
と結合すること（Evangelista et al., Science, 276,
118-122, 1997 Imamura et al., EMBO J., 16, 2745-27
55, 1997 Tanaka, Biochem. Biophys. Res. Commun., 2
67, 479-481, 2000）、 プロフィリンＩはアクチンと結合するのみならず、ア
クチンフィラメントの再構成を促すこと、ＰＩ３キナー
ゼ（PI3 kinase）の活性調節サブユニットであるｐ８５
に結合すること、フォスファチジルイノシトールリン酸
の一種であるＰＩＰ2に結合すること、そのホモログと
してプロフィリンＩＩ（Profilin II）が存在すること
が知られていること（Schluter et al., Biochim. Biop
hys. Acta, 1359, 97-109, 1997）、 一方では、ＧＬＵＴ４の形質膜への移行の際にはアク
チンフィラメントが形質膜の近傍に集積し、ＧＬＵＴ
４、ＩＲＡＰならびにＰＩ３キナーゼとコンプレックス
を形成すること（Khayat et al., J. Cell Sci., 113,
279-290, 2000）に着目し、ＭＤ３６とプロフィリン
Ｉ、プロフィリンＩＩの結合は生理的にＧＬＵＴ４が形
質膜へ移行するのに必須のタンパク質-タンパク質相互
作用のひとつであると考えた。さらに、本発明者らは、
例えば糖尿病におけるインスリン耐性のように、何らか
の形でインスリンのシグナルがＧＬＵＴ４の移行につな
がらないような病態を呈している場合には、細胞内のＭ
Ｄ３６とプロフィリンＩ、プロフィリンＩＩの結合を強
制的に切断する物質すなわちＭＤ３６／プロフィリン結
合阻害剤が糖尿病治療薬につながると考え、骨格筋タイ
プのＭＤ３６とプロフィリンＩ、プロフィリンＩＩの結
合の検討実験を行った。この時に、本発明者らは、プロ
フィリンＩＩにはさらにそのスプライシング・バリアン
トが存在することを見いだし、そのひとつをプロフィリ
ンＩＩＬ（配列番号：３で表されるアミノ酸配列を有す
るタンパク質）と名付けた。プロフィリンＩＩＬは全長
１４０アミノ酸から構成されるタンパク質でこのアミノ
酸残基数はプロフィリンＩ（配列番号：６で表されるア
ミノ酸配列を有するタンパク質）ならびにプロフィリン
ＩＩ（配列番号：８で表されるアミノ酸配列を有するタ
ンパク質）と同じである。しかも、プロフィリンＩＩＬ
はプロフィリンＩＩとそのアミノ末端から１０８番目ま
でのアミノ酸まで完全に一致する。しかしながら、各組
織における発現分布を比較するとプロフィリンＩＩが比
較的普遍的に分布するのに対し、プロフィリンＩＩＬは
脳、骨格筋、膵臓、胎盤、心臓に特異的に発現するタン
パク質である。さらに酵母two-hybridシステムを応用し
たタンパク質結合試験ではＭＤ３６がプロフィリン・フ
ァミリー（Profilin family）のうちプロフィリンＩＩ
Ｌに特異的に結合することを見いだした。本発明者ら
は、更に上述のＭＤ３６とプロフィリン・ファミリーの
組織特異性ならびに分子特異性を応用すると、ＭＤ３６
とプロフィリンＩＩＬとの結合阻害剤が糖尿病治療薬に
つながるものと考え、本発明を完成した。
題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、酵母two-hy
brid法（Fields & Strenglanz, Trends Genet., 10, 28
6-292, 1994; Brent &Finley, Annu. Rev. Genet., 31,
663-704, 1997）を用いて、新規ＩＲＡＰ結合タンパク
質としてＭＤ３６（特開2001-238685号、WO01/46413
号；配列番号：１０で表されるアミノ酸配列を有するタ
ンパク質）を見出している。更に、本発明者らは、 ＩＲＡＰ結合タンパク質（ＭＤ３６）が、構造的に
は、Formin familyの機能不明タンパク質であるＦＨＯ
Ｓに７８ｂｐの挿入配列があるスプライシング・バリア
ント（splicing variant）であること（特開2001-23868
5号、WO01/46413号）、 Formin familyのタンパク質は一般的にプロリン・リ
ッチなドメインを持ち、いくつかのタンパク質はアクチ
ン結合タンパク質であるプロフィリンＩ（Profilin I）
と結合すること（Evangelista et al., Science, 276,
118-122, 1997 Imamura et al., EMBO J., 16, 2745-27
55, 1997 Tanaka, Biochem. Biophys. Res. Commun., 2
67, 479-481, 2000）、 プロフィリンＩはアクチンと結合するのみならず、ア
クチンフィラメントの再構成を促すこと、ＰＩ３キナー
ゼ（PI3 kinase）の活性調節サブユニットであるｐ８５
に結合すること、フォスファチジルイノシトールリン酸
の一種であるＰＩＰ2に結合すること、そのホモログと
してプロフィリンＩＩ（Profilin II）が存在すること
が知られていること（Schluter et al., Biochim. Biop
hys. Acta, 1359, 97-109, 1997）、 一方では、ＧＬＵＴ４の形質膜への移行の際にはアク
チンフィラメントが形質膜の近傍に集積し、ＧＬＵＴ
４、ＩＲＡＰならびにＰＩ３キナーゼとコンプレックス
を形成すること（Khayat et al., J. Cell Sci., 113,
279-290, 2000）に着目し、ＭＤ３６とプロフィリン
Ｉ、プロフィリンＩＩの結合は生理的にＧＬＵＴ４が形
質膜へ移行するのに必須のタンパク質-タンパク質相互
作用のひとつであると考えた。さらに、本発明者らは、
例えば糖尿病におけるインスリン耐性のように、何らか
の形でインスリンのシグナルがＧＬＵＴ４の移行につな
がらないような病態を呈している場合には、細胞内のＭ
Ｄ３６とプロフィリンＩ、プロフィリンＩＩの結合を強
制的に切断する物質すなわちＭＤ３６／プロフィリン結
合阻害剤が糖尿病治療薬につながると考え、骨格筋タイ
プのＭＤ３６とプロフィリンＩ、プロフィリンＩＩの結
合の検討実験を行った。この時に、本発明者らは、プロ
フィリンＩＩにはさらにそのスプライシング・バリアン
トが存在することを見いだし、そのひとつをプロフィリ
ンＩＩＬ（配列番号：３で表されるアミノ酸配列を有す
るタンパク質）と名付けた。プロフィリンＩＩＬは全長
１４０アミノ酸から構成されるタンパク質でこのアミノ
酸残基数はプロフィリンＩ（配列番号：６で表されるア
ミノ酸配列を有するタンパク質）ならびにプロフィリン
ＩＩ（配列番号：８で表されるアミノ酸配列を有するタ
ンパク質）と同じである。しかも、プロフィリンＩＩＬ
はプロフィリンＩＩとそのアミノ末端から１０８番目ま
でのアミノ酸まで完全に一致する。しかしながら、各組
織における発現分布を比較するとプロフィリンＩＩが比
較的普遍的に分布するのに対し、プロフィリンＩＩＬは
脳、骨格筋、膵臓、胎盤、心臓に特異的に発現するタン
パク質である。さらに酵母two-hybridシステムを応用し
たタンパク質結合試験ではＭＤ３６がプロフィリン・フ
ァミリー（Profilin family）のうちプロフィリンＩＩ
Ｌに特異的に結合することを見いだした。本発明者ら
は、更に上述のＭＤ３６とプロフィリン・ファミリーの
組織特異性ならびに分子特異性を応用すると、ＭＤ３６
とプロフィリンＩＩＬとの結合阻害剤が糖尿病治療薬に
つながるものと考え、本発明を完成した。
【０００５】すなわち、本発明は、（１）配列番号：３
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、ま
たは配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしく
は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の
部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステル
またはその塩を用いることを特徴とする、配列番号：
３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一
のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、
または配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もし
くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質
の部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステ
ルまたはその塩と配列番号：１０で表されるアミノ酸
配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有
するタンパク質もしくはその塩、または配列番号：１０
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドもし
くはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩との
結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方
法、（２）配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一
もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパ
ク質の部分ペプチドが、配列番号：２１で表されるアミ
ノ酸配列を含有するペプチドである上記（１）記載のス
クリーニング方法、（３）配列番号：３で表されるアミ
ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を
含有するタンパク質または配列番号：３で表されるアミ
ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を
含有するタンパク質の部分ペプチドを産生する能力を有
する細胞を用いることを特徴とする、配列番号：３で
表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のア
ミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、また
は配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは
実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部
分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルま
たはその塩と配列番号：１０で表されるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質もしくはその塩、または配列番号：１０で表
されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ
ノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドもしくは
そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩との結合
を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（４）配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もし
くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質
の部分ペプチドが、配列番号：２１で表されるアミノ酸
配列を含有するペプチドである上記（３）記載のスクリ
ーニング方法、（５）高血糖症、糖尿病または低血糖症
の予防・治療用化合物を探索するための上記（１）から
（４）のいずれかに記載のスクリーニング方法、（６）
配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実
質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしく
はその塩、または配列番号：３で表されるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミドもしくは
そのエステルまたはその塩を含有する、配列番号：３
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、ま
たは配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしく
は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の
部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステル
またはその塩と配列番号：１０で表されるアミノ酸配
列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有す
るタンパク質もしくはその塩、または配列番号：１０で
表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のア
ミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドもしく
はそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩との結
合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キ
ット、（７）配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同
一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン
パク質の部分ペプチドが、配列番号：２１で表されるア
ミノ酸配列を含有するペプチドである上記（６）記載の
スクリーニング用キット、（８）配列番号：３で表され
るアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸
配列を含有するタンパク質または配列番号：３で表され
るアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸
配列を含有するタンパク質の部分ペプチドを産生する能
力を有する細胞を含有する、配列番号：３で表される
アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配
列を含有するタンパク質もしくはその塩、または配列番
号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチ
ドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその
塩と配列番号：１０で表されるアミノ酸配列と同一も
しくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク
質もしくはその塩、または配列番号：１０で表されるア
ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列
を含有するタンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミ
ドもしくはそのエステルまたはその塩との結合を阻害す
る化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（９）配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もし
くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質
の部分ペプチドが、配列番号：２１で表されるアミノ酸
配列を含有するペプチドである上記（８）記載のスクリ
ーニング用キット、（１０）上記（１）ないし（４）記
載のスクリーニング方法または上記（６）ないし（９）
記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、
配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実
質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしく
はその塩、または配列番号：３で表されるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミドもしくは
そのエステルまたはその塩と配列番号：１０で表され
るアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸
配列を含有するタンパク質もしくはその塩、または配列
番号：１０で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質
的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペ
プチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたは
その塩との結合を阻害する化合物またはその塩、（１
１）配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もし
くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質
もしくはその塩、または配列番号：３で表されるアミノ
酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含
有するタンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミドも
しくはそのエステルまたはその塩と配列番号：１０で
表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のア
ミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、また
は配列番号：１０で表されるアミノ酸配列と同一もしく
は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の
部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステル
またはその塩との結合を阻害する化合物またはその塩、
（１２）上記（１０）または上記（１１）記載の化合物
またはその塩を含有してなる医薬、（１３）上記（１
０）または上記（１１）記載の化合物またはその塩を含
有してなる高血糖症または糖尿病の予防・治療剤、（１
４）配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もし
くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質
もしくはその塩、または配列番号：３で表されるアミノ
酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含
有するタンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミドも
しくはそのエステルまたはその塩、または配列番号：
３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一
のアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードするＤＮ
Ａまたは配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一も
しくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク
質の部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる医
薬、（１５）低血糖症の予防・治療剤である上記（１
４）記載の医薬、（１６）配列番号：３で表されるア
ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列
を含有するタンパク質もしくはその塩、または配列番
号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチ
ドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその
塩に対する抗体、または配列番号：３で表されるアミ
ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を
含有するタンパク質をコードするＤＮＡまたは配列番
号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチ
ドをコードするＤＮＡに相補的または実質的に相補的な
ＤＮＡを含有するアンチセンスＤＮＡを含有してなる医
薬、（１７）高血糖症または糖尿病の予防・治療剤であ
る上記（１６）記載の医薬、（１８）配列番号：３で表
されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ
ノ酸配列を含有するタンパク質をコードするポリヌクレ
オチドを含有するポリヌクレオチドまたは配列番号：３
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドをコ
ードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド
を含有することを特徴とする高血糖症、糖尿病または低
血糖症の診断剤、（１９）配列番号：３で表されるアミ
ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を
含有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含
有するポリヌクレオチドまたは配列番号：３で表される
アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配
列を含有するタンパク質の部分ペプチドをコードするポ
リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドを用いるこ
とを特徴とする高血糖症、糖尿病または低血糖症の診断
方法、（２０）配列番号：３で表されるアミノ酸配列と
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
ンパク質もしくはその塩に対する抗体、または配列番
号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチ
ドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその
塩に対する抗体を含有することを特徴とする高血糖症、
糖尿病または低血糖症の診断剤、（２１）配列番号：３
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩に対
する抗体、または配列番号：３で表されるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミドもしくは
そのエステルまたはその塩に対する抗体を用いることを
特徴とする高血糖症、糖尿病または低血糖症の診断方
法、（２２）高血糖症または糖尿病の予防・治療剤をス
クリーニングするための配列番号：２１で表されるアミ
ノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩または配
列番号：２１で表されるアミノ酸配列を含有するペプチ
ドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその
塩の使用、（２３）哺乳動物に対して上記（１０）また
は（１１）記載の化合物またはその塩の有効量を投与す
ることを特徴とする高血糖症または糖尿病の予防・治療
法、（２４）哺乳動物に対して、配列番号：３で表さ
れるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ
酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、または配
列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質
的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペ
プチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたは
その塩、または配列番号：３で表されるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質をコードするＤＮＡまたは配列番号：３で表
されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ
ノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドをコード
するＤＮＡの有効量を投与することを特徴とする低血糖
症の予防・治療法、（２５）哺乳動物に対して、配列
番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的
に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはそ
の塩、または配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同
一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン
パク質の部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはその
エステルまたはその塩に対する抗体、または配列番
号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする
ＤＮＡまたは配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同
一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン
パク質の部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的また
は実質的に相補的なＤＮＡを含有するアンチセンスＤＮ
Ａの有効量を投与することを特徴とする高血糖症または
糖尿病の予防・治療法、（２６）高血糖症または糖尿病
の予防・治療剤を製造するための上記（１０）または
（１１）記載の化合物またはその塩の使用、（２７）低
血糖の予防・治療剤を製造するための、配列番号：３
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、ま
たは配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしく
は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の
部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステル
またはその塩、または配列番号：３で表されるアミノ
酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含
有するタンパク質をコードするＤＮＡまたは配列番号：
３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一
のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドを
コードするＤＮＡの使用、（２８）高血糖症または糖尿
病の予防・治療剤を製造するための、配列番号：３で
表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のア
ミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、また
は配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは
実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部
分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルま
たはその塩に対する抗体、または配列番号：３で表さ
れるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ
酸配列を含有するタンパク質をコードするＤＮＡまたは
配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実
質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分
ペプチドをコードするＤＮＡに相補的または実質的に相
補的なＤＮＡを含有するアンチセンスＤＮＡの使用、
（２９）配列番号：２１で表されるアミノ酸配列を含有
するタンパク質、ペプチドもしくはそのアミドもしくは
そのエステルまたはその塩（但し、配列番号：３で表さ
れるアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその塩を
除く）などに関する。
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、ま
たは配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしく
は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の
部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステル
またはその塩を用いることを特徴とする、配列番号：
３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一
のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、
または配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もし
くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質
の部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステ
ルまたはその塩と配列番号：１０で表されるアミノ酸
配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有
するタンパク質もしくはその塩、または配列番号：１０
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドもし
くはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩との
結合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方
法、（２）配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一
もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパ
ク質の部分ペプチドが、配列番号：２１で表されるアミ
ノ酸配列を含有するペプチドである上記（１）記載のス
クリーニング方法、（３）配列番号：３で表されるアミ
ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を
含有するタンパク質または配列番号：３で表されるアミ
ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を
含有するタンパク質の部分ペプチドを産生する能力を有
する細胞を用いることを特徴とする、配列番号：３で
表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のア
ミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、また
は配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは
実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部
分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルま
たはその塩と配列番号：１０で表されるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質もしくはその塩、または配列番号：１０で表
されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ
ノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドもしくは
そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩との結合
を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング方法、
（４）配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もし
くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質
の部分ペプチドが、配列番号：２１で表されるアミノ酸
配列を含有するペプチドである上記（３）記載のスクリ
ーニング方法、（５）高血糖症、糖尿病または低血糖症
の予防・治療用化合物を探索するための上記（１）から
（４）のいずれかに記載のスクリーニング方法、（６）
配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実
質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしく
はその塩、または配列番号：３で表されるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミドもしくは
そのエステルまたはその塩を含有する、配列番号：３
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、ま
たは配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしく
は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の
部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステル
またはその塩と配列番号：１０で表されるアミノ酸配
列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有す
るタンパク質もしくはその塩、または配列番号：１０で
表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のア
ミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドもしく
はそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩との結
合を阻害する化合物またはその塩のスクリーニング用キ
ット、（７）配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同
一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン
パク質の部分ペプチドが、配列番号：２１で表されるア
ミノ酸配列を含有するペプチドである上記（６）記載の
スクリーニング用キット、（８）配列番号：３で表され
るアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸
配列を含有するタンパク質または配列番号：３で表され
るアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸
配列を含有するタンパク質の部分ペプチドを産生する能
力を有する細胞を含有する、配列番号：３で表される
アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配
列を含有するタンパク質もしくはその塩、または配列番
号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチ
ドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその
塩と配列番号：１０で表されるアミノ酸配列と同一も
しくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク
質もしくはその塩、または配列番号：１０で表されるア
ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列
を含有するタンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミ
ドもしくはそのエステルまたはその塩との結合を阻害す
る化合物またはその塩のスクリーニング用キット、
（９）配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もし
くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質
の部分ペプチドが、配列番号：２１で表されるアミノ酸
配列を含有するペプチドである上記（８）記載のスクリ
ーニング用キット、（１０）上記（１）ないし（４）記
載のスクリーニング方法または上記（６）ないし（９）
記載のスクリーニング用キットを用いて得られうる、
配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実
質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしく
はその塩、または配列番号：３で表されるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミドもしくは
そのエステルまたはその塩と配列番号：１０で表され
るアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸
配列を含有するタンパク質もしくはその塩、または配列
番号：１０で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質
的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペ
プチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたは
その塩との結合を阻害する化合物またはその塩、（１
１）配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もし
くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質
もしくはその塩、または配列番号：３で表されるアミノ
酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含
有するタンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミドも
しくはそのエステルまたはその塩と配列番号：１０で
表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のア
ミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、また
は配列番号：１０で表されるアミノ酸配列と同一もしく
は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の
部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステル
またはその塩との結合を阻害する化合物またはその塩、
（１２）上記（１０）または上記（１１）記載の化合物
またはその塩を含有してなる医薬、（１３）上記（１
０）または上記（１１）記載の化合物またはその塩を含
有してなる高血糖症または糖尿病の予防・治療剤、（１
４）配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もし
くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質
もしくはその塩、または配列番号：３で表されるアミノ
酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含
有するタンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミドも
しくはそのエステルまたはその塩、または配列番号：
３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一
のアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードするＤＮ
Ａまたは配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一も
しくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク
質の部分ペプチドをコードするＤＮＡを含有してなる医
薬、（１５）低血糖症の予防・治療剤である上記（１
４）記載の医薬、（１６）配列番号：３で表されるア
ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列
を含有するタンパク質もしくはその塩、または配列番
号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチ
ドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその
塩に対する抗体、または配列番号：３で表されるアミ
ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を
含有するタンパク質をコードするＤＮＡまたは配列番
号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチ
ドをコードするＤＮＡに相補的または実質的に相補的な
ＤＮＡを含有するアンチセンスＤＮＡを含有してなる医
薬、（１７）高血糖症または糖尿病の予防・治療剤であ
る上記（１６）記載の医薬、（１８）配列番号：３で表
されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ
ノ酸配列を含有するタンパク質をコードするポリヌクレ
オチドを含有するポリヌクレオチドまたは配列番号：３
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドをコ
ードするポリヌクレオチドを含有するポリヌクレオチド
を含有することを特徴とする高血糖症、糖尿病または低
血糖症の診断剤、（１９）配列番号：３で表されるアミ
ノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を
含有するタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含
有するポリヌクレオチドまたは配列番号：３で表される
アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配
列を含有するタンパク質の部分ペプチドをコードするポ
リヌクレオチドを含有するポリヌクレオチドを用いるこ
とを特徴とする高血糖症、糖尿病または低血糖症の診断
方法、（２０）配列番号：３で表されるアミノ酸配列と
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
ンパク質もしくはその塩に対する抗体、または配列番
号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチ
ドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその
塩に対する抗体を含有することを特徴とする高血糖症、
糖尿病または低血糖症の診断剤、（２１）配列番号：３
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩に対
する抗体、または配列番号：３で表されるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミドもしくは
そのエステルまたはその塩に対する抗体を用いることを
特徴とする高血糖症、糖尿病または低血糖症の診断方
法、（２２）高血糖症または糖尿病の予防・治療剤をス
クリーニングするための配列番号：２１で表されるアミ
ノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩または配
列番号：２１で表されるアミノ酸配列を含有するペプチ
ドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその
塩の使用、（２３）哺乳動物に対して上記（１０）また
は（１１）記載の化合物またはその塩の有効量を投与す
ることを特徴とする高血糖症または糖尿病の予防・治療
法、（２４）哺乳動物に対して、配列番号：３で表さ
れるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ
酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、または配
列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質
的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペ
プチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたは
その塩、または配列番号：３で表されるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質をコードするＤＮＡまたは配列番号：３で表
されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ
ノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドをコード
するＤＮＡの有効量を投与することを特徴とする低血糖
症の予防・治療法、（２５）哺乳動物に対して、配列
番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的
に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはそ
の塩、または配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同
一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン
パク質の部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはその
エステルまたはその塩に対する抗体、または配列番
号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードする
ＤＮＡまたは配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同
一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン
パク質の部分ペプチドをコードするＤＮＡに相補的また
は実質的に相補的なＤＮＡを含有するアンチセンスＤＮ
Ａの有効量を投与することを特徴とする高血糖症または
糖尿病の予防・治療法、（２６）高血糖症または糖尿病
の予防・治療剤を製造するための上記（１０）または
（１１）記載の化合物またはその塩の使用、（２７）低
血糖の予防・治療剤を製造するための、配列番号：３
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、ま
たは配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしく
は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の
部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステル
またはその塩、または配列番号：３で表されるアミノ
酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含
有するタンパク質をコードするＤＮＡまたは配列番号：
３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一
のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドを
コードするＤＮＡの使用、（２８）高血糖症または糖尿
病の予防・治療剤を製造するための、配列番号：３で
表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のア
ミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、また
は配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは
実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部
分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルま
たはその塩に対する抗体、または配列番号：３で表さ
れるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ
酸配列を含有するタンパク質をコードするＤＮＡまたは
配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実
質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分
ペプチドをコードするＤＮＡに相補的または実質的に相
補的なＤＮＡを含有するアンチセンスＤＮＡの使用、
（２９）配列番号：２１で表されるアミノ酸配列を含有
するタンパク質、ペプチドもしくはそのアミドもしくは
そのエステルまたはその塩（但し、配列番号：３で表さ
れるアミノ酸配列を含有するタンパク質またはその塩を
除く）などに関する。
【０００６】
【発明の実施の形態】配列番号：３で表わされるアミノ
酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含
有するタンパク質（プロフィリンＩＩＬ；Mol. Cell. B
iol. (Nov. 2000), 20:8209-8219、EP 1033401号公報）
（以下、本発明のタンパク質と称することもある）は、
温血動物（例えば、ヒト、モルモット、ラット、マウ
ス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サルな
ど）の細胞（例えば、肝細胞、脾細胞、神経細胞、グリ
ア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、ラ
ンゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、胚細胞、内皮
細胞、平滑筋細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂
肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細
胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基
球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨
細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは
間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしく
はガン細胞など）もしくはそれらの細胞が存在するあら
ゆる組織、例えば、脳、脳の各部位（例、嗅球、扁桃
核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延
髄、小脳）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生
殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、
消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、
顎下腺、末梢血、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮、
骨、関節、骨格筋などに由来するタンパク質であっても
よく、合成タンパク質であってもよい。
酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含
有するタンパク質（プロフィリンＩＩＬ；Mol. Cell. B
iol. (Nov. 2000), 20:8209-8219、EP 1033401号公報）
（以下、本発明のタンパク質と称することもある）は、
温血動物（例えば、ヒト、モルモット、ラット、マウ
ス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ウシ、サルな
ど）の細胞（例えば、肝細胞、脾細胞、神経細胞、グリ
ア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メサンギウム細胞、ラ
ンゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮細胞、胚細胞、内皮
細胞、平滑筋細胞、繊維芽細胞、繊維細胞、筋細胞、脂
肪細胞、免疫細胞（例、マクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細
胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細胞、好中球、好塩基
球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜細胞、軟骨細胞、骨
細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細胞、肝細胞もしくは
間質細胞、またはこれら細胞の前駆細胞、幹細胞もしく
はガン細胞など）もしくはそれらの細胞が存在するあら
ゆる組織、例えば、脳、脳の各部位（例、嗅球、扁桃
核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延
髄、小脳）、脊髄、下垂体、胃、膵臓、腎臓、肝臓、生
殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副腎、皮膚、筋肉、肺、
消化管（例、大腸、小腸）、血管、心臓、胸腺、脾臓、
顎下腺、末梢血、前立腺、睾丸、卵巣、胎盤、子宮、
骨、関節、骨格筋などに由来するタンパク質であっても
よく、合成タンパク質であってもよい。
【０００７】配列番号：３で表わされるアミノ酸配列と
実質的に同一のアミノ酸配列としては、該アミノ酸配列
を含有するタンパク質が配列番号：１０で表されるア
ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列
を含有するタンパク質もしくはその塩、または配列番
号：１０で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的
に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプ
チドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはそ
の塩への結合活性を有していれば如何なるアミノ酸配列
であってもよい。本発明の配列番号：３で表わされるア
ミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
ンパク質としては、例えば、配列番号：３で表わされる
アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、
配列番号：３で表わされるアミノ酸配列を含有するタン
パク質と実質的に同質の性質を有するタンパク質などが
好ましい。実質的に同質の性質としては、例えば、配
列番号：１０で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実
質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしく
はその塩、または配列番号：１０で表されるアミノ酸
配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有
するタンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミドもし
くはそのエステルまたはその塩への結合活性などがあげ
られる。実質的に同質とは、それらの性質が定性的に同
質であることを示す。したがって、配列番号：１０で
表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のア
ミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、また
は配列番号：１０で表されるアミノ酸配列と同一もし
くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質
の部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステ
ルまたはその塩への結合活性が同等であることが好まし
いが、これらの性質の程度、タンパク質の分子量などの
量的要素は異なっていてもよい。
実質的に同一のアミノ酸配列としては、該アミノ酸配列
を含有するタンパク質が配列番号：１０で表されるア
ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列
を含有するタンパク質もしくはその塩、または配列番
号：１０で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的
に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプ
チドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはそ
の塩への結合活性を有していれば如何なるアミノ酸配列
であってもよい。本発明の配列番号：３で表わされるア
ミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
ンパク質としては、例えば、配列番号：３で表わされる
アミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を含有し、
配列番号：３で表わされるアミノ酸配列を含有するタン
パク質と実質的に同質の性質を有するタンパク質などが
好ましい。実質的に同質の性質としては、例えば、配
列番号：１０で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実
質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしく
はその塩、または配列番号：１０で表されるアミノ酸
配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有
するタンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミドもし
くはそのエステルまたはその塩への結合活性などがあげ
られる。実質的に同質とは、それらの性質が定性的に同
質であることを示す。したがって、配列番号：１０で
表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のア
ミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、また
は配列番号：１０で表されるアミノ酸配列と同一もし
くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質
の部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステ
ルまたはその塩への結合活性が同等であることが好まし
いが、これらの性質の程度、タンパク質の分子量などの
量的要素は異なっていてもよい。
【０００８】また、本発明のタンパク質としては、例え
ば、配列番号：３で表わされるアミノ酸配列中の１ま
たは２個以上（好ましくは、１〜９個程度、より好まし
くは１〜５個程度、さらに好ましくは数（１〜３）個）
のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、配列番号：３で
表わされるアミノ酸配列中の１または２個以上（好まし
くは、１〜９個程度、より好ましくは１〜５個程度、さ
らに好ましくは数（１〜３）個）のアミノ酸が付加した
アミノ酸配列、配列番号：３で表わされるアミノ酸配
列中の１または２個以上（好ましくは、１〜９個程度、
より好ましくは１〜５個程度、さらに好ましくは数（１
〜３）個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、配
列番号：３で表わされるアミノ酸配列中の１または２個
以上（好ましくは、１〜９個程度、より好ましくは１〜
５個程度、さらに好ましくは数（１〜３）個）のアミノ
酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、または
それらを組み合わせたアミノ酸配列を含有するタンパク
質などのいわゆるムテインも含まれる。
ば、配列番号：３で表わされるアミノ酸配列中の１ま
たは２個以上（好ましくは、１〜９個程度、より好まし
くは１〜５個程度、さらに好ましくは数（１〜３）個）
のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、配列番号：３で
表わされるアミノ酸配列中の１または２個以上（好まし
くは、１〜９個程度、より好ましくは１〜５個程度、さ
らに好ましくは数（１〜３）個）のアミノ酸が付加した
アミノ酸配列、配列番号：３で表わされるアミノ酸配
列中の１または２個以上（好ましくは、１〜９個程度、
より好ましくは１〜５個程度、さらに好ましくは数（１
〜３）個）のアミノ酸が挿入されたアミノ酸配列、配
列番号：３で表わされるアミノ酸配列中の１または２個
以上（好ましくは、１〜９個程度、より好ましくは１〜
５個程度、さらに好ましくは数（１〜３）個）のアミノ
酸が他のアミノ酸で置換されたアミノ酸配列、または
それらを組み合わせたアミノ酸配列を含有するタンパク
質などのいわゆるムテインも含まれる。
【０００９】本明細書におけるタンパク質は、ペプチド
標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端
がＣ末端（カルボキシル末端）である。配列番号：３で
表わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質をはじめ
とする、本発明のタンパク質は、Ｃ末端がカルボキシル
基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシレート(−ＣＯＯ-)、ア
ミド（−ＣＯＮＨ2）またはエステル（−ＣＯＯＲ）の
何れであってもよい。ここでエステルにおけるＲとして
は、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロ
ピル、ｎ−ブチルなどのＣ1-6アルキル基、例えば、シ
クロペンチル、シクロヘキシルなどのＣ3-8シクロアル
キル基、例えば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ6-12
アリール基、例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェ
ニル−Ｃ1-2アルキル基もしくはα−ナフチルメチルな
どのα−ナフチル−Ｃ1-2アルキル基などのＣ7-14アラ
ルキル基、ピバロイルオキシメチル基などが用いられ
る。
標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端
がＣ末端（カルボキシル末端）である。配列番号：３で
表わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質をはじめ
とする、本発明のタンパク質は、Ｃ末端がカルボキシル
基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシレート(−ＣＯＯ-)、ア
ミド（−ＣＯＮＨ2）またはエステル（−ＣＯＯＲ）の
何れであってもよい。ここでエステルにおけるＲとして
は、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロ
ピル、ｎ−ブチルなどのＣ1-6アルキル基、例えば、シ
クロペンチル、シクロヘキシルなどのＣ3-8シクロアル
キル基、例えば、フェニル、α−ナフチルなどのＣ6-12
アリール基、例えば、ベンジル、フェネチルなどのフェ
ニル−Ｃ1-2アルキル基もしくはα−ナフチルメチルな
どのα−ナフチル−Ｃ1-2アルキル基などのＣ7-14アラ
ルキル基、ピバロイルオキシメチル基などが用いられ
る。
【００１０】本発明のタンパク質がＣ末端以外にカルボ
キシル基（またはカルボキシレート）を有している場
合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されて
いるものも本発明のタンパク質に含まれる。この場合の
エステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルな
どが用いられる。さらに、本発明のタンパク質には、Ｎ
末端のアミノ酸残基（例、メチオニン残基）のアミノ基
が保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ
1-6アルカノイルなどのＣ1-6アシル基など）で保護され
ているもの、生体内で切断されて生成するＮ末端のグル
タミン残基がピログルタミン酸化したもの、分子内のア
ミノ酸の側鎖上の置換基（例えば−ＯＨ、−ＳＨ、アミ
ノ基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基な
ど）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基
などのＣ1-6アルカノイル基などのＣ1-6アシル基など）
で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆ
る糖タンパク質などの複合タンパク質なども含まれる。
本発明のタンパク質の具体例としては、例えば、配列番
号：３で表わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質
（本明細書において、ＰＦＮＩＩＬと称する場合もあ
る）などがあげられる。
キシル基（またはカルボキシレート）を有している場
合、カルボキシル基がアミド化またはエステル化されて
いるものも本発明のタンパク質に含まれる。この場合の
エステルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルな
どが用いられる。さらに、本発明のタンパク質には、Ｎ
末端のアミノ酸残基（例、メチオニン残基）のアミノ基
が保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基などのＣ
1-6アルカノイルなどのＣ1-6アシル基など）で保護され
ているもの、生体内で切断されて生成するＮ末端のグル
タミン残基がピログルタミン酸化したもの、分子内のア
ミノ酸の側鎖上の置換基（例えば−ＯＨ、−ＳＨ、アミ
ノ基、イミダゾール基、インドール基、グアニジノ基な
ど）が適当な保護基（例えば、ホルミル基、アセチル基
などのＣ1-6アルカノイル基などのＣ1-6アシル基など）
で保護されているもの、あるいは糖鎖が結合したいわゆ
る糖タンパク質などの複合タンパク質なども含まれる。
本発明のタンパク質の具体例としては、例えば、配列番
号：３で表わされるアミノ酸配列を含有するタンパク質
（本明細書において、ＰＦＮＩＩＬと称する場合もあ
る）などがあげられる。
【００１１】本発明のタンパク質の部分ペプチド（以
下、本発明の部分ペプチドと略記する場合もある）とし
ては、前記した本発明のタンパク質の部分ペプチドであ
って、好ましくは、前記した本発明のタンパク質と同様
の性質を有するものであればいずれのものでもよい。例
えば、本発明のタンパク質の構成アミノ酸配列のうち少
なくとも１０個以上、好ましくは２０個以上、より好ま
しくは５０個以上、さらに好ましくは７０個以上、もっ
とも好ましくは１００個以上のアミノ酸配列を有するペ
プチドなどが用いられる。また、本発明の部分ペプチド
は、そのアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましく
は、１〜１０個程度、より好ましくは数（１〜５）個）
のアミノ酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に１ま
たは２個以上（好ましくは、１〜１０個程度、より好ま
しくは数（１〜５）個）のアミノ酸が付加し、または、
そのアミノ酸配列に１または２個以上（好ましくは、１
〜１０個程度、より好ましくは数（１〜５）個）のアミ
ノ酸が挿入され、または、そのアミノ酸配列中の１また
は２個以上（好ましくは、１〜１０個程度、より好まし
くは数（１〜５）個程度）のアミノ酸が他のアミノ酸で
置換されていてもよい。本発明の部分ペプチドとして、
より具体的には、配列番号：３で表されるアミノ酸配列
のＮ末端から数えて第１３１番目（Ｍｅｔ）〜第１４０
番目（Ｐｈｅ）で表されるアミノ酸配列、すなわち配列
番号：２１で表されるアミノ酸配列を含有するペプチド
などが好ましい。配列番号：３で表されるアミノ酸配列
のＮ末端から数えて第１３１番目（Ｍｅｔ）〜第１４０
番目（Ｐｈｅ）で表されるアミノ酸配列（配列番号：２
１）を含有するペプチドとしては、配列番号：３で表さ
れるアミノ酸配列のＮ末端から数えて第１３１番目（Ｍ
ｅｔ）〜第１４０番目（Ｐｈｅ）で表されるアミノ酸配
列（配列番号：２１）のＮ末端に、配列番号：３で表さ
れるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第１３０番目
（Ｓｅｒ）で表されるアミノ酸配列（配列番号：１）の
Ｃ末端から数えて１〜１２９個のアミノ酸残基を付加し
たアミノ酸配列から成るペプチドなどが用いられる。と
りわけ、配列番号：３で表されるアミノ酸配列のＮ末端
から第１０９番目（Ｖａｌ）〜第１４０番目（Ｐｈｅ）
で表されるアミノ酸配列を含有してなる部分ペプチドな
どが好ましく用いられる。
下、本発明の部分ペプチドと略記する場合もある）とし
ては、前記した本発明のタンパク質の部分ペプチドであ
って、好ましくは、前記した本発明のタンパク質と同様
の性質を有するものであればいずれのものでもよい。例
えば、本発明のタンパク質の構成アミノ酸配列のうち少
なくとも１０個以上、好ましくは２０個以上、より好ま
しくは５０個以上、さらに好ましくは７０個以上、もっ
とも好ましくは１００個以上のアミノ酸配列を有するペ
プチドなどが用いられる。また、本発明の部分ペプチド
は、そのアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましく
は、１〜１０個程度、より好ましくは数（１〜５）個）
のアミノ酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に１ま
たは２個以上（好ましくは、１〜１０個程度、より好ま
しくは数（１〜５）個）のアミノ酸が付加し、または、
そのアミノ酸配列に１または２個以上（好ましくは、１
〜１０個程度、より好ましくは数（１〜５）個）のアミ
ノ酸が挿入され、または、そのアミノ酸配列中の１また
は２個以上（好ましくは、１〜１０個程度、より好まし
くは数（１〜５）個程度）のアミノ酸が他のアミノ酸で
置換されていてもよい。本発明の部分ペプチドとして、
より具体的には、配列番号：３で表されるアミノ酸配列
のＮ末端から数えて第１３１番目（Ｍｅｔ）〜第１４０
番目（Ｐｈｅ）で表されるアミノ酸配列、すなわち配列
番号：２１で表されるアミノ酸配列を含有するペプチド
などが好ましい。配列番号：３で表されるアミノ酸配列
のＮ末端から数えて第１３１番目（Ｍｅｔ）〜第１４０
番目（Ｐｈｅ）で表されるアミノ酸配列（配列番号：２
１）を含有するペプチドとしては、配列番号：３で表さ
れるアミノ酸配列のＮ末端から数えて第１３１番目（Ｍ
ｅｔ）〜第１４０番目（Ｐｈｅ）で表されるアミノ酸配
列（配列番号：２１）のＮ末端に、配列番号：３で表さ
れるアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第１３０番目
（Ｓｅｒ）で表されるアミノ酸配列（配列番号：１）の
Ｃ末端から数えて１〜１２９個のアミノ酸残基を付加し
たアミノ酸配列から成るペプチドなどが用いられる。と
りわけ、配列番号：３で表されるアミノ酸配列のＮ末端
から第１０９番目（Ｖａｌ）〜第１４０番目（Ｐｈｅ）
で表されるアミノ酸配列を含有してなる部分ペプチドな
どが好ましく用いられる。
【００１２】また、本発明の部分ペプチドはＣ末端がカ
ルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシレート（−Ｃ
ＯＯ-）、アミド（−ＣＯＮＨ2）またはエステル（−Ｃ
ＯＯＲ）（Ｒは上記と同意義を示す）の何れであっても
よい。本発明の部分ペプチドがＣ末端以外にカルボキシ
ル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カ
ルボキシル基がアミド化またはエステル化されているも
のも本発明のタンパク質に含まれる。この場合のエステ
ルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用
いられる。さらに、本発明の部分ペプチドには、前記し
た本発明のタンパク質と同様に、Ｎ末端のアミノ酸残基
（例、メチオニン残基）のアミノ基が保護基で保護され
ているもの、Ｎ端側が生体内で切断され生成したグルタ
ミン残基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミ
ノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されている
もの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなど
の複合ペプチドなども含まれる。本発明の部分ペプチド
は抗体作成のための抗原としても用いることができ、ま
た本発明のタンパク質と配列番号：１０で表されるア
ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列
を含有するタンパク質もしくはその塩、または配列番
号：１０で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的
に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプ
チドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはそ
の塩との結合を阻害する化合物のスクリーニングに用い
ることもできる。
ルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシレート（−Ｃ
ＯＯ-）、アミド（−ＣＯＮＨ2）またはエステル（−Ｃ
ＯＯＲ）（Ｒは上記と同意義を示す）の何れであっても
よい。本発明の部分ペプチドがＣ末端以外にカルボキシ
ル基（またはカルボキシレート）を有している場合、カ
ルボキシル基がアミド化またはエステル化されているも
のも本発明のタンパク質に含まれる。この場合のエステ
ルとしては、例えば上記したＣ末端のエステルなどが用
いられる。さらに、本発明の部分ペプチドには、前記し
た本発明のタンパク質と同様に、Ｎ末端のアミノ酸残基
（例、メチオニン残基）のアミノ基が保護基で保護され
ているもの、Ｎ端側が生体内で切断され生成したグルタ
ミン残基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミ
ノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されている
もの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなど
の複合ペプチドなども含まれる。本発明の部分ペプチド
は抗体作成のための抗原としても用いることができ、ま
た本発明のタンパク質と配列番号：１０で表されるア
ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列
を含有するタンパク質もしくはその塩、または配列番
号：１０で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的
に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプ
チドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはそ
の塩との結合を阻害する化合物のスクリーニングに用い
ることもできる。
【００１３】配列番号：１０で表わされるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質（以下、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質と
称することもある）は、温血動物（例えば、ヒト、モル
モット、ラット、マウス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒ
ツジ、ウシ、サルなど）の細胞（例えば、肝細胞、脾細
胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メ
サンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮
細胞、胚細胞、内皮細胞、平滑筋細胞、繊維芽細胞、繊
維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファ
ージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細
胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜
細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細
胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆
細胞、幹細胞もしくはガン細胞など）もしくはそれらの
細胞が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の各部位
（例、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、視床下
部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊髄、下垂体、胃、膵
臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副
腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血
管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、前立腺、睾
丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋などに由来す
るタンパク質であってもよく、合成タンパク質であって
もよい。
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質（以下、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質と
称することもある）は、温血動物（例えば、ヒト、モル
モット、ラット、マウス、ニワトリ、ウサギ、ブタ、ヒ
ツジ、ウシ、サルなど）の細胞（例えば、肝細胞、脾細
胞、神経細胞、グリア細胞、膵臓β細胞、骨髄細胞、メ
サンギウム細胞、ランゲルハンス細胞、表皮細胞、上皮
細胞、胚細胞、内皮細胞、平滑筋細胞、繊維芽細胞、繊
維細胞、筋細胞、脂肪細胞、免疫細胞（例、マクロファ
ージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、肥満細
胞、好中球、好塩基球、好酸球、単球）、巨核球、滑膜
細胞、軟骨細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、乳腺細
胞、肝細胞もしくは間質細胞、またはこれら細胞の前駆
細胞、幹細胞もしくはガン細胞など）もしくはそれらの
細胞が存在するあらゆる組織、例えば、脳、脳の各部位
（例、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、視床下
部、大脳皮質、延髄、小脳）、脊髄、下垂体、胃、膵
臓、腎臓、肝臓、生殖腺、甲状腺、胆のう、骨髄、副
腎、皮膚、筋肉、肺、消化管（例、大腸、小腸）、血
管、心臓、胸腺、脾臓、顎下腺、末梢血、前立腺、睾
丸、卵巣、胎盤、子宮、骨、関節、骨格筋などに由来す
るタンパク質であってもよく、合成タンパク質であって
もよい。
【００１４】配列番号：１０で表されるアミノ酸配列と
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列としては、該
アミノ酸配列を含有するタンパク質が配列番号：３で
表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のア
ミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、また
は配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしく
は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の
部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステル
またはその塩への結合活性を有していれば如何なるアミ
ノ酸配列であってもよい。本発明の配列番号：１０で表
わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を
含有するタンパク質としては、例えば、配列番号：１０
で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配
列を含有し、配列番号：１０で表わされるアミノ酸配列
を有するタンパク質と実質的に同質の性質を有するタン
パク質などが好ましい。実質的に同質の性質としては、
例えば、配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一
もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパ
ク質もしくはその塩、または配列番号：３で表される
アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配
列を含有するタンパク質の部分ペプチドもしくはそのア
ミドもしくはそのエステルまたはその塩への結合活性な
どがあげられる。実質的に同質とは、それらの性質が定
性的に同質であることを示す。したがって、配列番
号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその
塩、または配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同
一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン
パク質の部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはその
エステルまたはその塩への結合活性が同等であることが
好ましいが、これらの性質の程度、タンパク質の分子量
などの量的要素は異なっていてもよい。
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列としては、該
アミノ酸配列を含有するタンパク質が配列番号：３で
表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のア
ミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、また
は配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしく
は実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の
部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステル
またはその塩への結合活性を有していれば如何なるアミ
ノ酸配列であってもよい。本発明の配列番号：１０で表
わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配列を
含有するタンパク質としては、例えば、配列番号：１０
で表わされるアミノ酸配列と実質的に同一のアミノ酸配
列を含有し、配列番号：１０で表わされるアミノ酸配列
を有するタンパク質と実質的に同質の性質を有するタン
パク質などが好ましい。実質的に同質の性質としては、
例えば、配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一
もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパ
ク質もしくはその塩、または配列番号：３で表される
アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配
列を含有するタンパク質の部分ペプチドもしくはそのア
ミドもしくはそのエステルまたはその塩への結合活性な
どがあげられる。実質的に同質とは、それらの性質が定
性的に同質であることを示す。したがって、配列番
号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその
塩、または配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同
一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン
パク質の部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはその
エステルまたはその塩への結合活性が同等であることが
好ましいが、これらの性質の程度、タンパク質の分子量
などの量的要素は異なっていてもよい。
【００１５】また、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質と
しては、例えば、配列番号：１０で表わされるアミノ
酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜９個程
度、より好ましくは１〜５個程度、さらに好ましくは数
（１〜３）個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、
配列番号：１０で表わされるアミノ酸配列中の１または
２個以上（好ましくは、１〜９個程度、より好ましくは
１〜５個程度、さらに好ましくは数（１〜３）個）のア
ミノ酸が付加したアミノ酸配列、配列番号：１０で表
わされるアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましく
は、１〜９個程度、より好ましくは１〜５個程度、さら
に好ましくは数（１〜３）個）のアミノ酸が挿入された
アミノ酸配列、配列番号：１０で表わされるアミノ酸
配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜９個程
度、より好ましくは１〜５個程度、さらに好ましくは数
（１〜３）個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換された
アミノ酸配列、またはそれらを組み合わせたアミノ酸
配列を含有するタンパク質などのいわゆるムテインも含
まれる。
しては、例えば、配列番号：１０で表わされるアミノ
酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜９個程
度、より好ましくは１〜５個程度、さらに好ましくは数
（１〜３）個）のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、
配列番号：１０で表わされるアミノ酸配列中の１または
２個以上（好ましくは、１〜９個程度、より好ましくは
１〜５個程度、さらに好ましくは数（１〜３）個）のア
ミノ酸が付加したアミノ酸配列、配列番号：１０で表
わされるアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましく
は、１〜９個程度、より好ましくは１〜５個程度、さら
に好ましくは数（１〜３）個）のアミノ酸が挿入された
アミノ酸配列、配列番号：１０で表わされるアミノ酸
配列中の１または２個以上（好ましくは、１〜９個程
度、より好ましくは１〜５個程度、さらに好ましくは数
（１〜３）個）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換された
アミノ酸配列、またはそれらを組み合わせたアミノ酸
配列を含有するタンパク質などのいわゆるムテインも含
まれる。
【００１６】本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質がＣ末端
以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有
している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステ
ル化されているものも本発明のタンパク質に含まれる。
この場合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端の
エステルなどが用いられる。さらに、本発明のＩＲＡＰ
結合タンパク質には、Ｎ末端のアミノ酸残基（例、メチ
オニン残基）のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル
基、アセチル基などのＣ1-6アルカノイルなどのＣ1-6ア
シル基など）で保護されているもの、生体内で切断され
て生成するＮ末端のグルタミン残基がピログルタミン酸
化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例え
ば−ＯＨ、−ＳＨ、アミノ基、イミダゾール基、インド
ール基、グアニジノ基など）が適当な保護基（例えば、
ホルミル基、アセチル基などのＣ1-6アルカノイル基な
どのＣ1-6アシル基など）で保護されているもの、ある
いは糖鎖が結合したいわゆる糖タンパク質などの複合タ
ンパク質なども含まれる。本発明のＩＲＡＰ結合タンパ
ク質の具体例としては、例えば、配列番号：１０で表わ
されるアミノ酸配列を有するタンパク質（本明細書にお
いて、ＭＤ３６と称する場合もある）などがあげられ
る。
以外にカルボキシル基（またはカルボキシレート）を有
している場合、カルボキシル基がアミド化またはエステ
ル化されているものも本発明のタンパク質に含まれる。
この場合のエステルとしては、例えば上記したＣ末端の
エステルなどが用いられる。さらに、本発明のＩＲＡＰ
結合タンパク質には、Ｎ末端のアミノ酸残基（例、メチ
オニン残基）のアミノ基が保護基（例えば、ホルミル
基、アセチル基などのＣ1-6アルカノイルなどのＣ1-6ア
シル基など）で保護されているもの、生体内で切断され
て生成するＮ末端のグルタミン残基がピログルタミン酸
化したもの、分子内のアミノ酸の側鎖上の置換基（例え
ば−ＯＨ、−ＳＨ、アミノ基、イミダゾール基、インド
ール基、グアニジノ基など）が適当な保護基（例えば、
ホルミル基、アセチル基などのＣ1-6アルカノイル基な
どのＣ1-6アシル基など）で保護されているもの、ある
いは糖鎖が結合したいわゆる糖タンパク質などの複合タ
ンパク質なども含まれる。本発明のＩＲＡＰ結合タンパ
ク質の具体例としては、例えば、配列番号：１０で表わ
されるアミノ酸配列を有するタンパク質（本明細書にお
いて、ＭＤ３６と称する場合もある）などがあげられ
る。
【００１７】本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質の部分ペ
プチド（以下、本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチドと略
記する場合もある）としては、前記した本発明のＩＲＡ
Ｐ結合タンパク質の部分ペプチドであって、好ましく
は、前記した本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質と同様の
性質を有するものであればいずれのものでもよい。例え
ば、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質の構成アミノ酸配
列のうち少なくとも２０個以上、好ましくは５０個以
上、より好ましくは７０個以上、さらに好ましくは１０
０個以上のアミノ酸配列を有するペプチドなどが用いら
れる。また、本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチドは、そ
のアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１
〜１０個程度、より好ましくは数（１〜５）個）のアミ
ノ酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に１または２
個以上（好ましくは、１〜１０個程度、より好ましくは
数（１〜５）個）のアミノ酸が付加し、または、そのア
ミノ酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜１０
個程度、より好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が
挿入され、または、そのアミノ酸配列中の１または２個
以上（好ましくは、１〜１０個程度、より好ましくは数
（１〜５）個程度）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換さ
れていてもよい。
プチド（以下、本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチドと略
記する場合もある）としては、前記した本発明のＩＲＡ
Ｐ結合タンパク質の部分ペプチドであって、好ましく
は、前記した本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質と同様の
性質を有するものであればいずれのものでもよい。例え
ば、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質の構成アミノ酸配
列のうち少なくとも２０個以上、好ましくは５０個以
上、より好ましくは７０個以上、さらに好ましくは１０
０個以上のアミノ酸配列を有するペプチドなどが用いら
れる。また、本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチドは、そ
のアミノ酸配列中の１または２個以上（好ましくは、１
〜１０個程度、より好ましくは数（１〜５）個）のアミ
ノ酸が欠失し、または、そのアミノ酸配列に１または２
個以上（好ましくは、１〜１０個程度、より好ましくは
数（１〜５）個）のアミノ酸が付加し、または、そのア
ミノ酸配列に１または２個以上（好ましくは、１〜１０
個程度、より好ましくは数（１〜５）個）のアミノ酸が
挿入され、または、そのアミノ酸配列中の１または２個
以上（好ましくは、１〜１０個程度、より好ましくは数
（１〜５）個程度）のアミノ酸が他のアミノ酸で置換さ
れていてもよい。
【００１８】また、本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチド
はＣ末端がカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシ
レート（−ＣＯＯ-）、アミド（−ＣＯＮＨ2）またはエ
ステル（−ＣＯＯＲ）（Ｒは上記と同意義を示す）の何
れであってもよい。本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチド
がＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレー
ト）を有している場合、カルボキシル基がアミド化また
はエステル化されているものも本発明のタンパク質に含
まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記した
Ｃ末端のエステルなどが用いられる。さらに、本発明の
ＩＲＡＰ結合部分ペプチドには、前記した本発明のＩＲ
ＡＰ結合タンパク質と同様に、Ｎ末端のアミノ酸残基
（例、メチオニン残基）のアミノ基が保護基で保護され
ているもの、Ｎ端側が生体内で切断され生成したグルタ
ミン残基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミ
ノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されている
もの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなど
の複合ペプチドなども含まれる。本発明のＩＲＡＰ結合
部分ペプチドは抗体作成のための抗原としても用いるこ
とができ、また本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質と本発
明のタンパク質もしくはその塩，または本発明の部分ペ
プチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたは
その塩との結合を阻害する化合物のスクリーニングに用
いることもできる。
はＣ末端がカルボキシル基（−ＣＯＯＨ）、カルボキシ
レート（−ＣＯＯ-）、アミド（−ＣＯＮＨ2）またはエ
ステル（−ＣＯＯＲ）（Ｒは上記と同意義を示す）の何
れであってもよい。本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチド
がＣ末端以外にカルボキシル基（またはカルボキシレー
ト）を有している場合、カルボキシル基がアミド化また
はエステル化されているものも本発明のタンパク質に含
まれる。この場合のエステルとしては、例えば上記した
Ｃ末端のエステルなどが用いられる。さらに、本発明の
ＩＲＡＰ結合部分ペプチドには、前記した本発明のＩＲ
ＡＰ結合タンパク質と同様に、Ｎ末端のアミノ酸残基
（例、メチオニン残基）のアミノ基が保護基で保護され
ているもの、Ｎ端側が生体内で切断され生成したグルタ
ミン残基がピログルタミン酸化したもの、分子内のアミ
ノ酸の側鎖上の置換基が適当な保護基で保護されている
もの、あるいは糖鎖が結合したいわゆる糖ペプチドなど
の複合ペプチドなども含まれる。本発明のＩＲＡＰ結合
部分ペプチドは抗体作成のための抗原としても用いるこ
とができ、また本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質と本発
明のタンパク質もしくはその塩，または本発明の部分ペ
プチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたは
その塩との結合を阻害する化合物のスクリーニングに用
いることもできる。
【００１９】本発明のタンパク質、本発明の部分ペプチ
ド、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質、本発明のＩＲＡ
Ｐ結合部分ペプチドの塩としては、生理学的に許容され
る酸（例、無機酸、有機酸）や塩基（例、アルカリ金属
塩）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容さ
れる酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例え
ば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫
酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プ
ロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石
酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスル
ホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる
（以下、「本発明のタンパク質またはその塩」を単に
「本発明のタンパク質」と、「本発明の部分ペプチドま
たはその塩」、「本発明の部分ペプチドもしくはそのア
ミドもしくはそのエステルまたはその塩」を単に「本発
明の部分ペプチド」と、「本発明のＩＲＡＰ結合タンパ
ク質またはその塩」を単に「本発明のＩＲＡＰ結合タン
パク質」と、「本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチドまた
はその塩」、「本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチドもし
くはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩」を
単に「本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチド」と称する場
合がある）。本発明のタンパク質、本発明の部分ペプチ
ド、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質、本発明のＩＲＡ
Ｐ結合部分ペプチドは、前述したヒトや温血動物の細胞
または組織から公知のタンパク質の精製方法によって製
造することもでき、それらのタンパク質またはペプチド
をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養するこ
とによっても製造することができる。また、後述のペプ
チド合成法に準じて製造することもできる。ヒトや哺乳
動物の組織または細胞から製造する場合、ヒトや哺乳動
物の組織または細胞をホモジナイズした後、酸などで抽
出を行ない、該抽出液を逆相クロマトグラフィー、イオ
ン交換クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーを
組み合わせることにより精製単離することができる。
ド、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質、本発明のＩＲＡ
Ｐ結合部分ペプチドの塩としては、生理学的に許容され
る酸（例、無機酸、有機酸）や塩基（例、アルカリ金属
塩）などとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容さ
れる酸付加塩が好ましい。この様な塩としては、例え
ば、無機酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫
酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プ
ロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石
酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスル
ホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる
（以下、「本発明のタンパク質またはその塩」を単に
「本発明のタンパク質」と、「本発明の部分ペプチドま
たはその塩」、「本発明の部分ペプチドもしくはそのア
ミドもしくはそのエステルまたはその塩」を単に「本発
明の部分ペプチド」と、「本発明のＩＲＡＰ結合タンパ
ク質またはその塩」を単に「本発明のＩＲＡＰ結合タン
パク質」と、「本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチドまた
はその塩」、「本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチドもし
くはそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩」を
単に「本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチド」と称する場
合がある）。本発明のタンパク質、本発明の部分ペプチ
ド、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質、本発明のＩＲＡ
Ｐ結合部分ペプチドは、前述したヒトや温血動物の細胞
または組織から公知のタンパク質の精製方法によって製
造することもでき、それらのタンパク質またはペプチド
をコードするＤＮＡを含有する形質転換体を培養するこ
とによっても製造することができる。また、後述のペプ
チド合成法に準じて製造することもできる。ヒトや哺乳
動物の組織または細胞から製造する場合、ヒトや哺乳動
物の組織または細胞をホモジナイズした後、酸などで抽
出を行ない、該抽出液を逆相クロマトグラフィー、イオ
ン交換クロマトグラフィーなどのクロマトグラフィーを
組み合わせることにより精製単離することができる。
【００２０】本発明のタンパク質、本発明の部分ペプチ
ド、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質、本発明のＩＲＡ
Ｐ結合部分ペプチドの合成には、通常市販のタンパク質
合成用樹脂を用いることができる。そのような樹脂とし
ては、例えば、クロロメチル樹脂、ヒドロキシメチル樹
脂、ベンズヒドリルアミン樹脂、アミノメチル樹脂、４
−ベンジルオキシベンジルアルコール樹脂、４−メチル
ベンズヒドリルアミン樹脂、ＰＡＭ樹脂、４−ヒドロキ
シメチルメチルフェニルアセトアミドメチル樹脂、ポリ
アクリルアミド樹脂、４−（２’，４’−ジメトキシフ
ェニル−ヒドロキシメチル）フェノキシ樹脂、４−
（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃアミノエ
チル）フェノキシ樹脂などをあげることができる。この
ような樹脂を用い、α−アミノ基と側鎖官能基を適当に
保護したアミノ酸を、目的とするタンパク質またはペプ
チドの配列通りに、公知の各種縮合方法に従い、樹脂上
で縮合させる。反応の最後に樹脂からタンパク質または
ペプチドを切り出すと同時に各種保護基を除去し、さら
に高希釈溶液中で分子内ジスルフィド結合形成反応を実
施し、目的のタンパク質、ペプチドを取得する。
ド、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質、本発明のＩＲＡ
Ｐ結合部分ペプチドの合成には、通常市販のタンパク質
合成用樹脂を用いることができる。そのような樹脂とし
ては、例えば、クロロメチル樹脂、ヒドロキシメチル樹
脂、ベンズヒドリルアミン樹脂、アミノメチル樹脂、４
−ベンジルオキシベンジルアルコール樹脂、４−メチル
ベンズヒドリルアミン樹脂、ＰＡＭ樹脂、４−ヒドロキ
シメチルメチルフェニルアセトアミドメチル樹脂、ポリ
アクリルアミド樹脂、４−（２’，４’−ジメトキシフ
ェニル−ヒドロキシメチル）フェノキシ樹脂、４−
（２’，４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃアミノエ
チル）フェノキシ樹脂などをあげることができる。この
ような樹脂を用い、α−アミノ基と側鎖官能基を適当に
保護したアミノ酸を、目的とするタンパク質またはペプ
チドの配列通りに、公知の各種縮合方法に従い、樹脂上
で縮合させる。反応の最後に樹脂からタンパク質または
ペプチドを切り出すと同時に各種保護基を除去し、さら
に高希釈溶液中で分子内ジスルフィド結合形成反応を実
施し、目的のタンパク質、ペプチドを取得する。
【００２１】上記した保護アミノ酸の縮合に関しては、
タンパク質合成に使用できる各種活性化試薬を用いるこ
とができるが、特に、カルボジイミド類がよい。カルボ
ジイミド類としては、ＤＣＣ、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピ
ルカルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチル
アミノプロリル）カルボジイミドなどが用いられる。こ
れらによる活性化にはラセミ化抑制添加剤（例えば、Ｈ
ＯＢｔ、ＨＯＯＢｔ）とともに保護アミノ酸を直接樹脂
に添加するかまたは、対称酸無水物またはＨＯＢｔエス
テルあるいはＨＯＯＢｔエステルとしてあらかじめ保護
アミノ酸の活性化を行なった後に樹脂に添加することが
できる。
タンパク質合成に使用できる各種活性化試薬を用いるこ
とができるが、特に、カルボジイミド類がよい。カルボ
ジイミド類としては、ＤＣＣ、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピ
ルカルボジイミド、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチル
アミノプロリル）カルボジイミドなどが用いられる。こ
れらによる活性化にはラセミ化抑制添加剤（例えば、Ｈ
ＯＢｔ、ＨＯＯＢｔ）とともに保護アミノ酸を直接樹脂
に添加するかまたは、対称酸無水物またはＨＯＢｔエス
テルあるいはＨＯＯＢｔエステルとしてあらかじめ保護
アミノ酸の活性化を行なった後に樹脂に添加することが
できる。
【００２２】保護アミノ酸の活性化や樹脂との縮合に用
いられる溶媒としては、タンパク質縮合反応に使用しう
ることが知られている溶媒から適宜選択されうる。例え
ば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル
アセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどの酸アミド
類、塩化メチレン、クロロホルムなどのハロゲン化炭化
水素類、トリフルオロエタノールなどのアルコール類、
ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類、ピリジン
などのアミン類、ジオキサン、テトラヒドロフランなど
のエーテル類、アセトニトリル、プロピオニトリルなど
のニトリル類、酢酸メチル，酢酸エチルなどのエステル
類あるいはこれらの適宜の混合物などが用いられる。反
応温度はタンパク質結合形成反応に使用され得ることが
知られている範囲から適宜選択され、通常約−２０℃〜
５０℃の範囲から適宜選択される。活性化されたアミノ
酸誘導体は通常１.５〜４倍過剰で用いられる。ニンヒ
ドリン反応を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合
には保護基の脱離を行うことなく縮合反応を繰り返すこ
とにより十分な縮合を行うことができる。反応を繰り返
しても十分な縮合が得られないときには、無水酢酸また
はアセチルイミダゾールを用いて未反応アミノ酸をアセ
チル化することによって、後の反応に影響を与えないよ
うにすることができる。
いられる溶媒としては、タンパク質縮合反応に使用しう
ることが知られている溶媒から適宜選択されうる。例え
ば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチル
アセトアミド、Ｎ−メチルピロリドンなどの酸アミド
類、塩化メチレン、クロロホルムなどのハロゲン化炭化
水素類、トリフルオロエタノールなどのアルコール類、
ジメチルスルホキシドなどのスルホキシド類、ピリジン
などのアミン類、ジオキサン、テトラヒドロフランなど
のエーテル類、アセトニトリル、プロピオニトリルなど
のニトリル類、酢酸メチル，酢酸エチルなどのエステル
類あるいはこれらの適宜の混合物などが用いられる。反
応温度はタンパク質結合形成反応に使用され得ることが
知られている範囲から適宜選択され、通常約−２０℃〜
５０℃の範囲から適宜選択される。活性化されたアミノ
酸誘導体は通常１.５〜４倍過剰で用いられる。ニンヒ
ドリン反応を用いたテストの結果、縮合が不十分な場合
には保護基の脱離を行うことなく縮合反応を繰り返すこ
とにより十分な縮合を行うことができる。反応を繰り返
しても十分な縮合が得られないときには、無水酢酸また
はアセチルイミダゾールを用いて未反応アミノ酸をアセ
チル化することによって、後の反応に影響を与えないよ
うにすることができる。
【００２３】原料のアミノ基の保護基としては、例え
ば、Ｚ、Ｂｏｃ、ｔ−ペンチルオキシカルボニル、イソ
ボルニルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキ
シカルボニル、Ｃｌ−Ｚ、Ｂｒ−Ｚ、アダマンチルオキ
シカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホ
ルミル、２−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニル
ホスフィノチオイル、Ｆｍｏｃなどが用いられる。カル
ボキシル基は、例えば、アルキルエステル化（例えば、
メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｔ−ブチル、シク
ロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロ
オクチル、２−アダマンチルなどの直鎖状、分枝状もし
くは環状アルキルエステル化）、アラルキルエステル化
（例えば、ベンジルエステル、４−ニトロベンジルエス
テル、４−メトキシベンジルエステル、４−クロロベン
ジルエステル、ベンズヒドリルエステル化）、フェナシ
ルエステル化、ベンジルオキシカルボニルヒドラジド
化、ｔ−ブトキシカルボニルヒドラジド化、トリチルヒ
ドラジド化などによって保護することができる。セリン
の水酸基は、例えば、エステル化またはエーテル化によ
って保護することができる。このエステル化に適する基
としては、例えば、アセチル基などの低級（Ｃ1-6）ア
ルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイル基、ベンジ
ルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基などの炭
酸から誘導される基などが用いられる。また、エーテル
化に適する基としては、例えば、ベンジル基、テトラヒ
ドロピラニル基、ｔ−ブチル基などである。チロシンの
フェノール性水酸基の保護基としては、例えば、Ｂｚ
ｌ、Ｃｌ2−Ｂｚｌ、２−ニトロベンジル、Ｂｒ−Ｚ、
ｔ−ブチルなどが用いられる。ヒスチジンのイミダゾー
ルの保護基としては、例えば、Ｔｏｓ、４−メトキシ−
２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル、ＤＮＰ、
ベンジルオキシメチル、Ｂｕｍ、Ｂｏｃ、Ｔｒｔ、Ｆｍ
ｏｃなどが用いられる。
ば、Ｚ、Ｂｏｃ、ｔ−ペンチルオキシカルボニル、イソ
ボルニルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキ
シカルボニル、Ｃｌ−Ｚ、Ｂｒ−Ｚ、アダマンチルオキ
シカルボニル、トリフルオロアセチル、フタロイル、ホ
ルミル、２−ニトロフェニルスルフェニル、ジフェニル
ホスフィノチオイル、Ｆｍｏｃなどが用いられる。カル
ボキシル基は、例えば、アルキルエステル化（例えば、
メチル、エチル、プロピル、ブチル、ｔ−ブチル、シク
ロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロ
オクチル、２−アダマンチルなどの直鎖状、分枝状もし
くは環状アルキルエステル化）、アラルキルエステル化
（例えば、ベンジルエステル、４−ニトロベンジルエス
テル、４−メトキシベンジルエステル、４−クロロベン
ジルエステル、ベンズヒドリルエステル化）、フェナシ
ルエステル化、ベンジルオキシカルボニルヒドラジド
化、ｔ−ブトキシカルボニルヒドラジド化、トリチルヒ
ドラジド化などによって保護することができる。セリン
の水酸基は、例えば、エステル化またはエーテル化によ
って保護することができる。このエステル化に適する基
としては、例えば、アセチル基などの低級（Ｃ1-6）ア
ルカノイル基、ベンゾイル基などのアロイル基、ベンジ
ルオキシカルボニル基、エトキシカルボニル基などの炭
酸から誘導される基などが用いられる。また、エーテル
化に適する基としては、例えば、ベンジル基、テトラヒ
ドロピラニル基、ｔ−ブチル基などである。チロシンの
フェノール性水酸基の保護基としては、例えば、Ｂｚ
ｌ、Ｃｌ2−Ｂｚｌ、２−ニトロベンジル、Ｂｒ−Ｚ、
ｔ−ブチルなどが用いられる。ヒスチジンのイミダゾー
ルの保護基としては、例えば、Ｔｏｓ、４−メトキシ−
２，３，６−トリメチルベンゼンスルホニル、ＤＮＰ、
ベンジルオキシメチル、Ｂｕｍ、Ｂｏｃ、Ｔｒｔ、Ｆｍ
ｏｃなどが用いられる。
【００２４】原料のカルボキシル基の活性化されたもの
としては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エ
ステル〔アルコール（例えば、ペンタクロロフェノー
ル、２，４，５−トリクロロフェノール、２，４−ジニ
トロフェノール、シアノメチルアルコール、パラニトロ
フェノール、ＨＯＮＢ、Ｎ−ヒドロキシスクシミド、Ｎ
−ヒドロキシフタルイミド、ＨＯＢｔ）とのエステル〕
などが用いられる。原料のアミノ基の活性化されたもの
としては、例えば、対応するリン酸アミドが用いられ
る。保護基の除去（脱離）方法としては、例えば、Ｐｄ
−黒あるいはＰｄ−炭素などの触媒の存在下での水素気
流中での接触還元や、また、無水フッ化水素、メタンス
ルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオ
ロ酢酸あるいはこれらの混合液などによる酸処理や、ジ
イソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピペリ
ジン、ピペラジンなどによる塩基処理、また液体アンモ
ニア中ナトリウムによる還元なども用いられる。上記酸
処理による脱離反応は、一般に約−２０℃〜４０℃の温
度で行なわれるが、酸処理においては、例えば、アニソ
ール、フェノール、チオアニソール、メタクレゾール、
パラクレゾール、ジメチルスルフィド、１，４−ブタン
ジチオール、１，２−エタンジチオールなどのようなカ
チオン捕捉剤の添加が有効である。また、ヒスチジンの
イミダゾール保護基として用いられる２，４−ジニトロ
フェニル基はチオフェノール処理により除去され、トリ
プトファンのインドール保護基として用いられるホルミ
ル基は上記の１，２−エタンジチオール、１，４−ブタ
ンジチオールなどの存在下の酸処理による脱保護以外
に、希水酸化ナトリウム溶液、希アンモニアなどによる
アルカリ処理によっても除去される。
としては、例えば、対応する酸無水物、アジド、活性エ
ステル〔アルコール（例えば、ペンタクロロフェノー
ル、２，４，５−トリクロロフェノール、２，４−ジニ
トロフェノール、シアノメチルアルコール、パラニトロ
フェノール、ＨＯＮＢ、Ｎ−ヒドロキシスクシミド、Ｎ
−ヒドロキシフタルイミド、ＨＯＢｔ）とのエステル〕
などが用いられる。原料のアミノ基の活性化されたもの
としては、例えば、対応するリン酸アミドが用いられ
る。保護基の除去（脱離）方法としては、例えば、Ｐｄ
−黒あるいはＰｄ−炭素などの触媒の存在下での水素気
流中での接触還元や、また、無水フッ化水素、メタンス
ルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、トリフルオ
ロ酢酸あるいはこれらの混合液などによる酸処理や、ジ
イソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、ピペリ
ジン、ピペラジンなどによる塩基処理、また液体アンモ
ニア中ナトリウムによる還元なども用いられる。上記酸
処理による脱離反応は、一般に約−２０℃〜４０℃の温
度で行なわれるが、酸処理においては、例えば、アニソ
ール、フェノール、チオアニソール、メタクレゾール、
パラクレゾール、ジメチルスルフィド、１，４−ブタン
ジチオール、１，２−エタンジチオールなどのようなカ
チオン捕捉剤の添加が有効である。また、ヒスチジンの
イミダゾール保護基として用いられる２，４−ジニトロ
フェニル基はチオフェノール処理により除去され、トリ
プトファンのインドール保護基として用いられるホルミ
ル基は上記の１，２−エタンジチオール、１，４−ブタ
ンジチオールなどの存在下の酸処理による脱保護以外
に、希水酸化ナトリウム溶液、希アンモニアなどによる
アルカリ処理によっても除去される。
【００２５】原料の反応に関与すべきでない官能基の保
護ならびに保護基、およびその保護基の脱離、反応に関
与する官能基の活性化などは公知の基または公知の手段
から適宜選択しうる。目的とするタンパク質もしくはペ
プチドのアミド体を得る別の方法としては、例えば、ま
ず、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基をア
ミド化して保護した後、アミノ基側にペプチド（タンパ
ク質）鎖を所望の鎖長まで延ばした後、該ペプチド鎖の
Ｎ末端のα−アミノ基の保護基のみを除いたタンパク質
もしくはペプチドとＣ末端のカルボキシル基の保護基の
みを除去したタンパク質もしくはペプチドとを製造し、
この両タンパク質またはペプチドを上記したような混合
溶媒中で縮合させる。縮合反応の詳細については上記と
同様である。縮合により得られた保護タンパク質もしく
はペプチドを精製した後、上記方法によりすべての保護
基を除去し、所望の粗タンパク質またはペプチドを得る
ことができる。この粗タンパク質またはペプチドは既知
の各種精製手段を駆使して精製し、主要画分を凍結乾燥
することで所望のタンパク質もしくはペプチドのアミド
体を得ることができる。目的とするタンパク質もしくは
ペプチドのエステル体を得るには、例えば、カルボキシ
末端アミノ酸のα−カルボキシル基を所望のアルコール
類と縮合しアミノ酸エステルとした後、タンパク質もし
くはペプチドのアミド体と同様にして、所望のタンパク
質もしくはペプチドのエステル体を得ることができる。
護ならびに保護基、およびその保護基の脱離、反応に関
与する官能基の活性化などは公知の基または公知の手段
から適宜選択しうる。目的とするタンパク質もしくはペ
プチドのアミド体を得る別の方法としては、例えば、ま
ず、カルボキシ末端アミノ酸のα−カルボキシル基をア
ミド化して保護した後、アミノ基側にペプチド（タンパ
ク質）鎖を所望の鎖長まで延ばした後、該ペプチド鎖の
Ｎ末端のα−アミノ基の保護基のみを除いたタンパク質
もしくはペプチドとＣ末端のカルボキシル基の保護基の
みを除去したタンパク質もしくはペプチドとを製造し、
この両タンパク質またはペプチドを上記したような混合
溶媒中で縮合させる。縮合反応の詳細については上記と
同様である。縮合により得られた保護タンパク質もしく
はペプチドを精製した後、上記方法によりすべての保護
基を除去し、所望の粗タンパク質またはペプチドを得る
ことができる。この粗タンパク質またはペプチドは既知
の各種精製手段を駆使して精製し、主要画分を凍結乾燥
することで所望のタンパク質もしくはペプチドのアミド
体を得ることができる。目的とするタンパク質もしくは
ペプチドのエステル体を得るには、例えば、カルボキシ
末端アミノ酸のα−カルボキシル基を所望のアルコール
類と縮合しアミノ酸エステルとした後、タンパク質もし
くはペプチドのアミド体と同様にして、所望のタンパク
質もしくはペプチドのエステル体を得ることができる。
【００２６】本発明のタンパク質、本発明の部分ペプチ
ド、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質、本発明のＩＲＡ
Ｐ結合部分ペプチドは、公知のペプチドの合成法に従っ
て、あるいはタンパク質を適当なペプチダーゼで切断す
ることによって製造することができる。ペプチドの合成
法としては、例えば、固相合成法、液相合成法のいずれ
によっても良い。すなわち、本発明のタンパク質、本発
明の部分ペプチド、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質ま
たは本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチドの部分ペプチド
を構成し得る部分ペプチドもしくはアミノ酸と残余部分
（ペプチドもしくはアミノ酸）とを縮合させ、生成物が
保護基を有する場合は保護基を脱離することにより目的
のタンパク質またはペプチドを製造することができる。
公知の縮合方法や保護基の脱離としては、例えば、以下
の〜に記載された方法があげられる。 M. Bodanszky および M.A. Ondetti、ペプチド・シン
セシス (Peptide Synthesis), Interscience Publisher
s, New York (1966年)； SchroederおよびLuebke、ザ・ペプチド(The Peptid
e), Academic Press, NewYork (1965年)； 泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株)
（1975年）； 矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 タン
パク質の化学IV、 205、(1977年)； 矢島治明監修、続医薬品の開発、第14巻、ペプチド合
成、広川書店。また、反応後は通常の精製法、例えば、
溶媒抽出・蒸留・カラムクロマトグラフィー・液体クロ
マトグラフィー・再結晶などを組み合わせて本発明のタ
ンパク質、本発明の部分ペプチド、本発明のＩＲＡＰ結
合タンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチド
を精製単離することができる。上記方法で得られるタン
パク質またはペプチドが遊離体である場合は、公知の方
法あるいはそれに準じる方法によって適当な塩に変換す
ることができるし、逆に塩で得られた場合は、公知の方
法あるいはそれに準じる方法によって遊離体または他の
塩に変換することができる。
ド、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質、本発明のＩＲＡ
Ｐ結合部分ペプチドは、公知のペプチドの合成法に従っ
て、あるいはタンパク質を適当なペプチダーゼで切断す
ることによって製造することができる。ペプチドの合成
法としては、例えば、固相合成法、液相合成法のいずれ
によっても良い。すなわち、本発明のタンパク質、本発
明の部分ペプチド、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質ま
たは本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチドの部分ペプチド
を構成し得る部分ペプチドもしくはアミノ酸と残余部分
（ペプチドもしくはアミノ酸）とを縮合させ、生成物が
保護基を有する場合は保護基を脱離することにより目的
のタンパク質またはペプチドを製造することができる。
公知の縮合方法や保護基の脱離としては、例えば、以下
の〜に記載された方法があげられる。 M. Bodanszky および M.A. Ondetti、ペプチド・シン
セシス (Peptide Synthesis), Interscience Publisher
s, New York (1966年)； SchroederおよびLuebke、ザ・ペプチド(The Peptid
e), Academic Press, NewYork (1965年)； 泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株)
（1975年）； 矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 タン
パク質の化学IV、 205、(1977年)； 矢島治明監修、続医薬品の開発、第14巻、ペプチド合
成、広川書店。また、反応後は通常の精製法、例えば、
溶媒抽出・蒸留・カラムクロマトグラフィー・液体クロ
マトグラフィー・再結晶などを組み合わせて本発明のタ
ンパク質、本発明の部分ペプチド、本発明のＩＲＡＰ結
合タンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチド
を精製単離することができる。上記方法で得られるタン
パク質またはペプチドが遊離体である場合は、公知の方
法あるいはそれに準じる方法によって適当な塩に変換す
ることができるし、逆に塩で得られた場合は、公知の方
法あるいはそれに準じる方法によって遊離体または他の
塩に変換することができる。
【００２７】本発明のタンパク質をコードするポリヌク
レオチドとしては、上記した本発明のタンパク質をコー
ドする塩基配列（ＤＮＡまたはＲＮＡ、好ましくはＤＮ
Ａ）を含有するものであればいかなるものであってもよ
い。該ポリヌクレオチドとしては、本発明のタンパク質
をコードするＤＮＡ、ｍＲＮＡ等のＲＮＡであり、二本
鎖であっても、一本鎖であってもよい。二本鎖の場合
は、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡまたはＤＮＡ：ＲＮＡ
のハイブリッドでもよい。一本鎖の場合は、センス鎖
（すなわち、コード鎖）であっても、アンチセンス鎖
（すなわち、非コード鎖）であってもよい。本発明のタ
ンパク質をコードするポリヌクレオチドを用いて、例え
ば、公知の実験医学増刊「新ＰＣＲとその応用」15
(7)、1997記載の方法またはそれに準じた方法により、
本発明のタンパク質のｍＲＮＡを定量することができ
る。本発明のタンパク質をコードするＤＮＡとしては、
前述した本発明のタンパク質をコードする塩基配列を含
有するものであればいかなるものであってもよい。ま
た、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記し
た細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組織由来
のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよ
い。ライブラリーに使用するベクターは、バクテリオフ
ァージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいず
れであってもよい。また、前記した細胞・組織よりtota
l ＲＮＡまたはｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて直
接Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction
（以下、ＲＴ−ＰＣＲ法と略称する）によって増幅する
こともできる。
レオチドとしては、上記した本発明のタンパク質をコー
ドする塩基配列（ＤＮＡまたはＲＮＡ、好ましくはＤＮ
Ａ）を含有するものであればいかなるものであってもよ
い。該ポリヌクレオチドとしては、本発明のタンパク質
をコードするＤＮＡ、ｍＲＮＡ等のＲＮＡであり、二本
鎖であっても、一本鎖であってもよい。二本鎖の場合
は、二本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡまたはＤＮＡ：ＲＮＡ
のハイブリッドでもよい。一本鎖の場合は、センス鎖
（すなわち、コード鎖）であっても、アンチセンス鎖
（すなわち、非コード鎖）であってもよい。本発明のタ
ンパク質をコードするポリヌクレオチドを用いて、例え
ば、公知の実験医学増刊「新ＰＣＲとその応用」15
(7)、1997記載の方法またはそれに準じた方法により、
本発明のタンパク質のｍＲＮＡを定量することができ
る。本発明のタンパク質をコードするＤＮＡとしては、
前述した本発明のタンパク質をコードする塩基配列を含
有するものであればいかなるものであってもよい。ま
た、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記し
た細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組織由来
のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよ
い。ライブラリーに使用するベクターは、バクテリオフ
ァージ、プラスミド、コスミド、ファージミドなどいず
れであってもよい。また、前記した細胞・組織よりtota
l ＲＮＡまたはｍＲＮＡ画分を調製したものを用いて直
接Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction
（以下、ＲＴ−ＰＣＲ法と略称する）によって増幅する
こともできる。
【００２８】本発明のタンパク質をコードするＤＮＡと
しては、例えば、配列番号：４で表わされる塩基配列を
含有するＤＮＡ、または配列番号：４で表わされる塩基
配列を含有するＤＮＡとハイストリンジェントな条件下
でハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明のタンパ
ク質と実質的に同質の性質を有するタンパク質をコード
するＤＮＡであれば何れのものでもよい。配列番号：４
で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡとハイストリン
ジェントな条件下でハイブリダイズできるＤＮＡとして
は、例えば、配列番号：４で表わされる塩基配列と約９
８％以上、好ましくは約９９％以上の相同性を有する塩
基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。ハイブリダ
イゼーションは、公知の方法あるいはそれに準じる方
法、例えば、モレキュラー・クローニング（Molecular
Cloning）２nd（J. Sambrook et al.,Cold Spring Harb
or Lab. Press, 1989）に記載の方法などに従って行う
ことができる。また、市販のライブラリーを使用する場
合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行うことが
できる。より好ましくは、ハイストリンジェントな条件
に従って行うことができる。ハイストリンジェントな条
件とは、例えば、ナトリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、
好ましくは約１９〜２０ｍＭで、温度が約５０〜７０
℃、好ましくは約６０〜６５℃の条件を示す。特に、ナ
トリウム濃度が約１９ｍＭで温度が約６５℃の場合が最
も好ましい。
しては、例えば、配列番号：４で表わされる塩基配列を
含有するＤＮＡ、または配列番号：４で表わされる塩基
配列を含有するＤＮＡとハイストリンジェントな条件下
でハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明のタンパ
ク質と実質的に同質の性質を有するタンパク質をコード
するＤＮＡであれば何れのものでもよい。配列番号：４
で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡとハイストリン
ジェントな条件下でハイブリダイズできるＤＮＡとして
は、例えば、配列番号：４で表わされる塩基配列と約９
８％以上、好ましくは約９９％以上の相同性を有する塩
基配列を含有するＤＮＡなどが用いられる。ハイブリダ
イゼーションは、公知の方法あるいはそれに準じる方
法、例えば、モレキュラー・クローニング（Molecular
Cloning）２nd（J. Sambrook et al.,Cold Spring Harb
or Lab. Press, 1989）に記載の方法などに従って行う
ことができる。また、市販のライブラリーを使用する場
合、添付の使用説明書に記載の方法に従って行うことが
できる。より好ましくは、ハイストリンジェントな条件
に従って行うことができる。ハイストリンジェントな条
件とは、例えば、ナトリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、
好ましくは約１９〜２０ｍＭで、温度が約５０〜７０
℃、好ましくは約６０〜６５℃の条件を示す。特に、ナ
トリウム濃度が約１９ｍＭで温度が約６５℃の場合が最
も好ましい。
【００２９】本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡ
としては、前述した本発明の部分ペプチドをコードする
塩基配列を含有するものであればいかなるものであって
もよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリ
ー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞
・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいず
れでもよい。本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡ
としては、例えば、配列番号：４で表わされる塩基配列
の一部分を有するＤＮＡ、または配列番号：４で表わさ
れる塩基配列を有するＤＮＡとハイストリンジェントな
条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明の
タンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質を
コードするＤＮＡの一部分を有するＤＮＡなどが用いら
れる。本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡとして
は、例えば、（１）配列番号：３で表されるアミノ酸配
列のＮ末端から第１３１番目（Ｍｅｔ）〜第１４０番目
（Ｐｈｅ）で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配
列を含有するＤＮＡ（すなわち配列番号：４で表される
塩基配列の第３９１番目（Ａ）〜第４２０番目（Ｃ）で
表される塩基配列を含有するＤＮＡ）、または配列番
号：４で表される塩基配列の第３９１番目（Ａ）〜第４
２０番目（Ｃ）で表される塩基配列を含有するＤＮＡと
ハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩
基配列を含有するＤＮＡ、（２）配列番号：３で表され
るアミノ酸配列のＮ末端から数えて第１３１番目（Ｍｅ
ｔ）〜第１４０番目（Ｐｈｅ）で表されるアミノ酸配列
（配列番号：２１）のＮ末端に、配列番号：３で表され
るアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第１３０番目
（Ｓｅｒ）で表されるアミノ酸配列（配列番号：１）の
Ｃ末端から数えて１〜１２９個のアミノ酸残基を付加し
たアミノ酸配列をコードする塩基配列を含有するＤＮＡ
（すなわち配列番号：４で表される塩基配列の第３９１
番目（Ａ）〜第４２０番目（Ｃ）で表される塩基配列を
含有するＤＮＡの５’末端側に配列番号：４で表される
塩基配列の第１番目（Ａ）〜第３９０番目（Ａ）で表さ
れる塩基配列の３’末端から数えて３〜３８７個（ただ
し３の倍数個）の塩基配列を付加した塩基配列を含有す
るＤＮＡ）、または配列番号：４で表される塩基配列の
第３９１番目（Ａ）〜第４２０番目（Ｃ）で表される塩
基配列を含有するＤＮＡの５’末端側に配列番号：４で
表される塩基配列の第１番目（Ａ）〜第３９０番目
（Ａ）で表される塩基配列の３’末端から数えて３〜３
８７個（ただし３の倍数個）の塩基配列を付加した塩基
配列を含有するＤＮＡとハイストリンジェントな条件下
でハイブリダイズする塩基配列を含有するＤＮＡ、
（３）配列番号：３で表されるアミノ酸配列のＮ末端か
ら第１０９番目（Ｖａｌ）〜第１４０番目（Ｐｈｅ）で
表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を含有する
ＤＮＡ（すなわち配列番号：４で表される塩基配列の第
３２５番目（Ｇ）〜第４２０番目（Ｃ）で表される塩基
配列を含有するＤＮＡ）、または配列番号：４で表され
る塩基配列の第３２５番目（Ｇ）〜第４２０番目（Ｃ）
で表される塩基配列を含有するＤＮＡとハイストリンジ
ェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を含有す
るＤＮＡなどが好ましく用いられる。ハイブリダイゼー
ションは、公知の方法あるいはそれに準じる方法、例え
ば、モレキュラー・クローニング（Molecular Clonin
g）２nd（J. Sambrook et al.,Cold Spring Harbor La
b. Press, 1989）に記載の方法などに従って行うことが
できる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添
付の使用説明書に記載の方法に従って行うことができ
る。より好ましくは、ハイストリンジェントな条件に従
って行うことができる。ハイストリンジェントな条件と
は、例えば、ナトリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ま
しくは約１９〜２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好
ましくは約６０〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウ
ム濃度が約１９ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ま
しい。
としては、前述した本発明の部分ペプチドをコードする
塩基配列を含有するものであればいかなるものであって
もよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮＡライブラリ
ー、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡ、前記した細胞
・組織由来のｃＤＮＡライブラリー、合成ＤＮＡのいず
れでもよい。本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡ
としては、例えば、配列番号：４で表わされる塩基配列
の一部分を有するＤＮＡ、または配列番号：４で表わさ
れる塩基配列を有するＤＮＡとハイストリンジェントな
条件下でハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明の
タンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク質を
コードするＤＮＡの一部分を有するＤＮＡなどが用いら
れる。本発明の部分ペプチドをコードするＤＮＡとして
は、例えば、（１）配列番号：３で表されるアミノ酸配
列のＮ末端から第１３１番目（Ｍｅｔ）〜第１４０番目
（Ｐｈｅ）で表されるアミノ酸配列をコードする塩基配
列を含有するＤＮＡ（すなわち配列番号：４で表される
塩基配列の第３９１番目（Ａ）〜第４２０番目（Ｃ）で
表される塩基配列を含有するＤＮＡ）、または配列番
号：４で表される塩基配列の第３９１番目（Ａ）〜第４
２０番目（Ｃ）で表される塩基配列を含有するＤＮＡと
ハイストリンジェントな条件下でハイブリダイズする塩
基配列を含有するＤＮＡ、（２）配列番号：３で表され
るアミノ酸配列のＮ末端から数えて第１３１番目（Ｍｅ
ｔ）〜第１４０番目（Ｐｈｅ）で表されるアミノ酸配列
（配列番号：２１）のＮ末端に、配列番号：３で表され
るアミノ酸配列の第１番目（Ｍｅｔ）〜第１３０番目
（Ｓｅｒ）で表されるアミノ酸配列（配列番号：１）の
Ｃ末端から数えて１〜１２９個のアミノ酸残基を付加し
たアミノ酸配列をコードする塩基配列を含有するＤＮＡ
（すなわち配列番号：４で表される塩基配列の第３９１
番目（Ａ）〜第４２０番目（Ｃ）で表される塩基配列を
含有するＤＮＡの５’末端側に配列番号：４で表される
塩基配列の第１番目（Ａ）〜第３９０番目（Ａ）で表さ
れる塩基配列の３’末端から数えて３〜３８７個（ただ
し３の倍数個）の塩基配列を付加した塩基配列を含有す
るＤＮＡ）、または配列番号：４で表される塩基配列の
第３９１番目（Ａ）〜第４２０番目（Ｃ）で表される塩
基配列を含有するＤＮＡの５’末端側に配列番号：４で
表される塩基配列の第１番目（Ａ）〜第３９０番目
（Ａ）で表される塩基配列の３’末端から数えて３〜３
８７個（ただし３の倍数個）の塩基配列を付加した塩基
配列を含有するＤＮＡとハイストリンジェントな条件下
でハイブリダイズする塩基配列を含有するＤＮＡ、
（３）配列番号：３で表されるアミノ酸配列のＮ末端か
ら第１０９番目（Ｖａｌ）〜第１４０番目（Ｐｈｅ）で
表されるアミノ酸配列をコードする塩基配列を含有する
ＤＮＡ（すなわち配列番号：４で表される塩基配列の第
３２５番目（Ｇ）〜第４２０番目（Ｃ）で表される塩基
配列を含有するＤＮＡ）、または配列番号：４で表され
る塩基配列の第３２５番目（Ｇ）〜第４２０番目（Ｃ）
で表される塩基配列を含有するＤＮＡとハイストリンジ
ェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を含有す
るＤＮＡなどが好ましく用いられる。ハイブリダイゼー
ションは、公知の方法あるいはそれに準じる方法、例え
ば、モレキュラー・クローニング（Molecular Clonin
g）２nd（J. Sambrook et al.,Cold Spring Harbor La
b. Press, 1989）に記載の方法などに従って行うことが
できる。また、市販のライブラリーを使用する場合、添
付の使用説明書に記載の方法に従って行うことができ
る。より好ましくは、ハイストリンジェントな条件に従
って行うことができる。ハイストリンジェントな条件と
は、例えば、ナトリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ま
しくは約１９〜２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好
ましくは約６０〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウ
ム濃度が約１９ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ま
しい。
【００３０】本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質をコード
するＤＮＡとしては、例えば、配列番号：１１で表わさ
れる塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：１１
で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡとハイストリン
ジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有
し、配列番号：１０で表わされるアミノ酸配列を含有す
るＩＲＡＰ結合タンパク質と実質的に同質の性質を有す
るタンパク質をコードするＤＮＡであれば何れのもので
もよい。配列番号：１１で表わされる塩基配列を含有す
るＤＮＡとハイストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番号：１１で
表わされる塩基配列と約７０％以上、好ましくは約８０
％以上、より好ましくは約９０％以上、さらに好ましく
は約９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤ
ＮＡなどが用いられる。ハイブリダイゼーションは、公
知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュ
ラー・クローニング（Molecular Cloning）２nd（J. Sa
mbrook et al.,Cold Spring Harbor Lab. Press, 198
9）に記載の方法などに従って行うことができる。ま
た、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説
明書に記載の方法に従って行うことができる。より好ま
しくは、ハイストリンジェントな条件に従って行うこと
ができる。ハイストリンジェントな条件とは、例えば、
ナトリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９
〜２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６
０〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１
９ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ましい。より具
体的には、配列番号：１０で表わされるアミノ酸配列を
含有するタンパク質をコードするＤＮＡとしては、配列
番号：１１で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなど
が用いられる。
するＤＮＡとしては、例えば、配列番号：１１で表わさ
れる塩基配列を含有するＤＮＡ、または配列番号：１１
で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡとハイストリン
ジェントな条件下でハイブリダイズする塩基配列を有
し、配列番号：１０で表わされるアミノ酸配列を含有す
るＩＲＡＰ結合タンパク質と実質的に同質の性質を有す
るタンパク質をコードするＤＮＡであれば何れのもので
もよい。配列番号：１１で表わされる塩基配列を含有す
るＤＮＡとハイストリンジェントな条件下でハイブリダ
イズできるＤＮＡとしては、例えば、配列番号：１１で
表わされる塩基配列と約７０％以上、好ましくは約８０
％以上、より好ましくは約９０％以上、さらに好ましく
は約９５％以上の相同性を有する塩基配列を含有するＤ
ＮＡなどが用いられる。ハイブリダイゼーションは、公
知の方法あるいはそれに準じる方法、例えば、モレキュ
ラー・クローニング（Molecular Cloning）２nd（J. Sa
mbrook et al.,Cold Spring Harbor Lab. Press, 198
9）に記載の方法などに従って行うことができる。ま
た、市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説
明書に記載の方法に従って行うことができる。より好ま
しくは、ハイストリンジェントな条件に従って行うこと
ができる。ハイストリンジェントな条件とは、例えば、
ナトリウム濃度が約１９〜４０ｍＭ、好ましくは約１９
〜２０ｍＭで、温度が約５０〜７０℃、好ましくは約６
０〜６５℃の条件を示す。特に、ナトリウム濃度が約１
９ｍＭで温度が約６５℃の場合が最も好ましい。より具
体的には、配列番号：１０で表わされるアミノ酸配列を
含有するタンパク質をコードするＤＮＡとしては、配列
番号：１１で表わされる塩基配列を含有するＤＮＡなど
が用いられる。
【００３１】本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチドをコー
ドするＤＮＡとしては、前述した本発明のＩＲＡＰ結合
部分ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであ
ればいかなるものであってもよい。また、ゲノムＤＮ
Ａ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由
来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライ
ブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。本発明のＩＲ
ＡＰ結合部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、例
えば、配列番号：１１で表わされる塩基配列の一部分を
有するＤＮＡ、または配列番号：１１で表わされる塩基
配列を有するＤＮＡとハイストリンジェントな条件下で
ハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明のＩＲＡＰ
結合タンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク
質をコードするＤＮＡの一部分を有するＤＮＡなどが用
いられる。
ドするＤＮＡとしては、前述した本発明のＩＲＡＰ結合
部分ペプチドをコードする塩基配列を含有するものであ
ればいかなるものであってもよい。また、ゲノムＤＮ
Ａ、ゲノムＤＮＡライブラリー、前記した細胞・組織由
来のｃＤＮＡ、前記した細胞・組織由来のｃＤＮＡライ
ブラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。本発明のＩＲ
ＡＰ結合部分ペプチドをコードするＤＮＡとしては、例
えば、配列番号：１１で表わされる塩基配列の一部分を
有するＤＮＡ、または配列番号：１１で表わされる塩基
配列を有するＤＮＡとハイストリンジェントな条件下で
ハイブリダイズする塩基配列を有し、本発明のＩＲＡＰ
結合タンパク質と実質的に同質の活性を有するタンパク
質をコードするＤＮＡの一部分を有するＤＮＡなどが用
いられる。
【００３２】本発明のタンパク質、本発明の部分ペプチ
ド（以下、これらを単に「本発明のタンパク質」と略記
することもある）、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質、
本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチド（以下、これらを単
に「本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質」と略記すること
もある）をコードするＤＮＡのクローニングの手段とし
ては、本発明のタンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合
タンパク質の部分塩基配列を有する合成ＤＮＡプライマ
ーを用いてＰＣＲ法によって増幅するか、または適当な
ベクターに組み込んだＤＮＡを本発明のタンパク質また
は本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質の一部あるいは全領
域をコードするＤＮＡ断片もしくは合成ＤＮＡを用いて
標識したものとのハイブリダイゼーションによって選別
することができる。ハイブリダイゼーションの方法は、
例えば、モレキュラー・クローニング（Molecular Clon
ing）２nd（J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor
Lab. Press, 1989）に記載の方法などに従って行うこと
ができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、
添付の使用説明書に記載の方法に従って行うことができ
る。ＤＮＡの塩基配列の変換は、公知のキット、例え
ば、MutanTM-super ExpressKm（宝酒造（株））、Mutan
TM-K（宝酒造（株））等を用いて、ODA-LA PCR法やGapp
ed duplex法やKunkel法等の公知の方法あるいはそれら
に準じる方法に従って行うことができる。クローン化さ
れた本発明のタンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タ
ンパク質をコードするＤＮＡは目的によりそのまま、ま
たは所望により制限酵素で消化したり、リンカーを付加
したりして使用することができる。該ＤＮＡはその５’
末端側に翻訳開始コドンとしてのＡＴＧを有し、また
３’末端側には翻訳終止コドンとしてのＴＡＡ、ＴＧＡ
またはＴＡＧを有していてもよい。これらの翻訳開始コ
ドンや翻訳終止コドンは、適当な合成ＤＮＡアダプター
を用いて付加することもできる。本発明のタンパク質ま
たは本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質の発現ベクター
は、例えば、（イ）本発明のタンパク質または本発明の
ＩＲＡＰ結合タンパク質をコードするＤＮＡから目的と
するＤＮＡ断片を切り出し、（ロ）該ＤＮＡ断片を適当
な発現ベクター中のプロモーターの下流に連結すること
により製造することができる。
ド（以下、これらを単に「本発明のタンパク質」と略記
することもある）、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質、
本発明のＩＲＡＰ結合部分ペプチド（以下、これらを単
に「本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質」と略記すること
もある）をコードするＤＮＡのクローニングの手段とし
ては、本発明のタンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合
タンパク質の部分塩基配列を有する合成ＤＮＡプライマ
ーを用いてＰＣＲ法によって増幅するか、または適当な
ベクターに組み込んだＤＮＡを本発明のタンパク質また
は本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質の一部あるいは全領
域をコードするＤＮＡ断片もしくは合成ＤＮＡを用いて
標識したものとのハイブリダイゼーションによって選別
することができる。ハイブリダイゼーションの方法は、
例えば、モレキュラー・クローニング（Molecular Clon
ing）２nd（J. Sambrook et al., Cold Spring Harbor
Lab. Press, 1989）に記載の方法などに従って行うこと
ができる。また、市販のライブラリーを使用する場合、
添付の使用説明書に記載の方法に従って行うことができ
る。ＤＮＡの塩基配列の変換は、公知のキット、例え
ば、MutanTM-super ExpressKm（宝酒造（株））、Mutan
TM-K（宝酒造（株））等を用いて、ODA-LA PCR法やGapp
ed duplex法やKunkel法等の公知の方法あるいはそれら
に準じる方法に従って行うことができる。クローン化さ
れた本発明のタンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タ
ンパク質をコードするＤＮＡは目的によりそのまま、ま
たは所望により制限酵素で消化したり、リンカーを付加
したりして使用することができる。該ＤＮＡはその５’
末端側に翻訳開始コドンとしてのＡＴＧを有し、また
３’末端側には翻訳終止コドンとしてのＴＡＡ、ＴＧＡ
またはＴＡＧを有していてもよい。これらの翻訳開始コ
ドンや翻訳終止コドンは、適当な合成ＤＮＡアダプター
を用いて付加することもできる。本発明のタンパク質ま
たは本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質の発現ベクター
は、例えば、（イ）本発明のタンパク質または本発明の
ＩＲＡＰ結合タンパク質をコードするＤＮＡから目的と
するＤＮＡ断片を切り出し、（ロ）該ＤＮＡ断片を適当
な発現ベクター中のプロモーターの下流に連結すること
により製造することができる。
【００３３】ベクターとしては、大腸菌由来のプラスミ
ド（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１２，ｐ
ＵＣ１３）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ１１
０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミド
（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファージなどのバ
クテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウイル
ス，バキュロウイルスなどの動物ウイルスなどの他、ｐ
Ａ１−１１、ｐＸＴ１、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳ
Ｖ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどが用いられる。本発明で
用いられるプロモーターとしては、遺伝子の発現に用い
る宿主に対応して適切なプロモーターであればいかなる
ものでもよい。例えば、動物細胞を宿主として用いる場
合は、ＳＲαプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、Ｌ
ＴＲプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＨＳＶ-ＴＫ
プロモーターなどがあげられる。これらのうち、ＣＭＶ
（サイトメガロウイルス）プロモーター、ＳＲαプロモ
ーターなどを用いるのが好ましい。宿主がエシェリヒア
属菌である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモ
ーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰLプロモーター、
ｌｐｐプロモーター、Ｔ７プロモーターなどが、宿主が
バチルス属菌である場合は、ＳＰＯ１プロモーター、Ｓ
ＰＯ２プロモーター、ｐｅｎＰプロモーターなど、宿主
が酵母である場合は、ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプ
ロモーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨプロモーター
などが好ましい。宿主が昆虫細胞である場合は、ポリヘ
ドリンプロモーター、Ｐ１０プロモーターなどが好まし
い。
ド（例、ｐＢＲ３２２，ｐＢＲ３２５，ｐＵＣ１２，ｐ
ＵＣ１３）、枯草菌由来のプラスミド（例、ｐＵＢ１１
０，ｐＴＰ５，ｐＣ１９４）、酵母由来プラスミド
（例、ｐＳＨ１９，ｐＳＨ１５）、λファージなどのバ
クテリオファージ、レトロウイルス，ワクシニアウイル
ス，バキュロウイルスなどの動物ウイルスなどの他、ｐ
Ａ１−１１、ｐＸＴ１、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐＲｃ／ＲＳ
Ｖ、ｐｃＤＮＡＩ／Ｎｅｏなどが用いられる。本発明で
用いられるプロモーターとしては、遺伝子の発現に用い
る宿主に対応して適切なプロモーターであればいかなる
ものでもよい。例えば、動物細胞を宿主として用いる場
合は、ＳＲαプロモーター、ＳＶ４０プロモーター、Ｌ
ＴＲプロモーター、ＣＭＶプロモーター、ＨＳＶ-ＴＫ
プロモーターなどがあげられる。これらのうち、ＣＭＶ
（サイトメガロウイルス）プロモーター、ＳＲαプロモ
ーターなどを用いるのが好ましい。宿主がエシェリヒア
属菌である場合は、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモ
ーター、ｒｅｃＡプロモーター、λＰLプロモーター、
ｌｐｐプロモーター、Ｔ７プロモーターなどが、宿主が
バチルス属菌である場合は、ＳＰＯ１プロモーター、Ｓ
ＰＯ２プロモーター、ｐｅｎＰプロモーターなど、宿主
が酵母である場合は、ＰＨＯ５プロモーター、ＰＧＫプ
ロモーター、ＧＡＰプロモーター、ＡＤＨプロモーター
などが好ましい。宿主が昆虫細胞である場合は、ポリヘ
ドリンプロモーター、Ｐ１０プロモーターなどが好まし
い。
【００３４】発現ベクターには、以上の他に、所望によ
りエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加
シグナル、選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以
下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場合がある）などを含有
しているものを用いることができる。選択マーカーとし
ては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（以下、ｄｈｆｒ
と略称する場合がある）遺伝子〔メソトレキセート（Ｍ
ＴＸ）耐性〕、アンピシリン耐性遺伝子（以下、Ａｍｐ
rと略称する場合がある）、ネオマイシン耐性遺伝子
（以下、Ｎｅｏrと略称する場合がある、Ｇ４１８耐
性）等があげられる。特に、ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイ
ニーズハムスター細胞を用いてｄｈｆｒ遺伝子を選択マ
ーカーとして使用する場合、目的遺伝子をチミジンを含
まない培地によっても選択できる。また、必要に応じ
て、宿主に合ったシグナル配列をコードするＤＮＡを、
本発明のタンパク質をコードするＤＮＡの５’端末側に
付加する。宿主がエシェリヒア属菌である場合は、Ｐｈ
ｏＡ・シグナル配列、ＯｍｐＡ・シグナル配列などが、
宿主がバチルス属菌である場合は、α−アミラーゼ・シ
グナル配列、サブチリシン・シグナル配列などが、宿主
が酵母である場合は、ＭＦα・シグナル配列、ＳＵＣ２
・シグナル配列など、宿主が動物細胞である場合には、
インシュリン・シグナル配列、α−インターフェロン・
シグナル配列、抗体分子・シグナル配列などのシグナル
配列がそれぞれ利用できる。このようにして構築された
本発明のタンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タンパ
ク質をコードするＤＮＡを含有するベクターを用いて、
形質転換体を製造することができる。
りエンハンサー、スプライシングシグナル、ポリＡ付加
シグナル、選択マーカー、ＳＶ４０複製オリジン（以
下、ＳＶ４０ｏｒｉと略称する場合がある）などを含有
しているものを用いることができる。選択マーカーとし
ては、例えば、ジヒドロ葉酸還元酵素（以下、ｄｈｆｒ
と略称する場合がある）遺伝子〔メソトレキセート（Ｍ
ＴＸ）耐性〕、アンピシリン耐性遺伝子（以下、Ａｍｐ
rと略称する場合がある）、ネオマイシン耐性遺伝子
（以下、Ｎｅｏrと略称する場合がある、Ｇ４１８耐
性）等があげられる。特に、ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャイ
ニーズハムスター細胞を用いてｄｈｆｒ遺伝子を選択マ
ーカーとして使用する場合、目的遺伝子をチミジンを含
まない培地によっても選択できる。また、必要に応じ
て、宿主に合ったシグナル配列をコードするＤＮＡを、
本発明のタンパク質をコードするＤＮＡの５’端末側に
付加する。宿主がエシェリヒア属菌である場合は、Ｐｈ
ｏＡ・シグナル配列、ＯｍｐＡ・シグナル配列などが、
宿主がバチルス属菌である場合は、α−アミラーゼ・シ
グナル配列、サブチリシン・シグナル配列などが、宿主
が酵母である場合は、ＭＦα・シグナル配列、ＳＵＣ２
・シグナル配列など、宿主が動物細胞である場合には、
インシュリン・シグナル配列、α−インターフェロン・
シグナル配列、抗体分子・シグナル配列などのシグナル
配列がそれぞれ利用できる。このようにして構築された
本発明のタンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タンパ
ク質をコードするＤＮＡを含有するベクターを用いて、
形質転換体を製造することができる。
【００３５】宿主としては、例えば、エシェリヒア属
菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞な
どが用いられる。エシェリヒア属菌の具体例としては、
例えば、エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１
２・ＤＨ１〔プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル
・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユー
エスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），６０
巻，１６０(１９６８)〕，ＪＭ１０３〔ヌクイレック・
アシッズ・リサーチ（Nucleic Acids Research），９
巻，３０９(１９８１)〕，ＪＡ２２１〔ジャーナル・オ
ブ・モレキュラー・バイオロジー（Journal of Molecul
ar Biology），１２０巻，５１７(１９７８)〕，ＨＢ１
０１〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジ
ー，４１巻，４５９(１９６９)〕，Ｃ６００〔ジェネテ
ィックス（Genetics），３９巻，４４０(１９５４)〕な
どが用いられる。バチルス属菌としては、例えば、バチ
ルス・サブチルス（Bacillus subtilis）ＭＩ１１４
〔ジーン，２４巻，２５５(１９８３)〕，２０７−２１
〔ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Journal of
Biochemistry），９５巻，８７(１９８４)〕などが用
いられる。酵母としては、例えば、サッカロマイセス・
セレビシェ（Saccharomyces cerevisiae）ＡＨ２２、Ａ
Ｈ２２Ｒ-、ＮＡ８７−１１Ａ、ＤＫＤ−５Ｄ、２０Ｂ
−１２、Ｙ１９０、シゾサッカロマイセス・ポンベ（Sc
hizosaccharomyces pombe）ＮＣＹＣ１９１３、ＮＣＹ
Ｃ２０３６、ピキア・パストリス（Pichia pastoris）
ＫＭ７１などが用いられる。
菌、バチルス属菌、酵母、昆虫細胞、昆虫、動物細胞な
どが用いられる。エシェリヒア属菌の具体例としては、
例えば、エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１
２・ＤＨ１〔プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル
・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユー
エスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ），６０
巻，１６０(１９６８)〕，ＪＭ１０３〔ヌクイレック・
アシッズ・リサーチ（Nucleic Acids Research），９
巻，３０９(１９８１)〕，ＪＡ２２１〔ジャーナル・オ
ブ・モレキュラー・バイオロジー（Journal of Molecul
ar Biology），１２０巻，５１７(１９７８)〕，ＨＢ１
０１〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジ
ー，４１巻，４５９(１９６９)〕，Ｃ６００〔ジェネテ
ィックス（Genetics），３９巻，４４０(１９５４)〕な
どが用いられる。バチルス属菌としては、例えば、バチ
ルス・サブチルス（Bacillus subtilis）ＭＩ１１４
〔ジーン，２４巻，２５５(１９８３)〕，２０７−２１
〔ジャーナル・オブ・バイオケミストリー（Journal of
Biochemistry），９５巻，８７(１９８４)〕などが用
いられる。酵母としては、例えば、サッカロマイセス・
セレビシェ（Saccharomyces cerevisiae）ＡＨ２２、Ａ
Ｈ２２Ｒ-、ＮＡ８７−１１Ａ、ＤＫＤ−５Ｄ、２０Ｂ
−１２、Ｙ１９０、シゾサッカロマイセス・ポンベ（Sc
hizosaccharomyces pombe）ＮＣＹＣ１９１３、ＮＣＹ
Ｃ２０３６、ピキア・パストリス（Pichia pastoris）
ＫＭ７１などが用いられる。
【００３６】昆虫細胞としては、例えば、ウイルスがＡ
ｃＮＰＶの場合は、ヨトウガの幼虫由来株化細胞（Spod
optera frugiperda cell；Ｓｆ細胞）、Trichoplusia n
iの中腸由来のＭＧ１細胞、Trichoplusia niの卵由来の
High FiveTM細胞、Mamestrabrassicae由来の細胞または
Estigmena acrea由来の細胞などが用いられる。ウイル
スがＢｍＮＰＶの場合は、カイコ由来株化細胞（Bombyx
mori N 細胞；ＢｍＮ細胞）などが用いられる。該Ｓｆ
細胞としては、例えば、Ｓｆ９細胞（ATCC CRL1711）、
Ｓｆ２１細胞（以上、Vaughn, J.L.ら、イン・ヴィボ
（In Vivo）,13, 213-217,(1977)）などが用いられる。
昆虫としては、例えば、カイコの幼虫などが用いられる
〔前田ら、ネイチャー（Nature），３１５巻，５９２
(１９８５)〕。動物細胞としては、例えば、サル細胞Ｃ
ＯＳ−７、Ｖero、チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ
（以下、ＣＨＯ細胞と略記）、ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャ
イニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ（ｄｈｆ
ｒ-）細胞と略記）、マウスＬ細胞、マウスＡｔＴ−２
０、マウスミエローマ細胞、ラットＧＨ３、ヒトＦＬ細
胞などが用いられる。エシェリヒア属菌を形質転換する
には、例えば、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナ
ル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユ
ーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ）、６９
巻、２１１０(１９７２)やジーン（Gene），１７巻，１
０７(１９８２)などに記載の方法に従って行うことがで
きる。
ｃＮＰＶの場合は、ヨトウガの幼虫由来株化細胞（Spod
optera frugiperda cell；Ｓｆ細胞）、Trichoplusia n
iの中腸由来のＭＧ１細胞、Trichoplusia niの卵由来の
High FiveTM細胞、Mamestrabrassicae由来の細胞または
Estigmena acrea由来の細胞などが用いられる。ウイル
スがＢｍＮＰＶの場合は、カイコ由来株化細胞（Bombyx
mori N 細胞；ＢｍＮ細胞）などが用いられる。該Ｓｆ
細胞としては、例えば、Ｓｆ９細胞（ATCC CRL1711）、
Ｓｆ２１細胞（以上、Vaughn, J.L.ら、イン・ヴィボ
（In Vivo）,13, 213-217,(1977)）などが用いられる。
昆虫としては、例えば、カイコの幼虫などが用いられる
〔前田ら、ネイチャー（Nature），３１５巻，５９２
(１９８５)〕。動物細胞としては、例えば、サル細胞Ｃ
ＯＳ−７、Ｖero、チャイニーズハムスター細胞ＣＨＯ
（以下、ＣＨＯ細胞と略記）、ｄｈｆｒ遺伝子欠損チャ
イニーズハムスター細胞ＣＨＯ（以下、ＣＨＯ（ｄｈｆ
ｒ-）細胞と略記）、マウスＬ細胞、マウスＡｔＴ−２
０、マウスミエローマ細胞、ラットＧＨ３、ヒトＦＬ細
胞などが用いられる。エシェリヒア属菌を形質転換する
には、例えば、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナ
ル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユ
ーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ）、６９
巻、２１１０(１９７２)やジーン（Gene），１７巻，１
０７(１９８２)などに記載の方法に従って行うことがで
きる。
【００３７】バチルス属菌を形質転換するには、例え
ば、モレキュラー・アンド・ジェネラル・ジェネティッ
クス（Molecular & General Genetics）、１６８巻、１
１１（１９７９）などに記載の方法に従って行うことが
できる。酵母を形質転換するには、例えば、メソッズ・
イン・エンザイモロジー（Methods in Enzymology）、
１９４巻、１８２−１８７（１９９１）、プロシージン
グズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイ
エンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Ac
ad. Sci. ＵＳＡ）、７５巻、１９２９（１９７８）な
どに記載の方法に従って行うことができる。昆虫細胞ま
たは昆虫を形質転換するには、例えば、バイオ／テクノ
ロジー（Bio/Technology）、６巻、４７−５５（１９８
８）などに記載の方法に従って行うことができる。動物
細胞を形質転換するには、例えば、細胞工学別冊８ 新
細胞工学実験プロトコール．２６３−２６７（１９９
５）（秀潤社発行）、ヴィロロジー（Virology）、５２
巻、４５６（１９７３）に記載の方法に従って行うこと
ができる。このようにして、本発明のタンパク質をコー
ドするＤＮＡを含有する発現ベクターで形質転換された
形質転換体を得ることができる。宿主がエシェリヒア属
菌、バチルス属菌である形質転換体を培養する際、培養
に使用される培地としては液体培地が適当であり、その
中には該形質転換体の生育に必要な炭素源、窒素源、無
機物その他が含有せしめられる。炭素源としては、例え
ば、グルコース、デキストリン、可溶性澱粉、ショ糖な
ど、窒素源としては、例えば、アンモニウム塩類、硝酸
塩類、コーンスチープ・リカー、ペプトン、カゼイン、
肉エキス、大豆粕、バレイショ抽出液などの無機または
有機物質、無機物としては、例えば、塩化カルシウム、
リン酸二水素ナトリウム、塩化マグネシウムなどがあげ
られる。また、酵母、ビタミン類、生長促進因子などを
添加してもよい。培地のｐＨは約５〜８が望ましい。
ば、モレキュラー・アンド・ジェネラル・ジェネティッ
クス（Molecular & General Genetics）、１６８巻、１
１１（１９７９）などに記載の方法に従って行うことが
できる。酵母を形質転換するには、例えば、メソッズ・
イン・エンザイモロジー（Methods in Enzymology）、
１９４巻、１８２−１８７（１９９１）、プロシージン
グズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイ
エンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Ac
ad. Sci. ＵＳＡ）、７５巻、１９２９（１９７８）な
どに記載の方法に従って行うことができる。昆虫細胞ま
たは昆虫を形質転換するには、例えば、バイオ／テクノ
ロジー（Bio/Technology）、６巻、４７−５５（１９８
８）などに記載の方法に従って行うことができる。動物
細胞を形質転換するには、例えば、細胞工学別冊８ 新
細胞工学実験プロトコール．２６３−２６７（１９９
５）（秀潤社発行）、ヴィロロジー（Virology）、５２
巻、４５６（１９７３）に記載の方法に従って行うこと
ができる。このようにして、本発明のタンパク質をコー
ドするＤＮＡを含有する発現ベクターで形質転換された
形質転換体を得ることができる。宿主がエシェリヒア属
菌、バチルス属菌である形質転換体を培養する際、培養
に使用される培地としては液体培地が適当であり、その
中には該形質転換体の生育に必要な炭素源、窒素源、無
機物その他が含有せしめられる。炭素源としては、例え
ば、グルコース、デキストリン、可溶性澱粉、ショ糖な
ど、窒素源としては、例えば、アンモニウム塩類、硝酸
塩類、コーンスチープ・リカー、ペプトン、カゼイン、
肉エキス、大豆粕、バレイショ抽出液などの無機または
有機物質、無機物としては、例えば、塩化カルシウム、
リン酸二水素ナトリウム、塩化マグネシウムなどがあげ
られる。また、酵母、ビタミン類、生長促進因子などを
添加してもよい。培地のｐＨは約５〜８が望ましい。
【００３８】エシェリヒア属菌を培養する際の培地とし
ては、例えば、グルコース、カザミノ酸を含むＭ９培地
〔ミラー（Miller）、ジャーナル・オブ・エクスペリメ
ンツ・イン・モレキュラー・ジェネティックス（Journa
l of Experiments in Molecular Genetics）、４３１−
４３３、Cold Spring Harbor Laboratory、New York１
９７２〕が好ましい。ここに必要によりプロモーターを
効率よく働かせるために、例えば、３β−インドリルア
クリル酸のような薬剤を加えることができる。宿主がエ
シェリヒア属菌の場合、培養は通常約１５〜４３℃で約
３〜２４時間行ない、必要により、通気や撹拌を加える
こともできる。宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常
約３０〜４０℃で約６〜２４時間行ない、必要により通
気や撹拌を加えることもできる。宿主が酵母である形質
転換体を培養する際、培地としては、例えば、バークホ
ールダー（Burkholder）最小培地〔Bostian, K. L.
ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー
（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ）、７７巻、４５０
５（１９８０）〕や０.５％カザミノ酸を含有するＳＤ
培地〔Bitter, G. A. ら、プロシージングズ・オブ・ザ
・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オ
ブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. US
A）、８１巻、５３３０（１９８４）〕があげられる。
培地のｐＨは約５〜８に調整するのが好ましい。培養は
通常約２０℃〜３５℃で約２４〜７２時間行ない、必要
に応じて通気や撹拌を加える。宿主が昆虫細胞または昆
虫である形質転換体を培養する際、培地としては、Grac
e's Insect Medium（Grace, T.C.C.、ネイチャー（Natu
re）、１９５、７８８（１９６２））に非動化した１０
％ウシ血清等の添加物を適宜加えたものなどが用いられ
る。培地のｐＨは約６．２〜６．４に調整するのが好ま
しい。培養は通常約２７℃で約３〜５日間行ない、必要
に応じて通気や撹拌を加える。宿主が動物細胞である形
質転換体を培養する際、培地としては、例えば、約５〜
２０％の胎児牛血清を含むＭＥＭ培地〔サイエンス（Sc
ience）、１２２巻、５０１（１９５２）〕、ＤＭＥＭ
培地〔ヴィロロジー（Virology）、８巻、３９６（１９
５９）〕、ＲＰＭＩ １６４０培地〔ジャーナル・オブ
・ザ・アメリカン・メディカル・アソシエーション（Th
e Journal of the American Medical Association）、
１９９巻、５１９（１９６７）〕、１９９培地〔プロシ
ージング・オブ・ザ・ソサイエティ・フォー・ザ・バイ
オロジカル・メディスン（Proceeding of the Society
for the Biological Medicine）、７３巻、１（１９５
０）〕などが用いられる。ｐＨは約６〜８であるのが好
ましい。培養は通常約３０℃〜４０℃で約１５〜６０時
間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。以上のよ
うにして、形質転換体の細胞内、細胞膜または細胞外に
本発明のタンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タンパ
ク質を生成せしめることができる。
ては、例えば、グルコース、カザミノ酸を含むＭ９培地
〔ミラー（Miller）、ジャーナル・オブ・エクスペリメ
ンツ・イン・モレキュラー・ジェネティックス（Journa
l of Experiments in Molecular Genetics）、４３１−
４３３、Cold Spring Harbor Laboratory、New York１
９７２〕が好ましい。ここに必要によりプロモーターを
効率よく働かせるために、例えば、３β−インドリルア
クリル酸のような薬剤を加えることができる。宿主がエ
シェリヒア属菌の場合、培養は通常約１５〜４３℃で約
３〜２４時間行ない、必要により、通気や撹拌を加える
こともできる。宿主がバチルス属菌の場合、培養は通常
約３０〜４０℃で約６〜２４時間行ない、必要により通
気や撹拌を加えることもできる。宿主が酵母である形質
転換体を培養する際、培地としては、例えば、バークホ
ールダー（Burkholder）最小培地〔Bostian, K. L.
ら、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ザ・ユーエスエー
（Proc. Natl. Acad. Sci. ＵＳＡ）、７７巻、４５０
５（１９８０）〕や０.５％カザミノ酸を含有するＳＤ
培地〔Bitter, G. A. ら、プロシージングズ・オブ・ザ
・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オ
ブ・ザ・ユーエスエー（Proc. Natl. Acad. Sci. US
A）、８１巻、５３３０（１９８４）〕があげられる。
培地のｐＨは約５〜８に調整するのが好ましい。培養は
通常約２０℃〜３５℃で約２４〜７２時間行ない、必要
に応じて通気や撹拌を加える。宿主が昆虫細胞または昆
虫である形質転換体を培養する際、培地としては、Grac
e's Insect Medium（Grace, T.C.C.、ネイチャー（Natu
re）、１９５、７８８（１９６２））に非動化した１０
％ウシ血清等の添加物を適宜加えたものなどが用いられ
る。培地のｐＨは約６．２〜６．４に調整するのが好ま
しい。培養は通常約２７℃で約３〜５日間行ない、必要
に応じて通気や撹拌を加える。宿主が動物細胞である形
質転換体を培養する際、培地としては、例えば、約５〜
２０％の胎児牛血清を含むＭＥＭ培地〔サイエンス（Sc
ience）、１２２巻、５０１（１９５２）〕、ＤＭＥＭ
培地〔ヴィロロジー（Virology）、８巻、３９６（１９
５９）〕、ＲＰＭＩ １６４０培地〔ジャーナル・オブ
・ザ・アメリカン・メディカル・アソシエーション（Th
e Journal of the American Medical Association）、
１９９巻、５１９（１９６７）〕、１９９培地〔プロシ
ージング・オブ・ザ・ソサイエティ・フォー・ザ・バイ
オロジカル・メディスン（Proceeding of the Society
for the Biological Medicine）、７３巻、１（１９５
０）〕などが用いられる。ｐＨは約６〜８であるのが好
ましい。培養は通常約３０℃〜４０℃で約１５〜６０時
間行ない、必要に応じて通気や撹拌を加える。以上のよ
うにして、形質転換体の細胞内、細胞膜または細胞外に
本発明のタンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タンパ
ク質を生成せしめることができる。
【００３９】上記培養物から本発明のタンパク質または
本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質を分離精製するには、
例えば、下記の方法により行うことができる。本発明の
タンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質を培
養菌体あるいは細胞から抽出するに際しては、培養後、
公知の方法で菌体あるいは細胞を集め、これを適当な緩
衝液に懸濁し、超音波、リゾチームおよび／または凍結
融解などによって菌体あるいは細胞を破壊したのち、遠
心分離やろ過によりタンパク質の粗抽出液を得る方法な
どが適宜用いられる。緩衝液の中に尿素や塩酸グアニジ
ンなどのタンパク質変性剤や、トリトンＸ−１００TMな
どの界面活性剤が含まれていてもよい。培養液中に本発
明のタンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質
が分泌される場合には、培養終了後、公知の方法で菌体
あるいは細胞と上清とを分離し、上清を集める。このよ
うにして得られた培養上清、あるいは抽出液中に含まれ
る本発明のタンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タン
パク質の精製は、公知の分離・精製法を適切に組み合わ
せて行うことができる。これらの公知の分離、精製法と
しては、塩析や溶媒沈澱法などの溶解度を利用する方
法、透析法、限外ろ過法、ゲルろ過法、およびＳＤＳ−
ポリアクリルアミドゲル電気泳動法などの主として分子
量の差を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィー
などの荷電の差を利用する方法、アフィニティークロマ
トグラフィーなどの特異的親和性を利用する方法、逆相
高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用す
る方法、等電点電気泳動法などの等電点の差を利用する
方法などが用いられる。
本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質を分離精製するには、
例えば、下記の方法により行うことができる。本発明の
タンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質を培
養菌体あるいは細胞から抽出するに際しては、培養後、
公知の方法で菌体あるいは細胞を集め、これを適当な緩
衝液に懸濁し、超音波、リゾチームおよび／または凍結
融解などによって菌体あるいは細胞を破壊したのち、遠
心分離やろ過によりタンパク質の粗抽出液を得る方法な
どが適宜用いられる。緩衝液の中に尿素や塩酸グアニジ
ンなどのタンパク質変性剤や、トリトンＸ−１００TMな
どの界面活性剤が含まれていてもよい。培養液中に本発
明のタンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質
が分泌される場合には、培養終了後、公知の方法で菌体
あるいは細胞と上清とを分離し、上清を集める。このよ
うにして得られた培養上清、あるいは抽出液中に含まれ
る本発明のタンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タン
パク質の精製は、公知の分離・精製法を適切に組み合わ
せて行うことができる。これらの公知の分離、精製法と
しては、塩析や溶媒沈澱法などの溶解度を利用する方
法、透析法、限外ろ過法、ゲルろ過法、およびＳＤＳ−
ポリアクリルアミドゲル電気泳動法などの主として分子
量の差を利用する方法、イオン交換クロマトグラフィー
などの荷電の差を利用する方法、アフィニティークロマ
トグラフィーなどの特異的親和性を利用する方法、逆相
高速液体クロマトグラフィーなどの疎水性の差を利用す
る方法、等電点電気泳動法などの等電点の差を利用する
方法などが用いられる。
【００４０】このようにして得られる本発明のタンパク
質または本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質が遊離体で得
られた場合には、公知の方法あるいはそれに準じる方法
によって塩に変換することができ、逆に塩で得られた場
合には公知の方法あるいはそれに準じる方法により、遊
離体または他の塩に変換することができる。なお、組換
え体が産生するタンパク質を、精製前または精製後に適
当なタンパク質修飾酵素を作用させることにより、任意
に修飾を加えたり、ポリペプチドを部分的に除去するこ
ともできる。タンパク質修飾酵素としては、例えば、ト
リプシン、キモトリプシン、アルギニルエンドペプチダ
ーゼ、プロテインキナーゼ、グリコシダーゼなどが用い
られる。このようにして生成する本発明のタンパク質ま
たは本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質の存在は、特異抗
体を用いたエンザイムイムノアッセイやウエスタンブロ
ッティングなどにより測定することができる。
質または本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質が遊離体で得
られた場合には、公知の方法あるいはそれに準じる方法
によって塩に変換することができ、逆に塩で得られた場
合には公知の方法あるいはそれに準じる方法により、遊
離体または他の塩に変換することができる。なお、組換
え体が産生するタンパク質を、精製前または精製後に適
当なタンパク質修飾酵素を作用させることにより、任意
に修飾を加えたり、ポリペプチドを部分的に除去するこ
ともできる。タンパク質修飾酵素としては、例えば、ト
リプシン、キモトリプシン、アルギニルエンドペプチダ
ーゼ、プロテインキナーゼ、グリコシダーゼなどが用い
られる。このようにして生成する本発明のタンパク質ま
たは本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質の存在は、特異抗
体を用いたエンザイムイムノアッセイやウエスタンブロ
ッティングなどにより測定することができる。
【００４１】本発明のタンパク質または本発明のＩＲＡ
Ｐ結合タンパク質に対する抗体は、本発明のタンパク質
または本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質を認識し得る抗
体であれば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体
の何れであってもよい。本発明のタンパク質または本発
明のＩＲＡＰ結合タンパク質に対する抗体は、本発明の
タンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質を抗
原として用い、公知の抗体または抗血清の製造法に従っ
て製造することができる。
Ｐ結合タンパク質に対する抗体は、本発明のタンパク質
または本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質を認識し得る抗
体であれば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体
の何れであってもよい。本発明のタンパク質または本発
明のＩＲＡＰ結合タンパク質に対する抗体は、本発明の
タンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質を抗
原として用い、公知の抗体または抗血清の製造法に従っ
て製造することができる。
【００４２】〔モノクローナル抗体の作製〕 （ａ）モノクローナル抗体産生細胞の作製 本発明のタンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タンパ
ク質は、温血動物に対して投与により抗体産生が可能な
部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とともに投与され
る。投与に際して抗体産生能を高めるため、完全フロイ
ントアジュバントや不完全フロイントアジュバントを投
与してもよい。投与は通常２〜６週毎に１回ずつ、計２
〜１０回程度行われる。用いられる温血動物としては、
例えば、サル、ウサギ、イヌ、モルモット、マウス、ラ
ット、ヒツジ、ヤギ、ニワトリがあげられるが、マウス
およびラットが好ましく用いられる。モノクローナル抗
体産生細胞の作製に際しては、抗原で免疫された温血動
物、例えばマウスから抗体価の認められた個体を選択し
最終免疫の２〜５日後に脾臓またはリンパ節を採取し、
それらに含まれる抗体産生細胞を同種または異種動物の
骨髄腫細胞と融合させることにより、モノクローナル抗
体産生ハイブリドーマを調製することができる。抗血清
中の抗体価の測定は、例えば、後記の標識化タンパク質
と抗血清とを反応させたのち、抗体に結合した標識剤の
活性を測定することにより行うことができる。融合操作
は既知の方法、例えば、ケーラーとミルスタインの方法
〔ネイチャー（Nature）、２５６、４９５（１９７
５）〕に従い実施することができる。融合促進剤として
は、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）やセン
ダイウィルスなどがあげられるが、好ましくはＰＥＧが
用いられる。
ク質は、温血動物に対して投与により抗体産生が可能な
部位にそれ自体あるいは担体、希釈剤とともに投与され
る。投与に際して抗体産生能を高めるため、完全フロイ
ントアジュバントや不完全フロイントアジュバントを投
与してもよい。投与は通常２〜６週毎に１回ずつ、計２
〜１０回程度行われる。用いられる温血動物としては、
例えば、サル、ウサギ、イヌ、モルモット、マウス、ラ
ット、ヒツジ、ヤギ、ニワトリがあげられるが、マウス
およびラットが好ましく用いられる。モノクローナル抗
体産生細胞の作製に際しては、抗原で免疫された温血動
物、例えばマウスから抗体価の認められた個体を選択し
最終免疫の２〜５日後に脾臓またはリンパ節を採取し、
それらに含まれる抗体産生細胞を同種または異種動物の
骨髄腫細胞と融合させることにより、モノクローナル抗
体産生ハイブリドーマを調製することができる。抗血清
中の抗体価の測定は、例えば、後記の標識化タンパク質
と抗血清とを反応させたのち、抗体に結合した標識剤の
活性を測定することにより行うことができる。融合操作
は既知の方法、例えば、ケーラーとミルスタインの方法
〔ネイチャー（Nature）、２５６、４９５（１９７
５）〕に従い実施することができる。融合促進剤として
は、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）やセン
ダイウィルスなどがあげられるが、好ましくはＰＥＧが
用いられる。
【００４３】骨髄腫細胞としては、例えば、ＮＳ−１、
Ｐ３Ｕ１、ＳＰ２／０、ＡＰ−１などの温血動物の骨髄
腫細胞があげられるが、Ｐ３Ｕ１が好ましく用いられ
る。用いられる抗体産生細胞（脾臓細胞）数と骨髄腫細
胞数との好ましい比率は１：１〜２０：１程度であり、
ＰＥＧ（好ましくはＰＥＧ１０００〜ＰＥＧ６０００）
が１０〜８０％程度の濃度で添加され、２０〜４０℃、
好ましくは３０〜３７℃で１〜１０分間インキュベート
することにより効率よく細胞融合を実施できる。モノク
ローナル抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングには
種々の方法が使用できるが、例えば、タンパク質抗原を
直接あるいは担体とともに吸着させた固相（例、マイク
ロプレート）にハイブリドーマ培養上清を添加し、次に
放射性物質や酵素などで標識した抗免疫グロブリン抗体
（細胞融合に用いられる細胞がマウスの場合、抗マウス
免疫グロブリン抗体が用いられる）またはプロテインＡ
を加え、固相に結合したモノクローナル抗体を検出する
方法、抗免疫グロブリン抗体またはプロテインＡを吸着
させた固相にハイブリドーマ培養上清を添加し、放射性
物質や酵素などで標識したタンパク質を加え、固相に結
合したモノクローナル抗体を検出する方法などがあげら
れる。モノクローナル抗体の選別は、公知あるいはそれ
に準じる方法に従って行うことができる。通常ＨＡＴ
（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）を添加
した動物細胞用培地で行うことができる。選別および育
種用培地としては、ハイブリドーマが生育できるものな
らばどのような培地を用いても良い。例えば、１〜２０
％、好ましくは１０〜２０％の牛胎児血清を含むＲＰＭ
Ｉ １６４０培地、１〜１０％の牛胎児血清を含むＧＩ
Ｔ培地（和光純薬工業（株））あるいはハイブリドーマ
培養用無血清培地（ＳＦＭ−１０１、日水製薬（株））
などを用いることができる。培養温度は、通常２０〜４
０℃、好ましくは約３７℃である。培養時間は、通常５
日〜３週間、好ましくは１週間〜２週間である。培養
は、通常５％炭酸ガス下で行うことができる。ハイブリ
ドーマ培養上清の抗体価は、上記の抗血清中の抗体価の
測定と同様にして測定できる。
Ｐ３Ｕ１、ＳＰ２／０、ＡＰ−１などの温血動物の骨髄
腫細胞があげられるが、Ｐ３Ｕ１が好ましく用いられ
る。用いられる抗体産生細胞（脾臓細胞）数と骨髄腫細
胞数との好ましい比率は１：１〜２０：１程度であり、
ＰＥＧ（好ましくはＰＥＧ１０００〜ＰＥＧ６０００）
が１０〜８０％程度の濃度で添加され、２０〜４０℃、
好ましくは３０〜３７℃で１〜１０分間インキュベート
することにより効率よく細胞融合を実施できる。モノク
ローナル抗体産生ハイブリドーマのスクリーニングには
種々の方法が使用できるが、例えば、タンパク質抗原を
直接あるいは担体とともに吸着させた固相（例、マイク
ロプレート）にハイブリドーマ培養上清を添加し、次に
放射性物質や酵素などで標識した抗免疫グロブリン抗体
（細胞融合に用いられる細胞がマウスの場合、抗マウス
免疫グロブリン抗体が用いられる）またはプロテインＡ
を加え、固相に結合したモノクローナル抗体を検出する
方法、抗免疫グロブリン抗体またはプロテインＡを吸着
させた固相にハイブリドーマ培養上清を添加し、放射性
物質や酵素などで標識したタンパク質を加え、固相に結
合したモノクローナル抗体を検出する方法などがあげら
れる。モノクローナル抗体の選別は、公知あるいはそれ
に準じる方法に従って行うことができる。通常ＨＡＴ
（ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン）を添加
した動物細胞用培地で行うことができる。選別および育
種用培地としては、ハイブリドーマが生育できるものな
らばどのような培地を用いても良い。例えば、１〜２０
％、好ましくは１０〜２０％の牛胎児血清を含むＲＰＭ
Ｉ １６４０培地、１〜１０％の牛胎児血清を含むＧＩ
Ｔ培地（和光純薬工業（株））あるいはハイブリドーマ
培養用無血清培地（ＳＦＭ−１０１、日水製薬（株））
などを用いることができる。培養温度は、通常２０〜４
０℃、好ましくは約３７℃である。培養時間は、通常５
日〜３週間、好ましくは１週間〜２週間である。培養
は、通常５％炭酸ガス下で行うことができる。ハイブリ
ドーマ培養上清の抗体価は、上記の抗血清中の抗体価の
測定と同様にして測定できる。
【００４４】（ｂ）モノクローナル抗体の精製 モノクローナル抗体の分離精製は、公知の方法、例え
ば、免疫グロブリンの分離精製法〔例、塩析法、アルコ
ール沈殿法、等電点沈殿法、電気泳動法、イオン交換体
（例、ＤＥＡＥ）による吸脱着法、超遠心法、ゲルろ過
法、抗原結合固相あるいはプロテインＡあるいはプロテ
インＧなどの活性吸着剤により抗体のみを採取し、結合
を解離させて抗体を得る特異的精製法〕に従って行うこ
とができる。
ば、免疫グロブリンの分離精製法〔例、塩析法、アルコ
ール沈殿法、等電点沈殿法、電気泳動法、イオン交換体
（例、ＤＥＡＥ）による吸脱着法、超遠心法、ゲルろ過
法、抗原結合固相あるいはプロテインＡあるいはプロテ
インＧなどの活性吸着剤により抗体のみを採取し、結合
を解離させて抗体を得る特異的精製法〕に従って行うこ
とができる。
【００４５】〔ポリクローナル抗体の作製〕本発明のポ
リクローナル抗体は、公知あるいはそれに準じる方法に
従って製造することができる。例えば、免疫抗原（タン
パク質抗原）自体、あるいはそれとキャリアータンパク
質との複合体をつくり、上記のモノクローナル抗体の製
造法と同様に温血動物に免疫を行ない、該免疫動物から
本発明のタンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タンパ
ク質に対する抗体含有物を採取して、抗体の分離精製を
行うことにより製造することができる。温血動物を免疫
するために用いられる免疫抗原とキャリアータンパク質
との複合体に関し、キャリアータンパク質の種類および
キャリアーとハプテンとの混合比は、キャリアーに架橋
させて免疫したハプテンに対して抗体が効率良くできれ
ば、どの様なものをどの様な比率で架橋させてもよい
が、例えば、ウシ血清アルブミンやウシサイログロブリ
ン、ヘモシアニン等を重量比でハプテン１に対し、約
０．１〜２０、好ましくは約１〜５の割合でカプルさせ
る方法が用いられる。また、ハプテンとキャリアーのカ
プリングには、種々の縮合剤を用いることができるが、
グルタルアルデヒドやカルボジイミド、マレイミド活性
エステル、チオール基、ジチオビリジル基を含有する活
性エステル試薬等が用いられる。縮合生成物は、温血動
物に対して、抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは
担体、希釈剤とともに投与される。投与に際して抗体産
生能を高めるため、完全フロイントアジュバントや不完
全フロイントアジュバントを投与してもよい。投与は、
通常約２〜６週毎に１回ずつ、計約３〜１０回程度行な
われる。ポリクローナル抗体は、上記の方法で免疫され
た温血動物の血液、腹水など、好ましくは血液から採取
することができる。抗血清中のポリクローナル抗体価の
測定は、上記の抗血清中の抗体価の測定と同様にして測
定できる。ポリクローナル抗体の分離精製は、上記のモ
ノクローナル抗体の分離精製と同様の免疫グロブリンの
分離精製法に従って行うことができる。
リクローナル抗体は、公知あるいはそれに準じる方法に
従って製造することができる。例えば、免疫抗原（タン
パク質抗原）自体、あるいはそれとキャリアータンパク
質との複合体をつくり、上記のモノクローナル抗体の製
造法と同様に温血動物に免疫を行ない、該免疫動物から
本発明のタンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タンパ
ク質に対する抗体含有物を採取して、抗体の分離精製を
行うことにより製造することができる。温血動物を免疫
するために用いられる免疫抗原とキャリアータンパク質
との複合体に関し、キャリアータンパク質の種類および
キャリアーとハプテンとの混合比は、キャリアーに架橋
させて免疫したハプテンに対して抗体が効率良くできれ
ば、どの様なものをどの様な比率で架橋させてもよい
が、例えば、ウシ血清アルブミンやウシサイログロブリ
ン、ヘモシアニン等を重量比でハプテン１に対し、約
０．１〜２０、好ましくは約１〜５の割合でカプルさせ
る方法が用いられる。また、ハプテンとキャリアーのカ
プリングには、種々の縮合剤を用いることができるが、
グルタルアルデヒドやカルボジイミド、マレイミド活性
エステル、チオール基、ジチオビリジル基を含有する活
性エステル試薬等が用いられる。縮合生成物は、温血動
物に対して、抗体産生が可能な部位にそれ自体あるいは
担体、希釈剤とともに投与される。投与に際して抗体産
生能を高めるため、完全フロイントアジュバントや不完
全フロイントアジュバントを投与してもよい。投与は、
通常約２〜６週毎に１回ずつ、計約３〜１０回程度行な
われる。ポリクローナル抗体は、上記の方法で免疫され
た温血動物の血液、腹水など、好ましくは血液から採取
することができる。抗血清中のポリクローナル抗体価の
測定は、上記の抗血清中の抗体価の測定と同様にして測
定できる。ポリクローナル抗体の分離精製は、上記のモ
ノクローナル抗体の分離精製と同様の免疫グロブリンの
分離精製法に従って行うことができる。
【００４６】本発明のタンパク質をコードするＤＮＡ
（以下、本発明のＤＮＡと略記することもある）または
本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質をコードするＤＮＡ
（以下、本発明のＤＮＡ（ＩＲＡＰ結合）と略記するこ
ともある）に相補的な、または実質的に相補的な塩基配
列もしくはその一部を有するアンチセンスＤＮＡとして
は、本発明のＤＮＡまたは本発明のＤＮＡ（ＩＲＡＰ結
合）に相補的な、または実質的に相補的な塩基配列もし
くはその一部を有し、該ＤＮＡの発現を抑制し得る作用
を有するものであれば、いずれのアンチセンスＤＮＡで
あってもよい。本発明のＤＮＡまたは本発明のＤＮＡ
（ＩＲＡＰ結合）に実質的に相補的な塩基配列とは、例
えば、本発明のＤＮＡまたは本発明のＤＮＡ（ＩＲＡＰ
結合）に相補的な塩基配列（すなわち、本発明のＤＮＡ
または本発明のＤＮＡ（ＩＲＡＰ結合）の相補鎖）の全
塩基配列あるいは部分塩基配列と約７０％以上、好まし
くは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、最も
好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列など
があげられる。特に、本発明のＤＮＡまたは本発明のＤ
ＮＡ（ＩＲＡＰ結合）の相補鎖の全塩基配列うち、本発
明のタンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質
のＮ末端部位をコードする部分の塩基配列（例えば、開
始コドン付近の塩基配列など）の相補鎖と約７０％以
上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％
以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有するア
ンチセンスＤＮＡが好適である。これらのアンチセンス
ＤＮＡは、公知のＤＮＡ合成装置などを用いて製造する
ことができる。
（以下、本発明のＤＮＡと略記することもある）または
本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質をコードするＤＮＡ
（以下、本発明のＤＮＡ（ＩＲＡＰ結合）と略記するこ
ともある）に相補的な、または実質的に相補的な塩基配
列もしくはその一部を有するアンチセンスＤＮＡとして
は、本発明のＤＮＡまたは本発明のＤＮＡ（ＩＲＡＰ結
合）に相補的な、または実質的に相補的な塩基配列もし
くはその一部を有し、該ＤＮＡの発現を抑制し得る作用
を有するものであれば、いずれのアンチセンスＤＮＡで
あってもよい。本発明のＤＮＡまたは本発明のＤＮＡ
（ＩＲＡＰ結合）に実質的に相補的な塩基配列とは、例
えば、本発明のＤＮＡまたは本発明のＤＮＡ（ＩＲＡＰ
結合）に相補的な塩基配列（すなわち、本発明のＤＮＡ
または本発明のＤＮＡ（ＩＲＡＰ結合）の相補鎖）の全
塩基配列あるいは部分塩基配列と約７０％以上、好まし
くは約８０％以上、より好ましくは約９０％以上、最も
好ましくは約９５％以上の相同性を有する塩基配列など
があげられる。特に、本発明のＤＮＡまたは本発明のＤ
ＮＡ（ＩＲＡＰ結合）の相補鎖の全塩基配列うち、本発
明のタンパク質または本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質
のＮ末端部位をコードする部分の塩基配列（例えば、開
始コドン付近の塩基配列など）の相補鎖と約７０％以
上、好ましくは約８０％以上、より好ましくは約９０％
以上、最も好ましくは約９５％以上の相同性を有するア
ンチセンスＤＮＡが好適である。これらのアンチセンス
ＤＮＡは、公知のＤＮＡ合成装置などを用いて製造する
ことができる。
【００４７】以下に、本発明のタンパク質、本発明のＩ
ＲＡＰ結合タンパク質、本発明のＤＮＡ、本発明のＤＮ
Ａ（ＩＲＡＰ結合）、本発明のタンパク質に対する抗
体、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質に対する抗体、本
発明のＤＮＡのアンチセンスＤＮＡおよび本発明のＤＮ
Ａ（ＩＲＡＰ結合）のアンチセンスＤＮＡの用途を説明
する。
ＲＡＰ結合タンパク質、本発明のＤＮＡ、本発明のＤＮ
Ａ（ＩＲＡＰ結合）、本発明のタンパク質に対する抗
体、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質に対する抗体、本
発明のＤＮＡのアンチセンスＤＮＡおよび本発明のＤＮ
Ａ（ＩＲＡＰ結合）のアンチセンスＤＮＡの用途を説明
する。
【００４８】（１）本発明のタンパク質が関与する各種
疾病の予防・治療剤 本発明のタンパク質は、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク
質への結合活性を有しているため、本発明のタンパク質
または本発明のＤＮＡは血糖異常に関連する疾患（例、
低血糖症など）などの種々の疾患の予防・治療薬などの
医薬として使用することが出来る。該「本発明のタンパ
ク質」または「本発明のＤＮＡ」とは、上述のとおり、
ＰＦＮＩＩＬ（EP 1033401号公報）などの本発明のタン
パク質またはその部分ペプチドを包含する意味で用いら
れているが、ＰＦＮＩＩＬなどの本発明のタンパク質の
部分ペプチドは、ＰＦＮＩＩＬなどの本発明のタンパク
質とＭＤ３６などの本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質と
の結合を拮抗的に阻害する場合があるため、ＰＦＮＩＩ
Ｌなどの本発明のタンパク質の部分ペプチドや該部分ペ
プチドをコードするＤＮＡは、例えば、高血糖症、糖尿
病（特にＩＩ型糖尿病など）などの疾病に対する予防・
治療薬などの医薬として使用することも出来る。例え
ば、生体内において本発明のタンパク質などが減少ある
いは欠損しているために、生体の恒常性維持または生体
防御機構が十分に、あるいは正常に発揮されない患者が
いる場合に、（イ）本発明のＤＮＡを該患者に投与し、
生体内で本発明のタンパク質を発現させることによっ
て、（ロ）細胞に本発明のＤＮＡを挿入し、本発明のタ
ンパク質を発現させた後に、該細胞を患者に移植するこ
とによって、または（ハ）本発明のタンパク質を該患者
に投与することなどによって、該患者における本発明の
タンパク質の役割を十分に、あるいは正常に発揮させる
ことができる。本発明のＤＮＡを上記の予防・治療剤と
して使用する場合は、該ＤＮＡを単独あるいはレトロウ
イルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイ
ルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベ
クターに挿入した後、常套手段に従って、ヒトまたは温
血動物に投与することができる。本発明のＤＮＡは、そ
のままで、あるいは摂取促進のための補助剤などの生理
学的に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子銃やハ
イドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与
できる。本発明のタンパク質を上記の予防・治療剤とし
て使用する場合は、少なくとも９０％、好ましくは９５
％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは
９９％以上に精製されたものを使用するのが好ましい。
疾病の予防・治療剤 本発明のタンパク質は、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク
質への結合活性を有しているため、本発明のタンパク質
または本発明のＤＮＡは血糖異常に関連する疾患（例、
低血糖症など）などの種々の疾患の予防・治療薬などの
医薬として使用することが出来る。該「本発明のタンパ
ク質」または「本発明のＤＮＡ」とは、上述のとおり、
ＰＦＮＩＩＬ（EP 1033401号公報）などの本発明のタン
パク質またはその部分ペプチドを包含する意味で用いら
れているが、ＰＦＮＩＩＬなどの本発明のタンパク質の
部分ペプチドは、ＰＦＮＩＩＬなどの本発明のタンパク
質とＭＤ３６などの本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質と
の結合を拮抗的に阻害する場合があるため、ＰＦＮＩＩ
Ｌなどの本発明のタンパク質の部分ペプチドや該部分ペ
プチドをコードするＤＮＡは、例えば、高血糖症、糖尿
病（特にＩＩ型糖尿病など）などの疾病に対する予防・
治療薬などの医薬として使用することも出来る。例え
ば、生体内において本発明のタンパク質などが減少ある
いは欠損しているために、生体の恒常性維持または生体
防御機構が十分に、あるいは正常に発揮されない患者が
いる場合に、（イ）本発明のＤＮＡを該患者に投与し、
生体内で本発明のタンパク質を発現させることによっ
て、（ロ）細胞に本発明のＤＮＡを挿入し、本発明のタ
ンパク質を発現させた後に、該細胞を患者に移植するこ
とによって、または（ハ）本発明のタンパク質を該患者
に投与することなどによって、該患者における本発明の
タンパク質の役割を十分に、あるいは正常に発揮させる
ことができる。本発明のＤＮＡを上記の予防・治療剤と
して使用する場合は、該ＤＮＡを単独あるいはレトロウ
イルスベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイ
ルスアソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベ
クターに挿入した後、常套手段に従って、ヒトまたは温
血動物に投与することができる。本発明のＤＮＡは、そ
のままで、あるいは摂取促進のための補助剤などの生理
学的に認められる担体とともに製剤化し、遺伝子銃やハ
イドロゲルカテーテルのようなカテーテルによって投与
できる。本発明のタンパク質を上記の予防・治療剤とし
て使用する場合は、少なくとも９０％、好ましくは９５
％以上、より好ましくは９８％以上、さらに好ましくは
９９％以上に精製されたものを使用するのが好ましい。
【００４９】本発明のタンパク質は、例えば、必要に応
じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マ
イクロカプセル剤などとして経口的に、あるいはエアロ
ゾル化して吸入剤の形で、あるいは水もしくはそれ以外
の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液
剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、
本発明のタンパク質を生理学的に認められる担体、香味
剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などと
ともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量
形態で混和することによって製造することができる。こ
れら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な
用量が得られるようにするものである。錠剤、カプセル
剤などに混和することができる添加剤としては、例え
ば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビア
ゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形
剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのよう
な膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、
ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパー
ミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤など
が用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合に
は、前記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を
含有することができる。注射のための無菌組成物は注射
用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油な
どのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させる
などの通常の製剤製造法に従って処方することができ
る。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブ
ドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ−ソ
ルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムなど）
などがあげられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコー
ル（例えば、エタノールなど）、ポリアルコール（例え
ば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールな
ど）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート
８０TM、ＨＣＯ−５０など）などと併用してもよい。油
性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などがあげら
れ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアル
コールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、
リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液など）、無痛化
剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインな
ど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチ
レングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアル
コール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合して
もよい。調製された注射液は、通常、適当なアンプルに
充填される。本発明のＤＮＡが挿入されたベクターも上
記と同様に製剤化され、通常、非経口的に使用される。
じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マ
イクロカプセル剤などとして経口的に、あるいはエアロ
ゾル化して吸入剤の形で、あるいは水もしくはそれ以外
の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、または懸濁液
剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、
本発明のタンパク質を生理学的に認められる担体、香味
剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などと
ともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量
形態で混和することによって製造することができる。こ
れら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な
用量が得られるようにするものである。錠剤、カプセル
剤などに混和することができる添加剤としては、例え
ば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビア
ゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形
剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのよう
な膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、
ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパー
ミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤など
が用いられる。調剤単位形態がカプセルである場合に
は、前記タイプの材料にさらに油脂のような液状担体を
含有することができる。注射のための無菌組成物は注射
用水のようなベヒクル中の活性物質、胡麻油、椰子油な
どのような天然産出植物油などを溶解または懸濁させる
などの通常の製剤製造法に従って処方することができ
る。注射用の水性液としては、例えば、生理食塩水、ブ
ドウ糖やその他の補助薬を含む等張液（例えば、Ｄ−ソ
ルビトール、Ｄ−マンニトール、塩化ナトリウムなど）
などがあげられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコー
ル（例えば、エタノールなど）、ポリアルコール（例え
ば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールな
ど）、非イオン性界面活性剤（例えば、ポリソルベート
８０TM、ＨＣＯ−５０など）などと併用してもよい。油
性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などがあげら
れ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアル
コールなどと併用してもよい。また、緩衝剤（例えば、
リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液など）、無痛化
剤（例えば、塩化ベンザルコニウム、塩酸プロカインな
ど）、安定剤（例えば、ヒト血清アルブミン、ポリエチ
レングリコールなど）、保存剤（例えば、ベンジルアル
コール、フェノールなど）、酸化防止剤などと配合して
もよい。調製された注射液は、通常、適当なアンプルに
充填される。本発明のＤＮＡが挿入されたベクターも上
記と同様に製剤化され、通常、非経口的に使用される。
【００５０】このようにして得られる製剤は、安全で低
毒性であるので、例えば、温血動物（例えば、ヒト、ラ
ット、マウス、モルモット、ウサギ、トリ、ヒツジ、ブ
タ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーな
ど）に対して投与することができる。本発明のタンパク
質の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどに
より差異はあるが、例えば、低血糖症の治療目的で本発
明のタンパク質を経口投与する場合、一般的に成人（６
０ｋｇとして）においては、一日につき該タンパク質を
約０.１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０
ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非
経口的に投与する場合は、該タンパク質の１回投与量は
投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、
低血糖症の治療目的で本発明のタンパク質を注射剤の形
で成人（体重６０ｋｇとして）に投与する場合、一日に
つき該タンパク質を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好まし
くは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１
〜１０ｍｇ程度を患部に注射することにより投与するの
が好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに
換算した量を投与することができる。
毒性であるので、例えば、温血動物（例えば、ヒト、ラ
ット、マウス、モルモット、ウサギ、トリ、ヒツジ、ブ
タ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーな
ど）に対して投与することができる。本発明のタンパク
質の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなどに
より差異はあるが、例えば、低血糖症の治療目的で本発
明のタンパク質を経口投与する場合、一般的に成人（６
０ｋｇとして）においては、一日につき該タンパク質を
約０.１ｍｇ〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０
ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非
経口的に投与する場合は、該タンパク質の１回投与量は
投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例えば、
低血糖症の治療目的で本発明のタンパク質を注射剤の形
で成人（体重６０ｋｇとして）に投与する場合、一日に
つき該タンパク質を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好まし
くは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１
〜１０ｍｇ程度を患部に注射することにより投与するの
が好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに
換算した量を投与することができる。
【００５１】（２）結合阻害物質のスクリーニング 本発明のタンパク質は本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質
への結合活性を有するため、例えば糖尿病におけるイン
スリン耐性のように、何らかの形でインスリンのシグナ
ルがＧＬＵＴ４小胞体の移行につながらないような病態
を呈している場合（いわゆるＩＩ型糖尿病の場合など）
には、本発明のタンパク質と本発明のＩＲＡＰ結合タン
パク質との結合を阻害する化合物は、血中の糖の筋肉細
胞および脂肪細胞への取込みを促進し、血糖値を低下さ
せることができ、例えば、高血糖症、糖尿病（特にＩＩ
型糖尿病など）などの疾病に対する予防・治療剤などの
医薬として有用である。
への結合活性を有するため、例えば糖尿病におけるイン
スリン耐性のように、何らかの形でインスリンのシグナ
ルがＧＬＵＴ４小胞体の移行につながらないような病態
を呈している場合（いわゆるＩＩ型糖尿病の場合など）
には、本発明のタンパク質と本発明のＩＲＡＰ結合タン
パク質との結合を阻害する化合物は、血中の糖の筋肉細
胞および脂肪細胞への取込みを促進し、血糖値を低下さ
せることができ、例えば、高血糖症、糖尿病（特にＩＩ
型糖尿病など）などの疾病に対する予防・治療剤などの
医薬として有用である。
【００５２】本発明のスクリーニング方法には、本発明
のタンパク質が用いられ、さらに本発明のＩＲＡＰ結合
タンパク質が用いられてもよい。また、本発明のスクリ
ーニング方法は、本発明のタンパク質を産生する能力を
有する細胞（好ましくは、本発明のタンパク質コードす
るＤＮＡで形質転換された形質転換体（例、酵母、動物
細胞などの細胞））が用いられてもよく、さらに本発明
のＩＲＡＰ結合タンパク質を産生する能力を有する細胞
（好ましくは、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質コード
するＤＮＡで形質転換された形質転換体（例、酵母、動
物細胞などの細胞））が用いられてもよい。 （２−１）In vitro結合試験によるスクリーニング 本発明のタンパク質を本発明のタンパク質に対する抗体
を用いて固相（例、ＥＩＡプレート）に固定化するか、
あるいは本発明のタンパク質をＴａｇタンパク質（例、
Ｈｉｓ−Ｔａｇ、ＧＳＴ（グルタチオン−Ｓ−トランス
フェラーゼ）等）と融合させた後、固相に固定化する。
本発明のタンパク質として本発明の部分ペプチドを用い
る場合には、好ましくは本発明のＩＲＡＰ結合タンパク
質との結合活性を有する部分ペプチドが用いられる。タ
ンパク質の固相への固定に際しては、Ｈｉｓ−Ｔａｇで
あればニッケル、ＧＳＴであればグルタチオンが用いら
れる。これに、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質をビオ
チンなどで標識したものを加えて結合させる。この複合
体に試験化合物を添加し、本発明のタンパク質と本発明
のＩＲＡＰ結合タンパク質との結合の阻害の結果として
遊離した本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質を、ビオチン
などの標識体を検出する市販のキットまたは本発明のＩ
ＲＡＰ結合タンパク質に対する抗体を用いて、検出、定
量する。本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質を遊離させる
化合物を、本発明のタンパク質と本発明のＩＲＡＰ結合
タンパク質との結合を阻害する化合物（以下、結合阻害
剤と略称する場合がある）として選択する。また、本発
明のＩＲＡＰ結合タンパク質を固相に固定化し、これに
本発明のタンパク質を結合させてもよい。本発明のＩＲ
ＡＰ結合タンパク質を固相へ固定化する際には、例えば
ビオチンで標識された本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質
とアビジンで標識された固相（例、プレート）が好まし
く用いられる。この複合体に試験化合物を添加し、遊離
する本発明のタンパク質を本発明のタンパク質に対する
抗体またはＴａｇタンパク質に対する抗体で検出、定量
する。この方法において、本発明のタンパク質はＴａｇ
タンパク質と融合させた本発明のタンパク質を用いても
よく、その際には、遊離する本発明のタンパク質を本発
明のタンパク質に対する抗体で検出、定量してもよく、
またTagタンパク質に対する抗体で検出、定量してもよ
い。本発明のタンパク質を遊離させる化合物を、結合阻
害剤として選択する。選択された化合物は、本発明のＩ
ＲＡＰ結合タンパク質に対する抗体、本発明のタンパク
質に対する抗体またはＴａｇに対する抗体を用いた免疫
沈降法等の公知の方法により、その阻害活性を確認する
ことができる。該免疫沈降法では、選択された化合物に
よって本発明のタンパク質と本発明のＩＲＡＰ結合タン
パク質との結合が阻害されることにより遊離する本発明
のタンパク質を本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質に対す
る抗体、Ｔａｇタンパク質に対する抗体、本発明のＩＲ
ＡＰ結合タンパク質に対する抗体によって検出する。
のタンパク質が用いられ、さらに本発明のＩＲＡＰ結合
タンパク質が用いられてもよい。また、本発明のスクリ
ーニング方法は、本発明のタンパク質を産生する能力を
有する細胞（好ましくは、本発明のタンパク質コードす
るＤＮＡで形質転換された形質転換体（例、酵母、動物
細胞などの細胞））が用いられてもよく、さらに本発明
のＩＲＡＰ結合タンパク質を産生する能力を有する細胞
（好ましくは、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質コード
するＤＮＡで形質転換された形質転換体（例、酵母、動
物細胞などの細胞））が用いられてもよい。 （２−１）In vitro結合試験によるスクリーニング 本発明のタンパク質を本発明のタンパク質に対する抗体
を用いて固相（例、ＥＩＡプレート）に固定化するか、
あるいは本発明のタンパク質をＴａｇタンパク質（例、
Ｈｉｓ−Ｔａｇ、ＧＳＴ（グルタチオン−Ｓ−トランス
フェラーゼ）等）と融合させた後、固相に固定化する。
本発明のタンパク質として本発明の部分ペプチドを用い
る場合には、好ましくは本発明のＩＲＡＰ結合タンパク
質との結合活性を有する部分ペプチドが用いられる。タ
ンパク質の固相への固定に際しては、Ｈｉｓ−Ｔａｇで
あればニッケル、ＧＳＴであればグルタチオンが用いら
れる。これに、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質をビオ
チンなどで標識したものを加えて結合させる。この複合
体に試験化合物を添加し、本発明のタンパク質と本発明
のＩＲＡＰ結合タンパク質との結合の阻害の結果として
遊離した本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質を、ビオチン
などの標識体を検出する市販のキットまたは本発明のＩ
ＲＡＰ結合タンパク質に対する抗体を用いて、検出、定
量する。本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質を遊離させる
化合物を、本発明のタンパク質と本発明のＩＲＡＰ結合
タンパク質との結合を阻害する化合物（以下、結合阻害
剤と略称する場合がある）として選択する。また、本発
明のＩＲＡＰ結合タンパク質を固相に固定化し、これに
本発明のタンパク質を結合させてもよい。本発明のＩＲ
ＡＰ結合タンパク質を固相へ固定化する際には、例えば
ビオチンで標識された本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質
とアビジンで標識された固相（例、プレート）が好まし
く用いられる。この複合体に試験化合物を添加し、遊離
する本発明のタンパク質を本発明のタンパク質に対する
抗体またはＴａｇタンパク質に対する抗体で検出、定量
する。この方法において、本発明のタンパク質はＴａｇ
タンパク質と融合させた本発明のタンパク質を用いても
よく、その際には、遊離する本発明のタンパク質を本発
明のタンパク質に対する抗体で検出、定量してもよく、
またTagタンパク質に対する抗体で検出、定量してもよ
い。本発明のタンパク質を遊離させる化合物を、結合阻
害剤として選択する。選択された化合物は、本発明のＩ
ＲＡＰ結合タンパク質に対する抗体、本発明のタンパク
質に対する抗体またはＴａｇに対する抗体を用いた免疫
沈降法等の公知の方法により、その阻害活性を確認する
ことができる。該免疫沈降法では、選択された化合物に
よって本発明のタンパク質と本発明のＩＲＡＰ結合タン
パク質との結合が阻害されることにより遊離する本発明
のタンパク質を本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質に対す
る抗体、Ｔａｇタンパク質に対する抗体、本発明のＩＲ
ＡＰ結合タンパク質に対する抗体によって検出する。
【００５３】（２−２）Two-Hybrid法によるスクリーニ
ング （２−２−１）酵母two-hybrid法によるスクリーニング 酵母（例、サッカロマイセス・セレビシェ（Saccharomy
ces cerevisiae）、より好ましくはサッカロマイセス・
セレビシェ（S. cerevisiae）Ｙ１９０株においてレポ
ーター遺伝子結合ドメインを融合させた本発明のＩＲＡ
Ｐ結合タンパク質をコードするＤＮＡとレポーター遺伝
子転写活性ドメインが融合した本発明のタンパク質をコ
ードするＤＮＡを発現させると、two-hybridの作用によ
り、レポーター遺伝子であるβ−ガラクトシダーゼ遺伝
子とヒスチジン合成系遺伝子ＨＩＳ３の表現形が発現す
る。この酵母株を試験化合物の存在下、一定時間培養
し、酵母株のβ−ガラクトシダーゼ活性を減少させる
か、あるいは酵母株をヒスチジン要求性に転換させる化
合物を選択する。該酵母株は、上記した宿主が酵母であ
る形質転換体の培養と同様に培養できる。β−ガラクト
シダーゼの活性はＸ−Ｇａｌ（5-bromo-4-chloro-3-ind
olyl-β-D-galactopyranoside）、ＯＮＰＧ（o-nitroph
enyl β-D-galactopyranoside）あるいはＣＰＲＧ（chl
orophenyl red-β-D-galactopyranoside）を基質として
公知の方法に従って測定することができる。ＨＩＳ３表
現形の発現はヒスチジン欠損の最小培地で酵母を培養す
ることにより測定することができる。選択された化合物
のうち、細胞毒性のある化合物ならびにレポーター遺伝
子産物との相互作用等でレポーター遺伝子産物自身の活
性を阻害する化合物は擬陽性化合物として除外できる。
また、レポーター遺伝子結合ドメインに本発明のタンパ
ク質を融合させた本発明のタンパク質をコードするＤＮ
Ａとレポーター遺伝子転写活性ドメインに本発明のＩＲ
ＡＰ結合タンパク質を融合させた本発明のＩＲＡＰ結合
タンパク質をコードするＤＮＡを用いて、上記酵母two-
hybrid法によるスクリーニングを行うこともできる。
ング （２−２−１）酵母two-hybrid法によるスクリーニング 酵母（例、サッカロマイセス・セレビシェ（Saccharomy
ces cerevisiae）、より好ましくはサッカロマイセス・
セレビシェ（S. cerevisiae）Ｙ１９０株においてレポ
ーター遺伝子結合ドメインを融合させた本発明のＩＲＡ
Ｐ結合タンパク質をコードするＤＮＡとレポーター遺伝
子転写活性ドメインが融合した本発明のタンパク質をコ
ードするＤＮＡを発現させると、two-hybridの作用によ
り、レポーター遺伝子であるβ−ガラクトシダーゼ遺伝
子とヒスチジン合成系遺伝子ＨＩＳ３の表現形が発現す
る。この酵母株を試験化合物の存在下、一定時間培養
し、酵母株のβ−ガラクトシダーゼ活性を減少させる
か、あるいは酵母株をヒスチジン要求性に転換させる化
合物を選択する。該酵母株は、上記した宿主が酵母であ
る形質転換体の培養と同様に培養できる。β−ガラクト
シダーゼの活性はＸ−Ｇａｌ（5-bromo-4-chloro-3-ind
olyl-β-D-galactopyranoside）、ＯＮＰＧ（o-nitroph
enyl β-D-galactopyranoside）あるいはＣＰＲＧ（chl
orophenyl red-β-D-galactopyranoside）を基質として
公知の方法に従って測定することができる。ＨＩＳ３表
現形の発現はヒスチジン欠損の最小培地で酵母を培養す
ることにより測定することができる。選択された化合物
のうち、細胞毒性のある化合物ならびにレポーター遺伝
子産物との相互作用等でレポーター遺伝子産物自身の活
性を阻害する化合物は擬陽性化合物として除外できる。
また、レポーター遺伝子結合ドメインに本発明のタンパ
ク質を融合させた本発明のタンパク質をコードするＤＮ
Ａとレポーター遺伝子転写活性ドメインに本発明のＩＲ
ＡＰ結合タンパク質を融合させた本発明のＩＲＡＰ結合
タンパク質をコードするＤＮＡを用いて、上記酵母two-
hybrid法によるスクリーニングを行うこともできる。
【００５４】（２−２−２）動物細胞two-hybrid法によ
るスクリーニング 動物細胞（例、チャイニーズハムスターオバリー（ＣＨ
Ｏ）細胞）にレポーター遺伝子として、例えばクロラム
フェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）遺
伝子またはホタルルシフェラーゼ遺伝子を導入する。レ
ポーター遺伝子の転写調節領域は、例えば動物細胞で機
能するプロモーター（例、アデノウイルスＥ１ｂ由来の
最小プロモーター（TATA box）など）の下流に、例えば
ＧＡＬ１の転写活性配列（ＵＡＳ）を結合したものを用
い、酵母two-hybridシステムのＧＡＬ４−ＧＡＬ１の転
写調節系を動物細胞内に導入し、動物細胞内でレポータ
ー遺伝子の発現が誘導されるようにする。これにＧＡＬ
４−ＤＮＡ結合ドメインに融合された本発明のＩＲＡＰ
結合タンパク質をコードするＤＮＡと、例えば単純ヘル
ペスウイルス由来ＶＰ１６タンパク質をコードするＤＮ
Ａに融合した本発明のタンパク質をコードするＤＮＡを
発現させると、two-hybridの作用によりレポーター遺伝
子が発現される動物細胞株が得られる。この細胞株を試
験化合物の存在下、一定時間培養し、レポーター遺伝子
産物の活性を測定し、活性を低下させる化合物を選択す
る。該動物細胞株は、上記した宿主が動物細胞である形
質転換体の培養と同様に培養できる。ＣＡＴ、ルシフェ
ラーゼなどのレポーター遺伝子産物の活性は公知の方法
に従って、市販のキットを用いて測定できる。選択され
た化合物のうち、細胞毒性のある化合物ならびにレポー
ター遺伝子産物との相互作用等でレポーター遺伝子産物
自身の活性を阻害する化合物を擬陽性化合物として除外
できる。また、ＧＡＬ４−ＤＮＡ結合ドメインに本発明
のタンパク質を融合させた本発明のタンパク質をコード
するＤＮＡと例えば単純ヘルペスウイルス由来ＶＰ１６
タンパク質をコードするＤＮＡに本発明のＩＲＡＰ結合
タンパク質を融合させた本発明のＩＲＡＰ結合タンパク
質をコードするＤＮＡを用いて、上記動物細胞two-hybr
id法によるスクリーニングを行うこともできる。
るスクリーニング 動物細胞（例、チャイニーズハムスターオバリー（ＣＨ
Ｏ）細胞）にレポーター遺伝子として、例えばクロラム
フェニコールアセチルトランスフェラーゼ（ＣＡＴ）遺
伝子またはホタルルシフェラーゼ遺伝子を導入する。レ
ポーター遺伝子の転写調節領域は、例えば動物細胞で機
能するプロモーター（例、アデノウイルスＥ１ｂ由来の
最小プロモーター（TATA box）など）の下流に、例えば
ＧＡＬ１の転写活性配列（ＵＡＳ）を結合したものを用
い、酵母two-hybridシステムのＧＡＬ４−ＧＡＬ１の転
写調節系を動物細胞内に導入し、動物細胞内でレポータ
ー遺伝子の発現が誘導されるようにする。これにＧＡＬ
４−ＤＮＡ結合ドメインに融合された本発明のＩＲＡＰ
結合タンパク質をコードするＤＮＡと、例えば単純ヘル
ペスウイルス由来ＶＰ１６タンパク質をコードするＤＮ
Ａに融合した本発明のタンパク質をコードするＤＮＡを
発現させると、two-hybridの作用によりレポーター遺伝
子が発現される動物細胞株が得られる。この細胞株を試
験化合物の存在下、一定時間培養し、レポーター遺伝子
産物の活性を測定し、活性を低下させる化合物を選択す
る。該動物細胞株は、上記した宿主が動物細胞である形
質転換体の培養と同様に培養できる。ＣＡＴ、ルシフェ
ラーゼなどのレポーター遺伝子産物の活性は公知の方法
に従って、市販のキットを用いて測定できる。選択され
た化合物のうち、細胞毒性のある化合物ならびにレポー
ター遺伝子産物との相互作用等でレポーター遺伝子産物
自身の活性を阻害する化合物を擬陽性化合物として除外
できる。また、ＧＡＬ４−ＤＮＡ結合ドメインに本発明
のタンパク質を融合させた本発明のタンパク質をコード
するＤＮＡと例えば単純ヘルペスウイルス由来ＶＰ１６
タンパク質をコードするＤＮＡに本発明のＩＲＡＰ結合
タンパク質を融合させた本発明のＩＲＡＰ結合タンパク
質をコードするＤＮＡを用いて、上記動物細胞two-hybr
id法によるスクリーニングを行うこともできる。
【００５５】（３）本発明のタンパク質の発現を促進ま
たは抑制する化合物のスクリーニング 本発明のＤＮＡの転写調節領域をクローニングし、これ
にレポーター遺伝子（例、β−ガラクトシダーゼ、ホタ
ルルシフェラーゼ、クロラムフェニコールアセチルトラ
ンスフェラーゼ（ＣＡＴ）等）を融合し、動物細胞
（例、ＣＨＯ細胞）に導入する。この細胞株を試験化合
物の存在下、一定時間培養し、レポーター遺伝子産物の
産生量を上昇または低下させる化合物を選択する。該動
物細胞株は、上記した宿主が動物細胞である形質転換体
の培養と同様に培養できる。レポーター遺伝子産物の産
生量の上昇または低下は、例えば、培養液中のレポータ
ー遺伝子産物の活性を測定することによって判定するこ
とができる。選択された化合物のうち、細胞毒性のある
化合物ならびにレポーター遺伝子産物との相互作用等で
レポーター遺伝子産物自身の活性を上昇または低下させ
る化合物を擬陽性化合物として除外できる。
たは抑制する化合物のスクリーニング 本発明のＤＮＡの転写調節領域をクローニングし、これ
にレポーター遺伝子（例、β−ガラクトシダーゼ、ホタ
ルルシフェラーゼ、クロラムフェニコールアセチルトラ
ンスフェラーゼ（ＣＡＴ）等）を融合し、動物細胞
（例、ＣＨＯ細胞）に導入する。この細胞株を試験化合
物の存在下、一定時間培養し、レポーター遺伝子産物の
産生量を上昇または低下させる化合物を選択する。該動
物細胞株は、上記した宿主が動物細胞である形質転換体
の培養と同様に培養できる。レポーター遺伝子産物の産
生量の上昇または低下は、例えば、培養液中のレポータ
ー遺伝子産物の活性を測定することによって判定するこ
とができる。選択された化合物のうち、細胞毒性のある
化合物ならびにレポーター遺伝子産物との相互作用等で
レポーター遺伝子産物自身の活性を上昇または低下させ
る化合物を擬陽性化合物として除外できる。
【００５６】試験化合物としては、例えば、ペプチド、
タンパク質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生
産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液などが
あげられ、これら化合物は新規な化合物であってもよい
し、公知の化合物であってもよい。本発明のタンパク質
の発現を抑制する化合物としては、上記スクリーニング
で得られる本発明のタンパク質の発現を抑制する化合
物、上記したアンチセンスＤＮＡ、後述の本発明のＤＮ
Ａに対するプロモーター活性を阻害する化合物などがあ
げられる。本発明のタンパク質の発現を促進する化合物
としては、上記スクリーニングで得られる本発明のタン
パク質の発現を促進する化合物、後述の本発明のＤＮＡ
に対するプロモーター活性を促進する化合物などがあげ
られる。
タンパク質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生
産物、細胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液などが
あげられ、これら化合物は新規な化合物であってもよい
し、公知の化合物であってもよい。本発明のタンパク質
の発現を抑制する化合物としては、上記スクリーニング
で得られる本発明のタンパク質の発現を抑制する化合
物、上記したアンチセンスＤＮＡ、後述の本発明のＤＮ
Ａに対するプロモーター活性を阻害する化合物などがあ
げられる。本発明のタンパク質の発現を促進する化合物
としては、上記スクリーニングで得られる本発明のタン
パク質の発現を促進する化合物、後述の本発明のＤＮＡ
に対するプロモーター活性を促進する化合物などがあげ
られる。
【００５７】本発明のスクリーニング用キットは、本発
明のタンパク質を含有し、さらに本発明のＩＲＡＰ結合
タンパク質を含有していてもよい。また、本発明のスク
リーニング用キットは、本発明のタンパク質を産生する
能力を有する細胞（好ましくは、本発明のタンパク質コ
ードするＤＮＡで形質転換された形質転換体（例、酵
母、動物細胞などの細胞））を含有し、さらに本発明の
ＩＲＡＰ結合タンパク質を産生する能力を有する細胞
（好ましくは、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質をコー
ドするＤＮＡで形質転換された形質転換体（例、酵母、
動物細胞などの細胞））を含有してもよい。該形質転換
体は、本発明のタンパク質をコードするＤＮＡおよび本
発明のＩＲＡＰ結合タンパク質をコードするＤＮＡで形
質転換された形質転換体、あるいは本発明のタンパク質
をコードするＤＮＡおよび本発明のＩＲＡＰ結合タンパ
ク質をコードするＤＮＡで形質転換された形質転換体で
あってもよい。
明のタンパク質を含有し、さらに本発明のＩＲＡＰ結合
タンパク質を含有していてもよい。また、本発明のスク
リーニング用キットは、本発明のタンパク質を産生する
能力を有する細胞（好ましくは、本発明のタンパク質コ
ードするＤＮＡで形質転換された形質転換体（例、酵
母、動物細胞などの細胞））を含有し、さらに本発明の
ＩＲＡＰ結合タンパク質を産生する能力を有する細胞
（好ましくは、本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質をコー
ドするＤＮＡで形質転換された形質転換体（例、酵母、
動物細胞などの細胞））を含有してもよい。該形質転換
体は、本発明のタンパク質をコードするＤＮＡおよび本
発明のＩＲＡＰ結合タンパク質をコードするＤＮＡで形
質転換された形質転換体、あるいは本発明のタンパク質
をコードするＤＮＡおよび本発明のＩＲＡＰ結合タンパ
ク質をコードするＤＮＡで形質転換された形質転換体で
あってもよい。
【００５８】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
は、上記した試験化合物、例えば、ペプチド、タンパク
質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細
胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などから
選ばれた化合物であり、例えば、本発明のタンパク質と
本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質との結合阻害する化合
物、本発明のタンパク質の発現を促進または抑制する化
合物などがあげられる。該化合物の塩としては、前記し
た本発明のタンパク質の塩と同様のものが用いられる。
プロフィリンＩＩが比較的普遍的に分布するのに対し、
プロフィリンＩＩＬは脳、骨格筋、膵臓、胎盤、心臓で
特異的に発現する。また、ＭＤ３６はプロフィリンＩＩ
Ｌに特異的に結合する。これらのことを勘案すると、本
発明のタンパク質と本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質と
の結合を阻害する化合物または本発明のタンパク質の発
現を抑制する化合物は、例えば、高血糖症、糖尿病（特
にＩＩ型糖尿病など）などの疾病に対する予防・治療剤
などの医薬として有用である。また本発明のタンパク質
の発現を促進する化合物は、例えば、低血糖症などの疾
病に対する予防・治療剤などの医薬として有用である。
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
は、上記した試験化合物、例えば、ペプチド、タンパク
質、非ペプチド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細
胞抽出液、植物抽出液、動物組織抽出液、血漿などから
選ばれた化合物であり、例えば、本発明のタンパク質と
本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質との結合阻害する化合
物、本発明のタンパク質の発現を促進または抑制する化
合物などがあげられる。該化合物の塩としては、前記し
た本発明のタンパク質の塩と同様のものが用いられる。
プロフィリンＩＩが比較的普遍的に分布するのに対し、
プロフィリンＩＩＬは脳、骨格筋、膵臓、胎盤、心臓で
特異的に発現する。また、ＭＤ３６はプロフィリンＩＩ
Ｌに特異的に結合する。これらのことを勘案すると、本
発明のタンパク質と本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質と
の結合を阻害する化合物または本発明のタンパク質の発
現を抑制する化合物は、例えば、高血糖症、糖尿病（特
にＩＩ型糖尿病など）などの疾病に対する予防・治療剤
などの医薬として有用である。また本発明のタンパク質
の発現を促進する化合物は、例えば、低血糖症などの疾
病に対する予防・治療剤などの医薬として有用である。
【００５９】本発明のスクリーニング方法またはスクリ
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
を上述の予防・治療剤として使用する場合、常套手段に
従って製剤化することができる。例えば、前記した本発
明のタンパク質を含有する医薬と同様にして、錠剤、カ
プセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、無菌性
溶液、懸濁液剤などに製剤化し、経口的または非経口的
に投与することができる。このようにして得られる製剤
は安全で低毒性であるので、例えば、温血動物（例え
ば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウ
シ、ウマ、トリ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーな
ど）に対して投与することができる。該化合物またはそ
の塩の投与量は、その作用、対象疾患、投与対象、投与
ルートなどにより差異はあるが、例えば、糖尿病治療の
目的で本発明のタンパク質と本発明のＩＲＡＰ結合タン
パク質との結合を阻害する化合物または本発明のタンパ
ク質の発現を抑制する化合物を経口投与する場合、一般
的に成人（体重６０ｋｇとして）においては、一日につ
き該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．
０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与
する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与
量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例え
ば、糖尿病治療の目的で本発明のタンパク質と本発明の
ＩＲＡＰ結合タンパク質との結合を阻害する化合物また
は本発明のタンパク質の発現を抑制する化合物を注射剤
の形で通常成人（６０ｋｇとして）に投与する場合、一
日につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好まし
くは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１
〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合で
ある。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量
を投与することができる。例えば、低血糖症治療の目的
で本発明のタンパク質の発現を促進する化合物を経口投
与する場合、一般的に成人（体重６０ｋｇとして）にお
いては、一日につき該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、
好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．
０〜２０ｍｇ投与する。例えば、低血糖症治療の目的で
本発明のタンパク質の発現を促進する化合物を注射剤の
形で通常成人（６０ｋｇとして）に投与する場合、一日
につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましく
は約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜
１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合であ
る。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を
投与することができる。
ーニング用キットを用いて得られる化合物またはその塩
を上述の予防・治療剤として使用する場合、常套手段に
従って製剤化することができる。例えば、前記した本発
明のタンパク質を含有する医薬と同様にして、錠剤、カ
プセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤、無菌性
溶液、懸濁液剤などに製剤化し、経口的または非経口的
に投与することができる。このようにして得られる製剤
は安全で低毒性であるので、例えば、温血動物（例え
ば、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウ
シ、ウマ、トリ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーな
ど）に対して投与することができる。該化合物またはそ
の塩の投与量は、その作用、対象疾患、投与対象、投与
ルートなどにより差異はあるが、例えば、糖尿病治療の
目的で本発明のタンパク質と本発明のＩＲＡＰ結合タン
パク質との結合を阻害する化合物または本発明のタンパ
ク質の発現を抑制する化合物を経口投与する場合、一般
的に成人（体重６０ｋｇとして）においては、一日につ
き該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．
０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与
する。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与
量は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例え
ば、糖尿病治療の目的で本発明のタンパク質と本発明の
ＩＲＡＰ結合タンパク質との結合を阻害する化合物また
は本発明のタンパク質の発現を抑制する化合物を注射剤
の形で通常成人（６０ｋｇとして）に投与する場合、一
日につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好まし
くは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１
〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合で
ある。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量
を投与することができる。例えば、低血糖症治療の目的
で本発明のタンパク質の発現を促進する化合物を経口投
与する場合、一般的に成人（体重６０ｋｇとして）にお
いては、一日につき該化合物を約０.１〜１００ｍｇ、
好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．
０〜２０ｍｇ投与する。例えば、低血糖症治療の目的で
本発明のタンパク質の発現を促進する化合物を注射剤の
形で通常成人（６０ｋｇとして）に投与する場合、一日
につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましく
は約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜
１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが好都合であ
る。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を
投与することができる。
【００６０】（４）本発明のタンパク質の定量 本発明のタンパク質に対する抗体（以下、本発明の抗体
と略記する場合がある）は、本発明のタンパク質を特異
的に認識することができるので、被検液中の本発明のタ
ンパク質の定量、特にサンドイッチ免疫測定法による定
量などに使用することができる。すなわち、本発明は、
（ｉ）本発明の抗体と、被検液および標識化された本発
明のタンパク質とを競合的に反応させ、該抗体に結合し
た標識化された本発明のタンパク質の割合を測定するこ
とを特徴とする被検液中の本発明のタンパク質の定量
法、および（ii）被検液と担体上に不溶化した本発明の
抗体および標識化された本発明の別の抗体とを同時ある
いは連続的に反応させたのち、不溶化担体上の標識剤の
活性を測定することを特徴とする被検液中の本発明のタ
ンパク質の定量法などを提供する。上記（ii）の定量法
においては、一方の抗体が本発明のタンパク質のＮ端部
を認識する抗体で、他方の抗体が本発明のタンパク質の
Ｃ端部に反応する抗体であることが望ましい。
と略記する場合がある）は、本発明のタンパク質を特異
的に認識することができるので、被検液中の本発明のタ
ンパク質の定量、特にサンドイッチ免疫測定法による定
量などに使用することができる。すなわち、本発明は、
（ｉ）本発明の抗体と、被検液および標識化された本発
明のタンパク質とを競合的に反応させ、該抗体に結合し
た標識化された本発明のタンパク質の割合を測定するこ
とを特徴とする被検液中の本発明のタンパク質の定量
法、および（ii）被検液と担体上に不溶化した本発明の
抗体および標識化された本発明の別の抗体とを同時ある
いは連続的に反応させたのち、不溶化担体上の標識剤の
活性を測定することを特徴とする被検液中の本発明のタ
ンパク質の定量法などを提供する。上記（ii）の定量法
においては、一方の抗体が本発明のタンパク質のＮ端部
を認識する抗体で、他方の抗体が本発明のタンパク質の
Ｃ端部に反応する抗体であることが望ましい。
【００６１】また、本発明のタンパク質に対するモノク
ローナル抗体（以下、本発明のモノクローナル抗体と称
する場合がある）を用いて本発明のタンパク質の定量を
行なえるほか、組織染色等による検出を行うこともでき
る。これらの目的には、抗体分子そのものを用いてもよ
く、また、抗体分子のＦ(ａｂ')2、Ｆａｂ'、あるいは
Ｆａｂ画分を用いてもよい。本発明の抗体を用いる本発
明のタンパク質の定量法は、特に制限されるべきもので
はなく、被測定液中の抗原量（例えば、タンパク質量）
に対応した抗体、抗原もしくは抗体−抗原複合体の量を
化学的または物理的手段により検出し、これを既知量の
抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算出す
る測定法であれば、いずれの測定法を用いてもよい。例
えば、ネフロメトリー、競合法、イムノメトリック法お
よびサンドイッチ法が好適に用いられるが、感度、特異
性の点で、後述するサンドイッチ法を用いるのが特に好
ましい。標識物質を用いる測定法に用いられる標識剤と
しては、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発
光物質などが用いられる。放射性同位元素としては、例
えば、〔125Ｉ〕、〔131Ｉ〕、〔3Ｈ〕、〔14Ｃ〕など
が用いられる。上記酵素としては、安定で比活性の大き
なものが好ましく、例えば、β−ガラクトシダーゼ、β
−グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオ
キシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる。蛍
光物質としては、例えば、フルオレスカミン、フルオレ
ッセンイソチオシアネートなどが用いられる。発光物質
としては、例えば、ルミノール、ルミノール誘導体、ル
シフェリン、ルシゲニンなどが用いられる。さらに、抗
体あるいは抗原と標識剤との結合にビオチン−アビジン
系を用いることもできる。
ローナル抗体（以下、本発明のモノクローナル抗体と称
する場合がある）を用いて本発明のタンパク質の定量を
行なえるほか、組織染色等による検出を行うこともでき
る。これらの目的には、抗体分子そのものを用いてもよ
く、また、抗体分子のＦ(ａｂ')2、Ｆａｂ'、あるいは
Ｆａｂ画分を用いてもよい。本発明の抗体を用いる本発
明のタンパク質の定量法は、特に制限されるべきもので
はなく、被測定液中の抗原量（例えば、タンパク質量）
に対応した抗体、抗原もしくは抗体−抗原複合体の量を
化学的または物理的手段により検出し、これを既知量の
抗原を含む標準液を用いて作製した標準曲線より算出す
る測定法であれば、いずれの測定法を用いてもよい。例
えば、ネフロメトリー、競合法、イムノメトリック法お
よびサンドイッチ法が好適に用いられるが、感度、特異
性の点で、後述するサンドイッチ法を用いるのが特に好
ましい。標識物質を用いる測定法に用いられる標識剤と
しては、例えば、放射性同位元素、酵素、蛍光物質、発
光物質などが用いられる。放射性同位元素としては、例
えば、〔125Ｉ〕、〔131Ｉ〕、〔3Ｈ〕、〔14Ｃ〕など
が用いられる。上記酵素としては、安定で比活性の大き
なものが好ましく、例えば、β−ガラクトシダーゼ、β
−グルコシダーゼ、アルカリフォスファターゼ、パーオ
キシダーゼ、リンゴ酸脱水素酵素などが用いられる。蛍
光物質としては、例えば、フルオレスカミン、フルオレ
ッセンイソチオシアネートなどが用いられる。発光物質
としては、例えば、ルミノール、ルミノール誘導体、ル
シフェリン、ルシゲニンなどが用いられる。さらに、抗
体あるいは抗原と標識剤との結合にビオチン−アビジン
系を用いることもできる。
【００６２】抗原あるいは抗体の不溶化に当っては、物
理吸着を用いてもよく、また通常タンパク質あるいは酵
素等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用
いる方法でもよい。担体としては、アガロース、デキス
トラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポリスチレ
ン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹脂、ある
いはガラス等があげられる。サンドイッチ法においては
不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検液を反応
させ（１次反応）、さらに標識化した別の本発明のモノ
クローナル抗体を反応させ（２次反応）たのち、不溶化
担体上の標識剤の活性を測定することにより被検液中の
本発明のタンパク質量を定量することができる。１次反
応と２次反応は逆の順序に行っても、また、同時に行な
ってもよいし時間をずらして行なってもよい。標識化剤
および不溶化の方法は前記のそれらに準じることができ
る。また、サンドイッチ法による免疫測定法において、
固相用抗体あるいは標識用抗体に用いられる抗体は必ず
しも１種類である必要はなく、測定感度を向上させる等
の目的で２種類以上の抗体の混合物を用いてもよい。本
発明のサンドイッチ法による本発明のタンパク質の測定
法においては、１次反応と２次反応に用いられる本発明
のモノクローナル抗体は、本発明のタンパク質の結合す
る部位が相異なる抗体が好ましく用いられる。すなわ
ち、１次反応および２次反応に用いられる抗体は、例え
ば、２次反応で用いられる抗体が、本発明のタンパク質
のＣ端部を認識する場合、１次反応で用いられる抗体
は、好ましくはＣ端部以外、例えばＮ端部を認識する抗
体が用いられる。
理吸着を用いてもよく、また通常タンパク質あるいは酵
素等を不溶化、固定化するのに用いられる化学結合を用
いる方法でもよい。担体としては、アガロース、デキス
トラン、セルロースなどの不溶性多糖類、ポリスチレ
ン、ポリアクリルアミド、シリコン等の合成樹脂、ある
いはガラス等があげられる。サンドイッチ法においては
不溶化した本発明のモノクローナル抗体に被検液を反応
させ（１次反応）、さらに標識化した別の本発明のモノ
クローナル抗体を反応させ（２次反応）たのち、不溶化
担体上の標識剤の活性を測定することにより被検液中の
本発明のタンパク質量を定量することができる。１次反
応と２次反応は逆の順序に行っても、また、同時に行な
ってもよいし時間をずらして行なってもよい。標識化剤
および不溶化の方法は前記のそれらに準じることができ
る。また、サンドイッチ法による免疫測定法において、
固相用抗体あるいは標識用抗体に用いられる抗体は必ず
しも１種類である必要はなく、測定感度を向上させる等
の目的で２種類以上の抗体の混合物を用いてもよい。本
発明のサンドイッチ法による本発明のタンパク質の測定
法においては、１次反応と２次反応に用いられる本発明
のモノクローナル抗体は、本発明のタンパク質の結合す
る部位が相異なる抗体が好ましく用いられる。すなわ
ち、１次反応および２次反応に用いられる抗体は、例え
ば、２次反応で用いられる抗体が、本発明のタンパク質
のＣ端部を認識する場合、１次反応で用いられる抗体
は、好ましくはＣ端部以外、例えばＮ端部を認識する抗
体が用いられる。
【００６３】本発明のモノクローナル抗体をサンドイッ
チ法以外の測定システム、例えば、競合法、イムノメト
リック法あるいはネフロメトリーなどに用いることがで
きる。競合法では、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体
に対して競合的に反応させたのち、未反応の標識抗原
(Ｆ）と、抗体と結合した標識抗原（Ｂ）とを分離し
（Ｂ／Ｆ分離）、Ｂ，Ｆいずれかの標識量を測定し、被
検液中の抗原量を定量する。本反応法には、抗体として
可溶性抗体を用い、Ｂ／Ｆ分離をポリエチレングリコー
ル、前記抗体に対する第２抗体などを用いる液相法、お
よび、第１抗体として固相化抗体を用いるか、あるい
は、第１抗体は可溶性のものを用い第２抗体として固相
化抗体を用いる固相化法とが用いられる。イムノメトリ
ック法では、被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の
標識化抗体に対して競合反応させた後固相と液相を分離
するか、あるいは、被検液中の抗原と過剰量の標識化抗
体とを反応させ、次に固相化抗原を加え未反応の標識化
抗体を固相に結合させたのち、固相と液相を分離する。
次に、いずれかの相の標識量を測定し被検液中の抗原量
を定量する。また、ネフロメトリーでは、ゲル内あるい
は溶液中で抗原抗体反応の結果生じた不溶性の沈降物の
量を測定する。被検液中の抗原量が僅かであり、少量の
沈降物しか得られない場合にもレーザーの散乱を利用す
るレーザーネフロメトリーなどが好適に用いられる。
チ法以外の測定システム、例えば、競合法、イムノメト
リック法あるいはネフロメトリーなどに用いることがで
きる。競合法では、被検液中の抗原と標識抗原とを抗体
に対して競合的に反応させたのち、未反応の標識抗原
(Ｆ）と、抗体と結合した標識抗原（Ｂ）とを分離し
（Ｂ／Ｆ分離）、Ｂ，Ｆいずれかの標識量を測定し、被
検液中の抗原量を定量する。本反応法には、抗体として
可溶性抗体を用い、Ｂ／Ｆ分離をポリエチレングリコー
ル、前記抗体に対する第２抗体などを用いる液相法、お
よび、第１抗体として固相化抗体を用いるか、あるい
は、第１抗体は可溶性のものを用い第２抗体として固相
化抗体を用いる固相化法とが用いられる。イムノメトリ
ック法では、被検液中の抗原と固相化抗原とを一定量の
標識化抗体に対して競合反応させた後固相と液相を分離
するか、あるいは、被検液中の抗原と過剰量の標識化抗
体とを反応させ、次に固相化抗原を加え未反応の標識化
抗体を固相に結合させたのち、固相と液相を分離する。
次に、いずれかの相の標識量を測定し被検液中の抗原量
を定量する。また、ネフロメトリーでは、ゲル内あるい
は溶液中で抗原抗体反応の結果生じた不溶性の沈降物の
量を測定する。被検液中の抗原量が僅かであり、少量の
沈降物しか得られない場合にもレーザーの散乱を利用す
るレーザーネフロメトリーなどが好適に用いられる。
【００６４】これら個々の免疫学的測定法を本発明の定
量方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の
設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の
条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて本発
明のタンパク質の測定系を構築すればよい。これらの一
般的な技術手段の詳細については、総説、成書などを参
照することができる。例えば、入江 寛編「ラジオイム
ノアッセイ」（講談社、昭和４９年発行）、入江 寛編
「続ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和５４年発
行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（医学書院、昭
和５３年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第
２版）（医学書院、昭和５７年発行）、石川栄治ら編
「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年
発行）、「Methods in ENZYMOLOGY」 Vol. 70(Immunoch
emical Techniques(Part A))、同書 Vol. 73(Immunoche
mical Techniques(Part B))、 同書 Vol. 74(Immunoche
mical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunoche
mical Techniques(Part D: Selected Immunoassays))、
同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E: Mo
noclonal Antibodiesand General Immunoassay Method
s))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part
I: Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodie
s))(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照する
ことができる。以上のようにして、本発明の抗体を用い
ることによって、本発明のタンパク質を感度良く定量す
ることができる。さらには、本発明の抗体を用いて本発
明のタンパク質の濃度を定量することによって、（１）
本発明のタンパク質の濃度の増加が検出された場合、例
えば、高血糖症または糖尿病などの疾病である、または
将来罹患する可能性が高いと診断することができ、また
（２）本発明のタンパク質の濃度の減少が検出された場
合、例えば、低血糖症などの疾病である、または将来罹
患する可能性が高いと診断することができる。また、本
発明の抗体は、体液や組織などの被検体中に存在する本
発明のタンパク質を検出するために使用することができ
る。また、本発明のタンパク質を精製するために使用す
る抗体カラムの作製、精製時の各分画中の本発明のタン
パク質の検出、被検細胞内における本発明のタンパク質
の挙動の分析などのために使用することができる。
量方法に適用するにあたっては、特別の条件、操作等の
設定は必要とされない。それぞれの方法における通常の
条件、操作法に当業者の通常の技術的配慮を加えて本発
明のタンパク質の測定系を構築すればよい。これらの一
般的な技術手段の詳細については、総説、成書などを参
照することができる。例えば、入江 寛編「ラジオイム
ノアッセイ」（講談社、昭和４９年発行）、入江 寛編
「続ラジオイムノアッセイ」（講談社、昭和５４年発
行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（医学書院、昭
和５３年発行）、石川栄治ら編「酵素免疫測定法」（第
２版）（医学書院、昭和５７年発行）、石川栄治ら編
「酵素免疫測定法」（第３版）（医学書院、昭和６２年
発行）、「Methods in ENZYMOLOGY」 Vol. 70(Immunoch
emical Techniques(Part A))、同書 Vol. 73(Immunoche
mical Techniques(Part B))、 同書 Vol. 74(Immunoche
mical Techniques(Part C))、 同書 Vol. 84(Immunoche
mical Techniques(Part D: Selected Immunoassays))、
同書 Vol. 92(Immunochemical Techniques(Part E: Mo
noclonal Antibodiesand General Immunoassay Method
s))、 同書 Vol. 121(Immunochemical Techniques(Part
I: Hybridoma Technology and Monoclonal Antibodie
s))(以上、アカデミックプレス社発行)などを参照する
ことができる。以上のようにして、本発明の抗体を用い
ることによって、本発明のタンパク質を感度良く定量す
ることができる。さらには、本発明の抗体を用いて本発
明のタンパク質の濃度を定量することによって、（１）
本発明のタンパク質の濃度の増加が検出された場合、例
えば、高血糖症または糖尿病などの疾病である、または
将来罹患する可能性が高いと診断することができ、また
（２）本発明のタンパク質の濃度の減少が検出された場
合、例えば、低血糖症などの疾病である、または将来罹
患する可能性が高いと診断することができる。また、本
発明の抗体は、体液や組織などの被検体中に存在する本
発明のタンパク質を検出するために使用することができ
る。また、本発明のタンパク質を精製するために使用す
る抗体カラムの作製、精製時の各分画中の本発明のタン
パク質の検出、被検細胞内における本発明のタンパク質
の挙動の分析などのために使用することができる。
【００６５】（５）遺伝子診断剤 本発明のＤＮＡは、例えば、プローブとして使用するこ
とにより、温血動物（例えば、ヒト、ラット、マウス、
モルモット、ウサギ、トリ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウ
マ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）における本
発明のタンパク質をコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡの
異常（遺伝子異常）を検出することができるので、例え
ば、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの損傷、突然変異あるいは
発現低下や、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの増加あるいは発
現過多などの遺伝子診断剤として有用である。本発明の
ＤＮＡを用いる上記の遺伝子診断は、例えば、公知のノ
ーザンハイブリダイゼーションやＰＣＲ−ＳＳＣＰ法
（ゲノミックス（Genomics），第５巻，８７４〜８７９
頁（１９８９年）、プロシージングズ・オブ・ザ・ナシ
ョナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ユ
ーエスエー（Proceedings of theNational Academy of
Sciences of the United States of America）、第８６
巻、２７６６〜２７７０頁（１９８９年））などにより
実施することができる。例えば、ノーザンハイブリダイ
ゼーションにより発現過多が検出された場合やＰＣＲ−
ＳＳＣＰ法によりＤＮＡの突然変異が検出された場合
は、例えば、高血糖症または糖尿病、あるいは低血糖症
などの疾病である可能性が高いと診断することができ
る。
とにより、温血動物（例えば、ヒト、ラット、マウス、
モルモット、ウサギ、トリ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウ
マ、ネコ、イヌ、サル、チンパンジーなど）における本
発明のタンパク質をコードするＤＮＡまたはｍＲＮＡの
異常（遺伝子異常）を検出することができるので、例え
ば、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの損傷、突然変異あるいは
発現低下や、該ＤＮＡまたはｍＲＮＡの増加あるいは発
現過多などの遺伝子診断剤として有用である。本発明の
ＤＮＡを用いる上記の遺伝子診断は、例えば、公知のノ
ーザンハイブリダイゼーションやＰＣＲ−ＳＳＣＰ法
（ゲノミックス（Genomics），第５巻，８７４〜８７９
頁（１９８９年）、プロシージングズ・オブ・ザ・ナシ
ョナル・アカデミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ユ
ーエスエー（Proceedings of theNational Academy of
Sciences of the United States of America）、第８６
巻、２７６６〜２７７０頁（１９８９年））などにより
実施することができる。例えば、ノーザンハイブリダイ
ゼーションにより発現過多が検出された場合やＰＣＲ−
ＳＳＣＰ法によりＤＮＡの突然変異が検出された場合
は、例えば、高血糖症または糖尿病、あるいは低血糖症
などの疾病である可能性が高いと診断することができ
る。
【００６６】（６）アンチセンスＤＮＡを含有する医薬 本発明のＤＮＡに相補的に結合し、該ＤＮＡの発現を抑
制することができるアンチセンスＤＮＡは、生体内にお
ける本発明のタンパク質の産生を抑制することができる
ので、上記の本発明のタンパク質の発現を抑制する化合
物と同様に、例えば、高血糖症または糖尿病（特にＩＩ
型糖尿病など）などの予防・治療剤として使用すること
ができる。上記アンチセンスＤＮＡを上記の予防・治療
剤として使用する場合、前記した本発明のＤＮＡを含有
する各種の予防・治療剤と同様にして実施することがで
きる。例えば、該アンチセンスＤＮＡを用いる場合、該
アンチセンスＤＮＡを単独あるいはレトロウイルスベク
ター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスアソシ
エーテッドウイルスベクターなどの適当なベクターに挿
入した後、常套手段に従って実施することができる。該
アンチセンスＤＮＡは、そのままで、あるいは摂取促進
のために補助剤などの生理学的に認められる担体ととも
に製剤化し、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのよう
なカテーテルによって投与できる。あるいは、エアロゾ
ル化して吸入剤として気管内に投与することもできる。
さらに、該アンチセンスＤＮＡは、組織や細胞における
本発明のＤＮＡの存在やその発現状況を調べるための診
断用オリゴヌクレオチドプローブとして使用することも
できる。
制することができるアンチセンスＤＮＡは、生体内にお
ける本発明のタンパク質の産生を抑制することができる
ので、上記の本発明のタンパク質の発現を抑制する化合
物と同様に、例えば、高血糖症または糖尿病（特にＩＩ
型糖尿病など）などの予防・治療剤として使用すること
ができる。上記アンチセンスＤＮＡを上記の予防・治療
剤として使用する場合、前記した本発明のＤＮＡを含有
する各種の予防・治療剤と同様にして実施することがで
きる。例えば、該アンチセンスＤＮＡを用いる場合、該
アンチセンスＤＮＡを単独あるいはレトロウイルスベク
ター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスアソシ
エーテッドウイルスベクターなどの適当なベクターに挿
入した後、常套手段に従って実施することができる。該
アンチセンスＤＮＡは、そのままで、あるいは摂取促進
のために補助剤などの生理学的に認められる担体ととも
に製剤化し、遺伝子銃やハイドロゲルカテーテルのよう
なカテーテルによって投与できる。あるいは、エアロゾ
ル化して吸入剤として気管内に投与することもできる。
さらに、該アンチセンスＤＮＡは、組織や細胞における
本発明のＤＮＡの存在やその発現状況を調べるための診
断用オリゴヌクレオチドプローブとして使用することも
できる。
【００６７】（７）本発明の抗体を含有する医薬 本発明のタンパク質の活性を中和する作用を有する本発
明の抗体は、高血糖症、糖尿病（特にＩＩ型糖尿病な
ど）などの疾患に対する医薬（予防・治療剤）として使
用することができる。本発明の抗体を含有する上記疾患
の予防・治療剤は、そのまま液剤として、または適当な
剤形の医薬組成物として、温血動物（例、ヒト、ラッ
ト、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルな
ど）に対して経口的または非経口的に投与することがで
きる。投与量は、投与対象、対象疾患、症状、投与ルー
トなどによっても異なるが、例えば、成人の糖尿病の治
療・予防のために使用する場合には、本発明の抗体を１
回量として、通常０.０１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重程度、
好ましくは０.１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重程度、さらに好
ましくは０.１〜５ｍｇ／ｋｇ体重程度を、１日１〜５
回程度、好ましくは１日１〜３回程度、静脈注射により
投与するのが好都合である。他の非経口投与および経口
投与の場合もこれに準ずる量を投与することができる。
症状が特に重い場合には、その症状に応じて増量しても
よい。本発明の抗体は、それ自体または適当な医薬組成
物として投与することができる。上記投与に用いられる
医薬組成物は、本発明の抗体と薬理学的に許容され得る
担体、希釈剤もしくは賦形剤とを含むものである。かか
る組成物は、経口または非経口投与に適する剤形として
提供される。すなわち、例えば、経口投与のための組成
物としては、固体または液体の剤形、具体的には錠剤
（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、丸剤、顆
粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤を含む）、
シロップ剤、乳剤、懸濁剤などがあげられる。かかる組
成物は公知の方法によって製造され、製剤分野において
通常用いられる担体、希釈剤もしくは賦形剤を含有する
ものである。例えば、錠剤用の担体、賦形剤としては、
乳糖、でんぷん、蔗糖、ステアリン酸マグネシウムなど
が用いられる。
明の抗体は、高血糖症、糖尿病（特にＩＩ型糖尿病な
ど）などの疾患に対する医薬（予防・治療剤）として使
用することができる。本発明の抗体を含有する上記疾患
の予防・治療剤は、そのまま液剤として、または適当な
剤形の医薬組成物として、温血動物（例、ヒト、ラッ
ト、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ネコ、イヌ、サルな
ど）に対して経口的または非経口的に投与することがで
きる。投与量は、投与対象、対象疾患、症状、投与ルー
トなどによっても異なるが、例えば、成人の糖尿病の治
療・予防のために使用する場合には、本発明の抗体を１
回量として、通常０.０１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重程度、
好ましくは０.１〜１０ｍｇ／ｋｇ体重程度、さらに好
ましくは０.１〜５ｍｇ／ｋｇ体重程度を、１日１〜５
回程度、好ましくは１日１〜３回程度、静脈注射により
投与するのが好都合である。他の非経口投与および経口
投与の場合もこれに準ずる量を投与することができる。
症状が特に重い場合には、その症状に応じて増量しても
よい。本発明の抗体は、それ自体または適当な医薬組成
物として投与することができる。上記投与に用いられる
医薬組成物は、本発明の抗体と薬理学的に許容され得る
担体、希釈剤もしくは賦形剤とを含むものである。かか
る組成物は、経口または非経口投与に適する剤形として
提供される。すなわち、例えば、経口投与のための組成
物としては、固体または液体の剤形、具体的には錠剤
（糖衣錠、フィルムコーティング錠を含む）、丸剤、顆
粒剤、散剤、カプセル剤（ソフトカプセル剤を含む）、
シロップ剤、乳剤、懸濁剤などがあげられる。かかる組
成物は公知の方法によって製造され、製剤分野において
通常用いられる担体、希釈剤もしくは賦形剤を含有する
ものである。例えば、錠剤用の担体、賦形剤としては、
乳糖、でんぷん、蔗糖、ステアリン酸マグネシウムなど
が用いられる。
【００６８】非経口投与のための組成物としては、例え
ば、注射剤、坐剤などが用いられ、注射剤は静脈注射
剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉注射剤、点滴注射剤
などの剤形を包含する。かかる注射剤は、公知の方法に
従って、例えば、上記抗体またはその塩を通常注射剤に
用いられる無菌の水性もしくは油性液に溶解、懸濁また
は乳化することによって調製する。注射用の水性液とし
ては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬
を含む等張液などが用いられ、適当な溶解補助剤、例え
ば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコール
（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコー
ル）、非イオン界面活性剤〔例、ポリソルベート８０、
ＨＣＯ−５０（polyoxyethylene（５０mol）adduct of
hydrogenated castor oil）〕などと併用してもよい。
油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いら
れ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアル
コールなどを併用してもよい。調製された注射液は、通
常、適当なアンプルに充填される。直腸投与に用いられ
る坐剤は、上記抗体またはその塩を通常の坐薬用基剤に
混合することによって調製される。上記の経口用または
非経口用医薬組成物は、活性成分の投与量に適合するよ
うな投薬単位の剤形に調製されることが好都合である。
かかる投薬単位の剤形としては、錠剤、丸剤、カプセル
剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが例示され、それぞ
れの投薬単位剤形当たり通常５〜５００ｍｇ、とりわけ
注射剤では５〜１００ｍｇ、その他の剤形では１０〜２
５０ｍｇの上記抗体が含有されていることが好ましい。
なお前記した各組成物は、上記抗体との配合により好ま
しくない相互作用を生じない限り他の活性成分を含有し
てもよい。
ば、注射剤、坐剤などが用いられ、注射剤は静脈注射
剤、皮下注射剤、皮内注射剤、筋肉注射剤、点滴注射剤
などの剤形を包含する。かかる注射剤は、公知の方法に
従って、例えば、上記抗体またはその塩を通常注射剤に
用いられる無菌の水性もしくは油性液に溶解、懸濁また
は乳化することによって調製する。注射用の水性液とし
ては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬
を含む等張液などが用いられ、適当な溶解補助剤、例え
ば、アルコール（例、エタノール）、ポリアルコール
（例、プロピレングリコール、ポリエチレングリコー
ル）、非イオン界面活性剤〔例、ポリソルベート８０、
ＨＣＯ−５０（polyoxyethylene（５０mol）adduct of
hydrogenated castor oil）〕などと併用してもよい。
油性液としては、例えば、ゴマ油、大豆油などが用いら
れ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアル
コールなどを併用してもよい。調製された注射液は、通
常、適当なアンプルに充填される。直腸投与に用いられ
る坐剤は、上記抗体またはその塩を通常の坐薬用基剤に
混合することによって調製される。上記の経口用または
非経口用医薬組成物は、活性成分の投与量に適合するよ
うな投薬単位の剤形に調製されることが好都合である。
かかる投薬単位の剤形としては、錠剤、丸剤、カプセル
剤、注射剤（アンプル）、坐剤などが例示され、それぞ
れの投薬単位剤形当たり通常５〜５００ｍｇ、とりわけ
注射剤では５〜１００ｍｇ、その他の剤形では１０〜２
５０ｍｇの上記抗体が含有されていることが好ましい。
なお前記した各組成物は、上記抗体との配合により好ま
しくない相互作用を生じない限り他の活性成分を含有し
てもよい。
【００６９】（８）ＤＮＡ導入動物 本発明は、外来性の本発明のタンパク質をコードするＤ
ＮＡ（以下、本発明の外来性ＤＮＡと略記する）または
その変異ＤＮＡ（本発明の外来性変異ＤＮＡと略記する
場合がある）を有する非ヒト哺乳動物を提供する。すな
わち、本発明は、（１）本発明の外来性ＤＮＡまたはそ
の変異ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物、（２）非ヒト哺
乳動物がゲッ歯動物である第（１)記載の動物、（３）ゲ
ッ歯動物がマウスまたはラットである第（２）記載の動
物、および（４）本発明の外来性ＤＮＡまたはその変異
ＤＮＡを含有し、哺乳動物において発現しうる組換えベ
クターを提供するものである。本発明の外来性ＤＮＡま
たはその変異ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物（以下、本
発明のＤＮＡ導入動物と略記する）は、未受精卵、受精
卵、精子およびその始原細胞を含む胚芽細胞などに対し
て、好ましくは、非ヒト哺乳動物の発生における胚発生
の段階（さらに好ましくは、単細胞または受精卵細胞の
段階でかつ一般に８細胞期以前）に、リン酸カルシウム
法、電気パルス法、リポフェクション法、マイクロイン
ジェクション法、パーティクルガン法、ＤＥＡＥ−デキ
ストラン法、レトロウイルス法などにより目的とするＤ
ＮＡを導入することによって作出することができる。ま
た、該ＤＮＡ導入方法により、体細胞、生体の臓器、組
織細胞などに目的とする本発明の外来性ＤＮＡを導入
し、細胞培養、組織培養などに利用することもでき、さ
らに、これら細胞を上述の胚芽細胞と公知の細胞融合法
により融合させることにより本発明のＤＮＡ導入動物を
作出することもできる。
ＮＡ（以下、本発明の外来性ＤＮＡと略記する）または
その変異ＤＮＡ（本発明の外来性変異ＤＮＡと略記する
場合がある）を有する非ヒト哺乳動物を提供する。すな
わち、本発明は、（１）本発明の外来性ＤＮＡまたはそ
の変異ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物、（２）非ヒト哺
乳動物がゲッ歯動物である第（１)記載の動物、（３）ゲ
ッ歯動物がマウスまたはラットである第（２）記載の動
物、および（４）本発明の外来性ＤＮＡまたはその変異
ＤＮＡを含有し、哺乳動物において発現しうる組換えベ
クターを提供するものである。本発明の外来性ＤＮＡま
たはその変異ＤＮＡを有する非ヒト哺乳動物（以下、本
発明のＤＮＡ導入動物と略記する）は、未受精卵、受精
卵、精子およびその始原細胞を含む胚芽細胞などに対し
て、好ましくは、非ヒト哺乳動物の発生における胚発生
の段階（さらに好ましくは、単細胞または受精卵細胞の
段階でかつ一般に８細胞期以前）に、リン酸カルシウム
法、電気パルス法、リポフェクション法、マイクロイン
ジェクション法、パーティクルガン法、ＤＥＡＥ−デキ
ストラン法、レトロウイルス法などにより目的とするＤ
ＮＡを導入することによって作出することができる。ま
た、該ＤＮＡ導入方法により、体細胞、生体の臓器、組
織細胞などに目的とする本発明の外来性ＤＮＡを導入
し、細胞培養、組織培養などに利用することもでき、さ
らに、これら細胞を上述の胚芽細胞と公知の細胞融合法
により融合させることにより本発明のＤＮＡ導入動物を
作出することもできる。
【００７０】非ヒト哺乳動物としては、例えば、ウシ、
ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモッ
ト、ハムスター、マウス、ラットなどが用いられる。な
かでも、病体動物モデル系の作成の面から個体発生およ
び生物サイクルが比較的短く、また、繁殖が容易なゲッ
歯動物、とりわけマウス（例えば、純系として、Ｃ５７
ＢＬ／６系統，ＤＢＡ２系統など、交雑系として、Ｂ６
Ｃ３Ｆ1系統，ＢＤＦ1系統，Ｂ６Ｄ２Ｆ1系統，ＢＡＬ
Ｂ／ｃ系統，ＩＣＲ系統など）またはラット（例えば、
Ｗｉｓｔａｒ，ＳＤなど）などが好ましい。哺乳動物に
おいて発現しうる組換えベクターにおける「哺乳動物」
としては、上記の非ヒト哺乳動物の他にヒトなどがあげ
られる。本発明の外来性ＤＮＡとは、非ヒト哺乳動物が
本来有している本発明のＤＮＡではなく、いったん哺乳
動物から単離・抽出された本発明のＤＮＡをいう。本発
明の変異ＤＮＡとしては、元の本発明のＤＮＡの塩基配
列に変異（例えば、突然変異など）が生じたもの、具体
的には、塩基の付加、欠損、他の塩基への置換などが生
じたＤＮＡなどが用いられ、また、異常ＤＮＡも含まれ
る。該異常ＤＮＡとしては、異常な本発明のタンパク質
を発現させるＤＮＡを意味し、例えば、正常な本発明の
タンパク質の機能を抑制するタンパク質を発現させるＤ
ＮＡなどが用いられる。本発明の外来性ＤＮＡは、対象
とする動物と同種あるいは異種のどちらの哺乳動物由来
のものであってもよい。本発明のＤＮＡを対象動物に導
入させるにあたっては、該ＤＮＡを動物細胞で発現させ
うるプロモーターの下流に結合したＤＮＡコンストラク
トとして用いるのが一般に有利である。例えば、本発明
のヒトＤＮＡを導入させる場合、これと相同性が高い本
発明のＤＮＡを有する各種哺乳動物（例えば、ウサギ、
イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウス
など）由来のＤＮＡを発現させうる各種プロモーターの
下流に、本発明のヒトＤＮＡを結合したＤＮＡコンスト
ラクト（例、ベクターなど）を対象哺乳動物の受精卵、
例えば、マウス受精卵へマイクロインジェクションする
ことによって本発明のＤＮＡを高発現するＤＮＡ導入哺
乳動物を作出することができる。
ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウサギ、イヌ、ネコ、モルモッ
ト、ハムスター、マウス、ラットなどが用いられる。な
かでも、病体動物モデル系の作成の面から個体発生およ
び生物サイクルが比較的短く、また、繁殖が容易なゲッ
歯動物、とりわけマウス（例えば、純系として、Ｃ５７
ＢＬ／６系統，ＤＢＡ２系統など、交雑系として、Ｂ６
Ｃ３Ｆ1系統，ＢＤＦ1系統，Ｂ６Ｄ２Ｆ1系統，ＢＡＬ
Ｂ／ｃ系統，ＩＣＲ系統など）またはラット（例えば、
Ｗｉｓｔａｒ，ＳＤなど）などが好ましい。哺乳動物に
おいて発現しうる組換えベクターにおける「哺乳動物」
としては、上記の非ヒト哺乳動物の他にヒトなどがあげ
られる。本発明の外来性ＤＮＡとは、非ヒト哺乳動物が
本来有している本発明のＤＮＡではなく、いったん哺乳
動物から単離・抽出された本発明のＤＮＡをいう。本発
明の変異ＤＮＡとしては、元の本発明のＤＮＡの塩基配
列に変異（例えば、突然変異など）が生じたもの、具体
的には、塩基の付加、欠損、他の塩基への置換などが生
じたＤＮＡなどが用いられ、また、異常ＤＮＡも含まれ
る。該異常ＤＮＡとしては、異常な本発明のタンパク質
を発現させるＤＮＡを意味し、例えば、正常な本発明の
タンパク質の機能を抑制するタンパク質を発現させるＤ
ＮＡなどが用いられる。本発明の外来性ＤＮＡは、対象
とする動物と同種あるいは異種のどちらの哺乳動物由来
のものであってもよい。本発明のＤＮＡを対象動物に導
入させるにあたっては、該ＤＮＡを動物細胞で発現させ
うるプロモーターの下流に結合したＤＮＡコンストラク
トとして用いるのが一般に有利である。例えば、本発明
のヒトＤＮＡを導入させる場合、これと相同性が高い本
発明のＤＮＡを有する各種哺乳動物（例えば、ウサギ、
イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウス
など）由来のＤＮＡを発現させうる各種プロモーターの
下流に、本発明のヒトＤＮＡを結合したＤＮＡコンスト
ラクト（例、ベクターなど）を対象哺乳動物の受精卵、
例えば、マウス受精卵へマイクロインジェクションする
ことによって本発明のＤＮＡを高発現するＤＮＡ導入哺
乳動物を作出することができる。
【００７１】本発明のタンパク質の発現ベクターとして
は、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミ
ド、酵母由来のプラスミド、λファージなどのバクテリ
オファージ、モロニー白血病ウィルスなどのレトロウィ
ルス、ワクシニアウィルスまたはバキュロウィルスなど
の動物ウイルスなどが用いられる。なかでも、大腸菌由
来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミドまたは酵母由
来のプラスミドなどが好ましく用いられる。上記のＤＮ
Ａ発現調節を行うプロモーターとしては、例えば、ウ
イルス（例、シミアンウイルス、サイトメガロウイル
ス、モロニー白血病ウイルス、ＪＣウイルス、乳癌ウイ
ルス、ポリオウイルスなど）に由来するＤＮＡのプロモ
ーター、各種哺乳動物（ヒト、ウサギ、イヌ、ネコ、
モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来の
プロモーター、例えば、アルブミン、インスリンＩＩ、
ウロプラキンＩＩ、エラスターゼ、エリスロポエチン、
エンドセリン、筋クレアチンキナーゼ、グリア線維性酸
性タンパク質、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、
血小板由来成長因子β、ケラチンＫ１，Ｋ１０およびＫ
１４、コラーゲンＩ型およびＩＩ型、サイクリックＡＭ
Ｐ依存タンパク質キナーゼβＩサブユニット、ジストロ
フィン、酒石酸抵抗性アルカリフォスファターゼ、心房
ナトリウム利尿性因子、内皮レセプターチロシンキナー
ゼ（一般にＴｉｅ２と略される）、ナトリウムカリウム
アデノシン３リン酸化酵素（Ｎａ，Ｋ−ＡＴＰａｓ
ｅ）、ニューロフィラメント軽鎖、メタロチオネインＩ
およびＩＩＡ、メタロプロティナーゼ１組織インヒビタ
ー、ＭＨＣクラスＩ抗原（Ｈ−２Ｌ）、Ｈ−ｒａｓ、レ
ニン、ドーパミンβ−水酸化酵素、甲状腺ペルオキシダ
ーゼ（ＴＰＯ）、ポリペプチド鎖延長因子1α（ＥＦ−
１α）、βアクチン、αおよびβミオシン重鎖、ミオシ
ン軽鎖１および２、ミエリン基礎タンパク質、チログロ
ブリン、Ｔｈｙ−１、免疫グロブリン、Ｈ鎖可変部（Ｖ
ＮＰ）、血清アミロイドＰコンポーネント、ミオグロビ
ン、トロポニンＣ、平滑筋αアクチン、プレプロエンケ
ファリンＡ、バソプレシンなどのプロモーターなどが用
いられる。なかでも、全身で高発現することが可能なサ
イトメガロウイルスプロモーター、ヒトポリペプチド鎖
延長因子１α（ＥＦ−１α）のプロモーター、ヒトおよ
びニワトリβアクチンプロモーターなどが好適である。
は、大腸菌由来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミ
ド、酵母由来のプラスミド、λファージなどのバクテリ
オファージ、モロニー白血病ウィルスなどのレトロウィ
ルス、ワクシニアウィルスまたはバキュロウィルスなど
の動物ウイルスなどが用いられる。なかでも、大腸菌由
来のプラスミド、枯草菌由来のプラスミドまたは酵母由
来のプラスミドなどが好ましく用いられる。上記のＤＮ
Ａ発現調節を行うプロモーターとしては、例えば、ウ
イルス（例、シミアンウイルス、サイトメガロウイル
ス、モロニー白血病ウイルス、ＪＣウイルス、乳癌ウイ
ルス、ポリオウイルスなど）に由来するＤＮＡのプロモ
ーター、各種哺乳動物（ヒト、ウサギ、イヌ、ネコ、
モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）由来の
プロモーター、例えば、アルブミン、インスリンＩＩ、
ウロプラキンＩＩ、エラスターゼ、エリスロポエチン、
エンドセリン、筋クレアチンキナーゼ、グリア線維性酸
性タンパク質、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ、
血小板由来成長因子β、ケラチンＫ１，Ｋ１０およびＫ
１４、コラーゲンＩ型およびＩＩ型、サイクリックＡＭ
Ｐ依存タンパク質キナーゼβＩサブユニット、ジストロ
フィン、酒石酸抵抗性アルカリフォスファターゼ、心房
ナトリウム利尿性因子、内皮レセプターチロシンキナー
ゼ（一般にＴｉｅ２と略される）、ナトリウムカリウム
アデノシン３リン酸化酵素（Ｎａ，Ｋ−ＡＴＰａｓ
ｅ）、ニューロフィラメント軽鎖、メタロチオネインＩ
およびＩＩＡ、メタロプロティナーゼ１組織インヒビタ
ー、ＭＨＣクラスＩ抗原（Ｈ−２Ｌ）、Ｈ−ｒａｓ、レ
ニン、ドーパミンβ−水酸化酵素、甲状腺ペルオキシダ
ーゼ（ＴＰＯ）、ポリペプチド鎖延長因子1α（ＥＦ−
１α）、βアクチン、αおよびβミオシン重鎖、ミオシ
ン軽鎖１および２、ミエリン基礎タンパク質、チログロ
ブリン、Ｔｈｙ−１、免疫グロブリン、Ｈ鎖可変部（Ｖ
ＮＰ）、血清アミロイドＰコンポーネント、ミオグロビ
ン、トロポニンＣ、平滑筋αアクチン、プレプロエンケ
ファリンＡ、バソプレシンなどのプロモーターなどが用
いられる。なかでも、全身で高発現することが可能なサ
イトメガロウイルスプロモーター、ヒトポリペプチド鎖
延長因子１α（ＥＦ−１α）のプロモーター、ヒトおよ
びニワトリβアクチンプロモーターなどが好適である。
【００７２】上記ベクターは、ＤＮＡ導入哺乳動物にお
いて目的とするｍＲＮＡの転写を終結する配列（一般に
ターミネターと呼ばれる）を有していることが好まし
く、例えば、ウィルス由来および各種哺乳動物由来の各
ＤＮＡの配列を用いることができ、好ましくは、シミア
ンウィルスのＳＶ４０ターミネターなどが用いられる。
その他、目的とする外来性ＤＮＡをさらに高発現させる
目的で各ＤＮＡのスプライシングシグナル、エンハンサ
ー領域、真核ＤＮＡのイントロンの一部などをプロモー
ター領域の５’上流、プロモーター領域と翻訳領域間あ
るいは翻訳領域の３’下流 に連結することも目的によ
り可能である。正常な本発明のタンパク質の翻訳領域
は、ヒトまたは各種哺乳動物（例えば、ウサギ、イヌ、
ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）
由来の肝臓、腎臓、甲状腺細胞、線維芽細胞由来ＤＮＡ
および市販の各種ゲノムＤＮＡライブラリーよりゲノム
ＤＮＡの全てあるいは一部として、または肝臓、腎臓、
甲状腺細胞、線維芽細胞由来ＲＮＡより公知の方法によ
り調製された相補ＤＮＡを原料として取得することが出
来る。また、外来性の異常ＤＮＡは、上記の細胞または
組織より得られた正常なタンパク質の翻訳領域を点突然
変異誘発法により変異した翻訳領域を作製することがで
きる。該翻訳領域はＤＮＡ導入動物において発現しうる
ＤＮＡコンストラクトとして、前記のプロモーターの下
流および所望により転写終結部位の上流に連結させる通
常の遺伝子工学的手法により作製することができる。受
精卵細胞段階における本発明の外来性ＤＮＡの導入は、
対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞のすべてに存在す
るように確保される。ＤＮＡ導入後の作出動物の胚芽細
胞において、本発明の外来性ＤＮＡが存在することは、
作出動物の後代がすべて、その胚芽細胞および体細胞の
すべてに本発明の外来性ＤＮＡを保持することを意味す
る。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の
子孫はその胚芽細胞および体細胞のすべてに本発明の外
来性ＤＮＡを有する。
いて目的とするｍＲＮＡの転写を終結する配列（一般に
ターミネターと呼ばれる）を有していることが好まし
く、例えば、ウィルス由来および各種哺乳動物由来の各
ＤＮＡの配列を用いることができ、好ましくは、シミア
ンウィルスのＳＶ４０ターミネターなどが用いられる。
その他、目的とする外来性ＤＮＡをさらに高発現させる
目的で各ＤＮＡのスプライシングシグナル、エンハンサ
ー領域、真核ＤＮＡのイントロンの一部などをプロモー
ター領域の５’上流、プロモーター領域と翻訳領域間あ
るいは翻訳領域の３’下流 に連結することも目的によ
り可能である。正常な本発明のタンパク質の翻訳領域
は、ヒトまたは各種哺乳動物（例えば、ウサギ、イヌ、
ネコ、モルモット、ハムスター、ラット、マウスなど）
由来の肝臓、腎臓、甲状腺細胞、線維芽細胞由来ＤＮＡ
および市販の各種ゲノムＤＮＡライブラリーよりゲノム
ＤＮＡの全てあるいは一部として、または肝臓、腎臓、
甲状腺細胞、線維芽細胞由来ＲＮＡより公知の方法によ
り調製された相補ＤＮＡを原料として取得することが出
来る。また、外来性の異常ＤＮＡは、上記の細胞または
組織より得られた正常なタンパク質の翻訳領域を点突然
変異誘発法により変異した翻訳領域を作製することがで
きる。該翻訳領域はＤＮＡ導入動物において発現しうる
ＤＮＡコンストラクトとして、前記のプロモーターの下
流および所望により転写終結部位の上流に連結させる通
常の遺伝子工学的手法により作製することができる。受
精卵細胞段階における本発明の外来性ＤＮＡの導入は、
対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞のすべてに存在す
るように確保される。ＤＮＡ導入後の作出動物の胚芽細
胞において、本発明の外来性ＤＮＡが存在することは、
作出動物の後代がすべて、その胚芽細胞および体細胞の
すべてに本発明の外来性ＤＮＡを保持することを意味す
る。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の
子孫はその胚芽細胞および体細胞のすべてに本発明の外
来性ＤＮＡを有する。
【００７３】本発明の外来性正常ＤＮＡを導入させた非
ヒト哺乳動物は、交配により外来性ＤＮＡを安定に保持
することを確認して、該ＤＮＡ保有動物として通常の飼
育環境で継代飼育することが出来る。受精卵細胞段階に
おける本発明の外来性ＤＮＡの導入は、対象哺乳動物の
胚芽細胞および体細胞の全てに過剰に存在するように確
保される。ＤＮＡ導入後の作出動物の胚芽細胞において
本発明の外来性ＤＮＡが過剰に存在することは、作出動
物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発
明の外来性ＤＮＡを過剰に有することを意味する。本発
明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫はそ
の胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性ＤＮＡ
を過剰に有する。導入ＤＮＡを相同染色体の両方に持つ
ホモザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配す
ることによりすべての子孫が該ＤＮＡを過剰に有するよ
うに繁殖継代することができる。本発明の正常ＤＮＡを
有する非ヒト哺乳動物は、本発明の正常ＤＮＡが高発現
させられており、内在性の正常ＤＮＡの機能を促進する
ことにより最終的に本発明のタンパク質の機能亢進症を
発症することがあり、その病態モデル動物として利用す
ることができる。例えば、本発明の正常ＤＮＡ導入動物
を用いて、本発明のタンパク質の機能亢進症や、本発明
のタンパク質が関連する疾患の病態機序の解明およびこ
れらの疾患の治療方法の検討を行うことが可能である。
また、本発明の外来性正常ＤＮＡを導入させた哺乳動物
は、遊離した本発明のタンパク質の増加症状を有するこ
とから、本発明のタンパク質に関連する疾患に対する予
防・治療薬のスクリーニング試験にも利用可能である。
ヒト哺乳動物は、交配により外来性ＤＮＡを安定に保持
することを確認して、該ＤＮＡ保有動物として通常の飼
育環境で継代飼育することが出来る。受精卵細胞段階に
おける本発明の外来性ＤＮＡの導入は、対象哺乳動物の
胚芽細胞および体細胞の全てに過剰に存在するように確
保される。ＤＮＡ導入後の作出動物の胚芽細胞において
本発明の外来性ＤＮＡが過剰に存在することは、作出動
物の子孫が全てその胚芽細胞および体細胞の全てに本発
明の外来性ＤＮＡを過剰に有することを意味する。本発
明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の子孫はそ
の胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の外来性ＤＮＡ
を過剰に有する。導入ＤＮＡを相同染色体の両方に持つ
ホモザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配す
ることによりすべての子孫が該ＤＮＡを過剰に有するよ
うに繁殖継代することができる。本発明の正常ＤＮＡを
有する非ヒト哺乳動物は、本発明の正常ＤＮＡが高発現
させられており、内在性の正常ＤＮＡの機能を促進する
ことにより最終的に本発明のタンパク質の機能亢進症を
発症することがあり、その病態モデル動物として利用す
ることができる。例えば、本発明の正常ＤＮＡ導入動物
を用いて、本発明のタンパク質の機能亢進症や、本発明
のタンパク質が関連する疾患の病態機序の解明およびこ
れらの疾患の治療方法の検討を行うことが可能である。
また、本発明の外来性正常ＤＮＡを導入させた哺乳動物
は、遊離した本発明のタンパク質の増加症状を有するこ
とから、本発明のタンパク質に関連する疾患に対する予
防・治療薬のスクリーニング試験にも利用可能である。
【００７４】一方、本発明の外来性異常ＤＮＡを有する
非ヒト哺乳動物は、交配により外来性ＤＮＡを安定に保
持することを確認して該ＤＮＡ保有動物として通常の飼
育環境で継代飼育することが出来る。さらに、目的とす
る外来ＤＮＡを前述のプラスミドに組み込んで原科とし
て用いることができる。プロモーターとのＤＮＡコンス
トラク卜は、通常の遺伝子工学的手法によって作製する
ことができる。受精卵細胞段階における本発明の異常Ｄ
ＮＡの導入は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞の
全てに存在するように確保される。ＤＮＡ導入後の作出
動物の胚芽細胞において本発明の異常ＤＮＡが存在する
ことは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細
胞の全てに本発明の異常ＤＮＡを有することを意味す
る。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の
子孫は、その胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の異
常ＤＮＡを有する。導入ＤＮＡを相同染色体の両方に持
つホモザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配
することによりすべての子孫が該ＤＮＡを有するように
繁殖継代することができる。本発明の異常ＤＮＡを有す
る非ヒト哺乳動物は、本発明の異常ＤＮＡが高発現させ
られており、内在性の正常ＤＮＡの機能を阻害すること
により最終的に本発明のタンパク質の機能不活性型不応
症となることがあり、その病態モデル動物として利用す
ることができる。例えば、本発明の異常ＤＮＡ転移動物
を用いて、本発明のタンパク質の機能不活性型不応症の
病態機序の解明およびこの疾患を治療方法の検討を行う
ことが可能である。また、具体的な利用可能性として
は、本発明の異常ＤＮＡ高発現動物は、本発明のタンパ
ク質の機能不活性型不応症における本発明の異常タンパ
ク質による正常タンパク質の機能阻害（dominant negat
ive作用）を解明するモデルとなる。また、本発明の外
来異常ＤＮＡを導入させた哺乳動物は、遊離した本発明
のタンパク質の増加症状を有することから、本発明のタ
ンパク質の機能不活性型不応症に対する治療薬スクリー
ニング試験にも利用可能である。
非ヒト哺乳動物は、交配により外来性ＤＮＡを安定に保
持することを確認して該ＤＮＡ保有動物として通常の飼
育環境で継代飼育することが出来る。さらに、目的とす
る外来ＤＮＡを前述のプラスミドに組み込んで原科とし
て用いることができる。プロモーターとのＤＮＡコンス
トラク卜は、通常の遺伝子工学的手法によって作製する
ことができる。受精卵細胞段階における本発明の異常Ｄ
ＮＡの導入は、対象哺乳動物の胚芽細胞および体細胞の
全てに存在するように確保される。ＤＮＡ導入後の作出
動物の胚芽細胞において本発明の異常ＤＮＡが存在する
ことは、作出動物の子孫が全てその胚芽細胞および体細
胞の全てに本発明の異常ＤＮＡを有することを意味す
る。本発明の外来性ＤＮＡを受け継いだこの種の動物の
子孫は、その胚芽細胞および体細胞の全てに本発明の異
常ＤＮＡを有する。導入ＤＮＡを相同染色体の両方に持
つホモザイゴート動物を取得し、この雌雄の動物を交配
することによりすべての子孫が該ＤＮＡを有するように
繁殖継代することができる。本発明の異常ＤＮＡを有す
る非ヒト哺乳動物は、本発明の異常ＤＮＡが高発現させ
られており、内在性の正常ＤＮＡの機能を阻害すること
により最終的に本発明のタンパク質の機能不活性型不応
症となることがあり、その病態モデル動物として利用す
ることができる。例えば、本発明の異常ＤＮＡ転移動物
を用いて、本発明のタンパク質の機能不活性型不応症の
病態機序の解明およびこの疾患を治療方法の検討を行う
ことが可能である。また、具体的な利用可能性として
は、本発明の異常ＤＮＡ高発現動物は、本発明のタンパ
ク質の機能不活性型不応症における本発明の異常タンパ
ク質による正常タンパク質の機能阻害（dominant negat
ive作用）を解明するモデルとなる。また、本発明の外
来異常ＤＮＡを導入させた哺乳動物は、遊離した本発明
のタンパク質の増加症状を有することから、本発明のタ
ンパク質の機能不活性型不応症に対する治療薬スクリー
ニング試験にも利用可能である。
【００７５】また、上記２種類の本発明のＤＮＡ導入動
物のその他の利用可能性として、例えば、 組織培養のための細胞源としての使用、 本発明のＤＮＡ導入動物の組織中のＤＮＡもしくはＲ
ＮＡを直接分析するか、またはＤＮＡにより発現された
タンパク質組織を分析することによる、本発明のタンパ
ク質により特異的に発現あるいは活性化するタンパク質
との関連性についての解析、 ＤＮＡを有する組織の細胞を標準組織培養技術により
培養し、これらを使用して、一般に培養困難な組織から
の細胞の機能の研究、 上記記載の細胞を用いることによる細胞の機能を高
めるような薬剤のスクリーニング、および 本発明の変異タンパク質を単離精製およびその抗体作
製などが考えられる。さらに、本発明のＤＮＡ導入動物
を用いて、本発明のタンパク質の機能不活性型不応症な
どを含む、本発明のタンパク質に関連する疾患の臨床症
状を調べることができ、また、本発明のタンパク質に関
連する疾患モデルの各臓器におけるより詳細な病理学的
所見が得られ、新しい治療方法の開発、さらには、該疾
患による二次的疾患の研究および治療に貢献することが
できる。また、本発明のＤＮＡ導入動物から各臓器を取
り出し、細切後、トリプシンなどのタンパク質分解酵素
により、遊離したＤＮＡ導入細胞の取得、その培養また
はその培養細胞の系統化を行うことが可能である。さら
に、本発明のタンパク質産生細胞の特定化、アポトーシ
ス、分化あるいは増殖との関連性、またはそれらにおけ
るシグナル伝達機構を調べ、それらの異常を調べること
などができ、本発明のタンパク質およびその作用解明の
ための有効な研究材料となる。さらに、本発明のＤＮＡ
導入動物を用いて、本発明のタンパク質の機能不活性型
不応症を含む、本発明のタンパク質に関連する疾患の治
療薬の開発を行うために、上述の検査法および定量法な
どを用いて、有効で迅速な該疾患治療薬のスクリーニン
グ法を提供することが可能となる。また、本発明のＤＮ
Ａ導入動物または本発明の外来性ＤＮＡ発現ベクターを
用いて、本発明のタンパク質が関連する疾患のＤＮＡ治
療法を検討、開発することが可能である。
物のその他の利用可能性として、例えば、 組織培養のための細胞源としての使用、 本発明のＤＮＡ導入動物の組織中のＤＮＡもしくはＲ
ＮＡを直接分析するか、またはＤＮＡにより発現された
タンパク質組織を分析することによる、本発明のタンパ
ク質により特異的に発現あるいは活性化するタンパク質
との関連性についての解析、 ＤＮＡを有する組織の細胞を標準組織培養技術により
培養し、これらを使用して、一般に培養困難な組織から
の細胞の機能の研究、 上記記載の細胞を用いることによる細胞の機能を高
めるような薬剤のスクリーニング、および 本発明の変異タンパク質を単離精製およびその抗体作
製などが考えられる。さらに、本発明のＤＮＡ導入動物
を用いて、本発明のタンパク質の機能不活性型不応症な
どを含む、本発明のタンパク質に関連する疾患の臨床症
状を調べることができ、また、本発明のタンパク質に関
連する疾患モデルの各臓器におけるより詳細な病理学的
所見が得られ、新しい治療方法の開発、さらには、該疾
患による二次的疾患の研究および治療に貢献することが
できる。また、本発明のＤＮＡ導入動物から各臓器を取
り出し、細切後、トリプシンなどのタンパク質分解酵素
により、遊離したＤＮＡ導入細胞の取得、その培養また
はその培養細胞の系統化を行うことが可能である。さら
に、本発明のタンパク質産生細胞の特定化、アポトーシ
ス、分化あるいは増殖との関連性、またはそれらにおけ
るシグナル伝達機構を調べ、それらの異常を調べること
などができ、本発明のタンパク質およびその作用解明の
ための有効な研究材料となる。さらに、本発明のＤＮＡ
導入動物を用いて、本発明のタンパク質の機能不活性型
不応症を含む、本発明のタンパク質に関連する疾患の治
療薬の開発を行うために、上述の検査法および定量法な
どを用いて、有効で迅速な該疾患治療薬のスクリーニン
グ法を提供することが可能となる。また、本発明のＤＮ
Ａ導入動物または本発明の外来性ＤＮＡ発現ベクターを
用いて、本発明のタンパク質が関連する疾患のＤＮＡ治
療法を検討、開発することが可能である。
【００７６】（９）ノックアウト動物 本発明は、本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳
動物胚幹細胞および本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳
動物を提供する。すなわち、本発明は、（１）本発明の
ＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞、
（２）該ＤＮＡが薬剤耐性遺伝子（例、ネオマイシン耐
性遺伝子）またはレポーター遺伝子（例、大腸菌由来の
β−ガラクトシダーゼ遺伝子）を導入することにより不
活性化された第（１）項記載の胚幹細胞、（３）ネオマ
イシン耐性である第（１）項記載の胚幹細胞、（４）非
ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第（１）項記載の胚幹
細胞、（５）ゲッ歯動物がマウスである第（４）項記載
の胚幹細胞、（６）本発明のＤＮＡが不活性化された該
ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物、（７）該ＤＮＡが薬剤
耐性遺伝子（例、ネオマイシン耐性遺伝子）またはレポ
ーター遺伝子（例、大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ
遺伝子）を導入することにより不活性化され、該レポー
ター遺伝子が本発明のＤＮＡに対するプロモーターの制
御下で発現しうる第（６）項記載の非ヒト哺乳動物、
（８）非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第（６）項記
載の非ヒト哺乳動物、（９）ゲッ歯動物がマウスである
第（８）項記載の非ヒト哺乳動物、および（１０）第
（７）項記載の動物に、試験化合物を投与し、薬剤耐性
遺伝子またはレポーター遺伝子の発現を検出することを
特徴とする本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を
促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニン
グ方法を提供する。
動物胚幹細胞および本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳
動物を提供する。すなわち、本発明は、（１）本発明の
ＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚幹細胞、
（２）該ＤＮＡが薬剤耐性遺伝子（例、ネオマイシン耐
性遺伝子）またはレポーター遺伝子（例、大腸菌由来の
β−ガラクトシダーゼ遺伝子）を導入することにより不
活性化された第（１）項記載の胚幹細胞、（３）ネオマ
イシン耐性である第（１）項記載の胚幹細胞、（４）非
ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第（１）項記載の胚幹
細胞、（５）ゲッ歯動物がマウスである第（４）項記載
の胚幹細胞、（６）本発明のＤＮＡが不活性化された該
ＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物、（７）該ＤＮＡが薬剤
耐性遺伝子（例、ネオマイシン耐性遺伝子）またはレポ
ーター遺伝子（例、大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ
遺伝子）を導入することにより不活性化され、該レポー
ター遺伝子が本発明のＤＮＡに対するプロモーターの制
御下で発現しうる第（６）項記載の非ヒト哺乳動物、
（８）非ヒト哺乳動物がゲッ歯動物である第（６）項記
載の非ヒト哺乳動物、（９）ゲッ歯動物がマウスである
第（８）項記載の非ヒト哺乳動物、および（１０）第
（７）項記載の動物に、試験化合物を投与し、薬剤耐性
遺伝子またはレポーター遺伝子の発現を検出することを
特徴とする本発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を
促進または阻害する化合物またはその塩のスクリーニン
グ方法を提供する。
【００７７】本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺
乳動物胚幹細胞とは、該非ヒト哺乳動物が有する本発明
のＤＮＡに人為的に変異を加えることにより、ＤＮＡの
発現能を抑制するか、もしくは該ＤＮＡがコードしてい
る本発明のタンパク質の活性を実質的に喪失させること
により、ＤＮＡが実質的に本発明のタンパク質の発現能
を有さない（以下、本発明のノックアウトＤＮＡと称す
ることがある）非ヒト哺乳動物の胚幹細胞（以下、ＥＳ
細胞と略記する）をいう。非ヒト哺乳動物としては、前
記と同様のものが用いられる。本発明のＤＮＡに人為的
に変異を加える方法としては、例えば、遺伝子工学的手
法により該ＤＮＡ配列の一部又は全部の削除、他ＤＮＡ
を挿入または置換させることによって行うことができ
る。これらの変異により、例えば、コドンの読み取り枠
をずらしたり、プロモーターあるいはエキソンの機能を
破壊することにより本発明のノックアウトＤＮＡを作製
すればよい。本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺
乳動物胚幹細胞（以下、本発明のＤＮＡ不活性化ＥＳ細
胞または本発明のノックアウトＥＳ細胞と略記する）の
具体例としては、例えば、目的とする非ヒト哺乳動物が
有する本発明のＤＮＡを単離し、そのエキソン部分にネ
オマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子を
代表とする薬剤耐性遺伝子、あるいはｌａｃＺ（β−ガ
ラクトシダーゼ遺伝子）、ｃａｔ（クロラムフェニコー
ルアセチルトランスフェラーゼ遺伝子）を代表とするレ
ポーター遺伝子等を挿入することによりエキソンの機能
を破壊するか、あるいはエキソン間のイントロン部分に
遺伝子の転写を終結させるＤＮＡ配列（例えば、ｐｏｌ
ｙＡ付加シグナルなど）を挿入し、完全なｍＲＮＡを合
成できなくすることによって、結果的に遺伝子を破壊す
るように構築したＤＮＡ配列を有するＤＮＡ鎖（以下、
ターゲッティングベクターと略記する）を、例えば相同
組換え法により該動物の染色体に導入し、得られたＥＳ
細胞について本発明のＤＮＡ上あるいはその近傍のＤＮ
Ａ配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーション
解析あるいはターゲッティングベクター上のＤＮＡ配列
とターゲッティングベクター作製に使用した本発明のＤ
ＮＡ以外の近傍領域のＤＮＡ配列をプライマーとしたＰ
ＣＲ法により解析し、本発明のノックアウトＥＳ細胞を
選別することにより得ることができる。
乳動物胚幹細胞とは、該非ヒト哺乳動物が有する本発明
のＤＮＡに人為的に変異を加えることにより、ＤＮＡの
発現能を抑制するか、もしくは該ＤＮＡがコードしてい
る本発明のタンパク質の活性を実質的に喪失させること
により、ＤＮＡが実質的に本発明のタンパク質の発現能
を有さない（以下、本発明のノックアウトＤＮＡと称す
ることがある）非ヒト哺乳動物の胚幹細胞（以下、ＥＳ
細胞と略記する）をいう。非ヒト哺乳動物としては、前
記と同様のものが用いられる。本発明のＤＮＡに人為的
に変異を加える方法としては、例えば、遺伝子工学的手
法により該ＤＮＡ配列の一部又は全部の削除、他ＤＮＡ
を挿入または置換させることによって行うことができ
る。これらの変異により、例えば、コドンの読み取り枠
をずらしたり、プロモーターあるいはエキソンの機能を
破壊することにより本発明のノックアウトＤＮＡを作製
すればよい。本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺
乳動物胚幹細胞（以下、本発明のＤＮＡ不活性化ＥＳ細
胞または本発明のノックアウトＥＳ細胞と略記する）の
具体例としては、例えば、目的とする非ヒト哺乳動物が
有する本発明のＤＮＡを単離し、そのエキソン部分にネ
オマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子を
代表とする薬剤耐性遺伝子、あるいはｌａｃＺ（β−ガ
ラクトシダーゼ遺伝子）、ｃａｔ（クロラムフェニコー
ルアセチルトランスフェラーゼ遺伝子）を代表とするレ
ポーター遺伝子等を挿入することによりエキソンの機能
を破壊するか、あるいはエキソン間のイントロン部分に
遺伝子の転写を終結させるＤＮＡ配列（例えば、ｐｏｌ
ｙＡ付加シグナルなど）を挿入し、完全なｍＲＮＡを合
成できなくすることによって、結果的に遺伝子を破壊す
るように構築したＤＮＡ配列を有するＤＮＡ鎖（以下、
ターゲッティングベクターと略記する）を、例えば相同
組換え法により該動物の染色体に導入し、得られたＥＳ
細胞について本発明のＤＮＡ上あるいはその近傍のＤＮ
Ａ配列をプローブとしたサザンハイブリダイゼーション
解析あるいはターゲッティングベクター上のＤＮＡ配列
とターゲッティングベクター作製に使用した本発明のＤ
ＮＡ以外の近傍領域のＤＮＡ配列をプライマーとしたＰ
ＣＲ法により解析し、本発明のノックアウトＥＳ細胞を
選別することにより得ることができる。
【００７８】また、相同組換え法等により本発明のＤＮ
Ａを不活化させる元のＥＳ細胞としては、例えば、前述
のような既に樹立されたものを用いてもよく、また公知
のEvansとKaufmanの方法に準じて新しく樹立したもので
もよい。例えば、マウスのＥＳ細胞の場合、現在、一般
的には１２９系のＥＳ細胞が使用されているが、免疫学
的背景がはっきりしていないので、これに代わる純系で
免疫学的に遺伝的背景が明らかなＥＳ細胞を取得するな
どの目的で例えば、Ｃ５７ＢＬ／６マウスやＣ５７ＢＬ
／６の採卵数の少なさをＤＢＡ／２との交雑により改善
したＢＤＦ1マウス（Ｃ５７ＢＬ／６とＤＢＡ／２との
Ｆ1）を用いて樹立したものなども良好に用いうる。Ｂ
ＤＦ１マウスは、採卵数が多く、かつ、卵が丈夫である
という利点に加えて、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを背景に持
つので、これを用いて得られたＥＳ細胞は病態モデルマ
ウスを作出したとき、Ｃ５７ＢＬ／６マウスとバックク
ロスすることでその遺伝的背景をＣ５７ＢＬ／６マウス
に代えることが可能である点で有利に用い得る。また、
ＥＳ細胞を樹立する場合、一般には受精後３．５日目の
胚盤胞を使用するが、これ以外に８細胞期胚を採卵し胚
盤胞まで培養して用いることにより効率よく多数の初期
胚を取得することができる。また、雌雄いずれのＥＳ細
胞を用いてもよいが、通常雄のＥＳ細胞の方が生殖系列
キメラを作出するのに都合が良い。また、煩雑な培養の
手間を削減するためにもできるだけ早く雌雄の判別を行
うことが望ましい。ＥＳ細胞の雌雄の判定方法として
は、例えば、ＰＣＲ法によりＹ染色体上の性決定領域の
遺伝子を増幅、検出する方法が、その１例としてあげる
ことができる。この方法を使用すれば、従来、核型分析
をするのに約１０6個の細胞数を要していたのに対し
て、１コロニー程度のＥＳ細胞数（約５０個）で済むの
で、培養初期におけるＥＳ細胞の第一次セレクションを
雌雄の判別で行うことが可能であり、早期に雄細胞の選
定を可能にしたことにより培養初期の手間は大幅に削減
できる。
Ａを不活化させる元のＥＳ細胞としては、例えば、前述
のような既に樹立されたものを用いてもよく、また公知
のEvansとKaufmanの方法に準じて新しく樹立したもので
もよい。例えば、マウスのＥＳ細胞の場合、現在、一般
的には１２９系のＥＳ細胞が使用されているが、免疫学
的背景がはっきりしていないので、これに代わる純系で
免疫学的に遺伝的背景が明らかなＥＳ細胞を取得するな
どの目的で例えば、Ｃ５７ＢＬ／６マウスやＣ５７ＢＬ
／６の採卵数の少なさをＤＢＡ／２との交雑により改善
したＢＤＦ1マウス（Ｃ５７ＢＬ／６とＤＢＡ／２との
Ｆ1）を用いて樹立したものなども良好に用いうる。Ｂ
ＤＦ１マウスは、採卵数が多く、かつ、卵が丈夫である
という利点に加えて、Ｃ５７ＢＬ／６マウスを背景に持
つので、これを用いて得られたＥＳ細胞は病態モデルマ
ウスを作出したとき、Ｃ５７ＢＬ／６マウスとバックク
ロスすることでその遺伝的背景をＣ５７ＢＬ／６マウス
に代えることが可能である点で有利に用い得る。また、
ＥＳ細胞を樹立する場合、一般には受精後３．５日目の
胚盤胞を使用するが、これ以外に８細胞期胚を採卵し胚
盤胞まで培養して用いることにより効率よく多数の初期
胚を取得することができる。また、雌雄いずれのＥＳ細
胞を用いてもよいが、通常雄のＥＳ細胞の方が生殖系列
キメラを作出するのに都合が良い。また、煩雑な培養の
手間を削減するためにもできるだけ早く雌雄の判別を行
うことが望ましい。ＥＳ細胞の雌雄の判定方法として
は、例えば、ＰＣＲ法によりＹ染色体上の性決定領域の
遺伝子を増幅、検出する方法が、その１例としてあげる
ことができる。この方法を使用すれば、従来、核型分析
をするのに約１０6個の細胞数を要していたのに対し
て、１コロニー程度のＥＳ細胞数（約５０個）で済むの
で、培養初期におけるＥＳ細胞の第一次セレクションを
雌雄の判別で行うことが可能であり、早期に雄細胞の選
定を可能にしたことにより培養初期の手間は大幅に削減
できる。
【００７９】また、第二次セレクションとしては、例え
ば、Ｇ−バンディング法による染色体数の確認等により
行うことができる。得られるＥＳ細胞の染色体数は正常
数の１００％が望ましいが、樹立の際の物理的操作等の
関係上困難な場合は、ＥＳ細胞の遺伝子をノックアウト
した後、正常細胞（例えば、マウスでは染色体数が２ｎ
＝４０である細胞）に再びクローニングすることが望ま
しい。このようにして得られた胚幹細胞株は、通常その
増殖性は大変良いが、個体発生できる能力を失いやすい
ので、注意深く継代培養することが必要である。例え
ば、ＳＴＯ繊維芽細胞のような適当なフィーダー細胞上
でＬＩＦ（１−１００００Ｕ／ｍｌ）存在下に炭酸ガス
培養器内（好ましくは、５％炭酸ガス、９５％空気また
は５％酸素、５％炭酸ガス、９０％空気）で約３７℃で
培養するなどの方法で培養し、継代時には、例えば、ト
リプシン／ＥＤＴＡ溶液（通常０．００１−０．５％ト
リプシン／０．１−５ｍＭ ＥＤＴＡ、好ましくは約
０．１％トリプシン／１ｍＭ ＥＤＴＡ）処理により単
細胞化し、新たに用意したフィーダー細胞上に播種する
方法などがとられる。このような継代は、通常１−３日
毎に行うが、この際に細胞の観察を行い、形態的に異常
な細胞が見受けられた場合はその培養細胞は放棄するこ
とが望まれる。ＥＳ細胞は、適当な条件により、高密度
に至るまで単層培養するか、または細胞集塊を形成する
まで浮遊培養することにより、頭頂筋、内臓筋、心筋な
どの種々のタイプの細胞に分化させることが可能であり
〔M. J. Evans及びM. H. Kaufman、ネイチャー（Natur
e）、第２９２巻、１５４頁、１９８１年；G. R. Marti
n、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ユーエスエー（Pr
oc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.）、第７８巻、７６３４
頁、１９８１年；T. C. Doetschmanら、ジャーナル・オ
ブ・エンブリオロジー・アンド・エクスペリメンタル・
モルフォロジー、第８７巻、２７頁、１９８５年〕、本
発明のＥＳ細胞を分化させて得られる本発明のＤＮＡ発
現不全細胞は、インビトロにおける本発明のタンパク質
の細胞生物学的検討において有用である。本発明のＤＮ
Ａ発現不全非ヒト哺乳動物は、該動物のｍＲＮＡ量を公
知の方法を用いて測定して間接的にその発現量を比較す
ることにより、正常動物と区別することが可能である。
該非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものが用いら
れる。
ば、Ｇ−バンディング法による染色体数の確認等により
行うことができる。得られるＥＳ細胞の染色体数は正常
数の１００％が望ましいが、樹立の際の物理的操作等の
関係上困難な場合は、ＥＳ細胞の遺伝子をノックアウト
した後、正常細胞（例えば、マウスでは染色体数が２ｎ
＝４０である細胞）に再びクローニングすることが望ま
しい。このようにして得られた胚幹細胞株は、通常その
増殖性は大変良いが、個体発生できる能力を失いやすい
ので、注意深く継代培養することが必要である。例え
ば、ＳＴＯ繊維芽細胞のような適当なフィーダー細胞上
でＬＩＦ（１−１００００Ｕ／ｍｌ）存在下に炭酸ガス
培養器内（好ましくは、５％炭酸ガス、９５％空気また
は５％酸素、５％炭酸ガス、９０％空気）で約３７℃で
培養するなどの方法で培養し、継代時には、例えば、ト
リプシン／ＥＤＴＡ溶液（通常０．００１−０．５％ト
リプシン／０．１−５ｍＭ ＥＤＴＡ、好ましくは約
０．１％トリプシン／１ｍＭ ＥＤＴＡ）処理により単
細胞化し、新たに用意したフィーダー細胞上に播種する
方法などがとられる。このような継代は、通常１−３日
毎に行うが、この際に細胞の観察を行い、形態的に異常
な細胞が見受けられた場合はその培養細胞は放棄するこ
とが望まれる。ＥＳ細胞は、適当な条件により、高密度
に至るまで単層培養するか、または細胞集塊を形成する
まで浮遊培養することにより、頭頂筋、内臓筋、心筋な
どの種々のタイプの細胞に分化させることが可能であり
〔M. J. Evans及びM. H. Kaufman、ネイチャー（Natur
e）、第２９２巻、１５４頁、１９８１年；G. R. Marti
n、プロシージングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サイエンシイズ・オブ・ユーエスエー（Pr
oc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.）、第７８巻、７６３４
頁、１９８１年；T. C. Doetschmanら、ジャーナル・オ
ブ・エンブリオロジー・アンド・エクスペリメンタル・
モルフォロジー、第８７巻、２７頁、１９８５年〕、本
発明のＥＳ細胞を分化させて得られる本発明のＤＮＡ発
現不全細胞は、インビトロにおける本発明のタンパク質
の細胞生物学的検討において有用である。本発明のＤＮ
Ａ発現不全非ヒト哺乳動物は、該動物のｍＲＮＡ量を公
知の方法を用いて測定して間接的にその発現量を比較す
ることにより、正常動物と区別することが可能である。
該非ヒト哺乳動物としては、前記と同様のものが用いら
れる。
【００８０】本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物
は、例えば、前述のようにして作製したターゲッティン
グベクターをマウス胚幹細胞またはマウス卵細胞に導入
し、導入によりターゲッティングベクターの本発明のＤ
ＮＡが不活性化されたＤＮＡ配列が遺伝子相同組換えに
より、マウス胚幹細胞またはマウス卵細胞の染色体上の
本発明のＤＮＡと入れ換わる相同組換えをさせることに
より、本発明のＤＮＡをノックアウトさせることができ
る。本発明のＤＮＡがノックアウトされた細胞は、本発
明のＤＮＡ上またはその近傍のＤＮＡ配列をプローブと
したサザンハイブリダイゼーション解析またはターゲッ
ティングベクター上のＤＮＡ配列と、ターゲッティング
ベクターに使用したマウス由来の本発明のＤＮＡ以外の
近傍領域のＤＮＡ配列とをプライマーとしたＰＣＲ法に
よる解析で判定することができる。非ヒト哺乳動物胚幹
細胞を用いた場合は、遺伝子相同組換えにより、本発明
のＤＮＡが不活性化された細胞株をクローニングし、そ
の細胞を適当な時期、例えば、８細胞期の非ヒト哺乳動
物胚または胚盤胞に注入し、作製したキメラ胚を偽妊娠
させた該非ヒト哺乳動物の子宮に移植する。作出された
動物は正常な本発明のＤＮＡ座をもつ細胞と人為的に変
異した本発明のＤＮＡ座をもつ細胞との両者から構成さ
れるキメラ動物である。該キメラ動物の生殖細胞の一部
が変異した本発明のＤＮＡ座をもつ場合、このようなキ
メラ個体と正常個体を交配することにより得られた個体
群より、全ての組織が人為的に変異を加えた本発明のＤ
ＮＡ座をもつ細胞で構成された個体を、例えば、コート
カラーの判定等により選別することにより得られる。こ
のようにして得られた個体は、通常、本発明のタンパク
質のヘテロ発現不全個体であり、本発明のタンパク質の
ヘテロ発現不全個体同志を交配し、それらの産仔から本
発明のタンパク質のホモ発現不全個体を得ることができ
る。卵細胞を使用する場合は、例えば、卵細胞核内にマ
イクロインジェクション法でＤＮＡ溶液を注入すること
によりターゲッティングベクターを染色体内に導入した
トランスジェニック非ヒト哺乳動物を得ることができ、
これらのトランスジェニック非ヒト哺乳動物に比べて、
遺伝子相同組換えにより本発明のＤＮＡ座に変異のある
ものを選択することにより得られる。
は、例えば、前述のようにして作製したターゲッティン
グベクターをマウス胚幹細胞またはマウス卵細胞に導入
し、導入によりターゲッティングベクターの本発明のＤ
ＮＡが不活性化されたＤＮＡ配列が遺伝子相同組換えに
より、マウス胚幹細胞またはマウス卵細胞の染色体上の
本発明のＤＮＡと入れ換わる相同組換えをさせることに
より、本発明のＤＮＡをノックアウトさせることができ
る。本発明のＤＮＡがノックアウトされた細胞は、本発
明のＤＮＡ上またはその近傍のＤＮＡ配列をプローブと
したサザンハイブリダイゼーション解析またはターゲッ
ティングベクター上のＤＮＡ配列と、ターゲッティング
ベクターに使用したマウス由来の本発明のＤＮＡ以外の
近傍領域のＤＮＡ配列とをプライマーとしたＰＣＲ法に
よる解析で判定することができる。非ヒト哺乳動物胚幹
細胞を用いた場合は、遺伝子相同組換えにより、本発明
のＤＮＡが不活性化された細胞株をクローニングし、そ
の細胞を適当な時期、例えば、８細胞期の非ヒト哺乳動
物胚または胚盤胞に注入し、作製したキメラ胚を偽妊娠
させた該非ヒト哺乳動物の子宮に移植する。作出された
動物は正常な本発明のＤＮＡ座をもつ細胞と人為的に変
異した本発明のＤＮＡ座をもつ細胞との両者から構成さ
れるキメラ動物である。該キメラ動物の生殖細胞の一部
が変異した本発明のＤＮＡ座をもつ場合、このようなキ
メラ個体と正常個体を交配することにより得られた個体
群より、全ての組織が人為的に変異を加えた本発明のＤ
ＮＡ座をもつ細胞で構成された個体を、例えば、コート
カラーの判定等により選別することにより得られる。こ
のようにして得られた個体は、通常、本発明のタンパク
質のヘテロ発現不全個体であり、本発明のタンパク質の
ヘテロ発現不全個体同志を交配し、それらの産仔から本
発明のタンパク質のホモ発現不全個体を得ることができ
る。卵細胞を使用する場合は、例えば、卵細胞核内にマ
イクロインジェクション法でＤＮＡ溶液を注入すること
によりターゲッティングベクターを染色体内に導入した
トランスジェニック非ヒト哺乳動物を得ることができ、
これらのトランスジェニック非ヒト哺乳動物に比べて、
遺伝子相同組換えにより本発明のＤＮＡ座に変異のある
ものを選択することにより得られる。
【００８１】このようにして本発明のＤＮＡがノックア
ウトされている個体は、交配により得られた動物個体も
該ＤＮＡがノックアウトされていることを確認して通常
の飼育環境で飼育継代を行うことができる。さらに、生
殖系列の取得および保持についても常法に従えばよい。
すなわち、該不活化ＤＮＡの保有する雌雄の動物を交配
することにより、該不活化ＤＮＡを相同染色体の両方に
持つホモザイゴート動物を取得しうる。得られたホモザ
イゴート動物は、母親動物に対して、正常個体１，ホモ
ザイゴート複数になるような状態で飼育することにより
効率的に得ることができる。ヘテロザイゴート動物の雌
雄を交配することにより、該不活化ＤＮＡを有するホモ
ザイゴートおよびヘテロザイゴート動物を繁殖継代す
る。本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚
幹細胞は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を作
出する上で、非常に有用である。また、本発明のＤＮＡ
発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のタンパク質により
誘導され得る種々の生物活性を欠失するため、本発明の
タンパク質の生物活性の不活性化を原因とする疾病のモ
デルとなり得るので、これらの疾病の原因究明及び治療
法の検討に有用である。
ウトされている個体は、交配により得られた動物個体も
該ＤＮＡがノックアウトされていることを確認して通常
の飼育環境で飼育継代を行うことができる。さらに、生
殖系列の取得および保持についても常法に従えばよい。
すなわち、該不活化ＤＮＡの保有する雌雄の動物を交配
することにより、該不活化ＤＮＡを相同染色体の両方に
持つホモザイゴート動物を取得しうる。得られたホモザ
イゴート動物は、母親動物に対して、正常個体１，ホモ
ザイゴート複数になるような状態で飼育することにより
効率的に得ることができる。ヘテロザイゴート動物の雌
雄を交配することにより、該不活化ＤＮＡを有するホモ
ザイゴートおよびヘテロザイゴート動物を繁殖継代す
る。本発明のＤＮＡが不活性化された非ヒト哺乳動物胚
幹細胞は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物を作
出する上で、非常に有用である。また、本発明のＤＮＡ
発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のタンパク質により
誘導され得る種々の生物活性を欠失するため、本発明の
タンパク質の生物活性の不活性化を原因とする疾病のモ
デルとなり得るので、これらの疾病の原因究明及び治療
法の検討に有用である。
【００８２】（１０）本発明のＤＮＡの欠損や損傷など
に起因する疾病に対して治療・予防効果を有する化合物
のスクリーニング方法 本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のＤ
ＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病（例、低血糖症な
ど）に対して予防・治療効果を有する化合物のスクリー
ニングに用いることができる。すなわち、本発明は、本
発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に試験化合物を投
与し、該動物の変化を観察・測定することを特徴とす
る、本発明のＤＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病に
対して治療・予防効果を有する化合物またはその塩のス
クリーニング方法を提供する。該スクリーニング方法に
おいて用いられる本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動
物としては、前記と同様のものがあげられる。試験化合
物としては、例えば、ペプチド、タンパク質、非ペプチ
ド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植
物抽出液、動物組織抽出液、血漿などがあげられ、これ
ら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合
物であってもよい。具体的には、本発明のＤＮＡ発現不
全非ヒト哺乳動物を、試験化合物で処理し、無処理の対
照動物と比較し、該動物の各器官、組織、疾病の症状な
どの変化を指標として試験化合物の予防・治療効果を試
験することができる。試験動物を試験化合物で処理する
方法としては、例えば、経口投与、静脈注射などが用い
られ、試験動物の症状、試験化合物の性質などにあわせ
て適宜選択することができる。また、試験化合物の投与
量は、投与方法、試験化合物の性質などにあわせて適宜
選択することができる。
に起因する疾病に対して治療・予防効果を有する化合物
のスクリーニング方法 本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のＤ
ＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病（例、低血糖症な
ど）に対して予防・治療効果を有する化合物のスクリー
ニングに用いることができる。すなわち、本発明は、本
発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に試験化合物を投
与し、該動物の変化を観察・測定することを特徴とす
る、本発明のＤＮＡの欠損や損傷などに起因する疾病に
対して治療・予防効果を有する化合物またはその塩のス
クリーニング方法を提供する。該スクリーニング方法に
おいて用いられる本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動
物としては、前記と同様のものがあげられる。試験化合
物としては、例えば、ペプチド、タンパク質、非ペプチ
ド性化合物、合成化合物、発酵生産物、細胞抽出液、植
物抽出液、動物組織抽出液、血漿などがあげられ、これ
ら化合物は新規な化合物であってもよいし、公知の化合
物であってもよい。具体的には、本発明のＤＮＡ発現不
全非ヒト哺乳動物を、試験化合物で処理し、無処理の対
照動物と比較し、該動物の各器官、組織、疾病の症状な
どの変化を指標として試験化合物の予防・治療効果を試
験することができる。試験動物を試験化合物で処理する
方法としては、例えば、経口投与、静脈注射などが用い
られ、試験動物の症状、試験化合物の性質などにあわせ
て適宜選択することができる。また、試験化合物の投与
量は、投与方法、試験化合物の性質などにあわせて適宜
選択することができる。
【００８３】本発明のスクリーニング方法を用いて得ら
れる化合物は、上記した試験化合物から選ばれた化合物
であり、本発明のタンパク質の発現低下などによって引
き起こされる疾患（例、低血糖症など）に対して予防・
治療効果を有するので、該疾患に対する安全で低毒性な
治療・予防剤などの医薬として使用することができる。
さらに、上記スクリーニングで得られた化合物から誘導
される化合物も同様に用いることができる。該スクリー
ニング方法で得られた化合物は塩を形成していてもよ
く、該化合物の塩としては、生理学的に許容される酸
（例、無機酸、有機酸）や塩基（例、アルカリ金属）な
どとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸
付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機
酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との
塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン
酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン
酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベ
ンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる。該スクリ
ーニング方法で得られた化合物またはその塩を含有する
医薬は、前記した本発明のタンパク質を含有する医薬と
同様にして製造することができる。このようにして得ら
れる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、温血動
物（例えば、ヒト、ラット、マウス、モルモット、ウサ
ギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルな
ど）に対して投与することができる。該化合物またはそ
の塩の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなど
により差異はあるが、例えば、低血糖症の治療目的で該
化合物を経口投与する場合、一般的に成人（体重６０ｋ
ｇとして）においては、一日につき該化合物を約０.１
〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好
ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与
する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾
患などによっても異なるが、例えば、低血糖症の治療目
的で該化合物を注射剤の形で通常成人（６０ｋｇとし
て）に投与する場合、一日につき該化合物を約０．０１
〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、
より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射によ
り投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０
ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
れる化合物は、上記した試験化合物から選ばれた化合物
であり、本発明のタンパク質の発現低下などによって引
き起こされる疾患（例、低血糖症など）に対して予防・
治療効果を有するので、該疾患に対する安全で低毒性な
治療・予防剤などの医薬として使用することができる。
さらに、上記スクリーニングで得られた化合物から誘導
される化合物も同様に用いることができる。該スクリー
ニング方法で得られた化合物は塩を形成していてもよ
く、該化合物の塩としては、生理学的に許容される酸
（例、無機酸、有機酸）や塩基（例、アルカリ金属）な
どとの塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸
付加塩が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機
酸（例えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との
塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン
酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン
酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベ
ンゼンスルホン酸）との塩などが用いられる。該スクリ
ーニング方法で得られた化合物またはその塩を含有する
医薬は、前記した本発明のタンパク質を含有する医薬と
同様にして製造することができる。このようにして得ら
れる製剤は、安全で低毒性であるので、例えば、温血動
物（例えば、ヒト、ラット、マウス、モルモット、ウサ
ギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、サルな
ど）に対して投与することができる。該化合物またはそ
の塩の投与量は、対象疾患、投与対象、投与ルートなど
により差異はあるが、例えば、低血糖症の治療目的で該
化合物を経口投与する場合、一般的に成人（体重６０ｋ
ｇとして）においては、一日につき該化合物を約０.１
〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好
ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与
する場合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾
患などによっても異なるが、例えば、低血糖症の治療目
的で該化合物を注射剤の形で通常成人（６０ｋｇとし
て）に投与する場合、一日につき該化合物を約０．０１
〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、
より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射によ
り投与するのが好都合である。他の動物の場合も、６０
ｋｇ当たりに換算した量を投与することができる。
【００８４】（１１）本発明のＤＮＡに対するプロモー
ターの活性を促進または阻害する化合物をスクリーニン
グ方法 本発明は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に、
試験化合物を投与し、レポーター遺伝子の発現を検出す
ることを特徴とする本発明のＤＮＡに対するプロモータ
ーの活性を促進または阻害する化合物またはその塩のス
クリーニング方法を提供する。上記スクリーニング方法
において、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物とし
ては、前記した本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物
の中でも、本発明のＤＮＡがレポーター遺伝子を導入す
ることにより不活性化され、該レポーター遺伝子が本発
明のＤＮＡに対するプロモーターの制御下で発現しうる
ものが用いられる。試験化合物としては、前記と同様の
ものがあげられる。レポーター遺伝子としては、前記と
同様のものが用いられ、β−ガラクトシダーゼ遺伝子
（ｌａｃＺ）、可溶性アルカリフォスファターゼ遺伝子
またはルシフェラーゼ遺伝子などが好適である。本発明
のＤＮＡをレポーター遺伝子で置換された本発明のＤＮ
Ａ発現不全非ヒト哺乳動物では、レポーター遺伝子が本
発明のＤＮＡに対するプロモーターの支配下に存在する
ので、レポーター遺伝子がコードする物質の発現をトレ
ースすることにより、プロモーターの活性を検出するこ
とができる。
ターの活性を促進または阻害する化合物をスクリーニン
グ方法 本発明は、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物に、
試験化合物を投与し、レポーター遺伝子の発現を検出す
ることを特徴とする本発明のＤＮＡに対するプロモータ
ーの活性を促進または阻害する化合物またはその塩のス
クリーニング方法を提供する。上記スクリーニング方法
において、本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物とし
ては、前記した本発明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物
の中でも、本発明のＤＮＡがレポーター遺伝子を導入す
ることにより不活性化され、該レポーター遺伝子が本発
明のＤＮＡに対するプロモーターの制御下で発現しうる
ものが用いられる。試験化合物としては、前記と同様の
ものがあげられる。レポーター遺伝子としては、前記と
同様のものが用いられ、β−ガラクトシダーゼ遺伝子
（ｌａｃＺ）、可溶性アルカリフォスファターゼ遺伝子
またはルシフェラーゼ遺伝子などが好適である。本発明
のＤＮＡをレポーター遺伝子で置換された本発明のＤＮ
Ａ発現不全非ヒト哺乳動物では、レポーター遺伝子が本
発明のＤＮＡに対するプロモーターの支配下に存在する
ので、レポーター遺伝子がコードする物質の発現をトレ
ースすることにより、プロモーターの活性を検出するこ
とができる。
【００８５】例えば、本発明のタンパク質をコードする
ＤＮＡ領域の一部を大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ
遺伝子（ｌａｃＺ）で置換している場合、本来、本発明
のタンパク質の発現する組織で、本発明のタンパク質の
代わりにβ−ガラクトシダーゼが発現する。従って、例
えば、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−
ガラクトピラノシド（Ｘ−ｇａｌ）のようなβ−ガラク
トシダーゼの基質となる試薬を用いて染色することによ
り、簡便に本発明のタンパク質の動物生体内における発
現状態を観察することができる。具体的には、本発明の
タンパク質欠損マウスまたはその組織切片をグルタルア
ルデヒドなどで固定し、リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢ
Ｓ）で洗浄後、Ｘ−ｇａｌを含む染色液で、室温または
３７℃付近で、約３０分ないし１時間反応させた後、組
織標本を１ｍＭ ＥＤＴＡ／ＰＢＳ溶液で洗浄すること
によって、β−ガラクトシダーゼ反応を停止させ、呈色
を観察すればよい。また、常法に従い、ｌａｃＺをコー
ドするｍＲＮＡを検出してもよい。
ＤＮＡ領域の一部を大腸菌由来のβ−ガラクトシダーゼ
遺伝子（ｌａｃＺ）で置換している場合、本来、本発明
のタンパク質の発現する組織で、本発明のタンパク質の
代わりにβ−ガラクトシダーゼが発現する。従って、例
えば、５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリル−β−
ガラクトピラノシド（Ｘ−ｇａｌ）のようなβ−ガラク
トシダーゼの基質となる試薬を用いて染色することによ
り、簡便に本発明のタンパク質の動物生体内における発
現状態を観察することができる。具体的には、本発明の
タンパク質欠損マウスまたはその組織切片をグルタルア
ルデヒドなどで固定し、リン酸緩衝生理食塩液（ＰＢ
Ｓ）で洗浄後、Ｘ−ｇａｌを含む染色液で、室温または
３７℃付近で、約３０分ないし１時間反応させた後、組
織標本を１ｍＭ ＥＤＴＡ／ＰＢＳ溶液で洗浄すること
によって、β−ガラクトシダーゼ反応を停止させ、呈色
を観察すればよい。また、常法に従い、ｌａｃＺをコー
ドするｍＲＮＡを検出してもよい。
【００８６】上記スクリーニング方法を用いて得られる
化合物またはその塩は、上記した試験化合物から選ばれ
た化合物であり、本発明のＤＮＡに対するプロモーター
活性を促進または阻害する化合物である。該スクリーニ
ング方法で得られた化合物は塩を形成していてもよく、
該化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、
無機酸、有機酸）や塩基（例、アルカリ金属）などとの
塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩
が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例
えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、ある
いは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマ
ル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リン
ゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンス
ルホン酸）との塩などが用いられる。本発明のＤＮＡに
対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩
は、本発明のタンパク質の発現を促進し、該タンパク質
の活性を促進することができるので、例えば、低血糖症
などの疾病に対する安全で低毒性な予防・治療剤などの
医薬として有用である。一方、本発明のＤＮＡに対する
プロモーター活性を阻害する化合物またはその塩は、本
発明のタンパク質の発現を阻害し、該タンパク質の活性
を阻害することができるので、例えば、高血糖症、糖尿
病（特にＩＩ型糖尿病など）などの疾病に対する安全で
低毒性な予防・治療剤などの医薬として有用である。さ
らに、上記スクリーニングで得られた化合物から誘導さ
れる化合物も同様に用いることができる。
化合物またはその塩は、上記した試験化合物から選ばれ
た化合物であり、本発明のＤＮＡに対するプロモーター
活性を促進または阻害する化合物である。該スクリーニ
ング方法で得られた化合物は塩を形成していてもよく、
該化合物の塩としては、生理学的に許容される酸（例、
無機酸、有機酸）や塩基（例、アルカリ金属）などとの
塩が用いられ、とりわけ生理学的に許容される酸付加塩
が好ましい。この様な塩としては、例えば、無機酸（例
えば、塩酸、リン酸、臭化水素酸、硫酸）との塩、ある
いは有機酸（例えば、酢酸、ギ酸、プロピオン酸、フマ
ル酸、マレイン酸、コハク酸、酒石酸、クエン酸、リン
ゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタンスルホン酸、ベンゼンス
ルホン酸）との塩などが用いられる。本発明のＤＮＡに
対するプロモーター活性を促進する化合物またはその塩
は、本発明のタンパク質の発現を促進し、該タンパク質
の活性を促進することができるので、例えば、低血糖症
などの疾病に対する安全で低毒性な予防・治療剤などの
医薬として有用である。一方、本発明のＤＮＡに対する
プロモーター活性を阻害する化合物またはその塩は、本
発明のタンパク質の発現を阻害し、該タンパク質の活性
を阻害することができるので、例えば、高血糖症、糖尿
病（特にＩＩ型糖尿病など）などの疾病に対する安全で
低毒性な予防・治療剤などの医薬として有用である。さ
らに、上記スクリーニングで得られた化合物から誘導さ
れる化合物も同様に用いることができる。
【００８７】該スクリーニング方法で得られた化合物ま
たはその塩を含有する医薬は、前記した本発明のタンパ
ク質を含有する医薬と同様にして製造することができ
る。このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であ
るので、例えば、温血動物（例えば、ヒト、ラット、マ
ウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウ
マ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することがで
きる。該化合物またはその塩の投与量は、対象疾患、投
与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、
糖尿病の治療目的で本発明のＤＮＡに対するプロモータ
ー活性を阻害する化合物を経口投与する場合、一般的に
成人（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき該
化合物を約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜
５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与す
る。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量
は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例え
ば、糖尿病の治療目的で本発明のＤＮＡに対するプロモ
ーター活性を阻害する化合物を注射剤の形で通常成人
（６０ｋｇとして）に投与する場合、一日につき該化合
物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜
２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度
を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物
の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与すること
ができる。一方、例えば、低血糖症の治療目的で本発明
のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物を
経口投与する場合、一般的に成人（体重６０ｋｇとし
て）においては、一日につき該化合物を約０.１〜１０
０ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましく
は約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場
合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患など
によっても異なるが、例えば、低血糖症の治療目的で本
発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合
物を注射剤の形で通常成人（６０ｋｇとして）に投与す
る場合、一日につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程
度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましく
は約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するの
が好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに
換算した量を投与することができる。このように、本発
明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のＤＮＡ
に対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合
物またはその塩をスクリーニングする上で極めて有用で
あり、本発明のＤＮＡ発現不全に起因する各種疾患の原
因究明または予防・治療薬の開発に大きく貢献すること
ができる。また、本発明のタンパク質のプロモーター領
域を含有するＤＮＡを使って、その下流に種々のタンパ
ク質をコードする遺伝子を連結し、これを動物の卵細胞
に注入していわゆるトランスジェニック動物（遺伝子導
入動物）を作成すれば、特異的にそのタンパク質を合成
させ、その生体での作用を検討することも可能となる。
さらに上記プロモーター部分に適当なレポーター遺伝子
を結合させ、これが発現するような細胞株を樹立すれ
ば、本発明のタンパク質そのものの体内での産生能力を
特異的に促進もしくは抑制する作用を持つ低分子化合物
の探索系として使用できる。また該プロモーター部分を
解析することにより新たなシスエレメントやそれに結合
する転写因子を見つけることも可能である。
たはその塩を含有する医薬は、前記した本発明のタンパ
ク質を含有する医薬と同様にして製造することができ
る。このようにして得られる製剤は、安全で低毒性であ
るので、例えば、温血動物（例えば、ヒト、ラット、マ
ウス、モルモット、ウサギ、ヒツジ、ブタ、ウシ、ウ
マ、ネコ、イヌ、サルなど）に対して投与することがで
きる。該化合物またはその塩の投与量は、対象疾患、投
与対象、投与ルートなどにより差異はあるが、例えば、
糖尿病の治療目的で本発明のＤＮＡに対するプロモータ
ー活性を阻害する化合物を経口投与する場合、一般的に
成人（体重６０ｋｇとして）においては、一日につき該
化合物を約０.１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜
５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇ投与す
る。非経口的に投与する場合は、該化合物の１回投与量
は投与対象、対象疾患などによっても異なるが、例え
ば、糖尿病の治療目的で本発明のＤＮＡに対するプロモ
ーター活性を阻害する化合物を注射剤の形で通常成人
（６０ｋｇとして）に投与する場合、一日につき該化合
物を約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜
２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度
を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物
の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与すること
ができる。一方、例えば、低血糖症の治療目的で本発明
のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合物を
経口投与する場合、一般的に成人（体重６０ｋｇとし
て）においては、一日につき該化合物を約０.１〜１０
０ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましく
は約１．０〜２０ｍｇ投与する。非経口的に投与する場
合は、該化合物の１回投与量は投与対象、対象疾患など
によっても異なるが、例えば、低血糖症の治療目的で本
発明のＤＮＡに対するプロモーター活性を促進する化合
物を注射剤の形で通常成人（６０ｋｇとして）に投与す
る場合、一日につき該化合物を約０．０１〜３０ｍｇ程
度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましく
は約０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するの
が好都合である。他の動物の場合も、６０ｋｇ当たりに
換算した量を投与することができる。このように、本発
明のＤＮＡ発現不全非ヒト哺乳動物は、本発明のＤＮＡ
に対するプロモーターの活性を促進または阻害する化合
物またはその塩をスクリーニングする上で極めて有用で
あり、本発明のＤＮＡ発現不全に起因する各種疾患の原
因究明または予防・治療薬の開発に大きく貢献すること
ができる。また、本発明のタンパク質のプロモーター領
域を含有するＤＮＡを使って、その下流に種々のタンパ
ク質をコードする遺伝子を連結し、これを動物の卵細胞
に注入していわゆるトランスジェニック動物（遺伝子導
入動物）を作成すれば、特異的にそのタンパク質を合成
させ、その生体での作用を検討することも可能となる。
さらに上記プロモーター部分に適当なレポーター遺伝子
を結合させ、これが発現するような細胞株を樹立すれ
ば、本発明のタンパク質そのものの体内での産生能力を
特異的に促進もしくは抑制する作用を持つ低分子化合物
の探索系として使用できる。また該プロモーター部分を
解析することにより新たなシスエレメントやそれに結合
する転写因子を見つけることも可能である。
【００８８】本明細書および図面において、塩基やアミ
ノ酸などを略号で表示する場合、IUPAC-IUB Commission
on Biochemical Nomenclature による略号あるいは当
該分野における慣用略号に基づくものであり、その例を
下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場
合は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。 ＤＮＡ ：デオキシリボ核酸 ｃＤＮＡ ：相補的デオキシリボ核酸 Ａ ：アデニン Ｔ ：チミン Ｇ ：グアニン Ｃ ：シトシン ＲＮＡ ：リボ核酸 ｍＲＮＡ ：メッセンジャーリボ核酸 ｄＡＴＰ ：デオキシアデノシン三リン酸 ｄＴＴＰ ：デオキシチミジン三リン酸 ｄＧＴＰ ：デオキシグアノシン三リン酸 ｄＣＴＰ ：デオキシシチジン三リン酸 ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸 ＥＤＴＡ ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム Ｇｌｙ ：グリシン Ａｌａ ：アラニン Ｖａｌ ：バリン Ｌｅｕ ：ロイシン Ｉｌｅ ：イソロイシン Ｓｅｒ ：セリン Ｔｈｒ ：スレオニン Ｃｙｓ ：システイン Ｍｅｔ ：メチオニン Ｇｌｕ ：グルタミン酸 Ａｓｐ ：アスパラギン酸 Ｌｙｓ ：リジン Ａｒｇ ：アルギニン Ｈｉｓ ：ヒスチジン Ｐｈｅ ：フェニルアラニン Ｔｙｒ ：チロシン Ｔｒｐ ：トリプトファン Ｐｒｏ ：プロリン Ａｓｎ ：アスパラギン Ｇｌｎ ：グルタミン ｐＧｌｕ ：ピログルタミン酸
ノ酸などを略号で表示する場合、IUPAC-IUB Commission
on Biochemical Nomenclature による略号あるいは当
該分野における慣用略号に基づくものであり、その例を
下記する。またアミノ酸に関し光学異性体があり得る場
合は、特に明示しなければＬ体を示すものとする。 ＤＮＡ ：デオキシリボ核酸 ｃＤＮＡ ：相補的デオキシリボ核酸 Ａ ：アデニン Ｔ ：チミン Ｇ ：グアニン Ｃ ：シトシン ＲＮＡ ：リボ核酸 ｍＲＮＡ ：メッセンジャーリボ核酸 ｄＡＴＰ ：デオキシアデノシン三リン酸 ｄＴＴＰ ：デオキシチミジン三リン酸 ｄＧＴＰ ：デオキシグアノシン三リン酸 ｄＣＴＰ ：デオキシシチジン三リン酸 ＡＴＰ ：アデノシン三リン酸 ＥＤＴＡ ：エチレンジアミン四酢酸 ＳＤＳ ：ドデシル硫酸ナトリウム Ｇｌｙ ：グリシン Ａｌａ ：アラニン Ｖａｌ ：バリン Ｌｅｕ ：ロイシン Ｉｌｅ ：イソロイシン Ｓｅｒ ：セリン Ｔｈｒ ：スレオニン Ｃｙｓ ：システイン Ｍｅｔ ：メチオニン Ｇｌｕ ：グルタミン酸 Ａｓｐ ：アスパラギン酸 Ｌｙｓ ：リジン Ａｒｇ ：アルギニン Ｈｉｓ ：ヒスチジン Ｐｈｅ ：フェニルアラニン Ｔｙｒ ：チロシン Ｔｒｐ ：トリプトファン Ｐｒｏ ：プロリン Ａｓｎ ：アスパラギン Ｇｌｎ ：グルタミン ｐＧｌｕ ：ピログルタミン酸
【００８９】また、本明細書中で繁用される置換基、保
護基および試薬を下記の記号で表記する。 Ｍｅ ：メチル基 Ｅｔ ：エチル基 Ｂｕ ：ブチル基 Ｐｈ ：フェニル基 ＴＣ ：チアゾリジン−４（Ｒ）−カルボキサミド基 Ｔｏｓ ：ｐ−トルエンスルフォニル ＣＨＯ ：ホルミル Ｂｚｌ ：ベンジル Ｃｌ2−Ｂｚｌ ：２，６−ジクロロベンジル Ｂｏｍ ：ベンジルオキシメチル Ｚ ：ベンジルオキシカルボニル Ｃｌ−Ｚ ：２−クロロベンジルオキシカルボニル Ｂｒ−Ｚ ：２−ブロモベンジルオキシカルボニル Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル ＤＮＰ ：ジニトロフェニル Ｔｒｔ ：トリチル Ｂｕｍ ：ｔ−ブトキシメチル Ｆｍｏｃ ：Ｎ−９−フルオレニルメトキシカルボニル ＨＯＢｔ ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール ＨＯＯＢｔ ：３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ− １，２，３−ベンゾトリアジン ＨＯＮＢ ：1-ヒドロキシ-5-ノルボルネン-2,3-ジカルボキシイミド ＤＣＣ ：Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
護基および試薬を下記の記号で表記する。 Ｍｅ ：メチル基 Ｅｔ ：エチル基 Ｂｕ ：ブチル基 Ｐｈ ：フェニル基 ＴＣ ：チアゾリジン−４（Ｒ）−カルボキサミド基 Ｔｏｓ ：ｐ−トルエンスルフォニル ＣＨＯ ：ホルミル Ｂｚｌ ：ベンジル Ｃｌ2−Ｂｚｌ ：２，６−ジクロロベンジル Ｂｏｍ ：ベンジルオキシメチル Ｚ ：ベンジルオキシカルボニル Ｃｌ−Ｚ ：２−クロロベンジルオキシカルボニル Ｂｒ−Ｚ ：２−ブロモベンジルオキシカルボニル Ｂｏｃ ：ｔ−ブトキシカルボニル ＤＮＰ ：ジニトロフェニル Ｔｒｔ ：トリチル Ｂｕｍ ：ｔ−ブトキシメチル Ｆｍｏｃ ：Ｎ−９−フルオレニルメトキシカルボニル ＨＯＢｔ ：１−ヒドロキシベンズトリアゾール ＨＯＯＢｔ ：３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ− １，２，３−ベンゾトリアジン ＨＯＮＢ ：1-ヒドロキシ-5-ノルボルネン-2,3-ジカルボキシイミド ＤＣＣ ：Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド
【００９０】本願明細書の配列表の配列番号は、以下の
配列を示す。 〔配列番号：１〕ＰＦＮＩＩＬおよびＰＦＮＩＩＰのＮ
末端から１３０番目までのアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：２〕 配列番号：１で表されるアミノ酸配列をコードする塩基
配列を示す。 〔配列番号：３〕ＰＦＮＩＩＬのアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：４〕 配列番号：３で表されるアミノ酸配列をコードする塩基
配列を示す。 〔配列番号：５〕ＰＦＮＩＩＰのアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：６〕ＰＦＮＩのアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：７〕 配列番号：６で表されるアミノ酸配列をコードする塩基
配列を示す。 〔配列番号：８〕ＰＦＮＩＩのアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：９〕 配列番号：８で表されるアミノ酸配列をコードする塩基
配列を示す。 〔配列番号：１０〕ＭＤ３６のアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：１１〕 配列番号：１０で表されるアミノ酸配列をコードする塩
基配列を示す。 〔配列番号：１２〕実施例１および実施例３で用いられ
たプライマ−の塩基配列を示す。 〔配列番号：１３〕実施例１で用いられたプライマ−の
塩基配列を示す。 〔配列番号：１４〕実施例２で用いられたＭＤ３６のN
末端からプロリン・リッチなドメインまでを含むアミノ
酸配列を示す。 〔配列番号：１５〕参考例１で用いられたＩＲＡＰのア
ミノ酸残基５５から８２番目のポリペプチドをコードす
るDNA断片の塩基配列を示す。 〔配列番号：１６〕参考例２で用いられたプライマ−の
塩基配列を示す。 〔配列番号：１７〕参考例２で用いられたプライマ−の
塩基配列を示す。 〔配列番号：１８〕参考例２で用いられたプライマ−の
塩基配列を示す。 〔配列番号：１９〕参考例２で用いられたプライマ−の
塩基配列を示す。 〔配列番号：２０〕実施例３で用いられたプライマ−の
塩基配列を示す。 〔配列番号：２１〕ＰＦＮＩＩＬのＮ末端から第１３１
番目〜第１４０番目で表されるアミノ酸配列を示す。参
考例２で得られたプラスミドｐＴＢ２０７８を保持する
形質転換体Escherichia coli DH5α/pTB2078は１９９９
年１２月１６日から茨城県つくば市東１丁目１番地１
中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人
産業技術総合研究所 特許生物寄託センター（旧 通商
産業省工業技術院生命工学工業技術研究所：ＮＩＢＨ）
に受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−６９７０として、また１９
９９年１１月３０日から大阪府大阪市淀川区十三本町２
丁目１７番８５号（郵便番号５３２−８６８６）の財団
法人・発酵研究所（ＩＦＯ）にＩＦＯ １６３４０とし
て寄託されている。実施例１で得られたプロフィリンＩ
ＩＬを保持する形質転換体Escherichia coli INVαF'/p
TB2181は２０００年１１月１４日から大阪府大阪市淀川
区十三本町２丁目１７番８５号（郵便番号５３２−８６
８６）の財団法人・発酵研究所（ＩＦＯ）にＩＦＯ １
６５０１として寄託されている（Mol. Cell. Biol. (No
v. 2000), 20:8209-8219）。
配列を示す。 〔配列番号：１〕ＰＦＮＩＩＬおよびＰＦＮＩＩＰのＮ
末端から１３０番目までのアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：２〕 配列番号：１で表されるアミノ酸配列をコードする塩基
配列を示す。 〔配列番号：３〕ＰＦＮＩＩＬのアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：４〕 配列番号：３で表されるアミノ酸配列をコードする塩基
配列を示す。 〔配列番号：５〕ＰＦＮＩＩＰのアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：６〕ＰＦＮＩのアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：７〕 配列番号：６で表されるアミノ酸配列をコードする塩基
配列を示す。 〔配列番号：８〕ＰＦＮＩＩのアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：９〕 配列番号：８で表されるアミノ酸配列をコードする塩基
配列を示す。 〔配列番号：１０〕ＭＤ３６のアミノ酸配列を示す。 〔配列番号：１１〕 配列番号：１０で表されるアミノ酸配列をコードする塩
基配列を示す。 〔配列番号：１２〕実施例１および実施例３で用いられ
たプライマ−の塩基配列を示す。 〔配列番号：１３〕実施例１で用いられたプライマ−の
塩基配列を示す。 〔配列番号：１４〕実施例２で用いられたＭＤ３６のN
末端からプロリン・リッチなドメインまでを含むアミノ
酸配列を示す。 〔配列番号：１５〕参考例１で用いられたＩＲＡＰのア
ミノ酸残基５５から８２番目のポリペプチドをコードす
るDNA断片の塩基配列を示す。 〔配列番号：１６〕参考例２で用いられたプライマ−の
塩基配列を示す。 〔配列番号：１７〕参考例２で用いられたプライマ−の
塩基配列を示す。 〔配列番号：１８〕参考例２で用いられたプライマ−の
塩基配列を示す。 〔配列番号：１９〕参考例２で用いられたプライマ−の
塩基配列を示す。 〔配列番号：２０〕実施例３で用いられたプライマ−の
塩基配列を示す。 〔配列番号：２１〕ＰＦＮＩＩＬのＮ末端から第１３１
番目〜第１４０番目で表されるアミノ酸配列を示す。参
考例２で得られたプラスミドｐＴＢ２０７８を保持する
形質転換体Escherichia coli DH5α/pTB2078は１９９９
年１２月１６日から茨城県つくば市東１丁目１番地１
中央第６（郵便番号３０５−８５６６）の独立行政法人
産業技術総合研究所 特許生物寄託センター（旧 通商
産業省工業技術院生命工学工業技術研究所：ＮＩＢＨ）
に受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−６９７０として、また１９
９９年１１月３０日から大阪府大阪市淀川区十三本町２
丁目１７番８５号（郵便番号５３２−８６８６）の財団
法人・発酵研究所（ＩＦＯ）にＩＦＯ １６３４０とし
て寄託されている。実施例１で得られたプロフィリンＩ
ＩＬを保持する形質転換体Escherichia coli INVαF'/p
TB2181は２０００年１１月１４日から大阪府大阪市淀川
区十三本町２丁目１７番８５号（郵便番号５３２−８６
８６）の財団法人・発酵研究所（ＩＦＯ）にＩＦＯ １
６５０１として寄託されている（Mol. Cell. Biol. (No
v. 2000), 20:8209-8219）。
【００９１】
【実施例】以下に、参考例および実施例をあげて本発明
をさらに具体的に説明するが、本発明はそれに限定され
るものではない。なお、大腸菌を用いての遺伝子操作法
は、前掲のモレキュラー・クローニング（Molecular cl
oning）に記載されている方法に従った。
をさらに具体的に説明するが、本発明はそれに限定され
るものではない。なお、大腸菌を用いての遺伝子操作法
は、前掲のモレキュラー・クローニング（Molecular cl
oning）に記載されている方法に従った。
【００９２】参考例１ 酵母two-hybrid法によるＩＲＡ
Ｐ結合タンパク質をコードするｃＤＮＡのクローニング ＭＤ３６は酵母two-hybrid法によりクローニングした。
酵母two-hybrid法は、基本的にはClontech社製のMATCHM
AKERTM two-hybrid systemを用いて行った。ＩＲＡＰの
アミノ酸残基５５から８２番目のポリペプチド（Keller
et al, J.Biol. Chem., 270, 23612-23618, 1995）を
コードするＤＮＡ断片（配列番号：１５）を化学合成
し、これをＡＤＨ１プロモーター支配下でＧＡＬ４−Ｄ
ＮＡ結合ドメイン（ＧＡＬ４−ＢＤ）を発現するプラス
ミドｐＧＢＴ９（CLONTECH社製）に翻訳フレームが一致
するように挿入し、これをｂａｉｔベクターｐＢａｉｔ
−２とした。スクリーニングするｃＤＮＡライブラリー
はClontech社製のヒト骨格筋由来ｃＤＮＡライブラリー
を用いた。このライブラリーは、ＡＤＨ１プロモーター
支配下でＧＡＬ４転写活性化ドメイン（ＧＡＬ４−Ａ
Ｄ）に融合した形で、ライブラリーｃＤＮＡが酵母内で
発現されるように構築されている。宿主酵母にはサッカ
ロマイセス・セレビシェ（Saccharomyces cerevisiae）
Ｙ１９０を用いた。この酵母株は、レポーター遺伝子と
してＧＡＬ１のＴＡＴＡボックス（TATA box）とＵＡＳ
（upstream activating sequences）に制御下にあるβ
−ガラクトシダーゼ遺伝子（ｌａｃＺ）とヒスチジン合
成系遺伝子（ＨＩＳ３）をその染色体上に保持してい
る。サッカロマイセス・セレビシェ（Saccharomyces ce
revisiae）Ｙ１９０にｐＢａｉｔ−２（ＴＲＰ１マーカ
ー）とヒト骨格筋由来ｃＤＮＡライブラリープラスミド
（ＬＥＵ２マーカー）を導入し、両方のプラスミドを持
ち、かつtwo-hybridのレポーター遺伝子の一つであるＨ
ＩＳ３を発現している形質転換体酵母を最小培地である
６０ｍＭ ３−アミノトリアゾール添加ならびにＴｒ
ｐ、ＬｅｕおよびＨｉｓ非添加のＳＤ培地で選択した。
選択された形質転換体コロニーをナイロン膜にレプリカ
法で移し、液体窒素による凍結・融解で酵母細胞壁を破
砕した後、Ｘ−Ｇａｌ（5-bromo-4-chloro-β-D-galact
oside）で染色を行い、β−ガラクトシダーゼ活性を呈
する株を一次候補株とした。上記の手法で１０7個以上
のライブラリーｃＤＮＡをスクリーニングし、１２クロ
ーンの候補遺伝子を取得した。これらの酵母からザイモ
リエース（生化学工業社製）を用いて細胞抽出液を調製
し、そのＤＮＡ画分を用いてロイシン要求性の大腸菌
（Escherichia coli）ＨＢ１０１を形質転換した。形質
転換された大腸菌をロイシン不含Ｍ９培地に塗布し、ラ
イブラリープラスミド（ＬＥＵ２マーカー）を有する大
腸菌株を選択し、これらからプラスミドを抽出した。抽
出されたライブラリープラスミドとＩＲＡＰ ｂａｉｔ
ベクターであるｐＢａｉｔ−２を用いて、再びサッカロ
マイセス・セレビシェ（Saccharomyces cerevisiae）Ｙ
１９０を形質転換し、得られた形質転換体のヒスチジン
要求性ならびにβ−ガラクトシダーゼ活性を検査し、再
現性を示す５クローンを得た。これらのうち最もβ−ガ
ラクトシダーゼ活性の強いクローン（ＭＤ３６株）を選
択した。
Ｐ結合タンパク質をコードするｃＤＮＡのクローニング ＭＤ３６は酵母two-hybrid法によりクローニングした。
酵母two-hybrid法は、基本的にはClontech社製のMATCHM
AKERTM two-hybrid systemを用いて行った。ＩＲＡＰの
アミノ酸残基５５から８２番目のポリペプチド（Keller
et al, J.Biol. Chem., 270, 23612-23618, 1995）を
コードするＤＮＡ断片（配列番号：１５）を化学合成
し、これをＡＤＨ１プロモーター支配下でＧＡＬ４−Ｄ
ＮＡ結合ドメイン（ＧＡＬ４−ＢＤ）を発現するプラス
ミドｐＧＢＴ９（CLONTECH社製）に翻訳フレームが一致
するように挿入し、これをｂａｉｔベクターｐＢａｉｔ
−２とした。スクリーニングするｃＤＮＡライブラリー
はClontech社製のヒト骨格筋由来ｃＤＮＡライブラリー
を用いた。このライブラリーは、ＡＤＨ１プロモーター
支配下でＧＡＬ４転写活性化ドメイン（ＧＡＬ４−Ａ
Ｄ）に融合した形で、ライブラリーｃＤＮＡが酵母内で
発現されるように構築されている。宿主酵母にはサッカ
ロマイセス・セレビシェ（Saccharomyces cerevisiae）
Ｙ１９０を用いた。この酵母株は、レポーター遺伝子と
してＧＡＬ１のＴＡＴＡボックス（TATA box）とＵＡＳ
（upstream activating sequences）に制御下にあるβ
−ガラクトシダーゼ遺伝子（ｌａｃＺ）とヒスチジン合
成系遺伝子（ＨＩＳ３）をその染色体上に保持してい
る。サッカロマイセス・セレビシェ（Saccharomyces ce
revisiae）Ｙ１９０にｐＢａｉｔ−２（ＴＲＰ１マーカ
ー）とヒト骨格筋由来ｃＤＮＡライブラリープラスミド
（ＬＥＵ２マーカー）を導入し、両方のプラスミドを持
ち、かつtwo-hybridのレポーター遺伝子の一つであるＨ
ＩＳ３を発現している形質転換体酵母を最小培地である
６０ｍＭ ３−アミノトリアゾール添加ならびにＴｒ
ｐ、ＬｅｕおよびＨｉｓ非添加のＳＤ培地で選択した。
選択された形質転換体コロニーをナイロン膜にレプリカ
法で移し、液体窒素による凍結・融解で酵母細胞壁を破
砕した後、Ｘ−Ｇａｌ（5-bromo-4-chloro-β-D-galact
oside）で染色を行い、β−ガラクトシダーゼ活性を呈
する株を一次候補株とした。上記の手法で１０7個以上
のライブラリーｃＤＮＡをスクリーニングし、１２クロ
ーンの候補遺伝子を取得した。これらの酵母からザイモ
リエース（生化学工業社製）を用いて細胞抽出液を調製
し、そのＤＮＡ画分を用いてロイシン要求性の大腸菌
（Escherichia coli）ＨＢ１０１を形質転換した。形質
転換された大腸菌をロイシン不含Ｍ９培地に塗布し、ラ
イブラリープラスミド（ＬＥＵ２マーカー）を有する大
腸菌株を選択し、これらからプラスミドを抽出した。抽
出されたライブラリープラスミドとＩＲＡＰ ｂａｉｔ
ベクターであるｐＢａｉｔ−２を用いて、再びサッカロ
マイセス・セレビシェ（Saccharomyces cerevisiae）Ｙ
１９０を形質転換し、得られた形質転換体のヒスチジン
要求性ならびにβ−ガラクトシダーゼ活性を検査し、再
現性を示す５クローンを得た。これらのうち最もβ−ガ
ラクトシダーゼ活性の強いクローン（ＭＤ３６株）を選
択した。
【００９３】参考例２ ＭＤ３６の全長ｃＤＮＡクロー
ニング このｃＤＮＡの全体構造を知るために、プラークハイブ
リダイゼーション法とpolymerase chain reaction（Ｐ
ＣＲ）法で全長配列のクローニングを行った。プラーク
ハイブリダイゼーション法ではヒト骨格筋由来ｃＤＮＡ
ライブラリー（Clontech社製; lTripleEx vector）をス
クリーニングした。プローブ領域には、ＭＤ３６の０．
６８ｋｂ断片（配列番号：１１の塩基番号２９９５〜３
６７４）を用いた。このファージライブラリーのスクリ
ーニングにより、ＭＤ３６ ｃＤＮＡの３’末端より約
１．８ｋｂのｃＤＮＡクローン（配列番号：１１の塩基
番号２０１５〜３８５３）を得た。次に、ＰＣＲによる
クローニングを試みた。ＭＤ３６ ｃＤＮＡの３’末端
の配列はヒト脾臓由来のＦＨＯＳ ｃＤＮＡの配列（Wes
tendorf et al.,Gene, 232, 173-182, 1999; Genbank A
ccession No. AF113615）とほぼ一致した（blastn;scor
e bits=3540, Evalue=0.0）。Genbankデータベースに登
録されているＦＨＯＳの配列をもとにして、このｃＤＮ
Ａのほぼ全長をカバーする２種のＰＣＲプライマー、 (1) 5’-tgagccggccgcagagccatgg-3’（配列番号：１
６） および (2) 5’-tgctccgtgcgttcaaggagctcac-3’（配列番号：
１７） を合成し、これらを用いてＰＣＲを行った。ＰＣＲの鋳
型はヒト骨格筋ならびにヒト脾臓由来ｃＤＮＡ（Clonte
ch、＃７４１３−１ならびに＃７４１２−１）を用い
た。反応は９８℃，２０秒、６５℃，４０秒、７２℃，
３．５分を３５サイクル行った。それぞれの組織由来ｃ
ＤＮＡよりＰＣＲで得られた約３．７ｋｂの断片をＴＡ
クローニングし塩基配列を決定した。なお、Ｔａｑポリ
メラーゼの誤読由来の塩基配列置換箇所は、それぞれ一
つのＰＣＲ産物に対し３クローン以上の塩基配列を比較
することにより同定し、変異の入っていないクローンの
一部とＤＮＡ断片を入れ替えることで置換した。また、
３’末端から約１．８ｋｂは変異のおそれのないファー
ジライブラリー由来のｃＤＮＡ断片を利用した。塩基配
列を決定したところ、骨格筋由来の全長ｃＤＮＡは得ら
れたもの全てに、報告されているＦＨＯＳ ｃＤＮＡの
配列中に７８ｂｐの配列が挿入されたものであった（配
列番号：１１）。挿入部分に相当する配列は配列番号：
１１の塩基番号１３３９〜１４１７である。すなわち、
文献記載のＦＨＯＳの４４０番目のＬｙｓと４４１番目
のＡｌａの間に２６アミノ酸が挿入されていた。ヒト各
組織での挿入配列の有無の分布をヒト組織由来ｃＤＮＡ
を鋳型としたＰＣＲで検討した。ヒト各組織のｃＤＮＡ
はＭＴＣパネル（MTC panels（Clontech; #K1420-1, #K
1421-1））を用いた。プライマーは 5’-cctaccatctctgtggcaccctcagct-3’（配列番号：１
８） および 5’-ttggggcttgctggtatcagtggctcc-3’（配列番号：１
９） を用いた。これらのプライマーでＰＣＲを行いその産物
をＴＡクローニングし、それらの塩基配列を決定した。
このＰＣＲではＦＨＯＳで３１０ｂｐのバンドが検出さ
れるように設定された。上記２種のプライマー（配列番
号：１８および配列番号：１９）を用いてヒトの各組識
由来のｃＤＮＡに対してＰＣＲを行ったところ、ＭＤ３
６由来のＰＣＲ産物（３８８ｂｐ）は主に骨格筋で検出
され、他に心臓でわずかながら検出された。すなわち、
７８ｂｐの挿入配列は調べた臓器の中では骨格筋特異的
であることが確認された。得られたＭＤ３６ ｃＤＮＡ
（配列番号：１１）をpBluescriptII KS+のＳｐｅＩ部
位とＸｈｏＩ部位の間に挿入したプラスミドをｐＴＢ２
０７８とした。なお、ｐＴＢ２０７８は１ヶ所ＰＣＲ由
来の塩基置換が残っている（１６７７番目のＧがＡに置
換）が、これは翻訳されるアミノ酸の変異を伴わない。
ニング このｃＤＮＡの全体構造を知るために、プラークハイブ
リダイゼーション法とpolymerase chain reaction（Ｐ
ＣＲ）法で全長配列のクローニングを行った。プラーク
ハイブリダイゼーション法ではヒト骨格筋由来ｃＤＮＡ
ライブラリー（Clontech社製; lTripleEx vector）をス
クリーニングした。プローブ領域には、ＭＤ３６の０．
６８ｋｂ断片（配列番号：１１の塩基番号２９９５〜３
６７４）を用いた。このファージライブラリーのスクリ
ーニングにより、ＭＤ３６ ｃＤＮＡの３’末端より約
１．８ｋｂのｃＤＮＡクローン（配列番号：１１の塩基
番号２０１５〜３８５３）を得た。次に、ＰＣＲによる
クローニングを試みた。ＭＤ３６ ｃＤＮＡの３’末端
の配列はヒト脾臓由来のＦＨＯＳ ｃＤＮＡの配列（Wes
tendorf et al.,Gene, 232, 173-182, 1999; Genbank A
ccession No. AF113615）とほぼ一致した（blastn;scor
e bits=3540, Evalue=0.0）。Genbankデータベースに登
録されているＦＨＯＳの配列をもとにして、このｃＤＮ
Ａのほぼ全長をカバーする２種のＰＣＲプライマー、 (1) 5’-tgagccggccgcagagccatgg-3’（配列番号：１
６） および (2) 5’-tgctccgtgcgttcaaggagctcac-3’（配列番号：
１７） を合成し、これらを用いてＰＣＲを行った。ＰＣＲの鋳
型はヒト骨格筋ならびにヒト脾臓由来ｃＤＮＡ（Clonte
ch、＃７４１３−１ならびに＃７４１２−１）を用い
た。反応は９８℃，２０秒、６５℃，４０秒、７２℃，
３．５分を３５サイクル行った。それぞれの組織由来ｃ
ＤＮＡよりＰＣＲで得られた約３．７ｋｂの断片をＴＡ
クローニングし塩基配列を決定した。なお、Ｔａｑポリ
メラーゼの誤読由来の塩基配列置換箇所は、それぞれ一
つのＰＣＲ産物に対し３クローン以上の塩基配列を比較
することにより同定し、変異の入っていないクローンの
一部とＤＮＡ断片を入れ替えることで置換した。また、
３’末端から約１．８ｋｂは変異のおそれのないファー
ジライブラリー由来のｃＤＮＡ断片を利用した。塩基配
列を決定したところ、骨格筋由来の全長ｃＤＮＡは得ら
れたもの全てに、報告されているＦＨＯＳ ｃＤＮＡの
配列中に７８ｂｐの配列が挿入されたものであった（配
列番号：１１）。挿入部分に相当する配列は配列番号：
１１の塩基番号１３３９〜１４１７である。すなわち、
文献記載のＦＨＯＳの４４０番目のＬｙｓと４４１番目
のＡｌａの間に２６アミノ酸が挿入されていた。ヒト各
組織での挿入配列の有無の分布をヒト組織由来ｃＤＮＡ
を鋳型としたＰＣＲで検討した。ヒト各組織のｃＤＮＡ
はＭＴＣパネル（MTC panels（Clontech; #K1420-1, #K
1421-1））を用いた。プライマーは 5’-cctaccatctctgtggcaccctcagct-3’（配列番号：１
８） および 5’-ttggggcttgctggtatcagtggctcc-3’（配列番号：１
９） を用いた。これらのプライマーでＰＣＲを行いその産物
をＴＡクローニングし、それらの塩基配列を決定した。
このＰＣＲではＦＨＯＳで３１０ｂｐのバンドが検出さ
れるように設定された。上記２種のプライマー（配列番
号：１８および配列番号：１９）を用いてヒトの各組識
由来のｃＤＮＡに対してＰＣＲを行ったところ、ＭＤ３
６由来のＰＣＲ産物（３８８ｂｐ）は主に骨格筋で検出
され、他に心臓でわずかながら検出された。すなわち、
７８ｂｐの挿入配列は調べた臓器の中では骨格筋特異的
であることが確認された。得られたＭＤ３６ ｃＤＮＡ
（配列番号：１１）をpBluescriptII KS+のＳｐｅＩ部
位とＸｈｏＩ部位の間に挿入したプラスミドをｐＴＢ２
０７８とした。なお、ｐＴＢ２０７８は１ヶ所ＰＣＲ由
来の塩基置換が残っている（１６７７番目のＧがＡに置
換）が、これは翻訳されるアミノ酸の変異を伴わない。
【００９４】実施例１ プロフィリンＩＩＬ（配列番
号：３で表されるアミノ酸を有するタンパク質をコード
するＤＮＡ（配列番号：４））のクローニング プロフィリンＩＩＬはプロフィリンＩＩ（Genbank acce
sion #, L10678；配列番号：９）の開始コドンから終止
コドンの間を増幅するpolymarase chain reaction（Ｐ
ＣＲ）で得た。ＰＣＲに用いたプライマーは、 (1) 5'-atggccggttggcagagctacgtggat-3' (27 mer；配
列番号：１２) (2) 5'-ttacacatcagacctcctcaggtataaagc-3' (30 mer；
配列番号：１３) である。鋳型はヒト骨格筋由来のｃＤＮＡを、また酵素
はＰｆｕポリメラーゼ（Pfu polymerase）（STRATAGEN
E）を用いて、９５℃，３０秒、６５℃，４５秒、７２
℃，６０秒の反応を３５サイクル行った。ＰＣＲの結
果、プロフィリンＩＩである４２３ｂｐのＤＮＡ断片の
他に、７４５ｂｐのＤＮＡ断片が見いだされ、プロフィ
リンＩＩＬと名付けた。プロフィリンＩＩＬのｃＤＮＡ
の塩基配列と翻訳アミノ酸配列を図１〜２に、プロフィ
リンＩＩＬとプロフィリンＩならびにプロフィリンＩＩ
のアミノ酸配列の比較を図３に示す。また、これらのプ
ライマーを用いたＰＣＲで、ヒトＭＴＣパネルにより、
プロフィリンＩＩＬの組織分布を検討したところ脳、骨
格筋、膵臓、胎盤、心臓で発現が認められた。
号：３で表されるアミノ酸を有するタンパク質をコード
するＤＮＡ（配列番号：４））のクローニング プロフィリンＩＩＬはプロフィリンＩＩ（Genbank acce
sion #, L10678；配列番号：９）の開始コドンから終止
コドンの間を増幅するpolymarase chain reaction（Ｐ
ＣＲ）で得た。ＰＣＲに用いたプライマーは、 (1) 5'-atggccggttggcagagctacgtggat-3' (27 mer；配
列番号：１２) (2) 5'-ttacacatcagacctcctcaggtataaagc-3' (30 mer；
配列番号：１３) である。鋳型はヒト骨格筋由来のｃＤＮＡを、また酵素
はＰｆｕポリメラーゼ（Pfu polymerase）（STRATAGEN
E）を用いて、９５℃，３０秒、６５℃，４５秒、７２
℃，６０秒の反応を３５サイクル行った。ＰＣＲの結
果、プロフィリンＩＩである４２３ｂｐのＤＮＡ断片の
他に、７４５ｂｐのＤＮＡ断片が見いだされ、プロフィ
リンＩＩＬと名付けた。プロフィリンＩＩＬのｃＤＮＡ
の塩基配列と翻訳アミノ酸配列を図１〜２に、プロフィ
リンＩＩＬとプロフィリンＩならびにプロフィリンＩＩ
のアミノ酸配列の比較を図３に示す。また、これらのプ
ライマーを用いたＰＣＲで、ヒトＭＴＣパネルにより、
プロフィリンＩＩＬの組織分布を検討したところ脳、骨
格筋、膵臓、胎盤、心臓で発現が認められた。
【００９５】実施例２ ＭＤ３６（配列番号：１０で表
されるアミノ酸配列を有するタンパク質）とProfilinフ
ァミリーのタンパク質−タンパク質相互作用の検討 ＭＤ３６とプロフィリンファミリーのタンパク質−タン
パク質相互作用について、酵母two-hybridシステムを用
いて検出した。プロフィリンＩ、プロフィリンＩＩ、プ
ロフィリンＩＩＬのコード領域を酵母ＡＤＨ１プロモー
ター支配下で酵母ＧＡＬ４−ＤＮＡ結合ドメインタンパ
ク質に融合する形で発現する発現プラスミドをｐＧＢＴ
９（CLONTECH）をもとにして構築し、それぞれｐＧ−Ｐ
ＦＮＩ、ｐＧ−ＰＦＮＩＩ、ｐＧ−ＰＦＮＩＩＬとした
（酵母選択マーカーはＴＲＰ１）。一方で、ＩＲＡＰ−
ＢＰタンパク質であるＭＤ３６（ＦＨＯＳに加え筋肉特
異的である７８ｂｐの挿入配列を持つスプライシング・
バリアント（splicing variant））の全長配列（配列番
号：１０）、あるいは、このＮ末端からプロリン・リッ
チなドメインまでを含む配列（配列番号：１４）までの
コード領域を、酵母ＡＤＨ１プロモーター支配下で酵母
ＧＡＬ４転写活性化ドメインタンパク質に融合する形で
発現する発現プラスミドをｐＡＣＴ２（CLONTECH）をも
とにして構築し、それぞれｐＡＣＴ−ＭＤ３６、ｐＡＣ
Ｔ−ＭＤ３６ＮＴとした（酵母選択マーカーはＬＥＵ
２）。ｐＧ−ＰＦＮＩ、ｐＧ−ＰＦＮＩＩ、ｐＧ−ＰＦ
ＮＩＩＬまたはコントロールとしてｐＧＢＴ９をｐＡＣ
Ｔ−ＭＤ３６またはｐＡＣＴ−ＭＤ３６ＮＴとともに酵
母サッカロマイセス・セレビシェ（Saccharomyces cere
visiae）Ｙ１９０にCo-transfectionしトリプトファン
ならびにロイシン不含ＳＤ培地上で双方のプラスミドを
保持する酵母株を選択した。サッカロマイセス・セレビ
シェ（Saccharomyces cerevisiae）Ｙ１９０は本来ヒス
チジン要求性の株であるが導入したプラスミド上のタン
パク質が互いに相互作用を示すと、レポーター遺伝子で
あるＨＩＳ３が発現し、ヒスチジン不含プレート上でも
生育しうるようになる。得られた酵母株をトリプトファ
ン、ロイシンならびにヒスチジン不含、４０ｍＭ ３−
アミノ−１，２，４−トリアゾール添加のＳＤ培地に塗
布したところ、プロフィリンＩ／ＭＤ３６、プロフィリ
ンＩ／ＭＤ３６ＮＴ、プロフィリンＩＩ／ＭＤ３６、プ
ロフィリンＩＩ／ＭＤ３６ＮＴの発現の組み合わせでは
いずれもｐＧＢＴ９を用いたコントロール実験と同様
に、酵母は生育せず、プロフィリンＩＩＬ／ＭＤ３６、
プロフィリンＩＩＬ／ＭＤ３６ＮＴの発現の組み合わせ
のみ酵母の生育が認められた。これらのことからＭＤ３
６はプロフィリンファミリーのうちプロフィリンＩＩＬ
に特異的に結合することが分かった。
されるアミノ酸配列を有するタンパク質）とProfilinフ
ァミリーのタンパク質−タンパク質相互作用の検討 ＭＤ３６とプロフィリンファミリーのタンパク質−タン
パク質相互作用について、酵母two-hybridシステムを用
いて検出した。プロフィリンＩ、プロフィリンＩＩ、プ
ロフィリンＩＩＬのコード領域を酵母ＡＤＨ１プロモー
ター支配下で酵母ＧＡＬ４−ＤＮＡ結合ドメインタンパ
ク質に融合する形で発現する発現プラスミドをｐＧＢＴ
９（CLONTECH）をもとにして構築し、それぞれｐＧ−Ｐ
ＦＮＩ、ｐＧ−ＰＦＮＩＩ、ｐＧ−ＰＦＮＩＩＬとした
（酵母選択マーカーはＴＲＰ１）。一方で、ＩＲＡＰ−
ＢＰタンパク質であるＭＤ３６（ＦＨＯＳに加え筋肉特
異的である７８ｂｐの挿入配列を持つスプライシング・
バリアント（splicing variant））の全長配列（配列番
号：１０）、あるいは、このＮ末端からプロリン・リッ
チなドメインまでを含む配列（配列番号：１４）までの
コード領域を、酵母ＡＤＨ１プロモーター支配下で酵母
ＧＡＬ４転写活性化ドメインタンパク質に融合する形で
発現する発現プラスミドをｐＡＣＴ２（CLONTECH）をも
とにして構築し、それぞれｐＡＣＴ−ＭＤ３６、ｐＡＣ
Ｔ−ＭＤ３６ＮＴとした（酵母選択マーカーはＬＥＵ
２）。ｐＧ−ＰＦＮＩ、ｐＧ−ＰＦＮＩＩ、ｐＧ−ＰＦ
ＮＩＩＬまたはコントロールとしてｐＧＢＴ９をｐＡＣ
Ｔ−ＭＤ３６またはｐＡＣＴ−ＭＤ３６ＮＴとともに酵
母サッカロマイセス・セレビシェ（Saccharomyces cere
visiae）Ｙ１９０にCo-transfectionしトリプトファン
ならびにロイシン不含ＳＤ培地上で双方のプラスミドを
保持する酵母株を選択した。サッカロマイセス・セレビ
シェ（Saccharomyces cerevisiae）Ｙ１９０は本来ヒス
チジン要求性の株であるが導入したプラスミド上のタン
パク質が互いに相互作用を示すと、レポーター遺伝子で
あるＨＩＳ３が発現し、ヒスチジン不含プレート上でも
生育しうるようになる。得られた酵母株をトリプトファ
ン、ロイシンならびにヒスチジン不含、４０ｍＭ ３−
アミノ−１，２，４−トリアゾール添加のＳＤ培地に塗
布したところ、プロフィリンＩ／ＭＤ３６、プロフィリ
ンＩ／ＭＤ３６ＮＴ、プロフィリンＩＩ／ＭＤ３６、プ
ロフィリンＩＩ／ＭＤ３６ＮＴの発現の組み合わせでは
いずれもｐＧＢＴ９を用いたコントロール実験と同様
に、酵母は生育せず、プロフィリンＩＩＬ／ＭＤ３６、
プロフィリンＩＩＬ／ＭＤ３６ＮＴの発現の組み合わせ
のみ酵母の生育が認められた。これらのことからＭＤ３
６はプロフィリンファミリーのうちプロフィリンＩＩＬ
に特異的に結合することが分かった。
【００９６】実施例３ Ｃ末端１０アミノ酸を欠くＰＦ
ＮＩＩとＭＤ３６との結合試験 プロフィリンファミリーのタンパク質として、ＰＦＮ
Ｉ、ＰＦＮＩＩ、ＰＦＮＩＩＬの他に、ＰＦＮＩＩＬの
Ｃ末端部分１０アミノ酸を欠損したサブタイプが報告さ
れている（EP 1033401号公報）。この配列（以後、ＰＦ
ＮＩＩＰと呼ぶ）とＭＤ３６との結合試験を酵母Two-hy
brid法を用いて行った。ＰＦＮＩＩＰのＤＮＡ配列は、
単離されたＰＦＮＩＩＬ ｃＤＮＡを鋳型としたＰＣＲ
で１３１番目のメチオニンコドン（ＡＴＧ）を終止コド
ン（ＴＡＧ）に変換することにより得た。ＰＣＲに用い
たプライマーは次の２種である。 (1) 5'-atggccggttggcagagctacgtggat-3' (27 mer；配
列番号：１２) (2) 5'-ctatgagtatgccttcttattcaatcc-3' (27 mer；配
列番号：２０) 得られたＰＣＲ断片をｐＧＢＴ９に挿入し、発現プラス
ミドｐＧ−ＰＦＮＩＰを得た。結合試験は実施例２と同
様の手法で行った。ＰＦＮＩＩＰはＭＤ３６全長、ＭＤ
３６ＮＴ、ＦＨＯＳＮＴの何れとも結合活性を示さなか
った。以上のことより、ＰＦＮＩＩＬのＣ末端１０アミ
ノ酸、Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｒ
ｇ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−ＰｈｅはＭＤ３６との結
合に必須の配列であることが示された。
ＮＩＩとＭＤ３６との結合試験 プロフィリンファミリーのタンパク質として、ＰＦＮ
Ｉ、ＰＦＮＩＩ、ＰＦＮＩＩＬの他に、ＰＦＮＩＩＬの
Ｃ末端部分１０アミノ酸を欠損したサブタイプが報告さ
れている（EP 1033401号公報）。この配列（以後、ＰＦ
ＮＩＩＰと呼ぶ）とＭＤ３６との結合試験を酵母Two-hy
brid法を用いて行った。ＰＦＮＩＩＰのＤＮＡ配列は、
単離されたＰＦＮＩＩＬ ｃＤＮＡを鋳型としたＰＣＲ
で１３１番目のメチオニンコドン（ＡＴＧ）を終止コド
ン（ＴＡＧ）に変換することにより得た。ＰＣＲに用い
たプライマーは次の２種である。 (1) 5'-atggccggttggcagagctacgtggat-3' (27 mer；配
列番号：１２) (2) 5'-ctatgagtatgccttcttattcaatcc-3' (27 mer；配
列番号：２０) 得られたＰＣＲ断片をｐＧＢＴ９に挿入し、発現プラス
ミドｐＧ−ＰＦＮＩＰを得た。結合試験は実施例２と同
様の手法で行った。ＰＦＮＩＩＰはＭＤ３６全長、ＭＤ
３６ＮＴ、ＦＨＯＳＮＴの何れとも結合活性を示さなか
った。以上のことより、ＰＦＮＩＩＬのＣ末端１０アミ
ノ酸、Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ａｒ
ｇ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−ＰｈｅはＭＤ３６との結
合に必須の配列であることが示された。
【００９７】
【発明の効果】本発明のタンパク質は、低血糖症の予防
・治療剤として有用である。また、本発明は、本発明の
タンパク質と本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質との結合
を阻害する化合物のスクリーニング方法に用いることが
できる。本発明のタンパク質と本発明のＩＲＡＰ結合タ
ンパク質との結合を阻害する化合物は高血糖症、糖尿病
（特にＩＩ型糖尿病など）などの疾病の予防・治療剤と
して有用である。
・治療剤として有用である。また、本発明は、本発明の
タンパク質と本発明のＩＲＡＰ結合タンパク質との結合
を阻害する化合物のスクリーニング方法に用いることが
できる。本発明のタンパク質と本発明のＩＲＡＰ結合タ
ンパク質との結合を阻害する化合物は高血糖症、糖尿病
（特にＩＩ型糖尿病など）などの疾病の予防・治療剤と
して有用である。
【００９８】
<110> Takeda Chemical Industries, Ltd. <120> Screening Method for a medicament for treating diabetes <130> P2001-226 <150> JP 2000-363187 <151> 2000-11-29 <160> 21 <210> 1 <211> 130 <212> PRT <213> Human <400> 1 Met Ala Gly Trp Gln Ser Tyr Val Asp Asn Leu Met Cys Asp Gly Cys 5 10 15 Cys Gln Glu Ala Ala Ile Val Gly Tyr Cys Asp Ala Lys Tyr Val Trp 20 25 30 Ala Ala Thr Ala Gly Gly Val Phe Gln Ser Ile Thr Pro Ile Glu Ile 35 40 45 Asp Met Ile Val Gly Lys Asp Arg Glu Gly Phe Phe Thr Asn Gly Leu 50 55 60 Thr Leu Gly Ala Lys Lys Cys Ser Val Ile Arg Asp Ser Leu Tyr Val 65 70 75 80 Asp Gly Asp Cys Thr Met Asp Ile Arg Thr Lys Ser Gln Gly Gly Glu 85 90 95 Pro Thr Tyr Asn Val Ala Val Gly Arg Ala Gly Arg Val Leu Val Phe 100 105 110 Val Met Gly Lys Glu Gly Val His Gly Gly Gly Leu Asn Lys Lys Ala 115 120 125 Tyr Ser 130 <210> 2 <211> 390 <212> DNA <213> Human <400> 2 atggccggtt ggcagagcta cgtggataac ctgatgtgcg atggctgctg ccaggaggcc 60 gccattgtcg gctactgcga cgccaaatac gtctgggcag ccacggccgg gggcgtcttt 120 cagagcatta cgccaataga aatagatatg attgtaggaa aagaccggga aggtttcttt 180 accaacggtt tgactcttgg cgcgaagaaa tgctcagtga tcagagatag tctatacgtc 240 gatggtgact gcacaatgga catccggaca aagagtcaag gtggggagcc aacatacaat 300 gtggctgtcg gcagagctgg tagagtcttg gtctttgtaa tgggaaaaga aggggtccat 360 ggaggcggat tgaataagaa ggcatactca 390 <210> 3 <211> 140 <212> PRT <213> Human <400> 3 Met Ala Gly Trp Gln Ser Tyr Val Asp Asn Leu Met Cys Asp Gly Cys 5 10 15 Cys Gln Glu Ala Ala Ile Val Gly Tyr Cys Asp Ala Lys Tyr Val Trp 20 25 30 Ala Ala Thr Ala Gly Gly Val Phe Gln Ser Ile Thr Pro Ile Glu Ile 35 40 45 Asp Met Ile Val Gly Lys Asp Arg Glu Gly Phe Phe Thr Asn Gly Leu 50 55 60 Thr Leu Gly Ala Lys Lys Cys Ser Val Ile Arg Asp Ser Leu Tyr Val 65 70 75 80 Asp Gly Asp Cys Thr Met Asp Ile Arg Thr Lys Ser Gln Gly Gly Glu 85 90 95 Pro Thr Tyr Asn Val Ala Val Gly Arg Ala Gly Arg Val Leu Val Phe 100 105 110 Val Met Gly Lys Glu Gly Val His Gly Gly Gly Leu Asn Lys Lys Ala 115 120 125 Tyr Ser Met Ala Lys Tyr Leu Arg Asp Ser Gly Phe 130 135 140 <210> 4 <211> 420 <212> DNA <213> Human <400> 4 atggccggtt ggcagagcta cgtggataac ctgatgtgcg atggctgctg ccaggaggcc 60 gccattgtcg gctactgcga cgccaaatac gtctgggcag ccacggccgg gggcgtcttt 120 cagagcatta cgccaataga aatagatatg attgtaggaa aagaccggga aggtttcttt 180 accaacggtt tgactcttgg cgcgaagaaa tgctcagtga tcagagatag tctatacgtc 240 gatggtgact gcacaatgga catccggaca aagagtcaag gtggggagcc aacatacaat 300 gtggctgtcg gcagagctgg tagagtcttg gtctttgtaa tgggaaaaga aggggtccat 360 ggaggcggat tgaataagaa ggcatactca atggcaaaat acttgagaga ctctgggttc 420 <210> 5 <211> 130 <212> PRT <213> Human <400> 5 Met Ala Gly Trp Gln Ser Tyr Val Asp Asn Leu Met Cys Asp Gly Cys 5 10 15 Cys Gln Glu Ala Ala Ile Val Gly Tyr Cys Asp Ala Lys Tyr Val Trp 20 25 30 Ala Ala Thr Ala Gly Gly Val Phe Gln Ser Ile Thr Pro Ile Glu Ile 35 40 45 Asp Met Ile Val Gly Lys Asp Arg Glu Gly Phe Phe Thr Asn Gly Leu 50 55 60 Thr Leu Gly Ala Lys Lys Cys Ser Val Ile Arg Asp Ser Leu Tyr Val 65 70 75 80 Asp Gly Asp Cys Thr Met Asp Ile Arg Thr Lys Ser Gln Gly Gly Glu 85 90 95 Pro Thr Tyr Asn Val Ala Val Gly Arg Ala Gly Arg Val Leu Val Phe 100 105 110 Val Met Gly Lys Glu Gly Val His Gly Gly Gly Leu Asn Lys Lys Ala 115 120 125 Tyr Ser 130 <210> 6 <211> 140 <212> PRT <213> Human <400> 6 Met Ala Gly Trp Asn Ala Tyr Ile Asp Asn Leu Met Ala Asp Gly Thr 5 10 15 Cys Gln Asp Ala Ala Ile Val Gly Tyr Lys Asp Ser Pro Ser Val Trp 20 25 30 Ala Ala Val Pro Gly Lys Thr Phe Val Asn Ile Thr Pro Ala Glu Val 35 40 45 Gly Val Leu Val Gly Lys Asp Arg Ser Ser Phe Tyr Val Asn Gly Leu 50 55 60 Thr Leu Gly Gly Gln Lys Cys Ser Val Ile Arg Asp Ser Leu Leu Gln 65 70 75 80 Asp Gly Glu Phe Ser Met Asp Leu Arg Thr Lys Ser Thr Gly Gly Ala 85 90 95 Pro Thr Phe Asn Val Thr Val Thr Lys Thr Asp Lys Thr Leu Val Leu 100 105 110 Leu Met Gly Lys Glu Gly Val His Gly Gly Leu Ile Asn Lys Lys Cys 115 120 125 Tyr Glu Met Ala Ser His Leu Arg Arg Ser Gln Tyr 130 135 140 <210> 7 <211> 420 <212> DNA <213> Human <400> 7 atggccgggt ggaacgccta catcgacaac ctcatggcgg acgggacctg tcaggacgcg 60 gccatcgtgg gctacaagga ctcgccctcc gtctgggccg ccgtccccgg gaaaacgttc 120 gtcaacatca cgccagctga ggtgggtgtc ctggttggca aagaccggtc aagtttttac 180 gtgaatgggc tgacacttgg gggccagaaa tgttcggtga tccgggactc actgctgcag 240 gatggggaat ttagcatgga tcttcgtacc aagagcaccg gtggggcccc caccttcaat 300 gtcactgtca ccaagactga caagacgcta gtcctgctga tgggcaaaga aggtgtccac 360 ggtggtttga tcaacaagaa atgttatgaa atggcctccc accttcggcg ttcccagtac 420 <210> 8 <211> 140 <212> PRT <213> Human <400> 8 Met Ala Gly Trp Gln Ser Tyr Val Asp Asn Leu Met Cys Asp Gly Cys 5 10 15 Cys Gln Glu Ala Ala Ile Val Gly Tyr Cys Asp Ala Lys Tyr Val Trp 20 25 30 Ala Ala Thr Ala Gly Gly Val Phe Gln Ser Ile Thr Pro Ile Glu Ile 35 40 45 Asp Met Ile Val Gly Lys Asp Arg Glu Gly Phe Phe Thr Asn Gly Leu 50 55 60 Thr Leu Gly Ala Lys Lys Cys Ser Val Ile Arg Asp Ser Leu Tyr Val 65 70 75 80 Asp Gly Asp Cys Thr Met Asp Ile Arg Thr Lys Ser Gln Gly Gly Glu 85 90 95 Pro Thr Tyr Asn Val Ala Val Gly Arg Ala Gly Arg Ala Leu Val Ile 100 105 110 Val Met Gly Lys Glu Gly Val His Gly Gly Thr Leu Asn Lys Lys Ala 115 120 125 Tyr Glu Leu Ala Leu Tyr Leu Arg Arg Ser Asp Val 130 135 140 <210> 9 <211> 420 <212> DNA <213> Human <400> 9 atggccggtt ggcagagcta cgtggataac ctgatgtgcg atggctgctg ccaggaggcc 60 gccattgtcg gctactgcga cgccaaatac gtctgggcag ccacggccgg gggcgtcttt 120 cagagcatta cgccaataga aatagatatg attgtaggaa aagaccggga aggtttcttt 180 accaacggtt tgactcttgg cgcgaagaaa tgctcagtga tcagagatag tctatacgtc 240 gatggtgact gcacaatgga catccggaca aagagtcaag gtggggagcc aacatacaat 300 gtggctgtcg gcagagctgg tagagcattg gttatagtca tgggaaagga aggtgtccac 360 ggaggcacac ttaacaagaa agcatatgaa ctcgctttat acctgaggag gtctgatgtg 420 <210> 10 <211> 1190 <212> PRT <213> Human <400> 10 Met Ala Gly Gly Glu Asp Arg Gly Asp Gly Glu Pro Val Ser Val Val 5 10 15 Thr Val Arg Val Gln Tyr Leu Glu Asp Thr Asp Pro Phe Ala Cys Ala 20 25 30 Asn Phe Pro Glu Pro Arg Arg Ala Pro Thr Cys Ser Leu Asp Gly Ala 35 40 45 Leu Pro Leu Gly Ala Gln Ile Pro Ala Val His Arg Leu Leu Gly Ala 50 55 60 Pro Leu Lys Leu Glu Asp Cys Ala Leu Gln Val Ser Pro Ser Gly Tyr 65 70 75 80 Tyr Leu Asp Thr Glu Leu Ser Leu Glu Glu Gln Arg Glu Met Leu Glu 85 90 95 Gly Phe Tyr Glu Glu Ile Ser Lys Gly Arg Lys Pro Thr Leu Ile Leu 100 105 110 Arg Thr Gln Leu Ser Val Arg Val Asn Ala Ile Leu Glu Lys Leu Tyr 115 120 125 Ser Ser Ser Gly Pro Glu Leu Arg Arg Ser Leu Phe Ser Leu Lys Gln 130 135 140 Ile Phe Gln Glu Asp Lys Asp Leu Val Pro Glu Phe Val His Ser Glu 145 150 155 160 Gly Leu Ser Cys Leu Ile Arg Val Gly Ala Ala Ala Asp His Asn Tyr 165 170 175 Gln Ser Tyr Ile Leu Arg Ala Leu Gly Gln Leu Met Leu Phe Val Asp 180 185 190 Gly Met Leu Gly Val Val Ala His Ser Asp Thr Ile Gln Trp Leu Tyr 195 200 205 Thr Leu Cys Ala Ser Leu Ser Arg Leu Val Val Lys Thr Ala Leu Lys 210 215 220 Leu Leu Leu Val Phe Val Glu Tyr Ser Glu Asn Asn Ala Pro Leu Phe 225 230 235 240 Ile Arg Ala Val Asn Ser Val Ala Ser Thr Thr Gly Ala Pro Pro Trp 245 250 255 Ala Asn Leu Val Ser Ile Leu Glu Glu Lys Asn Gly Ala Asp Pro Glu 260 265 270 Leu Leu Val Tyr Thr Val Thr Leu Ile Asn Lys Thr Leu Ala Ala Leu 275 280 285 Pro Asp Gln Asp Ser Phe Tyr Asp Val Thr Asp Ala Leu Glu Gln Gln 290 295 300 Gly Met Glu Ala Leu Val Gln Arg His Leu Gly Thr Ala Gly Thr Asp 305 310 315 320 Val Asp Leu Arg Thr Gln Leu Val Leu Tyr Glu Asn Ala Leu Lys Leu 325 330 335 Glu Asp Gly Asp Ile Glu Glu Ala Pro Gly Ala Gly Gly Arg Arg Glu 340 345 350 Arg Arg Lys Pro Ser Ser Glu Glu Gly Lys Arg Ser Arg Arg Ser Leu 355 360 365 Glu Gly Gly Gly Cys Pro Ala Arg Ala Pro Glu Pro Gly Pro Thr Gly 370 375 380 Pro Ala Ser Pro Val Gly Pro Thr Ser Ser Thr Gly Pro Ala Leu Leu 385 390 395 400 Thr Gly Pro Ala Ser Ser Pro Val Gly Pro Pro Ser Gly Leu Gln Ala 405 410 415 Ser Val Asn Leu Phe Pro Thr Ile Ser Val Ala Pro Ser Ala Asp Thr 420 425 430 Ser Ser Glu Arg Ser Ile Tyr Lys Leu His Gln Thr Ala Ser Val Trp 435 440 445 Ala Pro Glu Ser Pro Pro Val Pro Gln Ser Pro Pro Gly Gln Ala Arg 450 455 460 Leu Glu Ala Arg Phe Leu Glu Asn Val Ala Ala Ala Glu Thr Glu Lys 465 470 475 480 Gln Val Ala Leu Ala Gln Gly Arg Ala Glu Thr Leu Ala Gly Ala Met 485 490 495 Pro Asn Glu Ala Gly Gly His Pro Asp Ala Arg Gln Leu Trp Asp Ser 500 505 510 Pro Glu Thr Ala Pro Ala Ala Arg Thr Pro Gln Ser Pro Ala Pro Cys 515 520 525 Val Leu Leu Arg Ala Gln Arg Ser Leu Ala Pro Glu Pro Lys Glu Pro 530 535 540 Leu Ile Pro Ala Ser Pro Lys Ala Glu Pro Ile Trp Glu Leu Pro Thr 545 550 555 560 Arg Ala Pro Arg Leu Ser Ile Gly Asp Leu Asp Phe Ser Asp Leu Gly 565 570 575 Glu Asp Glu Asp Gln Asp Met Leu Asn Val Glu Ser Val Glu Ala Gly 580 585 590 Lys Asp Ile Pro Ala Pro Ser Pro Pro Leu Pro Leu Leu Ser Gly Val 595 600 605 Pro Pro Pro Pro Pro Leu Pro Pro Pro Pro Pro Ile Lys Gly Pro Phe 610 615 620 Pro Pro Pro Pro Pro Leu Pro Leu Ala Ala Pro Leu Pro His Ser Val 625 630 635 640 Pro Asp Ser Ser Ala Leu Pro Thr Lys Arg Lys Thr Val Lys Leu Phe 645 650 655 Trp Arg Glu Leu Lys Leu Ala Gly Gly His Gly Val Ser Ala Ser Arg 660 665 670 Phe Gly Pro Cys Ala Thr Leu Trp Ala Ser Leu Asp Pro Val Ser Val 675 680 685 Asp Thr Ala Arg Leu Glu His Leu Phe Glu Ser Arg Ala Lys Glu Val 690 695 700 Leu Pro Ser Lys Lys Ala Gly Glu Gly Arg Arg Thr Met Thr Thr Val 705 710 715 720 Leu Asp Pro Lys Arg Ser Asn Ala Ile Asn Ile Gly Leu Thr Thr Leu 725 730 735 Pro Pro Val His Val Ile Lys Ala Ala Leu Leu Asn Phe Asp Glu Phe 740 745 750 Ala Val Ser Lys Asp Gly Ile Glu Lys Leu Leu Thr Met Met Pro Thr 755 760 765 Glu Glu Glu Arg Gln Lys Ile Glu Glu Ala Gln Leu Ala Asn Pro Asp 770 775 780 Ile Pro Leu Gly Pro Ala Glu Asn Phe Leu Met Thr Leu Ala Ser Ile 785 790 795 800 Gly Gly Leu Ala Ala Arg Leu Gln Leu Trp Ala Phe Lys Leu Asp Tyr 805 810 815 Asp Ser Met Glu Arg Glu Ile Ala Glu Pro Leu Phe Asp Leu Lys Val 820 825 830 Gly Met Glu Gln Leu Val Gln Asn Ala Thr Phe Arg Cys Ile Leu Ala 835 840 845 Thr Leu Leu Ala Val Gly Asn Phe Leu Asn Gly Ser Gln Ser Ser Gly 850 855 860 Phe Glu Leu Ser Tyr Leu Glu Lys Val Ser Glu Val Lys Asp Thr Val 865 870 875 880 Arg Arg Gln Ser Leu Leu His His Leu Cys Ser Leu Val Leu Gln Thr 885 890 895 Arg Pro Glu Ser Ser Asp Leu Tyr Ser Glu Ile Pro Ala Leu Thr Arg 900 905 910 Cys Ala Lys Val Asp Phe Glu Gln Leu Thr Glu Asn Leu Gly Gln Leu 915 920 925 Glu Arg Arg Ser Arg Ala Ala Glu Glu Ser Leu Arg Ser Leu Ala Lys 930 935 940 His Glu Leu Ala Pro Ala Leu Arg Ala Arg Leu Thr His Phe Leu Asp 945 950 955 960 Gln Cys Ala Arg Arg Val Ala Met Leu Arg Ile Val His Arg Arg Val 965 970 975 Cys Asn Arg Phe His Ala Phe Leu Leu Tyr Leu Gly Tyr Thr Pro Gln 980 985 990 Ala Ala Arg Glu Val Arg Ile Met Gln Phe Cys His Thr Leu Arg Glu 995 1000 1005 Phe Ala Leu Glu Tyr Arg Thr Cys Arg Glu Arg Val Leu Gln Gln Gln 1010 1015 1020 Gln Lys Gln Ala Thr Tyr Arg Glu Arg Asn Lys Thr Arg Gly Arg Met 1025 1030 1035 1040 Ile Thr Glu Thr Glu Lys Phe Ser Gly Val Ala Gly Glu Ala Pro Ser 1045 1050 1055 Asn Pro Ser Val Pro Val Ala Val Ser Ser Gly Pro Gly Arg Gly Asp 1060 1065 1070 Ala Asp Ser His Ala Ser Met Lys Ser Leu Leu Thr Ser Arg Pro Glu 1075 1080 1085 Asp Thr Thr His Asn Arg Arg Ser Arg Gly Met Val Gln Ser Ser Ser 1090 1095 1100 Pro Ile Met Pro Thr Val Gly Pro Ser Thr Ala Ser Pro Glu Glu Pro 1105 1110 1115 1120 Pro Gly Ser Ser Leu Pro Ser Asp Thr Ser Asp Glu Ile Met Asp Leu 1125 1130 1135 Leu Val Gln Ser Val Thr Lys Ser Ser Pro Arg Ala Leu Ala Ala Arg 1140 1145 1150 Glu Arg Lys Arg Ser Arg Gly Asn Arg Lys Ser Leu Arg Arg Thr Leu 1155 1160 1165 Lys Ser Gly Leu Gly Asp Asp Leu Val Gln Ala Leu Gly Leu Ser Lys 1170 1175 1180 Gly Pro Gly Leu Glu Val 1185 1190 <210> 11 <211> 3570 <212> DNA <213> Human <400> 11 atggcgggcg gggaagaccg cggggacgga gagccggtat cagtggtgac cgtgagggtg 60 cagtacctgg aagacaccga ccccttcgca tgtgccaact ttccggagcc gcgccgggcc 120 cccacctgca gcctggacgg ggcgctgccc ttgggcgcgc agatacccgc ggtgcaccgc 180 ctgctgggag cgccgctcaa gttggaggat tgtgctctgc aagtgtctcc ctccggatac 240 tacctggaca ccgagctgtc cctggaagag cagcgggaga tgctggaggg cttctatgaa 300 gagatcagca aagggcggaa gcccacgctg atccttcgga cccagctctc tgtgagggtc 360 aacgctatct tggaaaagct gtatagctcc agtggtcctg agctccgccg ctccctcttc 420 tcactgaagc agatcttcca ggaggacaaa gacctggtgc ctgaatttgt gcattcagag 480 gggctgagct gcctgatccg tgtgggtgct gctgccgacc acaactacca gagctacatc 540 cttagagcgc tcggccagct gatgctcttt gtggatggaa tgctgggggt ggtggcccac 600 agtgacacta ttcagtggct gtacacattg tgtgccagcc tgtcccgctt ggtggtgaag 660 acagccctga agctgctgtt ggtgtttgta gaatactccg aaaacaacgc accgctgttc 720 atccgtgcag tgaactctgt ggccagcacc accggtgctc ctccctgggc caatctggtg 780 tccatcctgg aggagaagaa tggcgctgac cctgagttgt tggtgtacac ggtcaccctc 840 atcaacaaga cgctggcggc gctcccggac caggactcct tctacgatgt gacggatgca 900 ctggagcagc agggcatgga agcgctggtc cagcgccacc tgggcactgc gggcactgac 960 gtcgacctgc gcacgcagct tgtgctctac gagaacgccc tgaaattgga ggatggagac 1020 atcgaagaag ccccaggcgc tggtgggcgg cgggaacgac gaaagccttc ttctgaggag 1080 ggcaagagga gccgccgttc tctggaaggc gggggctgcc ccgcgcgtgc cccggaacct 1140 ggccccacag gccccgcctc accggtaggc cccacctctt ccaccggccc cgccctgctg 1200 acaggccccg cctccagccc tgtgggccct ccctccggtc tccaagcttc agtgaacctt 1260 tttcctacca tctctgtggc accctcagct gacacctcca gcgagaggag catctacaaa 1320 cttcaccaaa ctgcttccgt ttgggcccct gagagcccac ccgtccccca gtcccctcct 1380 gggcaggcca ggctggaagc ccggttcctg gagaatgtgg cggcagcaga aacagagaag 1440 caggttgcgc tggcccaggg ccgggcagag acacttgccg gggccatgcc caatgaggcg 1500 ggtggacacc cagatgcccg gcaactctgg gactccccag agacagcccc tgcagccaga 1560 acaccccaga gccctgcccc ctgtgtcctg ctccgggccc agcgaagcct tgcaccagag 1620 cccaaggagc cactgatacc agcaagcccc aaggctgagc ccatctggga gctccctacc 1680 cgtgcaccca ggctctctat tggggacctg gacttttcag atctagggga ggatgaagac 1740 caggacatgc tgaatgtaga gtctgtggag gctgggaaag acatcccagc tccctcaccc 1800 ccactgcccc tgctctcggg agtacccccc cctcccccac ttccacctcc cccacccatc 1860 aaaggcccct tcccaccacc tccacctcta cctctggctg cccctcttcc ccattcagtg 1920 cctgacagct cagccctccc cactaagagg aagacagtaa aacttttctg gcgtgagctg 1980 aagctggctg ggggccatgg agtctctgca agccgctttg ggccctgcgc caccctctgg 2040 gcttcactgg accctgtctc agtggacacg gcccgactgg aacacctctt tgagtctcgt 2100 gccaaagagg tgctgccctc caagaaagct ggagagggcc gccggacaat gaccacagtg 2160 ctggacccca agcgcagcaa cgccatcaac atcggcctaa ccacactgcc acctgtgcat 2220 gtcattaagg ctgctctgct caactttgat gagtttgctg tcagcaagga tggcattgag 2280 aagctactga ccatgatgcc cacggaggaa gagcggcaga agattgagga agcccagctg 2340 gccaaccctg acatacccct gggcccagcc gagaacttcc tgatgactct tgcctccatt 2400 ggcggcctcg ctgctcgtct acaactctgg gccttcaagc tggactatga cagcatggag 2460 cgggaaattg ctgagccact gtttgacctg aaagtgggta tggaacagct ggtacagaat 2520 gccaccttcc gctgcatcct ggctaccctc ctagcggtgg gcaacttcct caatggctcc 2580 cagagcagcg gctttgagct gagctacctg gagaaggtgt cagaggtgaa ggacacggtg 2640 cgtcgacagt cactgctaca ccatctctgc tccctagtgc tccagacccg gcctgagtcc 2700 tctgacctct attcagaaat ccctgccctg acccgctgtg ccaaggtgga ctttgaacag 2760 ctgactgaga acctggggca gctggagcgc cggagccggg cagccgagga gagcctgcgg 2820 agcttggcca agcatgagct ggccccagcc ctgcgtgccc gcctcaccca cttcctggac 2880 cagtgtgccc gccgtgttgc catgctaagg atagtgcacc gccgtgtctg caataggttc 2940 catgccttcc tgctctacct gggctacacc ccgcaggcgg cccgtgaagt gcgcatcatg 3000 cagttctgcc acacgctgcg ggaatttgcg cttgagtatc ggacttgccg ggaacgagtg 3060 ctacagcagc agcagaagca ggccacatac cgtgagcgca acaagacccg gggacgcatg 3120 atcaccgaga cagagaagtt ctcaggtgtg gctggggaag cccccagcaa cccctctgtc 3180 ccagtagcag tgagcagcgg gccaggccgg ggagatgctg acagtcatgc tagtatgaag 3240 agtctgctga ccagcaggcc tgaggacacc acacacaatc gccgcagcag aggcatggtc 3300 cagagcagct ccccaatcat gcccacagtg gggccctcca ctgcatcccc agaagaaccc 3360 ccaggctcca gtttacccag tgatacatca gatgagatca tggaccttct ggtgcagtca 3420 gtgaccaaga gcagtcctcg tgccttagct gctagggaac gcaagcgttc ccgcggcaac 3480 cgcaagtctt tgagaaggac gttgaagagt gggctcggag atgacctggt gcaggcactg 3540 ggactaagca agggtcctgg cctggaggtg 3570 <210> 12 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 12 atggccggtt ggcagagcta cgtggat 27 <210> 13 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 13 ttacacatca gacctcctca ggtataaagc 30 <210> 14 <211> 671 <212> PRT <213> Human <400> 14 Met Ala Gly Gly Glu Asp Arg Gly Asp Gly Glu Pro Val Ser Val Val 5 10 15 Thr Val Arg Val Gln Tyr Leu Glu Asp Thr Asp Pro Phe Ala Cys Ala 20 25 30 Asn Phe Pro Glu Pro Arg Arg Ala Pro Thr Cys Ser Leu Asp Gly Ala 35 40 45 Leu Pro Leu Gly Ala Gln Ile Pro Ala Val His Arg Leu Leu Gly Ala 50 55 60 Pro Leu Lys Leu Glu Asp Cys Ala Leu Gln Val Ser Pro Ser Gly Tyr 65 70 75 80 Tyr Leu Asp Thr Glu Leu Ser Leu Glu Glu Gln Arg Glu Met Leu Glu 85 90 95 Gly Phe Tyr Glu Glu Ile Ser Lys Gly Arg Lys Pro Thr Leu Ile Leu 100 105 110 Arg Thr Gln Leu Ser Val Arg Val Asn Ala Ile Leu Glu Lys Leu Tyr 115 120 125 Ser Ser Ser Gly Pro Glu Leu Arg Arg Ser Leu Phe Ser Leu Lys Gln 130 135 140 Ile Phe Gln Glu Asp Lys Asp Leu Val Pro Glu Phe Val His Ser Glu 145 150 155 160 Gly Leu Ser Cys Leu Ile Arg Val Gly Ala Ala Ala Asp His Asn Tyr 165 170 175 Gln Ser Tyr Ile Leu Arg Ala Leu Gly Gln Leu Met Leu Phe Val Asp 180 185 190 Gly Met Leu Gly Val Val Ala His Ser Asp Thr Ile Gln Trp Leu Tyr 195 200 205 Thr Leu Cys Ala Ser Leu Ser Arg Leu Val Val Lys Thr Ala Leu Lys 210 215 220 Leu Leu Leu Val Phe Val Glu Tyr Ser Glu Asn Asn Ala Pro Leu Phe 225 230 235 240 Ile Arg Ala Val Asn Ser Val Ala Ser Thr Thr Gly Ala Pro Pro Trp 245 250 255 Ala Asn Leu Val Ser Ile Leu Glu Glu Lys Asn Gly Ala Asp Pro Glu 260 265 270 Leu Leu Val Tyr Thr Val Thr Leu Ile Asn Lys Thr Leu Ala Ala Leu 275 280 285 Pro Asp Gln Asp Ser Phe Tyr Asp Val Thr Asp Ala Leu Glu Gln Gln 290 295 300 Gly Met Glu Ala Leu Val Gln Arg His Leu Gly Thr Ala Gly Thr Asp 305 310 315 320 Val Asp Leu Arg Thr Gln Leu Val Leu Tyr Glu Asn Ala Leu Lys Leu 325 330 335 Glu Asp Gly Asp Ile Glu Glu Ala Pro Gly Ala Gly Gly Arg Arg Glu 340 345 350 Arg Arg Lys Pro Ser Ser Glu Glu Gly Lys Arg Ser Arg Arg Ser Leu 355 360 365 Glu Gly Gly Gly Cys Pro Ala Arg Ala Pro Glu Pro Gly Pro Thr Gly 370 375 380 Pro Ala Ser Pro Val Gly Pro Thr Ser Ser Thr Gly Pro Ala Leu Leu 385 390 395 400 Thr Gly Pro Ala Ser Ser Pro Val Gly Pro Pro Ser Gly Leu Gln Ala 405 410 415 Ser Val Asn Leu Phe Pro Thr Ile Ser Val Ala Pro Ser Ala Asp Thr 420 425 430 Ser Ser Glu Arg Ser Ile Tyr Lys Leu His Gln Thr Ala Ser Val Trp 435 440 445 Ala Pro Glu Ser Pro Pro Val Pro Gln Ser Pro Pro Gly Gln Ala Arg 450 455 460 Leu Glu Ala Arg Phe Leu Glu Asn Val Ala Ala Ala Glu Thr Glu Lys 465 470 475 480 Gln Val Ala Leu Ala Gln Gly Arg Ala Glu Thr Leu Ala Gly Ala Met 485 490 495 Pro Asn Glu Ala Gly Gly His Pro Asp Ala Arg Gln Leu Trp Asp Ser 500 505 510 Pro Glu Thr Ala Pro Ala Ala Arg Thr Pro Gln Ser Pro Ala Pro Cys 515 520 525 Val Leu Leu Arg Ala Gln Arg Ser Leu Ala Pro Glu Pro Lys Glu Pro 530 535 540 Leu Ile Pro Ala Ser Pro Lys Ala Glu Pro Ile Trp Glu Leu Pro Thr 545 550 555 560 Arg Ala Pro Arg Leu Ser Ile Gly Asp Leu Asp Phe Ser Asp Leu Gly 565 570 575 Glu Asp Glu Asp Gln Asp Met Leu Asn Val Glu Ser Val Glu Ala Gly 580 585 590 Lys Asp Ile Pro Ala Pro Ser Pro Pro Leu Pro Leu Leu Ser Gly Val 595 600 605 Pro Pro Pro Pro Pro Leu Pro Pro Pro Pro Pro Ile Lys Gly Pro Phe 610 615 620 Pro Pro Pro Pro Pro Leu Pro Leu Ala Ala Pro Leu Pro His Ser Val 625 630 635 640 Pro Asp Ser Ser Ala Leu Pro Thr Lys Arg Lys Thr Val Lys Leu Phe 645 650 655 Trp Arg Glu Leu Lys Leu Ala Gly Gly His 660 670 671 <210> 15 <211> 84 <212> DNA <213> Human <400> 15 gtgagaggtc ttggtgagca tgagatggat gaggatgaag aggattatga gtcatctgcc 60 aagctgctgg gcatgtcctt catg 84 <210> 16 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 16 tgagccggcc gcagagccat gg 22 <210> 17 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 17 tgctccgtgc gttcaaggag ctcac 25 <210> 18 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 18 cctaccatct ctgtggcacc ctcagct 27 <210> 19 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 19 ttggggcttg ctggtatcag tggctcc 27 <210> 20 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 20 ctatgagtat gccttcttat tcaatcc 27 <210> 21 <211> 10 <212> PRT <213> Human <400> 21 Met Ala Lys Tyr Leu Arg Asp Ser Gly Phe 5 10
【図１】プロフィリンＩＩＬの塩基配列ならびに予想さ
れるアミノ酸配列を示す（図２に続く）。
れるアミノ酸配列を示す（図２に続く）。
【図２】プロフィリンＩＩＬの塩基配列ならびに予想さ
れるアミノ酸配列を示す（図１の続き）。
れるアミノ酸配列を示す（図１の続き）。
【図３】プロフィリンＩ（ＰＦＮＩ）、プロフィリンＩ
Ｉ（ＰＦＮＩＩ）とプロフィリンＩＩＬ（ＰＦＮＩＩ
Ｌ）のアミノ酸配列を比較した図を示す。ボックスで囲
まれた部分は２つ以上の配列で一致したアミノ酸残基を
示す。
Ｉ（ＰＦＮＩＩ）とプロフィリンＩＩＬ（ＰＦＮＩＩ
Ｌ）のアミノ酸配列を比較した図を示す。ボックスで囲
まれた部分は２つ以上の配列で一致したアミノ酸残基を
示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｋ 48/00 ４Ｃ０８６ 48/00 Ａ６１Ｐ 3/08 ４Ｃ０８７ Ａ６１Ｐ 3/08 3/10 ４Ｈ０４５ 3/10 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 1/68 33/53 Ｄ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/53 Ａ６１Ｋ 37/43 Ｆターム(参考） 2G045 AA34 AA35 DA13 DA36 FB02 FB03 4B024 AA01 BA80 CA04 DA06 DA12 HA11 HA17 4B063 QA18 QA19 QQ08 QQ43 QQ79 QR32 QR48 QR62 QR77 QS25 QS34 QX01 QX02 4C084 AA02 AA13 AA17 BA01 BA08 BA22 BA23 CA18 DB36 NA14 ZC032 ZC202 ZC351 ZC352 4C085 AA13 BB11 CC03 DD62 4C086 AA01 AA02 EA16 MA01 MA04 NA14 ZC03 ZC20 ZC35 4C087 BC83 CA12 NA14 ZC03 ZC20 ZC35 4H045 AA10 AA20 AA30 BA10 CA40 EA27 EA50 FA74
Claims (29)
- 【請求項１】 配列番号：３で表されるアミノ酸配列と
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
ンパク質もしくはその塩、または配列番号：３で表され
るアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸
配列を含有するタンパク質の部分ペプチドもしくはその
アミドもしくはそのエステルまたはその塩を用いること
を特徴とする、配列番号：３で表されるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質もしくはその塩、または配列番号：３で表さ
れるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ
酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドもしくはそ
のアミドもしくはそのエステルまたはその塩と配列番
号：１０で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的
に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはそ
の塩、または配列番号：１０で表されるアミノ酸配列と
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
ンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそ
のエステルまたはその塩との結合を阻害する化合物また
はその塩のスクリーニング方法。 - 【請求項２】 配列番号：３で表されるアミノ酸配列と
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
ンパク質の部分ペプチドが、配列番号：２１で表される
アミノ酸配列を含有するペプチドである請求項１記載の
スクリーニング方法。 - 【請求項３】 配列番号：３で表されるアミノ酸配列と
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
ンパク質または配列番号：３で表されるアミノ酸配列と
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
ンパク質の部分ペプチドを産生する能力を有する細胞を
用いることを特徴とする、配列番号：３で表されるア
ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列
を含有するタンパク質もしくはその塩、または配列番
号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチ
ドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその
塩と配列番号：１０で表されるアミノ酸配列と同一も
しくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク
質もしくはその塩、または配列番号：１０で表されるア
ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列
を含有するタンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミ
ドもしくはそのエステルまたはその塩との結合を阻害す
る化合物またはその塩のスクリーニング方法。 - 【請求項４】 配列番号：３で表されるアミノ酸配列と
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
ンパク質の部分ペプチドが、配列番号：２１で表される
アミノ酸配列を含有するペプチドである請求項３記載の
スクリーニング方法。 - 【請求項５】 高血糖症、糖尿病または低血糖症の予防
・治療用化合物を探索するための請求項１から４のいず
れかに記載のスクリーニング方法。 - 【請求項６】 配列番号：３で表されるアミノ酸配列と
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
ンパク質もしくはその塩、または配列番号：３で表され
るアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸
配列を含有するタンパク質の部分ペプチドもしくはその
アミドもしくはそのエステルまたはその塩を含有する、
配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは
実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もし
くはその塩、または配列番号：３で表されるアミノ酸配
列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有す
るタンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミドもしく
はそのエステルまたはその塩と配列番号：１０で表さ
れるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ
酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、または配
列番号：１０で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実
質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分
ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまた
はその塩との結合を阻害する化合物またはその塩のスク
リーニング用キット。 - 【請求項７】 配列番号：３で表されるアミノ酸配列と
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
ンパク質の部分ペプチドが、配列番号：２１で表される
アミノ酸配列を含有するペプチドである請求項６記載の
スクリーニング用キット。 - 【請求項８】 配列番号：３で表されるアミノ酸配列と
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
ンパク質または配列番号：３で表されるアミノ酸配列と
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
ンパク質の部分ペプチドを産生する能力を有する細胞を
含有する、配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同
一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン
パク質もしくはその塩、または配列番号：３で表される
アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配
列を含有するタンパク質の部分ペプチドもしくはそのア
ミドもしくはそのエステルまたはその塩と配列番号：
１０で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同
一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその
塩、または配列番号：１０で表されるアミノ酸配列と同
一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタン
パク質の部分ペプチドもしくはそのアミドもしくはその
エステルまたはその塩との結合を阻害する化合物または
その塩のスクリーニング用キット。 - 【請求項９】 配列番号：３で表されるアミノ酸配列と
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
ンパク質の部分ペプチドが、配列番号：２１で表される
アミノ酸配列を含有するペプチドである請求項８記載の
スクリーニング用キット。 - 【請求項１０】 請求項１ないし４記載のスクリーニン
グ方法または請求項６ないし９記載のスクリーニング用
キットを用いて得られうる、配列番号：３で表される
アミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配
列を含有するタンパク質もしくはその塩、または配列番
号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチ
ドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその
塩と配列番号：１０で表されるアミノ酸配列と同一も
しくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク
質もしくはその塩、または配列番号：１０で表されるア
ミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列
を含有するタンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミ
ドもしくはそのエステルまたはその塩との結合を阻害す
る化合物またはその塩。 - 【請求項１１】 配列番号：３で表されるアミノ酸配
列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有す
るタンパク質もしくはその塩、または配列番号：３で表
されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ
ノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドもしくは
そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩と配列
番号：１０で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質
的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質もしくは
その塩、または配列番号：１０で表されるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミドもしくは
そのエステルまたはその塩との結合を阻害する化合物ま
たはその塩。 - 【請求項１２】 請求項１０または請求項１１記載の化
合物またはその塩を含有してなる医薬。 - 【請求項１３】 請求項１０または請求項１１記載の化
合物またはその塩を含有してなる高血糖症または糖尿病
の予防・治療剤。 - 【請求項１４】 配列番号：３で表されるアミノ酸配
列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有す
るタンパク質もしくはその塩、または配列番号：３で表
されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ
ノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドもしくは
そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩、または
配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは
実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質をコ
ードするＤＮＡまたは配列番号：３で表されるアミノ酸
配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有
するタンパク質の部分ペプチドをコードするＤＮＡを含
有してなる医薬。 - 【請求項１５】 低血糖症の予防・治療剤である請求項
１４記載の医薬。 - 【請求項１６】 配列番号：３で表されるアミノ酸配
列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有す
るタンパク質もしくはその塩、または配列番号：３で表
されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ
ノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドもしくは
そのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対する
抗体、または配列番号：３で表されるアミノ酸配列と
同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタ
ンパク質をコードするＤＮＡまたは配列番号：３で表さ
れるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ
酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドをコードす
るＤＮＡに相補的または実質的に相補的なＤＮＡを含有
するアンチセンスＤＮＡを含有してなる医薬。 - 【請求項１７】 高血糖症または糖尿病の予防・治療剤
である請求項１６記載の医薬。 - 【請求項１８】 配列番号：３で表されるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含有するポ
リヌクレオチドまたは配列番号：３で表されるアミノ酸
配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有
するタンパク質の部分ペプチドをコードするポリヌクレ
オチドを含有するポリヌクレオチドを含有することを特
徴とする高血糖症、糖尿病または低血糖症の診断剤。 - 【請求項１９】 配列番号：３で表されるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含有するポ
リヌクレオチドまたは配列番号：３で表されるアミノ酸
配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有
するタンパク質の部分ペプチドをコードするポリヌクレ
オチドを含有するポリヌクレオチドを用いることを特徴
とする高血糖症、糖尿病または低血糖症の診断方法。 - 【請求項２０】 配列番号：３で表されるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質もしくはその塩に対する抗体、または配列番
号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチ
ドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその
塩に対する抗体を含有することを特徴とする高血糖症、
糖尿病または低血糖症の診断剤。 - 【請求項２１】 配列番号：３で表されるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質もしくはその塩に対する抗体、または配列番
号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に
同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチ
ドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたはその
塩に対する抗体を用いることを特徴とする高血糖症、糖
尿病または低血糖症の診断方法。 - 【請求項２２】 高血糖症または糖尿病の予防・治療剤
をスクリーニングするための配列番号：２１で表される
アミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩また
は配列番号：２１で表されるアミノ酸配列を含有するペ
プチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルまたは
その塩の使用。 - 【請求項２３】 哺乳動物に対して請求項１０または１
１記載の化合物またはその塩の有効量を投与することを
特徴とする高血糖症または糖尿病の予防・治療法。 - 【請求項２４】 哺乳動物に対して、配列番号：３で
表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のア
ミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、また
は配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは
実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部
分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルま
たはその塩、または配列番号：３で表されるアミノ酸
配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有
するタンパク質をコードするＤＮＡまたは配列番号：３
で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一の
アミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドをコ
ードするＤＮＡの有効量を投与することを特徴とする低
血糖症の予防・治療法。 - 【請求項２５】 哺乳動物に対して、配列番号：３で
表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のア
ミノ酸配列を含有するタンパク質もしくはその塩、また
は配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは
実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部
分ペプチドもしくはそのアミドもしくはそのエステルま
たはその塩に対する抗体、または配列番号：３で表さ
れるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ
酸配列を含有するタンパク質をコードするＤＮＡまたは
配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実
質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質の部分
ペプチドをコードするＤＮＡに相補的または実質的に相
補的なＤＮＡを含有するアンチセンスＤＮＡの有効量を
投与することを特徴とする高血糖症または糖尿病の予防
・治療法。 - 【請求項２６】 高血糖症または糖尿病の予防・治療剤
を製造するための請求項１０または１１記載の化合物ま
たはその塩の使用。 - 【請求項２７】 低血糖の予防・治療剤を製造するため
の、配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一もし
くは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク質
もしくはその塩、または配列番号：３で表されるアミノ
酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含
有するタンパク質の部分ペプチドもしくはそのアミドも
しくはそのエステルまたはその塩、または配列番号：
３で表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一
のアミノ酸配列を含有するタンパク質をコードするＤＮ
Ａまたは配列番号：３で表されるアミノ酸配列と同一も
しくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有するタンパク
質の部分ペプチドをコードするＤＮＡの使用。 - 【請求項２８】 高血糖症または糖尿病の予防・治療剤
を製造するための、配列番号：３で表されるアミノ酸
配列と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有
するタンパク質もしくはその塩、または配列番号：３で
表されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のア
ミノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドもしく
はそのアミドもしくはそのエステルまたはその塩に対す
る抗体、または配列番号：３で表されるアミノ酸配列
と同一もしくは実質的に同一のアミノ酸配列を含有する
タンパク質をコードするＤＮＡまたは配列番号：３で表
されるアミノ酸配列と同一もしくは実質的に同一のアミ
ノ酸配列を含有するタンパク質の部分ペプチドをコード
するＤＮＡに相補的または実質的に相補的なＤＮＡを含
有するアンチセンスＤＮＡの使用。 - 【請求項２９】 配列番号：２１で表されるアミノ酸配
列を含有するタンパク質、ペプチドもしくはそのアミド
もしくはそのエステルまたはその塩（但し、配列番号：
３で表されるアミノ酸配列を含有するタンパク質または
その塩を除く）。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001362534A JP2002365287A (ja) | 2000-11-29 | 2001-11-28 | 糖尿病治療薬のスクリーニング方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000363187 | 2000-11-29 | ||
| JP2000-363187 | 2000-11-29 | ||
| JP2001362534A JP2002365287A (ja) | 2000-11-29 | 2001-11-28 | 糖尿病治療薬のスクリーニング方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002365287A true JP2002365287A (ja) | 2002-12-18 |
Family
ID=26604837
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001362534A Withdrawn JP2002365287A (ja) | 2000-11-29 | 2001-11-28 | 糖尿病治療薬のスクリーニング方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2002365287A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011526689A (ja) * | 2008-07-04 | 2011-10-13 | ユニヴェルシテ ジョセフ フーリエ | 診断及び予後の方法を実施するためのｉｒａｐタンパク質の使用 |
-
2001
- 2001-11-28 JP JP2001362534A patent/JP2002365287A/ja not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011526689A (ja) * | 2008-07-04 | 2011-10-13 | ユニヴェルシテ ジョセフ フーリエ | 診断及び予後の方法を実施するためのｉｒａｐタンパク質の使用 |
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