EA002365B1

EA002365B1 - Комбинация ингибитора альдозоредуктазы и ингибитора гликогенфосфорилазы

Info

Publication number: EA002365B1
Application number: EA200000433A
Authority: EA
Inventors: Банавара Лэкшмэн Майлари; Деннис Джей Хувер; Бернард Хьюлин; Джудит Ли Тредуэй
Original assignee: Пфайзер Продактс Инк.
Priority date: 1997-11-21
Filing date: 1998-11-02
Publication date: 2002-04-25
Also published as: TNSN98211A1; DE69801680D1; EP1032424B9; PT1032424E; TR200001451T2; SK7222000A3; DZ2656A1; PE135399A1; CN1279617A; ZA9810636B; GT199800166A; KR20010032300A; AR016423A1; DE69801680T2; KR100661214B1; IL135713A0; ES2161548T3; IS5453A; WO1999026659A1; MA26568A1

Abstract

Композиции фармацевтической комбинации и способы, включающие в себя ингибиторы альдозоредуктазы и ингибиторы гликогенфосфорилазы. Композиции и способы полезны для лечения инсулинрезистентных состояний, таких как диабет, и для снижения тканевого поражения вследствие ишемии.

Description

Это изобретение относится к фармацевтической комбинации ингибитора альдозоредуктазы и ингибитора гликогенфосфорилазы, к наборам, содержащим такие комбинации, и к применению таких комбинаций для лечения диабета, гипергликемии, гиперхолестеринемии, гипертензии, гиперинсулинемии, гиперлипемии, атеросклероза и тканевой ишемии у млекопитающих.

Несмотря на давнее открытие инсулина и его последующее широкое использование для лечения диабета, а также более позднее открытие и использование сульфонилмочевин (например СЫогргорашМе™ (РЫ/ег),

То1Ьи1аш1бе™ (ϋρ]οΕη), Асе1оЕехаш1бе™ (Ε.Ι. БШу), Ток/ашМе™ (ир]ойи)), бигуанидов (например, РЕепкогшш™ (С1Ьа Ое1§у), МеЙогшт™ (О. Ό. 8еаг1е)), ингибиторов альфа-глюкозидазы (например Ргесозе™ (Вауег)) и сенсибилизаторов инсулина (например Ке/ийп™ (Рагке Эау18)) в качестве пероральных гипогликемических агентов, необходимость в лечении диабета сохраняется. Использование инсулина, необходимого примерно 10% больных диабетом, для которых синтетические гипогликемические агенты не являются эффективными (диабет I типа, инсулинзависимый сахарный диабет, ИЗД), требует введения, обычно путем самостоятельного инъецирования, многократных доз в течение суток. Для определения подходящей дозы инсулина необходимы частые измерения концентрации сахара в моче и крови. Введение избыточной дозы инсулина вызывает гипогликемию с эффектами, колеблющимися от средних отклонений от нормального содержания глюкозы в крови до комы и даже смертельного исхода. Лечение инсулинонезависимого сахарного диабета (диабета II типа, ИНЗД) обычно состоит в комбинации диеты, физических упражнений, пероральных агентов, например сульфонилмочевин, и в более серьезных случаях, инсулина. Однако имеющиеся в клиниках гипогликемические агенты могут давать другие побочные эффекты, ограничивающие их применение. Во всяком случае, когда один из таких агентов оказывается неэффективным для отдельного пациента, использование другого может принести успех. Совершенно очевидной является необходимость в гипогликемических агентах, которые давали бы меньше побочных эффектов, либо применение которых было бы успешным в тех случаях, когда другие агенты оказываются неэффективными.

Ингибиторы альдозоредуктазы составляют класс соединений, которые стали широко известны вследствие их использования для предотвращения и лечения состояний, являющихся результатом осложнений диабета, таких как диабетическая невропатия и нефропатия. Такие соединения хорошо известны специалистам и легко идентифицируются с помощью стандартных биологических тестов.

Например, соединение зополрестат, 3,4дигидро-4-оксо-3 - [[5-(трифторметил)-2-бензотиазолил] метил] -1 -фталазинуксусная кислота, известное, например, из часто упоминаемого патента США 4,939,140, принадлежащего Багзоп е! а1. (включенного здесь посредством ссылки), вместе с рядом подобных ему соединений находят применение в качестве ингибиторов альдозоредуктазы. Зополрестат имеет структуру:

и в качестве ингибитора альдозоредуктазы полезен при лечении упомянутых выше осложнений, вызванных сахарным диабетом.

Некоторые ингибиторы альдозоредуктазы предлагают использовать для снижения уровней липидов у млекопитающих, смотри, например, патент США 4,492,706 (включенный здесь посредством ссылки), принадлежащий Ка11а1запкасоп, и ЕР 0 310 931 А2 (ЕШу1 Согрогайоп).

Часто упоминаемый патент США 5,064,830 (включенный здесь посредством ссылки), принадлежащий Оошд, описывает применение некоторых оксофталазинилуксусных кислот, включая зополрестат, для снижения уровней мочевой кислоты в крови.

Часто упоминаемая заявка на патент США Ио 08/059,688 описывает применение некоторых ингибиторов альдозоредуктазы, включая зополрестат, для снижения уровней липидов в крови у людей. Отмечается, что терапевтическая применимость обусловлена лечением заболеваний, вызванных повышенным уровнем триглицеридов в крови; такие заболевания включают в себя сердечно-сосудистые расстройства, такие как тромбоз, артериосклероз, инфаркт миокарда и стенокардию.

Атеросклероз, заболевание артерий, признан главной причиной смертности в США и Западной Европе. Патологическая последовательность, приводящая к атеросклерозу и заболеваниям, связанным с окклюзией сердца, хорошо известна. Ранняя стадия этой последовательности заключается в образовании «жировых прожилок» в сонной, венечной и мозговой артериях и аорте. Места этих поражений окрашены в желтый цвет вследствие наличия липидных отложений, обнаруживаемых в основном внутри клеток гладких мышц и в макрофагах внутреннего слоя артерий и аорты. Кроме того, постулируется, что большая часть холестерина, обнаруженная в жировых прожилках, в свою очередь, дает начало развитию «фиброзных бляшек», которые состоят из аккумулированных клеток внутренней оболочки гладких мышц, наполненных липидами и окруженных внекле3 точными липидами, коллагеном, эластином и протеогликанами. Клетки вместе с матриксом образуют фиброзное покрытие, охватывающее более глубокое отложение клеточных обломков и больше внеклеточных липидов. Липиды в основном представлены свободным и этерифицированным холестерином. Фиброзные бляшки образуются медленно и, по всей видимости, со временем становятся кальцифицированными и омертвевшими, развиваясь до «сложных поражений», которые считаются причиной артериальной окклюзии и тенденции к пристеночному тромбозу и артериальному мышечному спазму, что характеризует развитый атеросклероз.

В соответствии с эпидемиологическим доказательством твердо установлено, что гиперлипидемия является первичным фактором риска возникновения сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ), обусловленных атеросклерозом. В последние годы лидеры медицинской профессии вновь ставили ударение на снижении уровней холестерина в плазме и, в частности, холестерина липопротеинов низкой плотности, как необходимом этапе в предупреждении ССЗ. Верхние пределы «нормы» сейчас значительно ниже, чем принимались прежде. Как результат, большая часть населения Запада сейчас представляет собой группу особо повышенного риска. Такие независимые факторы риска включают в себя непереносимость глюкозы, левожелудочковую гипертрофию, гипертензию и связаны с представителями мужского пола. Среди больных диабетом особенно распространены сердечно-сосудистые заболевания, по меньшей мере частично, ввиду существования множественных независимых факторов риска у этой части населения. В связи с этим, успешное лечение гиперлипидемии у населения в целом и у больных диабетом, в частности, является задачей исключительной медицинской значимости.

Гипертензия (или высокое кровяное давление) является состоянием, встречающимся в человеческой популяции как вторичный симптом различных других заболеваний, таких как стеноз почечной артерии, феохромоцитома или расстройства эндокринной системы. Однако, кроме этого, гипертензия наблюдается у множества пациентов, у которых агент, являющийся причиной заболевания, или расстройство неизвестны. В то время как такая «эссенциальная» гипертензия часто связана с такими заболеваниями, как ожирение, диабет и гипертриглицеридемия, взаимоотношение между этими заболеваниями не выяснено. В дополнение к этому у многих пациентов проявляются симптомы повышенного кровяного давления при полном отсутствии любых других признаков болезни или расстройства.

Известно, что гипертензия может непосредственно приводить к сердечной недостаточности, почечной недостаточности и удару (кровоизлиянию в головной мозг). Эти состоя ния способны вызвать скоропостижную смерть пациента. Кроме того, гипертензия может вносить вклад в развитие атеросклероза и сердечнососудистых заболеваний. Эти состояния постепенно ослабляют пациента и могут приводить к отдаленной смерти.

Точная причина эссенциальной гипертензии неизвестна, хотя считается, что ряд факторов вносят вклад в развитие заболевания. Такими факторами являются стресс, неконтролируемые эмоции, нерегулируемое высвобождение гормонов (ренина, ангиотензина, альдостероновой системы), избыточная соль и вода, обусловленная почечной дисфункцией, утолщение стенок сосудов и гипертрофия сосудистой сети, приводящая к сужению кровеносных сосудов, и генетические факторы.

Лечение эссенциальной гипертензии следует осуществлять, держа в уме перечисленные выше факторы. Так, в качестве снижающих артериальное давление средств был разработан и поступил в продажу широкий набор бетаблокаторов, сосудосуживающих средств, ингибиторов ангиотензин-конвертирующего фермента и им подобных. Лечение гипертензии с использованием этих соединений обеспечивает благотворное предупреждение скоропостижной смерти, такой как в результате сердечной недостаточности, почечной недостаточности и кровоизлияния в головной мозг. Однако развитие атеросклероза и сердечных заболеваний, обусловленное гипертензией в течение длительного периода времени, остается проблемой. Это подразумевает, что, хотя высокое кровяное давление снижается, причина, лежащая в основе эссенциальной гипертензии, не устраняется в результате такого лечения.

Гипертензия связана с повышенными уровнями инсулина в крови, состоянием, известным как гиперинсулинемия. Инсулин, пептидный гормон, чье основное действие заключается в способствовании утилизации глюкозы, белковому синтезу и образованию и хранению нейтральных липидов, кроме этого, среди прочего, способствует росту клеток сосудов и усилению удерживания ионов натрия в почках. Эти последние функции могут выполняться без влияния на уровни глюкозы и известно, что они вызывают гипертензию. Периферийный рост сосудистой сети, например, может приводить к сужению периферийных капилляров; в то время как удержание ионов натрия повышает объем крови. Таким образом, снижение уровней инсулина в случаях гиперинсулинемии может предупреждать ненормальный рост сосудов и удержание ионов натрия в почках, вызванных высокими уровнями инсулина, и поэтому облегчать гипертензию.

Сердечная гипертрофия является значимым фактором риска в развитии внезапной смерти, инфаркта миокарда и застойной сердечной недостаточности. Эти события с сердцем, по меньшей мере, отчасти обусловлены повышенной чувствительностью к повреждению сердечной мышцы вследствие ишемии и реперфузии, которые могут иметь место как у амбулаторных больных, так и при операциях. Существует неудовлетворенная медицинская потребность в предупреждении или сведении к минимуму неблагоприятных в отношении миокарда исходов операций, особенно связанных с операцией по поводу инфаркта миокарда. Хирургичекое вмешательство как не на сердце, так и на сердце, связано со значительным риском инфаркта миокарда или смерти. Считается, что около 7 миллионов больных с хирургическим вмешательством не на сердце, подвергаются риску смерти в процессе операции и получения серьезных осложнений на сердце, составляющему в некоторых случаях 20-25%. В дополнение к этому среди 400000 больных, подвергнутых ежегодно операции по коронарному шунтированию, связанный с хирургическим вмешательством инфаркт миокарда отмечается в 5% и смерть в 1-2% случаев. В настоящее время в этой области не существует терапии с помощью лекарств, имеющихся продаже, которая позволила бы снизить разрушение сердечной ткани в результате операционной сердечной ишемии или усилить сердечную сопротивляемость к ишемическим эпизодам. Ожидается, что такая терапия будет жизнесохраняющей и уменьшающей госпитализацию, повысит качество жизни и снизит общие затраты на сохранение здоровья у пациентов с большим риском.

Продуцирование печеночной глюкозы является важной целью ИНЗД-терапии. Печень является главным регулятором уровней глюкозы в плазме в постабсорбтивном (связанном) состоянии, и скорость продуцирования печеночной глюкозы у ИНЗД-пациентов значительно повышена относительно нормальных индивидуумов. Более того, в послеобеденном (накормленном) состоянии, когда печень играет соразмерно меньшую роль в поставке глюкозы в плазму, продуцирование печеночной глюкозы является ненормально высоким у ИНЗДпациентов.

Гликогенолиз является важной мишенью для приостановки продуцирования печеночной глюкозы. Печень продуцирует глюкозу в результате гликогенолиза (распада полимера глюкозы - гликогена) и глюконеогенеза (синтеза глюкозы из 2- и 3-углеродных предшественников). Различные виды доказательств указывают на то, что гликогенолиз может вносить значительный вклад в выработку печеночной глюкозы при ИНЗД. Во-первых, предполагается, что у нормальных людей в постабсорбтивном состоянии до 75% продуцируемой печенью глюкозы является результатом гликогенолиза. Вовторых, пациенты, страдающие заболеваниями, связанными с хранением гликогена в печени, включая болезнь Герса (дефицит гликогенфос форилазы), обнаруживают эпизодическую гипогликемию. Эти наблюдения подтверждают, что гликогенолиз может являться существенным процессом для продуцирования печеночной глюкозы.

Гликогенолиз катализируется в печени, мышцах и головном мозге тканеспецифичными изоформами фермента гликогенфосфорилазы. Этот фермент расщепляет макромолекулу гликогена с высвобождением глюкозо-1-фосфата и новой укороченной макромолекулы гликогена. К настоящему времени имеются сообщения о двух типах ингибиторов гликогенфосфорилазы: глюкозе и аналогах глюкозы [Майи, ЕЬ. е! а1. Вюсйет181ту 1991, 30, 10101], и кофеине и других аналогах пурина [Ка8У1И8ку, Р.1. е! а1. 1. Βίο1. СЕет. 1978, 253, 3343-3351 и 9102-9106]. Постулируется, что эти соединения и ингибиторы гликогенфосфорилазы в целом будут потенциально полезными для лечения ИНЗД за счет уменьшения продуцирования глюкозы печенью и снижения гликемии [В1иибе11, Т.В. е! а1. Э1аЬеЮ1оДа 1992, 35, Бирр1. 2, 569-576 и Матйи е! а1. Вюсйетщйу 1991, 30,10101].

Механизм(ы), ответственный за повреждение миокарда, наблюдаемое после ишемии и реперфузии, не до конца понятен. Сообщается (М.Е. Л11атб, е! а1. Ат. 1. РЬу8ю1. 267, Н66-Н74, 1994), что «предишемическое снижение гликогена... связано с улучшенным постишемическим функциональным левожелудочковым восстановлением в гипертрофированных сердцах крыс».

Таким образом, несмотря на наличие разнообразной терапии гипергликемии, гиперхолестеринемии, гипертензии, гиперинсулинемии, гиперлипемии, атеросклероза и ишемии, сохраняется необходимость в альтернативных видах терапии и постоянный поиск в этой области.

Сущность изобретения

Это изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим ингибиторы альдозоредуктазы и ингибиторы гликогенфосфорилазы, и к применению таких композиций для лечения инсулинрезистентных состояний, включая диабет у млекопитающих (например у людей, как у мужчин, так и у женщин), или к применению таких композиций для снижения тканевого поражения (например для существенного предотвращения тканевого поражения, включая тканевую протекцию), являющегося результатом ишемии.

Данные комбинации содержат терапевтически эффективные количества ингибитора альдозоредуктазы и ингибитора гликогенфосфорилазы.

Предпочтительное количество ингибитора альдозоредуктазы составляет приблизительно от

0,1 мг/кг до приблизительно 20 мг/кг, а предпочтительное количество ингибитора гликогенфосфорилазы составляет приблизительно от 0,1 мг/кг до приблизительно 15 мг/кг.

Особенно предпочтительным ингибитором альдозоредуктазы является 3,4-дигидро-4-оксо3-[[5-(трифторметил)-2-бензотиазолил] метил]-1фталазинуксусная кислота.

Предпочтительные ингибиторы гликогенфосфорилазы включают в себя соединения, имеющие формулу I

^10 ^11

Формула I и их фармацевтически приемлемые соли и пролекарства, где отмеченная пунктиром линия (—) представляет собой возможную связь;

А представляет собой -С(Н)=, -С((С_ГС₄)алкил)= или -С(галогено)= в том случае, когда отмеченная пунктиром линия (—) представляет собой связь, либо А представляет собой метилен или -СН((С_гС₄)алкил)- в том случае, когда отмеченная пунктиром линия (—) не является связью;

Κι, Κ₁₀ или Κ₁₁, каждый независимо, представляет собой Н, галогено, 4-, 6- или 7-нитро, циано, (С₁-С₄)алкил, (С₁-С₄)алкокси, фторметил, дифторметил или трифторметил;

К₂ представляет собой Н;

К₃ представляет собой Н или (С₁-С₅)алкил;

Κ4 представляет собой Н, метил, этил, нпропил, гидрокси(С₁-С₃)алкил, (С ₁-С₃)алкокси (С₁-С₃)алкил, фенил(С₁-С₄)алкил, фенилгидрокси(С₁-С₄)алкил, фенил(С₁-С₄)алкокси(С₁-С₄)алкил, тиен-2- или -3-ил(С₁-С₄)алкил либо фур-2или -3-ил(С₁-С₄)алкил, причем указанные кольца Κ4 моно-, ди- или тризамещены независимо по углероду Н, галогено, (С ₁-С₄)алкилом, (С₁С4)алкокси, трифторметилом, гидрокси, амино или циано; либо

Κ4 представляет собой пирид-2-, -3- или -4ил(С₁-С₄)алкил, тиазол-2-, -4- или -5-ил(С₁С₄)алкил, имидазол-1-, -2-, -4- или -5-ил(С₁С4)алкил, пиррол-2- или -3-ил(С1-С4)алкил, оксазол-2-, -4- или -5-ил(С₁-С₄)алкил, пиразол-3-, -4- или -5-ил(С₁-С₄)алкил, изоксазол-3-, -4- или -5-ил(С₁-С₄) алкил, изотиазол-3-, -4- или -5ил(С1-С4)алкил, пиридазин-3- или -4-ил(С1С₄)алкил, пиримидин-2-, -4-, -5- или -6-ил(С₁С4)алкил, пиразин-2- или -3-ил(С1-С4)алкил либо 1,3,5-триазин-2-ил(С1-С4)алкил, причем указанные выше гетероциклы Κ4 возможно моноили дизамещены независимо галогено, трифторметилом, (С₁-С₄)алкилом, (С₁-С₄)алкокси, амино или гидрокси, и указанные моно- или дизаместители присоединены к углероду;

К₅ представляет собой Н, гидрокси, фторо, (С₁-С₅)алкил, (С₁-С₅)алкокси, (С₁-С₆)алканоил, амино(С₁-С₄)алкокси, моно-Ν- или ди-П,П-(С₁С4)алкиламино(С1-С4)алкокси, карбокси(С1-С4) алкокси, (С₁-С₅)алкоксикарбонил(С₁-С₄)алкокси, бензилоксикарбонил(С₁-С₄) алкокси или карбонилокси, причем указанный карбонилокси связывается по типу углерод-углерод с фенилом, тиазолилом, имидазолилом, 1Н-индолилом, фурилом, пирролилом, оксазолилом, пиразолилом, изоксазолилом, изотиазолилом, пиридазинилом, пиримидинилом, пиразинилом или 1,3,5триазинилом, и при этом указанные выше кольца К₅ возможно монозамещены галогено, (С₁С₄)алкилом, (С₁-С₄)алкокси, гидрокси, амино или трифторметилом, и указанные монозаместители присоединены к углероду;

К₇ представляет собой Н, фторо или (С₁С5)алкил; либо

К₅ и К₇ могут вместе образовывать оксо;

К₆ представляет собой карбокси, (С₁-С₈) алкоксикарбонил, Ο(Θ)ΝΚ₈Κ₉ или С(О)К₁₂, где

К₈ представляет собой Н, (С₁-С₃)алкил, гидрокси или (С₁-С₃)алкокси; и

К₉ представляет собой Н, (С₁-С₈)алкил, гидрокси, (С₁-С₈)алкокси, метиленперфторированный (С₁-С₈)алкил, фенил, пиридил, тиенил, фурил, пирролил, пирролидинил, оксазолил, тиазолил, имидазолил, пиразолил, пиразолинил, пиразолидинил, изоксазолил, изотиазолил, пиранил, пиперидинил, морфолинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, пиперазинил или 1,3,5-триазинил, причем указанные выше кольца К₉ связываются по типу углерод-азот; либо

К₉ является моно-, ди- или тризамещенным (С₁-С₅)алкилом, причем указанные заместители независимо представляют собой Н, гидрокси, амино, моно-Ν- или ди-П,П-(С₁-С₅)алкиламино; либо

К₉ является моно- или дизамещенным (С₁С₅)алкилом, причем указанные заместители независимо представляют собой фенил, пиридил, фурил, пирролил, пирролидинил, оксазолил, тиазолил, имидазолил, пиразолил, пиразолинил, пиразолидинил, изоксазолил, изотиазолил, пиранил, пиридинил, пиперидинил, морфолинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, пиперазинил или 1,3,5-триазинил, причем неароматические азотсодержащие кольца К₉ возможно монозамещены по азоту (С₁-С₆)алкилом, бензилом, бензоилом или (С₁-С₆)алкоксикарбонилом, и при этом данные кольца К₉ возможно монозамещены по углероду галогено, (С ₁-С₄) алкилом, (С₁-С₄)алкокси, гидрокси, амино или моно-Ν- и ди-Н^(С_гС₄)алкиламино при условии, что сюда не включается кватернизованный азот и нет связей азот-кислород, азот-азот или азотгалогено;

Κ₁₂ представляет собой пиперазин-1-ил, 4(С₁ -С₄)алкилпиперазин-1 -ил, 4-формилпиперазин-1-ил, морфолино, тиоморфолино, 1-оксотиоморфолино, 1,1-диоксотиоморфолино, тиазолидин-3-ил, 1-оксотиазолидин-3-ил, 1,1диоксотиазолидин-3-ил, 2-(С1-С6)алкоксикар9 бонилпирролидин-1-ил, оксазолидин-3-ил или 2(К)-гидроксиметилпирролидин-1 -ил; или

К₁₂ является 3- и/или 4- моно- либо дизамещенным оксазетидин-2-илом, 2-, 4- и/или 5моно- либо дизамещенным оксазолидин-3-илом, 2-, 4- и/или 5- моно- либо дизамещенным тиазолидин-3-илом, 2-, 4- и/или 5- моно- либо дизамещенным 1-оксотиазолидин-3-илом, 2-, 4и/или 5- моно- либо дизамещенным 1,1-диоксотиазолидин-3-илом, 3- и/или 4- моно- либо дизамещенным пирролидин-1-илом, 3-, 4- и/или 5моно-, ди- либо тризамещенным пиперидин-1 илом, 3-, 4- и/или 5- моно-, ди- либо тризамещенным пиперазин-1-илом, 3-замещенным азетидин-1-илом, 4- и/или 5- моно- либо дизамещенным 1,2-оксазинан-2-илом, 3- и/или 4- монолибо дизамещенным пиразолидин-1-илом, 4и/или 5- моно- либо дизамещенным изоксазолидин-2-илом, 4- и/или 5- моно- и/или дизамещенным изотиазолидин-2-илом, причем указанные заместители К₁₂ независимо представляют собой Н, галогено, (С₁-С₅)алкил, гидрокси, амино, моно-Ν- или ди-Ы,М-(С₁-С₅)алкиламино, формил, оксо, гидроксиимино, (С₁-С₅)алкокси, карбокси, карбамоил, моно-Ν- или ди-У№(Сц С₄)алкилкарбамоил, (С₁-С₄)алкоксиимино, (С₁С₄)алкоксиметокси, (С₁ -С₆)алкоксикарбонил, карбокси(С₁-С₅)алкил либо гидрокси(С₁-С₅)алкил;

при условии, что если К₄ представляет собой Н, метил, этил или н-пропил, то К₅ представляет собой ОН;

при условии, что если К₅ и К₇ представляют собой Н, то К₄ не является Н, метилом, этилом, н-пропилом, гидрокси(С₁-С₃)алкилом или (С₁-С₃)алкокси(С₁-С₃)алкилом, а Кб представляет собой С(О)ПК₈К.₉, С(О)К₁₂ или (С₁-С₄) алкоксикарбонил.

Первая группа предпочтительных соединений формулы I состоит из соединений, где

К₁ представляет собой 5-Н, 5-галогено, 5метил или 5-циано;

К₁₀ и К₁₁ каждая независимо представляет собой Н или галогено;

А представляет собой -С(Н)=;

К₂ и К₃ представляют собой Н;

К₄ представляет собой фенил(С₁-С₄)алкил, причем указанные фенильные группы моно-, ди- или тризамещены независимо Н или галогено либо являются моно- или дизамещенными независимо Н, галогено, (С₁-С₄)алкилом, (С₁-С₄) алкокси, трифторметилом, гидрокси, амино или циано; либо

К₄ представляет собой тиен-2- или -3ил(С₁-С₂)алкил, пирид-2-, -3- или -4-ил(С₁-С₂) алкил, тиазол-2-, -4- или -5-ил(С₁-С₂)алкил, имидазол-1-, -2-, -4- или -5-ил(С1-С2)алкил, фур2- или -3-ил(С₁-С₂)алкил, пиррол-2- или -3-ил (С1-С2)алкил, оксазол-2-, -4- или -5-ил-(С1-С2) алкил, пиразол-3-, -4- или -5-ил(С1-С2)алкил, изоксазол-3-, -4- или -5-ил(С1-С2)алкил, причем указанные выше гетероциклы К₄ возможно мо но- или дизамещены независимо галогено, трифторметилом, (С₁-С₄) алкилом, (С₁-С₄)алкокси, амино или гидрокси, и указанные моноили дизаместители присоединены к углероду;

К₅ представляет собой гидрокси;

Кб представляет собой С(О)ПК₈К₉ или С(О)К12; и

К₇ представляет собой Н.

В пределах вышеупомянутой первой группы предпочтительных соединений формулы I находится первая группа особо предпочтительных соединений, где углеродный атом а имеет (З)-стереохимию; углеродный атом Ь имеет (К)-стереохимию;

К₄ представляет собой фенил(С₁-С₂)алкил, тиен-2-ил-(С₁-С₂)алкил, тиен-3-ил-(С₁-С₂)алкил, фур-2-ил-(С₁-С₂)алкил или фур-3-ил-(С₁-С₂) алкил, причем указанные кольца моно- или дизамещены независимо Н или фторо;

К₆ представляет собой С(О)ПК₈К₉;

К₈ представляет собой (С₁-С₃)алкил, гидрокси или (С₁-С₃)алкокси; и

К₉ представляет собой Н, (С₁-С₈)алкил, гидрокси, гидрокси(С₁-С₆)алкил, (С₁-С₈)алкокси, пиридил, морфолинил, пиперазинил, пирролидинил, пиперидинил, имидазолил или тиазолил, или (С₁-С₄)алкил, монозамещенный пиридилом, морфолинилом, пиперазинилом, пирролидинилом, пиперидинилом, имидазолилом или тиазолилом.

В пределах вышеупомянутой первой группы особо предпочтительных соединений находятся, в частности, предпочтительные соединения:

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-((К.)-гидроксидиметилкарбамоилметил)-2фенилэтил] амид,

5,6-дихлор- 1Н-индол-2-карбоновой кислоты {(18)-[(К.)-гидрокси(метоксиметилкарбамоил)метил] -2-фенилэтил}амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты {(18)-[(К.)-гидрокси(метоксиметилкарбамоил) метил] -2-фенилэтил}амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты ((18)-{ (К.)-гидрокси-[(2-гидроксиэтил)метилкарбамоил] метил} -2-фенилэтил)амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты {(18)-[(К.)-гидрокси(метилпиридин-2-ил-карбамоил)метил]-2-фенилэтил}амид или

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты ((18)-{(К)-гидрокси-[метил-(2-пиридин-2-илэтил)карбамоил]метил}-2-фенилэтил)амид.

В пределах вышеупомянутой первой группы особо предпочтительных соединений находятся соединения, где

а) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К.ц представляют собой Н;

К₄ представляет собой бензил;

К₈ представляет собой метил; и

К₉ представляет собой метил;

б) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₁ представляет собой Н;

К1о представляет собой 6-хлоро;

К4 представляет собой бензил;

К₈ представляет собой метил; и

К₉ представляет собой метокси;

в) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К₄ представляет собой бензил;

К₈ представляет собой метил; и

К₉ представляет собой метокси;

г) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К₄ представляет собой бензил;

К₈ представляет собой метил; и

К₉ представляет собой 2-(гидрокси)этил;

д) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

Кд представляет собой бензил;

К₈ представляет собой метил; и

К₉ представляет собой пиридин-2-ил; и

е) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К4 представляет собой бензил;

К₈ представляет собой метил; и

К₉ представляет собой 2-(пиридин-2ил)этил.

В пределах вышеупомянутой первой группы предпочтительных соединений формулы I находится вторая группа особо предпочтительных соединений, где углеродный атом а имеет (8)-стереохимию;

углеродный атом Ь имеет (К)стереохимию;

К₄ представляет собой фенил(С₁-С₂)алкил, тиен-2-ил-(С₁ -С₂)алкил, тиен-3-ил-(С₁ -С₂)алкил, фур-2-ил-(С₁-С₂)алкил или фур-3-ил-(С₁-С₂)алкил, причем указанные кольца моно- или дизамещены независимо Н или фторо;

Кб представляет собой С(О)К₁₂; и

К₁₂ представляет собой морфолино, 4-(С₁С₄)алкилпиперазин-1-ил, 3-замещенный азетидин-1-ил, 3- и/или 4- моно- либо дизамещенный пирролидин-1-ил, 4- и/или 5- моно- либо дизамещенный изоксазолидин-2-ил, 4- и/или 5- моно- либо дизамещенный 1,2-оксазинан-2-ил, причем указанные заместители независимо представляют собой каждый Н, галогено, гидрокси, амино, моно-Ν- или ди-Ы,М-(С₁-С₅) алкиламино, оксо, гидроксиимино или алкокси.

В пределах вышеупомянутой второй группы особо предпочтительных соединений находятся особенно предпочтительные соединения:

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-(2К)-гидрокси-3-(4-метилпиперазин-1 -ил) -3 -оксопропил] амида гидрохлорид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-(2К)-гидрокси-3-(3 -гидроксиазетидин-1 -ил)-3 -оксопропил] амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты ((18)-бензил-(2К)-гидрокси-3 -изоксазолидин-2ил-3 -оксопропил)амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты ((18)-бензил-(2К)-гидрокси-3-[ 1,2]оксазинан-2ил-3 -оксопропил)амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-(2К)-гидрокси-3 -((3 8)-гидроксипирролидин-1 -ил)-3 -оксопропил] амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-3 -((38,48)-дигидроксипирролидин1-ил)-(2К)-гидрокси-3-оксопропил] амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-3-((3К,48)-дигидроксипирролидин1 -ил)-(2К) -гидрокси-3 -оксопропил] амид или

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты ((18)-бензил-(2К)-гидрокси-3 -морфолин-4-ил-3 оксопропил)амид.

В пределах вышеупомянутой второй группы особо предпочтительных соединений находятся соединения, где

а) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К4 представляет собой бензил; и

К₁₂ представляет собой 4-метилпиперазин1 -ил;

б) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К4 представляет собой бензил; и

К₁₂ представляет собой 3-гидроксиазетидин-1 -ил;

в) К1 представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К4 представляет собой бензил; и

К₁₂ представляет собой изоксазолидин-2ил;

г) К1 представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К4 представляет собой бензил; и

К₁₂ представляет собой (1,2)-оксазинан-2ил;

д) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К4 представляет собой бензил; и

К₁₂ представляет собой 3(8)-гидроксипирролидин-1 -ил;

е) К1 представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К4 представляет собой бензил; и

К₁₂ представляет собой (38,48)-дигидроксипирролидин-1 -ил;

ж) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К4 представляет собой бензил; и

К₁₂ представляет собой (3К,48)дигидроксипирролидин-1 -ил; и

з) К1 представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К4 представляет собой бензил; и

К₁₂ представляет собой морфолино.

Вторая группа предпочтительных соединений формулы 1 состоит из соединений, где

К1 представляет собой Н, галогено, метил или циано;

Κιο и К₁₁ каждая независимо представляет собой Н или галогено;

А представляет собой -С(Н)=;

К₂ и К₃ представляют собой Н;

Кд представляет собой фенил(С₁-С₂)алкил, причем указанные фенильные группы моно-, ди- или тризамещены независимо Н или галогено, либо моно- или дизамещены независимо Н, галогено, (С1-С₄)алкилом, (С₁-С₄)алкокси, трифторметилом, гидрокси, амино или циано; либо

К₄ представляет собой тиен-2- или -3ил(С₁-С₂)алкил, пирид-2-, -3- или -4-ил(С₁-С₂) алкил, тиазол-2-, -4- или -5-ил(С₁-С₂)алкил, имидазол-1-, -2-, -4- или -5-ил(С₁-С₂)алкил, фур2- или -3-ил(С1-С2)алкил, пиррол-2- или -3-ил (С1-С2)алкил, оксазол-2-, -4- или -5-ил(С1-С2) алкил, пиразол-3-, -4- или -5-ил(С₁-С₂)алкил, изоксазол-3-, -4- или -5-ил(С1-С2)алкил, причем указанные выше гетероциклы К₄ возможно моно- или дизамещены независимо галогено, трифторметилом, (С₁-С₄)алкилом, (С₁-С₄)алкокси, амино или гидрокси, и указанные моно- или дизаместители присоединены к углероду;

К₅ представляет собой гидрокси;

Кб представляет собой карбокси или (С₁С₈)алкоксикарбонил; и

К₇ представляет собой Н, фторо или (С₁С₆)алкил.

В пределах второй группы предпочтительных соединений формулы I находится группа особо предпочтительных соединений, где углеродный атом а имеет (8)-стереохимию;

углеродный атом Ь имеет (К)-стереохимию;

К₄ представляет собой фенил(С₁-С₂)алкил, тиен-2-ил-(С₁ -С₂)алкил, тиен-3-ил-(С₁ -С₂)алкил, фур-2-ил-(С₁-С₂)алкил или фур-3-ил-(С₁-С₂) алкил, причем указанные кольца моно- или дизамещены независимо Н или фторо;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К6 представляет собой карбокси; и

К₇ представляет собой Н.

Предпочтительным в пределах только что приведенной группы является соединение, где

К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н; и

К4 представляет собой бензил.

Третья группа предпочтительных соединений формулы I состоит из соединений, где

К₁₀ и К₁₁ каждый независимо представляет собой Н или галогено;

А представляет собой -С(Н)=;

К₂ и К₃ представляют собой Н;

К₄ представляет собой фенил(С₁-С₂)алкил, причем указанные фенильные группы моно-, ди- или тризамещены независимо Н или галогено, либо моно- или дизамещены независимо Н, галогено, (С₁-С₄)алкилом, (С₁-С₄)алкокси, трифторметилом, гидрокси, амино или циано; либо

К4 представляет собой тиен-2- или -3ил(С₁-С₂)алкил, пирид-2-, -3- или -4-ил(С₁-С₂) алкил, тиазол-2-, -4- или -5-ил(С1-С2)алкил, имидазол-1-, -2-, -4- или -5-ил(С1-С2)алкил, фур2- или -3-ил(С1-С2)алкил, пиррол-2- или -3-ил (С1-С2)алкил, оксазол-2-, -4- или -5-ил(С1-С2) алкил, пиразол-3-, -4- или -5-ил(С1-С2)алкил, изоксазол-3-, -4- или -5-ил(С₁-С₂)алкил, причем указанные выше гетероциклы К₄ изоксазол-3-, -4- или -5-ил(С1-С2)алкил, причем указанные выше гетероциклы К₄ возможно моно- или дизамещены независимо галогено, трифторметилом, (С₁-С₄)алкилом, (С₁-С₄)алкокси, амино или гидрокси, и указанные моно- или дизаместители присоединены к углероду;

К₅ представляет собой фторо, (С₁-С₄)алкил, (С1-С5)алкокси, амино(С1-С4)алкокси, моно-Ν- или ди-Ы,М-(С₁-С₄)алкиламино(С₁-С₄) алкокси, карбокси(С1-С4)алкокси, (С1-С5)алкоксикарбонил(С1-С4)алкокси, бензилоксикарбонил(С1-С4) алкокси;

К₆ представляет собой карбокси или (С₁С₈)алкоксикарбокил; и

К₇ представляет собой Н, фторо или (С₁С6)алкил.

Четвертая группа предпочтительных соединений формулы I состоит из соединений, где

К10 и К11 каждый независимо представляет собой Н или галогено;

А представляет собой -С(Н)=;

К₂ и К₃ представляют собой Н;

К4 представляет собой тиен-2- или -3ил(С₁-С₂)алкил, пирид-2-, -3- или -4-ил(С₁-С₂) алкил, тиазол-2-, -4- или -5-ил(С₁-С₂)алкил, имидазол-1-, -2-, -4- или -5-ил(С1-С2)алкил, фур2- или -3-ил(С₁-С₂)алкил, пиррол-2- или -3ил(С1-С2)алкил, оксазол-2-, -4- или -5-ил(С1С2)алкил, пиразол-3-, -4- или -5-ил(С1-С2)алкил, изоксазол-3-, -4- или -5-ил(С₁-С₂)алкил, причем указанные выше гетероциклы К₄ возможно моно- или дизамещены независимо галогено, трифторметилом, (С₁-С₄)алкилом, (С₁-С₄)алкокси, амино или гидрокси, и указанные моно- или дизаместители присоединены к углероду;

К5 представляет собой фторо, (С1-С4) алкил, (С₁-С₅)алкокси, амино(С₁-С₄) алкокси, моно-Ν- или ди-Ы,М-(С₁-С₄)алкиламино(С₁-С₄) алкокси, карбокси(С1-С4) алкокси, (С1-С5) алкоксикарбонил(С1-С4)алкокси, бензилоксикарбонил(С1-С4) алкокси;

К₆ представляет собой С(Ο)NΚ₈Κ9 или

С(О)К12; и

Предпочтительные ингибиторы гликогенфосфорилазы включают в себя соединения, имеющие формулу ΙΑ

Формула ΙΑ и их фармацевтически приемлемые соли и пролекарства, где отмеченная пунктиром линия (—) представляет собой возможную связь;

А представляет собой -С(Н)=, -С((С_ГС₄)алкил)=, -С(галогено)= или -Ν= в том случае, когда отмеченная пунктиром линия (—) представляет собой связь, либо

А представляет собой метилен или -СН((С₁-С₄)алкил)- в том случае, когда отмеченная пунктиром линия (—) не является связью;

К₁, К₁₀ или К₁₁, каждый независимо, представляет собой Н, галогено, циано, 4-, 6- или 7нитро, (С]-С₄)алкил, (С_гС₄)алкокси, фторметил, дифторметил или трифторметил;

К₂ представляет собой Н;

К₃ представляет собой Н или (С_гС₅)алкил;

К₄ представляет собой Н, метил, этил, нпропил, гидрокси(С]-С₃)алкил, (С_гС₃)алкокси(С₁-С₃)алкил, фенил(С₁-С₄)алкил, фенилгидрокси(С]-С₄)алкил, фенил(С₁-С₄)алкокси(С₁-С₄) алкил, тиен-2- или -3-ил(С₁-С₄)алкил либо фур2- или -3-ил(С]-С₄)алкил, причем указанные кольца К ₍ моно-, ди- или тризамещены независимо по углероду Н, галогено, (С_гС₄)алкилом, (С ₁-С₄) алкокси, трифторметилом, гидрокси, амино, циано или 4,5-дигидро-1Н-имидазол-2илом; либо

К₄ представляет собой пирид-2-, -3- или -4ил(С₁-С₄)алкил, тиазол-2-, -4- или -5-ил(С₁-С₄) алкил, имидазол-2-, -4- или -5-ил(С₁-С₄)алкил, пиррол-2- или -3-ил(С₁-С₄)алкил, оксазол-2-, -4или -5-ил(С₁-С₄)алкил, пиразол-3-, -4- или -5ил(С₁-С₄)алкил, изоксазол-3-, -4- или -5-ил(С₁С4)алкил, изотиазол-3-, -4- или -5-ил(С1-С4)алкил, пиридазин-3- или -4-ил(С1-С4)алкил, пиримидин-2-, -4-, -5- или -6-ил(С₁-С₄)алкил, пиразин-2- или -3-ил(С₁-С₄)алкил, 1,3,5-триазин-2ил(С1-С4)алкил или индол-2-(С1-С4)алкил, причем указанные выше гетероциклы К₄ возможно моно- или дизамещены независимо галогено, трифторметилом, (С₁-С₄)алкилом, (С₁-С₄)алкокси, амино, гидрокси или циано, и указанные заместители присоединены к углероду; либо

К₄ представляет собой К₁₅-карбонилоксиметил, причем указанный К₁₅ представляет собой фенил, тиазолил, имидазолил, 1Н-индолил, фурил, пирролил, оксазолил, пиразолил, изоксазолил, изотиазолил, пиридил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил или 1,3,5-триазинил, и при этом указанные выше кольца К₁₅ возможно моно- или дизамещены независимо галогено, амино, гидрокси, (С₁-С₄)алкилом, (С₁-С₄)алкокси или трифторметилом, и указанные моно- или дизаместители присоединены по углероду;

К₅ представляет собой Н;

К₆ представляет собой карбокси, (С₁-С₈) алкоксикарбонил, бензилоксикарбонил,

С(О)КК₈К₁₉ или С(О)К₁₂, где

К₈ представляет собой Н, (С₁-С₆)алкил, цикло(С3-С6)алкил, цикло(С3-С6) алкил(С1-С5) алкил, гидрокси или (С₁-С₈)алкокси; и

К₉ представляет собой Н, цикло(С₃-С₈)алкил, цикло(С₃-С₈)алкил(С₁-С₅) алкил, цикло(С₄С₇)алкенил, цикло(С₃-С₇)алкил(С₁-С₅)алкокси, цикло(С₃-С₇)алкокси, гидрокси, метиленперфторированный (С₁-С₈)алкил, фенил или гетероцикл, причем указанный гетероцикл представляет собой пиридил, фурил, пирролил, пирролидинил, оксазолил, тиазолил, имидазолил, пиразолил, пиразолинил, пиразолидинил, изоксазолил, изотиазолил, пиранил, пиридинил, пиперидинил, морфолинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, пиперазинил, 1,3,5триазинил, бензотиазолил, бензоксазолил, бензимидазолил, тиохроманил или тетрагидробензотиазолил, причем указанные гетероциклические кольца соединены связью углерод-азот; либо

К₉ представляет собой (С₁-С₆)алкил или (С1-С8)алкокси, причем указанный (С1-С6)алкил или (С₁-С₈)алкокси возможно монозамещен цикло(С4-С7)алкен-1 -илом, фенилом, тиенилом, пиридилом, фурилом, пирролилом, пирролидинилом, оксазолилом, тиазолилом, имидазолилом, пиразолилом, пиразолинилом, пиразолидинилом, изоксазолилом, изотиазолилом, пиранилом, пиперидинилом, морфолинилом, тиоморфолинилом, 1 -оксотиоморфолинилом, 1,1-диоксотиоморфолинилом, пиридазинилом, пиримидинилом, пиразинилом, пиперазинилом, 1,3,5триазинилом или индолилом, причем указанные (С₁-С₆)алкил или (С₁-С₈)алкокси возможно дополнительно независимо моно- или дизамещены галогено, гидрокси, (С1-С5)алкокси, амино, моно-Ν- или ди-^2№-(С_гС₅)алкиламино, циано, карбокси или (С1 -С4)алкоксикарбонилом; и при этом кольца К₉ возможно моно- или дизамещены независимо по углероду галогено, (С₁-С₄)алкилом, (С₁-С₄)алкокси, гидрокси, гидрокси(С₁ -С₄)алкилом, амино(С₁ -С₄)алкилом, моно-Ν- или ди>А-(С>С ₁)алкила\1ино(С|-С ₍) алкилом, (С₁-С₄)алкокси(С₁-С₄)алкилом, амино, моно-Ν- или ди^^-(С_гС₄)алкиламино, циано, карбокси, (С₁-С₅)алкоксикарбонилом, карбамоилом, формилом или трифторметилом, и указанные кольца К₉ возможно могут быть дополнительно моно- или дизамещены независимо (С₁-С₅)алкилом или галогено;

при условии, что в любой гетероцикл К₉ не включается кватернизованный азот;

К₁₂ представляет собой морфолино, тиоморфолино, 1 -оксотиоморфолино, 1 ,1-диоксотиоморфолино, тиазолидин-3-ил, 1-оксотиа17 золидин-3-ил, 1,1-диоксотиазолидин-3-ил, пирролидин-1-ил, пиперидин-1-ил, пиперазин-1-ил, пиперазин-4-ил, азетидин-1-ил, 1,2-оксазинан-2ил, пиразолидин-1-ил, изоксазолидин-2-ил, изотиазолидин-2-ил, 1,2-оксазетидин-2-ил, оксазолидин-3-ил, 3,4-дигидроизохинолин-2-ил, 1,3дигидроизоиндол-2-ил, 3,4-дигидро-2Н-хинол1-ил, 2,3-дигидробензо[1,4]оксазин-4-ил, 2,3дигидробензо [ 1,4]-тиазин-4-ил, 3,4-дигидро-2Нхиноксалин-1-ил, 3,4-дигидробензо[с][1,2]оксазин-1-ил, 1,4-дигидробензо[б][1,2]оксазин-3-ил, 3,4-дигидробензо[е][1,2]-оксазин-2-ил, 3Н-бензо [б]изоксазол-2-ил, 3Н-бензо[с]изоксазол-1-ил или азепан-1 -ил, причем указанные кольца К₁₂ возможно моно-, ди- или тризамещены независимо галогено, (С1-С₅)алкилом, (С1-С₅)алкокси, гидрокси, амино, моно-Ы-или ди-Ы,Ы-(С1-С₅)алкиламино, формилом, карбокси, карбамоилом, моно-Νили ди-Ы,М-(С1-С₅)алкилкарбамоилом, (С₁-С₆) алкокси(С1 -С₃)алкокси, (С₁ -С₅)алкоксикарбонилом, бензилоксикарбонилом, (С₁-С₅)алкоксикарбонил(С₁-С₅) алкилом, (С₁-С₄)алкоксикарбониламино, карбокси(С1-С5)алкилом, карбамоил(С₁-С₅)алкилом, моно-Ν- или ди-Ы,Ы-(С1-С₅) алкилкарбамоил(С1-С5)алкилом, гидрокси(С1С5)алкилом, (С1-С4)алкокси(С1-С4)алкилом, амино(С₁-С₄)алкилом, моно-Ν- или ди-Ы,Ы-(С₁С4)алкиламино(С1-С4)алкилом, оксо, гидроксиимино или (С₁-С₆)алкоксиимино, и при этом не более чем два заместителя выбираются из оксо, гидроксиимино или (С₁-С₆)алкоксиимино и оксо, гидроксиимино или (С₁-С₆) алкоксиимино, находятся на неароматическом углероде; и при этом указанные кольца К₁₂ возможно дополнительно моно- или дизамещены независимо (С₁-С₅)алкилом или галогено;

при условии, что если К₆ представляет собой (С₁-С₅)алкоксикарбонил или бензилоксикарбонил, то К является 5-галогено, 5-(С₁С₄)алкилом или 5-циано, а

К₄ представляет собой фенилгидрокси(С₁С₄)алкил, фенил(С₁ -С₄)алкокси(С₁ -С₄)алкил, гидроксиметил или Аг(С₁-С₂)алкил, причем Аг представляет собой тиен-2- или -3-ил, фур-2или -3-ил либо фенил, причем указанный Аг возможно моно- или дизамещен независимо галогено; при условиях, что когда К₄ представляет собой бензил, а К₅ представляет собой метил, то К₁₂ не является 4-гидроксипиперидин-1илом, или когда К₄ представляет собой бензил, а К₅ представляет собой метил, то К₆ не является С(О)Ы(СНз)2;

при условии, что когда К₁, и Κ₁₀, и Κ₁₁представляют собой Н, то К₄ не является имидазол-4-илметилом, 2-фенилэтилом или 2гидрокси-2-фенилэтилом;

при условии, что когда оба К₈ и К₉ представляют собой н-пентил, то К₁ представляет собой 5-хлоро, 5-бромо, 5-циано, 5(С₁-С₅)алкил, 5(С₁-С₅)алкокси или трифторметил;

при условии, что когда К₁₂ представляет собой 3,4-дигидроизохинол-2-ил, то указанный 3,4-дигидроизохинол-2-ил не замещен карбокси(С1 -С4)алкилом;

при условии, что когда К₈ представляет собой Н, и К₉ представляет собой (С₁-С₆)алкил, то К₉ не замещен карбокси или (С₁-С₄)алкоксикарбонилом по углероду, который присоединен к атому азота N в ΝΉΚ₉; и при условии, что когда Кб представляет собой карбокси, а К₁, К₁₀, К₁₁ и К₅ все представляют собой Н, то К₄ не является бензилом, Н, фенилгидроксиметилом, метилом, этилом или н-пропилом.

Первая группа предпочтительных соединений формулы ΙΑ состоит из соединений, где

К₁ представляет собой 5-Н, 5-галогено, 5метил, 5-циано или 5-трифторметил;

А представляет собой -С(Н)=;

К₂ и К₃ представляют собой Н;

К₄ представляет собой Н, метил, фенил(С₁С₂)алкил, причем указанные фенильные группы моно- или дизамещены независимо Н, галогено, (С₁-С₄) алкилом, (С₁-С₄)алкокси, трифторметилом, гидрокси, амино или циано, и при этом указанные группы К₄ возможно дополнительно монозамещены галогено; либо

К₄ представляет собой тиен-2- или -3ил(С₁-С₂)алкил, пирид-2-, -3- или -4-ил(С₁-С₂) алкил, тиазол-2-, -4- или -5-ил(С₁-С₂)алкил, имидазол-2-, -4- или -5-ил(С1-С2)алкил, фур-2или -3-ил(С₁-С₂)алкил, пиррол-2- или -3-ил(С₁С2)алкил, оксазол-2-, -4- или -5-ил(С1-С2)алкил, пиразол-3-, -4- или -5-ил(С1-С2)алкил, изоксазол-3-, -4- или -5-ил(С1-С2)алкил, изотиазол-3-, -4- или -5-ил(С1-С2)алкил, пиридазин-3-или -4ил(С₁-С₂)алкил, пиримидин-2-, -4-, -5- или -6ил(С1-С2)алкил, пиразин-2- или -3-ил(С1-С2) алкил либо 1,3,5-триазин-2-ил(С1-С2)алкил, причем указанные выше гетероциклы К₄ возможно моно- или дизамещены независимо галогено, трифторметилом, (С₁-С₄)алкилом, (С₁-С₄) алкокси, амино или гидрокси, и указанные моно- или дизаместители присоединены к углероду;

К₅ представляет собой Н; и

К₆ представляет собой ί.’(ϋ)ΝΚ₈Κ₉ или С(О)К12.

В пределах вышеупомянутой первой группы предпочтительных соединений формулы ΙΑ находится первая группа особо предпочтительных соединений, где

К₄ представляет собой Н, фенил(С₁-С₂)алкил, тиен-2- или -3-ил-(С₁-С₂) алкил, фур-2- или -3-ил-(С₁-С₂)алкил, причем указанные кольца К₄моно- или дизамещены независимо Н или фторо;

К₆ представляет собой С(О)К₁₂; и

К₁₂ представляет собой морфолино, тиоморфолино, 1-оксотиоморфолино, 1,1-диоксо19 тиоморфолино, тиазолидин-3-ил, 1-оксотиазолидин-3-ил, 1,1-диоксотиазолидин-3-ил, пирролидин-1-ил, пиперидин-1-ил, пиперазин-1-ил, пиперазин-4-ил, азетидин-1-ил, 1,2-оксазинан-2ил, изоксазолидин-2-ил, изотиазолидин-2-ил, 1,2-оксазетидин-2-ил, оксазолидин-3-ил, 1,3дигидроизоиндол-2-ил или азепан-1-ил, причем указанные кольца Κ₁₂ возможно моно- или дизамещены независимо галогено, (С1-С₅)алкилом, (С1-С₅)алкокси, гидрокси, амино, моно-Ν- или ди-Ы,Ы-(С1-С₅)алкиламино, формилом, карбокси, карбамоилом, моно-Νили ди-Ц№(С1-С₅)алкилкарбамоилом, (С₁С5)алкоксикарбонилом, гидрокси(С1-С5)алкилом, амино(С₁-С₄)алкилом, моно-Ν- или ди-Ν,Ν(С1-С₄)алкиламино(С1-С₄)алкилом, оксо, гидроксиимино или (С₁-С₆)алкоксиимино, при условии, что только гетероциклы Κ₁₂ тиазолидин-3ил, пирролидин-1 -ил, пиперидин-1 -ил, пиперазин-1-ил, пиперазин-4-ил, азетидин-1-ил, 1,2оксазинан-2-ил, изоксазолидин-2-ил или оксазолидин-3-ил возможно моно- или дизамещены оксо, гидроксиимино или (С₁-С₆)алкоксиимино; и при этом указанные кольца Κ₁₂ возможно дополнительно моно- или дизамещены независимо (С₁-С₅)алкилом.

В пределах вышеупомянутой группы особо предпочтительных соединений находятся соединения:

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-(3 -гидроксииминопирролидин-1 ил)-2-оксоэтил]амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [2-(цис-3,4-дигидроксипирролидин-1 -ил)-2оксоэтил]амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [2-((38,48)-дигидроксипирролидин-1-ил)-2оксоэтил]амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-(цис-3,4-дигидроксипирролидин1-ил)-2-оксоэтил]амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [2-(1,1 -диоксотиазолидин-3 -ил)-2-оксоэтил] амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты (2-оксо-2-тиазолидин-3-ил-этил)амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-(4-фторбензил)-2-(4-гидроксипиперидин1-ил)-2-оксоэтил]амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-((3К.8)-гидроксипиперидин-1 ил)-2-оксоэтил]амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [2-оксо-(( 1 В8)-оксо-1 -тиазолидин-3 -ил)этил] амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-(2-фторбензил)-2-(4-гидроксипиперидин1 -ил)-2 -оксоэтил] амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-((38,48)-дигидроксипирролидин1 -ил)-2 -оксоэтил] амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-(3 -гидроксиазетидин-1 -ил)-2оксоэтил]амид,

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-(3 -гидроксииминоазетидин-1 ил)-2-оксоэтил]амид или

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-(4-гидроксииминопиперидин-1ил) -2-оксоэтил] амид.

В пределах вышеупомянутой группы особо предпочтительных соединений находится первая группа особо предпочтительных соединений, где К₄ представляет собой Н; и

Κ.ι₂ представляет собой тиазолидин-3-ил, 1 -оксотиазолидин-3 -ил, 1, 1 -диоксотиазолидин3-ил или оксазолидин-3-ил, либо указанные заместители Κ₁₂ возможно моно- или дизамещены независимо карбокси, (С1-С₅) алкоксикарбонилом, гидрокси(С1-С₃)алкилом, амино(С₁-С₃)алкилом, моно-Ν- или ди-ЫЦ-(С1-С₃)алкиламино(С₁-С₃)алкилом, или

Κ₁₂ представляет собой моно- или дизамещенный пирролидин-1 -ил, причем указанные заместители независимо являются карбокси, (С₁-С₅)алкоксикарбонилом, (С₁-С₅)алкокси, гидрокси, гидрокси(С1-С13)алкилом, амино, амино(С₁-С₃)алкилом, моно-Ν- или ди-Ы^ДЦ-СД алкиламино(С₁-С₃)алкилом либо моно-Ν- или ди-ИЦДСыСДалкиламино; и кольца Κ₁₂ возможно дополнительно дизамещены независимо (С₁-С₅) алкилом.

В пределах только что представленной группы особенно предпочтительных соединений находятся соединения, где

а) Κ₁ представляет собой 5-хлоро;

К.Ю и Κ₁₁ представляют собой Н; и

Κ₁₂ представляет собой цис-3,4-дигидроксипирролидин-1 -ил;

б) Κ₁ представляет собой 5-хлоро;

Κιο и Κ₁₁ представляют собой Н; и

Κ₁₂ представляет собой (38,48)дигидроксипирролидин-1 -ил;

в) Κ1 представляет собой 5-хлоро;

Κ₁₀ и Κ₁₁ представляют собой Н; и

Κ₁₂ представляет собой 1,1-диоксотиазолидин-3-ил;

г) Κ1 представляет собой 5-хлоро;

Κ₁₀ и Κ₁₁ представляют собой Н; и

Κ₁₂ представляет собой тиазолидин-3-ил; и

д) Κ₁ представляет собой 5-хлоро;

Κ₁₀ и Κ₁₁ представляют собой Н; и

Κ12 представляет собой 1-оксотиазолидин3-ил.

В пределах вышеупомянутой группы особо предпочтительных соединений находится вторая группа особенно предпочтительных соединений, где

Κ₄ представляет собой фенилметил, тиен2- или -3-илметил, причем указанные кольца К₄ возможно моно- или дизамещены фторо; и

К₁₂ представляет собой тиазолидин-3-ил, 1 -оксотиазолидин-3 -ил, 1,1 -диоксотиазолидин3-ил или оксазолидин-3-ил, либо указанные заместители К₁₂ возможно моно- или дизамещены независимо карбокси, либо (С₁-С₅) алкоксикарбонилом, гидрокси(С₁-С₃)алкилом, амино(С₁-С₃) алкилом либо моно-Ы-или ди-Ы,Ы-(С₁-С₃)алкиламино(С₁ -С₃)алкилом, или

К.|₂ представляет собой моно- или дизамещенный азетидин-1 -ил, либо моно- или дизамещенный пирролидин-1 -ил, либо моно- или дизамещенный пиперидин-1-ил, причем указанные заместители независимо являются карбокси, (С₁-С₅) алкоксикарбонилом, гидрокси(С₁-С₃) алкилом, амино(С₁-С₃)алкилом, моно-Ν- или диΝ,Ν-(^ -С₃)алкиламино(С₁ -С₃)алкилом, гидрокси, (С₁-С₅)алкокси, амино, моно-Ν- или диЫ,Ы-(С₁-С₅)алкиламино, оксо, гидроксиимино или (С₁-С₅)алкоксиимино; и кольца К₁₂ возможно дополнительно моноили дизамещены независимо (С₁-С₅)алкилом.

а) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К₄ представляет собой 4-фторбензил;

К₁₂ представляет собой 4-гидроксипиперидин-1-ил; и углеродный атом (а) имеет (8)стереохимию;

б) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

Кд представляет собой бензил;

К₁₂ представляет собой 3-гидроксипиперидин-1 -ил; и углеродный атом (а) имеет (8)-стереохимию;

в) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К₄ представляет собой бензил;

К₁₂ представляет собой цис-3,4-дигидроксипирролидин-1 -ил; и углеродный атом (а) имеет (8)-стереохимию;

г) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К₄ представляет собой бензил;

К₁₂ представляет собой 3-гидроксииминопирролидин-1 -ил; и углеродный атом (а) имеет (8)-стереохимию;

д) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К₄ представляет собой 2-фторбензил;

К₁₂ представляет собой 4-гидроксипиперидин-1 -ил; и углеродный атом (а) имеет (8)-стереохимию;

е) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К₄ представляет собой бензил;

К₁₂ представляет собой (38,48)-дигидроксипирролидин-1 -ил; и углеродный атом (а) имеет (8)-стереохимию;

ж) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К₄ представляет собой бензил;

К₁₂ представляет собой 3-гидроксиазетидин-1 -ил; и углеродный атом (а) имеет (8)-стереохимию;

з) К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К₄ представляет собой бензил;

К₁₂ представляет собой 3-гидроксииминоазетидин-1 -ил; и углеродный атом (а) имеет (8)-стереохимию; и и К₁ представляет собой 5-хлоро;

К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н;

К₄ представляет собой бензил;

К₁₂ представляет собой 4-гидроксииминопиперидин-1-ил; и углеродный атом (а) имеет (8)-стереохимию.

Второй группой особо предпочтительных соединений в пределах первой группы предпочтительных соединений являются соединения, где

К₄ представляет собой Н, фенил(С₁-С₂)алкил, тиен-2- или -3-ил-(С₁-С₂)алкил, фур-2- или -3-ил-(С₁-С₂)алкил, причем указанные кольца Κ₄моно- или дизамещены независимо Н или фторо;

К₆ представляет собой ί.’(ϋ)ΝΒ_χΒ₉; и

К представляет собой Н, (С₁-С₅)алкил, гидрокси или (С₁-С₄)алкокси; и

К₉ представляет собой Н, цикло (С₄-С₆)алкил, цикло(С₃-С₆)алкил(С₁-С₅) алкил, метиленперфторированный (С₁-С₃)алкил, пиридил, пирролидинил, оксазолил, тиазолил, имидазолил, пиперидинил, бензотиазолил или тиохроманил; или

К₉ представляет собой (С₁-С₅)алкил, причем указанный (С₁-С₅)алкил возможно замещен цикло(С₄-С₆)алкенилом, фенилом, тиенилом, пиридилом, пирролидинилом, оксазолилом, тиазолилом, имидазолилом, пиразолилом, пиперидинилом, морфолинилом, тиоморфолинилом, 1 оксотиоморфолинилом или 1,1-диоксотиоморфолинилом, причем указанный (С1-С5)алкил или (С1-С4)алкокси возможно дополнительно независимо моно- или дизамещен галогено, гидрокси, (С₁-С₅)алкокси, амино, моно-Ν- или диЫ,Ы-(С₁-С₅)алкиламино, циано, карбокси или (С1-С4)алкоксикарбонилом; и при этом кольца К₉ возможно моно- или дизамещены независимо по углероду галогено, (С₁-С₄)алкилом, (С₁-С₄)алкокси, гидрокси, амино, моно-Ν- или ди-Ы,Ы-(С₁-С₄)алкиламино, карбокси, (С1-С5)алкоксикарбонилом или карбамоилом.

В пределах только что представленной второй группы особенно предпочтительных соединений находятся соединения, где

а) Я! представляет собой 5-хлоро;

Яю и Яп представляют собой Н;

Я4 представляет собой бензил;

Я§ представляет собой метил; и

Я₉ представляет собой 3-(диметиламино) пропил;

б) улеродный атом (а) имеет (8)стереохимию;

Я₁ представляет собой 5-хлоро;

Я₁₀ и Я₁₁ представляют собой Н;

Я4 представляет собой бензил;

Я§ представляет собой метил; и Я₉ представляет собой 3-пиридил;

в) углеродный атом (а) имеет (8)стереохимию;

Я₁ представляет собой 5-хлоро;

Я₁₀ и Я₁₁ представляют собой Н;

Я4 представляет собой бензил;

Я§ представляет собой метил; и

Я₉ представляет собой 2-гидроксиэтил; и

г) углеродный атом (а) имеет (8)стереохимию;

Я₁ представляет собой 5-хлоро;

Я₁₀ и Я₁₁ представляют собой Н;

Я₄ представляет собой 4-фторфенилметил;

Я§ представляет собой метил; и

Я₉ представляет собой 2-морфолиноэтил.

Третьей группой особо предпочтительных соединений в пределах первой группы предпочтительных соединений являются соединения, где

Я₄ представляет собой Н, фенил(С₁-С₂) алкил, тиен-2- или -3-ил(С₁-С₂)алкил, фур-2- или -3-ил(С₁-С₂)алкил, причем указанные кольца Я₄моно- или дизамещены независимо Н или фторо;

Я·, представляет собой С(О)Ж_ХЯ₉; и

Я§ представляет собой Н, (С₁-С₅)алкил, гидрокси или (С₁-С₄)алкокси; и

Я₉ представляет собой (С₁-С₄)алкокси, причем указанный (С₁-С₄) алкокси возможно замещен цикло (С₄-С₆)алкенилом, фенилом, тиенилом, пиридилом, пирролидинилом, оксазолилом, тиазолилом, имидазолилом, пиразолилом, пиперидинилом, морфолинилом, тиоморфолинилом, 1-оксотиоморфолинилом или 1,1-диоксотиоморфолинилом, и при этом указанные (С₁С₅)алкил или (С₁-С₄)алкокси возможно дополнительно независимо моно- или дизамещены галогено, гидрокси, (С1-С5)алкокси, амино, моно-Ν- или ди-М,М-(С₁-С₅)алкиламино, циано, карбокси или (С1-С4)алкоксикарбонилом; и при этом кольца Я₉ возможно моно- или дизамещены независимо по углероду галогено, (С1-С4)алкилом, (С1-С4)алкокси, гидрокси, амино, моно-Ν- или ди-Ы,М-(С₁-С₄)алкиламино, (С₁С5)алкоксикарбонилом или карбамоилом.

В пределах только что представленной третьей группы особенно предпочтительных соединений находятся соединения, где

а) Я1 представляет собой 5-хлоро;

Я₁₀ и Я₁₁ представляют собой Н;

Я4 представляет собой бензил;

Я§ представляет собой метил; и

Я₉ представляет собой 2-гидроксиэтокси;

б) углеродный атом (а) имеет (8)стереохимию;

Я1 представляет собой 5-хлоро;

Я₁₀ и Я₁₁ представляют собой Н;

Я₄ представляет собой 4-фторфенилметил;

Я§ представляет собой метил; и

Я9 представляет собой метокси;

в) углеродный атом (а) имеет (8)-стереохимию;

Я1 представляет собой 5-хлоро;

Я₁₀ и Я₁₁ представляют собой Н;

Я4 представляет собой бензил;

Я₈ представляет собой метил; и

Я9 представляет собой метокси.

Вторая группа предпочтительных соединений формулы 1А представляет собой соединения, где

Я₁ представляет собой 5-галогено, 5-метил, 5-циано или трифторметил;

Я10 и Я11 каждый независимо представляет собой Н или галогено;

А представляет собой -С(Н)=;

Я₂ и Я₃ представляют собой Н;

Я₄ представляет собой Н, фенил(С₁-С₂)алкил, тиен-2- или -3-ил(С₁ -С₂)алкил, фур-2- или -3-ил(С₁-С₂)алкил, причем указанные кольца моно- или дизамещены независимо Н или фторо;

Я5 представляет собой Н; и

Я₆ представляет собой (С₁-С₅)алкоксикарбонил.

Третья группа предпочтительных соединений формулы ΙΑ представляет собой соединения, где

Я-₁₀ и Я₁₁ ,каждый независимо, представляет собой Н или галогено;

А представляет собой -С(Н)=;

Я₂ и Я₃ представляют собой Н;

Я4 представляет собой Н, метил или фенил(С1 -С2)алкил, причем указанные фенильные группы моно- или дизамещены независимо Н, галогено, (С₁-С₄)алкилом, (С₁-С₄)алкокси, трифторметилом, гидрокси, амино или циано, и при этом указанные фенильные группы дополнительно моно- или дизамещены независимо Н или галогено; либо

Я₄ представляет собой тиен-2- или -3-ил (С₁-С₂)алкил, пирид-2-, -3- или -4-ил(С₁-С₂) алкил, тиазол-2-, -4- или -5-ил(С₁-С₂)алкил, имидазол-2-, -4- или -5-ил(С1-С2)алкил, фур-2или -3 -ил(С1 -С2)алкил, пиррол-2- или -3-ил(С1С2)алкил, оксазол-2-, -4- или -5-ил(С1-С2)алкил, пиразол-3-, -4- или -5-ил(С1-С₂)алкил, изоксазол-3-, -4- или -5-ил(С₁-С₂)алкил, изотиазол-3-, -4- или -5-ил(С₁-С₂)алкил, пиридазин-3- или -4ил(С₁-С₂)алкил, пиримидин-2-, -4-, -5- или -6ил(С₁-С₂)алкил, пиразин-2- или -3-ил(С₁-С₂)алкил либо 1,3,5-триазин-2-ил(С₁-С₂)алкил, причем указанные выше гетероциклы К₄ возможно моно- или дизамещены независимо галогено, трифторметилом, (С₁-С₄)алкилом, (С₁-С₄)алкокси, амино или гидрокси, и указанные моноили дизаместители присоединены к углероду;

К₅ представляет собой Н; и

Ке представляет собой карбокси.

В пределах третьей группы предпочтительных соединений находится первая группа особо предпочтительных соединений, где К₁₀ и К₁₁ представляют собой Н; и

К₄ представляет собой Н.

Особенно предпочтительным в пределах только что представленной особо предпочтительной группы является соединение, где К₁представляет собой 5-хлоро.

Согласно еще одному аспекту данного изобретения предложен способ лечения млекопитающих с инсулинрезистентными состояниями, при котором млекопитающему с инсулинрезистентным состоянием вводят терапевтически эффективные количества

а) первого соединения, представляющего собой ингибитор альдозоредуктазы; и

б) второго соединения, представляющего собой ингибитор гликогенфосфорилазы.

Предпочтительные инсулинрезистентные состояния, взятые по отдельности или в виде группы, включают в себя диабет, гиперинсулинемию, сниженную толерантность к глюкозе, гипергликемию и/или гиперлипидемию после приема пищи, диабет II типа, изменение состава тела, снижение мышечной массы тела, ожирение (в особенности абдоминальное висцеральное ожирение), гипертензию, дислипидемию (например, повышенные уровни свободных жирных кислот, триглицеридов, ЛОНП (липопротеиды очень низкой плотности) - холестерина и ЛПНП (липопротеины низкой плотности)холестерина и пониженный уровень Л! ПВП (липопротеины высокой плотности) - холестерина, атеросклероз, тканевую ишемию и сердечнососудистые заболевания, ожирение, синдром Х (называемый также метаболическим синдромом), беременность, инфекционные состояния, уремию, гиперадрогенизм, гиперкортизолемию или другие состояния, характеризующиеся избытком адренокортикоидного гормона, акромегалию, избыток гормона роста или поликистозную болезнь яичников.

Особенно предпочтительные инсулинрезистентные состояния, взятые по отдельности или в виде группы, включают в себя дислипидемию, тканевую ишемию, ожирение, поликистозную болезнь яичников, синдром Х и гипертензию. Особенно предпочтительным, в частности, яв ляется диабет. Предпочтительным ингибитором альдозоредуктазы является 3,4-дигидро-4-оксо3-[[5-(трифторметил)-2-бензотиазолил]метил]-1 фталазинуксусная кислота или ее фармацевтически приемлемая соль.

Предпочтительным ингибитором гликогенфосфорилазы являются

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-(2К)-гидрокси-3-((38)-гидроксипирролидин-1 -ил) -3 -оксопропил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-3-((38,48)-дигидроксипирролидин1-ил)-(2К)-гидрокси-3-оксопропил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-((К)-гидроксидиметилкарбамоилметил)-2фенилэтил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-((К)-гидроксиметоксиметилкарбамоил) метил)-2-фенилэтил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-((К)-гидрокси-[(2-гидроксиэтил)метилкарбамоил]метил)-2-фенилэтил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-(3 -гидроксииминопирролидин-1 ил) -2-оксоэтил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [2-(цис-3,4-дигидроксипирролидин-1-ил)-2-оксоэтил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-3 -((цис)-дигидроксипирролидин-1 ил)-(2К)-гидрокси-3-оксопропил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [2-((38,48)-дигидроксипирролидин-1-ил)-2оксоэтил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-(цис-3,4-дигидроксипирролидин1-ил)-2-оксоэтил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [2-(1,1 -диоксотиазолидин-3 -ил)-2-оксоэтил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-(4-фторбензил)-2-(4-гидроксипиперидин1-ил)-2-оксоэтил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-((3К8)-гидроксипиперидин-1ил) -2-оксоэтил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [2-оксо-2-((1К8)-оксотиазолидин-3-ил)этил] амид; или

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-(3 -гидроксиазетидин-1 -ил)-2оксоэтил]амид.

Особенно предпочтительным млекопитающим является, в частности, женщина или мужчина.

Согласно еще одному предпочтительному аспекту предложен способ, при котором первое соединение и второе соединение вводят, по существу, одновременно.

Согласно еще одному аспекту данного изобретения предложена синергическая фармацевтическая композиция для достижения инсу27 линсенсибилизирующего эффекта у млекопитающего, содержащая

а) некоторое количество первого соединения, представляющего собой ингибитор альдозоредуктазы; и

б) некоторое количество второго соединения, представляющего собой ингибитор гликогенфосфорилазы, при этом количество одного только первого соединения и количество одного только второго соединения является недостаточным для достижения инсулинсенсибилизирующего эффекта при введении по отдельности и при этом объединенный эффект данных количеств первого и второго соединений больше, чем сумма инсулинсенсибилизирующих эффектов, достижимых с использованием индивидуальных количеств первого и второго соединения, и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель.

Согласно еще одному аспекту данного изобретения предложен набор, содержащий

а) терапевтически эффективное количество ингибитора альдозоредуктазы и фармацевтически приемлемый носитель в первой стандартной лекарственной форме;

б) терапевтически эффективное количество ингибитора гликогенфосфорилазы и фармацевтически приемлемый носитель во второй стандартной лекарственной форме; и

в) контейнерные средства для вмещения указанных первой и второй лекарственных форм.

Согласно еще одному аспекту данного изобретения предложен синергический способ достижения инсулинсенсибилизирующего эффекта у млекопитающего, характеризующегося инсулинрезистентными состояниями, при котором указанному млекопитающему вводят

б) некоторое количество второго соединения, представляющего собой ингибитор гликогенфосфорилазы, при этом количество одного только первого соединения и количество одного только второго соединения является недостаточным для достижения инсулинсенсибилизирующего эффекта, и при этом объединенный эффект количеств первого и второго соединений больше, чем сумма инсулинсенсибилизирующих эффектов, достижимых с использованием индивидуальных количеств первого и второго соединения.

Согласно еще одному аспекту данного изобретения предложен способ снижения тканевого поражения, являющегося результатом или могущее быть результатом ишемии, при котором млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, вводят терапевтически эффективное количество

а) ингибитора альдозоредуктазы; и

б) ингибитора гликогенфосфорилазы.

Предпочтительные ишемические ткани, взятые по отдельности или в виде группы, представляют собой такие, среди которых ишемической тканью является ткань сердца, головного мозга, печени, почек, легких, кишок, скелетных мышц, селезенки, поджелудочной железы, нервов, спинного мозга, сетчатки, сосудистой системы или кишечная ткань.

Особенно предпочтительной ишемической тканью является ткань сердца.

Комбинацию по данному изобретению предпочтительно вводят с профилактической целью.

Ишемическое поражение, излечимое согласно данному изобретению, может иметь место при трансплантации органов.

Комбинацию по данному изобретению предпочтительно вводят перед хирургическим вмешательством на сердце.

Термин «инсулинрезистентные состояния» относится к состояниям (инсулинрезистентному синдрому или статусу), при которых чувствительность и/или восприимчивость к инсулину в органах, тканях или клетках тела млекопитающего уменьшена по сравнению с нормальным (или инсулинчувствительным) состоянием. Эта резистентность приводит к множественным нарушениям в метаболизме глюкозы, белков и липидов, к дисбалансу электролитов и ионов, и к росту, например, органов, тканей и клеток, что может обнаруживаться в одном или более чем одном следующем случае (но не ограничиваться ими): при гиперинсулинемии, сниженной толерантности к глюкозе (ипрагеб д1иео8е !о1егапсе, ЮТ), гипергликемии и/или гиперлипемии, вызванной приемом пищи, диабете II типа, изменении состава тела, снижении мышечной массы тела, ожирении (в особенности абдоминальном висцеральном ожирении), гипертензии, дислипидемии (например, повышенные уровни свободных жирных кислот, триглицеридов, ЛОНП (липопротеиды очень низкой плотности)холестерина и ЛИНИ (липопротеины низкой плотности)-холестерина и пониженный уровень ЛИВП (липопротеины высокой плотности)холестерина, атеросклерозе, тканевой ишемии и сердечно-сосудистых заболеваниях (Коре1тап апб А1Ьоп, 1997; ОеГгопхо апб Ееттаппшц 1991; Кеауеп, 1991; Ма1т81тот, е! а1., 1997). При инсулинрезистентном состоянии требуется большее количество инсулина для приближения к или для достижения того же самого биологического действия инсулина в органах, тканях или клетках по сравнению с нормальным (или инсулинчувствительным) состоянием, что приводит к необходимости увеличения секреции инсулина поджелудочной железой (ухудшенная гиперинсулинемия) и, в самом крайнем случае, к нарушению функции поджелудочной железы и инсулинонедостаточности, ведущей к диабети ческому состоянию I типа. Инсулинрезистентные состояния могут, например, включать в себя ожирение, синдром Х (называемый также «метаболическим синдромом»), беременность или инфекционные состояния, уремию, гиперадрогенизм, гиперкортизолемию или другие состояния, характеризующиеся избытком адренокортикоидного гормона, акромегалию или избыток гормона роста, поликистозную болезнь яичников или могут быть связаны с более старшим возрастом или со специфическими этническими группами (Коре1тап апб А1Ьои, 1997).

Термин «инсулинсенсибилизирующий эффект» относится к состоянию, при котором ткани пациентов заставляют давать нормальный или лучший чем нормальный биологический ответ на данное количество инсулина.

Термин «снижение» подразумевает частичное предотвращение или предотвращение, которое, хотя и является большим, чем то, которое могло бы иметь место без применения лекарства или при приеме плацебо, но составляет менее чем 100% в дополнение к, по существу, общему предотвращению.

Термин «поражение, являющееся результатом [...] ишемии», который использован здесь, относится к состояниям, непосредственно связанным со сниженным кровотоком к ткани, например вследствие тромба или закупорки кровеносных сосудов, которые доставляют кровь к рассматриваемой ткани, что приводит 1и1ег аба, к понижению переноса кислорода к такой ткани, ухудшению характеристик ткани, тканевой дисфункции и некрозу. С другой стороны, в тех случаях, когда кровоток или перфузия органов может быть количественно адекватной, может быть снижена способность к переносу кислорода кровью или средой для перфузии органа, например в гипоксическом окружении, так что доставка кислорода к указанной ткани понижается, и происходит ухудшение характеристики ткани, тканевая дисфункция и некроз.

Термин «ингибитор альдозоредуктазы» относится к соединениям, которые ингибируют биоконверсию глюкозы до сорбита, катализируемую ферментом альдозоредуктазой.

Термин «ингибитор гликогенфосфорилазы» относится к любому веществу или агенту либо любой комбинации веществ и/или агентов, которые снижают, замедляют или устраняют ферментативное действие гликогенфосфорилазы. Известное к настоящему времени ферментативное действие гликогенфосфорилазы заключается в деградации гликогена посредством катализа обратимой реакции макромолекулы гликогена и неорганического фосфата с образованием глюкозо-1-фосфата и макромолекулы гликогена, на один глюкозильный остаток меньшей исходной макромолекулы гликогена (прямое направление гликогенолиза).

Термин «лечащий», «лечить» или «лечение», который используется здесь, включает, в себя превентивное (например профилактическое) и паллиативное лечение.

Под «фармацевтически приемлемым» имеется в виду то, что носитель, разбавитель, эксципиенты и/или соль должны быть совместимы с другими ингредиентами препарата и быть безвредными для их реципиента.

Выражение «пролекарство» относится к соединениям, являющимся предшественниками лекарства, которые после введения высвобождают данное лекарство ίη νίνο посредством некоторого химического или физиологического процесса (например после перенесения в среду с физиологическим значением рН или благодаря действию фермента пролекарство преобразуется в желаемую лекарственную форму). Например, пролекарства в результате расщепления высвобождают соответствующую свободную кислоту.

Под алкиленом подразумевается насыщенный углеводород (с прямой или разветвленной цепью), в котором от каждого из концевых углеродов удален водородный атом. Примерами таких групп (предполагая, что обозначенная длина охватывает конкретный пример) являются метилен, этилен, пропилен, бутилен, пентилен, гексилен, гептилен.

Под галогено подразумевается хлоро, бромо, иодо или фторо.

Под алкилом подразумевается насыщенный углеводород с прямой цепью или разветвленный насыщенный углеводород. Примерами таких алкильных групп (предполагая, что обозначенная длина охватывает конкретный пример) являются метил, этил, пропил, изопропил, бутил, втор-бутил, третичный бутил, пентил, изопентил, неопентил, третичный пентил, 1 метилбутил, 2-метилбутил, 3-метилбутил, гексил, изогексил, гептил и октил.

Под алкокси подразумевается насыщенный алкил с прямой цепью или разветвленный насыщенный алкил, соединенный через оксигруппу. Примерами таких алкоксигрупп (предполагая, что обозначенная длина охватывает конкретный пример) являются метокси, этокси, пропокси, изопропокси, бутокси, изобутокси, третичный бутокси, пентокси, изопентокси, неопентокси, третичный пентокси, гексокси, изогексокси, гептокси и октокси.

Использованный здесь термин моно-Νили ди-Х,Ы-(С₁-С_х)алкил... относится к (С₁-С_х) алкильной группировке, взятой независимо, когда она представляет собой ди-Х,Ы-(С₁-С_х) алкил... (х обозначает целые числа).

Должно быть ясно, что, если карбоциклическая или гетероциклическая группировка может быть связана или прикреплена иным образом к обозначенному субстрату через различные кольцевые атомы без указания определенной точки присоединения, то подразумеваются все возможные точки присоединения как через атом углерода так, например, и через трехвалентный атом азота. К примеру, термин «пиридил» озна чает, например, 2-, 3- или 4-пиридил, термин «тиенил» означает, например, 2- или 3-тиенил и так далее.

Выражение «фармацевтически приемлемая соль» относится к нетоксичным анионным солям, содержащим такие анионы, как хлорид, бромид, иодид, сульфат, бисульфат, фосфат, ацетат, малеат, фумарат, оксалат, лактат, тартрат, цитрат, глюконат, метансульфонат и 4толуол-сульфонат (но не ограниченные ими). Выражение также относится к нетоксичным катионным солям, содержащим такие катионы, как натрий, калий, кальций, магний, аммоний или протонированный бензатин (Ν,Ν'дибензилэтилендиамин), холин, этаноламин, диэтаноламин, этилендиамин, мегламин (Νметилглюкамин), бенетамин (Ν-бензилфенетиламин), пиперазин или трометамин (2-амино2-гидроксиметил-1,3-пропандиол) (но не ограниченные ими).

Используемые здесь выражения «реакционно-инертный растворитель» и «инертный растворитель» относятся к растворителю или смеси растворителей, которые не взаимодействуют с исходными материалами, реагентами, промежуточными соединениями или продуктами таким способом, который неблагоприятно воздействует на выход желаемого продукта.

Заключенный в скобки знак «минус» или «плюс», использованный здесь, по номенклатуре указывает на направление вращения плоскости поляризованного света для конкретного стереоизомера.

Химик обычной квалификации понимает, что некоторые соединения по данному изобретению будут содержать один или более чем один атом, который может находиться в особой стереохимической или геометрической конфигурации, давая в результате стереоизомеры и конфигурационные изомеры. Все такие изомеры и их смеси охватываются данным изобретением. Также охватываются гидраты и сольваты соединений по данному изобретению.

ДТТ означает дитиотреит. ДМСО означает диметилсульфоксид. ЭДТА означает этилендиаминтетрауксусную кислоту.

Другие признаки и преимущества будут очевидны из описания и формулы, которые описывают изобретение.

Подробное описание изобретения

В общем случае соединения по данному изобретению могут быть получены в соответствии со способами, известными специалистам в области химии, в частности, это может быть сделано в свете содержащегося здесь описания. В качестве еще одного признака изобретения предлагаются некоторые способы производства соединений по данному изобретению, которые иллюстрируются следующими далее реакционными схемами. Другие способы могут быть описаны в экспериментальном разделе.

В качестве соединения (активного агента) по данному изобретению может быть использован любой ингибитор альдозоредуктазы. Термин «ингибитор альдозоредуктазы» относится к соединениям, которые ингибируют биоконверсию глюкозы в сорбит, катализируемую ферментом альдозоредуктазой. Подобное ингибирование без труда может быть определено специалистами в соответствии со стандартными тестами (1. Ма1опе, Ц1аЬе!е8. 22:861-864, 1980. Кеб Се11 8огЬбо1, ап 1пб1са!ог о£ П1аЬебс Соп!го1). Ниже описано и приведено большое число ссылок, касающихся ингибиторов альдозоредуктазы, однако, специалистам будут известны и другие ингибиторы альдозоредуктазы. Ввиду этого, описания патентов США, перечисленных ниже, вводятся посредством ссылки. Кроме того, общие химические названия в соответствии с υδΑΝ или другие указания приведены в круглых скобках, где целесообразно, вместе со ссылкой на соответствующую патентную литературу, описывающую соединение.

Активность ингибитора альдозоредуктазы в ткани может быть определена путем тестирования количества ингибитора альдозоредуктазы, необходимого для снижения тканевого сорбита (то есть путем ингибирования дальнейшего продуцирования сорбита вследствие блокирования альдозоредуктазы), либо снижения тканевой фруктозы (путем ингибирования продуцирования сорбита вследствие блокирования альдозоредуктазы и, как следствие, ингибирования продуцирования фруктозы). Вне связи с какой-либо конкретной теорией или механизмом полагают, что ингибитор альдозоредуктазы в результате ингибирования альдозоредуктазы предотвращает или снижает ишемическое повреждение, как описано здесь далее.

В соответствии с этим, примеры ингибиторов альдозоредуктазы, полезных в композициях и способах по данному изобретению, включают в себя:

1) 3-(4-бром-2-фторбензил)-3,4-дигидро-4оксо-1 -фталазинуксусную кислоту (поналрестат, США 4,251,528);

2) N11 (5-трифторметил)-6-метокси-1 -нафталинил] тиоксометил] -Ν -метилглицин (толрестат, США 4,600,724);

3) 5-[(2,Е)-Р-метилциннамилиден]-4-оксо2-тиоксо-3-тиазолиденуксусную кислоту (эпалрестат, США 4,464,382, США 4,791,126, США 4,831,045);

4) 3-(4-бром-2-фторбензил)-7-хлор-3,4- дигидро-2,4-диоксо-1(2Н)-хиназолинуксусную кислоту (зенарестат, США 4,734,419 и

4,883,800);

5) 2Я,4Я-6,7-дихлор-4-гидрокси-2-метилхроман-4-уксусную кислоту (США 4,883,410);

6) 2Я,4Я-6,7-дихлор-6-фтор-4-гидрокси-2метилхроман-4-уксусную кислоту (США 4,883,410);

7) 3,4-дигидро-2,8-диизопропил-3 -оксо2Н-1,4-бензоксазин-4-уксусную кислоту (США 4,771,050);

8) 3,4-дигидро-3-оксо-4-[(4,5,7-трифтор-2бензотиазолил)метил] -2Н-1,4-бензотиазин-2уксусную кислоту (8РК-210, США 5,252,572);

9) N-[3,5-диметил-4-[(нитрометил)сульфонил] фенил] -2-метилбензолацетамид (ΖΌ5522, США 5,270,342 и США 5,430,060);

10) (8)-6-фторспиро[хроман-4,4'-имидазолидин]-2,5'-дион (сорбинил, США 4,130,714);

11) б-2-метил-6-фтор-спиро(хроман-4',4'имидазолидин)-2',5'-дион (США 4,540,704);

12) 2-фтор-спиро(9Н-флуорен-9,4'-имидазолидин)-2',5'-дион (США 4,438,272);

13) 2,7-дифтор-спиро(9Н-флуорен-9,4'имидазолидин)-2',5'-дион (США 4,436,745, США 4,438,272);

14) 2,7-дифтор-5-метокси-спиро(9Н-флуо- рен-9,4'имидазолидин)2',5'-дион (США

4,436,745, США 4,438,272);

15) 7-фтор-спиро(5Н-инденол[ 1,2-Ь]пиридин-5,3'-пирролидин)2,5'-дион (США 4,436,745, США 4,438,272);

16) б-цис-6'-хлор-2',3'-дигидро-2'-метилспиро(имидазолидин-4,4'-4'-Н-пирано(2,3-Ь) пиридин)-2,5-дион (США 4,980,357);

17) спиро [имидазолидин-4,5'(6Н)-хинолин]-2,5-дион-3'-хлор-7',8'-дигидро-7'-метил-(5'цис) (США 5,066,659);

18) (28,48)-6-фтор-2',5'-диоксоспиро(хроман-4,4'-имидазолидин)-2-карбоксамид (США 5,447,946); и

19) 2-[(4-бром-2-фторфенил)метил]-6фторспиро [изохинолин-4( 1Н),3'-пирролидин]1,2',3,5'(2Н)-тетрон (ΑΚΙ-509, США 5,037,831).

Другие ингибиторы альдозоредуктазы включают в себя соединения, имеющие формулу I

о или их фармацевтически приемлемую соль, в которых

Ζ представляет собой О или 8;

К¹ представляет собой гидрокси или группу, которая может быть удалена ΐπ у1уо с образованием соединения формулы I, в котором К¹представляет собой ОН; и

Х и Υ одинаковые или различные и выбираются из водорода, трифторметила, фторо и хлоро.

Предпочтительная подгруппа в пределах приведенной выше группы ингибиторов альдозоредуктазы включает в себя соединения под номерами 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 10 и 17, а также следующие соединения формулы I:

20) 3,4-дигидро-3 -(5-фторбензотиазол-2илметил)-4-оксофталазин-1 -илуксусную кислоту [К¹⁼гидрокси; Х=Е; Υ=Η];

21) 3-(5,7-дифторбензотиазол-2-илметил)-

3,4-дигидро-4-оксофталазин-1 -илуксусную кислоту [К¹⁼гидрокси; Χ=Υ=Γ];

22) 3 -(5 -хлорбензотиазол-2-илметил)-3,4дигидро-4-оксофталазин- 1 -илуксусную кислоту [К¹⁼гидрокси; Х=С1; Υ=Η];

23) 3 -(5,7-дихлорбензотиазол-2-илметил)-

3,4-дигидро-4-оксофталазин-1 -илуксусную кислоту [К¹⁼гидрокси; Χ=Υ=Ο];

24) 3,4-дигидро-4-оксо-3-(5-трифторметилбензоксазол-2-илметил)фталазин-1 -илуксусную кислоту [К¹⁼гидрокси; Х=СЕ₃; Υ=Η];

25) 3,4-дигидро-3-(5-фторбензоксазол-2илметил)-4-оксофталазин-1 -илуксусную кислоту [К¹⁼гидрокси; Х=Е; Υ=Η];

26) 3 -(5,7-дифторбензоксазол-2-илметил)-

27) 3 -(5 -хлорбензоксазол-2-илметил)-3,4дигидро-4-оксофталазин- 1 -илуксусную кислоту [К¹=гидрокси; Х=С1; Υ=Η];

28) 3 -(5,7-дихлорбензоксазол-2-илметил)-

3,4-дигидро-4-оксофталазин-1 -илуксусную кислоту [К¹⁼гидрокси; Χ=Υ=Ο]; и

29) зополрестат; 3,4-дигидро-4-оксо-3-[[5- (трифторметил)-2-бензотиазолил]метил]-1 фталазинуксусную кислоту [К¹⁼гидрокси;

Х=трифторметил; Υ=Η].

В соединениях 20-23 и 29 Ζ представляет собой 8. В соединениях 24-28 Ζ представляет собой О.

Из указанной выше подгруппы наиболее предпочтительными являются соединения 2029, особенно предпочтительным является соединение 29.

Соединения по настоящему изобретению, являющиеся ингибиторами альдозоредуктазы, легко доступны либо без труда могут быть синтезированы специалистами с использованием традиционных способов органического синтеза, в особенности принимая во внимание наличие подходящих описаний патентных спецификаций.

В качестве второго соединения по данному изобретению может быть использован любой ингибитор гликогенфосфорилазы. Термин «ингибитор гликогенфосфорилазы» относится к любому веществу или агенту либо к любой комбинации веществ и/или агентов, которые снижают, тормозят либо устраняют ферментативную активность гликогенфосфорилазы. Известное в настоящее время ферментативное действие гликогенфосфорилазы заключается в деградации гликогена путем катализа обратимого взаимодействия макромолекулы гликогена с неорганическим фосфатом с образованием глюкозо-1 -фосфата и макромолекулы гликогена, которая на один глюкозильный остаток короче исходной макромолекулы гликогена (прямое направление гликогенолиза). Такие активности без труда могут быть определены специалистами в соответствии со стандартными тестами (например, описанными здесь далее). Большое число таких соединений содержится в следующих заявках РСТ на патенты: публикация заявки РСТ на патент ШО 96/39384 и ШО 96/39385. Однако специалистам будут известны и другие ингибиторы гликогенфосфорилазы.

В общем случае соединения формулы I и ΙΑ могут быть получены в соответствии со способами, известными специалистам в области химии, в частности, это может быть сделано в свете содержащегося здесь описания. В качестве еще одного признака изобретения предлагаются некоторые способы производства соединений формулы I и ΡΑ, которые иллюстрируются следующими далее реакционными схемами.

Схема III

Схема II

Схема V

Схема Х

В соответствии с реакционной схемой I соединения формулы I, в которых Κι, Яш, Кп, А, К₂, К₃, Кд, К₅, Кб и К₇ такие, как определены выше, могут быть получены с помощью любого из двух общих способов. В первом способе желаемое соединение формулы I может быть получено сочетанием соответствующей индол-2карбоновой кислоты формулы I или индолин-2карбоновой кислоты с соответствующим амином формулы III (то есть, посредством ацилирования амина). Во втором способе желаемое соединение формулы I может быть получено сочетанием соответствующего соединения формулы IV (то есть соединения формулы I, в котором Кб является карбокси) с соответствующим спиртом либо амином или спиртом формулы Κ₈Κ₉ΝΗ или Κ_ί2Η, где К₈, К₉ и Κ_ί2 такие, как определены выше (то есть посредством ацилирования амина или спирта).

Обычно соединение формулы II объединяют с соединением формулы III (или соединение формулы IV объединяют с соответствующим амином (например Κ_ί2Η или Κ₈Κ₉ΝΗ)) либо спиртом в присутствии подходящего агента сочетания. Подходящим агентом сочетания является такой агент, который преобразует карбоновую кислоту в реакционноспособное соединение, образующее амидную или эфирную связь при взаимодействии с амином или спиртом, соответственно.

Агент сочетания может представлять собой реагент, который производит эту конденсацию в одну стадию при смешивании карбоновой кислоты с амином или спиртом. В том случае, когда кислоту необходимо сконденсировать со спиртом, предпочтительным является применение большого избытка спирта в качестве реакционного растворителя с добавлением или без добавления от 1,0 до 1,5 эквивалентов диметиламинопиридина. Примерами агентов сочетания являются 1 -(3 - диметиламинопропил)-3 -этилкарбодиимида гидрохлоридгидроксибензотриазол (ΌΕΟ/ΗΒΤ), карбонилдиимидазол, дициклогексилкарбодиимид/гидроксибензотриазол (НВТ), 2-этокси-1 -этоксикарбонил-1 ,2-дигидрохинолин (ΕΕΌΡ), карбонилдиимидазол/НВТ и диэтилфосфорилцианид. Сочетание проводят в инертном, предпочтительно апротонном растворителе, при температуре от приблизительно -20 до приблизительно 50°С в течение от приблизительно 1 до приблизительно 48 ч.

Примеры растворителей включают в себя ацетонитрил, дихлорметан, диметилформамид и хлороформ.

Кроме этого, агентом сочетания может быть агент, превращающий карбоновую кислоту в активированное промежуточное соединение, которое выделяют и/или образуют на первой стадии и приводят во взаимодействие с амином или спиртом на второй стадии. Примерами таких агентов сочетания и активированных промежуточных соединений являются тионилхлорид или оксалилхлорид для образования хлорангидрида, цианурфторид для образования фторангидрида или алкилхлорформиат, такой как изобутил- либо изопропенилхлорформиат (с третичным аминным основанием) для образования смешанного ангидрида карбоновой кислоты. В том случае, когда агентом сочетания является оксалилхлорид, выгодным является применение небольших количеств диметилформамида в качестве сорастворителя с другим растворителем (таким как дихлорметан) для того, чтобы катализировать образование хлорангидрида. Примеры использования таких агентов сочетания и выбора подходящих растворителей и температур известны специалистам либо без труда могут быть найдены в литературе. Эти и другие примерные условия для осуществления сочета ния карбоновых кислот описаны в НоиЬеп-Уеу1, Уо1 XV, рай II, Е. УипксН, Еб., 6. ТНеппе Уег1ад, 1974, 81и1Цаг1. и М. Вобапкку, Рг1пс1р1ск οί Рерйбе 8уп(Нек1к. 8рппдег-Уег1ад Вег1ш 1984, и ТНе Рерйбек. Апа1ук1к, 8уп1кек1к апб Вю1оду (еб. Е. Сгокк апб 1. Ме1епкоГег), уо1к 1-5 (Асабеш1с Ргекк ΝΥ 1979-1983).

Соединения формулы IV, в которых Я₁, Я10, Я11, А, Я2, Я3, Я4, Я5 и Я7 такие, как определены выше, могут быть получены из соответствующего сложного эфира формулы V (то есть соединений формулы I, в которых Я, представляет собой (С₁-С₅)алкоксикарбонил или бензилоксикарбонил), путем гидролиза водной щелочью при температуре от приблизительно -20 до приблизительно 100°С, обычно при температуре приблизительно 20°С, в течение от приблизительно 30 мин до приблизительно 24 ч.

С другой стороны, соединения формулы IV получают активированием индолкарбоновой кислоты формулы II агентом сочетания (как описано выше), в результате чего получают активированное промежуточное соединение (такое как хлорангидрид, фторангидрид или смешаный ангидрид), которое далее приводят во взаимодействие с соединением формулы III, в котором Я3, Я4, Я5 и Я7 такие, как описаны выше, а Я6 является карбокси, в подходящем растворителе в присутствии подходящего основания. Подходящие растворители включают в себя воду или метанол либо их смесь совместно с сорастворителем, таким как дихлорметан, тетрагидрофуран или диоксан. Подходящие основания включают в себя гидроксиды натрия, калия или лития, бикарбонат натрия или калия, карбонат натрия или калия, либо карбонат калия совместно с бромидом тетрабутиламмония (1 эквивалент) в количестве, достаточном для связывания выделяющейся в реакции кислоты (в общем случае в количестве, достаточном для поддержания рН реакционной смеси выше 8). Для достижения надлежащего контроля за значением рН реакции основание можно добавлять по возрастающей с активированным промежуточным соединением. В общем случае взаимодействие проводят в температурном интервале от -20 до 50°С. Методики выделения приспосабливаются специалистами для удаления примесей, но в общем случае заключаются в удалении путем упаривания смешивающихся с водой сорастворителей, экстракции примесей при высоких значениях рН с помощью органического растворителя, подкислении до низких значений рН (1-2) и фильтровании либо экстракции желаемого продукта подходящим растворителем, таким как этилацетат или дихлорметан.

Соединение формулы V может быть получено сочетанием подходящего соединения формулы III, в котором Я, представляет собой алкоксикарбонил, и подходящего соединения формулы II аналогично описанной выше методике (например методике А).

С другой стороны, соединения формулы I, которые содержат атомы серы в состоянии окисления, соответствующем сульфоксиду или сульфону, могут быть получены из соответствующих соединений формулы I, содержащих атом серы в неокисленной форме, путем обработки подходящим окисляющим агентом, таким как м-хлорпероксибензойная кислота в дихлорметане, при температуре от приблизительно 0 до приблизительно 25°С в течение от приблизительно 1 до приблизительно 48 ч с использованием от приблизительно 1 до приблизительно 1,3 эквивалента для превращения в состояние окисления, соответствующее сульфоксиду, и более чем приблизительно 2 эквивалентов для превращения в состояние окисления, соответствующее сульфону.

С другой стороны, соединения формулы I, моно- или диалкилированные по Я5-аминоалкокси, могут быть получены из соответствующего соединения формулы I, в котором Я₅ представляет собой аминоалкокси, в результате моноалкилирования или диалкилирования Я₅амина с получением желаемого соединения формулы I. Такое моно- или диалкилирование может быть проведено обработкой Я₅аминоалкоксисоединения 1 эквивалентом соответствующего карбонильного соединения (для моноалкилирования) либо более чем 2 эквивалентами соответствующего карбонильного соединения (для диалкилирования) и подходящим восстанавливающим агентом в подходящем растворителе. Подходящие условия восстановления включают в себя цианборгидрид натрия или боргидрид натрия в метаноле или этаноле, либо водород/катализатор гидрирования (такой как палладий на угле) в полярном растворителе, таком как вода, метанол или этанол, при температуре от приблизительно 0 до 60°С в течение от 1 до 48 ч.

С другой стороны, соединения формулы I, в которых Я₅ представляет собой алканоилокси (ЯСОО-), получают в результате О-ацилирования соответствующего соединения формулы I соответствующим хлорангидридом или другим активированным кислым производным в присутствии, при необходимости, подходящего основания (например третичного аминного основания, такого как триалкиламин или пиридин), предпочтительно в апротонном растворителе, таком как тетрагидрофуран или дихлорметан, при температуре от приблизительно 0 до приблизительно 50°С в течение от приблизительно 0,5 до приблизительно 48 ч.

С другой стороны, соединения формулы I, в которых Я₅ и Я₇ вместе образуют оксогруппу, получают окислением соответствующего соединения формулы I, например в котором Я₅ является гидрокси, а Я₇ представляет собой Н, подходящим окисляющим агентом. Примеры окисляющих агентов включают в себя реагент Десса-Мартина (Оекк-Магйп) в дихлорметане, кар бодиимид, диметилсульфоксид и кислый катализатор (условия Пфицнера-Моффета (РГНхпегМоГГа!) или их модификации, такие как применение водорастворимого карбодиимида), либо реакции типа реакций Сверна (8\\егп) (например оксалилхлорид/ДМСО/триэтиламин). Соединения формулы I, имеющие другую чувствительную к окислению функциональную группу, могут быть использованы при осуществлении введения и снятия соответствующей защиты такой функциональности.

Например, на реакционной схеме I некоторые соединения формулы I содержат функциональность первичного амина, вторичного амина или карбоновой кислоты в части молекулы, определяемой группировками К5 или К6, которая может мешать намеченному ходу реакции сочетания согласно реакционной схеме I в том случае, когда промежуточное соединение формулы III или амин К₁₂Н либо К₈К<ХН оставлены незащищенными. В соответствии с этим функциональность первичного или вторичного амина может быть защищена в том случае, когда она присутствует в К₅ или К₆-группировках промежуточного соединения формулы III, либо в амине (Κ₈Κ₉NН или К₁₂Н), подходящей защитной группой в продолжение реакции сочетания по реакционной схеме I. Продуктом такой реакции сочетания будет являться соединение формулы I, содержащее защитную группу. Эту защитную группу удаляют на следующей стадии, получая соединение формулы I. Подходящие для защиты амина и карбоновой кислоты защитные группы включают в себя защитные группы, широко используемые в пептидном синтезе (такие как Νтрет-бутоксикарбонил, Ν-карбобензилокси и 9флуоренилметиленоксикарбонил для аминов и низшие алкиловые или бензиловые сложные эфиры для карбоновых кислот), которые не являются химически реакционноспособными в описанных выше условиях сочетания (и непосредственно предшествующих здесь примерам, представленным в виде методики А) и могут быть удалены без химического изменения других функциональностей в соединении формулы I.

В том случае, когда исходные индол-2карбоновые кислоты и индолин-2-карбоновые кислоты, используемые в реакционной схеме I, невозможно приобрести либо о них ничего не известно из ранее опубликованной литературы (подобная информация широко публикуется), они могут быть получены с помощью общепринятых методов синтеза. Например, в соответствии с реакционной схемой II, индольный эфир формулы VII может быть получен из соединения формулы VI (в котором О выбирается так, чтобы достичь желаемой А, описанной выше) посредством индольного синтеза Фишера (смотри Т11С ЕЬеНсГ Мок 8уП111С515 КоЬ1П8ОП, В. (Шйеу, Νο\ν Уогк, 1982)) с последующим омылением полученного индольного эфира форму лы VII и получением соответствующей кислоты формулы VIII. Исходный арилгидразон может быть получен путем конденсации легко доступного гидразина с подходящим карбонильным производным либо посредством реакции ЯппаКлингемана (1арр-К1тдетап) (смотри Огдашс Кеас!юпк. РЫШрк, К.К., 1959, 10, 143).

С другой стороны, индол-2-карбоновая кислота формулы УША может быть получена путем конденсации ортометилнитросоединения формулы IX с оксалатом (эфиром) с образованием индольного эфира формулы Х и последующим восстановлением нитрогруппы и гидролизом.

Этот трехстадийный процесс известен как индольный синтез Рейсерта (КетеП) (КетеП С11еш15с11е ВепсЫе 1897, 30, 1030). Условия выполнения этой последовательности и ссылки на нее имеются в литературе (Кегтаск, е! а1., 1. СЬет. 8ос. 1921, 119, 1602; Саппоп е! а1., 1. Меб. Скет. 1981, 24, 238; 1и11ап, е! а1 т НекгосусШ Сотроипбк, уо1 3 (ШШеу, №\ν Уогк, ΝΥ, 1962, К.С. Е1бегПе1б. еб.) р 18). Здесь примером специфического выполнения этой последовательности являются примеры 10А-10С.

3-Галогено-5-хлор-1Н-индол-2-карбоновые кислоты также могут быть получены галогенированием 5-хлор-1Н-индол-2-карбоновых кислот.

С другой стороны (по реакционной схеме

II) , замещенные индолины формулы XIV могут быть получены восстановлением соответствующих индолов формулы XV восстанавливающим агентом, таким как магний в метаноле, при температуре от приблизительно 25 до приблизительно 65°С в течение от приблизительно 1 до приблизительно 48 ч (реакционная схема

III) .

Индолинкарбоновые кислоты формулы XVI получают омылением соответствующего сложного эфира формулы XVII (реакционная схема III).

Соединение формулы XVII получают восстановлением соответствующего индольного эфира формулы VII восстанавливающим агентом, таким как магний в метаноле, как описано выше для превращения соединения формулы XV в соединение формулы XIV.

В следующих далее параграфах описывается, как получить разнообразные амины, используемые в приведенных выше реакционных схемах.

В соответствии с реакционной схемой IV соединения формулы XXII (амины формулы III из реакционной схемы I, в которых К₅ представляет собой ОН, К₇ является Н, а К₆ является эфиром) или соединения формулы XXVI (Кб представляет собой С(О)NΚ₈Κ9 или С(О)К₁₂) получают, начиная с Ν-защищенного (обозначенного Р_т) альдегида формулы XX. Альдегид формулы XX или аддукт бисульфита натрия альдегида формулы XX обрабатывают циани43 дом калия или натрия в водном растворе с сорастворителем, таким как диоксан или этилацетат, при температуре от приблизительно 0°С до приблизительно 50°С, получая циангидрин формулы XXI. Циангидрин формулы XXI обрабатывают спиртом (например (С₁-С₆)алканолом, таким как метанол) и сильным кислотным катализатором, таким как хлористый водород, при температуре от приблизительно 0 до приблизительно 50°С с последующим добавлением воды, при необходимости. Защитную группу (Р_т), если она еще присутствует, затем удаляют с помощью подходящего метода снятия защиты, получая соединение формулы XXII. Например, если Ν-защитная группа Р_т формулы XX является трет-бутоксикарбонилом (ΐ-Вос), соединение формулы XXIII непосредственно образуется из соединения формулы XXI, и добавление воды не является необходимым. Соединение формулы XXII может быть защищено по азоту подходящей защитной группой с образованием соединения формулы XXIII с последующим гидролизом сложного эфира с помощью водной щелочи при температуре от приблизительно 0 до приблизительно 50°С в реакционноинертном растворителе, в результате чего получается соответствующая оксикислота формулы XXIV. Соединение формулы XXIV сочетают (аналогично методике способа сочетания, представленной на реакционной схеме I) с подходящим амином Κ._χΚ.₉ΝΗ или НЯ₁₂ с образованием соединения формулы XXV, с которого затем снимают защиту, получая соединение формулы XXVI (например соединение формулы III, в котором Я представляет собой ОН, Я- является Н, и Я₆ является С(О)Я₁₂ или Ο(Θ)ΝΚ₈Β₉. Пример превращения циангидрина формулы XXI в соответствующий метиловый эфир формулы XXII с удалением ΐ-Вос-защитной группы представлен в РСТ-публикации ^Θ/9325574 в примере 1а. Другие примеры, в которых циангидрин превращают в низшие алкиловые эфиры формулы XXIII, могут быть найдены в патенте США 4,814,342 и ЕРО публикации 0438233.

Некоторые соединения формулы I являются стереоизомерами в силу стереохимической конфигурации при атомах углерода, обозначенных а и Ь. Специалист может получить промежуточные соединения формулы XXII и формулы XXVI с желаемой стереохимией в соответствии с ракционной схемой IV. Например, альдегид формулы XX в соответствии с изложенными далее литературными данными (смотри реакционную схему V) доступен в любой энантиомерной форме (стереохимия при а). Циангидрин формулы XXI может быть получен из соединения формулы XX в результате обработки цианидом натрия или калия, как описано выше, с поддержанием стереохимии при атоме углерода а и получением смеси стереоизомеров при атоме углерода Ь.

Для разделения изомеров или очистки одного изомера специалист в области химии может использовать на этой стадии кристаллизацию.

Например, получение соединения формулы XXI, в котором Р_т представляет собой Вос, Я₃ является Н, Яд представляет собой бензил, а стереохимия при атомах углерода а и Ь является соответственно (8) и (Я), с использованием этого пути совместно с очисткой перекристаллизацией описано в ВюсбетШгу 1992, 31, 81258141.

С другой стороны, разделение изомеров может быть достигнуто благодаря использованию методик хроматографии или перекристаллизации после превращения соединения формулы XXI (смесь изомеров) в соединение формулы XXII, XXIII, XXIV, XXV, XXVI, V, IV или I посредством применения описанных здесь методик и/или последовательностей (реакций). Промежуточные соединения формулы XXI со специфической стереохимией при атомах углерода а и Ь превращают в промежуточные соединения формулы XXII с сохранением этой стереохимии путем обработки спиртом и сильным кислотным катализатором, при необходимости с последующим добавлением воды, как описано выше.

С другой стороны, желаемый изомер соединения формулы XXI может также быть получен путем дериватизации промежуточного соединения формулы XXI и хроматографического разделения диастереомерных производных (например получения О-ТМ8- или ОΤΒΌΜδ-производных с помощью триметилсилилхлорида (ТМ8) или трет-бутилдиметилсилилхлорида (ΤΒΌΜ8)). Силильное производное промежуточного соединения формулы XXI, обладающее единственной стереоизомерной формой при атомах углерода а и Ь, превращают с сохранением стереохимии в промежуточное соединение формулы XXII (если силильная группа не удаляется на этой стадии, ее удаляют впоследствии с помощью соответствующего способа, такого как обработка фторидом тетрабутиламмония в тетрагидрофуране), применяя способ, описанный ранее для превращения соединения формулы XXI в соединение формулы XXII.

В соответствии с реакционной схемой V альдегиды формулы XX (исходные материалы для реакционной схемы IV) получают из соответствующих аминокислот формулы XXX. Аминокислоты формулы XXX защищают по азоту с помощью защитной группы (Р_т) (такой как Вос). Защищенное соединение этерифицируют спиртом и превращают в сложный эфир, предпочтительно метиловый или этиловый эфир соединения формулы XXXI. Это может быть осуществлено путем обработки соединения формулы XXX метил- или этилиодидом в присутствии подходящего основания (например

К₂СО₃) в полярном растворителе, таком как диметилформамид. Соединение формулы XXXI восстанавливают, например гидридом диизобутилалюминия в гексане или толуоле либо их смеси, при температуре от приблизительно -78°С до приблизительно -50 °С с последующей остановкой реакции метанолом при -78°С, как описано в 1. Меб. Сйет., 1985, 28, 1779-1790, с образованием альдегида формулы XX. С другой стороны (не показано на реакционной схеме V), аналогичные Ν-метоксиметиламиды, соответствующие соединению формулы XXXI, в которых спиртовой заместитель сложного эфира заменен на МОМе)Ме. образуются из соединения формулы XXX, Ν,Ο-диметилгидроксиламина и подходящего агента сочетания (например гидрохлорида 1 -(3 -диметиламинопропил)3-этилкарбодиимида (БЕС)). Полученное соединение восстанавливают, например с помощью алюмогидрида лития в реакционноинертном растворителе, таком как эфир или тетрагидрофуран, при температуре от приблизительно 0 до приблизительно 25°С с образованием альдегида формулы XX. Этот двустадийный способ является общим для превращения Ν-защищенных а-аминокислот в альдегиды формулы XX (ЕейгегИх апб Саз!го, 8уп1йез1з 1983, 676-678).

С другой стороны, альдегиды формулы XX могут быть получены окислением защищенных аминоспиртов формулы XXXIII, например, с помощью пиридин-8О₃, при температуре от приблизительно -10 до приблизительно 40°С в реакционноинертном растворителе, предпочтительно диметилсульфоксиде. В том случае, когда защищенные аминоспирты формулы XXXIII не могут быть приобретены, они могут быть получены посредством введения защиты в аминоспирты формулы XXXII. Аминоспирты формулы XXXII получают восстановлением аминокислот формулы XXX. Это восстановление осуществляют путем обработки соединений формулы XXX алюмогидридом лития в соответствии с методикой, описанной Бюктап е! а1., Отдашс 8уп1йез1з; ^Шеу: Νονν Уогк, 1990; Со11ес! νοί. VII, р 530, или серной кислотойборгидридом натрия в соответствии с методикой АЬ1ко и Мазатипе, Те1гайебгоп Ьей. 1992, 333, 5517-5518, либо боргидридом натрияиодом в соответствии с методикой МсКеппоп и Меуегз, 1. Огд. Сйет. 1993, 58, 3568-3571; этими авторами также дан обзор других подходящих методик превращения аминокислот формулы XXX в аминоспирты формулы XXXII.

В соответствии с реакционной схемой VI соединения формулы XXX, используемые в реакционной схеме V, могут быть получены следующим образом. Аминокислоты формулы УЫ могут быть получены путем Ν-алкилирования защищенных (Р_т) аминокислот формулы X^ в результате обработки соответствующим основанием и алкилирующим агентом. Специфические методики этого алкилирования известны (Вепойоп, Сап. 1. Сйет. 1977, 55, 906-910 и Напзеп, 1. Огд. Сйет. 1985, 50, 945-950). Например, когда К₃ представляет собой метил, применяют гидрид натрия и йодистый метил в тетрагидрофуране. Снятие защиты с соединения формулы X^I дает желаемое соединение формулы XXX.

С другой стороны, аминокислоты формулы X^II могут быть Ν-алкилированы последовательно в три стадии, включающие восстановительное бензилирование (например с помощью бензальдегида, Рб/С-катализируемого гидрирования), с получением моно-Л-бензильного производного и восстановительное аминирование соответствующим ацилсоединением (например формальдегидом и цианборгидридом натрия для введения К₃ в виде метила) с получением Ν-бензил, Л-К₃-замещенной аминокислоты. Ν-Бензильную защитную группу удобным образом удаляют (например гидрированием с подходящим катализатором) с получением соединения формулы XXX. Специфические условия для этой трехстадийной методики алкилирования описаны в Ке1ийо1б е! а1., 1. Меб. Сйет., 1968, 11, 258-260.

Кроме этого, для получения промежуточного соединения формулы X^V (которое представляет собой промежуточное соединение формулы III, где К₇ является ОН) может быть непосредственно использован предшествующий этап введения группировки К3 в промежуточное соединение формулы X^IV. Непосредственно предшествующий этап также может быть использован для введения группировки К₃ в промежуточное соединение формулы 111а (которое представляет собой промежуточное соединение формулы III, где К₃ является Н).

В том случае, когда используемых в приведенных здесь схемах аминокислот (например X^, X^II) нет в продаже или о них отсутствуют литературные данные, они могут быть получены разнообразными известными специалистам способами. Например, может быть применен синтез Стрекера (81гескег) или его варианты. Соответственно, альдегид (К₄СНО), цианид натрия или калия и хлорид аммония взаимодействуют с образованием соответствующего аминонитрила. Аминонитрил гидролизуют минеральной кислотой с образованием желаемой аминокислоты формулы X^II (К₄С(NН₂)СООН). С другой стороны, может быть использован способ Бухерера-Берга (Висйегег-Вегд), в котором в результате нагревания альдегида (К4СНО) с карбонатом аммония и цианидом калия образуется гидантоин, который далее гидролизуют (например с помощью гидроксида бария в диоксане при температуре дефлегмации) кислотой или основанием с образованием желаемой аминокислоты формулы X^II (1ТС(УН_;)СОО11).

Кроме этого, в литературе имеются данные о других способах синтеза а-аминокислот, которые могут позволить специалисту получить желаемое промежуточное соединение формулы

ХЬП (Κ.·|ί'’(ΝΗ₂)ί'ΌΟΗ). необходимое для синтеза соединений формулы I.

Подходящие способы синтеза или разделения соединений формулы ХЬП имеются в обзорах, написанных Ои111а1ег (Те1гаЕебгоп 1994, 50, 1539-1650) или ^1Шат8 (Κ.Μ. ^1Шат8, 8уп1Ее818 оГ орбсаПу асйуе атто аскез. Регдатоп: ОхГогб, и.К., 1989).

Специфическим способом синтеза промежуточного соединения формулы ХЬП в любой энантиомерной форме из соответствующего промежуточного соединения К₄Х (Х=С1, Вг или I) является методика Р1ггипд и КпзЕиатийЕу (1. Огд. СЕет. 1993, 58, 957-958) или методика О'БоппеИ, е! а1. (1. Ат. СЕет. 8ос. 1989, 111, 2353-2355). Необходимые Я₄Х-промежуточные соединения без труда получают с помощью многих, известных специалистам в области химии способов. Например, те соединения, в которых К₄Х представляет собой АгСН₂Х, могут быть получены радикальным галогенированием соединения АгСН₃ или путем образования арена Аг-Н и превращения спирта в бромид.

Другим специфическим способом синтеза промежуточных соединений формулы ХЬП в любой энантиомерной форме является способ Кори и Линка (Согеу апб Ыпк, 1. Ат. СЕет. 8ос. 1992, 114, 1906-1908). Так, промежуточное соединение формулы Я₄СОСС1₃ энантиоспецифически восстанавливают до промежуточного соединения Я₄СН(ОН)СС1₃, которое превращают в результате обработки азидом или основанием в промежуточное соединение ^СНЩДСООН, которое восстанавливают каталитическим гидрированием до желаемого соединения формулы ХЬП. Необходимый трихлорметилкетон И₄СОСС1₃ получают путем взаимодействия альдегида И₄СНО с трихлорметиданионом с последующим окислением (СаШпа апб Сюгбапо, 8уп1Ее818 1989, 466-468).

Промежуточные амины формулы III (используемые в реакционной схеме I), в которых Κ₅ и Κ₇ представляют собой Н, могут быть получены в соответствии с реакционной схемой VII. Аминокислоту формулы Ь (необходимым образом защищенную (Р_т)) активируют путем превращения в хлорангидрид, фторангидрид или смешаный ангидрид (например с помощью изобутилхлорформиата и триэтиламина в инертном растворителе, таком как тетрагидрофуран или диоксан, при температуре от приблизительно 0°С до приблизительно -40°С) и активированное промежуточное соединение обрабатывают диазометаном с получением диазокетона формулы ЬТ Для получения сложного эфира формулы ЬП диазокетон формулы Ы обрабатывают спиртом (ИОН) (например (С₁-С₆)алканолом, таким как метанол) и подходящим катализатором, таким как теплота, оксид серебра или бензоат серебра. С эфира формулы ЬП снимают защиту, получая соединение формулы ША (посредством перегруппировки Вольфа (\Уо1ГГ)). С другой стороны, эфир формулы ЬП гидролизуют, например, щелочью и сочетают с подходящим амином (И₁₂Н или ΗΝΚ₈Κ₉), получая соединение формулы ШВ, как описано ранее.

В соответствии с реакционной схемой VIII промежуточные амины формулы III, в которых Κ5 представляет собой кислородсвязанный заместитель (например алкокси) (используются в реакционной ссхеме I), могут быть получены следующим образом. Соединение формулы Ь-Х! алкилируют по кислороду путем обработки соответствующим алкилирующим агентом (например алкилиодидом, алкилбромидом, алкилхлоридом или алкилтозилатом) и нужным основанием (гидридом натрия или калия) для образования алкоксида в подходящем полярном апротонном растворителе (например диметилформамиде или тетрагидрофуране) при температуре от приблизительно 0 до приблизительно 150°С с получением соединения формулы ЬХП. С соединения формулы ЬХП снимают защиту, что позволяет получить желаемый промежуточный амин.

Промежуточные амины формулы III, в которых И₅ представляет собой (С₁-С₆)алкоксикарбонилалкокси (используются в реакционной схеме I), могут быть получены следующим образом. Соединение формулы ^XI алкилируют с помощью галогено-алканоатного эфира для образования соединения формулы ЬХШ, с которого далее снимают защиту с образованием желаемого амина. Соответствующая кислота может быть получена гидролизом эфира с использованием водной щелочи в подходящем растворителе. Те амины формулы III, в которых Ее содержит сложный эфир, и Κ₅ содержит карбокси, могут быть получены из амина формулы ЬХШ (как получают выше в этом параграфе), в котором Κ5 содержит функциональность карбоновой кислоты, защищенную в виде третбутилового эфира, путем обработки безводной кислотой с получением соответствующей кислоты при Κ5 без гидролиза сложного эфира в положении И₆. Соединения формулы ^XV! (промежуточные амины формулы III, в которых Κ₅ представляет собой защищенный аминоалкокси) могут быть получены из соединения формулы ЬХТ Соединение формулы ^XI алкилируют галогено-алканонитрилом с образованием соединения формулы ЬХ^. Соединение формулы ЕШV восстанавливают до первичного амина путем обработки водородом и соответствующим катализатором (например родием-наугле) в присутствии аммиака в предпочтительно полярном, протонном растворителе, таком как вода, метанол или этанол, получая первичный амин формулы ΕΚν. Соединение формулы ΕΚν защищают по азоту защитной группой (Р_т1), которая ортогональна другой защитной группе (Рт), с последующим снятием защитной группы Рт и получением желаемого соединения формулы III. Защищенное соединение формулы III сочетают с соответствующим соединением формулы II и с полученного соединения формулы I снимают защиту.

Соединения формулы ЬХШ и ЬХШ, в которых η равно двум, предпочтительно получают обработкой соединения формулы ЬХ! избытком акрилатного эфира или акрилонитрила, соответственно, в присутствии подходящего основания, такого как гидроксид калия или натрия, в подходящем растворителе, предпочтительно полярном протонном растворителе.

В соответствии с реакционной схемой IX соединения формулы ЬХУП и формулы ЬХБХ (соединения формулы III, в которых В₅ представляет собой Е, либо В₅ и В₇ обе являются Е) могут быть получены из соединения формулы БХГ Соединение формулы ^XI обрабатывают подходящим фторирующим агентом, таким как трифторид диэтиламиносеры, в реакционноинертном растворителе, таком как апротонный растворитель, предпочтительно дихлорметан, с образованием соединения формулы БХУП. С соединения формулы БХУП без труда снимают защиту.

Соединение формулы ^XI окисляют до соединения формулы БХУШ, используя описанные выше условия для получения соединений формулы I, в которых В₅ и В₇ вместе образуют оксо. Соединение формулы БХУШ дифторируют в подходящих условиях (например трифторидом диэтиламиносеры в дихлорметане).

В соответствии с реакционной схемой Х соединение формулы БХХШ или соединение формулы БХШ, в которых В₇ является алкилом (то есть соединение формулы III, в котором В₇является алкилом), получают из соединения формулы БХХ (смотри также реакционную схему V для аналогичного получения амина). Соединение формулы БХХ обрабатывают органометаллическим реагентом В₇М и полученный вторичный спирт окисляют так же, как и непосредственно предшествующем параграфе, с образованием соединения формулы БХХЕ Соединение формулы ^XXI превращают через циангидрин формулы БХХП в соединение формулы БХХШ, используя те же самые условия, которые используют для превращения соединения формулы XXI в соединение формулы ХХП на реакционной схеме IV.

С другой стороны, соединение формулы БХХП превращают в соединение формулы БХШ так, как представлено для превращения промежуточного цианосоединения в амид на реакционной схеме V.

Соединение формулы Β₈ΝΗ₂ или Κ₉ΝΗ₂моноалкилируют с помощью карбонильного соединения, соответствующего В₈ или В₉, соответственно, в подходящих условиях восстановительного аминирования, получая амин формулы Κ₈Κ₉ΝΗ₂. Для того, чтобы избежать диалкилирования, предпочтительной может являться защита аминов (Κ₈ΝΗ₂ или Κ₉ΝΗ₂) подходящей защитной группой Р_т, с получением К₈(Р_т)ИН или К₉(Р_т)ИН, например в результате взаимодействия с бензальдегидом и восстанавливающим агентом. Защищенные амины моноалкилируют карбонильным соединением, соответствующим В₈ или В₉, соответственно, в подходящих условиях восстановительного аминирования, с получением Β₈Β₉Ν(Ρ_τ). Защитную группу (Р_т) удаляют (например исчерпывающим каталитическим гидрированием, когда Рт представляет собой бензил) с получением соединения формулы Κ₈Κ₉ΝΗ. Соответствующие условия восстановительного аминирования специалистами могут быть найдены в литературе. Эти условия включают в себя условия, о которых сообщается Вогск е! а1. (1. Ат. Скет. 8ос. 1971, 2897-2904), и которые приведены в обзорах Етегаоп (Огдашс Кеасйопк, \УП1еу: №\ν Уогк, 1948 (14), 174), ИШсккъ е! а1. (Огд. Ргер. Ргосеб. Ш!. 1979 (11), 20 и Гапе е! а1. (Зупйеяз 1975, 135). Условия восстановительного аминирования, благоприятствующие Ν-моноалкилированию, включают в себя условия, о которых сообщалось Мога1е§ е! а1. (ЗуШкекс Соттишсайопк 1984, 1213-1220) и Уегагбо е! а1. (8уп1кем5 1992, 121-125). Амины Β₈ΝΗ₂ или Β₉ΝΗ₂, кроме этого, могут быть моноалкилированы с помощью В₉Х или В₈Х, соответственно, где Х представляет собой хлорид, бромид, тозилат или мезилат. С другой стороны, промежуточное соединение формулы Β₈(Ρ_τ)ΝΗ или Κ.₉(Р_т)NН может быть алкилировано с помощью В₉Х или К₈Х. а защитная группа удалена с получением соединения формулы Κ₈Κ₉,ΝΗ.

Для получения аминов формулы Β₈Β₉ΝΗ, в которых Β₈-ΝΗ или Β₉-ΝΗ соединены связью кислород-азот, могут быть использованы дополнительные способы. Так, легко доступное соединение формулы (С_£-С₄)алкоксикарбонилΝΗΟΗ или ΝΗ₂ΟΟΝΗΟΗ диалкилируют по азоту и кислороду путем обработки основанием и избытком подходящего алкилирующего агента (В-Х) с получением соответствующего (С₁-С₄) алкоксикарбонил-^В)ОВ, которое далее гидролизуют, получая соединение формулы Β₈Β₉ΝΗ (где В₈=В₉=В). Подходящие условия, основание и алкилирующий агент включают в себя описанные Сое1 и Кго11§ (Огд. Ргер. Ргосеб. Ш!. 1987, 19, 75-78) и Ма)ог и Е1еск (1. Ат. Скет. 8ос. 1928, 50, 1479). С другой стороны, амин формулы ΝΗ_;ΟΟΝΗ(ΟΗ) может быть последовательно алкилирован сначала по кислороду с получением ΝΗ^ΟΝΗ(ΟΒ'), затем по азоту с получением ΝΗ_;ΟΟΝ(Κ)(ΟΚ') в результате последовательной обработки алкилирующими агентами В'Х и ВХ, соответственно, в присутствии подходящего основания. Подходящее основание и алкилирующие агенты включают в себя описанные КгеШхкатр и Мекыпдег (Скет. Вег. 100, 3463-3465 (1967)) и Сапен е! а1 (1. Ат. Скет. 8ос. 1973, 95, 5716-5724). Гидролиз этих алкилированных производных гидроксимочеви51 ны позволяет получить амины Κ'ΟΝΗ₂ и Κ'ΟΝΗΚ, которые соответствуют конкретным аминам формулы К.₈К.₂₉ЫН. Специалист в области химии может адаптировать методики, описанные в этом параграфе, к алкилирующим агентам К-, К'- и К-Х для получения других аминов формулы Κ₈Κ₉ΝΗ, в которых Κ₈-Ν или Κ₉-Ν соединены связью кислород-азот. ипо е! а1. (8уиЬей 1991, 559-560) описывают катализируемое ВЕ₃ добавление органометаллического реагента К-Ы к О-алкилоксиму формулы Κ'ΟΗ=Ν-ΟΚ с получением соединений формулы Κ'ΚΟΗ-ΝΗ(ΟΚ). Этот путь также может быть использован для получения соединений формулы Κ₈Κ₉ΝΗ, в которых один из Κ₈-ΝΗ или Κ₉-ΝΗ соединены связью кислород-азот.

Пролекарства по данному изобретению, в которых карбоксильная группа в карбоновой кислоте формулы I заменена сложным эфиром, могут быть получены объединением карбоновой кислоты с соответствующим алкилгалогенидом в присутствии основания, такого как карбонат калия, в инертном растворителе, таком как диметилформамид, при температуре от приблизительно 0 до приблизительно 100°С в течение от приблизительно 1 до приблизительно 24 ч. С другой стороны, кислоту объединяют с соответствующим спиртом в качестве растворителя в присутствии каталитического количества кислоты, такой как концентрированная серная кислота, при температуре от приблизительно 20 до 120°С, предпочтительно при температуре дефлегмации, в течение от приблизительно 1 до приблизительно 24 ч. Другим способом является взаимодействие кислоты со стехиометрическим количеством спирта в присутствии каталитического количества кислоты в инертном растворителе, таком как тетрагидрофуран, с сопутствующим удалением образующейся воды физическими (например с помощью ловушки Дина-Старка (Эеаи-81агк)) или химическими (например с помощью молекулярных сит) средствами.

Пролекарства по данному изобретению, в которых спиртовая функция превращена в простой эфир, могут быть получены путем объединения спирта с соответствующим алкилбромидом или иодидом в присутствии основания, такого как карбонат калия, в инертном растворителе, Таком как диметилформамид, при температуре от приблизительно 0 до 100°С, в течение от приблизительно 1 до приблизительно 24 ч. Алканоиламинометиловые эфиры могут быть получены в результате взаимодействия спирта с бис-(алканоиламино)метаном в присутствии каталитического количества кислоты в инертном растворителе, таком как тетрагидрофуран, в соответствии со способом, описанным в патенте США 4,997,984. С другой стороны, эти соединения могут быть получены способами, описанными ИоГГтаи е! а1. в 1. Ογ§. Скет. 1994, 59, 3530.

Диалкилфосфатные сложные эфиры могут быть получены в результате взаимодействия спирта с диалкилхлорфосфатом в присутствии основания в инертном растворителе, таком как тетрагидрофуран. Дигидрофосфаты могут быть получены в результате взаимодействия спирта с диарил- или дибензилхлорфосфатом, как описано выше, с последующим гидролизом или гидрированием в присутствии благородного металла в качестве катализатора, соответственно.

Гликозиды получают в результате взаимодействия спирта и углевода в инертном растворителе, таком как толуол, в присутствии кислоты. Обычно образующуюся в ходе реакции воду удаляют по мере образования, как описано выше. Альтернативной методикой является взаимодействие спирта с подходящим образом защищенным гликозилгалогенидом в присутствии основания с последующим снятием защиты.

Ы-(1-Гидроксиалкил)амиды, Ы-(1-гидрокси-1-(алкоксикарбонил)метил)амиды или соединения, в которых К2 заменена на ^ΟΗ)^Ο)ΟΥ, могут быть получены в результате взаимодействия исходного амида или индола с соответствующим альдегидом в нейтральных или щелочных условиях (примером является этилат натрия в этаноле) при температурах между 25 и 70°С. Ν-Алкоксиметилиндолы или Ы-1-(алкокси)алкилиндолы могут быть получены в результате взаимодействия незамещенного по азоту индола с нужным алкилгалогенидом в присутствии основания в инертном растворителе. 1 -(Ν,Ν - Диалкиламинометил)индол, 1-(1-(Х,Х-диалкиламино)этил)индол и Ν,Νдиалкиламинометиламиды (например К₃= СН₂Ы(СН₃)₂) могут быть получены в результате взаимодействия исходного Ν-Η соединения с соответствующим альдегидом и амином в спиртовом растворителе при температуре от 25 до 70°С.

Циклические пролекарства (например пролекарства по данному изобретению, в которых К₂ и К₃ представляют собой общий атом углерода) могут быть получены в результате взаимодействия исходного соединения (лекарства) с альдегидом или кетоном либо его диметилацеталем в инертном растворителе в присутствии каталитического количества кислоты с сопутствующим удалением воды или метанола. С другой стороны, данные соединения могут быть получены в результате взаимодействия аминоспирта или гидроксиамида с гемдибромалканом в присутствии основания (например карбоната калия) в инертном растворителе (например диметилформамиде).

Соединения формулы 1А могут быть получены, как описано ниже. Номера схем и номера формул, упоминаемых, начиная с этой части текста, относятся к номерам схем и номерам формул, введенным, начиная с этой части текста (то есть их не следует путать с предыдущим изложением).

Схема XIV

Схема XII

Схема XVI

соон

хи!

20ОН

1. РЬСНО, восстановление

2. №СМВНз/ соот ветстауноце карбонильное соединение.

3. РавРеЖен-Но, Рб/С ньгй хи

II!

Схема XIII

В соответствии с реакционной схемой XI соединения формулы 1А, в которых Κι, Κ_ί0, Кп, А, К₂, К₃, К4, К₅ и К₆ такие, как определены выше, могут быть получены с помощью любого из двух общих способов. В первом способе желаемое соединение формулы ГА может быть получено сочетанием соответствующей индол-2карбоновой кислоты формулы II, индолин-2карбоновой кислоты или бензимидазол-2карбоновой кислоты с соответствующим амином формулы III (то есть посредством ацилирования амина). Во втором способе желаемое соединение формулы ЬА может быть получено сочетанием соответствующего соединения формулы IV (то есть соединения формулы ТА, в котором К₆ является карбокси) с соответствующим спиртом либо амином формулы Κ₈Κ₉ΝΗ или Κ_ί2Η, где К₈, К₉ и Κ_ί2 такие, как определены выше (то есть посредством ацилирования амина или спирта). Первый способ (сочетание соеди55 нений формулы II с соединениями формулы III) обычно предпочтителен, когда Кд не является Н, а К₅ представляет собой Н.

Обычно соединение формулы II объединяют с соединением формулы III (или соединение формулы IV объединяют с соответствующим амином (например К₁₂Н или Κ₈Κ₉ΝΗ)) либо спиртом в присутствии подходящего агента сочетания. Подходящим агентом сочетания является такой агент, который преобразует карбоновую кислоту в реакционноспособное соединение, которое образует амидную или сложноэфирную связь при взаимодействии с амином или спиртом, соответственно.

Агент сочетания может представлять собой реагент, который производит эту конденсацию в одну стадию при смешивании карбоновой кислоты с амином или спиртом. В том случае, когда кислоту необходимо сконденсировать со спиртом, предпочтительным является применение большого избытка спирта в качестве реакционного растворителя с добавлением или без добавления от 1,0 до 1,5 эквивалента диметиламинопиридина. Примерами агентов сочетания являются 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорид-гидроксибензотриазол (ИЕС/НВТ), карбонилдиимидазол, дициклогексилкарбодиимид/гидроксибензотриазол (НВТ), 2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин (ΕΕΌΟ), карбонилдиимидазол/НВТ, пропанфосфоновый ангидрид (ангидрид пропанфосфоновой кислоты, РРА) и диэтилфосфорилцианид. Сочетание проводят в инертном, предпочтительно апротонном растворителе при температуре от приблизительно -20 до приблизительно 50°С в течение от приблизительно 1 до приблизительно 48 ч, возможно в присутствии основания - третичного амина, такого как триэтиламин. Примеры растворителей включают в себя ацетонитрил, дихлорметан, этилацетат, диметилформамид и хлороформ или их смеси.

Кроме этого, агентом сочетания может быть агент, превращающий карбоновую кислоту в активированное промежуточное соединение, которое выделяют и/или образуют на первой стадии и приводят во взаимодействие с амином или спиртом на второй стадии. Примерами таких агентов сочетания и активированных промежуточных соединений являются тионилхлорид или оксалилхлорид для образования хлорангидрида, цианурфторид для образования фторангидрида или алкилхлорформиат, такой как изобутил- либо изопропенилхлорформиат (с основанием - третичным амином) для образования смешанного ангидрида карбоновой кислоты. В том случае, когда агентом сочетания является оксалилхлорид, выгодным является применение небольших количеств диметилформамида в качестве сорастворителя с другим растворителем (таким как дихлорметан) для того, чтобы катализировать образование хлорангидрида. Этот хлорангидрид может быть подвергнут со четанию путем смешивания с промежуточным соединением формулы III в соответствующем растворителе с соответствующим основанием. Соответствующими комбинациями растворитель/основание являются например, дихлорметан, диметилформамид или ацетонитрил либо их смеси в присутствии основания - третичного амина, например триэтиламина. Другие подходящие комбинации растворитель/основание включают в себя воду или (С1 -С5)спирт либо их смесь совместно с сорастворителем, таким как дихлорметан, тетрагидрофуран или диоксан, и основанием, таким как карбонат натрия или калия, гидроксид натрия, калия или лития либо бикарбонат натрия, в количестве, достаточном для связывания выделяющейся в реакции кислоты. Использование межфазного катализатора (обычно от 1 до 10 мол.%), такого как галогенид четвертичного амина (например бромида тетрабутиламмония или хлорида метилтриоктиламмония), выгодно в том случае, когда применяется смесь только частично смешивающихся сорастворителей (например дихлорметан-вода или дихлорметан-метанол). Примеры использования таких агентов сочетания и выбора подходящих растворителей и температур известны специалистам либо без труда могут быть найдены в литературе. Эти и другие примерные условия для сочетания карбоновых кислот описаны в НоиЬсп-Асу1. νοί XV, рай II, Е. АипсН, Ей., 6. ТНсппс Уегкщ 1974, §1ийдай, и М. Войапзку, ΡπηοίρΙοδ о£ Рерййе 8уп(Нс818, Зрппдег-Уегкщ ВегНи 1984, и ТНе Рерййез. АпаРъА 8уп111ем5 апй Вю1оду (ей. Е. Сго55 апй 1. Ме1епйо£ег), νοίδ 1-5 (Асайетю Рге§8 ΝΥ 1979-1983).

Соединения формулы IV, в которых К₁, К₁₀, К₁₁, А, К₂, К₃, К₄ и К₅ такие, как определены выше, могут быть получены из соответствующего сложного эфира формулы V (то есть соединений формулы в которых К₆ представляет собой (С₁-С₅)алкоксикарбонил или бензилоксикарбонил) в результате гидролиза водной щелочью при температуре от приблизительно -20 до приблизительно 100°С, обычно при температуре приблизительно 20°С, в течение от приблизительно 30 мин до приблизительно 24 ч.

С другой стороны, соединения формулы IV получают активацией индолкарбоновой кислоты формулы II агентом сочетания (как описано выше), в результате которой получают активированное промежуточное соединение (такое как хлорангидрид, фторангидрид или смешаный ангидрид), которое далее приводят во взаимодействие с соединением формулы III, в котором К₃, Кд и К₅ такие, как описаны выше, а К₆ является карбокси, в подходящем растворителе в присутствии подходящего основания. Подходящие растворители включают в себя воду или метанол либо их смесь, совместно с сорастворителем, таким как дихлорметан, тетрагидрофуран или диоксан. Подходящие основания включают в себя гидроксиды натрия, калия или лития, бикарбонат натрия или калия, карбонат натрия или калия либо карбонат калия совместно с бромидом тетрабутиламмония (1 эквивалент) в количестве, достаточном для связывания выделяющейся в реакции кислоты (в общем случае в количестве, достаточном для поддержания рН реакционной смеси выше 8). Для достижения надлежащего контроля за значением рН реакции основание можно добавлять по мере увеличения количества активированного промежуточного соединения. В общем случае взаимодействие проводят в температурном интервале от -20 до 50°С. Методики выделения приспосабливаются специалистами для удаления примесей, но в общем случае заключаются в удалении путем упаривания смешивающихся с водой сорастворителей, экстракции примесей при высоких значениях рН с помощью органического растворителя, подкислении до низких значений рН (1-2) и фильтровании либо экстракции желаемого продукта подходящим растворителем, таким как этилацетат или дихлорметан.

Соединение формулы V может быть получено сочетанием соответствующего соединения формулы III, в котором К₆ представляет собой алкоксикарбонил, и соответствующего соединения формулы II, аналогично описанной выше методике.

С другой стороны, соединения формулы 1А, которые содержат атомы серы в состоянии окисления, соответствующем сульфоксиду или сульфону, могут быть получены из соответствующих соединений формулы 1А, содержащих атом серы в неокисленной форме, путем обработки подходящим окисляющим агентом, таким как м-хлорпероксибензойная кислота, в дихлорметане при температуре от приблизительно 0 до приблизительно 25 °С в течение от приблизительно 1 до приблизительно 48 ч с использованием от приблизительно 1 до приблизительно 1,3 эквивалентов для превращения в состояние окисления, соответствующее сульфоксиду, и более чем приблизительно 2 эквивалента для превращения в состояние окисления, соответствующее сульфону.

Например, на реакционной схеме XI некоторые соединения формулы ΣΑ содержат функциональность первичного амина, вторичного амина или карбоновой кислоты в части молекулы, определенной К₆, которые могут мешать намеченному ходу реакции сочетания согласно реакционной схемы XI в том случае, когда промежуточное соединение формулы III или амин К₁₂Н либо Κ₈Κ₉ΝΗ оставлены незащищенными. В соответствии с этим функциональность первичного амина, вторичного амина либо карбоновой кислоты может быть защищена в том случае, когда она присутствует в К₆группировках промежуточного соединения формулы III, в амине Κ₈Κ₉ΝΗ или К₁₂Н, соответствующей защитной группой в ходе реакции сочетания по реакционной схеме XI. Продуктом такой реакции сочетания будет являться соединение формулы ΣΑ содержащее защитную группу. Эту защитную группу удаляют на следующей стадии, получая соединение формулы ΣΑ. Подходящие для защиты амина и карбоновой кислоты защитные группы включают в себя защитные группы, широко используемые в пептидном синтезе (такие как Ν-трет-бутоксикарбонил, Ν-карбобензилокси и 9-флуоренилметиленоксикарбонил для аминов и низшие алкиловые или бензиловые эфиры для карбоновых кислот), которые не являются химически реакционноспособными в описанных выше условиях сочетания и могут быть удалены без химических изменений других функциональностей в соединении формулы 1А.

В том случае, когда исходные индол-2карбоновые кислоты и индолин-2-карбоновые кислоты, используемые в реакционной схеме XI, невозможно приобрести либо о них ничего не известно из ранее опубликованной литературы (подобная информация широко публикуется), они могут быть получены с помощью общепринятых методов синтеза. Например, в соответствии с реакционной схемой XII, индольный эфир формулы VII (где А не является азотом) может быть получен из соединения формулы VI (в котором О выбирается так, чтобы достичь желаемой А, описанной выше, за исключением Ν) посредством индольного синтеза Фишера (смотри Тйе Иксйег Шбо1е 8уп!йе5Щ КоЬпъоп. В. (АПсу. №\ν Уогк, 1982)) с последующим омылением полученного индольного эфира формулы VII и получением соответствующей кислоты формулы VIII. Исходный арилгидразон может быть получен путем конденсации легко доступного гидразина с соответствующим карбонильным производным либо посредством реакции 1арр-К11пдетап (смотри Огдашс Кеасйоиз. РЫ111Р8, К.К., 1959, 10, 143).

С другой стороны, индол-2-карбоновая кислота формулы УША может быть получена путем конденсации ортометилнитросоединения формулы IX с оксалатом (эфиром) с получением индольного эфира формулы X, последующим восстановлением нитрогруппы и гидролизом.

Этот трехстадийный процесс известен как индольный синтез КеЮеП (ВеЮеП Сйетщсйе ВепсЫе 1897, 30, 1030). Условия выполнения этой последовательности (реакций) и ссылки на нее имеются в литературе (Кегтаск, е1 а1., I. Сйет. 8ос. 1921, 119, 1602; Саппоп е1 а1., I. Меб. Сйет. 1981, 24, 238; 1и11ап, е1 а1. т Не1егосус11с Сотроипбк, уо1 3 (А11еу, №\ν Уогк, ΝΥ, 1962, К.С. Е1бегйе1б, еб.) р 18).

3-Галогено-5-хлор- 1Н-индол-2-карбоновые кислоты также могут быть получены галогенированием 5-хлор-1Н-индол-2-карбоновых кислот.

В соответствии с реакционной схемой XIII промежуточные бензимидазол-2-карбоновые кислоты формулы XI могут быть получены конденсацией ортодиаминосоединения формулы XIII с гликолевой кислотой с последующим окислением полученного бензимидазол-2метанола формулы XII (ВМг/уекг Α. апб Рг/е\\ΌΓ51<ί. С. Вег. 1912. 45, 3483). С другой стороны (по реакционной схеме XII), замещенные индолины формулы XIV могут быть получены восстановлением соответствующих индолов формулы XV восстанавливающим агентом, таким как магний в метаноле, при температуре от приблизительно 25 до приблизительно 65°С в течение от приблизительно 1 до приблизительно 48 ч (реакционная схема III).

Индолинкарбоновые кислоты формулы XVI получают омылением соответствующего сложного эфира формулы XVII (реакционная схема XIII). Эфир формулы XVII получают восстановлением соответствующего индольного эфира формулы VII восстанавливающим агентом, таким как магний в метаноле, как описано выше для превращения соединения формулы XV в соединение формулы XIV.

В соответствии с реакционной схемой XIV альфа-аминокислота формулы XXIII может быть защищена по азоту с помощью соответствующей защитной группы (Р,) (например 1-Вое) с образованием соединения формулы XXIV. Специалист без труда может выбрать соответствующую защитную группу и способ ее введения. Например, двумя общеизвестными защитными группами являются ΐ-Вос (вводимая в результате обработки аминокислоты ди-третбутилдикарбонатом в предпочтительно протонном подходящем растворителе или смеси растворителей при высоких значениях рН) и ί,'ΒΖ (вводимая в результате обработки аминокислоты бензилхлорформиатом в подходящем, предпочтительно протонном растворителе или смеси растворителей и основания). Соединение формулы XXIV сочетают (аналогично методике способа сочетания, описанной для реакционной схемы XI) с соответствующим амином Κ₈Κ₉ΝΗ или ΗΚ₁₂ с образованием соединения формулы XXV, с которого далее снимают защиту, получая соединение формулы ШЬ (то есть соединение формулы III, в котором К₆ представляет собой С(О)К₁₂ или ί.’(Ο)ΝΚ₈Κ₉). Если защитной группой является ΐ-Вос, то путем обработки соединения формулы XXV кислотой в подходящем, предпочтительно апротонном растворителе. Кислоты, применяемые для такого снятия защиты, включают в себя НС1, Ме8О₃Н или трифторуксусную кислоту.

В соответствии с реакционной схемой XV соединение формулы XXXI (Ν-защищенный амин формулы III, в котором К₆ представляет собой (С₁-С₈)алкоксикарбонил или бензилокси карбонил) может быть получено из соответствующей незащищенной аминокислоты формулы XXX через введение Ν-защиты (с получением защищенной аминокислоты формулы XXXIII) с последующей этерификацией. Например, соединение формулы XXXIII может быть этерифицировано соответствующим спиртом и кислотным катализатором, таким как хлористый водород или тионилхлорид, либо, в случае третбутанола, путем обработки аминокислоты изобутиленом и кислотным катализатором, таким как концентрированная серная кислота, или путем обработки алкилгалогенидом (например метилиодидом) и основанием (например карбонатом калия). С другой стороны, этерификация может предшествовать стадии введения защиты.

В соответствии с реакционной схемой XVI соединения формулы XXX, в которых К₃ не является Н, используемые в реакционной схеме V, могут быть получены следующим образом. Аминокислоты формулы КЫ могут быть получены путем Ν-алкилирования защищенных (Р_т) аминокислот в результате обработки соответствующим основанием и алкилирующим агентом. Специфические методики для этого алкилирования описаны Вепобоп, Сап. 1. СЬет. 1977, 55, 906-910 и Напзеп, 1. Ог§. СЬет. 1985, 50, 945950. Например, когда В₃ представляет собой метил, и Рт представляет собой Вос, применяют гидрид натрия и иодистый метил в тетрагидрофуране. Снятие защиты с соединения формулы ΝΜ дает желаемое соединение формулы XXX.

С другой стороны аминокислота формулы ΑΡΗ может быть Ν-алкилирована последовательно в три стадии, включая восстановительное бензилирование (такое как с помощью бензальдегида, Рб/С-катализируемого гидрирования) с получением моно-И-бензильного производного и восстановительное аминирование соответствующим карбонильным соединением (например, формальдегидом и цианборгидридом натрия для введения Р₃ в виде метила) с получением Ν-бензил, Ν-Щ-замещенной аминокислоты. Ν-Бензильную защитную группу удобным образом удаляют (например гидрированием с соответствующим катализатором) с получением соединения формулы XXX. Специфические условия для этой трехстадийной методики алкилирования описаны Кет1ю1б е1 а1., 1. Меб. СЬет., 1968, 11, 258-260.

Кроме того, для введения группировки Р₃в промежуточное соединение формулы Ша (которое представляет собой промежуточное соединение формулы III, где Я₃ является Н) может быть использован непосредственно предшествующий этап получения.

В том случае, когда используемых в приведенных здесь схемах аминокислот (например

X^, X^II) нет в продаже или о них отсутствуют литературные данные, они могут быть получены разнообразными известными специалистам способами. Например, может быть применен синтез

Стрекера (8!гескег) или его варианты. Соответственно, альдегид (К^СИО), цианид натрия или калия и хлорид аммония взаимодействуют с образованием соответствующего аминонитрила. Аминонитрил гидролизуют минеральной кислотой с образованием желаемой аминокислоты формулы ХЬП (Ρ.·|ί.’(ΝΗ₂)ί.ΌΟΗ). С другой стороны, может быть использован метод БухерераБерга, в котором в результате нагревания альдегида (Ι<40ΗΟ) с карбонатом аммония и цианидом калия образуется гидантоин, который далее гидролизуют (например с помощью гидроксида бария в диоксане при температуре дефлегмации) кислотой или основанием с образованием желаемой аминокислоты формулы ХЬП (^(ΝΗ^ΟΟΗ).

Кроме этого, в литературе имеются данные о других способах синтеза α-аминокислот, которые могут позволить специалисту получить желаемое промежуточное соединение формулы ХЬП (Ρ₄ί.’(ΝΗ₂)ίΌΟΗ). необходимое для синтеза соединений формулы 1А.

Подходящие способы синтеза и/или разделения соединений формулы ХЬП имеются в обзорах, написанных Ои!Ба1ег (Те1гаБейгоп 1994, 50, 1539-1650) или №1Шатх (К.М. №11Батх, 8уп!Бех1х οί ор11са11у асБуе атшо аЛйех. Регдатоп: ΟχίοΜ. и.К., 1989).

Специфическим способом синтеза промежуточного соединения формулы ХЬП в любой энантиомерной форме из соответствующего промежуточного соединения К₄Х (Х=С1, Вг или I) является методика Р1ггипд и КпхБпатийБу (1. Ογ§. СБет. 1993, 58, 957-958) или методика Ο^η^ΙΙ, е! а1. (1. Ат. СБет. 8ос. 1989, 111, 2353-2355). Необходимые промежуточные соединения К₄Х без труда получают многими, известными специалистам в области химии способами. Например, те соединения, в которых К₄Х представляет собой АгСН₂Х, могут быть получены радикальным галогенированием соединения АгСН₃ или путем формирования арена Аг-Н и превращения спирта в бромид.

Другим специфическим способом синтеза промежуточных соединений формулы ХЬП в любой энантиомерной форме является способ Кори и Линка (Согеу апй Ыпк, 1. Ат. СБет. 8ос. 1992, 114, 1906-1908). Так, промежуточное соединение формулы К₄СОСС1₃ энантиоспецифически восстанавливают до промежуточного соединения К₄СН(ОН)СС1₃, которое превращают в результате обработки азидом или основанием в промежуточное соединение К₄СН(Ы₃)СООН, которое восстанавливают каталитическим гидрированием до желаемого соединения формулы ХЬП. Необходимый трихлорметилкетон К₄СОСС1₃ получают путем взаимодействия альдегида Ρ₄ί.ΉΟ с трихлорметид-анионом с последующим окислением (Са1Бпа апй Сюгйапо, 8уп!Бех1х 1989, 466-468).

Соединение формулы Ε₈ΝΗ₂ или Ρ₉ΝΗ₂моноалкилируют с помощью карбонильного соединения, соответствующего К8 или К9, соответственно, в соответствующих условиях восстановительного аминирования, получая амин формулы Ρ.₈Ρ.9ΝΗ₂. Для того, чтобы избежать диалкилирования, предпочтительной может являться защита аминов (Ρ.₈ΝΗ₂ или Ρ₉ΝΗ₂) подходящей защитной группой Р_т с получением Ρ.₈(Ρ_τ)ΝΗ или К₉(Р_т)ХН, например в результате взаимодействия с бензальдегидом и восстанавливающим агентом. Защищенные амины моноалкилируют карбонильным соединением, соответствующим К₉ или К₈, соответственно, в подходящих условиях восстановительного аминирования с получением КК^(Р_т). Защитную группу (Рт) удаляют (например исчерпывающим каталитическим гидрированием, когда Р_т представляет собой бензил) с получением соединения формулы Ρ,^ΝΗ. Соответствующие условия восстановительного аминирования специалистами могут быть найдены в литературе. Эти условия включают в себя условия, о которых сообщается ВогсБ е! а1. (1. Ат. СБет. 8ос. 1971, 2897-2904) и которые приведены в обзорах Етегхоп (Югдитс КеасБопх, \Уйеу: №\ν Уогк, 1948 (14), 174), ΗιιΝΗίπχ е! а1. (Ογ§. Ргер. Ргосей. Ш!. 1979 (11), 20 и Бале е! а1. (8уп!Бех1х 1975, 135). Условия восстановительного аминирования, благоприятствующие Ν-моноалкилированию, включают в себя условия, о которых сообщается Мога1ех, е! а1. (8уп!БеБс Соттишса!юпх 1984, 1213-1220) и Vе^а^йο е! а1. (8уп!Бех1х 1992, 121125). Кроме этого, амины Ρ.₈ΝΗ₂ или Ε₉ΝΗ₂ могут быть моноалкилированы с помощью К₉Х или К₈Х, соответственно, где Х представляет собой хлорид, бромид, тозилат или мезилат. С другой стороны, промежуточное соединение формулы Κ₈(Р_т)NН или Κ.9(Р_т)NН может быть алкилировано с помощью К9Х или К8Х, а защитная группа удалена с получением соединения формулы Ε^ΝΗ.

Для получения аминов формулы Ρ.₈Ρ.9ΝΉ, в которых Η₈-ΝΗ или Кд-ΝΗ соединены связью кислород-азот, могут быть использованы дополнительные способы. Так легко доступное соединение формулы (С1-С₄)алкоксикарбонилΝΗΟΗ или ΝΗ_;ί.ΌΝΗΟΗ диалкилируют по азоту и кислороду путем обработки основанием и избытком подходящего алкилирующего агента (К-Х) с получением соответствующего (С₁-С₄) алкоксикарбонил^(К)ОК, которое далее гидролизуют, получая соединение формулы Η^ΝΗ (где К8=К9=К). Подходящие условия, основание и алкилирующий агент включают в себя описанные Сое1 и Кго11х (Ογ§. Ргер. Ргосей. Ш!. 1987, 19, 75-78) и Мащг и Е1еск (1. Ат. СБет. 8ос. 1928, 50, 1479). С другой стороны, Νгидроксимочевина (ΝΗ_;ίΌΝΗ(ΌΗ)) может быть последовательно алкилирована сначала по кислороду с получением ΝΗ^ΟΝΗ(ΟΚ), затем по азоту с получением NΗ₂СΟN(Κ)(ΟΚ') в результате последовательной обработки алкилирующими агентами К'Х и КХ, соответственно, в присутствии подходящего основания. Подходящее основание и алкилирующие агенты включают в себя описанные КгсШхкатр и Мекаидет (СЬет. Вег. 100, 3463-3465 (1967)) и Палеи е! а1 (1. Ат. СЬет. 8ое. 1973, 95, 57165724).

Гидролиз этих алкилированных производных гидроксимочевины позволяет получить амины Κ'ΟΝΗ₂ и Κ'ΟΝΗΚ, которые соответствуют конкретным аминам формулы Κ₈Κ₉ΝΗ. Специалист в области химии может адаптировать методики, описанные в этом параграфе, к другим алкилирующим агентам Κ-, Κ'- и К-Х для получения других аминов формулы Κ₈Κ₉ΝΗ, в которых Κ₈-Ν или Κ₉-Ν соединены связью кислород-азот. Иио е! а1 (8уиЬей 1991, 559-560) описывают катализируемое ВР₃ добавление органометаллического реагента В-Ы к Οалкилоксиму формулы Β'ΟΗ=Ν-ΟΒ с получением соединений формулы Κ'ΚΟΗ-ΝΗ(ΟΚ). Этот путь также может быть использован для получения соединений формулы Κ8Κ9ΝΗ, в которых один из Κ₈-ΝΗ или Κ₉-ΝΗ соединен связью кислород-азот.

Пролекарства по данному изобретению, в которых карбоксильная группа в карбоновой кислоте формулы 1А заменена на сложный эфир, могут быть получены объединением карбоновой кислоты с соответствующим алкилгалогенидом в присутствии основания, такого как карбонат калия, в инертном растворителе, таком как диметилформамид, при температуре от приблизительно 0 до приблизительно 100°С в течение от приблизительно 1 до приблизительно 24 ч. С другой стороны, кислоту объединяют с соответствующим спиртом в качестве растворителя в присутствии каталитического количества кислоты, такой как концентрированная серная кислота, при температуре от приблизительно 20 до 120°С, предпочтительно при температуре дефлегмации, в течение от приблизительно 1 ч до приблизительно 24 ч. Другим способом является взаимодействие кислоты со стехиометрическим количеством спирта в присутствии каталитического количества кислоты в инертном растворителе, таком как тетрагидрофуран, с сопутствующим удалением образующейся воды физическими (с помощью ловушки Дина-Старка) или химическими (с помощью молекулярных сит) средствами.

Пролекарства по данному изобретению, в которых спиртовая функция была дериватизирована как простой эфир, могут быть получены путем объединения спирта с соответствующим алкилбромидом или иодидом в присутствии основания, такого как карбонат калия, в инертном растворителе, таком как диметилформамид, при температуре от приблизительно 0 до 100°С в течение от приблизительно 1 до приблизительно 24 ч. Алканоиламинометиловые эфиры могут быть получены в результате взаимодействия спирта с бис-(алканоиламино) метаном в присутствии каталитического количества кислоты в инертном растворителе, таком как тетрагидрофуран, в соответствии со способом, описанным в патенте США 4,997,984. С другой стороны, эти соединения могут быть получены способами, описанными ИоГГтап е! а1. в 1. Огд. СЬет. 1994, 59, 3530.

Диалкилфосфатные эфиры могут быть получены в результате взаимодействия спирта с диалкилхлорфосфатом в присутствии основания в инертном растворителе, таком как тетрагидрофуран. Дигидрофосфаты могут быть получены в результате взаимодействия спирта с диарил- или дибензилхлорфосфатом, как описано выше, с последующим гидролизом или гидрированием в присутствии благородного металла в качестве катализатора, соответственно.

Гликозиды получают в результате взаимодействия спирта с углеводом в инертном растворителе, таком как толуол, в присутствии кислоты. Обычно образующуюся в ходе реакции воду удаляют по мере образования, как описано выше. Альтернативной методикой является взаимодействие спирта с подходящим образом защищенным гликозилгалогенидом в присутствии основания с последующим снятием защиты.

Ν-(1 -Гидроксиалкил)амиды, Ν-(1 -гидрокси-1 -(алкоксикарбонил)метил)амиды или соединения, в которых Κ2 заменена на ^ΟΗ)^Ο)ΟΥ, могут быть получены в результате взаимодействия исходного амида или индола с соответствующим альдегидом в нейтральных или щелочных условиях (примером является этилат натрия в этаноле) при температурах между 25 и 70°С. Ν-Алкоксиметилиндолы или Ν-1 -(алкокси)алкилиндолы могут быть получены в результате взаимодействия незамещенного по азоту индола с нужным алкилгалогенидом в присутствии основания в инертном растворителе. 1 -(Ν,Ν - Диалкиламинометил)индол, 1-(1-(Ц№диалкиламино)этил)индол и Ν,Νдиалкиламинометиламиды (например В₃= СН^СНз^) могут быть получены в результате взаимодействия исходного соединения Ν-Η с соответствующим альдегидом и амином в спиртовом растворителе при температуре от 25 до 70°С.

Пролекарства по данному изобретению, в которых Κ2 и Κ23 представляют собой общий атом углерода, могут быть получены путем взаимодействия исходного соединения (лекарства) с бензальдегидом или кетоном либо его диметилацеталем в инертном растворителе в присутствии каталитического количества кислоты с сопутствующим удалением воды или метанола.

Исходные материалы и реагенты для описанных выше реакционных схем (например амины, замещенные индолкарбоновые кислоты, замещенные индолинкарбоновые кислоты, аминокислоты), несмотря на то, что способы получения большинства из них описаны выше, могут быть без труда приобретены или с легкостью синтезированы специалистами с использованием общепринятых методов органического синтеза. Например, многие из промежуточных соединений, использованных здесь для получения соединений формулы I и 1А, являются близкими к или происходят из природных аминокислот, которые представляют большой научный и коммерческий интерес, и в связи с этим многие такие промежуточные соединения имеются в продаже, или о них имеются литературные данные, или их без труда можно получить из других общедоступных веществ с помощью описанных в литературе способов.

Некоторые из способов получения, полезных для получения описанных здесь соединений (например, соединений формулы I, соединений формулы ΙΑ), могут требовать защиты отдаленной функциональности. Необходимость в такой защите будет изменяться в зависимости от природы отдаленной функциональности и условий способов получения. Вопрос о необходимости такой защиты без труда может быть решен специалистом. Использование подобных способов введения/снятия защиты также находится в компетенции специалистов. Общее описание защитных групп и их использования можно найти в Т.^. Сгеепе. Рго!ес!1уе Сгоир8 ш Огдашс 8уп!Ье818. Ло11п ^11еу & 8опз, Νον Уогк, 1991.

Некоторые из соединений по данному изобретению содержат ассиметричные атомы углерода и ввиду этого являются энантиомерами и диастереомерами. Диастереомерные смеси могут быть разделены на их индивидуальные диастереомеры на основании их физико-химических различий способами, известными рег 8е, например хроматографией и/или фракционной кристаллизацией. Энантиомеры могут быть разделены путем превращения энантиомерной смеси в дастереомерную смесь в результате взаимодействия с соответствующим оптически активным соединением (например спиртом), разделения диастереомеров и превращения (например гидролизом) индивидуальных диастереомеров в соответствующие чистые энантиомеры. Все такие изомеры, включая диастереомеры, энантиомеры и их смеси, рассматриваются как часть данного изобретения. Кроме этого, некоторые соединения по данному изобретению являются атропизомерами (например замещенные биарилы) и рассматриваются как часть данного изобретения.

Многие соединения по данному изобретению являются кислотными, и они образуют соль с фармацевтически приемлемым катионом. Некоторые соединения по данному изобретению являются основными, и они образуют соль с фармацевтически приемлемым анионом. Все такие соли находятся в пределах объема данного изобретения и могут быть получены общепринятыми способами. Например, они могут быть получены в результате простого контакти рования кислотной и основной сущностей обычно в стехиометрическом отношении как в водной, так и в неводной или частично водной среде, как целесообразно. Соли выделяют либо фильтрованием, либо осаждением с помощью соединений, в которых они нерастворимы, с последующим фильтрованием, либо упариванием растворителя, либо, в случае водных растворов, лиофилизацией, как целесообразно.

Вдобавок, в том случае, когда соединения по данному изобретению образуют гидраты или сольваты, они также находятся в пределах объема данного изобретения.

Полезность комбинаций по настоящему изобретению в качестве медицинских агентов при лечении таких заболеваний, которые подробно описаны здесь для млекопитающих (например людей), демонстрируется по активности соединений по данному изобретению в традиционных тестах и в тестах ш νίΙΐΌ и ш у1уо, описанных ниже. Кроме того, такие тесты обеспечивают возможность сравнения активностей соединений по данному изобретению с активностями других известных соединений. Результаты таких сравнений полезны для определения дозовых уровней у млекопитающих, включая людей, для лечения таких заболеваний.

Тестирование ингибиторов альдозоредуктазы

Активность ингибитора альдозоредуктазы может быть определена по количеству ингибитора альдозоредуктазы, необходимому для снижения тканевого сорбита и вследствие этого снижения тканевой фруктозы, в соответствии со следующим тестом.

Самцов крыс линии 8ргадие-Оа\\!еу приводят в диабетическое состояние с помощью внутривенной инъекции стрептозоцина в дозе 55 мг/кг, при рН 4,5 в цитратном буфере. Их кормят без ограничения в контролируемых условиях содержания, температуры и освещения. После пяти недель диабета крыс анестезируют с помощью чрезмерной дозы пентобарбитала и ткани быстро удаляют и анализируют на сорбит и фруктозу.

Уровень сорбита анализируют в соответствии со способом Эопа1б М. Еабе8 е! а1., Кар1б Апа1у818 о£ 8огЬйо1, Са1асй!о1, Маппйо1 апб Муото8Йо1 М1х1иге8 Егот Вю1одюа1 8оигсе8, 1оигпа1 о£ СЬгота!одгарЕу. 490,1-8, (1989).

Фруктозу в крысиных тканях измеряют ферментативно с использованием модификации метода Атеуата (Ме!йоб8 ш Епхуто1оду. 89: 20-29, 1982), в котором феррицианид заменяют на резазурин, краситель, который восстанавливается до резоруфина, обладающего сильной флуоресценцией. Уровень флуоресценции резоруфина находится в стехиометрическом отношении с количеством фруктозы, окисленной фруктозодегидрогеназой. В тест входит 0,1 мл нейтрализованного 6%-ной перхлорной кислотой экстракта нервов в конечном объеме 1,5 мл. По прошествии инкубации в течение 60 мин при комнатной температуре в закрытом ящике определяют флуоресценцию образца при возбуждении = 560 нм, эмиссии = 580 нм, щели 5 мм на флуоресцентном спектрофотометре фирмы Регк1п-Е1тег модели 650-40. Концентрации фруктозы рассчитывают путем сравнения с серией известных стандартов фруктозы.

Тестирование ингибиторов гликогенфосфорилазы

С помощью описанных далее методик могут быть получены три различных очищенных изофермента гликогенфосфорилазы (СР), в которых гликогенфосфорилаза находится в активированном «а» состоянии (обозначена как гликогенфосфорилаза а или сокращенно СРа), и обозначенных здесь как гликогенфосфорилаза а из печени человека (НЬСРа), гликогенфосфорилаза а из мышц человека (НМСРа) и гликогенфосфорилаза а из головного мозга человека (НВСРа).

Экспрессия и ферментация кДНК НЬСРа и НМСРа экспрессируют с плазмиды рКК233-2 (РИаттас1а Вю!есИ. Шс., Р|5са1а\\ау. №\ν 1ет§еу) в Е. со11, штамм КЬ-1 В1ие (8!га!адепе С1ошпд 8у51ет5, Ьа1о11а, СА). Штаммом инокулируют ЬВ-среду (содержащую 10 г триптона, 5 г дрожжевого экстракта, 5 г №1С1 и 1 мл 1н. №ЮН на 1 л) плюс 100 мг/л ампициллина, 100 мг/л пиридоксина и 600 мг/л МпС1₂ и выращивают при 37 °С до значения клеточной плотности ОЭ₅₅₀ = 1,0. В этот момент клетки индуцируют с помощью 1 мМ изопропил-1-тио-β-Ό-галактозида (1РТС). Через три часа после индукции клетки собирают центрифугированием, клеточные осадки замораживают и хранят при -70°С до тех пор, пока не появится необходимость в очистке.

кДНК НВСР может быть экспрессирована с использованием различных методологий, например способом, описанным Сгегаг, е! а1. (1. Вю1. СИет. 270:13748-13756). Способ, описанный Сгегаг, е! а1. (1. Вю1. СИет. 270:1374813756) для экспрессии НВСР, заключается в следующем: кДНК НВСР может быть экспрессирована с плазмиды рТАСТАС в штамме 25А6 Е. со11. Штаммом инокулируют ЬВ-среду (содержащую 10 г триптона, 5 г дрожжевого экстракта, 5 г №1С1 и 1 мл 1н. №ЮН на литр) плюс 50 мг/л ампициллина и выращивают в течение ночи, затем ресуспендируют в свежей ЬВ-среде плюс 50 мг/л ампициллина и повторно инокулируют 40Х объем ЬВ/амп. среды, содержащей 250 мкМ изопропил-1-тио-в-О-галактозида (ГОТС), 0,5 мМ пиридоксина и 3 мМ МдС1₂, и выращивают при 22°С в течение 48-50 ч. Далее клетки собирают центрифугированием, клеточные осадки замораживают при -70°С и хранят до необходимости в очистке.

кДНК НВСР экспрессируют с плазмиды рВ1иеВас III (ШуИтодеп Согр., 8ап Э1едо, СА), которую вводят сотрансфекцией с линейной вирусной ДНК Васи1оСоИ (РИатттдеп, 8ап Όίедо, СА) в 819-клетки. Рекомбинантный вирус впоследствии очищают посредством отбора из отдельных бляшек. Для получения белка 819клетки, выращенные в бессывороточной среде, инфицируют с множественностью заражения (то1) 0,5 и при клеточной плотности 2х10⁶ клеток/мл. После выращивания в течение 72 ч при 27°С клетки центрифугируют, клеточные осадки замораживают при -70°С и хранят до необходимости в очистке.

Очистка гликогенфосфорилазы, экспрессированной в Е.со11

Клетки Е.со11 из клеточных осадков (выше) суспендируют в 25 мМ β-глицерофосфате (рН 7,0) с 0,2 мМ ЭТТ, 1 мМ МдС1₂ плюс следующие ингибиторы протеаз:

0,7 мкг/мл Пепстатин А

0,5 мкг/мл Леупептин

0,2 мМ Фенилметилсульфонил фторид (РМ8Е) и

0,5 мМ ЭДТА, лизируют предобработкой 200 мкг/мл лизоцима и 3 мкг/мл ДНКазы с последующей обработкой ультразвуком в 250 мл ваннах в течение 5 х 1,5 мин во льду с использованием ультразвукового клеточного дезинтегратора Вгапкоп Мойе1 450 (Вгапкоп 8ошс Ро\гег Со., ПапЬиту СТ). Клеточные лизаты Е. со11 далее осветляют центрифугированием при 35000 х д в течение одного часа с последующим фильтрованием через 0,45 микронные фильтры. СР в растворимой фракции лизатов (по расчетам менее, чем 1% от общего белка) очищают, постоянно контролируя ферментативную активность (как описано в разделе «Измерение активности СРа», ниже), посредством серии хроматографических стадий, детально описанных ниже.

Аффинная хроматография на иммобилизованном металле ДМАС).

Эта стадия основана на способе Ьиопд е! а1. (Ьиопд е! а1. 1оитпа1 о1 СЬтота!одтарИу (1992) 584, 77-84). 500 мл фильтрованной растворимой фракции клеточных лизатов (полученной из приблизительно 160-250 г исходного клеточного осадка) наносят на колонку с ^АС Хелатирующей Сефарозой (РИатташа ЬКВ Вю!есйпо1оду, Р18са!атау, №\ν 1ет§еу) вместимостью 130 мл, нагруженной 50 мМ СиС1₂ и уравновешивающим буфером, содержащим 25 мМ βглицерофосфата, 250 мМ №1С1 и 1 мМ имидазола при рН 7. Колонку промывают уравновешивающим буфером до тех пор, пока значение А280 не выйдет на базовую линию. Затем образец элюируют из колонки тем же самым буфером, содержащим 100 мМ имидазола для удаления связанной СР и других связанных белков. Собирают фракции, содержащие СР активность (приблизительно 600 мл), и добавляют этилендиаминотетрауксусную кислоту (ЭДТА), ЭЬдитиотреитол (ЭТТ), фенилметилсульфонил69 фторид (РМ8Е), леупептин и пепстатин А для получения концентраций 0,3 мМ, 0,2 мМ, 0,2 мМ, 0,5 мкг/мл и 0,7 мкг/мл, соответственно. Объединенную СР обессоливают на колонке с Сефадексом С-25 (81дта СЬетюа1 Со., 8ΐ. Боше, М188оил), уравновешенной буфером, содержащим 25 мМ Трис-НС1 (рН 7,3), 3 мМ ΌΤΤ (Буфер А), для удаления имидазола и хранят во льду до второй хроматографической стадии.

Хроматография на 5'-АМФ-сефарозе

Обессоленный образец СР (приблизительно 600 мл) далее смешивают с 70 мл 5'-АМФСефарозы (РЬагтааа ЬКВ Вю1есЬио1о§у, Р18са1а\\ау. №\ν 1егзеу), уравновешенной Буфером А (смотри выше). Смесь аккуратно встряхивают в течение одного часа при 22°С, затем переносят в колонку и промывают Буфером А до тех пор, пока значение А280 не достигнет базовой линии. СР и другие белки элюируют с колонки с помощью 25 мМ Трис-НС1, 0,2 мМ ΌΤΤ и 10 мМ аденозин-5'-монофосфата (АМФ) при рН 7,3 (Буфер Б). Фракции, содержащие СР, объединяют с последующей идентификацией путем определения ферментативной активности (описано ниже) и визуализации белковой зоны СР со значением М_г приблизительно 97 кДа с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (8Ό8РАСЕ) с окрашиванием серебром (2Э-811уег 81аю II ПаисЫ Κίΐ, Оаис1п Риге СЬетюа1 Со., ΕΤΌ., ^куо, 1араи). Объединенную СР диализуют против буфера, содержащего 25 мМ βглицерофосфата, 0,2 мМ ΌΤΤ, 0,3 мМ ЭДТА, 200 мМ №С1, рН 7,0 (Буфер В), и хранят во льду до использования.

Перед использованием фермент СР переводят из неактивной формы, экспрессируемой в штамме X^-1 В1ие Е. соБ (обозначенной СРЬ) (81гадепе С1ои1пд 8у81етз, Ьа 1о11а, СаПГогша), в активную форму (обозначенную СРа) с помощью методики, описанной в разделе (А) «Активация СР», ниже.

Очистка гликогенфосфорилазы, экспрессированной в 819-клетках

Осадки 8Г9-клеток, описанные выше, ресуспендируют в 25 мМ β-глицерофосфате (рН 7,0) с 0,2 мМ ΌΤΤ, 1 мМ МдС1₂ плюс следующие ингибиторы протеаз:

0,7 мкг/мл Пепстатин А

0,5 мкг/мл Леупептин

0,2 мМ Фенилметилсульфонил фторид (РМ8Е) и

0,5 мМ ЭДТА, лизируют предобработкой 3 мкг/мл ДНКазы с последующей обработкой ультразвуком в ваннах в течение 3х1 минуте во льду с использованием ультразвукового клеточного дезинтегратора Вгаизоп Мобе1 450 (Вгапзоп 8ошс Ротеег Со., ОапЬигу СТ). Клеточные лизаты 819-клеток далее осветляют центрифугированием при 35000 х д в течение одного часа с последующим фильт рованием через 0,45 микронные фильтры. СР в растворимой фракции лизатов (по расчетам 1,5% от общего белка) очищают, постоянно контролируя ферментативную активность (как описано в разделе «Измерение активности СРа», ниже) посредством серии хроматографических стадий, детально описанных ниже.

Аффинная хроматография на иммобилизованном металле ЦМАС)

Хроматографию на иммобилизованном металле проводят так, как описано ранее. Объединенную обессоленную СР далее хранят во льду для дальнейшей работы.

Активация СР

Перед следующей хроматографией фракцию неактивного фермента, экспрессируемого 8Г9-клетками (обозначенного СРЬ), переводят в активную форму (обозначенную СРа), следуя методике, описанной в Разделе (А) «Активация СР», ниже.

Анионообменная хроматография

Вслед за активацией очищенной на ГМАС СРЬ путем перевода в СРа в результате взаимодействия с иммобилизованной киназой фосфорилазы, отобранные фракции СРа диализуют против 25 мМ Трис-НС1, рН 7,5, содержащего 0,5 мМ ΌΤΤ, 0,2 мМ ЭДТА, 1,0 мМ фенилметилсульфонилфторида (РМ8Е), 1,0 мкг/мл леупептина и 1,0 мкг/мл пепстатина А. Затем образец наносят на анионообменную хроматографическую колонку МопоЦ (РЬагтас1а Вю1ес11. Шс., Р18са1атеау, №\ν 1егзеу). Колонку промывают уравновешивающим буфером до тех пор, пока значение А280 не выйдет на базовую линию. Далее образец элюируют с колонки с помощью линейного градиента №01 (0-0,25 М), необходимого для выделения связанной СР и других связанных белков. Фракции, содержащие СР, элюируются в интервале 0,1-0,2М №С1, что детектируется с помощью регистрации белковых пиков абсорбции на А280 в элюате. Белок СР затем идентифицируют визуализацией белковой зоны СР со значением М_г приблизительно 97 кДа с помощью электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (8О8-РАСЕ) с окрашиванием серебром (ЭЭ-мкег 81а1п II Оаис1п Κίΐ, ЭайсЫ Риге Скетюа1 Со., ΕΤΌ., ^куо, 1арап) и собирают. Собранную СР диализуют против буфера, содержащего 25 мМ Н№бис|2-гидроксиэтил|2-аминоэтансульфоновую кислоту, 1,0 мМ ΌΤΤ, 0,5 мМ ЭДТА, 5 мМ №С1, рН 6,8, и хранят во льду до использования.

Определение ферментативной активности СР

А) Активация СР: превращение СРЬ в СРа.

Перед определением ферментативной активности СР фермент переводят из неактивной формы, экспрессируемой в штамме ΚΟΠ В1ие Е.

со11 (обозначенной СРЬ) (81гадепе С1ошпд 8узΐет8, Ьа 1о11а, Са1|Гогша), в активную форму (обозначенную СРа) посредством фосфорилирования СР с использованием киназы фосфори71 лазы, как описано далее. Фракцию неактивного фермента, экспрессируемого 8П9-клетками (обозначенную ОРЬ), также переводят в активную форму (обозначенную ОРа), следуя приведенной далее методике.

Взаимодействие ОР с иммобилизованной киназой фосфорилазы.

Киназу фосфорилазы (81дша Сйеш1са1 Сотрапу, 81. Ьошз, МО) иммобилизуют на АПП1Ое1 10 (ВюКаб Согр., МеМ1е, ΝΥ) в соответствии с инструкциями производителя. Кратко: фермент киназу фосфорилазы (10 мг) инкубируют с промытыми гранулами АПй-Ое1 (1 мл) в 2,5 мл 100 мМ ΗΕРΕ8 и 80 мМ СаС1₂ при рН 7,4 в течение 4 ч при 4°С. Затем гранулы АПй-Ое1 один раз промывают тем же самым буфером перед блокированием с помощью 50 мМ ИЕРЕ8 и 1М метилового эфира глицина при рН 8,0 в течение одного часа при комнатной температуре. Блокирующий буфер убирают и заменяют 50 мМ ИЕРЕ8 (рН 7,4), 1 мМ β-меркаптоэтанолом и 0,2 %-ным №А₃ для хранения. Перед использованием с целью перевода ОРЬ в ОРа гранулы АПй-Ое1 с иммобилизованной киназой фосфорилазы уравновешивают путем промывания в буфере, используемом для проведения киназной реакции, состоящем из 25 мМ βглицерофосфата, 0,3 мМ ЭТТ и 0,3 мМ ЭДТА при рН 7,8 (киназный тест-буфер).

Частично очищенную неактивную ОРЬ, полученную ранее в результате хроматографии на 5'-АМФ-сефарозе (из Е. сой), или смесь ОРа и ОРЬ, полученную ранее в результате 1МАС (из 8П9-клеток), разбавляют в отношении 1:10 с помощью киназного тест-буфера, затем смешивают с упомянутым ранее иммобилизованным на гранулах АПй-Ое1 ферментом киназой фосфорилазы. Добавляют Να-АТФ до концентрации 5 мМ и МдС1₂ до концентрации 6 мМ. Полученную смесь аккуратно перемешивают при 25°С в течение от 30 до 60 мин. Образец отделяют от гранул и производят определение процента активации ОРЬ в результате превращения в ОРа, определяя ферментативную активность ОР в присутствии и в отсутствие 3,3 мМ АМФ. Процент общей ферментативной активности, обусловленный ферментативной активностью ОРа (АМФ-независимой) далее рассчитывают следующим образом:

% от общей III.ОРа = (III.ОР активность - АМФ) / (III.ОР активность + АМФ)

С другой стороны, конверсия ОРЬ в ОРа может быть зарегистрирована с помощью изоэлектрического фокусирования на основании сдвига электрофоретической подвижности, отмеченного как следствие превращения ОРЬ в ОРа. Образцы ОР анализируют с помощью изоэлектрического фокусирования (ИЭФ), применяя РЬагшааа РПа§1Ое1 8у§1еш (РЬагшааа Вю1ес11. Шс., Рбса1атау, Νον 1ег8еу), используя предварительно приготовленные гели (интервал р1 4-6,5) и рекомендованный производителем метод. Разделенные зоны ОРа и ОРЬ далее визуализуют на гелях с помощью окрашивания серебром (2О-5буег 81ат II ИайсЫ Кб, ИайсЫ Риге Сйеш1са1 Со., ЬТИ., Токуо, 1арап). Идентификацию ОРа и ОРЬ осуществляют путем сравнения со стандартами ОРа и ОРЬ из Е. сой, которые наносят параллельно в те же самые гели, что и экспериментальные образцы.

Б) Тестирование активности ОРа.

Активности ингибиторов гликогенфосфорилазы по данному изобретению для лечения/предупреждения заболевания/состояния, описанные здесь, могут косвенно быть определены путем оценки влияния соединений по данному изобретению на активность активированной формы гликогенфосфорилазы (ОРа) одним из двух методов; активность гликогенфосфорилазы измеряют в прямом направлении, регистрируя образование глюкозо-1-фосфата из гликогена, либо следят за обратной реакцией, регистрируя выделение неорганического фосфата в результате синтеза гликогена из глюкозо-1 фосфата. Все реакции могут быть проведены в трех повторах в 96-луночных планшетах для микротитрования, и изменение в поглощении, обусловленное образованием продукта реакции, может быть измерено при длине волны, подробно обозначенной ниже в МСС/340 МКН Е1ба Кеабег (ЬаЬ Бубешз, Ип1апб), соединенном с Тйейесй М1сгор1а1е 81аскег (Κ’Ν Вюшеб1са1 Со, Ηι.ιπΐ5νί1Κ. А1аЬаша).

Для измерения ферментативной активности ОРа в прямом направлении образование глюкозо-1 -фосфата из гликогена регистрируют с помощью общего многоферментного метода Рексе е1 а1. [Рексе, М.А., Вобоипап, 8.Η., Иаггр, К.С. апб Мсйокоп, 1.Р. (1977) С11шса1 СйешЫгу 23, 1711-1717], модифицированного следующим образом: от 1 до 100 мкг ОРа, 10 единиц фосфоглюкомутазы и 15 единиц глюкозо-6фосфатдегидрогеназы (Воейппдег МаппНеип ВюсНеписаК [пб1апаро118, ΓΝ) разбавляют до 1 мл в Буфере А (описанном здесь ранее). Буфер А имеет рН 7,2 и содержит 50 мМ №РЕ8, 100 мМ КС1, 2,5 мМ этиленглюкотетрауксусную кислоту (ЭГТА), 2,5 мМ МдС1₂, 3,5 мМ КН₂РО₄и 0,5 мМ дитиотреитол. 20 мкл этого концентрированного раствора добавляют к 80 мкл Буфера А, содержащего 0,47 мг/мл гликогена, 9,4 мМ глюкозу, 0,63 мМ окисленную форму никотинамидадениндинуклеотидфосфата (НАДФ⁺). Тестируемые соединения добавляют в виде 5 мкл раствора в 14 %-ном диметилсульфоксиде (ДМСО) перед добавлением ферментов. Базовый уровень ферментативной активности ОРа в отсутствие ингибиторов определяют путем добавления 5 мкл 14%-ного ДМСО, а уровень, соответствующий состоянию полного ингибирования ферментативной активности ОРа, получают путем добавления 20 мкл 50 мМ кофеина, тест-вещества, взятого в качестве позитивного контроля. За реакцией следят при комнатной температуре путем измерения превращения окисленной формы НАДФ⁺ в восстановленную форму НАДФН при длине волны 340 нм.

Для измерения ферментативной активности СРа в обратном направлении степень превращения глюкозо-1 -фосфата в гликоген плюс неорганический фосфат измеряют с помощью общего метода, описанного Епдегк е! а1. [Епдегк, Η.Ό., 8ЬесЬокку, 8. апб Мабкеп, Ν.Β. (1970) Сап. 1. ВюсНет. 48, 746-754], модифицированного следующим образом: от 1 до 100 мкг СРа разбавляют до 1 мл в буфере Б (описанном здесь ранее). Буфер Б имеет рН 7,2 и содержит 50 мМ НЕРЕ8, 100 мМ КС1, 2,5 мМ ЭГТА, 2,5 мМ МдС1₂ и 0,5 мМ дитиотреитол. 20 мкл этого концентрированного раствора добавляют к 80 мкл Буфера Б с 1,25 мг/мл гликогена, 9,4 мМ глюкозой, 0,63 мМ глюкозо-1-фосфатом. Тестируемые соединения добавляют в виде 5 мкл раствора в 14 %-ном диметилсульфоксиде (ДМСО) перед добавлением фермента. Базовый уровень ферментативной активности СРа в отсутствие добавленных ингибиторов определяют путем добавления 5 мкл 14%-ного ДМСО, а уровень, соответствующий состоянию полного ингибирования ферментативной активности СРа, получают путем добавления 20 мкл 50 мМ кофеина. Смесь инкубируют при комнатной температуре в течение 1 ч и неорганический фосфат, высвобождающийся из глюкозо-1-фосфата, измеряют общим методом ЬапхеИа е! а1. [Ьап/ейа, Р.А., А1уагех, Ь.1., ЯешасЬ, Р.8. апб Сапб1а, О.А. (1979) Апа1. ВюсНет. 100, 95-97], модифицированным следующим образом: 150 мкл молибдата аммония (10 мг/мл), малахитового зеленового (0,38 мг/мл) в 1н. НС1 добавляют к 100 мкл смеси ферментов. Через 20 мин инкубации при комнатной температуре измеряют поглощение при длине волны 620 нм.

Описанные выше тесты проводят, используя интервал концентраций тестируемого соединения, дающий возможность определить величину Κ'₅₀ (концентрацию тестируемого соединения, необходимую для 50%-ного ингибирования) для ингибирования этим тестируемым соединением ферментативной активности Сра 1п уИго.

Тестирование инсулинрезистентности

Комбинации по данному изобретению без труда могут быть адаптированы для клинического применения в качестве гипогликемических агентов. Гипогликемическая активность комбинаций по данному изобретению может быть определена по количеству тестируемого соединения, которое снижает уровень глюкозы в сравнении с растворителем без тестируемого соединения у самцов оЬ/оЬ мышей. Кроме этого, тест позволяет производить измерение величины приблизительной минимальной эффективной дозы (МЭД) для таких тестируемых соединений, необходимой для снижения ш у|уо концентрации глюкозы в плазме у таких мышей.

Поскольку концентрация глюкозы в крови тесно связана с развитием диабетических расстройств, эти комбинации, благодаря их гипогликемическому действию, предотвращают, подавляют и/или приводят к регрессированию диабетических расстройств.

Самцов мышей линии С57ВЬ/61-оЬ/оЬ возрастом от пяти до восьми недель (полученных из 1асккоп ЬаЬога!о!у, Ваг НагЬог, МЕ) помещают по пять животных в клетку в соответствии со стандартной практикой ухода за животными. После периода акклиматизации в одну неделю животных взвешивают и перед любой обработкой из ретро-глазничного синуса отбирают 25 мкл крови. Образцы крови немедленно разбавляют в отношении 1:5 с помощью физиологического раствора, содержащего 0,025%-ную натриевую соль гепарина, и хранят во льду для анализов на метаболиты. Животных распределяют по группам лечения так, чтобы в каждую группу входили животные с одинаковой средней концентрацией глюкозы в плазме. После распределения по группам животным каждый день в течение четырех дней перорально вводят растворитель, содержащий или: 1) 0,25%-ную (вес/объем) метилцеллюлозу в воде без подведения рН; или 2) 0,1%-ный Р1игошс^Я Р105 В1оск Соро1утег 8шТас1ап1 (ВА8Е СогрогаНоп, Рагыррапу, N1) в 0,1%-ном физиологическом растворе без подведения рН. На 5-й день животных еще раз взвешивают и после этого перорально вводят тестируемое соединение или один растворитель. Все лекарства вводят в растворителе, содержащем или: 1) 0,25%-ную (вес/объем) метилцеллюлозу в воде без подведения рН; или 2) 10%-ный ДМСО/0,1%-ный Р1игошс^Я Р105 (ВА8Е СогрогаНоп, Рагыррапу, N1) в 0,1%-ном физиологическом растворе без подведения рН. Затем, тремя часами позже, для определения уровней метаболитов крови у животных отбирают кровь из ретроглазничного синуса. Свежесобранные образцы центрифугируют в течение двух минут при 10000 х д при комнатной температуре. Супернатант анализируют на глюкозу, например, с помощью АЬЬоП АГ™ (АЬЬо!! ЬаЬога!ойек, О|адпокБск ОМкюп, Штд, ТХ) и УТ 8ирег 8ук!ет^Я АнЮапаКхег (АЬЬо!! ЬаЬога!опек, Шшд, ТХ) или с помощью АЬЬой 8рес!гит ССХ™ Аи1оапа1ухег (АЬЬой ЬаЬога!ойек, Шшд, ТХ), применяя А-Сеп!™ Тек! геадеп! кук!ет (АЬЬо!! ЬаЬога!ойек, Штд, ТХ) (модификацию метода Я|с1Иепс11 апб Оаитеа1бег, 8с11\уе1/епксНе Меб|/йпкс11е ХУосНепксНпГк 101, 860 (1971)) (гексокиназный метод), используя стандарт с концентрацией 100 мг/дл. Концентрацию глюкозы в плазме далее рассчитывают по следующей формуле:

глюкоза в плазме (мг/дл)=объем образца х 8,14, где 8,14 представляет собой фактор разбавления, подведенный для гематокритного числа плазмы (принимая гематокритное число равным 44 %).

У животных, которым вводят растворитель, поддерживается существенно неизменный гипергликемический уровень глюкозы (например, выше или равный 250 мг/дл), у животных, которых лечат с помощью нужных доз тестируемых соединений, наблюдается значительно более пониженный уровень глюкозы. Гипогликемическую активность тестируемых соединений определяют на 5-й день с помощью статистического анализа (непарный 1-тест) средней концентрации глюкозы в плазме между группой, которую подвергают лечению тестируемым соединением, и группой, которую подвергают лечению растворителем. Описанный выше тест осуществляют, используя интервал доз тестируемых соединений, позволяющий определить величины приблизительной минимальной эффективной дозы (МЭД) для снижения ш у1уо концентрации глюкозы.

Соединения по данному изобретению без труда могут быть адаптированы для клинического применения в качестве агентов, реверсирующих гипергликемию, агентов, понижающих уровень триглицеридов, и гипохолестеринемических агентов. Такая активность может быть определена по количеству тестируемого соединения, которое снижает уровень инсулина, триглицеридов или холестерина относительно контрольного растворителя без тестируемого соединения у самцов оЬ/оЬ мышей.

Поскольку концентрация холестерина в крови тесно связана с развитием сердечнососудистых, церебрально-сосудистых и периферических сосудистых заболеваний, комбинации по данному изобретению, благодаря их гипохолестеринемическому действию, предотвращают, подавляют и/или приводят к регрессированию атеросклероза.

Поскольку концентрация инсулина в крови связана с активацией роста клеток сосудов и усилением удержания ионов натрия в почках (в дополнение к другим действиям, например активации утилизации глюкозы) и известно, что эти функции вызывают гипертензию, комбинации по данному изобретению, благодаря их гипоинсулинемическому действию, предотвращают, подавляют и/или приводят к регрессированию гипертензии.

Поскольку концентрация триглицеридов и свободных жирных кислот в крови вносит вклад в общий уровень липидов крови, комбинации по данному изобретению, благодаря их приводящей к снижению уровня триглицеридов и свободных жирных кислот активности, предотвращают, подавляют и/или приводят к регрессированию гиперлипидемии.

Свободные жирные кислоты вносят вклад в общий уровень липидов крови и независимо от этого негативно коррелируют с чувствительностью к инсулину в разнообразных физиологических и патологических состояниях.

Самцов мышей линии С57ВЬ/61-оЬ/оЬ возрастом от пяти до восьми недель (полученных из 1асккоп ЬаЬога!о1у, Ваг НагЬог, МЕ) помещают по пять животных в клетку в соответствии со стандартной практикой ухода за животными и кормят без органичения стандартной пищей для грызунов. После периода акклиматизации в одну неделю животных взвешивают и перед каким-либо лечением из ретро-глазничного синуса отбирают 25 мкл крови. Образцы крови немедленно разбавляют в отношении 1:5 с помощью физиологического раствора, содержащего 0,025%-ную натриевую соль гепарина, и хранят во льду для анализов на глюкозу плазмы. Животных распределяют по группам лечения так, чтобы в каждую группу входили животные с одинаковой средней концентрацией глюкозы в плазме. Соединения, которые необходимо протестировать, вводят перорально путем кормления через желудочный зонд в виде от приблизительно 0,02%-ного до 2,0%-ного раствора (вес/объем (в/о)) или в 1) 10%-ном ДМСО/0,1 %-ном Р1игошс^К Р105 В1оск Соро1утег 8игГас1ап! (ВА8Р Согрогайоп, Рагыррапу, N1) в 0,1%-ном физиологическом растворе без подведения рН, или в 2) 0,25%-ной (в/о) метилцеллюлозе в воде без подведения рН. Введение однократной дневной дозы (кл.б.) или двукратной дневной дозы (Ь.1.б.) поддерживают на протяжение от 1 до, например, 15 дней. Контрольные мыши получают только 10%-ный ДМСО/0,1%-ный Р1игошс^К Р105 в 0,1%-ном физиологическом растворе без подведения рН или 0,25%-ную (в/о) метилцеллюлозу в воде без подведения рН.

Через три часа после введения последней дозы животных умерщвляют обезглавливанием и кровь из туловища для отделения сыворотки собирают в пробирки вместимостью 0,5 мл, содержащие 3,6 мг смеси фторида натрия и оксалата калия в весовом отношении 1:1. Свежесобранные образцы центрифугируют в течение двух минут при 10000 х д при комнатной температуре и сыворотку (супернатант) переносят и разбавляют в отношении 1:1 (объем/объем) с помощью раствора апротинина (1 Τΐυ/мл) в 0,1 %-ном физиологическом растворе без подведения рН.

До использования в тестах разбавленные образцы сыворотки хранят при -80°С. Оттаявшие разбавленные образцы сыворотки анализируют на уровень инсулина, триглицеридов, свободных жирных кислот и холестерина. Концентрацию инсулина в сыворотке определяют, используя наборы Ес.|иа1е^К ША ΕΝδυΜΝ (метод двойных антител; в соответствии с указаниями производителя), приобретенные в Вшах, 8ои111 РогЦаиб, МЕ. Коэффициент отклонения между измерениями <10%. Триглицериды сыворотки определяют, используя, АЬЬо!! ¥Р™ и ¥Р 8ирег 8ук!ет^К Аи1оапа1ухег (АЬЬо!! ЬаЬога!опе8, [г^ппд. ТX) или АЬЬо!! 8рес1гит ССX™ (АЬЬо!! ЬаЬога!опе8, I^ν^пд, ТX), используя А-Сеп!™ Тпд1ус епбез Тез! геадеп! зуз!ет (АЬЬо!! ЬаЬога!опез, П1адпоз!1сз 0л'1зюп. ^тд, ТX) (ферментативный метод сочетания с липазой; модификация метода 8атрзоп, е! а1., С11шса1 Сйет1з!ту 21, 1983 (1975)). Уровень суммарного холестерина в плазме определяют, используя АЬЬо!! V?™ и V? 8ирет 8уз!ет^К Аи1оапа1ухег (АЬЬо!! ЬаЬога!опез, ^тд, ТX) или АЬЬо!! 8рес!тит ССX™ (АЬЬо!! ЬаЬога!опез, ^тд, ТX) и систему реагентов для тестирования холестерина А-Сеп!™ (ферментативный метод сочетания с холестериноксидазой; модификация метода АПащ е! а1., С11шса1 Сйет1з!гу 20, 470 (1974)), используя стандарты с концентрацией 100 и 300 мг/дл. Концентрацию свободных жирных кислот определяют, применяя набор, полученный из Атапо [п1егпаиопа1 Епхуте Со., Шс., адаптированный для использования с АЬЬо!! V?™ и V? 8ирег 8уз!ет^К Ли1оапа1у/ег (АЬЬо!! ЬаЬога!опез, I^ν^пд, ТX) или АЬЬо!! 8рес!гит ССX™ (АЬЬо!! ЬаЬога!опез, ^юд, ТX). Уровни инсулина, триглицеридов, свободных жирных кислот и суммарного холестерина сыворотки рассчитывают по уравнениям:

инсулин сыворотки (мкед/мл)= значение для образца х 2; триглицериды сыворотки (мг/дл) = значение для образца х 2; суммарный холестерин сыворотки (мг/дл) = значение для образца х 2;

свободные жирные кислоты сыворотки (мкэкв/л) = значение для образца х 2;

где 2 представляет собой фактор разведения.

У животных, которым вводят растворитель, поддерживается существенно неизменный, повышенный уровень инсулина (например 275 мкед/мл), триглицеридов (например 235 мг/дл), свободных жирных кислот (например 1500 мкэкв/мл) и суммарного холестерина (например 190 мг/дл) в сыворотке, тогда как у животных, которых лечат соединениями по данному изобретению, наблюдается сниженный уровень инсулина, триглицеридов, свободных жирных кислот и суммарного холестерина в сыворотке. Активность тестируемых соединений, приводящая к снижению уровня инсулина, триглицеридов, свободных жирных кислот и суммарного холестерина в сыворотке, определяют с помощью статистического анализа (непарный !-тест) усредненных значений концентраций инсулина, триглицеридов, свободных жирных кислот или суммарного холестерина в сыворотке между группой, которую лечат тестируемым соединением, и контрольной группой, которой вводят растворитель.

Активность соединений по данному изобретению в отношении обеспечения защиты от ишемии (например разрушения сердечной ткани) может быть продемонстрирована ш У1!то в соответствии с установками, представленными в ВиШе11 е! а1., Ат. 1. Рйузю1., 264, Н1884-Н1889, 1993 и А11агб е! а1., Ат. 1. Рйузю., 1994, 267, Н66-Н74. Эксперименты проводят, используя выделенные одинаковые по объему препараты сердца крысы, по существу так, как описано в приведенной выше ссылке. Нормальных самцов крыс 8ртадие-ПаМеу, самцов крыс 8ртадиеБаМеу, подвергнутых операции по перетяжке аорты с целью вызвать кардиальную гипертрофию, самцов крыс ВВЛУ с острым диабетом или крыс ВВАУ без диабета, подобранных по возрасту в качестве контрольных, предварительно обрабатывают гепарином (1000 ед, внутрибрюшинно), затем пентобарбиталом (65 мг/кг, внутрибрюшинно). После достижения состояния глубокой анестезии, определяемого по отсутствию рефлекса стопы, сердце быстро иссекают и помещают в ледяной физиологический раствор. Сердце диссимилирующе перфузируют через аорту в течение 2 мин. Частоту сердечных сокращений и вентрикулярное давление определяют, используя латексный баллон в левом желудочке с трубопроводом высокого давления, соединенным с датчиком давления. Сердце перфузируют раствором для перфузии, содержащим (мМ) №С1 118; КС1 4,7; СаС1₂ 1,2; МдС1₂1,2; NаНСОз 25; глюкозу 11. Аппарат для перфузии обеспечен тщательным контролем температуры с помощью ванн для нагревания, используемых для перфузата, и водяной рубашки вокруг трубок для перфузии, необходимых для поддержания температуры сердца при 37°С. Оксигенация перфузата обеспечивается с помощью педиатрического оксигенатора на полых волокнах (Сар1ах, Тегито Согр., Токуо, 1арап), расположенного непосредственно вблизи середины сердца. Сердца подвергают экспозиции раствором для перфузии ± тестируемое соединение в течение приблизительно 10 мин или более с последующей 20 мин глобальной ишемией и 60 мин перфузией в отсутствие тестируемого соединений. В период времени, следующий за ишемией, сравнивают сердечные сокращения контрольных и обработанных тестируемым соединением сердец. В период времени, следующий за ишемией, сравнивают давление в левом желудочке контрольных и обработанных тестируемым соединением сердец. В конце эксперимента сердца дополнительно перфузируют и фиксируют с целью определения отношения области инфаркта к области риска (% IЛ/ААК), как описано ниже.

Терапевтические эффекты соединений по данному изобретению для предупреждения разрушения сердечной ткани, вызванного иным способом - посредством ишемического инсульта, могут быть продемонстрированы ш у1уо в соответствии с установками, представленными в работе Ыи е! а1., С1тси1а!1оп, ^1. 84, №. 1, (1и1у 1991), как подробно здесь описано. В тесте ш У1уо проводят сравнение кардиопротектирующего действия тестируемого соединения относительно контрольной группы, которая получает физиологический раствор. Предварительно отмечено, что короткие периоды ишемии сердечной мышцы с последующей реперфузией коронарной артерии защищают сердце от даль79 нейшей серьёзной ишемии сердечной мышцы (Миггу е! а1., С1гси1а1юп 74:1124-1136, 1986). Кардиопротекция, как показано по восстановлению в сердечной мышце после инфаркта, может быть индуцирована фармакологически с использованием вводимого внутривенно агониста аденозинового рецептора интактным кроликам под анестезией, изучаемым в качестве модели ш 811и предпосылок ишемии сердечной мышцы (Ьш е! а1., С1гси1аИоп 84:350-356, 1991). В тесте 1п у1уо выясняют, способны ли соединения фармакологически индуцировать кардиопротекцию, то есть снижать размер инфаркта сердечной мышцы, в случае их парентерального введения интактным, подвергнутым анестезии кроликам. Эффекты, вызываемые соединениями по данному изобретению, можно сравнить с предпосылками ишемии при использовании А1 агониста аденозина, Ν⁶-1 -(фенил-2Я-изопропил)аденозина (Р^), для которого показано, что он фармакологически индуцирует кардиопротекцию в интактных, подвергнутых анестезии кроликах, исследуемых ш 8Йи (Ьш е! а1., С1гси1а!1оп 84:350356, 1991). Точная методология описана ниже.

Хирургия: самцов белых новозеландских кроликов (3-4 кг) подвергают анестезии с помощью пентобарбитала натрия (30 мг/кг, внутривенно). Посредством вентрального цервикального разреза по средней линии проводят трахеотомию и кроликам осуществляют внешнее дыхание 100%-ным кислородом, используя нагнетающий вентилятор. Вставляют катетеры в левую шейную вену -для введения лекарства, и в левую сонную артерию - для измерений кровяного давления. После этого сердца вынимают через левую торакотомию и вокруг выступающей ветви левой коронарной артерии располагают петлю (00-шелк). Ишемию индуцируют путем затягивания и фиксирования в таком состоянии петли. Ослабление петли позволяет воздействовать на площадь реперфузии. Ишемию сердечной мышцы подтверждают региональным цианозом; реперфузию подтверждают реактивной гиперемией.

Протокол: эксперимент начинают, когда артериальное давление и частота сердечных сокращений будут стабильными, по меньшей мере, в течение 30 мин. Предпосылки ишемии индуцируют, дважды перекрывая коронарную артерию на 5 мин с последующей 1 0-минутной реперфузией. Фармакологические предпосылки индуцируют путем двукратной инфузии тестируемого соединения в течение, например, 5 мин, оставляя 10 мин перед следующим вмешательством, либо путем инфузии агониста аденозина РМ (0,25 мг/кг). Вслед за предпосылками ишемии, фармакологическими предпосылками или когда не предпринималось никаких мер по улучшению состояния (растворитель в качестве контроля) артерию перекрывают на 30 мин и затем проводят реперфузию в течение двух часов с целью индуцирования инфаркта миокарда.

Тестируемое соединение и РМ растворяют в физиологическом растворе или другом подходящем растворителе и разбавляют от 1 до 5 мл/кг, соответственно.

Окрашивание (Ьш е! а1., С1гси1а!юп 84:350356, 1991): по окончании 2-х часового периода реперфузии сердца быстро удаляют, подвешивают в аппарате Лангендорффа и обильно промывают в течение 1 мин с помощью нормального физиологического раствора, нагретого до температуры тела (38°С). Шелковую нить, использованную в качестве петли, далее плотно завязывают для того, чтобы перезатянуть артерию, и с перфузатом вводят 0,5%-ную суспензию флуоресцентных частиц (1-10 мкм) Ийке 8с1епййс Согр. (Ра1о А1!о, СА) для окрашивания всей сердечной мышцы за исключением области риска (нефлуоресцирующий растворитель). Далее сердца быстро замораживают и хранят в течение ночи при -20°С. На следующий день сердца разрезают на ломтики по 2 мм и окрашивают 1%-ным хлоридом трифенилтетразолия (ТТХ). Поскольку ТТХ реагирует с живой тканью, это окрашивание позволяет выявить различие между живой (красное окрашивание) и мертвой тканью (неокрашенная, претерпевшая инфаркт ткань). Площадь претерпевшей инфаркт области (не окрашена) и области риска (нет флуоресцирующих частиц) подсчитываются для каждого ломтика левого желудочка с использованием предварительно откалиброванного анализатора образов. Для нормализации ишемического повреждения относительно различий в областях риска для различных сердец, данные выражают как отношение площади инфаркта к площади риска (% ШАЛИ). Все данные выражают в виде среднего значения ± стандартное отклонение (среднее±8ЕМ) и проводят статистическое сравнение, используя фактор ЛNΟVА или непарный 1-тест. Уровень значимости рассматривается как р<0,05.

Данное изобретение может быть протестировано на его применимость с целью снижения или предотвращения повреждений несердечных тканей, например, головного мозга или печени, с применением методик, описанных в научной литературе. Соединения по данному изобретению могут быть введены с использованием предпочтительного пути введения и растворителя, и в предпочтительное для введения время как до ишемического эпизода, так и во время ишемического эпизода, и вслед за ишемическим эпизодом (период реперфузии), если такой включается, или во время любой из ранее рассмотренных экспериментальных стадий.

Преимущество данного изобретения с целью уменьшения ишемических повреждений головного мозга может быть продемонстрировано, например, на млекопитающих с использованием метода Рагк, е! а1 (Апп. №иго1. 1988;

24:543-551). Кратко: в методике Рагк, е! а1.

взрослых самцов крыс 8ргадие ИаШеу подвер81 гают анестезии первоначально с помощью 2%ного галотана, а затем с помощью механической вентиляции смесью окись азота - кислород (70%:30%), содержащей 0,5-1% галотана. Далее проводят трахеостомию. Ударный объем вентилятора приспосабливают для поддержания артериального давления двуокиси углерода на уровне приблизительно 35 мм ртутного столба (4665,5 Па) и адекватной артериальной оксигенации (РаО₂>90 мм ртутного столба (11997 Па)). Температуру тела можно контролировать с помощью ректального термометра и животных можно поддерживать при нормальной температуре, используя, при необходимости, внешнее нагревание. Затем животным удаляют фрагмент подвисочной кости черепа для того, чтобы экспонировать основной ствол левой средней церебральной артерии (МСА) под операционный микроскоп, и экспонированную артерию перекрывают с помощью микробиполярной коагуляции, вызывая образование больших ишемических повреждений коры головного мозга и базального ганглия. По прошествие трех часов с начала перекрытия МСА крыс подвергают глубокой анестезии с помощью 2%-ного галотана и проводят торакотомию для того, чтобы провести инфузию гепаринизированного физиологического раствора в левый желудочек. Вытекающую жидкость собирают через разрез правого синуса. За промывкой физиологическим раствором следуют приблизительно 200 мл раствора, представляющего собой смесь 40%-ного формальдегида, ледяной уксусной кислоты и абсолютного метанола (ФАМ; 1:1:8; о/о/о), затем животных обезглавливают и голову помещают в фиксирующий раствор на 24 ч. Далее головной мозг удаляют, вскрывают, обрабатывают, заливают в парафин и делают срезы (приблизительно 100 срезов на мозг). Затем срезы окрашивают с помощью гематоксилина-эозина или с помощью комбинации крезилового фиолетового и Ьихо1 быстрого голубого и исследуют под световым микроскопом с целью идентификации и количественной характеристики ишемических повреждений, используя анализатор образов (например, ОнапНте! 720). Объемы и площади ишемии выражают в абсолютных единицах (мм³и мм²) и как процент от общего исследованного района. Влияние композиций и методов по данному изобретению на снижение ишемических повреждений головного мозга, индуцированных перекрытием МСА, отмечается на основании уменьшения площади или объема относительного или абсолютного ишемического повреждения в отделах мозга крыс из группы лечения в сравнении с отделами мозга крыс контрольной группы, обработанных плацебо.

Другие способы, которые, с другой стороны, могут быть применены для демонстрации преимущества данного изобретения в отношении снижения ишемических повреждений головного мозга, включают в себя таковые, опи санные Ыакауата, е! а1. в №иго1о§у 1988; 38:1667-1673, Метеха\\а. е! а1. в 81гоке 1992; 23:552-559, Ро1Ьегдгоуа, е! а1. в Ргос. №111. Асаб. 8с1. 1995; 92:5057-5059 и 6о!б, е! а1. в Вгаш Ке8. 1990; 522:290-307.

Преимущество соединений и способов по данному изобретению для снижения ишемических повреждений печени может быть продемонстрировано, например, на млекопитающих с использованием метода Υокоуата, е! а1. (Ат. 1. РкуДок 1990; 258:6564-6570). Кратко: в методике Υокоуата, е! а1., голодных взрослых самцов крыс 8ргадие Эа\\!еу подвергают анестезии с помощью пентобарбитала натрия (40 мг/кг, внутрибрюшинно), затем животных подвергают трахеотомии и механической вентиляции с помощью комнатного воздуха. Печень полностью удаляют и помещают в камеру для поддержания внешних условий на постоянную, температуру (37°С), затем подвергают перфузии при постоянном давлении величиной 15 см Н₂О (1471,5 Па) через воротную вену модифицированным свободным от гемоглобина буфером КребсаХенселейта (в мМ: 118 ЫаС1; 4,7 КС1; 27 №1Ηί.Ό₃; 2,5 СаС1₂; 1,2 Μ§δΟ₄; 1,2 КН₂РО₄; 0,05 ЭДТА и 11 мМ глюкозу плюс 300 ед. гепарина). рН перфузата поддерживают при 7,4 путем газирования буфера смесью 95% Ο2 - 5% СО2. Каждую печень подвергают перфузии со скоростью потока 20 мл/мин в одном направлении в течение 30 минутного периода промывки и уравновешивания (предшествующий ишемии период), за которым следует 2-х часовой период глобальной ишемии и затем 2-х часовой период реперфузии в условиях, аналогичных условиям предшествующего ишемии периода. Производят отбор аликвот (20 мл) перфузата в период, предшествующий ишемии, непосредственно сразу после периода ишемического перекрывания и каждые 30 мин в течение 2-х часового периода реперфузии. Образцы перфузата тестируют на наличие ферментов клеток печени, например, аспартатаминотрансферазы (АСТ), аланинаминотрансферазы (АЛТ) и лактатдегидрогеназы (ЛДГ), которые при количественном измерении отражают степень ишемического повреждения ткани печени во время процедуры. Активности АСТ, АЛТ и ЛДГ в перфузате могут быть определены различными способами, например рефлектометрическим методом, применяемым в автоматическом анализаторе Кобак ЕкШскет 500, сообщенном Макаио, е! а1. (ИераЮ1оду 1995; 22:539-545). Отмечается, что эффект снижения ишемического повреждения печени, вызванного перекрыванием, с помощью соединений и способов по данному изобретению, основан на снижении выделения ферментов клетками печени непосредственно вслед за периодом перекрывания и/или во время постишемического периода реперфузии, что наблюдается при сравнении подвергнутых перфузии печеней крыс из группы лечения и крыс контрольной группы, обработанных плацебо.

Другие методы и параметры, которые, с другой стороны, могут быть применены для демонстрации преимущества композиций и способов по данному изобретению для снижения ишемических повреждений печени, включают в себя описанные Nакаηο, е! а1. (Нера!о1оду 1995; 22:539-545).

Введение соединений по данному изобретению может быть осуществлено любым способом, который доставляет соединение по данному изобретению к желаемой ткани (например тканям печени и/или сердца). Эти способы включают в себя пероральные способы применения, парентеральные, интрадуоденальные способы применения и т.д. Обычно, соединения по настоящему изобретению вводят в одноразовой (например один раз в день) или в многократной дозах.

Комбинации по данному изобретению полезны для снижения или минимизации поражения, осуществленного непосредственно в любой ткани, которая может быть восприимчива к ишемическому/реперфузионному повреждению (например в сердце, головном мозге, легком, почке, печени, кишках, скелетной мышце, сетчатке), которое является результатом ишемического события (например инфаркта миокарда). Поэтому активные соединения с пользой применяются профилактически для предотвращения, то есть (предположительно или профилактически) для притупления или препятствия развитию, поражения ткани (например ткани миокарда) у пациентов с риском ишемиии (например ишемии миокарда).

Обычно соединения по данному изобретению вводят перорально, но может использоваться парентеральное введение (например, внутривенное, внутримышечное, подкожное или внутримозговое), например в тех случаях, когда пероральное введение представляется не подходящим для безотлагательной помощи или когда пациент не способен принять внутрь лекарство. Также может быть показано местное применение, например, в тех случаях, когда пациент страдает от желудочно-кишечных заболеваний, или всякий раз, когда наилучшим образом лекарственная терапия осуществляется при нанесении на поверхность ткани или органа, что определяется лечащим врачом.

Два разных соединения по данному изобретению могут быть введены вместе одновременно или последовательно в любом порядке либо может быть введена единая фармацевтическая композиция, содержащая описанный выше ингибитор альдозоредуктазы и описанный выше ингибитор гликогенфосфорилазы в фармацевтически приемлемом носителе.

В любом случае количество и хронометрирование вводимых соединений будут, конечно, зависеть от подвергаемого лечению субъекта, от серьезности заболевания, от способа введения и от оценки прописывающего лекарства врача. Таким образом, вследствие изменчивости от пациента к пациенту приведенные ниже дозировки представляют собой руководство, и врач может изменять дозы соединений для достижения лечения (например, активности, понижающей содержание глюкозы; уровней инсулина), которое врач считает подходящим для пациента. При рассмотрении степени желаемого лечения врач должен привести в баланс ряд факторов, таких как возраст пациента, наличие существующей ранее болезни, равно как и наличие других болезней (например, сердечнососудистой болезни).

Таким образом, например, согласно одному способу введения комбинация по данному изобретению может быть введена непосредственно до операции на сердце (например в пределах двадцати четырех часов перед операцией) в тех случаях, когда есть риск ишемии миокарда. В другом случае соединения могут быть введены после операции на сердце (например в пределах двадцати четырех часов после операции), когда есть риск ишемии миокарда. Кроме того, соединения по данному изобретению могут быть введены в режиме хронического каждодневного применения.

В общем случае используется такое количество комбинации по данному изобретению, которое оказывается эффективным для достижения соответствующего инсулинсенсибилизирующего действия.

С другой стороны, используется такое количество комбинации по данному изобретению, которое оказывается эффективным для достижения нормального биологического действия инсулина в «нормальной концентрации», что было бы очевидно по поддержанию эугликемии, нормогликемии и нормальной липидемии (например триглицеридов, холестерина, свободных жирных кислот), в дополнение к нормальному кровяному давлению и нормальной толерантности к глюкозе.

Кроме того, используется такое количество комбинации, которое оказывается эффективным для защиты от ишемии.

Используется такое количество ингибитора альдозоредуктазы по данному изобретению, которое оказывается эффективным для активностей по данному изобретению, например для активностей, снижающих содержание глюкозы в крови, триглицеридов и холестерина, и активностей, приводящих к регрессированию гиперинсулинемии. Обычно эффективная дозировка ингибиторов альдозоредуктазы по данному изобретению находится в диапазоне от приблизительно 0,1 до 100 мг/кг/день в одноразовой или разделенных дозах, предпочтительно от 0,1 до 20 мг/кг/день в одноразовой или разделенных дозах.

В общем случае эффективная дозировка для активностей по данному изобретению, например для активностей, снижающих уровень глюкозы в крови, триглицеридов, свободных жирных кислот и холестерина, и активностей, приводящих к регрессированию гиперинсулинемии, ингибирующих гликогенфосфорилазу соединениий по данному изобретению, находится в диапазоне от 0,005 до 50 мг/кг/день, предпочтительно от 0,01 до 25 мг/кг/день и наиболее предпочтительно от 0,1 до 15 мг/кг/день.

Соединения по настоящему изобретению обычно вводят в форме фармацевтической композиции, содержащей, по меньшей мере, одно из соединений по данному изобретению вместе с фармацевтически приемлемым наполнителем или разбавителем. Таким образом, соединения по данному изобретению могут быть введены по отдельности или вместе в любой традиционной пероральной, парентеральной, ректальной или трансдермальной лекарственной форме.

Фармацевтическая композиция для перорального введения может принимать форму растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул, порошков и тому подобного. Таблетки, содержащие различные эксципиенты, такие как цитрат натрия, карбонат кальция и фосфат кальция, используются наряду с различным разрыхлителями, такими как крахмал, и предпочтительно картофельный крахмал или крахмал из тапиоки, и некоторыми комплексными силикатами вместе со связующими веществами, такими как поливинилпирролидон, сахароза, желатин и аравийская камедь. Вдобавок, для таблетирования часто очень полезными оказываются смазывающие вещества, такие как стеарат магния, лаурилсульфат натрия и тальк. Кроме того, твердые композиции подобного типа используются как наполнители в желатиновых капсулах мягкого и твердого заполнения; в этой связи предпочтительные материалы также включают в себя лактозу или молочный сахар, равно как и полиэтиленгликоли с высокой молекулярной массой. В тех случаях, когда для перорального введения желательны водные суспензии и/или эликсиры, соединения по данному изобретению могут быть скомбинированы с различными подслащающими агентами, корригентами, окрашивающими агентами, эмульгаторами и/или суспендирующими агентами, равно как с такими разбавителями, как вода, этанол, пропиленгликоль, глицерин и различные подобные их комбинации.

С целью парентерального введения могут быть использованы растворы в кунжутном или арахисовом масле либо в водном пропиленгликоле, равно как стерильные водные растворы соответствующих водорастворимых солей. В случае необходимости такие водные растворы могут быть подходящим образом забуферены, и жидкостный разбавитель сначала делают изотоническим с помощью физиологического раство ра или глюкозы. Эти водные растворы особенно подходят для внутривенных, внутримышечных, подкожных и интраперитонеальных инъекций. В этой связи все используемые стерильные водные среды легко могут быть получены стандартными способами, хорошо известными специалистам.

С целью трансдермального (например местного) введения готовят разбавленные стерильные водные или частично водные растворы (обычно в приблизительно от 0,1%-ной до 5%ной концентрации), в остальном подобные вышеупомянутым парентеральным растворам.

Специалистам известны или будут очевидны в свете этого описания способы получения различных фармацевтических композиций с некоторым количеством активного ингредиента. Для примеров способов получения фармацевтических композиций смотри КеиипдЮпХ РНагтасеийса1 8с1епсе5, Маск РиЫкЫпд Сотрапу, Еайег, Ра., 15111 ЕйФоп (1975).

Фармацевтические композиции по изобретению могут содержать 0,1-95% соединения(й) по данному изобретению, предпочтительно 170%. В любом случае композиция или лекарственный препарат, которые нужно применять, будут содержать количество соединения(й) по данному изобретению в количестве, эффективном для лечения болезни/состояния лечимого субъекта.

Так как настоящее изобретение имеет аспект, относящийся к лечению, например, инсулинрезистентного состояния посредством лечения комбинацией активных ингредиентов, которые могут вводиться независимо, изобретение также относится к созданию комбинаций отдельных фармацевтических композиций в форме набора. Набор содержит две отдельные фармацевтические композиции: ингибитора альдозоредуктазы и ингибитора гликогенфосфорилазы, как описано выше. Набор содержит контейнеры для вмещения отдельных композиций, такие как разделенная бутылка или разделенный пакет из тонкой пленки. Обычно набор содержит инструкции к применению отдельных компонентов. Форма набора особенно выгодна в тех случаях, когда отдельные компоненты предпочтительно вводят в различных лекарственных формах (например, пероральной и парентеральной), вводят с различными интервалами дозирования или в тех случаях, когда согласно предписанию врача желательно изменение индивидуальных компонентов комбинации.

Примером такого набора является так называемая блистерная упаковка. Блистерные упаковки хорошо известны в упаковочной отрасли промышленности и широко используются для упаковки фармацевтических стандартных лекарственных форм (таблеток, капсул и тому подобным). Блистерные упаковки обычно состоят из листа сравнительно плотного материала, покрытого тонкой пленкой предпочтительно из прозрачного пластика. В процессе упаковки в пластиковой пленке формируют углубления. Углубления имеют размер и форму таблеток или капсул, которые будут упакованы. Затем таблетки или капсулы размещаются в углублениях, и лист сравнительно плотного материала герметизируют с пластиковой пленкой по лицевой стороне пленки в направлении, противоположном тому, в котором были сформированы углубления. В результате таблетки или капсулы оказываются герметично закрытыми в углублениях между пластиковой пленкой и листом. Предпочтительно, когда прочность листа такова, чтобы таблетки или капсулы можно было удалить из блистерной упаковки вручную путем надавливания на углубления, посредством чего в листе на месте углубления образуется отверстие. Затем таблетка или капсула может быть удалена через указанное отверстие.

Было бы желательно снабдить набор памяткой, например, в виде чисел, расположенных рядом с таблетками или капсулами, посредством чего числа будут соответствовать дням схемы приема, согласно которой определенная таким образом лекарственная форма должна приниматься внутрь. Другим примером такой памятки является календарь, напечатанный на карточке, например, следующим образом «Первая неделя, понедельник, вторник, ... и т.д. ... Вторая неделя, понедельник, вторник, ... » и т.д. Другие разновидности памяток будут очевидны. «Суточная доза» может представлять собой одиночную таблетку или капсулу либо на данный день нужно брать несколько таблеток или капсул. Кроме того, суточная доза первого соединения может состоять из одной таблетки или капсулы, в то время как суточная доза второго соединения может состоять из нескольких таблеток или капсул и наоборот. Памятка должна отразить это.

Согласно еще одному специфическому воплощению изобретения предложен дозатор, разработанный для дозирования суточных доз по одной за один прием в порядке их предполагаемого применения. Предпочтительно, чтобы дозатор был оборудован памяткой, чтобы в дальнейшем облегчить согласованность со схемой приема. Примером такой памятки является механический счетчик, указывающий число суточных доз, которые были дозированы. Другим примером такой памятки является микрокристаллическое запоминающее устройство с батарейным питанием вместе с системой считывания на жидких кристаллах или слышимым сигналом напоминания, который, например, оглашает дату принятия последней суточной дозы и/или напоминает, когда должна быть принята следующая доза.

Соединения по данному изобретению, либо по отдельности, либо в комбинации друг с другом или с другими соединениями, обычно будут вводиться в удобной форме лекарствен ного препарата. Следующие примеры лекарственных препаратов даются только для пояснения и не предполагаются для ограничения объема настоящего изобретения.

В следующих далее лекарственных препаратах «активный ингредиент» означает соединение или соединения по данному изобретению.

Лекарственный препарат 1. Желатиновые капсулы.

Жесткие желатиновые капсулы получают, используя следующее:

Ингредиент Количество (мг/капсула) Активный ингредиент 0,25-100

Крахмал, ΝΓ0-650

Крахмальный текучий порошок0-50

Силиконовая жидкость 350 сст0-15

Лекарственный препарат в форме таблетки получают, используя нижеуказанные ингредиенты:

Лекарственный препарат 2. Таблетки.

Ингредиент Количество (мг/таблетка) Активный ингредиент 0,25-100

Целлюлоза микрокристаллическая 200-650

Диоксид кремния, тонкодисперсный 10-650

Стеариновая кислота 5-15

Компоненты смешивают и прессуют для формирования таблеток. С другой стороны, таблетки с содержанием каждая по 0,25-100 мг активных ингредиентов изготавливают следующим образом.

Лекарственный препарат 3. Таблетки.

Ингредиент	Количество (мг/таблетка)
Активный ингредиент	0,25-100
Крахмал	45
Целлюлоза микрокристаллическая	35
Поливинилпирролидон (в виде10%-ного
раствора в воде)	4
Карбоксиметилцеллюлозы натриевая соль	4,5
Магния стеарат	0,5
Тальк	1

Активные ингредиенты, крахмал и целлюлозу просеивают через сито с размером ячеек № 45 меш США и тщательно перемешивают. Раствор поливинилпирролидона смешивают с полученными порошками, которые затем просеивают через сито с размером ячеек № 1 4 меш США. Изготовленные таким образом гранулы высушивают при 50-60°С и просеивают через сито с размером ячеек № 18 меш США. Затем карбоксиметилцеллюлозы натриевую соль, стеарат магния и тальк, просеянные предварительно через сито с размером ячеек № 60 США, добавляют к гранулам и после смешивания прессуют на таблетировочной машине для получения таблеток.

Суспензии, содержащие каждая по 0,25100 мг активного ингредиента в дозе 5 мл, приготовляют следующим образом.

Лекарственный препарат 4. Суспензии.

Ингредиент Количество (мг/5 мл)

Активный ингредиент 0,25-100мг

Карбоксиметилцеллюлозы натриевая соль 50 мг

Сироп 1,25 мг

Бензойной кислоты раствор 0,10 мл

Корригент Сколько нужно

Краситель Сколько нужно

Вода очищенная до 5 мл

Активный ингредиент просеивают через сито с размером ячеек № 45 США и смешивают с карбоксиметилцеллюлозы натриевой солью и сиропом до образования однородной пасты. Раствор бензойной кислоты, корригент и краситель разбавляют некоторым количеством воды и добавляют при перемешивании. Затем добавляют достаточное для получения требуемого объема количество воды.

Аэрозольный раствор получают содержащим следующие ингредиенты.

Лекарственный препарат 5. Аэрозоль.

Ингредиент Количество (мас. %)

Активный ингредиент0,25

Этанол25,75

Пропеллант 22 (хлордифторметан)70,00

Активный ингредиент смешивают с этанолом, смесь добавляют к части пропелланта 22, охлажденного до 30°С, и переносят в заполняющее устройство. Требуемое количество далее подают в контейнер из нержавеющей стали и разбавляют оставшимся пропеллантом. Затем на контейнер устанавливаются клапанные устройства.

Суппозитории получают следующим образом.

Лекарственный препарат 6. Суппозитории. Ингредиент Количество (мг/суппозиторий) Активный ингредиент 250

Глицериды насыщенных жирных кислот 2000

Активный ингредиент просеивают через сито с размером ячеек № 60 США и суспендируют в глицеридах насыщенных жирных кислот, предварительно расплавленных с использованием минимально необходимого нагревания. Затем смесь выливают в форму для суппозиториев номинальной вместимостью 2 г и позволяют охладиться.

Внутривенный лекарственный препарат получают следующим образом.

Лекарственный препарат 7. Внутривенный раствор.

Ингредиент Количество

Активный ингредиент 20мг

Изотонический физиологический раствор 1000 мл

Раствор вышеупомянутых ингредиентов вводят внутривенно пациенту со скоростью приблизительно 1 мл в минуту.

Вышеупомянутый активный ингредиент может также представлять собой комбинацию агентов.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество

а) ингибитора альдозоредуктазы;

б) ингибитора гликогенфосфорилазы; и

в) фармацевтический носитель.
2. Фармацевтическая композиция для достижения инсулинсенсибилизирующего эффекта у млекопитающего, содержащая

а) некоторое количество первого соединения, причем указанное первое соединение представляет собой ингибитор альдозоредуктазы; и

б) некоторое количество второго соединения, причем указанное второе соединение представляет собой ингибитор гликогенфосфорилазы,

в) фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель, при этом количество только одного первого соединения или количество только одного второго соединения является недостаточным для достижения инсулинсенсибилизирующего эффекта, а объединенный эффект этих количеств первого и второго соединений больше, чем сумма инсулинсенсибилизирующих эффектов, достижимых с использованием индивидуальных количеств первого и второго соединений.
3. Фармацевтическая композиция по п. 1 или 2, в которой ингибитором альдозоредуктазы является 3,4-дигидро-4-оксо-3-[[5-(трифторметил)-2 -бензотиазолил] метил] -1 -фталазинуксус ная кислота или ее фармацевтически приемлемая соль.
4. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-3, в которой ингибитором гликогенфосфорилазы является
5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-(2К)-гидрокси-3 -((3 8)-гидроксипирролидин-1 -ил)-3 -оксопропил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-3 -((38,48)-дигидроксипирролидин1-ил)-(2К)-гидрокси-3-оксопропил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-((К)-гидроксидиметилкарбамоилметил)-2фенилэтил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-((К)-гидроксиметоксиметилкарбамоил) метил) -2-фенилэтил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-((К)-гидрокси-[(2-гидроксиэтил)метилкарбамоил] метил) -2-фенилэтил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-(3 -гидроксииминопирролидин-1 ил)-2-оксоэтил] -амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [2-(цис-3,4-дигидроксипирролидин-1-ил)-2оксоэтил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [2-((38,48)дигидроксипирролидин-1-ил)-2-оксоэтил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-3 -((цис)-дигидроксипирролидин-1 ил)-(2В)-гидрокси-3-оксопропил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-(цис-3,4-дигидроксипирролидин1 -ил)-2 -оксоэтил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [2-( 1,1 -диоксотиазолидин-3 -ил)-2-оксоэтил] амид;

5-хпор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-(4-фторбензил)-2-(4-гидроксипиперидин1 -ил)-2 -оксоэтил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-((3В8)-гидроксипиперидин-1ил)-2-оксоэтил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [2-оксо-2-(( 1В8)-оксотиазолидин-3-ил)этил] амид; или

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-(3 -гидроксиазетидин-1 -ил)-2оксоэтил]амид.

5. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-4, в которой количество ингибитора альдозоредуктазы составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 20 мг/кг.
6. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-5, в которой количество ингибитора гликогенфосфорилазы составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 15 мг/кг.
7. Способ лечения млекопитающего с инсулинрезистентным состоянием, при котором указанному млекопитающему вводят терапевтически эффективное количество

а) ингибитора альдозоредуктазы; и

б) ингибитора гликогенфосфорилазы.
8. Способ по п.7, где инсулинрезистентное состояние представляет собой диабет, гиперинсулинемию, сниженную толерантность к глюкозе, гипергликемию и/или гиперлипидемию после приема пищи, диабет II типа, измененный состав тела, снижение мышечной массы тела, ожирение, гипертензию, дислипидемию, атеросклероз, тканевую ишемию, сердечнососудистые заболевания, синдром Х, беременность, инфекционные состояния, уремию, гиперадрогенизм, гиперкортизолемию или другие состояния, характеризующиеся избытком гормона коры надпочечников, акромегалию, избыток гормона роста или поликистозную болезнь яичников.
9. Способ достижения инсулинсенсибилизирующего эффекта у млекопитающего с инсулинрезистентным состоянием, при котором указанному млекопитающему вводят

а) некоторое количество первого соединения, причем указанное первое соединение представляет собой ингибитор альдозоредуктазы; и

б) некоторое количество второго соединения, причем указанное второе соединение пред ставляет собой ингибитор гликогенфосфорилазы, при этом количество только одного первого соединения или количество только одного второго соединения является недостаточным для достижения указанного инсулинсенсибилизирующего эффекта, а объединенный эффект этих количеств первого и второго соединений больше, чем сумма инсулинсенсибилизирующих эффектов, достижимых с использованием индивидуальных количеств первого и второго соединения.
10. Способ снижения поражения ткани, являющегося результатом ишемии, при котором млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, вводят терапевтически эффективное количество

а) ингибитора альдозоредуктазы; и

б) ингибитора гликогенфосфорилазы.
11. Способ по п. 10, при котором тканью является ткань сердца, головного мозга, печени, почки, легкого, кишечника, скелетных мышц, селезенки, поджелудочной железы, нервная ткань, ткань спинного мозга, сетчатки, сосудистой сети или кишечная ткань.
12. Способ по любому из пп. 7-11, при котором ингибитором альдозоредуктазы является 3,4-дигидро-4-оксо-3-[[5-(трифторметил)-2бензотиазолил]метил]-1-фталазинуксусная кислота или ее фармацевтически приемлемая соль.
13. Способ по любому из пп. 7-12, при котором ингибитором гликогенфосфорилазы является

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-(2В)-гидрокси-3 -((3 8)-гидроксипирролидин-1 -ил)-3 -оксопропил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-3 -((38,48)-дигидроксипирролидин1-ил)-(2В)-гидрокси-3-оксопропил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-((В)-гидроксидиметилкарбамоилметил)-2фенилэтил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-((В)гидроксиметоксиметилкарбамоил)метил)-2фенилэтил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-((В)-гидрокси-[(2-гидроксиэтил)метилкарбамоил] метил) -2-фенилэтил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-(3 -гидроксииминопирролидин-1 ил) -2-оксоэтил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [2-(цис-3,4-дигидроксипирролидин-1-ил)-2-оксоэтил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [2-((38,48)-дигидроксипирролидин-1-ил)-2оксоэтил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-3 -((цис)-дигидроксипирролидин-1 ил)-(2В)-гидрокси-3-оксопропил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-(цис-3,4-дигидроксипирролидин1 -ил)-2 -оксоэтил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [2-( 1,1 -диоксотиазолидин-3 -ил)-2-оксоэтил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-(4-фторбензил)-2-(4-гидроксипиперидин1 -ил)-2 -оксоэтил] амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-((3К8)-гидроксипиперидин-1ил)-2-оксоэтил]амид;

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [2-оксо-2-(( 1К8)-оксотиазолидин-3-ил)этил] амид; или

5-хлор-1Н-индол-2-карбоновой кислоты [(18)-бензил-2-(3 -гидроксиазетидин-1 -ил)-2оксоэтил]амид.
14. Способ по любому из пп.7-13, при котором количество ингибитора альдозоредуктазы составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 20 мг/кг и количество ингибитора гликогенфосфорилазы составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 15 мг/кг.
15. Способ по любому из пп.7-14, при котором млекопитающим является женщина или мужчина.