EA002227B1 - Фармацевтические композиции пептидов, имеющих низкую растворимость в физиологической среде - Google Patents

Фармацевтические композиции пептидов, имеющих низкую растворимость в физиологической среде Download PDF

Info

Publication number
EA002227B1
EA002227B1 EA199901089A EA199901089A EA002227B1 EA 002227 B1 EA002227 B1 EA 002227B1 EA 199901089 A EA199901089 A EA 199901089A EA 199901089 A EA199901089 A EA 199901089A EA 002227 B1 EA002227 B1 EA 002227B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
antide
nicotinamide
pharmaceutical composition
composition according
solubility
Prior art date
Application number
EA199901089A
Other languages
English (en)
Other versions
EA199901089A1 (ru
Inventor
Питер Ричардсон
Original Assignee
Апплайд Резеч Системз Арс Холдинг Н.В.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from EP97108593A external-priority patent/EP0880968A1/en
Application filed by Апплайд Резеч Системз Арс Холдинг Н.В. filed Critical Апплайд Резеч Системз Арс Холдинг Н.В.
Publication of EA199901089A1 publication Critical patent/EA199901089A1/ru
Publication of EA002227B1 publication Critical patent/EA002227B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/25—Growth hormone-releasing factor [GH-RF] (Somatoliberin)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A61K38/09—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH], i.e. Gonadotropin-releasing hormone [GnRH]; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/10—Drugs for disorders of the endocrine system of the posterior pituitary hormones, e.g. oxytocin, ADH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/24—Drugs for disorders of the endocrine system of the sex hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers

Abstract

Описаны фармацевтические композиции, которые включают: а) пептидный агонист ЛГРФ, пептидный антагонист ЛГРФ или пептид ГРФ в качестве активного ингредиента; б) никотинамид и с) физиологический водный раствор, пригодные для парентерального, перорального, назального, ингаляционного пути введения, а также для инъекций.

Description

Область изобретения
Данное изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей:
а) пептид, плохо растворимый в водном физиологическом солевом растворе, в качестве активного ингредиента;
б) неионное ароматическое гидротропное фармацевтически приемлемое вещество и
в) физиологический водный раствор.
В соответствии с предпочтительным осуществлением данного изобретения пептид (а) является аналогом ЛГРФ или ГРФ пептидом.
Предпосылки создания изобретения
Часто бывает необходимо улучшить растворимость лекарственного вещества в физиологической среде, чтобы достичь клинической эффективности инъекционных форм лекарственных препаратов. Пептидные лекарственные вещества часто плохо растворимы в физиологической среде из-за наличия гидрофобных заместителей.
Проблемы растворимости могут также приводить к плохому всасыванию при других путях введения, и в некоторых случаях соответствующие солюбилизирующие вещества могут помочь всасыванию лекарственных веществ при других путях введения, например, при пероральном или назальном.
Примерами пептидных лекарственных веществ, которые так плохо растворимы в физиологической среде, являются пептиды-аналоги ЛГРФ и рилизинг фактор гормона роста ГРФ.
Рилизинг гормон лютеинизирующего гормона (ЛГРФ или ГнРФ) представляет собой декапептид, секретируемый гипоталамусом и способный вызывать выделение как ЛГ (лютеинизирующего гормона), так и ФСГ (фолликулостимулирующего гормона). Он имеет следующую формулу: руго61и-Н15-Тгр-8ег-Туг-61уЬеи-Агд-Рго-61у -ΝΗ2.
ЛГРФ может или стимулировать секрецию гонадотропина или быть сильным ингибитором. При введении путем точной пульсации ЛГРФ может поддерживать нормальную циклическую секрецию гонадотропина. Пульсирующее введение ЛГРФ с использованием компьютеризированного насоса было использовано с хорошими результатами для индукции овуляции у женщин с отсутствием овуляции, связанным с дисфункцией гипоталамуса. При постоянном введении ЛГРФ или его агонисты, как было доказано, являются сильными ингибиторами секреции гонадотропина, дающими временную (полностью обратимую) гонадотропиновую специфическую лекарственную гипофизэктомию.
К настоящему времени синтезированы тысячи аналогов ЛГРФ, которые могут действовать или как агонисты, или как антагонисты. Чтобы получить антагонисты ЛГРФ, которые действуют путем связывания рецепторов, необходимо заменить несколько аминокислот в мо лекуле ЛГРФ. Для антагонистов также необходимы точные топологические характеристики для достижения высокого сродства связывания с рецепторами. Существует много недавно синтезированных аналогов ЛГРФ, в которых аминокислоты содержат ароматические или другие функциональные группы, способные к так называемому гидротропному взаимодействию. Использование антагонистов ЛГРФ с немедленным подавлением ими выделения гонадотропина может быть полезно в таких областях терапии, как контрацепция и при лечении гормонозависимых расстройств. В случае гормонозависимых опухолей специфическим преимуществом может являться исключение первоначальной стимуляторной фазы, создаваемой агонистами ЛГРФ. В отношении обзора по аналогам ЛГРФ см. Кайей апб КМег, 1986.
Антид, в частности, является сильным антагонистом ЛГРФ, формула, биологическая активность и получение которого описаны в патенте ЕР 377665.
В результате исследований, проведенных заявителем, было установлено, что антид обладает очень плохой растворимостью в 0,9% растворе ΝηΟΊ (растворимость 25 мкг/мл) или другой изотонической среде, такой как фосфатнобуферный солевой раствор (растворимость была равна 16 мкг/мл). Предыдущие водные лекарственные формы антида, как было показано, имеют плохую биодоступность и плохую воспроизводимость фармакокинетических показателей. Это связано с тем, например, что антид присутствует в месте инъекции в концентрациях выше 25 мкг/мл, что приводит к образованию осадка при контакте с физиологической средой. Этот осадок может быть желеобразным по природе и обладает неблагоприятным воздействием на всасываемость лекарственного вещества, что показано проведенными заявителем клиническими исследованиями.
Другие антагонисты рилизинг-гормона гонадотропина в водных растворах могут образовывать гелеобразные структуры и, кроме того, как известно, растворимость повышается, когда рН раствора снижается, благодаря усилению ионизации молекулы (Саппоп 1.В., е! а1., 1995).
ГРФ (также называемый соматорелином) является пептидом, секретируемым гипоталамусом, который вызывает выделение гормона роста из передней доли гипофиза. Он существует в природе в виде пептидов из 44, 40 и 37 аминокислот; форма из 44 аминокислот, возможно, может превращаться в формы меньшего размера, но, как сообщено, все они активны, причем активность определяется первыми 29 аминокислотными остатками. Пептид, соответствующий аминокислотной последовательности 1-29 человеческого ГРФ [ЬОКР(1-29)], [чГРФ(1-29)], также называемый серморелином, был получен путем технологии рекомбинантных ДНК, как описано в европейском патенте ЕР 105759.
Серморелин использовали в виде ацетата для диагностики и лечения дефицита гормона роста.
ГРФ имеет терапевтическое значение для лечения некоторых связанных с гормоном роста расстройств. Использование ГРФ для стимуляции выделения ГР является физиологичным способом индуцирования роста длинных костей или анаболизма белков.
Хорошо известно, что природная форма ГРФ может страдать от химической деградации в водном растворе, главным образом Аки в положении 8, что приводит к снижению биологической активности (Рбебшап с! а1., 1991; Вопдегк е! а1., 1992).
Основные гидролитические реакции, происходящие с ГРФ, чувствительны к рН, и как сообщается, представляют собой изменение Акр3 при рН 4-6,5; расщепление связи Акр3-А1а4 при рН 2,5-4,5; дезамидирование и изменение Акп8 при рН выше 7 (Рейх А.М., 1991). Из-за сочетанных путей деградации нестабилизированные водные растворы ГРФ наиболее стабильны в интервале рН 4-5. Вопдегк е! а1. (Вопдегк е! а1., 1992) показали, что реакция дезамидирования у Акп8 быстро усиливается, когда рН повышается выше рН 3.
Разные исследователи получили аналоги ГРФ путем замены аминокислот в последовательности природного ГРФ для улучшения химической стабильности (8етопо 8ушрок1а И8А, 1996; Рпебшап, 1991). В то время как модификация может быть эффективным средством для улучшения стабильности и сохранения биоактивности, она может нежелательной из-за изменения иммуногенности, которая могла бы стать проблемой при хронической терапии, такой как при дефиците гормона роста.
Из литературы известно, что в некоторых случаях добавление ароматических веществ к растворам белков может вызывать отрицательное воздействие на растворимость, приводящее к выпадению осадка. Например, когда ароматические вещества приводили в контакт с рекомбинантным человеческим гормоном роста (рчГР), происходили конформационные изменения или денатурация, приводящие к образованию агрегатов рчГР (Маа Υ.Ρ. апб Нки С. С., 1996). Кроме того, чтобы продемонстрировать, что это не является общим феноменом, было показано, что производные ароматических аминокислот давали улучшенную растворимость и повышенную абсорбцию гормона роста (Ьеопе Вау А. е! а1., 1996).
Никотинамид, как сообщалось, солюбилизирует обычные фармацевтические соединения (т. е. непептиды с молекулярным весом менее 1000 Да) путем комплексообразования с переносом заряда, называемым также гидротропной солюбилизацией. Этот процесс может происходить в результате взаимодействия ароматических групп солюбилизирующего вещества и ароматических или других соответствующих групп в молекуле лекарственного вещества. Например, см. К.акоо1 е! а1., 1991.
Однако было обнаружено, и соответствующие данные представлены в экспериментальной части, что другие молекулы, содержащие ароматические группы, такие как бензоатные или салицилатные, которые могли бы взаимодействовать путем гидротропного механизма (1аш Ν.Κ. апб Ра!е1 У.У. 1986), дают только небольшое улучшение растворимости аналога ЛГРФ (антид) в физиологическом растворе.
В европейской патентной заявке 0649655 описана солюбилизация водорастворимого противоязвенного лекарственного препарата с использованием никотинамида для получения применимой инъекционной формы. Заявлено много потенциальных производных активной составляющей, однако, не представлены данные по экспериментам ш νί\Ό. демонстрирующим улучшенную эффективность.
В заявке РСТ \ΥΟ 96/10417 описано совместное введение человеческого инсулина АкрВ28 и никотинамида для достижения быстрого начала проявления гипогликемического эффекта. Заявленный интервал концентраций никотинамида составлял 0,01-1М (0,01-12 вес.%), но предпочтительно от 0,05-0,5М. Документ дает доказательства более быстрого всасывания во время исследования ш νί\Ό у свиней, однако, механизм, путем которого осуществляется улучшенная абсорбция, не установлен, и поэтому из этого документа нельзя извлечь никаких обобщающих указаний.
Описание изобретения
Было обнаружено, что когда к водному раствору пептидного лекарственного препарата, который обычно плохо растворим в водном физиологическом солевом растворе, добавляют неионное ароматическое гидротропное вещество, его растворимость повышается, и к тому же полученные фармацевтические композиции проявляют превосходную стабильность.
В частности, было обнаружено, что когда к раствору антида в физиологическом растворе (0,9% Νηί'Ί) добавляют никотинамид, последний может способствовать растворимости этого лекарственного препарата. Конечная концентрация солюбилизированного антида зависит от концентрации добавленного никотинамида и с повышением концентрации никотинамида увеличивается экспоненциально, как показано ниже. Как известно, растворимость антагонистов рилизинг гормона гонадотропина повышается по мере того, как снижается рН раствора, однако, представленные здесь в экспериментальной части данные для антида показывают, что повышенная растворимость не связана с эффектом рН. К тому же было обнаружено, что никотинамид может также повышать растворимость антида в чисто водной среде.
Поэтому основным объектом данного изобретения является получение фармацевтической композиции, включающей:
а) пептид, плохо растворимый в водном физиологическом солевом растворе, в качестве активного ингредиента;
б) неионное ароматическое гидротропное фармацевтически приемлемое вещество; и
в) физиологический водный раствор.
Активным пептидным ингредиентом может быть пептид - аналог ЛГРФ или рилизинг фактор гормона роста ГРФ. Предпочтительно, аналог ЛГРФ является антагонистом. Более предпочтительно то, что он является антидом, чГРФ или его ПЭГ -конъюгантами.
По этому изобретению выражение чГРФ используется для охвата всех человеческих пептидов ГРФ, с указанием, в частности, пептидов 1-44, 1-40, 1-29 и их соответствующих амидов (содержащих -ΝΗ2 на своем конце). Все они имеются в продаже. Предпочтительным чГРФ является чГРФ(1-29)-NΗ2. Пептид ГРФ, использованный в примерах, является коммерческим продуктом, которому дано описание в разделе Материалы.
Также было открыто то, что добавление никотинамида к водным растворам чГРФ может снизить скорость дезамидирования Аки8 и дополнительных продуктов деградации, не все из которых были идентифицированы к настоящему времени. Известно, что Акп8 может разрушаться в водном растворе с образованием следующих продуктов деградации: α-Акр8, β-Акр8 и сукцинимидил-Аки8.
Также было установлено, что ГРФ может растворяться в неводных растворителях и благодаря последующему снижению активности воды в растворе предотвращается дезамидирование Акп8. Когда ГРФ растворяли в пропиленгликоле (ПГ), было обнаружено, что существуют альтернативные (не полностью охарактеризованные) пути деградации. Также было обнаружено, что путем включения никотинамида в неводный раствор, такой как ПГ, скорость образования некоторых из этих дополнительных продуктов деградации снижается.
Не ограничивающий перечень соответствующих фармацевтически приемлемых неионных ароматических гидротропных веществ включает никотинамид, никотиновую кислоту, бензойную кислоту, салициловую кислоту, гентизиновую кислоту, аскорбиновую кислоту, гистидин, триптофан, фенилаланин, тирозин, крезол, фенол, ксантины, пиридоксин, фолиевую кислоту, сахарин. Неионные производные любых из вышеприведенных соединений также применимы в целях этого изобретения. Предпочтительным является никотинамид.
Никотинамид является обычно используемым источником витамина В в фармацевтических продуктах и вводится главным образом пероральным путем, но также и путем инъек ций. Были рекомендованы дозы до 500 мг в сутки (разделенные на приемы), например, см. МатИпба1е.
Физиологический водный раствор может быть изотоническим солевым раствором или фосфатно-буферным солевым раствором, или любым соответствующим раствором, содержащим неорганические соли, с той же самой изотоничностью, что и физиологическая среда.
Композиции данного изобретения могут быть пригодными для любого пути введения, такого как пероральное, парентеральное, назальное или ингаляционное введение. Они могут быть в жидкой форме, а также в твердой форме в виде однородной смеси (например, после распылительной сушки, лиофилизации и т.д.). Они могут быть, например (но не ограничиваясь этим), в твердой дозированной форме, такой как желатиновые капсулы для перорального приема, или изготовлены в форме для назальных или легочных ингаляций. Могут использоваться и другие фармацевтически приемлемые дозированные формы, такие как суспензии, эмульсии, микроэмульсии, микронизированные порошки, растворы, суппозитории, пессарии, микросферы, наносферы, имплантанты и т.д., причем абсорбция или стабильность пептидного лекарственного препарата улучшается путем комбинации с неионным гидротропным веществом. Пероральные микроэмульсии являются предпочтительными формами для введения.
Поэтому композиции данного изобретения могут быть также лиофилизированы и снова растворены, и они могут дополнительно включать одно или более стабилизирующих веществ, а также одно или более фармацевтически приемлемых наполнителей.
Примерами интервалов содержания веществ в композиции для инъекций являются следующие:
Антид или чГРФ 0,1 -20,0 мг
Никотинамид 10-300 мг
Пропиленгликоль 0-800 мг
Водная фаза, достаточное количество до 1,0 мл
Термин пептид, как он используется в этой заявке, означает любое соединение, образованное из двух или более аминокислот. В нем аминогруппа (ΝΗ2) одной аминокислоты соединяется с карбоксильной группой (СООН) другой, образуя пептидную связь. Такие аминокислоты могут быть встречающимися в природе, химически синтезированными или модифицированными. Пептиды по этому изобретению имеют, обычно, до 100 аминокислот, предпочтительно до 50, более предпочтительно до 20.
Выражение плохо растворимый в водном физиологическом солевом растворе, которое использовано в данной заявке, означает, что в таком растворе при комнатной температуре без добавления кислот или оснований пептид проявляет растворимость <1 мг/мл и/или что рас002227 творимость в водном физиологическом солевом растворе на один порядок значения ниже, чем растворимость в одной воде при тех же самых условиях.
Данное изобретение будет теперь описано с помощью следующих примеров, которые не должны истолковываться как ограничивающие каким-либо образом данное изобретение. В примерах будут ссылки на чертеж, описанный здесь ниже.
Краткое описание чертежа
Чертеж: представлена растворимость антида в 0,9% растворе №1С1 в зависимости от концентрации никотинамида. График в полулогарифмическом масштабе показывает, что растворимость антида находится в логарифмической зависимости от концентрации присутствующего никотинамида. Важна линейная природа этого графика, так как она позволяет точно учесть эффекты разбавления и также показывает, что была достигнута равновесная растворимость лекарственного вещества в этих растворах.
Примеры Материалы
Антид в сыпучем виде (Васйет), серии 8901 и 9001 чГРФ(1-19)-ИН2 (Ваейеш), серии 1299201 и 1299202.
Фосфатно-буферный физиологический солевой раствор Дулбекко (81дта, Ό-8537).
Гистидин гидрохлорид (Мегск, 1.04351) марки биохимический (Вюсйетщйу).
Никотинамид (Г1ика, 72345), марки, соответствующей требованиям И8Р.
Фенилаланин (Мегск, 7256) - марки биохимический.
Натрий бензоат (Мегск, 6290) - марки ΡΙι.Ειπ/ΝΕ.
Натрий салицилат (8щша. 8-3007) - реагент для общих целей, 35Н1207.
Тиамин гидрохлорид (Мегск, 8181) - марки биохимический.
Каучуковые пробки, бутиловый каучук (Рйаттадитт1, арт. 1779 А1816 серый).
мл флаконы ΌΙΝ2Β стеклянные, типа I (Νιιονη Отр1).
Все другие использованные реагенты были марки аналитический, если не указано иначе.
Оборудование
Использовалось следующее оборудование.
Система для ВЭЖХ Мегск НйасЫ (насос Ь-6200, детектор Ь-4250, автоматическое устройство для подачи образца А8-2000А, ПК Сотрас.|. программное обеспечение НРЬСМападег 2000).
Система для ВЭЖХ Аа1егк (насос 626, контроллер 6008, детектор 994, автоматическое устройство для подачи образца 717, ПК №С, программное обеспечение Мах1та Вакейпе).
Аппарат для лиофильной сушки (Еб^атбк, ЬуоДех мод. 06 и мод. 04).
Метод анализа на антид
ОФ-ВЭЖХ с градиентным элюированием. Колонка С-18 (например, Уубас 218 ТР54, 250 х 4,6 мм). Определение в УФ при 215 нм, объем впрыскивания 15 мкл, подвижная фаза А: фосфатный буфер рН 4,5 (0,1М), подвижная фаза В: ацетонитрил, скорость потока = 1,0 мл/мин, время потока = 23 мин. Во время анализа впрыскивался извне стандартный раствор в концентрации 100 мкг/мл. Градиент составлял: 77% А, 23% В до 52% А, 48% В в течение 30 мин.
Метод анализа на чГРФ
Был разработан метод ОФ-ВЭЖХ для анализа на ГРФ(1-19)-NН2, с помощью которого возможна дифференциация следующих продуктов деградации:
Окисленных: в Ме!27.
Свободной кислоты: ГРФ(1-29)ОН.
Дезамидо: а-Акр8, β-Акр8 и сукцинимидилАкп8.
Ацетилированных: ацетил Туг1.
Изомеризованных: β-Акр8 и сукцинимидил-Акп8.
Усеченных: чГРФ(4-29)^2, ГРФ(9-29)νη2.
Этот метод использовали для определения химической чистоты ряда растворов чГРФ при хранении при 4°С и при 40°С, что показано в следующих таблицах.
Условия были подобными условиям, применяемым для антида, с использованием мобильной фазы, составленной из АСМН2О, и с ТФУ вместо фосфатного буфера. Градиент работал в течение срока, равного 60 мин, с общим временем протока, равным 80 мин.
Стабильность антида в водных растворах
Производили предварительное испытание стабильности растворов антида 0,1 мг/мл при -20, 4, 25 и 40°С, чтобы оценить их стабильность при рН 2, 3 и 4. Растворы с концентрацией 0,1 мг/мл получали, растворяя антид в воде и доводя рН, используя 0,01М соляную кислоту.
Стабильность чГРФ в водных растворах
Производили испытание стабильности водных растворов чГРФ 2,0, 5,0 и 10,0 мг/мл, содержащих никотинамид, при 4 и 40°С, чтобы оценить их стабильность при рН 7,5. Также оценивали эффект добавления пропиленгликоля.
Исследования по солюбилизации антида
Исследования по солюбилизации производили, чтобы изучить эффект:
- рН (растворы подкисляли или уксусной кислотой, или соляной кислотой),
- гидротропных веществ (никотинамида, натрийсахарина, салицилата натрия, бензоата натрия, гистидина гидрохлорида, тиамина гидрохлорида, фенилаланина).
Физиологический солевой раствор, использованный в этих исследованиях, соответствует 0,9% раствору хлорида натрия.
На основе результатов предыдущих исследований к испытуемому раствору добавляли избыток антида и визуально наблюдали, чтобы оценить растворимость после уравновешивания в течение ночи при 25°С. После визуального анализа отбирали ряд растворов для дальнейшего количественного определения растворимости путем фильтрования (0,45 мкм фильтры) и соответствующего разбавления с использованием ОФ-ВЭЖХ метода, описанного выше.
Исследования по растворимости чГРФ
Исследования по растворимости проводили для изучения действия физиологического раствора и фосфатного буфера рН 7 на растворимость чГРФ.
Определение количества растворенного чГРФ производили путем фильтрования уравновешенного раствора через 0,45 мкм фильтр перед разбавлением и анализом ВЭЖХ.
Изготовление лиофилизированной лекарственной формы антида флаконов лиофилизированного продукта антид/никотинамид изготавливают следующим образом:
1) отвешивают 0,7 г ацетата антида (представленного в виде сухого порошка), отвешивают 3,5 г маннита и добавляют примерно 50 мл воды для инъекций (ВДИ),
2) переводят оба вещества в раствор путем легкого перемешивания,
3) доводят до конечного веса 70 г добавлением ВДИ,
4) заполняют флаконы 1 мл раствора,
5) цикл лиофилизации:
загружают продукт при комнатной температуре.
Доводят продукт до -40°С и выдерживают в течение 1,5 ч, затем применяют вакуум.
Производят первичную сушку в течение 2 ч.
Повышают температуру стеллажа до +20°С и выдерживают в течение 16 часов.
Повышают температуру стеллажа до +40°С и выдерживают в течение 5 ч до завершения процесса.
Результаты и обсуждение Стабильность антида в водных растворах
Результаты трехмесячного испытания на стабильность растворов 0,1 мг/мл антида, доведенных до рН 2, 3 и 4 с использованием соляной кислоты и сохраняемых при -20, +4, +25 и +40°С представлены в табл. 1 и 2. Процент разложения повышался по мере снижения рН, что определилось наблюдаемыми оценками чистоты. Также было отмечено, что хранение при -20°С отрицательно влияло на стабильность продукта, когда рН был ниже 4.
Исследования по растворимости антида
Действие рН
В табл. 3 и 7 обобщены наблюдения, собранные для получения информации по поведению растворимости антида в воде для инъекций (ВДИ), ВДИ подкисляется НС1 или уксусной кислотой, физиологическим солевым раствором или физиологическим раствором, подкисленным уксусной кислотой. В согласии с предыдущими исследованиями растворимость антида повышалась, когда рН снижался.
В табл. 3 естественный рН в растворе ацетата антида составляет от 4,4 до 5,0, в зависимости от растворенного количества. Антид мог легко растворяться в воде при концентрации 1,0 мг/мл, однако, без дополнительного подкисления, как было обнаружено, предел растворимости составляет 8,1 мг/мл. рН не измеряли, в процессе превращения раствора в гель.
Когда антид добавляли в количестве 50 мг/мл в воду, рН которой доведен до рН 3,0 соляной кислотой, образовывался гель, что указывало на частичную растворимость. На основании этих результатов необходимо было добавлять дополнительное количество кислоты до получения полного растворения при этой концентрации.
В табл. 4 и 5 показано, что значительные количества уксусной кислоты были не эффективны для растворения антида в воде. Добавление 2% уксусной кислоты в воду, что эквивалентно 0,33М раствору (как полагают, слишком концентрированной для использования в целях изготовления инъекционных препаратов), как было обнаружено, эффективно для растворения 10 и 20 мг/мл антида.
Добавление 5 мг/мл антида в 1% уксусную кислоту давало раствор с рН 3,12 в присутствии физиологического солевого раствора. Раствор сохранял опалесценцию, указывающую на то, что растворимость лекарственного вещества была менее 5 мг/мл; точное количество не определялось (табл. 6).
В табл. 7 показано, что антид при концентрации 10 мг/мл в физиологическом растворе не растворялся при рН 3,0 или 4,6, при использовании 4% уксусной кислоты для достижения снижения рН. рН измеряли после приготовления раствора, после чего постепенно образовывался гель, что указывало на частичную растворимость лекарственного вещества. Растворимость лекарственного вещества в физиологическом растворе при рН 3,0, как было обнаружено, составляет 2,2 мг/мл по сравнению со значением, равным 0,025 мг/мл при естественном рН, равным 5,04, для этого раствора.
Действие гидротропных солюбилизирующих веществ на растворимость антида
Оценено действие различных гидротропных веществ (1,5% и 15 вес.%) в физиологических солевых растворах и описано в табл. 8 и 9. Никотинамид и гидрохлорид тиамина, как доказано, являются наиболее эффективными солюбилизирующими веществами.
В табл. 8 показано действие низких концентраций (1,5 вес.%) гидротропных веществ, выбранных по рН раствора, измеренного перед добавлением лекарственного вещества, однако, они были неэффективны при солюбилизации антида при уровне 10 мг/мл в физиологическом растворе.
Эксперимент, описанный в табл. 8, повторяли с использованием низкой концентрации лекарственного вещества и высокой концентрации гидротропного вещества, как описано в табл. 9. После определения количества растворенного антида, было обнаружено, что никотинамид является очень хорошим солюбилизирующим средством для антида при 3,3 мг/мл, растворенных в 15% по весу растворе никотинамида в физиологическом растворе при рН 5,8. Тиамин гидрохлорид также солюбилизировал значительные количества антида в физиологическом растворе при 3,0 мг/мл, растворенных в 15% по весу растворе в физиологическом растворе. В этом случае, однако, подкисление, создаваемое кислой солью тиамина, вызывало существенное снижение рН до 3,3, и солюбилизирующая сила большей частью обусловлена кислотностью раствора. Ионные гидротропные вещества не дают хорошей растворимости антида в физиологическом растворе.
Никотинамид
Были проведены дополнительные исследования, чтобы подтвердить солюбилизирующее действие никотинамида на антид в физиологическом растворе и определить наиболее эффективную для использования концентрацию. Действие этой концентрации никотинамида на растворимость антида показана в табл. 10, где, как было обнаружено, 20% никотинамида в физиологическом растворе обеспечивает растворимость 8,5 мг/мл антида.
Эти результаты представлены графически на чертеже. График в полулогарифмическом масштабе показывает, что растворимость антида находится в логарифмической зависимости от концентрации присутствующего никотинамида. Линейная природа этого графика является важной, так как позволяет точно рассчитывать эффекты разведения, а также показывает, что в этих растворах достигнута равновесная растворимость для этого лекарственного вещества.
Так как доказано, что никотинамид является очень хорошим солюбилизирующим средством для антида, были предприняты дополнительные исследования, чтобы подтвердить химическую совместимость между никотинамидом и антидом. Изготавливали четыре лекарственные формы антида и никотинамида с разным соотношением концентраций и доведенные до рН 5 и испытывали в течение 3 месяцев при +40, +25 и +4°С. Данные по стабильности представлены в табл. 11.
Повышенная вязкость с образованием осадка наблюдалась в лекарственной форме, содержащей 10 мг/мл антида и 5% никотинамида, через 1 неделю при +40 и +25°С; не наблюдалось изменений в образцах, которые хранили при +4°С. Это показывает, что растворимость антида в растворах никотинамида в физиологическом растворе снижается, когда повышается температура. Никакого химического разложения не наблюдалось в лекарственных формах через 3 месяца, что указывает на то, что не существует химической несовместимости между двумя веществами при исследуемых соотношениях. Хроматографические кривые анализа на антид были идентичными кривым стандартов с добавлением пика более рано элюируемого никотинамида, который появляется при времени удерживания, равного 3,2 мин.
Количества никотинамида, необходимые для того, чтобы солюбилизировать антид после инъекции могут быть больше, чем изотоническая концентрация никотинамида, которая равна 4,5%. Поэтому после инъекции в экстраваскулярную область, жидкости организма должны будут снова уравновешиваться, чтобы достичь осмотического равновесия, что приводит к разбавлению солюбилизирующего вещества. В целях имитации потенциального разбавления инъекционной лекарственной формы, которое может происходить, было изучено действие разбавления лекарственных форм, содержащих антид и никотинамид в фосфатно-буферном растворе (ФБР) путем следующих ίη νίίτο экспериментов. Делали указанные разбавления, чтобы довести концентрацию никотинамида до 5% путем добавления ФБР. Готовили растворы антида с концентрацией от 1 до 5 мг/мл в 15% никотинамиде/ВДИ с последующим разбавлением в ФБР с коэффициентом 3. Наблюдения производили в течение срока, равного 3 ч, и эффект разбавления в ФБР показан в табл. 12.
Эти результаты находятся в хорошем согласии с растворимостью, определенной для антида в этих системах, представленной в табл. 10, где раствор 5% никотинамида в физиологическом растворе может солюбилизировать примерно 0,5 мг/мл антида. Данные показывают, что возможно получение слегка перенасыщенного раствора антида в жидкостях организма путем изготовления, например, раствора антида 2 мг/мл в 15% никотинамиде. При разбавлении до 5% этот раствор должен содержать 0,67 мг/мл антида, который сохраняется в растворе во время исследований, представленных выше.
Поэтому в соответствующих лекарственных формах, содержащих, например, 15% никотинамида и 2 мг/мл антида или 5% никотинамида и 0,5 мг/мл антида, может, например, снижать образование осадка в месте инъекции после введения. Другие соответствующие лекарственные формы, такие как те, которые описаны выше, могут быть определены по графикам растворимости на чертеже и являются предпочтительными в соответствии с данным изобретением. В результате примеров, представленных выше, можно заключить, что антид может быть эффективно солюбилизирован с помощью ряда веществ, которые являются неионными ароматическими гидротропными соединениями, тогда как добавление ионизированных веществ снижает растворимость в водной среде. Растворимость антида, как показано, увеличивается при снижении рН, тогда как химическая стабильность антида снижается, когда рН снижается ниже значения рН 4.
Было также обнаружено, что антид остается химически стабильным в присутствии никотинамида.
Изучение растворимости чГРФ
Растворимость чГРФ количественно определяли при 25°С в воде в сравнении с физиологическим раствором (хранили в течение одной недели для достижения равновесия) и ФБР, который хранили в течение 5 дней. Растворимости были равны
ВДИ > 1 мг/мл,
0,9% ХаС1 0,042 мг/мл,
ФБР 0,032 мг/мл.
После хранения при 40°С в течение одной недели, наблюдалась следующая растворимость:
0,9% ХаС1 0,097 мг/мл,
0,9% №1С1 + 5% никотинамида 0,875 мг/мл.
Растворы чГРФ (5 и 20 мг/мл) готовили в воде, рН которой доводили до рН 3,0, и добавляли 5 или 20% никотинамида. Путем повышения рН определяли точку преципитации чГРФ. Результаты показывают способность никотинамида солюбилизировать чГРФ даже при высоком рН. Результаты представлены в табл. 13.
Стабильность чГРФ в водных растворах
Путем включения никотинамида в водные растворы чГРФ было открыто, что вещество также обладает способностью значительно снижать химическое разрушение этого пептида. ГРФ, как известно, быстро разрушается в водном растворе путем дезамидирования, скорость которого повышается при повышении рН выше области 4-5. Водные растворы чГРФ готовили в воде, рН которой доводили до 7,5, содержащей или 0,5 или 20% никотинамида, и хранили в течение срока до 12 недель при 4 и 40°С.
Данные, представленные в табл. 14 и 15, показывают, что скорость дезамидирования существенно снижалась в присутствии никотинамида, в частности, скорость дезамидирования у аспарагина в положении 8 в чГРФ, причем рас творы более стабильны при более низкой температуре.
Так как дезамидирование происходит в растворе, активность воды является важным фактором управления скоростью разложения. Поэтому, так как чГРФ растворим в пропиленгликоле, была изучена стабильность чРГФ в растворе этого растворителя, чтобы понять действие на реакции дезамидирования.
Данные, представленные в табл. 16 и 17, показывают, что разложение путем дезамидирования у аспарагина в положении 8 было снижено до очень низкого уровня в этом растворе. Данные также показывают, что чГРФ, растворенный в пропиленгликоле обнаруживает существенное разрушение путями, которые пока еще полностью не выяснены, с образованием многочисленных новых продуктов разложения, дающих пики элюирования после основного пика для чГРФ при примененных условиях хроматографии.
По этим данным можно ясно увидеть, что добавление никотинамида к раствору чГРФ в пропиленгликоле вызывает существенное снижение уровня этих продуктов разложения. На скорость разложения опять влияли температура растворов, причем растворы при 4°С были более стабильны, чем при 40°С.
Чтобы оценить действие сочетания обоих, никотинамида и пропиленгликоля, в водном растворе чГРФ, 10 мг чГРФ растворяли в растворе, содержащем 60% пропиленгликоля и 20% никотинамида, доведенного до рН 7,5.
Данные, представленные в табл. 18, 19 и 20, показывают, что разложение путем дезамидирования у аспарагина в положении 8 снижалось в этом растворе до очень низкого уровня и при 4°С скорость разложения была достаточно низкой, чтобы ее учитывать при фармацевтическом применении.
Эти данные свидетельствуют о стабилизации водных растворов чГРФ путем использования никотинамида и включения пропиленгликоля. Полагают, что для различного фармацевтического применения композиция может быть оптимизирована, или что другие неводные растворители могут быть использованы для снижения активности воды.
Однако для эффективного фармацевтического действия необходимо стабилизирующее действие никотинамида.
Таблица 1
Стабильность растворов антида 0,1 мг/мл при рН 2, 3 и 4; темп.=+4°С и -20°С
Рецептура Испытание -20°С +4°С
Т = 0 5 нед. 5 нед. 12 нед.
рН=2
Чистота, % 99,60 87,50 98,80 98,20
рН=3
Чистота, % 99,60 93,50 99,40 99,10
рН=4
Чистота, % 99,50 99,30 99,20 99,20
Таблица 2 Стабильность растворов антида 0,1 мг/мл при рН 2, 3 и 4;
темп.=+25°С и +40°С
Рецептура Испытание -25°С +40°С
Т=0 5 нед. 12 нед. 5 нед. 12 нед.
рН=2
Чистота, % 99,6 95,8 92,0 83,4 65,0
рН=3
Чистота, % 99,6 99,0 98,8 97,7 95,6
рН=4
Чистота, % 99,5 99,6 99,4 99,4 99,1
Таблица 3 Растворимость антида в ВДИ
Антид (номинальное добавленное количество, мг/мл) Вид рН Растворимость, мг/мл
50 гель НО НО
10 опалесцирующий 4,40 8,13
1 прозрачный 5,00 1,00
Таблица 4 Растворимость антида в ВДИ + 4% уксусной кислоты
Антид (номинальное добавленное количество, мг/мл) Вид рН
100 гель НО
50 гель НО
33 гель НО
25 опалесцирующий 3,18
Таблица 5 Растворимость антида в ВДИ +2% уксусной кислоты
Антид (номинальное добавленное количество, мг/мл) Вид рН
40 гель НО
20 опалесцирующий 3,31
10 прозрачный 3,31
Таблица 6 Растворимость антида в физиологическом растворе + 1% уксусной кислоты
Антид (номинальное добавленное количество, мг/мл) Вид рН
10 гель НО
5 опалесцирующий 3,12
Таблица 7 Влияние рН на растворимость антида в физиологическом растворе
Антид (номинальное добавленное количество, мг/мл) рН Вид Растворимость, мг/мл
1 5,04 опалесцирующий 0,025
10 4,61 гель НО
10 3,01 опалесцирующий 2,23
Таблица 8
Влияние 1,5% гидротропных веществ на растворимость антида в физиологическом растворе
Антид (номинальное добавленное количество, мг/мл) Г идротропное вещество рН Вид Растворимость, мг/мл
10 никотинамид 4,89 гель НО
10 сахарин 4,61 гель НО
10 салицилат натрия 5,08 гель НО
10 тиамин гидрохлорид 3,94 гель НО
Таблица 9
Влияние 15% гидротропных веществ на растворимость антида в физиологическом растворе
Антид (номинальное добавленное количество, мг/мл) Гидротропное вещество рН Вид Растворимость, мг/мл
5 никотинамид 5,79 опалесцирующий 3,32
5 салицилат натрия 5,81 опалесцирующий 0,21
5 тиамин гидрохлорид 3,30 опалесцирующий 3,01
5 бензоат натрия 6,69 опалесцирующий 0,072
5 гистидин гидрохлорид (5%) 4,17 опалесцирующий 0,076
5 фенилаланин (1,7%) 4,59 опалесцирующий 0,066
Таблица 10 Влияние концентрации никотинамида на растворимость антида в физиологическом растворе
Антид (номинальное добавленное количество, мг/мл) Никотинамид, % рН Вид Растворимость, мг/мл
1 5 НО опалесцирующий 0,47
5 10 5,68 опалесцирующий 1,40
5 15 5,76 опалесцирующий 3,23
10 20 5,64 опалесцирующий 8,49
Таблица 11 Стабильность препаратов никотинамида/антида при 4, 25 и 40°С
Антид, мг/мл Никотинамид, % +4°С +25°С +40°С
Т=0 1 нед. 4 нед. 12 нед. 1 нед. 4 нед. 12 нед. 1 нед. 4 нед. 12 нед.
1 5 1,0 НО 0,9 1,0 0,9 0,9 1,0 1,0 0,9 1,0
1 25 1,0 НО 1,0 1,1 1,0 1,0 1,1 1,0 1,0 1,1
10 5 9,7 10,3 10,0 10,5 гель гель гель гель гель гель
10 25 9,8 НО 10,1 НО 9,8 9,5 11,1 10,7 9,4 10,2
Таблица 12
Влияние разведения 1:3 раствора в ФБР антида/15 вес.% никотинамида
Ант. 5 мг/мл Ник. 15% Ант. 4 мг/мл Ник. 15% Ант. 3 мг/мл Ник. 15% Ант. 2 мг/мл Ник. 15% Ант. 1 мг/мл Ник. 15%
Время, мин Разведение 1:3 (ФБР) Разведение 1:3 (ФБР) Разведение 1:3 (ФБР) Разведение 1:3 (ФБР) Разведение 1:3 (ФБР)
0 опалесцирующий опалесцируюший прозрачный прозрачный прозрачный
5 осадок осадок прозрачный прозрачный прозрачный
15 осадок осадок осадок прозрачный прозрачный
30 осадок осадок осадок прозрачный прозрачный
60 осадок осадок осадок прозрачный прозрачный
120 осадок осадок осадок прозрачный прозрачный
180 осадок осадок осадок прозрачный прозрачный
Таблица 13 Растворимость чГРФ в водных растворах никотинамида
Растворы Первоначальный рН Точка выпадения осадка (рН)
ГРФ (5 мг/мл в Н2О при рН 3) 4,93 10,09
ГРФ (20 мг/мл в Н2О при рН 3) 4,94 7,20
ГРФ (5 мг/мл в Н2О при рН 3) +5% никотинамида) 5,65 12,28
ГРФ (20 мг/мл в Н2О при рН 3) + 5% никотинамида) 5,30 10,10
ГРФ (5 мг/мл в Н2О при рН 3) + 20% никотинамида) 6,76 12,01
ГРФ (20 мг/мл в Н2О при рН 3) + 20% никотинамида) 5,52 12,38
Значения (для аббревиатур в табл. 1-13):
НО = не определено; нед. = недели; темп. = температура;
ВДИ = вода для инъекций, ант. = антид; ник. = никотинамид
Таблица 14
Стабильность при +40°С растворов ГРФ (2 мг/мл) + никотинамид, доведенных до рН 7,5
1 неделя Площади хрома т о графических пиков (%). В порядке элюирования
% никотинамида ову=0,76 β-Άκρ8 β-Άκρ3 8исс-Л8? ГРФ 1-29 8исс-П3+Лкр8
0 0,8 16,7 3,8 0,3 68,0 но 5,2
5 0,5 13,4 3,5 0,3 73,9 0,9 3,9
20 0,5 11,5 3,6 0,3 77,1 0,9 3,1
4 недели Площади хроматографических пиков (%).
% никотинамида ову=0,76 β-Άκρ8 β-Άκρ3 8исс-Л8? ГРФ 1-29 8исс-О3?+Лкр8
0 6,2 37,8 5,7 2,7 22,2 2,9 10,4
5 4,9 33,3 6,4 1,9 31,5 2,4 9,0
20 4,2 28,6 7,5 2,1 39,5 2,6 7,6
Таблица 15
Стабильность при +4°С растворов чГРФ (2 мг/мл) + никотинамид, доведенных до рН 7,5
Площади хроматографических пиков (%). В порядке элюирования
% никотинамида 4-29? β-Άκρ8 β-Άκρ3 8исс-Л8? ГРФ 1-29 8исс-О3?+Акр8
Время 0 0,1 0,2 0 0,3 97,6 но 0,6
4 недели
0 0 1,4 0,1 0,1 95,4 но 0,8
5 0 0,9 0,1 0 96,8 но 0,6
20 0 0,8 0,1 0 97,4 но 0,6
8 недель
0 0 2,4 0,2 0,1 93,2 но 1,1
5 0 1,5 0,2 0,1 95,8 но 0,9
20 0 1,4 0,2 0,1 96,3 но 0,8
12 недель
0 1,06 3,39 0,27 0,07 89,9 но 1,29
5 0,28 2,12 0,26 0,11 94,0 но 0,97
20 0,15 1,95 0,26 0,10 95,1 но 0,97
Значения (для аббревиатур в табл. 14-15):
но = нет объяснения. 8исс-Б3 + Лзр8 может элюироваться в виде перекрывающего пика ? = необходимо дальнейшее определение свойств для подтверждения идентификации пика ову = отношение времени удерживания
Таблица 16
Стабильность при +4°С растворов чГРФ (5 мг/мл) в пропиленгликоле + никотинамид, доведенных до рН 7,5
1 неделя 4°С Площади хроматог эафических пиков (%). В порядке элюирования
% никотинамида Ме1-Ох β-Άδρ8 8исс-Ы8 1-29ОН ГРФ1-29 8исс-193+Α:>ρ8 ову 1,07
Партия 1299201 0,04 0 0,6 0,3 97,7 0,4 0,4 0
0 0,2 0 0,2 0,4 95,4 0,5 1,0 -
20 0,3 0 0,4 0,4 97,5 0,4 0,7 -
1 неделя 4°С Площади хроматог эафических пиков (%). В порядке элюирования
(Продолжение) ову 1,08 ову 1,11 ову 1,13 ову 1,17 ову 1,18 ову 1,20 ову 1,23 ову 1,39
0 0,2 0,2 0,4 - - 0,9 0,4 0,1
20 - - - - 0,3 0,2 - 0,2
4 недели 4°С Площади хроматог зафических пиков (%). В порядке элюирования
% никотинамида Ме1-Ох β-Άδρ8 8исс-Ы8 1-29ОН ГРФ1-29 8исс-193+Α:>ρ8 ову 1,07
0 0,1 0 0,2 0,3 95,0 0,4 0,9 0,4
20 0,4 0 0,3 0,3 97,1 0,4 1,0 0,1
4 недели 4°С Площади хроматографических пиков (%). В порядке элюирования
(Продолжение) ову 1,08 ову 1,11 ову 1,13 ову 1,17 ову 1,18 ову 1,20 ову 1,23 ову 1,36
0 0,2 0,6 - 1,6 - 0,3 - 0,1
20 0,1 0,1 - 0,1 - - - 0,1
8 недель 4°С Площади хроматографических пиков (%). В порядке элюирования
% никотинамида Ме1-Ох β-Азр8 8исс-Ы8 1-29ОН ГРФ1-29 8исс-Б3+А8р8 ову 1,07
0 0,3 0 0,2 0,3 92,2 1,2 но 0,7
20 0,5 0 0,3 0,3 95,7 1,8 но 0,1
8 недель 4°С Площади хроматографических пиков (%). В порядке элюирования
(Продолжение) ову 1,10 ову 1,11 ову 1,13 ову 1,17 ову 1,18 ову 1,20 ову 1,23 ову 1,36
0 0,5 0,9 - 2,6 - 0,5 - 0,1
20 0,1 0,1 - 0,2 - 0,1 - 0,1
Таблица 17
Стабильность при +40°С чГРФ (5 мг/мл) в растворах пропиленгликоля + никотинамида, доведенных до рН 7,5
1 неделя 40°С Площади хроматографических пиков (%). В порядке элюирования
% никотинамида Ме1-Ох β-Азр8 8исс-Ы8 1-29ОН ГРФ1-29 8исс-Б3+Азр8 ову 1,07
0 0,3 0 0 0,1 82,9 1,1 1,2 -
20 1,6 0 0,3 0,2 88,0 1,3 1,6 -
1 неделя 40°С Площади хроматографических пиков (%). В порядке элюирования
(Продолжение) ову 1,08 ову 1,11 ову 1,13 ову 1,17 ову 1,18 ову 1,20 ову 1,23 ову 1,39
0 0,5 3,2 1,4 0,3 3,9 2,6 1,37 0,3
20 0,3 1,4 0,4 0 1,8 1,0 1,2 0
4 недели 40°С Площади хроматографических пиков (%). В порядке элюирования
% никотинамида Ме1-Ох β-Азр8 8исс-Ы8 1-29ОН ГРФ1-29 8исс-Б3+Азр8 ову 1,07
0 0,5 0 0 0 44, 6 1,7 1,5 15,1
20 10,9 0,9 0 0,4 43,1 1,3 4,2 10,3
4 недели 40°С Площади хроматографических пиков (%). В порядке элюирования
(Продолжение) ову 1,08 ову 1,11 ову 1,13 ову 1,17 ову 1,18 ову 1,20 ову 1,23 другие
0 15,3 8,4 1,4 3,4 1,4 2,1 1,2 3,4 (η=8)
20 8,9 4,3 - 2,5 2,0 2,0 0,9 8,4 (η=7)
η = число дополнительных пиков, присутствующих на хроматограмме
Таблица 18
Стабильность при +4°С чГРФ (10 мг/мл) в 60% пропиленгликоле + 20% никотинамида, 20% Н2О, доведенных до рН 7,5
Площади хроматографических пиков, %
ГРФ 1-29 Пики окисления, % 4-29? β-Азр8 β-Азр3 8исс-Ы8 8исс-Б3 + Азр8
Отношение ВТ 0,65-0,67 0,87 0,89 0,96 0,98 1,06
Т=0 98,17 0,07-0,07 - 0,04 - 0,38 0,60
4 недели 97,97 0,06-0,07 0,03 0,03 0,03 0,28 0,84
8 недель 97,97 0,07-0,11 0,03 0,04 0,03 0,21 0,93
12 недель 97,62 0,07-0,07 0,08 0,06 0,09 0,16 0,93
Таблица 19 Стабильность при +25°С чГРФ (10 мг/мл) в 60% пропиленгликоле + 20% никотинамида, 20% Н2О, доведенных до рН 7,5
Площади хроматографических пиков, %
ГРФ 1-29 Пики окисления, % 4-29? β-Азр8 β-Азр3 8исс-Ы8 8исс-Б3 + Азр8
Отношение ВТ 0,65-0,67 0,87 0,89 0,96 0,98 1,06
Т=0 98,17 0,07-0,07 - 0,04 - 0,38 0,60
4 недели 96,28 0,08-0,09 0,03 0,27 0,85 0,15 1,34
8 недель 93,69 0,12-0,15 0,03 0,47 2,34 0,08 1,57
12 недель 90,94 0,12-0,14 0,10 0,60 3,54 0,10 1,73
Таблица 20 Стабильность при +40°С чГРФ (10 мг/мл) в 60% пропиленгликоле + 20% никотинамида, 20% Н2О, доведенных до рН 7,5
Площади хроматографических пиков (%)
ГРФ 1-29 Пики окисления, % В1г= 0,76 β-Азр8 β-Азр3 8исс-Ы8 8исс-Б3 + Азр8
Т=0 98,17 0,07-0,07 - 0,04 - 0,38 0,60
4 недели 84,06 0,15-0,16 0,22 1,75 8,59 0,10 2,18
8исс-Б3 + Азр8 может элюироваться в виде неразрешенного пика
Литература
Вопдегз, ά., е! а1., 1п!. ά. Рер!1бе. Рго1ет Кез. 39, 364-374, 1992;
Саппоп 1.В., Е РЕагт. 8сЕ, 84, 953-958, 1995;
Еейх А.М. е! а1., Рерйбез, ебЛогз: О1га1! Е. апб Апбгеи Ό., рр 732-733, Езсот РиЬНзЕегз 1991;
Епебтап, А.К. е! а1.. 1п!. Е Рерббе. Рго!еш Кез. 37, 14-20, 1991;
ОоНдЕ!1у Б., е! а1., Меб Тох1со1., 3, 128-165, 1988;
ОгаЕат С. XV. е! а1., Апаез!Еез1а & Апа1дез1а, 56, 409-13, 1977;
Είιι Ν.Κ. е! а1.. ТЕе Еаз!егп РЕагтас1з!, ΝθуешЬег, 51-54, 1986 РЕуз1с1апз Безк КеГегепсе, Б1Ьпиш топодгарЕ, 47!Е Ебйюп, 1993;
Беопе Вау А, е! а1., Е Мед СЕет., 39(13), 2571-2578, 1996;
Маа У.Е. е! а1., 1п!. Е РЕагт., 140(2): 155168, 1996;
Казоо1 е! а1., Е РЕагт. 8сЕ, 80(4), 387-393, 1991;
8азак1 Н., Вю1. РЕагт. Ви11. (1арап), 18/1, 169-171, 1995;
Вегопо 8утроз1а ИВА, Ого^!Е Еогтопе зесге!адодиез. СЕар!ег 3, ебкогз, В.В. Вегси & К.Е. Аа1кег, 8рппдег-Уег1ад, Ке\у Уогк, 1996;
8р1еде1 АЛ. е! а1., Е РЕагт. 8сЕ, 52, 917927, 1963;
ХУапд Υ-СЛ. е! а1., Е Рагеп!ег. Бгид Аззос., 34, 452-462, 1980;
Уа1ко\узку 8.Н. е! а1., Эгид 1п!. С1т. РЕагт., 11, 417-419, 1977;
Уа1ко\узку 8.Н. е! а1., Е РЕагт. 8сЕ, 74, 416-412, 1986.

Claims (9)

1. Фармацевтическая композиция, вклю- чающая:
а) пептидный агонист ЛГРФ, пептидный антагонист ЛГРФ или пептид ГРФ в качестве активного ингредиента;
б) никотинамид и
с) физиологический водный раствор.
2. Фармацевтическая композиция по п.1, в которой активный ингредиент представляет пептидный антагонист ЛГРФ.
3. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, в которой активный ингредиент представляет антид или человеческий ГРФ.
4. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, которая лиофилизирована и воссоздана и дополнительно включает одно или более стабилизирующее вещество.
5. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, которая дополнительно включает пропиленгликоль.
6. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, которая пригодна для парентерального, перорального, назального или ингаляционного пути введения.
7. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, дополнительно включающая один или более фармацевтически приемлемый наполнитель.
8. Фармацевтическая композиция по любому из предшествующих пунктов, которая пригодна для инъекций.
9. Фармацевтическая композиция по п.3, которая имеет следующие пределы изменения состава:
EA199901089A 1997-05-28 1998-05-26 Фармацевтические композиции пептидов, имеющих низкую растворимость в физиологической среде EA002227B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP97108593A EP0880968A1 (en) 1997-05-28 1997-05-28 Pharmaceutical compositions of peptides having low solubility in physiological medium
EP97121246A EP0880969A1 (en) 1997-05-28 1997-12-03 Pharmaceutical compositions of peptides having low solubility in physiological medium
PCT/EP1998/003079 WO1998053844A1 (en) 1997-05-28 1998-05-26 Pharmaceutical compostions of peptides having low solubility in physiological medium

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA199901089A1 EA199901089A1 (ru) 2000-06-26
EA002227B1 true EA002227B1 (ru) 2002-02-28

Family

ID=26145485

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA199901089A EA002227B1 (ru) 1997-05-28 1998-05-26 Фармацевтические композиции пептидов, имеющих низкую растворимость в физиологической среде

Country Status (27)

Country Link
US (1) US6331520B1 (ru)
EP (2) EP0880969A1 (ru)
JP (1) JP2002502384A (ru)
KR (1) KR100552546B1 (ru)
CN (1) CN1159062C (ru)
AR (1) AR012868A1 (ru)
AT (1) ATE252909T1 (ru)
AU (1) AU743152B2 (ru)
BG (1) BG64668B1 (ru)
BR (1) BR9809708A (ru)
CA (1) CA2291765A1 (ru)
CZ (1) CZ298825B6 (ru)
DE (1) DE69819322T2 (ru)
DK (1) DK0984788T3 (ru)
EA (1) EA002227B1 (ru)
EE (1) EE04001B1 (ru)
ES (1) ES2210772T3 (ru)
HK (1) HK1029928A1 (ru)
IL (2) IL133176A0 (ru)
NO (1) NO323697B1 (ru)
NZ (1) NZ500777A (ru)
PL (1) PL192647B1 (ru)
PT (1) PT984788E (ru)
SI (1) SI0984788T1 (ru)
SK (1) SK284640B6 (ru)
TR (1) TR199902865T2 (ru)
WO (1) WO1998053844A1 (ru)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8343186B2 (en) 2004-04-06 2013-01-01 Arthrex, Inc. Fully threaded suture anchor with transverse anchor pin
EP1064934A1 (en) 1999-06-30 2001-01-03 Applied Research Systems ARS Holding N.V. GRF-containing lyophilized pharmaceutical composition
US20020061838A1 (en) * 2000-05-17 2002-05-23 Barton Holmquist Peptide pharmaceutical formulations
US20040229334A1 (en) * 2003-05-15 2004-11-18 Mendoza Christine B. Process for manufacture of nematode-extracted anticoagulant protein (NAP)
EP2142207A4 (en) * 2007-04-04 2013-01-16 Theratechnologies Inc PHARMACEUTICAL FORMULATIONS OF GHRH MOLECULES
JP6224586B2 (ja) 2012-07-10 2017-11-01 武田薬品工業株式会社 注射用製剤
US9107853B2 (en) 2012-10-12 2015-08-18 L'oreal S.A. Compositions containing phenolic compounds and hydrotropes for cosmetic use
JP6295261B2 (ja) * 2012-10-12 2018-03-14 ロレアル 少なくとも一種のヒドロトロープ及び少なくとも一種の活性化合物を含む化粧品組成物
US9018177B2 (en) 2012-10-12 2015-04-28 L'oreal S.A. Cosmetic compositions for increasing bioavailability of the active compounds baicalin and/or vitamin C
US9072919B2 (en) 2012-10-12 2015-07-07 L'oreal S.A. Synergistic antioxidant cosmetic compositions containing at least one of baicalin and taxifolin, at least one of caffeine and nicotinamide, at least one of vitamin C and resveratrol and ferulic acid
US9023826B2 (en) 2012-10-12 2015-05-05 L'oreal S.A. Compositions containing adenosine and the hydrotropes caffeine and nicotinamide for cosmetic use
US9669242B2 (en) 2013-07-01 2017-06-06 L'oreal Compositions containing at least two phenolic compounds, a lipid-soluble antioxidant and at least one hydrotrope for cosmetic use
JP6634758B2 (ja) * 2015-09-25 2020-01-22 ニプロ株式会社 液体組成物及び凍結乾燥製剤
JP7030720B2 (ja) 2016-02-16 2022-03-07 ストロングブリッジ ダブリン リミテッド 先端巨大症、先端巨大症がん、ｓｓｔ－ｒ５発現腫瘍、２型糖尿病、高血糖症、及びホルモン関連腫瘍の治療において使用するための、生理学的条件において難溶性であるベルドレオチド

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4563352A (en) * 1982-10-04 1986-01-07 The Salk Institute For Biological Studies Human pancreatic GRF
US4935491A (en) * 1987-08-24 1990-06-19 Board Of Regents, The University Of Texas System Effective antagonists of the luteinizing hormone releasing hormone which release negligible histamine
EP0374120A3 (en) * 1988-12-13 1991-07-31 Monsanto Company Comosition for controlled release of polypeptides
DE69019534T2 (de) * 1989-12-21 1995-09-21 Novo Nordisk As Insulinzubereitungen, die nikotinsäure oder nikotinamid enthalten.
AU653026B2 (en) * 1991-06-07 1994-09-15 Teikoku Seiyaku Kabushiki Kaisha Physiologically active polypeptide-containing pharmaceutical composition
US5487898A (en) * 1991-08-26 1996-01-30 Abbott Laboratories Compositions and method for the sublingual or buccal administration therapeutic agents
ES2153362T3 (es) * 1991-08-26 2001-03-01 Abbott Lab Composiciones y procedimientos de administracion sublingual o bucal de agentes terapeuticos.
US5446025A (en) * 1992-06-12 1995-08-29 Abbott Laboratories Formulations and method of the percutaneous administration of leuprolide
CA2123144A1 (en) * 1993-05-10 1994-11-11 David Bodmer Stabilisation of pharmacologically active compounds in sustained release compositions
TW280770B (ru) * 1993-10-15 1996-07-11 Takeda Pharm Industry Co Ltd
WO1996010417A1 (en) * 1994-10-04 1996-04-11 Novo Nordisk A/S PREPARATIONS CONTAINING AspB28 HUMAN INSULIN AND NICOTINAMIDE
KR100236393B1 (ko) * 1996-02-02 1999-12-15 나까니시 히로유끼 사람성장호르몬을 함유하는 의약제제

Also Published As

Publication number Publication date
ATE252909T1 (de) 2003-11-15
DE69819322D1 (de) 2003-12-04
US6331520B1 (en) 2001-12-18
SI0984788T1 (en) 2004-02-29
CZ298825B6 (cs) 2008-02-20
DK0984788T3 (da) 2004-03-08
AU8106298A (en) 1998-12-30
EE04001B1 (et) 2003-04-15
JP2002502384A (ja) 2002-01-22
EP0984788A1 (en) 2000-03-15
AR012868A1 (es) 2000-11-22
CZ423199A3 (cs) 2000-05-17
EE9900545A (et) 2000-06-15
EP0880969A1 (en) 1998-12-02
CN1159062C (zh) 2004-07-28
WO1998053844A1 (en) 1998-12-03
NO995763D0 (no) 1999-11-24
AU743152B2 (en) 2002-01-17
TR199902865T2 (xx) 2000-05-22
ES2210772T3 (es) 2004-07-01
PL192647B1 (pl) 2006-11-30
BR9809708A (pt) 2000-07-11
PT984788E (pt) 2004-01-30
SK159799A3 (en) 2000-07-11
NO323697B1 (no) 2007-06-25
NZ500777A (en) 2001-09-28
EA199901089A1 (ru) 2000-06-26
SK284640B6 (sk) 2005-08-04
HK1029928A1 (en) 2001-04-20
PL336982A1 (en) 2000-07-31
BG64668B1 (bg) 2005-11-30
CN1263469A (zh) 2000-08-16
NO995763L (no) 1999-11-24
IL133176A0 (en) 2001-03-19
EP0984788B1 (en) 2003-10-29
CA2291765A1 (en) 1998-12-03
BG103884A (en) 2000-07-31
DE69819322T2 (de) 2004-07-29
IL133176A (en) 2006-08-01
KR20010012253A (ko) 2001-02-15
KR100552546B1 (ko) 2006-02-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4405666B2 (ja) 安定化テリパラチド溶液剤
AU627174B2 (en) Human growth hormone formulation
JP3065662B2 (ja) 副甲状腺ホルモン製剤
US7144861B2 (en) Stabilized teriparatide solutions
JP4353544B2 (ja) アミリン作動薬ペプチド用製剤
US20020061838A1 (en) Peptide pharmaceutical formulations
EP1246639A2 (en) Glp-2 formulations
JP2005537232A (ja) アミリンアゴニストペプチドの製剤
JP2008195739A (ja) 非水性プロトン性ペプチド配合物
PT1397155E (pt) Formulação de libertação sustentada
JP4845166B2 (ja) ゲルを形成する濃度の性腺刺激ホルモン放出ホルモン拮抗物質
EA002227B1 (ru) Фармацевтические композиции пептидов, имеющих низкую растворимость в физиологической среде
JP3263598B2 (ja) 経鼻吸収用生理活性ペプチド組成物
WO1998000155A1 (en) Stabilization and oral delivery of calcitonin
EP1297850B1 (en) Medicinal preparations for treating sex hormone-dependent diseases
JPH10130171A (ja) 経口投与用医薬組成物
IL301893A (en) Drug composition of dual GLP-1/GLP-2 agonists
MXPA99010863A (en) Pharmaceutical compostions of peptides having low solubility in physiological medium
EP0880968A1 (en) Pharmaceutical compositions of peptides having low solubility in physiological medium
JP2003503443A (ja) Ｇｒｆ含有凍結乾燥薬剤組成物
US20160095904A1 (en) Stabilized liquid formulation

Legal Events

Date Code Title Description
PC4A Registration of transfer of a eurasian patent by assignment
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU