EA001463B1

EA001463B1 - Изолируемые смеси из семян eugenia jambolana lamarck, способы их получения, способ получения оксамата натрия, лекарственные средства для профилактики и лечения диабета и применение указанных смесей, их компонентов и оксамата натрия для получения этих лекарственных средств

Info

Publication number: EA001463B1
Application number: EA199800692A
Authority: EA
Inventors: Альберт Ракото Ратсимаманга; Сюзанн Ракото Ратсимаманга; Филипп Расоанаиво; Жан Лебуль; Жан Прово; Даниель Рейсдорф
Original assignee: Энститю Мальгаш Де Решерш Апплике; Рон-Пуленк Роре С.А.
Priority date: 1996-02-06
Filing date: 1997-02-03
Publication date: 2001-04-23
Also published as: CZ243698A3; CN1325685A; YU4197A; CA2245701C; KR100494625B1; JP2001500103A; US6194412B1; HUP9902586A2; AU1727197A; KR19990082343A; CN1148178C; NO983592D0; DE69705108T2; CZ292800B6; IL125598A; PL328415A1; TNSN97031A1; JP4570694B2; AR005726A1; BG102673A

Abstract

Настоящее изобретение относится к изолируемым смесям из семян Eugenia Jambolana Lamarck,к способам их получения, к способу получения оксамата натрия, к лекарственным средствам для профилактики и лечения диабета и к применению указанных смесей, их компонентов и оксамата натрия для получения этих лекарственных средств.

Description

Настоящее изобретение касается изолируемых смесей из семян ЭВГЕНИЯ ЯМБОЛАНА ЛАМАРК (Ецдеша 1атЬо1апа Ьатагек) (семейство миртовых), лекарственных средств с содержанием этих смесей или определенных компонентов последних, применение этих смесей и их компонентов для изготовления противодиабетического лекарственного средства и способа их приготовления.

Растительный экстракт, приготовленный из семян или коры ЭВГЕНИЯ ЯМБОЛАНА ЛАМАРК с содержанием смешанного полифенольного и стерольного комплекса, описан в патенте БР 2465484.

В настоящее время обнаружены новые смеси, выделяемые из семян ЭВГЕНИЯ ЯМБОЛАНА ЛАМАРК, не содержащие полифенольный и стерольный комплекс, а также некоторые компоненты этих смесей, обладающие сахаропонижающими свойствами.

Эти смеси отличаются тем, что они не содержат полифенольных и стерольных производных и выделяются путем измельчения зерен ЭВГЕНИЯ ЯМБОЛАНА ЛАМАРК, мацерации полученного порошка низшим алифатическим спиртом в горячем состоянии, фильтрации, выделения нерастворимой фракции, не содержащей более полифенольных и стерольных соединений, мацерации нерастворимой фракции с помощью низшего алифатического спирта, фильтрации и выделения нерастворимой фракции, не содержащей более полифенольных и стерольных соединений, обработки нерастворимой фракции аммиачным раствором, обработки аммиачной смеси низшим алифатическим спиртом в горячем состоянии, фильтрации, выделения нерастворимого осадка и сушка этого осадка, представляющего собой смесь I, затем возможной обработки смеси I раствором воды с низшим алифатическим спиртом, отстаивания, затем, с одной стороны, выделения верхней фазы с последующей фильтрацией и выделением фильтрата 1 и, с другой стороны, обработки нижней фазы водой, фильтрации и выделения фильтрата 2, объединения обоих фильтратов, частичного концентрирования результирующего фильтрата, очистки на неполярных адсорбирующих смолах, фильтрации смол, частичного концентрирования фильтрата, центрифугирования концентрата, фильтрации, ультрафильтрации, лиофилизации фильтрата и выделения смеси II.

Из смеси II могут быть выделены оксамат натрия и компоненты формулы он он

-СНОН-СНОН-СНОН-СН₂ОН (В), или Р1 соответствует цепи формулы (А), а Р2 атому водорода.

Оксамат натрия уже описан Тоиккаш!, Αηη., 120, 237 (1861).

Соединения формулы (I) уже описаны Кийп е! со11., ΑΝΝ., 644, 122-127 (1961); Ткцсй1ба е! со11., Адг. Βΐο1. Сйет., 39 (5), 1143-1148 (1975); ТкисЫба е! со11., Адг. Вю1. Сйет., 40 (5), 921-925 (1976); ТкисйЛа е! со11., Мрроп 8йокийш Кодуо Саккащйц 37, 154-161 (1990) Ауа1ок е! со11., !е!гайебгоп, 49, 2655-2675 (1993).

Настоящее изобретение относится также к способу получения смеси I из семян ЭВГЕНИЯ ЯМБОЛАНА ЛАМАРК, высушенных и тщательно измельченных.

Порошок просеивается предпочтительно при помощи стандартного сита с отверстиями диаметром 0,5 мкм, а затем подвергается следующей обработке:

а) мацерации в условиях перемешивания в низшем алифатическом спирте при температуре в интервале 40-70°С,

б) вакуум-фильтрации с выделением нерастворимой фракции;

в) мацерации нерастворимой фракции в условиях перемешивания в низшем алифатическом спирте при температуре в интервале 4070°С;

г) вакуум-фильтрации с удалением спиртовых фаз, содержащих, главным образом, нежелательные полифенолы и стеролы, и выделением нерастворимой фракции;

д) обработке нерастворимой фракции в аммиачном растворе при температуре в интервале 10-30°С;

е) обработке аммиачной смеси в водном растворе низшего алифатического спирта при температуре в интервале 40-70°С;

ж) фильтрации и удалению спиртового раствора с выделением нерастворимого осадка;

з) дополнительному промыванию нерастворимого осадка низшим алифатическим спиртом, фильтрации и удалению спиртового раствора с выделением нерастворимого осадка;

и) и сушке указанного осадка, который представляет собой смесь 1 .

На стадии а) обработка производится, как правило, при помощи 2-1 0 л низшего алифатического спирта, например метанола или этанола, на 1 кг просеянного порошка. Предпочтительно используются 5 л этанола крепостью 93-95° по Гей-Люссаку при 60°С в течение 1 ч.

Фильтрация на стадии б) осуществляется предпочтительно под вакуумом 40 кПа.

На стадии в) на 1 кг исходного просеянного порошка используется обычно от 2 до 1 0 л низшего алифатического спирта, например метанола или этанола. Предпочтительно используется 4 л этанола крепостью 93-95° по ГейЛюссаку при температуре 60°С в течение 1 ч.

где Р₁ соответствует атому водорода, а Р₂ - цепи формулы

-СН₂-СНОН-СНОН-СН₂ОН (А),

Фильтрация на стадии г) осуществляется предпочтительно под вакуумом 40 кПа.

На стадии д) на 1 кг исходного просеянного порошка используется обычно 750-1250 мл водного аммиачного раствора с содержанием предпочтительно 350 мл 28%-ного гидрата окиси аммония на 1000 мл. Особенно предпочтительно использовать 1 литр водного аммиачного раствора и воздействовать в течение 10-30 ч, предпочтительно 20 ч, при температуре примерно 20°С.

На стадии е) влажная аммиачная масса, полученная из 1 кг исходного просеянного порошка, как правило, обрабатывается при размешивании в 2-10 л смеси низшего алифатического спирта с водой (например, метанола или этанола) (от 70/30 до 80/20 по объему) предпочтительнее в 5 л смеси этанола с водой (75/25 по объему) при температуре 60°С в течение 1 ч.

На стадии ж) фильтрация осуществляется предпочтительно через хлопчатобумажную ткань под вакуумом примерно 80 кПа.

На стадии з) промывка осуществляется, как правило, с использованием 500-1500 мл низшего алифатического спирта (например, метанола или этанола) 1 кг исходного просеянного порошка, предпочтительно 1 л этанола, а фильтрация осуществляется через хлопчатобумажную ткань под вакуумом примерно 80 кПа.

На стадии и) сушка осуществляется предпочтительно на открытом воздухе, в тени.

Настоящее изобретение относится также к способу приготовления смеси II.

Полученная ранее смесь I подвергается следующим операциям:

к) обработка смеси I водным раствором низшего алифатического спирта,

л) отстаивание, а затем откачка верхней фазы, которую фильтруют, получая фильтрат 1 , и обработка нижней фазы водой с последующей фильтрацией и получением фильтрата 2, воссоединение фильтратов 1 и 2 и концентрация в водной фазе,

м) очистка полученной смеси неполярной адсорбирующей смолой и дополнительная фильтрация,

н) концентрирование фильтрата, центрифугирование концентрата, фильтрация с последующей ультрафильтрацией,

о) лиофилизация фильтрата и выделение смеси II.

На стадии к) используется обычно от 1 0 до 25 л водного раствора низшего алифатического спирта (например, метанола или этанола) (в пределах от 95/5 до 90/10 по объему) на 1 кг смеси I. Предпочтительно использовать 18 л раствора вода-этанол (17,7-0,93 по объему).

На стадии л) предпочтительно фильтровать верхнюю фазу через миткаль. Целесообразно добавить на 1 кг смеси от 1 0 до 25 л воды в нижнюю фазу, более предпочтительно добавить 10 л и фильтровать через фритту.

На стадии л) концентрирование (сгущение) обычно осуществляется в термосифонном концентраторе при 35°С под вакуумом 0,4 кПа.

На стадии м) используется предпочтительно смола 8861 или смолы типа ΧΆΌ фирмы ЕЬош и На§8, и фильтрация осуществляется через фритту.

На стадии н) концентрирование осуществляется обычно в термосифонном концентраторе при 35°С под вакуумом 0,4 кПа. Также целесообразно проводить последовательно 3 ультрафильтрации через патронный фильтр 1 0, 3 и 1 кДа.

Настоящее изобретение относится также к способу получения оксамата натрия.

Для этого смесь II подвергается следующим операциям:

а) хроматографии на колонке с кизельгуром, выделению фракций, содержащих требуемый продукт, и соединению их в одну фракцию,

б) хроматографии ранее полученной фракции на колонке с сефадексом для получения оксамата натрия.

Настоящее изобретение относится также к способу получения компонентов формулы (I).

б) хроматографии ранее полученной фракции на колонке с сефадексом для получения компонента формулы (I), отличающегося тем, что Κι соответствует атому водорода, а К₂ - остальной части цепи (В) и смеси компонента формулы (I), отличающегося тем, что Κι соответствует атому водорода, а К₂ - остальной части цепи (А), и компонента формулы (I), отличающегося тем, что Κ соответствует остальной части (А), а К₂ - атому водорода,

в) возможна также ВЭЖХ - хроматография смеси соединения формулы (I), отличающегося тем, что Κι соответствует атому водорода, а К₂ остальной части цепи (А) и соединения формулы (I), отличающегося тем, что Κι соответствует остальной части (А), а К₂ - атому водорода.

Хроматография на стадии а) указанных способов осуществляется при помощи органического растворителя, например, гептана, этилацетата или низшего алифатического спирта. Предпочтительно используется колонка ^КСНЕМ ЕЬиТ фирмы Рто1аЬо, насыщенная водой, а затем элюируемая последовательно гептаном, смесью гептана с этилацетатом (50/50 по объему), этилацетатом, смесью этил-ацетата с нбутанолом (95/5; 90/10; 80/20; 50/50; 20/80), нбутанолом с водой (98/2, а затем 95/5 по объему).

Хроматография на стадии б) осуществляется предпочтительно при помощи смеси этанол-вода (50/50 по объему).

Хроматография на стадии в) обычно осуществляется на колонке УМС 180Э8-АО фирмы ΑΙΤ с использованием в качестве элюента смеси воды с 0,1%-ой муравьиной кислотой.

Низшие алифатические спирты, упоминаемые в предыдущем и последующем описании, содержат предпочтительно от 1 до 4 атомов углерода.

Предметом изобретения являются также лекарственные средства, содержащие смеси Ι или ΙΙ, или оксимат натрия, или один или несколько компонентов формулы (I).

Настоящее изобретение относится также к использованию смесей I и II, оксамата натрия и компонентов формулы (I) или смеси последних в приготовлении лекарственных средств для лечения или профилактики диабета и осложнений, связанных с диабетом.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Приготовление смеси I.

Семена ЭВГЕНИЯ ЯМБОЛАНА ЛАМАРК сушатся на открытом воздухе в тени, а затем хорошо измельчаются. Полученный таким образом порошок просеивается через сито с отверстиями 0,5 мкм. В 5 л этанола крепостью 93-95° по Гей-Люссаку производится мацерация при механическом перемешивании 1 кг просеянного порошка в течение 1 ч и температуре 60°С. После вакуум-фильтрации нерастворенный осадок вновь подвергается мацерации в тех же условиях в 4 л этанола указанной крепости в течение 1 ч при 60°С. Оба этаноловых экстракта, содержащие, главным образом, нежелательный полифенольный и стерольный комплекс, удаляются. После полной фильтрации нерастворенный осадок обрабатывается в 1 л аммиачного раствора (350 мл 28%-ой ΝΗ₄ΟΗ и дистиллированная Н₂О в достаточном количестве для получения 1 л раствора) и остается в растворе в течение примерно 20 ч при температуре около 20°С. Влажная аммиачная масса подвергается вторичной мацерации в 5 л смеси зтанола крепостью 93-95° по Гей-Люссаку с водой (75/25 по объему) при механическом перемешивании в течение 1 ч при 60°С. Осадок фильтруется и промывается в 1 л этанола указанной крепости; фильтрат и промывочная жидкость удаляются. Конечный нерастворимый осадок сушится на открытом воздухе в тени. Таким образом получается смесь I в виде порошка, не содержащего полифенольные и стерольные производные. Выход из измельченных и просеянных семян составляет 80%.

Пример 2. Приготовление смеси II.

Полученный в предыдущем примере 1 кг смеси I перемешивается в течение 3 ч в растворе, содержащем 17,7 л воды и 0,93 л этанола. После отстаивания в течение ночи верхняя фаза откачивается (13,5 л), а затем фильтруется через миткаль в фильтре на 7 л (8сйой), образуя фильтрат 1 (13,5 л), а нижняя фаза перемешива ется в течение 1 ч в 20 л воды и фильтруется через фритту № 3, образуя фильтрат 2 (24 л). Фильтраты 1 и 2 объединяются, а затем концентрируются в водной фазе (33,5 л) в термосифонном концентраторе (8сйой) при 35°С под вакуумом 0,4 кПа. Концентрат перемешивается в течение 1 ч с 2,5 л смолы 8861 (Кйош и Назз), а затем фильтруется через фритту № 3. Фильтрат концентрируется в термосифонном концентраторе (8сйой) при 35°С под вакуумом 0,4 кПа на 5,5 л. Концентрат подвергается центрифугированию в трубчатой центрифуге (центробежная сила 62000 д) и фильтруется через фильтр 0,22 мкм (Се1шаи 1уре зирогсар 100) насосом. После 3 последовательных ультрафильтраций через патронный фильтр 10, 3 и 1 кДа и лиофилизации получаются 25 г смеси II в виде темнобурого гигроскопического порошка.

Пример 3. Компоненты, полученные из смеси II.

525 мг смеси II, полученные в примере 2, в растворе 1,1 мл фильтрованной воды Ш1Ш О подвергаются хроматографии на колонке ^КСНЕМ ЕБИТ фирмы РКОЬАВО высотой 50 см и диаметром 1 см, насыщенной фильтрованной водой Ш1Ш О. Элюирование осуществляется гептаном в возвращающем градиенте концентрации в этилацетате, затем в н-бутаноле, нбутаноле/соляной кислоте и в воде (фракция 1: гептан; фракция 2: гептан/этилацетат (50:50); фракции 3-4: этилацетат; фракции 5-6: этилацетат/н-бутанол (95:5); фракции 7-8: этилацетат/нбутанол (90:10); фракции 9-10: этилацетат/нбутанол (80:20); фракции 11-12: этилацетат/нбутанол (50:50); фракции 13-14: этилацетат/нбутанол (20:80); фракции 15-16: н-бутанол; фракции 17-18: н-бутанол/вода (98:2); фракции 19-21: н-бутанол/вода (95:5). Собираются фракции 50 мл. Фракции 19-21 объединяются и концентрируются досуха под пониженным давлением. Таким образом получаются 1 08 мг фракции, которая хроматографируется на колонке с сефадексом БН20 фирмы Рйатшаша (высота 100 см, диаметр 1 см) смесью метанол/вода (50:50 по объему). Элюирование осуществляется той же элюирующей смесью; собираются фракции 1 мл.

. Собираются и концентрируются досуха фракции 88-91. Получается 14,4 мг продукта, который в результате кристаллизации в 0,5 мл этанола 2 мг 2,5-ди-(тетрагидроксибутил) пиразина образует белые кристаллы, отличающиеся следующими показателями:

- вращающая способность [α]²⁰ (№ 589)= -137°±2,0 (диметилсульфоксид; с=0,5),

- ИК-спектр, полученный на приборе №со1е! 608Х-К. в растворе в КВг, основные характеристические полосы поглощения: 3281 см^-1(ν ОН связанные, в том числе Н₂О),

2972+2940+2901+2880 см^-1 (ν СН групп

СН₂ и СНОН), 2733 см^-1 (ν связанные ОН), 1635 см¹ (деформации ОН, в том числе Н₂О), 1491 см¹(ν С=С и Ο=Ν ядра пиразина), 1449 см¹ (ν С=С и С=N ядра пиразина + деформации ОН), 1413 см¹ (деформации группы ОН), 1343 см¹ (ν С=С и СN ядра пиразина),1309+1290+1251+ 1215+1181+1161+1123 см¹ (деформации ОН), 1092 см¹ (ν СО вторичных спиртов), 1048+1035 см¹ (ν СО первичных спиртов + ядро пиразина), 947+899+854 см¹ (вторичные спирты), 877 см¹(ν СN ядра пиразина), 727 см¹ (ν ядро пиразина + деформации ОН), 639 см¹ (ядро пиразина), 607+531 см¹ широкие (деформации ОН), 451+411 см¹ (ядро пиразина), массспектр, полученный на приборе Финниган Т8О46. способ ионизации Μ/ζ = 321 (МН)+,

- ЯМР-спектр 1Н (800 МГц, ЭМ8О, хими ческий сдвиг в ррт): 3,40 и 3,61 (2 т18, 2Н каж дый: СН₂ в 4', 4); 3,58 (2 т18, 2Н каждый: СН в 2', 2, 3', 3); 4,36 (1 широты, 2Н:ОН в 4', 4);

4,40 (б, 1=7,2 Гц, 2Н: ОН в 2',2); 4,63 (б, 1=4,8 Гц, 2Н: ОН в 3', 3); 4,95 (бб, 1=6,0 и 0,6 Гц, 2Н: СН в 1', 1); 5,30 (б, 1=6,0 Гц, 2Н: ОН в 1', 1); 8,61 (8, 2Н, СН в 3 и 6),

УФспектр: Хмакс=275 нм (ε=8260); 206 нм (ε= 10220); (с=19 мг/мл; вода), Хмакс=276 нм (ε=7960); 206 нм (ε=9920); (с=19 мг/мл; НС1 0,1Ν), Хмакс=275 нм (ε=7690); (с=19 мг/мл; КОН 0,1Ν),

ВЭЖХ на колонке УМС 180 ^8Α^: 150 х 4,6 мм ( партия Л1Т/ЭЕ940377) фирмы А1Т, изократическое элюирование Н₂О + 0,1% му равьиной кислоты, расход: 1 мл/мин, УФ детектирование на 270 нм, время удерживания: 2 мин 32 с.

2. Фракции 92 и 93 собираются и концен трируются досуха. Получается 9 мг фракции, которая в результате кристаллизации в 0,5 мл этанола дает 1,2 мг оксамата натрия, имеющего те же показатели, что и описанные. ТОИ8 8ΑΙΝΤ, Апп., 120, 237 (1861).

3. Фракции с 94 по 97 собираются и кон центрируются досуха. Получается 25,9 мг фрак ции, которая после кристаллизации в 0,5 мл эта нола дает 6,2 мг смеси 2(тетрагидроксибутил) 5(2',3',4'тригидроксибутил)пиразина и 2 (тетрагидроксибутил)6(2',3',4'тригидроксибу тил)пиразина, который вновь отделяется ВЭЖХ на колонке УМС 180^8Α^: 150 х 4,6 мм (пар тия А1Т/ЭЕ940377); изократическое элюирова ние Н₂О +0,1% муравьиной кислоты, расход: 1 мл/мин, УФдетектирование на 270 нм.

Таким образом получается 5,2 мг 2 (тетрагидроксибутил)5(2',3',4'тригидроксибу тил)пиразина, который отличается следующими показателями:

вращающая способность [α]²⁰ (Να 589) = -116,3°±1,7 (диметилсульфоксид; с=0,5),

ИКспектр, полученный на приборе Νίοοίοΐ 608ХВ в растворе КВг, основные харак теристические полосы поглощения:

3398 см¹ (ν ОН связанные, в том числе Н2О), 2951+2922+2891 см¹ (ν СН группы СНОН), 2761 см¹ (ν ОН связанные), 1636 см¹(деформации ОН, в том числе Н2О), 1483+1463 см¹ (ν С=С и С=N ядра пиразина), 1411 см¹(деформации групп Он), 1367+1328+1270+

1227+1191 см¹ (деформации групп ОН), 1071 см⁴(у СО вторичных спиртов), 1041 см¹ (ν СО первичных спиртов + ядро пиразина), 943+897 см¹ (вторичные спирты), 869 см⁴(у СН ядра пиразина), 645 см¹ (СН ядра пиразина), 607 см¹широкие (деформации ОН), 446+409 см¹ (ядро пиразина), массспектр, полученный на приборе Финниган Т8О46, способ ионизации Μ/ζ=305 (МН)+,

ЯМРспектр 1Н (600 МГц, ЭМ8О, хими ческий сдвиг в ррт): 2,70 и 3,04 (2бб, 1=9,0 и 15,0 Гц и 1=3,0 и 15,0 Гц, 1Н каждый: СН₂ в 1), между 3,30 и 3,45 (т18, СН в 3, 4', 4); между

3,53 и 3,65 (т18, 4Н: СН в 2', 3', 4', 4); 3,73 (т18, 1Н: СН в 2); 4,37 (1 ширины, 1Н:ОН в 4'); 4,42 (т18, 2Н: ОН в 2'и 4); 4,60 (б, 1=6 Гц, 1Н: ОН в 2); 4,63 (б, 1=6 Гц, 1Н: ОН в 3'); 4,67 (б, 1=6 Гц, 1Н: ОН в 3); 4,92 (бб, 1=6,0 и 0,6 Гц, 1Н: СН в 1'); 5,30 (б, 1=6,0 Гц, 1Н: ОН в 1'); 8,39 (8, 1Н, СН в 6), 8,61 (8, 1Н, СН в 3),

УФспектр: Хмакс=276 нм (ε=7756); 206 нм (ε= 8738); (с=19 мг/мл; вода), Хмакс=277 нм (ε=7218); 208 нм (ε=7171); (с=19 мг/мл; НС1 0,1Ν), Хмакс=276 нм (ε=7467) (с=19 мг/мл; КОН, 0,1Ν),

ВЭЖХ на колонке УМС 180 ^8Α^: 150 х 4,6 мм (партия А1Т/ЭЕ940377) фирмы А1Т, изократическое элюирование Н2О + 0,1% му равьиной кислоты. Расход: 1 мл/мин, УФ детектирование на 270 нм, время удерживания: 3 мин 75 с и 1 мг 2(тетрагидроксибутил)6 (2,3,4тригидроксибутил)пиразина, который отличается следующими показателями:

ЯМРспектр 1Н (600 МГц, ЭМ8О, хими ческий сдвиг в ррт): 2,70 и 3,04 (2бб, 1=9,0 и 15,0 Гц и 1=3,0 и 15,0 Гц, 1Н каждый: СН₂ в 1), между 3,30 и 3,45 (т18, СН в 3,4',4); между

3,53 и 3,65 (т18, 4Н: СН в 2',3',4',4); 3,73 (т18, 1Н: СН в 2); 4,37 (1 ширины, 1Н: ОН в 4'); 4,42 (т18, 2Н: ОН в 2'и 4); 4,60 (б, 1=6 Гц, 1Н: ОН в 2); 4,63 (б, 1=6 Гц, 1Н: ОН в 3'); 4,67 (б, 1=6 Гц, 1Н: ОН в 3); 4,92 (бб, 1=6,0 Гц и 0,6 Гц, 1Н: СН в 1'); 5,30 (б, 1=6,0 Гц, 1Н: ОН в 1'); 8,31 (8, 1Н, СН в 5), 8,53 (8, 1Н, СН в 3),

ВЭЖХ на колонке УМС 180 ^8Α^: 150 х 4,6 мм (партия А1Т/ЭЕ940377) фирмы А1Т, изократическое элюирование Н₂О + 0,1% му равьиной кислоты, расход: 1 мл/мин, УФ детектирование при 270 нм, время удерживания:

мин 61 с.

Сахароснижающий эффект смесей I и II, оксамата натрия и компонентов формулы (I) определяли на мышах, у которых диабет вызывали введением стрептозоцина, и на нормальных мышах в состоянии послеобеденной гипергликемии в соответствии со следующей процедурой:

1. Мыши, у которых диабет вызывали введением стрептозотоцина. У белых мышей 8\νί55 весом 22-25 г диабет вызывали путем внутрибрюшинного введения стрептозотоцина в дозе 210 или 265 мг/кг веса мыши, разведенного в цитратном буфере, в концентрации, позволяющей каждой мыши получить 0,2 мл раствора в день 1-й (Д1). Спустя 3-4 дня на 2-3 мышах было проверено наличие диабета (гликемия выше 7,2 ммолей/л, т.е. 130 мг на 100 мл). Затем гликемия была измерена по истечении 4 ч после приема пищи. Если мыши стали диабетическими, их делят на группы по 5-7 мышей. Каждаягруппа, начиная с Д1, получает ежедневно определенную дозу продукта. Прием осуществляется раз в день в определенное время путем интубации желудка и сопровождается наполнителем 0,4 мл дистиллированной воды. Образуются две контрольные группы:

- группа мышей с диабетом, не охваченная курсом лечения,

- группа нормальных мышей.

Обе контрольные группы получают путем интубации желудка одновременно с мышами, включенными в курс лечения, по 0,4 мл наполнителя.

Лечение длится 4 дня. На 5-ый день продукт не принимается. По истечении 4 ч после приема пищи производится замер конечного уровня гликемии.

II. Нормальные мыши в состоянии послеобеденной гипергликемии.

Белые мыши 8\νί55 весом 22-25 г приводятся в состояние послеобеденной гипергликемии в соответствии со следующей процедурой:

воздержание от приема пищи в течение 2 ч, избыточное питание в течение 1 ч, воздержание от приема пищи в течение 2 ч. По истечении 2 последних часов воздержания производится замер уровня гликемии, что составляет гликемию на время Т₀. Вслед за этим мыши делятся на одинаковые группы в зависимости от уровня гликемии при замере. Апробируемый продукт вводится незамедлительно путем интубации желудка вместе с 0,4 мл дистиллированной воды. Контрольная группа получает наполнитель (0,4 мл дистиллированной воды). По истечении 1 ч производится замер конечного уровня гликемии, которая считается гликемией на время Т60.

Показатели гликемии мышей, заболевших диабетом в результате введения стрептозотоцина

Продукты, мг/мышь/день	Кол-во мышей	Гликемия на Д1, мг/100 мл	Гликемия на Д5, мг/100 мл	% ингибирования
Оксамат натрия (0,5 мг)	5	153,40±11,53	89,90±13,94	-41,46
Смесь II (0,5 мг)	5	270,50±58,72	117,50±17,35	-56,56
2-(Тетрагидроксибутил)-5(2',3',4'-тригидроксибутил) пиразин (0,5 мг)	5	304,25±99,35	164,50±95,13	-45,93
2-Тетрагидроксибутил)-5(2',3',4'-тригидроксибутил) пиразин и 2(тетрагидроксибутил)-6(2',3',4'-тригидроксибутил)пиразин (50:50) (0,25 мг)	6	320,83±130,30	174,00±97,74	-45,77
Контрольная группа	5	221,66±50,17	210,33±20,07	-5,11

Показатели гликемии контрольных мышей в состоянии послеобеденной гипергликемии

Продукты, мг/мышь/день	Кол-во мышей	Гликемия на Т₀, мг/100 мл	Гликемия на Т₆₀, мг/100 мл	% ингибирования
Смесь I (5 мг)	5	129,50±29,06	87,60±14,16	-32,35
Оксамат натрия (0,5 мг)	15	136,46±23,69	102,93±20,95	-24,57
Смесь II (0,5 мг)	15	133,93±17,50	105,60±16,91	-21,15
2,5-Ди(тетрагидроксибутил) пиразин (0,5 мг)	10	136,25±16,92	102,41±14,12	-24,83
2'-(Тетрагидроксибутил)-5(2',3',4'-тригидроксибутил) пиразин (0,5 мг)	10	128,75±21,23	90,50±19,55	-29,70

2-(Т етрагидроксибутил)-5(2',3', 4'-тригидроксибутил) пиразин и 2-(тетрагидроксибутил)-6-(2',3',4'-тригидроксибутил) пиразин (50:50) (0,25 мг)	5	126,60±17,03	100,60±16,88	-20,53
Контрольная группа	10	137,83±13,99	130,50±20,23	-5,32

Смеси, в соответствии с изобретением, оксамат натрия и компоненты формулы (I) обладают легкой токсичностью. Их ЭБ50 превышает 2000 мг/кг при пероральном введении у мышей.

Смеси, в соответствии с изобретением, оксамат натрия и компоненты формулы (I) снижают гликемию страдающего диабетом и, следовательно, полезны для лечения диабета и осложнений, связанных с диабетом.

При использовании этих продуктов в монотерапии для лечения диабета не возникает риска гипогликемии. Это настоящие противодиабетические средства. По-видимому, этот эффект является результатом периферического увеличения глюкозы. Продукты не стимулируют значительное выделение инсулина, но для их действия необходимо небольшое количество инсулина.

У песчаной крысы (Ркаттотук ойекик), которая в неволе самопроизвольно подвержена диабету, эти продукты снижают гипергликемию, предупреждают или уменьшают возникновение катаракты и увеличивают в определенной степени плодовитость.

При лечении человека эти продукты также полезны в профилактике и лечении диабета и, в частности, диабета II типа (ΝΙΌ диабет) без ацетонурии, диабета с ожирением, диабета пятидесятилетних, диабета метаплеторного, диабета взрослых и диабета в легких формах. Они могут быть использованы в дополнение инсулинтерапии (ввиду их потенцирующей инсулиноактивности) при инсулинозависимом диабете, когда они позволяют постепенно уменьшать дозу инсулина, при неустойчивом диабете, инсулинорезистентным диабете, в дополнении к гипогликемизирующим султфамидам, когда последние не определяют значительного снижения гликемии. Эти продукты могут также быть использованы при осложнениях, связанных с диабетом, например, при гиперлипемиях, нарушениях липидного обмена, дизлипемиях, ожирении. Равным образом они полезны в профилактике и лечении поражений атеросклерозом и их осложнений (коронаропатий, инфаркта миокарда, кардиомиопатии, эволюции этих трех осложнений в направлении левожелудочковой недостаточности, различных артериопатий, артериитов нижних конечностей с появлением хромоты и развитием язвы и гангрены, цереброваскулярной недостаточности и ее осложнений, половой импотенции сосудистого происхождения), диабетической ринопатии и всех ее проявлений (повышение проницаемости капилляров, расширение и тромбоз капилляров, микроаневризмы, артериовенозный шунт, точечные и макулярные кровотечения, экссудаты, макулярные отеки, проявления пролиферирующей ретинопатии: неососуды, рубцы пролиферирующего ретинита, кровоизлияния в глазное тело, отслоение сетчатки), диабетической катаракты, диабетической невропатии в ее различных формах (периферические полиневропатии и их проявления, например, парестезии, гиперестезии и боли, мононевропатии, радикулопатии, автономные невропатии, амиотрофии диабетические), проявлений диабетической стопы (язвы нижних конечностей и стопы), диабетической нефропатии в двух ее формах: диффузной и узловатой, атероматоза), увеличение липопротеинов высокой плотности -ЛВП, способствующих элиминации холестерина, начиная с атероматозных бляшек, уменьшение липопротеинов низкой плотности -ЛНП, снижение соотношения ЛНП/ЛВП, ингибирование окисления ЛНП, уменьшение адгезивности тромбоцитов), гиперлипемий и дизлипемий (гиперхолестеринемий, гипертриглицеридемий, нормализация содержания жирных кислот, нормализация урикемии, нормализация апопротеинов А и В), катаракты, гипертонии и ее последствий.

Лекарственные средства согласно изобретению состоят из смеси, соответствующей изобретению, оксамата натрия, соединения формулы (I) или комбинации этих продуктов, в чистом виде или в композиции, в которой она ассоциируется с любым другим фармацевтическим совместимым продуктом, который может быть инертным или физиологически активным. Лекарственные средства в соответствии с изобретением могут вводиться перорально, парентерально, ректально или иметь наружное применение.

В виде твердых композиций для перорального введения могут применяться таблетки, пилюли, порошки (желатиновые капсулы, облатки) или гранулы. В этих композициях действующее начало в соответствии с изобретением смешивается с одним или несколькими инертными разбавителями, например крахмалом, целлюлозой, сахарозой, лактозой или диоксидом кремния, в токе аргона. Эти композиции также могут включать кроме растворителей, другие вещества, например одно или несколько смазывающих веществ, таких как стеарат маг ния или тальк, краситель, сироп (драже) или лак.

В виде жидких композиций для перорального введения могут применяться растворы, суспензии, эмульсии, сиропы, эликсиры, фармацевтически приемлемые и содержащие инертные растворители, например, вода, этанол, глицерин, растительное масло или парафиновое масло. Эти композиции, кроме растворителей, могут также включать другие вещества, например, смачивающие вещества, подсластители, загустители, ароматизаторы или стабилизаторы.

Стерильные композиции для парантерального введения могут быть предпочтительно водными или неводными растворами, суспензиями или эмульсиями. В качестве растворителя или наполнителя могут использоваться вода, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, в частности оливковое масло, впрыскиваемые органические эфиры, например этилолеат, или другие приемлемые органические растворители. Эти композиции могут также содержать добавки, в частности смачивающие вещества, изотонирующие, эмульгирующие, диспергирующие и стабилизирующие. Стерилизация может производиться различными способами, например асептическим фильтрованием путем включения в композицию стерилизующих средств, облучением или нагревом. Они могут быть также изготовлены в виде твердых стерильных композиций, которые могут быть растворены в момент употребления в стерильной воде или в другой впрыскиваемой стерильной жидкости.

Композиции для ректального введения это свечи или ректальные капсулы, содержащие кроме действующего вещества наполнители типа масло какао, полусинтетические глицериды или полиэтиленгликоли.

Композициями местного наружного применения могут быть, например, кремы, лосьоны, глазные капли, капли в нос, жидкость для полоскания, аэрозоли.

Дозировка зависит от предполагаемого эффекта, продолжительности лечения и используемого способа введения; обычно суточная доза перорально для взрослого составляет 150600 мг, а разовые дозы от 50 до 200 мг действующего вещества.

Как правило, врач определяет необходимую дозировку в зависимости от возраста, веса и других факторов, характеризующих пациента.

Следующие примеры иллюстрируют композиции согласно изобретению:

Пример А.

По известной технологии изготавливаются желатиновые капсулы в дозировке по 50 мг действующего вещества следующей композиции:

Действующее вещество 50 мг

Целлюлоза 18 мг

Лактоза 55 мг

Коллоидный диоксид кремния	1 мг
Натриевая соль карбоксиметилкрахмала	1 0 мг
Тальк	1 0 мг
Стеарат магния	1 мг
Пример В.
По известной технологии приготавливают-
ся таблетки в дозировке по 50 мг действующего
вещества следующей композиции:
Действующее вещество	50 мг
Лактоза	104 мг
Целлюлоза	40 мг
Поливидон	1 0 мг
Натриевая соль карбоксиметилкрахмала	22 мг
Тальк	1 0 мг
Стеарат магния	2 мг
Коллоидный диоксид кремния	2 мг
Смесь оксиметилцеллюлозы, глицерина,
окиси титана (72:3,5:24,5) в достаточ.
кол-ве для 1 таблетки в оболочке на	245 мг
Пример С.
Приготавливается раствор для	инъекций,
содержащий 50 мг действующего	вещества,
следующей композиции:
Действующее вещество	50 мг
Бензойная кислота	80 мг
Бензиловый спирт	0,06 мл
Натрийбензоат	80 мг
95%-ый этанол	0,4 мл
Гидроксид натрия	24 мг
Пропиленгликоль	1 ,6 мл
Вода (в достаточном количестве)	4 мл

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Смесь, не содержащая полифенольных и стерольных производных и изолируемая посредством измельчения семян ΕυΟΕΝΙΑ 1ΑΜΒΘΕΑΝΑ ЬАМАКСК, мацерации полученного порошка низшим алифатическим спиртом в горячем состоянии, фильтрации, выделения нерастворимой фракции, не содержащей более полифенольных и стерольных соединений, мацерации нерастворимой фракции с помощью низшего алифатического спирта, фильтрации и выделения нерастворимой фракции, не содержащей более полифенольных и стерольных соединений, обработки нерастворимой фракции аммиачным раствором, обработки аммиачной смеси низшим алифатическим спиртом в горячем состоянии, фильтрации, выделения нерастворимого осадка и сушки указанного осадка, который представляет собой смесь I.
2. Смесь, не содержащая полифенольных и стерольных производных и изолируемая посредством измельчения семян ΕυΟΕΝΙΑ 1АМΒΘΕΑΝΑ ΓΑΜΑΒΠΚ. мацерации полученного порошка низшим алифатическим спиртом в горячем состоянии, фильтрации, выделения нерастворимой фракции, не содержащей более полифенольных и стерольных соединений, мацерации нерастворимой фракции низшим али фатическим спиртом, фильтрации, выделения нерастворимой фракции, которая более не содержит полифенольных и стерольных соединений, обработки нерастворимой фракции аммиачным раствором, обработки аммиачной смеси низшим алифатическим спиртом в горячем состоянии, фильтрации, выделения нерастворимого осадка и сушки указанного осадка с последующей обработкой его раствором воды с низшим алифатическим спиртом, отстаивания, затем, с одной стороны, выделения верхней фазы с последующей фильтрацией и выделением фильтрата 1, и с другой стороны, обработки нижней фазы водой, фильтрации и выделения фильтрата 2, объединения обоих фильтратов, частичного концентрирования результирующего фильтрата, очистки на неполярных адсорбирующих смолах, фильтрации смол, частичного концентрирования фильтрата, центрифугирования концентрата, фильтрации, ультрафильтрации, лиофилизации фильтрата и выделения смеси II.
3. Способ получения смеси I по п.1, отличающийся тем, что семена ΕυΟΕΝΙΑ 1ΑΜΒΘЬАЫА ЬАМАКСК высушивают, тонко измельчают и просеивают, а полученный порошок подвергают следующей обработке:

а) мацерации в условиях перемешивания в низшем алифатическом спирте при температурном интервале 40-70°С,

б) вакуум-фильтрации с выделением нерастворимой фракции,

в) мацерации нерастворимой фракции в условиях перемешивания в низшем алифатическом спирте при температурном интервале 4070°С,

г) вакуум-фильтрации с удалением спиртовых фаз, содержащих, главным образом, нежелательные полифенолы и стеролы, и выделением нерастворимой фракции,

д) обработке нерастворимой фракции в аммиачном растворе при температурном интервале 10-30°С,

е) обработке аммиачной смеси в водном растворе низшего алифатического спирта при температурном интервале 40-70°С,

ж) фильтрации и удалению спиртового раствора с выделением нерастворимого осадка,

з) дополнительному промыванию нерастворимого осадка низшим алифатическим спиртом, фильтрации и удалению спиртового раствора с выделением нерастворимого осадка, и

и) сушке указанного осадка, который представляет собой смесь I.
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что на стадии а) используют от 2 до 1 0 л низшего алифатического спирта на 1 кг просеянного порошка.
5. Способ по любому из пп.3 или 4, отличающийся тем, что на стадии а) используют 5 л этанола крепостью 93-95° по Гей-Люссаку при 60°С в течение 1 ч.
6. Способ по любому из пп.3-5, отличающийся тем, что вакуум-фильтрацию на стадиях

б) и г) осуществляют при 40 кПа.
7. Способ по любому из пп.3-6, отличающийся тем, что на стадии в) используют от 2 до 1 0 л низшего алифатического спирта на 1 кг исходного просеянного порошка.
8. Способ по любому из пп.3-7, отличающийся тем, что на стадии в) используют 4 л этанола крепостью 93-95° по Гей-Люссаку при температуре 60°С в течение 1 ч.
9. Способ по любому из пп.3-8, отличающийся тем, что на стадии д) на 1 кг исходного просеянного порошка используют 750-1250 мл аммиачного раствора.
10. Способ по любому из пп.3-9, отличающийся тем, что на стадии д) на 1 кг исходного просеянного порошка используют 1 л аммиачного раствора, содержащего 350 мл 28%-ного гидрата окиси аммония, и осуществляют обработку при температуре около 20°С в течение 1 030 ч.
11. Способ по любому из пп.3-10, отличающийся тем, что на стадии е) влажную аммиачную массу, полученную из 1 кг исходного просеянного порошка, помещают в 2-1 0 л раствора воды с низшим алифатическим спиртом.
12. Способ по любому из пп.3-11, отличающийся тем, что на стадии е) в процессе используют 5 л смеси этанола и воды (соотношение 75:25 по объему) при 60°С в течение 1 ч.
13. Способ по любому из пп.3-12, отличающийся тем, что на стадии з) промывание осуществляют с помощью 500-1500 мл низшего алифатического спирта на 1 кг исходного просеянного порошка.
14. Способ по любому из пп.3-13, отличающийся тем, что на стадии з) промывание осуществляют с помощью 1 л этанола, а фильтрацию осуществляют через миткаль под вакуумом, примерно составляющим 80 кПа.
15. Способ по любому из пп.3-13, отличающийся тем, что на стадии и) сушку осуществляют на открытом воздухе в тени.
16. Способ получения смеси II по п.2, отличающийся тем, что семена ΕυΟΕΜΑ 1ΑΜΒΘΓΑΝΑ ЬАМАКСК высушивают, подвергают тонкому измельчению, просеивают, а полученный порошок подвергают следующей обработке:

а) мацерации в условиях перемешивания в низшем алифатическом спирте при температурном интервале 40-70°С,

б) вакуум-фильтрации с выделением нерастворимой фракции,

в) мацерации нерастворимой фракции в условиях перемешивания в низшем алифатическом спирте при температуре в интервале 4070°С,

г) вакуум-фильтрации с удалением спиртовых фаз, содержащих, главным образом, неже лательные полифенолы и стеролы, и выделением нерастворимой фракции,

д) обработке нерастворимой фракции в аммиачном растворе при температурном интервале 10-30°С,

е) обработке аммиачной смеси низшим алифатическим спиртом при температурном интервале 40-70°С,

ж) фильтрации и удалению спиртового раствора с выделением нерастворимого осадка,

з) дополнительному промыванию нерастворимого осадка низшим алифатическим спиртом, фильтрации и удалению спиртового раствора с выделением нерастворимого осадка,

и) сушке указанного осадка, который представляет собой смесь I,

к) обработке смеси I водным раствором низшего алифатического спирта,

л) отстаиванию, за которым следуют откачка верхней фазы, которую фильтруют, получая тем самым фильтрат 1, и обработка нижней фазы водой с последующей фильтрацией и получением фильтрата 2, после чего оба фильтрата объединяют вместе и концентрируют в водной фазе,

м) очистке полученной смеси неполярной адсорбирующей смолой, а затем дополнительной фильтрации,

н) концентрированию фильтрата, центрифугированию концентрата, фильтрации с последующей ультрафильтрацией,

о) лиофилизации фильтрата и выделению смеси II.
17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что стадии а)-и) процесса осуществляют согласно любому из пп.3-15.
18. Способ по любому из пп. 16 и 17, отличающийся тем, что на стадии к) используют 1025 л раствора вода-низший алифатический спирт (взятые в соотношении 95:5-90:10 по объему) на 1 кг смеси I.
19. Способ по любому из пп. 16-18, отличающийся тем, что на стадии к) процесса используют 18 л раствора вода-этанол (в соотношении 17,7:0,93 по объему).
20. Способ по любому из пп. 16-19, отличающийся тем, что на стадии л) верхнюю фазу фильтруют через миткаль, а в расчете на 1 кг смеси I к нижней фазе добавляют от 10 до 25 л воды, после чего нижнюю фазу подвергают фильтрации через фритту.
21. Способ по любому из пп. 16-20, отличающийся тем, что на стадии л) концентрирование обычно осуществляют в термосифонном концентраторе под вакуумом, составляющим 0,4 кПа, и температуре 35°С.
22. Способ по любому из пп. 16-19, отличающийся тем, что на стадии м) для очистки используют смолу 8861 или смолы типа ХАД фирмы Вйот апб На88, а фильтрацию осуществляют через фритту.
23. Способ по любому из пп. 16-22, отличающийся тем, что на стадии н) концентрирование осуществляют в термосифонном концентраторе под вакуумом при 0,4 кПа и температуре 35°С.
24. Способ по любому из пп. 16-23, отличающийся тем, что на стадии н) процесса последовательно осуществляют 3 ультрафильтрации через патронные фильтраты с отсечением по мол. массе 10 кДа, 3 кДа и 1 кДа.
25. Способ получения оксамата натрия, отличающийся тем, что смесь II по п.2 обрабатывают следующим образом:

а) подвергают хроматографии на колонке с кизельгуром, выделяют фракции, содержащие требуемый продукт, и объединяют их в одну фракцию,

б) фракцию, полученную на предыдущей стадии а), подвергают хроматографии на колонке с сефадексом и выделяют оксамат натрия.
26. Способ по п.25, отличающийся тем, что хроматографию на стадии а) осуществляют на колонке СНЕМ ЕЬиТ (Рго1аЬо), которую насыщают водой, а затем последовательно элюируют гептаном, смесью гептан-этилацетат (50:50, по объему), смесью этилацетата и н-бутанола (95:5; 90:10; 80:20; 50:50; 20:80, а затем 0:100, по объему) и, наконец, смесью н-бутанола и воды (98:2, а затем 95:5, по объему).
27. Способ по любому из пп.25 или 26, отличающийся тем, что хроматографию на стадии б) осуществляют смесью воды и этанола (50:50, по объему).
28. Способ получения соединений формулы где либо Κι представляет собой атом водорода, а В₂ представляет собой

-СН₂-СНОН-СНОН-СН₂ОН (А) или

-СНОН-СНОН-СНОН-СН₂ОН (В), либо В! представляет собой остаток (А), а В₂представляет собой атом водорода, отличающийся тем, что смесь II по п.2 обрабатывают следующим образом:

а) подвергают хроматографии на колонке с кизельгуром, выделяют фракции, содержащие требуемый продукт, и объединяют их в одну фракцию,

б) фракцию, полученную на предыдущей стадии а), подвергают хроматографии на колонке с сефадексом и выделяют соединение формулы (I), где В! представляет собой атом водорода, а В₂ представляет собой остаток (В), и смесь соединения формулы (I), где В! представляет собой атом водорода, а В₂ представляет собой остаток (А), и соединения формулы (I), где В1 представляет собой остаток (В), а В₂ представляет собой атом водорода, и

в) при необходимости осуществляют хроматографию смеси соединения формулы (I), где К представляет собой атом водорода, а К₂ представляет собой остаток (А), и соединения формулы (I), где К представляет собой остаток формулы (А), а К₂ представляет собой атом водорода, методом жидкостной хроматографии высокого разрешения (НРЬС).
29. Способ по п.28, отличающийся тем, что хроматографию на стадии а) осуществляют на колонке СНЕМ ЕЬиТ (Рго1аЬо), которую насыщают водой, а затем последовательно элюируют гептаном, смесью гептана и этилацетата (50:50, по объему), смесью этилацетата и н-бутанола (95:5; 90:10; 80:20; 50:50; 20:80, а затем 0:100, по объему) и смесью н-бутанола и воды (98:2, а затем 95:5, по объему).
30. Способ по п.28, отличающийся тем, что хроматографию на стадии б) осуществляют смесью воды и этанола (50:50, по объему).
31. Способ по п.28, отличающийся тем, что хроматографию на стадии в) осуществляют на колонке типа УМС 180Д8-АО (А1Т), используя в качестве элюирующего агента смесь воды и 0,1%-ной муравьиной кислоты.
32. Лекарственное средство для профилактики и лечения диабета и осложнений после диабета, содержащее один или несколько носителей и терапевтически активное соединение, отличающееся тем, что указанное активное соединение является смесью I по п. 1, или смесью II по п.2, или оксаматом натрия, или одним или несколькими соединениями формулы (I) где либо К1 представляет собой атом водорода, а К2 представляет собой

-СН₂-СНОН-СНОН-СН₂ОН (А) или

-СНОН-СНОН-СНОН-СН₂ОН (В), либо Βι представляет собой остаток (А), а К₂представляет собой атом водорода.
33. Применение смеси I по п. 1 для изготовления лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения диабета и постдиабетических осложнений.
34. Применение смеси II по п.2 для изготовления лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения диабета и постдиабетических осложнений.
35. Применение оксамата натрия для изготовления лекарственного средства, предназначенного для профилактики и лечения диабета и постдиабетических осложнений.
36. Применение одного или нескольких соединений формулы (I) где либо К1 представляет собой атом водорода, а К2 представляет собой

-СН₂-СНОН-СНОН-СН₂ОН (А) или

-СНОН-СНОН-СНОН-СН₂ОН (В), либо Βι представляет собой остаток (А), а К₂представляет собой атом водорода, для изготовления лекарственного средства для профилактики и лечения диабета и постдиабетических осложнений.