SK282672B6

SK282672B6 - Zmesi pripraviteľné zo semien Eugenia Jambolana Lamarck, spôsob ich prípravy a prípravy ich zložiek, liečivo a ich použitie

Info

Publication number: SK282672B6
Application number: SK1052-98A
Authority: SK
Inventors: Ratsimamanga Albert Rakoto; Ratsimamanga Suzanne Rakoto; Philippe Rasoanaivo; Jean Leboul; Jean Provost; Daniel Reisdorf
Original assignee: Institut Malgache De Recherches Appliquees; Aventis Pharma S. A.
Priority date: 1996-02-06
Filing date: 1997-02-03
Publication date: 2002-11-06
Also published as: US6194412B1; AR005726A1; JP2010053133A; MA24077A1; UA60299C2; WO1997028813A1; EP0879058A1; DE69705108T2; CN1210469A; US5972342A; HUP9902586A2; PT879058E; TR199801490T2; NO983592L; AU726628B2; TNSN97031A1; AU1727197A; YU4197A; ZA97910B; BG63288B1

Abstract

Opisujú sa zmesi pripraviteľné zo semien ovocnej dreviny Eugenia Jambolana Lamarck, ich príprava, liečivo obsahujúce tieto zmesi alebo zložky týchto zmesí a použitie týchto zmesí a zložiek na prípravu liečiva.ŕ

Description

Vynález sa týka zmesí pripraviteľných zo semien ovocnej dreviny Eugénia Jambolana Lamarck (čeľaď myrtovitých), liečiv obsahujúcich tieto zmesi alebo niektoré z ich zložiek, použitia týchto zmesí a zložiek na prípravu antidiabetického liečiva a ich prípravy.

Doterajší stav techniky

Rastlinný extrakt pripravený zo semien alebo kôry Eugénia Jambolana obsahujúci zmesový polyfenolický a stcrolický komplex je opísaný v patente FR 2465484.

Podstata vynálezu

Teraz sa našli nové zmesi pripraviteľné zo semien dreviny Eugénia Jambolana Lamarck bez uvedeného polyfenolického a sterolického komplexu, ako aj niektoré zložky uvedených zmesí majúce hypoglykemické vlastnosti.

Podstata týchto zmesí spočíva v tom, že sú bez polyfenolických a sterolických derivátov, a že sú pripraviteľné rozomletím semien Eugénia Jambolana Lamarck, maceráciou získaného prášku nižším alifatickým alkoholom za tepla, filtráciou, oddelením nerozpustného podielu, ktorý už neobsahuje polyfenolické a sterolické zlúčeniny, spracovaním nerozpustného podielu amoniakálnym roztokom, spracovaním amoniakálnej zmesi nižším alifatickým alkoholom za tepla, filtráciou, oddelením nerozpustného podielu a vysušením tohto nerozpustného podielu, ktorý tvorí zmes I, a prípadným spracovaním zmesi 1 roztokom nižšieho alifatického alkoholu vo vode, filtráciou, čiastočným zahustením fíltrátu, prečistením na adsorpčnej nepolámej živici, čiastočným zahustením, odstredením, ultrafiltráciou a izoláciou zmesi II.

Zo zmesi II sa môžu tiež oddeliť oxamát sodný a zlúčeniny všeobecného vzorca (I)

OH OH

v ktorom R¹ znamená atóm vodíka a R² znamená uhlíkový reťazec všeobecných vzorcov (A) a (B)

-CH₂-CHOH-CHOH-CH₂OH (A)

-CHOH-CHOH-CHOH-CH₂OH (B) alebo R¹ znamená uhlíkový reťazec A a R² znamená atóm vodíka.

Uvedený oxamát sodný už bol opísaný Toussaintom v Ann, 120,237(1861).

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) už boli opísané Kuhnom a kol. v Ann., 644, 122-127 (1961), Tsuchidom a kol. v Agr. Biol. Chem, 39 (5), 1143-1148 (1975), Tsuchidom a kol. v Agr. Biol. Chem., 40(5), 921-925 (1976), Tsuchidom a kol. v Nippon Shokuhin Kogyl Gakkaishi, 37, 154-161 (1990) a Avalosom a kol. v Tetrahedron, 49, 2655-2675 (1993).

Vynález sa tiež týka spôsobu prípravy zmesi I zo semien Eugénia Jambolana Lamarck, ktoré boli predtým vysušené a jemne rozomleté.

Získaný prášok sa preoseje, výhodne cez normalizované sito s otvormi majúcimi priemer 0,5 pm, následne sa podrobí nasledujúcemu spracovaniu:

a) macerácia s miešaním v nižšom alifatickom alkohole pri teplote 40 až70°C,

b) filtrácia za vákua a izolácia nerozpusteného podielu,

c) macerácia s miešaním nerozpusteného podielu v nižšom alifatickom alkohole pri teplote 40 až 70 °C,

d) filtrácia za vákua a odstránenie alkoholických fáz obsahujúcich hlavne nežiaduce polyfenoly a steroly,

e) zavedenie nerozpusteného podielu do amoniakálneho roztoku pri teplote 10 až 30 °C,

f) zavedenie celej vlhkej amoniakálnej hmoty do vodného roztoku nižšieho alifatického alkoholu pri teplote 40 až 70 °C,

g) filtrácia a odstránenie alkoholického roztoku,

h) premytie nerozpusteného podielu nižším alifatickým alkoholom, filtrácia a odstránenie alkoholického roztoku,

i) izolácia nerozpusteného podielu a jeho vysušenie.

V stupni a) sa všeobecne použije 2 až 10 litrov nižšieho alifatického alkoholu, akým je metanol alebo etanol, na 1 kilogram preosiateho prášku. Výhodne sa použije 5 litrov etanolu s koncentráciou podľa Gay Lussaca 93 až 95° a macerácia sa uskutočňuje pri teplote 60 °C počas jednej hodiny.

Filtrácia v stupni b) sa výhodne uskutočňuje vo vákuu, ktorého hodnota je 40 kPa.

V stupni c) sa všeobecne použije 2 až 10 litrov nižšieho alifatického alkoholu, akým je metanol alebo etanol, na 1 kg východiskového preosiateho prášku. Výhodne sa použijú 4 litre etanolu s koncentráciou podľa Gay Lussaca 95 °C a macerácia sa uskutočňuje pri teplote 60 °C počas jednej hodiny.

Filtrácia v stupni d) sa výhodne uskutočňuje vo vákuu, ktorého hodnota je 40 kPa.

V stupni c) sa na 1 kg východiskového preosiateho prášku všeobecne použije 750 až 1250 ml vodného amoniakálneho roztoku obsahujúceho výhodne 350 ml 28 % amoniaku na 1000 ml vody. Obzvlášť výhodne sa použije 1 liter vodného amoniakálneho roztoku, čas odloženia v stupni e) je 10 až 30 hodín, výhodne 20 hodín, a pracuje sa pri teplote blízkej 20 °C.

V stupni f) sa vlhká amoniakálna hmota, získaná z 1 kg východiskového preosiateho prášku, všeobecne vyberie za miešania v 2 až 10 litroch zmesi nižší alifatický alkohol-voda (ako nižší alifatický alkohol sa použije napríklad metanol alebo etanol), v ktorej sú nižší alifatický alkohol a voda obsiahnuté v objemovom pomere 70:30 až 80 : 20, výhodne v 5 litroch zmesi etanolu a vody v objemovom pomere 75 : 25, pričom sa pracuje pri teplote 60 °C a čas prestávky v tomto stupni je jedna hodina.

V stupni g) sa filtrácia výhodne uskutoční na bavlnenej plachtičke vo vákuu, ktorého hodnota je 80 kPa.

V stupni h) sa premytie všeobecne uskutoční 500 až 1500 ml nižšieho alifatického alkoholu (napríklad metanol alebo etanol), vztiahnuté na 1 kg východiskového preosiateho prášku, výhodne s použitím 1 litra etanolu, pričom sa filtrácia uskutoční na bavlnenej plachtičke a za vákua, ktorého hodnota je asi 80 kPa.

V stupni i) sa vysušenie výhodne uskutočňuje na vzduchu a v neprítomnosti svetla.

Predmetom vynálezu je tiež spôsob prípravy zmesi II.

Na tento účel sa zmes I, získaná uvedeným spôsobom, podrobí nasledujúcemu spracovaniu:

j) spracovanie zmesi I pomocou vodného roztoku nižšieho alifatického alkoholu,

k) dckantácia a potom jednak odtiahnutie vrchnej fázy, ktorá sa sfiltruje na získanie filtrátu 1 a jednak spracovanie spodnej fázy vodou a filtrácia na získanie filtrátu 2, spojenie filtrátov 1 a 2 a zahustenie vodnej fázy,

l) spracovanie adsorpčnej nepolámej živice a potom filtrácia,

m) zahustenie filtrátu, filtrácia a potom ultrafiltrácia,

n) lyofilizácia a izolácia extraktu II.

V stupni j) sa všeobecne použije 10 až 25 litrov roztoku voda-nižší alifatický alkohol (napríklad metanol alebo etanol) (95 : 5 až 90 : 10 objemovo) na 1 kilogram zmesi I. Výhodne sa použije 18 litrov roztoku voda-etanol ( v objemovom pomere 17,7 - 0,93).

V stupni k) sa filtrácia vrchnej fázy výhodne uskutoční na bavlnenej plachtičke. Výhodne sa na 1 kilogram zmesi I pridá 10 až 25 litrov vody k spodnej fáze a najmä 10 litrov vody a filtrácia sa uskutoční na frite.

V stupni k) sa zahustenie všeobecne uskutoční v termosifónovom odparovači pri teplote 35 °C a za vákua, ktorého hodnota je 0,4 kPa.

V stupni 1) sa výhodne použije živica S861 alebo živica typu XAD, uvedené na trh firmou Rhom a Haas a filtrácia sa uskutoční na fiite.

V stupni m) sa zahustenie všeobecne uskutoční v termosifónovom odparovači pri teplote 35 °C a za vákua, ktorého hodnota je 0,4 kPa. Tiež je výhodné uskutočniť tri nasledujúce filtrácie s použitím filtračných náplní 10 kDa, 3 kDa a 1 kDa.

Predmetom vynálezu je tiež spôsob prípravy oxamátu sodného a zlúčenín všeobecného vzorca (I).

Tento spôsob spočíva v tom, že sa zmes II podrobí nasledujúcemu spracovaniu:

o) chromatografia zmesi II na stĺpci infuzóriovej hlinky, izolácia frakcií obsahujúcich uvedené štyri produkty a spojenie týchto štyroch frakcií do jedinej frakcie,

p) chromatografia frakcie získanej v predchádzajúcom stupni na stĺpci Sephadexu na získanie oxamátu sodného, zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorom R¹ znamená atóm vodíka a R² znamená zvyšok A, a zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorom R¹ znamená zvyšok A a R znamená atóm vodíka,

q) prípadná chromatografia zmesi zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorom R¹ znamená atóm vodíka a R² znamená zvyšok A a zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorom R¹ znamená zvyšok A a R² znamená atóm vodíka, s použitím vysoko výkonnej kvapalinovej chromatografie.

Chromatografia v stupni o) sa uskutočni s použitím organického rozpúšťadla, akým je heptán, etylacetát alebo nižší alifatický alkohol. Výhodne sa použije kolóna ChemElut, uvedená na trh firmou Prolabo, nasýtená vodou a potom postupne eluovaná heptánom, zmesou heptánu a etylacetátu v objemovom pomere 50 : 50, etylacetátom, zmesou etylacetátu a n-butanolu v objemových pomeroch 95 : 5, 90 : 10, 80 : 20, 50 : 50 a 20 : 80, n-butanolom a zmesou n-butanolu a vody v objemovom pomere najskôr 98 : 2 a potom 95 : 5.

Chromatografia v stupni p) sa výhodne uskutočňuje s použitím zmesi vody a etanolu v objemovom pomere 50 : 50.

Chromatografia v stupni q) sa všeobecne uskutočňuje na kolóne YMC180DS-AQ, uvedenej na trh firmou AIT, pričom sa ako elučná sústava použije voda obsahujúca 0,1 % kyseliny mravčej.

V skôr uvedených a ešte nasledujúcich definíciách sú nižšími alifatickými alkoholmi výhodne alkoholy obsahujúce 1 až 4 atómy uhlíka.

Liečivá obsahujúce zmesi I alebo II, alebo oxamát sodný, alebo jednu, alebo niekoľko zlúčenín všeobecného vzorca (I) tvoria tiež súčasť vynálezu.

Predmetom vynálezu je tiež použitie zmesí I a II, oxamátu sodného a zlúčenín všeobecného vzorca (I) alebo zmesí uvedených látok na prípravu liečiv určených na prevenciu cukrovky alebo komplikácií vyplývajúcich z tohto ochorenia.

Príklady uskutočnenia vynálezu

V nasledujúcej časti opisu bude vynález bližšie objasnený pomocou príkladov jeho konkrétneho uskutočnenia, pričom tieto príklady majú len ilustračný charakter a nijako neovplyvňujú vlastný rozsah vynálezu, ktorý je jednoznačne vymedzený formuláciou patentových nárokov.

Príklad 1

Príprava zmesi I

Semená Eugénia Jambolana Lamarck sa vysušia na vzduchu za neprítomnosti svetla, následne sa jemne rozomelú. Takto získaný prášok sa preoseje s použitím sita s veľkosťou otvorov 0,5 pm. 1 kilogram preosiateho prášku sa potom maceruje za miešania mechanickým miešadlom v 5 litroch etanolu s koncentráciou podľa Gay Lussaca 93 až 95° počas jednej hodiny pri teplote 60 °C. Po filtrácii za vákua sa oddelený nerozpustený podiel znovu spracuje pri rovnakých podmienkach 4 1 etanolu tej istej koncentrácie pri teplote 60 °C počas jednej hodiny. Oba etanolické extrakty, ktoré hlavne obsahujú polyfenolický a sterolický komplex, sa odstránia. Po dokončení filtrácie sa nerozpustný podiel vyberie 1 litrom amoniakálneho roztoku (350 ml 28 % NH₄OH a destilovaná voda v množstve dostatočnom na doplnenie na 1 liter roztoku) a zmes sa ponechá v styku počas asi 20 hodín pri teplote blízkej 20 °C. Vlhká amoniakálna hmota sa potom maceruje v 5 litroch zmesi etanolu (koncentrácia podľa Gay Lussaca 93 až 95°) a vody (objemový pomer 75 : 25) za mechanického miešania pri teplote 60 °C počas jednej hodiny. Nerozpustený podiel sa odfiltruje a premyje 1 litrom etanolu uvedenej koncentrácie. Filtrát a premývací podiel sa odstránia. Finálny nerozpustný podiel sa vysuší na vzduchu bez prístupu svetla.

Takto sa získa zmes I vo forme prášku, ktorá je bez nežiaducich polyfenolických a sterolických derivátov. Výťažok, vztiahnutý na rozomleté a preosiate semená, tvorí 80 %.

Príklad 2

Príprava zmesi II kg zmesi I, získanej v príklade 1, sa mieša počas troch hodín v roztoku obsahujúcom 17,7 litrov vody a 0,93 1 etanolu. Po dekantácii cez noc sa jednak vrchná ťáza odtiahne (13,5 litrov) a potom sfiltruje cez bavlnenú plachtičku v 7 1 filtra (Schott), pričom sa získa filtrát 1 (13,5 litrov), a jednak sa vrchná fáza mieša počas jednej hodiny s 20 litrami vody, sfiltruje cez fritu č.3, pričom sa získa filtrát 2 (24 litrov). Oba filtráty sa spoja a potom zahustia na objem 33,5 litrov v termosifónovom odparovači (Schoot) pri teplote 35 °C a pri zníženom tlaku (0,4 kPa). Koncentrát sa potom mieša počas jednej hodiny s 2,5 litrami živice S861 (Rhom a Haas), následne sa sfiltruje cez fritu č.3. Filtrát sa zahustí v termosifónovom odparovači (Schott) pri teplote 35 “C pri zníženom tlaku (0,4 kPa) na objem 5,5 litrov. Koncentrát sa odstredí v rúrkovej odstredivke (62000 g), sfiltruje na filtri 0,22 pm (Gelman, typ suporcap 100). Po troch ultraflltrácíách uskutočnených po sebe s použitím fil tračných náplní 10 Kd, 3 Kd a 1 Kd a po lyofilizácii sa získa 25 g zmesi II vo forme tmavohnedého hygroskopického prášku.

Príklad 3 Zložky získané zo zmesi II

525 mg zmesi II, získanej v predchádzajúcom príklade 2, v roztoku v 1,1 ml filtrovanej vody typu milli Q sa chromatografuje na kolóne ChemElut, uvedenej na trh firmou Prolabo, majúcej výšku 50 cm a priemer 1 cm a nasýtenej filtrovanou vodou typu milli Q. Elúcia sa uskutoční najskôr heptánom s rastúcim gradientom etylacetátu, potom v n-butanole, v zmesi n-butanolu a kyseliny chlorovodíkovej a vo vode: frakcia 1: heptán, frakcia 2: heptán/etylacetát v objemovom pomere 50 : 50, frakcia 3 - 4: etylacetát, frakcia 5 - 6: etylacetát/n-butanol v objemovom pomere 95 :5, frakcia 7-8: etylacetát/n-butanol v objemovom pomere 90:10, frakcia 9 - 10: etylacetát/n-butanol v objemovom pomere 80:20, frakcia 11 - 12: etylacetát/n-butanol v objemovom pomere 50:50, frakcia 13 - 14: etylacetát/n-butanol v objemovom pomere 20 : 80, frakcia 15 -16: n-butanol, frakcia 17 -18: v objemovom pomere 98 : 2, frakcia 19 - 21: n-butanol/voda v objemovom pomere 95 : 5. Zberajú sa frakcie s objemom 50 ml. Frakcie 19 až 21 sa zlúčia a zahustia do sucha pri zníženom tlaku.

Takto sa získa 108 mg frakcie, ktorá sa chromatografuje na stĺpci Sephadexu LH20 uvedeného na trh firmou Pharmacia (výška kolóny: 100 cm, priemer kolóny 1 cm) s použitím elučnej sústavy tvorenej zmesou metanolu a vody v objemovom pomere 50 : 50, pričom sa zberajú frakcie s objemom 1 ml.

1. Frakcie 88 až 91 sa zlúčia a zahustia do sucha. Získa sa 14,4 mg produktu, ktorý po kryštalizácii v 0,5 ml etanolu poskytuje 2 mg 2,5-di-(tetrahydroxybutyl)pyrazínu vo forme bielych kryštálov, ktoré majú nasledujúce charakteristiky: optická otáčavosť [a]²⁰(Na 589)= -137°+2,0 (dimetylsulfoxid, c = 0,5), infračervené spektrum získané s použitím prístroja Nicolet 60SX-R v roztoku v KBr: základné charakterististické absorpčné pásy: 3281 cm¹ (v OH viazané H2O), 2972+2940+2901+2880 cm’¹ (v CH skupín CH2 a CHOH), 2733 cm'¹ (v OH viazané), 1635 cm’¹ (deformácia skupín OH z H₂O), 1491 cm'¹ (v C=C a C=N pyrazínového jadra), 1449 cm¹ (v C=C a C=N pyrazínového jadra + deformácia OH), 1413 cm'¹ (deformácia OH), 1343 cm¹ (v C=C a C=N pyrazínového jadra), 1309+1290+1251+1215+1181+1161+1123 cm'¹ (deformácia CH), 1092 cm'¹ (v CO sekundárnych alkoholov), 1048+1035 cm'¹ (v CO primárnych alkoholov+pyrazínové jadro), 947+899+854 cm’¹ (sekundárne alkoholy), 877 cm'¹ (v CH pyrazínového jadra), 727 cm’¹ (pyrazínovéjadro+deformáciaOH),

639 cm’¹ (pyrazínové jadro), 607+531 cm^-1 šír. (deformácia OH),

451+411 cm’¹ (pyrazínové jadro), hmotnostná spektrum získané s použitím prístroja Finnigan TSQ46 (hmotnostná ionizácia) M/z = 321 (MH)⁺, ¹ Il-nukleárna magneticko rezonančné spektrum: (600 MHz, DMSO, chemické posuny v ppm)

3,40 a 3,61 (2mts, 2H každý : CH2 v 4', 4); 3,53 (2 mts, 2H každý : CH v 2',2,3’,3“); 4,36 (t šír., 2H : OH v 4',4); 4,40 (d, J=7,2 Hz, 2H : OH v 2', 2); 4,63 (d, J=4,8 Hz, 2H : OH v 3',37: 4,95 (dd J=6,0 a 0,6 Hz, 2H : CH v ľ, 1);5,30(d, J=6,0Hz, 2H:OH v 1', ľ); 8,61 (s, 2H, CH v 3 a ô), lambdajnax = 275 nm (e = 8260),

206 nm (e = 10220) (c = 19 mg/ml, voda), !ambda_milx = 276 nm (ε = 7960),

206 nm (e = 9920) (c = 19 mg/ml, HC1 0,lN), lambda_max = 275 nm (e = 7690) (c = 19 mg/ml, KOH 0,lN), vysoko výkonná kvapalinová chromatografia na kolóne YMC 180 DS-AQ s výškou 150 mm a priemerom 4,6 mm (šarža AIT/DE940377), ktorá je komerčne dostupná vo firme AIT, izokratická elúcia H₂O + 0,1 % kyseliny mravčej pri prietoku 1 ml/minútu a s použitím detekcie ultrafialovým žiarením s vlnovou dĺžkou 270 nm: čas retencie: 2 minúty a 32 sekúnd.

2. Frakcie 92 a 93 sa zlúčia a zahustia do suchu. Získa sa 9 mg frakcie, ktorá po kryštalizácii v 0,5 ml etanolu poskytne 1,2 mg oxamátu sodného, ktorý má rovnaké charakteristiky ako charakteristiky opísané Toussaintom v Ann., 120, 237(1861).

3. Frakcie 94 až 97 sa zlúčia a zahustia do sucha. Získa sa 25,9 mg frakcie, ktorá po kryštalizácii v 0,5 ml etanolu poskytne 6,2 mg zmesi 2-(tetrahydroxybutyl)-5-(2',3',4'-trihydroxybutyljpyrazínu a 2-(tetrahydroxybutyl)-6-(2',3', 4'-trihydroxybutyl)pyrazínu, ktorá sa znovu rozdelí vysoko výkonnou kvapalinovou chromatografiou na kolóne YMC 180 DS-AQ s výškou 150 mm a priemerom 4,6 mm (šarža AIT/DE940377) s použitím izokratickej elúcie elučnou sústavou tvorenou H₂O obsahujúcou 0,1 % kyseliny mravčej pri prietoku 1 ml/minútu a s použitím detekcie ultrafialovým žiarením s vlnovou dĺžkou 270 nm.

Takto sa získa 5,2 mg 2-(tetrahydroxybutyl)-5-(2',3',4'-trihydroxybutyl)pyrazínu, ktorý má nasledujúce charakteristiky:

optická otáčavosť [a]²⁰(Na 589)= -116,3°±1,7 (dimetylsulfoxid, c = 0,5), infračervené spektrum získané s použitím prístroja Nicolet 60SX-R v roztoku v KBr:

základné charakterististické absorpčné pásy: 3398 cm^-1 (v OH viazané H2O), 2951+2922+2891 cm’¹ (v CH skupín CH2 a CHOH), 2761 cm’¹ (v OH viazané),

1636 cm¹ (deformácia skupín OH z H₂O), 1483+1463 cm¹ (v C=C a C=N pyrazínového jadra), 1411 cm¹ (deformácia skupín OH), 1367+1328+1270+1227+1191 cm'¹ (deformácia skupín CH),

1071 cm'¹ (v CO sekundárnych alkoholov),

1041 cm'¹ (v CO primárnych alkoholov+pyrazínové jadro), 943+897 cm'¹ (sekundárne alkoholy),

869 cm'¹ (v CH pyrazínového jadra),

645 cm'¹ (CH pyrazínového jadra),

607 cm'¹ šír. (deformácia skupín OH), 446+409 cm'¹ (pyrazínové jadro), hmotnostná spektrum získané s použitím prístroja Finnigan TSQ46 (hmotnostná ionizácia) M/z = 305 (MH)⁺, ’H-nukleárne magnetickorezonančné spektrum: (600 MHz, DMSO, chemické posuny v ppm)

SK 282672 Β6

2,70 a 3,04 <2 dd, >9,0 a 15,0 Hz a J=3,0 a 15,0 Hz, 1H každý : CH2 v 1): medzi 3,30 a 3,45 (mts, CH v 3, 4', 4‘); medzi 3,53 a 3,65 (mts, 4H : CH v 2',3',4’,4·), 3,73 (mt, 1H : CH _v Z}; 4,37 (t šír.. 1H : OH _v 4'); 4,42 (mt, 2H : OH v 2' _a 4); 4,60 (d, >6 Hz, 1H : OH _v 2); 4,63 (d, J=6 Hz, 1H : OH v 3'); 4,67 (d, J=6 Hz, 1H : OH _v 3·); 4,92 (dd >6,0 et 0,6 Hz, 1H:CH v ľ); 5.30 (d, >6,0 Hz, 1H: OH „ D; 8,39 (s, 1H : CH „ 61:8,61 (s. 1H:CH v 3), ultrafialové spektrum: lambda_nliix = 276 nm (ε = 7756),

206 nm (e = 8738) (c = 19 mg/ml, voda), lambdamax = 277 nm (ε = 7218),

208 nm (e = 7171) (c = 19 mg/ml, HC10,lN), lambda^ = 276 nm (e = 7467) (c = 19 mg/ml, KOH 0,lN), vysoko výkonná kvapalinová chromatografia na kolóne YMC 180 DS-AQ s výškou 150 mm a priemerom 4,6 mm (šarža AIT/DE940377), ktorá je komerčne dostupná vo firme AIT, izokratická elúcia H₂O + 0,1 % kyseliny mravčej pri prietoku 1 ml/minútu a s použitím detekcie ultrafialovým žiarením s vlnovou dĺžkou 270 nm: čas retencie: 3 minúty a 75 sekúnd, a 1 mg 2-(tetrahydroxybutyl)-6-(2',3',4'-trihydroxybutyl)pyrazínu, ktorý má nasledujúce charakteristiky: 'H-nukleáma magnetickorezonančná chromatografia: (600 MHz, DMSO, chemické posuny v ppm)

2,70 a 3,04 (2 dd, J=9,0 a 15,0 Hz e J=3,0 a 15,0 Hz, 1H tódý ; CH2 ^v1”); medzí 3,30 a 3,45 (mts, CH v 3·, 4', 4);;uedzi3,53 a 3,65 (mts, 4H : CH v 2',3’,4',4), 3,73 (mt, 1H : CH v 2‘); 4,37 (t large. 1H : OH v 4·); 4,42 (mt, 2H : OH v 2' v 4'); 4,60 (d, J=6 Hz, 1H : OH v 2’); 4,63 (d, J=6 Hz, 1H : OH v 3'); 4,67 (d, >6 Hz, 1H : OH v 3); 4,92 (dd J=6,0 ^v 0,6 Hz, 1H : CH v 1'); 5,30 (d, J=6,0 Hz: 1H, OH v ľ); 8,31 (s, 1H: CH v 5); 8,53 (s, 1H:CHv3), vysoko výkonná kvapalinová chromatografia na kolóne YMC 180 DS-AQ s výškou 150 mm a priemerom 4,6 mm (šarža AIT/DE940377), ktorá je komerčne dostupná vo firme AIT, izokratická elúcia H₂O + 0,1 % kyseliny mravčej pri prietoku 1 ml/minútu a s použitím detekcie ultrafialovým žiarením s vlnovou dĺžkou 270 nm: čas retencie: 3 minúty a 61 sekúnd.

Hypoglykemická účinnosť zmesí I a II, oxamátu sodného a zlúčenín všeobecného vzorca (I) sa stanovila pri myšiach, pri ktorých sa indukovala cukrovka streptozotocínom a pri normálne postprandiálnc hyperglykemických myšiach podľa nasledujúceho protokolu:

I. Myši, pri ktorých sa indukovala cukrovka streptozotocínom

Pri myšiach Swiss albinos s telesnou hmotnosťou v rozsahu od 22 do 25 g sa indukuje cukrovka streptozotocínom podaným intraperitoneálne injekciou v dávke 210 alebo 265 mg/kg telesnej hmotnosti myši, zriedenej citrátovým pufrom na takú koncentráciu, že každá myš príjme 0,2 ml roztoku v deň 1 (Jl). Tri až štyri dni neskôr sa uskutoční kontrola, či pri myšiach prišlo k rozvíjaní cukrovky [glykémia vyššia ako 7,2 mmol/liter (130 mg na 100 ml)]. Vtedy sa po štvorhodinovom pôste zmeria glykémia. V prípade, že sa myši stali diabetickými, rozdelia sa do skupín po 5 až 7 jedincoch. Každá zo skupín príjme začínajúc dňom Jl denne zvolenú dávku produktu. Podanie sa uskutoční jedenkrát denne v pevne stanovenej hodine žalúdočnou sondou v objeme 0,4 ml destilovanej vody použitej vo funkcii nosiča. Vytvoria sa tiež dve kontrolné skupiny zvierat:

- skupina neošetrených diabetických myší a

- skupina normálnych myši.

Tieto dve kontrolné skupiny myší príjmu žalúdočnú sondu a súčasne s ošetrenými pokusnými zvieratmi 0,4 ml vehikula.

Liečenie trvá 4 dni. Piaty deň (J5) sa produkt nepodáva. Po štvorhodinovom pôste sa stanoví finálna glykémia.

II. Normálne myši s postprandiálnou hyperglykémiou

Myši Swiss albinos s telesnou hmotnosťou medzi 22 a 25 g sa uvedú do stavu postprandiálnej hyperglykémie podľa nasledujúceho protokolu:

- dvojhodinový pôst,

- prebytok potravy počas jednej hodiny a

- dvojhodinový pôst.

Po uplynutí posledného dvojhodinového pôstu sa stanoví glykémia, ktorá predstavuje glykémiu v čase TO. Myši sa potom rozdelia do homogénnych skupín v závislosti od nameranej glykémie. Testované produkty sa potom bez odkladu podávajú žalúdočnou sondou v 0,4 ml destilovanej vody. Skupina kontrolných zvierat prijme len vehikulum (0,4 ml destilovanej vody). Po jednej hodine sa zmeria finálna glykémia, ktorá takto predstavuje glykémiu v čase T60.

Získané výsledky pre glykémiu myší, pri ktorých sa indukovala cukrovka podaním streptozotocínu

Produkty Počet myši Glykémia	Glykémia v deň A5 (iog/100ml}	Inhibícia (%)
mg/myš/deň	v deň Jl (mg/lOOml)
Oxamát sodný (0,5 ig)	5	153,40i 11,53	89,90i 13,94	-41,46
Zmes II (0,5 mg)	5	270,50i 58,72	117,50i 17,35	-56,56
2 - (tetrahydroxybutyl)-5-(2',3’,4'trihydroxybuty1)pyrazín (0,5 mg)	5	304,25i 99,35	164,50+ 95,13	-45,93
2—(tetrahydroxybutyl)-5-(2,3',4’— tríhydroxybutyl)pyrazín a 2- (tetrahydroxybutyl)6-(2’,3 ,4’-trihydroxybutyl)pyrazín (50:50)(0,25 mg)	6	320,83i 130,30	174,00± 97,74	-45,77 .
Kontrolná skupina	5 '	221,66i 50,17	210,33i 20,07	-5,11

Výsledky získané pre glykémiu normálnych myší v stave postpradiálnej hyperglykémie

Produkty mg/myS/defl	Počet myši	Glykémia v Čase TO (mg/lCOml)	Glyk&oia v čase T60 (mg/lOOnl)	Inhibícia (%)
Zmes I	5	129,SOi	87,60i	-32,25
(5 mg)		20,06	14,16
Oxamát sodný	15	136,46i	102,93+	-24,57
(0,5 mg)		33,69	20,95
Zmes II	15	133,93i	105,60+	-21,15
(0,5 mg)		17,50	16,91
2,5-dif tetrahydroxy- 10	136,25i	102,41i	-24,83
butyl)pyrazín (0,5 mg)		16,92	14,12
2-(tetrahydroxy-	10	128,75i	90,50i	-29,70

butyl)-5-(2’,3',4'trihydroxybutyl)pyrazín (0,5 mg)

2-(tetrahydroxybutyl)-5-(2',3»,4' trlhydrozybutyl)pyrazín a 2(tetrahydcoxybutyl)6-(2»,3',4’-tribydroxybutyljpyrazín (50:50)(0,25 mg)

126,60+

17,03

100,60i -20,53

16,88

Kontrolná skupina

137,83i

130,50i —5,32

13,99 20,23

Zmesi podľa vynálezu, oxamát sodný a zlúčeniny všeobecného vzorca (I) majú nízku toxicitu. Ich DL50 je vyšší ako 2000 mg/kg pri myšiach pri perorálnom podaní.

Zmesi podľa vynálezu, oxamát sodný a zlúčeniny všeobecného vzorca (I) znižujú glykémiu u diabetického pacienta a sú teda použiteľné na liečenie cukrovky a diabetických komplikácií.

V prípade, že sa uvedené produkty použijú v rámci monoterapie pri liečení cukrovky, potom tu nie je riziko hypoglykémie. Tieto produkty sú skutočne antidiabetické. Predpokladá sa, že tento účinok je dôsledkom periférneho zvýšenia hladiny glukózy. Tieto produkty nestimulujú významnú mieru sekrécie inzulínu, aj keď k ich účinku sú potrebné malé množstva inzulínu.

Pri piesočnej myši (Psammonys obesus), ktoré sú v zajatí spontánne diabetické, uvedené produkty znižujú hyperglykémiu, predchádzajú alebo obmedzujú zákal šošovky a spôsobujú určitý stupeň plodnosti.

V rámci humánneho lekárstva sú teda tieto produkty použiteľné pri prevencii a liečení cukrovky a najmä cukrovky typu II (NID-diabetes) nemajúcej acetonúriu, cukrovky z obezity, cukrovky osôb okolo päťdesiatky, metapletorickej cukrovky, stareckej cukrovky a miernej cukrovky. Tieto produkty sa môžu použiť v rámci liečby doplňujúcej inzulínoterapiu (vzhľadom na ich schopnosť potencializovať tvorbu inzulínu) inzulíno-dependentnej cukrovky, kedy umožňuje výrazne znížiť dávku dodaného inzulínu, nestabilizovanej cukrovky, kedy doplňujú hypoglykemické sulfamidy, ak tieto zlúčeniny nespôsobujú dostatočné zníženie glykémie. Uvedené produkty sa môžu tiež použiť pri komplikáciách súvisiacich s cukrovkou, medzi ktoré patria najmä hyperlipémia, poruchy metabolizmu tukov, dyslipémia a obezita. Tieto zlúčeniny sú tiež použiteľné pri prevencii a liečení ateroskleróznych lézií a komplikáciách súvisiacich s týmito lcziami: koronopatia, infarkt myokardu, kardiomyopatia, rozvoj týchto troch komplikácií až k nedostatočnosti ľavej srdcovej komory, arteropatia rozličného typu, arteritídy spodných končatín s klaudikáciou a vývojom k vredom a ku gangréne, vaskuláma cerebrálna nedostatočnosť a komplikácie súvisiace s ňou, sexuálna impotencia vaskulárneho pôvodu, retinopatia diabetická a všetky jej prejavy (zvýšenie kapilárnej permeability, kapilárna dilatácia a trombóza, mikronervizmus, arteriovenózny bypass, venózna dilatácia, ponctiformná a škvrnová hemorágia, exudáty, škvmové edémy, prejavy proliferačnej retinopatie, jazvy proliferačnej retinitídy, hemorágia sklovca, oddeľovanie sietnice), diabetický šedý zákal očnej šošovky, diabetická neuropatia v rôznych formách (periférna polyneuropatia a jej prejavy, ako parestézia, hyperstézia a bolesti, kononeuropatia, radikulopatia, autonómna neuropatia, diabetická amyotrofia), prejavy diabetickej nohy (vredy dolných končatín), diabetická nefropatia v oboch jej formách (difúzna a modulárna), ateromatóza (zvýšenie HDLlipoproteínov priaznivo ovplyvňujúcich odstránenie cholesterolu z doštičiek aterómu, zníženie LDL-lipopro-teínu, zníženie pomeru LDL/HDL, inhibicia oxidácie LDL, zníženie adhézie z krvných doštičiek), hyperlipémia a dyslipémia (hypercholesterolémia, hypertriglyceridémia, normalizácia hladiny mastných kyselín, normalizácia urikémie, normalizácia apoproteínov A a B), ako aj na liečenie šedého zákalu očnej šošovky, arteriálnej hypertenzie a dôsledkov, ktoré s týmito chorobami súvisia.

Liečivá podľa vynálezu sú tvorené zmesou podľa vynálezu, oxamátom sodným, zlúčeninou všeobecného vzorca (I) alebo kombináciou týchto produktov a to v čistom stave alebo vo forme kompozície, v ktorej sú uvedené látky prítomné v kombinácii s ľubovoľným ďalším farmaceutický kompatibilným produktom, ktorý môže byť inertný alebo fyziologicky účinný. Liečivá podľa vynálezu sa môžu použiť perorálne, parentcrálne, rektálne alebo topicky.

Ako pevné kompozície na perorálne podanie sa môžu použiť tablety, pilulky, prášky (želatínové tobolky, vrecká) alebo granuly. V týchto kompozíciách je účinná látka podľa vynálezu zmiešaná s jedným alebo niekoľkými inertnými riedidlami, akými sú škrob, celulóza, sacharóza, laktóza alebo siliky, pričom miešanie týchto zložiek sa uskutočňuje pod argónovou atmosférou. Tieto kompozície môžu tiež obsahovať aj látky iné ako riedidlá, pričom takýmito látkami sú napríklad jedno alebo niekoľko mazív, medzi ktoré patria najmä stearát horečnatý alebo mastenec, farbivo, zapuzdrovací prostriedok (dražé) alebo lak.

Ako kvapalné kompozície na perorálne podanie sa môžu použiť roztoky, suspenzie, emulzie, sirupy a elixíry farmaceutickej kvality, ktoré obsahujú inertné riedidlá, akými sú voda, etanol, glycerol, rastlinné oleje a parafínový olej. Tieto kompozície môžu obsahovať aj iné látky ako riedidlá, pričom takýmito látkami sú napríklad zmáčadlá, sladidlá, zhutňovadlá, aromatizačné látky alebo stabilizačné prísady.

Sterilnými kompozíciami na parenterálne podanie môžu byť výhodne vodné alebo nevodné roztoky, suspenzie alebo emulzie. Ako rozpúšťadlo alebo vehikulum sa môžu použiť voda, propylénglykol, polyetylénglykol, rastlinné oleje, najmä olivový olej, injikovateľnc organické cstcry, napríklad etyloleát, alebo ďalšie vhodné organické rozpúšťadlá. Tieto kompozície môžu tiež obsahovať prísady, najmä zmáčacie činidlá a stabilizačné prísady. Sterilizácia sa môže uskutočniť rôznymi spôsobmi, napríklad aseptizujúcou filtráciou, zabudovaním sterilizačných činidiel do kompozície, ožiarením alebo zohriatím. Uvedené kompozície sa môžu tiež pripraviť vo forme pevných sterilných kompozícií, ktoré sa môžu bezprostredne pred použitím rozpustiť v sterilnej vode alebo v ľubovoľnom inom injikovateľnom sterilnom prostredí.

Kompozície na rektálne podanie sú čapíky alebo rektálne kapsuly, ktoré okrem účinnej látky obsahujú ešte pomocné látky, akými sú kakaové maslo, polosyntetické glyceridy alebo polyetylénglykoly.

Kompozície na topické podanie môžu byť napríklad krémy, lotióny, náplasti, kolutória, nosné kvapky alebo aerosóly.

Dávky účinných látok podľa vynálezu budú závisieť od požadovaného účinku, od času liečenia a od zvoleného spôsobu podania. Tieto dávky všeobecne tvoria 150 až 600 mg/deň pri perorálnom podaní dospelému pacientovi s použitím unitárnych dávok obsahujúcich 50 až 200 mg účinnej látky.

Vhodné dávkovanie stanoví ošetrujúci lekár v závislosti od veku, hmotnosti a ostatných faktorov liečeného pacienta.

Nasledujúce príklady ilustrujú kompozície podľa vynálezu.

Príklad A

Obvyklou technickou sa pripravia želatínové tobolky obsahujúce 50 mg účinnej látky a majúce nasledujúce zloženie;

Účinná látka 50mg

Celulóza 18mg

Laktóza 55mg

Koloidné siliky1 mg

Nátriumkarboxymetylškrob 10mg

Mastenec 10mg

Stearát horečnatý1 mg.

Príklad B

Obvyklou technikou sa pripravia tabletky obsahujúce 50 mg účinnej látky a majúce nasledujúce zloženie: Účinná látka50 mg

Laktóza 104 mg

Celulóza40 mg

Polyvidón10 mg

Nátriumkarboxymetylškrob22 mg

Mastenec10 mg

Stearát horečnatý2 mg

Koloidné siliky2 mg

Zmes hydroxymetylcelulózy, glycerínu a oxidu titaničitého (72 : 3,5 : 24,5) v množstve potrebnom na doplnenie finálnej hmotnosti lakovanej tabletky na 245 mg.

Príklad C

Pripraví sa injikovateľný roztok obsahujúci 50 mg účinnej látky a majúci nasledujúce zloženie: Účinná látka50 mg

Kyselina benzoová80 mg

Benzylalkohol 0,06 ml

Benzoát sodný80 mg

Etanol (95 %) 0,4ml

Hydroxid sodný24 mg

Propylénglykol 1,6 ml

Voda doplniť do4 ml.

Claims

1. Zmesi bez polyfenolických a sterolických derivátov a pripraviteľne rozomletím semien dreviny Eugénia Jambolana Lamarck, maceráciou získaného prášku nižším alifatickým alkoholom za tepla, filtráciou, izoláciou nerozpustného podielu, ktorý už neobsahuje polyfenolické a sterolické deriváty, spracovaním nerozpustného podielu v amoniakálnom roztoku, spracovaním amoniakálnej zmesi v nižšom alifatickom alkohole za tepla, filtráciou, izoláciou nerozpusteného podielu a vysušením tohto nerozpusteného podielu, ktorý tvorí zmes I, a prípadným spracovaním zmesi I v roztoku obsahujúcom vodu a nižší alifatický alkohol, filtráciou, čiastočným zahustením filtrátu, prečistením na adsorpčnej nepolámej živici, čiastočným zahustením, odstredením, ultrafiltráciou a izoláciou zmesi II.

2. Spôsob prípravy zmesi I podľa nároku 1, vyzná t u j ú c i sa tým, že sa semená dreviny Eugénia Jambolana Lamarck vysušia, jemne rozomelú a preosejú a získaný prášok sa podrobí spracovaniu zahŕňajúcemu nasledujúce stupne:

a) macerácia za miešania v nižšom alifatickom alkohole obsahujúcom 1 až 4 uhlíkové atómy pri teplote 40 až 70 “C,

b) filtrácia vo vákuu a izolácia nerozpusteného podielu,

c) macerácia za miešania nerozpusteného podielu v nižšom alifatickom alkohole obsahujúcom 1 až 4 uhlíkové atómy pri teplote 40 až 70 °C,

e) vybratie nerozpusteného podielu do amoniakálneho roztoku pri teplote 10 až 30 °C,

f) vybratie celej vlhkej amoniakálnej hmoty v roztoku obsahujúcom vodu a nižší alifatický alkohol obsahujúci 1 až 4 uhlíkové atómy pri teplote 40 až 70 “C,

g) filtrácia a odstránenie alkoholického roztoku,

h) premytie nerozpusteného podielu nižším alifatickým alkoholom obsahujúcim 1 až 4 uhlíkové atómy, filtrácia a odstránenie alkoholického roztoku,

i) izolácia nerozpusteného podielu a vysušenie zmesi I.

3. Spôsob podľa nároku 2, vyznačujúci sa tým, že sa v stupni a) použije 2 až 10 litrov nižšieho alifatického alkoholu na 1 kilogram preosiateho prášku.

4. Spôsob podľa nárokov 2 alebo 3, vyznačujúci sa tým, že sa v stupni a) použije 5 litrov etanolu s koncentráciou podľa Gay Lussaca 93 až 95°, pričom sa macerácia uskutočňuje počas jednej hodiny pri teplote 60 °C.

5. Spôsob podľa niektorého z nárokov 2 až 4, v y značujúci sa tým, že sa filtrácia v stupňoch b) a d) uskutočňuje za vákua zodpovedajúceho 40 kPa.

6. Spôsob podľa niektorého z nárokov 2 až 5, v y značujúci sa tým, že sa v stupni c) použije 2 až 10 litrov nižšieho alifatického alkoholu na 1 kilogram východiskového preosiateho prášku.

7. Spôsob podľa niektorého z nárokov 2 až 6, v y značujúci sa tým, že sa v stupni c) použijú 4 litre etanolu s koncentráciou podľa Gay Lussaca 93 až 95°, pričom sa macerácia uskutočňuje počas jednej hodiny pri teplote 60 °C.

8. Spôsob podľa niektorého z nárokov 2 až 7, v y značujúci sa tým, že sa v stupni e) použije 750 až 1250 ml vodného amoniakálneho roztoku na 1 kilogram východiskového preosiateho prášku.

9. Spôsob podľa niektorého z nárokov 2 až 8, v y značujúci sa tým, že sa v stupni e) použije na 1 kilogram východiskového preosiateho prášku 1 liter vodného amoniakálneho roztoku obsahujúceho 350 ml 28 % amoniaku, pričom sa spracovanie uskutočňuje počas 10 až 30 hodín pri teplote blízkej 20 °C.

10. Spôsob podľa niektorého z nárokov 2 až 9, v y značujúci sa tým, že sa v stupni f) vlhká amoniakálna hmota získaná z 1 kilogramu východiskového preosiateho prášku vyberie v 2 až 10 litroch roztoku obsahujúceho vodu a nižší alifatický alkohol.

11. Spôsob podľa niektorého z nárokov 1 až 10, v y značujúci sa tým, žc sa v stupni f) použije 5 litrov zmesi etanol-voda v objemovom pomere 75 : 25 pri teplote 60 °C, pričom sa spracovanie uskutočňuje počas jednej hodiny.

12. Spôsob podľa niektorého z nárokov 2 až 11, v y značujúci sa tým, že sa v stupni h) pri premývaní použije 500 až 1500 ml nižšieho alifatického alkoholu na 1 kilogram východiskového preosiateho prášku.

13. Spôsob podľa niektorého z nárokov 2 až 12, v y značujúci sa tým, že sa v stupni h) pri premývaní použije 1 liter etanolu a filtrácia sa uskutočňuje na bavlnenej plachtičke vo vákuu zodpovedajúcemu 80 kPa.

14. Spôsob podľa niektorého z nárokov 2 až 12, v y značujúci sa tým, že sa v stupni i) vysušenie uskutočňuje na voľnom vzduchu a bez prístupu svetla.

15. Spôsob prípravy zmesi II podľa nároku 1, vy značujúci sa tým, že sa zmes I podľa nároku 1 podrobí spracovaniu zahŕňajúcemu nasledujúce stupne:

j) spracovanie zmesi I podľa nároku 1 v roztoku obsahujúcom vodu a nižší alifatický alkohol obsahujúci 1 až 4 uhlíkové atómy,

k) dekantácia a potom jednak odtiahnutie vrchnej fázy, ktorá sa sfíltruje na získanie filtrátu 1 a jednak spracovanie spodnej fázy vodou a filtrácia na získanie filtrátu 2, zlúčenie oboch flltrátov a zahustenie na vodnú fázu,

l) spracovanie na nepolámej adsorpčnej živici a potom filtrácia,

m) zahustenie filtrátu, filtrácia a potom ultrafiltrácia,

n) lyofilizácia a izolácia extraktu II.

16. Spôsob podľa nároku 15, vyznačujúci sa tým, že sa v stupni j) použije 10 až 25 litrov roztoku obsahujúceho vodu a nižší alifatický alkohol v objemovom pomere 95 : 5 až 90 : 10 na 1 kilogram zmesi I.

17. Spôsob podľa niektorého z nárokov 15 alebo 16, vyznačujúci sa tým, že sa v stupni j) použije 18 litrov roztoku obsahujúceho vodu a etanol v objemovom pomere 17,7 - 0,93.

18. Spôsob podľa niektorého z nárokov 15 až 17, v y značujúci sa tým, že sa v stupni k) vrchná fáza sfiltruje na bavlnenej plachtičke a že sa pridá na 1 kg zmesi I 10 až 25 litrov vody k spodnej fáze a uskutoční sa filtrácia na frite.

19. Spôsob podľa niektorého z nárokov 15 až 18, v y značujúci sa tým, že sa v stupni k) zahustenie uskutoční všeobecne v termosifónovom odparovači pri teplote 35 °C a vo vákuu zodpovedajúcemu 0,4 kPa.

20. Spôsob podľa niektorého z nárokov 15 až 19, v y značujúci sa tým, že sa v stupni 1) použije živica S861 alebo živica typu XAD komerčne dostupná vo firme Rhom a Hass a filtrácia sa uskutoční na frite.

21. Spôsob podľa niektorého z nárokov 15 až 20, v y značujúci sa tým, že sa v stupni m) zahustenie uskutoční v termosifónovom odparovači pri teplote 35 °C a vo vákuu zodpovedajúcemu 0,4 kPa.

22. Spôsob podľa niektorého z nárokov 15 až 21, v y značujúci sa tým, že sa v stupni m) uskutočnia tri následné ultrafiltrácie na filtračných náplniach lOkDa, 3 kDaa 1 kDa.

23. Spôsob prípravy oxamátu sodného a zlúčenín všeobecného vzorca (I) v ktorom R¹ znamená atóm vodíka a R² znamená uhlíkový reťazec vzorca (A) alebo (B)

-CH₂-CHOH-CHOH-CH₂OH (A)

-CHOH-CHOH-CHOH-CH₂OH (B) alebo R¹ znamená uhlíkový reťazec A a R² znamená atóm vodíka, vyznačujúci sa tým, že sa zmes II podľa nároku 1 podrobí nasledujúcemu spracovaniu zahrnujúcemu tieto stupne:

o) chromatografia zmesi II podľa vynálezu na stĺpci infuzóriovej hlinky, izolácia frakcií obsahujúcich uvedené štyri produkty a zlúčenie týchto frakcií do jedinej frakcie,

p) chromatografia frakcie získanej v predchádzajúcom stupni na stĺpci Sephadexu na získanie oxamátu sodného, zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorom R¹ znamená atóm vodíka a R² znamená uhlíkový reťazec vzorca (B), a zmesi zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorom R¹ znamená atóm vodíka a R² znamená uhlíkový reťazec vzorca (A) a zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorom R¹ znamená uhlíkový reťazec A a R² znamená atóm vodíka,

q) prípadná chromatografia zmesi zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorom R¹ znamená atóm vodíka a R² znamená uhlíkový reťazec A a zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorom R¹ znamená uhlíkový reťazec vzorca (A) a R²znamená atóm vodíka, uskutočnená vysoko výkonnou kvapalinovou chromatografiou.

24. Spôsob podľa nároku 23, vyznačujúci sa t ý m , že sa chromatografia v stupni o) uskutoční na kolóne CHEM ELUT, ktorá je komerčne dostupná vo firme Prolabo, nasýtenej vodou a potom eluovanej postupne heptánom, zmesou heptánu a etylacetátu v objemovom pomere 50 : 50, zmesou etylacetátu a n-butanolu v objemových pomeroch 95 : 5, 90 : 10, 80 : 20, 50 : 50, 20 : 80 a nakoniec 0 : 100 a zmesou n-butanolu a vody v objemovom pomere 98:2a potom 95 : 5.

25. Spôsob podľa nároku 24, vyznačujúci sa t ý m , že sa chromatografia v stupni p) uskutoční s použitím elučnej sústavy tvorenej zmesou vody a etanolu v objemovom pomere 50 : 50.

26. Spôsob podľa nároku 24, vyznačujúci sa t ý m , že sa chromatografia v stupni q) uskutoční na kolóne YMC 180DS-AQ komerčne dostupnej vo firme AIT, pričom sa ako elučná sústava použije voda obsahujúca 0,1 % kyseliny mravčej.

27. Liečivo, vyznačujúce sa tým, že ako účinnú látku obsahuje zmes I podľa nároku 1 alebo zmes II podľa nároku 1 alebo oxamát sodný, alebo jednu, alebo niekoľko zlúčenín všeobecného vzorca (I)

OH OH v ktorom buď R¹ znamená atóm vodíka a R² znamená uhlíkový reťazec vzorca (A) alebo (B)

-CH₂-CHOH-CHOH-CH₂OH (A)

-CHOH-CHOH-CHOH-CH₂OH (B), alebo R¹ znamená uhlíkový reťazec A a R² znamená atóm vodíka, v kombinácii s jednou alebo niekoľkými pomocnými látkami.

28. Použitie zmesi I podľa nároku 1 alebo zmesi II podľa nároku 1 alebo oxamátu sodného, alebo jednej, alebo niekoľkých zlúčenín všeobecného vzorca (I)

OH OH (I) v ktorom buď R¹ znamená atóm vodíka a R² znamená uhlíkový reťazec vzorca (A) alebo (B)

-CH₂-CHOH-CHOH-CH₂OH (A)

-CHOH-CHOH-CHOH-CH₂OH (B) alebo R¹ znamená uhlíkový reťazec vzorca (A) a R² znamená atóm vodíka, na prípravu liečiva určeného na prevenciu a liečenie cukrovky a komplikácií s cukrovkou spojených.