CZ292800B6

CZ292800B6 - Směsi izolovatelné ze semen Eugenia Jambolana Lamarck, způsob jejich přípravy a použití těchto směsí a některých z jejich složek jako léčiva

Info

Publication number: CZ292800B6
Application number: CZ19982436A
Authority: CZ
Inventors: Ratsimamanga Albert Rakoto; Ratsimamanga Suzanne Rakoto; Philippe Rasoanaivo; Jean Leboul; Jean Provost; Daniel Reisdorf
Original assignee: Institut Malgache De Recherches Appliquees; Aventis Pharma S.A.
Priority date: 1996-02-06
Filing date: 1997-02-03
Publication date: 2003-12-17
Also published as: US6194412B1; AR005726A1; JP2010053133A; MA24077A1; UA60299C2; WO1997028813A1; EP0879058A1; DE69705108T2; CN1210469A; US5972342A; HUP9902586A2; PT879058E; TR199801490T2; NO983592L; AU726628B2; TNSN97031A1; AU1727197A; YU4197A; ZA97910B; BG63288B1

Abstract

Řešení se týká směsí izolovatelných ze semen ovocnaté dřeviny Eugenia Jambolana Lamarck, jejich přípravy, léčiv obsahujících tyto směsi nebo složky těchto směsí a použití těchto směsí a složek pro přípravu léčiva.ŕ

Description

Oblast techniky

Vynález se týká směsí izolovatelných ze semen ovocné dřeviny Eugenia Jambolana Lamarck (čeleď myrtovitých), léčiv obsahujících tyto směsi nebo některé z jejich složek, použití těchto směsí a složek pro přípravu antidiabetického léčiva a jejich přípravy.

Dosavadní stav techniky

Rostlinný extrakt připravený ze semen nebo kůry Eugenia Jambolana obsahující směsný polyfenolický a sterolický komplex je popsán v patentu FR 2 465 484.

Podstata vynálezu

Nyní byly nalezeny nové směsi izolovatelné ze semen dřeviny Eugenia Jambolana Lamarck prosté uvedeného polyfenolického a sterolického komplexu, jakož i některé složky uvedených směsí mající hypoglykemické vlastnosti.

Podstata těchto směsí spočívá v tom, že jsou prosté polyfenolických a sterolických derivátů a že jsou izolovatelné rozemletím semen Eugenia Jambolana Lamarck, macerací získaného prášku nižším alifatickým alkoholem za tepla, filtrací, oddělením nerozpustného podílu, který již neobsahuje polyfenolické a sterolické sloučeniny, zpracováním nerozpustného podílu amoniakálním roztokem, zpracováním amoniakální směsi nižším alifatickým alkoholem za tepla, filtrací, oddělením nerozpustného podílu a vysušením tohoto nerozpustného podílu, který tvoří směs I, a případným zpracováním směsi I roztokem nižšího alifatického alkoholu ve vodě, filtrací, částečným zahuštěním filtrátu, přečištěním na adsorpční nepolární pryskyřici, částečným zahuštěním, odstředěním, ultrafiltrací a izolací směsi Π.

Ze směsi Π mohou být rovněž odděleny oxamát sodný a sloučeniny obecného vzorce I

OH ve kterém Ri znamená atom vodíku a R₂ znamená uhlíkový řetězec obecných vzorců A a B

-CH2-CHOH-CHOH-CH₂OH (A)

-CHOH-CHOH-CHOH-CH₂OH (B) nebo Ri znamená uhlíkový řetězec A a R₂ znamená atom vodíku.

Uvedený oxamát sodný byl již popsán Toussaint-em v Ann., 120, 237 (1861).

Sloučeniny obecného vzorce I již byly popsány Kuhnem a kol. v Ann., 644,122-127 (1961), Tsuchidou a kol. v Arg. Biol. Chem., 39(5), 1143-1148(1975), Tsichidou a kol. v Arg. Biol. Chem., 40(5), 921-925(1976), Tsuchidou a kol. vNippon Shokuhin Kogyl Gakkaishi, 37, 154-161 (1990) a Avalosem a kol. v Tetrahedron, 49, 2655-2675 (1993).

-1 CZ 292800 B6

Vynález se rovněž týká způsobu přípravy směsi I ze semen Eugenia Jambolana Lamarck, které byly předtím vysušeny a jemně rozemlety.

Získaný prášek se proseje, výhodně přes normalizované síto s otvory majícími průměr 0,5 pm, načež se podrobí následujícímu zpracování:

a) macerace za míchání v nižším alifatickém alkoholu při teplotě 40 až 70 °C,

b) filtrace za vakua a izolace nerozpuštěného podílu,

c) macerace za míchání nerozpuštěného podílu v nižším alifatickém alkoholu při teplotě 40 až 70 °C,

d) filtrace za vakua a odstranění alkoholických fází obsahujících hlavně nežádoucí polyfenoly a steroly,

e) zavedení nerozpouštěného podílu do amoniakálního roztoku při teplotě 10 až 30 °C,

f) zavedení veškeré vlhké amoniakální hmoty do vodného roztoku nižšího alifatického alkoholu při teplotě 40 až 70 °C,

g) filtrace a odstranění alkoholického roztoku,

h) promytí nerozpuštěného podílu nižším alifatickým alkoholem, filtrace a odstranění alkoholického roztoku,

i) izolace nerozpuštěného podílu a jeho vysušení.

Ve stupni a) se obecně použijí 2 až 10 litrů nižšího alifatického alkoholu, jakým je methanol nebo ethanol, na 1 kilogram prosetého prášku. Výhodně se použije 5 litrů ethanolu s koncentrací podle Gay Lussaca 93 až 95 °C a macerace se provádí při teplotě 60 °C po dobu jedné hodiny.

Filtrace ve stupni b) se výhodně provádí za vakua činícího 40 kPa.

Ve stupni c) se obecně použijí 2 až 10 litrů nižšího alifatického alkoholu, jakým je methanol nebo ethanol,. na 1 kg výchozího prosetého prášku. Výhodně se použijí 4 litry ethanolu s koncentrací podle Gay Lussaca 95° a macerace se provádí při teplotě 60 °C po dobu jedné hodiny.

Filtrace ve stupni d) se výhodně provádí za vakua činícího 40 kPa.

Ve stupni e) se na 1 kg výchozího prosetého prášku obecně použije 750 až 1250 ml vodného amoniakálního roztoku obsahujícího výhodně 350 ml 28% amoniaku na 1000 ml vody. Obzvláště výhodně se použije 1 litr vodného amoniakálního roztoku, doba provedení ve stupni e) činí 10 až 30 hodin, výhodně 20 hodin, a pracuje se při teplotě blízké 20 °C.

Ve stupni f) se vlhká amoniakální hmota, získaná z 1 kg výchozího prosetého prášku, obecně vyjme za míchání ve 2 až 10 litrech směsi nižší alifatický alkohol-voda (jako nižší alifatický alkohol se použije například methanol nebo ethanol), ve které jsou nižší alifatický alkohol a voda obsaženy v objemovém poměru 70:30 až 80:20, výhodně v 5 litrech směsi ethanolu a vody v objemovém poměru 75:25, přičemž se pracuje při teplotě 60 °C a doba prodlevy v tomto stupni činí jednu hodinu.

Ve stupni g) se filtrace výhodně provede na bavlněné plachetce za vakua činícího 80 kPa.

-2CZ 292800 B6

Ve stupni h) se promytí obecně provede 500 až 1500 ml nižšího alifatického alkoholu (například methanol nebo ethanol), vztaženo na 1 kg výchozího prosetého prášku, výhodně za použití 1 litru ethanolu, přičemž se filtrace provede na bavlněné plachetce a za vakua činícího asi 80 kPa.

Ve stupni i) se vysušení výhodně provede na vzduchu a v nepřítomnosti světla.

Předmětem vynálezu je rovněž způsob přípravy směsi Π.

Za tím účelem se směs I, získaná výše uvedeným způsobem, podrobí následujícímu zpracování:

j) zpracování směsi I pomocí vodného roztoku nižšího alifatického alkoholu,

k) dekantace a potom jednak odtažení vrchní fáze, která se zfiltruje k získání filtrátu 1 a jednak zpracování spodní fáze vodou a filtrace k získání filtrátu 2, spojení filtrátů 1 a 2 a zahuštění vodné fáze,

l) zpracování adsorpční nepolární pryskyřicí a potom filtrace,

m) zahuštění filtrátu, filtrace a potom ultrafiltrace,

n) lyofilizace a izolace extraktu Π.

Ve stupni j) se obecně použije 10 až 25 litrů roztoku voda-nižší alifatický alkohol (například methanol nebo ethanol) (95:5 až 90:10 objemově) na 1 kilogram směsi I. Výhodně se použije 18 litrů roztoku voda-ethanol (v objemovém poměru 17,7 až 0,93).

Ve stupni k) se filtrace vrchní fáze výhodně provádí na bavlněné plachetce. Výhodně se na 1 kilogram směsi I přidá 10 až 25 litrů vody ke spodní fázi a zejména 10 litrů vody a filtrace se provádí na fritě.

Ve stupni k) se zahuštění obecně provede v termosifonové odparce při teplotě 35 °C a za vakua činícího 0,4 kPa.

Ve stupni 1) se výhodně použije pryskyřice S861 nebo pryskyřice typu XAD, uvedené na trh firmou Rhom a Haas a filtrace se provede na fritě.

Ve stupni m) se zahuštění obecně provede v termosifonové odparce při teplotě 35 °C a za vakua činícího 0,4 kPa. Rovněž je výhodné provést tři následující filtrace za použití filtračních náplní 10,3 a 1.

Předmětem vynálezu je rovněž způsob přípravy oxamátu sodného a sloučenin obecného vzorce I.

Tento způsob spočívá v tom, že se směs Π podrobí následujícímu zpracování:

o) chromatografie směsi Π na sloupci infuzóriové hlinky, izolace frakcí obsahujících uvedené čtyři produkty a spojení těchto frakcí do jediné frakce,

p) chromatografie frakce získané v předcházejícím stupni na sloupci Sephadexu k získání oxamátu sodného, sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R! znamená atom vodíku a R₂znamená zbytek B a směsi sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Ri znamená atom vodíku a R₂ znamená zbytek A, a sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Ri znamená zbytek A a R₂ znamená atom vodíku,

-3CZ 292800 B6

q) případná chromatografíe směsi sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Ri znamená atom vodíku a R₂ znamená zbytek A a sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R_t znamená zbytek A a R₂ znamená atom vodíku, za použití vysoce výkonné kapalinové chromatografíe.

Chromatografíe ve stupni o) se provede za použití organického rozpouštědla, jakým je heptan, ethylacetát nebo nižší alifatický alkohol. Výhodně se použije kolona ChemElut, uvedená na trh firmou Prolabo, nasycená vodou a potom postupně eluovaná heptanem, směsí heptanu a ethylacetátu v objemovém poměru 50:50, ethylacetátem, směsí eťhylacetátu a n-butanolu v objemových poměrech 95:5, 90:10, 80:20, 50:50 a 20:80, n-butanolem a směsí n-butanolu a vody v objemovém poměru nejdříve 98:2 a potom 95:5.

Chromatografíe ve stupni p) se výhodně provádí za použití směsi vody a ethanolu v objemovém poměru 50:50.

Chromatografíe ve stupni q) se obecně provádí na koloně YMC180DC-AQ, uvedené na trh firmou AIT, přičemž se jako eluční soustava použije voda obsahující 0,1 % kyseliny mravenčí.

V dříve uvedených a ještě následujících definicích jsou nižšími alifatickými alkoholy výhodně alkoholy obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy.

Léčiva obsahující směsi I nebo Π nebo oxamát sodný nebo jednu nebo několik sloučenin obecného vzorce I tvoří rovněž součást vynálezu.

Předmětem vynálezu je rovněž použití směsí I a Π, oxamátu sodného a sloučenin obecného vzorce I nebo směsi uvedených látek pro přípravu léčiv určených pro prevenci cukrovky nebo komplikací vyplývajících z tohoto onemocnění.

V následující části popisu bude vynález blíže objasněn pomocí příkladů jeho konkrétních provedení, přičemž tyto příklady mají pouze ilustrační charakter a nikterak neovlivňují vlastní rozsah vynálezu, který je jednoznačně vymezen formulací patentových nároků.

Příklady provedeni vynálezu

Příklad 1

Příprava směsi I

Semena Eugania Jambolana Lamrck se vysuší na vzduchu za nepřístupu světla, načež se jemně rozemelou. Takto získaný prášek se prošije za použití síta a velikostí ok 0,5 pm. 1 kilogram prosetého prášku se potom maceruje za míchání mechanickým míchadlem v 5 litrech ethanolu majícího koncentraci podle Gay Lussaca 93 až 95° po dobu jedné hodiny při teplotě 60 °C. Po filtraci za vakua se oddělený nerozpuštěný podíl znovu zpracuje za stejných podmínek 41 ethanolu téže koncentrace při teplotě 60 °C po dobu jedné hodiny. Oba ethanolické extrakty, které hlavně obsahují polyfenolický a sterolický komplex, se odstraní. Po dokončení filtrace se nerozpuštěný podíl vyjme 1 litrem amoniakálního roztoku (350 ml 28% NH4OH a destilovaná voda v množství dostatečném k doplnění na 1 litr roztoku) a směs se ponechá ve styku po dobu asi 20 hodin při teplotě blízké 20 °C. Vlhká amoniakální hmota se potom maceruje v 5 litrech směsi ethanolu (koncentrace podle Gay Lussaca 93 až 95°) a vody (objemový poměr 75:25) za mechanického míchání při teplotě 60 °C po dobu jedné hodiny. Nerozpuštěný podíl se odfiltruje a promyje 1 litrem ethanolu uvedené koncentrace. Filtrát a promývací podíl se odstraní. Finální nerozpuštěný podíl se vysuší na vzduch za nepřístupu světla.

-4CZ 292800 B6

Takto se získá směsi ve formě prášku, která je prosta nežádoucích polyfenolických a sterolických derivátů. Výtěžek, vztažený na rozemletá a prosetá semena, činí 80 %.

Příklad 2

Příprava směsi Π kg směsi I, získané v příkladu 1, se míchá po dobu tří hodin v roztoku obsahujícím 17,7 litru vody a 0,93 1 ethanolu. Po dekantací přes noc se jednak vrchní fáze odtáhne (13,5 litru) a potom zfiltruje přes bavlněnou plachetku v 7 1 filtru (Schott), přičemž se získá filtrát 1 (13,5 litru), a jednak se vrchní fáze míchá po dobu jedné hodiny s 20 litry vody, zfiltruje přes fritu č. 3, přičemž se získá filtrát 2 (24 litrů). Oba filtráty se spojí a potom zahustí na objem 33,5 litru v termosifonové odparce (Schott) při teplotě 35 °C a za sníženého tlaku (0,4 kPa). Koncentrát se potom míchá po dobu jedné hodiny s 2,5 litru pryskyřice S861 (Rhom a Haas), načež se zfiltruje přes fritu č. 3. Filtrát se zahustí v termosifonové odparce (Schott) při teplotě 35 °C za sníženého tlaku (0,4 kPa) na objem 5,5 litru. Koncentrát se odstředí v trubkové odstředivce (62 000 g), zfiltruje na filtru 0,22 pm (Gelman, typ suporcap 100). po třech ultrafiltracích provedených po sobě za použití filtračních náplní 10 Kd, 3Kd a 1 Kd a po lyofilizaci se získá 25 g směsi Π ve formě tmavohnědého hygroskopického prášku.

Příklad 3

Složky získané ze směsi Π

525 mg směsi Π, získané v předcházejícím příkladu 2, v roztoku v 1,1 ml filtrované vody typu milli Q se chromatografuje na koloně ChemElut, uvedené na trh firmou Prolabo, mající výšku 50 cm a průměr 1 cm a nasycené filtrovanou vodou typu milli Q. Eluce se provádí nejdříve heptanem s rostoucím gradientem ethylacetátu, potom v n-butanolu, ve směsi n-butanolu a kyseliny chlorovodíkové a ve vodě:

frakce 1:	heptan,
frakce 2:	heptan/ethylacetát v objemovém poměru 50:50,
frakce 3-4:	ethylacetát,
frakce 5-6:	ethylacetát/n-butanol v objemovém poměru 95:5,
frakce 7-8:	ethylacetát/n-butanol v objemovém poměru 90:10,
frakce 9-10:	ethylacetát/n-butanol v objemovém poměru 80:20,
frakce 11-12:	ethylacetát/n-butanol v objemovém poměru 50:50,
frakce 13-14: frakce 15-16:	ethylacetát/n-butanol v objemovém poměru 20:80, n-butanol,

frakce 17-18: v objemovém poměru 98:2, frakce 19-21: n-butanol/voda v objemovém poměru 95:5.

Jímají se frakce o objemu 50 ml. Frakce 19 až 21 se sloučí a zahustí k suchu za sníženého tlaku.

Takto se získá 108 m frakce, která se chromatografuje na sloupci Sephadexu LH20 uvedeného na trh firmou Pharmacia (výška kolony: 100 cm, průměr kolony 1 cm) za použití eluční soustavy tvořené směsí methanolu a vody v objemovém poměru 50:50, přičemž se jímají frakce objemu 1 ml.

1) Frakce 88 až 91 se sloučí a zahustí k suchu. Získá se 14,4 mg produktu, který pro krystalizaci v 0,5 ml ethanolu poskytuje 2 mg 2,5-di-(tetrahydroxybutyl)pyrazinu ve formě bílých krystalů, které mají následující charakteristiky:

-5CZ 292800 B6 optická otáčivost /alfa/²⁰ (Na 589) = -137° ± 2,0 (dimethylsulfoxid, c = 0,5), infračervené spektrum získané za použití přístroje Nicolet 60SX-R v roztoku v KBr:

základní charakteristické absorpční pásy:

3281 cm* (v OH vázané H₂O),

2972+2940+2901+2880 cm^-1 (v CH skupin CH₂ a CHOH),

2733 cm^-1 (v OH vázané),

1635 cm^-1 (deformace skupin OH z H₂O),

1491 cm^-1 (v C=C a C=N pyrazinového jádra),

1449 cm^-1 (v C=C a C=N pyrazinového jádra + deformace OH),

1413 cm“¹ (deformace OH),

1343 cm“¹ (v C=C a C=N pyrazinového jádra),

1309+1290+1251+1215+1181+1161+1123 cm'¹ (deformace CH),

1092 cm“¹ (v CO sekundárních alkoholů),

1048+1035 cm“¹ (v CO primárních alkoholů + pyrazinové jádro),

947+899+854 cm“¹ (sekundami alkoholy),

877 cm“¹ (v CH pyrazinového jádra),

727 cm“¹ (pyrazinové jádro + deformace OH),

639 cm“¹ (pyrazinové jádro),

607+531 cm“¹ šiř. (deformace OH),

451+411 cm'¹ (pyrazinové jádro), hmotové spektrum získané za použití přístroje Finnigan TSQ46 (hmotová ionizace) M/Z = 321 (MH)⁺, ^-nukleární magnetickorezonanční spektrum:

(600 MHz, DMSO, chemické posuny v ppm)

3,40 a 3,61 (2mts, 2H každý: CH2 v 4',4”); 3,58 (2mts, 2H každý: CH v 2',2,3',3”); 4,36 (t šiř., 2H : OH v 4',4”); 4,40 (d, J=7,2 Hz, 2H : OH v 2',2”); 4,63 (d, J=4,8 Hz, 2H : OH v3',3”); 4,95 (dd, J=6,0 a 0,6Hz, 2H: CH v Γ,Γ'); 5,30(d, J=6,0Hz, 2HOH v Γ,Γ’); 8,61 (s, 2H, CHv3a6), lambda^ = 275 nm (ε = 8260),

206 nm (ε = 10220) (c = 19 mg/ml, voda), lambdamax = 276 nm (ε = 7960),

206 nm (ε = 9920) (c = 19 mg/ml, HC1, 0,lN), lambda^ = 275 nm (ε = 7690), (c = 19 mg/ml, KOH 0,lN), vysoce výkonná kapalinová chromatografie na koloně YMC180DS-AQ s výškou 150 mm a průměrem 4,6 mm (šarže AII7DE940377), která je komerčně dostupná u firmy AIT, izokratická eluce H₂O + 0,1 % kyseliny mravenčí při průtoku lml/minutu a za použití detekce ultrafialovým zářením o vlnové délce 270 nm: doba retence: 2 minuty a 32 sekund. ²

2) Frakce 92 a 93 se sloučí a zahustí k suchu. Získá se 9 mg frakce, která po krystalizaci v 0,5 ml ethanolu poskytne 1,2 mg oxamátu sodného, který má stejné charakteristiky jako charakteristiky popsané Toussaint-em v Ann., 120,237 (1861).

-6CZ 292800 B6

3) Frakce 94 až 97 se sloučí a zahustí k suchu. Získá se 25,9 mg frakce, která po krystalizaci v0,5ethanolu poskytne 6,2 mg směsi 2-(tetrahydroxybutyl)-5-(2',3',4-trihydroxybutyl)pyrazinu a 2-(tetrahydroxybutyl)-6-(2',3',4'-trihydroxybutyl)pyrazinu, která se znovu rozdělí vysoce výkonnou kapalinovou chromatografií na koloně YMC 180DS-AQ mající výšku 150 mm a průměr 4,6 mm (šarže AIT/DE940377) za použití izokratické eluce eluční soustavou tvořenou H₂O obsahující 0,1 % kyseliny mravenčí při průtoku 1 ml/minutu a za použití detekce ultrafialovým zářením o vlnové délce 270 nm.

Takto se získá 5,2 mg 2-(tetrahydroxybutyl)-5-(2',3',4'-trihydroxybutyl)pyrazinu, který má následující charakteristiky:

optická otáčivost /alfa/²⁰ (Na 589) = -116,3° ± 1,7 (dimethylsulfoxid, c = 0,5), infračervené spektrum získané za použití přístroje Nicolet 60SX-R v roztoku v KBr:

základní charakteristické absorpční pásy:

3398 cm^-1 (v OH vázané H₂O),

2951+2 922+2 891 cm’¹ (v CH skupin CHOH),

2761 cm’¹ (v OH vázané),

1636 cm’¹ (deformace skupin OH z H₂O),

1483+1 463 cm’¹ (v C=C a C=N pyrazinového jádra),

1411 cm’¹ (deformace skupin OH),

1367+1328+1270+1227+1191 cm”¹ (deformace skupin CH),

1071 cm”¹ (v CO sekundárních alkoholů),

1041 cm’¹ (v CO primárních alkoholů + pyrazinové jádro),

943+897 cm’¹ (sekundární alkoholy),

869 cm“¹ (v CH pyrazinovéhé jádra),

645cm^_1 ( CH pyrazinového jádra),

607 cm”¹ šir. (deformace skupin OH),

446+409 cm’¹ (pyrazinové jádro), hmotové spektrum získané za použití přístroje Finnigan TSQ46 (hmotová ionizace) M/z = 305 (MH)⁺, ^-nukleární magnetickorezonanční spektrum:

(600 MHz, DMSO, chemické posuny v ppm)

2,70 a 3,04 (2 dd, J=9,0 a 15,0 Hz a J=3,0 a 15,0 Hz, 1H každý: CH2 v 1); mezi 3,30 a 3,45 (mts, CH v 3”,4',4); mezi 3,53 a 3,65 (mts, 4H:CH v 2',3',4',4); 3,73 (mt, 1H: CH v 2); 4,37 (t šir., 1H: OH v 4'); 4,42 (mt, 2H:OH v 2'a 4”);

4.60 (d, J=6 Hz, 1H: OH v 2”); 4,63 (d, J=6 Hz, 1H: OH v 3'); 4,67 (d, J=6 Hz, 1H: OH v 3”); 4,92 (dd J=6,0 et 0,6 Hz, 1H : OH v Γ); 5,30 (d, J=6,0 Hz, 1H : OH v Γ); 8,39 (s, 1H : CH v 6);

8.61 (s, lHCHv3), ultrafialové spektrum:

lambda_max = 276 nm (ε = 7756),

206 nm (ε = 8738) (c = 19 mg/ml, voda), lambdamax = 277 nm (ε = 7218),

208 nm (ε = 7171) (c 19 mg/ml, HC10,1Ν),

-7CZ 292800 B6 lambda^ = 276 nm (ε = 7467) (c = 19 mg/ml, KOH O,1N) vysoce výkonná kapalinová chromatografie na koloně YMC180DS-AQ s výškou 150 mm a průměrem 4,6 mm (šarže AIT/DE940377), která je komerčně dostupná u firmy ΑΓΓ, izokratická eluce H₂O + 0,1 % kyseliny mravenčí při průtoku 1 ml/minutu a za použití detekce ultrafialovým zářením o vlnové délce 270 nm:

doba retence: 3 minuty a 75 sekund, a 1 mg 2-(tetrahydroxybutyl)-6-(2',3',4'-trihydroxybutyl)pyrazinu, který má následující charakteristiky:

^!H-nukleámí magnetickorezonanční chromatografie:

(600 MHz, DMSO, chemické posuny v ppm)

2,70 a 3,04 (2 dd, J=9,0 a 15,0 Hz e J=3,0 a 15,0 Hz, 1H každý : CH2 v 1”); mezi 3,30 a 3,45 mts, CH v 3,4',4”); mezi 3,53 a 3,65 (mts, 4H: CH v 2',3',4',4”); 3,73 (mt, 1H : CH v 2''); 4,37(tlarge, 1HOH v 4'); 4,42 (mt, 2HOH v 2 v 4”); 4,60 (d, J=6Hz, 1H: OH v 2); 4,63 (d, J=6 Hz, 1H:OH v 3'); 4,67 (d, >6 Hz, 1H:OH v 3); 4,92 (dd J=6,0 v 0,6 Hz, 1H: CH v 1'); 5,30 (d, J=6,0 Hz : 1H, OH v Γ); 8,31 (s, 1H CH v 5); 8,53 (s, 1H: CH v 3), vysoce výkonná kapalinová chromatografie na koloně YMC180DS-AQ s výškou 150 mm a průměrem 4,6 mm (šarže AIT/DE940377), která je komerčně dostupná u firmy AIOT, izokratická eluce H₂O + 0,1 % kyseliny mravenčí při průtoku 1 ml/minutu a za použití detekce ultrafialovým zářením o vlnové délce 270 nm: doba retence: 3 minuty a 61 sekund.

Hypoglykemická účinnost směsí I a Π, oxamátu sodného a sloučenin obecného vzorce I byla stanovena u myší, u kterých byla indukována cukrovka streptozocinem a u normálně postprandiálně hyperglykemických myší podle následujícího protokolu:

I) Myši, u kterých byla indukována cukrovka streptozotocinem

U myší Swiss albinos s tělesnou hmotností v rozmezí od 22 do 25 g se indukuje cukrovka streptozotocinem podaným intraperitoneální injekcí v dávce 210 nebo 265 mg/kg tělesné hmotnosti myši, zředěné citrátovým pufrem na takovou koncentraci, že každá myš přijme 0,2 ml roztoku v den 1 (JI). Tři až 4 dny později se provede kontrola, zda u myší došlo k rozvoji cukrovky (glykemie vyšší než 7,2mmol/litr /130 mg na 100 ml/). Tehdy se po čtyřhodinovém půstu změří glykemie. V případě, že se myši staly diabetickými, rozdělí se do skupin po 5 až 7 jedincích. Každá ze skupin přijme počínaje dnem JI a denně zvolenou dávku produktu. Podání se provádí jednou denně v pevně stanovenou hodinu žaludeční sondou v objemu 0,4 ml destilované vody použité ve funkci nosiče. Rovněž se vytvoří dvě kontrolní skupiny zvířat:

- skupina neošetřených diabetických myší a

- skupina normálních myší.

Tyto dvě kontrolní skupiny myší přijmou žaludeční sondou a současně s ošetřenými pokusnými zvířaty 0,4 ml vehikula.

Léčení trvá 4 dny. Pátý den (J5) se produkt nepodává. Po čtyřhodinovém půstu se stanoví finální glykemie.

-8CZ 292800 B6

Π) Normální myši s postprandiální hyperglykemií

Myši Swiss albinos s tělesnou hmotností mezi 22 a 25 g se uvedenou do stavu postprandiální hyperglykemie podle následujícího protokolu:

- dvouhodinový půst,

- přebytek potravy po dobu jedné hodiny a

- dvouhodinový půst.

Po uplynutí posledního dvouhodinového půstu se stanoví glykemie, která představuje glykemii v čase TO. Myši se potom rozdělí do homogenních skupin v závislosti na naměřené glykemii. Testované produkty se potom bez odkladu podávají žaludeční sondou v 0,4 ml destilované vody. Skupina kontrolních zvířat přijme pouze vehikulum (0,4 ml destilované vody). Po jedné hodině se změří finální glykemie, která takto představuje glykemii v čase T60.

Získané výsledky pro glykemii myší, u kterých byla indukována cukrovka podáním streptozotocinu

Produkty mg/myš/den	Počet myší	Glykemie v den JI (mg/100 ml)	Glykemie v den A5 (mg/100 ml)	Inhibice (%)
Oxamát sodný (0,5 mg)	5	153,40 ±11,53	89,90113,94	-41,46
Směs Π (0,5 mg)	5	270,50158,72	117,50117,35	-56,56
2-(tetrahydroxybutyl)-5-(2',3',4'-trihydroxybutyl)pyrazin (0,5 mg)	5	304,25 1 99,35	164,50 1 95,13	-45,93
2-(tetrahydroxybutyl)-5-(2 ',3 ',4 -trihydroxybutyl)pyrazin a 2-(tetrahydroxybutyl)-6-(2',3',4'-trihydroxybutyl)pyrazin (50:50) (0,25 mg)	6	320,83 1 130,30	174,00197,74	-45,77
Kontrolní skupina	5	221,66 1 50,17	210,33 1 20,07	-5,11

Výsledky získané pro glykemii normálních myší ve stavu postpradiální hyperglykemie

Produkty mg/myš/den	Počet myší	Glykemie v čase TO (mg/100 ml)	Glykemie v čase T60 (mg/100 ml)	Inhibice (%)
Směs I (5 mg)	5	129,50 1 20,06	87,60114,16	-32,25
Oxamát sodný (0,5 mg)	15	136,46 1 23,69	102,93120,95	-24,57
Směs Π (0,5 mg)	15	133,93117,50	105,60116,91	-21,15
2,5-di(tetrahydroxybutyl)pyrazin (0,5 mg)	10	136,25116,92	102,41114,12	-24,83
2-(tetrahydroxybutyl)-5-(2',3',4'-trihydroxybutyl)paryzin (0,5 mg)	10	128,751	90,50 +	-29,70
2-(tetrahydroxybutyl)-5-(2 ',3 ',4 '-trihydroxybutyl)pyrazin a 2-(tetrahydroxybutyl)-6-(2',3',4'-trihydroxybutyl)pyrazin (50:50) (0,25 mg)	5	126,60117,03	100,60116,88	-20,53
Kontrolní skupina	10	137,83 113,99	130,50120,23	-5,32

Směsi podle vynálezu, oxamát sodný a sloučeniny obecného vzorce I mají nízkou toxicitu. Jejich DL50 je vyšší než 2000 mg/kg u myší při perorálním podání.

Směsi podle vynálezu, oxamát sodný a sloučeniny obecného vzorce I snižují glykemii u diabetického pacienta a jsou tedy použitelné pro léčení cukrovky a diabetických komplikací.

V případě, že se uvedené produkty použijí v rámci monoterapie při léčení cukrovky, potom zde není riziko hypoglykemie. Tyto produkty jsou skutečně antidiabetické. Předpokládá se, že tento účinek je důsledkem periferního zvýšení hladiny glukózy. Tyto produkty nestimulují významnou měrou sekreci inzulínu, i když k jejich účinku jsou nezbytná malá množství inzulínu.

U písečné myši (Psammonys obesus), které jsou v zajetí spontánně diabetické, uvedené produkty snižují hyperglykemií, předcházejí nebo omezují zákal čočky a způsobují určitý stupeň plodnosti.

-9CZ 292800 B6

V rámci humánního lékařství jsou tedy tyto produkty použitelné při prevenci a léčení cukrovky a zejména cukrovky typull (NID-diabetes) nevykazující acetonurii, cukrovky z obezity, cukrovky osob kolem padesáti, metapletorické cukrovky, stařecké cukrovky a mírné cukrovky. Tyto produkty mohou být použity v rámci léčby doplňující inzulinoterapii (vzhledem k jejich schopnosti potencializovat tvorbu inzulínu) inzulino-dependentní cukrovky, kdy umožňují výrazně snížit dávku dodávaného inzulínu, nestabilizované cukrovky, kdy doplňují hypoglykemické sulfamidy, když tyto sloučeniny nezpůsobují dostatečné snížení glykemie. Uvedené produkty mohou být rovněž použity při komplikacích souvisejících s cukrovkou, mezi které patří zejména hyperlipemie, poruchy metabolismu tuků, dyslipemie a obezita. Tyto sloučeniny jsou také použitelné při prevenci a léčení aterosklerózních lézí a komplikací s těmito lézemi souvisejících: koronopatie, infarkt myokardu, kardiomyopatie, rozvoj těchto tří komplikací až k nedostatečnosti levé srdeční komory, arteropatie rozličného typu, arteritidy spodních okončetin s klaudikací a vývojem k vředům a ke gangréně, vaskulámí cerebrální nedostatečnost a komplikace sní související, sexuální impotence vaskulámího původu, retinopartie diabetická a všechny její projevy (zvýšení kapilární permeability, kapilární dilatace a trombóza, mikronervismus, arteriovanózní bypass, venózní dilatace, ponctiformní a skvrnová hemoragie, exsudáty, skmové edémy, projevy proliferační retinopatie, jizvy proliferační retinitidy, hemoragie sklivce, oddělování sítnice), diabetický šedý zákal čočky oční, diabetická neuropatie v různých formách (periferní polyneuropatie a její projevy, jako parestesie, hyperstesie a bolesti, kononeuropatie, radikulopatie, autonomní neuropatie, diabetická amyotrofie), projevy diabetické nohy (vředy dolních okončetin), diabetická nefřopatie v obou jejích formách (difuzní a nodulámí), ateromatóza (zvýšení HDL-lipoproteinů příznivě ovlivňujících odstranění cholesterolu z destiček ateromu, snížení LDL-lipoproteinu, snížení poměru LDL/HDL, inhibice oxidace LDL, snížení adheze krevních destiček), hyperlipemie a dyslipemie (hypercholesterolemie, hypertriglyceridemie, normalizace hladiny mastných kyselin, normalizace urikemie, normalizace apoproteinů A a B), jakož i pro léčení šedého zákalu čočky oční, arteriální hypertenze a důsledků, které s těmito nemocemi související.

Léčiva podle vynálezu jsou tvořena směsí podle vynálezu, oxamátem sodným, sloučeninou obecného vzorce I nebo kombinací těchto produktů, a to v čistém stavu nebo ve formě kompozice, ve které jsou uvedené látky přítomné v kombinaci s libovolným dalším farmaceuticky kompatibilním produktem, který může být inertní nebo fyziologicky účinný. Léčiva podle vynálezu mohou být použita perorálně, parenterálně, rektálně nebo topicky.

Jakožto pevné kompozice pro perorální podám mohou být použity tablety, pilulky, prášky (želatinové tobolky, sáčky) nebo granule. V těchto kompozicích je účinná látka podle vynálezu smíšena s jedním nebo několika inertními ředidly, jakými jsou škrob, celulóza, sacharóza, laktóza nebo silika, přičemž míšení těchto složek se provádí pod argonovou atmosférou. Tyto kompozice mohou rovněž obsahovat i látky jiné než ředidla, přičemž takovými látkami jsou například jedno nebo několik maziv, mezi které patří zejména stearát hořečnatý nebo talek, barvivo, zapouzdřovací prostředek (dražé) nebo lak.

Jakožto kapalné kompozice pro perorální podání mohou být použity roztoky, suspenze, emulze, sirupy a elixíry farmaceutické kvality, které obsahují inertní ředidla, jakými jsou voda, ethanol, glycerol, rostlinné oleje a parafínový olej. Tyto kompozice mohou obsahovat i jiné látky než ředidla, přičemž takovými látkami jsou například smáčedla, sladidla, zhutňovadla, aromatizační látky nebo stabilizační přísady.

Sterilními kompozicemi pro parenterální podání mohou být výhodně vodné nebo nevodné roztoky, suspenze nebo emulze. Jako rozpouštědlo nebo vehikulum mohou být použity voda, propylenglykol, polyethylenglykol, rostlinné oleje, zejména olivový olej, injikovatelné organické estery, například ethyloleát, nebo další vhodná organická rozpouštědla. Tyto kompozice mohou rovněž obsahovat přísady, zejména smáčecí činidla, izotonizující látky, emulgační činidla, dispergační činidla a stabilizační přísady. Sterilizace může být provedena různými způsoby,

-10CZ 292800 B6 například aseptizující filtrací, zabudováním sterilizačních činidel do kompozice, ozářením nebo zahřátím. Uvedené kompozice mohou být rovněž připraveny ve formě pevných sterilních kompozic, které mohou být bezprostředně před použitím rozpuštěny ve sterilní vodě nebo v libovolném jiném injikovatelném sterilním prostředí.

Kompozice pro rektální podání jsou čípky nebo rektální kapsle, které kromě účinné látky obsahují ještě pomocné látky, jakými jsou kakaové máslo, polysyntetické glyceridy nebo polyethylenglykoly.

Kompozice pro topické podání mohou být například krémy, lotiony, náplasti, kolutoria, nosní kapky nebo aerosoly.

Dávky účinných látek podle vynálezu budou záviset na požadovaném účinku, na době léčení a na zvoleném způsobu podání. Tyto dávky obecně činí 150 až 600mg/den při perorálním podání dospělému pacientovi za použití unikátních dávek obsahujících 50 až 200 mg účinné látky.

λ/hodné dávkování stanoví ošetřující lékař v závislosti na věku, hmotnosti a ostatních faktorech léčeného pacienta.

Následující příklady ilustrují kompozice podle vynálezu.

Příklad A

Obvyklou technickou se připraví želatinové tobolky obsahující 50 mg účinné látky a mající následující složení:

r Účinná látka	50 mg
Celulóza	18 mg
Laktóza	55 mg
Koloidní silika	1 mg
Natriumkarboxymethylškrob	10 mg
Talek	10 mg
Stearát hořečnatý	1 mg

Příklad B

Obvyklou technikou se připraví tablety obsahující 50 mg účinné látky a mající následující složení:

Účinná látka	50 mg
Laktóza	104 mg
Celulóza	40 mg
Polyvidon	10 mg
Natriumkarboxymethylškrob	22 mg
Talek	10 mg
Stearát hořečnatý	2 mg
Koloidní silika	2 mg

Směs hydroxymethylcelulózy, glycerinu a oxidu titaničitého (72:3,5:24,5) v množství nezbytném pro doplnění finální hmotnosti lakované tablety na 245 mg.

-11 CZ 292800 B6

Příklad C

Připraví se injikovatelný roztok obsahující 50 mg účinné látky a mající následující složení:

Účinná látka Kyselina benzoová Benzylalkohol Benzoát sodný Ethanol (95%) Hydroxid sodný Propylenglykol Voda mg mg

0,06 ml mg

0,4 ml mg

1,6 ml doplnit do 4 ml

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Směsi prosté polyfenolických a sterolických derivátů a izolovatelné rozemletím semen dřeviny Eugenia Jambolana Lamarck, macerací získaného prášku nižším alifatickým alkoholem za tepla, filtrací, izolací nerozpouštěného podílu, který již neobsahuje polyfenolické a sterolické deriváty, zpracováním nerozpuštěného podílu v amoniakálním roztoku, zpracováním amoniakální směsi v nižším alifatickém alkoholu za tepla, filtrací, izolací nerozpuštěného podílu a vysušením tohoto nerozpuštěného podílu, který tvoří směs I, a případným zpracováním směsi I v roztoku obsahujícím vodu a nižší alifatický alkohol, filtrací, částečným zahuštěním filtrátu, přečištěním na adsorpční nepolární pryskyřici, částečným zahuštěním, odstředěním, ultrafiltrací a izolací směsi H.
2. Způsob přípravy směsiI podle nároku 1, vyznačený tím, že se semena dřeviny Eugenia Jambolana Lamarck vysuší, jemně rozemelou a prosejí a získaný prášek se podrobí zpracování zahrnujícímu následující stupně:

a) macerace za míchání v nižším alifatickém alkoholu obsahujícím 1 až 4 uhlíkové atomy při teplotě 40 až 70 °C,

b) filtrace za vakua a izolace nerozpuštěného podílu,

c) macerace za míchání nerozpuštěného podílu v nižším alifatickém alkoholu obsahujícím 1 až 4 uhlíkové atomy při teplotě 40 až 70 °C,

d) filtrace za vakua a odstranění alkoholických fází obsahujících hlavně nežádoucí polyfenoly a steroly,

e) vyjmutí nerozpuštěného podílu v amoniakálním roztoku při teplotě 10 až 30 °C,

f) vyjmutí veškeré vlhké amoniakální hmoty v roztoku obsahujícím vodu a nižší alifatický alkohol obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy při teplotě 40 až 70 °C,

g) filtrace a odstranění alkoholického roztoku,

h) promytí nerozpuštěného podílu nižším alifatickým alkoholem obsahujícím 1 až 4 uhlíkové atomy, filtrace a odstranění alkoholického roztoku,

i) izolace nerozpuštěného podílu a vysušení směsi I.

-12CZ 292800 B6
3. Způsob podle nároku 2, vyznačený tím, že se ve stupni a) použijí 2 až 10litrů nižšího alifatického alkoholu na 1 kilogram prosetého prášku.
4. Způsob podle nároku 2 nebo 3, vyznačený tím, že se ve stupni a) použije 5 litrů ethanolu s koncentrací podle Gay Lussaca 93 až 95°, přičemž se macerace provádí po dobu jedné hodiny při teplotě 60 °C.
5. Způsob podle některého z nároků 2až 4, vyznačený tím, že se filtrace ve stupních b) a d) provádí za vakua odpovídajícího 40 kPa.
6. Způsob podle některého z nároků 2až 5, vyznačený tím, že se ve stupni c) použijí 2 až 10 litrů nižšího alifatického alkoholu na 1 kilogram výchozího prosetého prášku.
7. Způsob podle některého z nároků 2až 6, vyznačený tím, že se ve stupni c) použijí

4 litry ethanolu s koncentrací podle Gay Lussaca 93 až 95°, přičemž se macerace provádí po dobu jedné hodiny při teplotě 60 °C.
8. Způsob podle některého z nároků 2 až 7, vyznačený tím, že se ve stupni e) použije 750 až 1 250 ml vodného amoniakálního roztoku na 1 kilogram výchozího prosetého prášku.
9. Způsob podle některého z nároků 2až 8, vyznačený tím,že se ve stupni e) použije na 1 kilogram výchozího prosetého prášku 1 litr vodného amoniakálního roztoku obsahujícího 350 ml 28% amoniaku, přičemž se zpracování provádí po dobu 10 až 30 hodin při teplotě blízké 20 °C.
10. Způsob podle některého z nároků 2 až 9, vyznačený tím, že se ve stupni f) vlhká amoniakální hmota získaná z 1 kilogramu výchozího prosetého prášku vyjme ve 2 až 10 litrech roztoku obsahujícího vodu a nižší alifatický alkohol.
11. způsob podle některého z nároků 1 až 10, vyznačený tím, že se ve stupni f) použije

5 litrů směsi ethanol-voda v objemovém poměru 75:25 při teplotě 60 °C, přičemž se zpracování provádí po dobu jedné hodiny.
12. Způsob podle některého z nároků 2 až 11,vyznačený tím, že se ve stupni h) při promývání použije 500 až 1500 ml nižšího alifatického alkoholu na 1 kilogram výchozího prosetého prášku.
13. Způsob podle některého z nároků 2 až 12, vyznačený tím, že se ve stupni h) při promývání použije 1 litr ethanolu a filtrace se provádí na bavlněné plachetce za vakua odpovídajícího 80 kPa.
14. Způsob podle některého z nároků 2až 12, vyznačený tím,že se ve stupni i) vysušení provádí na volném vzduchu a za nepřístupu světla.
15. Způsob přípravy směsi Π podle nároku 1,vyznačený tím, že se směs I podle nároku 1 podrobí zpracování zahrnujícímu následující stupně:

j) zpracování směsi I podle nároku 1 v roztoku obsahujícím vodu a nižší alifatický alkohol obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy,

k) dekantace a potom jednak odtažení vrchní fáze, která se zfiltruje k získání filtrátu 1, a jednak zpracování spodní fáze ve vodě a filtrace k získání filtrátu 2, sloučení obou filtrátů a zahuštění na vodnou fázi,

-13CZ 292800 B6

l) zpracování na nepolární adsorpční pryskyřici a potom filtrace,

m) zahuštění filtrátu, filtrace a potom ultrafiltrace,

n) lyofilizace a izolace extraktu Π.
16. Způsob podle nároku 15, vyznačený tím, že se ve stupni j) použije 10 až 25 litrů roztoku obsahujícího vodu a nižší alifatický alkohol v objemovém poměru 95:5 až 90:10 na 1 kilogram směsi I.
17. Způsob podle některého z nároku 15 nebo 16, vyznačený tím, že se ve stupni j) použije 18 litrů roztoku obsahujícího vodu a ethanol v objemovém poměru 17,7 až 0,93.
18. Způsob podle některého z nároků 15ažl 7, vyznačený tím, že se ve stupni k) vrchní fáze zfiltruje na bavlněné plachetce a že se přidá na 1 kg směsi I 10 až 25 litrů vody ke spodní fázi a provede se filtrace na fritě.
19. Způsob podle některého z nároků 15 až 18, vyznačený tím, že se ve stupni k) zahuštění provede obecně v termosifonové odparce při teplotě 35 °C a za vakua odpovídajícího 0,4 kPa.
20. Způsob podle některého z nároků 15 až 19, vyznačený tím, že se ve stupni m) zahuštění provede v termosifonové odparce při teplotě 35 °C a za vakua odpovídajícího 0,4 kPa.
21. Způsob podle některého z nároků 15 až 20, vyznačený tím, že se ve stupni m) provedou tři následné ultrafiltrace na filtračních náplních obsahujících membrány s velikostí pórů 10 kDa, 3 kDa a 1 kDa.
22. Způsob přípravy oxamátu sodného a sloučenin obecného vzorce I ve kterém buď Ri znamená atom vodíku a R₂ znamená uhlíkový řetězec vzorce A nebo B

-CH₂-CHOH-CHOH-CH₂OH (A)

-CHOH-CHOH-CHOH-CH₂OH (B) nebo Ri znamená uhlíkový řetězec vzorce A a R₂ znamená atom vodíku, vyznačený tím, že se směsi Π podle nároku 1 podrobí následujícímu zpracování zahrnujícímu tyto stupně:

o) chromatografie směsi Π na sloupci infiizóriové hlinky, izolace frakcí obsahujících uvedené čtyři produkty a sloučení těchto frakcí do jediné frakce,

p) chromatografie frakce získané v předcházejícím stupni na sloupci Sephadexu k získání oxamátu sodného, sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Rj znamená atom vodíku a R₂ znamená uhlíkový řetězec vzorce B, a směsi sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Ri znamená atom vodíku a R₂ znamená uhlíkový řetězec vzorce A a sloučeniny obecného vzorce A a R₂ znamená atom vodíku,

-14CZ 292800 B6

q) případná chromatografie směsi sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Ri znamená atom vodíku a R₂ znamená uhlíkový řetězec vzorce A a sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém Ri znamená uhlíkový řetězec vzorce A a R₂ znamená atom vodíku, provedená vysokovýkonnou kapalinovou chromatografií.
23. Způsob podle nároku 22, vyznačený tím, že se chromatografie ve stupni p) provede za použití eluční soustavy tvořené směsí vody a ethanolu v objemovém poměru 50:50.
24. Léčivo, vyznačené tím, že jako účinnou látku obsahuje směs I podle nároku 1 nebo směs Π podle nároku 1 nebo oxamát sodný nebo jednu nebo několik sloučenin obecného vzorce I ve kterém buď R] znamená atom vodíku a R₂ znamená uhlíkový řetězec vzorce A nebo B

-CH2-CHOH-CHOH-CH₂OH (A)

-CHOH-CHOH-CHOH-CH₂OH (B) nebo Rj znamená uhlíkový řetězec A a R₂ znamená atom vodíku, v kombinaci s jednou nebo několika pomocnými látkami.
25. Použití směsi I podle nároku 1 nebo směsi Π podle nároku 1 nebo oxamátu sodného nebo jedné nebo několika sloučenin obecného vzorce I

OH ve kterém buď Ri znamená atom vodíku a R₂ znamená uhlíkový řetězec vzorce A nebo B

-CHr-CHOH-CHOH-CHzOH (A)

-CHOH-CHOH-CHOH-CH₂OH (B) nebo Rj znamená uhlíkový řetězec vzorce A a R₂ znamená atom vodíku, pro přípravu léčiva určeného pro prevenci a léčení cukrovky a komplikací s cukrovkou spojených.

Konec dokumentu