DK2550363T3 - ADAM6-mus - Google Patents

Claims (14)

1. Mus med et genom omfattende en modifikation af et immunoglobulins tunge kædes locus, hvor modifikationen eliminerer endogen ADAM6-funktion, som er forbundet med en reduktion i fertilitet i hanmus, hvor musen yderligere omfatter nucleinsyresekvenser, som koder for et murint ADAM6a-protein eller en or-tolog eller en homolog eller et funktionelt fragment heraf, som er funktionelt i en hanmus, og et murint ADAM6b-protein eller en ortolog eller en homolog eller et fragment heraf, som er funktionelt i en hanmus.

2. Mus ifølge krav 1, hvor nucleinsyresekvenserne er ved et endogent im-munoglobulint locus, eller hvor nucleinsyresekvenserne er integreret i musege-nomet ved en anden position end et endogent immunoglobulinlocus.

3. Mus ifølge et vilkårligt af kravene 1 - 3, hvor modifikationen af immunoglo-bulinets tunge kædes locus omfatter en insertering af en eller flere humane im-munoglobulingensekvenser, eller hvor modifikationen af immunoglobulinets tunge kædes locus omfatter erstatning af en eller flere sekvenser i en museimmunoglobulins tunge kædes locus med en eller flere humane immunoglobulingensekvenser, fortrinsvis hvor modifikationen af immunoglobulinets tunge kædes locus omfatter erstatning af en endogen tung kæde variable gensekvens med en human tung kædes variable gensekvens, og mere foretrukket hvor modifikationen af immunoglobulinets tunge kædes locus omfatter erstatning af en eller flere endogene tunge kæders V (VH) gensegmenter med en eller flere humane tunge kæders V (VH) gensegmenter.

4. Fremgangsmåde til at modificere et immunoglobulins tunge kædes locus fra en mus omfattende: (a) fremstilling af en første modifikation af museimmunoglobulinets tunge kædes locus, som resulterer i en eliminering af endogent murint ADAM6-aktivitet i en hanmus, og (b) fremstilling af en anden modifikation af musen at tilsætte nucleinsyre-sekvenser, som tilfører musen ADAM6-aktivitet, som er funktionel i en hanmus, fortrinsvis hvor nucleinsyresekvenserne i trin (b) er sat til ved en ec-topisk position, hvilken nucleinsyresekvens koder for et murint ADAM6a-protein eller en ortolog, en homolog eller et funktionelt fragment deraf, og et murint ADAM6b-protein eller et ortolog, en homolog eller et funktionelt fragment heraf.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 4, hvor den første modifikation omfatter en in-sertering af en eller flere i humane immunoglobulingensekvenser eller hvor den første modifikation omfatter udbytningen af en eller flere sekvenser i musens immunoglobulins tunge kædes locus med en eller flere humane immunoglobulingensekvenser, fortrinsvis hvor den første modifikation omfatter udbytningen af en endogen tung kædes variable gensekvens med en human tung kædes variable gensekvens, og mere foretrukket hvor den første modifikation omfatter udbytningen af en eller flere endogene Vh gensegmenter med en eller flere humane Vh gensegmenter.

6. Fremgangsmåde ifølge et vilkårligt af kravene 4 - 5, hvor den første og den anden modifikation er fremstillet samtidigt.

7. Isoleret celle eller isoleret væv fra en mus ifølge et vilkårligt af kravene 1 -3.

8. Anvendelse af en mus ifølge krav 3 til generering af (i) et kimærisk antistof, hvilket kimæriske antistof omfatter humane variable regioner og murine konstante regioner, (ii) et fuldt humant antistof, (iii) et fuldt humant Fab-fragment, og/eller (iv) et fuldt humant (F(ab)2-fragment.

9. Fremgangsmåde til generering af et kimærisk antistof specifikt mod et antigen omfattende trinnene: a) immunisering af en mus ifølge krav 3 med antigenet, b) isolering af mindst en celle fra musen, der producerer det kimæriske antistof specifikt imod antigenet, hvilket kimæriske antistof omfatter humane variable regioner og murine konstante regioner, og c) dyrkning af mindst en celle, som producerer et kimærisk antistof fra trin b) og opnåelse af nævnte kimæriske antistof, fortrinsvis hvor dyrkningen i trin c) udføres på mindst en hybridomcelle genereret fra den i det mindste ene celle opnået i trin b).

10. Fremgangsmåde til generering af et fuldt humant antistof specifikt mod et antigen omfattende trinnene: a) immunisering af en mus ifølge krav 3 med antigenet, b) isolering af mindst en celle fra musen, der producerer et kimærisk antistof specifikt mod antigenet, hvilket kimæriske antistof omfatter humane variable regioner og murine konstante regioner, c) generering af mindst en celle, der producerer et fuldt humant antistof stammende fra det kimæriske antistof i trin b) og specifikt mod antigenet, og d) dyrkning af mindst en celle, der producerer det fulde humane antistof fra trin c) og opnåelse af nævnte fulde humane antistof.

11. Fremgangsmåde ifølge et vilkårligt af kravene 9 og 10, hvor den i det mindste ene celle opnåelig i trin b) er en splenocyt eller en B-celle.

12. Fremgangsmåde ifølge et vilkårligt af kravene 9-11, hvor antistoffet er et monoklonalt antistof.

13. Fremgangsmåde ifølge et vilkårligt af kravene 9-12, hvor immuniseringen med antigenet fra trin a) udføres med protein, DNA, en kombination af DNA og protein eller celler, der udtrykker antigenet.

14. Nucleinsyresekvens, som koder for et murint ADAM6a-protein eller en orto-log eller en homolog eller et funktionelt fragment heraf, som er funktionel i en hanmus, og et murint ADAM6b-protein eller en ortolog eller en homolog fragment heraf, som er funktionel i en hanmus til anvendelse i gendannelse eller forstærkning af fertiliteten af en hanmus med et genom omfattende en modifikation af et immunoglobulins tunge kædes locus, hvor modifikationen reducerer eller eliminerer endogen ADAM6-funktion, som er associeret med en reduktion af fertilitet i hanmus, hvor nævnte nucleinsyresekvens skal integreres i genomet på musen ved et endogent immunoglobulins locus eller ved en position anden end et endogent immunoglobulins locus.