DK168512B1 - Terapeutiske præparater til brug ved fotodiagnose og fototerapi - Google Patents

Description

i DK 168512 B1

Denne opfindelse angår hidtil ukendte terapeutiske præparater, som er nyttige til anvendelse ved fotodiagnose og fototerapi, især til detektering og behandling af tumorer og cancerøse væv i menneske- eller dyrekroppen.

5

Beskrivelse af den kendte teknik

Det er kendt at bestråle tumorer og cancrøse væv i menneskekroppen med intensivt lys i bølgelængde området 626-10 636 nm efter indgivning af et hematoporphyrinderivat for at reducere og, til tider, ødelægge de cancerøse celler (se den offentliggjorte internationale patentansøgning W0 83/00811). Det er også kendt, at porphyriner, især natriumsaltet af protoporphyriner, kan bevare eller fremme 15 cellers normale funktioner og er nyttige til forhindring af genese, vækst metastase og relaps af maligne tumorer.

Den offentlig tilgængelige japanske patentansøgning nr. 125737/76 beskriver anvendelsen af porphyriner som tumor-inhiberende midler, idet der som eksempler anføres etio-20 porphyrin, mesoporphyrin, protoporphyrin, deuteroporphy-rin, hematoporphyrin, coproporphyrin og uroporphyrin.

I Tetrahedron Letters No. 23, side 2017-2020 (1978), er beskrevet et aminomonocarboxylsyre-additionsprodukt af 25 pigmentet bonellin opnået ved ekstraktion af hovedsageligt kropsvæggen af den marine echiuroide B. viridis. Strukturen af disse additionsprodukter antages at være et amid dannet via den ene eller den anden af bonellins frie carboxylgrupper og aminocarboxylsyren. Hydrolyse af addi-30 tionsproduktet gav en blanding af valin, isoleucin, leu-cin og alloisoleucin. Der er ikke beskrevet nogen anvendelse for disse aminosyreadditionsprodukter i denne reference .

35 At tetrapyrrolerne forårsager intens fotosensitivitet i dyr er velkendt og er blevet dokumenteret i talrige artikler i litteraturen, f.eks. J. Intr. Sci. Vitaminol, 2 DK 168512 B1 27, 521-527 (1981); Agric. Biol. Chem., 46(9), 2183-2193 (1982); Chem. Abst. 98, 276 (1983) og 88, 69764m (1928).

EP-A-0 142 732 beskriver pheophorbid-derivater og alkali-5 metalsalte deraf som nyttige forbindelser ved cancerbehandling.

Sammenfatning af opfindelsen 10 De terapeutiske midler ifølge opfindelsen er cycliske te-trapyrroler afledt ved forskellige procedurer fra naturligt forekommende tetrapyrroler. De cycliske tetrapyrro-ler har som deres fælles udgangs-tetrapyrrol uroporphyrinogen og har den følgende ringstruktur; 15 1 2 19 30 A , ...

20 \ /==]b £> KH HK 5 16 \=. 7 N . ? 7 _^ \-Ll· 14 13 £ 1G 9 25 ^- 12 11 hvori positionerne i molekylet er nummereret 1-20, og ringene identificeres ved bogstaverne A,B,C og D, og in-30 kluderer også perhydro-, f.eks. dihydro- og tetrahydro-, derivater af denne ringstruktur, f.eks. forbindelser, hvori en eller flere dobbeltbindinger mangler. Der findes i ringsystemet 4 pyrrolringe sammenføjet via a-positio-nerne i de respektive pyrrolringe af en methingruppe, 35 dvs. -CH=. Forbindelserne ifølge opfindelsen betegnes af nemhedsgrunde i denne beskrivelse med krav som derivater af tetrapyrrolerne, og det skal forstås, at betegnelsen 3 DK 168512 B1 "tetrapyrrol" vil betegne forbindelser med den ovenstående karakteristiske ringstruktur såvel som de tilsvarende perhydro-derivater, og de tilsvarende ikke-cycliske pyr-roler, dvs. de lineære tetrapyrroler, der er almindeligt 5 kendte som galdepigmenterne.

De tetrapyrroler, som anvendes ifølge den foreliggende opfindelse, afledes alle fra naturlige tetrapyrroler ved forskellige midler og forskellige ændringsprocedurer. De 10 naturligt forekommende tetrapyrroler har som deres fælles ophav uroporphyrinogen III, en hexahydroporphyrin reduceret ved bro-positionerne. F. eks. er syntetiske eller biosyntetiske derivater eller produkter af protoporphyrin IX eller protoporphyrinogen IX velkendte indenfor faget 15 (se f. eks. Porphyrins and Metalloporphyrins, editor K. Smith, Elsevier; The Porphyrins (Vols. 1-7) D. Dolphin, Academic Press; og Biosynthetics Pathways, Vol. Ill, Chapter by B. Burnham, editor D.M. Greenberg, Academic Press).

20

De ikke-cycliske tetrapyrroler er almindeligt kendte som galdepigmenter og inkluderer f. eks. bilirubin og bili-verdin. Disse tetrapyrroler afledes også fra protoporphyrin, f. eks. som metaboliske produkter i dyr.

25

En yderligere karakteristisk egenskab ved det foreliggende hidtil ukendte terapeutiske præparat er tilstedeværelsen af mindst én amidbinding i en substituent ved en af de nummererede positioner i ringstrukturen. Disse er til-30 stede i de omhandlede hidtil ukendte forbindelser sammen med andre substituenter som defineret i det følgende.

Derfor omfatter den foreliggende opfindelse et terapeutisk præparat som angivet i krav 1.

35

Foretrukne udførelsesformer af dette præparat er angivet i krav 2-5.

4 DK 168512 B1

Yderligere omfatter opfindelsen den anvendelse, som er angivet i krav 6.

Således omfatter den foreliggende opfindelse de terapeu-5 tiske præparater indeholdende aminosyre- eller peptidderivater af forbindelser, som indeholder chromophoren af porphyriner, chloriner eller bacteriochloriner såvel som beslægtede porphyrinforbindelser. Peptidbindingen involverer en carboxylgruppe i den chromophor-bærende forbin-10 del se og aminogruppen i den specificerede aminosyre- De foreliggende hidtil ukendte terapeutiske præparater omfatter blandt andet derivater af tetrapyrroleme, som indeholder en fri carboxylgruppe. Disse derivater inkluderer hovedklasserne af tetrapyrroler: carboxylholdige por-15 phyriner, chloriner og bacteriochloriner, som er velkendte for fagfolk.

De aminosyrer, som ifølge opfindelsen anvendes til at danne den førnævnte peptidbinding, er aminomonocarboxyl-20 syrer, hvori aminogruppen selvfølgelig er lokaliseret på et carbonatom af monocarboxy1syren. Der kræves mindst to aminomonocarboxylsyrer. Den specifikke position af aminogruppen i carbonatomkæden er ikke kritisk, idet det eneste krav er, at aminogruppen er til rådighed til at danne 25 den nødvendige peptidbinding med carboxylgruppen i den valgte porphyrin. Således er en lang række aminomonocarb-oxylsyrer nyttige ifølge opfindelsen, herunder serin, glyoin, a-aminoalanin, Ø-aminoalanin, e-amino-n-capron-syre, piperidin-2-carboxylsyre, piperidin-6-carboxylsyre, 30 pyrrol-2-carboxylsyre, pyrrol-5-carboxylsyre, piperidin- 6-propionsyre, pyrrol-5-eddikesyre og sådanne lignende syrer. Disse aminosyrer kan være substitueret med angulæ-re alkylgrupper, såsom methyl- og ethylgrupper, såvel som andre grupper, der ikke har skadelig virkning på amino-35 gruppens evne til at danne peptidbindingen, f. eks. alk-oxygrupper eller acyloxygrupper, og de kan også inkludere yderligere aminogrupper. De foretrukne aminosyrer er de 5 DK 168512 B1 naturligt forekommende a-aminosyrer, serin, alanin og glycin, som er let tilgængelige og indtil nu har givet de bedste resultater.

5 Eksempler på forbindelser af tetrapyrrol-klasserne er anført i tabel I, hvori de nummererede positioner i tetra-pyrrol-ringstrukturen anvendes til at betegne positionen af den angivne substituent. Fraværet af dobbeltbindinger i ringsystemet angives under "dihydro", hvor hvert sæt 10 tal (ringposition) angiver fraværet af en dobbeltbinding mellem de angivne positioner.

15 20 25 30 35 DK 168512 Bl . 6

O

w ? ·' ! i j - ; °i ^

1 1 1 i O I —I 'O

O

jy O Q) CJ O o n o ^ A Σ λ. 2 2

Q

uu U U i-< '-»a.a.a« cl x cl x cl

^ = = X X .X = XX

^ ir* titi u lj u CL G. (L, a. _ O, X CL x

O

c 0 H OJ ϋ ϋ C8 CJ (U 0 0

H —.*.*.*. 2 2 2 2 S

•ri 01

O O

Ql ^ _ ΐ X X X i) JJ -U

Di c- x i—o-o > o o « x « •S 9 Vo

Pi a " °5!<υω yøxø ø o — 2-L 2 2 0 2 2X2

rv; Vj C! X X -j il JJ

c- x 2-0-0 > > y x a H

< 1 Oo rLøcua) oiø ø « S ° “ 2 2 22 — r-» 2 2

V/O

J-J

CO

·»-( 0 t-l 0 S o

x c ·“ * X X

!_.·—· X —! M H H

^ c M 3 =L.O c rj r< - -- = x ^ 5 -5 -a c: o *H c ^ Γ u u

•w >* D U 'd- ^ O O

Η >ΐ.| £ E. ® £ XX

J S € p I -p. S ω e- B 8 w χ p cr & g 8 5 ° j·} jå m l i °- = s < x o o -00(-° tom

r. X LI -LI 2 Jj JJ *· m C C

^ x c. π = o o ° tu 33 Q C v 2 ^ X τ> ·£ X ή £· U X X x o. — 7 DK 168512 B1 °l = 5 £ £ ^ ^ f- ^i η ^ 15 S 15 15 ~ 15 - = t X z = ± - 1J _ i· _ i- - '4 3

U ^ U ·_, u U

xs.j.c*xcl, z: 3 z a- r: 3 '"'S U CJ O O o o ·*· < 2: < < < < ^ 3= ’ X = — — ^ 0s1 o™ r? ™ rs ° 8 8 a: s 8 8 u C!

H

ω o a 05 ^a^xauyy =u ^Οοοοασ o Σ Σ s ξ ς ς = z

°·' ^ 3 x> jj D

> > U > £4 u ζ < ^1.¾ Si SI Si ej o o *=· *· <· <. a s s: μ (ΰ ” -, o| 8 , · i ;1 - fl u-i ! ®°l 1 l_i i i - o c —! H & -° " 'Γ1 - --( z z! ϋ I « i μ .μ . jz u u M —i V* — O Sj o o o ω ^ o o - -η ffl i i lj (j 2 Vi “••^.2 9 U o o i! ^ a· - - 9 o wi w · o C. ·_) -=! -3 i; ,¾ r, &i -^- —< .£. 2 3 8 DK 168512 B1

O

t< r» r* 73 r-~ <h f" —( **·| «· « ·· - jr \o vs vo o ·—I ·Η

Q

_ CJ ^ £

a vw VrvJ

]£J „ ti ti

WvJ '\yvsj ^ ø o ^ z < <N —

^ ΓΜ X

8 u

CJ "—· GJ OJ

0 1-1 Ξ s

•H

-P

•ri CO _ ,-,

O Γ'· _u) _UJ

Di = Μ = H g.

r? IjvnJ V/'vO Q- λ •H O PØ 05 Q1 Q.

0 Q.

<J3 o o ti r: r z r Σ t cd I i i CD ^ CJI Q.

^ C CD CD CD O- 0 O O. CL PØ

Q. ·π. Q. CL >> P

α Q. 3 3 CD CP

^ J 3 o U t- 0 r-i rsy y p P CD CD .* >·

^ ^ 31 Q. I—II—· ·Ρ-ί JJ

f ^ P . "O 0

C X Ό O

_c ~ -n Jj 0 CD

*-1 ,0 _9 ij Q > 0 ^

A ^ ω R ^ "" - T

*= rvj cn m o O

D 0 0 8 T

CD N II fM CN m d 9 9 S 5 o s *1.

W -s·! C

+J -0 ·η

Ti 1 M

° 5 3 sq.. c ; s s g -s *Ή o H 2-5-¾ tf 2 3 .2 ω >i ti ti CQ rr o ø tt C-, -D A) S 2 o u ^ o ø ^ C cq n 9 DK 168512 Bl

De foretrukne tetrapyrrolcarboxylsyrer er dem, hvori mindst 3 carboxylsyregrupper er asymmetrisk knyttet til porphyrinringsystemet, f.eks. hvor carboxyl syregrupperne er tilstede på ringside A og B af molekylet eller på 5 ringside D og C af molekylet.

De særligt foretrukne terapeutiske præparater omfatter et fluorescerende mono-, di- eller polyamid af en aminomono-carboxylsyre og en tetrapyrrol med formlen: 10

Y E B

VA J=-" 15 \ / a UH HN „

K-( '-CCOH

N

l_/\=4

D CH

\ ^

20 H-H CCOH

H {c« ) {,2}2

C00H

hvori; 25 X = H, vinyl, ethyl, acetyl eller formyl, Y = methyl eller formyl, M = methyl, og E = ethyl, og farmaceutisk acceptable salte deraf.

30

De forbindelser, som indgår i det terapeutiske præparat ifølge opfindelsen, danner salte med enten syrer eller baser. Syresaltene er særlig nyttige til rensning og/el-ler separation af de endelige amidprodukter ligesom sal-35 tene dannet med baser. Basesaltene er imidlertid særligt foretrukne til diagnostisk og terapeutisk anvendelse som beskrevet i denne beskrivelse.

10 DK 168512 B1

Syresaltene dannes med en række forskellige syrer, såsom mineralsyrerne saltsyre, hydrogenbromidsyre, salpetersyre og svovlsyre, og de organiske syrer toluensulfonsyre og benzensulfonsyre.

5

Basesaltene inkluderer f.eks. natrium-, kalium-, calcium-, magnesium-, ammonium-, triethylammonium-, tri-methylammonium-, morpholin- og piperidinsalte og salte med lignende kationer.

10

Syre- og basesaltene dannes ved den simple foranstaltning at opløse det valgte aminosyretetrapyrrolamid i en vandig opløsning af syren eller basen og inddampe opløsningen til tørhed. Anvendelsen af et med vand blandbart opløs-15 ningsmiddel for amidet kan hjælpe med til opløsning af amidet. De endelige amidprodukter kan også omdannes til metalkomplekser, f.eks ved omsætning med metalsalte. Magnesiumkomplekserne kan være nyttige til de samme formål som additionsprodukterne. Andre metalkomplekser, f.eks.

20 komplekser med jern og zink, er ligesom magnesiumkomplekserne nyttige til at udelukke forurening af additionsproduktet under forarbejdningen med metaller såsom nikkel, cobalt og kobber, der er vanskelige at fjerne. Zink og magnesium fjernes let fra det endelige additionsprodukt, 25 efter at forarbejdningen er fuldført.

Eftersom mange af aminodicarboxylsyrerne eksisterer i både D- og L-formerne og også anvendes i blandinger af disse former såvel som D,L-formen, vil valget af udgangs-30 aminosyren selvfølgelig resultere i produkter, hvori den respektive isomere eller blanding af isomere forekommer. Opfindelsen omfatter anvendelsen af alle sådanne isomere, men L-formen er særlig foretrukken.

35 De omhandlede hidtil ukendte forbindelser fremstilles ad de sædvanlige peptidsynteseveje, som almindeligvis inkluderer enhver amiddannende reaktion mellem den valgte ami- 11 DK 168512 B1 nosyre og den specificerede tetrapyrrol. Således kan ethvert amiddannende derivat af tetrapyrrolcarboxylsyren anvendes til fremstilling af de omhandlede hidtil ukendte peptider, f.eks. lavere alkylestere, anhydrider og blan-5 dede anhydrider.

Ved de foretrukne fremstillingsmetoder anvendes blandede anhydrider af carboxylsyren eller carbodiimider. Reaktanterne bringes blot i kontakt i et egnet opløsningsmiddel 10 for dem og får lov at reagere. Temperaturer op til tilbagesvalingstemperaturen kan anvendes, idet de højere temperaturer blot reducerer reaktionstiden. Det foretrækkes imidlertid sædvanligvis at undgå overdrevent høje temperaturer for at undgå uønskede bireaktioner.

15

Procedurerne til dannelse af de omhandlede peptider er velkendte indenfor faget og belyses i detaljer i de efterfølgende eksempler.

20 Eftersom den valgte tetrapyrrol indeholder mere end én carboxylgruppe, kan der dannes blandinger af produkter inkluderende isomere monopeptidprodukter og endog tri-eller højere peptidprodukter afhængigt antallet af carb-oxylgrupper og afhængigt af den valgte støkiometri. Når 25 der omsættes ækvimolære blandinger af aminosyre og tetrapyrrol, kan produktet således indeholde nogle monopeptider, men der vil også være di- eller polypeptider til stede. Det er almindeligvis muligt at adskille monopeptiderne og højere peptider under anvendelse af kendt chro-30 matografisk teknik. Imidlertid er sådanne separationer ikke nødvendige, da de blandede peptider sædvanligvis er sammenlignelige med de separerede produkter ved deres endelige anvendelse. Således kan der anvendes blandinger af mono-, di- og tripeptider af den samme tetrapyrrol.

Sædvanligvis separeres ureageret tetrapyrrol fra peptidprodukterne ifølge opfindelsen under rensningen, f.eks.

35 12 DK 168512 B1 ved chromatografisk teknik.

Fotodiagnose og fototerapi 5 Forbindelserne ifølge opfindelsen er nyttige til fotodiagnose og fototerapi af tumor-, cancer- og malignt væv, i det følgende betegnet som "tumor".

Når et menneske eller dyr med tumor behandles med doser 10 af en forbindelse ifølge opfindelsen, og når der påføres passende lysstråler eller elektromagnetiske bølger, udsender forbindelsen lys, dvs. fluorescens. Derved kan eksistensen, positionen og størrelsen af tumoren detekte-res, dvs. fotodiagnose.

15 Når tumoren bestråles med lys af den rette bølgelængde og intensitet, aktiveres forbindelsen til at udøve en celledræbende virkning overfor tumoren. Dette kaldes "fototerapi" .

20

Forbindelser egnet til fotodiagnose og fototerapi bør i ideelt have de følgende egenskaber: (a) ikke-toxiske i en normal terapeutisk dosering, med 25 mindre og indtil de aktiveres af lys, (b) bør være selektivt fotoaktive, (c) når der påføres lysstråler eller elektromagnetiske 30 bølger, bør de udsende karakteristisk og detekterbar fluorescens, (d) når de bestråles med lysstråler eller elektromagnetiske bølger, aktiveres de i en sådan grad, at de udøver 35 en celledræbende virkning overfor tumor, og 13 DK 168512 B1 (e) de metaboliseres eller udskilles let efter behandlingen.

Ifølge prøvning til dato har de hidtil ukendte forbindel-5 ser ifølge opfindelsen de ovenstående egenskaber og karakteriseres også af rimelig opløselighed i saltopløsning ved fysiologisk pH-værdi.

Forbindelserne, som indgår i præparaterne ifølge opfin-10 delsen, udviser større fluorescens i tumorer end de tilsvarende basistetrapyrroler. Deres anvendelse giver den bedste kontrast i tumorer sammenlignet med normalt væv omkring tumoren. De omhandlede forbindelser absorberer aktiverende energi til fototerapi i det hensigtsmæssige 15 område 600-800 nm, idet de foretrukne forbindelser absorberer i området 620-760 nm, dvs. lys af længere bølgelængde, som muliggør lettere indtrængen af energi i tumoren til fototerapeutisk formål.

20 Efter den nuværende erfaring fordeles forbindelserne, som indgår i præparaterne ifølge opfindelsen, mere ensartet igennem tumoren end basistetrapyrrolen, hvilket muliggør anvendelsen af betydeligt lavere dosering (ned til omkring 1/10 af den krævede normale dosis af basistetrapyr-25 rolen) og således formindsker, om ikke eliminerer, foto-sensitivering i værten. De har også en mere vedblivende fluorescens, medens nogle af de tilsvarende tetrapyrroler viser ikke-vedvarende fluorescens, eller fluorescensen varierer fra dag til dag i værten.

30

En særlig fordelagtig egenskab ved de omhandlede forbindelser er den lethed, hvormed de udskilles af værten. Almindeligvis er der indenfor 24-72 timer efter intravenøs eller intraperitoneal indgivning kun små eller ingen de-35 tekterbare mængder i normalt muskelvæv. Op til omkring 50% af de omhandlede forbindelser genfindes i værtens fæces indenfor 24-72 timer fra injektion, medens der under 14 DK 168512 B1 ækvivalente omstændigheder bliver væsentlige mængder af de tilsvarende tetrapyrroler tilbage og op til omkring 20% peptider, dannet med aminocarboxylsyrer, tilbage. Denne egenskab er yder s t vigtig derved, at den medvirker 5 til minimering af fotosensitivering hos værten.

De omhandlede forbindelser kan anvendes til diagnose og til terapeutisk behandling af et bredt område af tumorer. Eksempler på tumorer er mavecancer, tarmcancer, lungecan-10 cer, brystcancer, livmodercancer, spiserørscancer, ovariecancer, pancreascancer, strubecancer, sarkomer, levercancer, cancer i urinblæren, cancer i overkæben, cancer i galdegangen, cancer i tungen, hjernetumor, hudcancer, malign struma, prostatacancer, cancer i spytkirtlen, Hodg-15 kins's sygdom, multipel myeloma, nyrecancer, leukæmia og malignt lymfocytoma. Til diagnose er det eneste krav, at tumoren er i stand til at fluorescere selektivt, når den udsættes for det rette lys. Til behandling må tumoren være gennemtrængelig af aktiveringsenergien. Til diagnose 20 anvendes lys af kortere bølgelængde, medens der til terapeutiske formål anvendes lys af længere bølgelængde for at muliggøre let gennemtrængning af tumorvævet. Således kan der til diagnose anvendes lys på 360-760 nm og til behandling lys på 620-760 nm, afhængigt af tetrapyrrolens 25 individuelle egenskaber. De omhandlede hidtil ukendte forbindelsers absorptionsegenskaber er i det væsentlig de samme som hos den tetrapyrrol, hvorfra de er afledt.

Det er nødvendigt, at lysstrålerne er så intense, at de 30 får forbindelserne til at udsende fluorescens til diagnose og til at udøve en celledræbende virkning til terapi.

Bestrålingskilden til fotodiagnose og fototerapi er ikke begrænset, men laserstrålen foretrækkes, fordi der selek-35 tivt kan påføres intensive lysstråler i et ønsket bølgelængdeområde. F.eks. indgives forbindelsen ifølge opfindelsen ved fotodiagnose til en menneske- eller dyrekrop, 15 DK 168512 B1 og efter et vist tidsrum påføres lysstråler på den del, som skal undersøges. Når et endoskop kan anvendes til den påvirkede del, såsom lunger, spiserør, mave, livmoder, urinblære eller rectum, bestråles den under anvendelse af 5 endoskopet, og tumorportionen udsender selektivt fluorescens. Denne portion iagttages visuelt eller iagttages igennem et tilpasset fiberskop med øjet eller på en CRT-skærm.

10 Ved fototerapien udføres bestrålingen efter indgivningen af doseringen ved hjælp af laserstråler fra spidsen af kvartsfibre. Foruden bestrålingen af tumorens overflade kan den indre del af tumoren bestråles ved indsætning af spidsen af kvartsfibrene i tumoren. Bestrålingen kan 15 iagttages visuelt eller afbildes på en CRT-skærm.

Til fotodiagnose er lys af bølgelængder mellem 360-760 nm egnet til aktivering af de omhandlede tetrapyrrolforbin-delser. Selvfølgelig har hver forbindelse en specifik op-20 timal aktiveringsbølgelængde. En langbølget ultraviolet lampe er særligt egnet til fotodiagnose. Der kan anvendes lignende metoder til betragtningen af den behandlede tumor, som allerede er beskrevet for fototerapi.

25 Doseringerne af de omhandlede hidtil ukendte forbindelser vil variere afhængigt af den ønskede virkning, hvad enten det gælder diagnose eller behandling. Til diagnose vil doser på så lidt som 1 mg/kg være effektive, og der kan anvendes op til omkring 20 mg/kg. Til behandling vil do-30 sen sædvanligvis være omkring 0,5 mg/kg. Selvfølgelig kan doseringen for enhver diagnose eller behandling varieres bredt i betragtning af de før nævnte fordelagtige egenskaber ved de omhandlede forbindelser, f.eks. den lethed, hvormed de elimineres fra værten.

De omhandlede præparater er tilsyneladende ikke-toxiske i de doseringsniveauer, der anvendes til diagnosen eller 35 16 DK 168512 B1 behandling. Der er ikke blevet bemærket nogen dødelighed af prøvedyr på grund af de omhandlede forbindelser ved undersøgelser under anvendelse af doseringsniveauer på op til 20 mg/kg.

5

Til både diagnose og behandling kan de omhandlede forbindelser indgives ad oral, intravenøs eller intramuskulær vej. De kan sammensættes som lyophiliserede sterile pyro-genfrie forbindelser, fortrinsvis i form af basesalte, 10 f.eks. natriumsalte. De fortrukne doseringsformer tilvejebringes som injicerbare opløsninger (isotoniske).

Den bestrålingskilde, som anvendes ved behandling af tumorer indeholdende forbindelser ifølge opfindelsen, er en 15 filtreret, højintensitets, kontinuert eller pumpet-farvestof- eller anden laserlyskilde, som er i stand til at arbejde indenfor de følgende grænser: strålings-strømtæt- 2 hed 20-500 mW/cm ved bølgelængder mellem 620 og 760 nm og en total udgangseffekt på mindst 500 mW eller mere.

20 Flere for tiden kommercielt tilgængelige lasere opfylder disse kriterier.

Tetrapyrrolerne kan fremstilles ved forskellige syntesemetoder, som findes i litteraturen, f.eks.

25

Pheophorbider

Willståtter, R., Stoll, A.; Investigations on Chlorophyll, (Transi. Schertz, F.M., Merz, A.R.) side 249, 30 Science Printing Press, Lancaster, Pennsylvania, 1928.

Pennington, F.C., Strain, H.H., Svec, W.A., Katz, J.J.; J. Amer. Chem. Soc., 86, 1418 (1964).

35 17 DK 168512 B1

Chlorin eg

WillstStter, R., Stoll, A.; Investigations on Chlorophyll, (Trans., Schertz, F.M., Merz, A.R.,) side 176, 5 Science Printing Press, Lancaster, Pennsylvania, 1928.

Willståtter, R., Isler, M.; Ann. Chem., 390, 269 (1912).

Fischer, H., Baumler, R.; Ann. Chem., 474, 65 (1929).

10

Fischer, H., Siebel, H.; Ann. Chem., 499, 84 (1932).

Conant, J.B., Mayer, W.W.; J. Amer. Chem. Soc., 52, 3013 (1930).

15

Chlorin

Fischer, H., Heckmaier, J., Plotz, E.; Justus Liebigs Ann. Chem., 500, 215 (1933).

20

Chlorin eg, e4, isochlorin e4, mesochlorin eg, bacterio-pheophorbid, bacteriochlorin eg 25 Fischer-Orth, "Die Chemie des Pyrrols", Akademische Verlagsgesellschaft, Leipzig, 1940, Band II, Teil 2.

Almen reference for porphyriner 30 "Porphyrins and Metalloporphyrins" ed. Kevin M. Smith, Elsevier, New York 1975.

Præparaterne ifølge opfindelsen kan indgives til værten i en række forskellige former tilpasset den valgte indgiv-35 ningsvej, dvs. oralt, intravenøst, intramuskulært eller subkutant.

18 DK 168512 B1

Præparaterne kan indgives oralt, f.eks. med et inert fortyndingsmiddel eller med en assimilerbar spiselig bærer, eller den kan indgives i gelatinekapsler med hård eller blød skal, eller den kan komprimeres til tabletter, eller 5 den kan inkorporeres direkte i føden eller diæten. Til oral terapeutisk indgivning kan den aktive forbindelse inkorporeres med excipienter og anvendes i form af ind-tagelige tabletter, sugetabletter, trokisker, kapsler eliksirer, suspensioner, sirupper, oblater og lignende.

10 Sådanne præparater bør indeholde mindst 0,1% aktiv forbindelse. Procentindholdet i præparatet kan selvfølgelig varieres og kan hensigtsmæssigt være fra omkring 2 til omkring 60 vægtprocent af enheden. Mængden af aktiv forbindelse i sådanne terapeutisk nyttige præparater er så-15 dan, at der vil blive opnået en egnet dosering. Foretrukne præparater ifølge opfindelsen fremstilles således, at en oral doseringsenheds form indeholder mellem ca. 50 og 300 mg aktiv forbindelse.

20 Tabletterne, trokiskerne, pillerne, kapslerne og lignende kan også indeholde følgende: Et bindemiddel, såsom traga-canthgummi, akaciagummi, majsstivelse eller gelatine? excipienter, såsom dicalciumphosphat; et nedbrydningsmiddel, såsom majsstivelse, kartoffelstivelse, alginsyre og 25 lignende; et glittemiddel, såsom magnesiumstearat; et sødemiddel, såsom sucrose, lactose eller saccharin; og et aromamiddel, såsom pebermynte, vintergrøntolie eller kirsebæraroma. Når doseringsenhedensformen er en kapsel, kan den foruden materialer af den ovennævnte type indeholde 30 en flydende bærer. Forskellige andre materialer kan være tilstede som overtræk eller til på anden måde at modificere doseringsenhedens fysiske form. F.eks. kan tabletter, piller eller kapsler være overtrukket med shellak, sukker eller begge dele. En sirup eller en eliksir kan 35 indeholde den aktive forbindelse, sucrose som sødemiddel, methyl- og propylparabener som konserveringsmidler, et farvestof og en aroma, såsom kirsebær- eller appelsinaro- 19 DK 168512 B1 ma. Selvfølgelig bør ethvert materiale, der anvendes til fremstilling af enhver doseringsenhedsform, være farmaceutisk rent og i det væsentlige ikke-toxisk i de anvendte mængder. Desuden kan den aktive forbindelse inkorpore-5 res i præparater og sammensætninger med forlænget afgivelse.

Præparaterne kan også indgives parenteralt eller intrape-ritonealt. Opløsninger af den aktive forbindelse som fri 10 base eller farmakologisk acceptabelt salt kan fremstilles i vand, passende blandet med et overfladeaktivt middel, såsom hydroxypropylcellulose. Dispersioner kan også fremstilles i glycerol, flydende polyethylenglycoler og blandinger deraf og i olier. Under almindelige betingelser 15 for opbevaring og brug indeholder disse præparater et konserveringsmiddel for at forhindre væksten af mikroorganismer.

De farmaceutiske former, som er egnet til injektion, 20 inkluderer sterile vandige opløsninger eller dispersioner og sterile pulvere til fremstillingen af sterile injicer-bare opløsninger eller dispersioner på stedet. I alle tilfælde må formen være steril og må være flydende i en sådan grad, at den er let at fylde på sprøjte. Den må 25 være stabil under fremstillings- og opbevaringsbetingelserne og må være konserveret mod den kontaminerende virkning af mikroorganismer, såsom bakterier og svampe. Bæreren kan være et opløsningsmiddel eller dispersionsmedium indeholdende f.eks. vand, ethanol, polyol (f.eks. glyce-30 rol, prolylenglycol og flydende polyethylenglycol), egnede blandinger deraf og vegetabilske olier. Den rette flydeevne kan f.eks. opretholdes ved anvendelse af et overtræk, såsom lecithin, ved opretholdelse af den krævede partikelstørrelse i tilfælde af dispersion og ved anven-35 delse af overfladeaktive midler. Forhindringen af virkningen af mikroorganismer kan frembringes af forskellige antibakterielle og antifungale midler, f.eks. parabener, 20 DK 168512 B1 chlorbutanol, phenol, sorbinsyre, thimerosal og lignende.

I mange tilfælde vil det være at foretrække at inkludere isotoniske midler, f.eks. sukkerstoffer eller natri-umchlorid. Forlænget absorption af de injicerbare præpa-5 rater kan frembringes ved inkorporering i præparaterne af midler, som forsinker absorption, f.eks. aluminiummono-stearat og gelatine.

Sterile injicerbare opløsninger fremstilles ved inkorpo-10 rering af den aktive forbindelse i den krævede mængde i det passende opløsningsmiddel med forskellige af de andre ingredienser, som er opregnet ovenfor, efter behov, efterfulgt af sterilfiltrering. Almindeligvis fremstilles dispersioner ved inkorporering af den på forskellig vis 15 steriliserede aktive ingrediens i et sterilt medium, som indeholder grunddispersionsmediet og de krævede andre ingredienser blandt de ovenfor opregnede. I tilfælde af sterile pulvere til fremstilling af injicerbare opløsninger, er de foretrukne fremstillingsmetoder vakuumtør-20 rings- og frysetørringsteknik, som giver et pulver af den aktive ingrediens plus enhver yderligere ønsket ingrediens ud fra en i forvejen sterilfiltreret opløsning deraf.

De omhandlede hidtil ukendte præparater kan også påføres 25 direkte på tumorer hos værten, hvad enten det er internt eller eksternt, i topiske præparater. Eksempler på sådanne præparater inkluderer opløsninger af de hidtil ukendte forbindelser i opløsningsmidler, især vandige opløsningsmidler, og fortrinsvis vand. Alternativt kan de omhandle-30 de hidtil ukendte forbindelser til topisk anvendelse, især på hudtumorer, dispergeres i de sædvanlige cremeeller salvepræparater, som almindeligvis anvendes til dette formål, eller de kan tilvejebringes i form af sprøjteopløsninger eller suspensioner, som kan inkludere 35 et drivmiddel, der sædvanligvis anvendes i aerosolpræparater .

DK 168512 B1 21 I denne beskrivelse med krav inkluderer betegnelsen "farmaceutisk acceptabel bærer" alle opløsningsmidler, dispersionsmedier, overtræk, antibakterielle og antifungale midler, isotoniske og absorptionsforsinkende midler og 5 lignende. Anvendelsen af sådanne medier og midler i forbindelse med farmaceutisk aktive stoffer er velkendt indenfor faget. Med undtagelse af det tilfælde, hvor et eller andet konventionelt middel er uforeneligt med den aktive ingrediens, er dets anvendelse i de terapeutiske 10 præparater forudsat ifølge opfindelsen. Supplerende aktive ingredienser kan også inkorporeres i præparaterne.

Det er særligt fordelagtigt at sammensætte parenterale præparater i doseringsenhedsform med henblik på let ind-15 givning og ensartet dosering. "Doseringsenhedsform" anvendes i denne beskrivelse med krav om fysisk adskilte enheder, som er egnede som enhedsdoseringer for de pattedyrindivider, som skal behandles, idet hver enhed indeholder en forud fastsat mængde aktivt materiale udregnet 20 til at bringe den ønskede terapeutiske virkning i forbindelse med den nødvendige farmaceutiske bærer. Specifikationen for de hidtil ukendte doseringsformer ifølge opfindelsen er dikteret af og direkte afhængig af (a) det aktive materiales enestående egenskaber og den bestemte 25 terapeutiske virkning, som skal opnås, og (b) de faget iboende begrænsninger for sammensætningen af et sådant aktivt materiale til behandlingen af tumorer i levende individer.

30 De følgende eksempler tjener til nærmere belysning af opfindelsen.

35 22 DK 168512 B1

Mono-, di- og triamider;

Eksempel 1 5 Di-og mono-(DL)-serinyl-mesoporphyrin IX (blandet-anhy-drid-metoden) 400 mg (0,0007 mol) mesoporphyrin IX blev suspenderet i 50 ml tetrahydrofuran (THF). Der tilsattes 360 ul (0,0035 10 mol) triethylamin under omrøring. Efter 10 minutter tilsattes 340 nl (0,0031 mol) ethylchlorformiat. Efter omrøring i 10 minutter sattes 10 ml (0,01 mol) 1M KOH-opløs-ning indeholdende 761 mg (0,0072 mol) DL-serin til THF-opløsningen. Denne blanding blev omrørt i 60 minutter ved 15 stuetemperatur.

Det organiske opløsningsmiddel blev afdampet, og reaktionsblandingen blev kontrolleret for produkt ved silica-gel-TLC. Benzen/methanol/88% myresyre (8,5:1,5:0,13) blev 20 anvendt til at udvikle chromatogrammet.

Efter kontrollen for produkt blev opløsningen indstillet til pH 7,5-8,0 og anbragt på en revers-fase-(C^g-silica-gel) kolonne på 2,5 x 30 cm. Reaktionsblandingen blev ad-25 skilt under anvendelse af en lineær gradient på 20-70% methanol i 0,01M kaliumphosphatpuffer pH 6,85 (totalvolumen 1 1).

Søjleafløbet blev opsamlet ved hjælp af en fraktionsop-30 samler, og glassenes indhold blev hældt sammen efter de individuelle komponenter. Elueringsrækkefølgen var di-DL-serinyl-mesoporphyrin IX, mono-DL-serinyl-mesoporphyrin IX og usubstitueret mesoporphyrin IX.

35 Methanolet blev afdampet, og materialet blev udfældet ved pH 2,5-3,0. Bundfaldet blev vasket tre gange med fortyn det eddikesyre i vand. Produktet blev tørret under va- 23 DK 168512 B1 kuum. Udbyttet af di-(DL)-serinyl-mesoporphyrin IX var 95,6 mg.

Eksempel 2 5

Di- og monoglycyl-mesoporphyrin IX (blandet-anhydrld-me-toden) 100 mg (0,000175 mol) mesoporphyrin IX blev suspenderet i 10 100 ml tetrahydrofuran (THF). Der tilsattes 360 μΐ (0,0035 mol) triethylamin under omrøring. Efter 10 minutter tilsattes 340 ul (0,0031 mol) ethylchlorformiat. Efter omrøring i 10 minutter sattes 10 ml (0,01 mol) 1M KOH-opløsning indeholdende 500 mg (0,0066 mol) glycin til 15 THF-opløsningen. Denne blanding blev omrørt i 60 minutter ved stuetemperatur.

Det organiske opløsningsmidel blev afdampet, og reaktionsblandingen blev kontrolleret for produkt ved silica-20 gel-TLC. Benzen/methanol/88% myresyre (8,5:1,5:0,13) blev anvendt til at udvikle chromatogrammet.

Efter kontrollen for produkt blev opløsningen indstillet til pH 7,5-8,0 og anbragt på en revers-fase-(C^g-silica-25 gel) kolonne på 2,5 x 30 cm. Reaktionsblandingen blev adskilt under anvendelse af en lineær gradient fra 0 til 50% methanol i 0,01M kaliumphosphatpuffere pH 6,85 (totalvolumen 1 1).

30 Søjleafløbet blev opsamlet i en fraktionsopsamler, og fraktionerne blev sorteret efter individuelle komponenter. Elueringsrækkefølgen var diglycyl-mesoporphyrin IX, monoglycyl-mesoporphyrin IX og usubstitueret mesoporphyrin IX.

Methanolet blev afdampet, og materialet blev udfældet ved pH 2,5-3,0. Bundfaldet blev vasket tre gange med fortyn- 35 24 DK 168512 B1 det eddikesyre i vand. Produktet blev tørret under vakuum.

Eksempel 3 5

Di- og mono-g-(DL)-alanyl-mesoporphyrin IX (blandet-anhy-drid-metoden) 100 mg (0,000175 mol) mesoporphyrin IX blev suspenderet i 10 100 ml tetrahydrofuran (THF). Der tilsattes 210 ul (0,002 mol) triethylamin under omrøring. Efter 10 minutter tilsattes 195 fil (0,00177 mol) ethylchlorformiat. Efter omrøring i 10 minutter sattes 10 ml (0,01 mol) 1M KOH-op-løsning indeholdende 500 mg (0,0056 mol) a-(DL)-alanin 15 til THF-opløsningen. Denne blanding blev omrørt i 60 minutter ved stuetemperatur.

Det organiske opløsningsmiddel blev afdampet, og reaktionsblandingen blev kontrolleret for produkt ved silica-20 gel-TLC. Benzen/methanol/88% myresyre (8,5:1,5:0,13) blev anvendt til at udvikle chromatogrammet.

Efter kontrollen for produkt blev opløsningen indstillet til pH 7,5-8,0 og anbragt på en revers-fase-(Cl8-silica-25 gel) kolonne på 2,5 x 30 cm. Reaktionsblandingen blev adskilt under anvendelse af en lineær gradient på 20-70% methanol i 0,01M kaliumphosphatpuffer pH 6,85 (totalvolumen 1 1).

30 Søjleafløbet blev opsamlet via en fraktionsopsamler, og glassenes indhold blev sorteret efter de individuelle komponenter. Elueringsrækkefølgen var di-a-(DL)-alanyl-mesoporphyrin IX, mono-a-(DL)-alanyl-mesoporphyrin IX og usubstitueret mesoporphyrin IX.

35

Methanolet blev afdampet, og materialet blev udfældet ved pH 2,5-3,0. Bundfaldet blev vasket tre gange med fortyn- 25 DK 168512 B1 det eddikesyre i vand. Produktet blev tørret under vakuum.

Eksempel 4 5

Di- og mono-fl-alanyl-mesoporphyrin IX (blandet-anhydrid-metoden) 400 mg (0,0007 mol) mesoporphyrin IX blev suspenderet i 10 100 ml tetrahydrofuran (THF). Der tilsattes 360 al (0,0035 mol) triethylamin under omrøring. Efter 10 minutter tilsattes 340 al (0,0031 mol) ethylchlorformiat. Efter omrøring i 10 minutter sattes 10 ml (0,01 mol) 1M KOH-opløsning indeholdende 400 mg (0,0044 mol) Ø-alanin 15 til THF-opløsningen. Denne blanding blev omrørt i 60 minutter ved stuetemperatur.

Det organiske opløsningsmiddel blev afdampet, og reaktionsblandingen blev kontrolleret for produkt ved silica-20 gel-TLC. Benzen/methanol/88% myresyre (8,5:1,5:0,13) blev anvendt til at udviklet chromatogrammet.

Efter kontrol for produkt blev opløsningen indstillet til pH 7,5-8,0 og anbragt på en revers-fase-(C^g-silicagel) 25 kolonne på 2,5 x 30 cm. Reaktionsblandingen blev adskilt under anvendelse af en lineær gradient på 40-80% methanol i 0,01M kaliumphosphatpuffer pH 6,85 (totalvolumen 1 1).

Søjleafløbet blev opsamlet ved hjælp af en fraktionsop-30 samler, og glassenes indhold blev hældt sammen efter de individuelle komponenter. Elueringsrækkefølgen var di-Ø-alanyl-mesoporphyrin IX, mono-Ø-alanyl-mesoporphyrin IX og usubstitueret mesoporphyrin IX.

35 Methanolet blev afdampet, og materialet blev udfældet ved pH 2,5-3,0. Bundfaldet blev vasket tre gange med fortyn det eddikesyre i vand. Produktet blev tørret under va- 26 DK 168512 B1 kuum. Udbyttet af di - 0 - al any 1 -mesoporphyrin IX var 40 rag; udbyttet af mono-Æ-alanyl-mesoporphyrin IX var 23 mg.

Eksempel 5 5

Di- og raono-e-amino-n-caproyl-mesoporphyrin IX (blandet-anhydrid-metoden) 400 mg (0,0007 mol) mesoporphyrin IX blev suspenderet i 10 50 ml tetrahydrofuran (THF). Der tilsattes 360 ul (0,0035 mol) triethylamin under omrøring. Efter 10 minutter tilsattes 340 ul (0,0031 mol) ethylchlorformiat. Efter omrøring i 10 minutter sattes 10 ml (0,01 mol) 1M KOH-opløs-ning indeholdende 543 mg (0,00414 mol) e-amino-n-capron-15 syre til THF-opløsningen. Denne blanding blev omrørt i 60 minutter ved stuetemperatur.

Det organiske opløsningsmiddel blev afdampet, og reaktionsblandingen blev kontrolleret for produkt ved silica-20 gel-TLC. Benzen/methanol/88% myresyre (8,5:1,5:0,13) blev anvendt til at udvikle chromatogrammet.

Efter kontrol for produkt blev opløsningen indstillet til pH 7,5-8,0 og anbragt på en revers-fase-(C^-silicagel) 25 kolonne på 2,5 x 30 cm. Reaktionsblandingen blev adskilt under anvendelse af en lineær gradient på 20-70% methanol i 0,01M kaliumphosphatpuffer pH 6,85 (totalvolumen 1 1).

Søjleafløbet blev opsamlet ved hjælp af en fraktionsop-30 samler, og glassenes indhold blev hældt sammen efter de individuelle komponenter. Elueringsrækkefølgen var di-e-amino-n-caproyl-mesoporphyrin IX, mono-e-amino-n-caproyl-mesoporphyrin IX og usubstitueret mesoporphyrin IX.

35 Methanolet blev afdampet, og materialet blev udfældet ved pH 2,5-3,0. Bundfaldet blev vasket tre gange med fortyn det eddikesyre i vand. Produktet blev tørret under va- 27 DK 168512 B1 kuum. Udbyttet af di-e-amino-n-caproyl-mesoporphyrin IX var 237 mg.

Eksempel 6 5

Di- og mono-g-alanyl-hematoporphyrin IX (blandet-anhy-drid-metoden) 400 mg (0,00059 mol) hematoporphyrin IX dihydrochlorid 10 blev suspenderet i 50 ml tetrahydrofuran (THF). Der tilsattes 360 ul (0,0035 mol) triethylamin under omrøring. Efter 10 minutter tilsattes 340 ul (0,0031 mol) ethyl-chlorformiat. Efter omrøring i 10 minutter sattes 10 ml (0,01 mol) 1M KOH-opløsning indeholdende 400 mg (0,0044 15 mol) Ø-alanin til THF-opløsningen. Denne blanding blev omrørt i 60 minutter ved stuetemperatur.

Det organiske opløsningsmiddel blev fjernet ved lynafdampning, medens temperaturen blev holdt under 50 °C.

20 Reaktionsblandingen blev undersøgt for produkt ved sili-cagel-TLC under anvendelse af benzen/methanol/88% myresyre (8,5:1,5:0,13) som opløsningsmiddel til udvikling af chromatogrammet.

25 Opløsningen blev indstillet til pH 7,5-8,0 med HC1 og anbragt på en recvers-fase- (C18 -silicagel) kolonne på 2,5 x 30 cm. Blandingen blev adskilt under anvendelse af en lineær gradient på 40-80% methanol i 0,01M kaliumphosphat-puffer pH 6,85 (totalvolumen 1 1). De individuelle kompo-30 nenter blev opsamlet, efterhånden som de kom ud fra kolonnen i rækkefølgen di-Ø-alanyl-hematoporphyrin IX, mono- 0-alanyl-hematoporphyrin IX og hematoporphyrin IX.

Methanolet blev fjernet fra hver komponent ved lynafdamp-35 ning, og materialet blev udfældet ved indstilling af pH-værdien til 2,5-3,0 med HC1. Bundfaldet blev vasket tre gange med fortyndet eddikesyre i vand på centrifugen, og 28 DK 168512 B1 produkterne blev tørret under vakuum. Udbyttet af di-Ø-alanyl-hematoporphyrin IX var 52 mg, og udbyttet af mono-/5-alanyl-hematoporphyrin var 30 mg.

5 Eksempel 7

Di-L-a-serinyl-chlorin e^ (blandet-anhydrid-metoden) 650 mg chlorin eg blev opløst i 30 ml dimethyl formamid 10 (DM). Der sattes 277 μΐ (0,002 mol) triethylamin til DMF- opløsningen. Efter omrøring i 5 minutter til sattes 201 ul (0,002 mol) ethylchlorformiat, og omrøringen fortsattes i yderligere 30 minutter. Derpå sattes 0,95 g (0,009 mol) L-a-serin til DMF-opløsningen, og denne blev omrørt 15 i en time ved 50-60 °C.

DMF-opløsningen blev kontrolleret for dannelse af produkt ved revers-fase-(C^g-silicagel) TLC under anvendelse af methanol/0,01 M natriumphosphatpuffer, pH 6,85 (i volu-20 menforholdet 7,0:3,0) til at udvikle chromatogrammet. DMF-opløsningen blev lyninddampet til nærved tørhed, og reaktionsblandingen blev derpå optaget i fortyndet NaOH-opløsning, og pH-værdien indstillet til 2,5-3,0 for at udfælde blandingen. Bundfaldet blev derpå centrifugeret 25 ned og vasket 2 gange med fortyndet eddikesyre i vand. Bundfaldet blev derpå genopløst i fortyndet NaOH-opløs-ning, og pH-værdien indstillet til 7,0. Denne opløsning sattes på en revers-fase-(C^-silicagel) kolonne på 3,7 cm x 45 cm.

30

Produktet blev elueret fra kolonnen med en blanding af 0,1 M natriumphosphatpuffer (pH 6,85) og methanol i volumenforholdet 7,0:3,0. Der blev opsamlet fraktioner, og fraktionerne af rent di-a-serinyl-chlorin eg blev hældt 35 sammen. Methanolet blev lynafdampet og produktet blev udfældet ved pH 2,5-3,0. Bundfaldet blev centrifugeret ned og vasket tre gange med fortyndet eddikesyre og tørres 29 DK 168512 B1 under vakuum. Udbyttet var 200 mg di-L-a-serinyl-chlorin e6*

Under anvendelse af de førnævnte carbodlimid- eller blan-5 det-anhydrid-metoder kan der syntetiseres følgende foretrukne forbindelser ifølge opfindelsen: 10 15 20 25 30 35 30 DK 168512 B1

Chlorinderivater

Di - (DL)-serinyl-trans-mesochlorin IX Di - glycyl-trans-mesochlorin IX 5 Di - a-(DL)-alanyl-trans-mesochlorin IX Di - Ø-alanyl-trans-mesochlorin IX Di - e-amino-n-caproyl-mesochlorin IX

Di, tri-(D,L)-serinyl chlorin 10 Di, tri-(D,L)-serinyl mesochlorin

Di, tri-glycyl chlorin Di, tri-glycyl mesochlorin e^

Di, tri-«t-(D,L)-alanyl chlorin

Di, tri-a-(D,L)-alanyl mesochlorin e^ 15 Di, tri-Ø-alanyl chlorin

Di, tri-Ø-alanyl mesochlorin e^

Di, tri-e-amino-n-caproyl chlorin e^

Di, tri-e-amino-n-caproyl mesochlorin e^ 20 Di- (D,L)-serinyl chlorin e^

Di- (D,L)-serinyl mesochlorin e^

Di- (D,L)-serinyl isochlorin e^

Di- (D,L)-serinyl mesoisochlorin e4 Di- glycyl chlorin 25 Di- glycyl mesochlorin e^

Di- glycyl isochlorin e^

Di- glycyl mesoisochlorin Di-o-(DL)-alanyl chlorin e^

Di-o-(DL)-alanyl mesochlorin e^ 30 Di-a-(DL)-alanyl isochlorin e^

Di-a-(DL)-alanyl mesoisochlorin e^

Di-Ø-alanyl chlorin e^

Di-Ø-alanyl mesochlorin Di-Ø-alanyl isochlorin e^ 35 Di-Ø-alanyl mesoisochlorin e^

Di-e-amino-n-caproyl chlorin e^

Di-e-amino-n-caproyl mesochlorin e^ 31 DK 168512 B1

Di-e-amino-n-caproyl isochlorin Di-e-amino-n-caproyl mesoisochlorin

Di- (D, L)-serinylphotoprotoporphyrin IX 5 Di- glycylphotoprotoporphyrin IX

Di-α-(D, L)-alanylphotoprotoporphyrin IX

Di-0-alanylphotoprotoporphyrin IX

Di-e-amino-n-caproylphotoprotoporphyrin IX

10 Porphyrin Derivater

Di- (D, L)-serinylmesoporphyrin IX Di- glycylmesoporphyrin IX Di-a-(DL)-alanylmesoporphyrin IX 15 Di-Ø-alanylmesoporphyrin IX

Di-e-amino-n-caproylmesoporphyrin IX Di- (D,L)-serinylprotoporphyrin IX Di-glycylprotoporphyrin IX Di-a-(D,L)-alanylprotoporphyrin IX 20 Di-0-alanylprotoporphyrin IX

Di-e-amino-n-caproylprotoporphyrin IX

Di-(D,L)-serinyldeuteroporphyrin IX Di-glycyldeuteroporphyrin IX 25 Di-a-(D,L)-alanyldeuteroporphyrin IX

Di-Ø-alanyldeuteroporphyrin IX Di-a-amino-n-caproyldeuteroporphyrin IX

Di, tri, tetra- (D,L)-serinylcoproporphyrin III 30 Di, tri, tetra- glycylcoproporphyrin III

Di, tri, tetra-a-(D,L)-alanylcoproporphyrin III

Di, tri, tetra-Ø-alanylcoproporphyrin III

Di, tri, tetra-6-amino-n-caproylcoproporphyrin III

35 Di-(D,L)-serinylhematoporphyrin IX

Di-glycylhematoporphyrin IX Di-a-(D,L)-alanylhematoporphyrin IX

32 DK 168512 B1

Di-Ø-alanylhematoporphyrin IX

Di-e-amino-n-caproylhematoporphyrin IX

Bacteriochlorin Derivater 5

Di-(D, L)-serinylbacteriochlorin Di-glycylbacteriochlorin Di-a-(D,L)-alanylbacteriochlorin Di-Æ-alanylbacteriochlorin 10 Di-e-amino-n-caproylbacteriochlorin

Di-(D,L)-serinylbacterioisochlorin e^ Di-glycylbacterioisochlorin e^

Di-a-(D,L)-alanylbacterioisochlorin 15 Di-Æ-alanylbacterioisochlorin

Di-e-amino-n-caproylbacterioisochlorin e4

Di, tri- (D,L)-serinylbacteriochlorin eg Di, tri- glycylbacteriochlorin eg 20 Di, tri-a-(D,L)-alanylbacteriochlorin eg

Di, tri-&-alanylbacteriochlorin eg Di, tri-e-amino-n-caproylbacteriochlorin eg På lignende måde kan der ved anvendelse af andre 25 aminosyrer fremstilles peptider, som yderligere belyser udførelsesformer af den foreliggende opfindelse:

Di-Threoninyl trans-mesochlorin IX Di,tri-Threoninyl chlorin eg 30 Di,tri-Threoninyl mesochlorin eg

Di-Threoninyl chlorin e^

Di-Threoninyl mesochlorin e^

Di-Threoninyl isochlorin e^

Di-Threoninyl mesoisochlorin e^

35 Di-Threoninyl photoprotoporphyrin IX

Di-Threoninyl mesoporphyrin IX Di-Threoninyl protoporphyrin IX

33 DK 168512 B1

Di-Threoninyl deuteroporphyrin IX Di,tri,tetra-Threoninyl coproporphyrin III Di-Threoninyl hematoporphyrin IX Di-Threoninyl bacteriochlorin e^ 5 Di-Threoninyl bacterioisochlorin e^

Di-Threoninyl bacteriochlorin e^

Di-Cysteinyl trans-mesochlorin IX Di,tri-Cysteinyl chlorin eg 10 Di,tri-Cysteinyl mesochlorin eg

Di-Cysteinyl chlorin e^

Di-Cysteinyl isochlorin e^

Di-Cysteinyl mesoisochlorin e^

Di-Cysteinyl photoprotoporphyrin IX 15 Di-Cysteinyl mesoporphyrin IX

Di-Cysteinyl protoporphyrin IX Di-Cysteinyl deuteroporphyrin IX Di,tri,tetra-Cysteinyl-coproporphyrin III Di-Cysteinyl hematoporphyrin IX 20 Di-Cysteinyl bacteriochlorin e^

Di-Cysteinyl bacterioisochlorin e^

Di,tri-Cysteinyl bacteriochlorin eg Di-Tyrosyl trans-mesochlorin IX Di,tri-Tyrosyl chlorin eg 25 Di,tri-Tyrosyl mesochlorin eg

Di-Tyrosyl chlorin e^

Di-Tyrosyl mesochlorin e4 Di-Tyrosyl isochlorin e^

Di-Tyrosyl mesoisochlorin e^

30 Di-Tyrosyl photoprotoporphyrin IX

Di-Tyrosyl mesoporphyrin IX Di-Tyrosyl protoporphyrin IX Di-Tyrosyl deuteroporphyrin IX Di,tri,tetra-Tyrosyl coproporphyrin III 35 Di-Tyrosyl hematoporphyrin IX

Di-Tyrosyl bacteriochlorin e^

Di-Tyrosyl bacterioisochlorin e^ 34 DK 168512 B1

Di,tri-Tyrosyl bacteriochlorin

Di-Valyl trans-mesochlorin IX Di,tri-Valyl chlorin 5 Di,tri-Valyl mesochlorin Di-Valyl chlorin e4 Di-Valyl mesochlorin e4 Di-Valyl isochlorin e4 Di-Valyl mesoisochlorin e4 10 Di-Valyl photoprotoporphyrin IX

Di-Valyl mesoporphyrin IX Di-Valyl protoporphyrin IX Di-Valyl deuteroporphyrin IX Di,tri,tetra-Valyl coproporphyrin III 15 Di-Valyl hematoporphyrin IX

Di-Valyl bacteriochlorin e4 Di-Valyl bacterioisochlorin e4 Di,tri-Valyl bacteriochlorin e^

20 Di-Leucyl trans-mesochlorin IX

Di,tri-Leucyl chlorin e^

Di,tri-Leucyl mesochlorin e^

Di-Leucyl chlorin e4 Di-Leucyl mesochlorin e4 25 Di-Leucyl isochlorin e4

Di-Leucyl mesoisochlorin e4 Di-Leucyl photoprotoporphyrin IX Di-Leucyl mesoporphyrin IX Di-Leucyl protoporphyrin IX 30 Di-Leucyl deuteroporphyrin IX

Di,tri,tetra-Leucyl coproporphyrin III Di-Leucyl hematoporphyrin IX Di-Leucyl bacteriochlorin e4 Di-Leucyl bacterioisochlorin e4 35 Di,tri-Leucyl bacteriochlorin e^ 35 DK 168512 B1

Di-Isoleucyl trans-mesochlorin IX Di,tri-Isoleucyl chlorin e^

Di,tri-Isoleucyl mesochlorin Di-Isoleucyl chlorin e^ 5 Di-Isoleucyl mesochlorin e^

Di-Isoleucyl isochlorin e^

Di-Isoleucyl mesoisochlorin e^

Di-Isoleucyl photoprotoporphyrin IX Di-Isoleucyl mesoporphyrin IX 10 Di-Isoleucyl protoporphyrin IX

Di-Isoleucyl deuteroporphyrin IX Di,tri,tetra-Isoleucyl coproporphyrin III Di-Isoleucyl hematoporphyrin IX Di-Isoleucyl bacteriochlorin e^ 15 Di-Isoleucyl bacterioisochlorin e^

Di,tri-Isoleucyl bacteriochlorin eg

Di-Prolyl trans-mesochlorin IX Di,tri-Prolyl chlorin e^ 20 Di,tri-Prolyl mesochlorin e^

Di-Prolyl chlorin e^

Di-Prolyl mesochlorin e4 Di-Prolyl isochlorin e^

Di-Prolyl mesoisochlorin e^

25 Di-Prolyl photoprotoporphyrin IX

Di-Prolyl mesoporphyrin IX Di-Prolyl protoporphyrin IX Di-Prolyl deuteroporphyrin IX Di,tri,tetra-Prolyl coproporphyrin III 30 Di-Prolyl hematoporphyrin IX

Di-Prolyl bacteriochlorin e^

Di-Prolyl bacterioisochlorin e^

Di,tri-Prolyl bacteriochlorin e^

35 Di-Phenylalanyl trans-mesochlorin IX

Di,tri-Phenylalanyl chlorin e^

Di,tri-Phenylalanyl mesochlorin 36 DK 168512 B1

Di-Phenylalanyl chlorin e^

Di-Phenylalanyl mesochlorin Di-Phenylalanyl isochlorin e4 Di-Phenylalanyl mesoisochlorin e^

5 Di-Phenylalanyl photoprotoporphyrin IX Di-Phenylalanyl mesoporphyrin IX Di-Phenylalanyl protoporphyrin IX Di-Phenylalanyl deuteroporphyrin IX Di,tri,tetra-Phenylalanyl coproporphyrin IX 10 Di-Phenylalanyl hematoporphyrin IX

Di-Phenylalanyl bacteriochlorin Di-Phenylalanyl bacterioisochlorin e^

Di,tri-Phenylalanyl bacteriochlorin eg

15 Di-Tryptophyl trans-mesochlorin IX

Di,tri-Tryptophyl chlorin eg Di,tri-Tryptophyl mesochlorin eg Di-Tryptophyl chlorin e^

Di-Tryptophyl mesochlorin e^ 20 Di-Tryptophyl isochlorin e^

Di-Tryptophyl mesoisochlorin e^

Di-Tryptophyl photoprotoporphyrin IX Di-Tryptophyl mesoporphyrin IX Di-Tryptophyl protoporphyrin IX 25 Di-Tryptophyl deuteroporphyrin IX

Di,tri,tetra-Tryptophyl coproporphyrin III Di-Tryptophyl hematoporphyrin IX Di-Tryptophyl bacteriochlorin e^

Di-Tryptophyl bacterioisochlorin e^ 30 Di,tri-Tryptophyl bacteriochlorin eg

Di-Methionyl trans-mesochlorin IX Di,tri-Methionyl chlorin eg Di,tri-Methionyl mesochlorin eg 35 Di-Methionyl chlorin e^

Di-Methionyl mesochlorin e^

Di-Methionyl isochlorin e^ 37 DK 168512 B1

Di-Methionyl mesoisochlorin Di-Methionyl photoprotoporphyrin IX Di-Methionyl mesoporphyrin IX Di-Methionyl protoporphyrin IX 5 Di-Methionyl deuteroporphyrin IX

Di,tri,tetra-Methionyl coproporphyrin III Di-Methionyl hematoporphyrin IX Di-Methionyl bacteriochlorin e^

Di-Methionyl bacterioisochlorin e^ 10 Di,tri-Methionyl bacteriochlorin e^

Di-Histidyl trans-mesochlorin IX Di,tri-Histidyl chlorin eg Di,tri-Histidyl mesochlorin eg 15 Di-Histidyl chlorin e^

Di-Histidyl mesochlorin e^

Di-Histidyl isochlorin e^

Di-Histidyl mesoisochlorin e^

Di-Histidyl photoprotoporphyrin IX 20 Di-Histidyl mesoporphyrin IX

Di-Histidyl protoporphyrin IX Di-Histidyl deuteroporphyrin IX Di,tri,tetra-Histidyl coproporphyrin III Di-Histidyl hematoporphyrin IX 25 Di-Histidyl bacteriochlorin e^

Di-Histidyl bacterioisochlorin e^

Di,tri-Histidyl bacteriochlorin eg

Di-Arginyl trans-mesochlorin IX 30 Di,tri-Arginyl chlorin eg

Di,tri-Arginyl mesochlorin eg Di-Arginyl chlorin e^

Di-Arginyl mesochlorin Di-Arginyl isochlorin e4 35 Di-Arginyl mesoisochlorin e^

Di-Arginyl photoprotoporphyrin IX Di-Arginyl mesoporphyrin IX

38 DK 168512 B1

Di-Arginyl protoporphyrin IX Di-Arginy1 deuteroporphyrin IX Di,tri,tetra-Arginyl coproporphyrin III Di-Arginyl hematoporphyrin IX 5 Di-Arginyl bacteriochlorin e^

Di-Arginyl bacterioisochlorin Di,tri-Arginyl bacteriochlorin

Di-Lysyl trans-mesochlorin IX 10 Di,tri-Lysyl chlorin

Di,tri-Lysyl mesochlorin e^

Di-Lysyl chlorin Di-Lysyl mesochlorin e4 Di-Lysyl isochlorin 15 Di-Lysyl mesoisochlorin e^

Di-Lysyl photoprotoporphyrin IX Di-Lysyl mesoporphyrin IX Di-Lysyl protoporphyrin IX Di-Lysyl deuteroporphyrin IX 20 Di,tri,tetra-Lysyl coproporphyrin III

Di-Lysyl hematoporphyrin IX Di-Lysyl bacteriochlorin e^

Di-Lysyl bacterioisochlorin e^

Di,tri-Lysyl bacteriochlorin e^ 25

Di-Glutaminyl trans-mesochlorin IX Di-tri-Glutaminyl chlorin e^

Di-tri-Glutaminyl mesochlorin e^

Di-Glutaminyl chlorin e^ 30 Di-Glutaminyl mesochlorin e^

Di-Glutaminyl isochlorin e^

Di-Glutaminyl mesoisochlorin e^

Di-Glutaminyl photoprotoporphyrin IX Di-Glutaminyl mesoporphyrin IX 35 Di-Glutaminyl protoporphyrin IX

Di-Glutaminyl deuteroporphyrin IX

Di,tri,tetra-Glutaminyl coproporphyrin III

39 DK 168512 B1

Di-Glutaminyl hematoporphyrin IX Di-Glutaminyl bacteriochlorin e^

Di-Glutaminyl bacterioisochlorin e^

Di,tri-Glutaminyl bacteriochlorin eg 5

Di-Asparginyl trans-mesochlorin IX Di,tri-Asparginyl chlorin eg Di,tri-Asparginyl mesochlorin eg Di-Asparginyl chlorin e^ 10 Di-Asparginyl mesochlorin e^

Di-Asparginyl isochlorin e^

Di-Asparginyl mesoisochlorin e^

Di-Asparginyl photoprotoporphyrin IX Di-Asparginyl mesoporphyrin IX 15 Di-Asparginyl protoporphyrin IX

Di-Asparginyl deuteroporphyrin IX Di,tri,tetra-Asparginyl coproporphyrin III Di-Asparginyl hematoporphyrin IX Di-Asparginyl bacteriochlorin 20 Di-Asparginyl bacterioisochlorin e4

Di,tri-Asparginyl bacteriochlorin eg 25 30 35 5 Mono-(DL)-serinyl-mesoporphyrin IX (blandet -anhydrid-me toden ) 40 DK 168512 B1

Monoamider Eksempel 8 400 mg (0,0007 mol) mesoporphyrin IX blev suspenderet i 50 ml tetrahydrofuran (THF). Der tilsattes 360 ul (0,0035 10 mol) triethylamin under omrøring. Efter 10 minutter tilsattes 340 til (0,0031 mol) ethylchlorformiat. Efter omrøring i 10 minutter sattes 10 ml (0,01 mol) 1M KOH-opløs-ning indeholdende 761 mg (0,0072 mol) DL-serin til THF-opløsningen. Denne blanding blev omrørt i 60 minutter ved 15 stuetemperatur.

Det organiske opløsningsmiddel blev afdampet, og reaktionsblandingen blev kontrolleret for produkt ved silica-gel-TLC. Benzen/methanol/88% myresyre (8,5:1,5:0,13) blev 20 anvendt til at udvikle chromatogrammet.

Efter kontrollen for produkt blev opløsningen indstillet til pH 7,5-8,0 og anbragt på en revers-fase-fC^g-silica-gel) kolonne på 2,5 x 30 cm. Reaktionsblandingen blev ad-25 skilt under anvendelse af en lineær gradient på 20-70% methanol i 0,01M kaliumphosphatpuffer pH 6,85 (totalvolumen 1 1).

Kolonneafløbet blev opsamlet ved hjælp af en fraktionsop-30 samler, og glassenes indhold blev hældt sammen efter de individuelle komponenter. Elueringsrækkefølgen var di-se-rinyl-mesoporphyrin IX, mono-serinyl-mesoporphyrin IX og usubstitueret mesoporphyrin IX.

35 Methanolet blev lynafdampet, og materialet blev udfældet ved pH 2,5-3,0. Bundfaldet blev vasket tre gange med fortyndet eddikesyre i vand. Produktet blev tørret under va-

Eksempel 9 41 DK 168512 B1 kuum.

5 Monoglycyl-mesoporphyrin IX (blandet-anhydrid-metoden) 100 mg (0,000175 mol) mesoporphyrin IX blev suspenderet i 100 ml tetrahydrofuran (THF). Der tilsattes 360 ul (0,0035 mol) triethylamin under omrøring. Efter 10 minut-10 ter tilsattes 340 μΐ (0,0031 mol) ethylchlorformiat. Efter omrøring i 10 minutter sattes 10 ml (0,01 mol) 1M KOH-opløsning indeholdende 500 mg (0,0066 mol) glycin til THF-opløsningen. Denne blanding blev omrørt i 60 minutter ved stuetemperatur.

15

Det organiske opløsningsmiddel blev lynafdampet, og reaktionsblandingen blev kontrolleret for produkt ved silica-gel-TLC. Benzen/methanol/88% myresyre (8,5:1,5:0,13) blev anvendt til at udvikle chromatogrammet.

20

Efter kontrollen for produkt blev opløsningen indstillet til pH 7,5-8,0 og anbragt på en revers-fase-(Clg-silica-gel) kolonne på 2,5 x 30 cm. Reaktionsblandingen blev adskilt under anvendelse af en lineær gradient fra 0 til 25 50% methanol i 0,01M kaliumphosphatpuffer pH 6,85 (total volumen 1 1).

Kolonneafløbet blev opsamlet i en fraktionsopsamler, og glassenes indhold blev sorteret efter de individuelle 30 komponenter. Elueringsrækkefølgen var diglycyl-mesoporphyrin IX, monoglycyl-mesoporphyrin IX og usubstitueret mesoporphyrin IX.

Methanolet blev lynafdampet, og materialet blev udfældet 35 ved pH 2,5-3,0. Bundfaldet blev vasket tre gange med fortyndet eddikesyre i vand. Produktet blev tørret under vakuum.

5

Mono-a-(DL)-alanyl-mesoporphyrin IX (blandet-anhydrid-me- toden) 42

Eksempel 10 DK 168512 B1 100 mg (0,000175 mol) mesoporphyrin IX blev suspenderet i 100 ml tetrahydrofuran (THF). Der tilsattes 210 nl (0,002 mol) triethylamin under omrøring. Efter 10 minutter tilsattes 195 μΐ (0,00177 mol) ethylchlorformiat. Efter om-10 røring i 10 minutter sattes 10 ml (0,01 mol) 1M KOH-op-løsning indeholdende 500 mg (0,0056 mol) a-(DL)-alanin til THF-opløsningen. Denne blanding blev omrørt i 60 minutter ved stuetemperatur.

15 Det organiske opløsningsmiddel blev lynafdampet, og reaktionsblandingen blev kontrolleret for produkt ved silica-gel-TLC. Benzen/methanol/88% myresyre (8,5:1,5:0.13) blev anvendt til at udvikle chromatogrammet.

20 Efter kontrollen for produkt blev opløsningen indstillet til pH 7,5-8,0 og anbragt på en revers-fase-(C^-silica-gel) kolonne på 2,5 x 30 cm. Reaktionsblandingen blev adskilt under anvendelse af en lineær gradient på 20-70% methanol i 0,01M kaliumphosphatpuffer pH 6,85 (totalvo-25 lumen 1 1).

Kolonneafløbet blev opsamlet ved hjælp af en fraktionsopsamler, og glassenes indhold blev sorteret efter de individuelle komponenter. Elueringsrækkefølgen var di-a-(DL)-30 alanyl-mesoporphyrin IX, mono-a-(DL)-alanyl-mesoporphyrin IX og usubstitueret mesoporphyrin IX.

Methanolet blev lynafdampet, og materialet blev udfældet ved pH 2,5-3,0. Bundfaldet blev vasket tre gange med for-35 tyndet eddikesyre i vand. Produktet blev tørret under vakuum.

Eksempel 11 43 DK 168512 B1

Mono-g-alanyl-mesoporphyrin IX (blandet-anhydrid-metoden) 5 400 mg (0,0007 mol) mesoporphyrin IX blev suspenderet i 100 ml tetrahydrofuran (THF). Der tilsattes 360 ni (0,0035 mol) triethylamin under omrøring. Efter 10 minutter tilsattes 340 μΐ (0,0031 mol) ethylchlorformiat. Efter omrøring i 10 minutter sattes 10 ml (0,01 mol) 1M 10 KOH-opløsning indeholdende 400 mg (0,0044 mol) /5-alanin til THF-opløsningen. Denne blanding blev omrørt i 60 minutter ved stuetemperatur.

Det organiske opløsningsmiddel blev lynafdampet, og reak-15 tionsblandingen blev kontrolleret for produkt ved silica-gel-TLC. Benzen/methanol/88% myresyre (8,5:1,5:0,13) blev anvendt til at udvikle chromatogrammet.

Efter kontrollen for produkt blev opløsningen indstillet 20 til pH 7,5-8,0 og anbragt på en revers-fase-(C^-silica-gel) kolonne på 2,5 x 30 cm. Reaktionsblandingen blev adskilt under anvendelse af en lineær gradient på 40-80% methanol i 0,01M kaliumphosphatpuffer pH 6,85 (totalvolumen 1 1).

25

Kolonneafløbet blev opsamlet ved hjælp af en fraktionsopsamler, og glassenes indhold blev hældt sammen efter de individuelle komponenter. Elueringsrækkefølgen var di—/>— alanyl-mesoporphyrin IX, mono-Ø-alanyl-mesoporphyrin IX 30 og usubstitueret mesoporphyrin IX.

Methanolet blev lynafdampet, og materialet blev udfældet ved pH 2,5-3,0. Bundfaldet blev vasket tre gange med fortyndet eddikesyre i vand. Produktet blev tørret under 35 vakuum. Udbyttet af mono-Ø-alanyl-mesoporphyrin IX var 23 mg.

Mono-6-amino-n-caproyl-mesoporphyrin IX (blandet-anhy- dr id-metoden) 44

Eksempel 12 DK 168512 B1 5 400 mg (0,0007 mol) mesoporphyrin IX blev suspenderet i 50 ml tetrahydrofuran (THF). Der tilsattes 360 μΐ (0,0035 mol) triethylamin under omrøring. Efter 10 minutter tilsattes 340 ul (0,00414 mol) ethylchlorformiat. Efter om-10 røring i 10 minutter sattes 10 ml (0,01 mol) 1M KOH-op-løsning indeholdende 543 mg (0,00369 mol) e-amino-n-ca-pronsyre til THF-opløsningen. Denne blanding blev omrørt i 60 minutter ved stuetemperatur.

15 Det organiske opløsningsmiddel blev lynafdampet, og reaktionsblandingen blev kontrolleret for produkt ved silica-gel-TLC. Benzen/methanol/88% myresyre (8,5:1,5:0,13) blev anvendt til at udvikle chromatogrammet.

20 Efter kontrollen for produkt blev opløsningen indstillet til pH 7,5-8,0 og anbragt på en revers-fase-tC^g-silica-gel) kolonne på 2,5 x 30 cm. Reaktionsblandingen blev adskilt under anvendelse af en lineær gradient på 20-70% methanol i 0,01M kaliumphosphatpuffer pH 6,85 (totalvolu-25 men 11).

Kolonneafløbet blev opsamlet ved hjælp af en fraktionsopsamler, og glassenes indhold blev sorteret efter de individuelle komponenter. Elueringsrækkefølgen var di-s-ami-30 no-n-caproyl-mesoporphyrin IX, mono-e-amino-n-caproyl-me soporphyrin IX og usubstitueret mesoporphyrin IX.

Methanolet blev lynafdampet, og materialet blev udfældet ved pH 2,5-3,0. Bundfaldet blev vasket tre gange med for-35 tyndet eddikesyre i vand. Produktet blev tørret under vakuum.

Mono- 0 -alanyl-hematoporphyrin IX (blandet-anhydr id-meto den) 45

Eksempel 13 DK 168512 B1 5 400 mg (0,00059 mol) hematoporphyrin IX dihydrochlorid blev suspenderet i 50 ml tetrahydrofuran (THF). Der tilsattes 360 nl (0,0035 mol) triethylamin under omrøring. Efter 10 minutter tilsattes 340 ul (0,0031 mol) ethyl-10 chlorformiat. Efter omrøring i 10 minutter sattes 10 ml (0,01 mol) 1M KOH-opløsning indeholdende 400 mg (0,0044 mol) Ø-alanin til THF-opløsningen. Denne blanding blev omrørt i 60 minutter ved stuetemperatur.

15 Det organiske opløsningsmiddel blev fjernet ved lynafdampning, medens temperaturen blev holdt under 50 °C. Reaktionsblandingen blev kontrolleret for produkt ved si-licagel-TLC under anvendelse af benzen/methanol/88% myresyre (8,5:1,5:0,13) som opløsningsmiddel til udvikling af 20 chromatogrammet.

Opløsningen blev indstillet til pH 7,5-8,0 med HC1 og anbragt på en revers-fase-(C^g-silicagel) kolonne på 2,5 x 30 cm. Blandingen blev adskilt under anvendelse af en li-25 neær gradient på 40-80% methanol i 0,01M kaliumphosphat-puffer pH 6,85 (totalvolumen 11). De individuelle komponenter blev opsamlet, efterhånden som de kom ud fra kolonnen i rækkefølgen di-0-alanyl-hematoporphyrin IX, mono- 0 -alanyl-hematoporphyrin IX og hematoporphyrin IX.

30

Methanolet blev fjernet fra hver komponent ved lynafdampning, og materialet blev udfaeldet ved indstilling af pH-værdien til 2,5-3,0 med HC1. Bundfaldet blev vasket tre gange med fortyndet eddikesyre i vand på centrifugen, og 35 produkterne blev tørret under vakuum. Udbyttet af di-/5-alany 1-hematoporphyrin IX var 52 mg og af mono-/5-alanyl-hematoporphyrin 30 mg.

46

Eksempel 14 DK 168512 B1

Monoglycyl-chlorin eg (blandet-anhydrid-metoden) 5 625 mg chlorin eg blev opløst i 300 ml dimethylformamid (DMF), og der sættes 277 ul (0,002 mol) triethylamin (TEA) til DMF-opløsningen. Efter omrøring i 5 minutter tilsattes 201 nl (0,002 mol) ethylchlorformiat (EC), og der blev omrørt ved 1½ time ved stuetemperatur.

10

Der sattes 75 mg (0,0009 mol) glycin (ammoniak-fri) til DMF-opløsningen, og opløsningen blev omrørt i 3 timer ved 50-60 °C.

15 DMF-opløsningen blev prøvet for produkt ved revers-fase-(C^g-silicagel) TLC under anvendelse af 70% methanol/30% 0,01 M natriumphosphatpuffer (pH 6,85) til at udvikle chromatogrammet.

20 DMF-opløsningen blev lyninddampet til nær ved tørhed, hvorpå den blev opløst i fortyndet NaOH-opløsning, og pH-værdien blev indstillet til 2,5-3 for at udfælde det faste stof. Bundfaldet blev derpå anbragt på en revers-fase-(Cig-silioagel) kolonne (3,7 cm x 45 cm).

25

Fraktioner blev elueret under anvendelse 20-40% methanol i 0,01 M natriumphosphatpuffer (pH 6,85). Fraktionerne blev hældt sammen ifølge de individuelle komponenter.

30 Methanolet blev lynafdampet, og materialet blev udfældet ved pH 2,5-3,0. Bundfaldet blev vasket og centrifugeret 3 gange i fortyndet eddikesyre og vand. Produktet blev tørret under vakuum. Udbyttet af monoglycyl-chlorin eg var 87,5 mg.

35

Fremstilling af mono-L-serinyl-chlorin e^ 47

Eksempel 15 DK 168512 B1 5 Chlorin e^ blev fremstillet ifølge proceduren beskrevet af H. Fischer og A. Stern, Die Chemie des Pyrroles, Band II, Teil 2, Akademische Verlagsgesellschaft, Leipzig 1940, side 91-93.

10 100 mg chlorin e& (i form af den frie syre) og 35 mg 1- ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl )carbodiimid-hydrochlorid blev opløst i 2 ml N,Ν'-dimethylformamid. Efter 5 minutter tilsattes 125 mg L-serin-benzylester-hydrochlorid, der omrørtes kraftigt, indtil stoffet var fuldstændigt 15 opløst, og opløsningen fik derefter lov at stå ved stuetemperatur i 2 timer. Ved dette tidspunkt tilsattes 0,5 ml iseddike og derpå 30 ml methanol og 12 ml vand.

Opløsningen sattes på en C-^-revers-fase-kolonne (14 x 2 20 cm). Kolonnen blev vasket med vand (100 ml), derpå med 4 ml 1M NH^OH-opløsning, og derpå med vand igen (50 ml). Produktet blev elueret med methanol/vand. Fraktioner elueret fra kolonnen med 30-80% methanol indeholdt produkt såvel som carbodiimid-aktiveret chlorin som bestemt 25 ved TLC på C^g-revers-fase-plader med et opløsningsmiddel bestående af 70 vol.-% methanol/30 vol.-% puffer (0,1 M natriumphosphat, pH 6,85).

Disse fraktioner blev hældt sammen, og der tilsattes til-30 strækkeligt 3N NaOH-opløsning til at gøre opløsningen 0,1N med hensyn til NaOH. Efter 1 time var hydrolysen fuldført som bestemt ved TLC i det ovenstående system. Methanolet blev fjernet ved rotationsfordampning, og opløsningens pH-værdi blev indstillet til 7,5 med saltsyre.

35 Chlorinopløsningen sattes derpå igen på den samme revers-fase-kolonne, og der blev vasket med vand og elueret med methanol/vand under anvendelse af en trinvis gradient fra 48 DK 168512 B1 10 til 50% methanol. Fraktionerne indeholdende rent mono-L-serinylchlorin som bestemt ved TLC (R^ lidt større end for den usubstituerede chlorin) blev hældt sammen, metha-nolet blev fjernet ved rotationsfordampning, og produktet 5 tørret som trinatriumsaltet ved lyophilisering.

Eksempel 16

Fremstilling af mono-L-asparaginyl-chlorin eg 10 500 mg chlorin eg og 175 mg l-ethyl-3-(3-dimethylamino-propyl)carbodiimid-hydrochlorid blev opløst i 10 ml N,N’-dimethylformamid. Efter 5 minutter tilsattes 410 mg L-asparagin. Opløsningen blev omrørt i 4 timer. Asparaginet 15 opløstes ikke helt under denne reaktion, men revers-fase-(Cig-silicagel) TLC under anvendelse af 70% methanol/0,01 M natriumphosphatpuffer (pH 6,85) viste noget produkt ved dette tidspunkt (Rf lidt større end chlorin eg). Reaktionen blev afsluttet ved tilsætning af 2,5 ml iseddike, og 20 der blev fortyndet til et totalvolumen på 100 ml methanol og derpå tilsat 25 ml vand langsomt under omrøring. Opløsningen blev derpå sat på en 14 x 2 cm revers-fase-(Cig-silicagel) kolonne, vasket med vand og derpå med 5 ml 0,1 M NaOH-opløsning og endelig med 50 ml 0,01 M na-25 triumphosphatpuffer (pH 6,85). Produktet blev elueret af med methanol/vand i en trinvis gradient fra 20% methanol til 50% methanol. Fraktionerne indeholdende rent mono-L-asparaginyl-chlorin eg som bestemt ved TLC under anvendelse af de ovenfor angivne betingelser blev hældt sam-30 men, og methanolet blev fjernet ved rotationsinddampning. Produktet blev isoleret som trinatriumsaltet ved lyophilisering.

35

Fremstilling af mono-L-cysteinyl-chlorin e^ 49

Eksempel 17 DK 168512 B1 5 300 mg chlorin e^ og 105 mg 1-ethyl-3-(3-dimethylamino- propyl)carbodiimid-hydrochlorid blev opløst i 6 ml N,N*dimethylformamid. Efter 5 minutter tilsattes 255 mg L-cystein-hydrochlorid. Opløsningen blev omrørt ved stuetemperatur i 5 timer. Resten af proceduren er den samme 10 som for fremstillingen af mono-L-asparaginyl-chlorin e^.

Eksempel 18

Fremstilling af mono-L-serinyl-2-formylchlorin e^ 15 (mono-L-serinyl-2-desvinyl-2-formyl-chlorin e^) 500 mg chlorin-eg-trimethylester blev fremstillet ifølge proceduren beskrevet af H. Fisher og A. Stern, Die Chemie des Pyrroles, Band II, Teil 2, Akademische Verlagsge-20 sellschaft, Leipzig 1940, side 98-102. Chlorin-eg-tri- methylesteren blev opløst i 600 ml tilbagesvalende acetone. Der tilsattes langsomt 400 mg kaliumpermanganat og 800 mg magnesiumsulfat opløst i 130 ml vand i løbet af ca. 1 time. Opløsningen blev holdt under tilbagesvaling i 25 h time, efter at tilsætningen var fuldført. Efter afkøling tilsattes 300 ml methylenchlorid, og blandingen blev vasket 3 gange med vand i en skilletragt. Volumenet af methylenchlorid blev reduceret, og produktet chromatogra-feret på silicagel under eluering med en gradvis stigende 30 procentdel ethylacetat i CE^C^. Det første større brune bånd, som elueredes, blev opsamlet som produktet, 2-des-vinyl-2-formyl-chlorin e^. Udbytte 94 mg.

Produktet blev forsæbet ved opløsning i tilbagesvalende 35 n-propanol (0,1 ml/mg) og tilsætning af det seksdobbelte ækvivalent af IN KOH-opløsning. Trikaliumsaltet blev frafiltreret, vasket med n-propanol og tørret under vakuum til opnåelse af 2-formyl-chlorin e^.

50 DK 168512 B1 100 mg mesochlorin e^ (i form af den frie syre) og 35 mg l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-hydrochlorid 5 blev opløst i 2 ml N,Ν' -dimethylformamid. Efter 5 minutter tilsattes 125 mg L-serin-benzylester-hydrochlorid, der omrørtes kraftigt, indtil stoffet var fuldstændigt opløst, og opløsningen fik derpå lov at stå ved stuetemperatur i 2 timer. Ved dette tidspunkt tilsattes 0,5 ml 10 iseddike, og derpå 30 ml methanol og 12 ml vand.

Opløsningen blev sat på en C^g-revers-fase-kolonne (14 x 2 cm). Kolonnen blev vasket med vand (100 ml), derpå med 4 ml 1 H NH^OH-opløsning og derpå med vand igen (50 ml).

15 Produktet blev elueret med methanol/vand. Fraktioner e- lueret fra kolonnen med 30-80% methanol indeholdt produkt såvel som carbodiimid-aktiveret chlorin som bestemt ved TLC på C^g-revers-fase-plader med opløsningsmidlet 70 vol.-%/30 vol.-% puffer (0,01 M natriumphosphat, pH 20 6,85).

Disse fraktioner blev hældt sammen, og der tilsattes tilstrækkeligt 3 N NaOH-opløsning til at gøre opløsningen 0,1 N med hensyn til NaOH. Efter 1 time var hydrolysen 25 fuldført som bestemt ved TLC i det ovenstående system. Methanolet blev fjernet ved rotationsinddampning, og opløsningens pH-værdi indstillet til 7,5 med saltsyre. Chlorinopløsningen blev derpå igen sat på den samme re-vers-fase-kolonne, vasket med vand og elueret med metha-30 nol/vand under anvendelse af en trinvis gradient fra 10 til 50% methanol. Fraktionerne indeholdende rent mono-L-serinyl-chlorin som bestemt ved TLC (R^ lidt større end for det usubstituerede chlorin) blev hældt sammen, methanolet blev fjernet ved rotationsinddampning, og produktet 35 tørret som trinatriumsaltet ved lyophilisering.

51

Eksempel 19 DK 168512 B1

Fremstilling af mono-L-serinyl-deuterochlorin e^ (mono-L-serinyl-2-desvinyl-chlorin e^ 5 A. Deuterochlorin e^

Deuterochlorin-eg-trimethylester blev fremstillet ifølge proceduren beskrevet i H. Fischer og A. Stern, Die Chemie 10 des Pyrroles, Band II, Teil 2, Akademische Verlagsge-sellschaft, Leipzig 1940, side 104. Trimethylesteren blev derpå hydrolyseret til den frie syre ved opløsning i til-bagesvalende n-propanol (0,1 ml/mg) og tilsætning af 6 gange den ækvivalente af IN KOH-opløsning. Produktet blev 15 efter opvarmning opsamlet ved filtrering som kaliumsaltet og tørret under vakuum.

B. Mono-L-serinyl-deuterochlorin e^ 20 100 mg deuterochlorin e^ (i form af den frie syre) og 35 mg l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-hydro- chlorid blev opløst i 2 ml N,Ν'-dimethylformamid. Efter 5 minutter tilsattes 125 mg L-serin-benzylester-hydrochlo-rid, der omrørtes kraftigt, indtil stoffet var fuldstæn-25 digt opløst, og opløsningen fik derpå lov at stå ved stuetemperatur i 2 timer. Ved dette tidspunkt tilsattes 0,5 ml iseddike, og derpå 30 ml methanol og 12 ml vand.

Opløsningen sattes på en C^g-revers-fase-kolonne (14 x 2 30 cm). Kolonnen blev vasket med vand (100 ml), derpå med 4 ml 1M NH^OH-opløsning, og derpå med vand igen (50 ml). Produktet blev elueret med methanol/vand. Fraktioner e-lueret fra kolonnen med 30-80% methanol indeholdt produkt såvel som carbodiimid-aktiveret chlorin som bestemt ved 35 TLC på C^g-revers-fase-plader med opløsningsmidlet 70 vol.-%/30 vol.-% puffer (0,1M natriumphosphat, pH 6,85).

52 DK 168512 B1

Disse fraktioner blev hældt sammen, og der tilsattes tilstrækkeligt 3 N NaOH-opløsning til at gøre opløsningen 0,1 N med hensyn til NaOH. Efter 1 time var hydrolysen fuldført som bestemt ved TLC i det ovenstående system.

5 Methanolet blev fjernet ved rotationsinddampning, og opløsningens pH-værdi blev indstillet til 7,5 med saltsyre. Chlorinopløsningen blev derpå igen sat på den samme revers-f ase-kolonne, vasket med vand og elueret med metha-nol/vand under anvendelse af en trinvis gradient fra 10-10 50% methanol. Fraktionerne indeholdende rent mono-L-seri- nyl-chlorin som bestemt ved TLC (R^ lidt større end for det usubstituerede chlorin) blev hældt sammen, methanolet blev fjernet ved rotationsinddampning, og produktet tørret som trinatriumsaltet ved lyophilisering.

15

Eksempel 20

Fremstilling af mono-L-serinyl-2-acetyl-chlorin eg (mono-L-serinyl-2-desvinyl-2-acetyl-chlorin eg) 20 A. 2-acetyl-chlorin eg 2-acetyl-chlorin-eg-trimethylester blev fremstillet i-følge proceduren beskrevet i H. Fischer og A. Stern, Die 25 Chemie des Pyrroles, Band II, Teil 2, Akademische Ver-lagsgesellschaft, Leipzig 1940, side 185. Trimethyl-esteren blev derpå hydrolyseret til den frie syre ved opløsning i tilbagesvalende n-propanol (0,1 ml/mg) og tilsætning af 6 gange den ækvivalente mængde IN KOH-opløs-30 ning. Efter afkøling blev produktet opsamlet ved filtrering som kaliumsaltet og tørret under vakuum.

B. L-serinyl-2-acetyl-chlorin eg 35 100 mg 2-acetyl-chlorin eg (i form af den frie syre) og 35 mg l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-hydro-chlorid blev opløst i 2 ml N,N'-dimethylformamid. Efter 5 53 DK 168512 B1 minutter tilsattes 125 mg L-serin-benzylester-hydrochlo-rid, der omrørtes kraftigt, indtil stoffet var fuldstændigt opløst, og opløsningen fik derpå lov at stå ved stuetemperatur i 2 timer. Ved dette tidspunkt tilsattes 5 0,5 ml iseddike og derpå 30 ml methanol og 12 ml vand.

Opløsningen sattes på en C^-revers-fase-kolonne (14 x 2 cm). Kolonnen blev vasket med vand (100 ml), derpå med 4 ml 1M NH4OH-opløsning og derpå med vand igen (50 ml).

10 Produktet blev elueret med methanol/vand. Fraktioner elu-eret fra kolonnen med 30-80% methanol indeholdt produkt såvel som carbodiimid-aktiveret chlorin som bestemt ved TLC på C^g-revers-fase-plader med opløsningsmidlet 70 vol.-% methanol/30 vol.-% puffer (0,01 M natriumphosphat, 15 pH 6,85).

Disse fraktioner blev hældt sammen, og der tilsattes tilstrækkeligt 3 N NaOH-opløsning til at gøre opløsningen 0,1 N med hensyn til NaOH. Efter 1 time blev hydrolysen 20 fuldført som bestemt ved TLC i det ovenstående system. Methanolet blev fjernet ved rotationsinddampning, og opløsningens pH-værdi blev indstillet til 7,5 saltsyre. Chlorinopløsningen sattes derefter på den samme revers-fase-kolonne, og der blev vasket med vand og elueret med 25 methanol/vand under anvendelse af en trinvis gradient fra 10 til 50% methanol. Fraktionerne indeholdende rent mono-L-serinyl-chlorin som bestemt ved TLC (R^ lidt større end for det usubstituerede chlorin) blev hældt sammen, methanolet fjernet ved rotationsinddampning, og produktet tør-30 ret som trinatriumsaltet ved lyophilisering.

35

Eksempel 21 54 DK 168512 B1

Fremstilling af mono-L-serinyl-mesochlorin eg 5 A. Mesochlorin eg

Mesochlorin-eg-trimethylesteren blev fremstillet ifølge proceduren beskrevet i H. Fischer og A. Stern, Die Chemie des Pyrroles, Band II, Teil 2, Akademische Verlagsge-10 sellschaft, Leipzig 1940, side 102.

Mesochlorin-eg-trimethylesteren blev derpå hydrolyseret til den frie syre ved opløsning i tilbagesvalende n-pro-panol (0,1 ml/mg) og tilsætning af 6 gange den ækvivalen-15 te mængde 1 N KOH-opløsning. Efter afkøling blev produktet opsamlet ved filtrering som kaliumsaltet og tørret under vakuum.

B. Mono-L-serinyl-mesochlorin eg 20 100 mg mesochlorin eg (i form af den frie syre) og 35 mg l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-hydrochlorid blev opløst i 2 ml N,Ν'-dimethylformamid. Efter 5 minutter tilsattes 125 mg L-serin-benzylester-hydrochlorid, 25 der omrørtes kraftigt, indtil stoffet var fuldstændigt opløst, og opløsningen fik derpå lov at stå ved stuetemperatur i 2 timer. Ved dette tidspunkt tilsattes 0,5 ml iseddike, og derpå 30 ml methanol og 12 ml vand.

30 Opløsningen blev sat på en C^g-revers-fase-kolonne (14 x 2 cm). Kolonnen blev vasket med vand (100 ml), derpå med 4 ml 1 M NH^OH-opløsning og derpå med vand igen (50 ml). Produktet blev elueret med methanol/vand. Fraktioner e-lueret fra kolonnen med 30-80% methanol indeholdt produkt 35 såvel som carbodiimid-aktiveret chlorin som bestemt ved TLC på C1g-revers-fase-plader med opløsningsmidlet 70 vol.-%/30 vol.-% puffer (0,01 M natriumphosphat, pH

55 DK 168512 B1 6,85).

Disse fraktioner blev hældt sammen, og der tilsattes tilstrækkeligt 3 N NaOH-opløsning til at gøre opløsningen 5 0,1 N med hensyn til NaOH. Efter 1 time var hydrolysen fuldført som bestemt ved TLC i det ovenstående system. Methanolet blev fjernet ved rotationsinddampning, og opløsningens pH-værdi indstillet til 7,5 med saltsyre. Chlorinopløsningen blev derpå igen sat på den samme re-10 vers-fase-kolonne, vasket med vand og elueret med metha- nol/vand under anvendelse af en trinvis gradient fra 10 til 50% methanol. Fraktionerne indeholdende rent mono-L-serinyl-chlorin som bestemt ved TLC (R^ lidt større end for det usubstituerede chlorin) blev hældt sammen, metha-15 nolet blev fjernet ved rotationsinddampning, og produktet tørret som trinatriumsaltet ved lyophilisering.

Under anvendelse af de førnævnte carbodiimid- eller blan-det-anhydrid-metoder fra eksemplerne 8-21 syntetiseres de 20 følgende foretrukne monoamid-forbindelser til anvendelse i præparaterne ifølge opfindelsen:

Chlorin-derivater.

25 (DL)-Serinyl-trans-mesochlorin IX

Glycyl-trans-mesochlorin IX a-(DL)-Alanyl-trans-mesochlorin IX β-Alanyl-trans-mesochlorin IX e-Amino-n-caproyl-mesochlorin IX 30 (D,L)-Serinyl chlorin e^ (D,L)-Serinyl mesochlorin e^

Glycyl chlorin e^

Glycyl mesochlorin eg 35 a-(D,L)-Alanyl chlorin e^ a-(D,L)-Alanyl mesochlorin e^ 5-Alany1 chlorin e^ 56 DK 168512 B1 Ø-Alanyl mesochlorin eg e-Amino-n-caproyl chlorin eg e-Amino-n-caproyl mesochlorin eg 5 (D,L)-Serinyl chlorin e^ (D, L)-Serinyl mesochlorin e^ (DrL)-Serinyl isochlorin e^ (D,L)-Serinyl mesoisochlorin e^

Glycyl chlorin e^ 10 Glycyl mesochlorin e4

Glycyl isochlorin e^

Glycyl mesoisochlorin e^ a-(DL)-Alanyl chlorin e^ a-(DL)-Alanyl mesochlorin e^ 15 a-(DL)-Alanyl isochlorin e^ a-(DL)-Alanyl mesoisochlorin e^ Ø-Alanyl chlorin e^ Ø-Alanyl mesochlorin e^ 20 Ø-Alanyl isochlorin e^ Ø-Alanyl mesoisochlorin e^ e-Amino-n-caproyl chlorin e^ e-Amino-n-caproyl mesochlorin e^ e-Amino-n-caproyl isochlorin e^ 25 e-Amino-n-caproyl mesoisochlorin e^ (D, L)-Serinyl pyropheophorbid a Glycyl pyropheophorbid a a-(D,L)-Alanyl pyropheophorbid a 30 Æ-Alanyl pyropheophorbid a e-Amino-n-caproyl pyropheophorbid a (D, L)-Serinylpheophorbid a Glycyl pheophorbid a 35 a-(D,L)-Alanylpheoporbid a 0-Alanylpheophorbid a e-Amino-n-caproylpheophorbid a 57 DK 168512 B1

(D,L)-Serinylphotoprotoporphyrin IX Glycylphotoprotoporphyrin IX a -(D,L)-Alanylphotoprotoporphyrin IX Æ-Alanylphotoprotoporphyrin IX 5 e-Amino-n-caproylphotoprotoporphyrin IX

Threoninyl chlorin Tyrosyl chlorin Valyl chlorin eg 10 Leucyl chlorin e6

Isoleucyl chlorin Prolyl chlorin Methionyl chlorin Histidyl chlorin 15 Arginyl chlorin

Lysyl chlorin Glutaminyl chlorin e^ 4- hydroxyprolyl chlorin 5- hydroxylysyl chlorin 20 e amino-n-caproyl chlorin e^ α aminobutanoyl chlorin 3-methylhistidyl chlorin

Alanyl 2-acetyl-chlorin e^ 25 Valyl 2-acetyl-chlorin

Leucyl 2-acetyl-chlorin e^

Isoleucyl 2-acetyl-chlorin e^

Prolyl 2-acetyl-chlorin e^

Methionyl 2-acetyl-chlorin e^ 30 Glycyl 2-acetyl-chlorin e^

Serinyl 2-acetyl-chlorin e^

Threoninyl 2-acetyl-chlorin e^

Cysteinyl 2-acetyl-chlorin e^

Tyrosyl 2-acetyl-chlorin e^ 35 Asparginyl 2-acetyl-chlorin e^

Lysyl 2-acetyl-chlorin e^

Arginyl 2-acetyl-chlorin e^ 58 DK 168512 B1

Histidyl 2-acetyl-chlorin eg Glutaminyl 2-acetyl-chlorin eg 4- hydroxy-prolyl 2-acetyl-chlorin eg 5- hydroxy lysyl 2-acetyl-chlorin eg 5 e-amino-n-caproyl 2-acetyl-chlorin eg a-aminobutanoyl 2-acetyl-chlorin eg 3- methyl histidyl 2-acetyl-chlorin eg Ø-alanyl 2-acetyl-chlorin eg 10 Alanyl 2 formyl chlorin eg

Valyl 2 formyl chlorin eg Leucyl 2 formyl chlorin eg Isoleucyl 2 formyl chlorin eg Prolyl 2 formyl chlorin eg 15 Methionyl 2 formyl chlorin eg

Glycyl 2 formyl chlorin eg Serinyl 2 formyl chlorin eg Threoninyl 2 formyl chlorin eg Cysteinyl 2 formyl chlorin eg 20 Tyrosyl 2 formyl chlorin eg

Asparginyl 2 formyl chlorin eg Lysyl 2 formyl chlorin eg Arginyl 2 formyl chlorin eg Histidyl 2 formyl chlorin eg 25 Glutaminyl 2 formyl chlorin eg 4- hydroxy-prolyl 2 formyl chlorin eg 5- hydroxy lysyl 2 formyl chlorin eg e-amino-n-caproyl 2 formyl chlorin eg α-aminobutanoyl 2 formyl chlorin eg 30 3-methyl histidyl 2 formyl chlorin eg 0-alanyl 2 formyl chlorin eg

Alanyl Deuterochlorin eg Valyl Deuterochlorin eg 35 Leucyl Deuterochlorin eg

Isoleucyl Deuterochlorin eg Prolyl Deuterochlorin eg 59 DK 168512 B1 !

Methionyl Deuterochlorin eg Glycyl Deuterochlorin eg Serinyl Deuterochlorin eg Threoninyl Deuterochlorin eg 5 Cysteinyl Deuterochlorin eg Tyrosyl Deuterochlorin e^

Asparginyl Deuterochlorin eg Lysyl Deuterochlorin eg Arginyl Deuterochlorin e^ 10 Histidyl Deuterochlorin e^

Glutaminyl Deuterochlorin e^ 4- hydroxy-prolyl Deuterochlorin e^ 5- hydroxy lysyl Deuterochlorin e^ e-amino-n-caproyl Deuterochlorin e^ 15 a-aminobutanoyl Deuterochlorin eg 3- methyl histidyl Deuterochlorin eg Ø-alanyl Deuterochlorin eg

Valyl mesochlorin e^ 20 Leucyl mesochlorin e^

Isoleucyl mesochlorin eg Prolyl mesochlorin e^

Methionyl mesochlorin eg Serinyl mesochlorin e^ 25 Threoninyl mesochlorin e^

Cysteinyl mesochlorin eg Tyrosyl mesochlorin eg Asparginyl mesochlorin eg Lysyl mesochlorin eg 30 Arginyl mesochlorin eg

Histidyl mesochlorin eg Glutaminyl mesochlorin eg 4- hydroxy-prolyl mesochlorin eg 5- hydroxy lysyl mesochlorin eg 35 α-aminobutanoyl mesochlorin eg 3-methyl histidyl mesochlorin eg 60 DK 168512 B1

Porphyrin-derivater

(D,L)-Serinylmesoporphyrin IX Glysylmesoporphyrin IX 5 a-(DL)Alanylmesoporphyrin IX

0 -Alanylmesoporphyrin IX β-Amino-n-caproylmesoporphyrin IX

(D,L)-Serinylprotoporphyrin IX 10 Glycylprotoporphyrin IX

a-(D,L)-Alanylprotoporphyrin IX Ø-Alanylprotoporphyrin IX e-Amino-n-caproylprotoporphyrin IX

15 (D, L)-Serinyldeuteroporphyrin IX

Glycyldeuteroporphyrin IX a-(D,L)-Alanyldeuteroporphyrin IX 0 -Alanyldeuteroporphyrin IX e-Amino-n-caproyldeuteroporphyrin IX

20

tetra- (D,L)-Serinylcoproporphyrin III tetra- Glycylcoproporphyrin III tetra-a-(D,L)-Alanylcoproporphyrin III tetra-&-Alanylcoproporphyrin III 25 tetra-e-Amino-n-caproylcoproporphyrin III

(D,L)-Serinylhematoporphyrin IX Glycylhematoporphyrin IX a -(D,L) -Alanylhematoporphyrin IX 30 &-Alanylhematoporphyrin IX

e-Amino-n-caproylhematoporphyrin IX

Bacteriochlorin-derivater 35 (D,L)-Serinylbacteriochlorin e^

Glycylbacteriochlorin i I M^··^^------ DK 168512 B1 61 a-(DL)-Alanylbacteriochlorin 0-Alanylbacteriochlorin e^ e-Amino-n-caproylbacteriochlorin e^ 5 (D,L)-Serinylbacterioisochlorin Glycylbacterioisochlorin a-(DL)-Alanylbacterioisochlorin Ø-Alanylbacterioisochlorin e-Amino-n-caproylbacterioisochlorln e^ 10 (D,L)-Serinylbacteriochlorin e^

Glycylbacteriochlorin a-(DL)-Alanylbacteriochlorin 0-Alanylbacteriochlorin 15 e-Amino-n-caproylbacteriochlorin (D, L)-Serinylpyrobacteriopheophorbid a Glycylpyrobacteriopheophorbid a a-(D,L) Alanylpyrobacteriopheophorbid a 20 0-Alanylpyrobacteriopheophorbid a e-amino-n-caproylpyrobacteriopheophorbid a (D,L)-Serinylbacteriopheophorbid a Glycylbacteriopheophorbid a 25 a-(D,L)-Alanylbacteriopheophorbid a 0-Alanylbacteriopheophorbid a e-Amino-n-caproylbacteriopheophorbid a 30 35 62 DK 168512 B1

Andre aminosyre-derivater af tetrapyrrolerne kan også fremstilles. De følgende aminosyrer kan også anvendes til fremstilling af mono-, di-, tri- eller, hvor det er passende, tetra-aminosyre-derivaterne af chlorinerne, por-5 phyrinerne eller bacteriochlorinerne under anvendelse af en af de ovenstående procedurer: piperidin-2-carboxylsyre, piperidin-6-carboxylsyre, pyr-rol-2-carboxylsyre, pyrrol-5-carboxylsyre, piperidin-6-propionsyre og pyrrol-5-eddikesyre.

10

Blandede aminosyre-derivater af tetrapyrrolerne kan også fremstilles. De forskellige chlorin-derivater, porphyrin-derivater og baktereochlorin-derivter kan inkludere hvilke som helst to eller tre af de følgende aminosyrer: 15 glycin, serin, threonin, cystein, tyrosin, asparagin, glutamin, lysin, arginin, histidin, α-alanin, Ø-alanin, valin, leucin, isoleucin, prolin, β-phenylalanin, Ø-phe-nylalanin, tryptophan, methionin, e-amino-n-capronsyre, piperidin-2-carboxylsyre, pyrrol-5-carboxylsyre, piperi-20 din-6-propionsyre og pyrrol-5-eddikesyre.

Forbindelsernes fysiske egenskaber (relativ polaritet) måles ved hjælp af et chromatografisk standard system. De chromatografiske data (R^-værdier) blev målt på BAKER 25 tyndtlagschromatografiske C^g-silicagel-plader, hvis par- tikkel størrelse er 20 nm, og hvis overtrækstykkelse er 200 um. Opløsningsmiddelsystemet for disse chromatografiske forløb bestod af 75% methanol og 25% 0,01 M kalium-phosphat-puffer, pH 6,85. Forbindelserne blev sat på og 30 tørret på pladen som natriumsaltene ved omkring neutral pH og minimumsaltkoncentrationer. Rf-værdierne for de forskellige derivater er anført i TABEL I. Spektroskopis-ke data er angivet i TABEL II.

35 DK 168512 Bl 63

TABEL I

R^-værdier 5 Forbindelser Derivat R^

Mesoporphyrin IX — 0,32

Mesoporphyrin IX mono-a-alanyl 0,44 10 Mesoporphyrin IX mono-Ø-alanyl 0,44

Mesoporphyrin IX di-a-alanyl 0,51

Mesoporphyrin IX di-Ø-alanyl 0,49

Mesoporphyrin IX mono-glycyl 0,47

Mesoporphyrin IX di-sery1 0,58 15 Mesoporphyrin IX di-glycyl 0,54

Mesoporphyrin IX di-e-aminocaproyl 0,34

Hematoporphyrin IX — 0,78

Hematoporphyrin IX mono-Ø-alanyl 0,83 20 Hematoporphyrin IX di-/J-alanyl 0,83

Chlorin e^ — 0,66

Chlorin e^ di-L-a-serinyl 0,78 2-formyl-chlorin e^ ----- 0,74 25 2-acetyl-chlorin e^ ----- 0,71

Deuterochlorin e^ ----- 0,79

Mesochlorin ----- 0,69 2-formyl-chlorin e^ Mono-L-serinyl 0,87 2-acetyl-chlorin e6 Mono-L-serinyl 0,86 30 Deuterochlorin Mono-L-serinyl 0,90

Mesochlorin e^ Mono-L-serinyl 0,73

Chlorin e^ Mono-L-asparaginyl 0,72

Chlorin e^ Mono-L-cysteinyl 0,93

Chlorin e^ Mono-L-serinyl 0,72 35 64 DK 168512 B1

TABEL II

Spektroskopiske absorptionsdata Opløsningsmidlet er i alle tilfælde p-dioxan.

5

Absorptions- maximum (nm) Soret- i synlige bånd

Forbindelse områder nM

10 -------------------------------------------------------

Photoprotoporphyrin IX 668 38 415 (isomer blanding)

Pheophorbid a 667 35 408,6 15 Pyropheophorbid a 668 38 411,2

Trans-mesochlorin IX 643 60 388

Chlorin e^ 665,6 42 402

Bacteriopheophorbid a 753,5 44,7 359

Hematoporphyrin derivat 20 (HPD) 626 2,9 399

Mesochlorin 651 399 2-acetyl-chlorin eg 712, 683 410 25 2-formyl-chlorin eg 687 412

Deuterochlorin eg 653 398

Chlorin eg 666 402

Absorptionsdata for aminosyrekonjugaterne er identiske 30 med dem for udgangschlorinerne.

Eksempel 22

Forsøgene med fotodynamisk terapi er blevet udført på 35 Buffalo-rotter under anvendelse af den transplanterbare tumor, Morris Hepatoma 7777. Tumorerne blev transplanteret subcutant på ydersiden af låret. Under behandlingen 65 DK 168512 B1 varierer tumorerne i størrelse mellem 1 og 2,5 i diameter.

Den almene behandlingsplan er som følger. Rotterne inji-5 ceres med en opløsning af chlorinen fremstillet som følger: 20 mg af natriumsaltet af chlorinen blev opløst i 1 ml 0,9% NaCl-opløsning. Chlorinopløsningen blev derpå injiceret intravenøst igennem den ydre halsvene, medens rotten var anæstetiseret med ether. Volumenet af injice-10 ret opløsning blev udregnet på basis af dyrets vægt og doseringen, beregnet på vægt for det bestemte forsøg. Et specificeret tidsinterval fik derpå lov at gå, før lysbehandlingen blev startet.

15 Lysbehandlingen af rotterne skete uden bedøvelse. Rotterne blev spændt fast, håret fjernet i behandlingsområdet, og de blev behandlet med laserlys fra en Cooper Aurora argonpumpet, justerbar farvestoflaser.

20 Laseren var udstyret med et fiberoptisk lysfremføringssystem koblet til et mikrolinsesystem udviklet af Dr. Daniel Doiron, D.R.D. Consulting, Santa Barbara, California, U.S.A.

25 Linsen spreder laserstrålen og giver en cirkulær fordeling af lys med homogen lysintensitet over hele området af den indfaldende lysstråle. Lysets bølgelængde blev indstillet under anvendelse af et Hartridge reversionsspektroskop. Lysintensiteten blev bestemt under anvendel-30 se af et radiometer Model 65A fra Yellow Springs Instrument.

Mikrolinsen blev anbragt i en sådan afstand fra dyrets hud, at den gav en belysningsdiameter på 1,5 cm, og lys-35 strømmen blev varieret ved styring af laserudgangseffekten.

DK 168512 B1 66

Efter belysningen blev dyret sat tilbage i dets bur, og 24 timer senere blev det behandlet intravenøst i den ydre halsvene med 14 mg Evans Blue farvestof opløst i 250 »il 0,9% NaCl-opløsning. To timer efter injektionen blev rot-5 ten aflivet, og tumoren gennemskåret på tværs. Graden af tumornecrose blev bedømt efter manglen på farveoptagelse (M. C. Berenbaum, Br. J. Cancer, 45: 751(1982)), og dybden af de necrotiske tværsnit af tumoren blev optegnet i millimeter.

10

Tabel III sammenfatter virkningerne af disse midler på tumorer og inkluderer et område af bølgelængder, doseringer, intensiteter og tidsintervaller for behandling. Dette har været nødvendigt for at forsøge at fastslå de op-15 timale betingelser for fototerapi under anvendelse af disse hidtil ukendte midler.

I alle tilfælde, undtagen hvor anført, skete vævsbeskadigelse selektivt på tumorvævet som bedømt ved Evans Blue 20 metoden, selvom der i næsten alle tilfælde lå normal hud over tumoren, og behandlingsområdet overlappede væsentlige områder af normalt muskelvæv.

Dataene for fotodynamisk terapi er anført i tabelform.

25 Spalte nr. 2 er den totale påførte lysdosis angivet i J/cm2. Spalte nr. 3 er den indgivne dosis af chlorin angivet i mg lægemiddel pr. kg rottekropsvægt. Spalte nr. 4 er tidsrummet mellem indgivningen af midlet og behandlingen med laserlys. Spalte nr. 5 er bølgelængden af be-30 handlings lyset i nm. Spalte nr. 6 er intensiteten af behandlingslyset i mW/cm2. I spalte nr. 7 er x gennemsnitsdybden af necrose i mm af tumorvævet, dvs. afstanden fra den necrotiske top af tumoren nærmest huden til den necrotiske kant af tumoren fjernest fra huden.

s.d. er standard afvigelsen på x.

35 DK 168512 B1 67 (n) er antallet af tumorer eller ben, som er involveret i forsøget.

Spalte nr. 8 er området af necrosedybden i mm indenfor 5 gruppen.

10 15 20 25 30 35 0 DK 168512 B1

ID

Ό in in

•(O E * I O I

hg σ> in h in g I ' I '

O 03 03 CO CO

^ in 03 10 co β w w w w O CO t>- o • K *» K ^

Ό CO i—3. 03, rH

• +1 +1 +1 +1 M O) CO 00 O' + | ' ' ' '

X CO CO ID

%

P

O)

P

H

CO M

C g O) O O O IDO o P \ O IDO 0)0 o

C 3 ih fl) rH rH rH

Hg β

C *iH

H h

lO h O

0 O H

g Η Λ lo G G Λ O Q)

H O l W

H - h I H G >i

Η ΙϋΟ H >i Η H

Η 0 Ό Η >ι β h D) D) Λ β -Η O O)

CO Η Η β O ø h H O

vo ω ©· ffi i h ø .β m oqh Hin øm win om h < >i vD I ιΟ i ΙΟ I lO 0 E-< UvoevDOvOHiO T3 > I l >1 Ό

g Η Η P O H

0 0) G) I I >1 g

Η O O O O H

Η β β β O) ØH O O OH 0

g 0 Λ S 2 S P

Ό \ O) Ό Ό W ^ ^ ^ ^ Η H >i 03 03 03 03 Qi

iH g H

0

W

O

H U

0 O

P O) 0

W 0 X G

•Η Η X

CO Ό O) O O O O fi OH g 03 03 03 03 0 Q g O) β

H

0 W p

H W

W H

O 03 > Ό g w o o o o o p >1 \ 03 03 03 03 0 P ^ u o g

G

P

00 $"i M-) O C*· C*· O- O* 0 g O' O O' O'

D O' O' O' O' CO

Eh O' O' O« O' Η! 69 DK 168512 B1

Eksempel 23

Behandlings- og bedømmelsesproceduren er som følger: 5 DBA/2 Ha Ros-d+Ha mus med transplanterede tumorer SmT-F enten i den nedre del af bagbenet eller i siden af musen blev injiceret intravenøst via den ydre halsvene eller intraperiotonalt med det fotosensitiverende middel. Ved den angivne tid efter injektionen blev området over tu-10 moren barberet, og lysbehandlingen begyndt.

Lys fra en Cooper Aurora argonpumpet indstillelig farvestoflaser blev påført via et mikrolinsesystem (udviklet af Dr. Daniel Doiron, D.R.D. Consulting, Santa Barbara, 15 California, U.S.A.) koblet til laseren gennem en kvartsfiber. Linsens optiske egenskaber er således, at lyset træder ud af linsen i et cirkulært mønster med homogenintensitet over hele det belyste område. Det belyste områdes diameter er en funktion af afstanden fra linsen.

20

Lysintensiteten blev målt med et Model 65A radiometer fra Yellow Springs Instrument ved behandlingspunktet. En cirkel med diameter 1,5 cm på dyrets hud centreret så tæt som muligt over tumoren blev bestrålet ved alle 3 forsøg.

25 Lysets intensitet, bølgelængde og dosering er inkluderet i dataene for individuelle grupper af dyr. Bølgelængder indstilles under anvendelse af et Hartridge reversionsspektroskop til indenfor 1 nm af den angivne værdi.

30 24 timer efter lysbehandlingen modtog hver mus 5 mg Evans

Blue farvestof intravenøst (M. C. Berenbaum, Br. J. Cancer. 45:571 (1982)). Efter yderligere 2 timer blev musene aflivet, og tumorerne gennemskåret lodret igennem centret af det lysbehandlede område. Upåvirket tumor var 35 farvet blå ligesom upåvirket normalt væv. Necrotiske eller påvirkede områder var hvide eller røde af udseende. Målinger på både de hele tumorer og påvirkede områder af DK 168512 B1 70 tumorerne blev foretaget lodret og vandret med krumpasser til den nærmeste halve millimeter. Resultaterne for repræsentative forbindelser er vist i de følgende tabeller: 5 10 15 20 25 30 35 DK 168512 B1 71

TABEL IV

Forbindelse_Mono-L-serinylmesochlorin efi 1. Gruppe nr._78_♦-_ 5 2. Startdato ----------------------------------- 3. Mus nr. 1 2 345 4. Kon m *- ♦-«-<- 5. Musevægt, g 23,3 25,8 21,0 22,8 26,4 6. Dosis, mg/kg 100,0 *- *- *~ 10 7. Indgivnings- metode iv «_«_«_ 8. Tid, h_24^0_«-_«- _*-_ 9. Tumortype SMT-F *- <- *- *- 10. Tumorposition h. ben ♦- «-«-«- 2 11. Lysintens mW/cm 200,0 «-15 12. Lysdosis, J/cm^ 300,0 13. Bølgelængde, nm 651 ^ ♦-♦-♦· 14. Injekt.dato -------------------------------------- 15. Længde 1 1,00 0,90 0,75 0,55 1,05 20 16. Bredde 1 0,60 0,55 0,65 0,45 0,45 17. Dybde 1 0,45 0,30 0,30 0,20 0,25 18. Drabsdato ---------------------------------------- 19. Længde 2,_1,30 1,30_0,30 0,90 1,30 20. Bredde 2_1,20 1,00_0,80 0,70 0,85 25 21. Dybde 2 0,65 0,70 0,65 0,60 0,60 22. Længde 3_0,00 0,80_0,10 0,60 0,00 237 Bredde 3 0,00 0,40 0,10 0,60 0,00 24. Dybde 3_0,00 0,30_0,10 0,20 0,00 25. Bemærkninger ingen rød hud- rød hud- virk- virkning virkning 30 ning 0,9x0,9 0,6x0,6 cm, cm ingen virkning på tumoren 35 72 DK 168512 B1

TABEL V

Forbindelse Mono-L-serinyl-2-acetyl-chlorin efi 1. Gruppe nr. 81 *- 2. Startdato --------- 5 3. Mus nr. 1 2 4. Køn m m 5. Musevægt, g 26,5 21,0 6. Dosis, mg/kg 100,0 <- 7. Indgivningsmetode iv *- 10 8. Tid, h 24,0 ♦- 9. Tumortype SMT-F *- 10. Tumorposition h. ben «- 2 11. Lysintens Wh/cm 200,0 *- 2 12. Lysdosis, J/cm 300,0 «- 15 - 13. Bølgelængde, nm 680 *- 14. Injekt.dato ---------- 15. Længde 1 0,80 0,80 16. Bredde 1 0,45 0,60 nn 17. Dybde 1 M0 M0 WV ^ 18. Drabsdato -------------- 19. Længde 2, 1,20 0,90 20. Bredde 2_0,90 0,70_ 21. Dybde 2_0,60 0,40_ __ 22. Længde 3 0,00 0,00 23. Bredde 3_0,00 0,00_ 24. Dybde 3_0,00 0,00_ 25. Bemærkninger ingen ingen virk- virkning ning 30 35 73 DK 168512 B1

TABEL VI

Forbindelse Mono-L-serinyl-deuterochlorin 1. Gruppe nr. 82 «- ♦* «- ♦- 2. Startdato ------------------------------------- 5 3. Mus nr. 123 45 4. Kon m ♦· <- 5. Musevagt, g_25,7 23,2 21,3 20,5 24,4 6. Dosis, mg/kg 100,0 *- *- *- 7. Indgivningsmetode iv 10 8. Tid, h 24,0 *· «- <- +- 9. Tumortype SMT-F *- 10. Tumorposition h.ben * *- *· *- 2 11. Lysintens mn/cm 200,0 * *- 12. Lysdosis J/cm^ 300,0 ♦_ *- 15 - 13. Bølgelængde, nm 655 «. «- «- *- 14. Injekt.dato -------------------------------------- 15. Længde 1 1,40 1,75 1,90 1,45 1,35 16. Bredde 1 1,15 1,10 0,65 1,05 0,85 2Q 17. Dybde 1_0,75 1,00 0,20_0,90 0,65 18. Drabsdato ---------------------------------------- 19. Længde 2,_1,70 1,80 2,20_1,75 1,50 20. Bredde 2_0,80 1,15 1,00_1,25 0,85 21. Dybde 2_0,60 0,60 0,80_0,50 0,65 22. Længde 3 0,30 0,40 0,40 1,00 0,00 25 - 23. Bredde 3_0,35 0,40 0,40_1,15 0,00 24. Dybde 3_0,15 0,20 0,20 0,20 0,00 25. Bemærkninger ingen virkning 30 35 74 DK 168512 B1

TABEL VII

Forbindelse_Mono-L-asparaginyl-chlorin efi_ 1. Gruppe nr. 83 «- ♦- ♦- «- 2. Startdato ------------------------------------- 5 3. Mus nr. 1 2 3 4 5 4. Køn m *- *- *- *- 5. Musevægt, g 25,4 25,0 25,8 24,6 24,1 6. Dosis, mg/kg 100,0 «-«-♦* «- 7. Indgivningsmetode iv «- *- * «- 10 8. Tid, h 24,0 «-«-«- <- 9. Tumortype SMT-F «-«-«- «- 10. Tumorposition h.ben *-*-*- ♦- 2 11. Lysintens mW/cm 200,0 *- *- *- *· 2 12. Lysdosis J/cm 300,0 ♦.<_«. <_ 15 - 13. Bølgelængde, nm 665 ♦- 14. Injekt.dato -------------------------------------- 15. Længde 1_1,30 1,20 1,30 1,25 1,00 16. Bredde 1_0,90 0,90 1,05 0,75 0,70 2Q 17. Dybde 1_0,60 0,55 0,60 0,60 0,50 18. Drabsdato ---------------------------------------- 19. Længde 2,_1,05 1,40 1,60 1,60_1,30 20. Bredde 2_0,90 0,85 0,80 0,75 0,90 21. Dybde 2_0,65 0,65 0,60 0,65 0,60 22. Længde 3 1,05 1,40 1,10 1,60 1,05 25 ' ' —-.......... ' --------------— 23. Bredde 3_0,90 0,85 0,50 0,75_0,60 24. Dybde 3_0,50 0,60 0,35 0,65 0,45 25. Bemærkninger hud hud hud hud virk- virk- virk- virkning ning ning ning 0,65x 0,80x 0,95x 0,5x __ 0,60 cm 0,9 cm 0,95 0,5 30 muskel skade 35 75 DK 168512 B1

TABEL VIII

Forbindelse Mono-L-serinyl-2-fonnylchlorin _ 1. Gruppe nr. 85 «-«_♦- 2. Startdato ---------------------------- 5 3. Mus nr. 1 234 4. Kon m 5. Musevægt, g 26,0 20,5 20,2 28,8 6. Dosis, mg/kg 100,0 *-*-*- 7. Indgivningsmetode iv 10 8. Tid, h 24,0 +-+-*- 9. Tumortype SMT-F «- «- *· 10. Tumoiposition h.ben «-«-♦- 11. Lysintens mW/cm^ 200,0 12. Lysdosis J/cm^ 300,0 15 - 13. Bølgelængde, nm 690 14. Injekt.dato ---------------------------- 15. Længde 1_M0_1/70_M0_1,60 16. Bredde 1 1,00 1,10 1,20 1,00 2Q 17. Dybde 1_0/70_0^75_M0_0,70 18. Drabsdato -------------------------------- 19. Længde 2, 1,60 1,60 1,00 1,70 20. Bredde 2_M5_U0_U30_1,10 21. Dybde 2_0/75_0/30_0/30_0,80 22. Længde 3 0,40 1,30 0,90 0,00 23. Bredde 3_0^30_0^60_0/30_0,00 24. Dybde 3_M5_0^25_0/30_0,00 25. Bemærkninger ingen virk ning 30 35 76 DK 168512 B1

TABEL IX

Forbindelse Mono-L-cysteinyl-chlorin efi 1. Gruppe nr. 86 «.<_«_<_ 2. Startdato ---------------------------------------- 5 3. Mus nr. 1 2345 4. Køn m 5. Musevægt, g 26,0 26,2 27,1 22,2 26,0 6. Dosis, mg/kg 100,0 *- «- «- «- 7. Indgivningsmetode iv 10 8. Tid, h 24,0 ♦- «- <- «- 9. Tumortype SMT-F ♦* ♦- *- *- 10. Tumorposition h.ben <- «- <- ♦* 2 11. Lysintens mW/cm 200,0 *- *- 2 12. Lysdosis J/cm 300,0 ♦- <- *- *- 15 - 13. Bølgelængde, nm 665 «- <- <- <- 14. Injekt.dato -------------------------------------- 15. Længde 1_1,45 1,60 2,05 0,90 1,80 16. Bredde 1_1,00 1,20 1,60 0,85 1,30 2Q 17. Dybde 1_0,75 0,65 0,90 0,60 0,70 18. Drabsdato ---------------------------------------- 19. Længde 2, 1,40 1,80 1,80 1,00 2,00 20. Bredde 2 1,00 1,05 1,40 1,10 1,30 21. Dybde 2_0,80 0,70 0,80 0,75 0,80 22. Længde 3 1,40 1,60 1,60 1,00 1,85

ZD ..... ' " I — I I I

23. Bredde 3_1,00 1,05 1,10 1,10 1,20 24. Dybde 3_0,80 0,45 0,65 0,70 0,75 25. Bemærkninger rød hud hud- hud- hud- hud- 1, 3x1,0 virkn. virkn. virkn. virkn.

cm 1,6x1,2 1,4x1,4 0,9x0,9 1,5x1,4 nogen cm cm cm cm muskel- nogen nogen 30 skade muskel- muskelskade skade t 35 DK 168512 B1 in o o o o o p CO O CO 05 00 V i. K < ^ ^ o o o o o o Φ in in og o i ό co 'i o o o g «οι ε < k, *»*·*· 0 μ O O O O o o

. 05 <3· O 00 00 CO

Ό Η H O ' ! rH i t • /—S *. k *1 V » *> bi g o o o op o

So Η- Η· M· li H· a w h p oo in es

in P H H H

/*"> K K V s c o o o o o /—s /-s /’s /-n 1 Φ in in 05 ^ in in

Qjrg w w ' w w '

W P

H C _ © « e m rH c in in o o h jh vo p co σι in in vo vo ρ ρ ρ p W 05„ i ·Η ε co ω o

C Q S

j p ι-j O O O O O Q

O O O O O O

•μ CO CO CO CO CO CO

I Φ

C +> CM

Η "Η E

m o (li C >s, > Φ 3 O o o o o g j-με o o o o o o x 05 05 05 05 05 05 κ J μ Λ ω o φ H m ε q.

[Ν φ < |> ο Eh Ε* +> CO ε-ι ε-< ih &« g g ΕΗ ς ς ς ς ς ς ιη (Λ κη co w w w -η φ r

I P

+> Η Ό * φ φ η η μ ε ε > φ Β s ^ »tf 'tf 'tf ^ I« ·Η Φ CJ5 05 05 05 05 01 05 C Ε* Η Ο 1 φ 1 · Ό ω ρ > -μ φ Ησ,^>>>>>> 05 ·Η ·Η ·Η ·Η ·Η ·Η X * Η ^ I I 05 > ρ ε η w -η ο ο ο ο g g •η ε » ο ο ο ο ο ο rH CQr-it—ΙγΗιΗγΗϊΗγΗ φ Ο ‘Η Φ j5 Q (0 Ρ (0 I I Ρ I Ρ Ε-J Ρ Η 05 Φ 05 Ρ Φ

φ >1 I I Φ I I

-Η I c rH C rH (H C •"Η Ρ fflC-H >)-Η>ιΦ>ι·Η>ιΦ φ μ -η φ c μ c ·η c μ c c φ « μ -μ -(Ηθ·μμ·Η®τ1^ μ ωαοιο ρμπμομπμ-μ φ ΗΜΗάφΦΡΦΗΦΡΦμ ρ ΦΦΡσ δοΜΡίοοΜο «0 Ρ I Ο I C I I I Ο I Ο I Η •Ρ CJIJ-HJHJHJ^JX: ιΗ ·ΗΙΗΐμΐ5Ηΐ>ιΙΦΙϋ 3 ρο>οοο-μοεομοο w μησηπαΦημησεω φ ΟΟ-ΗΟΡ ο Ο Ο Ο Ο Φ Ο φ CC Ιζ,ΣΌ>ΣΟΣ(ΟΣ<+*ΣΧ}ΣΕ 78 DK 168512 B1 TABEL XI-1

Forbindelse Mono-L-a-serinyl-chlorin eg 1. Gruppe nr. 49 ♦- «- «- 2. Startdato --------------------------- 5 3. Mus nr. 12 3 4 4. Køn m f f f 5. Musevægt, g 24,8 22,1 20,2 16,4 6. Dosis, mg/kg 100,0 «- *- *- 7. Indgivningsmetode iv *- «- *· 10 8. Tid, h 24,0 *- *- *- 9. Tumortype SMT-F ♦* ♦- «- 10. Tumorposition h.ben ♦- *- *- 2 11. Lysintens mW/cm 75,0 «- *· * 2 12. Lysdosis J/cm 20,0 *· «- «- 15 - 13. Bølgelængde, nm 665 *- *- *- 14. Injekt.dato ---------------------------- 15. Længde 1_0,00 1,40_2^0_1,50_ 16. Bredde 1_0,00 0,80_1^0_0,90_ 2Q 17. Dybde 1 0,00 0,65 0,60 0,60 18. Drabsdato -------------------------------- 19. Længde 2,_0,00 1,60_^20_1^90_ 20. Bredde 2_0,00 0,85_3^15_1,15_ 21. Dybde 2_0,00 0,45 0,65_1^5_ __ 22. Længde 3 0,00 1,60 1,20 1,50 ΔΟ — »'i 23. Bredde 3_0,00 0,85_1^00_^20_ 24. Dybde 3_0,00 0,45_(^50_0^50_ 25. Bemærkninger Død af ben op- ben op- ben op- etheren svulmet, svulmet, svulmet, hud hud hud lyserød lyserød lyserød over be- over be- over be- hand- hand- handlings- lings- lings- området, omradet, området, tumor rød øverste tumor øverst.

2/3 af rød tumor øverst, rød.

35 ϊ 79 DK 168512 B1 TABEL XI-2

Forbindelse «- 1. Gruppe nr. «-<_+- ♦- 2. Startdato ---------------------------- 5 3. Mus nr. 567 8 4. Køn f f f f 5. Musevægt, g 20,7 22,7 20,9 19,4 6. Dosis, mg/kg *-<-<- *- 7. Indgivningsmetode *-*-+- *- 10 8. Tid, h 9. Tumortype «-♦-«- «- 10. Tumorposition <_<_<_ ♦- - 11. Lysintens mW/cm ♦- 2 12. Lysdosis J/cm «-«-+. <- 15 - 13. Bølgelængde, nm ♦- *- +· ♦* 14. Injekt.dato ---------------------------- 15. Længde 1 1,60 1,60 1,50 0,90 ΐβΤ"Bredde 1 1,05 0,90 1,25 0,75~ 2Q 17. Dybde 1_0,65 0,70 0,70 0,70 18. Drabsdato--------------------------------- 19. Længde 2, 1,20 1,70 1,90 1,45 20. Bredde 2 1,05 1,05 1,35 0,95 21. Dybde 2_0,80 0,80 0,85 0,80 22. Længde 3 1,20 1,50 1,50 1,30 23. Bredde 3_1,05 0,95 1,00 0,95 24. Dybde 3 0,50 0,50 0,70 0,60 25. Bemærkninger ben op- ben op- ben op- ben op svulmet svulmet, svulmet, svulmet, hud hud hud hud lyserød lyserød lyserød lyserød over be-over be- over be- over be-30 hand- hand- hand- handlings- lings- lings- lings- området, stedet, omradet, omradet, øverste øverste øverste øverste 2/3 2/3 af 2/3 af 1/2 af tumor rød. tumoren tumoren tumoren rød. rød. rød.

35 80 DK 168512 B1 TABEL XI-3

Forbindelse ♦- 1. Gruppe nr. «-«-«- 2. Startdato ----------------- 5 3. Mus nr. 9 10 11 4. Kon f f m 5. Musevægt, g 20,6 20,2 19,6 6. Dosis, mg/kg «-«-♦- 7. Indgivningsmetode 10 8. Tid, h «- «- 0,00 9. Tumortype *- *- 0,00 10. Tumorposition *- 0,00 2 11. Lysintens mW/cm *- «- 0,00 2 12. Lysdosis J/cm «- 0,00 15 - 13. Bølgelængde, nm +- *- 0,00 14. Injekt.dato --------------------- 15. Længde 1 1,70 1,30 0,00 16. Bredde 1_0,95 0,90 0,00_ 2Q 17. Dybde 1_0,65 0,60 0,00_ 18. Drabsdato ---------------------- 19. Længde 2,_1,70 1,70 0,00_ 20. Bredde 2_1,00 1,10 0,00_ 21. Dybde 2_0,95 0,85 0,00_ 2p. 22. Længde 3 1,40 1,10 0,00 23. Bredde 3_0,90 0,95 0,00_ 24. Dybde 3_0,60 0,45 0,00_ 25. Bemærkninger ben op- ben op- død af svulmet svulmet, etheren hud hud efter lyserød lyserød injektionen over be- over be- 30 hand- handlings- lings- stedet, omradet, øverste øverste 2/3 af 1/2 af tumoren tumoren rød. rød.

35 81 DK 168512 B1 TABEL XII-1 Forbindelse Monoglycyl-chlorin 1. Gruppe nr. 47 ♦- ♦- ^ 2. Startdato ---------------------------------------- 5 3. Mus nr. 1 2 3 4 5 4. Køn f *- * «_ <- 5. Musevægt, g 20,4 18,7 21,3 19,6 18,4 6. Dosis, mg/kg 100,0 «- «- *- *- 7. Indgivningsmetode iv «- *- *- *- 10 8. Tid, h 24,0 9. Tumortype SMT-F «- *- *- *- 10. Tumorposition h.ben ♦- *- 2 11. Lysintens mW/cm 75,0 * *- 2 12. Lysdosis J/cm 20,0 *- *· 15 - 13. Bølgelængde, nm 665 «- *- *- * 14. Injekt.dato -------------------------------------- 15. Længde 1 1,60 1,10 1,80 1,85 1,35 16. Bredde 1_1,00 0,95 1,10 1,50 1,05_ 17. Dybde 1 0,80 0,65 0,60 0,85 0,65 18. Drabsdato ---------------------------------------- 19. Længde 2,_1,20 0,00 1,65 1,40 1,25_ 20. Bredde 2_0,90 0,00 1,40 1,00 0,95_ 21. Dybde 2_0,90 0,00 1,00 0,90 0,65_ „ 22. Længde 3 0,70 0,00 0,40 0,30 0,70 23. Bredde 3_0,60 0,00 0,40 0,30 0,70_ 24. Dybde 3_0,30 0,00 0,60 0,60 0,80_ 25. Bemærkninger død af farvein-iektionen kan ikke aflæses.

30 35 82 DK 168512 B1 TABEL XII-2

Forbindelse *- 1. Gruppe nr. <_♦-<- «- «- 2. Startdato ---------------------------------------- 5 3. Mus nr. 6 7 8 9 10 4. Køn ♦-<-<- <- <- 5. Musevægt, g 19,6 19,1 20,1 19,8 19,6 6. Dosis, mg/kg 100,0 <- «- <- «- 7. Indgivningsmetode iv ♦- *- *- 10 8. Tid, h 24,0 ♦- <- «- «- 9. Tumor type SMT-F *- *- *- *- 10. Tumorposition h.ben <- *- «- «- 2 11. Lysintens mW/cm 75,0 *- *- *- 12. Lysdosis J/cm^ 20,0 ♦- ♦- ♦- ♦- 15 - 13. Bølgelængde, nm 665 *- *- *- *- 14. Injekt.dato -------------------------------------- 1ST Længde 1 1,30 1,35 1,35 1,35 1,30 16. Bredde 1_0,95 1,00 0,90 1,05 0,90_ on 17. Dybde 1 0,70 0,80 0,60 0,60 0,50 18. Drabsdato ---------------------------------------- 19. Længde 2,_1,05 1,35 1,40 1,35 1,20_ 20. Bredde 2_1,00 1,00 1,10 1,00 1,10_ 21. Dybde 2_0,65 0,90 0,80 0,80 0,70_ „ 22. Længde 3 0,00 0,75 0,00 0,00 0,35 23. Bredde 3_0,00 0,80 0,00 0,00 0,90_ 24. Dybde 3_0,00 0,90 0,00 0,00 0,25_ 25. Bemærkninger ingen ikke ingen ingen virk- klart virk- virkning. om ning. ning.

virk-ningen 30 skyldes behand lingen.

35 DK 168512 B1

O

Φ IN „ Ό s 00

«0 O

μ ε i o go in i 0 n* o o o c σι oo ^ σ» oo to oh V s o o ε ° +1 +1 O) i u

Ό X Gh O

S u c ε oo in

>ι «Η -Η -H «0 3 in H

α ro > c a +> - o o 1 <2 <D Ό o> o θ ffi ε in in « H β g s M k Νε

M 03 tQ O O O

: * » - a a' φ Η jo h ii cn to m c η ε +> x ·η to , o „ _ ti c +· N o o oo ia j -μ -p ε in Ln CO -p CQ o I> Φ <

+> EH

p 03 C

to c o +> ^ S 33 S c c i i τ! £ 2 Λ 1 3 0 ro E-< a h · · ra -c ro ε h 03 Φ fl) >1 Η Η Ό rt S S Φ Η O) N* nj i ε ε o .c <n in h x Φ p , r CO® fe fe

μ ε a I I

φ 3 > £ 5

3 H w M

£ ro ro +> h 03 Φ 03 -H -ri S λ: λ _ ω ό \ ο ο φ Ο Η 03 Ο Ο c ο ε ε η η μ .

£ , . ό 43 i £ S ιο Η ·ΗΦ I C μ 03 Ο Φ 3 .003 1 Ο Η Ο I Ο I _ w tin « c μ η ο c η c φ ΟΦ I Ο Φ J3 VO I Q >ι Η κ & ό j ε 03 ο φ j ε ο μ 84 DK 168512 B1

Fremstillingen af farmokologiske doseringsformer til indgi vning af den aktive ingrediens, dvs. aminosyre-porphy-rin-additionsprodukterne, som er fremstillet i de forudgående eksempler, kan ske som følgers 5

Eksempel 24

Der fremstilledes en tabletgrundmasse ved blanding af de følgende ingredienser i de angivne vægtmængder: 10

Sucrose, U.S.P. 80,3 g

Tapiocastivelse 13,2 g

Magnesiumstearat 4,4 g 15 I denne grundmasse blev der iblandet tilstrækkeligt ami- nosyre-porphyrin-additionsprodukt til at give tabletter, som hver indeholdt 100 mg aktiv ingrediens.

Eksempel 25 20

Der fremstilledes en blanding indeholdende de følgende ingredienser:

Calciumphosphat 17,6 g 25 Dicalciumphosphat 18,8 g

Magnesiumtrisilicat, U.P.S. 5,2 g

Lactose, U.S.P. 5,2 g

Kartoffelstivelse 5,2 g

Magnesiumstearat A 0,8 g 30 Magnesiumstearat B 0,32 g

Porphyrin-aminosyre-additions-produkter 20 g

Denne blanding blev delt og formet til kapsler, som hver 35 indeholdt 25 mg aktiv ingrediens.

85 DK 168512 B1

Eksempel 26

Til en kommercielt tilgængelig hindbæraromatiseret sukkersirup sættes ækvivalentet til 40 mg af aminosyre-por-5 phyrin-additionsproduktet pr. ml, og blandingen homogeniseres i en mekanisk indretning til dette formål. Blandingen er særligt egnet til oral indgivning indeholdende 200 mg af den aktive ingrediens.

10 Eksempel 27

Der fremstilles en steril opløsning med følgende sammensætning: 200 mg af natriumsaltet af aminosyre-porphyrin-additionsproduktet opløses i en 0,9% NaCl-opløsning, så-15 ledes at den endelige koncentration er 20 mg/ml.

Denne opløsning er egnet til intravenøs og intramuskulær indgivning.

20 Eksempel 28

Natriumsaltet af aminosyre-porphyrin-additionsproduktet opløses i 0,9% NaCl-opløsning, således at den endelige koncentration er 5 mg/ml. Denne opløsning anbringes i en 25 aerosolbeholder med et carbonhydrid-drivmiddel. Dette præparat er egnet til topisk påføring.

30 Eksempel 29

Fremstilling af et metalsalt

Natriumsaltet af porphyrin-aminosyre-additionsproduktet 35 fremstilles ved opløsning af additionsproduktet i vand indeholdende en ækvimolær mængde natriumhydroxid og fry setørring af den resulterende blanding.

DK 168512 B1 86 På denne måde fremstilles også andre metalsalte, herunder kalium-, calcium- og lithiumsalte.

5 Fremstilling af et syresalt

De i de forudgående eksempler beskrevne aminosyre-por-phyrin-additionsprodukter omdannes til syresalte, f.eks. hydrochloridet, ved opløsning i en vandig opløsning inde-10 holdende en ækvivalent mængde syre, f.eks. saltsyre, og efterfølgende inddampning af opløsningen til tørhed, hvorved der opnås det faste salt. Alternativt kan der i stedet for den vandige syreopløsning anvendes alkoholiske opløsninger af hydrogenchloridgas, og syresaltet opnås 15 ved afdampning af opløsningsmidlet eller krystallisation fra alkoholen, f.eks. ved tilsætning af et ikke-opløs-ningsmiddel.

20 25 30 35

Claims (6)

1. Terapeutisk præparat omfattende et fluorescerende mono-, di- eller polyamid af en aminomonocarboxylsyre og en 5 tetrapyrrol-forbindelse med formlen: T> P “I 2 i 19 20 A „ R io r‘o \ /=i ‘3 D NH HH 5 . *7 B R4 1_\=. C 110 *9 15 ______ R, R- O Π eller de tilsvarende dihydro- eller tetrahydro-tetrapyr-roler, hvori fr -H eller -OH -ch3 [-CH3 , R2 er H, vinyl, ethyl, -CHCHg, acetyl, C-H OH -ethyl,

25 H -C=0, -CH2CH2C02H eller =CHCH0, er methyl f-H eller -CH^ -CH« -OH , 30 ^ 35 DK 168512 B1 R4 er H, vinyl, ethyl, -CHCHg, -CH2CH2C02H, =CHCHO OH eller -H < 5 -ethyl , Rg er methyl, R6 er H, CH2CH2C02H, CH2CH2C02R eller C02H, 10 Ry er CH2CH2C02H, CH2CH2C02R eller f-CH2CH2C02H, 1-» r Rg er methyl eller -CHg 15 -H , Rg betyder H, C02H, CH2C02H eller methyl, og R er lavere alkyl eller benzyl, 20 forudsat at når R^, R2, Rg, R^, Ry og Rg repræsenterer to substituenter eller er divalente og knyttet til det samme carbonatom, er den respektive pyrrolring, hvortil de er knyttet, en dihydropyrrol, og forudsat at mindst én af 25 Rl“R9 illuderer en fri carboxylgruppe, idet der er dannet amidbindinger (1-4) mellem aminogruppen i aminomono-carboxylsyren og en af carboxylgrupperne i tetrapyrrol-forbindelsen, 30 eller et salt af et sådant amid samt en farmaceutisk acceptabel bærer med den undtagelse at tetrapyrrolresten ikke er pheophorbid a.

2. Præparat ifølge krav 1, hvori aminosyren er en a-ami-35 nosyre. DK 168512 B1

3. Præparat ifølge krav 1 eller 2, hvori tetrapyrrol-forbindelsen er en porphyrin, chlorin eller bacteriochlorin.

4. Præparat ifølge ethvert af kravene 1-3, hvori de amid-5 holdige substituenter er asymmetrisk arrangeret på tetra- pyrrolmolekylet.

5. Præparat ifølge krav 1, hvori amidet er: diserinyl-mesoporphyrin IX, 10 diglycyl-mesoporphyrin IX, di-α-(DL)-alanyl-mesoporphyrin IX, di-0-alanyl-mesoporphyrin IX, di-e-amino-n-caproyl-mesoporphyrin IX, diglycyl-trans-mesochlorin IX, 15 diglycyl-trans-mesochlorin e^, diglycyl-mesochlorin e4, diglycyl-hematoporphyrin IX, diglycyl-chlorin eg, diglycyl-protoporphyrin IX, 20 diglycyl-deuteroporphyrin, di-α-(DL)-alanyl-trans-mesochlorin IX, di-a-(DL)-alanyl-mesochlorin eg, di-a-(DL)-alanyl-mesochlorin e4, di-a-(DL)-alanyl-hematoporphyrin IX, 25 di-a-(DL)-alanyl-chlorin eg, di-a-(DL)-alanyl-protoporphyrin IX, di-a-(DL)-alanyl-deuteroporphyrin, di-0-(DL)-alanyl-trans-mesochlorin IX, di-0-(DL)-alanyl-mesochlorin eg, 30 di-0-(DL)-alanyl-mesochlorin e4, di-0 -(DL)-alanyl-hematoporphyrin IX, di-0-(DL)-alanyl-chlorin eg, di-0-(DL)-alanyl-protoporphyrin IX, di-0-(DL)-alanyl-deuteroporphyrin, 35 di-L-a-serinyl-chlorin eg, di-L-a-serinyl-trans-mesochlorin eg di-L-α-serinyl-trans-mesochlorin IX, DK 168512 B1 di-L-α-serinyl-trans-mesochlorin , di-L-α-serinyl-hematoporphyrin IX, di- L-a-serinyl-protoporphyrin IX, di-L-α-serinyl-deuteroporphyrin, 5 di-e-amino-n-caproyl-hematoporphyrin IX, di-e-amino-n-caproyl-chlorin eg, di-e-amino-n-caproyl-protoporphyrin IX, di - e -amino-n-caproyl-deuteroporphyrin, mono-L-serinyl-mesochlorin eg, 10 mono-L-serinyl-deuterochlorin eg, mono-L-serinyl-2-formyl-chlorin eg, mono-L-serinyl-2-acetyl-chlorin eg, mono-L-cysteinyl-chlorin eg, mono-L-asparaginyl-chlorin eg, 15 mono-serinyl-chlorin eg, mono-(DL)-glycyl-chlorin eg, alanyl-chlorin eg, mono-L-valyl-chlorin eg, mono-L-leucyl-chlorin eg, 20 mono-L-isoleucyl-chlorin eg, mono-L-prolyl-chlorin eg, mono-L-methionyl-chlorin eg, mono-L-threoninyl-chlorin eg, tyrosyl-chlorin eg, 25 glutaminyl-chlorin eg, lysyl-chlorin eg, arginyl-chlorin eg, histidyl-chlorin eg, Æ-alanyl-chlorin eg, 30 mono-e-amino-n-caproyl-chlorin eg, monoglycyl-mesoporphyrin IX, monoalanyl-mesoporphyrin IX, mono-0-alanyl-mesoporphyrin IX, mono-e-amino-n-caproyl-mesoporphyrin IX, 35 mono-β-alanyl-hematoporphyrin IX, threoninyl-2-formylchlorin eg, mono-L-threoninyl-deuterochlorin eg, eller DK 168512 B1 mono-L-threoninyl-mesochlorin eg.

6. Anvendelse af et fluorescerende mono-, di- eller polyamid af en aminomonocarboxylsyre og en tetrapyrrolforbin-5 delse indeholdende 1 eller 2 carboxylgrupper med den struktur, som er angivet i ethvert af kravene 1-5, eller et salt deraf og en farmaceutisk acceptabel bærer til fremstilling af et terapeutisk præparat til fotodiagnose og/eller fototerapi af tumorer. 10 15 20 25 30 35