DK168690B1 - Farmaceutiske præparater til detektion og/eller behandling af pattedyrtumorer - Google Patents

Description

i DK 168690 B1

Denne opfindelse angår hidtil ukendte farmaceutiske præparater, som er nyttige til anvendelse ved fotodiagnose og fototerapi, især til detektion og/eller behandling af tumorer og cancerøse væv i menneske- eller dyrekroppen.

5

Beskrivelse af den kendte teknik

Det er kendt at bestråle tumorer og cancrøse væv i menneskekroppen med intensivt lys i bølgelængdeområdet 626 -10 636 nm efter indgivning af et hematoporphyrinderivat for at reducere og, til tider, ødelægge de cancerøse celler (se den offentliggjorte internationale ansøgning WO 83/00811). Det er også kendt, at porphyriner, især natriumsaltet af protoporphyriner, kan bevare eller fremme 15 cellers normale funktioner og er nyttige til forhindring af genese, vækst, metastase og relaps af maligne tumorer.

Den offentligt tilgængelige japanske patentansøgning nr. 125737/76 beskriver anvendelser af porphyriner som tumor-inhiberende midler, idet der som eksempler anføres etio-20 porphyrin, mesoporphyrin, protoporphyrin, deuteroporphy- rin, hematoporphyrin, coproporphyrin og uroporphyrin.

At nogle af tetrapyrrolerne forårsager intens fotosensitivitet i dyr er velkendt og er blevet dokumenteret i 25 talrige artikler i litteraturen, f.eks. J. Intr. Sci. Vitaminol., 27, 521-527 (1981); Agric. Biol. Chem., 46(9), 2183-2193 (1982); Chem. Abst. 98, 276 (1983) og 88,- 69764m (1928).

30 I Igaku To Seibutsugaku, vol. 90 (1975), side 161-164 (jf. Chemical Abstracts, vol. 83 (1975) nr. 172597e) er det rapporteret, at formeringen af cancerceller hæmmes af den fotodynamiske virkning af phytochlorin-natrium. Imidlertid siger denne reference intet om, at den pågældende 35 forbindelse kan anvendes til detektion af tumorer, og den angiver intet om hverken detektion eller behandling af tumorer ved de specifikke bølgelængder, som anvendes i 2 DK 168690 B1 forbindelse med præparaterne ifølge opfindelsen.

DE offentliggørelsesskrift nr. 2 809 093 angår præparater til tumorbehandling, der som aktiv ingrediens omfatter 5 coproporphyrin type III eller et farmaceutisk acceptabelt vandopløseligt salt deraf. Ifølge denne reference anvendes således en coproporphyrin, som indeholder 3 propion-syregrupper, og der angives intet om detektion af tumorer og intet om de specifikke betingelser som anvendes i for-10 bindelse med præparaterne ifølge opfindelsen.

Sammenfatning af opfindelsen

De farmaceutiske præparater ifølge opfindelsen omfatter 15 tetrapyrrolcarboxylsyrer, som er kendte i sig selv eller kan fremstilles ved forskellige procedurer ud fra naturligt forekommende tetrapyrroler. Den eneste karakteristiske egenskab ved de omhandlede terapeutiske midler er tilstedeværelsen af mindst 3 carboxylsyregrupper i mole-20 kylet.

De cycliske tetrapyrroler, som anvendes i de farmaceutiske præparater ifølge opfindelsen, har som deres fælles udgangs-tetrapyrrol uroporphyrinogen, og har den følgende 25 ringstruktur: 12 19 20 A 3 4 18γΧ/Η 30 17|-\ /==i.6 £> NH HK b 16 af' ''fe 7 15 n 8 I_# \=l 35 14 13 C 1» 9 12 11 3 DK 168690 B1 hvori positionerne i molekylet er nummereret 1 - 20, og ringene identificeres ved bogstaverne A,B,C og D, og inkluderer også perhydro-, f.eks. dihydro- og tetrahydro-, derivater af denne ringstruktur, f.eks. forbindelser, 5 hvori en eller flere dobbeltbindinger mangler. Der findes i ringsystemet 4 pyrrolringe sammenføjet via a-positionerne i de respektive pyrrolringe af en methingruppe, dvs. -CH=. Forbindelserne ifølge opfindelsen betegnes af nemhedsgrunde i denne beskrivelse med krav som derivater 10 af tetrapyrrolerne, og det skal forstås, at betegnelserne "tetrapyrrol" vil betegne forbindelser med den ovenstående karakteristiske ringstruktur såvel som de tilsvarende perhydroderivater.

15 De tetrapyrroler, som anvendes i de farmaceutiske præparater ifølge opfindelsen, er alle kendte eller afledte fra naturlige tetrapyrroler ved forskellige midler og forskellige ændringsprocedurer. De naturligt forekommende tetrapyrroler har som deres fælles oprindelse uroporphy-20 rinogen III, en hexahydroporphyrin reduceret i broposi-tioneme.

De farmaceutiske præparater ifølge opfindelsen er således særegne ved, at de omfatter mindst én lysfølsom te-25 trapyrrolforbindelse med formlen: y e

B

30 * _ H

\ /—

?. NH HN C

Ml-—/ \==Lc00H

N

35 I-/ V=4 D CH..

\ z

M-l__H COOH

H 2

COOH

4 DK 168690 B1 eller perhydroderivater deraf, hvori X = H, vinyl, ethyl, acetyl eller formyl, Y = methyl, formyl eller H 5 methyl,

M = methyl, og E = ethyl eller H

ethyl, V- 10 eller farmaceutisk acceptable salte deraf, hvilken forbindelse kan aktiveres af lys med tilstrækkelig bølgelængde, så den udsender fluorescens eller udøver en celledræbende virkning på en tumor, idet den celledræbende forbindelse ikke er chlorin ec.

6 15

Foretrukne farmaceutiske præparater ifølge opfindelsen er sådanne, hvori X = H, vinyl, ethyl, acetyl eller formyl, 20 Y = methyl eller formyl, M = methyl, og E = ethyl, og farmaceutisk acceptable salte deraf.

25 Eksempler på forbindelser indenfor tetrapyrrolklasserne er vist i tabel I, hvori de nummererede positioner i te-trapyrrolringstrukturen anvendes til at betegne positionen- af den angivne substituent. Fraværet af dobbeltbindinger i ringsystemet angives under "dihydro" med hvert 30 sæt ringpositioner, mellem hvilke dobbeltbindingen mangler.

35 5 DK 168690 B1 si ΌΚ r- r- γ~· r- Γ" r-H H r-1 >H H i-l -Cl ~ - Γ"- - - » ' -*

-H Jlo LO - LO LO LO LO LO

Q H iH LO r-1 r-4 rH H iH

r^øcja) o o o o

-IS s: s s SS S 2 =2 =2 SS

Q

5-1 i-J Μ J-i J-l ^ U

V£>3 Λ SS SA SS SS SS SS

s t o o o oooo »—i ^ ^ c o

-H CM S S S S S S S

4J H « cm CM ojiMMtS.

•H o o o oooo M uoo oouu o o s O' H Cl (DG) G) G) G) G)

C H2 SS s s s S

*f~i

S

0 .-v CL 0 Γ"· JJ JJ JJ jj JJ JJ JJ 9·.9* w asw wwwh ^

? O' ^ ^ L IC

_ q_ 0 0 0 CT O.

^ lo C) G) G) O O G) S 9* >. α s ^ o' _j s S SS S S S O ^ ø o o >. u

Ui Q! C U U C3 O' CQ O CH Φ «—} < Ή Ή rH >.

*“ Ί TO Γ" Q. H

nri ri 2 .p Q C .C S 0 4J vJ w *** Cj ·η -u> Ό C_i

^ I> g Ω. > (D CL CO

< w w ~ —

r-I(DG)G) G) G) G) G) Q

S S S ssss g =l

CM <N _p O O

D D o O T

n CM II CM CM Π D 9 9 D 0 D· Ή vo|«y , G) I , .

LO I C LO I LO I

G) I G -H (D I G) 1 •H Lj

C M o C C

LO I Ή O r—l ’ -Η Ή

G) I 5-1 —12 5-1 5-1 .... .. .. J

O SU 00 O 5-t .. Jj o Π ,β H O O Ή r-i . 2 S > U3 < < LO -H 2 -I 5-1 JO 2

2 G) I ' M O >i G) O O r-ι-i o O C jj »—i * 5 cn I

S C -I -H -H 3 >, >1

>j -H 2 5-t ' > O -O 6 C

S 5-1 CJ G) Ui T! G) M-H it

SO 0-PGJ O Q Ό U

Pi H 10 O 3 ^ < S 0 g OS O ro I ® I I S "q SU S S cm rM cm « 2 ø 6 DK 168690 B1

De omhandlede hidtil ukendte forbindelser danner salte med enten syrer eller baser. Syresaltene er særlig nyttige til rensning og/eller separation af de endelige ami-noprodukter ligesom saltene dannet med baser. Basesaltene 5 er imidlertid særligt foretrukne til diagnostisk og terapeutisk anvendelse som beskrevet i denne beskrivelse.

Syresaltene dannes med en række forskellige syrer, såsom mineralsyrerne saltsyre, hydrogenbromidsyre, salpetersyre 10 og svovlsyre, og organiske syrer, såsom toluensulfonsyre og benzensulfonsyre.

Basesaltene inkluderer f.eks. natrium-, kalium-, calcium-, magnesium-, ammonium-, triethylammonium-, trimethyl-15 ammonium-, morpholin- og piperidinsalte og salte med lignende kationer.

Syre- og basesaltene dannes ved den simple foranstaltning at opløse det valgte aminosyretetrapyrrolamid i en vandig 20 opløsning af syren eller basen og inddampe opløsningen til tørhed. Anvendelsen af et med vand blandbart opløsningsmiddel for amidet kan hjælpe med til opløsning af amidet.

25 Tetrapyrrolerne kan også omdannes til metalkomplekser, f.eks. ved omsætning med metalsalte, og magnesiumkomplekserne er f.eks. nyttige til de samme formål som tetrapyr-rolen.

30 Fotodiagnose og fototerapi

Forbindelserne ifølge opfindelsen er nyttige til fotodiagnose og fototerapi af tumor-, cancer- og malignt væv, i det følgende betegnet som "tumor".

Når et menneske eller dyr med tumor behandles med doser af en forbindelse ifølge opfindelsen, og når der påføres 35 7 DK 168690 B1 passende lysstråler eller elektromagnetiske bølger, udsender forbindelsen lys, dvs. fluorescens. Derved kan eksistensen, positionen og størrelsen af tumoren detekte-res, dvs. fotodiagnose.

5 Når tumoren bestråles med lys af den rette bølgelængde og intensitet, aktiveres forbindelsen til at udøve en celledræbende virkning overfor tumoren. Dette kaldes "fototerapi".

10

Forbindelser egnet til fotodiagnose og fototerapi bør i ideelt have de følgende egenskaber: (a) ikke-toxiske i en normal terapeutisk dosering, med 15 mindre og indtil de aktiveres af lys, (b) bør være selektivt fotoaktive, (c) når der påføres lysstråler eller elektromagnetiske 20 bølger, bør de udsende karakteristisk og detekterbar fluorescens, (d) når de bestråles med lysstråler eller elektromagnetiske bølger, aktiveres de i en sådan grad at de ud- 25 øver en celledræbende virkning overfor tumor, og (e) de metaboliseres eller udskilles let efter behand-~lingen.

30 Ifølge prøvning til dato har de hidtil ukendte forbindelser ifølge opfindelsen de ovenstående egenskaber og karakteriseres også af rimelig opløselighed i saltopløsning ved fysiologisk pH-værdi.

35 De omhandlede forbindelser udviser større fluorescens i tumorer end de tilsvarende basiske tetrapyrroler. Deres anvendelse giver den bedste kontrast i tumorer sammenlig- DK 168690 Bl 8 net med normalt væv omkring tumoren. De omhandlede forbindelser absorberer aktiverende energi til fototerapi i det hensigtsmæssige område 600 - 800 nm, idet de foretrukne forbindelser absorberer i området 620 - 760 nm, 5 dvs. lys af længere bølgelængde, som muliggør lettere indtrængen af energi i tumoren til fototerapeutisk formål.

Efter den nuværende erfaring fordeles de omhandlede for-10 bindeiser mere ensartet igennem tumoren end den basiske tetrapyrrol, hvilket muliggør anvendelsen af betydeligt lavere dosering (ned til omkring 1/10 af den krævede normale dosis af den basiske tetrapyrrol) og således formindsker, om ikke eliminerer, fotosensitivering i værten.

15 De har også en mere vedblivende fluorescens, medens nogle af de tilsvarende tetrapyrroler viser ikke-vedvarende fluorescens eller fluorescensen varierer fra dag til dag i værten.

20 Præparaterne ifølge opfindelsen kan anvendes til diagnose og til terapeutisk behandling af et bredt område af tumorer. Eksempler på tumorer er mavecancer, tarmcancer, lungecancer, brystcancer, livmodercancer, spiserørscancer, ovariecancer, pancreascancer, strubecancer, sarcomer, le-25 vercancer, cancer i urinblæren, cancer i overkæben, cancer i galdegangen, cancer i tungen, hjernetumor, hudcancer, malign struma, prostatacancer, cancer i spytkirtlen, Hodgkins's sygdom, multipelt myeloma, nyrecancer, leukæmi og malignt lymfocytoma. Til diagnose er det eneste krav, 30 at tumoren er i stand til at fluorescere selektivt, når den udsættes for det rette lys. Til behandling må tumoren være gennemtrængelig af aktiveringsenergien. Til diagnose anvendes lys af kortere bølgelængde, medens der til terapeutiske formål anvendes lys af længere bølgelængde for 35 at muliggøre let gennemtrængning af tumorvævet. Således kan der til diagnose anvendes lys på 360 - 760 nm og til behandling lys på 620 - 760 nm, afhængigt af tetrapyrro- 9 DK 168690 B1 lens individuelle egenskaber.

Det er nødvendigt, at lysstrålerne er så intense, at de får forbindelserne til at udsende fluorescens til diagno-5 se og til at udøve en celledræbende virkning til terapi.

Bestrålingskilden til fotodiagnose og fototerapi er ikke begrænset, men laserstrålen foretrækkes, fordi der selektivt kan påføres intensive lysstråler i et ønsket bølge-10 længdeområde. F.eks. indgives forbindelsen ifølge opfindelsen ved fotodiagnose til en menneske- eller dyrekrop, og efter et vist tidsrum påføres lysstråler på den del, som skal undersøges. Når et endoskop kan anvendes til den påvirkede del, såsom lunger, spiserør, mave, livmoder, 15 urinblære eller rectum, bestråles den under anvendelse af endoskopet, og tumorportionen udsender selektivt fluorescens. Denne portion iagttages visuelt eller iagttages igennem et tilpasset fiberskop med øjet eller på en CRT-skærm.

20

Ved fototerapien udføres bestrålingen efter indgivningen af doseringen ved hjælp af laserstråler fra spidsen af kvartsfibre. Foruden bestrålingen af tumorens overflade kan den indre del af tumoren bestråles ved indsætning af 25 spidsen af kvartsfibrene i tumoren. Bestrålingen kan i-agttages visuelt eller afbildes på en CRT-skærm.

TiL fotodiagnose er lys af bølgelængder mellem 360 og 760 nm egnet til aktivering af de omhandlede tetrapyrrolfor-30 bindeiser. Selvfølgelig har hver forbindelse en specifik optimal aktiveringsbølgelængde. En langbølget ultraviolet lampe er særligt egnet til fotodiagnose. Der kan anvendes lignende metoder til betragtning af den behandlede tumor, som allerede er beskrevet for fototerapi.

Doseringerne af de omhandlede hidtil ukendte forbindelser vil variere afhængigt af den ønskede virkning, hvad enten 35 10 DK 168690 B1 det gælder diagnose eller behandling. Til diagnose vil doser på så lidt som 1 mg/kg være effektive, og der kan anvendes op til omkring 20 mg/kg. Til behandling vil dosen sædvanligvis være omkring 0,5 mg/kg. Selvfølgelig kan 5 doseringen for enhver diagnose eller behandling varieres bredt i betragtning af de førnævnte fordelagtige egenskaber ved de omhandlede forbindelser. Der er ikke blevet bemærket nogen dødelighed af prøvedyr på grund af de omhandlede forbindelser ved undersøgelser under anvendelse 10 af doseringsniveauer på op til 20 mg/kg.

Til både diagnose og behandling kan de omhandlede forbindelser indgives ad oral, intravenøs eller intramuskulær vej. De kan sammensættes som lyophiliserede sterile pyro-15 genfrie forbindelser, fortrinsvis i form af basesalte, f.eks. natriumsalte. De fortrukne doseringsformer tilvejebringes som injicerbare opløsninger (isotoniske).

Den bestrålingskilde, som anvendes ved behandling af tu-20 morer indeholdende forbindelser ifølge opfindelsen, er en filtreret, højintensitets, kontinuert eller pumpet-farvestof- eller anden laserlyskilde, som er i stand til at arbejde indenfor de følgende grænser: strålingsstrømtæt- 2 hed 20 - 500 mW/cm ved bølgelængder mellem 620 og 760 nm 25 og en total udgangseffekt på mindst 500 W eller mere. Flere for tiden kommercielt tilgængelige lasere opfylder disse kriterier.

Tetrapyrrolerne kan fremstilles ved forskellige syntese-30 metoder, som findes i litteraturen, f.eks.

Chlorin e, -6

Willståtter, R., Stoll, A.; Investigations: on Chloro-35 phyll, (Trans., Schertz, F.M., Merz, A.R.,) side 176, Science Printing Press, Lancaster, Pennsylvania, 1928.

11 DK 168690 B1

Willståtter, R., Isler, M.; Ann. Chem., 390, 269 (1912).

Fischer, H., Baumler, R.; Ann. Chem., 474, 65 (1929).

5 Fischer, H., Siebel, H.; Ann. Chem., 499, 84 (1932).

Conant, J.B., Mayer, W.W.; J. Amer. Chem. Soc., 52, 3013 (1930).

10 Fischer - Orth, "Die Chemie des Pyrrols”, Akademische Verlagsgesellschaft, Leipzig, 1940, Band II, Teil 2.

Almen reference for porphyriner 15 "Porphyrins and Metalloporphyrins" ed. Kevin M. Smith, Elsevier, New York 1975.

Præparaterne ifølge opfindelsen kan indgives til værten i en række forskellige former tilpasset den valgte indgiv-20 ningsvej, dvs. oralt, intravenøst, intramuskulært eller subkutant.

Den aktive forbindelse kan indgives oralt, f.eks. med et inert fortyndingsmiddel eller med en assimilerbar spise-25 lig bærer, eller den kan indgives i gelatinekapsler med hård eller blød skal, eller den kan komprimeres til tabletter, eller den kan inkorporeres direkte i føden eller diæten. Til oral terapeutisk indgivning kan den aktive forbindelse inkorporeres med excipienter og anvendes i 30 form af indtagelige tabletter, sugetabletter, trokisker, kapsler, eliksirer, suspensioner, sirupper, oblater og lignende. Sådanne præparater bør indeholde mindst 0,1% aktiv forbindelse. Procentindholdet i præparatet kan selvfølgelig varieres og kan hensigtsmæssigt være fra om-35 kring 2 til omkring 60 vægtprocent af enheden. Mængden af aktiv forbindelse i sådanne terapeutisk nyttige præparater er sådan, at der vil blive opnået en egnet dosering.

12 DK 168690 B1

Foretrukne præparater af forbindelserne ifølge opfindelsen fremstilles således, at en oral doseringsenhedsform indeholder mellem ca. 50 og 300 mg aktiv forbindelse.

5 Tabletterne, trokiskerne, pillerne, kapslerne og lignende kan også indeholde følgende: Et bindemiddel, såsom traga-canthgummi, akaciagummi, majsstivelse eller gelatine; ex-cipienter såsom dicalciumphosphat? et nedbrydningsmiddel, såsom majsstivelse, kartoffelstivelse, alginsyre og lig-10 nende; et glittemiddel, såsom magnesiumstearat; og et sødemiddel, såsom sucrose, lactose, saccharin, eller et aromamiddel, såsom pebermynte, vintergrøntolie eller kirsebæraroma. Når doseringsenhedsformen er en kapsel, kan den foruden materialer af den ovennævnte type indeholde 15 en flydende bærer. Forskellige andre materialer kan være tilstede som overtræk eller til på anden måde at modificere doseringsenhedens fysiske form. F.eks. kan tabletter, piller eller kapsler være overtrukket med shellak, sukker eller begge dele. En sirup eller en eliksir kan 20 indeholde den aktive forbindelse, sucrose som sødemiddel, methyl- og propylparabener som konserveringsmidler, et farvestof og en aroma, såsom kirsebær- eller appelsinaroma. Selvfølgelig bør ethvert materiale, der anvendes til fremstilling af enhver doseringsenhedsfonn, være farma-25 ceutisk ren og i det væsentlige ikke-toxisk i de anvendte mængder. Desuden kan den aktive forbindelse inkorporeres i præparater og sammensætninger med forlænget afgivelse.

Den aktive forbindelse kan også indgives parenteralt el-30 ler intraperitonealt. Opløsninger af den aktive forbindelse som fri base eller farmakologisk acceptabelt salt kan fremstilles i vand, passende blandet med et overfladeaktivt middel, såsom hydroxypropylcellulose. Dispersioner kan også fremstilles i glycerol, flydende polyethy-35 lenglckoler og blandinger deraf og i olier. Under almindelige betingelser for opbevaring og brug indeholder disse præparater et konserveringsmiddel for at forhindre 13 DK 168690 B1 væksten af mikroorganismer.

De farmaceutiske former, som er egnet til injektion, inkluderer sterile vandige opløsninger eller dispersioner 5 og sterile pulvere til fremstilling af sterile injicerba-re opløsninger eller dispersioner på stedet. I alle tilfælde må formen være steril og må være flydende i en sådan grad, at den er let at fylde på sprøjte. Den må være stabil under fremstillings- og opbevaringsbetingelserne 10 og må være konserveret mod den kontaminerende virkning af mikroorganismer, såsom bakterier og svampe. Bæreren kan være et opløsningsmiddel eller dispersionsmedium indeholdende f.eks. vand, ethanol, polyol (f.eks. glycerol, pro-lylenglycol og flydende polyethylenglycol), egnede blan-15 dinger deraf og vegetabilske olier. Den rette flydeevne kan f.eks. opretholdes ved anvendelse af et overtræk, såsom lecithin, ved opretholdelse af den krævede partikelstørrelse i tilfælde af dispersion og ved anvendelse af overfladeaktive midler. Forhindringen af virkningen af 20 mikroorganismer kan frembringes af forskellige antibak-terielle og antifungale midler, f.eks. parabener, chlor-butanol, fenol, sorbinsyre, thimerosal og lignende. I mange tilfælde vil det være at foretrække at inkludere isotoniske midler, f.eks. sukkerstoffer eller natrium-25 chlorid. Forlænget absorption af de injicerbare præparater kan frembringes ved inkorporering i præparaterne af midler, som forsinker absorption, f.eks. aluminiummono-stearat og gelatine.

30 Sterile injicerbare opløsninger fremstilles ved inkorporering af den aktive forbindelse i den krævede mængde i det passende opløsningsmiddel med forskellige af de andre ingredienser, som er opregnet ovenfor, efter behov, efterfulgt af steril filtrering. Almindeligvis - fremstilles 35 dispersioner ved inkorporering af den på forskellig vis steriliserede aktive ingrediens i et sterilt medium, som indeholder grunddispersionsmediet og de krævede andre in- 14 DK 168690 B1 gredienser blandt de ovenfor opregnede. 1 tilfælde af sterile pulvere til fremstilling af injicerbare opløsninger, er de foretrukne fremstillingsmetoder vakuumtørrings- og frysetørringsteknik, som giver et pulver af den 5 aktive ingrediens plus enhver yderligere ønsket ingrediens ud fra en i forvejen sterilfiltreret opløsning deraf.

De omhandlede hidtil ukendte forbindelser kan også påfø-10 res direkte på tumorer hos værten, hvad enten det er internt eller eksternt, i topiske præparater. Eksempler på sådanne præparater inkluderer opløsninger af de hidtil u-kendte forbindelser i opløsningsmidler, især vandige opløsningsmidler, og fortrinsvis vand. Alternativt kan de 15 omhandlede hidtil ukendte forbindelser til topisk anvendelse, især på hudtumorer, dispergeres i de sædvanlige creme- eller salvepræparater, som almindeligvis anvendes til dette formål, eller de kan tilvejebringes i form af sprøjteopløsninger eller suspensioner, som kan inkludere 20 et drivmiddel, der sædvanligvis anvendes i aerosolpræparater.

I denne beskrivelse med krav inkluderer betegnelsen "farmaceutisk acceptabel bærer" alle opløsningsmidler, dis-25 persionsmedier, overtræk, antibakterielle og antifungale midler, isotoniske og absorptionsforsinkende midler og lignende. Anvendelsen af sådanne medier og midler i forbindelse med farmaceutisk aktive stoffer er velkendt indenfor faget. Med undtagelse af det tilfælde, hvor et el-30 ler andet konventionelt middel er uforeneligt med den aktive ingrediens, er dets anvendelse i de terapeutiske præparater forudsat ifølge opfindelsen. Supplerende aktive ingredienser kan også inkorporeres i præparaterne.

35 Det er særligt fordelagtigt at sammensætte parenterale præparater i doseringsenhedsform med henblik på let ind-givning og ensartet dosering. "Doseringsenhedsform" an- DK 168690 Bl 15 vendes i denne beskrivelse med krav om fysisk adskilte enheder, som er egnede som enhedsdoseringer for de pattedyrindivider, som skal behandles, idet hver enhed indeholder en forud fastsat mængde aktivt materiale udregnet 5 til at bringe den ønskede terapeutiske virkning i forbindelse med den nødvendige farmaceutiske bærer. Specifikationen for de hidtil ukendte doseringsformer ifølge opfindelsen er dikteret af og direkte afhængig af (a) det aktive materiales enestående egenskaber og den bestemte 10 terapeutiske virkning, som skal opnås, og (b) de faget iboende begrænsninger for sammensætningen af et sådant aktivt materiale til behandlingen af tumorer i levende individer.

15 De følgende eksempler tjener til nærmere belysning af opfindelsen.

EKSEMPEL 1 20 Fremstilling af chlorin e^

Chlorin eg blev fremstillet ifølge proceduren beskrevet af Fischer og Stern, Die Chemie des Pyrrols, Band II,

Teil 2, Akademische Verlagsgesellschaft, Leipzig 1940, 25 side 91 - 93.

30 35 EKSEMPEL 2 16 DK 168690 B1

Fremstilling af formylchlorin (2-desvinyl-2-formyl- chlorin 5 500 mg chlorin-eg-trimethylester blev fremstillet ifølge proceduren beskrevet af Fischer og Stern, Die Chemie des Pyrrols, Band II, Teil 2, Akademische Verlagsgesell-schaft, Leipzig 1940, side 98 - 102. Chlorin-eg-trime-10 thylesteren blev opløst i 600 ml tilbagesvalende acetone.

Der tilsattes langsomt 400 mg kaliumpermanganat og 800 mg magnesiumsulfat opløst i 130 ml vand i løbet af ca. 1 time. Opløsningen blev holdt under tilbagesvaling i h time, efter at tilsætningen var fuldført. Efter afkøling til-15 sattes 300 ml methylenchlorid, og blandingen blev vasket 3 gange med vand i en skilletragt. Volumenet af methylenchlorid blev reduceret, og produktet chromatograferet på silicagel under eluering med en gradvis stigende procentdel ethylacetat i CH^C^· Det første større brune bånd, 20 som elueredes, blev opsamlet som produktet, 2-desvinyl-2-formyl-chlorin eg. Udbytte 94 mg.

Produktet blev forsæbet ved opløsning i tilbagesvalende n-propanol (0,1 ml/mg) og tilsætning af det seksdobbelte 25 ækvivalent af IN KOH-opløsning. Trikaliumsaltet blev frafiltreret, vasket med n-propanol og tørret under vakuum til opnåelse af 2-formyl-chlorin eg.

30 35 EKSEMPEL 3 17 DK 168690 B1

Fremstilling af deuterochlorin e^. (2-desvinylchlorin e^) 5 Deuterochlorin-eg-trimethylester blev fremstillet ifølge proceduren beskrevet af Fischer og Stern, Die Chemie des Pyrrols, Band II, Teil 2, Akademische Verlagsgesell-schaft, Leipzig 1940, side 104. Trimethylesteren blev derpå hydrolyseret til den frie syre ved opløsning i til-10 bagesvalende n-propanol (0,1 ml/mg) og tilsætning af 6 gange den ækvivalente af IN KOH-opløsning. Produktet blev efter opvarmning opsamlet ved filtrering som kaliumsaltet og tørret under vakuum.

15 EKSEMPEL 4

Fremstilling af acetylchlorin e^ (2-desvinyl-2-acetyl-chlorin e^.) 20 2-Acetyl-chlorin-eg-trimethylester blev fremstillet iføl ge proceduren beskrevet Fischer og Stern, Die Chemie des Pyrrols, Band II, Teil 2, Akademische Verlagsgesell-schaft, Leipzig 1940, side 185. Trimethylesteren blev derpå hydrolyseret til den frie syre ved opløsning i til-25 bagesvalende n-propanol (0,1 ml/mg) og tilsætning af 6 gange den ækvivalente mængde IN KOH-opløsning. Efter afkøling blev produktet opsamlet ved filtrering som kaliumsaltet og tørret under vakuum.

30 35 EKSEMPEL 5 18 DK 168690 B1

Fremstilling af mesochlorin 5 Mesochlorin-eg-trimethylester blev fremstillet ifølge proceduren beskrevet af Fischer og Stern, Die Chemie des Pyrrols, Band II, Teil 2, Akademische Verlagsgesell-schaft, Leipzig 1940, side 102.

10 Mesochlorin-eg-trimethylesteren blev derpå hydrolyseret til den frie syre ved opløsning i tilbagesvalende n-pro-panol (0,1 ml/mg) og tilsætning af 6 gange den ækvivalente mængde IN KOH-opløsning. Efter afkøling blev produktet opsamlet ved filtrering som kaliumsaltet og tørret under 15 vakuum.

Forbindelsernes fysiske egenskaber (relativ polaritet) måles ved hjælp af et chromatografisk standardsystem. De chromatografiske data (Rf-værdier) blev målt på BAKER 20 tyndtlagschromatografiske Clg-silicagel-plader, hvis par

tikelstørrelse er 20 jim, og hvis overtrækstykkelse er 200 um. Opløsningsmiddelsystemet for disse chromatografiske forløb bestod af 75% methanol og 25% 0,01 M kaliumphos-phat-puffer, pH 6,85. Forbindelserne blev sat på og tør-25 ret på pladen som natriumsaltene ved omkring neutral pH

og minimumsaltkoncentrationer. R^-værdierne for de forskellige derivater er anført i TABEL I. Spektroskopiske data er angivet i TABEL II.

30 35 19 DK 168690 B1 TABEL I Rf-værdier 5 Forbindelser Derivat

Chlorin eg ----- 0,66 2-formyl-chlorin ----- 0,74 10 2-acetyl-chlorin e^ ----- 0,71

Deuterochlorin ----- 0,79

Mesochlorin ----- 0,69 15

TABEL II

Spektroskopiske absorptionsdata Opløsningsmidlet er i alle tilfælde p-dioxan.

20

Absorptions- maximum (nm) Soret- i det synlige bånd

Forbindelse område nM

25 -------------------------------------------------------

Mesochlorin 651 399 2-acetyl-chlorin e^ 712, 683 410 2-formyl-chlorin e^ 687 412 30 Deuterochlorin e^ 653 398

Chlorin ec 666 402 o EKSEMPEL 6 35 Forsøgene med fotodynamisk terapi er blevet udført på Buffalo-rotter under anvendelse af den transplanterbare tumor, Morris Hepatoma 7777. Tumorerne blev tranplanteret 20 DK 168690 B1 subkutant på ydersiden af låret. Under behandlingen varierer tumorerne i størrelse mellem 1 og 2,5 cm i diameter.

5 Den almene behandlingsplan er som følger. Rotterne injiceres med en opløsning af chlorinen fremstillet som følger: 20 mg af natriumsaltet af chlorinen opløst i 1 ml 0,9% NaCl-opløsning. Chlorinopløsningen blev derpå injiceret intravenøst igennem den ydre halsvene, medens rot-10 ten var anæstetiseret med ether. Volumenet af injiceret opløsning blev udregnet på basis af dyrets vægt og doseringen, beregnet på vægt for det bestemte forsøg. Et specificeret tidsinterval fik derpå lov at gå, før lysbehandlingen blev startet.

15

Lysbehandlingen af rotterne skete uden bedøvelse. Rotterne blev spændt fast, håret fjernet i behandlingsområdet, og de blev behandlet med laserlys fra en Cooper Aurora argonpumpet, justerbar farvestoflaser.

20

Laseren var udstyret med et fiberoptisk lysfremføringssystem koblet til et mikrolinsesystem udviklet af Dr. Daniel Doiron, D.R.D. Consulting, Santa Barbara, California, U.S.A.

25

Linsen spreder laserstrålen og giver en cirkulær fordeling af lys med homogen lysintensitet over hele området af -den indfaldende lysstråle. Lysets bølgelængde blev indstillet under anvendelse af et Hartridge reversions-30 spektroskop. Lysintensiteten blev bestemt under anvendelse af et radiometer Model 65A fra Yellow Springs Instrument.

Mikrolinsen blev anbragt i en sådan afstand- fra dyrets 35 hud, at den gav en belysningsdiameter på 1,5 cm, og lysstrømmen blev varieret ved styring af laserudgangseffekten.

21 DK 168690 B1

Efter belysningen blev dyret sat tilbage i dets bur, og 24 timer senere blev det behandlet intravenøst i den ydre halsvene med 14 mg Evans Blue farvestof opløst i 250 ul 0,9% NaCl-opløsning. To timer efter injektionen blev rot-5 ten aflivet, og tumoren gennemskåret på tværs. Graden af tumornekrose blev bedømt efter manglen på farveoptagelse (M. C. Berenbaum, Br. J. Cancer, 45: 751(1982)), og dybden af det nekrotiske tværsnit af tumoren blev optegnet i millimeter.

10

Den følgende sammenfatning af forsøgsresultaterne inkluderer et område af bølgelængder, dosering, intensiteter og tidsintervaller for behandling. Dette har været nødvendigt for at forsøge at fastslå de optimale betingelser 15 for fototerapi under anvendelse af dette hidtil ukendte lægemiddel. De optimale betingelser mangler endnu at blive bestemt, men de beskrevne betingelser resulterer i målelig og væsentlig skade på tumorerne.

20 I alle tilfælde, undtagen hvor anført, skete vævsbeskadigelse selektivt på tumorvævet som bedømt ved Evans Blue metoden, selvom der i næsten alle tilfælde lå normal hud over tumoren, og behandlingsområdet overlappede væsentlige områder af normalt muskelvæv.

25

Dataene for fotodynamisk terapi er anført i tabelform. Spalte nr. 2 er den totale påførte lysdosis angivet i J/cm2. Spalte nr. 3 er den indgivne dosis af chlorin angivet i mg lægemiddel pr. kg rottekropsvægt. Spalte nr. 4 30 er tidsrummet mellem indgivningen af midlet og behandlingen med laserlys. Spalte nr. 5 er bølgelængden af behandlingslyset i nm. Spalte nr. 6 er intensiteten af behandlingslyset i mW/cm2. I spalte nr. 7 er x gennemsnitsdybden af nekrose i mm af tumorvævet, dvs. afstanden fra 35 den nekrotiske top af tumoren nærmest huden til den nekrotiske kant af tumoren fjernes fra huden.

22 DK 168690 B1 s.d. er standardafvigelsen på x.

(n) er antallet af tumorer eller ben, som er involveret i forsøget.

5

Spalte nr. 8 er området af nekrosedybden i mm indenfor gruppen.

Chlorin e^ blev indgivet i overensstemmelse med den oven-10 stående procedure, og resultaterne er sammenfattet nedenfor: 15 20 25 30 35 DK 168690 Bl 23

Tid mel-

Lys- Dosis af lem mid- Bølge- Inten- Omdosis middel del og længde sitet - råde 2 2 Tumor J/cm mg/kg lys h nm mW/cm x s.d. (n) mm 5 - 7777 20 20 24 665 100 4,540,9 (3) 3,5-5

Under anvendelse af den ovenstående procedure iagttages 10 lignende resultater ved anvendelse af: mesochlorin eg, bacteriochlorin eg, 2-desvinylchlorin eg, mesochlorin eg, 2-acetylchlorin eg, 2-formylchlorin eg og rhodin g7· 15 EKSEMPEL 7

Buffalo hanrotter (på omkring 200 g hver) med transplanterede subcutane Morris Hepatoma 7777 tumorer på den ydre 20 del af bagbenene blev injiceret intravenøst via den ydre halsvene med chlorin eg eller Photofrin II i en dosering på 20 mg/kg. [Photofrin II er et varemærke for renset he-matoporphyrinderivat (HPD). Det blev skaffet fra Oncology Research and Development i Roswell Park, Buffalo, New 25 York, U.S.A.]. 24 timer senere blev områderne over tumorerne barberet, og lysbehandlingen begyndt.

Lys. fra en Cooper Aurora argonpumpet indstillelig farvestoflaser blev påført via et mikrolinsesystem (udviklet 30 af Dr. Daniel Doiron, D.R.D. Consulting, Santa Barbara, California, U.S.A.) koblet igennem en kvartsfiber til laseren. Linsens optiske egenskaber er således, at lyset træder ud af linsen i et cirkulært mønster med en homogen intensitet;over hele det belyste område. Det·belyste om-35 rådes diameter er en funktion af dets afstand fra linsen.

24 DK 168690 B1

Lysintensiteten blev målt med et model 65A radiometer fra Yellow Springs Instrument ved behandlingspunktet. En cirkel med diameter 1,5 cm på dyrets hud, centreret så nært som muligt over tumoren, blev bestrålet ved alle forsøg.

5 I alle tilfælde blev der påført lys med en intensitet på 2 100 mW/cm , indtil der var nået en total dosering på 20 2 J/cm . Chlorin e^ rotter blev behandlet med 665 nm lys for tilnærmelsesvis at svare til dets absorptionsmaksimum i det røde område af spektret. Photofrin II rotter blev 10 behandlet med 630 nm lys i overensstemmelse med den overvejende del af de forsøg med fotodynamisk terapi under anvendelse af dette middel og dets forgængere HPD eller Photofrin I, som er beskrevet i litteraturen. Lysbølgelængderne blev bestemt ved hjælp af et Hartridge rever-15 sionsspektroskop til indenfor 1 nm.

24 timer efter lysbehandlingen modtog hver rotte 14 mg Evans Blue farvestof intravenøst (M.C. Berenbaum, Br. J. Cancer 45:571 (1982)). Efter yderligere 2 timer blev rot-20 terne aflivet, og tumorerne gennemskåret lodret igennem centret af det lysbehandlede område.

Upåvirket tumor var farvet blå ligesom normalt væv. Nekrotiske områder var hvide eller røde af udseende. Målin-25 ger på både de hele tumorer og nekrotiske områder af tumorerne blev foretaget lodret og vandret med krumpasser til den nærmeste halve millimeter.

19 tumorer blev bedømt for virkning af chlorin e^ og lys, 30 medens 22 tumorer blev bedømt for virkning af Photofrin II og lys.

35 25 DK 168690 B1

De følgende data blev opnået for chlorin e^ 5 Antallet af behandlede tumorer var 19

Antallet af tumorer, der udviklede necrose efter behandling, var 17 10 Gennemsnit s.d.

Gennemsnitsbredden af tumor- necrose var 12,2 ± 4,7 mm

Gennemsnitsdybden af tumor- 15 necrose var 4,6 ± 1,4 mm

Tumorstørrelser for behandlingsgruppen:

Gennemsnit s.d.

20 Bredden af tumortværsnit 13,4 ± 5,7 mm

Dybden af tumortværsnit 7,8 ± 2,7 mm

De følgende data blev opnået for Photofrin II

25 Antallet af behandlede tumorer var 22

Antallet af tumorer, der udviklede necrose efter behandling var 9 30 Gennemsnit s.d.

Gennemsnitsbredden af tumor- necrose var 4,5 ± 3,2 mm

Gennemsnitsdybden af tumor- 35 necrose var 2,4 ± 1,0 mm 26 DK 168690 B1

Tumorstørrelser for behandlingsgruppen:

Gennemsnit s.d.

Bredden af tumortværsnit 17,0 ± 6,4 mm 5 Dybden af tumortværsnit 9,2 ± 3,3 mm EKSEMPEL 8

Behandlings- og bedømmelsesproceduren er som følger: 10 DBA/2 Ha Ros-d+Ha mus med transplanterede SmT-F tumorer enten i den nedre del af bagbenet eller i siden af musen blev injiceret intravenøst via den ydre halsvene eller intraperitonealt med det fotosensitiverende middel. Ved 15 den angivne tid efter injektionen blev området over tumoren barberet, og lysbehandlingen begyndt.

Lys fra en Cooper Aurora argonpumpet indstillelig farvestoflaser blev påført via et mikrolinsesystem (udviklet 20 af Dr. Daniel Doiron, D.R.D. Consulting, Santa Barbara, California, U.S.A.) koblet til laseren gennem en kvartsfiber. Linsens optiske egenskaber er således, at lyset træder ud af linsen i et cirkulært mønster med homogen intensitet over hele det belyste område. Det belyste om-25 rådes diameter er en funktion af afstanden fra linsen.

Lysintensiteten blev målt med et Model 65A radiometer fra Yellow Springs Instrument ved behandlingspunktet. En cirkel med diameter 1,5 cm på dyrets hud centreret så tæt 30 som muligt over tumoren blev bestrålet ved alle 3 forsøg. Lysets intensitet, bølgelængde og dosering er inkluderet i dataene for individuelle grupper af dyr. Bølgelængder indstilles under anvendelse af et Hartridge reversionsspektroskop til indenfor 1 nm af den angivne værdi.

24 timer efter lysbehandlingen modtog hver mus 5 mg Evans Blue farvestof intravenøst (M. C. Berenbaum. Br. J. Can- 35 27 DK 168690 B1 cer. 45:571 (1982)). Efter yderligere 2 timer blev musene aflivet, og tumorerne gennemskåret lodret igennem centret af det lysbehandlede område. Upåvirket tumor var farvet blå ligesom upåvirket normalt væv. Nekrotiske eller på-5 virkede områder var hvide eller røde af udseende. Målinger på både de hele tumorer og påvirkede områder af tumorerne blev foretaget lodret og vandret med krumpasser til den nærmeste halve millimeter.

10 15 20 25 30 35

TABEL III

28 DK 168690 B1

Forbindelse 2-acetylchlorin eg 5 1. Gruppe nr._74_^^^_ 2. Startdato--------------------------------------- 3. Mus nr._3_2_1_4_ 4. Køn_m_*2_^^_ 5. Musevægt, g 22,8 24,7_24,8_22,6_ 10 6. Dosis, mg/kg 100_^^^_ 7. Indgivnings- metode_iv_^^^_ 8. Tid, h_24,0 _^^_ 9. Tumortype_SMT-F «-_^^_ 15 10. Tumorposition h. ben *·_^^_ 11. Lysintens.

2 mW/cm_200,0 <-_^^_ 12. Lysdosis 300,0 «-«-♦- J/cm2_ 20 13. Bølgelængde 680 nm_ 14. Injekt.dato ------------------------------------- 15. Længde 1_1,10 1,15_1,10_1,70 16. Bredde 1_0,70 0,70_0,65_0,70_ 25 17. Dybde 1_0,45 0,60_0,65_0,50 18. Drabsdato-------------------------------------- 19. Længde 2_0,70 1,20_1,10_1,55_ 20. 'Bredde 2_0,55 0,80_0,60_1,20 21. Dybde 2_0,50 0,55_0,50_0,60 30 22. Længde 3_0,55 0,00_0,00_0,00_ 23. Bredde 3_0,55 0,00_0,00_0,00_ 24. Dybde 3_0,15 0,00_0,00_0,00 25. Bemærkninger ingen ingen ingen virkning virkning- virkning 35 _ 29 DK 168690 B1

TABEL IV

Forbindelse_2-formylchlorin e^_ 1. Gruppe nr._71_^^^^_ 2. Startdato-------------------------------------- 5 3. Mus nr._1_2_3_4_5_ 4. Køn_f_^^^_*2_ 5. Musevægt, g 20,0 20,8_20,4_17,6_20, 6 6. Dosis, mg/kg 100,0 ^^ 7. Indgivnings- 10 metode_iv_^^^_*~ 8. Tid, h_24,0 «-_^^_«- 9. Tumortype_SMT-F «-_^^_*- 10. Tumorposition h. ben ♦-_^^_*- 11. Lysintens.

15 mW/cm^_200,0 *-_^^^_ 12. Lysdosis 300,0 «- «- ♦- «- J/cm^_ 13. Bølgelængde 690 «- ♦· * run__ 20 14. Injekt.dato -------------------------------------- 15. Længde 1_0,70 0,95 0,80_1,10 1,30 16. Bredde 1_0,25 0,60 0,50_0,70 0,80 17. Dybde 1_0,20 0,40 0,20_0,30 0,60 18. Drabsdato --------------------------------------- 25 19. Længde 2,_0,55 1,10 0,95_1,30 0,00 20. Bredde 2 0,45 0,95 0,60 1,00 0,00 21. Dybde 2_0,20 0,45 0,40_0,50 0,00 22., Længde 3_0,55 1,10 0,95_1,30 0,00 23. Bredde 3_0,45 0,95 0,60_1,00 0,00 30 24. Dybde 3_0,20 0,40 0,25_0,45 0,00 25. Bemærkninger total total total brun hud død necrose necrose necrose l,0xl,0cm efter hudskade brun lysbe- 0,7x0,7 hud hand- 35 cm 0,7xcm ling 0,65 cm TABEL V-l 30 DK 168690 B1

Forbindelse_chlorin e^_ 1. Gruppe nr._69_^^^ 5 2. Startdato-------------------------------------- 3. Mus nr._1_2_3_4_5 4. Køn_f_*2_^^ 5. Musevægt, g 23,8 21,2_21,8_22,5 21,9 6. Dosis, mg/kg 100,0 *-_^^ 10 7. Indgivnings- metode_iv_^^^_*~ 8. Tid, h_24,0 _^^_«- 9. Tumortype_SMT-F *-_^^_*- 10. Tumorposition h. ben *-_^^_<- 15 11. Lysintens.

mW/cm2_200,0 *-_^^_- 12. Lysdosis 300,0 «- *- *~ J/cm2_ 13. Bølgelængde 665 *- *- *· *- 20 ran_ 14. Injekt.dato -------------------------------------- 15. Længde 1_0,65 0,60 1,00_0,50 1,10 16. Bredde 1_0,65 0,60_0,85_0,60_0,85 17. Dybde 1_0,30 0,25 0,45_0,40 0,40 25 18. Drabsdato --------------------------------------- 19. Længde 2,_1,40 1,30 1,10_0,40 1,15 20. Bredde 2_1,00 0,95 0,90_0,40 1,00 21. 'Dybde 2_0,55 0,45 0,50_0,20 0,50 22. Længde 3_1,00 0,70 0,60_0,40 0,80 30 23. Bredde 3_0,90 1,00 0,40_0,40 0,50 24. Dybde 3_0,35 0,30 0,20_0,30 0,20 25. Bemærkninger brun hud brun brun brun hud brun 0,9x1,1 hud hud l,70x hudem 0,65x 0,55x 0,65 cm 0,8x 35 0,65 cm 0,5 cm 0,75 besvær cm_ med injektion TABEL V-2 DK 168690 Bl 31

Forbindelse_^_ 1. Gruppe nr._^^^^^_ 5 2. Startdato-------------------------------------- 3. Mus nr._6_7_8_9_10 4. Køn_^^_*2._ti_ 5. Musevægt, g 21,0 21,4_22,0_22,0_19,3 6. Dosis, mg/kg «-_^^^ 10 7. Indgivnings- metode_^^^^_«- 8. Tid, h_^^^^_«- 9. Tumortype_^^^^_«- 10. Tumorposition «-_^^^ 15 11. Lysintens.

2 mW/cm «_♦-«- «-«- 2 12. Lysdosis J/cm «-_^^^ 13. Bølgelængde nm <-_^^^ 14. Injekt.dato -------------------------------------- 20 15. Længde 1_0,85 0,90 0,70_0,75 0,95 16. Bredde 1_0,70 0,95 0,50_0,55 0,70 17. Dybde 1_0,35 0,45 0,30_0,50 0,40 18. Drabsdato ---------------------------------------- 19. Længde 2,_1,10 1,40 0,70_1,05 1,10 25 20. Bredde 2_0,90 1,25 0,60_0,90 0,80 21. Dybde 2_0,45 0,65 0,45 0,50 0,50 22♦ Længde 3_0,65 0,85_0,70_0,95_0, 50 23. ' Bredde 3_0,65 0,85 0,50_0,50 0,80 24, Dybde 3_0,25 0,20 0,25_0,30 0,25 30 25. Bemærkninger brun hud brun hud brun brun hud 0,60x 0,7x0,7cm hud 0,8x0,8 cm 0,65 muskel- 0,55x cm skade 0,55cm, 0,6x0,2cm total necrose, muskelskade 35 —— - DK 168690 Bl 32

TABEL VI

Forbindelse_deuterochlorin e^_ 1. Gruppe nr,_77_^^^_*· 5 2 ♦ Startdato-------------------------------------- 3« Mus nr._1_2_3_4_5 4. Køn_m_^_*1_!l_ 5. Musevægt, g 19,4 20,2_18,8_23,6 19,9 6. Dosis, mg/kg 100,0 ^^_*· 10 7. Indgivnings- metode_iv_^_y_*_«- 8. Tid, h_24,0 -_y_^_- 9 ♦ Tumortype_SMT-F ♦-_y_^_«- 10. Tumorposition h. ben ♦·_^^_«- 15 11. Lysintens.

mW/cm^_200,0 <-_y_^_«- 12. Lysdosis 300,0 «- «- «- «- J/cm^_ 13. Bølgelængde 655 *- *- «- «- 20 nm_ 14. Injekt.dato -------------------------------------- 15. Længde 1_0,90 1,15 0,85_1,05 1,15 16. Bredde 1_0,60 0,60 0,60_0,45 0,50 17. Dybde 1_0,45 0,40 0,45_0,30 0,30 25 18. Drabsdato --------------------------------------- 19. Længde 2,_1,20 1,15 1,10_0,70 0,90 20. Bredde 2_0,80 1,15 0,70_0,60 0,60 21.. Dybde 2_0,50 0,60 0,50_0,35 0,55 22. Længde 3_1,30 1,15 0,70_1,50 1,20 30 23. Bredde 3_0,80 1,25 0,70_0,75 0,70 24. Dybde 3_0,55 0,60 0,50_0,60 0,70 25. Bemærkninger rødt om- total rød hud rød hud rød hud råde på necrose, 0,75x 1,0x0,8 1,0x0,8 cm hud 0,75 rød hud 0,75 cm cm meget udbredt x0,65 cm,1,0x0,8cm total udbredt muskel udbredt overfla- necrose muskel skade 35 muskel- disk udbredt skade skade muskel- muskel- ____skade skade_ DK 168690 B1 33

TABEL VII

Forbindelse_mesochlorin e^_ 1. Gruppe nr._76_^^^_-_ 5 2. Startdato-------------------------------------- 3. Mus nr._1_2_3_4_5 4. Køn_m_*2_^^_*- 5. Musevægt, g 19,4 21,3_20,1_24,1 19,2 6. Dosis, mg/kg 100,0 ^^_«- 10 7. Indgivnings- metode_iv_^^^_*~ 8. Tid, h_24,0 _^^_- 9. Tumortype_SMT-F ♦·_^^_*- 10. Tumorposition h. ben ^^_*- 15 11. Lysintens.

mW/cm2_200,0 «-_^^_«- 12. Lysdosis 300,0 «- *- *- *- J/cm2_ 13. Bølgelængde 652 *- *- «- *~ 20 nm_ 14. Injekt.dato -------------------------------------- 15. Længde 1_0,45 1,25 0,95_1,10 1,00 16. Bredde 1_0,45 0,60 0,55_0,60 0,55 17. Dybde 1_0,25 0,40 0,35_0,25 0,30 25 18. Drabsdato ---------------------------------------- 19. Længde 2,_0,35 0,60 0,95_1,05 0,95 20. Bredde 2_0,35 0,55 0,65_0,55 0,65 21Dybde 2_0,15 0,40 0,50_0,40 0,50 22. Længde 3_0,35 0,00 0,10_0,10 0,00 30 23. Bredde 3_0,35 0,00 0,10_0,10 0,00 24. Dybde 3_0,15 0,00 0,10_0,10 0,00 25. Bemærkninger total ingen mente ingen necrose virk- det var virkning infektion ning 35 _ 34 DK 168690 B1 in in in o in h if to h h W V k k «.

0 o o o o

1 I I I I

a) o oooo

I Ό O Cd Cd lo O

ε .to ε » vvvv 0 μ o o oooo oo cd in o* ro o h o o o

V V V

. o oooo Ό H* H> h- H· H-

. ^ ^ CO CD OC CO

ra ε o co dj in o H- 0 ». v ^ k

M O OOOO

/»*. s-*. s-* C 'd' o in ^

—· '—' rH

v—' 1 0 ø Ό D> D> o o in in cd h C ro cn io in in

θ (¾ ε <D ID ID ID ID

CQ H C

0) Cd

I -H E O OOOO

CQ CO O O OOOO

>i O \ CO CO CO COCO

J Ό O

μ 0 i -μ cd h d -π e o oooo

H *H CO 0 O OOOO

η h to C \ cd cdcdcdcd

> H >1 Q) S

h j μ ε Η > <u i λ μι μ fo fo fo fo fo cd ω o cd μ ο ε a e eh e-· e-«

< 3 !* S 2SSS

μ &H Ε μ CO CO CO CO CO

μ a) h μ 0 Λ μ i ό <d η ό μ Φ μ co ^ C ε ε > cd cd cd cd cd

0 H

ε -σε ε -η ø σι ca Ei η o

CQ

ø μ · ό

0 ICO

Ό>μ > >>>> η C μ 0 μ ·η μ μ ·η η Η Di ε > Η Dl

Η X

Η \ I Dl Η - Όε Ο ΟΟΟΟ CD CQ μ ΟΟΟΟΟ λ με* μ η >Η <-ι η Λ C0 Η μ Ο μ 0

Q (0 Ό CD

0 0 μ μ c cd μ 0 0 μ C 0 ο c μ CQ ίο ιο ιο η μ 0 η ι 0 ι 0 0 c μ μ 0 Η Η ϋ Ο

(0 Ό C >i C C OH

μ C μ μ ε μ μ μ Λ η μ ομμμμοο c λ οοοοομο CQ μ c η μ η η 3 w 0 ο I Λ I Λ X! 0 0

Pi fo Ν Ο Cd Q Ο Ό Ε 35 DK 168690 B1

Fremstilling af farmakologiske doseringsformer til ind-givning af den aktive ingrediens, dvs aminosyre-porphy-rin-additionsprodukterne, som er fremstillet i de forudgående eksempler, kan ske som følger: 5 EKSEMPEL 9

Der blev fremstillet en tablet-grundmasse ved blanding af de følgende ingredienser i de angivne vægtmængder: 10

Gram

Sucrose, U.S.P. 80,3

Tapiocastivelse 13,2

Magnesiumstearat 4,4 15 I denne grundmasse blev der iblandet tilstrækkeligt por-phyrin-additionsprodukt til at give tabletter, som hver indeholdt 100 mg aktiv ingrediens.

20 EKSEMPEL 10

Der blev fremstillet en blanding indeholdende de følgende ingredienser: 25 Calciumphosphat 17,6

Dicalciumphosphat 18,8

Magnesiumtrisilicat, U.P.S. 5,2

Lactose, U.S.P. 5,2

Kartoffelstivelse 5,2 30 Magnesiumstearat A 0,8

Magnesiumstearat B 0,32

Porphyrinadditions- produkt 20 35 Denne blanding blev delt og formet til kapsler, som hver indeholdt 25 mg aktiv ingrediens.

EKSEMPEL 11 36 DK 168690 B1

Til en kommercielt tilgængelig hindbær aromat i seret sukkersirup sættes ækvivalentet til 40 mg af porphyrin-ad-5 ditionsproduktet pr. ml, og blandingen homogeniseres i en mekanisk indretning til dette formål. Blandingen er særligt egnet til oral indgivning indeholdende 200 mg af den aktive ingrediens.

10 EKSEMPEL 12

Der fremstilles en steril opløsning med følgende sammensætning: 200 mg af natriumsaltet af porphyrin-additions-produktet opløses i en 0,9% NaCl-opløsning, således at 15 den endelige koncentration er 20 mg/ml.

Denne opløsning er egnet til intravenøs og intramuskulær indgivning.

20 EKSEMPEL 13

Natriumsaltet af porphyrin-additionsproduktet opløses i 0,9% NaCl-opløsning, således at den endelige koncentration er 5 mg/ml. Denne opløsning anbringes i en aerosol-25 beholder med et carbonhydrid-drivmiddel. Dette præparat er egnet til topisk påføring.

EKSEMPEL 14 30 Fremstilling af et metalsalt

Natriumsaltet af porphyrin-additionsproduktet fremstilles ved opløsning af additionsproduktet i vand indeholdende en ækvimolær mængde natriumhydroxid og frysetørring af 35 den resulterende blanding. På denne måde fremstilles også andre metalsalte, herunder kalium-, calcium- og lithium-salte.

37 DK 168690 B1

Fremstilling af et syresalt

De i de forudgående eksempler beskrevne porphyrin-addi-tionsprodukter omdannes til syresalte, f.eks. hydrochlo-5 ridet ved opløsning i en vandig opløsning indeholdende en ækvivalent mængde syre, f.eks. saltsyre, og efterfølgende inddampning af opløsningen til tørhed, hvorved der opnås det faste salt. Alternativt kan der i stedet for den vandige syreopløsning anvendes alkoholiske opløsninger af 10 hydrogenchloridgas, og syresaltet opnås ved afdampning af opløsningsmidlet eller krystallisation fra alkoholen, f.eks. ved tilsætning af et ikke-opløsningsmiddel.

15 20 25 30 35

Claims (4)

1. Farmaceutisk præparat til detektion og/eller behand-5 ling af pattedyr tumorer, kendetegnet ved, at det omfatter mindst én lysfølsom tetrapyrrolforbindelse med formlen: y e 10 ΊΓ V I ' /=rM Λ NH HN c

15 M-—/ C00H N i—/ y=l D CH- \ 1 M-l-:--'H cooh -

20 H (?H2'2 COOH eller perhydroderivater deraf, hvori 25 X = H, vinyl, ethyl, acetyl eller formyl, Y = methyl, formyl eller CH I methyl, M = methyl, og

30 E = ethyl eller j H ^ethyl, eller farmaceutisk acceptable salte deraf, hvilken forbindelse kan aktiveres af lys med tilstrækkelig bølgelængde, så den udsender fluorescens eller udøver en cel-35 ledræbende virkning på en tumor, idet den celledræbende forbindelse ikke er chlorin ec. 5 DK 168690 B1

2. Farmaceutisk præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at X = H, vinyl, ethyl, acetyl eller formyl,

5 Y = methyl eller formyl, M = methyl, og E = ethyl.

3. Farmaceutisk præparat ifølge krav 1, kendeteg-10 net ved, at tetrapyrrolforbindelsen er mesochlorin e^, bacteriochlorin e^, 2-desvinylchlorin e^, 2-acetylchlorin e^, 2-formylchlorin e^ eller rhodin g^.

4. Farmaceutisk præparat ifølge krav 1 til detektion af 15 pattedyrtumorer, kendetegnet ved, at tetrapyrrolforbindelsen, som kan aktiveres til udsendelse af fluorescens, er chlorin e^. 20 25 30 35