JP5290142B2

JP5290142B2 - 新規な糖連結クロリン誘導体

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Publication number: JP5290142B2
Application number: JP2009500148A
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Inventors: 誠小幡; 重信矢野; 志保廣原
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Description

本発明は、光毒性が高い新規な糖連結クロリン誘導体、並びに当該クロリン誘導体を用いた医薬に関する。

光線力学的療法（ＰＤＴ）は、標的となる疾患組織中に光感作性物質を投与して、癌または腫瘍組織や病変部に集積させた後、適当な波長の光を照射することにより、癌組織のみを選択的に破壊する治療方法である。ＰＤＴは、光感作性物質が特定波長の光により励起され、生体組織に傷害的に作用することを利用したもので、活性化された光感作性物質からの直接的または間接的なエネルギー移動による分子状酸素からの一重項酸素の生成が、腫瘍破壊の主因であると現在考えられている。

ＰＤＴに用いられる光感作性物質としては、ポルフィリン誘導体がよく知られており、ポリヘマトポルフィリンエーテル（例えば、フォトフリン（登録商標））やタラポルフィリンナトリウムなどのように、すでに実用化されているものもある。しかし、ヘマトポルフィリンやその２量体の最大吸収波長は６３０ｎｍであり、モル吸光係数も３０００と低いため、ＰＤＴの治療効果が５〜１０ｍｍの表層癌に限定されてしまっている。また、光過敏症といった副作用の問題もある。このため、適用範囲が広く、副作用が少ない種々のポルフィリン誘導体が研究され、提案されている。

一般に、ＰＤＴは、癌、腫瘍組織だけでなく、正常組織も損傷させることになるため、できるだけ少量で光毒性を示す光感作性物質を使用することが求められる。また、副作用軽減の点から、光が照射されない条件下では、細胞毒性が低いことが求められる。近年、ポルフィリン環に糖を連結することにより、光照射下での強い細胞毒性を維持しながら、暗所下での細胞毒性を軽減できることが見出され、糖連結ポルフィリン誘導体をＰＤＴ用薬剤へ利用することが提案されている。

例えば、特許文献１には、Ｏ−グリコシル化により、グルコース等の単糖類又はアセチル化単糖類をフェニル基に結合させた、テトラフェニルバクテリオクロリン誘導体及びその金属錯体が提案されている。
このＯ−グリコシル化テトラフェニルバクテリオクロリン誘導体は、まず、アセチル化糖でＯ−グリコシル化したテトラフェニルポルフィリン誘導体を製造し、次いで炭酸アルカリ金属存在下、還元剤により還元して、テトラフェニルバクテリオクロリン誘導体とし、次いで、アルカリ処理して、アセチル化糖の脱アセチルを行なって、単糖類残基の水酸基を遊離の状態とすることにより製造している。

そして、５，１０，１５，２０−テトラキス〔３−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）フェニル〕バクテリオクロリン、５，１０，１５，２０−テトラキス〔３−（β−Ｄ−アラビノピラノシルオキシ）フェニル〕バクテリオクロリン、５，１０，１５，２０−テトラキス〔３−（β−Ｄ−キシロピラノシルオキシ）フェニル〕バクテリオクロリンを合成し、これらのＯ−グリコシル化バクテリオクロリン誘導体が７４０ｎｍ付近に強い吸収ピークをもつこと、これらのバクテリオクロリン誘導体に光を照射すると、細胞毒性を示すことが開示されている。

また、非特許文献１には、５，１０，１５，２０−テトラキス〔３−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）フェニル〕クロリン等のＯ−グリコシル化クロリン誘導体を合成して、この化合物が暗所では細胞毒性を示さないが、光照射により細胞毒性を示したと報告している。

さらに、特許文献２には、Ｓ−グリコシル化により、ガラクトース、キシロース、グルコース等の単糖類、マルトース等の二糖類を連結させたポルフィリン誘導体が提案されている。具体的には、ハロゲン化アルコキシフェニルポルフィリン誘導体にチオ糖アセチルを反応させて、アルコキシ基のハロゲンとチオ−糖アセチルとを置換反応し、次いで脱アセチル化により、Ｓ−グリコシル化アルコキシポルフィリン誘導体を製造している。また、アルコキシフェニル基に代えて、ペンタフルオロフェニル基がポルフィリン環に結合している場合には、ペンタフルオロフェニルポルフィリンにチオ糖アセチルを反応させることにより、Ｓ−グリコシル化テトラフルオロフェニルポルフィリンを合成している。

そして、これらの糖連結ポルフィリン誘導体は、光照射により細胞毒性を示し、グリコシル化されていない類似のポリフィリン誘導体よりも光毒性活性が強いことを開示している。
特許文献２には、所望であれば、Ｍｇ、Ｚｎ、Ｓｎなどで処理して金属複合体としてもよいとの記載はあるが、合成例は示されていない。

Ｓ−グリコシル化テトラフェニルポルフィリンについては、非特許文献２でも報告されている。テトラ（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリン（ＴＰＰＦ_２０）を合成し、このＴＰＰＦ_２０と糖のチオアセテート誘導体とを反応させることにより、５，１０，１５，２０−テトラキス（４，１’−チオ−グルコシル−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル）ポルフィリン等のＳ−グリコシル化テトラ（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリンを合成し、これらのポルフィリン誘導体を細胞と接触させた後、光照射により細胞死が観察できること、さらに糖の種類により光毒性が異なることを報告している。

ＷＯ２００２−０２０５３６特表２００５−５００３３５ Shiho Hiroharaら、「Sugar-dependent aggregation of glycoconjugated chlorins and its effect on photocytotoxicity in HeLa cells」Journal of Photochemistry and Photobiology B：Biology 84（2006）56-63 Xin Chenら、「Efficient Synthesis and Photodynamic Activity of Porphyrin−Saccharide Conjugates：Targeting and Incapacitating Cancer Cells」、Biochemistry 2004，43，10918-10929

以上のように、糖連結ポルフィリン、クロリン誘導体についても、開発、研究が進められているが、光毒性、安全性、さらに生産性の点で更なる改良余地がある。本発明では、暗所では安定で、少量で高い光毒性を示し、生産性に優れた新規な糖連結クロリン誘導体を提供することにある。

本発明者らは、種々の糖連結ポルフィリン誘導体、クロリン誘導体を検討した結果、光線力学的治療用剤として有用な、暗所で安定で且つ少量で高い光毒性を示すことができる光感作物質となる、新規な糖連結型クロリン誘導体を見出した。

よって、本発明は、新規な糖連結型クロリン誘導体である、下記一般式（１）で表されるＳ−グリコシル化クロリン誘導体又は下記一般式（２）で表されるＳ−グリコシル化クロリン誘導体の金属錯体を提供する。

【００１７】
【００１７】
式中、Ｘ^１〜Ｘ^２０は、互いに独立して、Ｆ−、グルコース−Ｓ−、グルコース−Ｚ−Ｓ−、及びグルコース―Ｏ−Ｚ−Ｓ−からなる群から選ばれる１つの基で、且つＸ^１〜Ｘ^２０のうち少なくとも１つはグルコース−Ｓ−、グルコース−Ｚ−Ｓ−、及びグルコース−Ｏ−Ｚ−Ｓ−からなる群から選ばれる１つの基であり（ここで、Ｆはフッ素原子、Ｓは硫黄原子、Ｏは酸素原子、Ｚは炭素数１〜６の炭化水素基である）、Ｒ^５及びＲ^６は、互いに独立して水素原子、低級アルキル又はＱ−（ＣＨ _２） _ｋ −（ここで、Ｑは低級アルキル、アリール、アミノ、低級アルキルアミノ、イミノ、低級アルキルイミノ、又はシクロアルキル基であり、ｋは０〜３の整数である）であり、互いに環を形成していてもよい。

好ましくは下記（１）’式、（２）’式で表されるように、クロリン環に対してｐ位にあるＸ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、及びＸ^４のうちの少なくとも１つがグルコース−Ｓ−、グルコース−Ｚ−Ｓ−、及びグルコース−Ｏ−Ｚ−Ｓ−からなる群から選ばれる１つの基であり、クロリン環に対してｏ位及びｍ位がフッ素原子の場合のＳ−グリコシル化クロリン誘導体又はその金属錯体である。より好ましくは、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、及びＸ^４の全てがグルコース−Ｓ−の場合である。

グルコースはＤ体であることが好ましい。

本発明は、上記クロリン誘導体又はその金属錯体を有効成分とする、医薬、特に、腫瘍若しくは固形癌、又は皮膚病の光線力学的治療用剤を提供する。

本発明の糖連結クロリン誘導体は、暗所で毒性がなく、光照射下で強い細胞毒性を示すことができる。

本発明の糖連結クロリン誘導体の製造方法の一実施形態を説明するための図である。本発明の糖連結クロリン誘導体の製造方法の一実施形態を説明するための図である。薬剤濃度０．５μＭのときの光毒性試験の結果を示すグラフである。薬剤濃度０．０９μＭのときの光毒性試験の結果（Ｎｏ．６，７，８，９，１４，１５）を示すグラフである。薬剤濃度０．０９μＭのときの光毒性試験の結果（Ｎｏ．８，１６）を示すグラフである。薬剤濃度０．５μＭのときの暗所における細胞毒性試験の結果を示すグラフである。実施例４（Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＣＨ_２ＣＨ_２ＯＡｃＧｌｃ）のＥＳＩ−ＭＳスペクトルである。実施例４（Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＣＨ_２ＣＨ_２ＯＡｃＧｌｃ）のＥＳＩ−ＭＳスペクトルのシミュレーション結果である。実施例５（Ｈ_２ＴＦＰＣ’−ＳＡｃＧｌｃ）のＥＳＩ−ＭＳスペクトルである。実施例５（Ｈ_２ＴＦＰＣ’−ＳＡｃＧｌｃ）のＥＳＩ−ＭＳスペクトルのシミュレーション結果である。

〔Ｓ−グリコシル化クロリン誘導体及びその製造方法〕
本発明は、新規な光感作性物質として、下記一般式（１）で示されるＳ−グリコシル化クロリン誘導体を提供する。

式中、Ｘ^１〜Ｘ^２０は、互いに独立して、Ｆ−、糖−Ｓ−、糖−Ｚ−Ｓ−、及び糖−Ｏ−Ｚ−Ｓ−からなる群から選ばれる１つの基で、且つＸ^１〜Ｘ^２０のうち少なくとも１つは糖−Ｓ−、糖−Ｚ−Ｓ−、及び糖−Ｏ−Ｚ−Ｓ−からなる群から選ばれる１つの基である。

ここで、Ｆはフッ素原子、Ｓは硫黄原子、Ｏは酸素原子、Ｚはメチレン基、エチレン基、プロピレン基、α−ブチレン基、β−ブチレン基、シクロへキシレン、ｏ−フェニレン基、ｍ−フェニレン基、ｐ−フェニレン基等の炭素数１〜６の炭化水素基である。

本発明のグリコシル化クロリン誘導体は、クロリンに結合している４個のフェニル基のうち、少なくとも１つがＳ−グリコシル化されていればよく、クロリン環に対して、ｏ位、ｍ位、ｐ位のいずれかがＳ−グリコシル化されていればよい。また、各フェニル基において、２個以上がＳ−グリコシル化されていてもよい。

好ましくは、下記（１）’式に示すように、各フェニル基において、クロリン環に対してｐ位にあるＸ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、及びＸ^４の少なくともいずれかが糖−Ｓ−、糖−Ｚ−Ｓ−、及び糖−Ｏ−Ｚ−Ｓ−からなる群から選ばれる１つの基で、ｏ位、ｍ位はフッ素原子の場合であり、より好ましくは、ｐ位にあるＸ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、及びＸ^４の全てがグリコシル化されている。また、糖は、チオ基に直接連結されていてもよいし、Ｓと糖との間に、−Ｚ−、−Ｏ−Ｚ−の連結基が介在していてもよい。好ましくは、糖はチオ基に直接連結されている。

連結される糖としては、下記式で表されるペントース又はヘキソースなどの単糖類；ショ糖、マルトース、ラクトースなどの２糖類；デンプン、アミロース、グリコーゲンなどの多糖類などが挙げられるが、好ましくは単糖類であり、より好ましくはペントース又はヘキソースである。単糖類は、Ｄ体であってもよいし、Ｌ体であってもよいが、Ｄ体が好ましく用いられる。

ペントースとしては、アラビノース、キシロース、ラムノースなどがある。また、ヘキソースとしては、具体的には、グルコース、ガラクトース、マンノース、アロース、アルトロース、グロース、イドース、タロースがあり、これらのうち、グルコースが最も好ましく用いられる。グルコースのときの光毒性が優れているからである。

（１）及び（１）’式中、Ｘ^１〜Ｘ^２０のうち、２つ以上が糖−Ｓ−、糖−Ｚ−Ｓ−、及び／又は糖−Ｏ−Ｚ−Ｓ−（以下、これらの基を特に区別しないときは、「Ｓ−グリコシル化基」と総称する）に置換されている場合、連結される糖の種類は同一であってもよいし、異なっていてもよい。また、単糖類と多糖類といった異なる種類の糖が連結されていてもよい。好ましくは、糖の種類が全て同一の場合であり、より好ましくは、置換されているＳ−グリコシル化基に含まれている糖の全てがグルコースの場合である。

上記（１）及び（１）’式中、Ｒ^５及びＲ^６は、水素原子又は互いに独立した有機基である。
前記有機基としては、例えば、低級アルキル又はＱ−（ＣＨ_２）_ｋ−である。Ｑは、低級アルキル、アリール、アミノ、低級アルキルアミノ、イミノ、低級アルキルイミノ又はシクロアルキル基である。ここで、低級アルキルとは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル等の炭素数１〜５の直鎖又は分岐アルキルをいう。ｋは０〜３の整数である。
Ｒ^５とＲ^６が互い環を形成していてもよく、例えば、Ｒ^５とＲ^６で、ポルフィリン環の１〜２４番号法でＡ環の２位、３位に結合するイミノ基、第３級アミンを構成していてもよい。

以上のようなＳ−グリコシル化クロリン誘導体の好ましい具体例としては、５，１０，１５，２０−テトラキス〔４−（β−Ｄ−グルコピラノシルチオ）−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル〕クロリン、５，１０，１５，２０−テトラキス〔４−（β−Ｄ−グルコピラノシルチオ）−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル〕−２，３−〔メタノ（Ｎ−メチル）イミノメタノ〕クロリンなどが挙げられる。

以上のような構成を有するＳ−グリコシル化クロリン誘導体は、暗所では細胞毒性は示さないが、光照射下で強い細胞毒性を示すことができる。特に、Ｏ−グリコシル化クロリン誘導体よりも、強い細胞毒性を有する。そして、ポルフィリン誘導体と比べて長波長における吸収が大きく（吸収極大波長６５０ｎｍ）、また糖の連結により化合物は水溶性となり、さらに細胞親和性、細胞透過性も高くなっているようである。

次に、本発明のＳ−グリコシル化クロリン誘導体の製造方法について説明する。本発明のＳ−グリコシル化クロリン誘導体の製造方法は、テトラフェニルポルフィリンのＡ環を還元反応又は付加反応に供してテトラフェニルクロリンとする工程を経て、テトラキス（ペンタフルオロフェニル）クロリンを得る工程；及び該テトラキス（ペンタフルオロフェニル）クロリンと糖又は糖誘導体のチオールエステルと反応させて、Ｓ−グリコシル化する工程を含む。

クロリンに結合している芳香環のフッ素化は、ポルフィリンをクロリンに変換した後行なってもよいが、予めフッ素化された芳香環が結合したポルフィリン、すなわちテトラキス（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリンを用いて、これをクロリンに変換することが好ましい。すなわち、本発明の好ましいＳ−グリコシル化クロリン誘導体の製造方法は、テトラキス（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリンのＡ環を還元反応又は付加反応に供してテトラキス（ペンタフルオロフェニル）クロリンとする工程；得られた反応混合物からテトラキス（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリンを分離除去し、テトラキス（ペンタフルオロフェニル）クロリンを得る工程；及び該テトラキス（ペンタフルオロフェニル）クロリンと糖又は糖誘導体のチオールエステルと反応させて、Ｓ−グリコシル化する工程を含む。

以下、テトラキス（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリンを用いた場合について、本発明の製造方法を、図１を参照しつつ詳述する。

まず、５，１０，１５，２０−テトラキス（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリン（Ｈ_２ＴＦＰＰと略記）を出発原料とし、ポルフィリン環の１〜２４番号法における２、３位（ピロール環Ａ環）を還元して、あるいは適宜化合物を付加することにより、クロリン環にする。還元は、約３当量の炭酸アルカリ金属の存在下、それぞれの基にもっとも適した量の還元剤、例えばヒドラゾン、セミカルバゾン、ｐ−トルエンスルホニルヒドラジドを用いて行なうことができる。また、付加反応の場合、１，３−ジヒドロベンゾチオフェン２，２−ジオキシド、Ｎ−メチルグリシンとパラホルムアルデヒドの組合わせ等をピロール環Ａ環の２、３位に環化付加反応させることによって、Ａ環の二重結合を一重結合としてもよい。あるいは、臭化ベンジル等のハロゲン化ベンジル、ハロゲン化アルキルなどを、水素化トリブチル錫などの連鎖移動剤の存在下で、ピロール環Ａ環に付加反応させることによってＡ環の二重結合を一重結合としてもよい。

反応後、Ｈ_２ＴＦＰＰを反応混合物から分離除去する。分離除去方法としては、再結晶、シリカゲルクロマトグラフィー、ゲル浸透クロマトグラフィー等により行なうことができる。
ポルフィリン誘導体の分離除去後、得られたテトラキス（ペンタフルオロフェニル）クロリン誘導体に、糖のチオールエステル（糖−ＳＲ）を作用させて、糖スルフィドをテトラフルオロフェニル基に連結させて、Ｓ−グリコシル化テトラフルオロフェニルクロリン誘導体（Ｈ_２ＴＦＰＣ−Ｓ−糖）を得る。図１に示すＨ_２ＴＦＰＣ−Ｓ−糖は、４個のフェニル基全てのｐ位に糖が連結した場合を示している。Ｈ_２ＴＦＰＣ−Ｓ−糖において、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４は糖−ＳＲに由来する糖残基である。

加える糖のチオールエステル（糖−ＳＲ）の量は、クロリン環に連結している４個のペンタフルオロフェニル基のうち、糖を連結しようとするフェニル基の数に応じて設定すればよい。例えば、過剰量の糖のチオールエステルを添加した場合には、クロリン環に結合している４個のフェニル基のうちの１個以上のフェニル基に２個以上の糖が連結することになり、過小量の糖のチオールエステルしか添加しなかった場合には、クロリン環に結合している４個のフェニル基のうち、Ｓ−グリコシル化されないフェニル基も残存した糖連結クロリンが得られることになる。

好ましくは、クロリン環に連結している４個全てのペンタフルオロフェニル基のｐ位がＳ−グリコシル化されるように、糖のチオールエステルの添加量を調整し、リサイクル法を用いたゲル濾過クロマトグラフィを併用することにより、Ｓ−グリコシル化工程を行なうことが好ましい。尚、使用する糖−ＳＲを構成するＲ基としては、Ｒがアシル基、アルキル基等が挙げられる。

また、糖のチオールエステル（糖−ＳＲ）中の糖としては、糖分子中の水酸基をアシル基等の保護基で保護したものを用いることが好ましい。保護基としては、アセチル、ピバロリル等の脂肪族アシル基；ベンゾイル基等の芳香族アシル基；ベンジル基等のアラルキル基が挙げられる。これらの保護基のうち、アセチル基が特に好ましい。

保護基で水酸基がブロックされている糖を使用した場合には、次いで、アルカリ処理等により、保護基を脱離除去する。保護基がアシル基の場合には、アルカリ溶液を加えて加水分解すればよい。例えば、ジクロロメタン、メタノール、エタノール、テトラヒドロフランあるいはこれらの混合溶媒中、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、ナトリウム−ｔ−ブトキシド、カリウムメトキシド、カリウムエトキシド、カリウム−ｔ−ブトキシド等のアルカリ金属アルコキシドのようなアルカリを用いて、保護された化合物を処理することにより、保護基を除去する。保護基がアラルキル基の場合には、パラジウム触媒を使った水素添加により除去することができる。保護基が結合した糖では、細胞内への薬剤の移行が妨げられ、細胞毒性効果が得られないからである。

チオ基と糖との間に連結基Ｚ又は−Ｏ−Ｚ−が介在する場合、テトラキス（ペンタフルオロフェニル）クロリン誘導体に作用させる糖のチオールエステルとして、連結基を有するチオールエステル（糖−Ｚ−ＳＲ又は糖−Ｏ−Ｚ−ＳＲ）を用いればよい。

以上のような製造方法では、グリコシル化の前に、ポルフィリンをクロリンに変換しているので、ポルフィリンからクロリンへの変換工程の条件の設定が容易となる。すなわち、糖は１２０℃くらいで分解してしまい、またこれ以上の高温では糖とポルフィリン骨格との結合が切断されてしまうおそれがあるため、この変換工程をそれ以上の高温を必要とするような反応を行なわせることができなかった。この点、グリコシル化前であれば、例えば、ポルフィリン骨格のピロールＡ環の環化付加反応（通常、１２０℃以上の加熱必要）によってもクロリン変換工程を行なうことができる。
また、ポルフィリン骨格誘導体とクロリン骨格誘導体の混合物から、クロリン骨格誘導体を分離精製する場合、糖連結ポルフィリン誘導体混合物から糖連結クロリン誘導体を分離精製する場合と比べて、糖が連結していないポルフィリン誘導体から糖が連結されていないクロリン誘導体を分離精製する方が容易であり、分離精製効率が高い。ひいては生産性に優れている。

〔金属錯体タイプのＳ−グリコシル化クロリン誘導体及びその製造方法〕
本発明は、また、新規な光感作性物質として、下記一般式（２）で示されるＳ−グリコシル化クロリン誘導体を提供する。

（２）式中、Ｘ^１〜Ｘ^２０、Ｒ^５及びＲ^６は、（１）式の場合と同様である。
Ｍは金属であり、具体的には、遷移金属、II族、III族、ＩＶ族の金属であり、好ましくは、Ｐｔ、Ｐｄ、Ａｕ、Ａｌ、Ｚｎ等の遷移金属であり、より好ましくはＰｔ、Ｐｄ、Ａｕといった貴金属である。金属の導入により光照射下での細胞毒性が高められ、特に、貴金属の導入の場合に細胞毒性向上効果が大きい。また、Ｐｔ、Ｐｄ、Ａｕ等の貴金属導入反応は高温で行なわなければならず、糖との関係で従来の方法では導入が困難であったが、後述する本発明の製造方法により、高収率で製造することができる。

本発明の金属錯体タイプのＳ−グリコシル化クロリン誘導体としては、好ましくは、下記（２）’式に示すように、クロリン環に対してｐ位にあるＸ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、及びＸ^４の少なくともいずれかが糖−Ｓ−、糖−Ｚ−Ｓ−、及び糖−Ｏ−Ｚ−Ｓ−からなる群から選ばれる１つの基で、ｏ位、ｍ位はフッ素原子の場合であり、より好ましくは、ｐ位にあるＸ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、及びＸ^４の全てがグリコシル化されているものである。

以上のような構成を有するＳ−グリコシル化クロリン誘導体の金属錯体は、金属が導入されていないＳ−グリコシル化クロリン誘導体を製造した後、該当する金属の塩酸塩、硫酸塩等の金属塩を作用させることによって、所望の金属錯体を製造してもよいが、次に述べる本発明の製造方法により製造することが、糖の安定性、精製のしやすさなど、生産性の点から好ましい。

本発明のＳ−グリコシル化クロリン誘導体の金属錯体の製造方法は、テトラフェニルポルフィリンのポルフィリンのＡ環を還元反応又は付加反応に供してテトラフェニルクロリンを得る工程、及びテトラフェニルポルフィリン又はテトラフェニルクロリンと金属塩とを反応させる工程を経てテトラキス（ペンタフルオロフェニル）クロリンの金属錯体を得る工程；並びに該テトラキス（ペンタフルオロフェニル）クロリンの金属錯体に、糖又は糖誘導体のチオールエステルを反応させてＳ−グリコシル化する工程を含む。

クロリン環に結合している芳香環のフッ素化は、金属塩との反応後であってもよいし、反応前であってもよい。いずれの場合でも、Ｓ−グリコシル化前に金属を導入しているので、反応混合物から目的とするテトラフェニルクロリンの金属錯体の分収効率が高く、Ｓ−グリコシル化クロリン誘導体の金属錯体の生産性に優れている。さらに、糖又は糖誘導体のチオールエステルとの反応を、目的とするテトラフェニルクロリンの金属錯体を得た後に行なっているので、金属導入のための反応、ポルフィリン環からクロリンへの反応条件を広範囲から選択することができる。

より好ましくは、まず、テトラフェニルポルフィリンのポルフィリンと金属塩を反応させてテトラフェニルポルフィリンの金属錯体を得た後、ポルフィリン環のＡ環を還元反応又は付加反応に供してテトラフェニルクロリンとする方法である。これにより、テトラフェニルクロリンの金属錯体の収率をより高めることが可能である。

本発明のＳ−グリコシル化クロリン誘導体の金属錯体の製造方法において、予めフッ素化された芳香環が結合したポルフィリン、すなわち、テトラキス（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリンを用いることが、より好ましい。従って、好ましいＳ−グリコシル化クロリン誘導体の金属錯体の製造方法は、テトラキス（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリンと金属塩とを反応させてテトラキス（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリンの金属錯体を得る工程；前記テトラキス（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリン金属錯体のポルフィリンのＡ環を還元反応又は付加反応に供してテトラキス（ペンタフルオロフェニル）クロリンの金属錯体とする工程；得られた反応混合物からテトラキス（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリンの金属錯体を分離除去し、テトラキス（ペンタフルオロフェニル）クロリンの金属錯体を得る工程；及び該テトラキス（ペンタフルオロフェニル）クロリンの金属錯体に、糖又は糖誘導体のチオールエステルを反応させてＳ−グリコシル化する工程を含む。

以下、テトラキス（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリンを用いた場合について、本発明の製造方法を、図２を参照しつつ詳述する。

まず、出発原料となる５，１０，１５，２０−テトラキス（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリン（Ｈ_２ＴＦＰＰと略記）に、金属Ｍを導入する。金属Ｍの導入は、塩化物、臭化物、ヨウ化物、カルボン酸塩など、有機酸、無機酸との塩を、Ｈ_２ＴＦＰＰと反応させることにより行なう。
例えば、Ｈ_２ＴＦＰＰと導入しようとする金属塩を適当な有機溶媒中に懸濁して加熱還流し、得られた反応混合物を冷却後、減圧濃縮して、カラムクロマトグラフィにより目的成分を分収すればよい。

加熱条件は、金属の種類により適宜設定される。亜鉛等のイオン半径の小さな金属の場合には、３０〜１００℃で５〜２５時間程度の加熱でよいが、Ｐｄ、Ｐｔ等のイオン半径の大きな金属を導入する場合、２００〜２５０℃で８０〜１００時間の加熱が必要となる。糖が連結される前に行なうので、ポルフィリン骨格が安定に存在できる条件であればよいことから、このような高温、長時間の加熱を行なうことができる。

次いで、得られたＨ_２ＴＦＰＰの金属錯体（ＭＴＦＰＰと略記）を、還元する。還元方法は、前述のテトラキス（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリン誘導体からクロリン誘導体への変換工程で行なった還元反応、付加反応と同様の方法にて行なうことができる。図２中、得られるテトラキス（ペンタフルオロフェニル）クロリン誘導体を、ＭＴＦＰＣで示す。

次に、Ｓ−グリコシル化する（図２中、得られるＳ−グリコシル化クロリン誘導体を、ＭＴＦＰＣ−Ｓ−糖で示す。このＭＴＦＰＣ−Ｓ−糖は、４個のペンタフルオロフェニル基の全てがＳ−グリコシル化された場合を示している。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４は糖−ＳＲに由来する糖残基である）。グリコシル化の方法も、前述のＳ−グリコシル化クロリン誘導体の製造で行なった方法と同様の方法にて行なうことができる。糖の保護基除去が必要な場合、保護基除去方法も、前述のＳ−グリコシル化クロリン誘導体の製造で行なった方法と同様の方法により行なうことができる。

チオ基と糖との間に連結基Ｚ又は−Ｏ−Ｚ−が介在する場合、得られたテトラキス（ペンタフルオロフェニル）クロリン誘導体に作用させる糖のチオールエステルとして、連結基を有するチオールエステル（糖−Ｚ−ＳＲ又は糖−Ｏ−Ｚ−ＳＲ）を用いればよい。

本発明の製造方法によれば、クロリン骨格への金属の導入を、グリコシド化より先に行なっているので、金属導入反応条件の許容範囲が広くなる。従って、従来、Ｏ−グリコシル化クロリン誘導体の金属錯体の場合には、糖の安定性との関係から、１００℃以下程度の加熱条件で導入できる金属の錯体しか合成できなかったが、本発明の製造方法によれば、それよりも高温、長時間の加熱還流が必要となるＰｔ、Ｐｄ等の貴金属の導入が可能となり、より光毒性が高い金属錯体を得ることができる。

以上のような金属錯体タイプのＳ−グリコシル化クロリン誘導体の吸収帯は、金属の導入により６００ｎｍ付近となるが、Ｓ−グリコシル化クロリン誘導体と同様に、糖残基の導入により水溶性を示し、また暗所下では細胞毒性を示さないが、光照射下で強い細胞毒性を示す。Ｓ−グリコシル化クロリン誘導体の場合と同様に、光照射下での細胞毒性は、Ｏ−グリコシル化クロリン誘導体の金属錯体よりも大きい。

〔用途〕
上記本発明のＳ−グリコシル化クロリン誘導体は、暗所下では細胞毒性を示さないが、光照射下で強い細胞毒性を示すことを利用して、標的となる生物材料と、暗所下でインビトロ又はインビボで接触させて、細胞内に取り込ませた後、クロリン誘導体の吸収波長の光を照射することにより、標的を破壊する用途に用いることができる。
ここで、標的としては、ウィルス又はバクテリア又はこれらの感染細胞；腫瘍；腫瘍状組織などが挙げられ、特に腫瘍組織に親和性を有し、腫瘍部に集積できることから、腫瘍の破壊に用いることができる。

従って、本発明のＳ−グリコシル化クロリン誘導体及びその金属錯体は、悪性腫瘍（malignant tumor）に分類される癌（cancer）の治療薬として利用できる。本発明で対象とする悪性腫瘍は、上皮性悪性腫瘍だけでなく、肉腫（saucoma）に分類されるような非上皮組織を発生母地とするような悪性腫瘍も含む。特に腫瘍細胞が塊状、充実性に増殖する固形癌（solid carcinoma）、光が届く表層癌の治療に有用である。具体的には、食道癌、肺癌、胃癌、子宮頸癌、子宮体癌等の子宮癌、皮膚癌、前立腺癌、腎臓癌などが挙げられる。皮膚癌には、原発性（扁平上皮癌、基底細胞癌、表皮付属機癌）の他、内臓癌の皮膚転移も含まれる。

また、本発明のＳ−グリコシル化クロリン誘導体及びその金属錯体は、悪性腫瘍だけでなく、良性腫瘍に対しても親和性を有することから、局所投与により、日光角化症、皮膚乾癬症等の皮膚病の光線力学的治療薬としての利用も可能である。

さらに、本発明のＳ−グリコシル化クロリン誘導体の腫瘍集積性を利用して、ＰＥＴ等との併用により、癌の診断に利用することも可能である。

本発明のＳ−グリコシル化クロリン誘導体の最大吸収波長が６５０ｎｍとポルフィリン系化合物よりも長波長となり、特に、水溶性で組織内部への浸透を期待できるので、表層癌だけでなく、表皮よりも深い領域にある腫瘍又は固形癌に対する適用が期待できる。一方、本発明のＳ−グリコシル化クロリン誘導体の金属錯体の吸収波長は６００ｎｍ付近であることから、光が届く表層癌や皮膚病の光線力学的治療薬、診断薬に適している。

〔医薬組成物〕
本発明の医薬組成物は、上記本発明のＳ−グリコシル化クロリン誘導体（金属錯体タイプを含む）（以下、特に区別しない場合は、本項目欄において、両者をまとめて「Ｓ−グリコシル化クロリン誘導体」という）を有効成分として含有し、製薬学的に許容できる固体又は液体状の担体を含有する。
有効成分であるＳ−グリコシル化クロリン誘導体及びその金属錯体は、上述のように、いずれも水溶性で細胞透過性に優れ、光毒性が高いので、腫瘍又は固形癌の光線力学的治療用剤として好適に使用できる。

本発明の組成物の有効成分の化合物は、カテーテル、静脈内または筋肉内注射により投与でき、またその他の非経口的な経路で投与することができる。また、経皮的にも投与できる。その他、体内の深部の腫瘍組織へ直接に局所注入することができる。

本発明で用いられる担体は、製剤の種類に応じて適宜選択される。注射用製剤で調製する場合、有効成分の化合物を含む無菌の水溶液又は分散液あるいは無菌の凍結乾燥剤の形に製剤化することができる。液体担体としては、例えば、水、生理食塩水、エタノール、含水エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、植物油が好ましい。

本発明の医薬組成物には、有効成分とともに、ラクトース、スクロース、第２リン酸カルシウム、カルボキシメチルセルロース等の希釈剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムおよびタルクのような滑剤；デンプン、グルコース、糖蜜、ポリビニルピロリドン、セルロース及びその誘導体等の結合剤を含み得る。

本発明のＳ−グリコシル化クロリン誘導体又はその金属錯体の投与量は、治療すべき対象や目的によって異なるが、一般に、Ｓ−グリコシル化クロリン誘導体の量として、腫瘍の診断のためには、１〜３ｍｇ／ｋｇ（フォトフリン）、腫瘍治療のためには、３０〜０．３ｍｇ／ｋｇＨｐＤ（フォトフリン）、好ましくは１〜５ｍｇ／ｋｇＨｐＤ（フォトフリン）または２０〜０．２ｍｇ／ｋｇＰＨＥである。
有効成分であるＳ−グリコシル化クロリン誘導体又はその金属錯体の細胞毒性は高いことから、従来よりも投与量を少なくして、同等以上の効果を得ることを期待できる。このことは、代謝、排泄に要する時間が短くて済むことを意味し、光線力学的療法の活用利便性を高める。

腫瘍の治療のためには、Ｓ−グリコシル化クロリン誘導体又はその金属錯体を投与した後、治療すべき部位に、該当化合物の吸収帯を含む光線を照射する。具体的には、５００ｎｍ以上の光線照射により一重項酸素を発生して、目的の細胞毒性を発揮することができるが、好ましくは最大吸収波長の光の割合が高い光線を照射することである。
照射源としては、レーザー、ハロゲンランプなどが用いられる。レーザとしては、色素レーザ、半導体レーザ、アルゴンレーザなど、励起に必要な波長の光線が得られるものであればよい。

本発明のＳ−グリコシル化クロリン誘導体は、吸光係数が大きいため、照射する光線の強度は、通常用いる光増感剤に比べて弱くても良い。従って、本発明のテトラフェニルクロリン誘導体又はその金属錯体を用いる光線力学的療法は、療法を受ける生体にとって受ける負担がより少なくなる。具体的には、光線照射量は、１〜２０Ｊ／ｃｍ^２である。

〔Ｓ−グルコシル化クロリン誘導体の製造〕
実施例１：Ｓ−グルコシル化クロリン誘導体
（１）Ｈ_２ＴＦＰＰの製造（テトラキス（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリン誘導体の合成）

ペンタフルオロベンズアルデヒド（５ｇ）とピロール（２ｍＬ）を窒素置換したジクロロメタン（１．２Ｌ）に溶解した。得られた溶液に、三フッ化ホウ素エーテル錯体（１ｍＬ）を加え、４時間、加熱還流した後、クロラニル（６．９ｇ）を加えて、さらに１２時間、加熱還流した。得られた反応混合物を冷却し、減圧濃縮した後、シリカゲルカラムに充填し、クロロホルムを用いて溶離することにより、５，１０，１５，２０−テトラキス（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリン（「Ｈ_２ＴＦＰＰ」と略記）を分収した。減圧濃縮後、さらにクロロホルムとメタノールの混合溶媒から再結晶した（収量３．８ｇ、収率６１％）。

（２）Ｈ_２ＴＦＰＣの製造（ポルフィリン誘導体からクロリン誘導体への変換）
（１）で製造したＨ_２ＴＦＰＰ（８９２ｍｇ）、Ｎ−メチルグリシン（１７１ｍｇ）及びパラホルムアルデヒド（１３４ｍｇ）を、トルエン（２００ｍＬ）に溶解した。得られた溶液を、窒素雰囲気下、Ｎ−メチルグリシン（約４００ｍｇ）とパラホルムアルデヒド（４００ｍｇ）を２時間毎に加えながら、２０時間加熱還流する。反応混合物を冷却後、溶媒を減圧留去する。クロロホルム（５０ｍＬ）を加え、水洗し過剰量のＮ−メチルグリシンとパラホルムアルデヒドを除去する。トルエン溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去する。得られた粗生成物をシリカゲルカラムに充填し、クロロホルムを用いて溶離することにより、５，１０，１５，２０−テトラキス（ペンタフルオロフェニル）−２，３−〔メタノ（Ｎ−メチル）イミノメタノ〕クロリン（Ｈ_２ＴＦＰＣと略記）を分収し、さらに減圧濃縮した（収量５９５ｍｇ、収率５５％）。

（３）Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＡｃＧｌｃの製造（Ｓ−グルコシル化）
（２）で得られたＨ_２ＴＦＰＣ（１０２ｍｇ）、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルチオアセチル（ＡｃＧｌｃＳＡｃと略記）（３７５ｍｇ）及びジエチルアミン（２ｍＬ）をジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）に溶解し、室温下１６時間攪拌した。反応混合物に、クロロホルム（２０ｍＬ）を加え、水洗した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムに充填し、クロロホルム及びメタノールの混合溶媒で溶離し、さらにゲル浸透クロマトグラフ分収装置により、５，１０，１５，２０−テトラキス〔４−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルチオ）−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル〕−２，３−〔メタノ（Ｎ−メチル）イミノメタノ〕クロリン（Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＡｃＧｌｃと略記）を得た（収量２１０ｍｇ、収率９４％）。

（４）Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＧｌｃの製造（アセチル保護基の除去）
Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＡｃＧｌｃ（１８５ｍｇ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）とメタノールの混合物に溶解した。得られた溶液にナトリウムメトキシドをｐＨ９になるまで加えた後、窒素雰囲気下、１５〜２０℃で１２時間、さらに、４５〜５０℃の湯浴で３時間加熱還流した。得られた反応混合物を冷却し、次いで酢酸で中和し減圧濃縮した。得られた沈殿をろ別し、水洗後、真空乾燥して、５，１０，１５，２０−テトラキス〔４−（β−Ｄ−グルコピラノシルチオ）−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル〕−２，３−〔メタノ（Ｎ−メチル）イミノメタノ〕クロリン（Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＧｌｃと略記）を得た（収量８１ｍｇ、収率４７％）。得られた化合物は、¹⁹Ｆ−ＮＭＲスペクトルから、全てのフェニル基のｐ位がＳ−グリコシル化されていることが確認できた。

実施例２：Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＧｌｃのＰｄ錯体
（１）ＰｄＴＦＰＰの製造（金属の導入）
実施例１の（１）で製造したＨ_２ＴＦＰＰ（１ｇ）と塩化パラジウム（０．４ｇ）をベンゾニトリル（３５ｍＬ）に溶解した。得られた溶液を、窒素置換後、窒素雰囲気下、２２０℃で９６時間加熱還流し、得られた反応混合物を、冷却後、減圧濃縮した。得られた粗生成物を、アルミナカラムに充填し、クロロホルムを用いて溶離することにより分収した。さらにシリカゲルクロマトグラフィーにより分収し、得られた生成物を減圧濃縮した後、さらにジクロロメタンとメタノールの混合溶媒から再結晶することにより、〔５，１０，１５，２０−テトラキス（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリナト〕パラジウム（ＩＩ）（ＰｄＴＦＰＰと略記）を得た（収量０．７６ｇ、収率７０％）。

（２）ＰｄＴＦＰＣの製造（ポルフィリン環からクロリン環への変換）
（１）で製造したＰｄＴＦＰＰ（０．４ｇ）、Ｎ−メチルグリシン（０．２ｇ）及びパラホルムアルデヒド（０．１７ｇ）を、トルエン（５０ｍＬ）に溶解し、実施例１（２）の変換工程に準じてポルフィリン環のＡ環を環化付加することによりクロリン骨格に変換した後、シリカゲルクロマトグラフィーにより分収し、減圧濃縮後、さらにゲル浸透クロマトグラフ装置により目的成分を分収し、クロロホルムとヘキサンの混合溶媒から再結晶して、｛５，１０，１５，２０−テトラキス（ペンタフルオロフェニル）−２，３−〔メタノ（Ｎ−メチル）イミノメタノ〕クロリナト｝パラジウム（ＰｄＴＦＰＣと略記）を得た（収量０．０７５ｇ、収率１７％）。

（３）ＰｄＴＦＰＣ−ＳＡｃＧｌｃの製造（Ｓ−グルコシル化）
（２）で得られたＰｄＴＦＰＣ（０．１１ｇ）、ＡｃＧｌｃＳＡｃ（０．１９ｇ）及びジエチルアミン（３ｍＬ）をジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）に溶解し、実施例１（３）に準じて、Ｓ−グリコシル化を行なった。得られた粗生成物をゲル浸透クロマトグラフ分収装置により目的成分を分収し、溶媒を減圧留去することにより、｛５，１０，１５，２０−テトラキス〔４−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルチオ）−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル〕−２，３−〔メタノ（Ｎ−メチル）イミノメタノ〕クロリナト｝パラジウム（ＩＩ）（ＰｄＴＦＰＣ−ＳＡｃＧｌｃと略記）を得た（収量０．１５ｇ、収率６６％）。

（４）ＰｄＴＦＰＣ−ＳＧｌｃの製造（アセチル保護基の除去）
（３）で得られたＰｄＴＦＰＣ−ＳＡｃＧｌｃ（０．１５ｇ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）とメタノール（２０ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、実施例１（４）に準じて、グルコースの水酸基の保護基であるアセチル基を除去し、逆相液体クロマトグラフ装置で、目的成分を分収し、溶媒を減圧留去後、その残渣を分子量カットオフが１０００の透析膜を用いて脱塩し、溶媒留去後、｛５，１０，１５，２０−テトラキス〔４−（β−Ｄ−グルコピラノシルチオ）−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル〕−２，３−〔メタノ（Ｎ−メチル）イミノメタノ〕クロリナト｝パラジウム（ＩＩ）（ＰｄＴＦＰＣ−ＳＧｌｃと略記）を得た（収量０．０６５ｇ、収率５９％）。得られた化合物は、¹⁹Ｆ−ＮＭＲスペクトルから、全てのフェニル基のｐ位がＳ−グリコシル化されていることが確認できた。

実施例３；Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＧａｌ
実施例１の（３）Ｓ−グルコシル化工程において、ＡｃＧｌｃＳＡｃに代えて、２，３，４，６−テトラ−ｏ−アセチル−β−Ｄ−ガラクトピラノシルアセチルチオアセチル（ＡｃＧａｌＳＡｃと略記）を用いた以外は、実施例１と同様にして、糖がガラクトースである５，１０，１５，２０−テトラキス〔４−（β−Ｄ−ガラクトピラノシルチオ）−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル〕−２，３−〔メタノ（Ｎ−メチル）イミノメタノ〕クロリン（Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＧａｌと略記）を得た（収量８６ｍｇ、収率８４％）。

〔ポルフィリン誘導体の製造〕
比較例１；Ｈ_２ＴＦＰＰ−ＳＧｌｃ
実施例１（１）で合成したＨ_２ＴＦＰＰ（５５ｍｇ）、ＡｃＧｌｃＳＡｃ（２０７ｍｇ）及びジエチルアミン（０．８ｍＬ）をジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解し、室温下２４時間攪拌し、実施例１（３）に準じてＳ−グリコシル化を行ない、ゲル浸透クロマトグラフ分収装置により分収し、溶媒を減圧留去することにより５，１０，１５，２０−テトラキス（４−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルチオ）−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル）ポルフィリン（Ｈ_２ＴＦＰＰ−ＳＡｃＧｌｃと略記）を得た（収量１００ｍｇ、収率７６％）。

得られたＨ_２ＴＦＰＰ−ＳＡｃＧｌｃ（１５２ｍｇ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）とメタノール（２０ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、実施例１（４）に準じて、アセチル基の除去反応後、逆相液体クロマトグラフ装置で、目的成分を分収した。分収した溶液から溶媒を減圧留去して、５，１０，１５，２０−テトラキス〔４−（β−Ｄ−グルコピラノシルチオ）−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル〕ポルフィリン（Ｈ_２ＴＦＰＰ−ＳＧｌｃと略記）を得た（収量５６ｍｇ、収率３７％）。

比較例２：ＰｄＴＦＰＰ−ＳＧｌｃ
実施例２（１）で合成したＰｄＴＦＰＰ（７７ｍｇ）、ＡｃＧｌｃＳＡｃ（２２４ｍｇ）及びジエチルアミン（１．２ｍＬ）をジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）に溶解し、実施例１（３）に準じてＳ−グリコシル化を行ない、ゲル浸透クロマトグラフ分収装置により分収し、溶媒を減圧留去することにより、｛５，１０，１５，２０−テトラキス〔４−（２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルチオ）−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル〕ポルフィリナト｝パラジウム（ＩＩ）（ＰｄＴＦＰＰ−ＳＡｃＧｌｃと略記）を得た（収量１５７ｍｇ、収率８９％）。

得られたＰｄＴＦＰＰ−ＳＡｃＧｌｃ（１８４ｍｇ）をジクロロメタン（２０ｍＬ）とメタノール（２０ｍＬ）の混合溶媒に溶解し、実施例１（４）に準じて、アセチル基を除去反応後、逆相液体クロマトグラフ装置で、目的成分を分収した。分収した溶液から溶媒を減圧留去して、｛５，１０，１５，２０−テトラキス〔４−（β−Ｄ−グルコピラノシルチオ）−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル〕ポルフィリナト｝パラジウム（ＩＩ）（ＰｄＴＦＰＰ−ＳＧｌｃと略記）を得た（収量４６ｍｇ、収率２５％）。

〔Ｏ−グリコシル化クロリン誘導体〕
比較例３：ｍ−ＴＧｌｃＰＣ
ＷＯ２００２−２０５３６に記載の方法に準じて、まず５，１０，１５，２０−テトラキス〔３−（２’，３’，４’，６’−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）フェニル〕ポルフィリン（以下、ＴＧｌｃＰＰと略記）を合成し、次いで、ポルフィリン環のＡ環を還元して、下記式で表される５，１０，１５，２０−テトラキス〔３−（β−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）フェニル〕クロリン（ｍ−ＴＧｌｃＰＣと略記）を得た。

参考例１：ＰｔＴＦＰＣ
実施例２（１）において、塩化パラジウムに代えて塩化白金酸ナトリウムを使用してＰｔＴＦＰＰを製造し、さらに実施例の方法と同様にしてポルフィリン環からクロリン環へ変換することにより、ＰｔＴＦＰＣを得た。

参考例２：
市販品の５，１０，１５，２０−テトラキス（４−スルホフェニル）ポルフィリン（ＴＰＰＳと略記）を用いた。

〔光毒性の評価方法〕
ＨｅＬａ細胞を９６穴プレートに５×１０^３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ（培地容積１００μＬ）だけ播き、５％ＣＯ_２存在下、３７℃で２４時間培養した。これに２％ジメチルスルホキシドを含む薬剤溶液を１００μＬ加え、所定濃度にした。これをさらに５％ＣＯ_２、３７℃で２４時間培養した。その後、培地を排出し、リン酸緩衝溶液１００μＬで２回洗浄した。各ウェルに１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）を１００μＬ加えた。５００ｎｍのカットフィルターとウォータージャケットをつけた１００Ｗのハロゲンランプを用いて、所定光量（１６Ｊ／ｃｍ^２）の光を照射した。その後、さらに５％ＣＯ_２、３７℃で２４時間培養した。これにＷＳＴ−８アッセイにより、薬剤を添加していない場合に対する相対値としての細胞生存率を算出した。各薬剤について６サンプル試験して得られた結果の平均値を求めた。
尚、所定光量は、パワーメータを用いて、照射時間を調節することにより調整した。
ＷＳＴアッセイは、細胞の脱水素酵素の活性を測定する方法の１つで、生細胞の量に依存してテトラゾリウム塩（ＷＳＴ−８）が分解される。この分解量を吸光光度法で測定することにより生細胞の相対量を調べた。

〔光毒性比較〕
（１）薬剤濃度０．５μＭ
上記実施例及び比較例で製造、及び製造中間体として得られたクロリン誘導体又はポルフィリン誘導体、及び参考例について、上記評価方法に基づいて、薬剤濃度０．５μＭのときの光毒性を測定した。結果を図３に示す。図３中の化合物Ｎｏ．に対応する化合物は、表１に示す通りである。

図３において、化合物Ｎｏ．１と６，Ｎｏ．２と７、Ｎｏ．３と８、Ｎｏ．４と９を比較すると、いずれも糖が連結している方が光毒性効果が高いことがわかる。また、Ｎｏ．６と１０、Ｎｏ．７と１１、Ｎｏ．８と１２、Ｎｏ．９と１３との比較から、糖の水酸基がアセチル基で保護されていると、光毒性が消失することがわかる。さらに、Ｎｏ．３，４，５の比較から、クロリン誘導体において、金属を導入することにより、光毒性が高くなることがわかった。

一方、Ｓ−グルコシド化クロリン誘導体（Ｎｏ．８，９）、Ｓ−グルコシド化ポルフィリン誘導体（Ｎｏ．６，７）、Ｏ−グルコシドクロリン誘導体（Ｎｏ．１５）、Ｓ−ガラクシドクロリン誘導体（Ｎｏ．１６）は、いずれも市販品のＴＰＰＳ（Ｎｏ．１４）と比べて、高い光毒性を示した。

（２）薬剤濃度０．０９μＭ
表１に示す化合物Ｎｏ．６〜９、１４〜１６について、上記評価方法に基づいて、薬剤濃度０．０９μＭのときの光毒性を測定した。結果を図４及び図５に示す。

薬剤濃度０．５μＭのときには、Ｓ−グルコシド化クロリン誘導体（Ｎｏ．８，９）とＳ−グルコシド化ポルフィリン誘導体（Ｎｏ．６，７）、Ｏ−グルコシド化クロリン誘導体（Ｎｏ．１５）との比較において光毒性の差違は認められなかったが、薬剤濃度０．０９μＭでは、図４に示すように、糖連結クロリン誘導体と糖連結ポルフィリン誘導体との間で顕著な差違が認められた。つまり、Ｎｏ．６，７，１４とＮｏ．８，９との比較からわかるように、薬剤濃度０．０９μＭの濃度では、ポルフィリン誘導体における糖連結による光毒性の向上効果が認められなかったが、クロリン誘導体では、薬剤濃度０．０９μＭの濃度において、糖連結による顕著な光毒性向上効果が認められた。

また、Ｎｏ．８、９と１５の比較から、糖連結クロリン誘導体として０．５μＭのときには光毒性に差違は認められなかったが、０．０９μＭでは、Ｓ−グリコシル化クロリン誘導体とＯ−グリコシル化クロリン誘導体との間で光毒性に差違が認められ、Ｓグリコシル化クロリン誘導体（Ｎｏ．８，９）の方が光毒性が高かった。

さらに、図５から、薬剤濃度０．０９μＭのときには、Ｓ−グリコシド化クロリン誘導体において、連結する糖がグルコースの場合（Ｎｏ．８）の方が、ガラクトースの場合（Ｎｏ．１６）よりも光毒性が高く、同程度の光毒性効果を得るために必要な量が、グルコース連結クロリン誘導体では少なくて済むことがわかる。

〔暗所における細胞毒性比較〕
上記実施例１，２の化合物（Ｎｏ．８、９）を、光照射しない（光量０Ｊ／ｃｍ^２）ときの細胞生存率を光毒性評価方法に準じて調べた。結果を図６に示す。
図６からわかるように、いずれの化合物も、暗所下では、細胞毒性がないことがわかる。

〔連結基介在クロリン誘導体の製造〕
実施例４；Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＣＨ_２ＣＨ_２ＯＡｃＧｌｃ
実施例１の（３）Ｓ−グルコシル化工程において、２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシルチオアセチル（ＡｃＧｌｃＳＡｃ）に代えて、２−（Ｓ−アセチル）メルカプトエチル２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−グルコピラノシド（ＡｃＧｌｃＯＣＨ_２ＣＨ_２ＳＡｃ）を用いた以外は、実施例１と同様にして、下記構造を有するＳ−グリコシド化クロリン誘導体を得た。

得られたＨ_２ＴＦＰＣ−ＳＣＨ_２ＣＨ_２ＯＡｃＧｌｃをＥＳＩ−ＭＳによりスペクトル測定した（イオン化モードＥＳＩ、スペクトル記録間隔１．０ｓｅｃ、オリフィス電圧掃引２００Ｖ）。得られたスペクトルを図７に示す。目的化合物の平均質量である２５８５に該当するピーク（２５８４．５００１２）が認められた。また、図７に示すマススペクトルと、Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＣＨ_２ＣＨ_２ＯＡｃＧｌｃをシミュレーションして得られるマススペクトル（図８参照）とは、主たるピーク（２５８３．５、２５８８．５、２５８９．５）がほぼ一致していた。従って、Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＣＨ_２ＣＨ_２ＯＡｃＧｌｃが合成されていることが確認できる。実施例１と同様にしてアセチル保護基を除去すれば、目的とするクロリン誘導体を合成できる。

〔他のクロリン誘導体の製造〕
実施例５：Ｈ_２ＴＦＰＣ’−ＳＡｃＧｌｃ
上記で合成したＨ_２ＴＦＰＰ１ｇをトルエン２０ｍｌに溶かし、６０℃で加熱しながら、臭化ベンジル９．７６ｍＬ、水素化トリブチル錫２４ｍＬ、アゾイソブチロニトリル１．７ｇを１７日かけて加えた。ヘキサンを分離液として用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィを用いて粗生成物から目的成分を分画し、さらにゲル浸透クロマトグラフ分収装置により目的成分を集めた。さらにクロロホルムとアセトニトリルから再結晶して、下記構造を有する、１０，１５，２０−テトラキス（ペンタフルオロフェニル）−２−ベンジルクロリン（Ｈ_２ＴＦＰＣ’と略記）３５ｍｇを得た。

Ｈ_２ＴＦＰＣ’を用いて実施例１と同様にして、Ｓ−グルコシル化を行ない、下記構造を有するＳ−グリコシド化クロリン誘導体（ＨＴＦＰＣ’−ＳＡｃＧｌｃ）を得た。

得られたＨＴＦＰＣ’−ＳＡｃＧｌｃをＥＳＩ−ＭＳによりスペクトル測定した（イオン化モードＥＳＩ、スペクトル記録感覚１．０ｓｅｃ、オリフィス電圧掃引１５０Ｖ）。得られたスペクトルを図９に示す。目的化合物の理論平均質量である２４４４．１３に該当するピーク（２４４３．４３０７２）が認められた。また、図９に示すマススペクトルと、ＨＴＦＰＣ’−ＳＡｃＧｌｃをシミュレーションして得られるマススペクトル（図１０参照）とは、主たるピーク（２４４２．５、２４４４．５、２４４５．５、２４４６．５）がほぼ一致していたことから、ＨＴＦＰＣ’−ＳＡｃＧｌｃが合成されていることが確認できる。実施例１と同様にしてアセチル保護基を除去すれば、目的とするクロリン誘導体を合成できる。

実施例６：糖が５分子連結したＳ−グルコシル化クロリン誘導体（Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＧｌｃ_５）
実施例１において、Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＡｃＧｌｃを合成した際に得られた副生成物をシリカゲルクロマトグラフィ（展開溶媒は酢酸エチル：ヘキサン＝３：２、Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＡｃＧｌｃ（Ｒｆ値＝０．１８）、Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＡｃＧｌｃ_５（Ｒｆ値＝０．１１））で分離、精製した。目的のフラクションについて、ＥＳＩ−ＭＳの測定を行なったところ、Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＡｃＧｌｃに由来するピークは確認されず、目的化合物（Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＡｃＧｌｃ_５）の平均質量である２７５２．５１及び２７７４．４９に該当するピーク（２７５１．５３及び２７７３．８７４７）のみが認められ、１分子内にグルコース５分子が連結したＳ−グルコシル化クロリン誘導体が得られていることが確認できた。

得られたＨ_２ＴＦＰＣ−ＳＡｃＧｌｃ_５（４７９ｍｇ）をジクロロメタン（３０ｍｌ）とメタノール（３０ｍｌ）の混合溶媒に溶解した後、ナトリウムメトキシド（１８８ｍｇ）を添加して、窒素雰囲気下、２５℃で２４時間攪拌した。得られた反応混合物を冷却し、次いで酢酸で中和して、減圧濃縮した。得られた沈殿をろ別し、水洗後、真空乾燥してＨ_２ＴＦＰＣ−ＳＧｌｃ_５を得た（収量３２６ｍｇ）。ＥＳＩ−ＭＳ測定を行なったところ、Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＧｌｃ_５の平均質量である１９１２．３０及び１９３４．２８に該当するピーク（１９１１．５８及び１９３３．５５）が認められ、Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＧｌｃ_５であることが確認できた。

〔Ｓ−グリコシル化クロリンの他の金属錯体の製造〕
実施例７：
実施例１で製造したＨ_２ＴＦＰＣ−ＳＧｌｃのメタノール溶液に塩化亜鉛を添加し、３０℃で２４時間反応させた。反応後、ＥＳＩ−ＭＳによりスペクトル測定したところ、Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＧｌｃのＮａ溶液で主として認められる１７５８ｍ／ｚのピークが低くなり、１８２０．４のピークが現われた。このピークは、Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＧｌｃの亜鉛錯体の理論平均質量のピークとほぼ一致していた。

実施例８：
実施例１で製造したＨ_２ＴＦＰＣ−ＳＧｌｃと塩化マンガンとを、メタノール（１０ｍｌ）と水（１０ｍｌ）の混合溶媒中で、８０℃で２４時間反応させた。反応後、ＥＳＩ−ＭＳによりスペクトル測定したところ、１７８８．２９のピークが現われた。このピークは、Ｈ_２ＴＦＰＣ−ＳＧｌｃのマンガン錯体の理論平均質量のピークとほぼ一致していた。

本発明の新規な糖連結クロリン誘導体及びその金属錯体は、水溶性で組織透過性がよく、光照射により強い光毒性を示すので、ＰＤＴ治療用薬剤の有効成分として有用である。さらに、本発明の新規な糖連結クロリン誘導体は、従来よりも長波長領域に強い吸収ピークを有するので、従来のＰＤＴ治療用薬剤よりも適用範囲の拡大が可能となる。

Claims

下記一般式（１）で示されるＳ−グリコシル化クロリン誘導体。

式中、Ｘ^１〜Ｘ^２０は、互いに独立して、Ｆ−、グルコース−Ｓ−、グルコース−Ｚ−Ｓ−、及びグルコース―Ｏ−Ｚ−Ｓ−からなる群から選ばれる１つの基で、且つＸ^１〜Ｘ^２０のうち少なくとも１つはグルコース−Ｓ−、グルコース−Ｚ−Ｓ−、及びグルコース−Ｏ−Ｚ−Ｓ−からなる群から選ばれる１つの基であり（ここで、Ｆはフッ素原子、Ｓは硫黄原子、Ｏは酸素原子、Ｚは炭素数１〜６の炭化水素基である）、
Ｒ^５及びＲ^６は、互いに独立して水素原子、低級アルキル又はＱ−（ＣＨ _２） _ｋ −（ここで、Ｑは低級アルキル、アリール、アミノ、低級アルキルアミノ、イミノ、低級アルキルイミノ、又はシクロアルキル基であり、ｋは０〜３の整数である）であり、互いに環を形成していてもよい。
下記一般式（１）’で示される請求項１に記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。

式中、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、及びＸ^４は、互いに独立して、Ｆ−、グルコース−Ｓ−、グルコース−Ｚ−Ｓ−、及びグルコース−Ｏ−Ｚ−Ｓ−からなる群から選ばれる１つの基で、且つＸ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、及びＸ^４のうち少なくとも１つはグルコース−Ｓ−、グルコース−Ｚ−Ｓ−、及びグルコース−Ｏ−Ｚ−Ｓ−からなる群から選ばれる１つの基であり（ここで、Ｆはフッ素原子、Ｓは硫黄原子、Ｏは酸素原子、Ｚは炭素数１〜６の炭化水素基である）、
Ｒ^５及びＲ^６は、互いに独立して水素原子、低級アルキル又はＱ−（ＣＨ _２） _ｋ −（ここで、Ｑは低級アルキル、アリール、アミノ、低級アルキルアミノ、イミノ、低級アルキルイミノ、又はシクロアルキル基であり、ｋは０〜３の整数である）であり、互いに環を形成していてもよい。
前記（１）’式中、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、及びＸ^４は、グルコース−Ｓ−である請求項２に記載のクロリン誘導体。
下記一般式（２）で示されるＳ−グリコシル化クロリン誘導体。

式中、Ｘ^１〜Ｘ^２０は、互いに独立して、Ｆ−、グルコース−Ｓ−、グルコース−Ｚ−Ｓ−、及びグルコース−Ｏ−Ｚ−Ｓ−からなる群から選ばれる１つの基で、且つＸ^１〜Ｘ^２０のうち少なくとも１つはグルコース−Ｓ−、グルコース−Ｚ−Ｓ−、及びグルコース−Ｏ−Ｚ−Ｓ−からなる群から選ばれる１つの基であり（ここで、Ｆはフッ素原子、Ｓは硫黄原子、Ｏは酸素原子、Ｚは炭素数１〜６の炭化水素基である）、
Ｒ^５及びＲ^６は、互いに独立して水素原子、低級アルキル又はＱ−（ＣＨ _２） _ｋ −（ここで、Ｑは低級アルキル、アリール、アミノ、低級アルキルアミノ、イミノ、低級アルキルイミノ、又はシクロアルキル基であり、ｋは０〜３の整数である）であり、互いに環を形成していてもよく、Ｍは金属である。
下記一般式（２）’で示される請求項４に記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。

式中、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、及びＸ^４は、互いに独立して、Ｆ−、グルコース−Ｓ−、グルコース−Ｚ−Ｓ−、及びグルコース−Ｏ−Ｚ−Ｓ−からなる群から選ばれる１つの基で、且つＸ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、及びＸ^４のうち少なくとも１つはグルコース−Ｓ−、グルコース−Ｚ−Ｓ−、及びグルコース−Ｏ−Ｚ−Ｓ−からなる群から選ばれる１つの基であり（ここで、Ｆはフッ素原子、Ｓは硫黄原子、Ｏは酸素原子、Ｚは炭素数１〜６の炭化水素基である）、
Ｒ^５及びＲ^６は、互いに独立して水素原子、低級アルキル又はＱ−（ＣＨ _２） _ｋ −（ここで、Ｑは低級アルキル、アリール、アミノ、低級アルキルアミノ、イミノ、低級アルキルイミノ、又はシクロアルキル基であり、ｋは０〜３の整数である）であり、互いに環を形成していてもよく、Ｍは金属である。
前記（２）’式中、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、及びＸ^４は、グルコース−Ｓ−である請求項５に記載のクロリン誘導体。
前記金属Ｍが遷移金属である請求項４〜６のいずれかに記載のクロリン誘導体。
前記金属Ｍが、Ｐｔ、Ｐｄ、及びＡｕからなる群より選ばれる１種である請求項４〜６のいずれかに記載のクロリン誘導体。
前記グルコースは、Ｄ体である請求項１〜８のいずれかに記載のクロリン誘導体。
請求項１〜９のいずれかの化合物を有効成分として含有する医薬。
請求項１〜９のいずれかの化合物を有効成分として含有する、腫瘍又は固形癌の光線力学的治療用剤。
請求項１〜９のいずれかの化合物を有効成分として含有する、皮膚病の光線力学的治療用剤。
請求項１〜９のいずれかの化合物を有効成分として含有し、製薬学的に許容できる固体又は液体状の担体又は賦形剤を含有する医薬組成物。