JP2015147758A - 糖類連結クロリン誘導体 - Google Patents

Abstract

【課題】殺腫瘍細胞性（光毒性）に優れるＳ−グリコシル化クロリン誘導体の提供。【解決手段】下式で例示のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。（Ｘ1ーＸ4は、Ｆ−又はオリゴ糖−Ｓ−のいずれかの基である）【選択図】なし

Description

本発明は、光線力学的療法（Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ；ＰＤＴ）や光線力学的診断（Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ：ＰＤＤ）において好適に用いることができる、Ｓ−グリコシル化クロリン誘導体、および当該クロリン誘導体を有効成分として含有する医薬または診断薬に関する。

光線力学的療法（ＰＤＴ）は、標的となる疾患組織を有する患者に光感受性物質を投与し、標的となる疾患組織（癌組織、腫瘍組織、皮膚病変部など）に光感受性物質を集積させた後、光感受性物質を励起するに適切な波長の光を照射することにより、標的疾患組織のみを選択的に破壊する治療方法である。この場合、光励起されて活性化した光感受性物質が、近傍の分子状酸素に対して直接的または間接的にエネルギー移動を行い、これによる一重項酸素の生成が標的疾患組織破壊の主要メカニズムであると考えられている。

ＰＤＴに用いられる光感受性物質としては、ヘマトポルフィリン誘導体（例えばフォトフリン（登録商標））が良く知られており、既に実用化されている。しかしポルフィリン誘導体の最大吸収波長は約６３０ｎｍであり、モル吸光係数も小さいため、ＰＤＴの治療効果が５〜１０ｍｍ程度の表層癌に限定されてしまう。

このような課題に対し、クロリン誘導体は最大吸収波長が６５０〜６７０ｎｍにあり、モル吸光係数も相対的に大きいため、ＰＤＴの治療効果がポルフィリン誘導体の場合よりも標的組織の深部に及ぶという利点があり、近年では光感受性物質としてクロリン誘導体の開発も進んでいる。例えば、タラポルフィンナトリウム（レザフィリン（登録商標））やテモポルフィン（フォスキャン（登録商標））、ベルテポルフィン（ビスダイン(登録商標））などが実用化され、臨床使用量を徐々に伸ばしている。しかしながら、これらの薬剤においては、腫瘍組織への選択蓄積性の不足、また臨床現場での実使用において重要となる薬剤自体の水溶性が不十分といった問題があり、さらなる改良が望まれている。特に腫瘍選択蓄積性の向上は、使用薬剤量の低減、さらに日光過敏症に代表される光線力学療法の副作用抑制につながるため、今後の重要な開発課題である。

このような課題に対し、特許文献１では、テトラフェニルクロリン骨格を有する化合物に糖分子を導入し、ワールブルグ効果を利用した腫瘍細胞親和性に優れる光感受性物質を開示している。さらに特許文献２や非特許文献１では、テトラキス（ペンタフルオロフェニル）ポルフィリン（Ｈ₂ＴＦＰＰ）のＡ環を還元反応または付加反応に供して誘導されるクロリン誘導体（Ｈ₂ＴＦＰＣ）に対して、チオエーテル結合を介して糖分子を結合したＳ−グリコシル化クロリン誘導体を開示し、特にグルコースを連結した５，１０，１５，２０−テトラキス（４−（β−Ｄ−グルコピラノシルチオ）−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル）−２，３−（メタノ（Ｎ−メチル）イミノメタノ）クロリン（以下Ｈ₂ＴＦＰＣ−ＳＧｌｃと略す）が、インビトロやインビボでのＰＤＴ実験において、タラポルフィンナトリウムよりも腫瘍細胞蓄積性が高く、殺腫瘍細胞性（光毒性）に優れ（ＩＣ５０（５０％ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）が低い）、腫瘍組織の成長抑制効果も高いことが示されている。

特開２０００−７６９３号公報 国際公開第２００８／１０２６６９号パンフレット

ＡＮＴＩＣＡＮＣＥＲ ＲＥＳＥＡＲＣＨ ３１：７６３−７７０（２０１１）．

ところがＨ₂ＴＦＰＣ−ＳＧｌｃは、グルコースが連結されているにも関わらず水溶性が不十分であり、常温の生理食塩水には殆ど溶解しない。そのため、ｉｎ ｖｉｔｒｏやｉｎ ｖｉｖｏでのＰＤＴ実験では、Ｈ₂ＴＦＰＣ−ＳＧｌｃを少量のジメチルスルホキシド等に一旦溶解した後、水（または細胞培養液）を加えて水溶液状態にするということになる。故にＨ₂ＴＦＰＣ−ＳＧｌｃは、臨床現場で患者に適用することが困難である。

水溶性を向上する方法として、新たな親水性官能基を導入するか、糖の水酸基数を増やす方法が考えられる。ところが多糖類であるセルロースは水に不溶であること、またデンプンやアミロースなども常温の水には溶けないことがよく知られており、単純な糖の水酸基数の増加では返って水溶性を低下させるという懸念がある。例えば三糖類でＨ₂ＴＦＰＣの４つのペンタフルオロフェニル基の１箇所ずつをＳ−グリコシル化した場合、１２個のピラノース環がクロリン環構造を覆い、一種の多糖類の様相を呈してくることが予想されるため、このような構造によって単純に水溶性が向上するか否かは一概には言えない。また糖の単糖結合数の増加に伴い、純度の高いＳ−グリコシル化クロリン誘導体の合成難易度も高くなることも難点である。

更に、薬物の多くは一般的に脂溶性（親油性）のものが多い。これは多くの薬剤は脂質二重膜からなる細胞膜を通過して薬効を発現するため、細胞膜を通過するためには脂溶性が高い方が有利であるからであり、これはＰＤＴ薬剤も例外ではないと推定される。言い換えれば、水溶性を上げることで逆に腫瘍細胞への取り込み性が低下し、薬効の低下も懸念される。

このような化学的推察もあってか、既述の特許文献２には、Ｓ−グリコシル化に用いる糖としてペントースまたはヘキソースなどの単糖類、ショ糖、マルトース、ラクトースなどの二糖類、デンプン、アミロース、グリコーゲンなどの多糖類などを挙げているが、好ましい糖類としてはグルコースやガラクトースなどの単糖類であることが開示されている。

前記した従来技術に鑑み、本発明が解決しようとする課題は、常温で優れた水溶性を有することで臨床現場での実使用が可能であり、しかも殺腫瘍細胞性（光毒性）および腫瘍組織の成長抑制効果に優れ、さらに正常細胞による代謝性にも優れるＳ−グリコシル化クロリン誘導体を提供することである。

本発明者らは、上記の問題を解決するため、Ｓ−グリコシル化に用いる糖として、特許文献２では全く言及されていなかったオリゴ糖類を用いた。その結果、オリゴ糖類、特に三糖類のマルトトリオースや四糖類のマルトテトラオースを用いてＳ−グリコシル化クロリン誘導体を合成し、ＰＤＴ評価を行ったところ、常温で優れた水溶性を有し、しかも驚くべきことに殺腫瘍細胞性（光細胞毒性）および腫瘍組織の成長抑制効果に優れ、さらに正常細胞による代謝性にも優れるＳ−グリコシル化クロリン誘導体が得られることを見出し、本発明に至ったのである。

すなわち、本発明は、以下の通りである。
［１] 下記一般式（１）で示されるＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
式中、Ｘ¹〜Ｘ²⁰は、互いに独立して、Ｆ−または糖−Ｓ−のいずれかの基であり、且つＸ¹〜Ｘ²⁰の少なくとも一つは糖−Ｓ−の基であって（ここでＦはフッ素原子、Ｓはイオウ原子である）、糖は２〜９個の単糖同士がグリコシド結合したオリゴ糖であり、Ｒ⁵およびＲ⁶は互いに独立して水素原子、低級アルキル、またはＱ−（ＣＨ₂）ｋ−（ここでＱは低級アルキル、アリール、アミノ、低級アルキルアミノ、イミノ、低級アルキルイミノ、またはシクロアルキル基であり、ｋは０〜３の整数）であり、互いに連結して環構造を形成していても良い。
［２] 下記一般式（２）で示されるＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
式中、Ｘ¹，Ｘ²，Ｘ³およびＸ⁴は、互いに独立して、Ｆ−または糖−Ｓ−のいずれかの基であり、且つＸ¹〜Ｘ⁴の少なくとも一つは糖−Ｓ−の基であって（ここでＦはフッ素原子、Ｓはイオウ原子である）、糖は２〜９個の単糖同士がグリコシド結合したオリゴ糖であり、Ｒ⁵およびＲ⁶は互いに独立して水素原子、低級アルキル、またはＱ−（ＣＨ₂）ｋ−（ここでＱは低級アルキル、アリール、アミノ、低級アルキルアミノ、イミノ、低級アルキルイミノ、またはシクロアルキル基であり、ｋは０〜３の整数）であり、互いに連結して環構造を形成していても良い。
［３] 前記一般式（２）中、Ｘ¹，Ｘ²，Ｘ³およびＸ⁴が全て糖−Ｓ−の基である、［２]に記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
［４] 下記一般式（３）で示されるＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
式中、Ｘ¹，Ｘ²，Ｘ³およびＸ⁴は、互いに独立してＦ−または糖−Ｓ−のいずれかの基であり、且つＸ¹〜Ｘ⁴の少なくとも一つは糖−Ｓ−の基であり（ここでＦはフッ素原子、Ｓはイオウ原子である）、糖は２〜９個の単糖同士がグリコシド結合したオリゴ糖である。
［５] 前記糖が２〜７個の単糖同士がグリコシド結合したオリゴ糖である、［１]〜［４]のいずれかに記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
［６] 前記糖が３〜７個の単糖同士がグリコシド結合したオリゴ糖である、［１]〜［５]のいずれかに記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
［７] 前記一般式（３）中、Ｘ¹，Ｘ²，Ｘ³，およびＸ⁴が全て糖−Ｓ−である、［６]に記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
［８] 前記糖がマルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキソースまたはマルトヘプタオースである、［７]に記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
［９] 前記糖が三糖類または四糖類である、請求項１〜８のいずれかに記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
［１０] 前記糖がマルトトリオースまたはマルトテトラオースである、［９]に記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
［１１] 前記糖がＤ体である、［１]〜［１０]のいずれかに記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
［１２] ［１]〜［１１]のいずれかに記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体、および薬剤学的に許容できる添加物を含有する、医薬組成物。
［１３] 腫瘍もしくは固形癌、または加齢黄斑変性症、あるいは皮膚疾患の、治療、診断または検出のための、［１２]に記載の医薬組成物。
［１４] 腫瘍もしくは固形癌、または加齢黄斑変性症、あるいは皮膚疾患の診断または検出のための、［１２]に記載の診断用組成物。

本発明のオリゴ糖を連結したＳ−グリコシル化クロリン誘導体は、常温で優れた水溶性を有するため臨床現場で治療薬として使用することが容易となり、しかも光照射による殺腫瘍細胞性（光細胞毒性）および腫瘍組織の成長抑制効果に優れ、また代謝性も良好であるため、インビトロまたはインビボにて、標的となるウィルス、細菌、若しくはこれらの感染細胞、腫瘍細胞、または腫瘍状組織と接触させた後、前記クロリン誘導体に吸収される波長の光線を照射することにより、前記標的を破壊する用途に適用することができる。従って、本発明は、上記クロリン誘導体を有効成分とする医薬、特に、腫瘍若しくは固形癌、または加齢黄斑変性症、あるいは皮膚病の光線力学的治療用薬、光線力学診断薬として用いることができる。

以下、本発明を実施するための形態（以下「実施形態」とも言う。）について詳細に説明する。尚、本発明は、以下の実施の形態に限定されるものではなく、その要旨の範囲内で種々変形して実施することができる。

本実施形態は、新規な光感受性物質として、下記一般式（１）で示されるＳ−グリコシル化クロリン誘導体を提供する。

式中、Ｘ¹〜Ｘ²⁰は、互いに独立して、Ｆ−または糖−Ｓ−のいずれかの基であり、且つＸ¹〜Ｘ²⁰のうち少なくとも１つは糖−Ｓ−であり、糖は２〜９個の単糖同士がグリコシド結合したオリゴ糖である。ここで、Ｆはフッ素原子、Ｓはイオウ原子である。また、クロリン環のメソ位に結合している４個のフェニル基において、各フェニル基に２個以上の糖−Ｓ−の基が連結されていてもよい。

好ましくは、下記一般式（２）に示すように、クロリン環に対してフェニル基のパラ位にあるＸ¹、Ｘ²、Ｘ³、およびＸ⁴の少なくとも一つが糖−Ｓ−の基で、オルト位およびメタ位はフッ素原子であり、より好ましくは、Ｘ¹、Ｘ²、Ｘ³、およびＸ⁴の全てが糖−Ｓ−である。

本実施形態のＳ−グリコシル化クロリン誘導体における糖−Ｓ−の基とは、糖がＳに間接的に連結されていてもよいが、直接連結されていることが好ましい。ここで直接連結とは、例えば糖のアノマー位のＣ（炭素原子）とＳ（イオウ原子）が連結している構造（−Ｃ−Ｓ−）や、糖のアノマー位の水酸基のＯ（酸素原子）とＳ（イオウ原子）が連結しているような構造（−Ｃ−Ｏ−Ｓ−）を指し、特に前者が好ましい。これに対し間接的な連結とは、前記の−Ｃ−Ｓ−結合のＣ−Ｓ結合間、または前記−Ｃ−Ｏ−Ｓ−結合のＯ−Ｓ結合間に、原子または官能基を有する構造を指す。

本実施形態の糖−Ｓ−の基において、糖は、２〜９個の単糖同士がグリコシド結合したオリゴ糖である。グリコシド結合する単糖同士は、同じでもよく、異なっていてもよい。多くの種類の癌に効果がある等の観点からは、グリコシド結合した単糖としては、少なくとも一つはグルコースであることが好ましい。また癌の種類によっては、少なくとも一つはガラクトースであることが好ましいであろう。また、単糖同士のグリコシド結合は、α−結合であっても、β−結合であってもよい。

本実施形態の糖−Ｓ−の基の糖として、二糖類としては、ショ糖、マルトース、ラクトース、オリゴ糖としては、ラフィノース、メレジトース、マルトトリオース、パノースなどの三糖類、マルトテトラオース、アカルボース、スタキオースなどの四糖類、マルトペンタオースなどの五糖類、マルトヘキソースなどの六糖類、さらに七糖類〜九糖類が例示される。ただしグリコシド結合した単糖数が増えすぎるとＳ−グリコシル化クロリン誘導体の水溶性が低下し、また合成および合成物の精製難易度も高くなる。従ってオリゴ糖は、光感受性物質の水溶解性、合成難易度およびその精製難易度、および生体内細胞の脂質二重膜透過性のバランスから、好ましくは二糖類または三糖類〜七糖類であり、より好ましくは三糖類〜六糖類であり、特に好ましくは三糖類〜五糖類であり、特に三糖類と四糖類が好ましい。さらに三糖類としてはマルトトリオース、四糖類としてはマルトテトラオースが好ましい。糖は、Ｄ体であってもよいし、Ｌ体であってもよいが、Ｄ体が好ましく用いられる。

また糖−Ｓ−の基において、糖が有するＯＨ基の一部が、水溶性や薬効に実質的に影響を与えない範囲であれば、保護基によって保護されている状態であっても構わない。ただし、保護基で保護されているＯＨ基が多くなると、Ｓ−グリコシル化クロリン誘導体の水溶性が低下するし、癌細胞による糖認識効果も低減する。従って、Ｓ−グリコシル化クロリン誘導体が有するＯＨ基の脱保護基化率は８０〜１００％が好ましく、９０〜１００％がより好ましく、９５〜１００％が特に好ましい。ここで、保護基としてはアセチル基が好ましく用いられる。

一般式（１）中のＸ¹〜Ｘ²⁰、または一般式（２）中のＸ¹〜Ｘ⁴のうち、２つ以上が糖−Ｓ−に置換されている場合、連結される糖の種類は同一であってもよいし、異なっていてもよい。また、三糖類と四糖類といった異なる単糖結合数の糖が連結されていてもよい。連結される糖の種類が異なるＳ−グリコシル化クロリン誘導体を得るには、Ｈ₂ＴＦＰＣ（クロリン誘導体、実施例１に記載）とそれに連結する糖分子の反応モル比を調節しながら、多段反応を行うことで得ることができる。例えば、一般式（２）中のＸ¹〜Ｘ⁴のうち、２つが「マルトトリオース−Ｓ−」であり、残り２つが「マルトテトラオース−Ｓ−」であるものを合成する場合は、まずチオアセチルマルトトリオースパーアセテート／Ｈ₂ＴＦＰＣ＝２／１のモル比で２分子置換体を合成し、引き続いてチオアセチルマルトテトラオースパーアセテート／２分子置換体＝２／１のモル比で目的とする４分子置換体を合成することができる。

糖の種類が全て同一の場合は、合成が容易となるため好ましく、より好ましくは置換されている糖−Ｓ−の基に含まれている糖の全てが三糖類または四糖類であり、特にマルトトリオースやマルトテトラオースであることが好ましい。

上記一般式（１）および（２）中、Ｒ⁵およびＲ⁶は、水素原子または互いに独立した有機基である。

前記有機基としては、例えば、低級アルキルまたはＱ−（ＣＨ₂）ｋ−である。Ｑは、低級アルキル、アリール、アミノ、低級アルキルアミノ、イミノ、低級アルキルイミノまたはシクロアルキル基である。ここで、低級アルキルとは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル等の炭素数１〜５の直鎖または分岐アルキルをいう。ｋは０〜３の整数である。
Ｒ⁵とＲ⁶が互いに環を形成していてもよく、例えば、Ｒ⁵とＲ⁶で、ポルフィリン環の１〜２４番号法でＡ環の２位と３位に結合するイミノ基（第３級アミン）を構成していてもよい。特にＲ⁵とＲ⁶が互いに環を形成した、一般式（３）に示す構造が好ましい。

本実施形態のＳ−グリコシル化クロリン誘導体は、クロリン環の内側にある四つの窒素原子が金属イオンの配位座として利用されていても構わない。この場合の金属は用途に応じて適宜選択され、特に限定されるものではないが、具体的には、遷移金属、II族、III族、ＩＶ族の金属から選ばれ、好ましくは、Ｐｔ、Ｐｄ、Ａｕ、Ａｌ、Ｚｎ等の遷移金属であり、より好ましくはＰｔ、Ｐｄ、Ａｕといった貴金属である。金属の導入により光照射下での細胞毒性が高められ、特に、貴金属の導入の場合に大きな細胞毒性向上効果が得られることがある。なお、クロリン環への金属の導入方法は、特許文献２に記載された方法に準ずることで可能となる。

以上のような構造を有するＳ−グリコシル化クロリン誘導体は、暗所では細胞毒性は示さないが、光照射下で強い細胞毒性を示すことができる。そして常温で優れた水溶性を示すため、医薬品としての実用性を有し、しかも腫瘍細胞蓄積性が良好であり、これに伴い殺腫瘍細胞性（光毒性）および腫瘍組織の成長抑制効果に優れ、さらに正常細胞による代謝性にも優れるＳ−グリコシル化クロリン誘導体となる。

〔用途〕
本実施形態のＳ−グリコシル化クロリン誘導体は、暗所下では細胞毒性を示さないが、光照射下で強い細胞毒性を示すことを利用して、標的となる生物材料と、暗所下でインビトロまたはインビボで接触させて細胞内に取り込ませた後、当該クロリン誘導体の吸収波長の光を照射することにより、標的を破壊する用途に用いることができる。

ここで、標的としては、ウィルスまたはバクテリアまたはこれらの感染細胞、腫瘍組織、腫瘍状組織、新生血管などが挙げられ、特に腫瘍組織、新生血管に親和性を有し、腫瘍部、新生血管に集積できることから、腫瘍、新生血管の破壊に用いることができる。

従って、本実施形態のＳ−グリコシル化クロリン誘導体は、悪性腫瘍（ｍａｌｉｇａｎｔ ｔｕｍｏｒ）に分類される癌（ｃａｎｃｅｒ）および新生血管に起因する滲出型加齢黄斑変性症の治療薬として利用できる。本実施形態で対象とする悪性腫瘍は、上皮性悪性腫瘍だけでなく、肉腫（ｓａｒｃｏｍａ）に分類されるような非上皮組織を発生母地とするような悪性腫瘍も含む。特に腫瘍細胞が塊状、充実性に増殖する固形癌（ｓｏｌｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、光が届く表層癌の治療に有用である。具体的には、食道癌、肺癌、胃癌、子宮頸癌、子宮体癌等の子宮癌、皮膚癌、前立腺癌、腎臓癌などが挙げられる。皮膚癌には、原発性（扁平上皮癌、基底細胞癌、表皮付属機癌）の他、内臓癌の皮膚転移も含まれる。

また、本実施形態で対象とする加齢黄斑変性症は、網膜の中心にある黄斑部の機能が老化により障害される病気であり、脈絡膜から発生する新生血管の有無で「萎縮型」と「滲出型」に分けられる。本実施形態のＳ−グリコシル化クロリン誘導体は、このうち網膜の下にある脈絡膜に新生血管が生じ、黄斑部に出血、網膜剥離、浮腫などが出現する滲出型加齢黄斑変性症の治療薬として利用できる。

加えて本実施形態のＳ−グリコシル化クロリン誘導体は、悪性腫瘍だけでなく、良性腫瘍に対しても親和性を有することから、局所投与により、日光角化症、重症ニキビ、皮膚乾癬症等の皮膚病の光線力学的治療薬としての利用も可能である。

さらに本実施形態のＳ−グリコシル化クロリン誘導体は、その腫瘍集積性を利用して、癌の光線力学的診断（Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ：ＰＤＤ）に利用することも可能である。ＰＤＤとは、光感受性物質をがん組織に選択的に蓄積させた後、特定波長の光を照射して発せられる蛍光色を観察することによって、がん部位を特定する診断方法である。ＰＤＤは簡便で診断時間も短く、さらに生体侵襲性が少ない癌診断方法である。さらに本実施形態のＳ−グリコシル化クロリン誘導体は、その腫瘍集積性および腫瘍に対する親和性を利用して、腫瘍の検出に利用することも可能である。

〔医薬組成物〕
本実施形態の医薬組成物は、上記本実施形態のＳ−グリコシル化クロリン誘導体を有効成分として含有し、製薬学的に許容できる添加物、例えば固体または液体状の担体、賦形剤を含有する。

有効成分であるＳ−グリコシル化クロリン誘導体は、上述のように、優れた水溶性を有し、しかも細胞透過性に優れ、光毒性が高いので、腫瘍または固形癌の光線力学的治療用剤として好適に使用できる。

本実施形態の組成物の有効成分となる化合物は、カテーテル、静脈内または筋肉内注射により投与でき、またその他の非経口的な経路で投与することができる。また、クリーム状の薬剤組成物とすることで経皮的にも投与できる。その他、体内の深部の腫瘍組織へ直接に局所注入することができる。

本実施形態で用いられる担体は、製剤の種類に応じて適宜選択される。注射用製剤で調製する場合、有効成分の化合物を含む無菌の水溶液または分散液あるいは無菌の凍結乾燥剤の形に製剤化することができる。液体担体としては、例えば、水、生理食塩水、エタノール、含水エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油が好ましい。

本実施形態の医薬組成物には、有効成分とともに、ラクトース、スクロース、第２リン酸カルシウム、カルボキシメチルセルロース等の希釈剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムおよびタルクのような滑剤；デンプン、グルコース、糖蜜、ポリビニルピロリドン、セルロースおよびその誘導体等の結合剤を含み得る。

本実施形態における一製剤当たりの有効成分の含量は、治療すべき対象や用法によって適宜とすることができるが、例えば、Ｓ−グリコシル化クロリン誘導体の量として、１〜２０００ｍｇとすることができ、５〜１０００ｍｇとしてもよく、１０〜５００ｍｇとしてもよい。

本実施形態のＳ−グリコシル化クロリン誘導体の投与量は、治療すべき対象や目的によって異なるが、一般に、Ｓ−グリコシル化クロリン誘導体の量として、腫瘍の診断または検出、および腫瘍治療のためには０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは０．２〜２０ｍｇ／ｋｇが目安となる。

有効成分であるＳ−グリコシル化クロリン誘導体は、その光細胞毒性が高いことから、従来品（フォトフリン（登録商標）やレザフィリン（登録商標））よりも投与量を少なくして、同等以上の効果を得ることを期待できる。このことは、代謝、排泄に要する時間が短くて済むことを意味し、光線力学的療法の活用利便性を高める。

腫瘍の治療のためには、Ｓ−グリコシル化クロリン誘導体を投与した後、治療すべき部位に、該当化合物の吸収帯を含む光線を照射する。具体的には、５００ｎｍ以上の光線照射により一重項酸素を発生して、目的の細胞毒性を発揮することができるが、好ましくは最大吸収波長の光の割合が高い光（６４０〜６６５ｎｍ）を照射することである。

照射源としては、ＬＥＤ、レーザー、ハロゲンランプなどが用いられる。レーザーとしては、色素レーザー、半導体レーザー、アルゴンレーザーなど、励起に必要な波長の光線が得られるものであればよい。

本実施形態のＳ−グリコシル化クロリン誘導体は、ポルフィリン誘導体と比較して相対的に吸光係数が大きいため、照射する光線の強度は、通常用いる光増感剤に比べて弱くても良い。従って、本実施形態のクロリン誘導体を用いる光線力学的療法は、療法を受ける生体への負担がより少なくなる。具体的には、光線照射量は、１〜１００Ｊ／ｃｍ²であることができる。

以下に本実施形態を、実施例および比較例に基づき詳細に説明する。ただし、本発明はこれらによってなんら限定されるものではない。

［実施例１］
１．マルトトリオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ ₃ −ｃｈｌｏｒｉｎ）の合成
（１）Ｈ₂ＴＦＰＣの合成（クロリン誘導体の合成）

１２００ｍｇのＨ₂ＴＦＰＰ（１．２０ｍｍｏｌ；Ｆｒｏｎｔｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）、２４０ｍｇのＮ−メチルグリシン（２．６４ｍｍｏｌ）および２４０ｍｇのパラホルムアルデヒド（７．９２ｍｍｏｌ）を、３００ｍＬのトルエンに溶解し、窒素雰囲気下で１６時間加熱還流した。この間、Ｎ−メチルグリシン（約２４０ｍｇ）とパラホルムアルデヒド（約２４０ｍｇ）を反応開始から２時間毎に追添した。１６時間後、反応混合物を冷却し溶媒を減圧留去した。クロロホルム（１００ｍＬ）を加え、水洗し過剰量のＮ−メチルグリシンとパラホルムアルデヒドを除去した。クロロホルム溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。得られた粗生成物を中圧分取液体クロマトグラフ装置（山善株式会社製 ＥＰＣＬＣ−Ｗ−Ｐｒｅｐ ２ＸＹ Ａ−Ｔｙｐｅ）を用い、未反応原料（Ｈ₂ＴＦＰＰ）、目的物（Ｈ₂ＴＦＰＣ）、副反応物（イソバクテリオクロリン誘導体）のフラクションに分離し（溶離液はクロロホルムと酢酸エチル）、目的物フラクション（深緑色）から溶媒除去、減圧乾燥することにより、Ｈ₂ＴＦＰＣ（５，１０，１５，２０−テトラキス（ペンタフルオロフェニル）−２，３−〔メタノ（Ｎ−メチル）イミノメタノ〕クロリン）を得た。収量５９５ｍｇ、収率５５％。

構造同定は、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００５，７０，２３０６−２３１４に基づき、¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，重クロロホルム溶媒）にて行った。

（２）１β-チオアセチルマルトトリオースパーアセテート［Ａｃ−Ｍａｌ₃−ＳＡｃ］の合成

（２−１）マルトトリオースパーアセテート［Ａｃ−Ｍａｌ₃］の合成
マルトトリオース［Ｍａｌ₃］３．００ｇ(５．９５ｍｍｏｌ：和光純薬株式会社製) をピリジン１５．６ｍＬ(１９３ｍｍｏｌ)に３０℃で溶解し、これを０℃に冷却後、無水酢酸１０．４ｍＬ(１１１ｍｍｏｌ)とジメチルアミノピリジン０．０６ｇ（０．４９ｍｍｏｌ）を加えた。氷浴を外し、そのまま１２時間撹拌した。薄層クロマトグラフィー法（ＴＬＣ；トルエン/アセトン＝２／１）で、原料消失と新規スポットの形成（Ｒｆ＝０．５４）にて反応終了を確認した。反応液に無水エタノール(４５ｍＬ)を加え、液体窒素でトラップしながら内容物を減圧濃縮した後、クロロホルム(９０ｍＬ)に溶解し、このクロロホルム溶液を、２Ｎ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の各１００ｍＬで順次洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥後、クロロホルムを減圧留去し、真空乾燥後に白色固体のマルトトリオースパーアセテートＡｃ−Ｍａｌ₃(５．７０ｇ)を得た。

構造同定は、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ：Ｐａｒｔ Ａ：Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．４４，４８６４−４８７９（２００６）に基づき、¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，重クロロホルム溶媒）にて行った。

（２−２）１α-ブロモマルトトリオースパーアセテート［Ａｃ−Ｍａｌ₃−Ｂｒ］の合成
上記（２−１）で合成したマルトトリオースパーアセテート５．３８ｇ(５．５６ｍｍｏｌ)を超脱水ジクロロメタン５０ｍＬ（和光純薬株式会社製）に溶解した後、臭化水素の２５％酢酸溶液２７ｍＬ（１０８ｍｍｏｌ)を加え、窒素下、室温で３０分撹拌した。ＴＬＣ(ヘキサン/酢エチ＝１／２)にて、原料であるＡｃ−Ｍａｌ₃(Ｒｆ＝０．３３)が消費され、新規スポットの生成(Ｒｆ＝０．４７)を確認した。反応混合物を、ジクロロメタン８０ｍＬと水８０ｍＬで分配し、水層はジクロロメタンで再抽出(８０ｍＬ×２回)した。合わせたジクロロメタン層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液２００ｍＬで２回洗浄し、さらに飽和食塩水２００ｍＬで洗浄した。ジクロロメタン層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ジクロロメタンの減圧留去、真空乾燥を行い、白色固体の1α-ブロモマルトトリオースパーアセテート（Ａｃ−Ｍａｌ₃−Ｂｒ）を収量４．５７ｇ、収率８４％で得た。

構造同定は、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ．Ｅｄ，２００４，４３，８２７（Ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｚ５２９７５）に基づき、¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，重クロロホルム溶媒）にて行った。

（２−３）１β-チオアセチルマルトトリオースパーアセテート［Ａｃ−Ｍａｌ₃−ＳＡｃ］の合成
上記（２−２）で合成した1α-ブロモマルトトリオースパーアセテート４．２３ｇ（４．２８ｍｍｏｌ)をドライアセトン１５ｍｌ（和光純薬株式会社製）に溶解し、チオ酢酸カリウム０．９８ｇ(８．５６ｍｍｏｌ)を加え、窒素下、室温で２１時間撹拌した。溶媒留去と真空乾燥後、反応混合物をジクロロメタン１５ｍＬと飽和食塩水３０ｍＬで分配した。さらに水層はジクロロメタン１５ｍＬで３回再抽出した。合わせたジクロロメタン層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し(５０ｍＬ×１回)、ｐＨ８であることを確認した。さらに飽和食塩水５０ｍＬで洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒留去と真空乾燥を行って、淡黄色固体４．０５ｇ（収率９６％）を得た。

構造同定は、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ．Ｅｄ，２００４，４３，８２７（Ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｚ５２９７５）に基づき、¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，重クロロホルム溶媒）にて行った。

（３）Ｈ₂ＴＦＰＣとＡｃ−Ｍａｌ₃−ＳＡｃの連結によるマルトトリオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎ）の合成

（１）で合成したＨ₂ＴＦＰＣの２００ｍｇ（１９３ｍｍｏｌ）、上記（２−３）で合成した1β-チオアセチルマルトトリオースパーアセテート（Ａｃ−Ｍａｌ₃−ＳＡｃ）の７６２ｍｇ（７７８ｍｍｏｌ）およびジエチルアミン４ｍＬ（３８．６ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド４０ｍＬに溶解し、氷水浴上で２時間撹拌、さらに室温で１７時間撹拌した。薄層クロマトグラフィー法（ＴＬＣ；トルエン/アセトン＝２/１）で原料消失と新規スポットの形成（Ｒｆ＝０．４３）を確認し、反応終了とした。反応液から溶媒を減圧留去後、クロロホルム（４０ｍＬ）を加え、十分に水洗後、無水硫酸ナトリウムでクロロホルム層を乾燥し、溶媒を減圧留去した。粗生成物をリサイクル分取ＨＰＬＣ装置（日本分析工業株式会社製ＬＣ−９１３０II ＮＥＸＴ、移動相はクロロホルム）にてリサイクル分離し、メインフラクションを分取した。溶媒除去することでパーアセチル化マルトトリオース連結フッ化クロリン（Ａｃ−Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎ）の３１９．６ｍｇを得た。

得られた化合物のフッ素ＮＭＲを測定し、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．１１，２０１０．に記載のグルコース連結フッ化クロリン（５，１０，１５，２０−テトラキス（４−（β−Ｄ−グルコピラノシルチオ）−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル）−２，３−（メタノ（Ｎ−メチル）イミノメタノ）クロリン）のフッ素ＮＭＲのスペクトルデータと比較することで、フェニル基のパラ位が置換された構造であることが確認できた。

¹⁹Ｆ−ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆，Ｃ₆Ｆ₆＝−１６３．６０ｐｐｍ）：δ（ｐｐｍ）＝−１３３．６２（４Ｆ，Ａｒ−ｍ−Ｆ），−１３４．７６（４Ｆ，Ａｒ−ｍ−Ｆ），−１３８．５９（２Ｆ，Ａｒ−ｏ−Ｆ），−１４０．６０（６Ｆ，Ａｒ−ｏ−Ｆ）．

続いて、得られたパーアセチル化マルトトリオース連結フッ化クロリン（Ａｃ−Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎ）の３１９．６ｍｇ（６７．９μｍｏｌ）を超脱水ジクロロメタン３５ｍＬ（和光純薬株式会社製）と超脱水メタノール１４０ｍＬ（和光純薬株式会社製）の混合溶媒に溶解した。これにナトリウムメトキシド４４２ｍｇ（８．２ｍｍｏｌ）を加えた後、窒素雰囲気下、室温で４時間撹拌し、脱アセチル化反応を行った。薄層クロマトグラフィー法（ＴＬＣ；水/アセトニトリル＝１/１）で原料消失と新規スポットの形成（Ｒｆ＝０．４７）の確認にて反応終了を確認した。得られた反応液を氷水浴上で冷却しながら酢酸で中和した後、溶媒を減圧留去した。得られた化合物を蒸留水１７５mlに溶解し、再生セルロース膜（スペクトラムラボラトリーズ社製，Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ６ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｍｅｍｂｒａｎｅ ＭＷＣＯ：１０００）を用いて２日間透析し、脱塩した。凍結乾燥後、さらに真空乾燥して、マルトトリオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎ）を１０８ｍｇ得た。

得られた化合物のＬＣ／ＭＳ法による解析結果から、完全脱アセチル化体（Ｍ）が６２．３％（ＬＣエリア面積）、アセチル基が１個残った構造体（Ｍ＋１Ａｃ）が２０．２％、アセチル基が２個残った構造体（Ｍ＋２Ａｃ）が１０．７％、アセチル基が３個残った構造体（Ｍ＋３Ａｃ）が２．１％、アセチル基が４個残った構造体（Ｍ＋４Ａｃ）が１．６％で検出された。従って、得られたＭａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎの純度は９６．９％、脱アセチル化率は９８．６％である事が分かった。

ＭＳ：ｍ／ｚ＝１５２５．３６［Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₄］²⁺＋１０１７．２４［Ｍ＋２Ｈ＋ＮＨ₄］³⁺（Ｍ，６２．３％），ｍ／ｚ＝１５４６．３６［Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₄］²⁺＋１０３１．２４［Ｍ＋２Ｈ＋ＮＨ₄］³⁺（Ｍ＋１Ａｃ，２０．２％），ｍ／ｚ＝１５６７．３７［Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₄］²⁺＋１０４５．２５［Ｍ＋２Ｈ＋ＮＨ₄］³⁺（Ｍ＋２Ａｃ，１０．７％），ｍ／ｚ＝１５８８．３７［Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₄］²⁺＋１０５９．２５［Ｍ＋２Ｈ＋ＮＨ₄］³⁺（Ｍ＋３Ａｃ，２．１％），ｍ／ｚ＝１６０９．３８［Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₄］²⁺＋１０７８．９３［Ｍ＋２Ｈ＋ＮＨ₄］³⁺（Ｍ＋４Ａｃ，１．６％）．ｍ／ｚ（［Ｍ＋Ｈ］⁺）； ｃａｌｃｄ．３０３２．６８ ｆｏｒ Ｃ₁₁₉Ｈ₁₄₂Ｆ₁₆Ｎ₅Ｏ₆₀Ｓ₄，ｆｏｕｎｄ．３０３２．７；ＵＶ（Ｈ₂Ｏ）：λ（ｎｍ）＝４１３，５１０，６００，ａｎｄ ６５２．

なおＬＣ／ＭＳ装置として、液体クロマトグラフ装置（ＬＣ）はＷａｔｅｒｓ社製ＵＰＬＣ（カラムはＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ社製Ｋｉｎｅｔｅｘ ２．６ｕ ＸＢ−Ｃ１８ １００Ａ）を用い、移動相は１０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液／メタノール＝６０／４０〜０／１００、検出は４０４ｎｍを用いた。質量分析装置（ＭＳ）は、Ｗａｔｅｒｓ社製Ｓｙｎａｐｔ Ｇ２を用い、イオン化法はＥＳＩ＋、スキャンレンジはｍ／ｚ＝５００〜３０００で行った。

２．マルトトリオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ ₃ −ｃｈｌｏｒｉｎ）の水溶性評価
５．０ｍｇのＭａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎに少量の蒸留水（０．１３５ｍＬ）を加えたところ、Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎは容易に全て溶解した。この結果、Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎの水溶性は高く、水への溶解度は３７ｍｇ／ｍＬ以上であることが分かった。

医薬品として実用化されているフォトフリン（登録商標）は、７５ｍｇを５％ブドウ糖注射液３０ｍＬに溶解して使用する。この場合の濃度は２．５ｍｇ／ｍＬである。またレザフィリン（登録商標、一般名はタラポルフィンナトリウム）は、１００ｍｇを生理食塩液４ｍＬに溶解して使用する。この場合は２５ｍｇ／ｍＬ。従って、Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎは実用上、十分な溶解性を有していることが分かる。結果を表１に示す。

３．マルトトリオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ ₃ −ｃｈｌｏｒｉｎ）の光毒性評価
光毒性評価にはＩＣ５０（Ｈａｌｆ ｍａｘｉｍａｌ（５０％）ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ）を用いることとし、以下の手順で測定した。

ヒト胃癌由来細胞であるＭＫＮ４５（ＪＣＲＢ細胞バンクより入手して６か月間継代培養したもの）およびＭＫＮ２８（株式会社免疫生物研究所より入手して６か月間継代培養したもの）を、それぞれ９６穴プレートの所定数量のｗｅｌｌに５×１０³個／ｗｅｌｌ播種し（ＦＢＳを１０％含むＲＰＭＩ１６４０培地、１００μＬ）、５％ＣＯ₂存在下、３７℃で２４時間培養した。次にそれぞれのｗｅｌｌに、マルトトリオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎ）を異なる濃度で含む同培地溶液を１００μＬ加え、各ｗｅｌｌを所定の薬剤濃度に調整し、４時間培養した後、１００μＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で１回洗浄した後、再度１００μＬのＰＢＳを加えた。その後、６６０ｎｍのＬＥＤ光源（３０．８ｍＷ／ｃｍ²）を用いて８分４０秒光照射した（１６Ｊ／ｃｍ²）。照射後、ＰＢＳを取り除き、２％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地を１００μＬ加え、２４時間培養した。

培養後、Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｋｉｔ−８（Ｄｏｊｉｎｄｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ：生細胞数測定キット）を用い、マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍの吸光度を測定することで、Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎを添加していない場合に対する相対値としての細胞生存率を算出した。なお測定はｎ＝８で行い、８回で得た値の最大値と最小値を除き、平均値をＩＣ５０の値とした。

マルトトリオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎ）のＩＣ５０は、それぞれ１．３μｍｏｌ／Ｌ（ＭＫＮ４５）および０．７０μｍｏｌ／Ｌ（ＭＫＮ２８）であった。また比較例１と比較するため、Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎを加えて細胞培養する際の培地に１％ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）を加え、同様にＩＣ５０の測定も行った。この場合のＩＣ５０は、それぞれ０．７９μｍｏｌ／Ｌ（ＭＫＮ４５）および１．０μｍｏｌ／Ｌ（ＭＫＮ２８）であり、培地に１％ＤＭＳＯを含んでいてもＩＣ５０の値に大きな影響はないことが分かった。得られた結果を表１に示す。

表１より、Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎとＧｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎ（比較例１）のＩＣ５０は、いずれもタラポルフィンナトリウムのＩＣ５０（比較例２）よりも有意に小さいことが分かった。これは両者が優れた光毒性（光腫瘍細胞毒性）を有することを意味する。

さらにＭａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎは、光毒性に優れるだけでなく、Ｇｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎでは実現できない優れた水溶性を有することが分かった。水溶性が良好になることで腫瘍細胞の細胞膜透過性が低下し、薬効の低下も懸念されたが、Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎは水溶性と細胞膜透過性のバランスを両立する優れたＰＤＴ用光感受性物質であることが分かった。

［実施例２］
１．マルトテトラオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ ₄ −ｃｈｌｏｒｉｎ）の合成
（１）1β-チオアセチルマルトテトラオースパーアセテート［Ａｃ−Ｍａｌ₄−ＳＡｃ］の合成

（１−１）マルトテトラオースパーアセテート［Ａｃ−Ｍａｌ₄］の合成
マルトテトラオース［Ｍａｌ₄］５．００ｇ(７．５０ｍｍｏｌ：和光純薬株式会社製) をピリジン２４．５６ｍＬ(３１０ｍｍｏｌ)に３０℃で溶解し、これを０℃に冷却後、無水酢酸１８．１１ｍＬ(１７７ｍｍｏｌ)とジメチルアミノピリジン０．１ｇ（０．７９ｍｍｏｌ）を加えた。氷浴を外し、そのまま１２時間撹拌した。薄層クロマトグラフィー法（ＴＬＣ；トルエン/アセトン＝２／１）で、原料消失と新規スポットの形成（Ｒｆ＝０．６３）にて反応終了を確認した。反応液に無水エタノール(６０ｍＬ)を加え、液体窒素でトラップしながら内容物を減圧濃縮した後、クロロホルム(１００ｍＬ)に溶解し、このクロロホルム溶液を、２Ｎ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の各１２５ｍＬで順次洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥後、クロロホルムを減圧留去し、真空乾燥後に白色固体のマルトテトラオースパーアセテートＡｃ−Ｍａｌ₄(１０．１５ｇ)を得た。構造同定は、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ：Ｐａｒｔ Ａ：Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖｏｌ．４４，４８６４−４８７９（２００６）に基づき、¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，重クロロホルム溶媒）にて行った。

（１−２）1α-ブロモマルトテトラオースパーアセテート［Ａｃ−Ｍａｌ₄−Ｂｒ］の合成
上記（１−１）で合成したマルトテトラオースパーアセテート９．５６ｇ(７．６２ｍｍｏｌ)を超脱水ジクロロメタン１００ｍＬ（和光純薬株式会社製）に溶解した後、臭化水素の２５％酢酸溶液３７ｍＬ（１４８ｍｍｏｌ)を加え、窒素下、室温で３０分撹拌した。ＴＬＣ(ヘキサン/酢エチ＝１／２)にて、原料であるＡｃ−Ｍａｌ₄(Ｒｆ＝０．４３)が消費され、新規スポットの生成(Ｒｆ＝０．５５)を確認した。反応混合物を、ジクロロメタン５０ｍＬと水１５０ｍＬで分配し、水層はジクロロメタンで再抽出(５０ｍＬ×２回)した。合わせたジクロロメタン層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液２００ｍＬで２回洗浄し、さらに飽和食塩水２００ｍＬで洗浄した。ジクロロメタン層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ジクロロメタンの減圧留去、真空乾燥を行い、白色固体の1α-ブロモマルトテトラオースパーアセテート（Ａｃ−Ｍａｌ₄−Ｂｒ）を収量８．７ｇ、収率９０％で得た。得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲを測定し、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ．Ｅｄ，２００４，４３，８２７（Ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｚ５２９７５）に記載の1α-ブロモマルトトリオースパーアセテート［Ａｃ−Ｍａｌ₃−Ｂｒ］の¹Ｈ−ＮＭＲのスペクトルデータにおける６．５３ｐｐｍのピーク（ピラノース環のアノマー位の水素に帰属される）に対応する、６．５０ｐｐｍのピークの出現を確認することで、ピラノース環のアノマー位のアセチル基がＢｒ基に置換された構造であると判断した。

¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，重クロロホルム溶媒，テトラメチルシラン＝０ｐｐｍ）：δ（ｐｐｍ）＝２．００-２．２０（３９Ｈ，１３×ＯＡｃ），３．９２-５．６０（２７Ｈ），６．５０（１Ｈ）．

（１−３）1β-チオアセチルマルトテトラオースパーアセテート［Ａｃ−Ｍａｌ₄−ＳＡｃ］の合成
上記（１−２）で合成した1α-ブロモマルトテトラオースパーアセテート８．４ｇ（６．６９ｍｍｏｌ)をドライアセトン５０ｍｌ（和光純薬株式会社製）に溶解し、チオ酢酸カリウム１．５３ｇ(１３．４ｍｍｏｌ)を加え、窒素下、室温で２１時間撹拌した。溶媒留去と真空乾燥後、反応混合物をジクロロメタン３０ｍＬと飽和食塩水６０ｍＬで分配した。さらに水層はジクロロメタン３０ｍＬで３回再抽出した。合わせたジクロロメタン層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し(１００ｍＬ×１回)、ｐＨ８であることを確認した。さらに飽和食塩水１００ｍＬで洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒留去と真空乾燥を行って、淡黄色固体８．４１ｇ（収率９９％）を得た。得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲを測定し、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ．Ｅｄ，２００４，４３，８２７（Ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｚ５２９７５）に記載の1β-チオアセチルマルトトリオースパーアセテート［Ａｃ−Ｍａｌ₃−ＳＡｃ］の¹Ｈ−ＮＭＲのスペクトルデータにおける２．４０ｐｐｍのピーク（ピラノース環のアノマー位に連結したチオアセチル基に帰属される）に対応する、２．３７ｐｐｍのピークを確認することで、ピラノース環のアノマー位のＢｒ基がチオアセチル基に置換された構造であると判断した。

¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，重クロロホルム溶媒，テトラメチルシラン＝０ｐｐｍ）：δ（ｐｐｍ）＝１．９９-２．１８（３９Ｈ，１３×ＯＡｃ），２．３７（３Ｈ，ＳＡｃ），３．８７-５．４２（２８Ｈ）．

（２）Ｈ₂ＴＦＰＣとＡｃ−Ｍａｌ₄−ＳＡｃの連結によるマルトテトラオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₄−ｃｈｌｏｒｉｎ）の合成

実施例１で合成したＨ₂ＴＦＰＣの２００ｍｇ（１９３ｍｍｏｌ）、上記（１−３）で合成した1β-チオアセチルマルトテトラオースパーアセテート（Ａｃ−Ｍａｌ₄−ＳＡｃ）の９８６ｍｇ（７７５ｍｍｏｌ）及びジエチルアミン５．０ｍＬ（４８．２ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド４０ｍＬに溶解し、氷水浴上で３時間撹拌した。薄層クロマトグラフィー法（ＴＬＣ；トルエン/アセトン＝２/１）で原料消失と新規スポットの形成（Ｒｆ＝０．３６）を確認し、反応終了とした。反応液から溶媒を減圧留去後、クロロホルム（４０ｍＬ）を加え、十分に水洗後、無水硫酸ナトリウムでクロロホルム層を乾燥し、溶媒を減圧留去した。粗生成物をリサイクル分取ＨＰＬＣ装置（日本分析工業株式会社製ＬＣ−９１３０II ＮＥＸＴ、移動相はクロロホルム）にてリサイクル分離し、メインフラクションを分取した。溶媒除去することでパーアセチル化マルトテトラオース連結フッ化クロリン（Ａｃ−Ｍａｌ₄−ｃｈｌｏｒｉｎ）の２２４ｍｇを得た。

得られた化合物のフッ素ＮＭＲを測定し、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．１１，２０１０．に記載のグルコース連結フッ化クロリン（５，１０，１５，２０−テトラキス（４−（β−Ｄ−グルコピラノシルチオ）−２，３，５，６−テトラフルオロフェニル）−２，３−（メタノ（Ｎ−メチル）イミノメタノ）クロリン）のフッ素ＮＭＲのスペクトルデータと比較することで、フェニル基のパラ位が置換された構造であることが確認できた。¹⁹Ｆ−ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ₆，Ｃ₆Ｆ₆＝−１６３．６０ｐｐｍ）：δ（ｐｐｍ）＝−１３３．５６（４Ｆ，Ａｒ−ｍ−Ｆ），−１３４．７２（４Ｆ，Ａｒ−ｍ−Ｆ），−１３８．９６（２Ｆ，Ａｒ−ｏ−Ｆ），−１４０．９０（６Ｆ，Ａｒ−ｏ−Ｆ）．

続いて、得られたパーアセチル化マルトテトラオース連結フッ化クロリン（Ａｃ−Ｍａｌ₄−ｃｈｌｏｒｉｎ）の２１５．５ｍｇ（３６．７μｍｏｌ）を超脱水ジクロロメタン２０ｍＬ（和光純薬株式会社製）と超脱水メタノール８０ｍＬ（和光純薬株式会社製）の混合溶媒に溶解した。これにナトリウムメトキシド３０９ｍｇ（５．７ｍｍｏｌ）を加えた後、窒素雰囲気下、室温で６時間撹拌し、脱アセチル化反応を行った。薄層クロマトグラフィー法（ＴＬＣ；水/アセトニトリル＝１/１）で原料消失と新規スポットの形成（Ｒｆ＝０．６０）の確認にて反応終了を確認した。得られた反応液を氷水浴上で冷却しながら酢酸で中和した後、溶媒を減圧留去した。得られた化合物を蒸留水１２０mlに溶解し、再生セルロース膜（スペクトラムラボラトリーズ社製，Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ６ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｍｅｍｂｒａｎｅ ＭＷＣＯ：１０００）を用いて２日間透析し、脱塩した。凍結乾燥後、さらに真空乾燥して、マルトテトラオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₄−ｃｈｌｏｒｉｎ）を４０ｍｇ得た。

得られた化合物のＬＣ／ＭＳ法による解析結果から、完全脱アセチル化体（Ｍ）が２８．９％（ＬＣエリア面積）、アセチル基が１個残った構造体（Ｍ＋１Ａｃ）が１９．６％、アセチル基が２個残った構造体（Ｍ＋２Ａｃ）が１７．１％、アセチル基が３個残った構造体（Ｍ＋３Ａｃ）が１４．０％、アセチル基が４個残った構造体（Ｍ＋４Ａｃ）が６．０％、アセチル基が５個残った構造体（Ｍ＋５Ａｃ）が４．２％、アセチル基が６個残った構造体（Ｍ＋６Ａｃ）が２．５％、アセチル基が７個残った構造体（Ｍ＋７Ａｃ）が２．０％、アセチル基が８個残った構造体（Ｍ＋８Ａｃ）が０．３％で検出された。従って、得られたＭａｌ₄−ｃｈｌｏｒｉｎの純度は９４．６％、脱アセチル化率は９６．５％である事が分かった。

ＭＳ：ｍ／ｚ＝１８４９．４６［Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₄］²⁺（Ｍ，２８．９％），ｍ／ｚ＝１８７０．４６［Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₄］²⁺（Ｍ＋１Ａｃ，１９．６％），ｍ／ｚ＝１８９１．４８［Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₄］²⁺（Ｍ＋２Ａｃ，１７．１％），ｍ／ｚ＝１９１２．４８［Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₄］²⁺（Ｍ＋３Ａｃ，１４．０％），ｍ／ｚ＝１９３３．４８［Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₄］²⁺（Ｍ＋４Ａｃ，６．０％），ｍ／ｚ＝１９４５．９８［Ｍ＋２Ｈ］²⁺＋１９５４．４９［Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₄］²⁺（Ｍ＋５Ａｃ，４．２％），ｍ／ｚ＝１９６６．９８［Ｍ＋２Ｈ］²⁺＋１９７５．５０［Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₄］²⁺（Ｍ＋６Ａｃ，２．５％），ｍ／ｚ＝１９８７．９９［Ｍ＋２Ｈ］²⁺＋１９９６．５０［Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₄］²⁺（Ｍ＋７Ａｃ，２．０％），ｍ／ｚ＝２００８．９９［Ｍ＋２Ｈ］²⁺＋２０１７．５１［Ｍ＋Ｈ＋ＮＨ₄］²⁺（Ｍ＋８Ａｃ，０．３％）．ｍ／ｚ（［Ｍ＋Ｈ］⁺）； ｃａｌｃｄ．３６８０．８９ ｆｏｒ Ｃ₁₄₃Ｈ₁₈₂Ｆ₁₆Ｎ₅Ｏ₈₀Ｓ₄，ｆｏｕｎｄ．３６８０．９；ＵＶ（Ｈ₂Ｏ）：λ（ｎｍ）＝４０７，５０８，５９９，ａｎｄ ６５１．

なおＬＣ／ＭＳ測定は、実施例１と同様の手法で行った。

２．マルトテトラオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ ₄ −ｃｈｌｏｒｉｎ）の水溶性評価
５．０ｍｇのＭａｌ₄−ｃｈｌｏｒｉｎに少量の蒸留水（０．１３５ｍＬ）を加えたところ、Ｍａｌ₄−ｃｈｌｏｒｉｎは容易に全て溶解した。この結果、Ｍａｌ₄−ｃｈｌｏｒｉｎの水溶性は高く、水への溶解度は３７ｍｇ／ｍＬ以上であり、実用上、十分な溶解性を有していることが分かった。結果を表１に示す。

３．マルトテトラオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ ₄ −ｃｈｌｏｒｉｎ）の光毒性評価
実施例１−３において、Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎの代わりにマルトテトラオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₄−ｃｈｌｏｒｉｎ）を用いる他は、同様の方法でＩＣ５０を測定した。マルトテトラオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₄−ｃｈｌｏｒｉｎ）のＩＣ５０は、それぞれ３．６μｍｏｌ／Ｌ（ＭＫＮ４５）および１．１μｍｏｌ／Ｌ（ＭＫＮ２８）であった。得られた結果を表１に示す。

表１より、Ｍａｌ₄−ｃｈｌｏｒｉｎのＩＣ５０はタラポルフィンナトリウムのＩＣ５０（比較例２）よりも有意に小さいことが分かった。これは優れた光毒性（光腫瘍細胞毒性）を有することを意味する。

水溶性が良好になることで腫瘍細胞の細胞膜透過性が低下し、薬効の低下も懸念されたが、Ｍａｌ₄−ｃｈｌｏｒｉｎは水溶性と細胞膜透過性のバランスを両立する優れたＰＤＴ用光感受性物質であることが分かった。

［実施例３］
１．マルトヘプタオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ ₇ −ｃｈｌｏｒｉｎ）の合成
（１）1β-チオアセチルマルトヘプタオースパーアセテート［Ａｃ−Ｍａｌ₇−ＳＡｃ］の合成

（１−１）マルトヘプタオースパーアセテート［Ａｃ−Ｍａｌ₇］の合成
マルトヘプタオース［Ｍａｌ₇］５．００ｇ(４．３４ｍｍｏｌ：和光純薬株式会社製) をピリジン２６．０３ｍＬ(３２９ｍｍｏｌ)に３０℃で溶解し、これを０℃に冷却後、無水酢酸１９．１９ｍＬ(１８８ｍｍｏｌ)とジメチルアミノピリジン０．１ｇ（０．８４ｍｍｏｌ）を加えた。氷浴を外し、そのまま１２時間撹拌した。薄層クロマトグラフィー法（ＴＬＣ；トルエン/アセトン＝２／１）で、原料消失と新規スポットの形成（Ｒｆ＝０．９０）にて反応終了を確認した。反応液に無水エタノール(６０ｍＬ)を加え、液体窒素でトラップしながら内容物を減圧濃縮した後、クロロホルム(１００ｍＬ)に溶解し、このクロロホルム溶液を、２Ｎ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和食塩水の各１２５ｍＬで順次洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥後、クロロホルムを減圧留去し、真空乾燥後に白色固体のマルトヘプタオースパーアセテートＡｃ−Ｍａｌ₇(９．７４ｇ)を得た。

（１−２）1α-ブロモマルトヘプタオースパーアセテート［Ａｃ−Ｍａｌ₇−Ｂｒ］の合成
上記（１−１）で合成したマルトヘプタオースパーアセテート９．３０ｇ(４．３９ｍｍｏｌ)を超脱水ジクロロメタン１００ｍＬ（和光純薬株式会社製）に溶解した後、臭化水素の２５％酢酸溶液２８ｍＬ（８５．５ｍｍｏｌ)を加え、窒素下、室温で３０分撹拌した。ＴＬＣ(ヘキサン/酢エチ＝１／２)にて、原料であるＡｃ−Ｍａｌ₇(Ｒｆ＝０．７０)が消費され、新規スポットの生成(Ｒｆ＝０．８２)を確認した。反応混合物を、ジクロロメタン１４０ｍＬと水１４０ｍＬで分配し、水層はジクロロメタンで再抽出(１４０ｍＬ×２回)した。合わせたジクロロメタン層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液３５０ｍＬで２回洗浄し、さらに飽和食塩水３５０ｍＬで洗浄した。ジクロロメタン層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、ジクロロメタンの減圧留去、真空乾燥を行い、白色固体の1α-ブロモマルトヘプタオースパーアセテート（Ａｃ−Ｍａｌ₇−Ｂｒ）を収量８．３ｇ、収率８７％で得た。得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲを測定し、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ．Ｅｄ，２００４，４３，８２７（Ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｚ５２９７５）に記載の1α-ブロモマルトトリオースパーアセテート［Ａｃ−Ｍａｌ₃−Ｂｒ］の¹Ｈ−ＮＭＲのスペクトルデータにおける６．５３ｐｐｍのピーク（ピラノース環のアノマー位の水素に帰属される）に対応する、６．５０ｐｐｍのピークの出現を確認することで、ピラノース環のアノマー位のアセチル基がＢｒ基に置換された構造であると判断した。

（１−３）1β-チオアセチルマルトヘプタオースパーアセテート［Ａｃ−Ｍａｌ₇−ＳＡｃ］の合成
上記（１−２）で合成した1α-ブロモマルトヘプタオースパーアセテート８．０ｇ（３．７４ｍｍｏｌ)をドライアセトン３０ｍｌ（和光純薬株式会社製）に溶解し、チオ酢酸カリウム０．８５ｇ(７．４７ｍｍｏｌ)を加え、窒素下、室温で２１時間撹拌した。溶媒留去と真空乾燥後、反応混合物をジクロロメタン３０ｍＬと飽和食塩水６０ｍＬで分配した。さらに水層はジクロロメタン３０ｍＬで３回再抽出した。合わせたジクロロメタン層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し(１００ｍＬ×１回)、ｐＨ８であることを確認した。さらに飽和食塩水１００ｍＬで洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒留去と真空乾燥を行って、淡黄色固体７．８５ｇ（収率９８％）を得た。得られた化合物の¹Ｈ−ＮＭＲを測定し、Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔ．Ｅｄ，２００４，４３，８２７（Ｓｕｐｐｏｒｔｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．Ｚ５２９７５）に記載の1β-チオアセチルマルトトリオースパーアセテート［Ａｃ−Ｍａｌ₃−ＳＡｃ］の¹Ｈ−ＮＭＲのスペクトルデータにおける２．４０ｐｐｍのピーク（ピラノース環のアノマー位に連結したチオアセチル基に帰属される）に対応する、２．３７ｐｐｍのピークを確認することで、ピラノース環のアノマー位のＢｒ基がチオアセチル基に置換された構造であると判断した。

（２）Ｈ₂ＴＦＰＣとＡｃ−Ｍａｌ₇−ＳＡｃの連結によるマルトヘプタオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₇−ｃｈｌｏｒｉｎ）の合成

実施例１で合成したＨ₂ＴＦＰＣの２００ｍｇ（１９３．９ｍｍｏｌ）、上記（１−３）で合成した1β-チオアセチルヘプタオースパーアセテート（Ａｃ−Ｍａｌ₇−ＳＡｃ）の１．６６ｇ（７７６ｍｍｏｌ）及びジエチルアミン４．０ｍＬ（５２．３ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド４０ｍＬに溶解し、氷水浴上で３時間撹拌した。薄層クロマトグラフィー法（ＴＬＣ；トルエン/アセトン＝２/１）で原料消失と新規スポットの形成（Ｒｆ＝０．２４）を確認し、反応終了とした。反応液から溶媒を減圧留去後、クロロホルム（４０ｍＬ）を加え、十分に水洗後、無水硫酸ナトリウムでクロロホルム層を乾燥し、溶媒を減圧留去した。粗生成物をリサイクル分取ＨＰＬＣ装置（日本分析工業株式会社製ＬＣ−９１３０II ＮＥＸＴ、移動相はクロロホルム）にてリサイクル分離し、メインフラクションを分取した。溶媒除去することでパーアセチル化マルトヘプタオース連結フッ化クロリン（Ａｃ−Ｍａｌ₇−ｃｈｌｏｒｉｎ）の６３３ｍｇを得た。

続いて、得られたパーアセチル化マルトヘプタオース連結フッ化クロリン（Ａｃ−Ｍａｌ₇ｃｈｌｏｒｉｎ６００ｍｇ（６４．３μｍｏｌ）を超脱水ジクロロメタン６０ｍＬ（和光純薬株式会社製）と超脱水メタノール２４０ｍＬ（和光純薬株式会社製）の混合溶媒に溶解した。これにナトリウムメトキシド９７２ｍｇ（１８．０ｍｍｏｌ）を加えた後、窒素雰囲気下、室温で６時間撹拌し、脱アセチル化反応を行った。薄層クロマトグラフィー法（ＴＬＣ；水/アセトニトリル＝１/１）で原料消失と新規スポットの形成（Ｒｆ＝０．８５）の確認にて反応終了を確認した。得られた反応液を氷水浴上で冷却しながら酢酸で中和した後、溶媒を減圧留去した。得られた化合物を蒸留水１２０mlに溶解し、再生セルロース膜（スペクトラムラボラトリーズ社製，Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ６ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｍｅｍｂｒａｎｅ ＭＷＣＯ：１０００）を用いて２日間透析し、脱塩した。凍結乾燥後、さらに真空乾燥して、マルトヘプタオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₇ｃｈｌｏｒｉｎ）を１０９ｍｇ得た。

２．マルトヘプタオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ ₇ −ｃｈｌｏｒｉｎ）の水溶性評価
５．０ｍｇのＭａｌ₇−ｃｈｌｏｒｉｎに少量の蒸留水（０．１３５ｍＬ）を加えたところ、Ｍａｌ₇−ｃｈｌｏｒｉｎは容易に全て溶解した。この結果、Ｍａｌ₇−ｃｈｌｏｒｉｎの水溶性は高く、水への溶解度は３７ｍｇ／ｍＬ以上であり、実用上、十分な溶解性を有していることが分かった。結果を表１に示す。

３．マルトヘプタオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ ₇ −ｃｈｌｏｒｉｎ）の光毒性評価
実施例１−３において、Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎの代わりにマルトヘプタオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₇−ｃｈｌｏｒｉｎ）を用いる他は、同様の方法でＩＣ５０を測定した。マルトヘプタオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₇−ｃｈｌｏｒｉｎ）のＩＣ５０は、それぞれ４．０μｍｏｌ／Ｌ（ＭＫＮ４５）および１．３μｍｏｌ／Ｌ（ＭＫＮ２８）であった。得られた結果を表１に示す。

表１より、Ｍａｌ₇−ｃｈｌｏｒｉｎのＩＣ５０はタラポルフィンナトリウムのＩＣ５０（比較例２）よりも有意に小さいことが分かった。これは優れた光毒性（光腫瘍細胞毒性）を有することを意味する。

表1の結果よりＭａｌ₇−ｃｈｌｏｒｉｎは水溶性と細胞膜透過性のバランスを両立する優れたＰＤＴ用光感受性物質であることが分かった。

［比較例１］
１．グルコース連結フッ化クロリン（Ｇｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎ）の合成
Ｇｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎは、特許文献２、およびＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２０１０．２１．２１３６−２１４６に従って合成した。具体的には、実施例１と同様の方法でグルコースから1β-チオアセチルグルコースパーアセテート［Ａｃ−Ｇｌｃ−ＳＡｃ］を合成し、これをＨ₂ＴＦＰＣと連結してＡｃ−Ｇｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎを得た。この化合物は、¹⁹Ｆ−ＮＭＲスペクトルからフェニル基のパラ位が置換されている構造であることが分かった（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．１１，２０１０．を参照した）。その後、脱アセチル化反応、脱塩を行って、Ｇｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎを合成した。脱塩は、Ｓｅｐ−Ｐａｋ Ｃ１８（Ｗａｔｅｒｓ社製）を用いて行った。

得られた化合物は、ＬＣ／ＭＳ法による解析から、完全脱アセチル化体が９９．０％（ＬＣエリア面積）で検出されたことから、得られたＧｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎの純度は９９．０％、脱アセチル化率は１００％であることが分かった。

ＭＳ：ｍ／ｚ＝８６８．６６［Ｍ＋２Ｈ］²⁺（９９．０％）．ｍ／ｚ（［Ｍ＋Ｈ］⁺）；ｃａｌｃｄ．１７３６．２５ ｆｏｒ Ｃ₇₁Ｈ₆₂Ｆ₁₆Ｎ₅Ｏ₂₀Ｓ₄，ｆｏｕｎｄ．１７３６．３０。

なおＬＣ／ＭＳ装置については、実施例１と同じであり、スキャンレンジはｍ／ｚ＝５００〜２２００で行った。

２．グルコース連結フッ化クロリン（Ｇｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎ）の水溶性評価
１．０ｍｇのＧｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎに蒸留水を加えて超音波照射を５秒行う操作を繰り返し、目視で完全に溶解するまで蒸留水を加え続けたところ、約１２０ｇの蒸留水を加えることでほぼ完全に溶解することが分かった。この結果、Ｇｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎの水への溶解度は約８．３μｇ／ｍＬ（約８．３×１０^-3ｍｇ／ｍＬ）であり極めて低いことが分かった。しかも超音波装置を使用しており、臨床現場での実用的観点からは、水への溶解度は不十分である。結果を表１に示す。

３．グルコース連結フッ化クロリン（Ｇｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎ）の光毒性評価
実施例１−３において、Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎの代わりにＧｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎを用いる他は、同様の方法でＩＣ５０を測定した。ただしＧｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎは水に殆ど溶けないため、一旦、Ｇｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎを少量のＤＭＳＯに溶解した後、所定量の培地に加えるという方法を採用した（細胞培養する際の培地に１％ＤＭＳＯを含む状態となる）。

その結果、グルコース連結フッ化クロリン（Ｇｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎ）のＩＣ５０は、それぞれ０．６７μｍｏｌ／Ｌ（ＭＫＮ４５）および０．５３μｍｏｌ／Ｌ（ＭＫＮ２８）であった。結果を表１に示す。ＩＣ５０は、Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎとほぼ同等の低い値であり、タラポルフィンナトリウム（比較例２）と比較して有意に良好な値を示した。しかし、生体評価（細胞評価）に供するための薬剤分散液を得るためにはＤＭＳＯのような有機溶媒や超音波のような物理的エネルギーが必要となるため、臨床現場で実際に使用することは困難である。

［比較例２］
１．タラポルフィンナトリウムの光毒性評価
実施例１−３において、Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎの代わりにタラポルフィンナトリウム（モノ−Ｌ−アスパルチルクロリンｅ６、Ｍｅｄｋｏｏ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）を用いる他は、同様の方法でＩＣ５０を測定した。

その結果、タラポルフィンナトリウムのＩＣ５０は、それぞれ１６μｍｏｌ／Ｌ（ＭＫＮ４５）および１６μｍｏｌ／Ｌ（ＭＫＮ２８）であった。結果を表１に示す。タラポルフィンナトリウムのＩＣ５０は、Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎ、Ｍａｌ₄−ｃｈｌｏｒｉｎ、およびＧｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎよりも有意に大きく、光毒性が低いことが分かった。なお、タラポルフィンナトリウムの水溶性は良好であり、臨床現場では１００ｍｇを生理食塩液４ｍＬに溶解して使用するため（２５ｍｇ／ｍＬ）、水溶解度は２５ｍｇ／ｍＬ以上である。

［一重項酸素の生成評価］
一重項酸素生成評価は以下の手順で測定した。近赤外蛍光分光装置はＬａｂＲＡＭ ＨＲ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ（堀場製作所）を用い、溶媒は重水、励起光として５３２ｎｍレーザー（出力５ｍＷ、シャープカットフィルタ８５０ｎｍ）を用いた。取り込み時間６０ｓｅｃ、積算回数１回、減光フィルタ１００％、対物レンズＸ１００、回折格子の刻線数１５０（ＮＩＲ、本／ｍｍ）の条件で１２７０ｎｍの発光を検出することで一重項酸素の生成評価を行った。Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２３３−２３４（２００２）３５１−３７１記載のＲｏｓｅ Ｂｅｎｇａｌの量子収率値を用い、発光強度より量子収率を算出した。それぞれ１０μＭの濃度に調整したＲｏｓｅ Ｂｅｎｇａｌ（和光純薬株式会社製）、マルトトリオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎ、実施例１）、マルトテトラオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₄−ｃｈｌｏｒｉｎ、実施例２）、マルトヘプタオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₇−ｃｈｌｏｒｉｎ、実施例３）、及びタラポルフィンナトリウム（比較例２）溶液について測定を行った。結果を表２に示した。

［腫瘍成長抑制率の評価］
ヌードマウス（各群各々４〜６匹ずつ、雌４〜５週齢、２０±２ｇ）の右臀部に、ダルベッコ変法イーグル培地（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ製）に浮遊させたヒト大腸癌細胞株ＨＴ２９を２×１０⁷個皮下注射（０日目）し、腫瘍の大きさを２日ごとに測定した。腫瘍体積は、１／２（４π／３）（Ｌ／２）（Ｗ／２）Ｈで計算した（Ｌ：腫瘍の長さ、Ｗ：幅、Ｈ：高さ）。腫瘍体積が５０〜１００ｍｍ³に達したところ（１０日目）で、ヌードマウスの側部尾静脈からそれぞれ０．１ｍｌの生理食塩水（コントロール群）、１．２５ｍＭのマルトトリオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎ、実施例１）、マルトテトラオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₄−ｃｈｌｏｒｉｎ、実施例２）、マルトヘプタオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₇−ｃｈｌｏｒｉｎ、実施例３）、グルコース連結フッ化クロリン（Ｇｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎ、比較例１）、及びタラポルフィンナトリウム（比較例２）を投与した。Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎ、Ｍａｌ₄−ｃｈｌｏｒｉｎ、Ｍａｌ₇−ｃｈｌｏｒｉｎ、及びタラポルフィンナトリウムは生理食塩水に溶解したもの、Ｇｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎは２０％Ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｇｌｙｃｏｌ４００（ＰＥＧ４００、和光純薬株式会社製）を含む純水に溶解したものを使用した。投与４時間後に、腫瘍に６６０ｎｍ（１５Ｊｃｍ^-2）、直径２ｃｍのスポットのダイオードレーザー（１００ｍＷ／ｃｍ²、ＣｒｙｓｔａＬａｓｅｒ ＣＬ６６０）を照射した。腫瘍の大きさを２日ごとに測定し、腫瘍成長抑制率（ＴＧＩ％）を２４日目の腫瘍体積から次式で計算した。結果を表２に示した。
ＴＧＩ％＝（（コントロール群の腫瘍体積）−（処理群の腫瘍体積））／
（コントロール群の腫瘍体積）× １００％

［皮膚光毒性の評価］
腫瘍成長抑制率の評価において、投与４時間後に、ヌードマウスの左後ろ足の正常皮膚にダイオードレーザーを照射し（下図）、２日ごとに「定量的皮膚光毒性評価系」（表３）に従い、ＰＤＴにより誘発された正常皮膚の損傷程度を評価した。結果を表４に示した。

マルトトリオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₃−ｃｈｌｏｒｉｎ、実施例１）では、照射後４日目より皮膚光毒性反応がみられたが、照射後から１０日目までに消滅した。マルトテトラオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₄−ｃｈｌｏｒｉｎ、実施例２）では、照射後４日目より皮膚光毒性反応がみられたが、照射後から８日目までに消滅した。マルトヘプタオース連結フッ化クロリン（Ｍａｌ₇−ｃｈｌｏｒｉｎ、実施例３）では、照射後４日目より皮膚光毒性反応がみられたが、照射後から６日目までに消滅した。また、グルコース連結フッ化クロリン（Ｇｌｃ−ｃｈｌｏｒｉｎ、比較例１）では、照射後４日目より照射後１４日目まで皮膚光毒性が観察された。

以上の実施例と比較例より、三糖を連結したマルトトリオース連結フッ化クロリン、四糖を連結したマルトテトラオース連結フッ化クロリン、七糖を連結したマルトヘプタオース連結フッ化クロリン、および単糖を連結したグルコース連結フッ化クロリンは、糖を連結していないタラポルフィンナトリウムに対していずれも優れた殺腫瘍細胞性（光毒性）および腫瘍組織の成長抑制効果を有する。しかし、単糖連結フッ化クロリンが水に殆ど溶けないため臨床現場での実用が困難であるという課題に対し、マルトトリオース連結フッ化クロリンは、常温で優れた水溶性を有するため臨床現場で治療薬として容易に使用することが可能であるという大きな特徴を有する。

Claims (14)

1. 下記一般式（１）で示されるＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
   式中、Ｘ¹〜Ｘ²⁰は、互いに独立して、Ｆ−または糖−Ｓ−のいずれかの基であり、且つＸ¹〜Ｘ²⁰の少なくとも一つは糖−Ｓ−の基であって（ここでＦはフッ素原子、Ｓはイオウ原子である）、糖は２〜９個の単糖同士がグリコシド結合したオリゴ糖であり、Ｒ⁵およびＲ⁶は互いに独立して水素原子、低級アルキル、またはＱ−（ＣＨ₂）ｋ−（ここでＱは低級アルキル、アリール、アミノ、低級アルキルアミノ、イミノ、低級アルキルイミノ、またはシクロアルキル基であり、ｋは０〜３の整数）であり、互いに連結して環構造を形成していても良い。
2. 下記一般式（２）で示されるＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
   式中、Ｘ¹，Ｘ²，Ｘ³およびＸ⁴は、互いに独立して、Ｆ−または糖−Ｓ−のいずれかの基であり、且つＸ¹〜Ｘ⁴の少なくとも一つは糖−Ｓ−の基であって（ここでＦはフッ素原子、Ｓはイオウ原子である）、糖は２〜９個の単糖同士がグリコシド結合したオリゴ糖であり、Ｒ⁵およびＲ⁶は互いに独立して水素原子、低級アルキル、またはＱ−（ＣＨ₂）ｋ−（ここでＱは低級アルキル、アリール、アミノ、低級アルキルアミノ、イミノ、低級アルキルイミノ、またはシクロアルキル基であり、ｋは０〜３の整数）であり、互いに連結して環構造を形成していても良い。
3. 前記一般式（２）中、Ｘ¹，Ｘ²，Ｘ³およびＸ⁴が全て糖−Ｓ−の基である、請求項２に記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
4. 下記一般式（３）で示されるＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
   式中、Ｘ¹，Ｘ²，Ｘ³およびＸ⁴は、互いに独立してＦ−または糖−Ｓ−のいずれかの基であり、且つＸ¹〜Ｘ⁴の少なくとも一つは糖−Ｓ−の基であり（ここでＦはフッ素原子、Ｓはイオウ原子である）、糖は２〜９個の単糖同士がグリコシド結合したオリゴ糖である。
5. 前記糖が２〜７個の単糖同士がグリコシド結合したオリゴ糖である、請求項１〜４のいずれかに記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
6. 前記糖が３〜７個の単糖同士がグリコシド結合したオリゴ糖である、請求項１〜５のいずれかに記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
7. 前記一般式（３）中、Ｘ¹，Ｘ²，Ｘ³，およびＸ⁴が全て糖−Ｓ−である、請求項６に記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
8. 前記糖がマルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、マルトヘキソースまたはマルトヘプタオースである、請求項７に記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
9. 前記糖が三糖類または四糖類である、請求項１〜８のいずれかに記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
10. 前記糖がマルトトリオースまたはマルトテトラオースである、請求項９に記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
11. 前記糖がＤ体である、請求項１〜１０のいずれかに記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体。
12. 請求項１〜１１のいずれか１項に記載のＳ−グリコシル化クロリン誘導体、および薬剤学的に許容できる添加物を含有する、医薬組成物。
13. 腫瘍もしくは固形癌、または加齢黄斑変性症、あるいは皮膚疾患の、治療、診断または検出のための、請求項１２に記載の医薬組成物。
14. 腫瘍もしくは固形癌、または加齢黄斑変性症、あるいは皮膚疾患の診断または検出のための、請求項１２に記載の診断用組成物。