DK165191B - L-carnitin-producerende mikroorganismer samt fremgangsmaade til fremstilling af l-carnitin under anvendelse af mikroorganismerne - Google Patents
L-carnitin-producerende mikroorganismer samt fremgangsmaade til fremstilling af l-carnitin under anvendelse af mikroorganismerne Download PDFInfo
- Publication number
- DK165191B DK165191B DK138085A DK138085A DK165191B DK 165191 B DK165191 B DK 165191B DK 138085 A DK138085 A DK 138085A DK 138085 A DK138085 A DK 138085A DK 165191 B DK165191 B DK 165191B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- carnitine
- butyrobetaine
- microorganisms
- betaine
- culture
- Prior art date
Links
- PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-N (R)-carnitine Chemical compound C[N+](C)(C)C[C@H](O)CC([O-])=O PHIQHXFUZVPYII-ZCFIWIBFSA-N 0.000 title claims abstract description 52
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims description 39
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 5
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N Betaine Natural products C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 49
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 claims abstract description 27
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O N,N,N-trimethylglycinium Chemical compound C[N+](C)(C)CC(O)=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims abstract 3
- GUYHPGUANSLONG-SNAWJCMRSA-N (E)-4-(trimethylammonio)but-2-enoate Chemical compound C[N+](C)(C)C\C=C\C([O-])=O GUYHPGUANSLONG-SNAWJCMRSA-N 0.000 claims description 20
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 12
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 11
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960001231 choline Drugs 0.000 claims description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- FFDGPVCHZBVARC-UHFFFAOYSA-N N,N-dimethylglycine Chemical compound CN(C)CC(O)=O FFDGPVCHZBVARC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108700003601 dimethylglycine Proteins 0.000 claims description 4
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 abstract description 3
- JHPNVNIEXXLNTR-UHFFFAOYSA-N 4-(trimethylammonio)butanoate Chemical compound C[N+](C)(C)CCCC([O-])=O JHPNVNIEXXLNTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 8
- 229930195714 L-glutamate Natural products 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N Xylose Natural products O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 4
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000007003 mineral medium Substances 0.000 description 4
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 4
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 4
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 4
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 4
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 3
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- -1 iron ion Chemical class 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KUWPCJHYPSUOFW-YBXAARCKSA-N 2-nitrophenyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O KUWPCJHYPSUOFW-YBXAARCKSA-N 0.000 description 2
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 2
- 108010082340 Arginine deiminase Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 108010048581 Lysine decarboxylase Proteins 0.000 description 2
- 239000006154 MacConkey agar Substances 0.000 description 2
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 description 2
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 241000243198 Peritrichia Species 0.000 description 2
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 2
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 2
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- 230000001651 autotrophic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N benzopyrrole Natural products C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004203 carnitine Drugs 0.000 description 2
- 108010029922 carnitine dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000001982 cetrimide agar Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 2-oxoglutaric acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)C(O)=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HKKHTABTHSUDBP-WMIWJMKMSA-N 3'-ketolactose Chemical compound O[C@@H]1C(=O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HKKHTABTHSUDBP-WMIWJMKMSA-N 0.000 description 1
- QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 4-[[(3ar,5ar,5br,7ar,9s,11ar,11br,13as)-5a,5b,8,8,11a-pentamethyl-3a-[(5-methylpyridine-3-carbonyl)amino]-2-oxo-1-propan-2-yl-4,5,6,7,7a,9,10,11,11b,12,13,13a-dodecahydro-3h-cyclopenta[a]chrysen-9-yl]oxy]-2,2-dimethyl-4-oxobutanoic acid Chemical compound N([C@@]12CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@H]5C(C)(C)[C@@H](OC(=O)CC(C)(C)C(O)=O)CC[C@]5(C)[C@H]4CC[C@@H]3C1=C(C(C2)=O)C(C)C)C(=O)C1=CN=CC(C)=C1 QCQCHGYLTSGIGX-GHXANHINSA-N 0.000 description 1
- SJZRECIVHVDYJC-UHFFFAOYSA-M 4-hydroxybutyrate Chemical compound OCCCC([O-])=O SJZRECIVHVDYJC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- DYDCUQKUCUHJBH-UWTATZPHSA-N D-Cycloserine Chemical compound N[C@@H]1CONC1=O DYDCUQKUCUHJBH-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- DYDCUQKUCUHJBH-UHFFFAOYSA-N D-Cycloserine Natural products NC1CONC1=O DYDCUQKUCUHJBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067121 Gamma-butyrobetaine dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L Malonate Chemical compound [O-]C(=O)CC([O-])=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000221961 Neurospora crassa Species 0.000 description 1
- 102000052812 Ornithine decarboxylases Human genes 0.000 description 1
- 108700005126 Ornithine decarboxylases Proteins 0.000 description 1
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 description 1
- JXXCENBLGFBQJM-FYZOBXCZSA-N [(2r)-3-carboxy-2-hydroxypropyl]-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)C[C@H](O)CC(O)=O JXXCENBLGFBQJM-FYZOBXCZSA-N 0.000 description 1
- LMEMIKWTNPWYMI-UHFFFAOYSA-N acridine half-mustard dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C1=C(Cl)C=CC2=C(NCCCNCCCl)C3=CC(OC)=CC=C3N=C21 LMEMIKWTNPWYMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010533 azeotropic distillation Methods 0.000 description 1
- 238000012365 batch cultivation Methods 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- YBGBJYVHJTVUSL-UHFFFAOYSA-L disodium;2-oxopentanedioate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CCC(=O)C([O-])=O YBGBJYVHJTVUSL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000011549 displacement method Methods 0.000 description 1
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 1
- 102000052653 gamma-Butyrobetaine Dioxygenase Human genes 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000002309 gasification Methods 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000012966 insertion method Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 238000005895 oxidative decarboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000004065 wastewater treatment Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/007—Carnitine; Butyrobetaine; Crotonobetaine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/824—Achromobacter
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Diaphragms For Electromechanical Transducers (AREA)
- Prostheses (AREA)
- Eye Examination Apparatus (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Catalysts (AREA)
Description
i
DK 165191 B
Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte mikroorganismer, som kan producere L-carnitin ud fra crotono-betain og/eller γ-butyrobetain, samt en fremgangsmåde 5 til fremstilling af L-carnitin under anvendelse af disse mikroorganismer.
Det er kendt, at L-carnitin kan fremstilles ud fra γ-butyro-betain. γ-Butyrobetain bringes i nærværelse af natrium-2-oxo-glutarat, ét reducerende middel, en jernionkilde og oxygen 10 fra atmosfærisk luft som hydroxylgruppedonator i kontakt med et hydroxylaseenzym, som er frigjort fra sporer fra Neurospora crassa, jf. US-patentskrift nr. 4.371.618. Denne kendte fremgangsmåde har den ulempe, at den kræver en række cofaktorer.
Ved omsætningen foregår der således oxidativ decarboxylering 15 af støkiometriske mængder 2-oxoglutarat til succinat. Der kræ-2+ ves Fe som O^-aktivator, ascorbat for at holde jernionen på den reducerende form samt katalase for at sønderdele skadeligt ^2^2' som ^annes ^ spormængder.
En mikroorganisme af slægten Pseudomonas, som vokser med 20 γ-butyrobetain som C- og N-kilde, er blevet isoleret, jf.
Lindstedt et al., Biochemistry 6, 1262-1270 (1967), "The Formation and Degradation of Carnitin in Pseudomonas". Den første reaktion i nedbrydningsprocessen er hydroxyleringen af γ-butyrobetain til L-carnitin, idet det intermediært dannede L-carnitin 25 fuldstændigt viderekataboliseres til C02, H20 og NH3<
Også denne hydroxylase udvundet fra bakterier ville, såfremt den var blevet anvendt til fremstillingen af L-carnitin, være behæftet med de ovenfor beskrevne ulemper i forbindelse med cofaktor-behov,jf. Lindstedt et al., Biochemistry 16, 30 2181-2188 (1977), "Purification and Properties of γ-Butyro- betaine Hydroxylase from Pseudomonas sp. AK 1".
Det er formålet med opfindelsen at tilvejebringe hidtil ukendte mikroorganismer, som ikke har ulemperne ved de kendte mikroorganismer, og som på enkel måde muliggør at 2
DK 165191 B
fremstille ikke racematet, men enantio-selektiv L-carni-tin ud fra crotonobetain, butyrobetain eller blandinger deraf.
5 Dette opnås med mikroorganismerne ifølge opfindelsen, som kan producere L-camitin ud fra crotonobetain og/eller γ-butyrobetain, men som ikke kan katabolisere L-carni-tin.
Mikroorganismerne ifølge opfindelsen er ejendommelige 10 ved, at de er stammerne HK 4 (DSM nr- 2938) og HK 13 (DSM nr. 2903).
Til forskel frå mikroorganismerne anvendt ved de kendte systemer anvender mikroorganismerne ifølge opfindelsen H2O og ikke O2 som hydroxylgruppedonator, hvilket er 15 fastslået ved undersøgelser foretaget under anvendelse af H2180 og 18θ2·
Mikroorganismerne ifølge opfindelsen kan producere L-car-nitin ud fra crotonobetain og/eller γ-butyrobetain uden at katabolisere L-carnitin.
20 En sammenlignende undersøgelse af jordprøver fra fire kontinenter viser, at mikroorganismer, som kataboliserer butyrobetain og crotonobetain over L-carnitin, forekommer overalt. Det er også muligt at isolere mikroorganismerne fra aktiveret slam fra spildevandsrenseanlæg. Potentielt 25 kan alle disse stammer anvendes til fremstilling af L-carnitin, når de muteres under anvendelse af det nedenfor anførte princip.
Sådanne mutanter fremstilles ved anvendelse af følgende selektionsmetode: 30 a) Mikroorganismer, som vokser med betain, γ-butyrobetain, crotonobetain og L-carnitin som C- og N-kilde, 3
DK 165191 B
muteres på sædvanlig måde.
b) Fra den ved dyrkningen dannede kultur af muterende mikroorganismer selekteres sådanne, som er stabile, 5 som ikke kataboliserer L-carnitin og ikke vokser på L-camitin, crotonobetain og c-butyrobetain, men derimod med betain.
Efter selektionstrin b) udvælges fortrinsvis de mikroorganismer, som udskiller L-carnitin og ikke vokser på Ι-ΙΟ carnitin, crotonobetain og γ-butyrobetain, men derimod betain.
Hensigtsmæssigt fortsættes dyrkningen af de muterede mikroorganismer i et betain-medium, hvorpå disse vide-redyrkede mikroorganismer til gennemførelse af selek-15 tionstrinet (b) fortrinsvis videredyrkes i et L-cami-tin-medium. Dyrkningen af stammer, der vokser med betain, γ-butyrobetain, crotonobetain og L-carnitin som C-og N-kilde, gennemføres hensigtsmæssigt således, at man ud fra bakterieblandinger ved podning af crotonobe-20 tain-dyrkningsopløsninger danner blandingskulturer, og ud fra disse under anvendelse af traditionelle mikrobiologiske metoder danner renkulturer af mikroorganismer, som nedbryder crotonobetain.
Mutationen af en sådan kultur, som vokser med betain, 25 γ-butyrobetain, crotonobetain og L-carnitin som C- og N-kilde, kan gennemføres under anvendelse af kendte fremgangsmåder, jf. J.H. Miller, Experiments in Molecular Genetics, Cold Spring Harbor Laboratory, 1972.
Hensigtsmæssigt anvendelige fremgangsmåder til 30 fremstilling af stabile mutanter er forskydningsmetoden, deletionsmetoden eller transposon-indsætningsmetoden.
De således muterede mikroorganismer videredyrkes i et betainmedium, hvorpå de overføres til et L-carnitin-me- 4
DK 165191 B
dium og underkastes selektionstrin b), idet der ved hjælp af kendte såkaldte "modselektionsmidler" [P.
Gerhardt et al. (eds.), Manual of Methods for General 5 Bacteriology, Am. Soc. for Microbiology, 1991 ] selekteres sådanne mikroorganismer, som ikke kataboliserer stabilt L-carnitin og ikke vokser på L-carnitin, crotonobetain og γ-butyrobetain, men derimod med betain.
En mikroorganisme ifølge opfindelsen, der vokser med 10 betain, 7-butyrobetain, crotonobetain og L-carnitin som C- og N-kilde, er stammen HK 4 (DSM nr. 2938).
Denne stamme er den 3. marts 1984 deponeret i overensstemmelse med Budapest-traktaten i Deutschen Sammlung von Mikroorganismen (DSM), Gesellschaft får Biotech-15 nologische Forschung mbH, Griesebachstrasse 8, 4300
GiSttingen, Forbundsrepublikken Tyskland, under deponeringsnummeret DSM 2938.
5
DK 165191 B
Beskrivelse af stammen HK 4 (DSM nr. 2938).
Celleform små stave phenylalanindeaminase f.t. plearorf ornithindecarboxylas.e længde ym 1-2 5 bredde ym 0,5-0,8 bevægelighed + H2S - svingtråde peritrich Voges-Proskauer gram-reaktion - indol sporer - nitrit af nitrat + 10 dannelse af poly-β- “ denitrifikation + hydroxybutyrat levandannelse - oxidase + lecithinase catalase + urease + vækst nedbrydning af 15 anaerob - stivelse 37°C + gelatine 41°C ~ casein pH 5,6 - tyrosin
Mac-Conkey-agar + "Tween 80"® 20 SS-agar - DNA + cetrimid-agar - aesculin + pigmentdannelse substratudnyttelse ikke diffunderende - acetat diffunderende - citrat - 25 fluorescerende - · malonat syredannelse (OF-test) ud fra glycin glucose aerob - norleucin anaerob - xylose + fructose aerob - fructose + 30 ASS glucose + glucose + xylose + autotrof vækst trehalose + med H2 ethanol - 3-ketolactose gasdannelse fra glucose - vækst 35 ONPG + betain + arginindihydrolase - L-carnitin + lysindecarboxylase ” γ-butyrobetain + crotonobetain + 6
DK 165191 B
En mikroorganisme ifølge opfindelsen, der er muteret og selekteret ud fra den ovenfor beskrevne mikroorganisme, og som endvidere er stabil og ikke kataboliserer, men 5 derimod udskiller L-carnitin, og som ikke vokser på L-camitin, crotonobetain og γ-butyrobetain, men som vokser på betain, er stammen HK 13.
Denne stamme er deponeret den 23. januar 1984 i overensstemmelse med Budapest-traktaten i Deutschen Sammlung 10 von Mikroorganismen (DSM)., Gesellschaft flir Biotechno-logische Forschung mbH, Griesebachstrasse 8, 4300 Gftttingen, Forbundsrepublikken Tyskland, under depone-ringsnummeret DSM 2903.
Beskrivelse af stammen HK 13 (DSM nr. 2903).
15 Celleform små stave phenylalanindeaminase - f.t. pleomorf længde μπι 1-2 ornithindecarboxylase - bredde ym 0,5-0,8 bevægelighed + 20 svingtråde peritrich Voges-Proskauer gram-reaktion - indol sporer - nitrit af nitrat + dannelse af ροΐγ-β-hydr- “ denitrifikation + oxybutyrat levandannelse 25 oxidase + lecithinase catalase + urease + vækst nedbrydning af anaerob - stivelse 37°C + gelatine 30 41°C - casein pH 5,6 - tyrosin
Mac-Conkey-agar + "Tween 80" SS-agar - DNA + cetrimid-agar “ aesculin + 7
DK 165191 B
pigmentdannelse substratudnyttelse ikke diffunderende - acetat diffunderende - citrat fluorescerende - malonat 5 syredannelse (OF-test) ud fra glycin glucose aerob - norleucin anaerob - xylose + fructose aerob - fructose + ASS glucose + glucose + 10 xylose + autotrof vækst trehalose + med Η^ ethanol + 3-ketolactose gasdannelse ud fra glucose - vækst ONPG + betain + 15 arginindihydrolase - L-carnitin lysindecarboxylase - γ-butyrobetain crotonobetain L-glutamat og crotonbetain - 20 L-glutamat og -f- butyrobetain L-glutamat og , + L-carmtm
Som eksempel på en mutant af mikroorganismen stamme HK 25 13, som er stabil, og som ikke kataboliserer, men derimod udskiller L-carnitin, ikke vokser på L-carnitin, crotonobetain og γ-butyrobetain, men derimod med betain, L-glutamat og crotonobetain, L-glutamat og butyrobetain, L-glutamat og L-carnitin, er stammen HK 1331 b. Den er iso-30 leret som spontane, godt voksende mutantkolonier fra overfladen af et fast agarsubstrat, som indeholdt L-glutamat og γ-butyrobetain.
Den ovenfor omtalte stamme HK 1331 b er deponeret den 8. februar 1985 i overensstemmelse med Budapest-traktaten i 35 Deutschen Sammlung ftir Mikroorganismen (DSM), Gesell- 8
DK 165191 B
schaft ftir Biotechnologische Forschung mbH, Griesebach-strasse 8, 4300 Gdttingen, Forbundsrepublikken Tyskland, med deponeringsnummeret DSM 3225.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen til fremstilling af 5 L-carnitin er ejendommelig ved, at man dyrker en mikroorganisme ifølge opfindelsen med crotonobetain og/eller γ-butyrobetain i nærværelse af et vækstsubstrat og isolerer det koncentrerede L-carnitin.
Fremgangsmåden gennemføres hensigtsmæssigt således, at 10 man dyrker en forkultur af en mikroorganisme, fortrinsvis en mikroorganisme med betegnelsen HK 13, i et steriliseret, fortrinsvis vitaminholdigt mineralmedium [Kulla et al., Arch. Microbiol. 135, 1 (1983)] ved en temperatur på 20-40, fortrinsvis 30°C, ved en hensigtsmæssig pH-værdi 15 fra 6-8, fortrinsvis ved pH-værdien 7, i fra 20 til 50 timer, fordelagtigt fra 30 til 40 timer. Denne forkultur indeholder hensigtsmæssigt 0,1-10 vægtprocent, fortrinsvis 0,5-5 vægtprocent, cholin, glutamat, acetat, dime-thylglycin eller betain som vækstsubstrat. Det fore-20 trækkes især at anvende betain i en mængde på 0,5-5 vægtprocent.
Desuden er det almindeligt i den mikrobiologiske teknik også at sætte udgangs forbindelserne γ-butyrobetain, crotonobetain eller blandinger deraf i mængder på 0,1-10 vægtprocent, for-25 trinsvis 0,5-5 vægtprocent, beregnet på reaktionsmediet, til forkulturen. γ-Butyrobetain eller crotonobetain kan foreligge som hydrochloridsalt, som frit indre salt samt i form af et derivat deraf.
Med forkulturen fremstillet som beskrevet ovenfor kan der fore-30 tages podning af andre kulturer. Disse kulturer har hensigtsmæssigt samme sammensætning som forkulturen.
9
DK 165191 B
Koncentrationen af crotonobetain, γ-butyrobetain eller blandinger deraf, som skal omsættes, ligger i området 0,1-10 vægtprocent, fortrinsvis 0,5-5 vægtprocent.
Endvidere anvendes vækstsubstraterne cholin, glutamat, acetat, 5 dimethylglycin og betain hensigtsmæssigt i de ved forkulturen anvendte koncentrationer.
Fordelagtigt tilpasses dyrkningsbetingelserne ved den videre dyrkning til dyrkningsbetingelserne ved fordyrkningen.
Temperaturerne ligger således hensigtsmæssigt mellem 20 og 10 40°C, fordelagtigt ved 30°C, og pH-værdien holdes i reglen mellem 6 og 8, fordelagtigt ved pH 7.
Fremstillingen af L-carnitin gennemført på denne måde går i stå efter 20-30 timer. Koncentrationen af L-carnitin er da i reglen ækvivalent med den anvendte mængde γ-butyrobetain 15 eller crotonobetain.
Cellerne kan fracentrifugeres eller frafiltreres og anvendes som podemateriale til en ny kultur.
L-carnitin kan isoleres fra supernatanten ved kationbytter-kromatografi på i og for sig kendt måde (J.P. Vandecasteele, 20 Appl. Environ. Microbiol. 39, 327 [1980]) og renses ved omkrystallisation .
Fremgangsmåden til fremstilling af L-carnitin kan også gennemføres kontinuerligt, idet man dyrker cellerne i en kemostat ved hensigtsmæssige fortyndingsrater fra 0,04 til 0,2 timer 25 fortrinsvis ved 0,06 til 0,08 .timer”'1', ved analoge betingelser som ved Batch-dyrkningen.
Opfindelsen illustreres nærmere i de efterfølgende eksempler.
10
DK 165191 B
Eksempel 1.
Isolering af en crotonobetain-nedbrydende mikroorganisme-
Mikroorganismer ekstraheres fra jord med neutral phosphatpuffer-opløsning ved omrøring, hvorefter større bestanddele frafiltre-5 res, og en crotonobetainnæringsopløsning podes med den således udvundne bakterieblanding, indtil opløsningen er svagt uklar. Efter 9 dages forløb er uklarheden som udtryk for cellekoncentrationen 90 gange så stor. Opløsningen indeholder ikke længere crotonobetain, og ammonium kan påvises som nedbryd-10 ningsprodukt.
Blandingskulturen anlægges under anvendelse af traditionel mikrobiologisk teknik (faste agar-substrater) renkulturer af mikroorganismer, som nedbryder crotonobetain. Til det videre arbejde udvælges en kultur, som benævnes HK 4.
15 Denne stamme vokser også med γ-butyrobetain, L-carnitin og betain.
Eksempel 2.
Isolering af en stabil carnitin-dehydrogenasenegativ mutant
En sådan mutant må ikke viderekatabolisere det af γ-butyro-20 betain eller crotonobetain opbyggede L-carnitin, men skal derimod i det ideelle tilfælde udskille dette. En kultur af HK 4 mutageniseres stabilt med "Acridin Mutagen ICR 191", 5 mikrogram pr. ml, i et succinat-medium under anvendelse af forskrifterne ifølge J.H. Miller, Experiments in Molecular 25 Genetics, Cold Spring Harbor Laboratory, 1972, hvorefter cellerne dyrkes under anvendelse af standardmetoder i handelssubstratet "Nutrient Broth" fra firmaet Oxoid Ltd., Storbritannien, til ekspression af mutationen, hvorpå der foretages overføring til et betain-medium. Et L-carnitin-medium podes med den udvok-30 sede kultur.
11
DK 165191 B
Efter nogle timer når kulturen logaritmisk vækst. På dette tidspunkt tilsættes Penicillin G (15 mg/ml) og D-cycloserin (0/5 mg/ml), jf. Ornston et al., Biochim. Biophys. Res. Commun. 36/ 179 (1969). Disse såkaldte "modselektionsmidler" dræber kun 5 voksende bakterier. Mutanterne, som ikke længere kan vokse med L-rcarnitin, og som har interesse ved den foreliggende opfindelse, overlever, og der sker således en relativ koncentrering af disse bakterier. Efter 30 timers forløb er antallet af levende celler faldet til 1/100, og antibiotikaene vaskes bort, 10 hvorpå kulturen overføres til et betain-medium. Efter vækst fordeles tilsvarende fortyndinger af kulturen på størknet næringsagar. De således isolerede celler vokser til kolonier, som testes hver for sig. Mutanten HK 13 udvælges. Den er stabil og danner ikke længere carnitin-dehydrogenase og vokser følge-15 lig ikke længere på L-carnitin, γ-butyrobetain eller crotono-betain, men derimod med betain. Ved vækst på betain, dimethyl-glycin, cholin, glutamat eller acetat omdanner denne stamme crotonobetain eller γ-butyrobetain til L-carnitin under udskillelse af dette stof.
20 Eksempel 3.
En 5 liter-forkul tur af HK 13 dyrkes i et vitaminholdigt mineralmedium [Kulla et al., Arch. Microbiol. 135, 1 (1983)]> som indeholder 1 vægtprocent betain og 0,5 vægtprocent crotono-betain-chlorid, ved 30°C og en pH-værdi på 7,0 i 32 timer.
25 15 liter substrat med samme sammensætning som ovenfor podes med en kultur, og der foretages dyrkning i 24 timer på samme måde som ved forkulturen (30°C, pH-værdi 7,0, p©2 = 3 ppm). Når produktionen går i stå, fracentrifugeres cellerne, som kan anvendes som podemateriale ved en ny dyrkning. Koncentratio-30 nen af L-carnitin måles i supernatanten (19,8 1) ved enzymatisk analyse.
Supernatantén indeholder 4,26 mg L-carnitin pr. ml. Dette svarer til et udbytte på 95,0%, beregnet på den anvendte mængde crotonobetain-chlorid.
12
DK 165191 B
Udgangsprodukter eller andre urenheder kan ikke påvises i NMR-spektret.
L-Carnitinet kan udvindes fra supernatanten, ved kationbytter-kromatografi på kendt måde [J.P. Vandecasteele, Appl. Environ.
5 Microbiol. 39, 327 (1980)] og renses ved omkrystallisation.
Eksempel 4«
En 5 liter-forkultur af HK 13 dyrkes i et vitaminholdigt mineralmedium (ifølge eksempel 3), som indeholder 1% cholin og 0/6% γ-butyrobetain-chlorid, ved en pH-værdi på 7,0 og en tem-10 peratur på 30°C i 32 timer. 15 liter dyrkningsmedium med den ovenfor anførte sammensætning podes med forkulturen, og der foretages dyrkning under samme betingelser som beskrevet i eksempel 1. Efter ca. 30 timers forløb er produktionen ophørt, og cellerne isoleres ved mikro filtrering (Arnicon- hul fiberpa tron) . 15 Denne cellemasse kan anvendes til videre produktion af L-carnitin. Koncentrationen af L-carnitin bestemmes enzymatisk i filtratet (19,6 liter). Filtratet indeholder 5,3 mg L-carnitin pr. ml. Dette svarer til et analytisk udbytte på 97,6%, beregnet på den anvendte mængde γ-butyrobetain-chlorid. Ifølge NMR-20 analyse kan der ikke påvises udgangs forbindelser- eller andre fremmede organiske biprodukter i filtratet. L-Carnitin kan derfor isoleres fra opløsningen på kendt måde, f.eks. ved azeotrop destillation som beskrevet i DE-patentskrift nr. 2.300.492.
Eksempel 5.
25 En fermenteringsbeholder til kontinuerlig dyrkning, som indeholder 1,5 liter vitaminholdigt mineralmedium (ifølge eksempel 3) med et indhold af 1,5% betain og 1,0% γ-butyrobetain-chlorid, podes med 150 ml af en HK 13-forkultur i samme medium. Efter 20 timers aerob dyrkning ved 30°C og en pH-værdi på 30 7,0 er kulturen udvokset, og den kontinuerlige drift påbegyn des med en strømningsrate på 0,1 liter/time. Dyrkningsopløs- 13
DK 165191 B
ningen, som udtages fra fermenteringsbeholderen, opfanges i en beholder, som er afkølet til 4°C. Cellerne fjernes ved centrifugering. Ifølge enzymatisk analyse indeholder super-natanten 8,8 g L-carnitin pr. liter kultur.
5 Dette svarer til et analytisk påviseligt udbytte på 99,2%, beregnet på den anvendte koncentration af γ-butyrobetain-chlorid.
Det faste L-carnitinchlorid kan isoleres fra opløsningen ved ionbytterkromatografi og fraskillelse af vand.
Claims (7)
1. Mikroorganismer som kan producere L-carnitin ud fra crotonobetain og/eller 7-butyrobetain, kendetegnet 5 ved, at de er stammerne HK 4 (DSM nr. 2938) og HK 13 (DSM nr. 2903).
2. Mikroorganisme ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er mikroorganismen HK 13 (DSM nr. 2903).
3. Mikroorganisme ifølge krav 1, kendetegnet ved, 10 at den er mikroorganismen HK 4 (DSM nr. 2938).
4. Fremgangsmåde til fremstilling af L-carnitin, kendetegnet ved, at man dyrker en mikroorganisme ifølge krav 1-3 med crotonobetain og/eller 7-butyrobetain i nærværelse af et vækstsubstrat og isolerer det koncentre- 15 rede L-camitin.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 4, kendetegnet ved, at man anvender crotonobetain, 7-butyrobetain eller en blanding deraf i en mængde på 0,1-10 vægtprocent, beregnet på dyrkningsmediet.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 4, kendetegnet ved, at der som vækstsubstrat anvendes dimethylglycin, cholin, glutamat, acetat og/eller betain.
7. Fremgangsmåde ifølge krav 4, kendetegnet ved, at vækstsubstratet anvendelses i en mængde på 0,1-10 25 vægtprocent, beregnet på dyrkningsmediet.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH160084 | 1984-03-29 | ||
| CH160084 | 1984-03-29 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK138085D0 DK138085D0 (da) | 1985-03-27 |
| DK138085A DK138085A (da) | 1985-09-30 |
| DK165191B true DK165191B (da) | 1992-10-19 |
| DK165191C DK165191C (da) | 1993-03-01 |
Family
ID=4214209
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK138085A DK165191C (da) | 1984-03-29 | 1985-03-27 | L-carnitin-producerende mikroorganismer samt fremgangsmaade til fremstilling af l-carnitin under anvendelse af mikroorganismerne |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5187093A (da) |
| EP (1) | EP0158194B1 (da) |
| JP (1) | JPS60224488A (da) |
| CN (1) | CN1004146B (da) |
| AT (1) | ATE64154T1 (da) |
| AU (1) | AU585216B2 (da) |
| BG (1) | BG50282A3 (da) |
| BR (1) | BR8501374A (da) |
| CA (1) | CA1265757A (da) |
| CS (1) | CS273163B2 (da) |
| DD (1) | DD232310A5 (da) |
| DE (1) | DE3583058D1 (da) |
| DK (1) | DK165191C (da) |
| ES (1) | ES541663A0 (da) |
| FI (1) | FI86889C (da) |
| HU (1) | HU193744B (da) |
| IE (1) | IE58045B1 (da) |
| IL (1) | IL74552A (da) |
| IN (1) | IN164247B (da) |
| NO (1) | NO164918C (da) |
| PL (1) | PL145712B1 (da) |
| RO (1) | RO92477B (da) |
| SU (1) | SU1435159A3 (da) |
| YU (1) | YU45708B (da) |
| ZA (1) | ZA851959B (da) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59183694A (ja) * | 1983-04-05 | 1984-10-18 | Hamari Yakuhin Kogyo Kk | 光学活性なカルニチンの生化学的製造法 |
| JPS59192095A (ja) * | 1983-04-13 | 1984-10-31 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−カルニチンの製造法 |
| DD221905B1 (de) * | 1983-11-03 | 1987-03-18 | Univ Leipzig | Verfahren zur herstellung von l(-)-carnitin und seinen derivaten |
| JPS62275689A (ja) * | 1985-12-09 | 1987-11-30 | Bio-Le Kk | Ｌ−カルニチンの製造法 |
| IE902689A1 (en) * | 1989-07-28 | 1991-02-27 | Lonza Ag | A method of discontinuous production of l-carnitine by a¹microbiological process |
| DE4017595A1 (de) * | 1990-05-31 | 1991-12-05 | Consortium Elektrochem Ind | Maltopentaose produzierende amylasen |
| DE4106375A1 (de) * | 1991-02-28 | 1992-09-03 | Degussa | Eine l-carnitin-amidase produzierender mikroorganismus, l-carnitin-amidase, verfahren zu deren gewinnung und deren verwendung |
| CN1058995C (zh) * | 1996-11-08 | 2000-11-29 | 江苏省微生物研究所 | L-肉碱或其盐的制备方法 |
| KR100255039B1 (ko) | 1997-07-28 | 2000-05-01 | 박영구 | L-카르니틴의제조방법 |
| DE19749480A1 (de) * | 1997-11-08 | 1999-05-20 | Univ Leipzig | Verfahren zur Herstellung von L-Carnitin aus Crotonobetain |
| ES2282399T3 (es) * | 2001-01-31 | 2007-10-16 | Lonza Ag | Procedimiento microbiologico para la obtencion de l-carnitina. |
| US7700074B2 (en) * | 2002-02-07 | 2010-04-20 | Pettegrew Jay W | Method and system for diagnosis of neuropsychiatric disorders including chronic alcoholism |
| US7407778B2 (en) | 2002-02-07 | 2008-08-05 | Pettegrew Jay W | Compounds, compositions and methods for treating neuropsychiatric disorders |
| ATE437884T1 (de) * | 2003-05-29 | 2009-08-15 | Jay W Pettegrew | Glycerophosphocholin und derivate davon zur medizinischen abbildung von neuropsychiatrischen erkrankungen |
| US20060257842A1 (en) * | 2003-05-29 | 2006-11-16 | Pettegrew Jay W | Cryopreservation media and molecules |
| CN101212956A (zh) * | 2005-07-05 | 2008-07-02 | 隆萨股份公司 | 生产干肉碱粉末或颗粒的喷雾干燥法 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2313573A (en) * | 1938-01-17 | 1943-03-09 | Gen Aniline & Film Corp | Capillary active compounds and process of preparing them |
| US2367878A (en) * | 1939-05-04 | 1945-01-23 | Hoffmann La Roche | Betaine esters |
| NL6511804A (da) * | 1964-11-30 | 1966-05-31 | ||
| FR1559839A (da) * | 1968-01-30 | 1969-03-14 | ||
| ES370147A1 (es) * | 1968-08-29 | 1971-04-01 | Gulf Research Development Co | Un procedimiento para fabricar ciclopropilamina. |
| US3711549A (en) * | 1970-05-19 | 1973-01-16 | Gulf Research Development Co | Process for manufacturing cyclopropylamine |
| US3796632A (en) * | 1971-12-10 | 1974-03-12 | Toray Industries | Process for racemizing alpha-amino-epsilon-caprolactam |
| DE2751134C2 (de) * | 1977-11-16 | 1986-04-17 | Degussa Ag, 6000 Frankfurt | Verfahren zur Herstellung von γ-Chlorcarbonsäureestern |
| IT1142201B (it) * | 1980-06-24 | 1986-10-08 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Procedimento per la produzione enzimatica di l-carnitina |
| DE3214953A1 (de) * | 1982-04-22 | 1983-10-27 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Mikrobielle polysaccharide, verfahren zu ihrer herstellung, dafuer geeignete mikroorganismen und verwendung der polysaccharide |
| JPS59192095A (ja) * | 1983-04-13 | 1984-10-31 | Ajinomoto Co Inc | Ｌ−カルニチンの製造法 |
| DD221905B1 (de) * | 1983-11-03 | 1987-03-18 | Univ Leipzig | Verfahren zur herstellung von l(-)-carnitin und seinen derivaten |
| CH664374A5 (de) * | 1985-02-27 | 1988-02-29 | Lonza Ag | Verfahren zur herstellung von l-carnitin auf mikrobiologischem weg. |
| IT1190280B (it) * | 1986-04-24 | 1988-02-16 | Sigma Tau Ind Farmaceuti | Procedimento per la preparazione di gamma-butirrobetaina |
-
1985
- 1985-02-26 FI FI850781A patent/FI86889C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-03-04 IE IE53385A patent/IE58045B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-03-07 IN IN177/MAS/854A patent/IN164247B/en unknown
- 1985-03-10 IL IL74552A patent/IL74552A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-03-15 ZA ZA851959A patent/ZA851959B/xx unknown
- 1985-03-19 HU HU851012A patent/HU193744B/hu unknown
- 1985-03-21 AU AU40192/85A patent/AU585216B2/en not_active Expired
- 1985-03-22 AT AT85103420T patent/ATE64154T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-03-22 EP EP85103420A patent/EP0158194B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-03-22 DE DE8585103420T patent/DE3583058D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-03-26 BG BG069432A patent/BG50282A3/xx unknown
- 1985-03-26 BR BR8501374A patent/BR8501374A/pt unknown
- 1985-03-27 RO RO118151A patent/RO92477B/ro unknown
- 1985-03-27 DK DK138085A patent/DK165191C/da not_active IP Right Cessation
- 1985-03-27 DD DD85274492A patent/DD232310A5/de not_active IP Right Cessation
- 1985-03-27 CS CS222085A patent/CS273163B2/cs unknown
- 1985-03-28 ES ES541663A patent/ES541663A0/es active Granted
- 1985-03-28 YU YU50485A patent/YU45708B/sh unknown
- 1985-03-28 NO NO851261A patent/NO164918C/no not_active IP Right Cessation
- 1985-03-28 PL PL1985252628A patent/PL145712B1/pl unknown
- 1985-03-28 SU SU853874110A patent/SU1435159A3/ru active
- 1985-03-28 CA CA000477804A patent/CA1265757A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-03-28 JP JP60064931A patent/JPS60224488A/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-04-01 CN CN85101191.8A patent/CN1004146B/zh not_active Expired
-
1990
- 1990-03-15 US US07/496,093 patent/US5187093A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR940005654B1 (ko) | L-2-아미노-4-(히드록시메틸 포스피닐)-부티르산의 제조방법 | |
| US4529697A (en) | Process for producing L-glutamic acid by fermentation | |
| DK165191B (da) | L-carnitin-producerende mikroorganismer samt fremgangsmaade til fremstilling af l-carnitin under anvendelse af mikroorganismerne | |
| US4745064A (en) | Process for the degradation of s-triazine derivatives in aqueous solutions | |
| CZ279790B6 (cs) | Mikrobiologický způsob výroby hydroxylovaných de rivátů pyrazinu | |
| KR100233330B1 (ko) | 6-히드록시피콜린산을 제조하기 위한 미생물학적 방법 | |
| EP0179864B1 (en) | Process for preparing l-carnitine | |
| US5316929A (en) | Process for the preparation of MA | |
| EP0434393A2 (en) | Process for preparation of R-(-)-3-halogeno-1,2-propanediol by treatment with microorganism | |
| US6342377B1 (en) | Microorganisms producing 5-aminolevulinic acid and processes for producing 5-aminolevulinic acid by using the same | |
| US5496715A (en) | Process for preparing indigo | |
| JP2586283B2 (ja) | 微生物学的手段によってｌ−カルニチンを製造する方法 | |
| US4416987A (en) | Method of synthesizing proteins from methanol | |
| US4699883A (en) | Process for producing N-acylneuraminate aldolase | |
| JP2638541B2 (ja) | Ｌ−２−アミノ−４−（ヒドロキシメチルホスフィニル）−酪酸の製法 | |
| KR0146493B1 (ko) | 발효법에 의한 l-알라닌의 제조 방법 | |
| US5716815A (en) | Method for preparing dimethylcarboxylic acid compounds | |
| CZ279298B6 (cs) | Mikroorganismy Alcaligenes faecalis DSM 6335 a způsob mikrobiologické výroby kyseliny 6-hydroxypikolinové | |
| JP4197778B2 (ja) | 光学活性なα−メルカプトカルボン酸の製造方法 | |
| JP3413294B2 (ja) | ２，５−ジヒドロキシピリジンの製造法および２，５−ジヒドロキシピリジン生産菌 | |
| JPH06153915A (ja) | ５−アミノレブリン酸生産微生物および５−アミノレブリン酸の製造方法 | |
| Packdibamrung et al. | Occurrence of an Inducible NADP+-Dependent D-Phenylserine Dehydrogenase in Pseudomonas syringae NK-15 Isolated from Soil | |
| WO2000023608A1 (en) | Preparation of amino alcohols | |
| JPH06245782A (ja) | トランス−４−ハイドロキシ−ｌ−プロリンの製造法 | |
| CZ279297B6 (cs) | Mikroorganismy agrobacterium sp. DSM 6336 a způsob mikrobiologické výroby kyseliny 6-hydroxynikotinové |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| AHS | Application shelved for other reasons than non-payment | ||
| PUP | Patent expired |