JPS60224488A - 微生物学的手段によるｌ−カルニチンの製造 - Google Patents
微生物学的手段によるｌ−カルニチンの製造Info
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- JPS60224488A JPS60224488A JP60064931A JP6493185A JPS60224488A JP S60224488 A JPS60224488 A JP S60224488A JP 60064931 A JP60064931 A JP 60064931A JP 6493185 A JP6493185 A JP 6493185A JP S60224488 A JPS60224488 A JP S60224488A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/007—Carnitine; Butyrobetaine; Crotonobetaine
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
り一力ルニチンをγ−ブチロベタインから製造すること
は知られている。 γ−ブチロベタインは、２−オキソ
ゲルタール酸ナトリウム、還元試薬、鉄イオン源および
ヒドロキシル基供与体としての空気中の酸素の存在下に
、ヒドロキシラーゼ酵素によってニューロスポラ・クラ
ツサの胞子から遊離されることが報告された（アメリカ
特許明細書４，３７１，６１８＞。 この方法は、コフ
ァクターを多数必要とするという欠点をもつ。
は知られている。 γ−ブチロベタインは、２−オキソ
ゲルタール酸ナトリウム、還元試薬、鉄イオン源および
ヒドロキシル基供与体としての空気中の酸素の存在下に
、ヒドロキシラーゼ酵素によってニューロスポラ・クラ
ツサの胞子から遊離されることが報告された（アメリカ
特許明細書４，３７１，６１８＞。 この方法は、コフ
ァクターを多数必要とするという欠点をもつ。
反応において、化学量論量の２−オキソゲルタール塩酸
が酸化的に］ハク酸塩に脱カルボキシル化される。 Ｆ
ｅ２＋は０２活性化剤として必要であり、アスコルビン
酸塩が鉄イオンを還元状態に保ち、カタラーゼが痕跡量
生成する有害なＨ２Ｏ２を破壊する。
が酸化的に］ハク酸塩に脱カルボキシル化される。 Ｆ
ｅ２＋は０２活性化剤として必要であり、アスコルビン
酸塩が鉄イオンを還元状態に保ち、カタラーゼが痕跡量
生成する有害なＨ２Ｏ２を破壊する。
リントシュチット（Ｌ １ｎｄｓｔｅｄｔ）はか［バイ
オケミストリー（Ｂ ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＞ 、
６．１２６２−１２７０（１９６７）］ ｒシュード
モナス中におけるカルニチンの生成と変質Ｊ’（Ｔｈｅ
Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｃａｒｏｄａｔｉｏｎ
ｏｆ Ｃａｒｎｉｔｉｎ ｉｎＰ ｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ ）は、γ−ブチロベタインをＣ−およびＮ−源と
して増殖するガツトラング・シュードモナス（Ｇａｔｔ
ｕｎｏ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ＞微生物を分離した。
オケミストリー（Ｂ ｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＞ 、
６．１２６２−１２７０（１９６７）］ ｒシュード
モナス中におけるカルニチンの生成と変質Ｊ’（Ｔｈｅ
Ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｃａｒｏｄａｔｉｏｎ
ｏｆ Ｃａｒｎｉｔｉｎ ｉｎＰ ｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓ ）は、γ−ブチロベタインをＣ−およびＮ−源と
して増殖するガツトラング・シュードモナス（Ｇａｔｔ
ｕｎｏ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ＞微生物を分離した。
代謝過程の第一の反応は、ｒ−１チロベタインのＬ−
カルニチンへのヒドロキシル化であって、それによって
中間体として生成したし一力ルニチンはすべてＣｏ、Ｈ
ＯおよびＮＨ３２ にざらに分解代謝される。
カルニチンへのヒドロキシル化であって、それによって
中間体として生成したし一力ルニチンはすべてＣｏ、Ｈ
ＯおよびＮＨ３２ にざらに分解代謝される。
このようにして、バクテリアから取得したヒドロキシラ
ーゼがあれば、それがＬ−力ルニチン生産のために添加
された場合には、上述した欠点であるコファクターの必
要性［リントシュチットほか、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ １６，２１８１−２１８８（１９７７）］ ｒシュ
ードモナス Ｓｔ）、ＡＫｌからのγ−ブチロベタイン
・ヒドロキシラーゼの精製と特性Ｊ （Ｐｕｒｉｆｉｃ
ａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ７−
ＢｕｔＶｒＯｂｅｔａｉｎｅ Ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ
ｆｒｏｍＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｓｐ 、 ＡＫ １
＞を解消できる。
ーゼがあれば、それがＬ−力ルニチン生産のために添加
された場合には、上述した欠点であるコファクターの必
要性［リントシュチットほか、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ １６，２１８１−２１８８（１９７７）］ ｒシュ
ードモナス Ｓｔ）、ＡＫｌからのγ−ブチロベタイン
・ヒドロキシラーゼの精製と特性Ｊ （Ｐｕｒｉｆｉｃ
ａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ７−
ＢｕｔＶｒＯｂｅｔａｉｎｅ Ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ
ｆｒｏｍＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ Ｓｐ 、 ＡＫ １
＞を解消できる。
本発明は、この課題にもとづき、既知の方法の欠点を有
しない、簡単な方法でラセミ休でなくエナンチオ選択性
り一力ルニチンをクロトノベタイン、ブチロベタインま
たはそれらの混合物から製造することを可能にする、新
しいタイプの微生物を見出すことを目的とする。
しない、簡単な方法でラセミ休でなくエナンチオ選択性
り一力ルニチンをクロトノベタイン、ブチロベタインま
たはそれらの混合物から製造することを可能にする、新
しいタイプの微生物を見出すことを目的とする。
現在の技術水準で知られている系とちがって、我々の微
生物は０２でなくＨ２Ｏをヒドロキシル基供与体として
利用する。 このことは、我々の研究において町１８０
と１８０２とを用いて確認することができた。
生物は０２でなくＨ２Ｏをヒドロキシル基供与体として
利用する。 このことは、我々の研究において町１８０
と１８０２とを用いて確認することができた。
本発明の微生物は、クロトノベタインおよび（または）
γ−ブチロベタインからし一カルニチンを生産する能力
があり、しかも後者を異化しない。
γ−ブチロベタインからし一カルニチンを生産する能力
があり、しかも後者を異化しない。
四つの大陸からの土壌のサンプルについての比較研究が
示したように、ブチロベタインおよびクロトノベタイン
をし一力ルニチンを経由して分解代謝する微生物は、広
い範囲にわたって存在する。
示したように、ブチロベタインおよびクロトノベタイン
をし一力ルニチンを経由して分解代謝する微生物は、広
い範囲にわたって存在する。
また、下水浄化装置の活性汚泥からも、単離に成功して
いる。 これらの株すべてが、以下に示す本発明の原理
に従って変異させた場合、問題のし一力ルニヂン生産株
としての能力をもつ。
いる。 これらの株すべてが、以下に示す本発明の原理
に従って変異させた場合、問題のし一力ルニヂン生産株
としての能力をもつ。
そのような変異種は、下記の分類法によって入手可能で
ある。
ある。
ａ〉ベタイン、γ−ブチロベタイン、クロトノベタイン
およびＬ−カルニチンをＣ−およびＮ−源として増殖す
る微生物を、常法に従って変異させること、 ｂ）変異した微生物の接種によって得た培養物からそれ
ぞれ分類され、安定であって、Ｌ−力ルニヂンを異化せ
ず、Ｌ−力ルニヂン、クロトノベタイン、γ−ブチロベ
タインで増殖しないがベタインで増殖すること。
およびＬ−カルニチンをＣ−およびＮ−源として増殖す
る微生物を、常法に従って変異させること、 ｂ）変異した微生物の接種によって得た培養物からそれ
ぞれ分類され、安定であって、Ｌ−力ルニヂンを異化せ
ず、Ｌ−力ルニヂン、クロトノベタイン、γ−ブチロベ
タインで増殖しないがベタインで増殖すること。
好ましくは、分類工程ｂ）に従って、Ｌ−カルニチンを
分泌しＬ−カルニチン、クロトノベタイン、γ−ブチロ
ベタインでは増殖しないがベタインで増殖する各微生物
を選別する。
分泌しＬ−カルニチン、クロトノベタイン、γ−ブチロ
ベタインでは増殖しないがベタインで増殖する各微生物
を選別する。
変異した微生物は、ベタイン媒体中でざらに培養し、こ
の培養された微生物を分類工程ｂ）に、好ましくはし一
力ルニチン媒体上に接種することが得策である。 ベタ
イン、γ−ブチＤベタイン、クロトノベタインおよびし
一力ルニチンをＣ−およびＮ−源として増殖する株の接
種は、つぎのように実施するのがよい。 すなわち、バ
クデリア混合物からクロトノベタイン栄養溶液への接種
により混合培養物を製造し、そこから常用の微生物工学
的技術の助けを借りて、クロトノベタイン生産微生物の
純粋培養をはじめるのである。
の培養された微生物を分類工程ｂ）に、好ましくはし一
力ルニチン媒体上に接種することが得策である。 ベタ
イン、γ−ブチＤベタイン、クロトノベタインおよびし
一力ルニチンをＣ−およびＮ−源として増殖する株の接
種は、つぎのように実施するのがよい。 すなわち、バ
クデリア混合物からクロトノベタイン栄養溶液への接種
により混合培養物を製造し、そこから常用の微生物工学
的技術の助けを借りて、クロトノベタイン生産微生物の
純粋培養をはじめるのである。
このような、ベタイン、γ−ブチロベタイン、クロトノ
ベタインおよびＬ−力ルニチンをＣ−およびＮ−源とし
て増殖する培養物の変異は、既知の方法に従って実施で
きる。 ［Ｊ、Ｈ，ミラー（Ｍｉｌｌｅｒ ）、ｒ分子
生物学実験Ｊ （Ｅｘｐｅｒｉ−ｍｅｎｔｓ ｉｎ Ｍ
ｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ） 、 、Ｊ−
ルド・スプリング・ハーバ−・ラボラトリ−（ＣＯＩｄ
３ｐｒｉｎｇ ｌ−１ａｒｂｏｒ Ｌ ａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ ） 、 １９７２ ］好適に利用できる安定な変
異種の製造方法は、フレームシフト法、ディリージョン
法またはトランスポソンーインサーション法である。
そのように変異した微生物は、ざらにベタイン媒体上で
培養され、Ｌ−カルニヂン媒体上に移したものを分類工
程ｂ）で処理し、そこで既知の「交叉分類」（Ｃｏｕｎ
ｔｅｒ−３ｅｌｅｋｔｉｏｎｉｅｒｅｎｄｅｎ Ａｏｅ
ｎｚｉｅｎ ＞［Ｐ、ゲルハルト（Ｇｅｒｈａｒｄｔ
）ほか編、［一般細菌学実験法Ｊ （ｌｖｌａｎｕａｌ
ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒＧｅｎｅｒａｌ Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ＞ 、アメリカン・ソサイエデ
イ・フォー・マイクロバイオロジー（Ａｍ。
ベタインおよびＬ−力ルニチンをＣ−およびＮ−源とし
て増殖する培養物の変異は、既知の方法に従って実施で
きる。 ［Ｊ、Ｈ，ミラー（Ｍｉｌｌｅｒ ）、ｒ分子
生物学実験Ｊ （Ｅｘｐｅｒｉ−ｍｅｎｔｓ ｉｎ Ｍ
ｏ１ｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ） 、 、Ｊ−
ルド・スプリング・ハーバ−・ラボラトリ−（ＣＯＩｄ
３ｐｒｉｎｇ ｌ−１ａｒｂｏｒ Ｌ ａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ ） 、 １９７２ ］好適に利用できる安定な変
異種の製造方法は、フレームシフト法、ディリージョン
法またはトランスポソンーインサーション法である。
そのように変異した微生物は、ざらにベタイン媒体上で
培養され、Ｌ−カルニヂン媒体上に移したものを分類工
程ｂ）で処理し、そこで既知の「交叉分類」（Ｃｏｕｎ
ｔｅｒ−３ｅｌｅｋｔｉｏｎｉｅｒｅｎｄｅｎ Ａｏｅ
ｎｚｉｅｎ ＞［Ｐ、ゲルハルト（Ｇｅｒｈａｒｄｔ
）ほか編、［一般細菌学実験法Ｊ （ｌｖｌａｎｕａｌ
ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒＧｅｎｅｒａｌ Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ ＞ 、アメリカン・ソサイエデ
イ・フォー・マイクロバイオロジー（Ａｍ。
Ｓｏｃ、 ｆｏｒ Ｍ １ｃｒｏｂｉｏｌｏｏｙ ）
、 １９８１ ］によって、各微生物を分類し、安定な
、［−カルニチンを異化せず、Ｌ−力ルニチン、クロト
ノベタイン、γ−ブチロベタインで増殖しないがベタイ
ンで増殖づるものを得る。
、 １９８１ ］によって、各微生物を分類し、安定な
、［−カルニチンを異化せず、Ｌ−力ルニチン、クロト
ノベタイン、γ−ブチロベタインで増殖しないがベタイ
ンで増殖づるものを得る。
ベタイン、γ−ブチロベタイン、クロトノベタイン、Ｌ
−力ルニチンをＣ−およびＮ−源として増殖する好適な
微生物は、１−ＩＫ４ （ＤＳＭ Ｎｏ。
−力ルニチンをＣ−およびＮ−源として増殖する好適な
微生物は、１−ＩＫ４ （ＤＳＭ Ｎｏ。
２９３８）株ならびにその子孫および変種である。
これらの株は、１９８４年３月３日にドイッチェン・ザ
ンムルング・７オン・ミクロオルガニスメン（ＤｅＵｔ
ＳＣｈｅｎ ５ａｌｌｌｌｌＵｎ（ＩＩ ＶＯｎ Ｍｉ
ｋｒｏ−ｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ、 ＤＳＭ） 、ゲゼル
シャフト・フユア・ビオテクノロジッシエ・フォアシュ
ング（Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｆｕｅｒ Ｂｉｏｆ
ｅｃｈｏｎｌｌｏｉｓｃｈｅ Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇ ）
・ｍｂｌ−１，ドイツ連邦共和国ゲッヂングンー４３０
０−グリーゼバッハシュトラーセ８に、Ｎｏ、ＤＳＭ２
９３８の番号で寄託されている。
ンムルング・７オン・ミクロオルガニスメン（ＤｅＵｔ
ＳＣｈｅｎ ５ａｌｌｌｌｌＵｎ（ＩＩ ＶＯｎ Ｍｉ
ｋｒｏ−ｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ、 ＤＳＭ） 、ゲゼル
シャフト・フユア・ビオテクノロジッシエ・フォアシュ
ング（Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ｆｕｅｒ Ｂｉｏｆ
ｅｃｈｏｎｌｌｏｉｓｃｈｅ Ｆｏｒｓｃｈｕｎｇ ）
・ｍｂｌ−１，ドイツ連邦共和国ゲッヂングンー４３０
０−グリーゼバッハシュトラーセ８に、Ｎｏ、ＤＳＭ２
９３８の番号で寄託されている。
ＨＫ４ ＣＤ５Ｍ Ｎｏ、２９３８）株の学術的記述
細胞形態 桿菌、一部は変形
長さ１〜２μｍ 幅０．５〜０．８μ７Ｗ運動性 ＋
鞭毛 周辺 ダラム反応 −胞子 − ポリ−β−ヒドロキシブチレート生成 −オキシダーゼ
→−カタラーゼ ＋ 増殖 嫌気的 −マコンキー寒天 士 ３７℃ ＋ ＳＳ寒天 − ４１℃ −セトリミド寒天 − ｐＨ５，６− 色素形成 非拡散性 −拡散性 − 螢光性 − 酸形成（ＯＦテスト） グルコースから 好気的 −嫌気的 −フラクトースか
ら好気的 − ＡＳＳＳＳグルース ＋ キシロース ＋トレハロース
＋ エタノール − グルコースからガス形成 − ０ＮＰＧ ＋ アルギニンジじトロラーゼ − リジンデカルレボキシラーゼ − フェニルアラニンデアミラーゼ − オルニチンデカルレボキシラーゼ − Ｈ２Ｓ − フォーゲス・プロスカウアー − インドール − 硝酸塩から亜硝酸塩 十 脱硝 十 レバン形成 − レシチナーピ −ウレアーゼ 汁 成育 でんぷん −ゼラチン − カゼイン − チロシン − トウィーン８０ − ＤＮＡ＋ エスクリン ＋ 基質転化 酢酸塩 −クエン酸塩 − マロン酸塩 −グリシン − ノルロイシン − キシロース ＋ フラクトース 士 グルコース 士 自家栄養増殖 Ｈ２存在下 − ３−ケトラクトース − 基質 ベタイン ＋ Ｌ−カルニチン ＋ γ−ブヂロベタイン 士 クロトノベタイン ＋ 上記した微生物から変異して分類された好適な微生物で
あって、安定で、Ｌ−カルニチンを異化せず、しかしこ
れを分泌し、かつＬ−カルニチン、クロトノベタインお
よびγ−ブチロベタインでは増殖しないかベタインで増
殖するものが、ＨＫ１３である。
鞭毛 周辺 ダラム反応 −胞子 − ポリ−β−ヒドロキシブチレート生成 −オキシダーゼ
→−カタラーゼ ＋ 増殖 嫌気的 −マコンキー寒天 士 ３７℃ ＋ ＳＳ寒天 − ４１℃ −セトリミド寒天 − ｐＨ５，６− 色素形成 非拡散性 −拡散性 − 螢光性 − 酸形成（ＯＦテスト） グルコースから 好気的 −嫌気的 −フラクトースか
ら好気的 − ＡＳＳＳＳグルース ＋ キシロース ＋トレハロース
＋ エタノール − グルコースからガス形成 − ０ＮＰＧ ＋ アルギニンジじトロラーゼ − リジンデカルレボキシラーゼ − フェニルアラニンデアミラーゼ − オルニチンデカルレボキシラーゼ − Ｈ２Ｓ − フォーゲス・プロスカウアー − インドール − 硝酸塩から亜硝酸塩 十 脱硝 十 レバン形成 − レシチナーピ −ウレアーゼ 汁 成育 でんぷん −ゼラチン − カゼイン − チロシン − トウィーン８０ − ＤＮＡ＋ エスクリン ＋ 基質転化 酢酸塩 −クエン酸塩 − マロン酸塩 −グリシン − ノルロイシン − キシロース ＋ フラクトース 士 グルコース 士 自家栄養増殖 Ｈ２存在下 − ３−ケトラクトース − 基質 ベタイン ＋ Ｌ−カルニチン ＋ γ−ブヂロベタイン 士 クロトノベタイン ＋ 上記した微生物から変異して分類された好適な微生物で
あって、安定で、Ｌ−カルニチンを異化せず、しかしこ
れを分泌し、かつＬ−カルニチン、クロトノベタインお
よびγ−ブチロベタインでは増殖しないかベタインで増
殖するものが、ＨＫ１３である。
上述の菌株は、１９８４年１月２３日に、ドイツチェ・
ザンムルング・７オン・ミクロオルガニスメン（ＤＳＭ
）、ゲゼルシャフト・ピュア・ビオテクノロジツシエ・
フォアシュング・ｍｂＨ、ドイツ連邦共和国ゲッチンゲ
ン−４３００−グリーゼバッハシュトラーセ８に、Ｎｏ
、ＤＳＭ２９０３の番号で寄託された。
ザンムルング・７オン・ミクロオルガニスメン（ＤＳＭ
）、ゲゼルシャフト・ピュア・ビオテクノロジツシエ・
フォアシュング・ｍｂＨ、ドイツ連邦共和国ゲッチンゲ
ン−４３００−グリーゼバッハシュトラーセ８に、Ｎｏ
、ＤＳＭ２９０３の番号で寄託された。
ＨＫｌ ３ （ＤＳＭ Ｎｏ、２９０３）株の学術的記
述 細胞形態 桿菌、一部は変形 長さ １〜２μＴＩ？、 幅０．５〜０．８μＴＷ運動
性 ＋ 鞭毛 周辺 ダラム反応 −胞子 − ポリ−β−ヒドロキシブチレート生成 −オキシダーゼ
十 カタラーゼ ＋ 増殖 嫌気的 −マコンキー寒天 十 ３７℃ 十 ＳＳ寒天 − ４１℃ −セトリミド寒天 − ｐ ト１５．６ − 色素形成 非拡散性 −拡散性 〜 螢光性 − 酸形成（ＯＦテスト） グルコースから 好気的 −嫌気的 −フラクトースか
ら好気的 − ＡＳＳＳＳグルメ ＋ キシロース ＋トレハロース
＋ エタノール − グルコースからガス形成 − ０ＮＰＧ ＋ アルギニンジヒドロラーゼ − リジンデカルボキシラーゼ − フェニルアラニンデアミラーゼ − オルニチンデカルボキシラーゼ − Ｈ２Ｓ − フォーゲスΦプロスカウアー − インドール − 硝酸塩から亜硝酸塩 士 脱硝 十 レバン形成 − レシチナーゼ − ウレアーゼ 士 成育 でんぷん −ゼラチン − カゼイン −チロシン − トウィーン８０− ＤＮＡ 十 王スクリン ＋ 基質転化 酢酸塩 −クエン酸塩 − マロン酸塩 −グリシン − ノルロイシン − キシロース ＋ ７ラクトース ＋ グル］−ス ＋ 自家栄養増殖 ト１２存在下 − ３−ケトラクトース − 基質 ベタイン ＋ １−カルニチン − γ−ブチロベタイン − クロトノベタイン − Ｌ−グルタミン酸塩十クロトノベタイン ±Ｌ−グルタ
ミン酸酸塩ジブチロベタイン ±Ｌ−グルタミン酸塩＋
１−カルニチン ±微生物ＨＫ１３の子孫であって、安
定でＬ−カルニチンを異化せず、しかしこれを分泌し、
Ｌ−カルニチン、クロトノベタインおよびγ−ブチロベ
タインでは増殖しないが、ベタイン、Ｌ−グルタミン酸
塩およびクロトノベタイン、Ｌ−グルタミン酸塩および
ブチロベタイン、Ｌ−グルタミン酸塩およびＬ−力ルニ
チンで増殖するものがＨＫ１３３Ｉｂ株である。 これ
は、寒天で固体にしたＬ−グルタミン酸およびγ−ブチ
ロベタイン含有栄養培地の表面の、自然突然変異による
良好に増殖する変異種コロニーとして単離された。
述 細胞形態 桿菌、一部は変形 長さ １〜２μＴＩ？、 幅０．５〜０．８μＴＷ運動
性 ＋ 鞭毛 周辺 ダラム反応 −胞子 − ポリ−β−ヒドロキシブチレート生成 −オキシダーゼ
十 カタラーゼ ＋ 増殖 嫌気的 −マコンキー寒天 十 ３７℃ 十 ＳＳ寒天 − ４１℃ −セトリミド寒天 − ｐ ト１５．６ − 色素形成 非拡散性 −拡散性 〜 螢光性 − 酸形成（ＯＦテスト） グルコースから 好気的 −嫌気的 −フラクトースか
ら好気的 − ＡＳＳＳＳグルメ ＋ キシロース ＋トレハロース
＋ エタノール − グルコースからガス形成 − ０ＮＰＧ ＋ アルギニンジヒドロラーゼ − リジンデカルボキシラーゼ − フェニルアラニンデアミラーゼ − オルニチンデカルボキシラーゼ − Ｈ２Ｓ − フォーゲスΦプロスカウアー − インドール − 硝酸塩から亜硝酸塩 士 脱硝 十 レバン形成 − レシチナーゼ − ウレアーゼ 士 成育 でんぷん −ゼラチン − カゼイン −チロシン − トウィーン８０− ＤＮＡ 十 王スクリン ＋ 基質転化 酢酸塩 −クエン酸塩 − マロン酸塩 −グリシン − ノルロイシン − キシロース ＋ ７ラクトース ＋ グル］−ス ＋ 自家栄養増殖 ト１２存在下 − ３−ケトラクトース − 基質 ベタイン ＋ １−カルニチン − γ−ブチロベタイン − クロトノベタイン − Ｌ−グルタミン酸塩十クロトノベタイン ±Ｌ−グルタ
ミン酸酸塩ジブチロベタイン ±Ｌ−グルタミン酸塩＋
１−カルニチン ±微生物ＨＫ１３の子孫であって、安
定でＬ−カルニチンを異化せず、しかしこれを分泌し、
Ｌ−カルニチン、クロトノベタインおよびγ−ブチロベ
タインでは増殖しないが、ベタイン、Ｌ−グルタミン酸
塩およびクロトノベタイン、Ｌ−グルタミン酸塩および
ブチロベタイン、Ｌ−グルタミン酸塩およびＬ−力ルニ
チンで増殖するものがＨＫ１３３Ｉｂ株である。 これ
は、寒天で固体にしたＬ−グルタミン酸およびγ−ブチ
ロベタイン含有栄養培地の表面の、自然突然変異による
良好に増殖する変異種コロニーとして単離された。
上述の菌株は、１９８５年２月８日に、ドイツチェン・
ザンムルング・ピュア・ミクロオルガニスムス（ＤＳＭ
＞、ゲゼルシレフト・ピュア・ビオテクノロジツシエ・
フォアシュング・ｍｂＨ，ドイツ連邦共和国ゲッチンゲ
ン−４３００−グリーゼバッハシュトラーセ８に、Ｎｏ
、ＤＳＭ３２２５の番号で寄託された。
ザンムルング・ピュア・ミクロオルガニスムス（ＤＳＭ
＞、ゲゼルシレフト・ピュア・ビオテクノロジツシエ・
フォアシュング・ｍｂＨ，ドイツ連邦共和国ゲッチンゲ
ン−４３００−グリーゼバッハシュトラーセ８に、Ｎｏ
、ＤＳＭ３２２５の番号で寄託された。
ＨＫ１３３１ｂ （ＤＳＭ Ｎｏ、３２２５＞株の学術
的記述 細胞形態 桿菌、一部は変形 長さ １〜２μＩｒＬ 幅０．５〜０．８μｍ運動性
十 鞭毛 周辺 ダラム反応 −胞子 − ポリ−β−ヒドロキシブチレート生成 −オキシダーゼ
十 カタラーゼ ＋ 増殖 嫌気的 −マコンキー寒天 ＋ ３７℃ 十 ＳＳ寒天 − ４１℃ −セトリミド寒天 − ｐＨ５，６− 色素形成 非拡散性 −拡散性 − 螢光性 − 酸形成 グルコースから 好気的 −嫌気的 −フラクトースか
ら好気的 − ＡＳＳＳＳグルース ＋ キシロース 士トレハロース
士 エタノール − グルコースからガス形成 − ＯＮ ＰＧ ＋ アルギニンジヒドロラーゼ − リジンデカルポキシラーゼ − フェニルアラニンデアミラーゼ − オルニチンデカルボキシラーゼ − Ｈ２Ｓ − フォーゲス・プロスカウアー − インドール − 硝酸塩から亜硝酸塩 士 脱硝 ＋ レバン形成 − レシチナーゼ − ウレアーゼ 士 成育 でんぷん −ゼラチン − 力ゼイン − チロシン トウィーン８Ｏ−ＤＮＡ 十 エスタリン 士 基質転化 酢酸塩 −クエン酸塩 − マロン酸塩 −グリシン − ノル−ロイシン − キシロース 士 フラクトース ＋ グルコース ＋ 自家栄養増殖 Ｈ２存在下 − ３−ケトラクトース − 基質 ベタイン ＋ Ｌ−カルニチン ＋ γ−ブチロベタイン 士 クロトノベタイン 士 Ｌ−グルタミン酸塩およびクロトノベタイン＋し一グル
タミン酸塩およびブチロベタイン ＋Ｌ−グルタミン酸
塩およびＬ−カルニチン ＋Ｌ−力ルニチンの製造方法
は、好ましくはつぎのように実施する。 すなわち、微
生物、好ましくは番号ＨＫ１３の微生物を、滅菌した前
培養、好ましくは、ビタミン含有ミネラル培地［クラ（
）（ｕｌｌａ）ほか、アルヒーフ・ミクロピロオシ−（
Ａｒｃｈ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、）、１３５． １ （
１９８３）］に、２０−／１０℃、好ましくは３０℃に
おいて、６〜Ｂの適当なｐＨ１好ましくはｐＨ７で、２
０〜５０時間、有利には３０〜４０時間培養する。 こ
の前培養物は、代表的には０．１〜１０重量％とりわけ
０．５〜５重量％のコリン、グルタミン酸塩、酢酸塩、
ジメチルグリシンまたはベタインを成長基質として含有
する。 とくに好ましいものは、０．５〜５重量％のベ
タインを添加したものである。
的記述 細胞形態 桿菌、一部は変形 長さ １〜２μＩｒＬ 幅０．５〜０．８μｍ運動性
十 鞭毛 周辺 ダラム反応 −胞子 − ポリ−β−ヒドロキシブチレート生成 −オキシダーゼ
十 カタラーゼ ＋ 増殖 嫌気的 −マコンキー寒天 ＋ ３７℃ 十 ＳＳ寒天 − ４１℃ −セトリミド寒天 − ｐＨ５，６− 色素形成 非拡散性 −拡散性 − 螢光性 − 酸形成 グルコースから 好気的 −嫌気的 −フラクトースか
ら好気的 − ＡＳＳＳＳグルース ＋ キシロース 士トレハロース
士 エタノール − グルコースからガス形成 − ＯＮ ＰＧ ＋ アルギニンジヒドロラーゼ − リジンデカルポキシラーゼ − フェニルアラニンデアミラーゼ − オルニチンデカルボキシラーゼ − Ｈ２Ｓ − フォーゲス・プロスカウアー − インドール − 硝酸塩から亜硝酸塩 士 脱硝 ＋ レバン形成 − レシチナーゼ − ウレアーゼ 士 成育 でんぷん −ゼラチン − 力ゼイン − チロシン トウィーン８Ｏ−ＤＮＡ 十 エスタリン 士 基質転化 酢酸塩 −クエン酸塩 − マロン酸塩 −グリシン − ノル−ロイシン − キシロース 士 フラクトース ＋ グルコース ＋ 自家栄養増殖 Ｈ２存在下 − ３−ケトラクトース − 基質 ベタイン ＋ Ｌ−カルニチン ＋ γ−ブチロベタイン 士 クロトノベタイン 士 Ｌ−グルタミン酸塩およびクロトノベタイン＋し一グル
タミン酸塩およびブチロベタイン ＋Ｌ−グルタミン酸
塩およびＬ−カルニチン ＋Ｌ−力ルニチンの製造方法
は、好ましくはつぎのように実施する。 すなわち、微
生物、好ましくは番号ＨＫ１３の微生物を、滅菌した前
培養、好ましくは、ビタミン含有ミネラル培地［クラ（
）（ｕｌｌａ）ほか、アルヒーフ・ミクロピロオシ−（
Ａｒｃｈ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、）、１３５． １ （
１９８３）］に、２０−／１０℃、好ましくは３０℃に
おいて、６〜Ｂの適当なｐＨ１好ましくはｐＨ７で、２
０〜５０時間、有利には３０〜４０時間培養する。 こ
の前培養物は、代表的には０．１〜１０重量％とりわけ
０．５〜５重量％のコリン、グルタミン酸塩、酢酸塩、
ジメチルグリシンまたはベタインを成長基質として含有
する。 とくに好ましいものは、０．５〜５重量％のベ
タインを添加したものである。
さらｋ、微生物学的技術において通常行なわれるように
、この前培養物には添加される出発化合物に加えて、γ
−ブチロベタイン、クロトノベタインまたはそれらの混
合物を反応媒体基準で０゜１〜１０重量％、好ましくは
０．５〜５重四％の量加える。 γ−ブチロベタインあ
るいはクロトノベタインは、塩酸塩であっても、遊離の
内部塩であっても、あるいはその誘導体の形であっても
よい。 上述の方法によって製造した前培養物は、別の
培養のため接種することができる。 この別の培養には
、前培養と同じ組成物を用いることが好ましい。
、この前培養物には添加される出発化合物に加えて、γ
−ブチロベタイン、クロトノベタインまたはそれらの混
合物を反応媒体基準で０゜１〜１０重量％、好ましくは
０．５〜５重四％の量加える。 γ−ブチロベタインあ
るいはクロトノベタインは、塩酸塩であっても、遊離の
内部塩であっても、あるいはその誘導体の形であっても
よい。 上述の方法によって製造した前培養物は、別の
培養のため接種することができる。 この別の培養には
、前培養と同じ組成物を用いることが好ましい。
添加すべきクロトノベタイン、γ−ブチロベタインまた
はそれらの混合物は、０．１〜１０重量％、好ましくは
０．５〜５重量％とする。
はそれらの混合物は、０．１〜１０重量％、好ましくは
０．５〜５重量％とする。
成長基質、コリン、グルタミン酸塩、酢酸塩、ジメチル
グリシンおよびベタインは、前培養において使用された
濃縮物中に、有利に利用することができる。 後の培養
の培養条件を前培養の培養条件と合致させることが得策
である。
グリシンおよびベタインは、前培養において使用された
濃縮物中に、有利に利用することができる。 後の培養
の培養条件を前培養の培養条件と合致させることが得策
である。
従って温度は、好ましくは２０〜４０℃、とりわけ３０
℃、ｐＨ値は６〜Ｂの範囲、とりわけ１）Ｈ７に保持す
る。
℃、ｐＨ値は６〜Ｂの範囲、とりわけ１）Ｈ７に保持す
る。
このようにして実施されるし一カルニチンの生産は、２
０〜３０時間の後に停止に至る。 Ｌ−カルニチンの濃
度は、加えられたγ−ブチロベタインまたはクロトノベ
タインの量の範囲に相当である。 細胞は遠心分離また
はろ過分離され、接種材料として新しい培養のために利
用することができる。 Ｌ−カルニチンは、既知の方法
［Ｊ。
０〜３０時間の後に停止に至る。 Ｌ−カルニチンの濃
度は、加えられたγ−ブチロベタインまたはクロトノベ
タインの量の範囲に相当である。 細胞は遠心分離また
はろ過分離され、接種材料として新しい培養のために利
用することができる。 Ｌ−カルニチンは、既知の方法
［Ｊ。
Ｐ、ヴ７７ンデカス−７−（−レ（ＶａｎｄｅＣａＳｔ
ｅｅｌｅ） 。
ｅｅｌｅ） 。
アプライド・エンピロンメンタル・マイクロバイオロジ
ー（ＡＩ）Ｄｌ、Ｅｎｖｉｒｏｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌ、 ＞ ３９゜３２７ （１９８０）］によって、カ
チオン交換クロマトグラフィーの手段で上澄液から回収
し、再結晶によって精製することかできる。
ー（ＡＩ）Ｄｌ、Ｅｎｖｉｒｏｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌ、 ＞ ３９゜３２７ （１９８０）］によって、カ
チオン交換クロマトグラフィーの手段で上澄液から回収
し、再結晶によって精製することかできる。
Ｌ−カルニチンの製造は、連続的な方法によっても実施
でき、その場合、細胞は化学装置内で、有利には希釈速
度０．０４〜０．２／ｈ、好ましくは０．０６〜０．０
８／ｈで、バッチ培養と同様な条件下に増殖させること
かできる。
でき、その場合、細胞は化学装置内で、有利には希釈速
度０．０４〜０．２／ｈ、好ましくは０．０６〜０．０
８／ｈで、バッチ培養と同様な条件下に増殖させること
かできる。
叉簾叢ユ
クロトノベタイン生育微生物の単離
土壌中から微生物を中性リン酸塩緩衝溶液を用いて撹拌
下に抽出し、最後に大きな構成部分をろ紙によって分離
して、クロトノベタイン栄養溶液中に、上記のようにし
て得たバクテリア混合物をわずかに濁るまで接種した。
下に抽出し、最後に大きな構成部分をろ紙によって分離
して、クロトノベタイン栄養溶液中に、上記のようにし
て得たバクテリア混合物をわずかに濁るまで接種した。
９日の後、濁りは９０倍の細胞濃度の集団に増大して
いた。 クロトノベタインはこの溶液から全く消失し、
アンモニアが生産副生物として検出された。
いた。 クロトノベタインはこの溶液から全く消失し、
アンモニアが生産副生物として検出された。
この場合培養体から、常用の微生物学的手段（固体にし
た寒天−栄養培地）の助けを借りて、クロトノベタイン
生育微生物の純粋培養を行なった。 培養物をさらに処
理して選別し、ＨＫ４と命名した。
た寒天−栄養培地）の助けを借りて、クロトノベタイン
生育微生物の純粋培養を行なった。 培養物をさらに処
理して選別し、ＨＫ４と命名した。
この菌株は、γ−ブチロベタイン、Ｌ−カルニチンおよ
びベタインでも増殖する。
びベタインでも増殖する。
実施例２
安定なカルニチン−デヒドロゲナーゼ陰性変異種の単離
このような変異種は、γ−ブチロベタインまたはクロト
ノベタインから生産されたＬ−カルニチンをそれ以上分
解代謝することがなく、理想的な場合はむしろ分泌する
ものである。
ノベタインから生産されたＬ−カルニチンをそれ以上分
解代謝することがなく、理想的な場合はむしろ分泌する
ものである。
ＨＫ４の培養物を、［アクリジン・ミュターゲン ＩＣ
Ｒ１９１ｊ５μｔｉ／ｍｆｌとともに、コハク酸塩媒体
中で指針［Ｊ、Ｈ，ミラー、「分子生物学実験」］−ル
ド・スプリング・ハーバ−・ラボラトリ−、（１９７２
）］に従って安定に変異させ、ついで細胞を標準に従っ
て「栄養肉汁ｊ中で変異のあられれを促進し、続いてベ
タイン媒体中で実施した。 この熟成した培養物をＬ−
カルニチン媒体に接種した。
Ｒ１９１ｊ５μｔｉ／ｍｆｌとともに、コハク酸塩媒体
中で指針［Ｊ、Ｈ，ミラー、「分子生物学実験」］−ル
ド・スプリング・ハーバ−・ラボラトリ−、（１９７２
）］に従って安定に変異させ、ついで細胞を標準に従っ
て「栄養肉汁ｊ中で変異のあられれを促進し、続いてベ
タイン媒体中で実施した。 この熟成した培養物をＬ−
カルニチン媒体に接種した。
数時間後、培養物は対数的な増殖をみせた。
この時点で、ペニシリンＧ （１５ＩＩＩｇ／ｌｔ）お
よびＤ−シフロゼリン（０，５ｍｙ／ｒｄ＞を添加した
［オルンストン（Ｑ ｒｎｓｔｏｎ）ほか、 ３ｉ０Ｃ
ｈｉｎ＋。
よびＤ−シフロゼリン（０，５ｍｙ／ｒｄ＞を添加した
［オルンストン（Ｑ ｒｎｓｔｏｎ）ほか、 ３ｉ０Ｃ
ｈｉｎ＋。
３ｉｏｐｈｙｓ、 Ｒｅｓ、 Ｑｏｍｍｕｎ、３６．１
７９ （１９６９）］。 この「カウンター分類」をさ
れた試薬は、成長したバクテリアだけを殺した。 Ｌ−
力ルニチンでもはや増殖することのできず、我々にとっ
て興味のある変異種は、生き残って相対的に増加した。
７９ （１９６９）］。 この「カウンター分類」をさ
れた試薬は、成長したバクテリアだけを殺した。 Ｌ−
力ルニチンでもはや増殖することのできず、我々にとっ
て興味のある変異種は、生き残って相対的に増加した。
３０時間後、生きている細胞の数は１００分の１に後退
した。 抗生物質を洗い流し、培養をベタイン媒体中で
実施した。 増殖ののち、対応する固化した栄養寒天上
の培養液希釈物を分配した。
した。 抗生物質を洗い流し、培養をベタイン媒体中で
実施した。 増殖ののち、対応する固化した栄養寒天上
の培養液希釈物を分配した。
そのように個別化された細胞を増殖させてコロニーにし
、個々に試験した。 変異種ＨＫ１３をえらび出した。
、個々に試験した。 変異種ＨＫ１３をえらび出した。
これは安定でもはやカルニチン・デヒドロゲナーゼを
含まず、従ってＬ−力ルニチン、γ−ブチロベタインま
たはクロトノベタインでは増殖しないがベタインでは増
殖した。 ベタイン、ジメヂルグリシン、コリン、グル
タミン酸塩または酢酸塩による増殖に際して、この菌株
はクロトノベタインまたはγ−ブチロベタインをＬ−力
ルニチンに転化させ、それを分泌した。
含まず、従ってＬ−力ルニチン、γ−ブチロベタインま
たはクロトノベタインでは増殖しないがベタインでは増
殖した。 ベタイン、ジメヂルグリシン、コリン、グル
タミン酸塩または酢酸塩による増殖に際して、この菌株
はクロトノベタインまたはγ−ブチロベタインをＬ−力
ルニチンに転化させ、それを分泌した。
実施例３
ＨＫ１３の前培養物５ｊ！を、ビタミン含有ミネラル媒
体［クラほか、 ＡｒＣｈ、ＭｉＣｒＯｂ＋０１．１３
５゜１ （１９８３）］であってベタイン１重量％およ
びクロトノベタイン・クロライド０．５重量％を含有す
るものの中で、３０℃、 ｐＨ７，０において、３２時
間のあいだ培養した。 これを１５．１！の同じ組成物
に接種し、前培養と同様に（３０℃。
体［クラほか、 ＡｒＣｈ、ＭｉＣｒＯｂ＋０１．１３
５゜１ （１９８３）］であってベタイン１重量％およ
びクロトノベタイン・クロライド０．５重量％を含有す
るものの中で、３０℃、 ｐＨ７，０において、３２時
間のあいだ培養した。 これを１５．１！の同じ組成物
に接種し、前培養と同様に（３０℃。
１）Ｈ７，Ｏ，ｐ０２ ＝３Ｆ１Ｆ）ｍ ）２４時間に
わたって培養した。 生成が停止に至ったところで細胞
を遠心分離し、新しいバッチへの接種材料として利用し
た。 上澄液（１９，８，１！ ）の中のＬ−力ルニチ
ンの濃度を、酵素的分析によって測定した。
わたって培養した。 生成が停止に至ったところで細胞
を遠心分離し、新しいバッチへの接種材料として利用し
た。 上澄液（１９，８，１！ ）の中のＬ−力ルニチ
ンの濃度を、酵素的分析によって測定した。
この上澄液は、１ｄあたり４．２６Ｎのし一力ルニチン
を含んでいた。 これは、クロトノベタインの添加量に
対して９５．０％の収率に相当すると計算された。
を含んでいた。 これは、クロトノベタインの添加量に
対して９５．０％の収率に相当すると計算された。
中間体または他の汚染物は、ＮＭＲスペクトル中に検出
されなかった。
されなかった。
記述されたように［Ｊ、Ｐ、ウアンデ力スティーレ、
ＡＩ）Ｄｌ、Ｅｎｖｉｒｏｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、
３９．３２７ （１９８０）］、］Ｌ−カルニチはカ
チオン交換クロマトグラフィーの手段で上澄液から回収
することができ、再結晶によって精製された。
ＡＩ）Ｄｌ、Ｅｎｖｉｒｏｎ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、
３９．３２７ （１９８０）］、］Ｌ−カルニチはカ
チオン交換クロマトグラフィーの手段で上澄液から回収
することができ、再結晶によって精製された。
実施例４
ＨＫ１３の前培養物５ｊを、ビタミン含有ミネラル媒体
（実施例１に従う）であってコリン１％およびγ−ブチ
ロベタイン０．６％を含有するも゛のの中で、Ｅ）Ｈ７
，Ｏ，温度３０℃で３２時間にわたって培養した。 こ
の前培養物で、同じ組成物の媒体１５Ｍの培地に接種し
、実施性１と同じ条件下に培養した。
（実施例１に従う）であってコリン１％およびγ−ブチ
ロベタイン０．６％を含有するも゛のの中で、Ｅ）Ｈ７
，Ｏ，温度３０℃で３２時間にわたって培養した。 こ
の前培養物で、同じ組成物の媒体１５Ｍの培地に接種し
、実施性１と同じ条件下に培養した。
約３０時間後に生産が停止し、細胞を精密ろ過（アミ」
ンのホローファイバーカートリッジ）により分離した。
ンのホローファイバーカートリッジ）により分離した。
この細胞集団は、次のし一力ルニチン生産に利用する
ことができた。 ろ液（１９，６，ｌｌ）中の１−力ル
ニチンの濃度は、酵素的に測定した。 このろ液は１ｄ
あたり５．３ｍｙのＬ−カルニチンを含有していた。
これは、添加したγ−ブヂロベタインクロライドの最に
対して９７．６％の分析収率に相当すると計樟された。
ことができた。 ろ液（１９，６，ｌｌ）中の１−力ル
ニチンの濃度は、酵素的に測定した。 このろ液は１ｄ
あたり５．３ｍｙのＬ−カルニチンを含有していた。
これは、添加したγ−ブヂロベタインクロライドの最に
対して９７．６％の分析収率に相当すると計樟された。
拡大ＮＭＲ分析によっても、中間体または他の異なった
有機副生物は、ろ液中に検出されなかった。 この溶液
から、Ｌ−カルニチンを既知の手法たとえば共沸蒸留（
ドイツ特許２３００４９２）によって単離することがで
きた。
有機副生物は、ろ液中に検出されなかった。 この溶液
から、Ｌ−カルニチンを既知の手法たとえば共沸蒸留（
ドイツ特許２３００４９２）によって単離することがで
きた。
実施例５
連続培養のための設備をそなえた発酵器に１゜５１のビ
タミン含有ミネラル媒体（実施例１に従う）ｋ：ベタイ
ン１．５％およびγ−ブチロペタインク目ライトを含有
させたものを入れ、同じ培地のＨＫ１３前培養物１５０
ｄを接種した。 ３０℃、ｐＨ７，０における２０時間
の好気的培養ののち、培養物は完全に成熟したので、連
続運転を流速０．ＩＪｌ／ｈで開始した。 発酵器から
流出する培養物溶液を、４℃に冷却した容器に受けとっ
た。 細胞は、遠心分離によって除去した。
タミン含有ミネラル媒体（実施例１に従う）ｋ：ベタイ
ン１．５％およびγ−ブチロペタインク目ライトを含有
させたものを入れ、同じ培地のＨＫ１３前培養物１５０
ｄを接種した。 ３０℃、ｐＨ７，０における２０時間
の好気的培養ののち、培養物は完全に成熟したので、連
続運転を流速０．ＩＪｌ／ｈで開始した。 発酵器から
流出する培養物溶液を、４℃に冷却した容器に受けとっ
た。 細胞は、遠心分離によって除去した。
拡大酵素分析の結果、上澄液は＠養物１．ｌ！あたり８
．８ｇの１−力ルニチンを含有していた。
．８ｇの１−力ルニチンを含有していた。
これは、ｒ−１チロベタインクロライドの添加された濃
度に対する分析的に検出される収率９９゜２％に相当す
ると計紳された。
度に対する分析的に検出される収率９９゜２％に相当す
ると計紳された。
固体のし一カルニチンは、この溶液からイオンクロマト
グラフィーおよび水分離によって単離することができた
。
グラフィーおよび水分離によって単離することができた
。
特許出願人 ロング リミテッド
代理人 弁理士 須 賀 総 夫
Claims (12)
- （１） クロトノベタインおよび（または）γ−ブチロ
ベタインからし一力ルニチンを生産する能力を有し、か
つ後者を異化しない微生物。 - （２） 下記の分類法によって特定される特許請求の範
囲第１項の微生物。 ａ） ベタイン、Ｔ−ブチロベタイン、クロトノベタイ
ンおよびＬ−力ルニチンをＣ−およびＮ−源として増殖
する微生物を常用の方法で変異させること、 ｂ） 変異した微生物の接種によって得られる培養物か
らそれぞれ分類され、安定であって、Ｌ−カルニチンを
異化せず、かつＬ−カルニチン、クロトノベタイン、γ
−ブチロベタインで増殖しないが、ベタインで増殖する
こと。 - （３） 分離工程ｂ）に従って、Ｌ−カルニチンを分泌
し、ｌ−一力ルニヂン、クロトノベタイン、γ−ブチロ
ベタインで増殖しないが、ベタインで増殖すること、に
より分類されることを特徴とする特許請求の範囲第２項
の微生物。 - （４） 前記ａ）の変異した微生物をベタイン培地上で
さらに培養したことを特徴とする特許請求の範囲第２項
または第３項の微生物。 - （５） ベタイン培地上でさらに接種された微生物を分
離工程ｂ）の実施のためにＬ−力ルニチン培地上に接種
して得たことを特徴とする特許請求の範囲第３項または
第４項の微生物。 - （６） 微生物ＨＫ１３（ＤＳＭ Ｎα２９０３＞なら
びにその子孫および変異種。 - （７） 微生物ＨＫ１３３１ｂ（ＤＳＭ Ｎｏ、３２２
５）ならびにその子孫および変異種。 - （８） 微生物ＨＫ４ （ＤＳＭ Ｎｏ、２９３８＞な
らびにその子孫および変異種。 - （９） 特許請求の範囲第１項ないし第７項のいずれか
の微生物をクロトノベタインおよび（または）γ−ブチ
ロベタインを用いて成長基質の存在下に培養し、蓄積さ
れたｌ−カルニチンを単離することを特徴とするし一力
ルニチンの製造方法。 - （１０） クロトノベタイン、γ−ブチロベタインまた
はそれらの混合物を培地基準で０．１〜１０重量％の量
使用することを特徴とする特許請求の範囲第９項の製造
方法。 - （１１） 成長基質としてジメチルグリジン、コリン、
グルタミン酸塩、酢酸塩および（または）ベタインを使
用することを特徴とする特許請求の範囲第９項の製造方
法。 - （１２） 成長基質を培地基準で０．１〜１０重量％の
量使用することを特徴とする特許請求の範囲第９項の製
造方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH160084 | 1984-03-29 | ||
| CH1600/84 | 1984-03-29 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32921592A Division JP2586283B2 (ja) | 1992-12-09 | 1992-12-09 | 微生物学的手段によってｌ−カルニチンを製造する方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60224488A true JPS60224488A (ja) | 1985-11-08 |
Family
ID=4214209
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60064931A Expired - Lifetime JPS60224488A (ja) | 1984-03-29 | 1985-03-28 | 微生物学的手段によるｌ−カルニチンの製造 |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5187093A (ja) |
| EP (1) | EP0158194B1 (ja) |
| JP (1) | JPS60224488A (ja) |
| CN (1) | CN1004146B (ja) |
| AT (1) | ATE64154T1 (ja) |
| AU (1) | AU585216B2 (ja) |
| BG (1) | BG50282A3 (ja) |
| BR (1) | BR8501374A (ja) |
| CA (1) | CA1265757A (ja) |
| CS (1) | CS273163B2 (ja) |
| DD (1) | DD232310A5 (ja) |
| DE (1) | DE3583058D1 (ja) |
| DK (1) | DK165191C (ja) |
| ES (1) | ES541663A0 (ja) |
| FI (1) | FI86889C (ja) |
| HU (1) | HU193744B (ja) |
| IE (1) | IE58045B1 (ja) |
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