JPH04316490A - ６−ヒドロキシピコリン酸の微生物学的製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、ピコリン酸および（または）そ
の塩を原料として６−ヒドロキシピコリン酸を製造する
ための新規な微生物学的方法に関する。

【０００２】６−ヒドロキシピコリン酸は、たとえば医
薬品製造のための重要な中間体である、２−オキシピリ
ミジンの製造に使用される［Ｂｅｒｉｃｈｔｅ　　ｄｅ
ｒ　　Ｄｅｕｔｓｃｈｅ　　Ｃｈｅｍｉｓｃｈｅｎ　　
Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｆ（ドイツ化学協会報告）１９
１２，４５，２４５６〜２４６７頁］。

【０００３】有機合成によって６−ヒドロキシピコリン
酸を製造するための、多くの方法が知られている。　　
ピコリン酸から、たとえば水酸化カリウムとの反応によ
り、６−ヒドロキシピコリン酸を得ることができる［Ｔ
ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　　Ｌｅｔｔｅｒｓ（テトラヘド
ロン・レタース）２９巻，４３８９〜４３９２頁，１９
８８］。

【０００４】この方法の欠点は、６−ヒドロキシピコリ
ン酸の収量が低い（５１％）ことである。

【０００５】また、バチルス種の微生物がピコリン酸を
６−ヒドロキシピコリン酸にヒドロキシル化することが
知られている［Ｏ．シュクラおよびＳ．Ｍ．カウル，Ｉ
ｎｄｉａｎ　　Ｊ．　　ｏｆ　　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ　　ａｎｄ　　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ（インディア
ン・ジャーナル・オブ・バイオケミストリー・アンド・
バイオフィジックス）１０巻，１７６〜１７８頁、Ｏ．
シュクラら、同書，１４巻，２９２〜２９５頁］。

【０００６】この方法の大きな欠点は、６−ヒドロキシ
ピコリン酸がそれ以上代謝されるのを阻害剤の亜ヒ酸ナ
トリウムを使用することによりはじめて防げるが、その
ために微生物の成長も阻害されることである。　　もう
一つの欠点は、６−ヒドロキシピコリン酸だけではなく
、３，６−ジヒドロキシピコリン酸と６−ヒドロキシピ
コリン酸の混合物が形成されることである。

【０００７】Ｒ．Ｌ．テイトおよびＪ．Ｃ．エンサイン
，Ｃａｎ．Ｊ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．（カナディアン・
ジャ−ナル・オブ・マイクロバイオロジ−），２０巻，
６９５〜７０２頁，１９７４は、アートロバクター種の
微生物によるピコリン酸のヒドロキシル化を記載してい
る。　　この方法の欠点は、この微生物はピコリン酸を
唯一の炭素、窒素、およびエネルギーの供給源として利
用できるのではなく、ヒドロキシル化の際に、生成物の
好ましくない汚染を引き起こすことがある酵母抽出物の
存在を必要とすることである。　　もう一つの欠点は、
酸素含有量が少ない場合に限り６−ヒドロキシピコリン
酸が形成され、そこでは微生物が成長期では存在しない
ので、僅かな生成物しか形成されないことである。

【０００８】以下、ピコリン酸とは、その塩、たとえば
その水溶性アルカリ塩、アンモニウム塩、またはピコリ
ン酸とその水溶性アルカリ塩の混合物も意味する。

【０００９】本発明の目的は、上記の欠点を克服し、生
成物が高純度および高収量で形成される、６−ヒドロキ
シピコリン酸を製造するための経済的な、微生物学的方
法を提案することである。

【００１０】この目的は、請求項１の方法および請求項
７の方法により達成される。

【００１１】本発明に従う６−ヒドロキシピコリン酸製
法の一実施形態では、ピコリン酸を唯一の炭素源、窒素
源およびエネルギー源として成長する、シュ−ドモナス
、バチルス、アルカリゲネス、アエロコッカス、または
ロドトルラ種の微生物を使用してピコリン酸をヒドロキ
シル化し、その際、ピコリン酸の濃度を、６−ヒドロキ
シピコリン酸がそれ以上代謝されないレベルに選択する
。

【００１２】微生物としては、ピコリン酸を唯一の炭素
源、窒素源およびエネルギー源として成長する、上記の
種類のすべての微生物を使用することができる。これら
の微生物は、専門家にとっては通常の方法により、たと
えば浄化設備または土壌から分離することができる。

【００１３】好ましくは、６−ヒドロキシピコリン酸の
製造には、１９９０年１２月７日にＤＳＭ（ドイチェン
・ザムルング・フォン・ミクロオルガニズメン・ウント
・ツェルクルトゥーレン）ＧｍｂＨ，マシェローデヴェ
ク１ｂ，Ｄ−３３００　　ブラウンシュバイク、に番号
６２６９で供託した微生物アルカリゲネス・フェ−カリ
スを使用する。　　この微生物はこれまで知られていな
い。

【００１４】この種族（アルカリゲネス・フェ−カリス
，ＤＳＭ−Ｎｏ．６２６９）の特性：細胞形状　　　　
　　　　　　棒状　　　　　　　　　　　　　　　　Ｖ
Ｐ　　　　　　　　　　　　　　　　−幅　　μｍ　　
　　　　　　　　０．５〜０．８長さ　　μｍ　　　　
　　　　１．０〜２．０　　　　　　ＯＤＣ　　　　　
　　　　　　　　　−移動性　　　　　　　　　　　　
＋　　　　　　　　　　　　　　　　　　ＮＯ３からＮ
Ｏ２　　　　　　−鞭毛　　　　　　菌体から鞭毛が突
き出ている　　脱窒　　　　　　　　　　　　　　　　
−グラム反応　　　　　　　　−　　　　　　　　　　
　　　　　　　　フェニルアラニン３％ＫＯＨによる　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　デスアミ
ナーゼ　　　　　　−　　　　分解　　　　　　　　　
　＋　　　　　　　　　　　　　　　　　　アミノペプ
チダーゼ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　サ
ッカロ−スからの　　　　　　（Ｃｅｒｎｙ）＋　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　レバン　　　
　　　　　　　−胞子　　　　　　　　　　　　　　−
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　オキシダーゼ　　　　　　＋　　　　　　　　　　　
　　　　　　　レシチナーゼ　　　　　　　　−　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　ウレアーゼ　　　　　　　　　　
−カタラーゼ　　　　　　　　＋　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　加水分解
：成長　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　デンプン　　　　　　　
　　　−　　けん気性　　　　　　　　−　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　ゼラチン　　　　　　　
　　　−　　３７／４０℃　　　　＋／−　　　　　　
　　　　　　　　　　カゼイン　　　　　　　　　　−
　　ｐＨ５．６　　　　　　＋　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　ＤＮＡ　　　　　　　　　　　　−
　　マック−コンキー　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　ツイーン８０　　　　　　−　　　　　
　寒天　　　　　　　　＋　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　エスクリン　　　　　　　　−　　 顔料　　　　　　　　　　　　　　−　　　　　　　　
　　　　　　　　　　チロシン分解　　　　　　　　−
　　非散乱　　　　　　　　　　− 　　散乱　　　　　　　　　　　　−　　　　　　　　
　　　　　　　　　　成長ホルモン要求　　　　−　　
蛍光発生　　　　　　　　− 　　ピオシアニン　　　　−　　　　　　　　　　　　
　　　　　　基質利用　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
酢酸塩　　　　　　　　　　　　＋酸発生（ＯＦ試験）
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　アジピ
ン酸塩　　　　　　−　　グルコース好気性　　−　　
　　　　　　　　　　　　　　　　カプリン酸塩　　　
　　　＋　　グルコースけん気性　　−　　　　　　　
　　　　　　　　　クエン酸塩　　　　　　　　＋　　
キシロース好気性　　−　　　　　　　　　　　　　　
　　　　グリコール酸塩　　　　＋　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　Ｌ−乳酸塩　　　　　　　　＋グルコース
からの　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　レブリン酸塩　　　　　　−　　　　ガス発生　　
　　　　−　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
リンゴ酸塩　　　　　　　　＋　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　マロン酸塩　　　　　　　　＋酸発生（ＡＳＳ
）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
フェニル酢酸塩　　　　＋　　グルコース　　　　　　
−　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　プロピオ
ン酸塩　　　　＋　　フルクトース　　　　−　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　スベリン酸塩　　　
　　　−　　キシロース　　　　　　−　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　Ｌ−アラビノース　　−　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　フルクトース　　　　　
　−ＯＮＰＧ　　　　　　　　　　−　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　グルコース　　　　　　　　
−　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　マンノース　　　　
　　　　−ＡＤＨ　　　　　　　　　　　　−　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　マルトース　　　　
　　　　−　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　キシロース
　　　　　　　　−ＬＤＣ　　　　　　　　　　　　−
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　リボース　
　　　　　　　　　−　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
マンニット　　　　　　　　−ＶＰ　　　　　　　　　
　　　　　−　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　グルコン酸塩　　　　　　−　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　２−ケトグルコン酸塩　　−インドール　　　
　　　　　−　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　Ｎ−アセチルグルコサミン　　−　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　Ｌ−ヒスチジン　　　　−　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　Ｌ−メチオニン　　　　＋　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　ヒドロキシ酪酸塩　　＋ピコリン
酸のヒドロキシル化を行なうには、６−ヒドロキシピコ
リン酸をそれ以上代謝しないことが望ましい。

【００１５】経済的なピコリン酸のヒドロキシル化を行
なうには、下記の条件を満たす必要がある。 ａ）細胞が成長段階で、すでに６−ヒドロキシピコリン
酸を生産すべきである。 ｂ）ピコリン酸−ヒドロキシラーゼが、成長後も活性を
維持すべきである。 ｃ）ピコリン酸の分解過程が、６−ヒドロキシピコリン
酸の段階で阻止されるべきである。 ｄ）生成物（６−ヒドロキシピコリン酸）が、成長媒体
中に濃縮されるべきである。

【００１６】驚くべきことに、微生物の成長中、あるい
は微生物の成長段階後にも、ピコリン酸を、６−ヒドロ
キシピコリン酸がそれ以上代謝されないような濃度で補
給することにより、これらの条件が同時に満たされるこ
とがわかった。

【００１７】先に述べたように、この品種は唯一の炭素
源、窒素源およびエネルギー源としてピコリン酸を利用
し、それにより成長する。　　この品種の育成は０．０
５〜０．２重量％のピコリン酸により行なわれ、その際
、前に使用したピコリン酸は完全に代謝される。　　ピ
コリン酸濃度が高くなると細胞成長が阻害され、０．５
重量％のピコリン酸濃度を超えると、成長はもはや観察
されなくなる。しかし、ピコリン酸−ヒドロキシラーゼ
の活性は細胞中では不変である。

【００１８】微生物の育成後は、ピコリン酸を１０重量
％〜飽和溶液として、発酵装置内のピコリン酸濃度が１
０重量％を超えないような速度で加えるのが有利である
。

【００１９】好ましくは、発酵装置内のピコリン酸濃度
が１重量％を超えないようにする。培養基のｐＨ値を調
整するための水酸化アルカリ溶液とともにピコリン酸溶
液を使用するのが有利である。　　水酸化アルカリとし
ては、たとえば水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウム
を使用できる。　　培養基としては、この専門分野で通
常の培養基を使用できるが、好ましくは表２にその構成
を示す鉱物塩培養基を使用する。

【００２０】ヒドロキシル化の際の培養基中における酸
素含有量は、最高は飽和の９０％まで、好ましくは酸素
含有量は最高飽和の０．１〜５０％の範囲にあるのが有
利である。　　ピコリン酸のヒドロキシル化は、成長段
階の最中またはその後に行なわれる。

【００２１】ｐＨ値は、成長段階の最中またはその後で
、ｐＨ４〜１０、好ましくは５〜９であるのが有利であ
る。

【００２２】ヒドロキシル化は、１０〜６０℃、好まし
くは１５〜４０℃の温度で行なうのが有利である。

【００２３】生成物濃度をさらに高めるために、本発明
の好ましい実施形態では、微生物の成長段階の後で、ピ
コリン酸のアルカリ塩を加えるが、その際、ピコリン酸
アルカリ塩の供給は発酵装置内の酸素分圧調整により制
御する。

【００２４】ピコリン酸のアルカリ塩は、発酵装置内の
ピコリン酸塩濃度が１０重量％を超えない、好ましくは
１重量％を超えないような速度で加えるのが有利である
。

【００２５】６−ヒドロキシピコリン酸を製造するため
の本発明に従う方法の第二の実施形態は、ａ）ピコリン
酸を利用する好気性生物材料を、ピコリン酸および鉱酸
により、ピコリン酸対鉱酸のモル比１〜８で育成し、そ
の際、全育成段階にわたってこの比を確保すること、お
よび、次いで ｂ）ピコリン酸のヒドロキシル化をこの生物材料で行な
うことにより行なう。

【００２６】「ピコリン酸を利用する好気性生物材料を
育成する」とは、接種物として浄化スラッジから、上記
のピコリン酸−鉱酸のモル比で、好気性条件下で生物材
料を成長させ、ピコリン酸を利用する好気性生物材料、
すなわちピコリン酸を唯一の炭素源、窒素源およびエネ
ルギー源として、酸素の存在下で成長する、殺菌されて
いない生物材料を得ることである。

【００２７】ピコリン酸対鉱酸のモル比、すなわちピコ
リン酸および鉱酸からなる混合物の細胞分散物への供給
は、ｐＨ値の測定により、および（または）排気中の酸
素対二酸化炭素の比の測定により調整するのが有利であ
る。

【００２８】鉱酸としては、たとえば硫酸、塩酸、硝酸
またはリン酸を使用するが、好ましくは硫酸を使用する
。

【００２９】その調整ないし混合物の供給は、生物材料
の育成中（段階ａ）に、ピコリン酸対硫酸のモル比を３
〜５に確保するように行なうのが有利である。　　すな
わち、硫酸１モルあたり３〜５モルのピコリン酸を育成
に使用する。　　好ましくは、硫酸１モルあたり４〜５
モルのピコリン酸を育成に使用する。

【００３０】通常、ピコリン酸を利用する好気性生物材
料の育成は鉱物塩培養基中で行ない、好ましくは表２に
その成分を示す鉱物塩培養基中で行なう。

【００３１】生物材料の育成は５〜９、好ましくは６〜
８のｐＨ値で行なうことが有利である。　　生物材料育
成中の温度は１５〜５０℃、好ましくは２５〜４０℃で
あるのが有利である。　　通常、生物材料の育成は０．
５〜３日間行なう。　　育成の後、本来の生物変換（ヒ
ドロキシル化）を行なうため、生物材料を専門家にとっ
ては通常の方法により分離するか、あるいはヒドロキシ
ル化すべきピコリン酸を育成した生物材料に直接供給す
る。　次いで、第一の実施形態ですでに説明した条件と
同じ条件で、ピコリン酸（基質）の本来のヒドロキシル
化を行なう。　　ヒドロキシル化の際、生物材料の６５
０ｎｍにおける光学光度（ＯＤ６５０）は０．５〜１０
０、好ましくは１〜５０であるのが有利である。この実
施形態における温度は１５〜５０℃、好ましくは２５〜
４０℃であり、ｐＨは５〜９、好ましくは６〜８である
のが有利である。

【００３２】培養基から、たとえば遠心分離または微小
濾過により細胞を分離した後、透明な溶液を酸性化する
ことにより、６−ヒドロキシピコリン酸を沈殿させるこ
とができる。　　結晶形成を最適化するために、溶液を
６０℃で酸性化することが好ましい。　　しかし、透明
溶液は処理せずに次の反応に使用することもできる。

【００３３】

【実施例１】アルカリゲネス・フェ−カリス（ＤＳＭ６
２６９）の分離 好気性のピコリン酸代謝性微生物を、Ａ＋Ｎ培養基（表
１の組成）中で、唯一の炭素源およびエネルギー源とし
て０．１％（ｗ／ｖ）のピコリン酸を加えて濃縮した。 　　微生物を分離するための一般的な技術は、たとえば
、Ｇ．ドリュウスＭｉｋｒｏｂｉｏｌｏｇｉｓｃｈｅｓ
　　Ｐｒａｋｔｉｋｕｍ（微生物学実習）第４版，シュ
プリンガー出版，１９８３，１〜８４頁に記載されてい
る。 　　接種物としては、土壌または浄化設備から得られる
試料を使用した。　　濃縮は振とうフラスコ中で３０℃
で行なった。　　３回の新しい培養基における過剰接種
の後、濃縮物を１リットルあたり１６ｇの寒天を加えた
同じ培養基上に塗布し、３０℃で培養した。　　寒天培
養基上に何度も塗布した後、純粋な培養菌を分離するこ
とができた。

【００３４】

【実施例２】成長段階におけるヒドロキシル化アルカリ
ゲネス・フエ−カリス（ＤＳＭ６２６９）を、唯一の炭
素源、窒素源およびエネルギー源としてピコリン酸を加
えた鉱物塩培養基（表２の組成）中で、ｐＨ７および３
０℃の温度で好気的に育成した。　　育成には、作業容
量約１５リットルの２０リットル発酵装置を使用した。 　　ｐＨを調整するために、４．０６モル／リットル（
５０％ｗ／ｖ、約２ｌ）ピコリン酸溶液および３モル／
リットル（１２％ｗ／ｖ、＜２０ｍｌ）水酸化ナトリウ
ム溶液を２７時間かけて加えた。　　その後、発酵溶液
中で、０．１４モル／リットル（２％ｗ／ｖ）の６−ヒ
ドロキシピコリン酸および１６ミリモル／リットル（０
．１８％ｗ／ｖ）のピコリン酸が確認された。　　この
時点で、空気流入量３０ｌ／分および撹拌速度７５０回
転／分で、酸素含有量は１％であった。

【００３５】成長段階後のヒドロキシル化成長段階後に
、２．７モル／リットル（４７％ｗ／ｖ、約２．５ｌ）
のピコリン酸ナトリウム溶液（ｐＨ７）を１５時間内に
発酵装置に添加した。　　ピコリン酸ナトリウム溶液の
添加速度は、発酵装置の酸素分圧調整により、酸素含有
量が２０％を超えず、ピコリン酸塩の濃度が約２０ミリ
モル／リットル（０．２２％ｗ／ｖ）になるように制御
した。　　６−ヒドロキシピコリン酸濃度が０．７モル
／リットル（９．８％ｗ／ｖ）および発酵期間が合計４
２時間になったところで生産を停止した。　　この生産
に、合計１７．８モル（２１９０ｇ）の、遊離酸および
ナトリウム塩の形のピコリン酸を使用した。　　このピ
コリン酸ないしそのナトリウム塩から、細胞を分離した
溶液を酸性化した後、１３．３モル（１８５０ｇ）の６
−ヒドロキシピコリン酸が結晶形で分離されたが、これ
は投入したピコリン酸に対して７４％の収量に相当する
。　　ＨＰＬＣ分析により、６−ヒドロキシピコリン酸
の純度は９５％を超えていた。　　透明な濾液中に、投
入したピコリン酸の０．７５％に相当する０．１３モル
（１８．５ｇ）の６−ヒドロキシピコリン酸および投入
したピコリン酸の１．７％に相当する０．３モル（３７
ｇ）のピコリン酸が確認された。

【００３６】

【実施例３】６−ヒドロキシピコリン酸の製造（殺菌し
ていない生物材料による） ａ）育成 作業容量５リットルの発酵装置内で、殺菌していない鉱
物塩培養基（表２の組成）中、ｐＨ７．０、温度３０℃
および換気速度０．５〜５．０ｌ／分で発酵させた。　
　ｐＨを調整するために、３０７ｇのピコリン酸（２．
５モル）および４９ｇ（０．５モル）のＨ２ＳＯ４およ
び１リットルの水からなる混合物を培養基に加えた。　
　この発酵装置に、スイス、ツェルマットの浄水場から
得た２００ｍｌの浄化スラッジを接種した。４８時間後
、発酵装置を半リットルまであけ、新しい殺菌していな
い培養基を満たした。　　さらに２４時間後、この工程
を繰り返した。

【００３７】ｂ）成長段階におけるヒドロキシル化ａ）
に記載する材料のＯＤ６５０ｎｍが１に達した時、ヒド
ロキシル化を開始した。　　この時点まで、ｐＨ調整を
５０％（ｗ／ｖ）ピコリン酸溶液の添加により行なった
。　　さらに、５９％（ｗ／ｖ）ピコリン酸ナトリウム
溶液を、６８時間かけて７．３ｍｌ／時間の添加速度で
発酵装置に加えた。　　ヒドロキシル化段階の終了時に
、分光測光法によりピコリン酸はまったく確認されなか
った。　　６−ヒドロキシピコリン酸の最終濃度は分析
により５１ｇ／リットルであった。

【００３８】 表１　　Ａ＋Ｎ培養基 成　　　　　　分　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　濃度（ｍｇ／リットル）（ＮＨ
４）２ＳＯ４　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　２０００Ｎａ２ＨＰＯ４　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　２０００ＫＨ２ＰＯ
２　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　１０００ＮａＣｌ　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　３０００ＭｇＣｌ
２・６Ｈ２Ｏ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　４００ＣａＣｌ２・２Ｈ２Ｏ　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　１４．５ＦｅＣｌ３・６Ｈ２Ｏ　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．８塩酸ピリ
ドキサール　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
１０・１０３リボフラビン　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　５・１０３ニコチン酸アミ
ド　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５・
１０３塩酸チアミン　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　２・１０３ビオチン　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２
・１０３パントテン酸　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　５・１０３ｐ−アミノ安息香酸
塩　　　　　　　　　　　　　　　　　　５・１０３葉
酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　２・１０３ビタミンＢ１２　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５・１０
３ＺｎＳＯ４・７Ｈ２Ｏ　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　１００・１０３ＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　９０・１０３Ｈ
３ＢＯ３　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　３００・１０３ＣｏＣｌ２・６Ｈ２
Ｏ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２００・
１０３ＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　１０・１０３ＮｉＣｌ２・６Ｈ２Ｏ　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０・１０３
Ｎａ２ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ　　　　　　　　　　　　　
　　　　３０・１０３ＥＤＴＡＮａ２・２Ｈ２Ｏ　　　
　　　　　　　　　　　　　５・１０３ＦｅＳＯ４・７
Ｈ２Ｏ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２・
１０３（溶液のｐＨは、ピコリン酸を加えてから７．０
に調節した。） 表２ 鉱物塩培養基の成分 ピコリン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　２　
　　　　　ｇ／ｌＭｇＣｌ２・６Ｈ２Ｏ　　　　　　　
　　　０．８　　ｇ／ｌＣａＣｌ２　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　０．１６ｇ／ｌＮａ２ＳＯ４　　
　　　　　　　　　　　　　　　　０．２５ｇ／ｌＫＨ
２ＳＯ４　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．４
　　ｇ／ｌＮａ２ＨＰＯ４　　　　　　　　　　　　　
　　　０．９　　ｇ／ｌ微量物質　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　１　　　　ｍｌ／ｌ微量物質溶液
の成分 ピコリン酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０
０　　　　　　ｇ／ｌＮａＯＨ　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　６５　　　　　　ｇ／ｌＺｎＳ
Ｏ４・７Ｈ２Ｏ　　　　　　　　　　　　　　９　　　
　　　ｇ／ｌＭｎＣｌ２・４Ｈ２Ｏ　　　　　　　　　
　　　　　４　　　　　　ｇ／ｌＨ３ＢＯ３　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．７　　ｇ
／ｌＣｏＣｌ２・６Ｈ２Ｏ　　　　　　　　　　　　　
　１．８　　ｇ／ｌＣｕＣｌ２・２Ｈ２Ｏ　　　　　　
　　　　　　　　１．５　　ｇ／ｌＮｉＣｌ２・６Ｈ２
Ｏ　　　　　　　　　　　　　　０．１８ｇ／ｌＮａ２
ＭｏＯ４・２Ｈ２Ｏ　　　　　　　　　　　０．２　　
ｇ／ｌＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ　　　　　　　　　　　　
３０　　　　　　ｇ／ｌ（溶液のｐＨは７．０に調節し
た。）

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　６−ヒドロキシピコリン酸を製造する
   ための微生物学的方法において、ピコリン酸および（ま
   たは）その塩を、ピコリン酸を唯一の炭素源、窒素源お
   よびエネルギー源として成長する、シュ−ドモナス、バ
   チルス、アルカリゲネス、アエロコッカスまたはロドト
   ルラ種の微生物を使用してヒドロキシル化し、その際、
   ピコリン酸および（または）その塩の濃度を、６−ヒド
   ロキシピコリン酸がそれ以上代謝されないような値に選
   択することを特徴とする方法。
2. 【請求項２】　　ヒドロキシル化を、ＤＳＭに番号６２
   ６９で供託したアルカリゲネス・フェ−カリスまたはそ
   の子孫および突然変異体により行なうことを特徴とする
   請求項１の方法。
3. 【請求項３】　　ピコリン酸および（または）その塩の
   濃度を、１０重量％を超えないように選択して実施する
   ことを特徴とする請求項１または２の方法。
4. 【請求項４】　　ヒドロキシル化を、温度１０〜６０℃
   およびｐＨ４〜１０で行なうことを特徴とする請求項１
   〜３のいずれかの方法。
5. 【請求項５】　　ＤＳＭに番号６２６９で供託した微生
   物アルカリゲネス・フェ−カリスおよびその子孫および
   突然変異体
6. 【請求項６】　　６−ヒドロキシピコリン酸を製造する
   ための微生物学的方法において、 ａ）ピコリン酸および（または）その溶解性塩を利用す
   る生物材料を、ピコリン酸および（または）その溶解性
   塩および鉱酸により、ピコリン酸および（または）その
   溶解性塩対鉱酸のモル比１〜８で育成し、その際、全育
   成段階にわたってこの比を確保すること、および、次い
   でｂ）ピコリン酸および（または）その溶解性塩のヒド
   ロキシル化をこの生物材料で行なうことを特徴とする方
   法。
7. 【請求項７】　　工程ａ）において、ピコリン酸および
   （または）その溶解性塩対鉱酸のモル比を、排気中の酸
   素対二酸化炭素の比の測定および（または）ｐＨ値の測
   定により調整することを特徴とする請求項６の方法。
8. 【請求項８】　　工程ａ）において、鉱酸として硫酸を
   、ピコリン酸および（または）その溶解性塩対硫酸のモ
   ル比３〜５で使用することを特徴とする請求項６または
   ７の方法。
9. 【請求項９】　　工程ａ）における育成および工程ｂ）
   におけるヒドロキシル化を、温度１５〜５０℃およびｐ
   Ｈ５〜９で行なうことを特徴とする請求項６〜８のいず
   れかの方法。