DK155915B - Fremgangsmaade til fremstilling af pertussis-toksoid til anvendelse i vacciner - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af pertussis-toksoid til anvendelse i vacciner Download PDFInfo
- Publication number
- DK155915B DK155915B DK009281A DK9281A DK155915B DK 155915 B DK155915 B DK 155915B DK 009281 A DK009281 A DK 009281A DK 9281 A DK9281 A DK 9281A DK 155915 B DK155915 B DK 155915B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- liquid
- pertussis
- toxoid
- process according
- formalin
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/04—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K2039/10—Brucella; Bordetella, e.g. Bordetella pertussis; Not used, see subgroups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/825—Bacteria
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
DK 155915 B
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af et pertussis-toksoid til anvendelse i vacciner.
Kighoste er en infektionssygdom, der forårsages af Bordetella 5 pertussis og giver alvorlige virkninger, især hos børn.
Hidtil har der været anvendt vacciner til forebyggelse af denne sygdom. Fordi disse vacciner traditionelt fremstilles af de hele celler af den tilgrundliggende bakterie, giver disse 10 imidlertid anledning til feber og andre alvorlige bivirkninger. Det har derfor været et påtrængende socialt behov at overvinde disse ulemper.
Mange forsøg er blevet gjort, ved hvilke der kun isoleres en 15 effektiv komponent af Bordetella pertussis fase I stamme, som forarbejdes til en vaccine, men ingen af de foreslåede fremgangsmåder har vist sig at være tilfredsstillende. Fra britisk patentskrift nr. 512.196 kendes således en fremgangsmåde til fremstilling af pertussis-toksoid ved at dyrke kulturer af 20 pertussisbakterier i et medium af opløselig stivelse, vegetabilsk ekstrakt eller halvfast agar og derefter adskille bakterierne fra mediet ved filtrering og bevare filtratet til anvendelse som toksin. I mellemtiden er det blevet antydet, at infektionen af Bordetella pertussis ligger i exotoksinet, som 25 frigøres af bakterien (M. Pittmann: "Reviews of Infectious
Diseases", 1, side 401-412, 1979), med muligheden af beskyt telse ved hjælp af et pertussis-toksoid af dette, men der er ikke fremkommet nogen opløsninger, som viser, at man har haft held til at fremstille et sådant pertussis-toksoid.
30 På den ovennævnte tekniske baggrund er det for første gang lykkedes de foreliggende opfindere at fremstille et pertussis-toksoid ved en ny fremgangsmåde til detoksificering.
35 Opfindelsens formål er således at angive en fremgangsmåde til fremstilling af et pertussis-toksoid, som har lav toksicitet, men alligevel har en meget høj immuniseringsstyrke.
DK 155915 B
2
Dette formål opnås ved opfindelsen, som er ejendommelig ved fjernelse af endotoksin fra en overliggende kulturvæske af en Bordetella pertussis fase I stamme eller et koncentrat deraf og flokkulering af pertussis-exotoksin i den fremkomne væske 5 ved at lade formaldehyd indvirke på væsken i fravær af basisk aminosyre.
Dyrkningen af Bordetella pertussis fase I stammen kan udføres på i og for sig kendt måde. Stammen dyrkes f.eks. i et væske-10 medium (Cohen-Wheeler-medium, Strainer & Scholte-medium osv.) ved 3 5 - 3 7 ° Q i 5-7 dage. Den overliggende væske i den fremkomne kultur opsamles ved filtrering eller centrifugering. Enten denne overliggende væske eller et koncentrat deraf kan anvendes i det påfølgende trin til fjernelse af dets endotoksin.
15 Koncentratet kan fås ved udsaltning, hvilket er traditionelt som sådan. F.eks. sættes 2-5 kg ammoniumsulfat til 10 liter af den overliggende kulturvæske, og efter blanding opsamles det dannede bundfald ved passende teknik, såsom filtrering eller centrifugering. Dette bundfald opløses så i en passende mængde 20 0,05 M phosphat-stødpude suppleret med 1 N natriumchlorid, og den overliggende væske fås ved centrifugal udfældning eller lignende fremgangsmåde til dannelse af en koncentreret væske.
Ifølge opfindelsen behandles ovennævnte overliggende væske el-25 ler koncentrat for at fjerne dens endotoksin. Denne fjernelse af endotoksinet kan opnås på enhver af sådanne fremgangsmåder som saccharose-vægtfyldegradient-centrifugering, kaliumtartrat-vægtfyIdegradient-centri fuger ing, cesiumchlorid-vægtfyldegra-dient-centrifugering, gelfiltrering, osv. En særlig fordelag-30 tig fremgangsmåde består i centrifugering af ovennævnte overliggende væske eller koncentrat på en saccharose-vægtfyldegra-dient på 0-60 W/W % ved 62.000 til 122.000 G i 10-24 timer.
Det væsentligste træk ifølge opfindelsen er trinnet med flokku-35 lering af pertussis-exotoksin i den ovenfor fremkomne pertus-sis-exotoksinvæske ved at lade formaldehyd indvirke på væsken i fravær af basisk aminosyre, hvorved exotoksinet bliver i det væsentlige detoksificeret til dannelse af pertussis-toksoid.
DK 155915 B
3
Det udfældede, rensede således detoksificerede toksoid kan anvendes i en vaccine, f.eks. også sammen med diphtheria og tetanus vacciner og har da lav toksicitet, men har alligevel meget høj immuniserende styrke. Disse virkninger kan ikke opnås med 5 pertussis-toksoidvæsken fremstillet ved at lade formaldehyd indvirke på pertussis-exotoksi n-væsken i væsentlig nærværelse af basisk aminosyre, især L-lysin.
Generelt giver de sædvanlige bakterielle exotoksiner, såsom 10 diphtheria, kun løse bindinger mellem formaldehyd og toksinmolekyler, og det var umuligt at opnå et stabilt polymerisat uden hjælp af et additivt stof, såsom en basisk aminosyre, f.eks. L-lysin. Hvad angår pertussis-exotoksin viste det sig imidlertid uventet, at formal indetoksificering i fravær af en 15 sådan aminosyre derimod fremmer polymerisationen af exotoksi-net til dannelse af en flokkulent antigenmasse. Dette fremmer stigningen i immunitetskompetent molekylstørrelse, styrker im-munogeniciteten og muliggør derfor fremstilling af et pertus-sis-toksoidaf høj styrke.
20
Den ovennævnte flokkulerende behandling udføres ved at sætte formalin (dvs. 37 W/V % vandig opløsning af formaldehyd) eller en fortynding deraf med vand til pertussis-exotoksin-væsken i fravær (dvs. mindre end 10 mM) af basisk aminosyre, såsom L-25 lysin og inkubere blandingen, indtil pertussis-exotoksinet er detoksificeret. Det er i reglen fordelagtigt at blande formalin eller dets fortynding med exotoksinvæsken uden nogen tilsætning af basisk aminosyre overhovedet til dannelse af en koncentration på 0,1-0,6 V/V % udtrykt som formalin og inkube-30 re blandingen med eller uden yderligere tilsætning af formalin eller dets fortynding op til en samlet koncentration indenfor ovenstående interval ved 32-42°C i 3-14 dage.
Ved ovennævnte behandling flokkuleres pertussis-exotoksinet og 35 detoksificeres derved til dannelse af en flokkulent pertussis-toksoid masseholdig suspension. Den fremkomne flokkulente tok-soidmasse i suspensionen dispergeres ved en egnet teknik, såsom ultralydbehandling, ved 10-50 kc til dannelse af en toksoid væske.
DK 155915B
4
Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan en dialysebehandling indskydes mellem de respektive trin. Denne dialyse kan udføres på en i og for sig kendt måde.
5 På samme måde som med kighostevaccinevæsken med hele celler kan den således fremkomne pertussis-toksoidvæske forarbejdes til en udfældet, renset pertussis-vaccine eller en udfældet, renset pertussis-diphtheria-tetanus trivalent vaccine og kan administreres til mennesker.
10
De følgende eksempler illustrerer opfindelsen nærmere.
Egenskaberne af Tohama^fase I stammen af Bordetella pertussis, der anvendes i følgende eksempler, er beskrevet f.éks. i 15 "Infection and Immunity", 6, side 899-=-904 (1972). Denne stamme er blevet vedligeholdt ved National Institute of . Health, Tokyo, Japan (NIHJ) og også deponeret ved Institute for Fermentation, Osaka, Japan under deponeringsnummeret IFO-14073.
20 I den foreliggende beskrivelse og kravéne betyder’ forkortelserne "]ig"r "mg", "g", "kg", "ml", "1", ,,0C", "mM", ”M", "r.p.m.", "kc", "R max.", "G", "IU" og "Lf" til henholdsvis "mikrogram", "milligram", "gram", "kilogram", milliliter", 25 "liter", "grader celcius", "millimolær koncentration", "molær koncentration", "omdrejninger pr. min.", "kilo hertz", "radius maximum", "tyngdekraft", "international enhed" og "flokkuleringsgrænse".
30 Eksempel 1
Tohama fase I stammen af Bordetella pertussis blev podet på et Bordet-Gengou-medium fremstillet af kartoffel, pepton, natri-umchlorid, agar og okseblod og inkuberet ved 35°C i 2 dage.
35 Derefter blev de gennemskinnelige cirkulære kolonier opsamlet, og en koloni, der er reaktionsdygtig overfor K agglutinerende antistof, blev igen udviklet på et Bordet-Gengou-medium til brug som podekultur. Et produktionsmedium blev fremstillet ved at autoklavere et Cohen-Wheeler væskemedium (tabel 1 i det følgende) ved 121°C i 60 min. og straks afkøle det til ca.
40°C. Dette medium blev opbevaret ved 37eC.
DK 155915 B
5 5 Den ovenfor fremstillede podekultur blev sat til dette produktionsmedium til dannelse af en endelig population på 200-300 millioner celler/ml, blev omrørt godt, podet i Roux-flasker i en mængde af 0,2 1/flaske og straks kultiveret i en inkubator ved 37°C. Inkubationsperioden af-10 hang af cellevækstbetingelserne. Det maksimale celleudbytte blev opnået den femte dag, da hemaglutinerings (HA) titeren af kulturvæsken overfor kyllinge-erythrocyter (bestemt ved fremgangsmåden beskrevet i "Infection and Immunity", 7, side 992-99.9 (1978) overalt i den forelig-15 gende beskrivelse) også var på et maksimalt niveau. Væskerne blev derfor samlet og centrifugeret og 20,2 W/V % ammoniumsulfat blev sat til den overliggende væske. Efter god omrøring fik blandingen lov at henstå ved 4°C. Efter 7 dage blev den overliggende væske suget fra, og bundfal-20 det blev opsamlet og centrifugeret ved 8000 r.p.m. i 10 minutter. Den overliggende væske blev kasseret. Til bundfaldet blev sat en 1/10 af rumfanget af de samlede væsker af 1 M natriumchlorid-0,05 M phosphat-stødpude (pH 8,0), og blandingen blev omrørt godt. Blandingen fik lov at hen-25 stå igen ved 4°C i 7 dage, hvorefter den igen blev centrifugeret, og den overliggende væske blev opsamlet (ekstrakt I). Denne overliggende væske var rig på fimbriae, leukocy-tose-fremmende faktor (i det følgende LPF), histamin-sensi= biliserende faktor (i det følgende HSF) og endotoksin men 30 fri for celler. Ekstrakt I blev koncentreret igen, et lige så stort rumfang mættet ammoniumsulfat (indstillet til pH 8,0 med ammoniak) blev tilsat, og blandingen fik lov at henstå ved 4°C i 7 dage. Denne ammoniumsulfatfraktion blev centrifugeret ved 10 r.p.m. i 20 min, for at høste 35 bundfaldet, og en 1/300 af rumfanget af den samlede væske af 1 M natriumchlorid-0.,05 M phosphat-stødpude (pH 8,0) blev tilsat. Efter grundig blanding blev blandingen anbragt i et dialyserør af semi-permeabel membran for at fjerne ammoniumsulfatet under anvendelse af en 1 M opløs-
DK 155915 B
6 ning af natriumchlorid (pH 8,0) som ydre væske. Det dialys serede koncentrat blev så underkastet følgende saccharose-vægtfyldegradient-centrifugering.
5 En tidligere steriliseret centrifugalrotor (kapicitet 1700 ml) og låsesamling blev drevet ved lav hastighed, og 1300 ml 5 W/V % til 30 W/V % saccharose-opløsning blev tilført ved hjælp af en gradientpumpe. Derefter blev 100 ml af ovennævnte dialyserede koncentrat tilført, og der blev indført 300 ml af en 10 overliggende væske (0,5 M natriumchlorid-opløsning, pH 8,0). Rotoren blev drevet ved 89.400 G i 18,5 time.
Efter centrifugering blev 34 W/V % saccharose-opløsning indført ved lav hastighed, og væsken inde i rotoren blev op-15 samlet i 50-10Q ml fraktioner (opsamling af fraktioner).
Denne opsamling blev påbegyndt fra siden med lav saccharose-vægtfylde og de højt HA—reaktionsdygtige (ikke mindre end 20 titer/ml, fortrinsvis ikke mindre end 500 titer/ml),log endotoksinmagre fraktioner blev høstet. Knapheden på endo-20 toksin blev bedømt ved en pyrogenicitet-prøve med kanin.
Hver fraktionsprøve blev således opvarmet til 100eC i 3 min. og fortyndet til 20 HA titer/ml med fysiologisk saltopløsning. Denne fortynding blev administreret intravenøst til kaniner i 25 en dosis på 1 ml/kg legemsvægt. Fraktionerne, der ikke forårsagede feber indenfor 3 timer, blev udvalgt og samlet som exo-toksi nvæske.
Exotoksinvæsken blev fortyndet med M/250 phosphat-stødpude-30 saltopløsning (pH 7,0) til et proteinholdigt N indhold på ca.
50 pg/ml. I dette trin blev gelatine, Tween® 80 (polyoxyethylen-sorbitan-momooleat, Kao-Atlas, Japan) og thimerosal tilsat til dannelse af koncentrationerne 0,02 W/V % gelatine, 0,05 V/V % Tween® 80 og 0,01 W/V % thimerosal. Til denne væske blev der 35 uden tilsætning af nogen basisk aminosyre tilsat formalin til en koncentration på 0,2 V/V % i en inkubator ved 39°C, og efter grundig blanding fik den lov at henstå i samme inkubator. Efter en dag blev en yderligere mængde formalin tilsat til en
DK 155915 B
7 koncentration på 0,3 V/V %, og efter grundig blanding blev blandingen yderligere inkuberet i samme inkubator. Efter yderligere 2 dage blev der tilsat mere formalin til en koncentration på 0,4 V/V %, og blandingen blev omrørt godt og yderlige-5 re inkuberet i inkubatoren i ialt 5 dage. Den fremkomne flok-kulerede toksoid-masseholdige suspension blev dialyseret overfor 0,01 V/V % formalin-fysiologisk saltopløsning som ydre væske. Denne dialyse blev udført ved at dialysere ovenstående suspension i et dialysemembranrør overfor 12,5 gange rumfanget 10 af den indre væske af nævnte ydre væske i et koldt værelse (4°C) i 2 dage, idet den ydre væske blev konstant omrørt. Den ydre væske blev erstattet med en frisk 2 dage senere, og dialysen blev gentaget. Den dialyserede flokkulente toksoid-sus-pension blev underkastet forskellige prøver, der er anvende-15 lige til pertussis-stamvaccine og derpå anvendt som en tokso-id stamvæske. Før fremstilling af et endeligt produkt blev den flokkulente toksoid-suspension ultralydbehandlet (10 kc, 4 min.) og filtreret gennem en sigte med 0,40 mm åbninger til dannelse af en endelig pertussis-toksoid væske. Som kontrol 20 blev exotoksinvæsken behandlet med formalin under tilsætning af 0,05 M L-lysin og derpå behandlet som ovenfor til fremstilling af en kontrolvæske.
Den ovenfor fremstillede pertussis-toksoidvæske og kontrol-25 væsken blev hver behandlet efter fremgangsmåden ifølge Levine (Reo Levine, Joseph L. Stone & Louise Wyman:
Factors affecting the efficiency of the aluminum adjuvant in diphteria and tetanus toxoid. J. Immunology 75, side 301-307, 1955).. Hver væske blev således fortyndet med 30 M/250 saltopløsning med phosphat-stødpude (pH 7,0) til et proteinholdigt N indhold på 20 yg/ml eller mindre efterfulgt af tilsætning af aluminiumchlorid til en koncentration på 0,18 W/V S. Blandingen blev omrørt godt og indstillet til pH 7,0 med saltsyre eller natriumhydroxid 35 til dannelse af en aluminiumfældet vaccine med ca. 0,2 mg som aluminium/ml. Egenskaberne af disse produkter er vist i tabel 2. Efter statistisk bearbejdelse er LPF acceptabel, når den ikke er mere end ækvivalent med 0,5 LPU (leukocytose-
DK 155915 B
8 fremmende enheder hestemt ved fremgangsmåden beskrevet i "Medicine and Biology", 83, side 117-123)/ml og ikke accept-tabel, når den er anderledes. På lignende måde er HSF acceptabel, når den ikke er mere end ækvivalent med 0,8 HSU 5 (histamin-sensibiliserende enheder bestemt ved fremgangsmåden beskrevet i "Journal of Biological Standardization", 7 (1979), side 21-29)/ml,og ikke acceptabel, når den er anderledes.
Styrken til beskyttelse af mus er acceptabel ligeledes efter statistisk bearbejdelse, når den er mindst 8 IU (smittet 3 uger 10 efter.immunisering)/ml eller mere,og ikke acceptabel, når den er anderledes,
Som det fremgår af tabel 2, fandtes der ved detoksificerings-metoden ifølge opfindelsen ingen kasserede produkter med 15 hensyn til nogen af LPF, HSF og musebeskyttelsesstyrken gennem fjorten på hinanden følgende produktionspartier og middelstyrken var 13,5 IU/ml. Nåri modsætning hertil L-lysin var blevet tilsat, gav en produktionsrække på 23 partier 4 kasserede partier for LPF, 8 kasserede partier for HSF og 20 10 partier kasseret for styrke, og de samlede acceptable var kun 6/23=26%.
25 30 35
DK 155915 B
9
Tabel 1
Opløselig stivelse 225 g
NaCl 375 g 5 K H2P04 75 g
MgCl2/6H20 750 ml (8 W/V % væske)
CaCl2 75 ml (2 W/V % væske)
CuS04,5H20 112,5 ml (0,1 W/V % væske)
Natrium-L-glutamat 30 g 10 Nicotinamid 4,5 g
Casaminosyre 1800 g
Cystein-hydrochlorid 4,5 g
Tris-stødpude 12,5 1 15 Ovenstående komponenter blev fortyndet med destilleret vand til dannelse af 150 liter, indstillet til pH 7,0 til 7,2 og sterilliseret. Derefter blev følgende stoffer tilsat.
20 Glutation (reduceret form) 50 ml (1 W/V % væske)
FeS04, 7H20 5Q ml (1 W/V % væske) 25 30 35
10 DK 155915 B
i ~ ~~ \
H
S
•jj j j
$ <] <l <] O <3 <3 <3 -X H
mM ooootN'f oooomiiioMi r~ Φ 0)>i ......1.».».·»»..·. cn A3 -y 4J roror^LntNoocNraH'^'iroot^Ln tn to Φ & is i § +i φ 15 ft ω Λ g
W OOOOO OOOOOOOOO SB’S
S » ω > " 3 B< 1 pL4
i ft OOOOOOOOOOOOOO
« J w rn M __0)
-5 H
J k S
S ^ I
« 5 ί I
Ό >i <] <] Η N ^ H
Φ M NcwnoNinom.^ - Kiv S mm op g ^ .-XftsrcDHooHoor^H Λ g 1¾ rlrlrl •η tn & Λ Φ S tn s "gi o| οι cn ω jj . ht* Κω xxxxxxxO* cues *d o
A B ft ØJ ^ S O
Η φ E S ^ PS ω m CQ P 6 ^ E JJ Φ
< <D -g ® S X
B i >(X) flS
ft Η M v S h H W O (¾ ^ ft x x O OO O * * „ ..
^ O X
-------— Pm cn
Uj
(D
5 Ά cn ep
Η -Η H
0) -jj ^
^ ^j1 OlfiCOOOOOOONNClrlin LD
• |_] If) *“ m φφ oo'icsoMtnfoooHMin^æm m rlrlrlrlrlHHHrlrlrlHH iH _ 0 S 5 d H S “ -0¾ i& S fj O CL £ jxj ^ 'H § l>
1 cn OOOOOOOOOOOOOO idg· SS I
I® ω -d ϋ -¾ G
r sis si 6 [xi ·· ** δ g ft OOOOOOOOOOOOOO Oxo ft _J_J_ J 5 t
DK 155915 B
11
Eksempel 2
Pertussis-toksoidvæsken fremkommet i eksempel 1, diphtheria-toksoidvæsken, der tilfredsstiller den japanske, biologiske produktstandard og tetanus-toksoidet, der tilfredsstiller 5 samme standard, blev udfældningsbehandlet som i eksempel 1 til fremstilling af en udfældet, renset pertussis-diphtheria-tetanus trivalent vaccine. Sammensætningen af denne vaccin var som følger:
Pertussfsrtoksoid : Proteinholdigt N indhold? ca. 15 yg/ml 10 Diphtheria-toksoid: ca. 30 Lf/ml
Tetanus-toksoid : ca. 5 Lf/ml
Aluminium ; ca. 0,2 mg/ml
Thimerosal : 0,01 W/V %
De vigtigste egenskaber af denne trivalente vaccine er føl-15 gende: Hydrogenion-koncentration (reciprok), 7,0? kanin= pyrogenicitet (fortyndet 50 gange med saltopløsning og injiceret intravenøst i en dosis af 1 ml/kg legemsvægt), negativ? vægttab af muselegeme, ikke mere end ækvivalent med 10 BWDU (fald i legemsvægtenheder bestemt ved fremgangs-20 måden beskrevet i J. Med. Sci. Biol. 21, 115-1353/ml? museleukocytose-fremmende virkning, ikke mere end ækvivalent med 0,5 LPU/ml? musehistamin-sensibiliserende virkning, ikke mere end ækvivalent med 0,8 HSO/ml? pertussis-toksoid-styrke, ækvivalent med 8 IU/ml? diphtheria-toksold-styrke 25 ækvivalent med 45 IU/ml? tetanus-toksoid-styrke, ækvivalent med 30 IU/ml.
Den trivalente vaccine kan administreres til mennesker f.eks. efter følgende skema:
Til børn med en alder på 3-48 måneder 0,5 ml hver af vac-3Q cinen podet subcutant 3 gange med mellemrum på 2-8 uger.
12-18 måneder efter sidste podning podes hvert af børnene yderligere med 0,5 ml af vaccinen subcutant.
Claims (10)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af et pertussis-toksoid til 5 anvendelse i vacciner, kendetegnet ved fjernelse af endotoksin fra en overliggende kulturvæske af en Bordetella Pertussis fase I stamme eller et koncentrat deraf og flokkule-ring af pertussis-exotoksin i den fremkomne væske ved at lade formaldehyd indvirke på væsken i fravær af basisk aminosyre. 10
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at flokkuleringen udføres ved at blande formalin eller en fortynding deraf med væsken i fravær af basisk aminosyre og inkubere blandingen. 15
3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at inkubationen fortsættes indtil pertussis-exotoksinet er i hovedsagen detoksificeret.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at formalin eller en fortynding deraf blandes med væsken til dannelse af en koncentration på 0,1 til 0,6 v/v % som formalin, og blandingen inkuberes ved 32-42°C i 3-14 dage.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at fjernelse af endotoksinet udføres ved at centrifugere den overliggende kulturvæske eller et koncentrat deraf på en sac-charose-vægtfyldegradient på 0-60 w/w % ved 62.000 til 122.000 G i 10-24 timer. 30
6. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den yderligere omfatter dispergering af den flokkulente masse i den fremkomne suspension ved ultralydbehandling.
7. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der indskydes en dialysebehandling mellem de respektive trin. DK 155915 B
8. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den overliggende kulturvæske koncentreres ved udsaltning ved anvendelse af ammoniumsulfat, og endotoksin fjernes fra det fremkomne koncentrat. 5
9. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at Bordetella pertussis fase I stamme er Tohama fase I stamme.
10 15 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55127825A JPS5750925A (en) | 1980-09-12 | 1980-09-12 | Preparation of pertussis toxoid |
| JP12782580 | 1980-09-12 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK9281A DK9281A (da) | 1982-03-13 |
| DK155915B true DK155915B (da) | 1989-06-05 |
| DK155915C DK155915C (da) | 1989-10-23 |
Family
ID=14969595
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK009281A DK155915C (da) | 1980-09-12 | 1981-01-09 | Fremgangsmaade til fremstilling af pertussis-toksoid til anvendelse i vacciner |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4455297A (da) |
| EP (1) | EP0047802B1 (da) |
| JP (1) | JPS5750925A (da) |
| KR (1) | KR840001512B1 (da) |
| CA (1) | CA1152001A (da) |
| DE (1) | DE3069433D1 (da) |
| DK (1) | DK155915C (da) |
| ES (1) | ES499112A0 (da) |
| GB (1) | GB2083358A (da) |
| HU (1) | HU185404B (da) |
| NO (1) | NO159667C (da) |
| SU (1) | SU1297712A3 (da) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59206316A (ja) * | 1983-05-11 | 1984-11-22 | Kaken Pharmaceut Co Ltd | インシユリン分泌増強活性物質誘導体およびその製法 |
| US4551429A (en) * | 1983-09-15 | 1985-11-05 | American Home Products Corporation | Stimulation of antigen production by Bordetella pertussis |
| CA1237998A (en) * | 1984-04-14 | 1988-06-14 | Akihiro Ginnaga | Method for purification of filamentous hemagglutinin |
| GB8412207D0 (en) | 1984-05-12 | 1984-06-20 | Wellcome Found | Antigenic preparations |
| JPS60155127A (ja) * | 1984-12-10 | 1985-08-15 | Teijin Ltd | 生物学的活性物質の製法 |
| GB8512972D0 (en) * | 1985-05-22 | 1985-06-26 | Univ Glasgow | Vaccine production |
| GB8601279D0 (en) * | 1986-01-20 | 1986-02-26 | Public Health Lab Service | Purification of pertussis antigens |
| FR2597344B1 (fr) * | 1986-04-16 | 1989-06-23 | Merieux Inst | Perfectionnement au procede de purification d'antigenes proteiques de bacteries appartenant au genre bordetella, en vue de l'obtention d'un vaccin acellulaire. |
| US4705686A (en) * | 1986-05-09 | 1987-11-10 | American Cyanamid | Process for the preparation of acellular Bordetalla pertussis vaccine |
| US5165927A (en) * | 1986-08-01 | 1992-11-24 | University Of Southern California | Composition with modified pertussis toxin |
| US5032398A (en) * | 1986-08-01 | 1991-07-16 | Kaslow Harvey R | Selective modification of the catalytic subunit of pertussis toxin |
| US5139776A (en) * | 1987-04-24 | 1992-08-18 | The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University | Method for culturing Bordetella pertussis, a pertussis toxoid and a pertussis vaccine |
| CA1337859C (en) * | 1987-04-24 | 1996-01-02 | Masashi Chazono | Method for culturing bordetella pertussis, a pertussis toxoid and a pertussis vaccine |
| US5101019A (en) * | 1987-05-22 | 1992-03-31 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Method for removing pertussis endotoxin, a pertussis toxoid and its production |
| JPS6485926A (en) * | 1987-06-24 | 1989-03-30 | Teijin Ltd | Mutant of bordetella pertussis |
| GB8807860D0 (en) * | 1988-04-05 | 1988-05-05 | Connaught Lab | Pertussis vaccine |
| JP2706792B2 (ja) * | 1988-11-29 | 1998-01-28 | 財団法人化学及血清療法研究所 | 百日咳毒素のトキソイド化法 |
| DE69022106T2 (de) * | 1989-04-28 | 1996-02-15 | Sclavo Spa | Pertussistoxin-Mutanten, dieselbe produzierende Bordetella-Stämme und ihre Verwendung als Vakzin gegen Pertussis. |
| GB8910570D0 (en) | 1989-05-08 | 1989-06-21 | Wellcome Found | Acellular vaccine |
| US5578308A (en) * | 1990-02-12 | 1996-11-26 | Capiau; Carine | Glutaraldehyde and formalin detoxified bordetella toxin vaccine |
| EP0515415B1 (en) * | 1990-02-12 | 1995-10-18 | SMITHKLINE BEECHAM BIOLOGICALS s.a. | Novel vaccine and method therefor |
| JPH0432188U (da) * | 1990-07-10 | 1992-03-16 | ||
| JP3043809B2 (ja) * | 1991-11-15 | 2000-05-22 | ファイザー・インコーポレイテッド | グラム陰性菌ワクチン |
| JP2634545B2 (ja) * | 1992-10-27 | 1997-07-30 | 日本全薬工業株式会社 | Ｒｔｘトキシンファミリーに属する細菌毒素ワクチンの製造法 |
| CA2188424A1 (en) * | 1994-04-28 | 1995-11-09 | Akihiro Suehara | Method of separating protective components of bordetella pertussis |
| BRPI0402630B8 (pt) * | 2004-07-05 | 2021-05-25 | Fund Butantan | processo de obtenção de vacina pertussis celular menos reatogênica |
| RU2504399C1 (ru) * | 2012-12-06 | 2014-01-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским и иммунопрофилактическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГУП "НПО "Микроген" Минздрава России) | Способ получения бесклеточной вакцины для иммунопрофилактики коклюша |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB512196A (en) * | 1937-08-19 | 1939-08-30 | Lederle Lab Inc | Method of preparing pertussis toxin and toxoid |
| US2359388A (en) * | 1941-02-13 | 1944-10-03 | Lederle Lab Inc | Method of preparing pertussis toxin and toxoid |
| US3135662A (en) * | 1961-01-05 | 1964-06-02 | Burroughs Wellcome Co | Diphtheria toxoid preparation and its production |
| NL6600706A (da) * | 1965-02-05 | 1966-08-08 | ||
| US4070454A (en) * | 1973-05-04 | 1978-01-24 | Agence Nationale De Valorisation De La Recherche (Anvar) | Vaccines, the process for preparing the same and the applications thereof |
| DE2448530C3 (de) * | 1974-10-11 | 1980-03-27 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zum Herstellen von Derivaten des Diphtherietoxins und diese enthaltende Mittel |
| DE2457047C3 (de) * | 1974-12-03 | 1979-10-31 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur Herstellung eines Derivates der leichten Kette des Tetanustoxins, dessen Verwendung zur Tetanusprophylaxe |
| FR2393065A1 (fr) * | 1977-05-31 | 1978-12-29 | Merieux Inst | Procede de separation de lipides d'endotoxines bacteriennes et notamment d'endotoxine de bordetella pertussis |
-
1980
- 1980-09-12 JP JP55127825A patent/JPS5750925A/ja active Granted
- 1980-12-30 EP EP80108246A patent/EP0047802B1/en not_active Expired
- 1980-12-30 DE DE8080108246T patent/DE3069433D1/de not_active Expired
-
1981
- 1981-01-05 NO NO810014A patent/NO159667C/no not_active IP Right Cessation
- 1981-01-08 CA CA000368112A patent/CA1152001A/en not_active Expired
- 1981-01-09 DK DK009281A patent/DK155915C/da not_active IP Right Cessation
- 1981-01-23 KR KR1019810000199A patent/KR840001512B1/ko active Pre-grant Review Request
- 1981-01-23 SU SU813235495A patent/SU1297712A3/ru active
- 1981-01-26 HU HU81164A patent/HU185404B/hu unknown
- 1981-02-04 ES ES499112A patent/ES499112A0/es active Granted
- 1981-09-10 GB GB8127421A patent/GB2083358A/en not_active Withdrawn
-
1982
- 1982-08-16 US US06/408,563 patent/US4455297A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0047802A3 (en) | 1982-12-29 |
| US4455297A (en) | 1984-06-19 |
| NO810014L (no) | 1982-03-15 |
| EP0047802A2 (en) | 1982-03-24 |
| JPS5750925A (en) | 1982-03-25 |
| HU185404B (en) | 1985-02-28 |
| ES8202058A1 (es) | 1982-02-01 |
| JPS64928B2 (da) | 1989-01-10 |
| SU1297712A3 (ru) | 1987-03-15 |
| GB2083358A (en) | 1982-03-24 |
| DK9281A (da) | 1982-03-13 |
| KR830004851A (ko) | 1983-07-20 |
| ES499112A0 (es) | 1982-02-01 |
| NO159667B (no) | 1988-10-17 |
| EP0047802B1 (en) | 1984-10-10 |
| DK155915C (da) | 1989-10-23 |
| KR840001512B1 (ko) | 1984-09-29 |
| NO159667C (no) | 1989-02-01 |
| CA1152001A (en) | 1983-08-16 |
| DE3069433D1 (en) | 1984-11-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK155915B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af pertussis-toksoid til anvendelse i vacciner | |
| US4220717A (en) | Isolation and purification of polyribosyl ribitol phosphate from Haemophilus influenzae type b. | |
| US4687738A (en) | Method for the production of HA fraction containing protective antigens of Bordetella pertussis and pertussis vaccine | |
| RU2194531C2 (ru) | Поливалентные ассоциированные коклюшно-дифтерийно-столбнячно (акдс)-полиомиелитные вакцины | |
| NO151225B (no) | Fremgangsmaate ved fremstilling av pasteurellosis-vaksiner | |
| US4196192A (en) | Combined Haemophilus influenzae type b and pertussis vaccine | |
| EP0041897B1 (en) | Polysaccharide antigen from streptococcus and vaccines | |
| KR890004019B1 (ko) | 요로 감염 치료용 백신의 제조방법 | |
| JP4874339B2 (ja) | Ｉｐｖ−ｄｐｔワクチン | |
| CA1326444C (en) | Method for removing pertussis endoxin, pertussis toxoid and its production | |
| JPS6211090A (ja) | トレポネマ・ハイオジセンテリアエの生育方法 | |
| CN105999256B (zh) | 一种预防手足口病的联合疫苗 | |
| NO172188B (no) | Fremstilling av pertussis-toksin ved dyrkning av bordetella pertussi | |
| JPH05503936A (ja) | 新規なワクチンおよびそのための方法 | |
| CN115920022A (zh) | 一种ev71-ca16二价灭活疫苗及其制备方法和应用 | |
| CA1117866A (en) | Haemophilus influenzae vaccine | |
| CN111053898B (zh) | 一种疫苗组合物及其应用 | |
| US3627874A (en) | Vaccine preparation | |
| US3035980A (en) | Bacterial vaccines with p-hydroxybenzoates and their production | |
| JPS63243023A (ja) | ヒト免疫不全ウイルスのフエノールによる不活化 | |
| KR810001317B1 (ko) | 혼합백신의 제조방법 | |
| JPS59110626A (ja) | Ｂ−オリゴマ−含有百日咳ワクチンおよびその製造方法 | |
| CN117467001A (zh) | A型产气荚膜梭菌抗毒素血清的制备方法及应用 | |
| JPS59184132A (ja) | 百日ぜきワクチンの製造方法 | |
| JPS6324977B2 (da) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |