DE69431024T2

DE69431024T2 - Neues physiologisch aktives Mittel

Info

Publication number: DE69431024T2
Application number: DE69431024T
Authority: DE
Inventors: Giichi Hamada; Jin-Emon Konishi
Original assignee: Nippon Zoki Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Nippon Zoki Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1993-09-28
Filing date: 1994-09-28
Publication date: 2003-01-30
Anticipated expiration: 2014-09-29
Also published as: AU7437494A; EP0645142B1; SG45225A1; EP0645142A1; CN1107365A; JP2594222B2; PT645142E; TW326028B; ES2180555T3; JPH0797336A; DK0645142T3; DE69431024D1; ATE220913T1; KR100189144B1; CN1062182C; US5560935A; CA2132993A1; CA2132993C; KR960010010A; AU676081B2

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft eine neue physiologisch aktive Substanz, die aus einem Gewebe extrahiert wird, das man durch interne und externe stressauslösende Verbindungen aktiviert hat.
Lebende Organismen bewahren ihr Leben als Individuen, indem sie ihre physikalischen und chemischen Zustände an gewisse stabile physiologische Bedingungen anpassen, die den Veränderungen der inneren und äußeren Umstände entsprechen, und innerhalb dieser aufrecht erhalten.
Um solch eine Homeostase anzupassen und aufrechtzuerhalten, stellt der lebende Organismus immer verschiedene Substanzen in vivo her und produziert beim Befall durch Viren, Bakterien, etc. bzw. durch eine Generation von Tumorzellen auch in vivo gewisse Substanzen, die gegenüber einem solchen äußeren und inneren Befall widerstandsfähig sind.
Wenn die zuvor beschriebenen Biofunktionen jedoch aus irgendeinem Grund nicht im Gleichgewicht sind und dies chronisch wird, ergibt sich eine Morbidität, die verschiedene Krankheiten verursacht.
Idealerweise heilt man die Krankheit, indem man die Funktion des Organismus, die Homeostase aufrechtzuerhalten, aktiviert und so einstellt, das das abnormale Ungleichgewicht der gestörten Biofunktion wieder ihren normalen Zustand zurückgewinnt. Es ist wohl bekannt, dass die Aufrechterhaltung und Normalisierung von Biofunktionen insbesondere durch verschiedene Rezeptoren auf der Zelloberfläche und den Ionenkanälen, wie Natrium, Kalium, Kalzium, etc. ausgeführt wird.
Es ist bekannt, dass beim Älterwerden die Fähigkeit der DNA zur Wiederherstellung bei Beschädigung in Säugerzellen abnimmt und dass die Erzeugung von freien Radikalen in vivo das Altern, Kollagenkrankheiten und die Krebserzeugung fördert. Kollagen ist im übrigen eine nicht-zelluläre Substanz, die in der Haut, in Blutgefäßen, dem Knorpelgewebe, dem Augapfel, den Nieren, etc. weit verbreitet ist und mit zunehmendem Alter die Vernetzung von aus Kollagen bestehenden Materialien fortschreitet, wodurch sich deren Elastizität verringert und diese hart werden. Es ist wohl bekannt, dass bei an Diabetes leidenden Patienten eine übermäßig Vernetzung der aus Kollagen bestehenden Materialien als Ergebnis eines kontinuierlich gehalts abläuft, wodurch insbesondere grauer Star, Arteriosklerose, Nierenkrankheiten, periphere Nervenschäden, etc. resultieren.
Die vorliegenden Erfinder haben der die Homeostase von lebenden Organismen aufrechterhaltenen Funktion Aufmerksamkeit geschenkt, welche die Belastung in Nerven-, immunologischen und endokrinalen Systemen einstellt und normalisiert, die durch die Störung von Zellfunktionen in vivo als Ergebnis von Krankheiten und des Alterungsprozesses verursacht werden und unter dieser Prämisse ausgedehnte Untersuchungen zu den Substanzen durchgeführt, die in der Widerstandsphase des Organismus gegen innere und äußere stressauslösende Verbindungen (d. h. in der Aktivierungsphase lebender Gewebe) produziert werden und die natürliche Heilungsfähigkeit von Organismen fördern, um an der Normalisierung der Biofunktionen teilzunehmen, und auf diese Weise die vorliegende Erfindung vollendet.
Als einen Mechanismus zur Einstellung komplizierter Funktionen in vivo kennt man ein als Kallikrein-Kinin-System bezeichnetes enzymatisches System. Im Hinblick auf das Kallikrein-Kinin-System glaubt man, dass der Blutgerinnungsfaktor XII durch die in vivo Stimmulierung von Geweben in Folge von Beschädigung oder Befall aktiviert wird, wodurch eine Reihe von enzymatischen Reaktionen induziert werden. Somit wirkt der aktivierte Blutgerinnungsfaktor XII auf das im gleichen Plasma vorliegende Plasma-Prekallikrein, um dieses in Plasmakallikrein aus einem aktivierten Enzymtypus umzuwandeln und dann wirkt das Plasmakallikrein auf das hoch-molekulargewichtige Kininogen im Plasma ein unter Freisetzung von Bradykinin.
Bradykinin, ein Produkt des Plasmakallikrein-Kinin-Systems, weist verschiedene physiologische Aktivitäten auf, wie die Erweiterung der peripheren Blutgefäße, eine beschleunigte Permeation der Blutgefäße, Schmerzinduktion, das Hervorrufen von Entzündungen, Leukozytenwanderung, etc. und ist als Mediator für die Schmerzinduktion, Entzündung und allergische Reaktionen bekannt. Wenn man daher eine übermäßige Freisetzung und Produktion von Bradykinin inhibiert, ist es möglich Schmerz, Entzündungen, allergische Syndrome, etc. zu lindern und solche Störungen zu normalisieren.
Wie zuvor erwähnt, wird Bradykinin in der Reaktion des Plasmakallikreins mit hoch-molekulargewichtigem Kininogen freigesetzt und produziert und daher haben Substanzen, welche die Kallikrein-Produktion im Plasmakallikrein-Kinin-System inhibieren und eine übermäßige Produktion des Bradykinins verhindern, das Potential, als Schmerzmittel, entzündungshemmende Mittel, antiallergische Mittel, etc. verwendet zu werden und als Pharmazeutika von hohem Nutzen zu sein.
Als Hintergrund der vorliegenden Erfindung kann man sich auf die beiden folgenden japanischen Patentanmeldungen beziehen, die vom selben Anmelder eingereicht wurden:
1) JP-A-58 35 117 (Chemical Abstracts, Bd. 98, Nr. 221826z (1983))
2) JP-A-59 118 711 (Patent Abstracts of Japan, nicht geprüfte Anmeldungen, Gebiet C, Bd. 8, Nr. 236, S. 99c 249 (1984))
Beide Anmeldung betreffen physiologisch aktive Substanzen, die man im gleichen Herstellungsverfahren erhält, welches durch einen Reinigungsschritt in einem Ultrafiltrationsverfahren gekennzeichnet ist, das man bei einem Extrakt aus mit Vacciniavirus geimpften Geweben anwendet, unter Erhalt von aktiven Substanzen mit einem Molekulargewicht von weniger als 1.000. Die erfindungsgemäße Substanz wird andererseits ebenfalls aus entzündeten, mit einem Virus infizierten Geweben extrahiert, jedoch durch ein anderes Verfahren und besitzt pharmakologisch kennzeichnende Aktivitäten, wie Inhibierung der Plasmakallikrein-Herstellung und die Verbesserung einer peripheralen Zirkulationsstörung.
Die vorliegende Erfindung betrifft eine Substanz, die Biofunktionen einstellt und aufrechterhält, die Plasmakallikrein-Produktion inhibiert und den peripheren Blutfluß verbessert, sowie abnormale Funktionen im Krankheitszustand normalisiert und den Normalzustand wieder herstellt.
Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es, eine physiologisch aktive Substanz bereitzustellen, die sich verbessernd auf den peripheren Blutfluß auswirkt und schmerzlindernde, entzündungshemmende und antiallergische Wirkungen, etc. aufweist.
Die vorliegende Erfindung betrifft eine physiologisch aktive Substanz, erhältlich durch
A) das Impfen von Tieren oder Tiergeweben mit einer stressauslösenden Verbindung zur Aktivierung der Gewebe, und
B) das Extrahieren der physiologisch aktiven Substanz aus dem aktivierten Gewebe, die ferner die folgenden Eigenschaften aufweist:
i) sie ist ein amorphes, hygroskopisches Pulver, mit einer schwach gelblich braunen Farbe, welches 1 bis 20 ug/mg Silizium, berechnet als Silizium, enthält;
ii) sie ist löslich in Wasser, Methanol und Ethanol und unlöslich in Benzol und Ether;
iii) sie weist einen pH von 6,0 bis 8,3 auf;
iv) sie hat einen Peak im UV-Absorptionsspektrum bei λmax = 265 bis 275 nm;
v) sie zeigt die folgenden Farbreaktionen:
- Aminosäuren - positiv auf die Ninhydrin-Reaktion;
- Zucker - positiv auf das Orcinol-Eisen(III)-Chlorid-Salzsäure- Verfahren;
- Phosphor - positiv auf das Molybdänblau-Verfahren;
- Proteine - negativ auf das Trichloressigsäure-Verfahren;
- Phenole - negativ auf das Eisen(III)-Chlorid-Verfahren;
vi) sie zeigt eine Inhibitorwirkung für die Herstellung von Plasmakallikrein.
Man erhält die vorliegende Erfindung vorzugsweise, indem man aktiviertes Gewebe eines Tieres mahlt, ein Extraktionslösungsmittel zugibt, die Gewebereste hiervon entfernt, Proteine entfernt, dann den Rückstand mit einem Adsorptionsmittel adsorbiert und die hiermit adsorbierte Substanz eluiert.
Im Detail kann das Herstellungsverfahren für die erfindungsgemäße physiologisch aktive Substanz die folgenden Schritte umfassen:
A) das Impfen von Tieren oder Tiergeweben mit einer stressauslösenden Verbindung zur Aktivierung der Gewebe, und
B) das Extrahieren der physiologisch aktiven Substanz aus dem aktivierten Gewebe, wobei der Extraktionsschritt (ii) die folgenden Schritte umfasst:
a) das Mahlen des aktivierten Gewebes und das Zugeben eines extrahierenden Lösungsmittels unter Bildung einer Emulsion,
b) gegebenenfalls das Unterziehen der Suspension einer Gefrier-/Schmelzbehandlung, einer Ultraschallbehandlung, die Zugabe von Zellmembran-auflösenden Enzymen oder die Zugabe von Tensiden,
c) das Trennen und Entfernen des Geweberückstands,
d) das Entfernen von Proteinen aus der extrahierten Fraktion,
e) das Einstellen der extrahierten Fraktion auf einen sauren pH und das Adsorbieren mit einem Adsorptionsmittel und das Trennen und Sammeln des Adsorptionsmittels,
f) Das Eluieren des Produkts von dem Adsorptionsmittel mit einem extrahierenden Lösungsmittel bei einem alkalischen pH-Wert,
g) gegebenenfalls das Reinigen des Produkts durch Chromatographie, Dialyse oder Ultrafiltration.
Die vorliegende Erfindung wird nachstehend näher erläutert.
Die stressauslösende Verbindung ist vorzugsweise ein Virus oder Tumorzellen.
Die in der vorliegenden Erfindung verwendeten tierischen Gewebe sind vorzugsweise kultivierte Gewebe, kultivierte Zellen oder entzündetes Gewebe menschlichen oder tierischen Ursprungs, die mit einem Virus infiziert sind, oder Chorio-Alantois-Membranen von befruchteten (bzw. Embryonen-enthaltenden) Eiern, die mit einem Virus infiziert sind. Beispiele des zur Aktivierung des tierischen Gewebes als stressauslösende Verbindung verwendeten Virus sind Vacciniavirus, Kuhpockenvirus, Variolavirus, Ectromeliavirus, Simianpockenvirus und andere Orthopoxviren, Orf-Virus, Paravacciniavirus, Rinder-"nopplelike"-Stomatitisvirus und andere Parapoxviren, Schafpockenvirus, Ziegenpockenvirus, Hautgeschwulst-Krankheitsvirus und andere Ziegenpockenviren, Vögelpockenvirus, Hasenfibromavirus und andere Vögelpockenviren, Kaninchenmyxomavirus, Kaninchenfibromavirus und andere Kaninchenpockenviren sowie Schweinepockenvirus, Yava-Affen-Tumorvirus, Tara-Pockenvirus und andere zur Familie der Pockenviren gehörende Viren. Der Virus ist vorzugsweise ein Vacciniavirus. Im Hinblick auf Tumorzellen als stressauslösende Verbindung kann man verschiedene kultivierte Tumorzellstämme, die von menschlichen Wesen und Tieren stammen, verwenden, wobei sich alles eignet, womit man die zuvor angegebenen Tiere und Tiergewebe impfen kann.
Als Tiere zur Gewinnung des aktivierten Gewebes kann man Haustiere und Geflügel, wie Kaninchen, Kühe, Pferde, Schafe, Ziegen, Schweine, Hühner, etc. und Säugetiere, wie Affen, Ratten, Mäuse, Meerschweinchen, Hamster, etc. verwenden und auf geeignete Weise auswählen je nach Art der stressauslösenden Verbindung und Ziel. Das tierische Gewebe ist vorzugsweise Kaninchenhaut.
Als Zellen für die Kultur eignen sich beliebige Zellen, so lange die stressauslösende Verbindung in der Lage ist, dort zu wachsen. Beispiele solcher Zellen für die Kultur umfassen verschiedene Gewebe (z. B. menschliche Hämozyten und Plazenta) und die Zellen verschiedener Gewebe, wie Niere, Haut, Lunge, Testis, Muskel, Nebenniere, Schilddrüse, Gehirn, Nervenzellen, Hämozyten, etc. der zuvor erwähnten Tiere und deren Embryos.
Diese aktivierten Gewebe werden aseptisch gesammelt, gemahlen und zu einer emulgierten Suspension verarbeitet, indem man das 1- bis 5-fach des extrahierenden Lösungsmittels dazugibt. Beispiele des extrahierenden Lösungsmittels sind destilliertes Wasser, physiologische Kochsalzlösung, schwach-saure bis schwach-basische Puffer, etc. Gegebenenfalls kann man Stabilisatoren, wie Glyzerin, antibakterielle/antiseptische Mittel, wie Phenol, anorganische Salze, wie Natriumchlorid, Kaliumchlorid, Magnesiumchlorid, etc. zugeben. Zu diesem Zeitpunkt kann man die Extraktion vereinfachen, indem man eine Gefrier-/Schmelzbehandlung ausführt, mit Ultraschall behandelt, oder Zellmembran-lösende Enzyme oder Tenside zugibt.
Man filtriert oder zentrifugiert den resultierenden milchigen Extrakt, um die Gewebereste zu entfernen und entfernt dann die Proteine. Man kann die Proteine nach bekannten Verfahren entfernen, beispielsweise durch Wärmebehandlung, die Behandlung mit Ultraschall, die Zugabe von proteindenaturierenden Mitteln, wie Säuren, Basen, Harnstoff, Guanidin, organischen Lösungsmitteln, Tensiden, etc., isoelektrische Fällung, Aussalzen und dergl. Dann filtriert man die separierten Proteine durch Filtration unter Verwendung von Filterpapier (Zellulose, Nitrozellulose, etc.), Glasfiltern, Celite, Seitz- Filtern, etc. bzw. durch Ultrafiltration, Gelfiltration, Ionenaustauschharz, Zentrifugieren und dergl. ab.
Die resultierende extrahierte Fraktion stellt man auf einen sauren pH- Wert, vorzugsweise auf pH 3,5 bis 5,5 mit einer Säure, wie Salzsäure, Schwefelsäure, Bromwasserstoffsäure, etc. ein und adsorbiert mit einem Adsorptionsmittel. Beispiele anwendbarer Adsorptionsmittel sind Aktivkohle, Kaolin, Ionenaustauschharze, etc., wobei Aktivkohle das bevorzugte Adsorptionsmittel ist.
Man gibt das Adsorptionsmittel zum Extrakt und rührt dann oder führt den Extrakt über eine mit dem Adsorptionsmittel gefüllte Säule, wodurch die wirksame Komponente adsorbiert werden kann.
Vorzugsweise führt man den Schritt des Einstellens der extrahierten Fraktion auf einen sauren pH und das Adsorbieren mit einem Adsorptionsmittel und das Trennen und Sammeln des Adsorptionsmittels mehr als einmal durch.
Beim Eluieren der erfindungsgemäßen Substanz vom Adsorptionsmittel gibt man ein Extraktionsmittel zu (z. B. eine basische wäßrige Lösung, eine Lösung in einem wassermischbaren Lösungsmittel, wie Alkohol oder eine Mischlösung hiervon), stellt die Mischung vorzugsweise auf einen pH von 9 bis 12 ein und eluiert dann bei Raumtemperatur, oder durch Schlagen in einem gewissen Ausmaß, oder unter Rühren, und entfernt das Adsorptionsmittel durch herkömmliche Mittel, wie Filtration, wodurch man die Elution bewirken kann. Dann kann man gegebenenfalls Mittel, wie Chormatographie, Ultrafiltration, Dialyse unter Verwendung von Umkehr-Osmose-Filtration etc. einsetzen oder das Salz hiervon entfernen, wodurch man die physiologisch aktive Substanz der Erfindung in einem reineren Zustand gewinnen kann.
Das in der erfindungsgemäßen physiologisch aktiven Substanz enthaltene Silizium liegt als wasserlösliche Kieselsäuren oder Silikate oder Polymere hiervon vor. Es kann als Kieselsäure, wie Orthokieselsäure, Metakieselsäure, Mesodikieselsäure, Mesotrikieselsäure, Mesotetrakieselsäure, etc. oder als Alkalisalze hiervon (z. B. Natrium- und Kaliumsalze), als monomere Form, oder in einer polymerisierten Form vorliegen. Die erfindungsgemäße Substanz enthält hiervon 1 bis 20 ug/mg (vorzugsweise 1,5 bis 15 ug/mg), als Silizium berechnet.
Beispiele zur Herstellung der erfindungsgemäßen Substanz werden nachstehend angeführt.

BEISPIELE

BEISPIEL 1

Die Haut von einem gesunden erwachsenen Kaninchen wurde zwecks Aktivierung mit Vacciniavirus geimpft, dann wurde die aktivierte Haut unter aseptischen Bedingungen entfernt und fein geschnitten, und man gab Wasser zu und mahlte Mischung mit einem Homogenisator, um eine Emulsion herzustellen. Diese wurde unter Druck filtriert, das resultierende Filtrat stellte man auf pH 5,0 mit Salzsäure ein und erwärmte es auf 100ºC mit einem Dampfstrom. Man entfernte die Proteine durch Filtration, stellte das Filtrat mit Natriumhydroxid auf pH 9,1 ein, erwärmte auf 100ºC und filtrierte. Man stellte das Filtrat auf pH 4,1 ein, rührte nach der Zugabe von 2% Aktivkohle und filtrierte die Mischung. Zu dem Filtrat gab man 5, 5% Aktivkohle und rührte die Mischung zwei Stunden und filtrierte. Man mischte die Aktivkohle, die man aus der ersten Filtration erhalten hatte, mit Wasser, stellte mit Natriumhydroxid auf pH 9, 9 ein, rührte 1,5 Stunden bei 60ºC und filtrierte. Man gab Wasser zu der ersten Menge Aktivkohle und zu der zweiten Menge, stellte mit Natriumhydroxyd auf pH 10,9 ein, rührte 1,5 Stunden bei 60ºC und filtrierte. Man kombinierte die Filtrate, neutralisierte mit Salzsäure, entsalzte unter Verwendung einer Umkehr-Osmose-Filtermembran (Molekulargewicht: 100) und trocknete im Vakuum. Die Ausbeute aus 1 kg aktivierter Haut betrug 3 g. Die so erhaltene physiologisch aktive Substanz wies die folgenden Eigenschaften auf:
(1) Eigenschaft: ein amorphes und hygroskopisches Pulver, mit einer schwach gelblich braunen Farbe, welches 2 bis 10 ug/mg Silizium, berechnet als Silizium, enthält;
(2) Lösungsmittel: es ist löslich in Wasser, Methanol und Ethanol und unlöslich in Benzol und Ether;
(3) pH; 6,0 bis 8,3;
(4) Ultraviolettabsorption: λmax = 265 bis 275 nm;
(5) Farbreaktionen: Aminosäuren (positiv auf die Ninhydrin-Reaktion), Zucker (positiv auf das Orcinol-Eisen(III)-Chlorid-Salzsäure-Verfahren), Phosphor (positiv auf das Molybdänblau-Verfahren), Proteine (negativ auf das Trichloressigsäure-Verfahren) und Phenole (negativ auf das Eisen- (III)-Chlorid-Verfahren).

BEISPIEL 2

L-Zellen (Sarcomazellen aus Mäusen) wurden hypodermal in C&sub3;H-Mäuse transplantiert, die an der gleichen Stelle nach 10 Tagen mit Vacciniavirus geimpft wurden; 5 Tage danach schnitt man Bereiche der Tumorentzündung heraus. Das herausgetrennte Gewebe (100 g) wurde fein geschnitten, dann gab man eine auf pH 7,0 gepufferte 70%ige Glyzerinlösung zu, mahlte unter Verwendung eines Waring-Mischers und wiederholte den Verfahrensschritt des Gefrierens/Schmelzens dreimal. Man zentrifugierte die milchige gemahlene Flüssigkeit bei 2.000 · g eine Stunde lang, entfernte den Niederschlag, stellte den pH der überstehenden Flüssigkeit auf 5,0 ein, erhitzte auf 100ºC und filtrierte. Das Filtrat wurde auf pH 9,0 eingestellt, erneut auf 100ºC erhitzt und filtriert, um unlösliche Stoffe zu entfernen. Nach dem Abkühlen stellte man das Filtrat auf pH 4, 5 ein, führte es über eine mit Aktivkohle gefüllte Säule und wusch die Säule mit destilliertem Wasser und eluierte mit N/25- wäßrigem Ammoniak. Das Neutralisieren und Entsalzen führte man auf die gleiche Weise aus wie in Beispiel 1, worauf man im Vakuum trocknete und ein pulvriges Produkt erhielt. Die so hergestellte physiologisch aktive Verbindung enthielt größere Mengen an Kieselsäuren und die in 1 mg des hygroskopischen Pulvers enthaltene Menge betrug 5 bis 15 ug, berechnet als Silizium.
Die pharmakologische Aktivität der erfindgungsgemäßen physiologischaktiven Verbindung ist wie folgt.

(1) Inhibierung der Plasmakallikrein-Produktion.

Die inhibierende Wirkung der physiologisch aktiven Substanz bei der Produktion von Plasmakallikrein wurde nach einem Literaturbekannten Verfahren gemessen [Kiso to Rinsho, Bd. 20, Nr. 17, S. 399-405 (1986)].
Man gab dementsprechend eine Kaolinsuspension zu mit physiologischer Salzlösung verdünntem, normalen menschlichen Plasma, gab Lima-Bohnen-Trypsin-Inhibitor nach einem gewissen Zeitraum zu, um die Reaktion der Kallikrein-Produktion zu beenden und bestimmte dann das resultierende Kallikrein mit einem synthetischen Substrat (D-Pro-Phe-Arg-p-Nitroanilin). Die zu testende Substanz wurde gleichzeitig zu dem obigen System gegeben, wodurch man die inhibierende Wirkung der zu testenden Substanz auf die Kallikrein-Produktion bestimmte.
Ein Beispiel der Ergebnisse ist in Tabelle 1 angegeben. Die Aktivitätsstärke wird über die Konzentration (IC&sub5; &sub0;) angegeben, bei der die Plasmakallikrein-Produktion zu 50% inhibiert war.

TABELLE 1

Getestete Substanz IC&sub5; &sub0; (ug/ml)

Erfindungsgemäße Substanz 35
Indomethacin 370
Ketoprofen 400
Ibuprofen 700
Pentazocin 1.600

(2) Verbesserung der peripheren Zirkulationsstörung.

Als Maß für die Wirkung der erfindungsgemäßen Substanz bei der Verbesserung abnormaler Zustände, wurde die Verbesserung der peripheren Blutzirkulationsstörung durch Chinoform gemessen. Dementsprechend verabreichte man Chinoform intraperitoneal Ratten über 27 Tage mit allmählich ansteigenden Dosen, um eine periphere Zirkulationsstörung zu verursachen; dann tauchte man die Hinterpfoten in 5ºC kaltes Wasser zwei Minuten lang, um diese einer Belastung durch geringe Temperatur auszusetzen und unterzog den Fortschritt bei der Wiederherstellung der Pfotentemperatur einer Bildanalyse mittels Thermographie, um die verbessernde Wirkung gegenüber peripherer Zirkulationsstörung zu bewerten. Die erfindungsgemäße Substanz wurde intravenös kontinuierlich 7 Tage ausgehend vom 21. Tag nach der Chinoformverabreichung verabreicht. Ein Beispiel der Ergebnisse ist in Tabelle 2 angegeben.

TABELLE 2

Mittlere Hauttemperatur der Hinterpfoten (ºC) 15 Minuten nach Beendigung der Belastung mit einer geringen Temperatur

Nicht-behandelte Gruppe 27,3 ±0,8
Kontrollgruppe (behandelt mit Chinoform) 24,1 ±0,3
mit der erfindungsgemäßen Substanz behandelte Gruppe 50 mg/kg 25,7 ±0,3
100 mg/kg 28,2 ±0,7
Die Ergebnisse der Tabelle 1 verdeutlichen, dass die erfindungsgemäße physiologisch aktive Substanz eine ausgezeichnete inhibierende Wirkung gegenüber der Plasmakallikrein-Produktion aufweist. Wie bereits erläutert wirkt das Plasmakallikrein auf hoch-molekulargewichtiges Kininogen ein, wodurch Bradykinin freigesetzt und hergestellt wird. Dieses Bradykinin ist als Mediator beim Induzieren von peripherer Blutgefäßerweiterung, Schmerz, Entzündungen und allergischen Reaktionen bekannt. Wenn man somit die Plasmakallikrein-Produktion inhibiert, kann man die Bradykinin-Freisetzung inhibieren und dementsprechend ist die erfindungsgemäße Substanz, die eine ausgezeichnete inhibierende Wirkung gegenüber der Plasmakallikrein-Produktion zeigt, von großem Nutzen als Pharmazeutikum, beispielsweise als Schmerzmittel, entzündungshemmendes Mittel und antiallergisches Mittel. Ferner testete man die pharmakologische Aktivität der erfindungsgemäßen physiologisch-aktiven Substanz in verschiedenen Systemen, sowohl in vitro als auch in vivo, wobei man fand, dass die erfindungsgemäße Substanz ausgezeichnete pharmakologische Aktivitäten, beispielsweise bei der Verbesserung des peripheren Blutflusses und entzündungshemmende und antiallergische Wirkungen aufweist.
Man kann die erfindungsgemäße physiologisch aktive Substanz zu verschiedenen pharmazeutischen Zubereitungen verarbeiten durch eine geeignete Kombination mit verschiedenen pharmazeutischen Trägern oder Verdünnungsmitteln unter Einsatz herkömmlicher Techniken, wobei man feste, halbfeste, flüssige oder aerosole Zubereitungen zur oralen oder parenteralen Verabreichung als Formulierung erhält und die erfindungsgemäße Substanz einzeln oder zusammen mit anderen pharmazeutisch aktiven Komponenten verwendet werden kann.
Für Injektionen kann man eine Lösung oder eine Suspension unter Verwendung eines wäßrigen oder nicht-wäßrigen Lösungsmittels, wie destilliertem Wasser für Injektionen oder physiologischer Salzlösung herstellen. Ringers- Lösung, Pflanzenöl, synthetische Fettsäureglyceride, höhere Fettsäureester, Proylenglycol, etc., gefolgt von Einstellung des pH's und Isotonisierung.
Für oral zu verabreichende Zubereitungen kann man die erfindungsgemäße Substanz per se oder ihre Mischung mit geeigneten Additiven kombinieren, wie Füllstoffen (z. B. Laktose, Mannitol, Maisstärke, kristalline Zellulose, etc.) mit Bindemitteln (z. B. Gummiarabikum, Maisstärke, Gelatine, etc.), Auflösemitteln (z. B. Maisstärke, Kartoffelstärke, Carmerose, Carmerosekalzium, etc.), Gleitmitteln (z. B. Talk, Magnesiumstearat, etc.), guellmitteln, Feuchthaltemitteln, Puffern, Konservierungsmitteln, Geruchsstoffen und dergl., unter Erhalt von Tabletten, verdünnten Pulvern, Granulaten oder Kapseln. Abhängig vom Zustand des Patienten und der Art der Krankheit kann man andere Zubereitungsformen als die zuvor erwähnten, die sich für die Therapie eignen, wie Zäpfchen, Inhalierungsmittel, Aerosole, Salben, Kataplasmen, Augentropfen, etc. zubereiten.

Claims

1. Eine physiologisch aktive Substanz, die durch das Extrahieren der physiologisch aktiven Substanz aus aktiviertem Gewebe erhältlich ist, das aus Tieren oder tierischen Geweben stammt, welche man mit einer stressauslösenden Substanz zur Aktivierung der Gewebe geimpft hat, und welche die folgenden zusätzlichen Eigenschaften aufweist:

i) sie ist ein amorphes, hygroskopisches Pulver, mit einer schwach gelblich braunen Farbe, welches 1 bis 20 ug/mg Silicium, berechnet als Silicium, enthält;

ii) sie ist löslich in Wasser, Methanol und Ethanol und unlöslich in Benzol und Ether;

iii) sie weist einen pH von 6,0 bis 8, 3 auf;

iv) sie hat einen Peak im UV-Absorptionsspektrum bei λmax = 265 bis 275 nm;

v) sie zeigt die folgenden Farbreaktionen:

- Aminosäuren - positiv auf die Ninhydrin-Reaktion;

- Zucker - positiv auf das Orcinol-Eisen(III)-Chlorid-Salzsäure- Verfahren;

- Phosphor - positiv auf das Molybdänblau-Verfahren;

- Proteine - negativ auf das Trichloressigsäure-Verfahren;

- Phenole - negativ auf das Eisen(III)-Chlorid-Verfahren;

vi) sie zeigt eine Inhibitorwirkung für die Herstellung von Plasmakallikrein.

2. Physiologisch aktive Substanz gemäß Anspruch 1, worin die zumindest eine Silicium-Komponente mindestens eine Verbindung ausgewählt aus wasserlöslichen Kieselsäuren, wasserlöslichen Silikaten, Polymeren von wasserlöslichen Kieselsäuren und Polymeren von wasserlöslichen Silikaten ist.

3. Physiologisch aktive Substanz gemäß Anspruch 1 oder 2, welche 2 bis 10 ug/mg Silicium, berechnet als Silicium enthält.

4. Physiologisch aktive Substanz gemäß Anspruch 1 oder 2, die 5 bis 14 ug/mg Silicium, berechnet als Silicium enthält.

5. Pharmazeutische Zusammensetzung, die eine physiologisch aktive Substanz, wie sie in irgendeinem der Ansprüche 1 bis 4 definiert ist und einen pharmazeutisch annehmbaren Träger enthält.

6. Verwendung der physiologisch aktiven Substanz wie sie in irgendeinem der Ansprüche 1 bis 4 definiert ist, bei der Herstellung eines Medikaments, das als Mittel zur Verbesserung des peripherischen Blutflusses, als schmerzlinderndes Mittel, als entzündungshemmendes Mittel, als antiallergisches Mittel, oder als Inhibitor für die Plasmakallikrein-Herstellung wirksam ist.

7. Verwendung gemäß Anspruch 6 bei der Herstellung eines den peripherischen Blutfluß verbessernden Mittels.

8. Verwendung gemäß Anspruch 6 bei der Herstellung eines schmerzlindernden Mittels.

9. Verwendung gemäß Anspruch 6 bei der Herstellung eines entzündungshemmenden Mittels.

10. Verwendung gemäß Anspruch 6 bei der Herstellung eines antiallergischen Mittels.

11. Verwendung gemäß Anspruch 6 bei der Herstellung eines die Plasmakallikrein-Herstellung inhbierenden Mittels.