DE69228556T2 - CDw52-SPEZIFISCHER ANTIKÖRPER ZUR BEHANDLUNG VON MULTIPLER SKLEROSE - Google Patents

Description

• Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung eines Antikörpers, der das CDw52- Antigen erkennt, zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Multipler Sklerose bei einem Menschen oder Tier.
• Die Zellen und Moleküle in einem Tierkörper stimulieren normalerweise nicht eine adaptive Immunantwort in dem Körper, als Ergebnis einer Anzahl von Mechanismen, die einen Zustand sicherstellen, der als "Selbsttoleranz" bezeichnet wird. Unter bestimmten Umständen können diese Mechanismen jedoch versagen, die Stimulation einer solchen Immunantwort zu verhindern, und dieser Zustand wird als "Autoimmunität" bezeichnet. Von einer Anzahl von Krankheiten bei Menschen und Tieren wird jetzt angenommen, daß sie durch Autoimmunität entstehen.
• Multiple Sklerose ist eine Entmarkungskrankheit des zentralen Nervensystems, deren Beginn allgemein in einem Altersbereich von etwa 15 bis 45 (Jahren) liegt. Myelin ist eine fettartige Substanz, die eine Hülle bzw. Scheide um bestimmte Nervenfasern herum bildet, und die Nervenimpulse mit einer Geschwindigkeit weiterleitet, die es ermöglicht, daß Muskeln präzise und feine Bewegungen ausführen. Die Krankheit ist gekennzeichnet durch eine Verhärtung der Markscheidensubstanz, die zur Bildung von Plaques unterschiedlicher Größe und Lage führt, die die Impulse, die normalerweise durch die Scheide geleitet werden, stören. Der Verlauf der Krankheit kann bei einzelnen Patienten sehr unterschiedlich sein und kann Zeiten spontaner Remission umfassen. Die Krankheit führt jedoch allgemein zu einer progressiven Zerstörung der Kontrolle der Muskelfunktion, mit am Ende Paralyse in vielen Fällen. Die genaue Ursache von Multipler Sklerose ist nicht bekannt, und sie kann von einer komplexen Wechselwirkung einer Anzahl unterschiedlicher Faktoren herrühren. Es wird jetzt jedoch allgemein anerkannt, daß mindestens eine autoimmunologische Komponente bei der Verursachung der Krankheit eine Rolle spielt.
• Das CDw52-Antigen (ein 23kDa-Glycoprotein, auch als CAMPATH-1 bezeichnet) ist stark exprimiert auf der Oberfläche von allen menschlichen Lymphozyten und den meisten Monozyten, aber es ist nicht vorhanden in anderen Blutzellen, einschließlich Stammzellen. Eine Anzahl von Antikörpern wurde entwickelt, die gegen CDw52 gerichtet sind, das ein ungewöhnlich gutes Ziel für einen Komplement vermittelten Angriff ist. Antikörper gegen CDw52 binden an alle Lymphozyten und Monozyten, aber lysieren nur Lymphozyten (T und B) in vivo. Antigene, ähnlich CDw52, werden in anderen Säugetierarten exprimiert.
• Antikörper, die gegen CDw52 entwickelt worden sind und in der Therapie verwendet worden sind, umfassen die folgenden:
• CAMPATH-1M ist ein monoklonaler IgM-Antikörper der Ratte, der verbreitet in vitro angewandt worden ist, um Knochenmark zu reinigen, um die T-Zellenpopulation vor einer Knochenmark-Transplantation zu entfernen. Mit dieser Therapie wurde eine deutliche Verringerung des Auftretens und der Schwere von Graft-versus-host-Erkrankungen beobachtet.
• CAMPATH-1G ist eine IgG2b-Klassenwechselvariante der Ratte eines IgG2a-Antikörpers, der das CDw52-Antigen erkennt, der in vivo angewandt wurde, um eine Immunsupression bei mehr als 100 Patienten hervorzurufen, die einer Organ- oder Knochenmark-Transplantation unterzogen worden waren, zur Beherrschung der Organabstoßung und Behandlung von hämatolytischen bösartigen Erkrankungen mit großen Erfolg. Die schnelle Entwicklung einer Anti-Ratten-Immunoglobulinantwort, einschließlich der Möglichkeit der Anaphylaxe, kann jedoch die Anwendung von monoklonalen Antikörpern der Ratte gegen das CDw52- Antigen bei Menschen in vivo einschränken.
• CAMPATH-1H ist ein gentechnisch manipulierter IgG-Antikörper, der erhalten worden ist durch Aufpfropfen der Komplementarität bestimmenden Regionen von CAMPATH-1G in menschliche Gerüstregionen. Der erhaltene "humanisierte" Antikörper ist in vitro hochwirksam und entspricht dem monoklonalen Antikörper der Ratte in der Komplementlyse und ist zwei- bis viermal besser in der zellvermittelten Lyse von menschlichen Lymphozyten. Es wird keine einschränkende Anti-Globulinantwort von diesem humanisierten Antikörper erwartet.
• Die Expression von CAMPATH-1H wurde zunächst in Myelomzellen der Ratte erreicht, indem DNA, die die manipulierten Antikörperketten codiert, im Genomzusammenhang unter Kontrolle des Immunoglobulin-Promotors/Verstärkers gebracht wurde. CAMPATH-1H wurde kürzlich mit hohen Gehalten in Ovarzellen von chinesischen Hamstern (CHO) exprimiert.
• Die WO 92/07084 (die nach Artikel 54(3) EPÜ zum Stand der Technik gehört) beschreibt ein Verfahren zum Reinigen von Anti-CDw52-Antikörpern, einschließlich CAMPATH-1H, und gibt auch Dosierungsanleitungen für derartige Antikörper bei der Therapie von Menschen an. Diese Beschreibung legt nahe, daß Anti-CDw52-Antikörper allgemein zur Behandlung von Autoimmunzuständen, einschließlich Multipler Sklerose, geeignet sind (ohne daß irgendwelche Daten angegeben werden).
• Es hat sich nun überraschender Weise gezeigt, daß Antikörper gegen das CDw52-Antigen wirksam sein können bei der Behandlung von Multipler Sklerose.
• Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung eines Antikörpers, der das CDw52- Antigen erkennt, zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Multipler Sklerose.
• Es ist bevorzugt, einen Anti-CDw52-Antikörper zu verwenden, der nicht die Gefahr der Entwicklung einer Immunreaktion gegen den Antikörper selbst besitzt. Folglich ist es, obwohl es möglich ist, monoklonale Antikörper der Maus oder Ratte zu verwenden, bevorzugt, Antikörper zu verwenden, die durch DNA-Rekombinatinstechnologie gebildet worden sind, und die manipuliert worden sind, um die Gefahr der Hervorrufung einer Immunreaktion zu verringern. So ist es möglich, einen chimären Antikörper zu verwenden, bei dem die konstanten Domänen eines Mäuse- oder Ratten-Anti-CDw52-Antikörpers ersetzt worden sind durch die konstanten Domänen eines menschlichen Antikörpers. Es ist jedoch bevorzugt, einen humanisierten oder CDR-gepfropften Antikörper zur Behandlung von Menschen zu verwenden, d. h. einen Antikörper, bei dem die Komplementarität bestimmenden Regionen von einem Mäuse- oder Ratten-Antikörper mit Gerüstregionen und konstanten Domänen von einem oder mehreren menschlichen Antikörpern kombiniert sind.
• Insbesondere wird die Behandlung von Multipler Sklerose durchgeführt unter Verwendung des CDR-gepfropften Antikörpers CAMPATH-1H (siehe Riechmann et al. Nature 322, 323-327 (1988)). Wie oben angegeben, kann der Antikörper CAMPATH-1H in Myelomzellen der Ratte gebildet werden, wie es ursprünglich beschrieben ist, oder er kann in irgendeinem anderen Expressionssystem gebildet werden, insbesondere einem Expressionssystem, das geeignet ist zur Bildung eines korrekt gefalteten glykosylierten Säugetierproteins. Hohe Ausbeuten an CAMPATH-1H wurden erhalten durch Expression in einer gentechnisch manipulierten CHO-Zellinie (Page und Sydenham, Biotechnology, 9, 64-68 (1991)).
• Die Dosen an Anti-CDw52-Antikörper, vorzugsweise CAMPATH-1H, die an einen Patienten verabreicht werden, der an Multipler Sklerose leidet, variieren mit der genauen Art des zu behandelnden Zustands und dem Empfänger der Behandlung. Die Dosis liegt allgemein im Bereich von 1 bis etwa 100 mg pro erwachsenem Patienten, die üblicherweise täglich während einer Zeit zwischen 1 und 30 Tagen verabreicht wird. Die bevorzugte tägliche Dosis beträgt 1 bis 10 mg pro Tag, obwohl in einigen Fällen höhere Dosen, bis zu 40 mg pro Tag angewandt werden können.
• Der Anti-CDw52-Antikörper, insbesondere CAMPATH-1H, wird allgemein an den Patienten in Form einer pharmazeutischen Zubereitung verabreicht. Derartige Zubereitungen umfassen vorzugsweise neben dem Antikörper einen physiologisch annehmbaren Träger oder ein Verdünnungsmittel, möglicherweise im Gemisch mit einem oder mehreren anderen Mitteln, wie anderen Antikörpern oder Arzneimitteln, wie einem Antibiotikum. Geeignete Träger umfassen, sind jedoch nicht beschränkt auf, physiologische Salzlösung, mit Phosphat gepufferte Salzlösung, mit Phosphat gepufferte Salzlösung/Glucose und gepufferte Salzlösung. Wahlweise kann der Antikörper lyophilisiert (gefriergetrocknet) und zur Verwendung bei Bedarf durch Zusatz einer wäßrigen gepufferten Lösung, wie oben angegeben, rekonstituiert werden. Verabreichungsrouten sind üblicherweise parenterale, einschließlich intravenöse, intramuskuläre, subkutane und intraperitoneale Injektion oder Abgabe.
• Der Anti-CDw52-Antikörper kann in Kombination mit oder nacheinander mit anderen Arzneimitteln, insbesondere anderen Arzneimitteln, die üblicherweise zur Behandlung von Multipler Sklerose verwendet werden, wie Steroiden, z. B. Hydrokortisonen, wie Methylprednisolon, oder anderen Arzneimitteln zur Verbesserung der spezifischen Symptome der Erkrankung, verabreicht werden. Eine aufeinander folgende Verabreichung des Antikörpers mit einem anderen Arzneimittel kann in einigen Fällen angebracht sein.
• Die Erfindung wird anhand der folgenden Fallhistorie eines Patienten erläutert, der mit dem CDR-gepfropften Anti-CDw52-Antikörper CAMPATH-1H behandelt worden ist. Der verwendete Antikörper wurde erzeugt durch Expression in einer CHO-Rekombinationszellinie (Page und Sydenham, Biotechnology, 9, 64-68 (1991)) und anschließende Extraktion aus dem Zellkulturmedium und Reinigung.
• Es ist zu verstehen, daß die folgende Fallhistorie in keiner Weise für den Umfang der Erfindung einschränkend sein soll.
Fallhistorie
• Der Patient war eine 43 Jahre alte Frau, die nach 10 Tagen fortschreitendem Verlust des Gefühls in dem Perineum ärztliche Hilfe suchte. Sie hatte auch verschiedene Zeiten von Harn- und Stuhlinkontinenz erlebt. Die klinischen Bewertungen waren auffallend für normal visuell hervorgerufene Antworten, multiple weiße Abnormalitäten in den zerebralen Hemisphären, die durch Gehirn-MRI identifiziert wurden, und oligoklonale Banden in dem CSF; es wurde die Diagnose Multiple Sklerose gestellt.
• Die Behandlung mit hoch dosierten iv-Gaben von Methylprednisolon führten zu einer unvollständigen Erholung (verringerte Inkontinenz mit weiterhin bestehender perinealer Taubheit und steifen Beinen). Vier Monate nach dem ersten Aufsuchen des Arztes hatte die Patientin eine Zeit mit linksseitigem fazialem Schmerz und Taubheit des linken Beins, übereinstimmend mit einer Hirnstamm-Entkernung. Während der nächsten zwölf Monate verschlimmerten sich die Symptome nach und nach, und am Ende dieses Zeitraums wurde die Patientin ins Krankenhaus eingeliefert mit linksseitiger Augennueritis und Lhermitte-Phänomen. Eine zweite iv-Verabreichung von Methylprednisolon (500 mg/Tag während fünf Tagen) war mit einer begrenzten Verbesserung verbunden. Die Krankheit wurde so beurteilt, daß sie eine chronisch progressive Phase erreicht hatte, und während der nächsten wenigen Monate litt die Patientin weitere identifizierbare Zeiten an Hirnstamm-Entkernung und linksseitiger Augenneuritis.
• Zwanzig Monate, nach dem sie zunächst ärztliche Hilfe gesucht hatte, wurde die Patientin mit CAMPATH-1H (2 mg/Tag iv während fünf Tagen, zwei Tage Pause und dann 10 mg/Tag iv während fünf Tagen) behandelt. Die Lymphozyten-Verarmung fiel schnell auf 0,2 · 10&sup9; Zellen/l, am zweiten Tag von einem Wert vor der Behandlung von 3,8 · 10&sup9; Zellen/l. Die Lymphozytenzahlen blieben unter 0,3 · 10&sup9; Zellen/l während etwa einem Monat und stiegen dann langsam auf einen Wert von 1,07 · 10&sup9; Zellen/l drei Monte nach der Behandlung. CRP in normalen Grenzen vor der Behandlung stieg auf 140 mg/l, fiel ab und erhöhte wieder auf 91 mg/l am dritten bzw. neunten Behandlungstag. Dieses "Doppelpeak"-Muster wurde auch bei Neutrophilen beobachtet, die während des Zeitverlaufs zunahmen und übereinstimmten mit den zweiten und dritten Verabreichungstagen von 2 bzw. 10 mg (10 mg Dosen nach zweitägiger Pause).
• Die Krankheitsaktivität wurde nicht deutlich verändert während oder unmittelbar nach der CAMPATH-1H-Behandlung. Der neurologische Kurtzke-Status, etwa ein bis zwei Monate nach Beginn der Behandlung, wurde auf eine Gesamtbewertung von 11 von einer Bewertung vor der Behandlung von 14 verbessert. Ein zweites Bewertungssystem zur Bewertung der Krankheitsaktivität bei Entkernungskrankheiten zeigte ebenfalls eine Verbesserung in den Bewertungskategorien, Progression, Behinderung und Rückfall.
• Die CAMPATH-1H-Behandlung mit 10 Dosen wurde gut vertragen. Fieber und Kopf schmerzen wurden als nachteilige Ereignisse angegeben, die beide mit Verabreichung der ersten 2 mg bzw. 10 mg Dosen auftraten. Ebenfalls berichtet wurde eine vorübergehende linksseitige visuelle Störung am dritten Tag, deren Bedeutung im Hinblick auf die vorher existierende linksseitige optische Neuritis unklar war.
• Etwa 18 Monate nach der Behandlung mit CAMPATH-1H bestand die Verbesserung des Zustands des Patienten noch.

Claims (4)

1. Verwendung eines Antikörpers, der das CDw52-Antigen erkennt, zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Multipler Sklerose durch ein Verfahren, das auch die Verabreichung eines Steroids umfaßt.

2. Verwendung nach Anspruch 1, wobei der Antikörper ein humanisierter Antikörper ist, umfassend CDRs von einem Maus- oder Ratten-Antikörper, kombiniert mit Gerüstregionen und konstanten Domänen von einem oder mehreren menschlichen Antikörpern.

3. Verwendung nach Anspruch 2, wobei der Antikörper CAMPATH-1H ist.

4. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die Behandlung eine tägliche Verabreichung einer Dosis von 1 bis 10 mg pro Tag während eines Zeitraums von 1 bis 30 Tagen an einen Patienten umfaßt.