DE69202559T2

DE69202559T2 - Proliposomales pulver für polyenliposomen sowie verfahren zu dessen herstellung.

Info

Publication number: DE69202559T2
Application number: DE69202559T
Authority: DE
Inventors: Robert P. New Waverly Tx 77358 Lenk; Gabriel Houston Tx 77096 Lopez-Berestein; Reeta Houston Tx 77096 Mehta
Original assignee: ARGUS PHARM Inc; University of Texas System
Current assignee: ARGUS PHARM Inc; University of Texas System
Priority date: 1991-01-14
Filing date: 1992-01-10
Publication date: 1996-01-11
Anticipated expiration: 2012-01-11
Also published as: AU1252792A; CA2099771C; EP0567582B1; US5178875A; DE69202559D1; EP0567582A1; AU663074B2; ATE122559T1; ES2074878T3; JP3267611B2; JPH06509547A; WO1992011842A1; CA2099771A1; US5965158A; GR3017118T3; DK0567582T3

Description

Die vorliegende Beschreibung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines gefriergetrockneten Pulvers, das zur raschen und bequemen Erzeugung einer liposomalen Formulierung eines Polyens, wie Nystatin, verwendet werden kann.
Nystatin ist ein Tetraen-Dien-Polyen-Antibiotikum, das zuerst aus Streptomyces noursei isoliert wurde und zur Behandlung verschiedener Pilzinfektionen verwendet wird. Allerdings eignet sich Nystatin wie andere Polyene im allgemeinen nicht für die parenterale Verabreichung, und zwar aufgrund seiner hohen Toxizität und seiner Unlöslichkeit in Wasser. Eine Formulierung eines Polyens, wie Nystatin, die parenteral verabreicht werden könnte, würde die therapeutische Anwendbarkeit des Arzneistoffs wesentlich verbessern.
Einige der Erfinder des vorliegenden Patents haben bereits früher festgestellt, daß diese Probleme durch Formulierung von Nystatin in Phospholipidvesikeln oder Liposomen überwunden werden können. Eine derartige liposomale Formulierung ist erheblich weniger toxisch für das Tier, dem sie verabreicht wird, sie ist jedoch noch wirksam gegen Pilzinfektionen und eignet sich daher für die systemische Verwendung. US-Patent 4 812 312 beschreibt diese Erfindung und wird durch Verweis zum Gegenstand der vorliegenden Anmeldung gemacht.
WO 89/03208 beschreibt ein Verfahren zur Herstellung eines präliposomalen Pulvers, das mehrere Stufen, wahlweise unter Einschluß einer Erwärmungsstufe, umfaßt. Die Phospholipide und das Polyen werden jeweils in einem organischen Lösungsmittel gelöst, und dann werden die beiden Lösungen unter Bildung eines ersten Gemisches gemischt, ohne das zuvor Wasser zu der Phospholipidlösung gegeben worden ist.
Ein Nachteil gewisser liposomaler Arzneimittelformulierungen besteht darin, daß ihre Haltbarkeit geringer ist, als es wünschenswert wäre. Ein weiterer Nachteil ist die relative Komplexität des Verfahrens, das zu ihrer Herstellung erforderlich ist. Im Hinblick auf diese Nachteile wäre es sehr wünschenswert, eine stabile, trockene Formulierung herzustellen, die bei Bedarf für die Behandlung eines Patienten rehydratisiert werden könnte. Lyophilisierte oder gefriergetrocknete Pulver sind eine mögliche Lösung für dieses Problem. Für die praktische Anwendung muß ein lyophilisiertes Pulver jedoch nicht nur stabil und zur Rekonstitution als Liposomen imstande sein, sondern es muß auch nach einem Verfahren hergestellt werden können, das einfach und billig genug ist, so daß es praktisch durchführbar und kostengünstig für die großtechnische Anwendung ist.
Die vorliegende Erfindung löst diese und andere Aufgaben, die sich ausgehend vom Stand der Technik stellen.
Die vorliegende Erfindung betrifft allgemein ein Verfahren zur Herstellung eines Pulvers, das sich zur Herstellung von Polyen enthaltenden Liposomen bei Suspension in einer wäßrigen Lösung eignet. Gemäß einem Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Herstellung eines präliposomalen Pulvers für Polyenliposomen, das die Stufen des Mischens mindestens eines Phospholipids mit tert.-Butylalkohol unter Bildung einer ersten Lösung; des Mischens der ersten Lösung mit Wasser unter Bildung einer geklärten ersten Lösung; des Mischens von Polyen mit einem zweiten organischen Lösungsmittel, das unter Dimethylsulfoxid und Dimethylformamid ausgewählt ist, unter Bildung einer zweiten Lösung; des Mischens der geklärten ersten Lösung und der zweiten Lösung unter Bildung einer klaren gemischten Lösung; und der Entfernung des Lösungsmittels aus der gemischten Lösung durch Lyophilisieren umfaßt. Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform dieses Aspekts der vorliegenden Erfindung umfaßt das Verfahren zur Herstellung eines präliposomalen Pulvers für Nystatinliposomen die Stufen des Mischens von Dimyristoylphosphatidylcholin (DMPC) und Dimyristoylphosphatidylglycerin (DMPG) mit tert.-Butylalkohol unter Bildung einer ersten Lösung; des Mischens der ersten Lösung mit Wasser unter Bildung einer geklärten ersten Lösung; des Mischens von Nystatin mit Dimethylsulfoxid unter Bildung einer zweiten Lösung; des Mischens der geklärten ersten Lösung und der zweiten Lösung unter Bildung einer klaren gemischten Lösung; und der Entfernung von tert.-Butylalkohol und Dimethylsulfoxid aus der gemischten Lösung durch Lyophilisieren.
Gemäß einem weiteren Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Herstellung einer parenteral verabreichbaren Polyenzubereitung, das die Stufen des Mischens mindestens eines Phospholipids mit tert.-Butylalkohol unter Bildung einer ersten Lösung; des Mischens der ersten Lösung mit Wasser unter Bildung einer geklärten ersten Lösung; des Mischens von Polyen mit einem zweiten organischen Lösungsmittel, das unter Dimethylsulfoxid und Dimethylformamid ausgewählt ist, unter Bildung einer zweiten Lösung; des Mischens der geklärten ersten Lösung und der zweiten Lösung unter Bildung einer klaren gemischten Lösung; der Entfernung des Lösungsmittels aus der gemischten Lösung durch Lyophilisieren und der dabei erfolgenden Bildung eines präliposomalen Pulvers; und der Zugabe eines pharmazeutisch verträglichen Lösungsmittels zu dem präliposomalen Pulver umfaßt.
Gemäß einem weiteren Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung ein präliposomales Pulver für Polyenliposomen, das nach einem Verfahren hergestellt wurde, das die Stufen des Mischens mindestens eines Phospholipids mit tert.-Butylalkohol unter Bildung einer ersten Lösung; des Mischens der ersten Lösung mit Wasser unter Bildung einer geklärten ersten Lösung; des Mischens von Polyen mit einem zweiten organischen Lösungsmittel, das unter Dimethylsulfoxid und Dimethylformamid ausgewählt ist, unter Bildung einer zweiten Lösung; des Mischens der geklärten ersten Lösung und der zweiten Lösung unter Bildung einer klaren gemischten Lösung; und des Entfernens des Lösungsmittels aus der gemischten Lösung durch Lyophilisieren umfaßt, wobei ein präliposomales Pulver zurückbleibt. Eine spezielle Ausführungsform dieses Aspekts der vorliegenden Erfindung ist ein lyophilisiertes Nystatinpulver, das Nystatin, Dimyristoylphosphatidylcholin und Dimyristoylphosphatidylglycerin umfaßt, wobei das Gewichtsverhältnis von DMPC zu DMPG etwa 7:3 beträgt und das Pulver frei von halogenierten Lösungsmitteln ist. Man nimmt an, daß die relativen Anteile von Wasser und tert.-Butylalkohol die Beschaffenheit und Eigenschaften des erhaltenen Pulvers beeinflussen, und zwar einschließlich in der Weise, in der sich das Pulver beim Hydratisieren verhält. Man nimmt an, daß die Polarität der Lösung, wobei der Anteil von Wasser vorzugsweise nicht größer als der Anteil von tert.-Butylalkohol ist, die Organisation des Materials in der Lösung und damit die Beschaffenheit des schließlich gebildeten Pulvers beeinflußt.
Gemäß einem weiteren Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung eine klare, filtrierbare Polyenlösung, die mindestens ein Polyen, mindestens ein Phospholipid, tert.-Butylalkohol und Wasser umfaßt.
Die vorliegende Erfindung sorgt in ihren verschiedenen Aspekten für überraschende Vorteile gegenüber dem Stand der Technik. Zum Beispiel ist festgestellt worden, daß das bloße Mischen von Phospholipiden mit einem organischen Lösungsmittel, wie tert.-Butylalkohol, zu einer Lösung führt, die nicht klar ist und sich daher nicht besonders für die Verwendung bei der Herstellung eines präliposomalen Pulvers eignet. Die vorliegende Erfindung nutzt den überraschenden Befund, daß Wasser zu der Lösung aus Polyen und tert.-Butylalkohol gegeben werden kann, was zu einer klaren Lösung führt, die sich für die Verwendung in den nachfolgenden Stufen des Verfahrens eignet. Die klare Beschaffenheit der Lösung erlaubt einen im wesentlichen gleichförmigen Kontakt zwischen dem Polyen und den Phospholipiden in den nachfolgenden Stufen. Ferner erlaubt es die Filtrierbarkeit dieser Lösung, kontaminierende Mikroorganismen vor der Lyophilisierung ohne weiteres zu entfernen. Der letztgenannte Punkt ist besonders wichtig im Hinblick auf Polyene, wie Nystatin, die ein Autoklavieren als alternative Maßnahme zur Entfernung von Mikroorganismen nicht überstehen würden.
Es ist auch überraschend, daß die klärende Menge an Wasser, die für die Verwendung bei dem erfindungsgemäßen Verfahren erforderlich ist, im Bereich von etwa 10 % der Menge an tert.-Butylalkohol an aufwärts liegen kann. Es ist bekannt, daß in anderen Alkohol-Lipid-Lösungen derartig große Mengen an Wasser nicht verwendet werden können, ohne eine Ausfällung hervorzurufen. Zum Beispiel tritt eine Ausfällung in einer Lösung von Eiphosphatidylcholin in Ethanol auf, wenn die Menge an zugegebenem Wasser 30 % des Volumens an Alkohol übersteigt.
Es ist auch überraschend, daß ein zweites organisches Lösungsmittel, wie Dimethylsulfoxid, zu der klaren Lösung, die die klärende Menge an Wasser enthält, im Zusammenhang mit der Zugabe an Polyen gegeben werden kann, ohne daß eine Fällung der Lipide oder des Polyens hervorgerufen wird. Erneut macht die überraschende klare Beschaffenheit der schließlich erhaltenen Lösung die Lösung einfacher filtrierbar, und auf diese Weise wird das Gesamtverfahren vorteilhafter und wirtschaftlicher. Ohne an eine spezielle Theorie zur Erklärung dieser überraschenden Ergebnisse gebunden sein zu wollen, nimmt man an, daß tert.-Butylalkohol einen Solvatationskomplex mit den Phospholipiden bildet, wobei der Komplex sich selbst zu einer micellulären Konfiguration ordnet, so daß er selbst in einem großen Überschuß von Wasser oder Lösungsmittel klar bleibt. Man nimmt auch an, daß das Polyen sich selbst zu einem Komplex, der möglicherweise von micellulärer Beschaffenheit ist, in Gegenwart der Phospholipide ordnet.
Die vorliegende Erfindung erleichtert die Formulierung und Rekonstitution von Polyenliposomen aus einem gegen Abbau beständigen präliposomalen Pulver. Die Einfachheit der vorliegenden Erfindung macht sie für Herstellungsverfahren im großen Maßstab geeignet. Ferner wird ein stabiles Pulver gebildet, daß ohne weiteres für mindestens ein Jahr gelagert werden kann. Darüber hinaus bildet das erfindungsgemäße Produkt bei Rekonstitution multilamellare Liposomen, die eine mittlere Größe aufweisen, die für die Verabreichung an Menschen geeignet ist, z.B. bei der systemischen Verabreichung von liposomalem Nystatin zur Behandlung von Pilz- oder Virusinfektionen.
Ein erfindungsgemäßes Verfahren kann die folgenden Stufen umfassen. Zuerst werden ein oder mehrere Phospholipide mit tert.-Butylalkohol gemischt. Die Phospholipide, die verwendet werden können, sind diejenigen, die für die Herstellung von Liposomen geeignet sind, und sie sind dem Fachmann bekannt. Zwei spezielle Beispiele, die in der vorliegenden Erfindung besonders bevorzugt sind, sind Dimyristoylphosphatidylcholin und Dimyristoylphosphatidylglycerin. Das bevorzugte Gewichtsverhältnis von DMPC:DMPG beträgt ungefähr 7:3. Das Verhältnis von Phospholipid zu erstem organischem Lösungsmittel liegt vorzugsweise zwischen etwa 10 g : 160 cm³ und etwa 10 g : 640 cm³ und insbesondere bei etwa 10 g : 320 cm³. Das Mischen von Phospholipid und tert.-Butylalkohol erzeugt eine erste Lösung.
Eine klärende Menge an Wasser wird dann zu der ersten Lösung gegeben, was zu einer Klärung der Lösung führt. Eine "klärende Menge an Wasser", bedeutet im vorliegenden Patent eine Menge an Wasser, die wirksam zur Klärung einer bereits bestehenden Lösung von Phospholipid und tert.- Butylalkohol ist. Diese Menge an Wasser entspricht vorzugsweise mindestens 10 Gew.-% der Menge an tert.-Butylalkohol in der ersten Lösung. Die klärende Menge an Wasser kann bis zu 100 Gew. -% der Menge an tert.-Butylalkohol betragen, und sie kann sogar darüber liegen. Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform beträgt das Volumenverhältnis von Wasser zu tert.- Butylalkohol etwa 1:4. Mit anderen Worten: Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform beträgt das Verhältnis von Phospholipid zu tert.-Butylalkohol zu Wasser 10 g : 320 cm³ : 80 cm³.
Die nächste Stufe besteht im Mischen mindestens eines Polyens mit einem zweiten organischen Lösungsmittel, das unter Dimethylsulfoxid und Dimethylformamid ausgewählt ist, unter Bildung einer zweiten Lösung. Das Verhältnis von Polyen zu zweitem organischem Lösungsmittel liegt vorzugsweise im Bereich von etwa 1 g : 5 ml bis etwa 1 g : 25 ml. Geeignete Polyene umfassen Nystatin, Amphotericin B, Filipin, Hamycin und Mepartricin. Nystatin ist besonders bevorzugt. Geeignete zweite organische Lösungsmittel umfassen Dimethylsulfoxid (DMSO) und Dimethylformamid. Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung beträgt das Verhältnis von Nystatin zu DMSO ungefähr 1 g : 7 ml.
Die erste und die zweite Lösung können vor dem Mischen z.B. durch eine Filterpatrone mit einer Porengröße von 0,45 um getrennt filtriert werden. Kontaminierendes Material, das vorhanden ist, wie Mikroorganismen, kann jedoch üblicherweise durch eine einzige Filtrationsstufe unmittelbar vor der Entfernung der organischen Lösungsmittel aus der gemischten Lösung entfernt werden. Wenn die Menge an verunreinigendem Material, die in der gemischten Lösung vorhanden ist, zu Problemen bei der Filtration führt, dann können in zweckmäßiger Weise zusätzliche Filtrationsstufen vorgesehen werden.
Die geklärte erste Lösung wird dann mit der zweiten Lösung unter Bildung einer klaren gemischten Lösung gemischt. Vorzugsweise beträgt die Konzentration an Nystatin in der gemischten Lösung etwa 2,5 bis 2,75 mg/ml, und die Konzentration an Phospholipid beträgt etwa 25 bis 27,5 mg/ml. Man nimmt an, daß das Verhältnis von Feststoffen zu Flüssigkeit in dieser Lösung wichtig für die einfache Rekonstitution des präliposomalen Pulvers zu Liposomen ist, wenn Wasser zugegeben wird. Wenn die Feststoffkonzentration zu hoch ist, dann ist das erhaltene trockene Produkt dichter als optimal und verhält sich bei der Rekonstitution nicht so gut wie gewünscht.
Sodann werden die organischen Lösungsmittel aus der gemischten Lösung durch Lyophilisieren unter Bildung eines präliposomalen Pulvers entfernt. Das Pulver kann zu einer wäßrigen Formulierung von Polyenliposomen durch Zugabe eines pharmazeutisch verträglichen Lösungsmittels, wie Wasser oder Kochsalzlösung, rekonstituiert werden.
Nachstehend wird ein spezielles Beispiel dafür vorgelegt, wie das erfindungsgemäße Verfahren durchgeführt werden kann. Die nachstehend angegebenen Mengen dienen als Beispiel und können proportional erhöht werden.
7 g Dimyristoylphosphatidylcholin und 3 g Dimyristoylphosphatidylglycerin (Lipoid KG, Ludwigshafen, Deutschland) werden in ein erstes Mischgefäß gegeben. In dieses Gefäß werden 250 ml tert.-Butylalkohol gegeben, und die Lösung wird gemischt. Diese erste Lösung ist zu diesem Zeitpunkt trüb. Anschließend werden 250 ml Wasser zugegeben und bis zum Auflösen gemischt, was zu einer geklärten Lösung führt. Nystatin (1,1 g, American Cyanamid, Pearl River, N.Y.) wird getrennt davon in ein zweites Mischgefäß gegeben, und 7 ml Dimethylsulfoxid werden zugegeben. Die theoretische Menge an Nystatin, die für diese spezielle Zubereitung erforderlich ist, beträgt 1 g (Gewichtsverhältnis Nystatin : Phospholipid von 1:10), es ist jedoch bevorzugt, 110 % der theoretisch erforderlichen Menge zuzugeben. Diese zweite Lösung wird bis zum Auflösen gemischt, und sie wird mit der ersten Lösung unter Bildung einer gemischten Lösung gemischt, die klar gelb ist.
Die gemischte Lösung wird auf die Nystatin-Konzentration durch einen spektrophotometrischen Assay analysiert. Falls dies zur Korrektur der Konzentration erforderlich ist, wird ein geeignetes Volumen an einem Verdünnungsmittel, wie Wasser, zugegeben.
Sodann wird die gemischte Lösung durch eine sterile Membran mit einer Porengröße von 0,22 um geleitet, und 20 ml des Filtrats werden in ein 100 ml fassendes Fläschchen überführt. Ein Lyophilisierungsstopfen wird dann locker auf das gefüllte Fläschchen gegeben, und das Fläschchen wird in eine sterile Lyophilisierungskammer gegeben, in der die Lösungsmittel entfernt werden. Während das Fläschchen in die Kammer gegeben wird, wird eine Thermoelementsonde in das Fläschchen eingeführt, um in der Lage zu sein, seine Temperatur während des Gefriertrockenverfahrens zu überwachen. Wenn mehrere Fläschchen in die Kammer gegeben werden, dann werden Thermoelemente so angeordnet, daß ein vernünftiger Querschnitt der Kammer überwacht werden kann (z.B. oberer, mittlerer und unterer Bereich der Kammer).
Das im Kreis geführte Fluid in der Gefriertrockenkammer wird auf -45ºC eingestellt. Die Kammer wird dann auf ein Vakuum von nicht mehr als 200 um evakuiert. Die Temperatur des im Kreis geführten Fluids wird dann auf 10ºC in mindestens etwa 24 Stunden mit einer ungefähren Geschwindigkeit von 2,3ºC/Stunde erhöht. Das Kammervakuum wird eingestellt, so daß es langsam den Bereich von 60 bis 100 um überstreicht, und zwar unter Verwendung von N zur Steuerung der Sweep-Geschwindigkeit. Wenn das kälteste Thermoelement -5ºC erreicht, dann wird das im Kreis geführte Fluid auf 28ºC über mindestens 4 Stunden mit einer ungefähren Geschwindigkeit von 5,5ºC/Stunde erwärmt. Wenn das kälteste Thermoelement 28ºC erreicht, dann befindet sich das Produkt bei der abschließenden Trockentemperatur und wird für etwa 12 bis 30 Stunden bei dieser Temperatur gehalten. Am Ende dieser Zeit wird die Kammer unter Verwendung von N und NF, die durch einen mikrobiologischen Rückhaltefilter geleitet werden, auf atmosphärischen Druck eingestellt. Vor dem Entladen der Gefriertrockenkammer wird die Temperatur des im Kreis geführten Fluids auf 25ºC eingestellt. Am Ende dieses Lyophilisierungszyklus sind die Fläschchen mit Stickstoffgas gefüllt, und die Verschlüsse sind vollständig verschlossen. Das lyophilisierte Pulver weist ein blaßgelbes Aussehen auf und enthält weniger als 2 % restlichen tert.-Butylalkohol und weniger als 1 % restliches Dimethylsulfoxid.
Die Formulierung wird durch Zugabe von etwa 50 ml Wasser zu dem Pulver pro 1 g Polyen rekonstituiert. Es ist bevorzugt, die Lösung auf über 27ºC, insbesondere auf zwischen etwa 30ºC und 45ºC, für etwa 15 bis 60 Minuten zu erwärmen, um den Hydratisierungsprozeß zu unterstützen. Das Pulver verteilt sich zunächst in Klumpen mit einem Durchmesser von mehreren 10 um. Wenn die Lösung erwärmt wird, dann werden die Klumpen hydratisiert und bilden spontan Liposomen. Die Temperatur, bei der dieser Übergang auftritt, kann seine Ursache in der Phasenübergangstemperatur der Lipide haben, die für die vorstehend beschriebenen Materialien bei etwa 23ºC liegt.
Nach der Rekonstitution beträgt die mittlere Teilchengröße etwa 2 bis 3 um, wobei nicht mehr als 1 % einen Durchmesser über 8 um aufweisen. Der Aufnahmewirkungsgrad von Arzneistoff in die Liposomen ist größer als 90 % und kann 100 % erreichen.
Die vorstehende Beschreibung soll die vorliegende Erfindung erläutern. Sie soll keine umfassende Liste aller möglichen Ausführungsformen der Erfindung darstellen. Fachleute auf diesem Gebiet erkennen, daß Modifizierungen ausgehend von der vorstehend vorgelegten Beschreibung durchgeführt werden können, die im Schutzumfang der Erfindung bleiben.

Claims

1. Verfahren zur Herstellung eines präliposomalen Pulvers für Polyenliposomen, das folgende Stufen umfaßt:

(a) Mischen mindestens eines Phospholipids mit tert.-Butylalkohol unter Bildung einer ersten Lösung;

(b) Mischen der ersten Lösung mit Wasser, um eine geklärte erste Lösung zu erhalten;

(c) Mischen von Polyen mit einem organischen Lösungsmittel, das unter Dimethylsulfoxid und Dimethylformamid ausgewählt ist, unter Bildung einer zweiten Lösung;

(d) Mischen der geklärten ersten Lösung und der zweiten Lösung unter Bildung einer klaren gemischten Lösung; und

(e) Entfernen der Lösungsmittel aus der gemischten Lösung durch Lyophilisieren.

2. Verfahren nach Anspruch 1, wobei es sich bei dem Polyen um Nystatin handelt.

3. Verfahren nach Anspruch 1, wobei das Wasser in einer Menge von mindestens 10 Vol.-% der Menge an tert.-Butylalkohol verwendet wird.

4. Verfahren nach Anspruch 1, wobei es sich bei den Phospholipiden um Dimyristoylphosphatidylcholin (DMPC) und Dimyristoylphosphatidylglycerin (DMPG) handelt.

5. Verfahren nach Anspruch 4, wobei das Verhältnis von DMPC zu DMPG 7:3, bezogen auf das Gewicht, beträgt.

6. Verfahren nach Anspruch 1, wobei das Verhältnis von Phospholipid zu tert.-Butylalkohol in Stufe (a) 10 g : 160 ml bis 10 g : 640 ml beträgt.

7. Verfahren nach Anspruch l, wobei das Verhältnis von Polyen zu organischem Lösungsmittel in Stufe (c) 1 g : 5 ml bis 1 g : 25 ml beträgt.

8. Verfahren nach Anspruch 1, ferner umfassend die Zugabe eines pharmazeutisch verträglichen Lösungsmittels zu dem präliposomalen Pulver, wobei eine parenteral verabreichbare Polyenzubereitung hergestellt wird.

9. Präliposomales Pulver für Polyenliposomen, das nach dem Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8 erhältlich ist.

10. Klare, filtrierbare Polyenlösung, umfassend mindestens ein Polyen, mindestens ein Phospholipid, tert.-Butylalkohol und Wasser.

11. Polyenlösung nach Anspruch 10, wobei das Polyen und/oder die Phospholipide und/oder das Wasser den Definitionen in einem der Ansprüche 2, 4 bis 7 und 3 entsprechen.

12. Polyenlösung nach Anspruch 10, ferner umfassend Dimethylsulfoxid.

13. Polyenlösung nach Anspruch 10, die frei von halogenierten Lösungsmitteln ist.