DE60318387T2 - Polyphenole enthaltende pharmazeutische nahrungsmittelergänzungsformel und ihre anwendung in der krebsbehandlung - Google Patents

Polyphenole enthaltende pharmazeutische nahrungsmittelergänzungsformel und ihre anwendung in der krebsbehandlung Download PDF

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Description

  • GEBIET DER ERFINDUNG
  • Die vorliegende Erfindung betrifft eine pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelformulierung und ihre Verwendung bei der Behandlung von Krebs. Insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung Polyphenolenthaltende pharmazeutische Formulierungen mit einer wirksamen Menge an Polyphenolen zur Behandlung von Krebs. Die Formulierung gemäß der vorliegenden Erfindung wird als Mittel für die Vorbeugung und Behandlung von Krebs verwendet und umfasst Ascorbinsäure, Lysin, Prolin und wenigstens eine Polyphenol-Komponente, die aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Epigallocatechingallat, Epicatechingallat, Epigallocatechin, Epicatechin und Catechin besteht.
  • HINTERGRUND DER ERFINDUNG
  • Krebs ist eine der häufigsten Todesursachen in der industrialisierten Welt. Es gibt keine spezifische und kausale Behandlung von Krebs, und die Mortalität von Krebs gehört zu den höchsten aller Erkrankungen. Die am häufigsten verwendeten Behandlungsweisen, nämlich Chemotherapie und Strahlentherapie, unterscheiden nicht zwischen gesundem Gewebe und Krebs und sind mit schweren Nebenwirkungen verbunden. Es besteht daher Bedarf an einer selektiven Behandlung von Krebs.
  • Einer der zentralen Mechanismen, die Krebszellen bei der Ausbreitung und Metastasierung im Körper verwenden, ist mit der enzymatischen Zerstörung des umgebenden Bindegewebes verbunden. Therapeutische Ansätze, um diesen Vorgang durch spezifische Arzneimittel unter Kontrolle zuhalten, sind erfolglos geblieben, und gegenwärtig sind keine Mittel zum Beherrschen der Krebsmetastasierung verfügbar. Gegenwärtige Behandlungsprotokolle mit Chemotherapie und Strahlentherapie sind auf die Zerstörung von Krebszellen im Körper gerichtet und sprechen die Metastasierung nicht an. Darüber hinaus sind diese Behandlungen toxisch, nichtspezifisch und mit schweren Nebenwirkungen verbunden. Chemotherapie und Strahlentherapie tragen ein Risiko für die Entwicklung neuer Krebserkrankungen und können durch ihre Zerstörung von Bindegewebe im Körper die Invasion von Krebs erleichtern.
  • Um zu wachsen und sich auf andere Teile des Körpers auszubreiten, bauen Krebszellen die extrazelluläre Matrix durch verschiedene Matrix-Metalloproteinasen (MMPs) und Plasmin ab, deren Aktivität mit der Aggressivität des Tumorwachstums in Beziehung gebracht worden sind. Rath und Pauling (1992) haben postuliert, dass Nahrungsergänzungsmittel, wie z. B. die Aminosäure Lysin und Ascorbinsäure, als natürliche Inhibitoren der Proteolyse der extrazellulären Matrix wirken können und daher das Potential zur Beeinflussung von Tumorwachstum und -ausbreitung haben. Diese Nahrungsergänzungsmittel können ihr Antitumorpotential über mehrere Mechanismen ausüben, darunter durch die Hemmung von MMPs und die Stärkung des Bindegewebes, das die Krebszellen umgibt (Wirkung einer Tumor-„Einkapselung").
  • Die U.S.-Patentschrift Nr. 5,962,517 offenbart eine pharmazeutische Zusammensetzung für eine andere medizinische Indikation (Behandlung von Akne). Die offenbarte Zusammensetzung umfasst eine Komponente zum Verringern von Akne, wenigstens eines von Klettwurzel, Wurzel des krausen Ampfers oder eine Zusammensetzung auf Catechinbasis; und eine Komponente zur Konditionierung von Hautzellen, die ein Übergangsmetall umfasst. Von der offenbarten Zusammensetzung wird kein Nutzen bei der Behandlung und/oder Vorbeugung von Krebs gezeigt.
  • PCT WO 00/76492 offenbart eine Nahrungsergänzungsmittelformulierung zur Erkrankungsverringerung, die eine CatechinKomponente umfasst. Es ist jedoch gezeigt worden, dass die biologische Verfügbarkeit von Catechinkomponenten nur gering ist (Chen L., Lee M. J., Yang C. S., Drug Metab. Dispos. 25: 1045–1050 (1997); Yang C. S., Chen L., Lee M. J., Balentine D. A., Kuo M. C., Schantz S., Cancer Epidemol. Biomark. Prev. 7: 351–35 (1998); Bell J. R., Donovan J. L., Wong R., Waterhouse H., German J. B., Walzem R. L., Kasim K., Am. J. Clin. Nutr. 71: 103–108 (2000); Sherry Chow H. H., Cai Y., Alberts D. S., Hakim I., Dorr R., Shahi F., Crowell J. A., Yang S. C., Hara H., Cancer Epidemol. Biomark. Prev. 10: 53–58 (2001)), wobei PCT WO 00/76492 kein Mittel zum Erhöhen der biologischen Verfügbarkeit, wie es bei der Behandlung und/oder Vorbeugung von Krebs notwendig ist, offenbart.
  • PCT WO 00/57875 offenbart die Verwendung von Catechinen zur Behandlung von Krebs.
  • Demeule et al. offenbaren, dass Catechine aus grünem Tee eine hemmende Wirkung auf die Matrix-Metalloproteinase zeigen können. Es gibt jedoch keinen Vorschlag und keine Lehre darüber, wie Catechine bei der Behandlung und/oder Vorbeugung von Krebs zu verwenden sind. Auf Grund des Umstands, dass die biologische Verfügbarkeit von Polyphenolen bei Menschen außerordentlich gering ist, wird durch die geringe Gewebekonzentration von Catechinen der therapeutische Wert von Polyphenolen, einschließlich Epigallocatechingallat (EGCG), sehr stark verringert. Es besteht anhaltender Bedarf an der Entwicklung einer besseren pharmazeutischen Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung mit Polyphenolen, die bei der Behandlung von neoplastischen Erkrankungen und anderen Erkrankungen, einschließlich entzündlichen Erkrankungen, wirksam ist.
  • Es besteht Bedarf an sicheren und wirkungsvollen natürlichen Ansätzen, die zum Beherrschen des Vorgangs der Krebsausbreitung im Körper verwendet werden können.
  • Es besteht auch Bedarf an einem vorbeugenden Mittel gegen die Entwicklung von Krebserkrankungen oder gutartigen Tumoren im Menschen, wobei ein solches Mittel ohne das Risiko von behandlungsbezogenen Nebenwirkungen bei Patienten angewendet werden könnte. Pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzungen sind beliebt geworden, da die Inzidenz von Krebs in letzter Zeit zunimmt. Der Bedarf an einer solchen Zusammensetzung wird weiter bestehen bleiben und vermutlich sogar zunehmen.
  • ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
  • Bei einer Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung bereit, die bei der Behandlung von Krebs von Nutzen ist, umfassend: a) eine Ascorbin-Komponente; b) eine L-Lysin-Komponente; c) eine L-Prolin-Komponente; und d) wenigstens eine Polyphenol-Komponente, die aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Epigallocatechingallat, Epicatechingallat, Epigallocatechin, Epicatechin und Catechin besteht. Die Komponenten a–c) verbessern die Wirkung der Polyphenol-Komponente beim Blockieren der Krebsproliferation und -metastasierung.
  • Vorzugsweise ist die Ascorbin-Komponente aus der Gruppe ausgewählt, die aus Ascorbinsäure, pharmazeutisch verträglichen Ascorbatsalzen, Ascorbatestern und/oder Gemischen davon besteht. Vorzugsweise ist das pharmazeutisch verträgliche Ascorbatsalz Calciumascorbat oder Magnesiumascorbat. Stärker bevorzugt ist der Ascorbatester Ascorbylpalmitat. Vorzugsweise ist die Lysin-Komponente aus der Gruppe ausgewählt, die aus Lysinhydrochlorid und pharmazeutisch verträglichen Lysinsalzen besteht. Vorzugsweise ist die Prolin-Komponente aus der Gruppe ausgewählt, die aus Prolinhydrochlorid und pharmazeutisch verträglichen Prolinsalzen besteht.
  • Bei einer weiteren Ausführungsform umfasst die vorliegende pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung ferner ein Spurenelement, das aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Selen, Kupfer, Mangan, Calcium und Magnesium besteht.
  • Bei einer weiteren Ausführungsform umfasst die vorliegende pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung ferner eine Aminosäure. Vorzugsweise ist die Aminosäure Arginin. Stärker bevorzugt umfasst die vorliegende pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung ferner N-Acetylcystein.
  • Bei einer weiteren Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung bereit, die bei der Behandlung von Krebs von Nutzen ist, umfassend: a) eine Ascorbin-Komponente; b) eine L-Lysin-Komponente; c) eine L-Prolin-Komponente; d) N-Acetylcystein; und e) wenigstens eine Polyphenol-Komponente, die aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Epigallocatechingallat, Epicatechingallat, Epigallocatechin, Epicatechin und Catechin besteht. Die Komponenten a–d) verbessern die Wirkung der Polyphenol-Komponente beim Blockieren der Krebsproliferation und -metastasierung.
  • Bei einer weiteren Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung bereit, umfassend 250 mg Ascorbinsäure, 250 mg Calciumascorbat, 250 mg Magnesiumascorbat, 250 mg Ascorbylpalmitat, 1.000 mg Polyphenole, 200 mg N-Acetylcystein, 1.000 mg Lysin, 750 mg Prolin, 500 mg Arginin, 30 mcg Selen, 2 mg Kupfer und 1 mg Mangan.
  • Bei einer weiteren Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung bereit, umfassend 25 mg Ascorbinsäure, 25 mg Calciumascorbat, 25 mg Magnesiumascorbat, 25 mg Ascorbylpalmitat, 200 mg Polyphenole, 10 mg N-Acetylcystein, 50 mg Lysin, 25 mg Prolin, 50 mg Arginin, 1 mcg Selen, 20 mcg Kupfer und 50 mcg Mangan.
  • Bei einer weiteren Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung bereit, umfassend 5.000 mg Ascorbinsäure, 5.000 mg Calciumascorbat, 5.000 mg Magnesiumascorbat, 5.000 mg Ascorbylpalmitat, 5.000 mg Polyphenole, 1.500 mg N-Acetylcystein, 5.000 mg Lysin, 3.000 mg Prolin, 3.000 mg Arginin, 200 mcg Selen, 9 mg Kupfer und 10 mg Mangan.
  • Bei einer weiteren Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung bereit, umfassend 250 mg Ascorbinsäure, 250 mg Calciumascorbat, 250 mg Magnesiumascorbat, 250 mg Ascorbylpalmitat, 1.000 mg Polyphenole, 200 mg N-Acetylcystein, 1.000 mg Lysin, 750 mg Prolin, 500 mg Arginin, 100 mcg Selen, 2 mg Kupfer, 1 mg Mangan, 500 mg Calcium und 400 mg Magnesium.
  • Bei noch einer weiteren Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung bereit, umfassend 250 mg Ascorbinsäure, 250 mg Calciumascorbat, 250 mg Magnesiumascorbat, 250 mg Ascorbylpalmitat, 1.000 mg Polyphenole, 200 mg N-Acetylcystein, 1.000 mg Lysin, 750 mg Prolin, 500 mg Arginin, 100 mcg Selen, 2 mg Kupfer, 1 mg Mangan, 500 mg Calcium, 400 mg Magnesium und 200 mg Citrus-Bioflavonoide.
  • Bei noch einer weiteren Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung bereit, die bei der Behandlung von Krebs von Nutzen ist, umfassend L-Lysin, L-Prolin, L-Arginin, Ascorbinsäure, Calcium, Magnesium, Polyphenole, N-Acetylcystein, Selen, Kupfer und Mangan.
  • Bei einer weiteren Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung eine pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung bereit, umfassend 1.000 mg L-Lysin, 750 mg L-Prolin, 500 mg L-Arginin, 710 mg Ascorbinsäure, 22 mg Calcium, 50 mg Magnesium, 1.000 mg Polyphenole, 200 mg N-Acetylcystein, 30 mcg Selen, 2 mg Kupfer und 1 mg Mangan.
  • Bei einer weiteren Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung ein Verfahren zum Behandeln von Krebs bei einem Individuum bereit, umfassend den Schritt der Verabreichung der offenbarten pharmazeutischen Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzungen an das Individuum. Vorzugsweise ist der Krebs aus der Gruppe ausgewählt, die aus Melanomen, Brustkrebs, Darmkrebs, Lungenkrebs und Hirnkrebs besteht.
  • Bei einer weiteren Ausführungsform stellt die vorliegende Erfindung ein Verfahren zum Behandeln einer entzündlichen Erkrankung bei einem Individuum bereit, umfassend den Schritt der Verabreichung der offenbarten pharmazeutischen Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzungen an das Indiviuum. Vorzugsweise ist die entzündliche Erkrankung Osteoarthritis.
  • KURZE BESCHREIBUNG DER ABBILDUNGEN
  • 1 zeigt die hemmende Wirkung von Polyphenolen, Ascorbat, Prolin und Lysin auf das Wanderungsverhalten von menschlichen Brustkrebszellen.
  • 2 zeigt die hemmende Wirkung von Polyphenolen, Ascorbat, Prolin und Lysin auf das Wanderungsverhalten von menschlichen Darmkrebszellen.
  • 3 zeigt die hemmende Wirkung von Polyphenolen, Ascorbat, Prolin und Lysin auf das Wanderungsverhalten von menschlichen Melanomzellen.
  • 4 zeigt die hemmende Wirkung von Polyphenol, Ascorbat, Prolin und Lysin auf die Apoptose von menschlichen Melanomzellen.
  • 5 zeigt die hemmende Wirkung von Ascorbinsäure, Prolin, Lysin und verschiedenen Mengen EGCG auf die Zellproliferation von menschlichen Melanomzellen (A 2058).
  • 6 zeigt die hemmende Wirkung von EGCG auf die Zellproliferation von menschlichen Brustkrebszellen (MDA-MB 231).
  • 7 zeigt die Wirkung der Ergänzung des Grundmediums mit Ascorbinsäure, Prolin, Lysin und verschiedenen Mengen EGCG auf die Zellproliferation von menschlichen Brustkrebszellen (MDA-MB 231).
  • 8 zeigt die Wirkung der Ergänzung des Grundmediums mit Ascorbinsäure, Prolin, Lysin und verschiedenen Mengen EGCG auf die Zellproliferation von menschlichen Darmkrebszellen (HCT 116).
  • 9 zeigt die Wirkung der Ergänzung des Grundmediums mit Ascorbinsäure, Prolin, Lysin und verschiedenen Mengen EGCG auf die Expression von Matrix-Metalloproteinasen (MMP) in menschlichen Melanomzellen.
  • 10 zeigt die Wirkung der Ergänzung des Grundmediums mit Ascorbinsäure, Prolin, Lysin und verschiedenen Mengen EGCG auf die Matrigel-Invasion von menschlichen Brustkrebszellen (MDA-MB 231).
  • 11 zeigt die Wirkung der Ergänzung des Grundmediums mit Ascorbinsäure, Prolin, Lysin und verschiedenen Mengen EGCG auf die Matrigel-Invasion von menschlichen Darmkrebszellen (HTC 116).
  • 12 zeigt die Wirkung der Ergänzung des Grundmediums mit Ascorbinsäure, Prolin, Lysin und verschiedenen Mengen EGCG auf die Verringerung der Anzahl von invadierenden Zellen bei menschlichen Melanomzellen (A 2058).
  • AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
  • Wie hier verwendet, wird „Lysin" austauschbar mit L-Lysin verwendet, „Prolin" wird austauschbar mit L-Prolin verwendet, „Arginin" wird austauschbar mit L-Arginin verwendet; „Vitamin C" wird austauschbar mit Ascorbinsäure verwendet und kann Ascorbatsalze und Ascorbatester umfassen. „MMPs" bezieht sich auf Matrix-Metalloproteinasen, wie z. B. MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP7, MMP-8, MMP-9, MMP-10, MMP-11 und so weiter. „EGCG" bezieht sich auf (–)-Epigallocatechin-3-gallat, bei dem es sich um den Hauptbestandteil an Polyphenolen von grünem Tee handelt. „NHDF" bezieht sich auf normale menschliche Hautfibroblasten, umfassend menschliche Chondrozyten und menschliche Stromazellen.
  • Die vorliegende Erfindung stellt eine pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung bereit, die Ascorbinsäure, Lysin, Prolin und wenigstens eine Polyphenol-Komponente umfasst. Vorzugsweise ist die AscorbatKomponente aus der Gruppe ausgewählt, die aus Ascorbinsäure, Ascorbatsalzen und Ascorbatestern besteht. Vorzugsweise ist Lysin Lysinhydrochlorid oder pharmazeutisch verträgliche Lysinsalze. Vorzugsweise ist Prolin Prolinhydrochlorid oder pharmazeutisch verträgliche Prolinsalze davon.
  • Polyphenol-Komponenten sind Extrakte von grünem Tee. Sie sind auch als Catechine bekannt. Polyphenole sind in grünem Tee vorhanden, und es ist vermutet worden, dass sie Schutz gegen eine Vielfalt von Erkrankungen bieten, einschließlich gegen Krebs (Mukhtar H., Ahmed N., Am. J. Clin. Nutr. 71: 1698S–1702S (2000)). Die orale Verabreichung von grünem Tee erhöhte die tumorhemmende Wirkung von Doxorubicin bei Mäusen. Die mögliche Antikrebswirkung von Catechinen könnte mit ihrer Wirkung auf mehrere Faktoren, die bei der Proliferation von Krebszellen und ihrer Metastasierung beteiligt sind, in Beziehung stehen. Es ist bekannt, dass Catechine den Zellzyklus von menschlichen Karzinomzellen stoppen (Ahmad N., Feyes D. K., Nieminen A. L., Agarwal R., Mukhtar H., J. Natl. Cancer Inst. 89: 1881–1886 (1997)). Es wird auch angenommen, dass die Polyphenolfraktion von grünem Tee gegen Entzündung und von Tumoren hervorgerufene Zytokine schützt.
  • Polyphenol-Komponenten stellen 30% des Trockengewichts von grünem Tee dar. Sie umfassen Flavanole, Flavandiole, Flavonoide und Phenolsäuren. Flavanole sind die häufigsten der Polyphenole in grünem Tee und sind allgemein als Catechine bekannt. In grünem Tee sind hauptsächlich vier Catechine vorhanden: 1) (–)-Epicatechin, 2) (–)-Epicatechin-3-gallat, 3) (–)-Epigallocatechin und 4) (–)-Epigallocatechin-3-gallat (EGCG). Unter den Catechinen ist EGCG der hauptsächliche Polyphenolbestandteil von grünem Tee. EGCG ist eine wirkungsvolle antioxidierende Komponente, der die Antikrebswirkung von grünem Tee zugeschrieben werden kann. Es ist berichtet worden, dass Catechinkomponenten ihre antimetastatische Wirkung durch Verhindern der Angiogenese ausüben (Cao Y., Cao R., Nature 398: 381 (1999)). Es ist auch gezeigt worden, dass EGCG die Wirkung der Urokinase (u-Plasminogen-Aktivator) stört (Jankun J., Selman S. H., Swiercz R., Skrzypczak J. E., Nature: 387–567 (1997)), einem der am häufigsten exprimierten Enzyme in menschlichen Krebsarten. EGCG ist eine bevorzugte Polyphenol-Komponente.
  • Die Polyphenol-Komponente ist vorzugsweise aus der Gruppe ausgewählt, die aus Epigallocatechingallat, Epicatechingallat, Epigallocatechin, Epicatechin, Catechin und anderen pharmazeutisch verträglichen Polyphenolsalzen und/oder Gemischen davon besteht.
  • Eines der wichtigsten therapeutischen Ziele der vorliegenden Patentanmeldung ist das Verhindern des Abbaus der extrazellulären Matrix sowie deren Wiederherstellung. Ascorbinsäure oder deren Salz (d. h. Ascorbat) wird für die Synthese von Collagen, Elastin und anderen Schlüsselmolekülen der extrazellulären Matrix benötigt.
  • Vorzugsweise wird eine Kombination von Ascorbinsäure, Prolin und Lysin verwendet, um die Antikrebswirkung von Polyphenol-Komponenten zu verbessern. Bevorzugter verstärkt die Kombination die Polyphenol-Komponenten, umfassend Epigallocatechingallat, Epicatechingallat, Epigallocatechin, Epicatechin und Catechin, auf eine solche Weise, dass die Polyphenol-Komponente zum Verringern der Invasion von Krebszellen oder zum vollständigen Blockieren der Invasion wirksam ist.
  • Ohne Bindung an eine Theorie umfasst die vorliegende pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelformulierung ein Gemisch von Bestandteilen, das Polyphenole umfasst, und es wird gefunden, dass das Gemisch zum Blockieren der Proliferation und der Metastasierung wirkungsvoll ist. Wir haben gefunden, dass die vorliegende Nahrungsergänzungsmittelformulierung die Invasion von Krebszellen wesentlich verringert oder die Metastasierung von Krebszellen vollständig blockiert. Somit verhinderte die Zusammensetzung wirkungsvoll die Ausbreitung der Krebszellen. Die therapeutische Verwendung der beanspruchten Komponente ist eine wirkungsvolle, selektive und sichere Behandlung von Krebs der Brust, des Darms und anderer Organe. Vorzugsweise kann die offenbarte pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung zwei der Komponenten kovalent gebunden enthalten.
  • Vorzugsweise wird die Wirksamkeit der Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung durch Einschließen von Komponenten, von denen eine vorteilhafte Beeinträchtigung des Wachstums und der Invasion von Krebs und anderen Tumoren bekannt ist, einschließlich L-Arginin und/oder Arginin-enthaltende Komponenten, verbessert. Stärker bevorzugt wird N-Acetylcystein verwendet. Stärker bevorzugt wird ein Selensalz, ein Kupfersalz und ein Mangansalz, die zur Vorbeugung und Behandlung von Krebs und anderen Tumoren wirksam sind, verwendet. Die Zusammensetzung kann auch eine oder mehrere Komponenten, die als Coenzym im Krebsscheu Zyklus, der Atmungskette oder für andere Stoffwechselfunktionen von Zellen notwendig sind, in einer Menge umfassen, die zur Vorbeugung und Behandlung von Krebs und anderen Tumoren wirksam ist.
  • Die vorliegende pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung kann einem Patienten in der Form von Kapseln, Tabletten, Pulvern, Pillen, Injektionen, Infusionen, Inhalationen, Zäpfchen oder anderen pharmazeutisch wirksamen Trägern und/oder Abgabemitteln zur Vorbeugung und Behandlung von Krebs und anderen Tumoren verabreicht werden. Vorzugsweise wird die pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung als Kapseln, Tabletten oder Pulver verabreicht. Stärker bevorzugt wird sie als Kapseln verabreicht.
  • Die vorliegende pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung kann bei der Vorbeugung und Behandlung von Krebs und anderen Tumoren bei einem ausgewählten Patienten verwendet werden, wobei der Tumor oder Krebs in der Brust, den Eierstöcken, der Zervix oder anderen Organen des weiblichen Fortpflanzungssystems, der Lunge, der Leber, der Haut, dem Magen/Darm-System, dem Hirn, den Knochen oder anderen Organen des Körpers lokalisiert ist. Vorzugsweise wird die Zusammensetzung bei Lungenkrebs und Hirnkrebs verwendet.
  • Die vorliegende pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung kann auch bei der Vorbeugung und Behandlung von infektiösen Erkrankungen, Atherosklerose, Restenose, anderen Herz/Kreislauf-Erkrankungen und entzündlichen Erkrankungen verwendet werden. Vorzugsweise ist die entzündliche Erkrankung Osteoarthritis.
  • MMP-vermittelte Aktivierung von Plasmin Es wird gemutmaßt, dass die Wirkung von MMPs von Lysin über plasminvermittelte Mechanismen beeinträchtigt werden kann, obwohl andere Mechanismen nicht ausgeschlossen sind. MMPs werden als Proenzyme abgeschieden, ihre Aktivierung wird teilweise von Plasmin vermittelt und ihre Vervollständigung benötigt die aktive Form von MMP-3. Der von Nagase (1997) ausführlich beschriebene Mechanismus der Aktivierung verschiedener MMPs zeigt, dass MMP-3 auch die Umwandlung von Plasminogen zu seiner aktiven Form, also Plasmin, benötigt. Das aktive Bindungszentrum von Plasminogen weist die Stellen auf, an denen Lysin spezifisch gebunden wird. Aus diesem Grund kann Lysin die Aktivierung von Plasminogen zu Plasmin durch den Plasminogenaktivator stören (Rath und Pauling, 1992), indem es an die aktiven Stellen von Plasminogen bindet. Tranexamsäure, ein synthetisches Analogon von Lysin, ist verwendet worden, um durch diesen Mechanismus die plasmininduzierte Proteolyse zu hemmen.
  • Da die Plasminwirkung zum Induzieren verschiedener Gewebe-MMPs notwendig ist, kann Lysin die Umwandlung von Plasminogen zu Plasmin stören und dadurch die Aktivierung beinahe aller MMPs hemmen. Außerdem kann EGCG durch Hemmen von MMP-2 eine hemmende Wirkung auf den Abbau der extrazellulären Matrix ausüben.
  • Krebsinvasion und die Rolle der Matrix Es ist auch möglich, die Matrixinvasion von Krebszellen durch Erhöhen der Stabilität und Stärke des Bindegewebes, das die Krebszellen umgibt, und durch einen Beitrag zur „Einkapselung" des Tumors zu beeinträchtigen. Dies erfordert das Optimieren der Synthese und der Struktur von Collagenfasern, für welche die Hydroxylierung von Hydroxyprolin- und Hydroxylysinresten in Collagenfasern unentbehrlich ist. Ascorbinsäure kann für die Hydroxylierung dieser Aminosäuren wesentlich sein. Ascorbinsäure und L-Lysin werden normalerweise nicht im menschlichen Körper hergestellt, weshalb bei verschiedenen pathologischen Zuständen und auch bei ungeeigneter Ernährung suboptimale Spiegel dieser Nahrungsergänzungsmittel möglich sind. Obwohl Prolin aus Arginin synthetisiert werden kann, kann seine Synthese oder Hydroxylierung bei pathologischen Zuständen beeinträchtigt sein. So ist gezeigt worden, dass der Gehalt an Hydroxyprolin von metastatischem Tumorgewebe weitaus niedriger als der von nichtmetastatischem Tumorgewebe ist (Chubainskaia et al., 1989). Eine Vielfalt von Arzneimitteln, welche die Metastasierung verringerten, erhöhten zugleich den Gehalt an Hydroxyprolin der Gewebe (Chubinskaia et al., 1989). Es ist gefunden worden, dass der Gehalt an Hydroxyprolin im Harn von Krebspatienten höher ist als der von gesunden Personen oder Nichtkrebs-Patienten (Okazaki et al., 1992). Diese Beobachtungen weisen alle auf nachteilige Wirkungen von Krebszellen auf den Prolinstoffwechsel und einen möglichen abhängigen Prolinmangel bei Krebspatienten hin.
  • Krebspatienten können ungenügende Ascorbinsäurespiegel aufweisen. Ascorbinsäure kann für maligne Zelllinien zytotoxisch sein und übt eine antimetastatische Wirkung aus. Bei der vorliegenden Erfindung wird offenbart, dass eine Kombination von Ascorbinsäure, Prolin, Lysin und wenigstens einer Polyphenol-Komponente eine starke antiproliferative und antimetastatische Wirkung auf Krebszelllinien ausübt. Vorzugsweise ist die vorliegende pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelformulierung gegen Melanom-, Brustkrebs- und Darmkrebszellen wirksam. Am stärksten bevorzugt ist die vorliegende pharmazeutische Formulierung gegen menschliche Darmkrebszellen wirksam.
  • Polyphenol-Komponenten (Catechine): EGCG ist eines der Catechine im Extrakt von grünem Tee und kann wachstumshemmende Wirkungen gegen menschliche Krebszellen zeigen. Der genaue, zugrunde liegende Mechanismus ist unklar. Die vorliegende Erfindung offenbart einen überraschenden Synergismus bei der pharmazeutischen Nahrungsergänzungsmittelformulierung, die Ascorbinsäure, Prolin, Lysin und wenigstens eine Polyphenol-Komponente umfasst, bei der wirksamen Blockierung der Proliferation und Metastasierung von Krebszellen.
  • Die pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung blockiert wirksam die Invasion von Krebs der Brust, des Darms, der Haut (Melanom) und anderer Formen von Krebs. Die Bestandteile der Nahrungsergänzungsmittelformulierung sind natürlich vorkommende Komponenten; wenn sie in dem beanspruchten Bereich verwendet werden, der in der Anmeldung offenbart wird, weisen sie, wie gezeigt wird, keine toxischen Nebenwirkungen auf. Daher kann die Zusammensetzung auch vorbeugend verwendet werden, d. h. zur wirksamen Vorbeugung von Krebs und anderen Tumoren im Körper.
  • Da virale Zellen und andere invasive Mikroorganismen ähnliche Proteasen wie Krebszellen zum Ausbreiten der Infektion über den Körper verwenden, kann die von diesem Patent beanspruchte Zusammensetzung zur wirksamen Vorbeugung und Behandlung von Viruserkrankungen und anderen Infektionserkrankungen verwendet werden.
  • Ähnliche Mechanismen der Aktivierung von Matrix-Metalloproteinasen, wie sie Krebszellen zur Matrixinvasion verwenden, tragen auch zur Destabilisierung von atherosklerotischen Plaques bei, die zu Herzinfarkt und Schlaganfall führt. Daher kann die von diesem Patent beanspruchte Zusammensetzung auch zur wirksamen Vorbeugung und Behandlung von Atherosklerose, Restenose und anderen Herz/Kreislauf-Komplikationen verwendet werden.
  • Die Aktivierung von Matrix-Metalloproteinasen, wie sie Krebszellen zur Matrixinvasion verwenden, ist eine wesentliche Komponente bei verschiedenen entzündlichen Leiden. Daher kann die von diesem Patent beanspruchte Zusammensetzung auch zur wirksamen Vorbeugung und Behandlung von Erkrankungen wie der rheumatoiden Arthritis, Emphysem, Allergien, Osteoarthritis und anderen Leiden, die entzündliche Anteile umfassen, verwendet werden.
  • Die pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung gemäß der vorliegenden Erfindung kann einem Patienten in der Form von Tabletten, Pillen, Injektionen, Infusionen, Inhalationen, Zäpfchen oder anderen pharmazeutisch verträglichen Trägern und/oder Abgabemitteln bereitgestellt werden.
  • BEISPIELE
  • Die Wirkung von Ascorbinsäure, Lysin, Prolin und wenigstens einer Polyphenol-Komponente wurden hinsichtlich ihrer antiproliferativen und antiinvasiven Wirkungskraft bei verschiedenen menschlichen Krebszelllinien untersucht. Insbesondere wurde einer der Bestandteile des Extrakts von grünem Tee (d. h. Epigallochatechingallat (EGCG)) untersucht.
  • Materialien und Verfahren
  • Menschliche Brustkrebszellen MDA-MB-231, menschliche Darmkrebszellen HCT 116 und die menschliche Melanomzelllinie A2058 wurden von ATCC erhalten. Normale menschliche Hautfibroblasten wurden von GIBCO erhalten. Wenn nicht angegeben, wurde das von ATCC erhaltene Kulturmedium verwendet.
  • Bei den Untersuchungen der Krebszellen-Proliferation wurde jede Behandlung achtfach durchgeführt. Bei den Invasionsuntersuchungen wurde jede Behandlung drei- oder vierfach durchgeführt.
  • Untersuchungen der Zellproliferation
  • Bei diesen Untersuchungen wurden 5 × 104 Brustkrebszellen in Liebovitz-Medium mit 10 fötalem Rinderserum (FBS) in Platten mit 24 Vertiefungen kultiviert. Das Medium wurde als solches (Grundmedium) oder mit angegebenen Ergänzungen verwendet. Die Platten wurden vier Tage in einem Inkubator mit zirkulierender Luft (ohne ergänzendes CO2) inkubiert. Die Darmkrebszellen HCT 116 wurden in McCoy-5A-Medium kultiviert und in einem Inkubator mit zirkulierender Luft und 5 CO2 gehalten. Am Ende der Inkubation wurde das Medium abgezogen und die Zellen in den Vertiefungen mit PBS gewaschen, gefolgt von 3 Stunden Inkubation mit MTT-Färbung. Jeder Vertiefung wurde Dimethylsulfoxid (DMSO, 1 ml) zugesetzt. Die Platten mit dem DMSO wurden unter leichter Bewegung 15 Minuten bei Raumtemperatur stehen gelassen, anschließend wurde für jede Vertiefung die CD der Lösung bei 550 nm gemessen. Der Wert von OD550 der DMSO-Lösung in der Vertiefung wurde als direkt proportional zu der Anzahl der Zellen angesehen. Der Wert von OD550 des Behandlungsmediums, das keine Ergänzung umfasste (Grundmedium), wurde als 100 definiert.
  • Untersuchungen der Matrigel-Invasion
  • Diese Untersuchungen wurden unter Verwendung von Matrigel (Becton Dickinson)-Einsätzen in passende Platten mit 24 Vertiefungen durchgeführt. In die Vertiefungen der Platte wurden Fibroblasten geimpft und darin unter Verwendung von DMEM kultiviert. Nach dem Erreichen der Konfluenz der Fibroblasten wurde das Medium abgezogen und durch 750 μl des zur Behandlung vorgesehenen Mediums ersetzt. Die in 250 μl des Mediums, das entsprechend der Planung des Experiments mit Nahrungsergänzungsmitteln ergänzt war, suspendierten Krebszellen (5 × 104) wurden auf den Einsatz in der Vertiefung geimpft. Somit enthielten das Medium auf dem Einsatz und jenes in der Vertiefung die gleichen Ergänzungen. Anschließend wurden die Platten mit den Einsätzen 18 bis 20 Stunden inkubiert (MDA-MB-231-Zellen in einem Inkubator mit zirkulierender Luft, und Darmkrebszellen und Melanomzellen in einem Inkubator mit 5% CO2). Nach der Inkubation wurde das Medium aus den Vertiefungen abgezogen. Die Zellen an der obenliegenden Oberfläche der Einsätze wurden vorsichtig mit einem Baumwolltupfer abgewischt. Die Zellen, die in die Matrigel-Membran eingedrungen und auf die untenliegende Oberfläche des Matrigels gewandert waren, wurden mit Hemacolor-Färbung (EM Sciences) gefärbt und unter einem Mikroskop visuell gezählt. Die Ergebnisse wurden einer ANOVA unterzogen und alle möglichen Paare mit p < 0,05 auf Signifikanz geprüft.
  • Bei verschiedenen Untersuchungen wurden die Medien mit Ascorbinsäure, Prolin, Lysin und EGCG mit den angegebenen Konzentrationen ergänzt.
  • Gelatinase-Zymographie
  • Die Gelatinase-Zymographie wurde in vorgeformtem 10% Novex Polyacrylamid-Gel (Invitrogen) in Gegenwart von 0,1% Gelatine durchgeführt. Das Beladen des Kulturmediums (20 μl) und die Durchführung des SDS-PAGE erfolgten mit Tris-Glycin-SDS-Puffer. Nach der Elektrophorese wurden die Gele 30 Minuten mit 5% Triton X-100 gewaschen und gefärbt. Proteinstandards wurden gleichzeitig laufen gelassen, und die Molekulargewichte wurden näherungsweise bestimmt.
  • Beispiel 1
  • MDA-MB 231 (ATCC)-Brustkrebszellen wurden auf einen Matrigel-Einsatz in einer verbesserten Matrigel-Invasionskammer (BD) geimpft. Den Vertiefungen wurden konditionierte Medien von normalen menschlichen Hautfibroblasten (Clonetics), die mit verschiedenen Mitteln ergänzt waren (wie in 1 angegeben), zugesetzt. Die Kammer wurde 24 Stunden inkubiert, dann wurden die Zellen gezählt, die die Matrigel-Membran invadiert und in die untenliegende Oberfläche der Membran gewandert waren. Diese Daten zeigen die hemmende Wirkung von Epigallocatechingallat und der Kombination von Ascorbinsäure, Prolin und Lysin auf die Matrigel-Invasion und Wanderung von menschlichen Brustkrebszellen MDA-MB 231.
  • Beispiel 2
  • Menschliche Darmkrebszellen HCT 116 (ATCC) wurden auf einen Matrigel-Einsatz in einer verbesserten Matrigel-Invasionskammer (BD) geimpft. Den Vertiefungen wurden konditionierte Medien von normalen menschlichen Hautfibroblasten (Clonetics), die mit verschiedenen Mitteln ergänzt waren (wie in 2 angegeben), zugesetzt. Die Kammer wurde 24 Stunden inkubiert, dann wurden die Zellen gezählt, die die Matrigel-Membran invadiert und in die untenliegende Oberfläche der Membran gewandert waren. Diese Daten zeigen eine hemmende Wirkung von Epigallocatechingallat und der Kombination von Ascorbinsäure, Prolin und Lysin auf die Matrigel-Invasion und Wanderung von menschlichen Darmkrebszellen HCT 116.
  • Beispiel 3
  • Menschliche Melanomzellen A2058 (ATCC) wurden auf einen Matrigel-Einsatz in einer verbesserten Matrigel-Invasionskammer (BD) geimpft. Den Vertiefungen wurden konditionierte Medien von normalen menschlichen Hautfibroblasten (Clonetics), die mit verschiedenen Mitteln ergänzt waren, zugesetzt. Die Kammer wurde 24 Stunden inkubiert, dann wurden die Zellen gezählt, die die Matrigel-Membran invadiert und in die untenliegende Oberfläche der Membran gewandert waren. Diese Daten zeigen eine hemmende Wirkung von Epigallocatechingallat und der Kombination von Ascorbinsäure, Prolin und Lysin auf die Matrigel-Invasion und Wanderung von menschlichen Melanomzellen A2058.
  • Beispiel 4
  • Bei diesem Experiment wurden menschliche Melanomzellen A2058 (ATCC) auf einen Matrigel-Einsatz in einer verbesserten Matrigel-Invasionskammer (BD) in Gegenwart von Folgendem geimpft:
    • A: konditioniertem Medium von normalen menschlichen Hautfibroblasten (Clonetics), und
    • B: das gleiche Medium, das wie in der Legende von 4 angegeben mit verschiedenen Nahrungsergänzungsmitteln ergänzt war.
  • Nach 24 Stunden Inkubation wurden die Zellen, die die Matrigel-Membran invadiert und in die untenliegende Oberfläche der Membran gewandert waren, unter einem Mikroskop untersucht und gezählt.
  • Diese Daten zeigen eine apoptotische Wirkung von Epigallocatechingallat und der Kombination von Ascorbinsäure + Prolin + Lysin auf A2058. A: Menschliche Melanomzellen in Gewebekulturmedium. B: Menschliche Melanomzellen in Gewebekulturmedium, das Ascorbinsäure (100 μM), Prolin (140 μM), Lysin (400 μM) und EGCG (20 μg/ml) enthielt. Es ist zu beachten, dass die Zellen zerstört wurden.
  • Beispiel 5
  • Untersuchung der Krebszellen-Proliferation
  • A2058-Melanomzellen
  • 5 zeigt die Wirkung von 10, 20 und 50 μg/ml EGCG ohne und mit einer Ergänzung mit Lysin, Prolin und Ascorbinsäure auf die Proliferation von Melanomzellen. Weder Lysin, Prolin und Ascorbinsäure noch EGCG mit 10 bzw. 20 μg/ml zeigten eine wesentliche Wirkung auf die Zellproliferation. Dagegen verringerte EGCG mit 50 μg/ml die Anzahl der Zellen wesentlich auf 30 Eine ähnliche Wirkung wurde mit Lysin, Prolin und Ascorbinsäure beobachtet.
  • MDA-MB-231-Brustkrebszellen
  • Bei diesen Experimenten wurde das Grundmedium mit 0, 10, 20, 50, 100 und 200 μg/ml EGCG ergänzt (6).
  • Die Ergebnisse zeigen, dass die Ergänzung des Grundmediums mit 50, 100 und 200 μg/ml EGCG die Anzahl der Zellen wesentlich verringerte, nämlich auf 56,1 ± 5,3, 33,6 ± 2 bzw. 29,6 ± 0,8% bezogen auf die nichtergänzten Kontrollen. EGCG-Konzentrationen im Zellmedium bis zu 20 μg/ml zeigten keine wesentliche hemmende Wirkung auf die Zellproliferation.
  • Wir haben auch die Wirkung von Ascorbinsäure, Lysin, Prolin und verschiedenen Konzentrationen von EGCG auf die Proliferation von Krebszellen untersucht. 7 zeigt eine unwesentliche Verringerung der Anzahl der Zellen auf 86,1 ± 1,93% durch Ascorbinsäure, Lysin und Prolin. Durch das Zugeben von 20, 50 und 100 μg EGCG zu dieser Kombination wurde die Anzahl der Zellen wesentlich verringert, nämlich auf 74 ± 5,8, 64,8 ± 1,6 bzw. 22 ± 5% bezogen auf die Kontrollgruppe.
  • HCT 116-Darmkrebszellen
  • Die hemmende Wirkung von Ascorbinsäure, Prolin und Lysin auf die Zellproliferation von Darmkrebszellen war nicht ausgeprägt, die Kombination von Ascorbinsäure, Prolin und Lysin mit 20 μg/ml EGCG verringerte die Anzahl der Zellen jedoch wesentlich auf 69 ± 0,5% (8). Ein höherer Pegel von EGCG in dieser Kombination (50 μg/ml) verringerte die Anzahl der Zellen drastisch auf 4,6 ± 0,3%.
  • Die Antiproliferationswirkung der bei diesen Untersuchungen verwendeten Nahrungsergänzungsmittelkombinationen variierte mit der Art der Krebszellen. Bei Brustkrebszellen zeigte die Kombination von Ascorbinsäure, Prolin und Lysin mit EGCG höhere Antiproliferationswirkungen als bei der einzelnen Verwendung dieser Nahrungsergänzungsmittel. Bei Melanom- und Darmkrebszellen, die der Kombination von Ascorbinsäure, Prolin und Lysin ausgesetzt waren, wurde ihre Proliferation nicht beeinträchtigt. Die Kombination dieser Nahrungsergänzungsmittel mit 20 μg/ml EGCG führte jedoch zu einer wesentlichen Verringerung der Anzahl der Darmkrebszellen, nicht aber bei Melanomzellen. Die Darmkrebszellen schienen empfindlicher als die Brustkrebszellen gegen die Kombination von Ascorbinsäure, Prolin, Lysin und EGCG zu sein, und die Melanomzellen am wenigsten. Die Proliferation der Darmkrebszellen wurde beinahe vollständig verringert (4,6%), wenn Ascorbinsäure, Prolin und Lysin zusammen mit 50 μg/ml EGCG gegeben wurden.
  • Beispiel 6
  • Gelatinase-Zymographie-Untersuchungen
  • Die Wirkung von EGCG auf Melanomzellen mit Grundmedium und einer Ergänzung mit Ascorbinsäure, Prolin und Lysin auf die Expression von MMPs ist in 9 gemäß einer Gelatinase-Zymographie dargestellt. Die Melanomzellen zeigten zwei Banden, die MMP-2 und MMP-9 entsprechen. Die Kombination von Ascorbinsäure, Lysin und Prolin zeigt keine Wirkung auf die Expression von MMP-Banden im Vergleich zum Grundmedium. EGCG hemmt dagegen die Expression sowohl von MMP-2 als auch von MMP-9 auf dosisabhängige Weise. Die Intensität der Banden war für das Grundmedium und für die Kombination von Ascorbinsäure, Lysin und Prolin gleich.
  • Beispiel 7
  • Untersuchungen der Invasion der extrazellulären Matrix und der Wanderung
  • Die hemmende Wirkung einer Kombination von Ascorbinsäure, Prolin und Lysin wurde bei getrennter Verwendung untersucht, sowie zusammen mit verschiedenen Konzentrationen von EGCG. Die Wirkung dieser Kombinationen auf die extrazelluläre Matrix wurde unter Verwendung von vorgeformten Matrigel-Matrizen, die routinemäßig zum Bestimmen des invasiven Potentials verschiedener Krebszelllinien verwendet werden, untersucht.
  • MDA-MB-231-Brustkrebszellen
  • 10 zeigt die Ergebnisse der Matrigel-Invasion von Brustkrebszellen, die in Gegenwart von Ascorbinsäure, Prolin und Lysin inkubiert wurden. Die Invasion der mit einer Kombination von Ascorbinsäure, Prolin und Lysin inkubierten Krebszellen wurde auf 48,1 ± 22,1% im Vergleich zu Zellen, die mit nicht ergänztem Medium inkubiert waren, verringert. In dem Medium, das nur mit 20 μg/ml EGCG ergänzt war, verringerte sich die Anzahl der invadierenden Zellen auf 69,5 ± 27,4%. Eine vollständige Hemmung der Matrixinvasion durch Brustkrebszellen wurde in Gegenwart höherer EGCG-Konzentrationen (50 μg/ml und 100 μg/ml) erreicht.
  • Bei einer anderen Untersuchungsreihe verringerte die Ergänzung des Mediums mit 100 μM Ascorbinsäure die Invasion um 36%. Die Ergänzung mit Ascorbinsäure und 140 μM Prolin verringerte die Invasion weiter um 47%. Die Verwendung von 400 μM Lysin zusätzlich zu Ascorbinsäure und Prolin in der Ergänzung verringerte die Invasion auf 67%; Lysin zeigt eine lineare Antwort bei der Verstärkung der Wirkung von Ascorbinsäure und Prolin bis zu einem Pegel von 800 μM.
  • 10 zeigt, dass die Kombination von Ascorbinsäure, Prolin und Lysin sowie 20 μg/ml EGCG zu einer vollständigen Beendigung der Invasion von Krebszellen durch die extrazelluläre Matrix führte. Mit dieser Kombination konnte die größtmögliche hemmende Wirkung auf die Invasion von Krebszellen erzielt werden, ohne die Notwendigkeit der Verwendung von hohen Konzentrationen einzelner Nahrungsergänzungsmittel. Somit ermöglichten Ascorbinsäure, Prolin und Lysin zusammen mit EGCG das vollständige Beenden der Matrixinvasion von Brust krebszellen bei einem niedrigen Pegel von EGCG (20 μg/ml).
  • HCT 116-Darmkrebszellen
  • 11 zeigt, dass die Kombination von Ascorbinsäure, Prolin und Lysin die Invasion von Darmkrebszellen wesentlich verringerte, nämlich auf 67,2 ± 3,7% Allein verwendetes EGCG mit 20 μg/ml verringerte die Invasion wesentlich auf 44,9 ± 3,3%, während die Kombination von Ascorbinsäure, Prolin und Lysin sowie 20 μg/ml EGCG eine synergistische Wirkung zeigte und die Invasion der Darmkrebszellen auf 24,9 ± 4,6% verringerte.
  • A2058-Melanomzellen
  • 12 zeigt, dass die Kombination von Ascorbinsäure, Prolin und Lysin die Anzahl der invadierenden Zellen auf 88,2 ± 4% verringerte, wobei diese Verringerung jedoch statistisch nicht signifikant war. Das Kombinieren dieser Nahrungsergänzungsmittel mit nur 20 μg/ml EGCG verringerte die Anzahl der invadierenden Zellen auf null.
  • Die Ergebnisse zeigen, dass uns die Verwendung von Ascorbinsäure, Prolin und Lysin zusammen mit EGCG ermöglichte, eine drastische Verringerung der Anzahl der Zellen zu erhalten, die bei niedrigen Pegeln von EGCG eine Matrigel-Membran invadieren und durch sie wandern. Durch die Verwendung eines niedrigen Pegels von 24 μg/ml EGCG zusammen mit Ascorbinsäure, Prolin und Lysin wurde bei Brustkrebszellen und Melanomzellen die Invasion auf null verringert. Bei Darmkrebszellen war der Vorteil der Kombination nicht so spektakulär wie bei Brustkrebszellen. Der Pegel von EGCG musste bei 50 μl/ml liegen, um eine Verringerung der Invasion dieser Zellen um 90% zu erhalten. Bei dieser Untersuchung wurde keine Änderung der Expression von MMPs in Melanomzellen beobachtet, obwohl EGCG eine dosisabhängige hemmende Wirkung auf ihre Expression aufweist.
  • Diese Untersuchungsreihe zeigt schlüssig, dass die vorliegende pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelformulierung, die Ascorbinsäure, Prolin, Lysin und wenigstens eine Polyphenol-Komponente umfasst, eine wirkungsvolle antiproliferative und antiinvasive Wirkung auf Krebszellen zeigt.
  • Beispiel 8
  • Für die nachstehenden pharmazeutischen Nahrungsergänzungsmittelformulierungen (Tabellen 1 bis 5) und EPICAN FORTETM (Tabelle 6) werden die Zusammensetzungen angegeben. Von diesen Formulierungen, die Ascorbinsäure, Prolin, Lysin und wenigstens eine Polyphenol-Komponente umfassen, ist gefunden worden, dass sie zum Blockieren der Invasion von Krebszellen und der Metastasierung von Krebszellen wirksam sind. Tabelle 1. Formulierung 1
    Biochemische Stoffe Menge %
    Ascorbinsäure 250 mg 5,6
    Calciumascorbat 250 mg 5,6
    Magnesiumascorbat 250 mg 5,6
    Ascorbylpalmitat 250 mg 5,6
    Polyphenole 1.000 mg 22,5
    N-Acetylcystein 200 mg 4,5
    Lysin 1.000 mg 22,5
    Prolin 750 mg 16,8
    Arginin 500 mg 11,2
    Selen 30 mcg < 0,01
    Kupfer 2 mg 0,04
    Mangan 1 mg 0,02
    mg = Milligramm mcg = Mikrogramm „%" bedeutet Gewichts-% des einzelnen Bestandteils bezogen auf das Gesamtgewicht der Formulierung
    Tabelle 2. Formulierung 2
    Biochemische Stoffe Menge %
    Ascorbinsäure 25 mg 5,7
    Calciumascorbat 25 mg 5,7
    Magnesiumascorbat 25 mg 5,7
    Ascorbylpalmitat 25 mg 5,7
    Polyphenole – 50% 200 mg 46,0
    N-Acetylcystein 10 mg 2,3
    Lysin 50 mg 11,5
    Prolin 25 mg 5,7
    Arginin 50 mg 11,5
    Selen 1 mcg < 0,001
    Kupfer 20 mcg < 0,001
    Mangan 50 mcg < 0,001
    mg = Milligramm mcg = Mikrogramm „%" bedeutet Gewichts-% des einzelnen Bestandteils bezogen auf das Gesamtgewicht der Formulierung
    Tabelle 3. Formulierung 3
    Biochemische Stoffe Menge %
    Ascorbinsäure 5.000 mg 13,3
    Calciumascorbat 5.000 mg 13,3
    Magnesiumascorbat 5.000 mg 13,3
    Ascorbylpalmitat 5.000 mg 13,3
    Polyphenole – 100% 5.000 mg 13,3
    N-Acetylcystein 1.500 mg 4,0
    Lysin 5.000 mg 13,3
    Prolin 3.000 mg 8,0
    Arginin 3.000 mg 8,0
    Selen 200 mcg < 0,001
    Kupfer 9 mg 0,02
    Mangan 10 mg 0,002
    mg = Milligramm mcg = Mikrogramm „%" bedeutet Gewichts-% des einzelnen Bestandteils bezogen auf das Gesamtgewicht der Formulierung
    Tabelle 4. Formulierung 4
    Biochemische Stoffe Menge %
    Ascorbinsäure 250 mg 4,7
    Calciumascorbat 250 mg 4,7
    Magnesiumascorbat 250 mg 4,7
    Ascorbylpalmitat 250 mg 4,7
    Polyphenole – 98% 1.000 mg 18,7
    N-Acetylcystein 200 mg 3,7
    Lysin 1.000 mg 18,7
    Prolin 750 mg 14,0
    Arginin 500 mg 9,3
    Selen 100 mcg < 0,002
    Kupfer 2 mg 0,04
    Mangan 1 mg 0,02
    Calcium 500 mg 9,3
    Magnesium 400 mg 7,5
    mg = Milligramm mcg = Mikrogramm „%" bedeutet Gewichts-% des einzelnen Bestandteils bezogen auf das Gesamtgewicht der Formulierung
    Tabelle 5. Formulierung 5
    Biochemische Stoffe Menge %
    Ascorbinsäure 250 mg 4,5
    Calciumascorbat 250 mg 4,5
    Magnesiumascorbat 250 mg 4,5
    Ascorbylpalmitat 250 mg 4,5
    Polyphenole – 98% 1.000 mg 18
    N-Acetylcystein 200 mg 3,6
    Lysin 1.000 mg 18
    Prolin 750 mg 13,5
    Arginin 500 mg 9
    Selen 100 mcg < 0,002
    Kupfer 2 mg < 0,04
    Mangan 1 mg < 0,02
    Calcium 500 mg 9
    Magnesium 400 mg 7,2
    Citrus-Bioflavonoide 200 mg 3,6
    mg = Milligramm mcg = Mikrogramm „%" bedeutet Gewichts-% des einzelnen Bestandteils bezogen auf das Gesamtgewicht der Formulierung
    Tabelle 6. Formulierung von EPICAN FORTETM
    Portionsgröße: 6 Kapseln (vorgeschlagene Verwendung: drei Mal täglich zwei Kapseln, vorzugsweise zusammen mit Mahlzeiten)
    6 Kapseln enthalten: Menge pro Portion % täglicher Wert
    L-Lysin 1.000 mg
    L-Prolin 750 mg
    L-Arginin 500 mg
    Vitamin C (als Ascorbinsäure, Calciumascorbat, Magnesiumascorbat und Ascorbatpalmitat) 782 mg 1180%
    Calcium (in Calciumascorbat) 22 mg 2%
    Magnesium (in Magnesiumascorbat) 50 mg 12%
    Standardextrakt von grünem Tee (Blätter) (80% Polyphenole, 800 mg) entkoffeiniert 1.000 mg
    N-Acetylcycstein 200 mg
    Selen (in L-Selenomethionin) 30 mg 43%
    Kupfer (in Kupferglycinat) 2 mg 100%
    Mangan (in Mangancitrat) 1 mg 50%
    mg = Milligramm mcg = Mikrogramm EPICAN FORTETM ist ein Markennamein einer anhängigen U.S.-Anmeldung. Andere Bestandteile: vegetarische Kapseln (Hydroxypropylmethylcellulose), Siliciumdioxid, Cellulose und Magnesiumstearat.
  • Beispiel 9
  • Wirkung von EPICAN FORTETM auf menschliche Krebszellen
  • Es wurde die Wirkung von EPICAN FORTETM auf menschliche Krebszellen untersucht. Es wurden metastatische Parameter untersucht, wie z. B. die Expression von Matrix-Metalloproteinasen (MMPs) durch Gelatinase-Zymographie, und das Invasionspotential durch Matrigel und Proliferation/Wachstum durch MTT-Assays. Die Protokolle dieser Assays sind vorstehend ausführlich beschrieben worden. Es wurden mehrere menschliche Krebszelllinien verwendet: Hautkrebs-Melanomzellen 2058, Leberkrebszellen HepG2, Fibrosarkomzellen HT 1080, Darmkrebs HCT 116, Brustkrebs ER+/–MCF-7 und Brustkrebs ER–/–MDA-MB-231.
  • Die Ergebnisse sind in den nachstehenden Tabellen (Tabellen 7 und 8) zusammengefasst.
  • Wirkung von EPICAN FORTETM auf Proliferation/Wachstum von menschlichen Krebszelllinien
  • Tabelle 7. Behandlungsdosen von EPICAN ForteTM (μg/ml): Prozent bezogen auf die Kontrolle
    Krebszellen 0 10 50 100 500 1000
    Melanom 100% 98 - 105 - 50
    Hep G2 100% 92 - 138 - 85
    HT-1080 100% 100 - 97 80 63
    Darm (HCT 116) 100% 119 125 141 120 106
    MCF-7 100% 93 88 92 97 77
    MDA-MB-231 100% 103 - 82 - 25
  • Wirkung von EPICAN FORTETM auf Matrigel-Invasion und Wanderung von menschlichen Krebszellen
  • Tabelle 8. Behandlungsdosen von EPICAN ForteTM (μg/ml): Prozentuelle Hemmung
    Krebszellen 0 10 50 100 500 1000
    Melanom 0% 80 98 100 -
    Hep G2 0% 15 25 50 95 100
    HT-1080 0% 90 - 50 70 100
    Darm (HCT 116) 0% 20 50 80 100 -
    MDA-MB-231 0% 50 - 98 - -
    MCF-7 nichtinvasiv
  • Wirkung von EPICAN FORTETM auf die Expression von Matrix-Metalloproteinasen (MMPs) von menschlichen Krebszelllinien
    • Melanomzellen: Bei der Gelatinase-Zymographie zeigten Melanomzellen zwei Banden, die MMP-2 und MMP-9 entsprachen. EPICAN FORTETM hemmte die Expression von MMP-2 und -9 auf dosisabhängige Weise. Die Expression von MMP-2 und -9 war bei einer Konzentration von 100 μg/ml EPICAN FORTETM wesentlich gehemmt und bei einer Konzentration von 1000 μg/ml nahezu nicht nachweisbar.
    • HepG2-Zellen: Wie Melanomzellen exprimierten auch HepG2-Zellen zwei Banden, die MMP-2 und MMP-9 entsprachen. EPICAN FORTETM hemmte die Expression von MMP-2 und -9 bei Konzentrationen von 500 und 1000 μg/ml.
    • Fibrosarkom HT-1080: HT-1080-Zellen zeigten zwei Banden für MMP-2 und -9. EPICAN FORTETM hemmte die Expression beider Banden auf dosisabhängige Weise. Bei Konzentrationen von 500 und 1000 μg/ml wurden sehr schwache Banden beobachtet.
    • Darmkrebs HOT 116: Bei der Zymographie zeigten Darmkrebszellen nur eine Bande, die MPP-2 entsprach und bei einer Konzentration von 100 μg/ml vollständig verschwand.
    • MCF-7 und MDA-MB-231: Diese Krebszelllinien exprimierten bei unseren experimentellen Konzentrationen, die denen der anderen Krebszelllinien ähnlich waren, keine MMP-Banden.
  • Die Invasion von MDA-MB-231 durch Matrigel wurde von 10, 50 und 100 μg/ml EPICAN FORTETM um 50, 60 bzw. 95% gehemmt. EPICAN FORTETM war mit 10 μg/ml gegen MDA-MB-231 nicht toxisch, zeigte eine leichte Toxizität bei 100 μg/ml und eine wesentliche Toxizität bei 1000 μg/ml. Bei der Zymographie wurde weder MMP-2 noch MMP-9 exprimiert. Im Gegensatz dazu war EPICAN FORTETM sogar bei 500 μg/ml nicht toxisch gegen MCF-7 und zeigte eine leichte Toxizität bei 1000 μg/ml. MCF-7 war nichtinvasiv und exprimierte keine MMP-Aktivität.
  • EPICAN FORTETM hemmt die Expression von MMP-2 und MMP-9 auf dosisabhängige Weise. Die Expression von MMP-2 und MMP-9 war bei einer Konzentration von 100 μg/ml EPICAN FORTETM wesentlich gehemmt und bei einer Konzentration von 100 μg/ml nahezu nicht nachweisbar. EPICAN FORTETM, das mit Konzentrationen von 10 und 100 μg/ml verwendet wurde, beeinträchtigte die Lebensfähigkeit der Zellen nicht wesentlich, während es mit 100 μg/ml eine Zytotoxizität im Bereich von 10 bis 40 Prozent, abhängig vom Zelltyp, zeigte. Die Invasion von Melanomzellen, MDA-MB-231-Zellen und einer Cokultur von Melanomzellen mit NHDF durch Matrigel wurde auf dosisabhängige Weise wesentlich verringert. Die Invasion von HT-1080-Zellen durch Matrigel wurde bei 10, 100, 200 und 1000 μg/ml um 10%, 50%, 70% bzw. 100% verringert. Es ist interessant, dass EPICAN FORTETM mit 100 μg/ml für HT-1080-Zellen nicht toxisch war. Diese Ergebnisse zeigen, dass EPICAN-FORTETM gegen mehrere Krebszelllinien sehr wirksam ist, und auch in Cokultur. Diese Beobachtungen zeigen, dass EPICAN-FORTETM eine natürliche therapeutische Grundlage bereitstellen kann, die es zu einem wertvollen und viel versprechenden Kandidaten für die Behandlung von menschlichen Krebsarten macht.
  • Beispiel 10
  • Wirkung von EPICAN FORTETM auf normale menschliche Zelllinien
  • Es wurde die Wirkung von EPICAN FORTETM auf normale menschliche Zellen untersucht. Es wurden ähnliche Parameter wie bei den Krebszelllinien verwendet, nämlich Zymographie für die Expression von MMPs, und MTT-Assays für die Invasion durch Matrigel und Proliferation/Wachstum. Es wurden mehrere normale menschliche Hautfibroblasten (NHDF) verwendet, einschließlich: menschliche Chondrozyten und menschliche Stromazellen.
  • In den nachstehenden Tabellen (Tabellen 9 und 10) sind die Wirkungen von EPICAN FORTETM auf Proliferation/Wachstum, Metastaseninvasion und MMP-Herstellung in normalen menschlichen Zellen zusammengefasst. Tabelle 9. Wirkung von EPICAN ForteTM auf Proliferation/Wachstum von normalen menschlichen Zellen. Behandlungsdosen von EPICAN ForteTM (μg/ml): Prozent bezogen auf die Kontrolle
    normale Zellen 0 10 50 100 500 1000
    NHDF 100% 118 - 135 - 90
    Chondrozyten 100% 113 - 148 76 82
    Stromazellen 100% 100 116 115 98 64
    Tabelle 10. Wirkung von EPICAN ForteTM auf die Matrigel-Invasion von normalen menschlichen Zellen. Behandlungsdosen von EPICAN ForteTM (μg/ml): Prozentuelle Hemmung
    normale Zellen 0 10 50 100 200 1000
    NHDF 0% 67% 89% 100% - -
    Chondrozyten 0% 45% 85% 95% 100% -
    Stromazellen 0% 0% - 95% 100% -
  • Die Wirkung von EPICAN FORTETM auf die Expression von Matrix-Metalloproteinasen (MMPs) durch normale menschliche Zellen werden nachstehend zusammengefasst:
    • NHDF: Bei der Zymographie exprimierte NHDF nur eine Bande, die MMP-2 entsprach und bei einer Konzentration von 1000 μg/ml EPICAN FORTETM beinahe vollständig verschwunden war.
    • Chondrozyten: Auch Chondrozyten zeigten nur eine Bande, die MMP-2 entsprach. EPICAN FORTETM hemmte die Expression von MMP-2 auf dosisabhängige Weise. Die Expression von MMP-2 war bei einer Konzentration von 100 μg/ml EPICAN FORTETM wesentlich gehemmt und bei einer Konzentration von 200 μg/ml EPICAN FORTETM vollständig verschwunden.
    • Stromazellen: Auch Stromazellen zeigten nur eine Bande, die MMP-2 entsprach. EPICAN FORTETM hemmte die Expression von MMP-2 auf dosisabhängige Weise. Bei Konzentrationen von 50 und 100 μg/ml wurde eine sehr schwache Bande beobachtet, die bei 200 und 500 μg/ml unbeobachtet blieb.
  • Zusammengefasst zeigen die Ergebnisse, dass EPICAN FORTETM die Expression von MMP-2 auf dosisabhängige Weise hemmt. Die Expression von MMP-2 war bei einer Konzentration von 100 μg/ml EPICAN FORTETM wesentlich gehemmt und bei einer Konzentration von 200 μg/ml nahezu nicht nachweisbar. Außerdem wurde beobachtet, dass die Invasion von Chondrozyten durch Matrigel bei 10 μg/ml, 100 μg/ml und 200 μg/ml um 50%, 85% bzw. 95% gehemmt wurde. Bei 500 μg/ml wurde die Invasion vollständig auf 0% gehemmt.
  • EPICAN FORTETM war für Chondrozyten sogar bei einer Konzentration von 200 μg/ml nicht toxisch. Tatsächlich übte EPICAN FORTETM eine Zellproliferationswirkung aus, nämlich eine Zunahme von 70% der Zellproliferation bei 200 μg/ml, 70% mehr als bei der Kontrolle. Eine leicht toxische Wirkung wurde nur bei 500 μg/ml beobachtet. Diese Ergebnisse zeigen, dass EPICAN FORTETM beim Hemmen der Expression von MMP-2 wirkungsvoll ist und dass EPICAN FORTETM eine neue entzündungshemmende Nahrungsergänzungsmittelformulierung als einen natürlichen Ansatz zum Hemmen der MMP-Produktion und des Abbaus der extrazellulären Matrix bei Osteoarthritis und anderen, verwandten Störungen, einschließlich übermäßigem Knorpelabbau, darstellt.
  • Obwohl die Durchführung von in vivo-Untersuchungen von Epican-Forte gerade erst begonnen hat, sind zwei Fälle berichtet worden, welche die Gültigkeit von Epican-Forte als Medikament zur Behandlung von Krebs bestätigen.
  • Eine Patientin mit einem diagnostizierten Hirntumor wurde mit Chemo- und Strahlentherapie erfolglos behandelt und Ende April 2002 aufgegeben. Durch Zufall begann sie eine Behandlung mit Epican-Forte mit empfohlenen Dosierungen. Ende August 2002 zeigten MRTs, dass der Tumor verschwunden war.
  • Bei einem 64-jährigen männlichen Patienten mit einem im Mai 2002 wesentlich erhöhten Wert des Tumormarkers PSA (59,9 μg/l) wurden Metastasen eines Prostatakarzinoms entlang der Lymphgefäße der Aorta diagnostiziert. Er begann eine Behandlung mit Epican-Forte mit der empfohlenen Dosierung. Drei Monate später war der PSA-Wert auf 0,9 μg/l gefallen. Eine CT-Kontrolle Ende Oktober 2002 zeigte, dass die zuvor sichtbare lymphatische Metastasierung nicht mehr sichtbar war und die Prostata eine normale Größe aufwies.

Claims (18)

  1. Pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung mit – einer Ascorbin-Komponente, – einer L-Lysin-Komponente, – einer L-Prolin-Komponente, – mindestens einer Polyphenol-Komponente, die aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Epigallocatechingallat, Epicatechingallat, Epigallocatechin, Epicatechin und Catechin besteht, und – N-Acetylcystein.
  2. Pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung nach Anspruch 1, wobei die Ascorbin-Komponente aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Ascorbinsäure, pharmazeutisch akzeptablen Ascorbatsalzen, Ascorbatestern und/oder Gemischen davon besteht.
  3. Pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung nach Anspruch 2, wobei das pharmazeutisch akzeptable Ascorbatsalz Calciumascorbat oder Magnesiumascorbat ist.
  4. Pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung nach Anspruch 2 oder 3, wobei das Ascorbatester Ascorbylpalmitat ist.
  5. Pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Lysin-Komponente aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Lysinhydrochlorid und pharmazeutisch akzeptablen Lysinsalzen besteht.
  6. Pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Prolin-Komponente aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Prolinhydrochlorid und pharmazeutisch akzeptablen Prolinsalzen besteht.
  7. Pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Zusammensetzung weiterhin ein Spurenelement umfasst, das aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Selen, Kupfer, Mangan, Calcium und Magnesium besteht.
  8. Pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Zusammensetzung weiterhin eine weitere Aminosäure, insbesondere Arginin, umfasst.
  9. Pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung mit Ascorbinsäure, Calciumascorbat, Magnesiumascorbat, Ascorbylpalmitat, Polyphenolen, N-Acetylcystein, L-Lysin, L-Prolin, L-Arginin, Selen, Kupfer und Mangan.
  10. Pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung nach Anspruch 9, wobei die Zusammensetzung das Folgende umfasst: a) 250 mg Ascorbinsäure, 250 mg Calciumascorbat, 250 mg Magnesiumascorbat, 250 mg Ascorbylpalmitat, 1.000 mg Polyphenole, 200 mg N-Acetylcystein, 1.000 mg Lysin, 750 mg Prolin, 500 mg Arginin, 30 μg Selen, 2 mg Kupfer und 1 mg Mangan; b) 25 mg Ascorbinsäure, 25 mg Calciumascorbat, 25 mg Magnesiumascorbat, 25 mg Ascorbylpalmitat, 200 mg Polyphenole, 10 mg N-Acetylcystein, 50 mg Lysin, 25 mg Prolin, 50 mg Arginin, 1 μg Selen, 20 μg Kupfer und 50 μg Mangan; c) 5.000 mg Ascorbinsäure, 5.000 mg Calciumascorbat, 5.000 mg Magnesiumascorbat, 5.000 mg Ascorbylpalmitat, 5.000 mg Polyphenole, 1.500 mg N-Acetylcystein, 5.000 mg Lysin, 3.000 mg Prolin, 3.000 mg Arginin, 200 μg Selen, 9 mg Kupfer und 10 mg Mangan; d) 250 mg Ascorbinsäure, 250 mg Calciumascorbat, 250 mg Magnesiumascorbat, 250 mg Ascorbylpalmitat, 1.000 mg Polyphenole, 200 mg N-Acetylcystein, 1.000 mg Lysin, 750 mg Prolin, 500 mg Arginin, 100 μg Selen, 2 mg Kupfer, 1 mg Mangan, 500 mg Calcium und 400 mg Magnesium; oder e) 250 mg Ascorbinsäure, 250 mg Calciumascorbat, 250 mg Magnesiumascorbat, 250 mg Ascorbylpalmitat, 1.000 mg Polyphenole, 200 mg N-Acetylcystein, 1.000 mg Lysin, 750 mg Prolin, 500 mg Arginin, 100 μg Selen, 2 mg Kupfer, 1 mg Mangan, 500 mg Calcium, 400 mg Magnesium und 200 mg Zitrus-Bioflavonoide.
  11. Pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung mit L-Lysin, L-Prolin, L-Arginin, einer Ascorbin-Komponente, Calcium, Magnesium, Polyphenolen, N-Acetylcystein, Selen, Kupfer und Mangan.
  12. Pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung nach Anspruch 11, wobei die Zusammensetzung 1.000 mg L-Lysin, 750 mg L-Prolin, 500 mg L-Arginin, 710 mg Ascorbinsäure, 22 mg Calcium, 50 mg Magnesium, 1.000 mg Polyphenole, 200 mg N-Acetylcystein, 30 μg Selen, 2 mg Kupfer und 1 mg Mangan umfasst.
  13. Pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung nach Anspruch 11 oder 12, wobei die Ascorbin-Komponente aus der Gruppe ausgewählt ist, die aus Ascorbinsäure, Calciumascorbat, Magnesiumascorbat und Ascorbylpalmitat besteht.
  14. Pharmazeutische Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung nach einem der Ansprüche 11 bis 13, wobei die Polyphenole aus der Gruppe ausgewählt sind, die aus Epigallocatechingallat, Epicatechingallat, Epigallocatechin, Epicatechin, Catechin und anderen pharmazeutisch akzeptablen Polyphenolsalzen und/oder Gemischen davon besteht.
  15. Verwendung einer Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 14 zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung von Krebs.
  16. Verwendung nach Anspruch 15, wobei der Krebs ein Melanom, Brustkrebs, Darmkrebs, Lungenkrebs oder Gehirnkrebs ist.
  17. Verwendung einer Nahrungsergänzungsmittelzusammensetzung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 14 zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung einer entzündlichen Erkrankung.
  18. Verwendung nach Anspruch 17, wobei die entzündliche Erkrankung Osteoarthritis ist.
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