DE60225004T2 - Verfahren zur Herstellung von Glutathion - Google Patents
Verfahren zur Herstellung von Glutathion Download PDFInfo
- Publication number
- DE60225004T2 DE60225004T2 DE60225004T DE60225004T DE60225004T2 DE 60225004 T2 DE60225004 T2 DE 60225004T2 DE 60225004 T DE60225004 T DE 60225004T DE 60225004 T DE60225004 T DE 60225004T DE 60225004 T2 DE60225004 T2 DE 60225004T2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- biomass
- glutathione
- gsh
- resulting
- ncyc
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 title claims abstract description 192
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 title claims abstract description 97
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 37
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 title claims abstract description 26
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims abstract description 60
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 27
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 16
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 11
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 18
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 16
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 14
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 13
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 12
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 11
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 8
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 8
- 241000320412 Ogataea angusta Species 0.000 claims description 7
- 241000222124 [Candida] boidinii Species 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 7
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 6
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 6
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 6
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 229910052793 cadmium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 5
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 4
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 4
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 4
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 4
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 claims description 4
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 4
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 claims description 3
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 claims description 3
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 3
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052745 lead Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 3
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 claims description 3
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000005862 Whey Substances 0.000 claims description 2
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 2
- 239000002154 agricultural waste Substances 0.000 claims description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 2
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical compound CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003925 fat Substances 0.000 claims description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims description 2
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 claims description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000002440 industrial waste Substances 0.000 claims description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 claims description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 claims description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 2
- 125000002485 formyl group Chemical class [H]C(*)=O 0.000 claims 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 18
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 17
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 17
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 17
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 15
- 235000003969 glutathione Nutrition 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 11
- 238000001994 activation Methods 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 8
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 8
- -1 DL-lactate - galactose - glycerin - ribose - sorbitol Chemical compound 0.000 description 6
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 5
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 5
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 5
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 5
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 5
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 4
- QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N D-melezitose Natural products O1C(CO)C(O)C(O)C(O)C1OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O QWIZNVHXZXRPDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 4
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 4
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 4
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 4
- 150000001722 carbon compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 4
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 4
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 4
- QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N melezitose Chemical compound O([C@@]1(O[C@@H]([C@H]([C@@H]1O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)O)CO)CO)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O QWIZNVHXZXRPDR-WSCXOGSTSA-N 0.000 description 4
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 4
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N Cichoriin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)c1c(O)cc2c(OC(=O)C=C2)c1 WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 3
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 3
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 3
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 3
- 241000503139 Saccharomyces cerevisiae var. ellipsoideus Species 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 3
- 229940093496 esculin Drugs 0.000 description 3
- AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N esculin Natural products OC1OC(COc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O)C(O)C(O)C1O AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 3
- 229940097042 glucuronate Drugs 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 229940058352 levulinate Drugs 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 239000007320 rich medium Substances 0.000 description 3
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- AIJULSRZWUXGPQ-UHFFFAOYSA-N Methylglyoxal Chemical compound CC(=O)C=O AIJULSRZWUXGPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 2
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 2
- TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L barium sulfate Chemical compound [Ba+2].[O-]S([O-])(=O)=O TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N beta-melibiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N cadmium atom Chemical compound [Cd] BDOSMKKIYDKNTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 2
- 235000013681 dietary sucrose Nutrition 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- HOVAGTYPODGVJG-ZFYZTMLRSA-N methyl alpha-D-glucopyranoside Chemical compound CO[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HOVAGTYPODGVJG-ZFYZTMLRSA-N 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000007003 mineral medium Substances 0.000 description 2
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- 238000001223 reverse osmosis Methods 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- HELHAJAZNSDZJO-OLXYHTOASA-L sodium L-tartrate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O HELHAJAZNSDZJO-OLXYHTOASA-L 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001433 sodium tartrate Substances 0.000 description 2
- 229960002167 sodium tartrate Drugs 0.000 description 2
- 235000011004 sodium tartrates Nutrition 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 2-acetamido-3-sulfanylpropanoic acid Chemical compound CC(=O)NC(CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VOZDNCFKGOLECZ-NQZVPSPJSA-N 2-hydroxypropanoic acid (2R,3S,4S,5R)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal Chemical compound C(C(O)C)(=O)O.O=C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO VOZDNCFKGOLECZ-NQZVPSPJSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NSPMIYGKQJPBQR-UHFFFAOYSA-N 4H-1,2,4-triazole Chemical compound C=1N=CNN=1 NSPMIYGKQJPBQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N L-N-acetyl-Cysteine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100412856 Mus musculus Rhod gene Proteins 0.000 description 1
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 229960004308 acetylcysteine Drugs 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 229910001854 alkali hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000008044 alkali metal hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 description 1
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000001680 brushing effect Effects 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000006783 corn meal agar Substances 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- LSXWFXONGKSEMY-UHFFFAOYSA-N di-tert-butyl peroxide Chemical compound CC(C)(C)OOC(C)(C)C LSXWFXONGKSEMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OISMQLUZKQIKII-UHFFFAOYSA-L dichlorocadmium;hydrate Chemical compound O.[Cl-].[Cl-].[Cd+2] OISMQLUZKQIKII-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 description 1
- KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N linolenic acid Natural products CC=CCCC=CCC=CCCCCCCCC(O)=O KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M monosodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M 0.000 description 1
- 239000004223 monosodium glutamate Substances 0.000 description 1
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 229960002969 oleic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000008823 permeabilization Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M potassium bisulfate Chemical compound [K+].OS([O-])(=O)=O CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000343 potassium bisulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000011506 response to oxidative stress Effects 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N trisodium vanadate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-][V]([O-])([O-])=O IHIXIJGXTJIKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007218 ym medium Substances 0.000 description 1
- 239000007221 ypg medium Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
- C07K5/0215—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing natural amino acids, forming a peptide bond via their side chain functional group, e.g. epsilon-Lys, gamma-Glu
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
- Die vorliegendende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Produktion von Glutathion. Insbesondere betrifft die Erfindung ein Fermentations- und Aktivierungsverfahren zur Produktion von Glutathion (hiernach GSH), das es ermöglicht, GSH bei hohen Ausbeuten und relativ geringen Kosten zu erhalten.
- GSH, auch bekannt als N-(N-L-y-Glutamyl-L-cysteinyl)glycin, ist ein bekanntes zelluläres Tripeptid, das in praktisch allen Zellen vorhanden ist. Seine diversen Funktionen sind für viele biomedizinische Gebiete, einschließlich Enzymologie, Transport, Pharmakologie, Therapie, Toxikologie, Endokrinologie und Mikrobiologie, sowie für die Agrikultur wichtig.
- GSH spielt eine ausschlaggebende Rolle in vielen Stoffwechselgebieten („metabolic districts") sowie im Transport und im Zellschutz. Es dient der Reduktion der Disulfidbrücken von Proteinen und anderen Molekülen, der Synthese von Desoxyribonukleotidvorläufern von DNA und dem Schutz von Zellen gegen die gefährlichen Wirkungen von freien Radikalen und von vielen reaktiven Sauerstoffintermediaten (z. B. Peroxide), die in verschiedenen Stufen des Stoffwechsels gebildet werden. Die enzymatischen und Transportphänomene des GSH-Stoffwechsels werden behandelt in: Meister „Selective Modification of Glutathione Metabolism", Science, Band 220, Nr. 4596, 472–477 (1983).
- Eine Erhöhung der intrazellulären GSH-Spiegel kann, in zahlreichen Bereichen des menschlichen Körpers, durch orale Verabreichung von reinem GSH oder durch Injektion von bestimmten GSH-Monoestern nach Auflösung in Wasser erreicht werden (siehe z. B.
US 4,710,489 ;US 4,784,685 undUS 4,879,370 ). - GSH wird industriell hauptsächlich durch Fermentationsverfahren produziert, wobei die Verbindung aus mikrobiellen Zellen extrahiert wird. Verfahren der Herstellung von GSH aus Mikroorganismen sind in zahlreichen Patenten offenbart, einschließlich
US 4,596,775 undUS 4,582,801 . - Die
US 4,582,801 offenbart ein Verfahren zur Produktion von GSH bei hohen Ausbeuten (etwa 3–4%, bezogen auf trockene Zellen, und etwa 0,7–0,9% g/l), das das Kultivieren eines Stammes, der zur Gattung Saccharomyces gehört und sowohl eine Fähigkeit zum Produzieren von GSH als auch eine Resistenz gegenüber 1,2,4-Triazol oder Natriumazid aufweist, in einem Kulturmedium, das assimilierbare Quellen für Kohlenstoff, Stickstoff und anorganische Salze enthält, Akkumulieren bzw. Anreichern von GSH in den mikrobiellen Zellen, Ernten der Zellen und Gewinnung von GSH daraus umfasst. - Die
FR-A-2,692,280 - Udeh K. O. und Achremowicz B. debattieren in „Highglutathione containing yeast Saccharomyces cerevisiae: optimization of production", Acta Microbiologica Polonica, 1997, Band 46, Nr. 1, 105–114 darüber, wie die GSH-Ausbeute unter Verwendung einer hoch GSH-haltigen Hefe S. cerevisiae S-8H maximiert und eine durchschnittliche GSH-Ausbeute von 1,6 g/l und ein GSH-Gehalt von 17 mg/g trockener Biomasse erhalten werden kann.
- Chi-Hsien Liu et al. beschreibt in „Medium optimization for glutathione production by Saccharomyces cerevisiae", Process Biochemistry, Band 34, 1999, 17–23, dass Glucose, Pepton und Magnesiumsulfat geeignete Komponenten für das Zellwachstum und die GSH-Produktion in dem Hefestamm sind, wobei der letztere im Durchschnitt bis 26–28 mg/l und bis 124,93 mg/l als Maximum erreicht.
- Alfafara C. et al. lehren in „Cysteine addition strategy for maximum glutathione production in fed-batch culture of Saccharomyces cerevisiae", Appl. Microbiol. Biotechnol., 1992, 37, 141–146, die Aufrechterhaltung einer konstanten Cysteinkonzentration im Reaktor während der Fermentation, um die Gesamt-GSH-Produktion, die bis etwa 0,8 mg/l erreicht, zu maximieren, und zwar entweder durch kontinuierliche Cysteineinspeisung oder durch Cysteineinspeisungsstöße in allen Zellwachstumsbedingungen.
- Alfafara et al., „Effect of amino acids an glutathione production by Saccharomyces cerevisiae", Appl. Microbiol. Biotechnol., 1992, 36: 538–540, beschreiben die Wirkungen der Zugabe von Glutamat, Glycin und Cystein auf die spezifische GSH-Produktionsrate in Bezug auf das Hefewachstum während des Verlaufs der Fermentation, unter Zellwachstumsbedingungen.
- Die
JP 61027999 - Die
JP 52156994 - Obgleich diese Verfahren bereits eine Verbesserung für die Produktion von GSH darstellen, sind sie manchmal entweder zu komplex oder ihre Produktionsausbeuten sind noch relativ niedrig, und eine hohe Produktion von Biomasse zusammen mit einer spezifischen Produktivität sind noch ein Ziel für die Produktion von GSH.
- Es ist nun festgestellt worden, dass GSH mittels eines Fermentationsverfahrens hergestellt werden kann, umfassend:
- (a) das Erhalten einer Biomasse-Vorkultur durch Vorkultivieren, unter aeroben Bedingungen, eines Stammes einer Hefegattung, ausgewählt aus Pichia angusta -NCYC 2957- GN/2219, Saccharomyces cerevisiae -NCYC 2958- GN/2220, Saccharomyces cerevisiae var. ellipsoideus -NCYC 2959- GN/2221 und Candida boidinii, Mutante 21 -NCYC 2983- GN/2222, wobei der Glutathion-Gehalt pro Biomasseeinheit höher ist als 1,2% (G/G), bezogen auf das Trockengewicht;
- (b) das Kultivieren, unter aeroben Bedingungen, der resultierenden Biomasse-Vorkultur, so dass die Dichte der resultierenden kultivierten Biomasse höher ist als 50 g/l, bezogen auf das Trockengewicht;
- (c) die Aktivierung der kultivierten Biomasse unter Nicht-Wachstumsbedingungen, umfassend:
- (α) Resuspendieren der kultivierten Biomasse, 5–20% trockene Biomasse, in einer wässrigen Lösung, enthaltend 0,4–1 M Kohlenstoffquelle und 0,001–0,01 M Cystein;
- (β) Rühren der resultierenden Suspension bei 300–600 Upm und
- (γ) Belüften der Suspension entweder mit Luft oder Sauerstoffgas und/oder einem Gemisch davon; und
- (d) die Gewinnung von Glutathion aus der kultivierten Biomasse, die aus Stufe (c) resultiert, durch Extrahieren von Glutathion bei einem pH gleich oder niedriger als 6 und Reinigen des resultierenden Glutathions.
- Besonders bevorzugt als GSH-produzierende Hefen sind Pichia angusta, identifiziert in unserer Stammsammlung als GN/2219, eingereicht am 13. Juli 2000 bei der „National Collection of Yeast Cultures" (NCYC), Eingangsnummer: NCYC 2957; Saccharomyces cerevisiae, identifiziert in unserer Stammsammlung als GN/2220, eingereicht am 13. Juli 2000 bei der NCYC, Eingangsnummer: NCYC 2958; Saccharomyces cerevisiae var. ellipsoideus, identifiziert in unserer Stammsammlung als GN/2221, eingereicht am 13. Juli 2000 bei der NCYC, Eingangs nummer: NCYC 2959; Candida boidinii, Mutante 21, identifiziert in unserer Stammsammlung als GN/2222, eingereicht am 24. Oktober 2000 bei der NCYC, Eingangsnummer: NCYC 2983.
- Die Hefezellen sind entweder nicht mutagenisiert oder sie können mit einem mutagenen Agens bzw. Mittel behandelt werden (z. B. UV-Licht, 1-Methyl-3-nitro-1-nitrosoguanidin (NTG), Methansulfonsäureethylester (EMS) usw.). Die Hefezellen, die zur Auswahl von Mutanten verwendet werden können, zeigen eine Reaktion auf oxidativen Stress, die geringer ist als die des ursprünglichen Wildstammes, und zwar in einem Weg, der vom GSH-Reaktionsweg verschieden ist.
- Pichia Angusta -NCYC 2957- GN/2219
- Die morphologischen, Nährstoff- und sexuellen Merkmale dieses Stammes stimmen mit jenen überein, die für diese Art typisch sind, wie z. B. beschrieben in: Kurtzman & Fell, „The Yeasts, a taxonomy study" (4. Ausgabe) Elsevier, 1998.
- Insbesondere:
- Morphologische Merkmale
- In 5%igem Malzextrakt sind die Zellen nach 3-tägiger Inkubation bei 25°C sphäroid, einzeln, in Paaren oder in kleinen Aggregaten bzw. Clustern. In bzw. auf Dalmau-Platten-Agar werden nach 7-tägiger Inkubation bei 25°C weder Pseudohyphen noch Hyphen unter dem Deckglas beobachtet.
- Bei 25°C werden in 2%igem Malzextrakt- oder YM-Medium (3 g/l Hefeextrakt; 3 g/l Malzextrakt; 5 g/l Bacto-Pepton – hergestellt von Difco –; 10 g/l Glucose; 20 g/l Agar), Ascosporen beobachtet (Ascosporen sind hutförmig und üblicherweise nicht konjugiert). Fermentation
Glucose + Trehalose + Galactose – Saccharose – Maltose – Lactose – Raffinose – Sorbose (schwach) + Mannit + Saccharose + Glucit + Maltose + α-Methyl-D-glucosid + Trehalose + Salicin (schwach) + Melezitose + Gluconat (schwach) + Xylose + Succinat + Glycerin + Citrat + Erythrit + Nitrat + Ribit + vitaminfreies Medium – - Wachstum: 10% NaCl +; 5% Glucose +.
- Andere Merkmale: Stärke wird nicht beobachtet; Gelatineverflüssigung ist sehr schwach; maximale Wachstumstemperatur ist 48°C.
- Saccharomyces cerevisiae -NCYC 2958- GN/2220
- Die morphologischen, sexuellen und Nährstoffmerkmale dieses Stammes stimmen überein mit jenen, die für diese Art typisch sind, wie zum Beispiel beschrieben in J. A. Barnet et al.: YEAST: Characteristics and identification, dritte Ausgabe Cambridge University, 2000, insbesondere:
Wachstum in „Malzextrakt": Nach 3 Tagen bei 25°C sind die Zellen ellipsoid bis zylindrisch. Ein Sediment, gelegentlich ein Ring, ist vorhanden. - Nach einem Monat bei 20°C ist ein Sediment vorhanden.
- Wachstum auf „Malzagar": Nach einem Monat bei 20°C ist die Ausstrichkultur („streak culture") butterähnlich, cremefarben bis leicht bräunlich.
- Bildung von Ascosporen: Die Asci enthalten ein bis vier Ascosporen.
- Acetatagar ist das beste Medium zum Induzieren der Sporulation. Assimilation von Kohlenstoffverbindungen
Glucose + DL-Lactat – Galactose – Glycerin – Ribose – Sorbit – Saccharose + Erythrit – Maltose + Mannit – Cellobiose – Inosit – Lactose – Sorbose – Melibiose – Glucuronat – Raffinose + Gluconat – Trehalose – Glucosamin – L-Arabinose – N-Acetyl-glucosamin – D-Xylose – α-Methyl-D-glucosid – Ramnose – 2-Ketogluconat – Levulinat – Palatinose + Melezitose – Äsculin – Actidion – 3 Tage 24 Tage Cellobiose – – Galactose – – Glucose + + Lactose – – Maltose + + Melibiose – – Saccharose + + Trehalose – – - Saccharomyces cerevisiae var. ellipsoideus -NCYC 2959- GN/2221
- Die Merkmale dieses Stammes sind identisch mit denen, die oben für Saccharomyces cerevisiae -NCYC 2958-, GN/2220, beschrieben wurden, abgesehen von der Assimilation von Kohlenstoffverbindungen und den Fermentationstests. Assimilation von Kohlenstoffverbindungen
Glucose + DL-Lactat – Galactose + Glycerin – Ribose – Sorbit – Saccharose + Erythrit – Maltose + Mannit – Cellobiose – Inosit – Lactose – Sorbose – Melibiose – Glucuronat – Raffinose + Gluconat – Trehalose – Glucosamin – L-Arabinose – N-Acetyl-glucosamin – D-Xylose – α-Methyl-D-glucosid – Ramnose – 2-Ketogluconat – Levulinat – Palatinose + Melezitose – Äsculin – Actidion – 3 Tage 24 Tage Cellobiose – – Galactose – + Glucose + + Lactose – – Maltose + + Melibiose – – Saccharose + + Trehalose – – - Candida boidinii (Mutante 21) -NCYC 2983- GN/2222
- Die morpohologischen, sexuellen und Nährstoff-Merkmale dieses Stammes stimmen überein mit jenen, die für diese Art typisch sind, wie zum Beispiel beschrieben in: J. A. Barnet et al.: YEAST: Characteristics and identification, dritte Ausgabe, Cambridge University, 2000, insbesondere: Wachstum in Glucose-Hefeextrakt-Pepton-Wasser: Nach 3 Tagen bei 25°C sind die Zellen lang-ovoid bis zylindrisch, danach leicht gebogen.
- Wachstum auf Glucose-Hefeextrakt-Pepton-Agar: Nach einem Monat bei 25°C ist die Ausstrichkultur gelblich cremefarben, weich, feinfaltig.
- Dalmau-Platten-Kultur auf Maismehlagar („corn meal agar"): Das Pseudomycel ist vorhanden und mit kurzen verzweigten Hyphen, die verticillate bzw. quirlförmig angeordnete Ketten und Gruppen von ovoiden Blastosporen tragen. Assimilation von Kohlenstoffverbindungen:
Glucose + DL-Lactat + Galactose – Glycerin + Ribose + Sorbit + Saccharose – Erythrit + Maltose – Mannit + Cellobiose – Inosit – Lactose – Sorbose – Melibiose – Glucuronat – Raffinose – Gluconat – Trehalose – Glucosamin – L-Arabinose – N-Acetyl-glucosamin +– D-Xylose + α-Methyl-D-glucosid – Ramnose – 2-Ketogluconat – Levulinat – Palatinose –+ Melezitose – Äsculin – Actidion + 3 Tage 24 Tage Cellobiose – – Galactose – – Glucose + + Lactose – – Maltose – – Melibiose – – Saccharose – – Trehalose – – - Das erfindungsgemäße Verfahren stellt einen wirtschaftlichen Weg zur Produktion von GSH bereit, ermöglicht die Verbesserung der Produktivität der GSH-produzierenden Hefen sowie die schnelle Isolation von GSH-überproduzierenden Mutanten, die kostengünstige Kultivierung von derartigen Mutanten, die Erhöhung des GSH-Gehalts der Biomasse und die schnelle und effektive Extraktion von GSH aus der Biomasse.
- Die Zellen der Hefe, geeignet zur Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens, sind haploid.
- Entweder Stufen (a) und/oder (b) und/oder (c) des erfindungsgemäßen Verfahrens können in einem wässrigen, flüssigen oder festen Nährmedium durchgeführt werden, das wenigstens eine der folgenden Verbindungen umfasst:
- (i) eine Verbindung eines Metalls, ausgewählt aus Cd, V, Cu, Fe, Pb, Al, Co, Cr, Mn, Ni, Mo, Hg;
- (ii) ein Peroxid (z. B. H2O2, tert.-Butylperoxid usw.);
- (iv) ein Hydroperoxid (z. B. tert.-Butyl-HOOH usw.);
- (v) eine Fettsäure (z. B. Ölsäure, Linolensäure, Arachidonsäure usw.) und/oder ein geradkettiges oder verzweigtes, gesättigtes oder ungesättigtes Derivat davon; wobei das Medium ferner wenigstens eine assimilierbare Quelle für Kohlenstoff und/oder Stickstoff und/oder wenigstens ein Mineralsalz umfasst, wenn die Verbindungen (i) bis (v) selbst nicht eine derartige Quelle und/oder ein derartiges Salz sind.
- Die Kohlensstoffquellen können zum Beispiel aus agrikulturellen und/oder industriellen Abfällen stammen; insbesondere können sie wenigstens eine der folgenden Substanzen umfassen: Zucker, wie Dextrose, Dextrin, Glucose, Fructose, Saccharose, Mannit, Mannose; organische Säuren; Alkohole; Aldehyde; Glycerin; Stärke; Fette; Öle; Kohlenwasserstoffe und Molke und dergleichen; insbesondere kann die erfindungsgemäße Produktion von GSH unter günstigen Bedingungen, wobei relativ preiswerte Kohlenstoffquellen, wie Rübenmelasse, eingesetzt werden, durchgeführt werden.
- Die Stickstoffquellen können zum Beispiel wenigstens eine der folgenden Substanzen umfassen: Malzextrakt, Maisquellwasser („corn steep liquor"), enzymatisches Hydrolysat von Casein, Sojamehl, Trockenhefe, Pepton, Sojapepton, Fleischextrakt, Nitrat, Aminosäuren, Casein, Ammoniumsalze und dergleichen. Gute Ergebnisse werden unter Verwendung von Ammoniumsalzen, wie Ammoniumnitrat und Ammoniumsulfat, erhalten.
- Die zur Produktion verwendeten Mineralsalze können in Abhängigkeit vom Kulturmedium variieren; die löslichen anorganischen Salze, die Natrium-, Kalium-, Magnesium-, Sulfat-, Chlorid-, Nitrationen bereitstellen, können verwendet werden. Derartige Salze können z. B. Kaliumdihydrogenphosphat, Magnesiumsulfat, Kaliumhydrogensulfat, Natriumnitrat sein. Die Zugabe von Calciumcarbonat kann ebenso hilfreich sein.
- Ferner kann das Medium wenigstens eine Aminosäure (z. B. Cystein, Methionin, Glutamat, Glutamin, Glycin, Leucin, Ace tylcystein usw.) und/oder eine Phosphorquelle (z. B. Kaliumphosphat usw.) und/oder einen Alkohol (Methanol, Ethanol, Isopropanol, Butanol usw.) umfassen.
- Vorzugsweise ist in Stufe (a) der GSH-Gehalt pro Biomasseeinheit höher als 1,6% (G/G), bezogen auf das Trockengewicht, wohingegen Stufe (b) vorzugsweise bei 20–50°C für 12–72 h, insbesondere bei 25–45°C für 12–48 h, durchgeführt wird; die Dichte der kultivierten Biomasse liegt vorzugsweise zwischen 50 und 65 g/l, bezogen auf das Trockengewicht.
- Das erfindungsgemäße Verfahren und spezifisch entweder Stufen (a) und/oder (b) und/oder (c) können entweder chargenweise oder kontinuierlich durchgeführt werden.
- Die Stufen (a) und/oder (b) und/oder (c) des erfindungsgemäßen Verfahrens können durch Belüftung mit entweder Luft oder Sauerstoffgas und/oder einem Gemisch davon durchgeführt werden; das erfindungsgemäße Verfahren wird vorteilhafterweise in belüfteten Fermentern durchgeführt, um bemerkenswerte Mengen an GSH zu erhalten. Der bevorzugte Fermenter ist ein Fermenter vom Typ Belüftung-Umwälzung oder ein Airlift-Fermenter. Ferner kann das Verfahren in einem Kolben und in Fermentern verschiedener Kapazität durchgeführt werden.
- Das erfindungsgemäße Verfahren umfasst die Aktivierung – Stufe (c) – der kultivierten Biomasse. In der vorliegenden Beschreibung soll „Aktivierung" auf eine Anreicherung des intrazellulären GSH-Gehalts der Biomasse, durchgeführt unter Einsatz von ruhenden Zellen unter Nicht-Wachstumsbedingungen, hinweisen.
- Die Aktivierung umfasst:
- (α) Resuspendieren der kultivierten Biomasse, z. B. 5–20% der/an trockenen/r Biomasse, in einer wässrigen Lösung, enthaltend 0,4–1 M Kohlenstoffquelle und 0,001–0,01 M Cystein;
- (β) Rühren der resultierenden Suspension bei 300–600 UpM; und
- (γ) Belüften der Suspension entweder mit Luft oder Sauerstoffgas und/oder einem Gemisch davon, vorzugsweise bei 1–4 vvm.
- In Stufe (a) enthält die wässrige Lösung vorzugsweise 0,001–0,01 M Cystein, Glycin und Glutamat.
- In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform wird GSH in Stufe (d) des erfindungsgemäßen Verfahrens durch Lyse bei einem pH von 0,05–3,0 und bei einer Temperatur von 70–90°C extrahiert.
- Die kultivierte Biomasse, die aus Stufe (b) resultiert, zeigt eine Produktivität an GSH von etwa 0,9–1,2%, wohingegen die aktivierte kultivierte Biomasse, die aus Stufe (c) des erfindungsgemäßen Verfahrens resultiert, eine Erhöhung der GSH-Produktivität auf 2,7–3,9% unter getrockneten Bedingungen zeigt.
- Die Extraktion von GSH in Stufe (d) kann vorzugsweise durch ein stark kationisches Harz, wie z. B. Amberlite® IR 120-200-220, hergestellt von Rhom & Haas, oder Relite® CF, hergestellt von Mitsubishi Chemical Corporation, und nachfolgend ein nicht-ionisches Harz, wie z. B. SP 207 (Resindion, Mitsubishi), durchgeführt werden. Die GSH-Extraktion kann vorzugsweise durch Fällung des Salzes in Gegenwart von H2SO4, in der das Salz nach Salzbildung durch ein (Molekül) H2SO4 unlöslich wird, erhalten werden.
- Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung ohne sie einzuschränken.
- BEISPIEL 1
- Ein Wildstamm von Pichia angusta, isoliert aus Bodenproben, wurde verwendet, nämlich ein homothallischer, haploider (Stamm).
- Stufe 1
- Der Stamm wurde für 20 Stunden bei 37°C (konische 250 ml-Kolben, Inkubation bei 200 UpM orbital) in 100 ml reichen Me dium („Rich Medium") (RM) kultiviert, das die folgende Zusammensetzung (g/l) aufwies:
Glucose 20 Pepton 20 Hefeextrakt 10 - Stufe 2
- 25 ml Hefekultur wurden zwei mal in destilliertem Wasser per Zentrifugation gewaschen („spin-washed") und in destilliertem Wasser resuspendiert.
- 5 × 107 Zellen wurden auf Glucose-Mineral-Medium (GM), enthaltend 8 mM Cadmiumchloridmonohydrat (MMC), ausplattiert, das die folgende Zusammensetzung (g/l) aufwies:
Glucose 20 Hefe-Stickstoffbasis 7 Cadmiumchloridmonohydrat 1,61 - Die Platten wurden bis zu einer Mortalität von 90% UV-bestrahlt und für 20 Tage bei 37°C im Dunklen inkubiert.
- Stufe 3
- Nach der Inkubation zeigte eine typische Platte 800–1000 Kolonien, wobei etwa 50% von diesen einen Durchmesser F < 1 mm („klein") und etwa 50% F > 1 mm („groß") aufwiesen. Zehn große Kolonien wurden isoliert, mittels Ausstreichen auf RM-Platten gereinigt und auf MMC erneut getestet. Der cadmiumresistente Phänotyp von 5 von 10 Kolonien wurden bestätigt.
- Stufe 4
- Fünf in Stufe 3 isolierte Kolonien wurden wie gerade oben beschrieben behandelt, in diesem Fall wurde das Cadmium durch 200 mM Natriumorthovanadat ersetzt. Am Ende wurden 5 Kolonien isoliert, deren Cadmium-Vanadat-resistenter Phänotyp bestätigt war.
- Stufe 5
- Jede der 5 Cadmium-Vanadat-resistenten Kolonien der vorherigen Stufe (hiernach CVCdA, CVCdB, CVC, CVD, CVE) wurde in 7,5 ml Mineralmedium (MM) vorkultiviert und für 16 h bei 37°C (orbital, 200 UpM) inkubiert. Zellen aus diesen Vorkulturen wurden anschließend verwendet, um 100 ml-Kolben, enthaltend 20 ml MM, zu inokulieren, so dass mit 5 × 106 Zellen/ml begonnen wurde. Die Kolben wurden bei 37°C für 24 h (orbital, 200 UpM) inkubiert; das Experiment wurde in dreifacher Wiederholung durchgeführt.
- Stufe 6
- Der Zellgehalt jedes Kolbens wurde mittels Zentrifugation gewonnen, zweimal gewaschen und in zwei Aliquots aufgeteilt. Ein Aliquot diente der Bestimmung des Trockengewichts der Biomasse, wohingegen das andere der Bestimmung des GSH-Gehalts von Zellextrakten diente, die erhalten wurden durch Resuspendieren der Zelle in 1 ml Perchlorsäure, Zugeben von 0,5 g Glaskügelchen (Sigma # G-9268), Rühren für 1 Min × 3, Präzipitieren bzw. Fällen der Festphase mittels Zentrifugation und Pipettieren auf dem Extrakt, gemäß dem Verfahren von Akerboom und Sies, „Methods in enzymology", Band 27, Seiten 373–384, 1981, Academic Press Inc.
- Tabelle 1 zeigt einige signifikante Ergebnisse, die mit den fünf Kulturen erhalten wurden, ausgedrückt als prozentualer Anteil der Gewichtskonzentrationen („weight levels") pro Einheit Biomasse. Tabelle 1
Stamm GSH/Biomasseeinheit E. 1 E. 2 E. 3 Mittelwert Wildtyp (Kontrolle) 100 100 100 100 Mutante CVCdA 124 119 122 122 Mutante CVCdB 231 219 242 231 Mutante CVC 100 101 97 99 Mutante CVD 102 105 106 104 Mutante CVE 109 110 107 109 - E. = Experiment
- Es wird bemerkt werden, dass die Mutanten CVCdA und, bemerkenswerterweise, CVCdB (Pichia angusta, identifiziert in unserer Stammsammlung als GN/2219, NCYC 2957) eine signifikante Erhöhung im intrazellulären GSH-Gehalt zeigen.
- Stufe 7
- Die Produktion von GSH unter Verwendung der Mutante CVCdB GN/2219, NCYC 2957, in Tabelle 2 als Mutante B angegeben, in einem 3 l-Fermenter wurde unter Verwendung von 2 verschiedenen Medien (GM, GlyM – wie GM, jedoch ist Glucose durch 2% Glycerin ersetzt – und mM – wie GM, jedoch ist Glucose durch 18% Melasse, entsprechend 9% als Saccharose, ersetzt) und den folgenden Kulturbedingungen durchgeführt: Volumen: 2 l, Temperatur: 35°C, Luft: 1 vvm, pH: 5,0.
- Die Entwicklung von GSH und Biomasse wurde für 62 h verfolgt und mit der einer identischen Kontrollkultur (Wildstamm) verglichen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 gezeigt.
- Es wird bemerkt werden, dass die zelluläre Produktivität im Falle der Mutante B höher ist als im Wildstamm, wohingegen die Ausbeuteunterschiede zwischen den zwei Medien nicht relevant sind.
- Diese Tests zeigen, dass das erfindungsgemäße Verfahren unter günstigen Bedingungen unter Einsatz verschiedener Medien und für lange Zeiträume durchgeführt werden kann.
- Nach der Fermentationsphase wurde die Biomasse gewonnen, gewaschen und entweder in konzentrierter Form resuspendiert, um eine Aktivierungsstufe zu beginnen, wobei auf eine weitere Erhöhung der GSH-Ausbeuten abgezielt wurde (beschrieben in Beispiel 2), oder eine Bearbeitung zum Extrahieren und Reinigen von GSH erfolgte (hier unten beschrieben in Stufe 8).
- Stufe 8
- Die aus der vorherigen Stufe erhaltene Biomasse wurde in entmineralisiertem Wasser bis zu einer Konzentration von 7 g/l (Biomassetrockengewicht) resuspendiert. 10 Liter dieser konzentrierten Biomassesuspension (CoBS) wurden unter Verwendung einer Kombination aus niedrigem pH (1–6,5, mit konzentrierter H2SO4) und hoher Temperatur (75°C × 3 Min) permeabilisiert. Die Biomasse wurde anschließend mittels Filtration (0,2 mm-Keramikmembranen) entfernt und die GSH-enthaltende Lösung wurde mittels Umkehrosmose konzentriert, um etwa 6 g/l GSH zu erreichen.
- Tabelle 3 fasst die GSH-Ausbeuten (%), erhalten bei verschieden pH(-Werten), wobei die vorstehend genannte CoBS verwendet wurde, zusammen. Tabelle 3
pH 6,5 5 4 3 1,5 E. 1 0,50 0,55 0,61 0,68 0,98 E. 2 0,48 0,52 0,58 0,72 1,02 E. 3 0,42 0,49 0,64 0,73 0,95 - E. = Experiment
- Diese Tests zeigen, dass eine Zellpermeabilisierung unter den eingesetzten Bedingungen durch niedrige pH-Werte begünstigt wird.
- Stufe 9
- Die Reinigung von GSH wurde bewerkstelligt, indem 1 l der konzentrierten GSH-Lösung (etwa 6 g/l) in einer Säule, gepackt mit Amberlite (1 l, IR120H), bei einer Flussrate von 1 BV/h percoliert wurde. 30 BV entmineralisiertes Wasser wurden anschließend aufgebracht, um das Harz zu waschen, bevor das GSH mit 1% H2SO4 eluiert wurde. 6 l der resultierenden Eluate werden auf 5 1 mittels Umkehrosmose konzentriert, was etwa 85% des anfänglichen GSH ergibt.
- Stufe 10
- Die konzentrierten Eluate wurden in einer Säule perkoliert, gepackt mit 1 1 nicht-ionischem porösem Harz, d. h. SP207 (Resindion, Mitsubishi), zuvor regeneriert bei 1 BV/h. GSH wurde anschließend mit Wasser eluiert und die Fraktionen 2 bis 9 wurden gesammelt. Die wässrige GSH-Lösung, die so erhalten wurde, wurde auf 500 g/l konzentriert. GSH wurde schließlich mittels einer 50%igen Ethanollösung gefällt. 4 g weißes kristallines Pulver mit 98% GSH-Gehalt wurden erhalten.
- BEISPIEL 2
- Ein nicht-sporulierender, spontan mutierter bzw. mutanter Stamm von Saccharomyces cerevisiae (identifiziert in unserer Stammsammlung als GN/2220, NCYC 2958), der einen GSH-Gehalt pro Biomasseeinheit von mehr als 1,4% (G/G) aufweist, wurde verwendet.
- Stufe 1
- Der Stamm wurde chargenweise für 24 h in einem 14 l-Fermenter kultiviert, wobei 3 verschiedene Medien eingesetzt wurden, nämlich (Mengen sind als g/l angegeben): YP (20 Pepton, 10 Hefeextrakt, 10 Glycerin, pH 5), YPG (20 Pepton, 10 Hefeextrakt, 20 Glukose, pH 5) und B (60 Rübenmelasse – entsprechend 30 Saccharose –, 5(NH4)2SO4, 1K2HPO4, 0,5 Hefeex trakt, 0,2MgSO4, pH 5,8). Die Kultivierungsbedingungen waren wie folgt: 28°C, 1 vvm Luft, 400 UpM. Antischaum: Sigma PPG #2000, Inokulum 10% (V/V) einer Kolbenkultur in stationärer Phase in YP.
- Tabelle 4 fasst die Ergebnisse von sieben verschiedenen Chargen zusammen. Tabelle 4
Biomasse GSH E. M Y1 P Y1 Y2 P g/l g/lh mg/l % mg/lh 1 YPG 9,40 0,39 94 1,0 3,90 2 YPG 9,20 0,39 65 0,7 2,70 3 B 10,7 0,44 207 1,9 8,60 4 B 9,10 0,38 155 1,7 6,50 5 B 10,5 0,44 203 1,9 8,46 6 YP 7,50 0,31 90 1,2 3,80 7 YP 7,80 0,32 101 1,2 4,00 - E. = Experiment; P = Produktivität; Y1 = Ausbeute pro Volumen; Y2 = Ausbeute pro trockener Biomasse; es wurde keine verbleibende Saccharose detektiert.
- Es wird bemerkt werden, dass die zelluläre Produktivität in Falle des Mediums B mehr als die doppelte der im Falle der anderen 2 Medien ist; ebenso zeigen die relativen endgültigen Ausbeuten, die zwischen den 3 Medien beträchtlich differieren, dass B das Erhalten der besten Ergebnisse ermöglicht.
- Stufe 2
- Biomasse, erhalten aus der vorherigen Stufe, wurde mittels Zentrifugation bei 10000 UpM für 10 Min (5°C) gewonnen, zwei mal mit entionisiertem Wasser gewaschen und bis zu einer Konzentration von 7% (trockene Biomasse, G/V) in der folgenden Lösung (g/l) resuspendiert:
Glucose 82 Natriumtartrat 10 Adenin 4 Cystein 4 Methionin 3,5 KH2PO4 3,5 - Das „Biomasseaktivierungs"-Verfahren wurde anschließend in einem 3 l-Fermenter für 24 h gestartet, und zwar mit den folgenden Betriebsbedingungen: Rührgeschwindigkeit, 500 UpM; Belüftungsrate 3 vvm; Temperatur 28°C.
- Tabelle 5 fasst die GSH-Ausbeuten von vier Aktivierungsexperimenten zusammen, wobei Biomasse eingesetzt wurde, die entweder in B-Medium oder in YPG-Medium erhalten wurde. Tabelle 5
E Fermentationsmedium GSH-Ausbeute (% der trockenen Biomasse) vor Aktivierung nach Aktivierung 1 YPG 1,0 2,0 2 YPG 0,7 2,0 3 B 1,9 3,7 4 B 1,7 3,4 - E. = Experiment
- Es wird bemerkt werden, dass das vorstehend angeführte 24-stündige Aktivierungsverfahren unabhängig vom anfänglichen GSH-Gehalt signifikante GSH-Ausbeuteerhöhungen ermöglicht.
- BEISPIEL 3
- Der Stamm Saccharomyces cerevisiae NCYC 2958 wurde chargenweise für 30 h in einem 50 l-Fermenter unter Verwendung des Mediums B (Beispiel 2) kultiviert. Inokulum: 20% von stationärer Phase. Kultivierungsbedingungen waren wie in Beispiel 2.
- Während des Wachstums, beginnend ab der zwölften Stunde, erfolgten 5 Zugaben (alle 3 h) von Melasse, so dass die Kon zentration an Saccharose bis zur 24sten Stunde höher als 10% gehalten wurde.
- Eine Biomasse von 58,89 g/l und 1,45% GSH, beide bezogen auf das Trockengewicht, wurden erhalten.
- Die für Zentrifugation gesammelte bzw. gewonnene Biomasse (Beispiel 2) wurde wieder zu 10% suspendiert und in der folgenden Lösung (g/l) „aktiviert":
Glucose 82 Natriumtartrat 10 Adenin 4 Cystein 4 Natriumglutamat 5 Glycin 5 Methionin 3 85% H3PO4 0,25 ml - Bei den gleichen Bedingungen von Beispiel 2 wurden 3,7% GSH unter trockenen Bedingungen erhalten, entsprechend 3,7 g/l der „Aktivierung".
- BEISPIEL 4
- Ein Wildstamm von Candida boidinii, isoliert aus Pflanzenmaterial, wurde mutagenisiert und die Mutante #21 wurde nach einer Verfahrensweise, die analog zu der in Beispiel 1 beschriebenen war, ausgewählt, wobei jedoch Methylglyoxal („methylglioxal") als ein Selektionsmittel verwendet wurde. Dieser Stamm wurde als Candida boidinii Mutante 21, NCYC 2983, interne Stammsammlung GN/2222, identifiziert und zeigte einen GSH-Gehalt pro Biomasseeinheit von mehr als 1,5% (G/G).
- Stufe 1
- Der Stamm wurde chargenweise über 24 h in einem 14 l-Fermenter unter Einsatz von Medium B kultiviert, jedoch wurde die Melasse bis 180 g/l (90 g/l als Saccharose) wie in Beispiel 3 zugesetzt. Die Kultivierungsbedingungen waren wie folgt: 28°C, 1 vvm Luft, 400 UpM. Antischaum: Sigma PPG #, Inokulum 10% (V/V) einer Kolbenkultur in stationärer Phase in YP.
- Tabelle 6 fasst die Ergebnisse der Fermentation zusammen. Tabelle 6
Biomasse GSH H Y1 P Y1 Y2 P g/l g/lh mg/l % mg/lh 6 0,54 0,09 2,7 0,5 0,33 18 16,2 0,9 194,4 1,2 10,80 24 29,2 1,2 408,8 1,4 17,03 30 36,1 1,2 469,3 1,3 15,64 - H = Stunden; P = Produktivität; Y1 = Ausbeute pro Volumen; Y2 = Ausbeute pro trockener Biomasse; es wurde keine verbleibende Saccharose detektiert.
- Stufe 2
- Die aus der vorstehend genannten Charge erhaltene Biomasse wurde wie in Beispiel 1 (Stufe 8) beschrieben behandelt, um eine konzentrierte GSH-Lösung (etwa 6 g/l) zu erhalten. 1 l dieser Lösung wurde mit H2SO4 auf pH 1,8 eingestellt und anschließend mit einer 10 ml-Suspension, enthaltend 1,4 g Cu2O in Wasser, behandelt. Die Suspension wurde sehr sanft eingetropft, während die Temperatur bei 4°C gehalten wurde. Die Lösung wurde anschließend bei 4°C für 2 h gerührt und anschließend über Nacht ungestört gelassen.
- Stufe 3
- Nach Filtration wurde das Präzipitat (9 g) mehrmals mit verdünnter H2SO4 gewaschen und anschließend mit H2S bei Raumtemperatur solubilisiert. Die Lösung, enthaltend 4,5 g GSH, wurde auf 1 l SP 207, ein von Mitsubishi Chemical hergestelltes nicht-ionisches Harz, aufgebracht und anschließend mit 10 BV entmineralisiertem Wasser eluiert. Fraktionen wurden gesammelt (6 l), konzentriert und mit 50% Ethanol in Wasser behandelt, um GSH auszufällen. 3,5 g GSH, die eine Reinheit von 99% zeigten, wurden erhalten.
- BEISPIEL 5
- Die gemäß den Beispielen 1 und 4 erhaltene Biomasse wurde behandelt, wie in Beispiel 1 (Stufe 8) beschrieben, um eine konzentrierte Lösung von GSH (etwa 6 g/l) zu erhalten. 1 l dieser Lösung wurde mit H2SO4 auf pH 1,8 eingestellt und in einem Wasserbad auf 40°C erhitzt.
- Bei einer Temperatur von 40°C wurden 10 ml einer Cu2O-Suspension (1,5 g) in Wasser zugegeben.
- Nach 3 Minuten wurde die resultierende Lösung schnell auf 4°C gebracht und dann für 2 Stunden unter Rühren gehalten.
- Nach 2 Stunden wurde sie wie in Beispiel 3 (Stufe 3) zur Filtration fortgeführt. Nach der Filtration wurde das Präzipitat (0,5 g) in H2S gelöst, mit SP 207, einem von Mitsubishi Chemical hergestellten nicht-ionischen Harz, gereinigt und in Ethanol gefällt. 3,6 g GSH mit einer Reinheit von 99% wurden erhalten.
Claims (18)
- Fermentationsverfahren zur Produktion von Glutathion, umfassend: (a) das Erhalten einer Biomasse-Vorkultur durch Vorkultivieren, unter aeroben Bedingungen, eines Stammes einer Hefegattung, ausgewählt aus Pichia angusta -NCYC 2957- GN/2219, Saccharomyces cerevisiae -NCYC 2958- GN/2220, Saccharomyces cerevisiae var. ellipsoideus -NCYC 2959- GN/2221 und Candida boidinii, Mutante 21 -NCYC 2983- GN/2222, wobei der Glutathion-Gehalt pro Biomasseeinheit höher ist als 1,2 (G/G), bezogen auf das Trockengewicht; (b) das Kultivieren, unter aeroben Bedingungen, der resultierenden Biomasse-Vorkultur, so dass die Dichte der resultierenden kultivierten Biomasse höher ist als 50 g/l, bezogen auf das Trockengewicht: (c) die Aktivierung der kultivierten Biomasse unter Nicht-Wachstumsbedingungen, umfassend: (α) Resuspendieren der kultivierten Biomasse, 5–20% trockene Biomasse, in einer wässrigen Lösung, enthaltend 0,4–1 M Kohlenstoffquelle und 0,001–0,01 M Cystein; (β) Rühren der resultierenden Suspension bei 300–600 Upm und (γ) Belüften der Suspension entweder mit Luft oder Sauerstoffgas und/oder einem Gemisch davon; und (d) die Gewinnung von Glutathion aus der kultivierten Biomasse, die aus Stufe (c) resultiert, durch Extrahieren von Glutathion bei einem pH gleich oder niedriger als 6 und Reinigen des resultierenden Glutathions.
- Verfahren nach dem vorstehenden Anspruch, worin entweder die Stufen (a) und/oder (b) und/oder (c) in einem wässrigen, flüssigen oder festen Nährmedium durchgeführt werden, das wenigstens eine der folgenden Verbindungen umfasst: (i) eine Verbindung eines Metalls, ausgewählt aus Cd, V, Cu, Fe, Pb, Al, Co, Cr, Mn, Ni, Mo, Hg; (ii) ein Peroxid; (iii) ein Aldehyd; (iv) ein Hydroperoxid; (v) eine Fettsäure und/oder ein geradkettiges oder verzweigtes, gesättigtes oder ungesättigtes Derivat davon; wobei das Medium ferner wenigstens eine assimilierbare Quelle für Kohlenstoff und/oder Stickstoff und/oder wenigstens ein Mineralsalz enthält, wenn die Verbindungen (i) bis (v) selbst nicht eine derartige Quelle und/oder ein derartiges Salz sind.
- Verfahren nach dem vorstehenden Anspruch, worin die Verbindung (i) ein anorganisches wasserlösliches Mineralsalz ist.
- Verfahren nach Anspruch 2 oder 3, worin das Medium wenigstes eine Aminosäure und/oder eine Phosphorquelle und/oder einen Alkohol umfasst.
- Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, worin der Glutathion-Gehalt pro Biomasseeinheit in Stufe (a) höher ist als 1,6% (G/G), bezogen auf das Trockengewicht.
- Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, worin Stufe (b) bei 20–50°C für 12–72 h durchgeführt wird und die Dichte der resultierenden kultivierten Biomasse zwischen 50 und 65 g/l, bezogen auf das Trockengewicht, liegt.
- Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, worin Stufe (b) bei 25–45°C für 12–48 h durchgeführt wird.
- Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, worin entweder Stufen (a) und/oder (b) und/oder (c) entweder chargenweise oder kontinuierlich durchgeführt werden.
- Verfahren nach einem der Ansprüche 2 bis 8, worin die Kohlenstoffquelle aus agrikulturellen und/oder industriellen Abfällen stammt.
- Verfahren nach dem vorstehenden Anspruch, worin die Kohlenstoffquelle wenigstens eine der folgenden Substanzen umfasst: Zucker, organische Säuren, Alkohole, Aldehyde, Glycerin, Fette, Öle, Kohlenwasserstoffe und Molke.
- Verfahren nach Anspruch 9 oder 10, worin die Kohlenstoffquelle Rübenmelasse umfasst.
- Verfahren nach einem der Ansprüche 2 bis 8, worin die Stickstoffquelle wenigstens eine der folgenden Substanzen umfasst: Malzextrakt, Maisquellwasser („corn steep liquor"), enzymatisches Hydrolysat von Casein, Sojamehl, Trockenhefe, Pepton, Sojapepton, Fleischextrakt, Nitrat, Aminosäuren, Casein und Ammoniumsalze.
- Verfahren nach dem vorstehenden Anspruch, worin die Stickstoffquelle Ammoniumnitrat oder Ammoniumsulfat umfasst.
- Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, worin entweder Stufen (a) und/oder (b) und/oder (c) durch Belüftung entweder mit Luft oder Sauerstoffgas und/oder einem Gemisch davon durchgeführt werden.
- Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, worin die wässrige Lösung in Stufe (a) 0,001–0,01 M Cystein, Glycin und Glutamat enthält.
- Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, worin der zu verwendende Fermenter ein Fermenter vom Typ Belüftung-Umwälzung oder vom Airlift-Typ ist.
- Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, worin das Glutathion in Stufe (d) durch Lyse bei einem pH von 0,5–3,0 und bei einer Temperatur von 70–90°C extrahiert wird.
- Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, worin das Glutathion in Stufe (d) durch ein starkes kationisches Harz und nachfolgend ein nicht-ionisches Harz extrahiert wird.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP02017906A EP1391517B1 (de) | 2002-08-09 | 2002-08-09 | Verfahren zur Herstellung von Glutathion |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE60225004D1 DE60225004D1 (de) | 2008-03-27 |
DE60225004T2 true DE60225004T2 (de) | 2009-03-05 |
Family
ID=30775787
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE60225004T Expired - Lifetime DE60225004T2 (de) | 2002-08-09 | 2002-08-09 | Verfahren zur Herstellung von Glutathion |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6902912B2 (de) |
EP (1) | EP1391517B1 (de) |
JP (1) | JP4342860B2 (de) |
KR (1) | KR101023923B1 (de) |
AT (1) | ATE386134T1 (de) |
CA (1) | CA2436682C (de) |
DE (1) | DE60225004T2 (de) |
ES (1) | ES2300403T3 (de) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR100771077B1 (ko) * | 2006-06-02 | 2007-10-29 | 주식회사 홍재그린 | 발효 효모 배양 배지용 효모 영양제 |
CN101225402B (zh) * | 2007-01-16 | 2011-04-27 | 上海医药工业研究院 | 生产谷胱甘肽的毕赤酵母基因工程菌及用于构建其的重组质粒 |
CN101918535B (zh) * | 2008-01-18 | 2013-08-21 | 澳洲生质处理有限公司 | 由粗甘油制备营养性、治疗性或感官性产品的方法 |
JP5410703B2 (ja) * | 2008-07-30 | 2014-02-05 | アサヒグループホールディングス株式会社 | 酵母変異株の作製方法および酵母変異株 |
ITPD20090348A1 (it) | 2009-11-21 | 2011-05-22 | Silvia Bradamante | Metodo per produrre glutatione extracellulare con alte rese |
CN101709318B (zh) * | 2009-11-26 | 2012-05-23 | 苏州大学 | 一种产朊假丝酵母流加发酵制备谷胱甘肽的方法 |
US20140329324A1 (en) * | 2011-11-23 | 2014-11-06 | Universidad De Antioquia | Functional unlimited culture medium having a natural bio-composite inducer |
CN105614895A (zh) * | 2015-12-22 | 2016-06-01 | 厉政轩 | 碱性-酸性蛋白酶联合酶解制备富铬酵母自溶粉的方法 |
IT201800006336A1 (it) * | 2018-06-14 | 2019-12-14 | Glutatione ridotto in forma solida amorfa altamente solubile e processo per ottenerlo | |
CN110698536A (zh) * | 2019-10-30 | 2020-01-17 | 江西诚志生物工程有限公司 | 一种采用发酵法生产谷胱甘肽的新方法 |
IT202000022846A1 (it) | 2020-09-28 | 2022-03-28 | Lesaffre & Cie | Lievito ricombinante per la produzione di oligopeptide |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS4914680A (de) | 1972-06-07 | 1974-02-08 | ||
JPS52156904A (en) | 1976-06-18 | 1977-12-27 | Basf Ag | Wood preservative |
JPS5881797A (ja) * | 1981-11-10 | 1983-05-17 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | グルタチオンの製造法 |
EP0146265B1 (de) * | 1983-11-15 | 1991-04-03 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Verfahren zur Herstellung einer Verbindung aus deren Vorläufer unter Verwendung einer enzymatisch aktiven Bakterie |
JPS6127999A (ja) | 1984-07-16 | 1986-02-07 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | グルタチオンの精製方法 |
DE4219381C2 (de) * | 1992-06-13 | 1994-07-21 | Huels Chemische Werke Ag | Zink-resistente Hefe zur Herstellung von Glutathion |
-
2002
- 2002-08-09 DE DE60225004T patent/DE60225004T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-08-09 AT AT02017906T patent/ATE386134T1/de active
- 2002-08-09 EP EP02017906A patent/EP1391517B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-08-09 ES ES02017906T patent/ES2300403T3/es not_active Expired - Lifetime
-
2003
- 2003-07-01 US US10/609,561 patent/US6902912B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-07-02 JP JP2003270328A patent/JP4342860B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2003-08-07 CA CA2436682A patent/CA2436682C/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-08-08 KR KR1020030055071A patent/KR101023923B1/ko not_active IP Right Cessation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2004129647A (ja) | 2004-04-30 |
EP1391517A1 (de) | 2004-02-25 |
US6902912B2 (en) | 2005-06-07 |
CA2436682A1 (en) | 2004-02-09 |
DE60225004D1 (de) | 2008-03-27 |
ATE386134T1 (de) | 2008-03-15 |
ES2300403T3 (es) | 2008-06-16 |
EP1391517B1 (de) | 2008-02-13 |
CA2436682C (en) | 2011-03-15 |
KR20040014360A (ko) | 2004-02-14 |
KR101023923B1 (ko) | 2011-03-22 |
JP4342860B2 (ja) | 2009-10-14 |
US20040048337A1 (en) | 2004-03-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0049858B1 (de) | Verfahren zur Herstellung von N-substituierten Derivaten des 1-Desoxynojirimycins | |
EP0012278B1 (de) | Herstellung von N-substituierten Derivaten des 1-Desoxy-nojirimycins | |
DE69720379T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Erythritol | |
DE60225004T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Glutathion | |
DE3490213T1 (de) | Verfahren zur Erzeugung von Ethanol aus Xylose enthaltenden Substanzen | |
CH658868A5 (de) | Verfahren zur herstellung von s-adenosyl-methionin. | |
EP2069515B1 (de) | Verfahren zur herstellung von erythrit unter verwendung von moniliella tomentosa stämmen in gegenwart anorganischer nitrate als stickstoffquelle | |
JP2004129647A6 (ja) | グルタチオンの生産方法 | |
DE3049308A1 (de) | Verfahren zur bildung des enzyms (alpha)-galactoxidase und zur hydrolyse von raffinose unter verwendung dieses enzyms | |
DE60307403T2 (de) | Bakterien und Verfahren zur Herstellung von Riboflavin durch Fermentation | |
DE2916736A1 (de) | Verfahren zur gewinnung eines mikroorganismenstammes | |
EP0552191B1 (de) | Mikroorganismus und verfahren zur gewinnung von anthranilsäure | |
DE3527649A1 (de) | Mikroorganismus einer neuen art der gattung streptomyces | |
EP0683225B1 (de) | Prozess für die Herstellung von Inositol und dazu verwendeter Mikroorganismus | |
DE2358496C2 (de) | Herstellung von L-Serin | |
DE1155413B (de) | Verfahren zur biotechnischen Herstellung von Gibberellinsaeure | |
DE3019450A1 (de) | Verfahren zur gewinnung von glucosedehydrogenase und hierfuer geeigneter mikroorganismus | |
EP0450491B1 (de) | Verfahren zur Herstellung von D-Isocitronensäure durch Fermentation | |
DE69930070T2 (de) | Fermentations-Verfahren zur Herstellung von Erythritol mittels neuer Zellen von Pichia | |
DE2406708A1 (de) | Verfahren zur herstellung von hefezellen | |
EP0188770B1 (de) | Verfahren zur Gewinnung von Cholesterinesterase | |
DE3441549A1 (de) | Verbesserte mikroorganismenstaemme zur fermentativen herstellung von l-serin | |
DE3320653A1 (de) | Fermentatives verfahren zur herstellung von l-leucin | |
CH665220A5 (de) | Verfahren zur erzeugung von d-ribose. | |
EP0522112B1 (de) | Verfahren zur herstellung von dulcit aus lactose |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
8364 | No opposition during term of opposition |