DE60025856T2

DE60025856T2 - Neue Pseudoerythromycin Derivate

Info

Publication number: DE60025856T2
Application number: DE60025856T
Authority: DE
Inventors: Satoshi Minato-ku OMURA; Yuzuru Minato-ku IWAI; Toshiaki Minato-ku Sunazuka; Tohru Minato-ku Nagamitsu
Original assignee: Kitasato Institute
Current assignee: Kitasato Institute
Priority date: 2000-08-17
Filing date: 2000-08-17
Publication date: 2006-10-19
Anticipated expiration: 2020-08-18
Also published as: US6734292B1; KR20040066185A; KR20040074096A; EP1256587A4; KR20040066186A; CA2386828C; KR20040066187A; EP1256587A1; DK1489090T3; ES2261224T3; EP1256587B1; ES2257720T3; KR20040066188A; EP1489090B1; DE60027015D1; AU2000265939A1; PT1489090E; WO2002014338A1; CA2386828A1; DE60025856D1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Pseudoerythromycin-Derivate oder ein Salz davon.
Erythromycin (im Weiteren manchmal als EM bezeichnet) ist sei langem als 14-gliedriges Makrolid-Antibiotikum für die Behandlung infektiöser Krankheiten, die durch Gram-positive Bakterien hervorgerufen werden, verwendet worden. Seit ungefähr zehn Jahren ist bekannt, dass Erythromycin inflammatorische Langzeiterkrankungen, wie die diffuse Panbronchiolitis und bronchiales Asthma, verbessert bzw. kuriert mit der Ausnahme therapeutischer Wirkung auf bakterielle Infektionserkrankungen. (Kudo, Shoji et al., Studies of clinical results on long term small administration of erythromycin for diffuse panbronchiolitis-Treatment results for 4 years, J. Japan. Thorac. Dis. Assoc., 25: 632-642, 1987).
Erythromycin ist ein Antibiotikum und weist eine antibakterielle Wirkung auf, die nicht immer für die Behandlung von Entzündungskrankheiten erforderlich ist. In der Folge werden in Patienten resistente Bakterien erzeugt, denen Antibiotika verabreicht werden, und im Ergebnis bewirkt das die Beeinträchtigung der Behandlung von Infektionserkrankungen in anderen Fällen.
Wie oben erwähnt, haben Kudo, Shoji et al. gezeigt, dass die diffuse Panbronchiolitis durch Langzeitverabreichung von geringen Mengen an Erythromycin behandelt werden kann (Kudo, Shoji et al., Studies of clinical results on long term small administration of erythromycin for diffuse panbronchiolitis-Treatment results for 4 years, J. Japan. Thorac. Dis. Assoc., 25: 632-642, 1987)
Kürzlich sind andere Wirkungen als die antibiotische Aktivität von Erythromycin festgestellt worden. Als Ergebnis wurde von der Anwendbarkeit auf anderen Gebieten als Lungenerkrankungen berichtet, zum Beispiel nicht auf diffuse Panbronchiolitis beschränkt, sondern für chronische Sinusitis und Crohn'sche Erkrankung. Der Wirkmechanismus von Erythromycin für chronische Krankheiten wie diffuse Panbronchiolitis ist vermutlich das Ergebnis der ursprünglichen antibakteriellen Wirkung. Es laufen zu Zeit Forschungsstudien und zeigen die antiinflammatorische Wirkung, welche durch immune inflammatorische Zellen in der penumbralen chronischen Atemwegsentzündung vermittelt wird.
Zum Beispiel zeigen die Studien die Regulierung der Migration von Neutrophilen zur infektiösen Region durch direkte Wirkung und die Regulierung der Migration von Neutrophilen oder von Freisetzung von aktivem Sauerstoff aus Neutrophilen durch indirekte Wirkung durch Mediatoren oder Cytokine. Des Weiteren besitzt Erythromycin eine Wirkung auf Lymphozyten, Makrophagen und Mastzellen zur Regulierung ihrer Proliferation oder der Cytokinbildung oder zur Differentiations-Induktion. (Kudo, Shoji Ed., Supervisors: Shimizu, Kihachiro and Omura Satoshi „Inflammation, Immunity and Macrolides Up to Date", Iyaku Journal Inc., Osaka, 1996).
Wie oben erläutert, nimmt man an, dass 14-gliedrige Makrolide chronische Atemwegserkrankungen als Ergebnis von Immunregulation und antiinflammatorischer Wirkung heilen.
Wir haben auf die Differentiations-Induktion von Monozyten zu Makrophagen fördernde Wirkung von Erythromycin abgestellt (N. Keicho, S. Kudoh, H. Yotsumoto, K. Akagawa, „Erythromycin promotes monocyte to macrophage differentiation", J. Antibiotics, 47, 80-89, 1994) und versucht, Erythromycin-Derivate mit dem Zweck zu synthetisieren, Derivate herzustellen, welche die antibakterielle Wirkung nicht mehr aufweisen und die Differentiations-Induktion in erhöhtem Maße fördern.
Die vorliegende Erfindung betrifft eine neue Verbindung, die ein Pseudoerythromycin der allgemeinen Formel (III)
ist, worin R₃ für NOH steht und Me Methyl ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Die Erfindung betrifft weiterhin eine neue Verbindung, die ein Pseudoerythromycin der allgemeinen Formel (IV)
ist, worin R₁ und R₂ gleich oder verschieden sind, und jeweils für H oder Methyl stehen, R₃ und R₄ für H, Hydroxyl oder Amino stehen und Me Methyl ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Syntheseverfahren für zahlreiche Erythromycin-Derivate sind beispielsweise in dem in 1 gezeigten Syntheseschema illustriert. Namentlich wird Erythromycin A mit eiskalter Essigsäure gemäß den Literaturstellen: (a) I. O. Kibwage, R. Busson, G. Janssen, J. Hoogmartens, H. Vanderhaeghe, Translactonization of Erythromycins, J. Org. Chem., 52, 990-996, 1987, (b) H. A. Kirst, J. A. Wind, J. W. Paschal, Synthesis of Ring-Constracted Derivatives of Erythromycin, J. Org. Chem., 52, 4359-4362, 1987 behandelt, was den Erythromycin-A-Enolether (EM201) liefert, anschließendes Rückflusskochen in Methanol in Gegenwart von Kaliumcarbonat liefert dem Pseudoerythromycin-A-Enolether (EM701) (bekannte Verbindung).
Das Produkt wurde mit Iod und Natriumacetat gemäß der Literaturstelle (L. A. Friberg, US-Patent 3,725,385) behandelt, um den De-N-methylpseudoerythromycin-A-enolether (EM703) (bekannte Verbindung) herzustellen. Die Verbindung wurde weiter mit Iod und Natriummethoxid behandelt, um den Bis(de-N-methyl)-pseudoerythromycin-A-enolether (EM721) (neue Verbindung) zu erhalten. Alkylierung, Acylierung und Sulfonylierung unter Verwendung von EM703 und EM721 lieferte zahlreiche Derivate unter Einschluss des Bis-de(3'-N-methyl)-3'-N-ethyl-8,9-anhydro-pseudoerythromycin-A-6,9-hemiketals (EM722).
Ein Syntheseschema analog zu dem, das für die Synthese der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet wird, ist in 1 erläutert. Namentlich können die Verbindungen durch einen Syntheseweg erhalten werden, der analog ist zu dem von: Erythromycin A (EMA) → Erythromycin-A-enolether (EM201) → Pseudoerythromycin-A-enolether (EM701) → De-N-methyl-pseudoerythromycin-A-enolether (EM703) → Bis(de-N-methyl)pseudoerythromycin-A-enolether (EM721).
Um die die Differentiations-Induktion erhöhende Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen zu bestätigen, wurde dieser Effekt für die Differentiations-Induktion von menschlichen Monozyten zu Makrophagen getestet. Diese Methode wird wie folgt duchgeführt.
THP-1-Zellen wurden aus Kulturflüssigkeit durch Zentrifugation gewonnen, unter Verwendung von Medium (RPMI 1640) wurde die Konzentration auf 2 × 10⁵ Zellen/ml eingestellt und auf eine Tüpfelplatte mit 48 Vertiefungen mit einer Menge von 500 μl/Vertiefung aufgebracht. 10 μl PMA-Lösung und 5 μl Probenlösung wurden jeder Vertiefung zugesetzt, unter mildem Schütteln verrührt und 72-96 Stunden unter 5% CO₂ bei 37°C inkubiert. Des Weiteren wurde eine 0,5-mg/ml-MTT-Lösung in einer Menge von 300 μl/Vertiefung zugesetzt und 3 Stunden lang unter 5% CO₂ bei 37°C inkubiert. Überstehende Lösung wurde unter Verwendung eines Injektionsröhrchens abgesaugt, 500 μl DMSO wurden unter Verwendung eines automatischen kontinuierlich arbeitenden Injektors zugegeben, um Formazan vollständig aufzulösen, und je 100 μl auf die Platte mit 96 Vertiefungen überführt. Die optische Absorption wurde unter Verwendung des Plattenlesers gemessen.
Die Ergebnisse der die Differentiations-Induktion von menschlichen Monozyten zu Makrophagen erhöhende Wirkung, welche durch den obigen Assay gemessen wurde, sind in Tabelle 1 gezeigt.
Tabelle 1 Struktur von EM703-analogen Derivaten und Aktivitäten in dem THP-1-Mϕ-System
In Tabelle 1 bedeuten Me: Methyl; Pr: Propyl; Et: Ethyl; Ac: Acetyl und Ms: Methansulfonyl. *ED₅₀: Wirkstoffkonzentration (μM), welche für 50%-ige Differentiations-Induktion von THP in Mϕ erforderlich ist.
In Tabelle 1 wird die angegebene Aktivität im Vergleich zu der die Differentiations-Induktion von EM 100 μM erhöhenden Wirkung dargestellt und die Symbole bedeuten: ++: Erhöhung um 100% oder mehr; +: Erhöhung von 50-100%; ±: Erhöhung von 25-50%; –: keine Aktivität; /: auftretende Cytotoxizität und NT: nicht getestet oder in der Prüfung.
Wie in Tabelle 1 gezeigt, wurde gefunden, dass die Verbindungen eine für die Differentiations-Induktion von THP-1 zu Mϕ erhöhende Wirkung haben, da je kleiner der ED₅₀-Wert (μM) (minimale Wirkstoffkonzentration, die für 50%-ige Differentiations-Induktion von THP-1 zu Mϕ erforderlich ist), die Differentiations-Induktions-Aktivität um so stärker ist.
Als nächstes wurde die Suppressionswirkung von EM703 gegenüber Bleomycininduzierter pulmonärer Fibrose geprüft (im Weiteren wird Bleomycin manchmal als BML bezeichnet).
Eine in fünfprozentigem Gummi arabicum suspendierte Probe wurde oral in einer Menge von 50 mg/kg/Tag über 17 Tage (von Tag 3 bis Tag 13) und Bleomycin in einer Menge von 100 mg/kg wurde am Tag 0 über die Schwanzvene verabreicht. Am Tag 28 wurden die Tiere unter Betäubung getötet und die Fibrose der Lungen mit unbehandelten Mäusen verglichen. Die Suppressionswirkungen sind in Tabelle 2 gezeigt.
Literaturstellen:

Azuma A., Furuta T., Enomoto T., Hashimoto Y., Uematsu K., Nukariya N., Murata A., Kudoh S., Preventive effect of erythromycin on experimental bleomycin-induced acute lung injury in rats Thorax 53, 186-189, 1998

Tabelle 2

Gruppe: Fortsetzung (Kontroll-) Gruppe (n = 1) BLM (Bleomycin)-Gruppe (n = 2) EM (Erythromycin)-Gruppe (n = 4) BLM (Bleomycin)- + EM (Erythromycin) 703-Gruppe (n = 5)

Wie oben angegeben ist Hydroxyprolin ein Index für die Lungenfibrose und ein höherer Wert zeigt Hyperfibrose an. Der Hydroxyprolinspiegel, ein Index für Lungenverletzung, in einer Gruppe, welcher BLM verabreicht wurde, wurde in einer Gruppe, der BLM + EM703 verabreicht wurde, reduziert.
Als nächstes wurde die Suppressionswirkung der Verbindung EM703 auf durch virale Infektion hervorgerufene Influenza untersucht.
Eine Probe wurde in physiologischer Kochsalzlösung mit 1% DMSO aufgelöst und eine Menge, welche der oralen Gabe bei der gering dosierten Verabreichung für die Langzeittherapie entsprach, wurde von Tag 1 bis Tag 6 der Infektion im Maus-Influenza-Lungenentzündungsmodell (0,3 mg und 0,03 mg/Maus) einmal täglich intraperitoneal verabreicht. Die Ergebnisse wurden mit der Kontrollgruppe verglichen, der nur Lösungsmittel verabreicht wurde.
Literaturstelle:

Sato K., Suga M., Akaike T. et al., Therapeutic effect of erythromycin on influenza virus-induced lang injury in mice. Am. J. Respir Crit. Care Med. 157, 853-859, 1998.

Die Ergebnisse sind in 2 und 3 gezeigt. In diesem System bekamen die Mäuse Lungenentzündung, die etwa 20 Tage nach der Infektion fast zum Tode führte. Im Gegensatz dazu kurierte die Verabreichung von EM703, 0,3 mg/Maus, wie in 2 gezeigt, die Lungenentzündung und 40% der Mäuse überlebten. Des Weiteren zeigte sich bei Mäusen, die Wirkstoffe nicht verabreicht bekamen (Kontrolle) eine signifikante Abnahme des Körpergewichts in Folge von Lungenentzündung, aber die Verabreichung von EM703 resultierte in einem erhöhten Körpergewicht vom Tag 10 an. Dies zeigt eine Suppressionswirkung in Bezug auf Lungenentzündung und eine Behandlung davon.
Wie oben beschrieben zeigt die erfindungsgemäße Verbindung eine Suppressionswirkung gegenüber durch Influenzaviren induzierter bzw. hervorgerufener Lungenentzündung.
1 zeigt ein Beispiel für ein analoges Syntheseschema für erfindungsgemäße Verbindungen.
2 ist eine Auftragung der Suppressionswirkung gegenüber Lungenentzündung, welche die Beziehung zwischen der Anzahl an Tagen nach der Infektion in Folge von Influenzavireninfektion und der Überlebensrate zeigt.
3 ist eine Auftragung, die die Suppressionswirkungen auf Bleomycin-induzierte pulmonäre Fibrose zeigt.
Die vorliegende Erfindung wird durch erläuternde Bezugsbeispiele und Beispiele erklärt, ist aber nicht auf diese Beispiele beschränkt.
BEZUGSBEISPIEL 1
Synthese von EM701
Eine Eisessiglösung von Erythromycin A (12,4 g, 16,9 mmol) wurde 2 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt, anschließend wurde wässrige Natriumhydrogencarbonatlösung langsam zugegeben und die Lösung neutralisiert. Das Reaktionsgemisch wurde mit Chloroform extrahiert, die organische Phase mit Natriumsulfat dehydratisiert, das Natriumsulfat abfiltriert und das Lösungsmittel durch Destillation entfernt, wobei eine Rohsubstanz erhalten wurde. Die Rohsubstanz wurde durch Kieselgelchromatographie (Chloroform : Methanol : wässrige Ammoniaklösung = 10 : 0,5 : 0,01 → 10 : 1 : 0,05) gereinigt, wodurch EM201 (7,7 g, 63%) erhalten wurde. Anschließend wurde Kaliumcarbonat (1,4 g, 10,6 mmol) der methanolischen Lösung (100 ml) von EM201 (7,6 g, 10,6 mmol) zugesetzt und 2 Stunden lang unter Rückfluss gekocht. Nach Abdestillieren des Lösungsmittels wurde der Rückstand in wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung aufgelöst und mit Chloroform extrahiert. Das Gemisch wurde mit Natriumsulfat dehydratisiert, abfiltriert und das Natriumsulfat entfernt, anschließend wurde die erhaltene Rohsubstanz durch Kieselgelchromatographie (Chloroform : Methanol : wässrige Ammoniaklösung = 10 0,5 : 0,01 → 10 : 1 : 0,05) gereinigt, wodurch EM701 (5,9 g, 78%, weißes Pulver) erhalten wurde.
BEZUGSBEISPIEL 2 Synthese von De(3'-N-methyl)-8,9-anhydro-pseudoerythromycin-A-6,9-hemiketal (EM703)
EM703
Natriumacetat (3,9 g, 48,5 mmol) und Iod (2,5 g, 9,7 mmol) wurden in dieser Reihenfolge einer Methanol (52,0 ml)-Wasser (13,0 ml)-Lösung von EM701 (6,9 g, 9,7 mmol) bei Raumtemperatur zugesetzt und 3Stunden lang bei 50°C gerührt. Während des Rührens wurde eine 1-N-wässrige Natriumhydroxidlösung kontinuierlich zugesetzt, um den pH bei 8-9 zu halten. Nachdem durch DSC die Vervollständigung der Reaktion bestätigt worden war, wurde das Reaktionsgemisch mit wässrigem Ammoniak (7,5 ml)-Wasser (200 ml) verdünnt und mit Dichlormethan extrahiert. Nach Dehydratisierung der organischen Phase mit Natriumsulfat wurde das Natriumsulfat durch Filtration entfernt und das Lösungsmittel zum Erhalt der Rohsubstanz abdestilliert. Die Rohsubstanz wurde durch Kieselgelsäulenchromatographie (Chloroform : Methanol : wässrige Ammoniaklösung = 10 0,5 : 0,01 → 10 : 1 : 0,05) gereinigt, wodurch EM703 (4,8 g, Ausbeute: 70%, weißes Pulver) erhalten wurde.

EM703: Schmp.: 177-180°C.

BEZUGSBEISPIEL 3 Synthese von Bis-de(3'-N-methyl)-8,9-anhydro-pseudoerythromycin-A-6,9-hemiketal (EM721)
EM721
Natrium (4,5 g, 1,67 mmol) wurde zu Methanol (15 ml) gegeben, um eine Methanollösung von Natriummethoxid herzustellen und EM703 (195,4 mg, 0,279 mmol) und Iod (353,6 mg, 1,393 mmol) wurden in dieser Reihenfolge bei 0°C zugegeben und 3 Stunden lang gerührt. Nach Bestätigung des vollständigen Ablaufs der Reaktion durch DSC wurden Natriumthiosulfat (0,8 g), wässriger Ammoniak (0,5 ml) und Wasser (80 ml) zugegeben und mit Dichlormethan extrahiert. Die organische Phase wurde durch Zugabe von Natriumsulfat dehydratisiert, zur Entfernung des Natriumsulfats filtriert und das Lösungsmittel zum Erhalt der Rohsubstanz entfernt. Die Rohsubstanz wurde durch Kieselgelsäulenchromatographie (Chloroform : Methanol : wässrige Ammoniaklösung = 10 : 0,5 : 0,01 10 : 1 : 0,05) gereinigt, um EM721 zu erhalten (166,3 mg, Ausbeute: 87%, weißes Pulver).

EM721: Schmp. 134-136°C.
IR (KBr) ν: 3467,4, 2973,7, 2935,1, 2879,2, 1700,9, 1637,3, 1457,9, 1380,8, 1265,1, 1166,7, 1126,2, 1079,9, 1037,5, 1016,3 cm^–1.
HRMS (FAB) m/z: C₃₅H₆₁NO₁₂Na [M + Na]⁺
Berechnet 710,4091,
Gefunden 710,4060.

BEZUGSBEISPIEL 4 Synthese von Bis-de(3'-N-methyl)-3'-N-ethyl-8,9-anhydro-pseudoerythromycin-A-6,9-hemiketal (EM722)
EM722
N,N-Diisopropylethylamin (26,6 μl, 0,153 mmol) und Ethyliodid (12,2 μl, 0,153 mmol) wurden einer Dimethylformamid (1,0 ml)-Lösung von EM721 (21,0 mg, 0,0305 mmol) zugesetzt und bei Raumtemperatur 4 Stunden lang gerührt. Nach Bestätigung des vollständigen Ablaufs der Reaktion durch DSC wurde das Reaktionsgemisch mit Wasser verdünnt und mit Dichlormethan extrahiert. Die organische Phase wurde durch Zugabe von Natriumsulfat dehydratisiert, zur Entfernung des Natriumsulfats filtriert und das Lösungsmittel zum Erhalt der Rohsubstanz entfernt. Die Rohsubstanz wurde durch Kieselgelsäulenchromatographie (Chloroform : Methanol : wässrige Ammoniaklösung = 10 0,5 : 0,01 → 10 : 1 : 0,05) gereinigt, wodurch EM722 erhalten wurde (7,0 mg, Ausbeute: 32%, weißes Pulver).

EM722: Schmp. 124-126°C.
IR (KBr) ν: 3471,6, 2933,2, 1704,8, 1457,9, 1378,9, 1263,1, 1166,7, 1128,2, 1074,2, 1037,5, 1018,2 cm^–1.
HRMS (FAB) m/z: C₃₇H₆₅NO₁₂Na [M + Na]⁺
Berechnet 738,4404
Gefunden 738,4393.

BEZUGSBEISPIEL 5 Herstellung von De(12-hydroxy)-de[12-(1-hydroxypropyl)]-12-oxo-8,9-anhydro-pseudoerythromycin-A-6,9-hemiketal (EM705)
EM705
Bleitetraacetat (508,0 mg, 1,136 mmol) wurde zu einer Dichlormethan (24,0 ml)-Lösung von EM701 (508,0 mg, 0,701 mmol) gegeben und 40 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Nach Bestätigung des vollständigen Ablaufs der Reaktion durch DSC wurde das Reaktionsgemisch mit einer gesättigten wässrigen Kochsalz-Natriumhydrogencarbonat (1:1, Vol./Vol.)-Lösung verdünnt und mit Dichlormethan extrahiert Die organische Phase wurde durch Zusatz von Natriumsulfat dehydratisiert, zur Entfernung des Natriumsulfats filtriert und das Lösungsmittel zum Erhalt der Rohsubstanz entfernt. Die Rohsubstanz wurde durch Kieselgelsäulenchromatographie (Chloroform : Methanol : wässrige Ammoniaklösung = 10 0,5 : 0,01) gereinigt, wodurch EM705 erhalten wurde (282,7 mg, Ausbeute: 61%, weißes Pulver).

EM705: Schmp. 108-112°C.
IR (KBr) ν: 3488, 2972, 2883, 1740, 1724, 1458, 1379, 1244, 1165, 1107, 1093, 1076, 1055, 1034, 1016 cm^–1.
HRMS (FAB): C₃₄H₅₈NO₁₁ [M + H]⁺
Berechnet 656,4010
Gefunden 656,4021.

BEISPIEL 1 Synthese von De(12-hydroxy)-de[12-(1-hydroxypropyl)]-12-hydroxyoxim-8,9-anhydro-pseudoerythromycin-A-6,9-hemiketal (EM743) und des Salzes davon
EM743
Pyridin (0,9 ml) wurde langsam bei 0°C einer Ethanol (0,9 ml)-Lösung von EM705 (116,5 mg, 0,1781 mmol) und Hydroxylaminhydrochlorid (32,0 mg, 0,533 mmol) zugesetzt und 3 Stunden lang gerührt. Nach Bestätigung des vollständigen Ablaufs der Reaktion durch DSC wurde das Reaktionsgemisch mit Wasser verdünnt und mit Dichlormethan extrahiert. Die organische Phase wurde durch Zugabe von Natriumsulfat dehydratisiert, zur Entfernung des Natriumsulfats filtriert und das Lösungsmittel zum Erhalt der Rohsubstanz entfernt. Die Rohsubstanz wurde durch Kieselgelsäulenchromatographie (Chloroform : Methanol wässrige Ammoniaklösung = 10 : 0,5 : 0,01 → 10 : 1 : 0,05) gereinigt, wodurch EM743 erhalten wurde (114,5 mg, Ausbeute: 96%, weißes Pulver).

EM743: Schmp. 141-143°C.
IR (KBr) ν: 3485,8, 2971,8, 2937,1, 2883,1, 1737,5, 1459,8, 1378,9, 1255,4, 1247,7, 1166,7, 1112,7, 1089,6, 1076,1, 1037,5, 1014,4 cm^–1.
HRMS (FAB): C₃₄H₅₉NO₁₁ [M + H]⁺
Berechnet 671,4112
Gefunden 671,4108.

BEISPIEL 2 Synthese von De[12-(hydroxypropyl)]-8,9-anhydro-pseudoerythromycin-A-6,9-hemiketal (EM746)
EM746
Natriumborhydrid (21,8 mg, 0,575 mmol) wurde bei –78°C einer Methanol (2,9 ml)-Lösung von EM705 (37,7 mg, 0,0575 mmol) zugesetzt und 30 Minuten lang gerührt. Die Temperatur des Reaktionsgemisches wurde auf 0°C erhöht und anschließend wurde 30 Minuten lang gerührt. Nach Bestätigung des vollständigen Reaktionsablaufs durch DSC wurde die Reaktion durch Zugabe von Aceton (0,5 ml) beendet. Das Reaktionsgemisch wurde mit Wasser verdünnt und mit Dichlormethan extrahiert. Die organische Phase wurde durch Zugabe von Natriumsulfat dehydratisiert, zur Entfernung des Natriumsulfats filtriert und das Lösungsmittel zum Erhalt der Rohsubstanz entfernt. Die Rohsubstanz wurde durch Kieselgelsäulenchromatographie (Chloroform : Methanol : wässrige Ammoniaklösung = 15 1 : 0,1) gereinigt, wodurch EM746 erhalten wurde (35,8 mg, Ausbeute: 95%, weißes Pulver).

EM746: Schmp. 116-118°C.
IR (KBr) ν: 3457,7, 2971,3, 2939,0, 1731,8, 1631,5, 1457,9, 1378,9, 1265,1, 1166,7, 1110,8, 1078,0, 1041,4, 1016,3 cm^–1.
HRMS (FAB) m/z: C₃₄H₅₉NO₁₁Na [M + Na]⁺
Berechnet 680,3963
Gefunden 680,3963.

BEISPIEL 3 Synthese von De(12-hydroxy)-de[12-(hydroxypropyl)]-12-amino-8,9-anhydro-pseudoerythromycin-A-6,9-hemiketal (EM750)
EM750
Molybdänoxid (IV) (10,0 mg, 0,0694 mmol) und Natriumborhydrid (10,5 mg, 0,277 mmol) wurden einer Ethanol (2,3 ml)-Lösung von EM743 (15,5 mg, 0,0231 mmol) bei 0°C zugesetzt und 4 Stunden lang gerührt. Nach Bestätigung des vollständigen Reaktionsablaufs durch DSC wurde die Reaktion durch Zugabe von Aceton (0,5 ml) beendet und das Reaktionsgemisch mit einer gesättigten wässrigen Kochsalz-/Natriumhydrogencarbonat-Lösung (1:1, Vol./Vol.) verdünnt und mit Dichlormethan extrahiert. Die organische Phase wurde durch Zugabe von Natriumsulfat dehydratisiert, zur Entfernung des Natriumsulfats filtriert und das Lösungsmittel zum Erhalt der Rohsubstanz entfernt. Die Rohsubstanz wurde durch Kieselgelsäulenchromatographie (Chloroform : Methanol : wässrige Ammoniaklösung = 10 : 1 : 0,1) gereinigt, wodurch EM750 erhalten wurde (13,4 mg, Ausbeute: 88%, weißes Pulver).

EM750: Schmp. 104-107°C.
IR (KBr) ν: 3448,1, 2971,8, 2935,1, 1729,8, 1629,6, 1457,9, 1378,9, 1259,3, 1166,7, 1114,7, 1078,0, 1039,4, 1016,3 cm^–1.
HRMS (FAB) m/z: C₃₄H₆₀N₂O₁₀Na [M + Na]⁺
Berechnet 679,4145
Gefunden 679,4117.

BEZUGSBEISPIEL 6 Synthese von De(3'-N-methyl)-de(12-hydroxy)-de-[12-(1-hydroxypropyl)]-12-oxo-8,9-anhydro-pseudoerythromycin-A-6,9-hemiketal (EM706)
EM706
Bleitetraacetat (508,0 mg, 1,136 mmol) wurde einer Dichlormethan (24,0 ml)-Lösung von EM701 (508,0 mg, 0,701 mmol) zugesetzt und 40 Minuten lang bei Raumtemperatur gerührt. Nach Bestätigung des vollständigen Reaktionsablaufs durch DSC wurde das Reaktionsgemisch mit einer gesättigten wässrigen Kochsalz-/Natriumhydrogencarbonat-Lösung (1:1, Vol./Vol.) verdünnt und mit Dichlormethan extrahiert. Die organische Phase. wurde durch Zugabe von Natriumsulfat dehydratisiert, zur Entfernung des Natriumsulfats filtriert und das Lösungsmittel zum Erhalt der Rohsubstanz entfernt. Die Rohsubstanz wurde durch Kieselgelsäulenchromatographie (Chloroform : Methanol : wässrige Ammoniaklösung = 10 : 0,5 : 0,01) gereinigt, wodurch EM706 erhalten wurde (71,6 mg, Ausbeute: 16%, weißes Pulver).

EM706: Schmp. 176-179°C.
IR (KBr) ν: 3468, 2966, 2852, 2360, 1736, 1718, 1558, 1462, 1379, 1246, 1165, 1126, 1099, 1076, 1038, 1016 cm^–1.
HRMS (FAB) m/z: C₃₃H₅₆NO₁₁ [M + H]⁺
Berechnet 642,3853
Gefunden 642,3866.

BEISPIEL 4 Synthese von De(3'-N-methyl)-de[12-(1-hydroxypropyl)]-8,9-anhydro-pseudoerythromycin-A-6,9-hemiketal (EM751)
EM751
Natriumborhydrid (22,9 mg, 0,605 mmol) wurde einer Methanol (3,0 ml)-Lösung von EM706 (38,8 mg, 0,0605 mmol) bei 0°C zugesetzt und 1 Stunde lang gerührt. Nach Bestätigung des vollständigen Reaktionsablaufs durch DSC wurde das Reaktionsgemisch mit einer gesättigten wässrigen Kochsalz-/Natriumhydrogencarbonat-Lösung (1:1, Vol./Vol.) verdünnt und mit Dichlormethan extrahiert. Die organische Phase wurde durch Zugabe von Natriumsulfat dehydratisiert, zur Entfernung des Natriumsulfats filtriert und das Lösungsmittel zum Erhalt der Rohsubstanz entfernt. Die Rohsubstanz wurde durch Kieselgelsäulenchromatographie (Chloroform : Methanol : wässrige Ammoniaklösung = 15 1 : 0,1) gereinigt, wodurch EM751 erhalten wurde (31,4 mg, Ausbeute: 81%, weißes Pulver).

EM751: Schmp. 123-125°C.
IR (KBr) ν: 3504,0, 2448,1, 2971,8, 2935,1, 1729,8, 1664,3, 1594,8, 1457,9, 1378,9, 1334,1, 1265,1, 1166,7, 1126,2, 1078,0, 1041,4, 1016 cm^–1.
HRMS (FAB) m/z: C₃₃H₅₈NO₁₁ [M + H]⁺
Berechnet 644,3987
Gefunden 644,4011.

Die neuen Pseudoerythromycin-Derivate der vorliegenden Erfindung weisen eine verringerte antibakterielle Aktivität und eine erhöhte antiinflammatorische Wirkung auf, was erwarten lässt, dass sie als neue antiinflammatorische Mittel anwendbar sind.

Claims

Verbindung, die ein Pseudoerythromycin der allgemeinen Formel (III)
ist, worin R₃ für NOH steht und Me Methyl ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verbindung, die ein Pseudoerythromycin der allgemeinen Formel (IV)
ist, worin R₁ und R₂ gleich oder verschieden sind, und jeweils für H oder Methyl stehen, R₃ und R₄ für H, Hydroxyl oder Amino stehen und Me Methyl ist, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
Verbindung nach Anspruch 2, die ausgewählt ist aus de[12-(1-Hydroxypropyl)]-8,9anhydro-pseudoerythromycin A 6,9-hemiketal oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon; de(12-Hydroxy)-de[12-(1-hydroxypropyl)]-12-amino-8,9-anhydro-pseudoerythromycin A 6,9-hemiketal oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon; und de(3'-N-methyl)-de[12-(1-hydroxypropyl)]-8,9-anhydro-pseudoerythromycin A 6,9-hemiketal oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon.
Verbindung nach einem der vorhergehenden Ansprüche zur Verwendung in der Behandlung des menschlichen Körpers durch Therapie.
Verwendung einer Verbindung, die ein Pseudoerythromycin der allgemeinen Formel (III)
ist, worin R₃ NOH und Me Methyl ist; oder der allgemeinen Formel (IV)
worin R₁ und R₂ gleich oder verschieden sind und jeweils für H oder Methyl stehen und Me Methyl ist; oder eine pharmazeutisch annehmbare Form von (III) oder (IV); zur Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in der Differenzierungsinduktion vom Monozyten zum Makrophagen, zur Unterdrückung der Bleomycin-induzierten pulmonären Fibrose oder zur Unterdrückung von Lungenentzündung hervorgerufen durch eine virale Influenza-Infektion.