DE3854764T2

DE3854764T2 - Verfahren zur Herstellung von (R) 5-Pentylamino-5-Oxopentanesäurederivate mit Anticholecystokininwirkung.

Info

Publication number: DE3854764T2
Application number: DE3854764T
Authority: DE
Inventors: Rolando Chiste; Francesco Makovec; Walter Peris; Luigi Rovati
Original assignee: Rotta Research Laboratorium SpA
Current assignee: Rottapharm SpA
Priority date: 1987-02-05
Filing date: 1988-01-28
Publication date: 1996-05-09
Anticipated expiration: 2008-01-29
Also published as: CA1339917C; AU1228288A; DE3885889D1; EP0344184B1; WO1988005774A1; JPH075534B2; EP0550899A1; US5130474A; ATE131153T1; JPS63201156A; US5602179A; ZA88733B; IT1217123B; IE63369B1; IE880300L; US5391574A; PT86700B; EP0344184A1; EP0550899B1; PT86700A

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Derivaten der (R) 5-Pentylamino-5-oxopentansäure, die durch die allgemeine Formel, die im folgenden angegeben ist, dargestellt werden können:
worin R&sub1; aus aer Gruppe bestehena aus 2-Naphthyl, 3,4-Dichlorophenyl und 3,4-Dimethylphenyl ausgewählt ist und R&sub2; für eine Pentylgruppe oder eine Alkoxyalkylgruppe mit 4 Kohlenstoffatomen steht und worin die Substituenten an der zentralen chiralen Gruppe (die in Formel (I) mit einem Sternchen markiert ist) die R (rectus) Konfiguration aufweisen
R&sub2; wird vorzugsweise aus der Gruppe bestehend aus den Pentyl-, 2- Ethoxyethyl- und 3-Methoxypropyl-Gruppen ausgewählt.
Die Verbindungen entfalten eine mächtige antagonistische Wirkung gegenüber Cholecystokinin (CCK). Die durch das erfindungsgemäße Verfahren erhaltenen Verbindungen können auf diese Weise mit Vorteil bei der Behandlung verschiedener Krankheiten beim Menschen, wie etwa Krankheiten des Verdauungssystems, wie zum Beispiel bei der Behandlung von Colitis, von Gallen-Dyskinesie und Pankreatitis, verwendet werden.
Auf der Grundlage ihrer pharmazeutischen Eigenschaften kann ihre Verwendung auch für die Behandlung mentaler Störungen ins Auge gefaßt werden, die auf Mängel in den physiologischen Neurongehalten von CCK oder anderer verwandter bioaktiver Polypeptide beruhen, ebenso wie für die Behandlung von Anorexie.
Die durch das erfindungsgemäße Verfahren erhaltenen Verbindungen haben, wie bereits erwähnt, sowohl in vivo als auch in vitro eine kräftige Anti-CCK-Wirkung in verschiedenen experimentellen Situationen.
So inhibieren sie in nanomolaren Konzentrationen die Bindung von markiertem Cholecystokinin an die Zellmembranen der Gallenblase eines Rindes, einem Gewebe, das als Zielorgan für die physiologische Wirkung von Cholecystokinin erachtet wird.
Außerdem sind diese Verbindungen auch in vivo sehr aktiv. Zum Beispiel inhibieren sie in einer dosisabhängigen Weise, manche sogar bei einer Dosis von weniger als 0,1 mg/kg, die Kontraktion und Entleerung der Gallenblase, wenn diese durch Eidotter, der ein Induktionsmittel für die endogene Freisetzung von CCK darstellt, induziert wird. Sie begünstigen auch die Entleerung des Magens dadurch, daß sie die durch CCK verursachte pylorische Kontraktion verhindern.
Außerdem haben sie gegen experimentelle Pankreatitis, zum Beispiel gegen durch Natrium-Taurocholat hervorgerufene Pankreatitis, eine besonders kräftige Schutzwirkung.
Die pharmazeutischen Formen der durch das erfindungsgemäße Verfahren erhaltenen Verbindungen können auf übliche Weise hergestellt werden, zum Beispiel in Form von Pillen, Kapseln, Suspensionen, Lösungen und Suppositorien, und können oral, parenteral oder rectal verabreicht werden
Der Wirkstoff wird in der Regel in einem Verhältnis von 0,005 bis 5 mg/kg Körpergewicht pro Dosis an den Patienten verabreicht. Für die parenterale Verabreichung wird es bevorzugt, ein wasserlösliches Salz der gegenständlichen Verbindungen zu verwenden, wie etwa das Natriumsalz oder ein anderes Salz, das nicht-toxisch und pharmazeutisch verwendbar ist. Substanzen, die üblicherweise in der pharmazeutischen Industrie als Trägerstoffe, Bindernittel, Geschmacksstoffe, Dispergiermittel, Farbstoffe, Feuchthaltemittel etc. verwendet werden, können als inaktive Bestandteile eingesetzt werden.
Diese Derivate der 5-Pentylamino-5-oxopentansäure gehören zum Teil zu einer Klasse von Verbindungen, die in der früheren Patentliteratur beschrieben wurde (vgl. GB-A-2160869), wo ein Verfahren zur Herstellung der gegenständlichen Verbindungen, jedoch in der racämischen Form (R, S) ausgehend von L-Glutaminsäure, beschrieben ist.
Die DE-A-2 049 332 beschreibt Amide der N-Benzoyl-glutaminsäure und ein Herstellungsverfahren zur Bereitung der von dem entsprechenden Gamma-Isomer freien Alfa-Amide.
Das erfindungsgemäße Verfahren beruht auf den folgenden beiden Überlegungen:
A) Die Anti-Cholecystokinin-Aktivität der Verbindungen, die in der oben erwähnten Patentliteratur geoffenbart sind, beruht auf den enantiomeren R-Formen, die der als Ausgangsmaterial verwendeten D- Glutaminsäure entsprechen. Diese Tatsache ist ziemlich überraschend, wenn man das Faktum bedenkt, daß die neutralen Aminosäuren, die biologisch aktiv sind, alle zu der L-Serie gehören.
B) Das in der GB-A-2 160 869 beschriebene Verfahren ermöglicht es nicht, die Konfiguration beizubehalten; das heißt, daß unabhängig davon, ob L-Glutaminsäure oder D-Glutaminsäure als Ausgangsmaterial verwendet wird, die (R, S) Derivate der Pentansäure produziert werden.
Das Ziel der vorliegenden Erfindung ist es daher, ein Verfahren zur Verfügung zu stellen, mit dessen Hilfe gewährleistet wird, daß die Konfiguration in aufeinanderfolgenden Umwandlungen beibehalten wird, und das es aus diesem Grund ermöglicht, 5-Pentylamino-5-oxopentansäure-Derivate aus D-Glutaminsäure in der optisch aktiven R (rectus) Form, die die pharmakologisch wirksame enantiomere Form ist, zu gewinnen.
Das Verfahren zur Herstellung der Derivate der Formel (I) ist dadurch gekennzeichnet, daß es die folgenden Schritte umfaßt:
a) Umsetzung des Gamma-Benzylesters von N-Carbobenzoxy-D- glutaminsäure mit einem Amin der Formel
worin R&sub2; die oben angegebene Bedeutung hat, mit Hilfe des Verfahrens der gemischten Anhydride in einem inerten wasserfreien Lösungsmittel bei einer Temperatur zwischen -150 und +150, um die Verbindungen der Formel (III) zu ergeben (vgl. das später folgende Reaktionsschema);
b) Debenzylierung und Decarbobenzoxylierung der Verbindung der Formel (III), die in einem inerten Lösungsmittel gelöst ist, durch Umsetzung derselben mit Wasserstoff bei Raumtemperatur und Atmosphärendruck in Anwesenheit einer katalytisch wirksamen Menge eines Hydrierungskatalysators, zur Gewinnung von Derivaten der Formel (II) (siehe das später folgende Schema);
c) Umsetzung der Derivate der Formel (II) unter Schotten-Bauman- Bedingungen mit einer äquivalenten Menge eines Acylchlorids der Formel R&sub1;-COCl, worin R&sub1; die oben angegebene Bedeutung hat, bei einer Temperatur von 0 bis 15ºC und Gewinnung der (R) 4-Acylamino- 5-pentylamino-5-oxopentansäure-Derivate der Formel (I) aus der Reaktionsmasse.
Die Aufeinanderfolge von Verfahrensstufen gemäß der Erfindung wird als Ganzes in dem folgenden Reaktionsschema dargestellt: AMIDIERUNG Stufe HYDRIERUNG ACYLIERUNG
Die Amidierungsstufe (a) wird vorzugsweise bei einer Temperatur zwischen -15º und -10ºC während eines Zeitraums von 1 bis 24 Stunden, vorzugsweise während 6 Stunden, durchgeführt, wobei die Reagenzien in stoichiometrischem Verhältnis eingesetzt werden. Das für die Reakt-on oevorzugte Lösungsmlttel wird aus Chloroform, Dioxan und Tetrahydrofuran ausgewählt.
Die Hydrierungsstufe (b) wird vorzugsweise in Anwesenheit von Palladium auf Kohlenstoff als Träger, wobei zwischen 0,02 und 0,0001 Atom Palladium pro Mol Verbindung (III) verwendet werden, in einer methanolischen Lösung bei Raumtemperatur und -druck in einem Wasserstoffstrom während eines Zeitraums von 1 bis 12 Stunden, vorzugsweise 3 Stunden, durchgeführt. Die Acylierungsstufe (c) wird vorzugsweise bei einer Temperatur von etwa 5ºC während eines Zeitraums von 1 bis 24 Stunden, vorzugsweise 12 Stunden durchgeführt.
Die folgenden Beispiele sind zur besseren Erläuterung der Erfindung angegeben.

Beispiel 1

Herstellung des Benzylesters der (R) 4-Carbobenzoxyamino-5-(di-n- pentylamino)-5-oxopentansäure (Verbindung 1 von Tabelle 1).

37,1 g (0,1 Mol) des Gamma-Benzylesters der N-Carbobenzoxy-D- glutaminsäure werden in 250 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran gelöst, die Lösung wird auf -10ºC abgekühlt und es werden 10,1 g (0,1 Mol) Triethylamin unter Rühren zugesetzt 10,8 g (0,1 Mol) Ethylchlorcarbonat werden dann zugesetzt, immer noch bei -10ºC. Die Temperatur wird 20 Minuten auf -10ºC gehalten und dann werden 15,7 g (0,1 Mol) Dipentylamin zugesetzt. Es wird weitere 6 Stunden gerührt und die Temperatur auf Raumternperatur ansteigen gelassen; die Masse wird getrocknet und der Rückstand in Ethylacetat aufgenommen.
Es wird mit 2N HCl, Natriumbicarbonat und schließlich mit Wasser gewaschen; dann wird über wasserfreiem Na&sub2;SO&sub4; getrocknet. Durch Einengen auf ein kleines Volumen wird ein öliger Rückstand (MG 510,6) gewonnen, der nicht kristallisiert und eine chromatographische Reinheit von mehr als 95 aufweist.
TLC: Rf 0,81 (Chloroform-Ethylacetat 7/3 V/V).
Es werden 46,5 g erhalten. Ausbeute 91 %.
Alle Verbindungen der Formel III werden auf die gleiche Weise kristallisiert (siehe obiges Schema). Die erhaltenen Verbindungen mit einigen Identifikationsrnerkmalen ebenso wie mit den gewonnenen Ausbeuten werden in der folgenden Tabelle 1 gezeigt.

Beispiel 2

Herstellung von (R) 4-Amino-5-(di-n-pentylamino)-5-oxopentansäure (Verbindung 4 von Tabelle 2).

51,1 g (0,1 Mol) des Benzylesters von (R) 4-Carbobenzoxyamino-5- (di-n-pentylamino)-5-oxopentansäure werden in 300 ml Methanol gelöst, wobei 1 g Kohlenstoff-Palladiat mit 10 % zugesetzt und bei Raumtemperatur mit einem Wasserstoffstrom während 3 Stunden hydriert wird. Der Katalysator wird abfiltriert und das Methanol unter Vakuum destilliert. Es wird ein öliger Rückstand erhalten (MG 286,4), der nicht kristallisiert und eine chromatographische Reinheit von mehr als 95 aufweist.
TLC: Rf 0,75 (n-Butanol-Essigsäure-H&sub2;O 5/2/2 V/V/V).
Alle Verbindungen der Formel II werden nach dem gleichen Verfahren synthetisiert (vgl. Schema).
Die erhaltenen Verbindungen sind mit einigen Identifikationsmerkmalen ebenso wie mit den erhaltenen Ausbeuten weiter unten angegeben.

Beispiel 3

Herstellung von (R) 4-(2-Naphthylamino)-5-(di-n-pentylamino)-5-oxopentansäure (Verbindung 7 von Tabelle 3).

28,6 g (0,1 Mol) (R) 4-Amino-5-(di-n-pentylamino)-5-oxopentansäure werden in 300 ml Wasser suspendiert und dann unter Rühren und Zusatz von 10,6 g (0,1 Mol) Natriumcarbonat gelöst. Anschließend werden 19,1 g: (0,1 Mol) 2-Naphthoylchlorid während 1 Stunde bei 0ºC unter Rühren zugesetzt.
Die Mischung wird 12 Stunden reagieren gelassen.
Sie wird mit verdünnter HCl gegen Congo-Rot angesäuert und der so gebildete Niederschlag wird abfiltriert. Er wird aus H&sub2;O-Ethanol (2/1) umkristalllsiert.
Schmp. 69-72ºC TLC (Isoamylalkohol-Aceton-H&sub2;O: 5/2/1): Rf 0,83. Es wurden 37 g erhalten (MG 440,6). Ausbeute 84 %.
Spezifische Rotation: [alpha] D²&sup0; = +11,0 (c = 2,5 % in 95 % Ethanol).
Alle Verbindungen der Formel I (vgl. Schema) werden auf die gleiche Weise synthetisiert.
Manche Beispiele dieser Verbindungen sind mit einigen Identifikationsmerkmalen ebenso wie mit den erhaltenen Ausbeuten in beispielhafter Weise in der folgenden Tabelle 3 angegeben.
Um die Anti-CCK-Aktivität der Derivate der (R) 5-Pentylamino-5-oxopentansäure mit der der entsprechenden Enantiomeren der (S)-Serie zu vergleichen, wurden einige dieser Derivate durch das oben beschriebene Verfahren synthetlsiert, wobei jedoch in diesem Fall vom Gamma-Benzylester der N- Carbobenzoxy-L-glutaminsäure ausgegangen wurde.
Tabelle 4 zeigt einige der so erhaltenen (S) 4-Acylamino-5-(di-n- pentylamino)-5-oxopentansäure-Derivate mit einigen ihrer Identifikationsmerkmale, wobei sie für pharmakclogische Vergleiche verwendet wurden. TABELLE 1: Derivate der Formel Verbindung Formel Pentyl 3-Methoxypropyl 2-Ethoxyethyl
(*) Eluiermittel: Chloroform/Ethylacetat 9/1-V/V TABELLE 2: Derivate der Formel Verbindung Formel Pentyl 3-Methoxypropyl 2-Ethoxyethyl
(*) Eluiermittel: n-Butanol-Essigsäure - H&sub2;O: 5/2/2-V/V TABELLE 3: (R Serie) Derivate der Formel Verbindung Schmelzpunkt (ºC) Kristallisationslösungsmittel Ausbeute spezifische Drehung Formel 2-Naphthyl 3,4-Dichlor-phenyl 3,4-Dimethylphenyl 2-Naphthyl 3,4-Dichlorophenyl 2-Naphthyl Pentyl 3-Methoxypropyl 2-Ethoxyethyl Wasser/Alkohol(2:1) Isopropylether
(*) Eluiermittel: Isoamylalkohol/Aceton/Wasser: 5/2/1-V/V
(**) berechnete Ausbeute, ausgehend vom Gamma-Benzylester der N-Carbobenzoxy-D-Glutaminsäure TABELLE 4: (S Serie) Derivate der Formel Verbindung Schmelzpunkt (ºC) Kristallisationslösungsmittel spez. Drehung [alpha] D²&sup0; Formel 2-Naphthyl 3,4-Dichlor-phenyl 3,4-Dimethylphenyl 2-Naphthyl Pentyl 3-Methoxypropyl Wasser/Alkohol(2:1) Isopropylether
(*) Eluiermittel: Isoamylalkohol/Aceton/Wasser: 5/2/1-V/V
Die kräftige Anti-Cholecystokinin-Aktivität der Verbindungen, die mit Hilfe des erfindungsgemäßen Verfahrens erhalten werden, wird nun durch eine Reihe pharmakologischer Experimente dokumentiert, die sowohl in vitro als auch in vivo durchgeführt wurden.

Untersuchungen über die Bindung an die Zellmembranen von Rinder- Gallenblasen

Die Fähigkeit einiger der Verbindungen, die mit dem erfindungsgemäßen Verfahren erhalten werden, und einiger entsprechenden Enantiomeren der 5-Serie zur Inhibierung der Bindung von [125-1]- Bolton Hunter-CCK-8 an die Cholecystokinin-Rezeptoren von Rinder- Gallenblasenmembranen wurde bewertet, indem mit der durch kaltes (unmarkiertes) CCK induzierten Verdrängung verglichen wurde.
Die Zellmembranen der Rinder-Gallenblasen wurden mit Tris-Puffer (pH 7,4) homogenisiert und das Homogenat wurde mit einer Gravität von 50.000 10 Minuten zentrifugiert. Dann wurden die Membranen mit radioaktivem Tracer und den zu untersuchenden Verbindungen 2 Stunden bei 25ºC inkubiert.
Nachdem die überstehende Flüssigkeit verworfen worden war, wurde die mit dem Pellet assoziierte Radioaktivität mit einem Flüssig- Scintillator bestimmt. Die spezifische Bindung wurde als die Differenz zwischen der Bindung in Abwesenheit und in Anwesenheit von 10&supmin; &sup6;M CCK-8 bestimmt.
Die auf diese Weise erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 5 angegeben, worin die IC50 gezeigt sind, das heißt, die Konzentration (in Molen/Liter) des Antagonisten, der zur Verdrängung von 50 % des [125-I]-CCK-8 von den Rezeptoren befähigt ist. TABELLE 5: Inhibierung der Bindung von (¹²&sup5;I)-(B-H)-CCK-8 Verbindungen (R Serie)
Aus den in der Tabelle angegebenen Daten ist ersichtlich, daß die Verbindungen 50 % der Bindung des CCK bei einer Konzentration antagonisieren, die für die aktivste Verbindung der R-Serie nur 5-fach größer ist als die des spezifischen Antagonisten, wodurch eine sehr hohe Spezifität der Wirkung demonstriert wird. Die entsprechenden Enantiomeren der 5-Serie sind im Durchschnitt 50-90 mal weniger aktiv.
Um die Ergebnisse dieser in vitro-Studie zu bestätigen, wurden manche der Verbindungen auch in vivo getestet.

Antispastische Wirkung auf die Gallenblase bei Mäusen

Die Entleerung der Gallenblase wurde durch eine einzige orale Verabreichung von 1 ml einer 30%igen Suspension (Gewicht/Volumen) von lyophilisiertem Eidotter in einer physiologischen Lösung hervorgerufen.
Sobald der Eidotter absorbiert ist, induziert er, wie oben angegeben, die Freisetzung von endogenem CCK. Diese Dosis wurde ausgewählt, da sie praktisch vollständige Entleerung der Gallenblase verursacht.
Die antagonistischen Verbindungen wurden intraperitoneal (i.p.) 15 Minuten vor dem Kontraktionsmittel verabreicht.
Die % antispastische Wirkung für jede Dosis wurden durch die folgende Formel berechnet:
% = P&sub1; - P&sub2;/P&sub3; - P&sub2; x 100
worin
P&sub1; = Durchschnittsgewicht der Gallenblasen der Gruppe von Tieren, die mit dem Arzneimittel plus dem Kontraktionsmittel behandelt wurden,
P&sub2; = Durchschnittsgewicht der Gallenblasen der Gruppe von Tieren, die nur mit dem Kontraktionsmittel behandelt wurden,
P&sub3; = Durchschnittsgewicht der Gallenblasen der Vergleichsgruppe der Tiere.
Die Verbindungen wurden mit verschiedenen Dosen getestet, um die Berechnung des IDSO-Werts zu ermöglichen, d.h. jener Dosis (in mg/kg i.p.), die zur Inhibierung des kontrahierenden Effekts des Eidotters um 50 % befähigt ist.
Die so erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 6 angegeben, wo die erzielten Wirkungen als die IDSO-Werte ausgedrückt sind. TABELLE 6: Antispastische Wirkung auf die durch Eidotter hervorgerufene Kontraktion der Gallenblase Verbindung Dosen % Inhibierung der Entleerung der Gallenblase Serie ATROPIN PAPAVERIN INAKTIV
(1) r = der Korrelationskoeffizient der Regressionsgeraden.
Die Entleerung der Gallenblase wird in einer dosisabhängigen Weise durch die Verbindungen, die den Gegenstand der Erfindung darstellen, herabgesetzt. Die Verbindung 7 blockiert bei einer Dosis von 0,1 mg/kg die durch den Eidotter hervorgerufene Kontraktion um etwa 75 %. Ihr (S) Enantiomer ist ebenfalls aktiv, hat jedoch einen um etwa das 60-fache größeren ID50-Wert. Andererseits ist Atropin inaktiv und Papaverin ist schwach aktiv, jedoch nur bei der toxischen Dosis von 75 mg/kg, die den Tod von 20 % der behandelten Tiere verursacht.

Antispastische Wirkung auf die pylorische Kontraktion bei Ratten

Dieser Versuch zeigt die kontrahierende Wirkung von CCK auf den pylorischen Sphincter. Eine Dosis von 8 mcg/kg i.p. von CCK wurde verwendet, die eine sub-maximale Kontraktion des Pylorus induziert.
Die antagonistischen Verbindungen wurden (i.p.) 15 Minuten vor dem Kontraktionsmittel verabreicht. 10 Minuten nach der Verabreichung des Kontraktionsmittels wurden die Tiere oral mit 25 ml/kg H&sub2;O behandelt. 5 Minuten nach dieser Verabreichung wurden die Tiere getötet, ihre Mägen entnommen und der Mageninhalt durch Entnahme mit einer Injektionsspritze gemessen.
Die Prozente der antispastischen Wirkung für jede verabreichte Dosis wurde aus der folgenden Formel berechnet: = V&sub2; - V&sub1;/V&sub2; - V&sub3; x 100
worin
V&sub1; = Volumen des Mageninhalts jener Gruppe von Tieren, die mit dem Arzneimittel plus dem Kontraktionsmittel behandelt wurden,
V&sub2; = Volumen des Mageninhalts jener Gruppe von Tieren, die nur mit dem Kontraktionsmittel behandelt wurden,
V&sub3; = Volumen des Mageninhalts der Vergleichsgruppe der Tiere.
Die Verbindungen wurden in verschiedenen Dosierungen untersucht, um die Berechnung des ID50-Werts zu ermöglichen, d.h. jener Dosis (in mg/kg i.p.) die zur Inhibierung des Kontraktionseffekts von CCK um befähigt ist.
Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 7 angegeben, wo die erzielten Wirkungen als die ID50-Werte ausgedrückt sind. TABELLE 7: Antispastische Wirkung auf die durch CCK induzierte pylorische Kontraktion bei der Ratte. Verbindung Dosen % Inhibition der pylorischen Kontraktion Serie
(1) : in Klammern r = der Korrelationskoeffizient der Regressionsgeraden.
Die durch 8 mcg/kg CCK-8 verursachte pylorische Kontraktion wird durch einige der erfindungsgemäßen Verbindungen bei sehr niedrigen Dosen um 50 inhibiert, in Fall der Verbindung 7 mit 30 mcg/kg, das heißt mit einer Dosis, die nur um das 3- bis 4-Fache größer ist als die des hormonalen Kontraktionsmittels. Andererseits ist die Verbindung 13, die das S-Enentiomer der Verbindung 7 darstellt, nur bei Dosen von etwa dem 150-Fachen wirksam.

Durch Natrium-Taurocholat hervorgerufene Pankreatitis

Es wurde nach dem von Aho et al. (Scandinavian J. Gastroenterology 15 (1980), 411-16) beschriebenen Verfahren gearbeitet.
Männliche Ratten mit einem Gewicht von etwa 250 g wurden laparotomiert und der Pankreas freigelegt. 0,3 ml einer 6%igen Lösung von Natrium-Taurocholat wurden direkt in das Pankreasgewebe injiziert.
Die zu untersuchenden Produkte wurden intraperitoneal (i.p.) 30 Minuten vor der Operation und 3 Stunden nach der Operation verabreicht. 6 Stunden nach der Laparotomie und nach der Anästhesie mit Äther wurde Blut aus dem retro-orbitalen Plexus entnommen, die Tiere wurden getötet und der Pankreas entnommen und gewogen. Die Aktivität der Serum-Amylase wurde nach der Ceska-Methode (Clin. Chim. Acta 26 (1969), 437-444) bestimmt.
Die Verbindungen wurden mit verschiedenen Dosierungen untersucht, sodaß sie die Berechnung des ID50-Werts ermöglichten, das heißt jener Dosis (in mg/kg i.p.), die imstande ist, die toxische Wirkung des Natrium-Taurocholats um 50 % herabzusetzen, ausgedrückt sowohl als % Inhibition der Gewichtssteigerung des Pankreas als auch als % Inhibition der Zunahme von Serum-Amylase. Die mit den Verbindungen 7 und 8 erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 8 angegeben. TABELLE 8: Beispiele proteolytischer Aktivität der erhaltenen Verbindungen bei experimenteller, durch Taurocholat hervorgerufener Pankreatitis bei Ratten % Verhältnis Pankreasgewicht Gewicht des Tieres % Inhibition der Gewichtszunahme (ID50 mg/kg ip) Amylase im Serum % Inhibition der Amylasezunahme (ID50 mg/kg ip) Vergleiche Taurochocolat Verbindung
(r) = Korrelationskoeffizient
Natrium-Taurocholat ruft Pankreatitis hervor, die ihrerseits eine Zunahme des Gewichts dieses Organs verursacht, wobei dieses auch ödematös wird, die Elastizität verliert und haemorrhagisch wird.
Außerdem tritt fast Verdoppelung der Serum-Amylase auf. Diese Wirkungen werden in dosisabhängiger Weise durch die Verbindungen blockiert, die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren gewonnen werden. Zum Beispiel inhibiert eine Dosis von etwa 0,5 mg/kg i.p. der Verbindung 7 die Gewichtssteigerung des Pankreas und die Zunahme der Serum-Amylase um 50 %.
Die oben angegebenen experimentellen Ergebnisse haben somit die mögliche Verwendbarkeit dieser Verbindungen bei der Behandlung verschiedener den Gastrointestinaltrakt betreffender pathologischer Zustände aufgezeigt, zum Beispiel bei spastischen Syndromen und Schmerz im allgemeinen, wie etwa Gallen-Dyskinesie, oder hinsichtlich der Unterstützung der Magenentleerung und dadurch Förderung der Verdauung.
Diese Produkte könnten mit besonderem Vorteil zur Behandlung von Pankreatitis verwendet werden, da es für diesen pathologischen Zustand keine sicher wirkenden Arzneimittel gibt, deren Wirkung durch einschlägige pharmakologische Versuche bewiesen worden wäre. Eine günstige therapeutische Verwendung kann auch für viele der gegenständlichen Verbindungen bei der Behandlung verschiedener Formen von Anorexie ebenso wie für die Behandlung mancher pathologischer Zustände des CNS, die mit Mängeln in den physiologischen Neurongehalten von CCK oder anderen bioaktiven Peptiden im Zusammenhang stehen, in Betracht gezogen werden.

Claims

1. Ein Verfahren zur Herstellung eines Derivats der (R) 5- Pentylamino-5-oxopentansäure der Formel (I)

in welcher R&sub1; aus der Gruppe bestehend aus 2-Naphthyl, 3,4-Dichlorphenyl und 3,4-Dimethylphenyl ausgewählt ist und R&sub2; für eine Pentylgruppe oder eine Alkoxyalkylgruppe mit 4 Kohlenstoffatomen steht und worin die Substituenten an der zentralen chiralen Gruppe (die mit einem Sternchen in Formel (I) markiert ist) die R (rectus) Konfiguration aufweisen, dadurch gekennzeichnet, daß es folgende Schritte umfaßt:

a) Umsetzung nach der gemischten Anhydrid-Methode des Gamma- Benzylesters von N-Carbobenzoxy-D-Glutaminsäure mit einem Amin der Formel

worin R&sub2; die oben angegebene Bedeutung hat, bei einer Temperatur von -150 bis +150 in einem wasserfreien inerten Lösungsmittel und Gewinnung der Verbindungen (III) aus der Reaktionsmasse,

b) Debenzylieriing und Decarbobenzoxylierung der Verbindung der Formel (III), die n einem inerten Lösungsmittel, wie etwa Methanol, gelöst ist, Umsetzung derselben bei Raumtemperatur und Atrnosphärendruck mit Wasserstoff in Gegenwart einer katalytisch wirksamen Menge eines Hydrierungskatalysators und Gewinnung der Verbindungen (II) aus der Reaktionsmasse,

c) Umsetzung der Derivate der Formel (II) unter Scotten-Bauman-Bedingungen mit einer äquimolaren Menge eines Acylchlorids der Formel R&sub1;-CO-Cl, worin R&sub1; die obenangegebene Bedeutung hat, bei einer Temperatur von 0 bis 15ºC und Gewinnung der (R) 5- Pentylamino-5-oxopentansaure-Derivate der Formel (I) aus der Reaktionsmasse.

2. Ein Verfahren nach Anspruch 1, bei welcnem die Reaktion der Stufe a) in einem Lösungsmittel durchgeführt wird, das aus Chlorofern, Tetrahydrofuran und Dioxan ausgewählt ist, wobei die Reagenzien in stöchiometrischem Verhältnis vorliegen.

3. Ein Verfahren nach Anspruch 1, bei welchem als Katalysator in Stufe b) Palladium mit Kohlenstoff als Träger in einem Verhältnis von 0,02 bis 0,001 Atomen Palladium pro Mol Verbindung (III) verwendet wird.

4. Ein Verfahren nach Anspruch 1, worin R&sub2; ausgewählt ist aus Pentyl, 2-Ethoxyethyl und 3-Methoxypropyl.