PT86700B

PT86700B - Processo para a preparacao de novos derivados do acido (r) 5-pentilamino-5-oxo--pentanoico opticamente activos com actividade antagonista contra a colecistoquinina

Info

Publication number: PT86700B
Application number: PT86700A
Authority: PT
Inventors: Francesco Makovec; Luigi Rovati; Walter Peris; Rolando Chiste
Original assignee: Rotta Research Lab
Priority date: 1987-02-05
Filing date: 1988-02-04
Publication date: 1992-04-30
Also published as: EP0344184A1; ATE131153T1; IT8767076A0; WO1988005774A1; EP0550899B1; US5130474A; ZA88733B; IT1217123B; DE3854764T2; DE3885889T2; IE880300L; EP0344184B1; DE3885889D1; PT86700A; US5602179A; JPH075534B2; DE3854764D1; US5391574A; EP0550899A1; AU1228288A

Description

Memória_desçritiva

A presente invenção refere-se a derivados originais do ácido 5-pentilaminO”5-oxopentanóico que se podem representar pela fórmula geral abaixo indicada:

COOH

I (CH₂)₂

- CH-NH-CO-R₁

CO-N

-ch₃

na qual representa um grupo 2-naftilo, 3,4-diclorofenilo ou

3,4-dimetil-fenilo e R₂ representa um grupo pentilo ou um grupo alcoxi-alquilo cora 4 átomos de carbono no qual os substituin

- 2 Λ r tes no grupo quirálico central (assinalado com asterisco na fórmu la geral (I)) possuem conformação R (recta).

R^ representa de preferência um grupo pentilo, 2-etoxietilo ou 3-metoxipropilo.

Os compostos que constituem o objectivo da presente invenção revelam uma poderosa actividade antagonista face à colecistoqui, nina (CCQ). Assim, os compostos da presente invenção podem utilizar -se, com vantagem no tratamento de diversas doenças no homem, tais como as doenças do sistema digestivo, como por exemplo, no tratamento da colite, de disquinesia biliar e de pancreatite.

Com base nas suas características farmacológicas pode também considerar-se a sua utilização no tratamento de distúrbios mentais atribuíveis a deficiências de CCQ ou de outros polipéptidos bio-activos afins nos níveis fisiológicos dos neurónios e também no tratamento da anorexia.

Os compostos que constituem o objectivo da presente invenção, conforme já foi mencionado, demonstram uma poderosa actividade I anti-CCQ em diversas situações experimentais quer in vivo quer in vitro.

Assim, em concentrações nanomolares, inibem a ligação de co lecistoquinina marcada às membranas celulares da vesícula biliar de um boi, um tecido que se considera ser um alvo orgânico para a acçao fisiológica da colecistoquinina.

Para além disso, estes compostos também são muito activos in vivo. Por exemplo, inibem segundo um processo dependente da dose, a.1 guns mesmo com uma dose inferior a 0,1 mg/Kg, a contracção e o esva ziamento da vesícula biliar induzidos por gema de ovo que é um indu

- 3 tor da libertação endógena de CCQ. Também contribuem para o esvazia, mento do estômago por inibição da contracção pilórica provocada pela CCQ.

Para além disso, a sua acção protectora é particularmente poderosa contra a pancreatite experimental, por exemplo, contra a pancreatite induzida por tauroclorato de sódio.

As formas farmacêuticas dos compostos que constituem o objectivo da presente invenção podem preparar-se segundo técnicas con vencionais, por exemplo, como pílulas, cápsulas^ suspensões, soluções e supositórios e podem administrar-se oralmente, parentericamente ou por via rectal.

Habitualmente, administra-se o ingrediente activo ao doente numa proporção de 0,005 a 5 mg/Kg do peso do corpo, por dose. Para a administração parentérica, é preferível utilizar um sal solúvel na água dos referidos compostos, tal como o sal de sódio ou outro sal que não seja tóxico e seja aceitável sob o ponto de vista farmacêutico. Podem utilizar-se como ingredientes ina chi vos substâncias usualmente utilizadas na industria farmacêutica, como excipientes, ligantes, aromatizantes, dispersantes, agentes corantes, humectantes, etc.

Estes derivados do ácido 5-pentilamino-5-oxopentanóico fazem parte de uma classe de compostos que constituem o objectivo de patentes anteriores do requerente que descrevem um método para a produção dos referidos compostos, mas na forma racémica (R,S) a par tir do ácido L-glutâmico.

A presente invenção resulta das duas considerações seguintes:

A) A actividade anti-colecistoquinina, dos compostos que constituem o objectivo das patentes anteriormente menci onadas, deve-se às formes enantioméricas R, que correspondsn ao ácido D-glutâmico, de partida. Esta circunstância é bastante surpreen dente, considerando o facto de que os aminoácidos naturais, que são biologicamente activos, pertencerem todos à série L.

B) 0 método anteriormente descrito não permite que se mantenha a con figuração; isto é, quando se utilizou o ácido L-glutâmico ou o ácido D-&Lutâmico como material de partida, produzem-se os derivados (R,S) do ácido pentanóico.

Por consequência, outro objectivo da presente invenção con. siste em fornecer um método que assegure a preservação da configura, ção nas transformações sucessivas e que permita, assim, a obtenção dos derivados 5-pehtilamino-5-oxopentanóicos, a partir do ácido D-glutêmico na forma R (recta) opticamente activa que é a forma enan tiomérica activa sob o ponto de vista farmacológico.

método para a preparação dos derivados que constituem o objectivo da presente invenção, caracteriza-se pelo facto:

a) fazer reagir o éster gama-benzílico do ácido N-carbo-

-benzoxi-D-glutâmico com uma amina de fórmula geral

na qual R^ tem o significado que lhe foi atribuído antes, segundo o método do anidrido misto, no seio de um dissol- 5 ^£·

vente inerte anidro a. uma temperatura compreendida entre -15°0 e +15°C, para se obter os compostos de fórmula geral (III); (ver o esquema da reacção a seguir).

b) de se desbenzilar e descarbobenzoxilar o composto de fór mula geral (III) dissolvido em um dissolvente inerte fazen do-o reagir com hidrogénio à temperatura e pressão atmos. férica ambientes, na presença de uma quantidade cataliti camente eficaz de um catalizador de hidrogenação, para se obterem os derivados de fórmula geral (II) (ver esquema a seguir)

c) fazer reagir os derivados de fórmula geral (II) sob as con dições de Schotter-Bauman” com uma quantidade equivalen, te de um cloreto de acilo de fórmula geral R^-COCl, na qual R^ possui o significado que lhe foi atribuído antes, a uma temperatura compreendida entre 0^o e 15°C e de se re cuperar os derivados (R) 4-acilamino-5-pentilamino-oxopentanóicos de fórmula geral (I) a partir da massa reaccional.

A série de passos do método de acordo com a presente invenção.

ilustra-se globalmente, no esquema de reacção seguinte:

GOOH.

cooh₂-c₆h₅

AMIDAÇAO

(passo a) (III)

- 6 / ?

HIDBOGENàÇÍO COOH ⁽p^{mso b)} :0113)3

COOH

CH-NH₂

ACILAÇÃO

---------->

R₁-CO-G1 (CH₂)₂ (passo c)

GH-NH-CO-R₁ (II) (I)

O passo de amidação (a) efectua-se, de preferência, a. uma tem / ~~ peratúra compreendida entre -15°C e ~1O°C durante um período que va ria entre 1 e 24 horas, de preferência durante 6 horas, com os reagen tes numa proporção estequiométrica. 0 dissolvente preferido para a reacção selecciona-se entre clorofórmio, dioxano e tetrahidrofurano.

passo de hidrogenação (b) efectua-se, preferencialmente na

I presença de paládio suportado sobre carbono, com 0,02 a 0,001 átomos de paládio por mole do composto (III) no seio de uma solução metano lica à temperatura e pressão ambientes, sob uma corrente de hidrogé. nio durante um período compreendido entre 1 e 12 horas, de preferên cia 3 horas. 0 passo de acilação (c) efec'tua-se, de preferência a uma temperatura de aproximadamente 5°θ durante um período que varia entre 1 e 24 horas, de preferência 12 horas.

No sentido de melhor ilustrar a presente invenção, apresen tam-se os exemplos seguintes:

/

Exemplo 1

Preparação do éster benzílico do ácido (R) 4-carbobenzoxia mino-5-(di-n-pentilamino)-5-oxopentanóico (composto 1 do quadro 1). Dissolveu-se 57»1 g (0,1 moles) do éster gamabenzílico do ácido N-carbobenzoxi-D-glutámico em 250 ml de tetrahidrofurano anidro, arrefeceu-se a solução até -10°C e adicionou-se, com agitação, 10,1 g (0,1 moles) de trietilamina; adicionou-se então, 10,8 g (0,1 moles) de clorocarbonato de etilo, ainda a -10°C. Manteve-se a temperatura a -10°C durante 20 minutos e depois adicionou-se 15,7 g (0,1 moles) de di-pentilamina. Continuou-se a agitar durante mais 6 horas e a tem peratura subiu sté à temperatura ambiente; secou-se e recolheu-se o resíduo em acetato de etilo.

Lava-se com HC1 2N, bicarbonato de sódio e finalmente com á gua; depois secou-se sobre Na^SO^ anidro. Por concentração para um pequeno volume, obtém-se um resíduo oleoso (mw 510,6) que não cristã, liza, com uma pureza cromatográfica superior a 95%·

CCF: Fr 0,81 (clorofórmio/acetato de etilo 7/5 v/v).

) Obtiveram-se 46,5 g·

Rendimento de 91%.

Cristalizaram-se todos os compostos de fórmula geral III se, gundo o mesmo método (ver esquema anterior). No quadro 1, a seguir, apresentam-se os compostos obtidos com algumas características iden tificativas assim como os rendimentos que se obtiveram.

- 8 /

Exemplo 2

Preparação do ácido (R) 4-amino-5-(di-n-pentilamino)-5-oxopen tanóico (composto 4 do quadro 2)

Dissolveu-se %1 g (0,1 moles) de éster benzílico de ácido (R) 4-carbobenzoxiamino-5~(di-n-pentilamino)-5-oxopentanóico em

300 ml de metanol com a adição de lg de paladiato de carbono a 10% e hidrogenou-se à temperatura ambiente com uma corrente de hidrogé nio durante 3 horas. Filtrou-se o catalizador e destilou-se o metanol em vácuo. Obteve-se um resíduo oleoso (mw 286,4) que não cristaliza, com uma pureza cromatográfica superior a 95%·

CCF: Fr 0,75 (n-butanol/ácido acético/HpO 5/2/2 v/v/v).

Sintetizaram-se todos os compostos de fórmula geral II segundo o mesmo método (ver esquema).

Apresentam-se adiante, os compostos obtidos, com algumas características identificativas assim como os rendimentos obtidos.

Exemplo 3

Preparação do ácido (R) 4Í2-naftilamino)-5-(di-n-pentilamino)-5-oxopentanóico (composto 7 do quadro 3)·

Fez-se uma suspensão de 28,6 g (0,1 moles) de ácido (R) 4-amino-5-(di-n-pentilamino)-5-oxopentanóico em 3θθ ml de água e dis solveu-se com agitação, pela adição de 10,6g (0,1 moles) de carbona to de sódio. Depois, adicionou-se 19,1 g (0,1 moles) de cloreto de

2-naftanoílo durante 1 hora a 0°C, com agitação.

Deixou-se a mistura reagir durante 12 horas.

Acidificou-se até vermelho de Congo com HC.1 diluído e filtra -se o precipitado assim formado. Cristalizou-se no seio de l^O/eta- 9 ( nol (2/1).

PP. 69° - 72° CGF (álcool iso-amílico/acetona/H₂0: 5/2/1): Fr 0,83 J7 g obtidos (mw 440,6) rendimento de 84%.

PO

Poder rotativo: /*alfa J⁷ u - 4-11,0 (c»2,5% em etanol a 95%).

Sintetizaram-se todos os compostos de fórmula geral I (ver esquema) segundo o mesmo método.

No quadro 3 seguinte, apresentam-se alguns exemplos destes com postos com algumas características identificativas assim como os ren, dimentos obtidos, a título de exemplo.

No sentido de comparar a actividade anti-CCQ dos derivados do ácido (R) 5-peutil-amino-5-oxopentanóico com os enantiómeros da série (S) correspondentes, sintetizaram-se alguns destes derivados segundo o método descrito antes, mas, neste caso, partindo do éster gama-benzílico do ácido N-carbobenzoxi-L-glutâmico.

quadro 4 apresenta alguns dos derivados (S) 4-acilamino-5-(di-n-pentil-amino)-5-oxopentanóicos assim obtidos e que se utiliz^a rarn para comparações farmacológicas, assim como algumas das suas ca. racterísticas identificativas.

- 10 / /

Qusd.ro 1: derivados de fórmula geral

COOCHp - C_gH₅ ch₂ ^i3H2

CH-BH-COOCHg - CgHc o^z \

K₂

Gomposto	Rp Fr *	Fórmula
1	pentilo 0,71	c₅₀h₄₂n₂°₅
2	3-metoxipropilo 0,22	^C29^H40^N2°6
5	2-etoxietilo 0,28	^G29^H40^N2°6

(*) eluentes: clorofórmio/acetato de etilo 9/1 - v/v

Quadro 2: derivados de fórmula geral

COOH ch₂ oh₂

CH-HHg /⁰¾¼^ )

“2

Composto	^H2	Fr x	Fórmula
4	pentilo	0,73	^C15^H5O^H2°5
5	3-met oxi pro pilo	0,58	Ci₄h₂₈h₂°₄
6	2-etoxietilo	0,62	0ι₄η₂₈π₂°₄

(x) eluentes: n-butanol-ácido acético/H^O: 5/2/2 - v/v

	4· o OJ		o o ♦H e <C0 P
LA O _pj	.r	h 1 1
4			LA	125	LA	1
o	04	o	O	04	O	(	h
04	H	OJ	OJ	r~1	04	1	60
&	O	J23	125	O	a	1	1
LO	04	CO	4	o	4	1	θ
fA	IA	IA	IA	IA	IA	1	.1
K	w	m		w	ffl	1
lo	04	4	LA	r—1	LA	1	o
OJ	OJ	04	04	04	OJ	1	§
o	O	O	O	O	O	1	5
						1 1	o

o	o	LO	OJ	LA	o	1		o
r»	·»	·*	«*	·*	#*	1		1
r4	x	ΜΛ	LO	CA	LO	1
r-l	r-l	r4				1
+	+	4-	+	4	+	1		o
						1		Ό
						1		•r-l
CO	CO	í>	LO	x	LA	1		o
r·	r'	r*	<*		<*	1		'CO
co	LA	o	OJ	x	co	1
Φ	LO	LA	LA	4	4	1		o
						1 \|
4	X	04	LO	co	co	1 1		o
CO	00	00	LO	o-	LO	1		o
*·	<*			r»	·*	1		•H
O	o	o	Q	o	o	1	»>	H
						1	X	Ή

Quadro Js (SÉRIE R) derivados de fórmula geral

I			1	z-x.	O	O	Z~x	z-s	z-'
1			1	H	o	o	r-l	H	rH
1	Φ		1	·«	Ή	•r4	··	··	»»
1	*tí		1	OJ	r-l	H	OJ	OJ	OJ
1 1		O	1	x-z	*rl	*r4	x_z	x-z	x-z
CQ	tcC	1		PM	CM
1	Φ	e>	1	H	O	O	H	r4	H
1	-P	CO	1	o	h	A	O	O	O
1	H	CSJ	1	o	PM	PM	o	O	O
1	Φ	•H	1	o	O	O	o	O	O
1	í>	H	1	ι—1	ω	CQ	H	ι—1	H
1	rH	CC	1	'CO	•rí	•r-4	'CO	'CC	'CC
1	O	•P	l	X			X	X	X
1	CQ	CQ	1	ro	h	Pi	co	CO	co
1	CQ	•r4	1		Φ	Φ	à	2	k
1	•H	Fm	1	&	P	•p>	&	60	oO
1		o	1	'CO	'Φ	'Φ	'C0	'CO	'CO

	O	1 1	LO co	4	r-l	O	O O	OJ X
o	o	1	1	í	ΓΑ	LO	H	1
•P	iro	1	IA	1	1	1
q	CQ	1	00	r-l	CA	X	X	oo
o	ps	1		r-l	X	LA	CA	LO
Pm	<P	1 1 1 1		r-l			Q	O
		1				o	q	H
		1					Pm	•H
		1				g	8	•P
		1 1	O	O	O	H	H	Φ •rl
		1	r-l	r-l	H		2S	M
		1	•H	•H	•rl		H	o
		1	P	•P	•P	Φ β	Φ	-P
OJ		1	0	PI	PI	s	φ
P3		1	Φ	Φ	Φ	T	1	1
	1	PM	PM	PM	LA	IA	OJ

1	o	o	•P	O	o	O	1	Φ	o
1	r-l	H	Φ	ι—1	H	H	1
1	•H	O	s	Ή	O	•r4	1
1	P	•14	•r-l	P	•r4	•P	1		z-x
1	«H	Ό		<H		MH	1	✓*>	M
1	ro	1	1	CC	1	ro	1	*	X
1	PI	4	4	PI		α	1	o	o
1	1	e*		1	r»	1	1
1	OJ	IA	IA	OJ	ΓΑ	OJ	1

Quadro 4: (SÉRIE S) derivados de fórmula geral

(x) eluente: álcool iso-amílico/acetona/água: 5/2/1 - v/v

1		4			1
1		o			1
1		gj			t
4	&	4·	IA	1
\|	o	CM	o	O	1
l 1	CM	rd	CM	JM
£d	O		la	1
1 1	ω	CL	CO	4·	1
KA	KA	KA	KA	1
1	M	M			1
1	50	(X	4-	LÍA	1
1 1	CM	CM	CM	CM	1
o	O	O	O	1
1					1
1					1

	o	CCI	1
Fd	!>	'Hl	o	10	CU	o	1
Φ	•fí	r-l 1	Cd	r*	r»	r·	1
Ό	•P	051	H	10	LfX	VO	1
o	05	i 1	H	rd	H		1
Pd	+5	M	1	1	1	1	1

50	rd
co	00
o	o

1		o	1	KA	o	Ο-	KA	1
1			1	Ο-	σ'			1
1	o	o	1					1
1	P	105	1	ι	1	Ι	1	1
1	fl	ω	1	o	co	UA	rd	1
1	o	p	1	o-	00	O-	LÍA	1
1	Pd	«H	1					1
1			I					1
1			1					1
1			1				α	1
1			1				*ΓΊ	1
1			1				P	1
1			1				h	1
1			1				&	1
1			1	o	o	O	*8	1
1			1	rd	rd	rd	o	1
1			1	•rd	•rd	•rd	•P	1
l			1	P	P	•P	Φ	1
1	CM		1	o			e	1
1	Pd		1	Φ	Φ	Φ	1	1
1			1	Pd	Pd	Pd	KA	1
1			1					1
1			1		Λ			1
1			1			o		1
1					M P			1 \|
1			ΐ			-Φ Ck4		1
1			1		o	H		1
1			1		Fd	•H		1
1			1	o	O	P	O	1
1			1	rd	rd	Φ	rd	1
1			1	•rd	O	E	•rd	1
l			1	•P	•rd	•H	•P	1
1	rd		1		Ό	TD	«d-d	1
1	Pd		1	ro	1	1	CO	1
1			1	P	4-	4*	α	1
1			1	1	<·	r·	1	1
1			1	CM	KA	KA	CM	1
1	rai		1					1
	o		1					1
1	Pd	o	1					1
1	β	-P	1	KA	4·	LÍA	50	1
1	o		1	rd	rd	rd	rd	1

- 14/Documentar-se-á, agora, por uma série de experiências farmacológicas realizadas in vivo e in vitro, a poderosa acção anti-colecistoquinina dos compostos que constituem o objectivo da pre sente invenção.

Estudo sobre a ligação às membranas celulares de vesículas biliares de bois

Avaliou-se a capacidade de alguns dos compostos da presente invenção e alguns dos enantiómeros correspondentes (Série S) p_a ra inibir a ligação de / 125-1.7-Bolton Hunter-CCQ-8 aos receptores de colecistoquinina das membranas da vesícula biliar do boi, por comparação com o deslocamento induzido pela COQ fria (não marcada).

Homogeneizaram-se as membranas da vesícula biliar de boi com tampão Tris (pH 7,4) e centrifugou-se o homogenato a 5θ 000 ro tações durante 10 minutos. Procedeu-se à incubação das membranas am um marcador radioactivo e dos compostos em estudo durante 2 horas a 25°0.

Após ter-se retirado o líquido sobrenadante, determinou-se a radioactividade associada à pastilha com um cintilador de líquido. Determinou-se a ligação específica como a diferença entre a li gação na ausência e na presença de CCQ-8 ÍCT^M.

Apresentam-se no quadro 5 os resultados assim obtidos, no qual se apresenta a CI50, que é a concentração (em moles/litro) do antagonista capaz de deslocar 50% do Γ125-1_7-CCQ-8 dos receptores.

- 15 / ί· J

Quadro Inibição da ligação de (^^⁹I)-(B-H)-CCQ-8

Compostos (Sétiec R)	CI50 (moles/litro)	Compostos (Série S)	OI5O (moles/litro)
Composto CCQ-8	0,2 x IO”⁹	Composto 13	6,1 x 10”⁸
Composto 7	1,0 x IO”⁹	Composto 14	4,5 x 10“⁷
Composto 8	7,5 x 10”⁹	Composto 15	2,2 x 10⁶
Composto 9	4,4 x 10“⁸	Composto 16	5,6 x IO”⁷
Composto 10	6,2 x IO”⁹
Composto 11	3,0 x 10”⁸
Composto 12	9,3 x 10⁹

A partir dos dados apresentados no quadro pode verificar-se que os compostos reivindicados antagonizam 5θ % da ligação de OGQ numa concentração que, para o composto mais activo de série R, é apenas 5 vezes superior à do antagonista específico, demonstran do assim, ume especificidade de acção muito elevada. Os enantióme ros correspondentes de série S são, em média, 5θ - 90 vezes menos activos.

No sentido de se confirmar o que se observou sobre este ma téria num estudo in vitro, ensaiaram-se também alguns destes compos. tos in vivo.

Actividade antiespástica na vesícula biliar de ratos

Provocou-se o esvaziamento da vesícula biliar através de

- 16 uma única administração oral de 1 ml de uma suspensão a 30 % (peso/ / volume de gema de ovo liofilizada numa solução fisiológica.

Uma vez absorvida, a gema de ovo, conforme referido antes induz a libertação de CCQ endógena. Seleccionou-se esta dose porque obriga praticamente, ao esvaziamento completo da vesícula biliar.

Administraram-se intraperitonealmente (i.p.) os compostos antagonistas, 15 minutos antes do agente de contracção.

Calculou-se a percentagem de actividade antiespástica para cada dose, pela fórmula seguinte:

^P3 ^P2 na qual P^ = peso médio das vesículas biliares do grupo de animais tratados com o fármaco mais o agente de contracção

Pp = peso médio das vesículas biliares do grupo de animais tratados apenas com o agente de contracção

P^ = peso médio das vesículas biliares do grupo de animais de controlo.

Ensaiaram-se os compostos em diversas doses para tornar pos. sível o cálculo do valor de DI50, que é a dose (em mg/Kg i.p.) que é susceptível de inibir em 5θ% o efeito contráctil da gema de ovo.

Apresentam-se no quadro 6 os resultados assim obtidos, onde se expressam os efeitos obtidos como 0 DI50.

- 17 Quadro 6: Actividade antiespástica sobre a contracção induzida pela gema de ovo na vesícula biliar

Composto	Doses (mg/Kg i.p.)	% de inibição do esvazia, mento da vesícula biliar	DI50 (1) (mg/Kg i.p·)
7 (Série R)	0,025	24,0	0,05
	0,05	44,2
	0,1	74,0	(0,99)
8 (Série R)	0,1	25,2	0,25
	0,3	53,2
	0,1	86,3	(0,99)
15 (Série R)	1	18,8	3,2
	5	47,7
	9	80,2	(0,99)
ATROPINA	5	3,7
	10	21,6	INACTIVO
	15	10,5
PAPAVERINA	25	0
	50	0	INACTIVO
	75	26,1

1) r = o coeficiente de correlação da linha recta de regressão.

O esvaziamento da vesícula biliar reduz-se, consoante a dose administrada dos compostos que constituem o objecti vo da presente invenção. 0 composto 7, numa dose de 0,1 mg/Kg, bloqueia em aproximadamente 75% a contracção indu zida pela gema de ovo. 0 seu enantiómero (S) também é aç_ tivo mas com um valor de DI50 aproximadamente 60 vezes maior. Por outro lado, a atropina é inactiva e a papaveri na é ligeiramente activa, mas apenas na dose tóxica de 75 mg/Kg, que provoca a morte de 20% dos animais tratados.

Actividade antiespástica sobre a contracção pilórica em ratazanas

Esta experiência demonstra 0 efeito contráctil da CCQ sobre 0 esfincter pilórico. Utilizou-se uma dose de 8 mcg/Kg i.p. de CCQ que induz uma contracção sub-máxima do piloro.

Administraram-se os compostos antagonistas (i.p.) 15 minu tos antes do agente de contracção. Decorridos 10 minutos sobre a admi nistração do espasmódico, trataram-se os animais com 25 ml/Kg de H^O: Passados 5 minutos sobre esta administração, sacrificaram-se os animais, removeram-se os estômagos e mediu-se 0 conteúdo gástrico por remoção com uma seringa.

Calculou-se a % de actividade antiespástica, para cada dose administrada, a partir da fórmula seguinte:

x 100 ί è na qual Vj = volume do conteúdo gástrico do grupo de animais tratados com o fármaco e com o agente de contracção.

Vg = volume do conteúdo gástrico do grupo de animais tratados apenas com o agente de contracção.

= volume do conteúdo gástrico do grupo de animais de controlo.

Ensaiaram-se os compostos em diversas doses para possibili tar 0 cálculo do valor de DI50, que é a dose (em mg/Kg i.p.) que é susceptível de inibir em 5θ% o efeito contráctil da CCQ.

Apresentam-se no Quadro 7 os resultados obtidos, onde os efeitos obtidos se expressam como DI 50·

Quadro 7: actividade antiespástica sobre a contracção pilórica induzida pela CCQ em ratazanas

Composto	Doses (mg/Kg i. p.)	% de inibição da con tracção pilórica	DI50 (1) (mg/Kg i.p.)
7 (Série R)	0,01	27,7
	0,03	48,8	0,03
	0,1	80,8	(0,99)
8 (Série R)	0,05	29,8
	0,1	48,0	0,11
	0,5	68,1	(0,99)
13 (Série R)	1	17,7	4,55
	3	39,0
	5	54,2	(0,99)

1): 0 ί entre parêntesis = coeficiente de correlação da linha recta de regressão.

Alguns dos compostos da presente invenção, administrados em doses muito baixas, inibem em 50% a contracção pilórica origina do por 8 mcg/Kg de CCQ-8. Uma dose de 30 mcg/Kg no caso do composto 7, isto é uma dose apenas 3-4 vezes superior à do agente de contra£ ção hormonal. Por outro lado, o composto 13, que é o enantiómero S do composto 7 apenas é activo em doses aproximadamente 150 vezes superiores.

- 21 X

Pancreatite induzida por taurocolato de sódio

Segui-se o método descrito por Aho e outros (Scandinavian J. Gastroenterology 15, 1980, p. 411 - 16).

Efectuou-se a laparotomia de ratos machos que pesavam apro ximadamente 250 g e expos-se o pâncreas. Injectou-se directamente no tecido pãncreático 0,3 ml de uma solução a 6% de taurocolato de sódio.

Administraram-se intraperitonealmente (i.p.) os produtos em ensaio 3θ minutos antes da operação e 3 horas após a operação. Decorridas 6 horas sobre a laparotomia e após anestesia com éter, removeu-se sangue do plexus retro-orbital, sacrificaram-se os ani mais, removeu-se e pesou-se o pâncreas. Determinou-se a actividade da amilase do soro, segundo o método de Ceska (Clin. Chim. Acta, 26, 1969, p. 437 - 444.

Ensaiaram-se os compostos em diversas doses para permitir o cálculo do valor de DI50, que é a dose (em mg/Kg i.p.) que é capaz de inibir em 50% o efeito tóxico do taurocolato de sódio, que se expressa como uma percentagem de inibição do acréscimo do peso do pâncreas e como uma % de inibição do acréscimo da amilase do soro. No quadro 8 apresentam-se os resultados que se obtiveram com os compostos 7 e 8.

À

Quadro 8: exemplos da actividade proteolítica dos compos.

tos reivindicados na pancreatite experimental in duzida por meio de taurocolato de sódio em ratazanas

	% proporção peso do pan creas/peso do animal	% de inibi, ção do aumento de peso	Amilase no soro (U/ml)	% de inibição do aumento de amilase (DI50 mg/Kg i.p.)
Controlos	0,40	«M»	8,3
Controlos + taurocolato	0,51	-	14,7	-
Composto 7 (0,3 mg/Kg)+ taurocolato	0,47	36,4	12,0	42,2
Composto 7 ( .1 mg/Kg)+ taurocolato	0,45	54,5	9,6	79,7
Composto 7 (3 mg/Kg) + taurocolato	0,41	90,8	9,0	89,0
	DI50=0,6	(r=0,98)	DI50=0,4	(r=0,94)
Controlos	0,37	—	7,9	—
Controlos + taurocolato	0,5*	-	16,0	-
Composto 8 (1,0 mg/Kg)+ taurocolato	0,48	35,3	12,7	40,7
Composto 8 (5 rag/Kg)+ taurocolato	0,45	52,5	9,8	76,5
Composto 8 (5 mg/Kg) + taurocolato	0,40	82,3	9,0	86,4
	DI50=l,8	(r=0,97)	DI50=l,2	(r=0,97)

(r) = coeficiente de correlação taurocolato de sódio induz a pancreatite que origina um aumento de peso do órgão que também se torna edematoso, com perda de elasticidade e hemorrágico.

Para além disso, a amilase do soro praticamente duplica. Os compostos que constituem o objectivo da. presente invenção, bloqueiam estes efeitos segundo um procedimento dependente da dose. Por exem pio, uma dose de aproximadamente 0,5 mg/Kg i.p. do composto 7 ini be em 5θ% ⁰ acréscimo do peso do pâncreas e o aumento da amilase do soro.

Os dados experimentais fornecidos antes, demonstram, assim, a possível utilidade destes compostos no tratamento de diversas si. tuações patológicas que afectam o tracto gastrointestinal, por exem pio, nos sindromes espásticos e dores generalizadas, tais como dis quinésia biliar ou no auxílio prestado ao esvaziamento do estômago facilitando assim, a digestão.

Estes produtos podem utilizar-se com especial vantagem no tratamento da pancreatite desde que os fármacos activos e inócuos cuja eficácia se demonstrou por experiências farmacológicas pertinen tes, não combatam eficazmente esta situação- patológica. Pode também prever-se, para muitos dos compostos, uma utilização favorável no tratamento de diversas formas de anorexia e também no tratamento de algumas situações patológicas do SNG relacionadas com deficiências de CCQ ou de outros péptidos bio-activos nos níveis fisiológi. cos dos neurónios.

Claims

Reivindicações

1..- Processo para a preparação de um derivado do acido (R) 5-pentilamino-5-oxo-pentanóico de fórmula geral

COOH f (C^h2)2 ^(*) (*) - CH-NH-CO-R^

CO-N >(CH₂)₄-CH₃ na qual representa um grupo 2-naftilo, 3,4-diclorofenilo ou 3,4-dimetil-fenilo e R₂ representa um grupo pentilo ou um grupo alcoxi-alquilo com 4 átomos de carbono no qual os substituintes no grupo quirãlico central /T^arcada com o asterisco na fórmula geral (I)_7 tem a conformação R (recta), caracterizado pelo facto:

-25a) de se fazer reagir, pelo método do anidrido misto, o éster gama-benzílico do ácido N-carbobenzoxi-D-glutâmico com uma amina de fórmula geral

H-N na qual Rg tem o significado definido antes a uma temperatura compreendida entre -15°C e +15°C no seio de um dissolvente inerte anidro e de se recuperarem os compostos de fórmula geral (III) da massa reaccional,

COOCHg (Ç^H ₂)2

CH-NH-CO-O-CHg

CO

b)de se desbenzilar e descarbobenzoxilar o composto de fórmula geral (III) dissolvido em um dissolvente inerte, tal como o metanol, de se fazer reagir ã temperatura ambiente e ã pressão normal com hidrogénio na presença de uma quantidade cataliticamente eficaz de um catalisador de hidrogenaçao e de se recuperarem os compostos de fórmula geral (II) da massa reaccional

COOH ch-nh₂ (II)

c) de se fazer reagir os derivados de fórmula geral (II) sob as condições de Schotten-Bauman com uma quantidade equimolecular de um cloreto de acilo de fórmula geral R^-CO-C1, na qual R^ tem o significado definido antes, a uma temperatura compreendida entre

0° e 15°C e de se recuperar os derivados (R) 5-pentilamino-5-oxo.pentanõicos de fórmula geral (I) a partir da massa reaccional.
2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se realizar a reacção do passo a) no seio de um dissolvente escolhido entre clorofórmio, tetrahidrofurano e dioxano, com os reagentes numa proporção estequiométrica.
3. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de no passo b), o paládio suportado sobre carvão ser utilizado como catalisador em uma proporção de 0,02 a 0,001 átomos de paládio por mole de composto de fórmula geral (III).
4. - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R₂ representa um grupo pentilo, 2-etoxi-etilo ou 3-metoxi-propilo, caracterizado pelo facto de se utilizarem compostos iniciais correspondentemente substituídos,