DE3129987A1 - Verfahren zur herstellung eines faktor viii(ahf)-hochkonzentrates - Google Patents
Verfahren zur herstellung eines faktor viii(ahf)-hochkonzentratesInfo
- Publication number
- DE3129987A1 DE3129987A1 DE19813129987 DE3129987A DE3129987A1 DE 3129987 A1 DE3129987 A1 DE 3129987A1 DE 19813129987 DE19813129987 DE 19813129987 DE 3129987 A DE3129987 A DE 3129987A DE 3129987 A1 DE3129987 A1 DE 3129987A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- ahf
- factor viii
- precipitation
- polyethylene glycol
- subjected
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 title claims description 35
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 title claims description 31
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 6
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims description 34
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims description 34
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 27
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 27
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 23
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 claims description 16
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 13
- 108010049003 Fibrinogen Chemical group 0.000 claims description 12
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 12
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 11
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 8
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 8
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 7
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 claims description 6
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 claims description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 6
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims description 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 4
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 3
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 claims 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims 1
- -1 polyethylene Polymers 0.000 claims 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 claims 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 5
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 5
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 5
- 235000019263 trisodium citrate Nutrition 0.000 description 5
- 108010035369 Cohn fraction I Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 235000019624 protein content Nutrition 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 1-O-galloyl-3,6-(R)-HHDP-beta-D-glucose Natural products OC1C(O2)COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC1C(O)C2OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JQBCLHCLJAHVPV-UHFFFAOYSA-N CCO.NCC(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O Chemical compound CCO.NCC(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O JQBCLHCLJAHVPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000252095 Congridae Species 0.000 description 1
- 239000001263 FEMA 3042 Substances 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N Penta-digallate-beta-D-glucose Natural products OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 description 1
- 229940127554 medical product Drugs 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- ZMRUPTIKESYGQW-UHFFFAOYSA-N propranolol hydrochloride Chemical compound [H+].[Cl-].C1=CC=C2C(OCC(O)CNC(C)C)=CC=CC2=C1 ZMRUPTIKESYGQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N tannic acid Chemical compound OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N 0.000 description 1
- 229940033123 tannic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000015523 tannic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920002258 tannic acid Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
- Y10S530/83—Plasma; serum
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
- Y10S530/83—Plasma; serum
- Y10S530/831—Cohn fractions
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
IMMUNO Aktiengesellschaft für chemisch-medizinische Produkte Wien, Österreich
Verfahren zur Herstellung eines Faktor VIII (AHF) Hochkonzentrates
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines
Faktor VIII (AHF)-Hochkonzentrates mit einer spezifischen Aktivität von mindestens 2,5 Einheiten AHF und einem Fibrinogengehalt
von weniger als 0,25 mg/mg Protein aus menschlichem oder tierischem Plasma durch mehrstufige Fraktionierung
des Plasmas, insbesondere durch Kryopräzipitieren und Reinigen mittels Proteinfällungsmittel, wie Polyäthylen-·
glykol. .
Es sind bereits Faktor VIII(AHF)-Konzentrate bekannt,.die
aus menschlichem oder tierischem Plasma hergestellt werden" und im Vergleich zum nativen Plasma eine erhöhte Aktivität
an Faktor VIII aufweisen. Bekannte Verfahren zur Herstel^
lung von Faktor VIII-Konzentraten bedienen sich als Fr aktionierungsmaßnahmen
einer Behandlung des Plasmas mit Äthanol, mit Äther, mit Polyäthylenglykol und/oder Glycin.
Bekannt ist auch die Kryopräzipitation des Plasmas nach Pool (1965, "The New England Journal of Medicine" 273,
1443) oder die Kryoäthanolprazipitation des Plasmas nach Johnson (Congr. Int. Soc. Blood Trarisf., Sydney, Australia,
Abstracts of Paper, Seite 1109 (1966)).
Es gibt auch noch andere Methoden, um Faktor VIII-Konzentrate
herzustellen, nämlich die Behandlung des Plasmas mit Adsorptionsmittel^ wie Florigel·, Bentonit, Ionenaustauschern
und permeationschromatographischen Mitteln.
Soweit der Stand der Technik die Behandlung des Plasmas mit
Äthanol betrifft, wurde diese erstmals von Gohn .(J. Amer.
Chem. Soc. J58, 459 (1946)) beschrieben. Bei der Behandlung
des Plasmas mit Äthanol wird die sogenannte Cohn-Fraktion I erhalten, die jedoch nur eine relativ geringe Faktor VIII-Aktivität
besitzt. Die Cohn-Methode wurde von Blombäck (Arkiv for Kemir--12_ 387 (1958)) verbessert, wobei Cohn-Fraktion
I durch Extraktion mit einem Äthanol-Glycin-Zitrat-Puffer
weiter gereinigt wurde. Dabei entstand die sogenannte Fraktion I-O. Diese kann, wie Simonetti et al. (Hemo-·
stase 1, 57 (1961)) beschrieben, mit Gerbsäure noch weiter
gereinigt werden? auch diese verbesserten Konzentrate haben nur eine relativ geringe Faktor VIII-Aktivität.' Diese Konzentrate
haben auch den Nachteil, daß sie hohe Fremdproteingehalte, d. h. Faktor VIII unwirksame Proteingehalte besitzen.
So ist in der Cohn-Fraktion I mehr als 60 % des Proteins Fibrinogen und in der Blombäck-Fraktion I-O so- ·
gar über 80 % Fibrinogen enthalten.
Was die bekannte Fraktionierung durch Kryopräzipxtieren betrifft, wurde diese so vorgenommen, daß menschliches oder
tierisches Ausgangsplasma tiefgefroren und wieder aufgetaut wurde. Das Kryoprazipitat wurde in einer Pufferlösung gelöst
und gegebenenfalls durch Proteinfällungsmittel, wie Polyäthylenglykol und Glycin, weiter gereinigt. Durch die ·
Kryppräzipitation ist es nicht gelungen, die Faktor VIII-Aktivität wesentlich zu steigern. Die Faktor VIII-Aktivität
wird durch das Kryopräzipitieren im Vergleich zum Ausgangsplasma nur um etwa das 1Ofache gesteigert, doch auch die
in Kombination mit dem Kryopräzipitieren angewendeten weiteren Maßnahmen haben bisher die Aktivität der erhaltenen
Produkte nicht in der Weise steigern können, wie es erwünschenswert wäre.
Mehrstufige Fraktiönierungsverfahren in Verbindung mit einer ersten Kryoprazipitationsstufe sind in den US-PSen
3,652,530, 3,631,018, 3,682,881 sowie in der AT-PS 349 639 beschrieben.
Solche Produkte werden als "hochgereinigter AHF" oder als "High Purity AHF" bezeichnet. Ihre Faktor VIII-Aktivität
beträgt jedoch auch bloß die 90 bis lOOfache Aktivität
gegenüber nativem Plasma, während der Faktor-VIII-unwirksame
Proteingehalt (Fibrinogen) immer noch 35 % des Gesamtproteins ausmacht.
Die Erfindung bezweckt die Vermeidung der geschilderten '
Nächteile und Schwierigkeiten und stellt sich die Aufgabe, ein Faktor VIII-Hochkonzentratzu schaffen, in welchem die
inerten, nicht-Faktor-VIII-wirksamen Proteine weitestgehend
entfernt sind, der Gehalt an Fibrinogen so niedrig wie möglich gehalten ist und die Faktor VTII-Aktivität, bezogen
auf das im Konzentrat vorhandene Protein, höher ist als bei den bekannten therapeutisch verwendeten Präparaten.
-Im besonderen ist es eine Aufgabe der Erfindung, ein Verfahren
zur Herstellung eines Faktor VIII (AHF)-Hochkonzentrates mit einer spezifischen Aktivität von mindestens
2,5 Einheiten AHF und einem Fibrinogeng.ehalt von weniger als 0,25 mg/mg Protein zu schaffen, welches Verfahren betriebsmäßig
bzw. in technischem Maßstab anwendbar ist und eine hohe Wirtschaftlichkeit gewährleistet.
Diese Aufgabe wird durch ein mehrstufiges Fraktionierungsverfahren
der eingangs bezeichneten Art, bei welchem vor-. zugsweise als erste Stufe eine Kryopräzipitation. angewendet
wird, dadurch gelöst, daß eine durch diese Fraktionierungsmaßnahmen"gereinigte
und an Faktor VIII (AHF) angereicherte Fraktion einer Kryoalkoholfallung unterworfen und "
der erhaltene Niederschlag in eine haltbare Form aufgearbeitet wird.
Nach einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird
·· οβ ta tot
ö ο · «α λ
ft »β* α> · «ι
— 7 —
der gereinigten und an Faktor VIII (AHF) angereicherten Fraktion bei einem pH-Wert von 5,9 bis 6,3 und einer Temperatur
von 0 bis -3° C ein ein- oder mehrwertiger Alkohol, wie Methylalkohol, Äthylalkohol, Polyäthylenglykol oder
Polyesterglykol (PLURONIC) zugesetzt, die Mischung tiefgefroren und sodann.'bei einer Temperatur von 0 bis 4° C
aufgetaut, worauf der das AHF-Hochkonzentrat enthaltende' Niederschlag gelöst-und durch Tieffrieren und Lyophilisieren
in haltbare Form gebracht wird.
Eine bevorzugte Ausführungsform der Erfindung umfaßt die
Kombination der folgenden Maßnahmen:
-<■ daß menschliches oder tierisches Plasma einer ersten
Kryoprazipxtation unterworfen wird; das Kryopräzipitat in einer wässerigen Pufferlösung
gelöst, auf einen pH-Wert von 6,15 bis 6,25 gestellt und die Lösung einer ersten Reinigungsfällung mit Polyäthylenglykol
unterworfen wird;
- daß der nach Verwerfen des Niederschlags erhaltene Überstand mindestens einer weiteren Reinigungsfäliung
mit Polyäthylenglykol unterworfen und
- die nach Verwerfen der Niederschläge schließlich erhaltene
gereinigte, an Faktor VIII (AHF) angereicherte Fraktion der Kryoalkoholfällung unterworfen wird, indem
dieser Fraktion ein ein- oder mehrwertiger Alkohol, wie Methylalkohol, Äthylalkohol/ Polyäthylenglykol oder
Polyesterglykol (PLURONIC) zugesetzt; die Mischung tiefgefroren und sodann bei einer Temperatur von 0 bis 4 C
aufgetaut wird, worauf der das AHF-Hochkonzentrat enthaltende Niederschlag gelöst und durch Tieffrieren und
Lyophilisieren in haltbare Form gebracht wird.
Vorteilhaft werden dabei die erste Polyäthylenglykol-Fällung mit 3 G/V %igem Polyäthylenglykol und die zweite bzw. die
weiteren Polyäthylenglykol-Fällungen mit 8 G/V %igem Polyäthylenglykol durchgeführt.
Zweckmäßig wird zur Ausfällung des Faktor VIII-Konzentrates
eine etwa 10 G/V %ige PLURONIC-Lösung verwendet.
Anstelle von Polyäthylenglykol als Proteinfällungsmittel
kann auch "PLURONIC" verwendet werden, in welchem Fall die Kombination aus den folgenden Merkmalen besteht:
- daß menschliches oder tierisches Plasma einer ersten
Kryoprazipitation unterworfen wird/
- das Kryopräzipitat in einer wässerigen Pufferlösung gelöst,
auf einen pH-Wert von 6,25 gestellt und die Lösung einer ersten Reinigungsfällung mit PLURONIC unterworfen
wird;
- daß der nach Verwerfen des Nieiderschlages erhaltene Überstand mindestens einer .weiteren Reinigungsfällung
mit PLURONIC unterworfen und
- die nach Verwerfen der Niederschläge schließlich erhaltene,
gereinigte, an Faktor VIII. (AHF) angereicherte Fraktion der Kryoalkoholfällung unterworfen wird, indem
dieser Fraktion ein ein-? oder mehrwertiger Alkohol,
wie Methylalkohol, Äthylalkohol, Polyäthylenglykol oder
Polyesterglykol (PLURONIC) zugesetzt/ die Mischung tiefgefroren und sodann bei einer Temperatur von 0 bis 4°'C
aufgetaut wird, worauf der das AHF-Hochkonzentrat enthaltende
Niederschlag gelöst und durch Tieffrieren und Lyophilisieren in haltbare Form gebracht wird.
Das erfindungsgemäße Verfahren wird durch die folgenden
Beispiele näher erläutert:
4.60 1 frisch gefrorenes Plasma werden bei 0° und +4°· C aufgetaut.
Das entstandene Kryopräzipitat wird durch Zentrifugieren
abgetrennt und in 9,6 ] Tri-Natriumcitrat bei 37° C gelöst. · '
β β Ο · β 8
Der pH-Wert der Lösung wird auf 6,2 gestellt und 3 G/V
%iges Polyäthylenglykol 2000 wird zugesetzt. Dabei entsteht ein Niederschlag, der durch Zentrifugieren abgetrennt
und verworfen wird. .
Die Ionenstärke des Überstandes, der Faktor VIII (AHF) enthält, wird durch Zugabe von Tri-Natriumcitrat erhöht.
Die restlichen unerwünschten Proteine werden durch Erhöhung der Polyäthylenglykol 2000-Konzentration .auf 8 G/V
% ausgefällt und nach dem Zentrifugieren· verworfen.
Durch Zugabe von 8 G/V %igem Äthanol, bei -2° C und einem
pH-Wert von 6,1, wird Faktor VIII-Konzentrat ausgefällt; die Suspension wird eingefroren und nach Auftauen bei
+4° C wird das Faktor VIII enthaltende Kryoalkoholpräzipitat in einem physiologischen Puffer gelöst, sterilfiltriert,
abgefüllt und gefriergetrocknet.
9600 ml frisch gefrorenes Plasma werden bei 0 bis +4° C
aufgetaut. Das zentrifugierte Kryopräzipitat wird in 240. ml Tri-Natriumcitrat bei 37° C gelöst.
Der pH-Wert der Lösung wird auf 6,2 gestellt und 3 G/V
%iges Polyäthylenglykol 2000 zugesetzt. Der entstandene
Niederschlag wird abgetrennt und verworfen.
Durch Zugabe von Tri-Natriumcitrat wird die Ionenstärke erhöht, durch Zugabe von weiterem Polyäthylenglykol 2000
bis auf 8 G/V % fallen unerwünschte Proteine aus; diese werden abgetrennt und verworfen.
Bei pH 6,0 und -2 bis -3° C wird Faktor VIII-Konzentrat
mittels 10 G/V %igem Methanol ausgefällt; die Suspension
wird eingefroren und nach Auftauen wird das Kryoalkohol-
präzipitat in einem isotonen Puffer gelöst, sterilfiltriert/ abgefüllt und gefrxergetrocknet.
Die Arbeitsweise des Beispieles 2 wird wiederholt, jedoch
wird statt 10 G/V %igem Methanol 12 %iges Polyäthylenglykol zur Ausfällung des Faktor VIII-Konzentrates verwendet.
•Beispiel 4:
Die Arbeitsweise des Beispieles 2 wird wiederholt, jedoch wird statt 10 G/V %igem Methanol 10 G/V %iges "PLURONIC"
zur Ausfällung des Faktor VIII-Konzentrates verwendet.
10,4 1 frisch gefrorenes Plasma werden bei 0° bis +4° C aufgetaut. Das Kryopräzipitat wird in 250 ml Tri-Natriumcitratpuffer
gelöst.
Der pH-Wert der Lösung wird auf 6,3 gestellt und 2,5 G/V
TJ
%iges PLURONIC zugesetzt. Der Niederschlag wird verworfen.
Nach Erhöhung der Ionenstärke wird die PLURONIC-Konzentration auf 7,5 G/V % gesteigert und der Niederschlag
abermals verworfen.
Der Überstand wird bei einem pH-Wert von 6,0 und einer ·
Temperatur von -2° C mit 8 G/V %igem Äthanol behandelt,
wobei Faktor VIII-Konzentrat ausfällt. Die Suspension
wird eingefroren und nach Auftauen bei +4 C das Kryo-.alkoholpräzipitat
abgetrennt; '
■Die durch das erfindungsgemäße Verfahren wesentlich erhöhte
spezifische Aktivität der'erhaltenen Hochkonzentrate
bzw. die Anreicherung an AHF um mehr als das 20Ofache
gegenüber Ausgangsplasma zeigt Tabelle I im Vergleich zu bekannten, im Handel befindlichen AHF-Konzentraten.
| • » ■ β *- ο t • . Ολο »ο t> e ■ ο ο ^. £ |
Spezifität Einh«/mg |
Ό i.3 129987 ■ | |
| - 11 - | 0,017 | ||
| Tabelle I | 0,145 | ||
| 1,667 | Reinheit im" Ver gleich zu Plasma |
||
| Plasma | 1 | ||
| Kryopräzipität | 9fache | ||
| High Purity AHP | >3,500 | 98fache | |
| Hochkonzentrat, | herge- | ||
| stellt nach der | Erfin- | ||
| dung | 206fache | ||
Der geringere Gehalt des erfindungsgemäßen Hochkonzentrates
an Fibrinogen gegenüber bekannten Konzentraten ergibt sich aus der Tabelle II.
Cohn-Fraktion I Blombäck-Fraktion 1-0 gereinigter, oder High
Purity AHF
Hochkonzentrat, hergestellt nach der Erfindung
> 60 % Fibrinogen ;> 80 % Fibrinogen
> 35 % Fibrinogen 10 % Fibrinogen
Claims (6)
1. Verfahren zur Herstellung eines Faktor VIII (AHF)-Hochkonzentrates
mit einer spezifischen Aktivität von mindestens 2,5 Einheiten AHF und einem Fibrinogengehalt von
weniger als 0,25 mg/mg Protein aus menschlichem oder ·
tierischem Plasma durch mehrstufige Fraktionierung des Plasmas, insbesondere durch Kryopräzipitieren und Reinigen
mittels Proteinfällungsmittel, wie Polyäthylenglykol,
dadurch gekennzeichnet, daß eine durch diese Frak-
. tionierungsmaßnahmen gereinigte und an Faktor VIII CAHF)
angereicherte Fraktion einer Kryoalkoholfällung unterworfen und der erhaltene Niederschlag in eine haltbare
Form aufgearbeitet wird.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß
der gereinigten und an Faktor VIII (AHF) angereicherten Fraktion bei einem pH-Wert von 5,9 bis 6,3 und einer
Temperatur von Ö bis -
3 C ein ein- oder mehrwertiger Alkohol, wie Methylalkohol, Äthylalkohol, Polyäthylenglykol
oder Polyesterglykol (PLURONIC) zugesetzt wird, die Mischung tiefgefroren und sodann bei einer Temperatur von 0 bis 4° C aufgetaut wird, worauf der das
AHF-Hochkonzentrat enthaltende Niederschlag gelöst und
durch Tieffrieren und Lyophilisieren in haltbare Form
gebracht wird.
-"3.. Verfahren nach den Ansprüchen 1 und 2, gekennzeichnet
durch die Kombination der folgenden Maßnahmen:
- daß menschliches oder tierisches Plasma einer ersten
Kryopräzipitation unterworfen wird,·
- das Kryopräzipitat in einer wässerigen Pufferlösung
gelöst, auf einen pH-Wert von 6,15 bis 6,25 gestellt
und die Lösung einer ersten Reinigungsfällung mit Polyäthylenglykol unterworfen wird;
- daß der nach Verwerfen des Niederschlags erhaltene überstand mindestens einer weiteren Reinigungsfällung
mit Polyäthylenglykol unterworfen und
- die nach Verwerfen der Niederschläge schließlich er-,
haltene gereinigte, an Faktor VIII (AHF) angereicherte Fraktion der Kryoalkoholfallung unterworfen wird,
indem dieser Fraktion ein ein- oder mehrwertiger Alkohol, wie Methylalkohol, Äthylalkohol, Polyäthylenglykol
oder Polyesterglykol (PLURONIC) zugesetzt,' die Mischung tiefgefroren und'sodann bei einer Temperatur
von 0 bis 4° C aufgetaut wird, worauf der das AHF-Hochkonzentrat enthaltende Niederschlag gelöst und
durch Tieffrieren und Lyophilisieren in haltbare Form gebracht wird.
4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß die erste Polyäthylenglykol-Fällung mit 3 G/V %igem
* . . Polyäthylenglykol und die zweite bzw. die weiteren PoIy-
äthylenglykol-Fällungen mit 8 G/V %igem Polyäthylen-'
glykol durchgeführt werden. . · ■
5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß ■ ■ zur Ausfällung des Faktor VIII-Konzentrates eine etwa
G/V %ige PLURONIC-Lösung verwendet wird.
6. Verfahren nach Anspruch 1, gekennzeichnet.durch die
Kombination der folgenden Maßnahmen:
daß menschliches oder tierisches Plasma einer ersten Kryoprazipitation unterworfen wird/
- das Kryopräzipitat in einer wässerigen Pufferlösung gelöst, auf einen pH-Wert von 6,25 gestellt und die
Lösung einer ersten Reinigungsfällung mit PLURONIC unterworfen wird/
daß der nach Verwerfen des Niederschlages erhaltene überstand mindestens einer weiteren Reinigungsfällung
mit PLURONIC unterworfen und
die nach Verwerfen der Niederschläge schließlich erhaltene gereinigte, an Faktor VIII (AHF) angereicherte
Fraktion der Kryoalkoholfallung unterworfen wird, indem dieser Fraktion ein ein- oder mehrwertiger Alkohol,
wie Methylalkohol, Äthylalkohol, PοIyäthy1engIykol
oder Polyesterglykol (PLURONIC) zugesetzt/ die
Mischung tiefgefroren und sodann bei einer Temperatur
von 0 bis 4° C aufgetaut wird, worauf der das AHF-Hochkonzentrat
enthaltende Niederschlag gelöst und durch Tieffrieren und Lyophilisieren in haltbare Form gebracht
wird.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT0433880A AT369263B (de) | 1980-08-27 | 1980-08-27 | Verfahren zur herstellung eines faktor viii(ahf) -hochkonzentrates |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE3129987A1 true DE3129987A1 (de) | 1982-04-22 |
| DE3129987C2 DE3129987C2 (de) | 1984-11-29 |
Family
ID=3562706
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE3129987A Expired DE3129987C2 (de) | 1980-08-27 | 1981-07-29 | Verfahren zur Herstellung eines Faktor VIII(AHF)-Hochkonzentrates |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4404131A (de) |
| JP (1) | JPS5928537B2 (de) |
| AR (1) | AR228874A1 (de) |
| AT (1) | AT369263B (de) |
| BE (1) | BE890003A (de) |
| CA (1) | CA1160567A (de) |
| CH (1) | CH652030A5 (de) |
| DE (1) | DE3129987C2 (de) |
| DK (1) | DK156764C (de) |
| ES (1) | ES8302017A1 (de) |
| FI (1) | FI72653C (de) |
| FR (1) | FR2489150A1 (de) |
| GB (1) | GB2083047B (de) |
| HU (1) | HU183542B (de) |
| IT (1) | IT1138511B (de) |
| LU (1) | LU83577A1 (de) |
| NL (1) | NL8103563A (de) |
| NO (1) | NO157884C (de) |
| SE (1) | SE459639B (de) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU555305B2 (en) * | 1982-09-29 | 1986-09-18 | Bayer Corporation | Antihemophilic factor concentrate |
| US4650858A (en) * | 1983-03-21 | 1987-03-17 | Nordisk Gentofte A/S | Concentrate of the antihemophilic factor VIII and a process for producing it |
| AT379510B (de) * | 1983-05-20 | 1986-01-27 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer faktor viii (ahf) -haeltigen praeparation |
| US4965199A (en) * | 1984-04-20 | 1990-10-23 | Genentech, Inc. | Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection |
| US4710381A (en) * | 1984-05-22 | 1987-12-01 | The Blood Center Of Southeastern Wisconsin | Method for maintaining intact, non-degraded factor VIII/von-Willebrand factor during blood processing |
| US5149787A (en) * | 1984-05-22 | 1992-09-22 | The Blood Center Research Foundation | Method for maintaining intact, non-degraded factor VIII/von-Willebrand factor during blood processing |
| US4543210A (en) * | 1984-10-04 | 1985-09-24 | Miles Laboratories, Inc. | Process for producing a high purity antihemophilic factor concentrate |
| US4847362A (en) * | 1985-02-01 | 1989-07-11 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
| US4743680A (en) * | 1985-02-01 | 1988-05-10 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
| US4952675A (en) * | 1985-02-01 | 1990-08-28 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
| CA1293941C (en) * | 1985-11-08 | 1992-01-07 | Maria Erlinda Co-Sarno | Method for preparing antihemophilic factor (ahf) by cold precipitation and for improving solubility of recovered ahf product |
| AU7254894A (en) * | 1993-07-23 | 1995-02-20 | Baxter International Inc. | Activated human factor viii and method of preparation |
| US5576291A (en) * | 1993-09-13 | 1996-11-19 | Baxter International Inc. | Activated factor VIII as a therapeutic agent and method of treating factor VIII deficiency |
| US5659017A (en) * | 1995-11-07 | 1997-08-19 | Alpha Therapeutic Corporation | Anion exchange process for the purification of Factor VIII |
| DK2130554T3 (da) | 1999-02-22 | 2012-12-03 | Univ Connecticut | Albuminfrie faktor VIII-præparater |
| US6893639B2 (en) * | 2001-10-19 | 2005-05-17 | Hemacare Corporation | Method for high yield purification of immune globulins from blood plasma and blood plasma intermediates |
| AU2009313325B2 (en) * | 2008-11-07 | 2014-05-01 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Factor VIII formulations |
| US20220380439A1 (en) | 2020-11-09 | 2022-12-01 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Purification of fviii from plasma using silicon oxide adsorption |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4069216A (en) * | 1975-06-16 | 1978-01-17 | Edward Shanbrom, Inc. | Simplified methods for preparation of very high purity Factor VIII concentrate |
| US4188318A (en) * | 1975-06-16 | 1980-02-12 | Edward Shanbrom | Simplified method for preparation of high yield, high purity Factor VIII concentrate |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3652530A (en) * | 1967-08-28 | 1972-03-28 | American Nat Red Cross | Antihemophilic factor prepared from blood plasma using polyethylene glycol |
| US3631018A (en) * | 1970-05-01 | 1971-12-28 | Baxter Laboratories Inc | Production of stable high-potency human ahf using polyethylene glycol and glycine to fractionate a cryoprecipitate of ahf concentrate |
| US3682881A (en) * | 1970-10-02 | 1972-08-08 | Baxter Laboratories Inc | Fractionation of plasma using glycine and polyethylene glycol |
| US3869436A (en) * | 1971-06-01 | 1975-03-04 | Statens Bakteriologiska Lab | Method for fractionating plasma proteins using peg and ion-exchangers |
| CA1101332A (fr) * | 1976-01-30 | 1981-05-19 | Edward Shanbrom | Procedes simplifies pour la preparation de concentres de facteur viii de tres grande purete |
| DE2624373C2 (de) | 1976-05-31 | 1983-02-03 | Arnold Dr. 8782 Karlstadt Seufert | Verfahren zur Herstellung von steril filtriertem Kryopräzipilat mit einer Anreicherung des Faktors VIII |
| CA1054052A (en) | 1976-08-14 | 1979-05-08 | Edward Shanbrom | Simplified method for preparation of high yield, high purity factor viii concentrate |
| FR2460305A2 (fr) * | 1979-06-29 | 1981-01-23 | Merieux Inst | Procede de preparation d'un concentre de facteur viii |
-
1980
- 1980-08-27 AT AT0433880A patent/AT369263B/de not_active IP Right Cessation
-
1981
- 1981-07-22 SE SE8104482A patent/SE459639B/sv not_active IP Right Cessation
- 1981-07-28 NL NL8103563A patent/NL8103563A/nl not_active Application Discontinuation
- 1981-07-29 DE DE3129987A patent/DE3129987C2/de not_active Expired
- 1981-07-29 US US06/287,912 patent/US4404131A/en not_active Expired - Fee Related
- 1981-08-11 HU HU812315A patent/HU183542B/hu not_active IP Right Cessation
- 1981-08-12 GB GB8124600A patent/GB2083047B/en not_active Expired
- 1981-08-13 DK DK360281A patent/DK156764C/da not_active IP Right Cessation
- 1981-08-18 BE BE0/205702A patent/BE890003A/fr not_active IP Right Cessation
- 1981-08-20 ES ES504859A patent/ES8302017A1/es not_active Expired
- 1981-08-20 FI FI812567A patent/FI72653C/fi not_active IP Right Cessation
- 1981-08-20 CA CA000384242A patent/CA1160567A/en not_active Expired
- 1981-08-24 FR FR8116169A patent/FR2489150A1/fr active Granted
- 1981-08-24 LU LU83577A patent/LU83577A1/de unknown
- 1981-08-24 AR AR286519A patent/AR228874A1/es active
- 1981-08-24 CH CH5443/81A patent/CH652030A5/de not_active IP Right Cessation
- 1981-08-26 NO NO812905A patent/NO157884C/no unknown
- 1981-08-26 JP JP56134808A patent/JPS5928537B2/ja not_active Expired
- 1981-08-27 IT IT23660/81A patent/IT1138511B/it active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4069216A (en) * | 1975-06-16 | 1978-01-17 | Edward Shanbrom, Inc. | Simplified methods for preparation of very high purity Factor VIII concentrate |
| US4188318A (en) * | 1975-06-16 | 1980-02-12 | Edward Shanbrom | Simplified method for preparation of high yield, high purity Factor VIII concentrate |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Bibl.haemat., Nr. 29, Part 4, Basel, New York 1968, S. 1109 * |
| Johnson, A.J. et al: Brit. J. Haemotology, 21, 1971, S. 21-41 * |
| Johnson: Proc. 11. Congr.Int.Soc. Blood Transf., Sidney 1966 * |
| Wickerhauser: Haemophilia, Hrsg. Deutsch, E. u. Pilgerstorfer, H.W., Stuttgart 1971, S. 165-173 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NL8103563A (nl) | 1982-03-16 |
| GB2083047A (en) | 1982-03-17 |
| IT8123660A0 (it) | 1981-08-27 |
| LU83577A1 (de) | 1981-12-01 |
| JPS5775928A (en) | 1982-05-12 |
| HU183542B (en) | 1984-05-28 |
| NO157884C (no) | 1988-06-15 |
| GB2083047B (en) | 1984-03-28 |
| DK156764C (da) | 1990-02-19 |
| DK360281A (da) | 1982-02-28 |
| NO157884B (no) | 1988-02-29 |
| FI72653C (fi) | 1987-07-10 |
| NO812905L (no) | 1982-03-01 |
| ATA433880A (de) | 1982-05-15 |
| FR2489150A1 (fr) | 1982-03-05 |
| ES504859A0 (es) | 1983-01-01 |
| CH652030A5 (de) | 1985-10-31 |
| JPS5928537B2 (ja) | 1984-07-13 |
| CA1160567A (en) | 1984-01-17 |
| FI72653B (fi) | 1987-03-31 |
| US4404131A (en) | 1983-09-13 |
| AT369263B (de) | 1982-12-27 |
| FI812567L (fi) | 1982-02-28 |
| IT1138511B (it) | 1986-09-17 |
| AR228874A1 (es) | 1983-04-29 |
| BE890003A (fr) | 1981-12-16 |
| SE8104482L (sv) | 1982-02-28 |
| FR2489150B1 (de) | 1984-06-29 |
| DK156764B (da) | 1989-10-02 |
| ES8302017A1 (es) | 1983-01-01 |
| DE3129987C2 (de) | 1984-11-29 |
| SE459639B (sv) | 1989-07-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE3129987A1 (de) | Verfahren zur herstellung eines faktor viii(ahf)-hochkonzentrates | |
| DE2751717C2 (de) | ||
| DE2854381A1 (de) | Verfahren zur gewinnung des antihaemophilen faktors viii aus blut, blutplasma oder blutplasma-fraktionen | |
| DE69333928T2 (de) | Verbesserte solubilisierung und stabilisierung des faktor viii-komplexes | |
| DE2029455C3 (de) | Verfahren zur Herstellung eines neuen Prothrombinkomplexes | |
| EP0511234B1 (de) | Stabile injizierbare lösungen von faktor viii | |
| EP0270025B1 (de) | Verfahren zur Herstellung eines intravenös anwendbaren und in flüssiger Form stabilen Immunglobulins | |
| EP0122909B1 (de) | Immunglobulin-G-hältige Fraktion | |
| DE69535593T2 (de) | Verwendung von hgf zur herstellung eines arzneimittels zur behandlung von lungenfibrose | |
| DE2734821B2 (de) | Blutgerinnungsfördernde Präparation und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
| DE2333883A1 (de) | Verfahren zur herstellung von gereinigtem albumin durch anwendung einer thermokoagulation und das erhaltene gereinigte albumin | |
| DE3043857A1 (de) | Verfahren zur herstellung von blutgerinnungsfaktoren und danach hergestellte praeparation der faktoren ii und vii | |
| EP0018353A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von nebenwirkungsfreien Plasmafraktionen | |
| EP0011231B1 (de) | Verfahren zur Herstellung des kälteunlöslichen Globulins und dieses enthaltende Arzneimittel | |
| WO1986005690A1 (en) | Fibronectine solution suitable for use with humans, and process for its manufacture | |
| DE3043409T1 (de) | Prothrombin complex concentrates,preparation and application thereof | |
| DE2715832A1 (de) | Verfahren zur gewinnung von gereinigtem antihaemophilem globulin a (faktor viii) | |
| EP0270516A2 (de) | Verfahren zur Herstellung einer Faktor VIII (AHF)-hältigen Fraktion | |
| EP0065256A2 (de) | Verfahren zur Herstellung von und danach hergestelltes Plasminogen | |
| DE3236126A1 (de) | Verfahren zur herstellung von zur intravenoesen verabreichung geeignetem (gamma)-globulin | |
| DE2500810A1 (de) | Reinigen von plasminogen | |
| DE1617805A1 (de) | Verfahren zur Herstellung von Lysozym | |
| DE2658334C3 (de) | Verfahren zum Herstellen von Immunglobulinpräparationen mit verminderter Komplementaktivität und ein diese enthaltendes Arzneimittel | |
| DE2703620C2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines Konzentrats des Antihämophiliefaktors | |
| EP0120835A2 (de) | Verfahren zur Inaktivierung von Unverträglichkeitsreaktionen verursachenden Substanzen |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8110 | Request for examination paragraph 44 | ||
| D2 | Grant after examination | ||
| 8364 | No opposition during term of opposition | ||
| 8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |