DK156764B - Fremgangsmaade til fremstilling af et faktor viii-(ahf)-hoejkoncentrat - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af et faktor viii-(ahf)-hoejkoncentrat Download PDFInfo
- Publication number
- DK156764B DK156764B DK360281A DK360281A DK156764B DK 156764 B DK156764 B DK 156764B DK 360281 A DK360281 A DK 360281A DK 360281 A DK360281 A DK 360281A DK 156764 B DK156764 B DK 156764B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- precipitate
- ahf
- polyethylene glycol
- subjected
- fraction
- Prior art date
Links
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 title claims description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 44
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 27
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 27
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims description 19
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims description 19
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 claims description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 14
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 14
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 14
- 239000004721 Polyphenylene oxide Substances 0.000 claims description 13
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 claims description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 13
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 12
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims description 9
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims description 9
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 8
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 claims description 6
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 claims description 5
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 claims description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 5
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 claims description 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 238000005562 fading Methods 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims 3
- 210000003918 fraction a Anatomy 0.000 claims 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 20
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 8
- 108010035369 Cohn fraction I Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 4
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 239000004023 fresh frozen plasma Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 1-O-galloyl-3,6-(R)-HHDP-beta-D-glucose Natural products OC1C(O2)COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC1C(O)C2OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JQBCLHCLJAHVPV-UHFFFAOYSA-N CCO.NCC(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O Chemical compound CCO.NCC(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O JQBCLHCLJAHVPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical group [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102100023804 Coagulation factor VII Human genes 0.000 description 1
- 241000252095 Congridae Species 0.000 description 1
- 239000001263 FEMA 3042 Substances 0.000 description 1
- 108010023321 Factor VII Proteins 0.000 description 1
- 108010080865 Factor XII Proteins 0.000 description 1
- 102000000429 Factor XII Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N Penta-digallate-beta-D-glucose Natural products OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229940012413 factor vii Drugs 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- XULSCZPZVQIMFM-IPZQJPLYSA-N odevixibat Chemical compound C12=CC(SC)=C(OCC(=O)N[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC)C(O)=O)C=3C=CC(O)=CC=3)C=C2S(=O)(=O)NC(CCCC)(CCCC)CN1C1=CC=CC=C1 XULSCZPZVQIMFM-IPZQJPLYSA-N 0.000 description 1
- -1 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012716 precipitator Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N tannic acid Chemical compound OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N 0.000 description 1
- 229940033123 tannic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000015523 tannic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920002258 tannic acid Polymers 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- SOBHUZYZLFQYFK-UHFFFAOYSA-K trisodium;hydroxy-[[phosphonatomethyl(phosphonomethyl)amino]methyl]phosphinate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].OP(O)(=O)CN(CP(O)([O-])=O)CP([O-])([O-])=O SOBHUZYZLFQYFK-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
- Y10S530/83—Plasma; serum
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
- Y10S530/83—Plasma; serum
- Y10S530/831—Cohn fractions
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
DK 156764B
ι
Opfindelsen angâr en fremgangsmâde til fremstilling af et faktor VIII(AHF)-h0jkoncentrat med en specifik aktivitet pâ mindst 2,5 enheder AHF og et fibrinogenindhold pâ mindre end 0,25 mg/mg protein ud fra menneske- eller dyreplasma ved 5 hjælp af flertrinsfraktionering af plasmaet, især ved hjælp af kryoudfældning og rensning ved hjælp af proteinfældningsmid-ler, sâsom polyethylenglykol
Der kendes allerede faktor VIII(AHF)-koncentrater, som 10 fremstilles ud fra menneske- eller dyreplasma og i sammen- ligning med naturligt plasma udviser en for0get aktivitet med hensyn til faktor VIII. Kendte fremgangsmâder til fremstilling af faktor VlII-koncentrater benytter sig af en behandling af plasmaet med éthanol, med ether, med polyethylen= 15 glycol og/eller med glycin som fraktioneringsforanstaltninger.
Ogsâ kryopræcipitationen af plasmaet if01ge Pool (1965, "The New England Journal of Medicine” 273, 1443) eller kryo= ethanolpræcipitationen af plasmaet if0lge Johnson (Congr.
Int. Soc. Blood Transf., Sydney, Australia, Abstracts of 20 Paper, side 1109 (1966)) kendes.
Der findes ogsâ andre metoder at fremstille faktor VlII-kon-centrater pâ, nemlig behandling af plasmaet med adsorptions-midler, sâsom "florigel", "bentonit", ionbyttere og permea-25 tionskromatografiske midler.
For sâ vidt angâr den kendte teknik med behandling af plasmaet med éthanol, blev denne behandling for f0rste gang beskrevet af Cohn (J. Amer. Chem. Soc. 68> 459 (1946)). Ved behandlingen 30 af plasmaet med éthanol opnâs den sâkaldte Cohn-fraktion I, som imidlertid kun har eh relativt ringe faktor VUI-aktivi-tet. Cohn-metoden blev forbedret af Blomback (Arkiv for Kemi, 12 387 (1958)), idet Cohn-fraktion I blev renset yderligere ved ekstraktion med en ethanol-glycin-citratpuf-35 fer. Derved dannedes den sâkaldte fraktion 1-0. Denne kan, sâledes som beskrevet af Simonetti et al. (Hémostase 1, 57 (1961)), renses yderligere ved hjælp af garvesyre. Ogsâ dis-
DK 156764B
2 se forbedrede koncentrater har kun en realativ ringe faktor VlII-aktivitet. Disse koncentrater har ogsâ den ulempe, at de har h0je fremmedproteinindhold„ det vil sige faktor
VlII-uvirksomme proteinindhold. Sâledes bestâr mere end 5 60% af proteinet af fibrinogen i Cohn-fraktion I, og i
Blombâch-fraktion I-Q er endog indeholdt mere end 80% fi= brinogen.
Med hensyn til den kendte fraktionering ved hjælp af kryoud-10 fældning blev denne foretaget sâledes, at udgangsp1asma fra mennesker eller dyr blev dybfrosset og atter optoet. Kryobund-faldet blev oplost i en pufferoplesning og eventuelt yderlige-re renset med proteinfældningsmidler, sâsom polyethylenglycol og glycin. Ved hjælp af kryoudfældningen er det ikke lykkedes 15 at foroge faktor VUI-aktiviteten væsentligt. Faktor VUI-ak- tiviteten bliver ved hjælp af kryoudfældning kun foroget til ca. ti gange i sammenligning med udgangsplasmaet, men ogsâ de i kombination med kryoudfældningen benyttede yderligere foran-staltninger har hidtil ikke kunnet foroge aktiviteten af de 20 opnàede produkter pâ den mâde, som det ville være onskeligt.
Flertrinsfraktioneringsmetoder i forbindelse med et ferste kryoudfældningstrin er beskrevet i USA patentskrifterne nr. 3.652.530, 3.631.018 og 3.682.881 samt i estrisk patentskrift 25 nr. 349.639.
Sâdanne produkter betegnes som "hojrenset AHF" eller som "High Purity AHF". Deres faktor VIII-aktivitet andrager imidlertid ogsâ kun 90 til 100 gange aktiviteten i forhold til naturligt 30 plasma, medens det faktor VlII-uvirksomme proteinindhold (fi brinogen) stadig udg0r 35% af det totale proteinindhold.
Den foreliggende opfindelse tager sigte pâ at undgâ de om-talte ulemper og vanskeligheder og at tilvejebringe et fak-35 tor VIII-h0jkoncentrat, hvori de indifferente ikke-faktor- 3
DK 156764 B
VlII-virksamme proteiner i videst mulige omfang er fjernet, indholdet af fibrinogen er sa lavt som muligt, og faktor VlII-aktiviteten, regnet i forhold til det i koncentratet tilstedeværende protein, er h0jere end ide kendte terapeu-5 tisk benyttede præparater. Især er det et formai med op- findelsen at angive en fremgangsmâde til fremstilling af et faktor VIII(AHF)-h0jkoncentrat med en specifik aktivitet pâ mindst 2,5 enheder AHF og et fibrinogenindhold pâ mindre end 0,25 mg/mg protein, hvilken fremgangsmâde er industrielt 10 anvendelig eller anvendelig i teknisk mâlestok og sikrer en rationel produktion med god 0konomi.
Denne opgave lases ved hjælp af en flertrinsfraktioneringsme-tode af den i indledningen beskrevne art, og som er ejendomme-1 i g ved, at en ved hjælp af disse fraktioneringsforanstaltn- 15 inger renset og med faktor VIII(AHF) beriget fraktion underka- stes en alkoholudfældning og en ledsagende dybfrysning af hele suspensionen, hvorefter det efter optoning opnâede bundfald oparbejdes til en holdbar form.
If01ge en foretrukken udf0relsesform for opfindelsen bliver 20 den rensede og med faktor VIII(AHF) berigede fraktion ved en pH-værdi fra 5,9 til 6,3 og en temperatur fra 0 til -3°C tilsat en mono- eller polyvalent alkohol, sâsom methylalkohol, ethylalkohol, polyethylenglycol eller ikke-ionisk polyether-glycol ("PLURONIC" ®), hvorpâ blandingen dybfryses og derefter 25 optes ved en temperatur fra 0 til 4°C, hvorefter bundfaldet indeholdende AHF-h0jkoncentratet oploses og ved hjælp af dybfrysning op lyofi1isering bringes pâ holdbar form.
En foretrukken udf0relsesfomi for opfindelsen omfatter kom-binationen af f0lgende foranstaltninger: 30 ~ Menneske- eller dyreplasma underkastes en f0rste kryo= udfældning;
DK 156764B
4 - kryobundfaldet oploses i en vandig pufferoplosning, indstil-les pâ en pH-værdi fra 6,15 til 6,25, og oplosningen underka-stes en forste rensningsfældning med polyethylenglycol; 5 - den efter bortkastning af bundfaldet opnâede ovenover stâende del underkastes mindst en yderligere rensningsfæld-ning med polyethylenglycol, - og den efter bortkastning af bundfaldene til slut opnâede 10 rensede og med faktor VIII(AHF) berigede fraktion underkastes kryoalkoholfældningen, idet denne fraktion tilsættes en mono-eller polyvalent alkohol, sâsom methylalkohol, ethylalkohol, polyethylenglycol eller polyetherglycol ("PLURONIC" .
Blandingen dybfryses og opt0s derefter ved en temperatur 15 fra 0 til 4°Cf hvorefter bundfaldet indeholdende AHF-h0j- koncen'tratet opl0ses og ved hjælp af dybfrysning og lyofili-sering bringes pâ holdbar form.
Den f0rste polyethylenglycolfældning bliver herved fordel-20 agtigt gennemf0rt med 3% vægt/volumen polyethylenglycol, og den anden eller de yderligere polyethylenglycolfældninger gennemf0res fordelagtigt med 8% vægt/volumen polyethylengly= col.
25 Til udfældm'ngen af faktor VlII-koncentratet anvendes hen- sigtsmæssigt en ca. 10% vægt/volumen oplosning af en ikke-io-nisk polyetherglycol ("PLURONIC" ©-oplosning).
I stedet for polyethylenglycol kan der som proteinfældnings-30 middel ogsà anvendes ikke-ionisk polyetherglycol ("PLURONIC" ®), i hvilket tilfælde kombinationen bestâr af folgende træk: - Menneske- eller dyreplasma underkastes en forste kryoudfæld-ning; 35 - kryobundfaldet oploses i en vandig pufferoplosning indstil-les pâ en pH-værdi pâ 6,25, og oplosningen underkastes en for-ste rensningsfældning med ikke-ionisk polyetherglycol ("PLURONIC" ®); 5
DK 156764 B
- den efter bortkastning af bundfaldet opnàede ovenover stâen-de væske underkastes mindst ên yderligere rensningsfældning med ikke-ionisk polyetherglycol ("PLURONIC" ®), og - den efter bortkastning af bundfaldene til slut opnâede ren-5 sede og med faktor VIII(AHF) berigede fraktion underkastes en kryoudfældnng med alkohol, idet denne fraktion tilsættes en mono- eller polyvalent alkohol, sâsom methy1 a 1koho1, ethylal-kohol, polyethylenglycol eller ikke-ionisk polyetherglycol ("PLURONIC" ®). Blandingen dybfryses og optes derefter ved en 10 temperatur fra 0 til 4°C, hvorpâ bundfaldet indeholdende AHF-hejkoncentratet opleses og ved hjælp af dybfrysning af lyofi-lisering bringes pâ holdbar form.
Fremgangsmâden if0lge opfindelsen belyses nærmere i de f0lg-ende eksempler; EKSEMPEL 1 15 - 460 1 frisk frosset plasma opt0s ved O til +4°C. Det dan-nede kryopræcipitat fraskilles ved hjælp af centrifugering og opl0ses i 9,6 1 trinatriumcitrat ved 37°C.
Opl0sningens pH-værdi indstilles pâ 6,2, og 3% vægt/volumen 20 polyethylenglycol 2000 tilsættes. Derved dannes et bundfald, der fraskilles ved hjælp af centrifugering og bortkastes.
Ionstyrken af den ovenover stâende rest, soin indeholder faktor VIII(AHF), for0ges ved tilsætning af trinatriumcitrat.
De resterende u0nskede proteiner udfældes ved for0gelse af 25 koncentrationen af polyethylenglycol 2000 til 8% vægt/volumen og bortkastes efter centrifugering.
Faktor VlXI-koncentrat udfældes ved tilsætning af 8% vægt/ volumen éthanol ved -2°C og en pH-vaerdi pâ 6,1. Suspensionen fryses, og efter opt0ning ved +4°C opl0ses det faktor VIII-
DK 156764B
6 holdige kryoalkoholbundfald i en fysiologisk puffer, steril-filtreres, aftappes og fryset0rres, EKSEMPEL 2 9.600 ml frisk frosset plasma opt0s ved O til +4°C. Det 5 centrifugerede kryopræcipitat opl0ses i 240 ml trinatrium= citrat ved 37°C.
Opl0sningen pH-værdi indstilles pâ 6,2, og 3% vægt/volumen polyethylenglycol 2000 tilsættes. Det dannede bundfald fra-skilles og bortkastes.
10 Ved tilsætning af trinatriumcitrat for0ges ionstyrken, og ved tilsætning af yderligere polyethylenglycol 2000 indtil 8% vægt/volumen udfældes u0nskede proteiner. Disse fraskil-les og bortkastes.
Ved pH 6,0 og en temperatur fra -2 til -3°C udfældes faktor 15 VlII-koncentratet ved hjælp af 10% vægt/volumen methanol.
Suspehsionen fryses, og efter opt0ning opl0ses kryoalkohol= bundfaldet i en isotonisk pufferv hvorefter der sterilfil-treres, aftappes og fryset0rres.
' EKSEMPEL· 3 20 Den i eksempel 2 angivne arbejdsmâde gentages, men i stedet for 10% vægt/volumen methanol anvendes 12% polyethylenglycol til udfældning af faktor VlII-koncentratet.
• EKSEMPEL 4
Den i eksempel 2 angivne arbejdsmâde gentages, men i stedet 25 for 10% vægt/volumen methanol anvendes 10% vægt/volumen "PLU= RONIC"(R) til udfældning af faktor VlII-koncentratet.
7
DK 156764 B
EKSEMPEL -5 10 , 4 1 frisk frosset' plasma opt0s ved O til +4°C. Kryo= bundfaldet opl0ses 1 250 ml trinatriumcitratpuffer.
Opl0sningeris PH-værdi indstilles pâ 6,3, og 2,5% vægt/volumen 5 "PLURONIC"(r)tilsættes. Bundfaldet bortkastes. Efter for0gelse af ionstyrken for0ges "PLURQNIC"(R)-kpnceritrationen til 7,5% vægt/volumen, og bundfaldet bortkastes atter.
Den ovenover stâende rest bliver yed en pH-værdi pâ 6,0 og en temperatur pâ -2°C behandlet med 8% vægt/volumen éthanol, 10 hvorved faktor VllI-koncentrat udfældea. Suspensionen fryses, og efter opt0ning ved +4°C fraskilles kryoalkoholbundfaldet.
Den ved hjælp af fremgangsmâden ifelge opfindelsen væsentligt forogede specifikke aktivitet af de opnâede hejkoncentrater eller berigelsen med AHF til mere end 200 gange i forhold til 15 udgangsplasmaet fremgâr af tabel I i sammenligning med kendte i handelen gâende AHF-koncentrater.
Tabel 1
Specificitet, -Renhed i sammenligning _Int, enheder/mg med plasma_
Plasma 0,017 1 20 Kryobundfald 0,145 9 gange
High Purity AHF 1,667 98 gange
Hejkoncentrat, frem- > 3,500 206 gange stillet ifolge opfindelsen 25
Med "specificitet” menes antallet af faktor VlII-enheder pr. mg protein, medens der ved "aktivitet" forstâs virkningen pr. volumenenhed, d.v.s. antallet af enheder pr. ml.
Det ringere indhold af fibrinogen i de ved fremgangsmâden
Claims (6)
1. Fremgangsmâde ti1 fremstilling af et faktor VIII(AHF)-h0j-koncentrat med en specifik aktivitet pà mindst 2,5 enheder AHF og et fibrinogenindhold pâ mindre end 0,25 mg/mg protein ud fra menneske- eller dyreplasma ved hjælp af flertrinsfraktio- 1. nering af plasmaet, især ved hjælp af kryoudfældning og rens-ning ved hjælp af proteinfældningsmidler, sâsom polyethylen-glycol, kendetegnet ved, at en ved hjælp af disse fraktioneringsforanstaltninger renset og med faktor VIII(AHF) beriget fraktion underkastes en alkoholudfældning og en ledsa-20 gende dybfrysning af hele suspensionen, hvorefter det efter optoning opnâede bundfald oparbejdes til en holdbar form.
2. Fremgangsmâde ifolge krav 1, kendetegnet ved, at den rensede og med faktor VIII(AHF) berigede fraktion ved 25 en pH-værdi fra 5,9 til 6,3 og en temperatur fra 0 til -3°C tilsættes en mono- eller polyvalent alkohol, sâsom methylalko-hol, ethylalkohol, polyethylenglycol eller ikke-ionisk poly-etherglycol, og at blandingen dybfryses og derefter optes ved en temperatur fra 0 til 4°C, hvorefter bundfaldet indeholdende 30 AHF-hejkoncentratet opleses og ved hjælp af dybfrysning og lyofi1isering bringes pâ holdbar form.
3. Fremgangsmâde ifolge krav 1 eller 2, k,e ndetegnet ved kombinationen af felgende foranstaltninger: 35 DK 156764 B - menneske- eller dyreplasma underkastes en ferste kryoudfæld-ning; - kryobundfaldet oploses i en vandig pufferoplosning, indstil-5 les pà en pH-værdi fra 6,15 til 6,25, og oplesningen underka- stes en forste rensningsfældning med polyethylenglycol; - den efter bortkastning af bundfaldet opnâede ovenover stâen-de væske, som opnâs efter fjernelse af bundfaldet, underkastes 10 mindst én yderligere rensningsfældning med polyethylenglycol; og - den efter bortkastning af bundfaldet til slut opnâede rense-de og med faktor VIII(AHF) berigede fraktion underkastes en 15 kryoalkoholudfældning, idet denne fraktion tilsættes en mono-eller polyvalent alkohol, sàsom methylal kohol, ethylalkohol, polyethylenglycol eller ikke-ionisk polyetherglycol, hvorpà blandingen dybfryses og derefter optos ved en temperatur fra 0 til 40C, hvorefter bundfaldet indeholdende AHF-hojkoncentratet 20 oploses og ved hjælp af dybfrysning og lyofi1isering bringes pâ holdbar form.
4. Frexngangsmâde if0lge krav 3,kendetegnet ved, at den f0rste pQlyethylenglycolfældning gennemf0res med 3% 25 vægt/volumen polyethylenglycol, og at den anden eller de yderligere polyethylenglycolfældninger gennemf0res med 8% vægt/volumen polyethylenglycol.
5. Fremgangsmâde ifelge krav 4, kendetegnet ved, 30 at der til udfældning af faktor VlII-koncentratet anvendes en 10% vægt/volumen opl0sning af ikke-ionisk polyetherglycol.
5 Purity AHF > 35% fibrinogen H0jkoncentrât, fremstillet if0lge opfindelsen 10% fibrinogen Patentkrav. 10 -
6. Fremgangsmâde ifolge krav 1, kendetegnet ved, at kombinationen af fælgende foranstaltninger: 35 - menneske- eller dyreplasma underkastes en forste kryoudfæld-ni ng ; DK 156764 B - kryobundfaldet opleses i en vandig pufferoplesning, indstil-les pâ en pH-værdi pâ 6,25, og oplesningen underkastes en fer-ste rensningsfældning med ikke-ionisk polyetherglycol ; 5. den efter bortkastning af bundfaldet opnâede ovenover stâen- de væske, som opnâs efter fjernelse af bundfaldet, underkastes mindst ên yderligere rensningsfældning med ikke-ionisk polyetherglycol ; og 10. den efter bortkastning af bundfaldet til slut opnâede rense- de og med faktor VIII(AHF) berigede fraktion underkastes en kryoalkoholudfældning, idet denne fraktion tilsættes en mono-eller polyvalent alkohol, sâsom methylal kohol, ethylalkohol, polyethylenglycol eller ikke-ionisk polyetherglycol, hvorpâ 15 blandingen dybfryses og derefter optes ved en temperatur fra 0 til 4eC, hvorpâ bundfaldet indeholdende AHF-hejkoncentratet opleses og ved hjælp af dybfrysning og lyofi1isering bringes pâ holdbar form. 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT433880 | 1980-08-27 | ||
| AT0433880A AT369263B (de) | 1980-08-27 | 1980-08-27 | Verfahren zur herstellung eines faktor viii(ahf) -hochkonzentrates |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK360281A DK360281A (da) | 1982-02-28 |
| DK156764B true DK156764B (da) | 1989-10-02 |
| DK156764C DK156764C (da) | 1990-02-19 |
Family
ID=3562706
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK360281A DK156764C (da) | 1980-08-27 | 1981-08-13 | Fremgangsmaade til fremstilling af et faktor viii-(ahf)-hoejkoncentrat |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4404131A (da) |
| JP (1) | JPS5928537B2 (da) |
| AR (1) | AR228874A1 (da) |
| AT (1) | AT369263B (da) |
| BE (1) | BE890003A (da) |
| CA (1) | CA1160567A (da) |
| CH (1) | CH652030A5 (da) |
| DE (1) | DE3129987C2 (da) |
| DK (1) | DK156764C (da) |
| ES (1) | ES8302017A1 (da) |
| FI (1) | FI72653C (da) |
| FR (1) | FR2489150A1 (da) |
| GB (1) | GB2083047B (da) |
| HU (1) | HU183542B (da) |
| IT (1) | IT1138511B (da) |
| LU (1) | LU83577A1 (da) |
| NL (1) | NL8103563A (da) |
| NO (1) | NO157884C (da) |
| SE (1) | SE459639B (da) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU555305B2 (en) * | 1982-09-29 | 1986-09-18 | Bayer Corporation | Antihemophilic factor concentrate |
| DE3481109D1 (de) * | 1983-05-09 | 1990-03-01 | Novo Nordisk As | Antihaemophilie-faktor-viii-konzentrat und dessen herstellungsverfahren. |
| AT379510B (de) * | 1983-05-20 | 1986-01-27 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer faktor viii (ahf) -haeltigen praeparation |
| US4965199A (en) * | 1984-04-20 | 1990-10-23 | Genentech, Inc. | Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection |
| US4710381A (en) * | 1984-05-22 | 1987-12-01 | The Blood Center Of Southeastern Wisconsin | Method for maintaining intact, non-degraded factor VIII/von-Willebrand factor during blood processing |
| US5149787A (en) * | 1984-05-22 | 1992-09-22 | The Blood Center Research Foundation | Method for maintaining intact, non-degraded factor VIII/von-Willebrand factor during blood processing |
| US4543210A (en) * | 1984-10-04 | 1985-09-24 | Miles Laboratories, Inc. | Process for producing a high purity antihemophilic factor concentrate |
| US4743680A (en) * | 1985-02-01 | 1988-05-10 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
| US4847362A (en) * | 1985-02-01 | 1989-07-11 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
| US4952675A (en) * | 1985-02-01 | 1990-08-28 | New York University | Method for purifying antihemophilic factor |
| CA1293941C (en) * | 1985-11-08 | 1992-01-07 | Maria Erlinda Co-Sarno | Method for preparing antihemophilic factor (ahf) by cold precipitation and for improving solubility of recovered ahf product |
| AU7254894A (en) * | 1993-07-23 | 1995-02-20 | Baxter International Inc. | Activated human factor viii and method of preparation |
| US5576291A (en) * | 1993-09-13 | 1996-11-19 | Baxter International Inc. | Activated factor VIII as a therapeutic agent and method of treating factor VIII deficiency |
| US5659017A (en) * | 1995-11-07 | 1997-08-19 | Alpha Therapeutic Corporation | Anion exchange process for the purification of Factor VIII |
| DE60035260T2 (de) | 1999-02-22 | 2007-10-18 | The University Of Connecticut, Farmington | Neue albuminfreie faktor viii formulierungen |
| US6893639B2 (en) * | 2001-10-19 | 2005-05-17 | Hemacare Corporation | Method for high yield purification of immune globulins from blood plasma and blood plasma intermediates |
| NZ593190A (en) | 2008-11-07 | 2013-01-25 | Baxter Int | Factor viii formulations |
| EP4240757A2 (en) | 2020-11-09 | 2023-09-13 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Purification of fviii from plasma using silicon oxide adsorption |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3652530A (en) * | 1967-08-28 | 1972-03-28 | American Nat Red Cross | Antihemophilic factor prepared from blood plasma using polyethylene glycol |
| US3631018A (en) * | 1970-05-01 | 1971-12-28 | Baxter Laboratories Inc | Production of stable high-potency human ahf using polyethylene glycol and glycine to fractionate a cryoprecipitate of ahf concentrate |
| US3682881A (en) * | 1970-10-02 | 1972-08-08 | Baxter Laboratories Inc | Fractionation of plasma using glycine and polyethylene glycol |
| US3869436A (en) * | 1971-06-01 | 1975-03-04 | Statens Bakteriologiska Lab | Method for fractionating plasma proteins using peg and ion-exchangers |
| US4188318A (en) * | 1975-06-16 | 1980-02-12 | Edward Shanbrom | Simplified method for preparation of high yield, high purity Factor VIII concentrate |
| US4069216A (en) * | 1975-06-16 | 1978-01-17 | Edward Shanbrom, Inc. | Simplified methods for preparation of very high purity Factor VIII concentrate |
| CA1101332A (fr) * | 1976-01-30 | 1981-05-19 | Edward Shanbrom | Procedes simplifies pour la preparation de concentres de facteur viii de tres grande purete |
| DE2624373C2 (de) | 1976-05-31 | 1983-02-03 | Arnold Dr. 8782 Karlstadt Seufert | Verfahren zur Herstellung von steril filtriertem Kryopräzipilat mit einer Anreicherung des Faktors VIII |
| CA1054052A (en) | 1976-08-14 | 1979-05-08 | Edward Shanbrom | Simplified method for preparation of high yield, high purity factor viii concentrate |
| FR2460305A2 (fr) * | 1979-06-29 | 1981-01-23 | Merieux Inst | Procede de preparation d'un concentre de facteur viii |
-
1980
- 1980-08-27 AT AT0433880A patent/AT369263B/de not_active IP Right Cessation
-
1981
- 1981-07-22 SE SE8104482A patent/SE459639B/sv not_active IP Right Cessation
- 1981-07-28 NL NL8103563A patent/NL8103563A/nl not_active Application Discontinuation
- 1981-07-29 DE DE3129987A patent/DE3129987C2/de not_active Expired
- 1981-07-29 US US06/287,912 patent/US4404131A/en not_active Expired - Fee Related
- 1981-08-11 HU HU812315A patent/HU183542B/hu not_active IP Right Cessation
- 1981-08-12 GB GB8124600A patent/GB2083047B/en not_active Expired
- 1981-08-13 DK DK360281A patent/DK156764C/da not_active IP Right Cessation
- 1981-08-18 BE BE0/205702A patent/BE890003A/fr not_active IP Right Cessation
- 1981-08-20 ES ES504859A patent/ES8302017A1/es not_active Expired
- 1981-08-20 FI FI812567A patent/FI72653C/fi not_active IP Right Cessation
- 1981-08-20 CA CA000384242A patent/CA1160567A/en not_active Expired
- 1981-08-24 AR AR286519A patent/AR228874A1/es active
- 1981-08-24 FR FR8116169A patent/FR2489150A1/fr active Granted
- 1981-08-24 CH CH5443/81A patent/CH652030A5/de not_active IP Right Cessation
- 1981-08-24 LU LU83577A patent/LU83577A1/de unknown
- 1981-08-26 JP JP56134808A patent/JPS5928537B2/ja not_active Expired
- 1981-08-26 NO NO812905A patent/NO157884C/no unknown
- 1981-08-27 IT IT23660/81A patent/IT1138511B/it active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SE8104482L (sv) | 1982-02-28 |
| AT369263B (de) | 1982-12-27 |
| DK156764C (da) | 1990-02-19 |
| DK360281A (da) | 1982-02-28 |
| JPS5775928A (en) | 1982-05-12 |
| BE890003A (fr) | 1981-12-16 |
| CH652030A5 (de) | 1985-10-31 |
| DE3129987A1 (de) | 1982-04-22 |
| GB2083047B (en) | 1984-03-28 |
| IT1138511B (it) | 1986-09-17 |
| NO812905L (no) | 1982-03-01 |
| NO157884B (no) | 1988-02-29 |
| AR228874A1 (es) | 1983-04-29 |
| HU183542B (en) | 1984-05-28 |
| CA1160567A (en) | 1984-01-17 |
| LU83577A1 (de) | 1981-12-01 |
| ES504859A0 (es) | 1983-01-01 |
| NL8103563A (nl) | 1982-03-16 |
| SE459639B (sv) | 1989-07-24 |
| NO157884C (no) | 1988-06-15 |
| FR2489150B1 (da) | 1984-06-29 |
| FI72653B (fi) | 1987-03-31 |
| FR2489150A1 (fr) | 1982-03-05 |
| ATA433880A (de) | 1982-05-15 |
| US4404131A (en) | 1983-09-13 |
| IT8123660A0 (it) | 1981-08-27 |
| FI72653C (fi) | 1987-07-10 |
| ES8302017A1 (es) | 1983-01-01 |
| GB2083047A (en) | 1982-03-17 |
| FI812567L (fi) | 1982-02-28 |
| JPS5928537B2 (ja) | 1984-07-13 |
| DE3129987C2 (de) | 1984-11-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK156764B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et faktor viii-(ahf)-hoejkoncentrat | |
| Neame et al. | The transamination of glutamic and aspartic acids during absorption by the small intestine of the dog in vivo | |
| US4203891A (en) | Method of collecting anti-hemophilic factor VIII from blood and blood plasma using heparin or sodium heparin | |
| CA1126652A (en) | Antithrombin preparation and process for the production thereof | |
| US7879332B2 (en) | Ultra-high yield intravenous immune globulin preparation | |
| Mendel et al. | Studies on cholinesterase: 2. A method for the purification of a pseudo-cholinesterase from dog pancreas | |
| JPS62502116A (ja) | 沈殿による血液凝固８因子の精製 | |
| Stolte et al. | Glomerular albumin filtration: a comparison of micropuncture studies in the isolated perfused rat kidney with in vivo experimental conditions | |
| JPH0676337B2 (ja) | 高純度抗血友病性因子濃縮物の製造法 | |
| DK167900B1 (da) | Middel til behandling og forebyggelse af haemostatiske forstyrrelser indeholdende vaevsprotein pp4 | |
| JPH0348888B2 (da) | ||
| JPS58225023A (ja) | α―１―プロテイナーゼ阻害剤の製法 | |
| DK158281B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et faktor viii (ahf)-holdigt praeparat | |
| EP0011739B1 (en) | Process for obtaining blood coagulation factor xiii derived from human placenta | |
| US4104125A (en) | Process for producing human lysozyme | |
| Astrup et al. | A protease inhibitor in ox lung tissue | |
| JPS61189228A (ja) | 血液凝固第８因子製剤の製法 | |
| RU2388819C2 (ru) | Способ получения пероксидазы хрена | |
| KR100696897B1 (ko) | 바이러스의 불활성화 방법 | |
| US4197238A (en) | Method of preparation of human albumin using polyethylene glycol | |
| CN108822205A (zh) | 一种羊血清白蛋白的提取方法 | |
| WO1988008004A1 (en) | Extraction of factor viii | |
| DK175644B1 (da) | Fremgangsmåde til stabilisering af biologiske og farmaceutiske midler under inaktivering af virale og bakterielle kontaminanter | |
| PL93587B1 (da) | ||
| RU2261112C1 (ru) | Способ получения иммуноглобулинового препарата |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |