DE2836631A1

DE2836631A1 - Vaginalpraeparat

Info

Publication number: DE2836631A1
Application number: DE19782836631
Authority: DE
Inventors: Hiroaki Okada; Hyogo Takarazuka; Iwao Yamazaki; Takatsuka Yashiki
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1977-08-24
Filing date: 1978-08-22
Publication date: 1979-03-08
Also published as: IT1098199B; AU517349B2; GB2003386A; AU3918378A; FR2400904B1; IT7826956A0; CH634992A5; US4211769A; GB2003386B; FR2400904A1; CA1112570A

Description

VON KREISLER SCHÖNWAI.D MFYER FiSHOLD FUES VONKREISLER ^ KELLER SELTING

PATENTANWÄLTE Dr.-Ing. von Kreisler + 1973

Dr.-Ing. K. Schönwald, Köln Dr.-Ing. Th. Meyer, Köln Dr.-Ing. K. W. Eishold, Bad Soden Dr. J. F. Fues, Köln Dipl.-Chem. Alek von Kreisler, Köln Dipl.-Chem. Carola Keller, Köln Dipl.-Ing. G. Selting, Köln

5 KÖLN 1

DEICHMANNHAUS AM HAUPTBAHNHOF

21. August 1978 AvK/Ax

Takeda Chemical Industries, Ltd. 27, Doshomachi 2-chome, Higashi-ku Osaka, Japan

Vaginalpräparat

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Telefon: (0221) 23 45 41-4 · Telex: 88S2307 dopa d - Telegramm: Dompotenl Köln

Vaginalsuppositorien, die ein Peptid mit der Wirkung von luteinisierendem Hormon-releasing Hormon (nachstehend als "LH-RH" bezeichnet) haben, werden beispielsweise in der GB-PS 1 393 628 (entsprechend der US-PS 3 917 825) beschrieben. Dieses bekannte Suppositorium enthält eine Zubereitung, die durch Dispergieren eines Peptids mit LH-RH-Wirkung in einem Gemisch einer öligen Grundlage und eines nichtionogenen Tensids erhalten wird. Es wurde gefunden, daß die Einarbeitung einer bestimmten Art einer wasserlöslichen Carbonsäure in eine solche Zubereitung eine überraschend gesteigerte Resorption des Wirkstoffs durch den lebenden Körper zur Folge hat. Dieser Feststellung folgen weitere ünterscuhungen, die in der vorliegenden Erfindung gipfelten.

15 Gegenstand der Erfindung sind demgemäss

1) ein Vaginalpräparat, das ein Peptid mit LH-RH-Wirkung und eine wasserlösliche aliphatische Carbonsäure mit 2 bis 6 C-Atomen enthält;

2) das Vaginalpräparat gemäss 1) mit einer öligen Grundlage und

3) das Vaginalpräparat gemäss 1) als wässrige Zubereitung sowie

4) das Vaginalpräparat gemäss 1) worin das Peptid mit LH-RH-Wirkung die Formel

12 3 4 5 6 7 8 9 . (Pyr) GIu-E₁-Trp-Ser-E^B,-E₄-Arg-Pro-E^ (I)

hat.

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worin R₁ für His, Tyr, Trp oder p-NH₂-Phe, R₂ für Tyr oder Phe, R " für GIy oder einen D-Aminosäurerest, R. für Leu, He oder Nie.und R₁- für GIy-NH-R, (worin R_fi für H oder einen niederen Alkylrest mit 1 bis 3 C-Ätomen steht, der gegebenenfalls eine Hydroxylgruppe enthält) oder NH-R, (worin R_ß die vorstehend genannte Bedeutung hat) steht.

Die in der Zubereitung gemäss der Erfindung enthaltene wasserlösliche aliphatische Carbonsäure mit 2 - 6, vorzugsweise 3-6 C-Atomen kann eine Monocarbonsäure, Dicarbonsäure, Tricarbonsäure usw. sein. Als Monocarbonsäuren kommen beispielsweise niedere Fettsäuren und Monocarbonsäuren mit 1-5 Hydroxylgruppen infrage. Als Di- oder Tricarbonsäuren eignen sich beispielsweise Alkandi- oder —tricarbonsäuren (mit 2 oder 3 Carboxylgruppen, die an beliebige Stellungen einer Alkankette gebunden sind). Diese Alkanketten können in beliebigen Stellungen mit Hydroxylgruppen und/oder Aminogruppen substituiert sein, wobei die Zahl dieser Hydroxylgruppen 1 bis 3 und die Zahl der Aminogruppen normalerweise 1 beträgt.

Als Beispiele dieser Carbonsäuren sind Essigsäure, Propionsäure, n-Buttersäure, n-Pentansäure, Ascorbinsäure, Milchsäure, Gluconsäure, Glucuronsäure, Malonsäure, Bernsteinsäure, Zitronensäure, Weinsäure, Apfelsäure, Glutarsäure, Adipinsäure, Asparaginsäure und Glutaminsäure zu nennen. Bei mehrbasischen Säuren gibt es Fälle, in denen wenigstens eine _cihrer Carboxylgruppen frei ist, während die andere bzw* die anderen Carboxylgruppen in Form eines .Esters oder Salzes vorliegen. Von den wasserlöslichen aliphatischen Carbonsäuren sind Bernsteinsäure, Weinsäure, Citronensäure usw. besonders vorteilhaft für praktische Zwecke.

Die Zubereitung gemäß der Erfindung kann in beliebiger Form, die in die Vagina eingeführt werden kann, her—

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gestellt werden. Beispielsweise kann sie in beliebiqen Arzneiformen beispielsweise als Suppositorien, Salben, Tabletten, wässrige Lösungen (einschließlich solcher, die auf eine feste Matrix aufgebracht sind), wässrige Gele und Emulsionen verwendet werden.

Die geeignete Menge der wasserlöslichen aliphatischen Carbonsäure liegt in vielen Fällen mit Ausnahme der wässrigen Lösungen im Bereich von etwa 0,5 bis 50 Gew.-%, vorzuasweise im Bereich von etwa 2 bis 20 Gew.-%.

Die Menge der wasserlöslichen aliphatischen Carbonsäure in den Lösungen kann im Bereich von etwa 0,5 bis 20 Gew.-% liegen und beträgt in Abhängigkeit vom vorgesehenen Verwendungszweck etwa 1 bis 10 Gew.-%, bezogen auf das Gewicht der wässrigen Lösung im Vaginalpräparat gemäß der Erfindung (z.B. einer wässrigen Lösung der wasserlöslichen aliphatischen Carbonsäure, eines Peptids mit LH-RH-Wirkung, eines pH-Reglers, eines wässrigen Gels als Grundlage, eines Gelstabili-

20 sators, Konservierungsmittels usw.).

Das in den Zubereitungen gemäß der Erfindung enthaltene Peptid kann ein beliebiges Peptid mit LH-RH-Wirkung sein. Geeignet sind beispielsweise Peptide der Formel

12 3 4-5 '6 7 8 9

Ec (D

Hierin steht R₁ für Hys, Tyr, Trp oder p-NH₂~Phe, R₂ für Tyr oder Phe, R_ für GIy oder einen D-Aminosäurerest, R₄ für Leu, He oder Nie und. R₅ für GIy-NH-R, (worin R_g für H oder einen niederen Alkylrest mit 1 bis 3 C-Atomen steht, der ggfls. eine Hydroxylgruppe enthält) oder NH-R_g (worin R₆ die oben genannte Bedeutung hat) .

Als Beispiele von D-Aminosäureresten R₃ sind die Reste von o(-D-Aminosäuren mit bis zu 9 C-Atomen (z.B."

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D-Leu, D-IIe, D-NIe, D-VaI, D-Nval, D-Abu, D-Phe, D-Phg, D-Ser, D-Thr, D-Met, D-AIa und D-oi-Aibu, D-Trp, D-Tyf etc), die geeignete Schutzgruppen (z.B. t-Butyl, t-Butoxy und t-Butoxycarbonyl) enthalten, zu nennen. Natürlich können auch Salze des Peptide (I) mit Säuren sowie Metallkomplexverbindungen des Peptids (I) ebenso wie das Peptid (I) verwendet werden. Alle hier gebrauchten Abkürzungen zur Bezeichnung der Aminosäuren, Peptide, Schutzgruppen usw. entsprechen den Vorschriften der IUPAC-IUB-Kommission für biologische Nomenklatur oder den üblicherweise auf dem jeweiligen Gebiet verwendeten Abkürzungen. Wenn die hier genannten Aminosäuren der optischen Isomerie unterliegen, ist bei allen diesen hier ge-, nannten Aminosäuren die L-Form gemeint, falls nicht anders angegeben.

Beispielsweise werden die folgenden Abkürzungen verwendet:

Abu: a-Aminobuttersäure a-Aibu: a-Aminoisobuttersäure

20 AIa: Alanin

Arg: Arginin

CrIy: Glycin

Hin: Histidin

lie: Isoleucin

25 Leu: Leucin

Nie: Norleucin

Nva: Norvalin·.

Met: Methionin-

Phe; Phenylalanin

30 Phg: oc-Phenylglycin

Pro: Prolin _ _Ä ^ .

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(r,yr)ülu: Pyroglutaminsäure Ser: Serin
Thr: Threonin
Trp: Tryptophan
Tyr: Tyrosin

VaI: Valin

t
Bu : h-Butyl

Alle bekannten Peptide mit LH-RH-Wirkung können verwendet werden. Beispiele dieser Peptide sind nachstehend genannt.

(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-GIy-NH₂ (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NH-C₂H_q (I^:iyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr--D-Ala-Leu-Arg-PrO-NH-C₂H₅ (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (Bi^)-Leu-Arg-Pro-NH-C ^₅

(PyTOGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NH-C^ (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-PrO-RHCH₂CH₂OH (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NHCH^ (Fyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Pyrrolidin (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-NLe-Arg-Pro-NHC₂H₅ (Fyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-Gly-Leu-Arg-PrO-NHC₂H₅ (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-Gly-Ile-Arg-PrO-NHC₂H₅ (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Met-Arg-Pro-NHC₂H₅

Die vorstehend genannten Peptide werden beispielsweise in den folgenden Patentschriften beschrieben: 25 US-PS 3 853 837 (entsprechend der BE-PS 798 114, der DE-OS 2 321 174 und niederländische Offenlegungsschrift 7 305 995), BE-PS 817 989 (entsprechend der DE-OS 2 435 027 und der niederländischen Offenlegungsschrift 7 410 026), US-PS 4 008 209 (entsprechend der

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PE-PS 82ο 451, der DE-OS 2 446 οο5 und der niederländischen Offenlegungsschrift 74 12 837) und der US-PS 3 972 859 (entsprechend der BE-PS 826 43o, der DE-OS 2 5o9 783 und der niederländischen Offenlegungsschrift 75 o2 564).

Die Menge des Peptids mit LH-RH-Wirkung, die verwendet wird, variiert, sollte jedoch genügen, um die gewünschte pharmakologische Wirkung sicherzustellen. Beispielsweise kann sie in vielen Fällen im Bereich von etwa 0,000025 bis 10 Gew.-%, bezogen auf die Zubereitung gemäß der Erfindung, liegen. Wenn die Auslösung der Ovulation die gewünschte Wirkung ist, kann die Menge zuweilen im Bereich von etwa 0,000025 bis 1 Gew.-%, vorzugsweise im Bereich von etwa 0,0001 bis 0,2 Gew.-% liegen, wobei eine Menge von 0,0001 bis 0,1 Gew.-% besonders bevorzugt wird. Wenn eine tumorhemmende Wirkung auf Brustkrebs angestrebt wird, kann die Menge zuweilen im Bereich von 0,001 bis 20 Gew.-X, vorzugsweise etwa 0,01 bis 10 Gew.-% liegen, wobei eine Menge von 0,01 bis 5 Gew.—% besonders be— vorzugt wird.

Die Zubereitungen gemäß der Erfindung können nach bekannten pharmazeutischen Verfahren hergestellt werden.

Zu den Zubereitungen gemäß der Erfindung gehören Vaginalsuppositorien, die bei Raumtemperatur fest bleiben, aber bei der Körpertemperatur schmelzen; Salben, die in öligen Trägern dispergiert sind und immer flüssig sind, und Zubereitungen vom Geltyp, die durch Röhrchen o.dgl. verabreicht werden. Als weitere Arzneiform kommt eine Zubereitung in Frage, die nach der vaginalen Anwendung in den Vaginalflüssigkeiten gelöst wird oder zerfällt. Eine solche Zubereitung läßt sich leicht vorzugsweise mit Hilfe eines Applikators oder einer Einführvorrichtung verabreichen.

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η₀

Zur Herstellung eines Vaginalsuppositoriums oder einer Vaginalsalbe wird die vorstehend genannte Carbonsäure als feines Pulver in dem vorher geschmolzenen öligen Arzneiträger gelöst oder dispergiert, worauf ein Peptid mit LH-RH-Wirkung zugesetzt und bei einer geeigneten erhöhten Temperatur verrührt wird, bis sich eine homogene Dispersion gebildet hat. Diese geschmolzene Masse wird dann zu Dosierungseinheiten geformt. Bei einem anderen Verfahren, das ebenfalls für die Herstellung von Suppositorien und Salben bekannt ist, wird die organische Säure im Arzneiträger dispergiert, eine wässrige Lösung des Peptids mit LH-RH-Wirkung in der Schmelze gleichmäßig verteilt und die erhaltene Dispersion geformt»

Für die Zwecke der Erfindung können beliebige bekannte Grundlagen bzw. Arzneiträger für Salben und Suppositorien verwendet werden» Beispielsweise können als wasserlösliche Grundlagen Arzneiträger auf Basis von Polyäthylenglykol verwendet werden. Besonders zweck~ mäßig sind Polyäthylenglykole mit einem Polymerisationsgrad von nicht weniger als 100» Als Beispiele geeigneter Polyäthylenglykole sind solche mit einem Polymerisationsgrad von 200, 30<">, 400, 1000, 4000 und 6000 zu nennen. Diese Grundlagen und Arzneiträger können allein oder in Mischung verwendet werden. Als ölige Grundlagen eignen sich beispielsweise Öle und Fette wie Sesamöl, Olivenöl, Maisöl, Sojabohnenöl, Raumwollsaatöl, Erdnußöl, Kakaobutter, Rizinussöl, Laurin, Rindertalg, Schmalz, Wollfett, Schildkrötenöl und Squalen, die entsprechenden modifizierten Materialien, die durch Verfahren wie Hydrierung, Fettsäureaustausch, Acetylierung, fraktionierte Extraktion usw. modifiziert worden sind, Mineralöle, z.B. Vaseline, Paraffin, Isoparaffin und Siliconöle Glycerinester von Fettsäuren mit 6 bis 30 C-Atomen, insbeson-

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dere höhere Fettsäureester wie Glycerinpalmitat, Glycerinlaurat, Glycerinstearat und Glycerinmyristat, Ester von Fettsäuren mit 6 bis 30 C-Atomen mit Alkoholen mit 2 bis 8 C-Atomen, insbesondere Wachse wie Isopropylmyristat, Butylstearat, Diisopropyladipat und DiäthylsebacatjUnd höhere Fettsäuren mit 6 bis C-Atomen, insbesondere Stearinsäure und Ölsäure.

Die genannten öligen Grundlagen können allein oder in Mischung verwendet werden. Besonders vorteilhaft als ölige Grundlagen oder Arzneiträger sind Maisöl, Kakaobutter und Fettsäure-ausgetauschte Öle (z.B. Mono-, Di- und Triglyceride von Palmitinsäure, Stearinsäure und anderen höheren Fettsäuren).

Zur Herstellung von Vaginaltabletten wird der Wirkstoff im allgemeinen nach einem bekannten Verfahren zu geeigneten Arzneiformen gepreßt, wobei Verdünnungsstoffe wie Lactose, Saccharose, Stärke usw., Sprengmittel wie Stärke und Natriumhydrogencarbonat, Bindemittel wie Stärke, Gelatine, Carboxymethylcellulose, PoIyvinylpyrrolidon und Hydroxypropylcellulose, Gleitmittel wie Talkum, Magnesiumstearat, Polyäthylenglykol (6000) und Stearinsäure usw. verwendet werden. Wenn die erforderliche Dosis sehr gering ist, kann erhöhte Gleichmäßigkeit des Produkts erzielt werden, indem eine gemischte Lösung aus einem Peptid mit LH-RH-Wirkung mit einem Hilfsstoff wie Lactose, Stärke oder Mannit vorher hergestellt, die Lösung durch Gefriertrocknen oder Sprühtrocknen unter Bildung eines gestreckten Pulvers getrocknet und dieses gestreckte Pulver zu Tabletten gepreßt wird. Angesichts der geringen Menge der Vaginalflüssigkeiten im Vergleich zu Gastrointestinalflüssigkeiten sind der Zerfall und die Auflösung wichtige Punkte, die berücksichtigt werden müssen.

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Um den Zerfall und die Auflösung zu beschleunigen, können Brausetabletten mit Hilfe von Natriumhydrogencarbonat und. Weinsäure hergestellt werden.

Die wässrigen Vaginalpräparate gemäß der Erfindung 5 können nach bekannten pharmazeutischen Verfahren

hergestellt werden. Zur Herstellung einer wässrigen Lösung können das Peptid mit LH-RH-Wirkung und die wasserlösliche aliphatische Carbonsäure mit 2 bis 6 C-Atomen in beliebiger Reihenfolge gelöst werden. Diese wässrige Lösung muß sauer sein und vorzugsweise im pH-Bereich von etwa 2 bis 6 liegen. Das aus den genannten Mengen des Peptids und der wasserlöslichen aliphatischen Carbonsäure und Wasser bestehende wässrige Vaginalpräparat kann einen pH-Wert im vorstehend genannten Bereich haben. Wenn dies nicht der Fall ist, wird die Zubereitung mit einer geeigneten Säure, Base, einem Puffer o.dgl. auf einen erwünschten pH-Wert im genannten Bereich eingestellt. Als Beispiele geeigneter Säuren für die pH-Einstellung sind wasserlösliche aliphatische Carbonsäuren mit 2 bis 6 C-Atomen, die als Klasse eine Komponente der Zubereitung gemäß der Erfindung sind, und anorganische Säuren zu nennen. Als Basen eignen sich beispielsweise Natriumhydroxyd und Kaliumhydroxyd. Als Beispiele von Puffern sind Sörensen-Puffer (Ergeh. Physiol. 12 (1912) 393), Cl'ark-Lubs-Puffer (J.Bact. 2 (1) (1971) 109, 191), Macllvaine-Puffer (J.Biol.Chem.49 (1921) 183), Michaelis-Puffer (Die Wasserstoffionenkonzentration, Seite 186 (1914) und KoIthoff-Puffer (Biochem.Z. 179 (1926) 410 zu nennen.

Die Herstellung des wässrigen Vaginalpräparats in Form von wasserlöslichen Gelsuppositorien kann durch Mischen der wasserlöslichen aliphatischen Carbonsäure mit 2 bis 6 C-Atomen, des Peptids mit LH-RH-Aktivität, des Wassers und einer Gelgrundlage nach einem zur Her-

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stellung von wässrigen Vaginalsuppositorien bekannten Verfahren erfolgen. Als wasserlösliche Gelgrundlagen eignen sich beispielsweise natürliche Gummen (z.B. Traganthgummi, Gummiarabikum, Karayagum, irisches Moos, Guaiagum, Xanthangum und Johannisbeerkerngum), Cellulosederivate (z.B. Methylcellulose und Carboxymethylcellulose) , Acrylsäurepolymerisate (z.B. Polyacrylsäure und Polymethacrylsäure), Vinylpolymerisate (z.B. Polyvinylpyrrolidon, Polyvinylalkohol, PoIyvinylmethyläther und Carboxypolymethylen), synthetische Polysaccharide (z.B. Polysaccharose, Polyglucose und Polylactose), Stärke, Dextrin, Pektin und Natriumalginat. Diese Arzneiträger können entweder allein oder, falls erforderlich, als Gemisch von zwei oder mehr verschiedenen Grundlagen verwendet werden. Copolymerisate der vorstehend genannten Polymerisate sind ebenfalls geeignet.

Die wasserlöslichen Gelsuppositorien können beispielsweise wie folgt hergestellt werden: Zunächst wird eine wässrige Lösung, die eine wasserlösliche aliphatische Carbonsäure mit 2 bis 6 C-Atomen enthält, hergestellt. Der Lösung werden dann pH-Regler, Konservierungsmittel und andere notwendige Komponenten zugesetzt. Diese Lösung wird in zwei Teile geteilt. Die Gelgrundlage wird dann in einem dieser Teile dispergiert oder gelöst. Das Gemisch wird dann zur Herstellung eines stabilen Gels nach Bedarf erhitzt oder gekühlt. Im anderen Teil der Lösung wird das Peptid mit LH-RH-Wirkung gelöst. Die beiden Teile werden dann gleichmäßig gemischt, wobei die gewünschten wasserlöslichen Gelsuppositorien erhalten werden.

Die wässrige Lösung gemäß der Erfindung kann auch beispielsweise in einer auf eine feste Matrix aufgebrachten Form vaginal verabreicht werden.

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Als feste Matrix oder Träger eignen sich die bekannten Träger, z.B. poröse Materialien aus hochmolekularen Verbindungen·(z.B₀ Siliconkautschuk und Polyurethan), biologische Polymerisate (z.B. Kollagen und Hyaluronsäure) und Cellulosematerialien (z.B. Watte und Papier) . Nachdem die wässrige Lösung auf eine solche feste Matrix aufgebracht worden ist, wird die Matrix zur Entfernung des Wassers getrocknet. Nach intravagi— naler Einführung der das Arzneimittel enthaltenden Matrix-wird der Wirkstoff unter dem Einfluß der Vaginalflüssigkeiten freigegeben.

Die wässrige Lösung gemäß der Erfindung kann auch nach Überführung in eine Öl-in-Wasser-Emulsion oder Wasser-Öl-Wasser-Emulsion in üblicher Weise mit Hilfe einer geeigneten oberflächenaktiven Verbindung, z.B. der Produkte der Handelsbezeichnung "Span", "Arlacel" (höhere Fettsäuresorbitanester, Hersteller Atlas Powder Co.), "Tween" (Polyoxyäthylensorbitanfettsäureester (Hersteller Atlas Powder Co.), "Pluronic" (Polyoxypropylen-polyoxyäthylen, Hersteller Windot Co.), "Brij" (Polyoxyäthylenalkyläther, Hersteller Atlas Powder Co.), Lecithin, Ölen und Fetten (z.B. Sesamöl, Maisöl, Rapsöl, Olivenöl, Erdnußöl, Baumwollsaatöl, Ölsäure und Linolsäure) verabreicht werden.

Die wässrige Lösung gemäß der Erfindung kann auch in Aerosol_Schaum verabreicht werden.

Falls erforderlich, können die wässrigen Vaginalpräparate gemäß der Erfindung außerdem andere geeignete Komponenten wie Elektrolyte (z.B. Natriumchlorid, Kaliumchlorid, Natriumcarbonat und Magnesiumsulfat), Netzmittel (z.B_o Glycerin, Propylenglykol und Sorbit), Konservierungsmittel (z.B. Methylparaben, Propylparaben, Chlorbutanol, Benzylalkohol und Sorbinsäure) und Antioxydantien (z.B. Butylhydroxyanisol, Natriumhydrogensulfit und Nordihydroguaiaretinsäure) enthalten.

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Die Einzeldosis der Vaginalpräparate gemäss der Erfindung kann mit der Arzneiform, der jeweiligen Art des Wirkstoffs, der Tiergattung, der das Präparat verabreicht wird (z.B. Maus, Ratte, Pferd, Rind, Mensch oder andere Warmblüter) und dem Ziel der Behandlung variieren. In jedem Fall muss die Dosis genügen, um pharmakologisch wirksam zu sein. Sie kann im Bereich von beispielsweise etwa 1 bis 5oo mg des endgültigen Präparats pro kg Körpergewicht liegen. Die geeignete Zahl der Verabreichungen pro Tag kann ebenfalls in Abhängigkeit von den genannten Faktoren variieren. Sie kann einmal bis etwa dreimal täglich erfolgen.

Die Antitumorwirkung des Peptids ist bekannt, z.B. aus "Science" 194, 329 (1976), "Cancer Research" 36, 383o, (1976) und US-PS 4 002 738.

Die Vaginalpräparate gemäß der Erfindung haben die folgenden Vorteile und weiteren vorteilhaften Merkmale:

1) Bei vaginaler Verabreichung eines Peptids mit LH-RH-Wirkung gibt es Fälle, in denen das Vaginalpräparat gemäß der Erfindung die Ovulation auch bei niedrigen Konzentrationen auslöst, die bei den üblichen Arzneimitteln keine Ovulation bewirken wurden.

2) Bei der vaginalen Verabreichung eines LH-RH-aktiven Peptids zur Auslösung der Ovulation löst dieses wässrige Vaginalpräparat, das sauer ist und die genannte organische Säure enthält, wirksam die Ovulation bei reduzierter Peptidkonzentration oder bei Zugabe nur einer geringen Menge der organischen Säure aus.

3) ^üie Verabreichung eines aktiven Derivats von LH-RH mit tumorhemmender Wirkung gegen Brustkrebs, Uteruskrebs usw. in Form eines Vaginalpräparats, das die genannte wasserlösliche Carbonsäure gemäß der Erfindung enthält, bringt die gewünschte tumorhemmende Wirkung bei reduzierten Peptidkonzentrationen hervor.

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4) Mit der vaginalen Arzneiform gemäß der Erfindung können verschiedene pharmakologische Wirkungen, z.B. Besserung der Amenorrhoe, Dysmenorrhoe, Hypophyseoprivus oder pbstkoitale Kontrazeption durch Verhinderung der Implantation leicht mit einer reduzierten Menge des LH-RH-aktiven Peptids erreicht werden. Bisher waren vergleichbare Wirkungen nur durch mehrfache häufige Injektionen erzielbar.

5) Auch wenn eine tumorhemmende Wirkung gewünscht

-]_o wird, die häufige Injektionen erfordert, ermöglicht es das Vaginalpräparat gemäß der Erfindung dem Patienten, sich selbst zu behandeln, so daß eine Heimtherapie möglich ist.

6) Insbesondere wässrige Vaginalpräparate gemäß der

Erfindung haben eine hohe Affinität zur Vaginalschleimhaut. Sie ermöglichen leichte pH-Einstellung und leichte Reinigung des Instruments und der Vagina nach jeder Verabreichung. Da ferner die Komponenten vorher gelöst worden sind, entsteht weder Brennen noch Reizung der Vaginalschleimhaut. Da außerdem jede Dosierungseinheit aus geringeren Mengen des Arzneiträgers für Suppositorien und anderer Komponenten besteht, bleibt nur eine geringe Rückstandsmenge im Vaginaltrakt zurück.

7) im Vergleich zu parenteralen Zubereitungen können die Serumkonzentrationen von LH (luteinisierendes Hormon, nachstehend mit der Abkürzung "LH" bezeichnet) und des FSH (follikelstimulierendes Hormon) nach vaginaler Verabreichung während einer bedeutend längeren

3_O Zeit aufrecht erhalten werden.

Beispiel 1

B g höheres gesättigtes Fettsäuretriglycerid ("Witepsol S55", Hersteller Dynamit Nobel Aktiengesellschaft, gesättigtes Triglycerid von Pflanzenfettsäure mit einem

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geringen Gehalt an Monoglycerid) wurden bei 50°C geschmolzen. Der Schmelze wurde 1 g gemahlene Bernsteinsäure zugesetzt. Nach gutem Mischen wurde 1 g des Triglycerids "Witepsol S55", das 2 mg vorher darin ι- dispergiertes natürliches LH-RH der Formel (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NHp enthielt, zugesetzt. Unter Erwärmen und Rühren wurde die Masse In Suppositorienformen für Ratten in einer Menge von je 50 mg pro Form gefüllt. Die Formen wurden dann in Eiswasser abgeschreckt. Hierbei wurden Suppositorien erhalten. Es ist zu bemerken, daß der Gehalt an Peptid mit LH-RH-Wirkung in jedem Suppositorium eingestellt werden kann, indem die Konzentration von LH-RH im getrennt hergestellten Triglycerid "Witepsol S55"

.J5 erhöht oder eine erhöhte Menge des gleichen Arzneiträgers mit Carbonsäuren einem Arzneiträger, der LH-Rh enthält, zugesetzt wird.

Beispiel 2
In etwa 0,5 ml Wasser wurden 71,4 mg Peptid der Formel (Pyr)Glu-HIs-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NH-C^Hc gelöst. Der Lösung wurden 4 g Lanolin zugesetzt. Das Gemisch wurde gut homogenisiert. Dann wurde ein Gemisch von 91 g des höheren Fettsäuretriglycerids ''Witepsol S55",das vorher bei 50⁰C geschmolzen worden war, und 5 g feingemahlener Citronensäure langsam unter Rühren zugesetzt. Die Masse wurde In Suppositorienformen aus Kunststoff in einer Menge von 1,4 g pro Form zur Herstellung von Vaginalsuppositorien für den menschlichen Gebrauch geformt. Jedes Suppositorium enthielt 1 mg Peptid.

Beispiel 3

In 40 ml Wasser wurden 2 mg Peptid der Formel (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NH-C₂H_tgelöst und 5gLactose dispergiert. Die Lösung wurde gefriergetrocknet. Das getrocknete Gemisch wurde gemahlen. Mit 1 g dieses Gemisches wurden 6,175 g Lactose gemischt. Dem Gemisch wurden 1 g Citronensäure und 1 g Maisstärke zugesetzt. Dann wurden 2 ml einer

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- yf -

vorher hergestellten 10%igen äthanolischen Lösung von Hydroxypropylcellulose (HPC) zugesetzt und zugemischt. Das Gemisch wurde gesiebt, granuliert und 8 Stunden bei 50⁰C getrocknet. Das Granulat wurde mit 500 mg Maisstärke und 125 mg Magnesiumstearat gut gemischt» Aus dem Gemisch wurden Tabletten von je 50 mg hergestellt. In dieser Weise wurden zur Auflösung bestimmte Vaginaltabletten für Ratten, die 2 ug des Peptids pro Tablette enthielten, erhalten.

10 Beispiel 4

Auf die in Beispiel 1 beschriebene Weise wurden verschiedene Mengen von natürlichem LH-RH der Formel (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NHp in einer öligen Grundlage ("Witepsol"), in der 10% Citronensäure dispergiert worden war , in Form von feinen Teilchen sowie in einem ähnlichen öligen Träger, der keine Carbonsäure enthielt, dispergiert» Die erhaltenen Zubereitungen wurden Ratten vaginal verabreicht, um die ovulationsauslösenden Wirkungen festzustellen«,

Weiblich-SD-Ratten im Diöstrus (120-150 Tage, Körpergewicht 250-350 g) erhielten das Präparat vaginal und wurden am nächsten Tag autopsiert, um festzustellen, ■ ob Ovulation stattgefunden hatte, festgestellt auf der Grundlage der Anwesenheit oder Abwesenheit von Ova

25 in der Ampulla. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 genannt»

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Tabelle 1

7iic;pf 7 c*^TS¹F"FΡ»

Dosis von natürlichem LH-RH (ng/Ratte)

400

600

800

1,000

10,000

20,000

40,000

60,000

80,000

Konfidenz-
grenze)
(ng/Ratte)

909

1/10

2/10

10/10

9/10

10/10

24400
(I73OO-32IOO)

810/07

Ohne Zusatz

1/10

4/10

8/10

4/4

820(680-
1140)

i

Citronensäure
(ίο ⁰Z)

n/n = Zahl der ovulierenden Ratten /Zahl der vaginal behandelten Ratten

OO OO CD CO CO

Beispiel 5

Auf die in Beispiel 1 beschriebene Weise wurde ein synthetisches Peptid der Formel (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NH-CpHjin aliquoten Teilen einer öligen Grundlage (bezogen auf Glyceryltrilaurat), in die jeweils verschiedene organische Säuren eingearbeitet worden waren, dispergiert. Ein Versuch zur Auslösung der Ovulation auf vaginalem Wege wurde auf die in Beispiel 4 beschriebene Weise durchgeführt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 genannt.

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Ta'belle

Carbonsäuren

20

40

60

Dosis (r

80

100

ig/Ratte)

200

400

600

800

(ng/Ratte)

keine

0/10

150

3/10

8/10

9/10

10/10

270(194-353)*

Citronensäure (10$)

2/10

6/10

8/IC

9/10

10/10

5/5

56(38-69)-

Bernsteinsäure (10$)

0/10

4/10

6/10

8/10

9/10

50(37-63)"

ι Weinsäure (10$)

1/10

5/10

8/10

82(69-97)"

Asparaginsäure (10$)

2/10

4/10

5/5

9/10

10/10

5/5

122(79-169) "·'

Glutaminsäure (10$)

0/10

7/10

10/10

5/5

177(133-243)"

Milchsäure (2 $)

2/10

0/10

3/10

117(95-134Γ

Ascorbinsäure (10$)

3/10

2/10

4/10

8/10

114(80-161)'■■
r

7/10

* 95 $ Konfidenzgrenze n/n = Zahl der ovulierenden Ratten/Zahl der vaginal behandelten Ratten

Beispiel 6

Das in Beispiel 5 beschriebene Peptid wurde in einem öligen Arzneiträger, der überwiegend aus Glyceryltrilaurat bestand und durch 10% Citronensäure ergänzt 5 war, dispergiert. Die hergestellten Vaginalsuppositorien wurden ständig in die Vagina von sechs weiblichen Ratten eingeführt, bei denen vorher Brustkrebs durch orale Verabreichung von DMBA (7.12-Dimethylbenzanthracen) ausgelöst worden war, um die tumorhemmenden 10 Wirkungen zu untersuchen und zu bewerten. Das Peptid wurde in einer Menge von 350 jjg/Ratte in 50 g der Arzneigrundlage für Suppositorien dispergiert» Vier Tiere erhielten täglich mit Ausnahme von Samstag und Sonntag während einer Zeit von 2,5 Monaten das Präpa-15 rat. Zum Vergleich erhielten zwei Ratten das in physiologischer Kochsalzlösung gelöste Peptid in einer Menge von 100 ug/kg subkutan nach dem gleichen vorstehend beschriebenen Zeitplan.

Die Ergebnisse zeigten, daß mäßige Wachstumshemmung der Tumore in beiden Fällen bei subkutaner Verabreichung erreicht wurde, mäßige Hemmung bei drei von vier der vaginal behandelten Tiere und vollständiges Verschwinden der Tumore bei dem verbleibenden Tier erzielt wurde.

In allen Fällen wurde Atrophie des Uterus und der Ovarien beobachtet. Dies war ivahrscheinlich auf das verabreichte Peptid zurückzuführen. Im Falle von Krebs sind die Wirkungen einer Medikation schwierig quantitativ zu bestimmen, weil die verschiedensten Faktoren wie Krebsstadium, Dosierung, Häufigkeit der Verabreichung usw, eine Rolle spielen«,

Die Ergebnisse dieses Versuchs lassen jedoch bedeutende tumorhemmende Wirkungen, ein Zeichen für befriedigende Resorption, erkennen.

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Wie die Ergebnisse der in Beispiel 4, 5 und 6 beschriebenen Versuche zeigen, hat die Zumischung einer organischen .Säure, z.B. Citronensäure, eine wesentlich gesteigerte Resorption der Peptide mit LH-RH-Wirkung aus der Vagina zur Folge.

Hinsichtlich der ovulationauslösenden Wirkung wurde eine 3ofache Steigerung der stimulierenden Wirkung gegenüber dem Vergleichsversuch (ohne Carbonsäure) im Falle von natürlichem LH-RH erzielt (Tabelle 1). Bei dem gemäß Beispiel 5 verwendeten synthetischen Peptid hatte die Zumischung von 10% Bernsteinsäure eine 5,4mal größere Resorption als beim Vergleichsversuch (ohne organische Säure) zur Folge. Hieraus ergibt sich eindeutig, daß eine gegebene pharmakologische Wirkung bei einer Dosis, die dem 5,2-fachen der intravenösen Dosis oder dem 3,1-fachen der subkutanen Dosis entspricht, erzielt werden kann. Es ist zu bemerken, daß zur Erzielung einer gegebenen pharmakologischen Wirkung durch orale Verabreichung der gleichen Verbindung eine Dosis, die das 1900-fache der intravenösen Dosis beträgt, erforderlich ist und ohne Verwendung einer Carbonsäure, wie Tabelle 2 zeigt, eine Dosis, die 26x so groß ist wie die intravenöse Dosis, verabreicht werden muß, wenn der vaginale Weg gewählt wird.

Diese Tatsachen zeigen eindeutig, daß die vaginale Verabreichung gemäß der Erfindung ein sehr vorteilhafter Weg der Medikation ist.

Hinsichtlich der tumorhemmenden Wirkung ist zwar zu berücksichtigen, daß komplizierende Faktoren wie Phase des Krebses, Dosierung und Häufigkeit der Verabreichung eine Rolle spielen, jedoch wurde Wirksamkeit in 3 von 5 Fällen und in einem Fall ein' sehr großer Erfolg (Verschwinden von Tumoren) erzielt.

Die Zumischung einer Carbonsäure ermöglichte somit die Behandlung von Krebserkrankungen mit geringeren Mengen

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des Peptids mit LH-RH-Wirkung nach einem bequemen Verfahren der vaginalen Verabreichung, die von den Patienten selbst vorgenommen werden kann. Dies ist ein erheblicher Beitrag zum therapeutischen Wert des Peptids mit LH-RH-Wirkung, das vom Verdauungstrakt nur sehr begrenzt resorbiert wird und bisher nur durch Injektionen verabreicht wurde.

Außer den vorstehenden Bewertungen der pharmakologischen Wirkung wurden die Resorption von LH-RH und seine Langzeitwirkung nach vaginaler Verabreichung mit Hilfe des Radioimmuntests von Serum-LH untersucht. Dieser Versuch wird nachstehend in Beispiel 7 beschrieben.

Beispiel 7

50 ng des in Beispiel 5 beschriebenen Peptids wurden in einem öligen Arzneiträger (der überwiegend aus Glyceryltrilaurat bestand) dispergiert, dem vorher 10% Citronensäure zugemischt worden waren. Die Konzentration von Serum-LH wurde dann mit Hilfe des Radioimmuntests bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle genannt.

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ts.

Tabelle 3

Änderungen der Serum-LH-Konzentratlonen nach einmaliger intravaginaler Verabreichung an Ratten im Diöstrus

Minuten nach der Verabreichung	Serum-LH-Konzeni (Mittelwert, ng/
0	23.8 ± 9.1
10	46.5 ± 7.8
20	59.7 ± 12.0
40	110.0 ± 16.4
60	178.0 ± 83.4
120	602.0 ± 254.9
180	166.6 ± 97.5
240	380.0 ± 182.4
300	158.6 ± 78.8
360	39.0 ± 9.1

In jeder Gruppe wurden 5 Ratten verwendet. S.F. = Standardfehler

Bei vaginaler Verabreichung von 50 ng des in Beispiels beschriebenen Peptids wurde somit eine Spitzen-LH-Konzentration, die 25 mal so hoch ist wie die normale Konzentration, erzielt, und selbst 5 Stunden nach der Verabreichung betrug die Konzentration noch etwa das 7-fache der Konzentration vor der Verabreichung. Es gibt viele Berichte, die erkennen lassen, daß hinsichtlich der ovulationsauslosenden Wirkung nicht nur die Konzentrationen der LH- und FSH-Maxima, sondern auch die Aufrechterhaltung ausreichender Konzentrationen sehr wichtige Faktoren sind.

Dies zeigt eindeutig, daß durch Verwendung dieser Vaginalsuppositorien, die eine gewisse organische

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Säure enthalten, der Schmerz und die Unannehmlichkeiten, die mit intravenöser Instillation über längere Zeit oder häufigen intramuskulären oder subkutanen Injektionen verbunden ist, vermieden wird und die Erzielung der gewünschten therapeutischen Wirkung mit verhältnismäßig geringen Mengen des Peptids mit LH-RH-Wirkung möglich ist.

Beispiel 8 Über Nacht wurden 10 g säurebehandelte Gelatine in 10 g einer 5%igen wässrigen Citronensäurelösung (pH 3,5, mit einer geringen Menge konzentriertem wässrigem NaOH eingestellt, nachstehend als Lösung A bezeichnet) gehalten, wodurch die Gelatine stark quoll. Unter Zusatz von 20 g Glycerin wurde die ge-

15 quollene Gelatine dann durch Erhitzen auf 60⁰C geschmolzen. Zu einem Teil von 33,3 g dieser glycerinhaltigen Gelatine wurden 27,8 g Glycerin und 33,9 ml der vorstehend genannten Lösung A gegeben. Das Gemisch wurde bei 60⁰C gerührt, bis es homogen war. Nach 20 der Bildung eines homogenen Gemisches wurden 5 ml der Lösung A, die 83 bis 533 mg eines synthetischen Peptids der Formel (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NHp enthielt, zugesetzt. Das Gemisch wurde bei 60⁰C geschmolzen, bis es homogen war, in Formen 25 gegossen und abgeschreckt« Hierbei wurden Vaginalpräparate (pH 3,5) für Ratten erhalten, die 50 bis 200 ,ug Peptid enthielten. Jedes Suppositorium wog 60 mg.

Beispiel 9

1,5 g Xanthangum wurden in 47 ml der Lösung A dispergiert. Die Dispersion wurde bei etwa 90°C gerührt, bis sie homogen war. Getrennt hiervon wurden 1,5 g Johannisbrotkerngum in der gleichen Weise in 45 ml der Lösung A dispergiert. Die Dispersion wurde bei etwa 90°C gerührt, bis sie homogen war. Die beiden

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Flüssigkeiten wurden bei etwa 9o°C gemischt,wobei ein homogenes Gel erhalten wurde. Während auf 70 bis 80°C erhitzt wurde, wurde eine Lösung von 20 bis 1OO iig des Peptids (Monoacetat.Pentahydrat.(Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NH-CpH,-) in 5 ml der Lösung A dem homogenen Gel zugesetzt. Das Gemisch wurde gut gerührt, bis ein homogenes Gel (pH 3,5) erhalten wurde. Zur Herstellung eines Vaginalpräparats für Ratten wurden 100 mg dieses Gels in einen Applikator gefüllt.

10 Beispiel 10

50 ml Lösung A, in der 0,12% Methylparaben und 0,012% Propylparaben gelöst worden waren (nachstehend wird die hierbei erhaltene Lösung als Lösung B bezeichnet), wurden auf etwa 80 bis 90°C erhitzt, worauf 5 g Methylcellulose ("Methorose 90 SH 4000", Hersteller Shin-etsu Kagaku, Japan) zugesetzt und unter Rühren gut dispergiert wurden. Getrennt hiervon wurde 1 g synthetisches Peptid der Formel (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-C„H₅ in 45 ml Lösung B gelöst. Die Lösung wurde gekühlt (etwa 4 bis 10°C).

Diese gekühlte Lösung wurde der vorstehend genannten Dispersion zugesetzt. Das Gemisch wurde bei Raumtemperatur gut gerührt, bis sich ein homogenes Gel ge~ bildet hatte. Zum Ausgleich des durch Verdampfung während dieses Arbeitsschrittes verlorenen Wassers wurde destilliertes Wasser zur Auffüllung auf insgesamt 100 g zugesetzt. Anschließend wurde das Gel (pH 3,5) zentrifugiert, entschäumt und in ein Rohr gefüllt, das dann verschlossen wurde. 1 g dieses Gels wurde in Vaginal-Einführröhrchen aus Kunststoff gefüllt, wobei wässrige Vaginalpräparate in Dosierungseinheiten für den menschlichen Gebrauch mit je 10 mg Peptid erhalten wurden.

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Zl

Beispiel 11

250 mg des synthetischen Peptids der Formel (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NH-C„H₅ wurden genau abgewogen und in einer solchen Menge einer wässrigen Lösung gelöst, die 0,12% Methylparaben, 0,012% Propylparaben und 3,0% Bernsteinsäure (vorher mit einer geringen Menge 1On-NaOH auf pH 3,0 eingestellt) enthielt, daß das Gesamtvolumen 100 ml betrug. Ein Teil von 1 ml dieser Lösung (pH 3,0) wurde dann durch Sorption auf eine mit Glutaldehyd behandelte poröse Kollagenmatrix in einem Kunststoffapplikator aufgebracht, wobei eine vaginale Dosierungseinheit, die 2,5 mg des Peptids enthielt, erhalten wurde.

Beispiel 12 15 Ein synthetisches Peptid (Monoacetatpentahydrat;

(Pyr)GIu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-PTO-NH-C₂H₅) wurde in aliquoten Teilen von Clark-Lubs-Puffer (J.Bact.2 (1) (1917) 109, 191 (oder Sörensen' Puffer (Ergeb.Physiol. 12 (1912) 3931) bei pH 2 bis 7 gelöst. Jede Lösung wurde auf ein Stück Watte (mit im wesentlichen vorbestimmtem Volumen) aufgebracht und in die Vagina von Ratten eingeführt, um die pH-Abhängigkeit der ovulationsauslösenden Wirkung des Peptids zu untersuchen.

Ausgewachsenen weiblichen SD-Ratten (120-150 Tage alt, Körpergewicht 250-350 g) wurde jedes Präparat während des Diöstrus vaginal verabreicht. Die Tiere wurden am nächsten Morgen autopsiert, um das Auftreten der Ovulation auf der Grundlage der Anwesenheit oder Abwesenheit von Ova in der Ampulla zu überprüfen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 4 genannt.

Die Ergebnisse in Tabelle 4 zeigen, daß die vaginale Resorption des Peptids pH-abhängig ist. Wenn der pH-Wert der Dosierungslösung von 6,70 bis 2,02 verändert

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wurde, ging der ED₅Q-Wert auf 1/4,5 zurück, ein Zeichen, daß eine bedeutend höhere Resorption erzielt werden kann,· wenn die Lösung sauer eingestellt wird.

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Tabelle

pH-Wert der Dosierungslösung

CD O CO

6.70 4.76

3.

2.02

Dosis (ng/100 g Körpergewicht der Ratte)

0/10 4/10 4/10 8/10

4/20 12/20 I?/²⁰ 15/20 15/15

o/io 2/10 5/13 8/10 5/5

2/10 5/10 6/10 7/10 10/10

EE<-₀(ng/100g Ratte )

(95%-Konfidenz-

grenze)

144(115-201) 52( 44- 58) 67( 60- 79) 32( 23- 40)

n/n = Zahl der ovulierenden Ratten/Zahl der vaginal behandelten Ratten

Als Lösungsmittel für die Herstellung der Lösungen von pH 6,7 und pH 4,76 wurde
Clark-Lubs-Puffer verwendet. Als Lösungsmittel für die Lösungen von pH 3,47 und pH 2,02
wurde Sörensen' Puffer verwendet.

OO CO CO CT) CO

Ii

Beispiel 13

Das gleiche Peptid wie in Beispiel 12 wurde in wässrigen Lösungen, die pro Liter 0,238 Mol verschiedener wasserlöslicher aliphatischer Carbonsäuren enthielten und vorher mit geringen Mengen 10 n-NaOH auf pH 3,5 eingestellt worden waren, gelöst. Nach der in Beispiel 12 beschriebenen Methode erhielten Ratten vaginal jede der Lösungen (pH 3,5) in einer Dosis von 40ng/kg, um den Einfluß dieser Säuren auf die ovulationsauslösende Wirkung zu untersuchen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 genannt.

Tabelle 5

Zugesetzte organische Zahl der ovulierenden Rat-Carbonsäure ten/Zahl von vaginal behandelten Ratten (40 ng/

100 g Körpergewicht der Ratte)

Citronensäure 9/10

20 Weinsäure 2/10

Bernsteinsäure 10/10

Malonsäure 7/10

Essigsäure 5/10

Apfelsäure 3/10

Die Ergebnisse zeigen, daß diese aliphatischen Carbonsäuren die Resorption des aktiven Peptids erheblich förderten.

Anschließend wurde ein Versuch zur Unterschung des Einflusses der zugesetzten Säuremenge unter Verwendung von Citronensäure durchgeführt. Dieser Versuch ist in Beispiel 14 beschrieben.

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Beispiel 14

Das gleiche Peptid wie in Beispiel 12 wurde als Wirkstoff verwendet. Aliquoten Teilen eines Phthalatpuffers (pH 3,5) wurde Citronensäure in einer Menge von 1, 2, 5, 7 und 10% (Gew./Vol.) zugesetzt. Der pH-Wert jeder Lösung wurde mit einer geringen Menge konzentriertem NaOH erneut auf 3,5 eingestellt. Diese Lösungen wurden Ratten auf die in Beispiel 12 beschriebene Weise vaginal verabreicht, um den Einfluß verschiedener zugesetzter Mengen der Citronensäure auf die ovulationsauslösende Wirkung zu untersuchen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 6 genannt.

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Tabelle

Konzentration der Citronensäure in der Dosierungslösung, % Dosis (ng/100 g Körpergewicht der 'Ratte

EE₅₀ .(ng/100.5

Körpergewicht der Ratte) (95%-Konfidenzgrenzen)

0 0/10 2/10 3/I3 8/10

10 n/n = Zahl der ovulierenden Ratten/Zahl der vaginal behandelten Ratten

	0/10	1/10	0/10	2/10	3/13
	1/10	2/10	6/10	5/10	8/10
	Vio	6/10	Vio	VlO	6/10
1/10	5/10	9/10	9/10
0/10	7/10	10/10
2/10

c/c

67(60-79)
44(37-54)

53(40-177)
23(16-31)

20(15-25)
15(10-19)

CO CJ CD CD

Die vorstehenden Ergebnisse zeigen, daß die Adsorption des Peptids nach vaginaler Verabreichung mit steigenden Mengen der zugesetzten Citronensäure, einer mehrbasischen organischen Säure, stieg. Die Lösungen, 5 die 1 bis 5% Citronensäure enthielten, wurden mit NaCl isotonisch gemacht.

Die Ergebnisse der in den Beispielen 12, 13 und 14 beschriebenen Versuche zeigen, daß die vaginale Resorption eines Peptids mit LH-RH-Wirkung erheblich

10 gesteigert werden kann, indem der pH-Wert einer Lösung

organische sauer eingestellt und eine/Säure eines bestimmten Typs der Lösung zugesetzt wird.

So ergibt ein Vergleich der ovulationsauslösenden Wirkung des Peptids bei verschiedenen Darreichungs-

15 wegen, daß der ED „-Wert 3,8 ng/lOO g (Körpergewicht der Ratte) bei intravenöser Verabreichung, 5,8 ng/ 100 g (Körpergewicht der Ratte) bei subkutaner Verabreichung und 9,9 ng/100 g (Körpergewicht der Ratte) bei vaginaler Verabreichung einer wässrigen Lösung,

die mit 10% Citronensäure bei pH 2,0 ergänzt war, betrug. Um eine gegebene ovulationsauslösende Wirkung zu erzielen, ist für das vaginale Präparat gemäß der Erfindung nur das 2,6-fache der Peptidmenge wie bei intravenöser Verabreichung und die 1,7-fache Peptid-

25 menge wie bei subkutaner Verabreichung erforderlich. Die ungewöhnliche Wirksamkeit des Vaginalpräparats gemäß der Erfindung ist auch daran erkennbar, daß die orale Verabreichung die 1900—fache Peptidmenge wie bei intravenöser Verabreichung, die rektale Verabreichung 30 die 82-fache Peptidmenge die bei intravenöser Verabreichung und die vaginale Verabreichung mit dem öligen Arzneiträger ("Witepsol S55") die 26- fache Peptidmenge wie bei intravenöser Verabreichung erfordert.

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Im Hinblick auf praktische Anwendungen wurde eine wässrige Lösung des Peptids ähnlich dem in Beispiel verwendeten in aliquoten Teilen verschiedener wasserlöslicher Gele dispergiert. Die ovulationsauslosende Wirkung jeder Dispersion wurde ermittelt, um die Resorbierbarkeit zu bewerten.

Beispiel 15

Unter Verwendung des gleichen Peptids wie in Beispiel 12 und verschiedener wasserlöslicher Gele wurden Vaginalpräparate auf die in den Beispielen 12, 13 und 14 beschriebene Weise sowie nach analogen Verfahren hergestellt. Jedes Präparat wurde Ratten mit einem Glasapplikator vaginal in Dosen von 60 bis 100 mg verabreicht. Die ovulationsauslösenden Wirkungen wurden auf die in Beispiel 12 beschriebene Weise untersucht. Die Ergebnisse sind in Tabelle 7 genannt.

Es ist erkennbar, daß stets befriedigende Ergebnisse erhalten wurden, obwohl die Resorption des Peptids mit den verwendeten verschiedenen Gelgrundlagen etwas variierte.

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Tabelle

	Arzneiträger	33?'	30 40 50	Dosis	(nc·/ Ratte)	100 120	150 200	EE_CQ (ng/Ratt (95/i-Konfi-
	Xanthangum	5*	1/10 3/10 7/10	60 70	80	9/9		.denzgrenzen
	Methylcellulose	5*	1/10	8/10		9/10		4^C (38-54)
co ö to	Glycerinhaltige Gelatine	5*		2/10 3/10	8/10	2/10	4/1? 6/9	75(67-86)
θθ O ^]	CMC-Na	lO9f			0/10	1/7	5/5	179(145-349)
θ	Carrageenan	10%	2/5			5/10	9/10
	Polyacrylsäure	5%			5/5	1/5	2/5
	Agar		0/5			4/5
	Stärke	1/10			5/5
	GMC-Glycerin				1/5

n/n = Zahl der ovulierenden Ratten/Zahl der vaginal behandelten Ratten

Beispiel 16

Das gleiche Peptid wie in Beispiel 12 wurde in einem Puffer, der 10% Citronensäure enthielt (pH 2,0), gelöst. Nach vaginaler Verabreichung der Lösung (pH 2,0) auf die in Beispiel 12 beschriebene Weise wurde die Konzentration von LH im Serum durch den Radioimmuntest in bestimmten Zeitabständen bestimmt. Zum Vergleich wurde eine Lösung des gleichen Peptids in physiologischer Kochsalzlösung subkutan bzw.intravenös verabreicht, worauf die LH-Konzentrationen im Serum in der gleichen Weise gemessen wurden. In allen Fällen entsprach die Dosis dem EDj-Q-Wert für die ovulationsauslösende Wirkung.

Die Ergebnisse sind in Tabelle' 8 genannt.

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Tabelle

Änderungen der LH-Konzentrationen im Serum nach einmaliger Verabreichung des Peptids bei Ratten im Diöstrus

(Mittelwert von mg/ml + Standardfehler)

Minuten nach
Verabreichung

s.c.

5.8 ng/100 g
Körpergewicht

3.8 ng/100 g Körpergewicht Intravaginal, Puffer
in Wattekugelchen
+ 5% Citronensäure,
pH 2, 9,9 ng/100 g
Körpergewicht

116.5 ± 8.2

90.5 ± 16.6 120.5 ± 16.0 323.5 ± 51.4 208.5 ±24.9

46.6 ± 9.4

55.9 ± 7.9 41.8 ± 18.4

43.0 ± 13.6

In jeder Gruppe wurden 5 Ratten verwendet. s.c. = subkutan i.v. = intravenös

co O	0	27-2	± 2.7 (
βο	10	40.9	± 5.5
O	20	78.5	± 15.1
0790	40 60	158.0 297.0	± 19.5 ± 89.5
	120	561.0	± 68.5
	180	170.0	± 50.6
	240	44.1	± 10.0
	300	25.8	± 4.9
	360	56.1	± 19.5

27-2	- 2.7 (21 Patten)
50.4	± 5.5
55.2	± 7.1
28.0	± 2.5
76.4	± 21.5
648.0	± 207.5
628.0	± 157.2
557.0	± 89.0
95.0	± 11.9
71.1	± 8.5

N) OO CO

Die Ergebnisse zeigen, daß zwar die ovulationsauslösenden Wirkungen vergleichbar sind, jedoch das Vaginalpräpafat gemäß der Erfindung eine LH-Konzentration im Serum ergibt, die ein höheres Maximum aufweist und wesentlich länger anhält als bei subkutaner oder intravenöser Verabreichung.

LH-RH und synthetische LH-RH-Derivate haben stets sehr kurze biologische Halbwertzeiten im Körper, jedoch ergibt die Verwendung der Arzneiform gemäß der Erfindung, die eine Daueranwendung ermöglicht, eine lang anhaltende Konzentration im Blut bei Verabreichung einer einzelnen Dosis, so daß eine Verstärkung der LH-RH-Wirkung möglich ist. Die Vaginalpräparate gemäß der Erfindung sind ferner besonders wirksam bei bestimmten Anwendungen, beispielsweise wenn tumorhemmende Wirkungen angestrebt werden, wobei die LH-RH-Wirkung während eines längeren Zeitraums aufrecht erhalten werden muß.

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Claims

Patentansprüche

. Vaginalpräparat für die vaginale Verabreichung, das ein Peptid mit LH-RH-Wirkung enthält, dadurch gekennzeichnet, daß es außerdem eine wasserlösliche aliphatische Carbonsäure mit 2-6 C-Atomen enthält.
2. Vaginalpräparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es einen öligen Arzneiträger enthält.
3. Vaginalpräparat nach Anspruch 1 in Form einer wässrigen Zubereitung.
4. Vaginalpräparat nach Anspruch 1, gekennzeichnet durch einen pH-Wert von 2 bis 6.
5. Vaginalpräparat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Peptid mit LH-RH-Wirkung die Formel

₁₄₁ hat,
(worin R₁ für Hys, Tyr, Trp oder p-NH^-Phe, R„ für Tyr oder Phe, R₃ für GIy oder einen D-Aminosäurerest, R₄ für Leu, He oder Nie und R₅ für GIy-NH-Rg (worin Rg für H oder einen niederen Alkylrest steht, der gegebenenfalls eine Hydroxylgruppe enthält) oder NH-Rg (worin Rg die oben genannte Bedeutung hat) steht.
6. Vaginalpräparat nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß es als Peptid mit LH-RH-Wirkung (Pyr)Glu-His-Trp-Ser--T^r--Gly-Leu-Arg-PrO-GIy-NH₂, (Pyr) GIu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Ieu-Arg-Pro-NH-C0H₁- , (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr»D-Ala-Leu-Arg-Pro--NH-C₂H_c- oder (PyrOGlu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NH-C^c. enthält.

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7) Vaginalpräparat nach Anspruch 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß es als wasserlösliche aliphatische Carbonsäure eine Monocarbonsäure oder mehrbasische Säure enthält.
8) Vaginalpräparat nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß es als Monocarbonsäure Essigsäure, Milchsäure oder Ascorbinsäure enthält.
9) Vaginalpräparat nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß es als mehrbasische Säure eine Dicarbonsäure oder Tricarbonsäure enthält.
10) Vaginalpräparat nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß es als Dicarbonsäure Bernsteinsäure, Weinsäure, Malonsäure, Glutarsäure, Apfelsäure oder Asparaginsäure enthält.
11) Vaginalpräparat nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, daß es als Tricarbonsäure Citronensäure enthält.

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