DE2831534A1

DE2831534A1 - Neue angiotensin-ii-antagonistisch wirkende peptide und verfahren zur herstellung dieser verbindungen

Info

Publication number: DE2831534A1
Application number: DE19782831534
Authority: DE
Inventors: Katalin Dr Gidai; Egon Dr Karpati; Lajos Dipl Ing Chem Kisfaludy; Geb Kuprina Olga Nyeki; Geb Sarkoezi Maria Szirmai; Laszlo Dr Szporny
Original assignee: Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar RT
Current assignee: Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar Nyrt
Priority date: 1977-07-18
Filing date: 1978-07-18
Publication date: 1979-02-01
Also published as: BE869077A; IL55121A0; CS201014B2; PL111979B1; DK319478A; CA1108124A; HU177133B; PL208496A1; YU171378A; YU41431B; SE7807823L; SU845773A3; GB2001653B; AU3800878A; DE2831534C2; IN149489B; NO148031B; AT361143B; ES471793A1; FI64140B

Description

DipL-ChenL DR. PETER WAGER Patentanwalt

8 MONCiIBN 5, Monusistr. 8/Π Telefon 2237S2

/I- άο

NEUE ANGIOTENSIN-II-ANTAGONISTISCH WIRKENDE PEPTIDE UND VERFAHREN ZUR HERSTELLUNG DIESER VERBINDUNGEN

Die Erfindung betrifft die Herstellung von neuen,, angio tensin-II-antagonistisch wirkenden Peptiden der allgemeinen Formel I

X-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Y (i)

worin

A 1361-67 (ri-640)

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X den Rest einer in der «-Stellung eine Aminooxygruppe enthaltenden aliphatischen Carbonsäure, besonders eine Aminooxyacetyl- oder «Aminooxypropionylgruppe. und

Y den Rest einer aliphatischen «-Aminocarbonsäure, besonders eine Leucyl=, Isoleucyl-, Alanyl- oder Threonylg ruppe, bedeuten,! sowie von 'Säureadditionssalzen und Komplexen solcher Peptide.

Angiotensin-II ist ein blutdrucksteigeiid wirkendes Octapeptid, welches im Organismus auf solche Weise entsteht, dass ein aus der Niere freigesetztes Enzym, das Renin^das durch die Leber produzierte «-Globulin in das Decapeptid Angiotensin-I überführt und dieses dann im Organismus in Angiotensin-II überführt wirdo

Im Dahr 1970 wurde das erste Angiotensin-II-Analogen beschrieben, exne Verbindung, welche sich sowohl in νϊνο,ι als auch in vitro als spezifischer kompetitiver Inhibitor von Angiotensin-II verhält IG.R. _flMa rshall u_o Mitard'., Pr₁OC. Nat. Acad. Sei. USA 67;, 1624 ζΐ97θ}ίο. Diese Beobachtung Hat in breiten Kreiseo grosses Interesse hervorgerufen; zahlreiche Forscher wurden dazu angeregt, neue antagonistisch wirkende Angiotensin-II-analoga zu synthetisieren und zu untersuchen, welche z.\xf$€v Diagnostiz^ierung und eventuell zur therapeutischen Behandlung von durch Renin beeinflussten Hypertensionen eingesetzt werden könnten. Es hat sich gleich am Anfang dieser Forschungsarbeit herausgestellt, dass^es'sich zu diesem Zweck diejenigen Angiotensin-II-Analoga am besten bewähren, in welchen die Phe-Gruppe in der 8-Stellung des Angiotensin-II-Moleküls durch irgendeine aliphatische Seitenkette enthaltende Aminosäure ersetzt ist_o Eine solche Abänderung des Moleküls bedeutet nämlich eine" praktische^ Aufhebern der agonistischen Wirkung bei gleichzeitige^ einer starken antagonistischen Wirkung des Produkts (vgl,:

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Do Gagnon u. Mitarb.,. Br. 0. Pharmacol, 43, 409 (l97l); D.T. Pals u. Mitarb. Circ. Res. 29, 664 (1971))_O Die antagonistische Wirkung kann noch erheblich gesteigert werden tt«*«!» wenn man neben der oben erwähnten Abänderung der 8-Stellung des Moleküls auch die in der 1-Stellung befindliche Asp- ^•Gruppe durch Sar ersetzt !vgl.: D.T. PaIs u₀ Mitarb., Circ. Res. 29, 673 (I97l)]. Das auf diese Weise hergestellte (Sar » Ala )-Angiotensin-II~Analogpn wurde später unter dem Namen "Saralasin" auch in Verkehr gebracht. Seine vorteilhaften Eigenschaften wurden durch eine Herabsetzung des in vivo eintretenden enzymatischen Abbaus und durch die grosse Affinität des Moleküls zu den Rezeptorzellen erklärt.

Durch die auf diesem Gebiet durchgeführten klinischen Untersuchungen IH.R. Brunner u. Mitarb., Lancet 1973, 1045; A.O.M. Donker u. Mitarb., Lancet 1974, 1535; T₀ Ogihara u.

Mitarb.,. Lancet 1974, 219; D.H. Laragh u. Mitarbo, New Englo 0. Med. 292, 695 (1975); W.A. Pettinger u. Mitarb., New Engl. 0. Medo 292, 1214·(1975); D.H.B. Streeten u_o Mitarb.,j Circ. Res. 36». Suppl. 1, 125 (Ί975); H.R. Brunner u„ H₀ Gavras,, Schweiz. Med. Wschr_o 106, 1791 (1976)] wurden die schon am Anfang dieser Forschungsarbeit gemachten Annahmen, dass die antagonistisch wirkenden Analoga von Angiotensin-II in der Diagnose und in der Therapie von durch Renin beeinflussten Hypertensionen anwendbar sein werden, in vollem Umfang bestätigt !vgl.: D. Ganton und Fo Gross, Med. Klino 71,. 2043 (1976); D.L. Marx, Science JL94, 821 (1976); P. Needleman u_o G.R. Marshall, Fed. Proc. 35_#! 2486 (1976)3.

'Ein Vergleich der Strukturen und biologischen Wirkungen der bis dahin hergestellten Angiotensin-II-Analoga hat zahlreiche wichtige Informationen zur Deutung der agoni^- Stischen bzw· antagonistischen Wirkung geliefert (M.C. Khosla

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u. Mitarb., Handbook of Experimental Pharmacology, VoIo 37, I.H, Page u. P₀M, Bumbus ed», 1974; G.R. Marshall, Fed. Proc. £5, 2494 (1976)1.

In der letzteren Zeit steht besonders die Herstellung von nebenwirkungsfreien,; längere biologische Halbwertzeiten Au z-ei-genden Antagonisten im (Jet Vordergrund der Forschung (vgl.: M.C. Khosla u. Mitarbo, 3. Med. Chem_o Ij3,. 244 (1976); ibid. 20, 253 (1977)].

Es wurde nun gefunden,, dass man durch die Ersetzung des in der 8-Stellung befindlichen Phenylalanine durch den Rest einer aliphatischen «-Aminocarbonsäure und durch das Einführen des Restes einer in der «-Stellung eine Aminooxygruppe enthaltenden Carbonsäure in die 1-Stellung der Peptidkette solche j^ngiotensin-II-kompetitive?) Inhibitoren herstellen kann, welche <^ie durch Angiotensin-II erzeugte Hypertension in vivo erheblich herabsetzen und diese Wirkung auch bei subcutaner Verabreichung ausüben könnerio

Die derartigen angiotensin-II-antagonistischen Peptide können durch die allgemeine Formel I

X-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Y (i)

worin X und Y die obenSgegebeneriBedeutungen haben,-. gekenn- zeichnet^ werden; sie werden im Sinn der Erfindung so hergestellt, dass man ein reaktionsfähiges Heptapeptidderivat der allgemeinen Formel II

H-Arg(A)-Val-Tyr|"B)-Ile-His(E)-Pro-Y~OG (il)

worin . . , .
A exne zum temporären Schutz des Guanidinorestes von Arg geeignete Schutzgruppe, vorteilhaft eine Nitro- oder Tosylg ruppe,

B eine zum temporären Schutz der aromatischen Hydroxylgruppe von Tyr geeignete Schutzgruppe, vorteilhaft eine Benzyl- oder substituierte,/ Benzylg ruppe»j

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COPY

E eine zum temporären Schutz der Imidazolgruppe von His geeignete Schutzgruppe, vorteilhaft eine Dinitrophenylgruppe^

G Wasserstoff oder eine zum Schutz der Carboxylgruppe der C-teminalen Aminosäure geeignete,: gegenüber schwach sauren Einflüssen widerstandsfähige, aber durch Behandeln mit stärkeren Säuren oder mit Alkalien abspnaltbare Schutz gruppe vftrten und

und

Y die oben angegebene Bedeutung hat,·

mit einem reaktionsfähigen Aminooxycarbonsäurederivat der allgemeinen Formel III

W-X-M (Hl)

worin

X die oben angegebene Bedeutung hat,*
W eine durch Acidolyse abspaltbare Schutzgruppe, vorteilhaft eine Benzyloxycarbonyl- oder terto-Butyloxycarbonylgruppe^und M eine Hydroxylgruppe oder eine an sich bekannte aktivierende Gruppe, vorteilhaft eine Pivaloyloxy-, Nitrophenoxy-, 2,3,5-Trichlo rphenoxy-, pentachlorphenoxy-, pentafluorphenoxy-, N-guccinxmidoxy- oder Azidogruppe. vere, umsetzt und von der erhaltenen Verbindung der allgemeinen Formel IV

W-X-Arg(A)-VaI-Tyr(B)-Ile-His(E)-Pro-Y-OG (iv)

worin Μ,Χ,Υ,Α^Ε und G die-obigen Bedeutungen haben, die Schutzgruppen selektiv nacheinander oder auf/einmal entfernt-*.

und gewünschtenfalls das erhaltene Peptid der allgemeinen Formel I in ein Säureadditionssalz oder einen Komplex überführt.

Die im erfindungsgemässen Verfahren als Ausgangsstoffe einsetzbaren reaktionsfähigen Heptapeptidderivate der allgemeinen Formel II können nach beliebigen^in der Peptidchemie üblichen Methoden,, z»B. nach der in der ungarischen Patentschrift No. 168 431^-tre rgestellt werden_o In diesem Herstellungs-

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GOPY

verfahren werden zum Schutz der funktioneilen Seitengruppen zweckmässig solche Schutzgruppen eingesetzt, welche unter den Bedingungen desf zum Abspalten der nach der Koppelungsreaktion zu entfernden Schutzgruppen durchgeführten Acidolyse stabil bleiben_o

Nach einer vorteilhaften Ausführungsweise des erfindung sgemässen Verfahrens wird zum temporären Schutz der Carboxylgruppe der C-terminalen Aminosäure die p-Nitrobenzylgruppe
(NB), zum Schutz der Hydroxylgruppe von Tyrosin die Benzylgruppe (BzI), zum Schutz des Imidazolrings von Histidin die Dinitrophenylgruppe (Dnp) und zum Schutz der Guanidinogruppe von Arginin die Tosylgruppe (Tos) eingesetzt. Die^iCSchutzgruppen sind gegenüber schwachen-Säuren stabil^ so kann die t~Butoxycarbonylgruppe (Boc) nach den Koppelungsreaktionen

ohne Schädigung depi genannten Schutzgruppen abgespalten werden,, Die Dinitrophenylgruppe kann dann durch Thilyse und die übrigen genannten Schutzg rupperv) mit flüssigem Fluorwasserstoff entfernt werdenq

Die erfindungsgemäss hergestellten Verbindungen der allgemeinen Formel I können nach an sich bekannten Methoden,.

vorteilhaft durch Ionenaustauschchromatographie an Carboxymethylcellulose, gereinigt werdeno Dabei werden die Produkte meistens in der Form von lyophilisierten Pulvern erhalten;
solche Produkte können unmittelbar zur Bildung von verschiedenen Salzen oder Komplexen eingesetzt werden.

Die antagonistischen Wirkungen der neuen Verbindungen der allgemeinen Formel I wurden an narkotisierten männlichen Katzen untersucht. Der Blutdruck der Tiere wurde an der Halsarterie gemesseno Die Untersuchungen wurden derart durchgeführt,dass in eine Schenkelvene Hypertensin in einer Dosierungsrate von 0,5 ,ug/kg/min infundiert wurdej, nachdem sich die
Blutdrucksteigerung stabilisiert hatte, wurde die zu unter-

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suchende Substanz in wässriger physiologischer Lösung-^ in einer einmaligen Dosp intravenös oder subcutan verabreicht, und dann wurde die durch den verabreichten Wirkstoff verursachte Verminderung des Blutdrucks gemessene

Die durch die intravenöse Verabreichung von verschiedenen neuen Verbindungen erfolgte Verminderung des Blutdrucks wird durch die in der Tabelle I zusammengefassten Daten gezeigto Diese Daten sind Durchschnittswerte von 6 Messungen^ mit Angabe der Streuung der Mittelwerte^, Zum Vergleich wurden auch die mit dem bekannten Saralasin, d_oh· l-(N-Methyl-glycinj- -5-L-valin-8-L-alanin-angiotensin~II unter den gleichen Bedingungen erhaltenen Werte angegeben_o

Tabelle I

Änderung des Blutdruckes nach i»v_o Verabreichung verschiedener Angiotensin-II-analoga unter i₀v₀ Infusion von Angiotensin-II

Wirkstoff

Veränderung des Blutdrucks (mmJHg) nach i.v. Dosen von

20 ,ug/kg

(Aminooxyacetyl , Leu J-Ang-II ~33jf3,!6 -42_+4,,2

"j Q

(D-«-Aminooxypropionyl', Leu )-

-Ang-II - -30+3,4 -38+3,8

(Aminooxyacetyl ,He )-Ang-II -28+2_βί0 -40+5,7

Saralasin - -41+2,5

Aus den Daten der obigen Tabelle ist ßs'eindeutig ersichtlich, dass sämtliche in der 1-Stellung durch einen eine «-Aminooxygruppe enthaltenden aliphatischen Carbonsäurerest substituiertenAngiotensin-II-Analoga sehr erhebliche blutdrucksenkende Wirkungen haben.» Die Höhe dieser Wirkung

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ist proportional jjiiet der Grosse der verabreichten Dosen,,

Die Untersuchungen wurden auch auf die in der Literatur nicht übliche subcutane Verabreichungsweise ausgedehnte In diesem Fall wurde der die zu untersuchende Substanz enthaltenden physiologischen Kochsalzlösung auch noch Carboxymethylcellulose oder Gelatine zugesetzto Die in der nachstehenden Tabelle II zusammengefassten Versuchsergebnisse sind Durchschnittswerte von an je fünf Tieren durchgeführten Messungen, wobei die Streuungen der Mittelwerte ebenfalls angegeben sindo Tabelle II

Wirkstoff Dose Zusatz Blutdrucksenjiung mm Hg, nach

zur 15 30 60 120

Lösung Minuten 15

(Aminooxyacetyl^X,

-21+5,8 -26+7,2 -13+9,4 -5+7,8

-23+2,0 -21+2,2 -10+2,8 -1+5,1

Leu⁸)-Ang-II	200	CMC
	200	GIt
(D-«-Amiποoxy- •j Q
propionyl ,Leu )-
-Ang-II	200	CMC
	200	GIt

-2U6,7 -24+5,7 -15jf5,_;1 -1+4,0 -24+5,7 -2l+5,i6 - 9^5,7 -3^8,8

CMC = Carboxymethylcellulose

GIt = Gelatine

Die Daten dieser Tabelle zeigen, dass die neuen Verbindungen bei subcutaner Verabreichung den experimentell hervorgerufenen hohen Blutdruck auch nach 60 Minuten noch erheblich verhindern·

Auf Grund dieser Eigenschaften können die erfindungsgemässen neuen Verbindungen^, sowie die physiologisch unbedenklichen Salze und Komplexe davon in der Therapie als blutdruck-

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senkende Mittel angewendet werden· Unter physiologisch unbedenklicher, Komplexen dieser neuen Peptide sind solche Verbindungen zu verstehen, welche durch die Zugabe von gewissen, z.B. organischen Stoffen entstehen und dem Wirkstoff eine retardierte Wirkung verleihen. Als solche komplexbildende Stoffe kommen z.Bo Gelatine, Carboxymethylcellulose, Alginsäureester, PoIyphloretinphosphate, Aminosäure-polymere,·« sowie andere Polymere und Copolymere in Betrachto Als physiologisch unbedenkliche Salze der neuen Peptide können die üblichen, pharmazeutisch anwendbaren Säureadditionssalze, z_oB. Acetate hergestellt werdeno

Die neuen Peptide^ sowie deren physiologisch unbedenkliche^ Salze und Komplexe werden in der Therapie in der Form von üblichen Arzneimittelpräparaten eingesetzt» Diese Präparate enthalten die neuen Verbindungen ftn -on zur enteralen oder parenteralen Verabreichung geeigneten anorganischen oder organischen Trägerstoffen_o Die Arzneimittelpräparate können in der Form von festen Lyophilisaten hergestellt werden? in diesem Fall kommen als Trägerstoffe verschiedene, mit den Peptiden nicht reagierende Verbindungen, wie z.B. Kohlenhydrate.in Betrachte Ferner kann man konzentrierte oder verdünnte Suspensionen oder Emulsionen als Arzneimittelpräparate herstellen, welche neben den üblichen flüssigen Trägerstoffen auch stabilisierende und konservierende HiIfstoffe enthalten«,

Solche Arzneimittelpräparate können in der Therapie

zur Behandlung von allen solchen Syndromen verwendet werden, »

in deren Atiologie ein erhöhter Renin-Blutspiegel eine Rolle spielt; sie können ferner als Diagnostika zu einer differenzierten Unterscheidung von Hypertensionen renaler Herkunft dieneno

Die Herstellung der erfindungsgemässen neuen Peptidej^ wire durch die nachstehenden Beispiele näher veranschaulichte Die

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in den Beispielen verwendeten Abkürzungen entsprechen den in der Fachliteratur üblichen Abkürzungen, vgl, CJ. Biol_o Chem», 247, 977 (1972). Die von «-Aminooxysäuren stammenden Gruppen werden durch ein dem üblichen Symbol der entsprechenden Aminosäure vorgesetzte^ "O* bezeichnet; so bedeutet z_oB. "OGIy" Aminooxyessigsäure "OALA" cc-Aminooxypropionsäure usw. Als weitere Abkürzung wird "PFP" für die Bezeichnung von Pentafluorphenyl verwendet«

Bei der Herstellung der verschiedenen Verbindungen wurde das Eindampfen von Lösungen immer mit dem Büchischen "Rotavapor"-Apparat durchgeführte Die Schmelzpunkte wurden mit dem Dr₀ Tottolischen Apparat (Büchi) bestimmte Die Dünnschichtchromatogramme, wurden auf^ "Kieselgel G nach Stahl" (E. Merck, DarmstadtJI Platten aufgenommen; zu der Entwicklung der Chromatogramme wurden die folgenden Lösungsmittelsysteme verwendet:

1) Athylacetat: (Pyridin-Essigsäure-Wasser 20:6:11) = 95 : 5

2.) Athylacetat; (Pyridin-Essigsäure-Wasser 20:6:11) = 90 : lO

3) Athylacetat: (Pyridin-Essigsäure-Wasser 20s6sli; = 80 : 20

4) Athylacetat: (Pyridin-Essigsäure-Wasser 20:6:11) = 70 : 30 5) n-Butanol: Essigsäure : Wasser =4:1:5

6) n-Butanol: Essigsäure : Pyridin s Wasser = 30 : 6 : 20 :

7) n-Butanol: Athylacetat : Essigsäure ι Wasser =1:1:1:1

Bei den angegebenen R_f-Werten ist das zur Bestimmung

(3) verwendete Lösungsmittelsystem jeweils angegeben, z_oB. R/ .

Die Papierelektrophoretischen Untersuchungen wurden in einem "LMIM* horizontalen Mittelspannungsapparat, auf "MN-214" Papier, in einer Pufferlösung von pH = 1,9 neben Glutaminsäure durchgeführte Die angewendete Stromspannung war 450 V* mit einer Zeitdauer von 3 Stunden_o

Die Dünnschichtchromatogramme wurden einerseits mit Ninhydrinlösung, andererseits nach der üblichen Chlorierung^ mit o-Tolidin-Oodkaliumlösung entwickelt,,

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Die Endprodukte wurden nach der folgenden allgemeinen Methode gereinigt; Zuerst wurden die mit Fluorwasserstoff gebildeten Salze der freien Peptide an "Sephacryl-S-200-Superfine^M-Harz (Hersteller: Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala, Schweden) durch Gradientelution mit 0,01 JA' (pH = 4,5) und 0,4 M (pH = 6,7; Ammoniumacetatlösungen gereinigt. Die Registrierung der Eluate erfolgte mit einem *LKB-Uvicord-II*-Apparat (Herstellers LKB, Uppsala, Schweden) mit Hilfe eines automatischen Fraktionerrsammlerso
Die weitere Reinigung der Haupt fraktion erfolgte an Carboxymethylcellulose in der folgenden Weise; 0,5 1 Carboxymethylcellulose (CMC-52) wurde^in einer Säule mit der ersten Pufferlösung ins Gleichgewicht gebracht,) dann wurde die Säule mit der Lösung von 0,5 g Peptid in 4 ml 0,01 ,M Ammoniumacetatlösung überschichtet und es wurde die Gradient-Elution mit

den oben angegebenen Pufferlösungen angefangene Die Strömungsgeschwindigkeit war 25 ml/Stunde; es wurden Fraktionen von je 10 ml aufgefangen und diese wurden mit dem LKB-Uvicord-II-Apparat registrierte Das gereinigte Endprodukt wurde durch Lyophilisierung der Hauptfraktion erhalten,, Beispiel 1;

(AminoxyacetSl , He )~Ängiotensin-II Schritt 1;

Boc-Arg(Tos)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)~Pro~Ile-ONB 4,5 g (15 mMol) He-ONB.HCl wurden in -50 ml Chloroform gelöst und mit 2,1 ml Triäthylamin und 3,81 g (10 mMol) Boc-Pro-OPFP versetzt· Nach 20 Minuten Rühren bei Raumtempera tur wurde die Lösung mit Wasser und dann mit wässrige r(lO StHV i Citronensäurelösung ausgeschüttelte Das nach dem Trocknen und Eindampfen der Lösung als Rückstand erhaltene geschützte Dipeptid ( R Λ ' = 0,8 ) wurde ohne Reinigung in 20 ml einer 8 yc Lösung von Salzsäure in Dioxan gelöst;

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- ier-

nach 10 Minuten wurde die Lösung mit wasserfreiem Äther verdünnt und eingedampft. Das als Rückstand erhaltene freie Dipeptid-hydrochlorid (R^ ^J = 0,44) wurde in 30 ml Chloroform gelöst, mit Triäthylamin auf-pH = 8^Hlgestellt und mit 8,8 g (15 mMol) Boc-His(Dnp)-OPFP versetzt» Nach 1,5 Stunden wurden 1,65 ml'Ν,Ν-Dimethylamino-äthylamin der Lösung zu-

n
gesetzt, und nach weitere« 15 Minuten wurde die Lösung mit 10 %-iger wässriger Citronensäurelösung, mit U Salzsäure, mit Wasser und mit 5 %-iger wässriger Natriumbicarbonatlösung in der angegebenen Reihenfolge ausgeschüttelte Dann wurde die organische Phase getrocknet und eingedampft und das als Rückstand erhaltene rohe geschützte Tripeptid

(l) \ uJw. rh-

( R/ = 0,.5OJ ohne Reinigung in 20 nu) 8 y\ Lösung von Salzsäure in Dioxan gelöst. Nach 15 Minuten wurde das auf diese Weise erhaltene freie Tripeptid ( R_f^⁴^ = 0,25) durch Zugabe von trockenem Äther gefällt,, abfiltriert und mit Äther gewasch n_o Das Produkt wurde dann sofort im Gemisch^

von 50 ml Chloroform und 20 ml Dimethylformamid gelöst^." eier pH-Wert der Lösung mit Triäthylamin auf eNgestellt'iu*ä dann wurden 6,0 g (15 mMol) Boc-Ile-OPFP zugesetzt. Nach 30 Minuten wurde das Lösungsmittel verdampft und durch Athylacetat ersetzt und die Lösung mit 10 %-iger wässriger Citronensäurelösung. dann mit Wasser ausgeschüttelto Das nach Trocknen und Eindampfen als Rückstand erhaltene, geschützte Tetrapeptid ( RΛ * = 0,65) wurde mit Hilfe eines 1s9-Gemisches aus n-Hexan und Äther isolierte Das erhaltene Produkt wurde in 25 ml einer 8m-Lösung von Salzsäure in Dioxan gelöst; nach 30 Minuten wurde das freie Peptid (Rf = 0,4l) durch Zugabe von trockenem Äther gefällt», abfiltriert, mit Äther gewaschen und anschliessend sofort in 70 ml l:l-Gemisch aus Chloroform und Dimethylformamid gelöst. Die Lösung wurde mit Triäthylamin auf pH = 8 eingestellt und mit 6,_;0 g (Il,i5 mMol) Boc-

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-Tyr(Bzl)-OPFP versetzto Nach 15 Minuten wurde das Lösungsmittel verdampft und durch Essigester ersetzt,- dann wurden 0,66 ml N,;N-Dimethylamino-äthylamin zugegeben», und nach weiteren 15 Minuten wurde das Gemisch mit l0-proz_o wässriger Citronensäure,, η-Salzsäure und zuletzt mit Wasser ausgeschüttelto Nach dem Trocknen und Eindampfen der organischen Phase wurde das geschützte Pentapeptid (R-Λ = 0,j59) mit Äther gefällt,, abfiltriert

Ii T f

mit Äther gewaschen und in 20 ml einer 8m-Lösung von Salzsäure in Dioxan gelösto Nach 15 Minuten wurde das erhaltene freie Pentapeptid (R^ ⁱ = 0,4) durch Zugabe von trockenem Äther gefällt,; abfiltriert, mit Äther gewaschen und sofort in 50 ml Dimethylformamid gelösto Die Lösung wurde mit Triäthylamin auf pH = 8 eingestellt und mit 4,62 g (12 mMol) Boc-Val-OPFP versetzte Nach einer Stunde wurde das Lösungsmittel abdestilliert und durch Chloroform ersetzt und die organische Lösung in der üblichen Weise mit 10-proz. wässriger Citronensäure, n-Salz-

06 SilSft.7 ' säure und Wasser ausgeschutteXfovTJze^abgetrennte organische Phase wurde getrocknet und eingedampft, der Rückstand wurde

mit Äther verrieben und abfiltrierto Es wurden auf diese Weise 12,4 g geschütztes Heptapeptid Boc-Arg(Tos)-VaI-Tyr(Bzl)·=· -Ile-His(6np)-Pro-Ile-0NB (80^d₀Th. auf die Ausgangsverbindung Boc-Pro-OPFP bef-eitin&i) erhaltene F. 189-192 ⁰C; Rr^²·' = 0,55.

Schritt 2:
Boc-OGly-Arg(Tos)-VaI-Tyr-Ile-His-Pro-Ile-OH

3,1 g (2 mMol) BGc~Arg(Tos)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp)- -Pro-Ile-ONB wurden'in 5 ml Dimethylformamid gelöst und die Lösung mit 2,|9 ml 2-Mercaptoäthanol versetzto Nach einer Stunde

wurde das Peptid durch die Zugabe von trockenem Äther gefällt,! abfiltriert,, mit Äther gewaschen und durch Umfallen aus

It

Methanol/Ather gereinigt«. Es wurden auf diese Weise 2,_;0 g (74 % d. Tho) Boc-Arg(Tos)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His-Pro-Ile-ONB

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■ίη-ιΓ-.i^ Γ.υ-f ioit:. Γ-, ..'eile 17:

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BAD ORIGINAL

(Rf = Ο,ιΐ) erhalten. Dieses Produkt wurde dann/30 ml des Gemisches Methanol-Essigsäure-Wasser 5:1:1 gelöst und mit 1,.O g IO %-iger Palladium-Aktivkohle versetzto Wasserstoffgas wurde 5 Stunden lang durch die Lösung geleitet, dann wurde der Katalysator attefiltriert, das Filtrat eingedampft und der

Rückstand mit Äther verriebene Es wurdelauf diese Weise 1,22 g (75 % d. Th.) partiell geschütztes Heptapeptid (Rr = 0,8) erhaltene Dieses Produkt wurde in 5 ml 8 -M" Lösung von SaIz-säure in Dioxan gelöst, und nach 20 Minuten wurde durch φί€ Zugabe von trockenem Äther das freie Heptapeptid (Rx = = 0,1) gefällte Das erhaltene freie Heptapeptid wurde ab-

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filtriert, mit Äther gewaschen und sofort in 15 ml Dimethylformamid aufgelöst· Der pH-Wert der Lösuhrpjmit Triethylamin auf 8 eingestellt und 0,45 g (1,2 mMol) Boc-OGly-OPFP wurden der Lösung zugesetzte Nach 30 Minuten w^rdtdas Reaktionsgemisch eingedampft, der Rückstand in 30 ml 3:1-Gemisch von Chloroform und Dimethylformamid gelöst und die Lösung mit 10 %-iger Citronensäurelösung und mit Wasser ausgeschüttelte Nach dem Trocknen und Eindampfen der Lösung wurde der Rückstand mit Athylacetat verrieben, abfiltriert und mit Athylacetat

gewaschene Es wurden auf diese Weise 0,46 g Boc-OGly-Arg(Tos)- -Val-Tyr-Ile-His-Pro-Ile-OH (72 % d. Th.) erhalten; (R_f'³' = 0.23; R_f'⁴^ = 0,40.
'Schritt 3:

Das Entfernen der Schutzgruppen

0,46 g (0,35 $Mol) Boc-OGly-Arg(Tos)-Val-Tyr-Ile-^,-ß-o-J,¹t- -OH wurden in 2 ml flüssigem Fluorwasserstoff gelöst und mit 0,5 ml Thianisol versetzt. Die Lösung wurde eine Stunde bei O C stehengelassen,) dann wurde das Peptid durch $ic€ Zugabe von Äther gefällt, abfiltriert und mit Äther gewaschene Es wurden 0*35 g (Aminooxyacetyl ,. He )-$ngiotensin-II~hydrofluorid (100 % d. Th.) erhalten; das'Produkt wurde in der

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oben (vor den Beispielen) angegebenen Weise gereinigte» Charakteristika des reinen Produkts: ί?Λ = 0,26; R_f = 0,,56; r/⁷^ = 0,57; E_Glu = 1,00.

Aminosäure-Analyse: Pro; 1,01 (l); VaI: 1,0 (l); He; 1,98 (2); Tyr: 0,65 (l); His; I₁O-(Dj Arg: 1,03 (l).

Beispiel 2:

(L-Ci-Aminooxypropionyl , He )-&ngiotensin-II Schritt 1:
Boc-OAla-Arg(Tos)-VaI-Tyr-Ile-His-Pro-He-OH

0,6 g (0,5 mMol) -Boc-Arg(Tos)-Val-Tyr-Ile-His-Pro- -He-OH (Beispiel 1, Schritt 2) wurden in 5 ml!-^slM"Lösung von Salzsäure in Dioxan aufgelöst; nach 20 Minuten wurde das erhaltene freie Peptid (Rf = 0,1) durch die Zugabe von trockenem Äther gefällt, filtriert und gewaschen. Das auf diese Weise isolierte Produkt wurde sofort in 20 ml Dimethylformamid gelöst, mit Triäthylamin auf pH = 8\gestellt und mit 0,7 g (1,9 mMol) Boc-OAla-OPFP versetzte Nach 30 Minuten wurde die Lösung eingedampft, der Rückstand iri 30 ml 3:1-Gemisch von Chloroform und Dimethylformamid gelöst und diese Lösung mit 10^-iger wässriger Cit ronensäurelösung und anschliessend mit Wasser ausgeschüttelte Die organische Phase wurde getrock-

net und eingedampft und der Rückstand mit AthyJacetat verrieben,

abfiltriert und mit Athylacetat gewaschen,, Es wurden 0,55 g Boc-QAla-ArgfTosj-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Ile-OH (84 % d. Th.) erhalten; R_f^ = 0_t43j R_f^⁵^ = 0,8O₀ Schritt 2s

Das Entfernen der Schutzgruppen

0,53 g (0,_;42 mMol) Boc-OAla-Arg(Tos)-Val-Tyr-He-His- -Pro-Ile-OH wurden in 2'inl flüssigem Fluorwasserstoff gelöst und mit 0,55 ml Thioanisol versetzt· Die Lösung wurde bei O ⁰C eine Stunde stehen gelassen, dann wurde das Peptid durch

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die Zugabe von trockenem Äther gefällt«, abfiltriert und mit »

Äther gewasc..en_o

Es wurden auf diese Weise 0,41 g (OAla · He )-fingiotensin-II erhalten; das Produkt wurde in der oben beschriebenen Weise gereinigt. R_f^⁵^ = 0.32,- R_f^ = O.,58; R_f^⁷^ = 0,59; ^EGlu = ¹^'⁰-

Aminosäure-Analyse: Pro: 1,0 (l)j Val·: 1»_:1 (l);

He: 2,02 (2); His: 0,9 (l); Tyr: 0,_;95 (l); Arg: 1..05 (l).

Beispiel 3:

(Aminooxyacetyl ,. Leu )-/angiotensin-II Schritt l·;

Boc-Arg(Tos)-VaI-Tyr(BzI)-Ile-His(Dnp)-Pro-Leu-ONB 4,2 g (12 mMol) Leu-ONB,.HBr wurden in-50 ml Chloroform gelöst, und dann wurden^ 1,68 ml Triethylamin und 3,81 g (10 mMol) Boc-Pro-OPFP der Lösung zugesetzt· Das Gemisch

r wurde 20-Minuten bei Raumtemperatur ge/ührt und anschliessend mit 10 %-iger wässriger Citronensäurelösung und mit Wasser ausgeschüttelte Die organische Phase wurde getrocknet und eingedampft,, das als Rückstande' erhaltene geschützte Dipeptid (R^ = 0,i8j ohne Reinigung in 20 m1> 8 JA Lösung von Salzsäure in Dioxan aufgelöst^ nach 10 Minuten wurde die Lösung mit trockenem Äther verdünnt und eingedampft. Das als Rückstand erhaltene freie Dipeptid (Rf = 0,56) wurde ohne Reinigung in 50 ml Chloroform gelöst*- die Lösung mit Triäthylamin. auf pH = 8 eingestellt und mit 8,8 g (15 mMol) Boc- -His(Dnp)-OPFP versetzt. Nach 30 Minuten wurden 1,;65 ml N,N- -Dimethylamino-äthylamin der Lösung zugesetzt und nach weiteren 10 Minuten wurde das Gemische mit 10 %-iger wässriger Citronensäurelösung, mit ,N Salzsäurelösung, mit wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung und mit Wasser in der angegebenen Reihenfolge ausgeschüttelt. Die organische Phase

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wurde getrocknet und eingedampft, das als Rückstand erhaltene geschützte Tripeptid (Rf = 0,;65) wurde ohne Reinigung in 25 ml '"a M Lösung von Salzsäure in Dioxan aufgelöst und das erhaltene freie Tripeptid (Rf = 0,47) durch .dieT Zugabe von trockenem Äther gefällt. Dieses Tripeptid wurde nach dem Ab-

filtrieren und Waschen mit Äther sofort im Gemisch von 50 ml Chloroform und 20 ml Dimethylformamid aufgelöst, die Lösung mit Triäthylamin auf pH - 8 eingestellt und mit 6,0 g (15 mMol) Boc-Ile-OPFP versetzt» Nach 30 Minuten wurde das Lösungsmittel-

verdampft und durch Athylacetat ersetzt, die Lösung mit 10-%-iger wässriger Citronensäurelösung, mit ,N'Salzsäurelösung und mit Wasser ausgeschüttelt,-die organische Phase getrocknet und eingedampfte» Das als Rückstand erhaltene geschützte Tetrapeptid (Rf = 0,65) wurde mit Hilfe eines 7:3-Gemisches von η-Hexan und AtheF isolierte Das erhaltene Produkt wurde in 25 ml/8 >f Lösung von Salzsäure in Dioxan aufgelöst; nach 15 Minuten wurde das freie Peptid (Rf = 0,65) durch οϋ€ Zugabe von trockenem Äther gefällt, abfiltriert, mit Äther gewaschen und anschliessend sofort in 50 ml l;l-Gemisch von Chloroform und Dimethylformamid aufgelöst. Die Lösung wurde mit Triäthylamin auf pH = Umgestellt und mit 6,0 g (11,5 mMol) Boc-Tyr- -OPFP versetzt. Nach 15 Minuten wurde das Lösungsmittel verdampft und durch Athylacetat ersetzt, dann wurden 0,66 ml Ν,Ν-Dimethylamino-äthylamin ^zugegeben und nach 15 Minuten wurde das Gemisch mit 10 %-iger wässriger Citronensäurelösung, mit ,N Salzsäurelösung und zuletzt mit Wasser ausgeschüttelt. Nach dem Trocknen und Eindampfen der organischen Phase wurde das geschützte Pentapeptid (Rf = 0,8)mit Äther isoliert und in 20 ml) 8 JM Lösung von Salzsäure in Dioxan aufgelöst.

Das erhaltene freie Pentapeptid (Rf = 0,,8) wurde durch die Zugabe von trockenem Äther gefällt, abfiltriert, mit Äther gewaschen und sofort in 50 ml Dimethylformamid gelöst. Die

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Lösung wurde mit Triäthylamin auf pH = abgestellt und mit 3,85 g (10 mMol) Boc-Val-OPFP versetzte Nach einer Stunde wurde das Lösungsmittel abdestilliert und durch Chloroform ersetzt* die organische Lösung in der üblichen Weise mit 10 %-iger wässriger Citronensäurelösung, mit .N'Salzsäure und mit Wasser ausgeschüttelt, und dann wurde das erhaltene geschützte Hexapeptid (Rf = 0,82) mit Hilfe von Äther isolierte Dieses Produkt wurde in 20 ml) 8 M Lösung von Salzsäure in Dioxan gelöst und nach 15 Minuten wurde das freie Hexapeptid (R^ = 0,55) durch ßi^e Zugabe von trockenem Äther gefällto Das freie -Hexapeptid wurde dann sofort in ml Dimethylformamid gelöst^*die Lösung mit Triäthylamin auf pH = 8 gestellt und mit 6,0 g (10 mMol) Boc-Arg(Toc)-OPFP versetzte Nach 30 Minuten wurde das Lösungsmittel abdestilliert

π —

und durch Chloroform ersetzt und diese Lösung mit N Salzsäure und mit Wasser ausgeschüttelt» Nach dem Trocknen und Eindampfen der Lösung wurde das erhaltene geschützte Heptapeptid Boc-Arg(Tos)-VaI-Tyr(BzI)-Ile-His(Dnp)-Pro-Leu-ONB (R,>"·' = 0,62) mit-Hilfe von Atha^ojfl isoliert,* Ausbeute: 7,5 g (50 %'d. Th.,.-auf die Ausgangsverbindung Boc-Pro-OPFP be.PAonnet-); F. 186-190 ⁰C.
' Schritt 2:

Boc-OGly-Arg(Tos)-VaI-Tyr-Ile-His-Pro-Leu-OH 3,j45 g (2„26 mMol) Boc-Arg(Tos)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His(Dnp) -Pro-Leu-ONB wurden in 10 ml Dimethylformamid gelöst, mit 6,6 ml 2-Mercaptoäthanol versetzt und nach 2 "Stunden wurde durch c^äre Zugabe von trockenem Äther das partiell geschützte

Heptapeptid gefällt· Nach Umfallen aus Methanol/Ather wurden 2,9 g gereinigtes Boc-Arg(Toc)-Val-Tyr(Bzl)-Ile-His-Pro- -Leu-ONB (93 % d. Th.) erhalten; R_f(²^ ₌ o,'l2j R_f^ = 0,26_o Dieses Produkt wurde im 5:1:1-Gemisch von Methanol, Essigsäure und Wasser gelöst, mit l_ti0 g 10 %-iger Palladium-

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/■Aktivkohle versetzt und Wasserstoffgas 6 Stunden lang in die Lösung geleitet. Nach Abfiltrieren des Katalysators wurde

" Yi t -

die Lösung eingedampft und der Rückstand mit Äther verarbeiteto Es wurden auf diese Weise 2,15 g Boc-Arg(Tos)-Val-Tyr- -Ile-His-Pro-Leu-OH (89 % d. Th.) erhalten; R_f(⁵' = 0,75;

1,1 g (1 mMol) des erhaltenen Produkts wurden in 10 ml«■·■·!■ 8 ^W Lösung von Salzsäure in DioxarYgelöst,\ nach 30 Minuten wurde das erhaltene frei« Heptapeptid (R_f^ ' = 0,08. ) durch jA±e" Zugabe von trockenem Äther gefällt, abfiltriert, mit

Athere gewaschen und sofort in 10 ml Dimethylformamid gelöst. Die Lösung wurde mit Triäthylamin auf pH = abgestellt und mit 0,54 g (1,5 mMol) Boc-OGly-OPFP versetzt. Nach 30 Minuten wurde die Lösung mit-30 ml Chloroform verdünnt und mit Wasser ausgeschüttelte Nach dem Troern und Eindampfen der Lösung wurde der Rückstand mit Athylacetat verrieben, abfiltriert

und mit Athylacetat gewaschene Es wurden auf diese Weise 1,% g Boc-OGly-Arg(Tos)-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Leu-OH (86 % d. Th.) erhalten; R_f ^v'³^ = 0,23; R '⁴^ = 0,40. Schritt 3:

Das Entfernen der Schutzgruppen

0,9 g (0.73 mMol) Bos-OGly-Arg(Tos)-Val-Tyr-Ile-His- -Pro-Leu-OH wurden in 5 ml flüssigem Fluorwasserstoff gelöst und mit 1,5 ml Thioanisol versetzt. Das Gemisch wurde 1,5 Stunden bei O ⁰C gehalten^ dann wurde das Peptid durch Zugabe von trockenem Äther gefällt, abfiltriert und mit Äther ge-

1 8 waschen» Es wurden auf diese Weise 0,55 g (OGly , Leu )- -ingiotensin-II (80 % d. Th.) erhalten. Das Produkt wuFde

( 5) auf die oben angegebenen Weise gereinigt; R^ ' = 0,33;

R_f(⁶' 2 0,60; R_f^⁷^ = 0,55; E_Qlu = 1,18.

Aminosäure-Analyse: Pro: 1,0 (l); VaI: 1,0 (l); He: 1,0 (l); Leu: 1,1 (1); His: 0,,95-(I); Arg: 1,0-(l);

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Tyr: 0,7 (l).

Beispiel 4:

(D-ö-Aminooxypropionyl , Leu )-_/4ngiotensin-II Schritt 1:

Boc-D-OAla-Arg(Tos)-VaI-Tyr-Ile-His-Pro-Leu-OH

1,1 g (1 mMol) Boc-Arg(Tos)-Val-Tyr-Ile-Hxs-Pro-Leu- -OH wurden in 10 ml·-8 M Lösung von Salzsäure in Dioxan gelöst und nach 30 Minuten wurde das freie Peptid durch dire

Zugabe von trockenem Äther gefällt,, abfiltriert und mit

Äther gewaschen· Das Produkt wurde sofort in 10 ml Dimethyl-

1.1 Mi (

formamid gelöst,, die Lösung mit Triäthylamin auf pH = 8 eingestellt und mit 0,56 g (1,5 mMol) Boc-D-OAla-OPFP versetzt. Nach 30 Minuten wurde die Lösung mit Chloroform verdünnt und mit Wasser ausgeschüttelt«. Nach dem Trocknen und Eindampfen der Lösung wurde der Rückstand mit Athylacetat verrieben, abfiltriert und mit Athylacetat gewaschen_o Es wurden auf diese Weise 0,95 g Boc~D-OAla-Arg(Tos)-Val-Tyr- -Ile-His-Pro-Leu-OH (77 % d. Th.) erhalten; R_f'⁴< = 0_tl29_e Schritt 2:

Das Entferner, der Schutzgruppen

0,,95 g (0,77 mMol) Boc-D-OAla-Arg(Tos)~Val-Tyr-Ile- -His-Pro-Leu-OH wurden in 4 ml flüssigem Fluorwasserstoff gelöst und mit 1,2 ml Thioanisol versetzt· Die Lösung wurde 1,5 Stunden bei O ⁰C gehalten, dann wurden'das Produkt durch die Zugabe von trockenem Äther gefällt,; abfiltriert und mit

U 1

Äther gewaschen_o Es wurden auf diese Weise 0,6 g (D-OAla—, Leu )-^ngiotensin-II (⁹⁰ % do Th.) erhalten, welches dann auf die oben beschriebene Weise gereinigt wurde· Κ/⁵) = 0,33; R_f(⁶) = 0,61; R_f^⁷⁾ = 0,56; E_Glu = l,l0_o Aminosäure-Analyse? Pro: 1,02 (l); VaI: 1,0 (l); Leu: 1,02 (l); He: 1,03 (l); His: 1,01 (l)j Arg: 0,92 (l); Tyr; 0,8 (l).

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Claims

DJpL-Ch_6nLDR-PETER WACSBRPATENTANSPRÜCHE 2 8 3 1 5 3 A

Patentanwalt

MÜNCHEN 5, MoraBBtoto.8/n Telefon 223792

Ι©)Peptide der allgemeinen Formel I

J X-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Y (i)

worin

X den Rest einer in der «-Stellung eine Aminooxygruppe enthaltenden aliphatischen Carbonsäure,,DesondenS eine Aminooxyacetyl- oder «-Aminooxypropionylgruppe, und

/ f. ι -

Y den Rest einer aliphatischen «-Aminocarbonsäure, besonder^

eine Leucyl-, Isoleucyl-, Alanyl- oder Threonylgruppe, bedeuten,: sowie Säureadditionssalze und Komplexe davon» 2o OGly-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Leu-OH.

3. OAla-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Leu-OH.

4. OGly-Arg-VaI-Tyr-Ile-His-Pro-Ile-OH. 5o OAla-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Ile-OH.

6_O Verfahren zur Herstellung von Peptiden der allgemeinen Formel I

X-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro-Y (i)

worin
X den Rest einer in der «-Stellung eine Aminooxygruppe enthaltenden aliphatischen Carbonsäure,; Desondera eine Aminooxyacetyl- oder «-Aminooxypropionylgruppe und

' l'ii,-

Y den Rest einer aliphatischen «-Aminocarbonsäure, Desondera eine Leucyl-, Isoleucyl-, Alanyl- oder Threonylgruppe

bedeuten, sowie von Säureadditionssalzen und Komplexen solcher Peptide,; dadurch gekennzeichnet, dass man ein reaktionsfähiges Heptapeptidderivat der allgemeinen Formel II

H-Arg(A)-Val-Tyr(B)-Ile-His(E)-Pro-Y-OG (il) worin , , ,

A eine zum temporären Schutz des Guanidinorestes von Arg geeignete Schutzgruppe,: vo eine Nitro- oder Tosylgruppe,!

B eine zum temporären Schutz der aromatischen Hydroxylgruppe

l>» 4 fco i Cn βί trt

von Tyr geeignete Schutzgruppe, vo-rt-eitiftei+ eine Benzyl-

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oder substituierte Benzylgruppe,

E eine zum temporären Schutz der Imidazolgruppe von His geeignete Schutzgruppe, ve-Ptei-l-ha-ft- eine Dinitrophenylgruppe,
G Wasserstoff oder eine zum Schutz der Carboxylgruppe der C-terminalen Aminosäure geeignete, gegenüber schwach sauren Einflüssen widerstandsfähige, aber durch Behandeln mit stärkeren Säuren oder mit Alkalien abspaltbare Schutzgruppe -t- und
Y die oben angegebene Bedeutung hat, mit einem reaktionsfähigen Aminooxycarbonsäurederivat der allgemeinen Formel III

W-X-M (Hl)

worin
X die oben angegebene Bedeutung hat,, Uhj(

W eine durch Acidolyse abspaltbare Schutzgruppe, (.ie. re
Jxai-t eine Bertzyloxycarbonyl- oder terto-Butyloxycarbonylgruppe^Jnd

M eine Hydroxylgruppe oder eine an sich bekannte aktivierende Gruppe, eine Piv^loyloxy-, Nitrophenoxy-, 2,_;3,;5~Trichlorphenoxy-, ^entachlorphenoxy-, p^entafluorphenoxy-, N-auccinimidoxy- oder Azidogruppe ve-r-

umsetzt und von der erhaltenen Verbindung der allgemeinen Formel IV

W~X-Arg(A)-Val-Tyr(B)-Ile-His(E)-Pro-Y-OG worin W, X, Y* Α,'Έ und G die obigen Bedeutungen haben, die Schutzgruppen selektiv nacheinander oder auf einmal entfernt^*

und gewunschtenfalls das erhaltenen Peptid der allgemeinen Formel I in ein Säureadditionssalz oder einen Komplex überführt,

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