JPS5835504B2 - ペプチド及びその製法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はアンギオテンシン■拮抗作用を有する一般式（
Ｉ）： Ｘ −Ａｒｇ −Ｖａｌ −Ｔｙｒ −Ｉ ｌｅ −Ｈ
ｌｓ−Ｐｒｏ −Ｙ（Ｉ） の新規ペプチド及びその製法に関する。

一般式（Ｉ）において、Ｘはアミノオキシアセチル基又
はα−アミノオキシプロピオニル基を表わし、Ｙはロイ
シル基又はインロイシル基を表わす。

一般式（Ｉ）を有するペプチドの酸付加塩も本発明の範
囲内にある。

アンギオテンシン■は、昇圧作用を有するオクタペプチ
ドである。

生体中で、アンギオテンシンＩは腎臓から放出されるレ
ニンと言われる酵素により肝臓で生成するα−グロブリ
ンから製造される。

この化合物は生体中でアンギオテンシン■に変わる。

１９７０年に初めて、最初のアンギオテンシン■類似体
が報告された。

この化合物は生体内及び試験管内試験でアンギオテンシ
ン■の特異的拮抗阻害剤として作用することが判明して
いる〔Ｇ。

Ｒ，Ｍａｒｓｈａ１１等＊ Ｐｒｏｃ−Ｎａｔｌ 、Ａ
ｃａｄ、 Ｓｃｉ 。

ＵＳＡ６７巻１６２巻貝６２４頁０）；Ｐ、Ａ。

Ｋｈａｉｒｒａｌａｈ等ｓ Ｊ、Ｍｅｄ、 Ｃｈｅｍ、
１３巻１８１頁（１９７０）。

この観察は多数の研究者に広範な興味をもたらし、拮抗
作用を有し、従ってレニンに左右される高血圧の診断又
は治療に使用しうる新規アンギオテンシン■類似体を合
成し、観察するよう刺激した。

研究の極めて初期に、８フエニルアラニン残基が脂肪族
側鎖を有するアミノ酸で置換された同族体がこの目的に
極めて有望な化合物であることが判明した。

即ち、アンギオテンシン■分子の構造をこのように変化
させると、実察に基本作用（ａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａ
ｃｔｉｖｉｔｙ ）が消失＊＊し、強い拮抗作用が発現
する（ Ｄ 、 Ｇ ａｇｎｏｎ等；Ｂ ｒ 、 Ｊ
、 Ｐｈａｒｍａｃｏｌ 、、４３巻４０９頁（１９７
１）Ｄ、 Ｔ、Ｐａ１ｓ等：Ｃ１ｒｃ、Ｒｅｓ、２９巻
６６４頁（１９７１））。

拮抗作用は、８−位で変性を行なうと共に、■−アスパ
ラギン酸残基がＳａｒ単位で置換されている場合に著し
く増加する〔Ｄ、Ｔ。

Ｐ ａｌｓ等；Ｃ１ｒＣ０Ｒｅｓ０．２９巻６７３頁（
１９７１）〕。

この方法で製造された（Ｓａｒ’、Ａｌａ８）−アンギ
オテンシン■は既に市販されている。

この化合物の有利な性質は生体内酵素分解が少なく、受
容体への親和性が高いことである。

アンギオテンシン■の拮抗性類似体は、レニンに依存す
る高血圧の診断及び若干の場合には治療に使用しうると
考えられている（ Ｄ、 Ｇａｎｔｏｎ及びｒ Ｆ、
Ｇｒｏｓｓ ： Ｍｅｄ、に１ｉｎ、、７１巻２０４３
頁（１９７６） ； Ｊ、Ｌ、Ｍａｒｘ ： ５ｃｉｅ
ｎｃｅ１９４巻８２１頁（１９７６） ： Ｐ、 Ｎｅ
ｅｄｅｌｍａｎ及びＧ。

Ｒ，Ｍａｒｓｃｈａｌｌ ： Ｆｅｄ、 Ｐｒｏｃ 、
３５巻２４８６頁（１９７６））。

現在までに製造されたアンギオテンシン■類似体の構造
及び生物学的活性を比較して、基本作用−拮抗作用の解
明に関し若干の極めて重要な情報が提供されたＣ Ｍ、
Ｃ，Ｋｈｏｓｌａ等二” Ｈａｎｄｂｏｏｋｏｆ
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇ
ｙ”３７巻、１、Ｈ，及びＰ、Ｍ、Ｂｕｍｐｕｓ ｅ
ｄｓ、１９７４ ： Ｑ。

ＲｏＭａｒｓｈａｌｌ ： Ｆｅｄ 、Ｐｒｏｃ 、
３５巻２４９４頁（１９７６）、ｌ。

本発明者の研究の中心には、不所望な副作用がなく、生
物学的半減期の長い新規拮抗剤の製造がある（ Ｍ、
Ｃ、Ｋｈｏｓ ｌａ等； Ｊ、Ｍｅｄ、Ｃｈｅｍ、 １
９巻２４４頁（１９７６）；同文献２０巻２５３頁（１
９７７））。

ところで、アンギオテンシン■の分子中の８フエニルア
ラニン残基を脂肪族α−アミノ酸残基で代え、同時に脂
肪族α−アミノオキシ酸残基を１位に結合すると、新規
アンギオテンシン■拮抗阻害剤が得られ、このものはレ
ニンによって誘起された高血圧を生体内試験で皮下投与
の場合でも、著しく低下させることが判明した。

本発明によれば、一般式（ＩＩ）、 （式中、Ｙは前記の意味を有する） で示される反応性へブタペプチド誘導体を、式（ＩＩＩ
）、 一般 Ｂｏｃ−Ｘ−ＯＰＦＰ （■）＊ ＊（式中、Ｘは前記の意味を有する） で示される反応性アミノオキシ酸誘導体と反応させ、こ
うして得た一般式（ＩＶ）、 （式中、Ｘ及びＹはそれぞれ前記の意味を有する）で示
される化合物から保護基を選択的に、順次又は同時−反
応工程で脱離されることによって、一般式（Ｉ）、 Ｘ−Ａｒｇ−Ｖａｌ −Ｔｙｒ −Ｉ ｌｅ −Ｈｌｓ
−Ｐｒｏ−Ｙ（Ｉ） （式中、Ｘ及びＹは前記の意味を有する）で示される化
合物を製造し、こうして得た一般式（Ｉ）の化合物を必
要に応じてその酸付加塩に変える。

前記の式において、’ｌ’ｏｓはトシル基、Ｂｚｌはベ
ンジル基、Ｄｎｐはジニトロフェニル基、ＮＢはｐニト
ロベンジル基、１３０ｃはｔ−ブトキシカルボニル基を
意味する。

本発明の化合物の合成に原料として使用しうる一般式（
ｎ）の反応性へブタペプチド誘導体は、ペプチド化学に
公知の任意の方法で製造される。

適当な方法は、例えばハンガリー特許第 １６８４３１号明細書に記載されている。

この方法によれば、側鎖の官能基は、結合波保護基を除
去する際に行なわれるアシドリシスの条件下で安定な基
で保護される。

これらの保護基はすべて緩和な酸性条件下で安※※定で
あり、従ってこれらの基を脱離する危険なく、Ｎ−末端
ｔ−ブトキシカルボニル基（Ｂｏｃ）を除去することが
できる。

ジニトロフェニル基の除去はチオリシスによって行なわ
れ、残りの保護基は弗化水素によって脱離することがで
きる。

一般式（Ｉ）の化合物は、自体公知の方法で、特にカル
ボキシメチルセルロースイオン交換体クロマトグラフィ
ーによって精製することができる。

この方法により、この化合物は凍結乾燥粉末として得ら
れ、これを容易に種々の塩又は錯体に変えることができ
る。

一般式（Ｉ）の化合物の拮抗作用を麻酔した雄猫につい
て試験した。

血圧を頚動脈で測定した。この試験は外側大腿静脈中に
０．５μ？／ｋｇ／分の速度でハイパーテンシン（ｈｙ
ｐｅｒｔｅｎｓｉｎ ）（ＣＩ ＢＡ ）を注入するこ
とによって実施した。

血圧の上昇が安定したら、試験化合物の生理学的又は賦
形剤含有水溶液及びサララシン（５ａｒａｌａｓｉｎ）
を１回静脈注射又は皮下注射により投与し、血圧の低下
を測定した。

第１表には、試験化合物の静脈内投与の影響下での動脈
血圧の低下を説明する。

比較のため、サララシンを使用した。

第１表に示したデータは、６回の実験の結果の平均値を
計算して得たものである。

誤差限界は主値の散乱を示す。第１表に示したデータか
ら明らかなとおり、１位カ脂肪族α−アミノオキシ酸で
置換されたアンギオテンシン■類似体はすべて顕著な血
圧降下作用を有する。

作用の程度は使用した投与量に比例する。

皮下投与の場合についても試験を実施した。

アンギオテンシン■又はその類似体に関するこの投※※
与法は以来文献に記載されていない。

皮下投与には、試験すべき化合物を含む生理食塩溶液に
それぞれカルボキシメチルセルロース及びゼラチンを加
えた。

５種の別個の試験の平均である結果を下記の第２表に示
す。

上値に関連して誤差限界を示す。

前記のデータによれば、皮下注射された本発明の新規化
合物は、故意に誘起された高い血圧を投与後６０分でさ
え顕著に降下させる。

本発明によるペプチド並びにその医薬として許容しうる
塩は、常用の医薬組成物の形で薬用に供される。

医薬として許容しうる塩としては、常用の、医薬として
許容しうる酸付加塩、例えば酢酸塩を使用する。

医薬組成物は、本発明による化合物を腸内投与又は非経
口投与に適当な有機又は無機賦形剤と混合して含む。

従って医薬組成物は固体親液性物質として処方され、ペ
プチドと反応しない種々の不活性化合物、例えば炭水化
物を賦形剤として使用することができる。

医薬組成物を希薄又は濃厚懸濁液又は乳剤として処方す
る場合、種々の保存剤及び安定剤をも含む。

本発明による化合物を含む医薬組成物は、腎性高血圧の
鑑別診断並びに上昇した腎血圧に帰因するすべての症候
群の治療のため使用することができる。

次に、実施例に基づいて本発明を詳述するが、本発明は
これに限定されるものではない。

実施例で使用する略記号は文献に一般に使用されている
ものに相当する（ Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２４７巻
、９７７頁（１９７２））。

α−アミノオキシ酸は、問題のアミノ酸に相当する記号
の前に０″を記入して示す。

従って、例えば０Ｇｌｙはアミノオキシ酢酸を表わし、
０Ａ１ａはα−アミノオキシプロピオン酸を表わす。

更に記号ＰＰＰはペンタフルオルフェニル基を表わし、
２はカルボメトキシ基を表わす。

本発明による工程の間、蒸発は通常ビュツチのロタヴエ
イパー（Ｂｉｉｃｈｉ Ｒｏｔａｖａｐｏｒ）装置で
実施する。

融点はドクター・トラトリ（Ｄｒ。Ｔｏｔｔｏｌｉ ）
の装置（ビュツチによって作成）で測定した。

薄層クロマトグラフィーは、′キーモルゲル・ナツハー
シュタール（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ｎａｃｈＳｔａｈ
ｌ ） ”型シリカゲルプレート（工・メルク社、ダル
ムシュタット在）で実施した。

クロマトグラムは下記の溶剤混合物によって展開した：
１、酢酸エチル：（ピリジン／酢酸／水の２０二６：１
１混合物）＝９５：５ ２、酢酸エチル：（ピリジン／酢酸／水の２０：６：１
１混合物）＝９０：１０ ３、酢酸エチル：（ピリジン／酢酸／水の２０：６：１
１混合物）＝８０：２０ ４、酢酸エチル：（ピリジン／酢酸／水の２０二６：１
１混合物）＝７０：３０ ５、 ｎ−ブタノール／酢酸／水の４：１：５混合物 ６、 ｎ−ブタノール／酢酸／ピリジン／水の３０：
６ ： ２０ ： ２４混合物 ７、 ｎ−ブタノール／酢酸エチル／酢酸／水のｌ：
１：１：１混合物 実施例において、Ｒｆ値を示す場合には、前記溶剤系の
番号を併記する。

Ｆ紙電気泳動法は、ＬＭＩＭ中電圧水平装置中でグルタ
ミン酸の他にｐＨ＝１．９の緩衝液を用いてＭＮ２１４
Ｐ紙で実施した。

電圧４５０Ｖ、時間３時間。

薄層クロマトグラムは一部はニンヒドリン溶液で、一部
はＯ−） １，１ジン−ＫＪ浴溶液用いて行なう常用の
塩素化法で展開した６ 最終生成物は、下記のようにして精製した。

遊離ペプチドと弗化水素との塩を、”セファクリル・Ｓ
−２００スパーフアイア （５ｅｐｈａｃｒｙｌＳ −
２００５ｐｅｒｆｉｎｅ ）”樹脂〔スウエーテン、ウ
プサラのファルマシア、ファインケミカル（Ｐｈａｒｍ
ａｃｉａ １Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ） ）
上で、０．０１Ｍ酢酸アンモニウム溶液（ｐＨ＝ ４．
５ ）、及び次に０．４Ｍ酢酸アンモニウム溶液（ｐＨ
＝６．７）を用いて行なう傾斜溶離法で精製した。

溶離液を自動フラクション捕集器を用いて゛ＬＫＢユヴ
イコード（Ｕｖｉｃｏｒｄ ） ＩＩ ”装置（ＬＫＢ
１スウェーデン、ウプサラ）によって記録した。

主フラクションを更に下記のようにして精製した。

カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ−５２）カラム０
．５ Ｊを前記の第一の緩衝液と平衡させた。

ペプチド０．５１を０．０１Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液
Ａｒｎ１中に溶かした。

得られた溶液をカルボキシメチルセルロースカラム上に
重層した。

０．０１Ｍ酢酸アンモニウム溶液１．５１を傾斜攪拌機
で０．４Ｍ酢酸アンモニウム溶液１．５１と混合し、傾
斜溶離を実施した。

流動速度を２５ｍ１／時に調節し、フラクション１０ｍ
１を集めた。

カラムを出る溶離液をＬＫＢユヴイコード・■装置で連
続的に記録した。

主フラクションを凍結乾燥することによって、精製され
た最終生成物を得た。

例１ （アミノオキシアセチル１、■１ｅ８）−アンギオテン
シン■ 工程１ Ｂｏｃ −Ａｒｇ （Ｔｏｓ ）−Ｖａｌ −Ｔｙｒ
（Ｂｚｌ ） −Ｉ ｌｅＨｉｓ （Ｄｎｐ ） −Ｐ
ｒｏ −Ｉ ｌｅ −０ＮＢＩ ｌｅ −０ＮＢ
４．５ ｆ！（１５ミリモル）をクロロホルム５０ｒｎ
ｌに溶かし、この溶液にトリエチルアミン２．１ ｍｌ
及びＢｏｃ−Ｐｒｏ −０ＰＦＰ ３．８１ ？（１
０ミｌ、）モル）を加える。

反応混合物を室温で２０分攪拌し、その抜水及び１０％
クエン酸水溶液と共に振盪する。

乾燥し、蒸発した後、得られた、保護されたペプチド（
Ｒｆｌ−０，８）を直ちにジオキサン中の塩酸の８Ｍ溶
液２０ｍ１に溶かす。

溶液を１０分間放置し、乾燥エーテルで希釈し、蒸発さ
せた。

こうして得た遊離ジペプチド塩酸塩（Ｒｆ３＝０．４４
）をクロロホルム３０１１Ｌｌに溶かし、トリエチルア
ミンでｐＨ値を８に調節し、ＢｏｃＨｉｓ （Ｄｎｐ
） −０ＰＦＰ ８．８ ？ （１５ミリモル）を加
える。

１時間半後、Ｎ−Ｎ−ジメチルアミノエチルアミン１．
６５ｍ１を溶液に加え、１５分後反応混合物を１０％ク
エン酸水溶液、ＩＮ塩酸水溶液、水及び最後に５％炭酸
水素ナトリウム水溶液と共に振盪する。

乾燥し、蒸発した後、得られた保護されたトリペプチド
（Ｒｆ’ ＝０．５０ ）を単離せずにジオキサン中の
塩酸の８Ｍ溶液２０ｍ１に溶かし、乾燥エーテルを添加
して、遊離トリペプチド（Ｒｆ’＝０．２５）を沈殿さ
せる。

得られた沈殿を戸別し、エーテルで洗浄する。

その後、これをクロロホルムｓｏｍｌとジメチルホルム
アルデヒド２０７１Ａ’との混合物中に直ちに溶かし、
トリエチルアミンによりｐＨを８に調節し、この溶液に
ＢｏｃＩ １ｅ−ＯＰＦＰ６．０ ？ （１５ミリモル
）を加える。

３０分後、溶剤を酢酸エチルに代え、混合物をｉｏｏ％
クエン酸水溶液、１Ｍ塩酸水溶液及び最後に水と共に振
盪する。

この有機溶液を乾燥し、その後蒸発して、保護されたテ
トラペプチド（Ｒｆ２＝０．６５）を得る。

これを次にエーテルとｎ−ヘキサンとの１：９混合物を
用いて単離する。

これをジオキサン中の塩酸の８Ｍ溶液２５ｍ１中に溶か
し、３０分後乾燥エーテルにより遊離テトラペプチド（
Ｒｆ’＝０．４１ ＞を沈殿させる。

沈殿を戸別し、エーテルで洗浄する。

これを直ちにジメチルホルムアミドとクロロホルムとの
１：１混合物（７０ｍ７）中に溶かし、溶液のｐＨをト
リエチルアミンで８に調節し、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ （Ｂｚ
ｌ ） −０ＰＦＰ６．ｏｆ（１１，５ミリモル）を加
える。

溶液を１５分間放置し、溶剤を酢酸エチルで代える。

Ｎ−Ｎ−ジメチルアミノエチルアミン０．６６ｍ１を加
え１．１５分後混合物を１０％クエン酸水溶液、１Ｍ塩
酸水溶液及び最後に水と共に振盪する。

乾燥し、蒸発すると、保護されたペンタペプチド（Ｒｆ
２＝０．５９ ）が生じる。

これをエーテルで沈殿させ、戸別し、エーテルで洗浄す
る。

これをジオキサン中の塩酸の８Ｍ溶液２０ｙｒｔに溶か
し、１５分間放置する。

遊離ペンタペプチド（Ｒｆ４−０．４）を乾燥エーテル
で沈殿させ、戸別し、エーテルで洗浄する。

これを直ちにジメチルホルムアミド５０ｍ１に溶かし、
溶液のｐＨをトリエチルアミンで８に調節し、Ｂ ｏｃ
−Ｖａｌ −０ＰＦＰ ４．６２ ？（１２ミリモル
）を加える。

１時間後、溶剤をクロロホルムに代え、溶液を１０％ク
エン酸水溶液、オ＊ＩＭ塩酸水溶液及び最後に水と共に
振盪する。

混合物を乾燥し、蒸発し、生ずる保護されたヘキサペプ
チド（Ｒｆ２＝０．５６ ）をエーテルを用いて単離し
、エーテルで洗浄する。

生成物をジオキサン中の塩酸の８Ｍ溶液２０ｍ１に溶か
し、遊離へキサペプチド（Ｒｆ’＝０．４７）を乾燥エ
ーテルで沈殿させる。

沈殿を戸別し、エーテルで洗浄する。これを直ちにジメ
チルホルムアミド５０ｒＩｌｌ中に溶かし、溶液のｐＨ
値をトリエチルアミンで８に調節する。

Ｂｏｃ −Ａｒｇ （Ｔｏｓ ） −０ＰＦＰ ７．２
ｆ！ （１２ミＩＪモル）を加え、混合物を１時間攪
拌し、溶剤をクロロホルムに代える。

得られた溶液を１０％クエン酸水溶液、ＩＮ塩酸水溶液
及び最後に水と共に振盪する。

乾燥し、蒸発した後、残分をエーテルと擦合せて、相応
する保護されたヘプタペプチド１２．４Ｐ（理論量の８
０％）を得る。

融点１８９〜１９２℃；Ｒｆ２＝０．５５゜ 工程２ Ｂｏｃ−ＯＧｌｙ−Ａｇｒ（Ｔｏｓ） −Ｖａｌ −Ｔ
ｙｒ−Ｉ ｌｅ−Ｈｉ ｓ −Ｐ ｒｏ −Ｉ ｌｅ
−ＯＨ１３ｏｃ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ ） −Ｖａｌ −
Ｔｙｒ （Ｂｚｌ ） −Ｉ １ｅ−Ｈｉｓ （Ｄｎｐ
） −Ｐｒｏ−Ｉ １ｅ−（）ＮＢ ３．１ ｆ？
（２ミリモル）をジメチルホルムアミド５ｍｌに溶かし
、２−メルカプトエタノール２．９ ｍｌを加える。

１時間後、ペプチドを乾燥エーテルで沈殿させ、濾過し
、エーテルで洗浄し、メタノールに溶解し、そしてエー
テルで沈殿せしめて精製する。

ＢｏｅＡｒｇ （Ｔｏｓ ） −Ｖａｌ −Ｔｙｒ （
Ｂｚｌ ） −Ｉ ｌｅ−ＨｉｓＰｒｏ −Ｉ １ｅ
−０ＮＢ２． Ｏｆ？ （７０％）を得る（Ｒｆ２＝ｏ
、ｉ）。

生成物をメタノール、酢酸及び水の５：１：１混合物３
０ｍ１中に溶かし、１０％パラジウム黒触媒１．０ｆＩ
を加える。

その後、水素を５時間溶液に吹き込み、触媒を戸去し、
溶液を蒸発させ、エーテルと擦り合せる。

式；の部分的に保護されたヘプタペプチド１．２２Ｐ（
７５％）が得られる。

Ｒｆ５＝０．８゜得られた生成物０．６１をジオキサン
中の塩酸の８Ｍ溶液５１ｒＬｌ中に溶かし、２０分攪拌
した後、遊離へブタペプチド（Ｒｆ’＝０．１ ）を戸
別し、エーテルで洗浄する。

これを直ちにジメチルホルムアミド１５ｒｒＬｌに溶か
し、トリエチルアミンでｐＨ値を８に調節し、Ｂｏｃ
−０Ｇ１ｙ −０ＰＦＰ ０．４５ ？ （１，２ミ
リモル）を加える。

３０分後、反応混合物を蒸留し、残分ヲクロロホルムと
ジメチルホルムアミドとの３：１混合物３０ｒｒＬｌ！
中に溶かし、溶液を１０％クエン酸水溶液及びその抜水
と共に振盪する。

抽出液を乾燥し、蒸発し、残分を酢酸エチルと擦合せる
。

沢過し、エーテルで洗浄した後、Ｂ ｏｃ −ＯＧ ｌ
ｙＡｒｇ （Ｔｏｓ ） −Ｖａｌ −Ｔｙｒ −Ｉ
ｌｅ −Ｈｌｓ −Ｐｒｏ −１１ｅ −ＯＨＯ，４６
？ （７２％）が得られる。

Ｒｆ！ ３＝０．２３ ；Ｒｆ’＝０．４００ 工程３ 保護基の除去 Ｂｏｃ−ＯＧｌｙ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ ） −Ｖａｌ
−Ｔｙｒ −Ｉ ｌｅ −Ｈｌｓ−Ｐｒｏ −Ｉ ｌｅ
−ＯＨＯ，４６？ （０，３５ミリモル）を液体弗化
水素２ｍｌに溶かし、チオアニソール０．５ ｍｌを加
える。

溶液を０℃で１時間放置し、ペプチドをエーテルで沈殿
させ、濾過し、エーテルで洗浄する。

生成物０．３５Ｐ（１００％）が得られる。

得られた弗化水素塩を前記のように精製する。

（アミノオキシアセチル１、ｌ１ｅ８）−アンギオテン
シン■類似体の特性は下記のとおりである。

Ｒｆ５＝０．２６ ：Ｒｆ６＝０．５６ ： Ｒｆ７＝
０．５７：ＥＧ １ｕ＝ １．００゜アミノ酸分析：
Ｐｒｏ ： １．０２（１）、Ｖａｌ ： １．０（１
）、Ｉｌｅ ： １．９８（２）、Ｔｙｒ ： ０．６
５ （１）、Ｈｉｓ ： １．０（１）、Ａｒｇ： １
．０３（１）。

例２ （Ｌ−α−アミノオキシプロピオニル１、ｌ１ｅ８）ア
ンギオテンシン■ 工程Ｉ Ｂ ｏｃ −ＯＡ ｌａ −Ａｒｇ （Ｔｏｓ ）−Ｖ
ａｌ −Ｔｙｒ−１１ｅ−Ｈｉｓ −Ｐｒｏ −Ｉ １
ｅ −ＯＨＢｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ） −Ｖａｌ −Ｔ
ｙｒ−Ｉ ｌｅ −Ｈｌｓ−Ｐｒｏ −Ｉ ｌｅ −Ｏ
Ｈ（例１の工程２で製造）０．６ｆ（０，５ミリモル）
をジオキサン中の塩酸の８Ｍ溶液５ｍｌに溶かす。

溶液を２０分間放置し、遊離へブタペプチド（Ｒｆ’＝
０．１ ）を乾燥エーテルで沈殿させ、沢過し、エー
テルで洗浄する。

これを直ちにジメチルホルムアミド２０ＴＬｌに溶かし
、ｐＨ値をトリエチルアミンで８に調節し、Ｂｏｃ−Ｏ
Ａｌａ −０ＰＦＰ Ｏ，７ｆｌ （１，９ミリモル
）を加える。

３０分後、溶液を蒸発し、残部をクロロホルムとジメチ
ルホルムアミドとの３：１混合物３０ｍ１に溶かす。

溶液を１０％クエン酸水溶液及びその抜水と共に振盪す
る。

乾燥し、蒸発した後、残分を酢酸エチルと擦り合せ、濾
過し、洗浄すると、標題の化合物０．５５５’（８４％
）が得られる。

Ｒ４’＝０．４３ ； Ｒｆ”＝０．８０工程２ 保護基の除去 Ｂｏｃ −ＯＡ ｌａ −Ａｒｇ （Ｔｏｓ ） −Ｖ
ａｌ −Ｔｙｒ −Ｉ ｌｅ −Ｈｌｓ−Ｐｒｏ −Ｉ
１ｅ −ＯＨ０，５２Ｆ （０，４２ミリモル）を液
体弗化水素２ｍｌに溶かし、チオアニソール０．５５ｍ
１を加える。

溶液を０℃に１時間保持し、乾燥エーテルで沈殿させ、
沢過し、エーテルで洗浄する。

（ＯＡ ｌａ ’、ｌ１ｅ８）−アンギオテンシンｎＯ
，４Ｎ’が得られる。

前記のような生成物を精製した後、下記の特性を有する
生成物が得られる：Ｒｆ５＝０．３２、Ｒ４６＝０．５
８、Ｒｆ７＝０．５９、ＥＧ ｌｕ ＝ １− Ｏｏア
ミノ酸分析；ＰｒＯ：１、０（１）、Ｖａｌ ： １．
１（１）、Ｉｌｅ： ２．０２（２）、Ｈｉｓ：０．９
（１）、Ｔｙｒ ： ０．９５ （１）、Ａｒｇ ：
１．０５ （１）。

例３ （アミノオキシアセチル’１Ｌｅｕ８）−アンギオテン
シン■ 工程Ｉ Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ ） −Ｖａｌ−Ｔｙｒ（Ｂｚ
ｌ ） −Ｉ １ｅ−Ｈｉｓ（Ｄｎｐ ） −Ｐｒｏ
−Ｌｅｕ −０ＮＢＬｅｕ −０ＮＢ −ＨＢｒ ４．
２ ？ （１２ミリモル）をクロロホルム５０１１Ｌｌ
中に溶かし、トリエチルアミン１．６８ｍ１及びＢ ｏ
ｃ −Ｐ ｒｏ −０ＰＦＰ ３．８１９を加える。

溶液を室温で２０分間攪拌し、これを１０％クエン酸水
溶液及び次に水と共に振盪する。

乾燥し、蒸発した後得られる保護されたジペプチド（Ｒ
ｆ”＝０．８）をジオキサン中の塩酸の８Ｍ溶液２０ｍ
Ａ’に溶かし、１０分後浴液を乾燥エーテルで希釈し、
蒸発させた。

遊離ジペプチド（Ｒｆ４ ＝０．５６）を単離せずにク
ロロホルム５０ｍ１に溶がし、トリエチルアミンでこの
溶液のｐＨ値を８に調節し、Ｂｏｃ −Ｈｌｓ （Ｄｎ
ｐ ）−０ＰＦ’Ｐ ８．８ ？（１５ミリモル）を加
える。

３０分後、この溶液にＮ−Ｎ−ジメチルアミノエチルア
ミン１．６５１７１１を加え、１０分間放置する。

その後１０％クエン酸水溶液、ＩＮ塩酸水溶液、炭酸水
素ナトリウム溶液及び最後に水と共に振盪する。

抽出液を乾燥し、蒸発し、得られた保護されたトリペプ
チド（Ｒｆ’＝０．６５ ）を単離せずにジオキサン中
の塩酸の８Ｍ溶液２５１ｆＬｌ中に溶かす。

遊離トリペプチドを乾燥エーテルで沈殿させ（Ｒｆ’＝
０．４７ ）Ｐ別し、洗浄する。

これを直ちにクロロホルム５０ａとジメチルホルムアミ
ド２０ｍ１との混合物に溶かし、トリエチルアミンでｐ
Ｈを８に調節し、Ｂ ｏｃ −Ｉ ｌｅ −０ＰＦＰ６
． Ｏｆｌ （１５ミリモル）を加える。

３０分後、溶剤を酢酸エチルに代え、溶液を１０％クエ
ン酸水溶液及び次に水と共に振盪する。

乾燥し、蒸発させた後、保護されたテトラペグチド（Ｒ
ｆ”＝０．６５）をｎ−ヘキサンとエーテルとの７：３
混合物により単離する。

次に、これをジオキサン中の塩酸の８Ｍ溶液２５ｒＩＬ
ｌに溶かし、１５分後、遊離テトラペプチド（Ｒｆ’＝
０．６５ ）を乾燥エーテルで沈殿させ、を過し、エー
テルで洗浄する。

次にこれを乾燥エーテルで沈殿させ、濾過し、エーテル
で洗浄する。

これを直ちにクロロホルムとジメチルホルムアミドとの
１：１混合物５０ｍ１に溶かし、トリエチルアミンでｐ
Ｈ値を８に調節し、ｆ３ｏｃ −Ｔｙｒ −０ＰＦＰ
６． Ｏｙ（１１，５ミリモル）を加える。

１５分後、溶剤を酢酸エチルに代え、Ｎ−Ｎ〜ジメチル
アミノエチルアミン０．６６ｍ１を加え、溶液を１５分
間放置する。

これを次に１０％クエン酸水溶液、ＩＮ塩酸水溶液及び
最後に水と共に振盪する。

乾燥し、蒸発した後、保護されたペンタペプチド（Ｒｆ
２＝０．８ ）をエーテルで単離する。

得られた生成物（Ｒｆ’＝０．８）をジオキサン中の塩
酸の８Ｍ溶液２０ｍ１！に溶かし、乾燥エーテルを添加
して沈殿させ、濾過し、エーテルで洗浄する。

これを直ちにジメチルホルムアミド５０ｄに溶かし、ト
リエチルアミンでｐＨを８に調節し、Ｂｏｃ −Ｖａｌ
−０ＰＦＰ ３．８５ ｆｌ（１０ミリモル）を加
える。

１時間後溶剤をクロロホルムに代え、常法で振盪し、保
護されたヘキサペプチド（Ｒｆ２＝０．８２ ）をエー
テルで単離する。

これを次にジオキサン中の塩酸の８Ｍ溶液２０ｍ１に溶
かし、１５分後浴離へキサペプチド（Ｒｆ３＝０．５５
）を乾燥エーテルで単離する。

これを直ちにジメチルホルムアミド４０ｒｒＬｌに溶か
し、トリエチルアミンでｐＨを８に調節し、１３ｏｃ
−Ａｒｇ （Ｔｏｓ ） −０ＰＦＰ ６．Ｏｙ（１０
ミリモル）を加える。

３０分後、溶剤をクロロホルムに代え、溶液をＩＮ塩酸
水溶液及びその抜水と共に振盪する。

抽出液を乾燥し、蒸発して、保護されたヘプタペプチド
（Ｒｆ２＝０．６２ ）を得る。

これをエタノールで単離する。

収量７．５１（出発Ｂ□ｃ −Ｐｒ。−０ＰＦＰ に
対して５０％）。

融点１８６〜１９０℃ 工程２ Ｂｏｃ −ＯＧｌｙ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ） −Ｖａｌ
−Ｔｙｒ （Ｂｚｌ ） −Ｉ １ｅ −Ｈｉｓ −Ｐ
ｒｏ −Ｌｅｕ−ＯＨＢｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ） −Ｖ
ａｌ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ） −１１ｅ−Ｈｉｓ （Ｄｎｐ
）−Ｌｅｕ −０ＮＢ ３．４５９ （２，２６ミリ
モル）をジメチルホルムアミド１０ｍ１に溶かし、２−
メルカプトエタノール６．６ｒＩＬｌを加え、２時間放
置後、部分的に保護されたヘプタペプチドを乾燥エーテ
ルで沈殿させる。

生成物をメタノール／エーテル沈殿によって精製する。

Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ） −Ｖａｌ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ
） −Ｉ １ｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒ。

−Ｉ、ｅｕ −０Ｎ１３２．９ ｆ （９３％）が得ら
れる。

Ｒｆ２＝０．１２ ； Ｒｆ３＝ ０．２６゜生成物を
メタノール、酢酸及び水の５：１：１混合物４０１ｒＬ
ｌに溶かし、１０％パラジウム黒触媒１．０ｆＩを加え
、水素を６時間混合物に吹き込む。

触媒を戸去し、溶液を蒸発する。

残分なエーテルと共に擦り合せて生成物２．５Ｐ（８９
％）を得る。

Ｒｆ５＝０．７５；Ｒｆ’＝０．２０、 Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ ） −Ｖａｌ −Ｔｙｒ −
Ｉ １ｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ −Ｌｅｕ−ＯＨ１，１？
（１ミリモル）をジオキサン中の塩酸の８Ｍ溶液１０Ｔ
Ｌｌに溶かす。

３０分後、遊離へブタペプチド（Ｒｆ’＝ ０．０８
）を乾燥エーテルで沈殿させ、戸別し、エーテルで洗浄
する。

これを直ちにジメチルホルムアミド１０ｒｎｌに溶かし
、トリエチルアミンで溶液のｐＨを８に調節し、Ｂｏｃ
−ＯＧｌｙ −０ＰＦＰ Ｏ，５４ｆｌ （１，５ミリ
モル）を加える。

３０分後、溶液をクロロホルム３０７ｉｌｌで希釈し、
水と共に振盪する。

抽出液を乾燥し、蒸発し、残分を酢酸エチルと擦り合せ
、沢過し、酢酸エチルで洗浄する。

Ｂｏｃ −ＯＧ ｌｙ −Ａｒｇ （Ｔｏｓ ） −Ｖ
ａｌ −Ｔｙｒ −Ｉ ｌｅ −Ｈｌｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅ
ｕ−ＯＨ１，０５ｆＺ （８６％）が得られる。

Ｒｆ３＝０．２３ ； Ｒｆ’＝０．４０工程３ 保護基の除去 Ｂｏｃ−ＯＧｌｙ −Ａｒｇ （Ｔｏｓ ） −Ｖａｌ
−Ｔｙｒ −Ｉ ｌｅ −Ｈｌｓ−Ｐｒｏ −Ｌｅｕ
−ＯＨＯ，９ｆＺ （０，７３ミリモル）を液体弗化水
素５Ｉ７１１に溶かし、チオアニソール１．５１ｒｔｌ
を加える。

反応混合物を１．５時間Ｏ℃に保持し、これを乾燥エー
テルで処理し、沈殿したペプチドをエーテルで洗浄し、
戸別する。

（ＯＧＩ、ｙ’、Ｌｅｕ８）−アンギオテンシンＩＩＯ
，５５１（８０％）が得られる。

これを前記方法で精製する。

Ｒｆ５＝０．３３ ： Ｒｆ’＝０．６０ ： Ｒｆ７
＝０．５５ ； ＥＧＩｕ＝１．１８゜アミノ酸分析；
Ｐ ｒｏ 、’１．０／Ｉ／、 Ｖａｌ ： １．
０／１／、 Ｉ ｌｅ 二 １．０／ １／、Ｌｅｕ
： １．１／ １ ／、Ｈｉｓ ： ０．９５／ １／
、Ａｒｇ：１．０／１／、Ｔｙｒ：０．７／Ｉ１０ 例４ （Ｄ−α−アミノオキシグロピオニル１、Ｌｅ♂）−ア
ンギオテンシン■ 工程Ｉ Ｂｏｃ −Ｄ−ＯＡｌａ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ ） −Ｖａ
ｌ −Ｔｙｒ−７ｌｅ −Ｈｉｓ −Ｐ ｒｏ −Ｌｅ
ｕ −ＯＨＢｏＣ−Ａｒｇ （Ｔｏｓ ） −Ｖａｌ
−Ｔｙｒ−Ｉ １ｅ−Ｈｉｓ−Ｐｒｏ −Ｌｅｕ −Ｏ
Ｈ１，１ｆｌ （１ミリモル）をジオキサン中の塩酸の
８Ｍ溶液１０ＴＬｌに溶かす。

３０分後、遊離へブタペプチドを乾燥エーテルで沈殿さ
せ、１過し、エーテルで洗浄する。

これを直ちにジメチルホルムアミド１０ｍ１に溶かし、
トリエチルアミンでｐＨを８に調節し、この溶液にＢｏ
ｃ−Ｄ−ＯＡｌａ−ＯＰＦＰｏ、５６ ？ （１，５ミ
リモル）を加える。

３０分後、溶液をクロロホルムで希釈し、水と共に振盪
する。

乾燥し、蒸発した後、残分を酢酸エチルと擦り合せ、１
過し、酢酸エチルで洗浄する。

こうしてＢｏｃ −Ｄ −０Ａ１ａ −Ａ ｒｇ（Ｔｏ
ｓ ） −Ｖａｌ −Ｔｙｒ−Ｉ ｌｅ −Ｈｌｓ ＝
Ｐｒｏ −Ｌｅｕ −ＯＨ０，９５？ （７７％）が得
られるＲｆ４＝０．２９ 工程２ 保護基の除去 Ｂ ｏｃ −Ｄ −ＯＡ ｌａ −Ａｒｇ （Ｔ ｏｓ
） −Ｖａｌ −Ｔｙｒ−Ｉ ｌｅ −Ｈｌｓ−Ｐｒ
ｏ−Ｌｅｕ−ＯＨＯ，９５？ （０，７７ミリモル）を
液体弗化水素４−に溶かし、チオアニソール１２ｒｕｌ
を加える。

この溶液を０℃に保持し、乾燥エーテルで物質を沈殿さ
せ、１過し、エーテルで洗浄する。

こうして（Ｄ−ＯＡ１ａ’、１ｅｕ８）アンギオテンシ
ンＩＩ０．６ｆ（９０％）が得られる。

これを常法で精製することができる。Ｒ４５＝０．３３
； Ｒｆ６＝０．６１ ： Ｒｆ７＝０．５６ ；Ｅ
Ｇｌｕ ＝ １．１００ アミノ酸分析；Ｐｒｏ： １．０２／１／、Ｖａｌ ：
１、Ｑ／１／、Ｌｅｕ：１．０２／１／、Ｊｌｅ：１．
０３／１／、Ｈｉｓ ： １．０１／ Ｉ／、Ａｒｇ：
０．９２／１／、Ｔｙｒ ： ０．８／ １／。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １一般式（■）： Ｘ−Ａｒｇ −Ｖａｌ −Ｔｙｒ −Ｉ ｌｅ −Ｈｌ
   ｓ−Ｐｒｏ−Ｙ（Ｉ） （式中、Ｘはアミノオキシアセチル基又はα−アミノオ
   キシプロピオニル基を表わし、Ｙはロイシル基又はイソ
   ロイシル基を表わす） で示されるペプチド及びその酸付加塩。 ２一般式（■）： Ｘ −Ａｒｇ −Ｖａｌ −Ｔｙｒ −Ｉ ｌｅ −Ｈ
   ｌｓ−Ｐｒｏ−Ｙ（Ｉ） （式中、Ｘはアミノオキシアセチル基又はα−アミノオ
   キシプロピオニル基を表わし、Ｙはロイシル基又はイン
   ロイシル基を表わす） で示されるペプチド及びその酸付加塩を製造するにあた
   り、一般式（■）： （式中、Ｘ及びＹはそれぞれ前記の意味を有する）で示
   される化合物から保護基を選択的に、順次又は同時に一
   反応工程で脱離させ、こうして得た一般式（Ｉ）の化合
   物を必要に応じてその酸付加塩に変えることを特徴とす
   る方法。