KR0141973B1 - 신규의 생리활성 펩티드 및 이를 유효성분으로서 함유한 칼슘대사 조절제 - Google Patents
신규의 생리활성 펩티드 및 이를 유효성분으로서 함유한 칼슘대사 조절제Info
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Abstract
다음 아미노산 시퀀스를 가진 신규의 생리적 활성 펩티드 또는 약리적으로 허용되는 그의 염, 및 유효성분으로서 상기 언급된 펩티드 또는 염으로 이루어진 칼슘 대사 조절제.
상기 시퀀스에서 X1은 Ser-Thr 또는 Thr-Ser을 나타내며. X2는 Met, Gly, Ala, Val, n-Val, Pro, Leu, n-Leu, Ile, Phe 또는 α-아미노락트산을 나타내며, X3은 Asp 또는 Glu를 나타내며, X4는 Leu-Gln0Thr, Gln-Thr, Leu 또는 Gly-Gln-Thr을 나타내며, X5는 Val-Gly-Ala 또는 Ser-Gly-Thr을 나타내며, R은 H, NH2, N-아실 또는 N-알킬을 나타내며, X6는 CO-NH 또는 NH-CO를 나타내며, X7은 아미노산 0-6개인 순순 칼시토닌, 도는 그의 치환, 삭제 또는 첨가 유도체의 2-6위치에서 아미노산 시퀀스를 나타내며, X8는 순수 칼시토닌, 또는 그의 치환, 삭제 또는 첨가 유도체의 8-32위치에서 아미노산 시퀀스를 나타내며, 그리고 n1및 n2각각은 1-19의 정수이며, n1+n2는 2-20이다.
Description
본 발명은 신체에서 비정상 칼슘대사에 의하여 원인이 된 질병, 이를테면 과칼슘혈증, 뼈의 페제트병, 및 골공증의 치료에 유효한 신규의 생리활성 펩티드류에 관한 것이다.
에스트로겐, 비타민 D, 칼슘염, 및 칼시토닌(calicitonin)이 과칼슘혈증, 뼈의 페제트병, 및 골공증의 치료에 투여된 바 있으나 대상이 한정되며 또는 그 효과가 명백치 않다는 결함이 있다.
칼시토닌은 천연 발생되는 32개 아미노산으로 구성된 단일 사슬 폴리펩티드 호르몬이며, 포유류의 갑상선 및 어류, 및 조류에서 외측 갑상선으로부터 분비된다.아미노산 조성 또는 시퀀스는 서로 다른 종 가운데 많이 다른지만, 혈액내 생리적 활성은 실제 동일하다.
따라서, 본 발명자들은 과칼슘혈증 뼈의 페제트병, 및 골공증을 치료할 수 있는 칼슘대사 조절제의 개발연구를 수행하였고, 끝으로 신규의 펩티드를 합성하고 그 생리활성을 시험하였다. 그 결과, 다음에 기재된 신규의 펩티드가 혈액 칼슘 수준을 저하시키는 매우 높은 활성을 가지고 있다는 것을 발견하였다.
보다 구체적으로는, 본 발명의 일예에 따라 다음의 아미노산 시퀀스를 가진 신규의 생리활성 펩티드(이후 본 발명의 펩티드로 지칭함)또는 약리적으로 허용되는 그의 염을 제공한다.
상기 시퀀스에서 X1은 Ser-Thr 또는 Thr-Ser을 나타내며, X2는 Met, Gly, Ala, Val, n-Val, Pro, Leu, n-Leu, Ile, Phe 또는 α-아미노락트산을 나타내며, X3은 Asp 또는 Glu를 나타내며, X4는 Leu-Gln-Thr, Gln-Thr, Leu 또는 Gly-Gln-Thr을 나타내며, X5는 Val-Gly-Ala 또는 Ser-Gly-Thr을 나타내며, R은 H, NH2, N-아실 또는 N-알킬을 나타내며, X6은 CO-NH 또는 NH-CO를 나타내며, X7은 순수 칼시토닌, 또는 아미노산 0-6개인 그의 치환, 삭제 또는 첨가 유도체 2-6위치에서 아미노산 시퀀스를 나타내며, X8은 순수 칼시토닌, 또는 그의 치환, 삭제 또는 첨가 유도체 8-32위치에서 아미노산 시퀀스를 나타내며, 그리고 n1및 n2각각 1-19의 정수이며 n1+n2는 2-20이다.
본 발명의 또다른 일예에 따라, 유효성분으로서 상기 언급된 펩티드 또는 약리적으로 허용되는 그의 염으로 이루어진 칼슘대사 조절제를 제공한다.
본 명세서와 첨부된 청구범위에서 사용된 용어 칼슘대사 조절제란 신체에서 칼슘의 비 정상적 대사로 원인이 된 질병, 이를테면 과칼슘혈증 도는 뼈의 페제트병 및 골공증의 치료용 유효제를 의미한다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서, 아미노산은 순수 및 응용화학 국제연합 및 생화학 국제연합(IUPAC-IUB)의 생화학 명명 위원회(CBN)에 의하여 채택된 방법을 따라 단축된다. 예를 들어, 다음의 약호가 채택된다.
Ala:L-알라닌, Arg:L-아르기닌, Asn:L-아스파라긴, Asp:L-아스파르트산, Cys:L-시스테인, Gln:L-글루타민, Glu:L-글루타민산, Gly:L-글리신, His:L-히스티딘, Ile:L-이소로이신, Leu:L-로이신, Lys:L-리신, Met:L-메티오닌, Phe:L-페닐알라닌, Pro:L-프롤린, Ser:L-세린, Thr:L-트레오닌, Tyr:L-티로신, Trp:L-트립토판, Val:L-발린
본 발명의 펩티드는 펩티드 합성에 대하여 통상적으로 채택된 공지의 액상법 또는 고상법에 따라 합성될 수 있다. 예를 들어, 고상법이 채택된다면, 합성은 다음 방식으로 수행된다.
보다 구체적으로 말하자면, 상기 언급된 일반식에 포함된 아미노산에 상응하는 보호 L-아미노산은 유기 용매-불용성 수지내 C-말단 잔기로부터 연속 축합된 다음 산처리가 수행되며, 따라서 본 발명의 펩티드(유리 펩티드)가 얻어진다.
용매에 대해 안정하며, 거의 비파괴적이고, 양호한 팽창성을 가진 유기용매 불용성 수지가 유기용매-불용성 수지로 사용되는 것이 바람직하다. 구체적 일예로서, 클로로메틸기 또는 히드록시메틸기와 같은 작용기를 스티렌/디비닐벤젠 공중합체로 도입시켜 형성된 수지 및 상기 언급된 공중합체를 벤즈히드릴아민 형태로 전환시켜 형성된 수지가 언급될 수 있다.
본 발명의 펩티드 C-말단잔기가 아미드이므로, 상기 언급된 두 형태의 수지가 사용될 때, 암모니아등을 사용하여 아미드화가 수행된다. 그러나 다른 구성 아미노산의 측사슬이 이러한 아미드화에 의하여 영향 받게 되며, 따라서 합성이 효과적으로 수행될 수 없다. 따라서 산처리 단계에서 C-말단기에 펩티드 아미드를 제공할 수 있는 후자 형태의 벤즈히드릴아민 형 수지(BHA수지)가 바람직하다. 상기 언급된 벤즈히드릴아민 형 수지와 같이 효과적으로 C-단말기에 아미드를 가진 펩티드를 제공할 수 있는 어떠한 수지도 사용될 수 있다.
서로 다른 가교도 및 아미노기 도입량을 가진 BHA수지가 제조되고 적절히 선택되며 의도 목적에 따라 사용된다. 또한, 상용수지가 사용될 수 있다.
상기 언급된 수지는 합성전에 활성화되어야 하며, 이와같은 활성화는 예를 들어, 다음 방식으로 성취될 수 있다.
BHA를 펩티드 고상 합성용 반응관에 충전한 다음 염화메틸렌 및 10% 트리에틸아민(TEA)/염화메틸렌을 첨가시키고 매 교반시 5-1분간 1-3회 교반시키고 이어서 여과시킨다. 유사하게도, 염화메틸렌, 메탄올 또는 에탄올 및 다시 염화 메틸렌을 첨가하고 연속으로 (매 용매에 대하여 1-3회 및 매 교반시 1-3분간)교반을 수행하고 이어서 여과 및 세척시킨다.
이와 같은 합성 공정에서, α-아미노기 단독 또는 측사슬의 작용기와 다같이 보호기에 의하여 보호된 아미노산은 연속 축합된다. t-부틸록시카르보닐(Boc)기, 9-플루오렌일메틸록시카르보닐(Fmoc)기 또는 대등기가 α-아미노기를 위한 보고기로서 사용된다.
아스파라긴 또는 글루타민의 경우에, 일반적으로 Boc아미노산 또는 Fmoc-아미노산이 바로 사용되거나 또는 그의 페닐 에스테르 형태, 예를 들어, p-니트로페닐 에스테르로 사용된다. 또한, 크산틸(Xan)기, 4,4-디메톡시벤즈히드릴(Mbh)기 또는 대등기에 의해 보호된 ω-카르바미드기를 가진 아미노산이 사용될 수 있다.
아스파르트산 또는 글루타민산의 -카르복실기는 벤질 에스테르(OBzl)기, 시클로헥실 에스테르기 또는 대등기에 의하여 보호된다.
아르기닌의 구아니디노기 또는 히스티딘의 이미다졸릴기는 일반적으로 p-톨루엔-술폰일(Tos)기 또는 디니트로페닐(Dnp)기에 의하여 보호된다.
리신의 ε-아미노기는 벤질록시카르보닐(Z)기, 그 유도체, 즉, O-클로로벤질록시카르보닐(Cl-Z)기, 또는 대등기에 의하여 보호된다.
세린 또는 트레오닌의 알코올성 히드록실기는 일반적으로 벤질(Bzl)기 또는 대등기에 의하여 보호된다.
티로신의 페놀성 히드록실기는 일반적으로 Bzl기, 2,6-디클로로벤질(Cl2-Bzl)기, O-브로모벤질록시카르보닐(Br-z)기와 같은 그 유도체 또는 대등기에 의하여 보호된다.
또한, 프롤린, 알라닌, 글리신, 로이신, 이소로이신, 메티오닌, 발린 및 트립토판은 일반적으로 Boc-아미노산 또는 Fmoc-아미노산의 형태로 사용된다.
이들 보호된 아미노산의 상용제품이 사용될 수 있다.
본 발명의 펩티드 합성을 상세히 기재하면 다음과 같다.
(1) 구성 아미노산의 도입
BHA수지를 시약, 용매등을 첨가하기 위한 개구부, 및 여과에 의하여 용매를 회수하기 위한 여과기를 갖춘 반응관에 충전시키며, 따라서 반응은 반응관 전체를 흔들거나 교반시킴으로서 진행되는 형태이며 여과는 상승 또는 감압하에 성취된다. 이와 같은 반응관은 바람직하게도 유리, 테플론피복 유리 또는 테플론으로 형성된다.
BHA수지 1g에 수지를 팽창시킬 수 있는 용매, 이를테면 염화메틸렌, 클로로포름, 디메틸포름아미드(DMF)또는 벤젠 약 2-약20㎖를 첨가하고, 수지를 용매에 현탁시킨 다음 C-말단기와 상응하며 보호된 α-아미노기를 가진 아미노산을 수지의 아미노기 당량당 약 1-약6당량의 양으로 현탁액에 첨가시킨다. 교반 또는 진탕을 약1-약20분간 수행하고, 디시클로헥실카르보디이미드(DCC)와 같은 짝지음제(coupling agent)를 보호 아미노산 당량당 약0.5-2당량의 양으로 첨가하며 교반 또는 진탕을 다시 수행한다.
DCC와 다른 짝지음제로서, 수용성 카르보디이미드, 카르보닐디이미다졸, 우드워드(Woodward)시약 K, N-에틸-2'-히드록시벤즈이소옥사졸륨 트리플루오로보레이트, 1-에톡시카르보닐-2-에톡시-1,2-디히드록시퀴놀린, 봅(Bop)시약 및 디페닐포스포릴아지드가 언급될 수 있다.
또한, 보호된 α-아미노기를 가진 아미노산은 활성 에스테르법 또는 대칭 무수물법에 의하여 수지에 결합될 수 있다.
짝지음 반응의 진행도는 닌히드린 시험 또는 플루오레스크아민(fluorescamine)시험에 의하여 검측될 수 있다. 반응이 완료되지 않는다면, 짝지음 반응을 반복시킨다.
반응 종료후, 염화 메틸렌, 클로로포름, 메탄올, 에탄올, DMF,벤젠 및 초산중에서 선택된 적어도 한가지 용매를 최초사용된 BHA수지 그람당 약 2-약 50㎖의 양으로 사용함으로서 아미노산 수지를 1내지 수회 세척하고, 프롤린-수지를 여과에 의하여 회수한다.
종결제(terminating agent)를 사용한 다음 반응에 의하여 세척된 BHA수지의 미반응 아미노기를 차단하고 수지를 다시 세척한다.
종결제로서, 무수 초산, TEA/염화메틸렌 또는 클로로포름, 아세틸이미다졸/DMF, 플루오레스크아민-디이소프로필에틸아민/염화메틸렌등이 사용될 수 있다. 종결제는 수지의 아미노기 당량당 약0.5-약5당량의 양으로 사용되며, 반응은 약 10분-약18시간동안 수행된다.
C-말단기 아미노산-수지로 다음 아미노산의 짝지음을 위하여, C-말단기 아미노산 -수지의 α-아미노 보호기가 제거된다.
트리플루오로초산(TFA)은 Boc기 제거용 시약으로서 바람직하며, 바로 (100%)또는 염화메틸렌, 클로로포름 또는 그 대등물로 10% 또는 그 이상으로 희석될 때 사용된다.
바람직하게도, TFA용액은 초기에 사용된 BHA수지 그람당 약2-약50㎖의 양으로 첨가되며, 반응은 약5-약60분간 수행된다. 반응후, 여과 및 상기 언급된 세척 용매로서 세척이 수행되며, 염화메틸렌, 클로로포름 또는 그 대등물내 TFA약5-약30%를 함유한 용액을 초기에 사용된 BHA수지의 그람당 약2-약50㎖의 양으로 첨가시켜 잔류 TFA를 중화시키며 상기 언급된 세척용매로 세척시킨다.
피페리딘은 Fmoc기를 제거하기 위한 시약으로서 바람직하며, 피페리딘은 염화메틸렌, DMF, 클로로포름 또는 그 대등물로 희석한 다음 농도5-50%인 용액형태로 사용된다.
피페리딘 용액을 초기에 사용된 BHA수지의 그람당 약2-약100㎖의 양으로 첨가시키며, 반응이 약 5-약60분간 수행되는 것이 바람직하다. 반응후, 여과 및 상기 언급된 세척용매로서 세척이 수행된다.
그후, 또 다른 아미노산이 다음 방식으로 도입된다.
용매를 얻어진 C-말단기 아미노산 -수지에 첨가시켜 현탁액을 형성시키며, 보호된 α-아미노기를 가진 아미노산을 수지의 아미노기 당량당 약1-약6당량의 양으로 첨가한 다음 짝지음제를 첨가한다.
짝지음 반응의 진행도는 닌히드린 시험 또는 플루오레스크아민 시험에 의하여 검측될 수 있다.
반응 종료후, 수지를 상기 언급된 세척용매로 세척한다. 반응이 완료되지 않는다면, 짝지음 반응을 반복하거나, 또는 후속 반응에 의하여 상기 언급된 종료제를 사용함으로서 차단 효과를 얻는다.
후속단계에서, 각 아미노산에 상응하는 보호 아미노산을 사용하는 것 이외에 상기에 기재된 것과 동일한 방식으로 보호기의 제거, 세척, 중화, 세척, 짝지음 및 세척을 수행한다. 펩티드 사슬이 확대됨에 따라 짝지음이 어렵게 되므로, 1-히드록시-벤조트리아졸(HOBt)을 DCC에 첨가시키는 것이 바람직하며, 반응은 DMF에서 수행되거나, 또는 Bop시약에 디이소프로필에틸아민(DIEA)을 첨가시킴으로서 반응을 수행하는 것이 바람직하다.
이황화물 연결(linkage)과 다른 연결에 의하여 형성된 고리구조를 가진 펩티드에 대하여, 고리구조는 예를 들어, 1위치에서 아미노산 짝지음 완료후 1위치에서 아미노산 측사슬 및 상응하는 아미노산의 측사슬이 상기 언급된 짝지음 과정에 의하여 결합되는 방법, 또는 1위치에서 아미노산이 결합되는 측사슬과 상응하는 아미노산이 연속적으로 결합되는 아미노산의 α-아미노산과 상응하는 다른 아미노산에 결합되는 방법을 이용함으로서 수지위에 형성될 수 있다.
아실, 알킬등에 의한 N-α-아미노기의 변형은 자체 공지된 방법에 의하여 수행될 수 있으며, N-α-아미노기가 없는 펩티드는 1위치에서 아미노산으로 상응하는 카르복실산등을 도입시킴으로서 얻어질 수 있다.
상기 언급된 방식으로 각 구성 아미노산을 도입시켜 얻어진 펩티드 수지를 반응관으로부터 취하여 건조시킨다.
(2) 수지로부터 펩티드의 분리 및 보호기의 제거
펩티드 수지를 플루오로화 수소산(HF)으로 처리하여 펩티드와 수지의 아미드 결합을 절단하고 보호기를 제거하며, 따라서 유리 펩티드를 얻는다.
HF처리에 특수관이 필요하며, 상용관이 사용될 수 있다.
건조 펩티드-수지를 관에 충전시키고, 부반응의 발생을 억제하기 위하여, 아니솔을 펩티드-수지 그람당 0.5-5㎖의 양으로 첨가시키고 혼합물을 교반한다. 그후, 액체 HF를 펩티드-수지의 그람당2-50㎖의 양으로 첨가시키고 그 처리를 -20-0℃에서 0.5-2시간 수행한다.
바람직하게도, 디메틸술파이드 또는 에탄-디티올이 아니솔에 첨가된다,
반응 종료후, HF를 진공하에 제거하여 잔류 HF, 보호기, 아니솔 및 다른 첨가제를 에틸아세테이트, 디에틸에테르 또는 벤젠과 같은 용매를 사용하여 제거시킨다. 초산 수용액과 같은 산성 수용액으로 펩티드를 추출하고 수지를 여과에 의하여 회수한다.
얻어진 펩티드에서, 아미드가 C-말단기에 존재하며, 두개 시스테인을 함유한 펩티드는 이황화물 연결이 형성되지 않은 비고리 펩티드이다.
(3) 이황화물 연결의 형성
두개 시스테인을 함유한 펩티드에서 이황화물 연결의 형성은 다음 방법에 의하여 성취될 수 있다.
펩티드의 고희석된 알칼리 수용액을 공기 또는 칼륨 페리시아나이드와 같은 산화제에 의하여 산화시켜 이황화물 연결을 형성시킨다. 또한, 이황화물 연결은 Tam[J.P. Tam, Int. Peptide and Protein Res, 29, 421-431(1987)]의 방법에 의하여 형성될 수 있다.
(4) 원 펩티드의 정제
상기 언급된 단계로서 얻어진 본 발명의 펩티드는 합성중 형성된 변형 펩티드, 고리화시 형성된 소중합체 및 다른 부산물을 함유한다. 따라서, 정제가 필요하다.
보다 구체적으로 말하자면, 수지로부터 추출된 용액 또는 고리화 처리에 의하여 얻어진 용액을 한외 여과에 의하여 농축시킨 다음 이온 교환처리 및 친액화 처리시킨다. 건조 생성물을 역상 고속 액체 크로마토그래피에 의하여 정제한 다음, 이온 교환 처리 및 겔 여과 처리시키며, 따라서 정제된 생성물이 얻어진다.
다음 53개의 신규 펩티드는 상기 언급된 방법으로 합성시켜 얻어졌다.
이들 53개 펩티드의 구조 및 아미노산 시퀀스는 다음에 기재된다(이후 각 펩티드는 상응하는 숫자로 제시될 것이다).
펩티드 번호 1:
펩티드 번호 2:
펩티드 번호 3:
펩티드 번호 4:
펩티드 번호 5:
펩티드 번호 6:
펩티드 번호 7:
펩티드 번호 8:
펩티드 번호 9:
펩티드 번호 10:
펩티드 번호 11:
펩티드 번호 12:
펩티드 번호 13:
펩티드 번호 14:
펩티드 번호 15:
펩티드 번호 16:
펩티드 번호 17:
펩티드 번호 18:
펩티드 번호 19:
펩티드 번호 20:
펩티드 번호 21:
펩티드 번호 22:
펩티드 번호 23:
펩티드 번호 24:
펩티드 번호 25:
펩티드 번호 26:
펩티드 번호 27:
펩티드 번호 28:
펩티드 번호 29:
펩티드 번호 30:
펩티드 번호 31:
펩티드 번호 32:
펩티드 번호 33:
펩티드 번호 34:
펩티드 번호 35:
펩티드 번호 36:
펩티드 번호 37:
펩티드 번호 38:
펩티드 번호 39:
펩티드 번호 40:
펩티드 번호 41:
펩티드 번호 42:
펩티드 번호 43:
펩티드 번호 44:
펩티드 번호 45:
펩티드 번호 46:
펩티드 번호 47:
펩티드 번호 48:
펩티드 번호 49:
펩티드 번호 50:
펩티드 번호 51:
펩티드 번호 52:
펩티드 53:
상기 언급된 합성방법에 의하여 얻어진 본 발명의 펩티드의 아미노산 분석결과가 표 1에 제시된다.
표 1에서, 각 상단수치는 실측치이며, 각 하단 괄호수치는 이론치이다.
표 1 (계속)
표 1 (계속)
표 1 (계속)
표 1 (계속)
표 1 (계속)
본 발명의 펩티드는 혈청에서 칼슘 수준을 감소시키는 우수한 기능을 가지고 있으며, 본 발명의 펩티드는 신체에서 비정상적 칼슘대사로 원인이 된 질병, 이를테면 과칼슘혈증 및 골공증의 치료에 효과적이다. 이와 같은 사실은 다음 시험에 기재될 것이다.
시험 1
위스타(Wistar)균주인 6주생 암컷쥐(각 그룹은 4마리의 쥐로 구성됨)를 시험동물로 사용하였고, 이후 제공된 실시예에서 얻어진 본 발명의 펩티드를 초산나트륨 1% 수용액(pH 4.0)으로 조절된 농도에서 이에 0.1% 소혈청 알부민(BSA)을 첨가시켜 시험하였다.
용액을 166㎍/㎖, 830ng/㎖ 또는 83ng/㎖의 농도로 조절하고 꼬리 정맥으로서 1㎖/㎏의 양으로 투여하였다.
쥐의 등을 고정시키고 투여전, 및 투여후 일정한 간격으로 목정맥으로부터 혈액을 채취하였다. 매시간 수집된 혈액 양은 0.3㎖이었다. 시료 혈액을 350rpm에서 20분간 원심 분리시켜 혈청을 분리하였고 분리된 혈청내 칼슘 함유량을 Wako칼슘 측정키트(o-cpc 방법)를 사용한 TBA-380(Toshiba사에 의하여 공급)에 의하여 측정하였고, 혈청내 칼슘 농도의 감소비를 측정하였다.
그 결과는 표2-10에 제시된다.
이전의 결과로부터, 본 발명의 펩티드가 혈청에서 칼슘수준을 감소시키는 작용을 가지고 있다고 확인하였다.
본 발명의 펩티드 급성독성(LD)은 경구투여 또는 정맥내 주사시 쥐(mice)에서 10,000 I.U./㎏ 또는 그 이상이며, 또는 경구투여 또는 정맥내 주사시 쥐(rat)에서 5,000 I.U./㎏ 또는 그 이상이다. 즉, 본 발명의 펩티드는 높은 안정성 인자를 가지고 있다.
따라서, 본 발명의 펩티드는 실제 부작용없는 안정한 약제이며 과칼슘혈증, 뼈의 페제트병, 및 골공증을 치료하는데 유효하다.
본 발명의 펩티드 투여량 및 본 발명의 약제 제조방법을 기재하면 다음과 같다.
본 발명의 펩티드는 동물 및 사람에게 바로 또는 통상의 약제담체와 다같이 투여될 수 있다. 투여형태는 적절히 선택되며, 즉, 주사제, 좌제 및 점막에 투여될 약제와 같은 비경구 약제가 언급될 수 있다.
의도효과를 발휘하는 비경구 약제에 대하여, 바람직하게도 본 발명의 펩티드는 펩티드의 투여량이 환자의 연령과 체중 및 병의 심각성에 따르지만 정맥내 주사, 정맥내 주입, 피하주사 또는 근육내 주사에 의하여 또는 좌제 또는 점막에 투여될 약제 형태로 성인의 1일 10-200I.U.의 적정량 투여된다.
이들 비경구 약제는 통상의 방법에 의하여 제조된다. 일반적으로, 희석제로서 주사용 증류수, 생리적 염수용액, 글루코스 수용액, 주사용 식물유, 참깨유, 피넛유, 콩유, 옥수수유, 프로필렌 글리콜 및 폴리에틸렌 글리콜이 사용될 수 있다. 살균제, 방부제 및 안정화제가 첨가될 수 있다. 안정성의 면에서, 비경구 약제가 약병등에 충전된 다음 동결시키는 방법이 채택될 수 있으며, 종래의 동결건조 기술에 의하여 물이 제거되며, 건조 제품은 투여전에 바로 다시 액체로 형성된다. 또한, 등장제, 방부제, 방부약 진통제, 분산제, 산화방지제등이 필요에 따라 첨가될 수 있다.
또다른 비경구 약제로서, 직장내 투여용 좌제, 점막투여용 약제, 연고등이 언급될 수 있으며 통상의 방법에 의하여 제조될 수 있다.
결코 본 발명의 범위를 한정시키기 않는 다음 실시예로서 본 발명을 보다 상세히 기재하면 다음과 같다.
(1) 수지의 활성화
펩티드의 고상 합성용 반응관(Peninsula Laboratory에 의하여 제공)을 BHA수지(Peninsula Laboratory에 의하여 제공, 디비닐벤젠 함유량=1%, 100-120메쉬, 아미노기 함유량=0.86mM/g) 150g으로 충전시켰고, 수지를 다음 용매와 함께, 각 교반시 5분간 각 용매에 2회 연속 교반시키고 여과시켰다.
(i)염화메틸렌/L
(ii)10% TEA/염화메틸렌 420㎖
그후, 염화메틸렌, 메탄올 및 염화메틸렌 각 1.5L로서 연속 세척하였다. 각 용매로서 2회 세척하였고, 각 세척시 2분간 교반시킨 다음 각 교반후 여과시켰다(이와 같은 세척공정은 이후 세척공정 I로 언급될 것이다).
(2) 단계 1
상기 과정(I)에서 얻어진 수지 모두를 다음 용매와 함께 연속 교반하고 여과시켰다.
짝지음:
염화메틸렌 1.5L + Boc - Pro 25.8g(0.12mole) + 1M DCC/염화메틸렌 120㎖(2.5시간)
그후 세척공정 I을 수행하였다.
아세틸화:
염화메틸렌 1.5L +무수초산 10㎖ + 10% TEA/염화메틸렌 100㎖(30분) 그후 세척공정 I을 수행하였다.
처리수지를 닌히드린 시험할 때, 그 결과는 음성이었다.
(3) 단계 2
상기 과정(2)에 의하여 얻어진 수지 모두 다음 용매와 함게 연속 교반하고 여과시켰다.
보호기 제거:
50% TFA/염화메틸렌(5분 및 25분, 각 1.8L)
그후 수지를 염화메틸렌, 메탄올 및 클로로포름 각 1.5L와 함께 각 교반시 2분 각 용매에 대하여 2회 교반시킴으로서 세척하였고 이어서 여과시켰다(이와 같은 세척공정은 이후 세척공정II로 언급될 것이다).
중화:
클로로포름 1.5L + 10% TEA/염화메틸렌(5분 및 15분)
그후 세척공정 I을 수행하였다.
짝지음:
염화메틸렌 1.5L + Boc - Ala 56.7g (0.30mole) + 1M DCC/ 염화메틸렌 300㎖(2시간)
그후 세척공정 I을 수행하였다.
처리수지를 닌히드린 시험할 때, 그 결과는 음성이었다.
(4) 단계 3-11
상기 과정(3)에 의하여 얻어진 수지 모두 표11에 제시된 보호기가 연속으로 짝지음 되는 것을 제외하고 상기 과정(3)과 동일한 방식으로 보호기 제거, 중화 및 세척시켰다.
표11에서, CHCl는 염화메틸렌을 나타내고, DMF는 디메틸포름아미드를 나타내며 HOBt는 1-히드록시벤조트리아졸을 나타낸다.
단계 11에서 티로신의 짝지음 및 세척후, 펩티드 수지를 반응관으로부터 취하고 건조시켰다.
(5)단계 12-13
상기 과정(4)에 의하여 얻어진 펩티드-수지 100g을 사용함으로서, 표 12에 제시된 보호 아미노산을 연속으로 짝지음하고 용매의 양을 과정(3)에 사용된 양2/3으로 조절시키는 것을 제외하고 상기 과정(3)과 동일한 방식으로 보호기의 제거, 중화 및 세척을 수행하였다.
단계 13에서 글루타민 짝지음 및 세척후, 펩티드 수지를 반응관으로 부터 취한 다음 건조시켰다.
(6) 단계 14-17
과정(5)에 의하여 얻어진 펩티드수지 30g을 사용하여 표 13에 제시된 보호 아미노산이 연속으로 짝지음되고 용매의 양이 과정(3)에 사용된 양 1/6으로 조절되는 것을 제외하고 과정(3)에서와 동일한 방식으로 보호기에 제거, 중화 및 세척을 수행하였다.
단계 17에서 로이신의 짝지음 및 세척후, 펩티드수지를 반응관으로 부터 취한 다음 건조시켰다.
(7) 단계 18-25
과정(6)에 의하여 얻어진 펩티드수지 18g을 사용하여 표 13에 제시된 보호 아미노산이 연속으로 짝지음되고 용매의 양이 과정(3)에 사용된 양 1/6으로 조절되는 것을 제외하고 과정(3)에서와 동일한 방식으로 보호기의 제거, 중화 및 세척을 수행하였다.
단계 25에서 메티오닌 짝지음 및 세척후, 펩티드수지를 반응관으로부터 취한 다음 건조시켰다.
(8) 단계 26-32
과정(7)에 의하여 얻어진 펩티드 수지 11g을 사용하여, 표15에 제시된 보호 아미노산이 연속으로 짝지음 되고 용매의 양이 과정(3)에 사용된 양 1/6으로 조절되는 것을 제외하고 과정(3)과 동일한 방식으로 보호기의 제거, 중화 및 세척을 수행하였다.
단계 32에서 시스테인 짝지음 및 세척 후, 펩티드수지를 반응관으로부터 취한 다음 건조시켰다.
(9) 수지로부터 펩티드의 분리 및 보호기의 제거
HF반응관을 과정(8)에 의하여 얻어진 펩티드-수지 4g으로 충전하였고, 아니솔 4㎖와 황화메틸 1㎖를 첨가하고 혼합물을 교반하였다. 반응관을 HF반응장치(Peptide Laboratory에 의하여 제공됨)에 고정시켰고 제조 얼음/아세톤조에서 냉각시켰고 HF 약 35㎖를 도입하였다.
그후, 얼음수조에서 반응효과를 얻도록 반응 혼합물을 45분간 교반하여 반응을 수행하고, 진공펌프를 사용하여 15분간 증류시켜 HF를 제거하였다. 그후, 수조에서 추가로 15분간 배기시켰다.
그후, 에테르를 첨가하고 혼합물을 완전히 교반시켰고 유리 여과기를 사용하여 여과시켰다. 여과기위 잔류물을 에테르로 다시 세척하였다(전체로서 에테르 약 300㎖사용). 펩티드를 초산 0.1N수용액(4×100㎖)에 의하여 추출하였따.
(10) 고리화
과정(9)에 의하여 얻어진 초산 수용액에 환원형 글루타티온 150㎎및 산화형 글루타티온 300㎎을 첨가하였고 총부피가 약 800㎖ 되도록 혼합물에 첨가하였고 pH수치를 암모니아수에 의하여 9.0으로 조절하였다. 혼합물을 30분간 교반하였고 pH수치를 무수초산에 의하여 8.0으로 조절하였다. 질소가스로 기포화하면서 혼합물을 밤새 교반하였다.
(11)정제
과정(10)에 의하여 얻어진 용액의 pH수치를 무수초산에 의하여 5.0으로 조절하였고 분자량 1000인 한외 여과막이 부착된 한외여과 장치를 사용하여 용액을 농출처리한 다음 초산 암모늄 완충액을 사용하여 투석 처리하였다. 이동상으로서 초산 암모늄 완충액을 사용하여 양이온 교환수지(Wattman에 의하여 제공된 CM52)로 포장된 컬럼에서 얻어진 액체를 용출하였다. 용출물을 동결 건조시켰다.
건조 생성물을 분리 역상 고속액체 크로마토그래피에 의하여 정제하였다. 사용된 컬럼은 ODP-90(Asahi Kasei에 의하여 제공)이었고, 인산염 완충액/아세토니트릴계를 사용하여 기울기 용출을 수행하였다. 주요 피크의 분율을 상기 언급된 한외여과 장치에 의하여 농축하였다. 이동상으로서 염화나트륨 수용액을 사용하여 양이온 교환수지(Pharmacia에 의하여 제공된 SP-Sephaeex)로 포장된 컬럼에서 농축물을 용출하였고, 이동상으로서 초산 수용액을 사용하여 Sephadec G-25(Parmacia에 의하여 제공)로 포장된 컬럼에서 용출물을 추가 용출하였다. 용출물을 동결 건조시켰다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과를 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
ASP; 1.00(1), Thr; 2.80 (3), Ser; 1.82 (2),
Glu; 4.05 (4), Pro; 1.98 (2), Gly; 3.94 (4),
Ala; 2.00 (2), Cys; 1.65 (2), Val; 1.01 (1),
Met; 1.01 (1), Ile; 1.02 (1), Leu; 4.99 (5),
Tyr; 0.97 (1), Lys; 2.00 (2), His; 1.04 (1),
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표 1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 1번이라는 결론을 뒷받침한다.
[실시예 2]
단계 14에서 로이신의 짝지음 및 단계 26에서 시스테인의 제2짝지음을 수행하지 않는 것을 제외하고 실시예 1에 기재된 것과 동일한 방식으로 실시예 1의 과정(5)에서 얻어진 펩티드수지 30g을 과정(6)의 공정 및 후속단계로 수행시켜 정제 생성물을 얻었다.
정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
ASP; 1.00(1), Thr; 2.64 (3), Ser; 1.59 (2),
Glu; 4.00 (4), Pro; 2.12 (2), Gly; 3.90 (4),
Ala; 2.01 (2), Cys; 1.62 (2), Val; 0.99 (1),
Met; 1.00 (1), Ile; 1.05 (1), Leu; 4.12 (5),
Tyr; 1.10 (1), Lys; 1.97 (2), His; 1.03 (1)
아미노산 분석결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표 1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 2번이라는 결론을 뒷받침한다.
[실시예 3]
과정(5)에서 짝지음 수행하고 표16에 제시된 아미노산에 대한 짝지음 조건을 표16에 제시된 대로 변화시키는 것을 제외하고 실시예 1에 기재된 것과 동일한 방식으로 과정(6)의 공정 및 후속단계로 실시예 1의 과정()4)에서 얻어진 펩티드 수지 30g을 수행시켜 정제 생성물을 얻었다.
정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호수치는 이론치이다.
ASP; 1.01(1), Thr; 1.89 (3), Ser; 1.80 (2)
Glu; 3.08 (4), Pro; 2.17 (2), Gly; 3.93 (4),
Ala; 2.02 (2), Cys; 1.65 (2), Val; 1.01 (1),
Met; 0.96 (1), Ile; 0.98 (1), Leu; 4.95 (5),
Tyr; 0.93 (1), Lys; 1.96 (2), His; 1.00 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표 1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 3번이라는 결론을 뒷받침한다.
[실시예 4]
실시예 1의 과정(6)에서 단계 14의 로이신 짝지음 대신에 동일 위치의 글리신 짝지음을 수행하고 과정(8)에서 단계 26의 시스테인 제2짝지음을 수행하지 않는 것을 제외하고 실시예 1에 기재된 것과 동일방식으로 과정(6)의 공정과 후속단계로 실시예 1의 과정(5)에서 얻어진 펩티드수지 30g을 수행시켜 정제 생성물을 얻는다. 또한 단계 27에서 트레오닌 짝지음을 2회 수행하고 아세틸화를 수행하였다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
ASP; 1.07(1), Thr; 2.69 (3), Ser; 1.72 (2),
Glu; 3.97 (4), Pro; 2.03 (2), Gly; 4.95 (5),
Ala; 2.01 (2), Cys; 1.64 (2), Val; 1.10 (1),
Met; 0.91 (1), Ile; 0.91 (1), Leu; 3.92 (4),
Tyr; 1.06 (1), Lys; 1.96 (2), His; 0.96 (1),
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 4번이라는 결론을 뒷받침한다.
[실시예 5]
(1) 수지의 활성화
펩티드의 고상 합성용 반응관(Peninsula Laboratory에 의하여 제공)을 BHA수지(Peninsula Laboratory에 의하여 제공, 디비닐벤젠 함유량=1% 100-120 메쉬, 아미노기 함유량=0.86mM/g)75g으로 충전하였고, 그 수지를 염화메틸렌 900㎖와 각 교반시 2분간 2회 교반한 다음 여과시켰다. 그후, 수지를 다음 용매와 각 교반시 5분 각 용매에 대하여 2회 연속 교반하고 이어서 여과시켰다.
(i) 염화메틸렌 900㎖
(ii) 10% TEA/염화메틸렌 300㎖
그후 염화메틸렌, 에탄올 및 염화메틸렌 각 900㎖로서 연속 세척하였다. 각 용매로서 2회 세척하고 각 세척시 2분간 교반한 다음 각 교반후 여과시켰다 (이후 이 공정을 세척공정 III으로 지칭함).
(2) 단계 1
과정 (1)에서 얻어진 수지 모두 다음 용매와 연속 교반하고 여과하였다.
짝지음:
염화메틸렌 900㎖ + Boc - Pro 25g(0.12mole) + 1M DCC/염화메틸렌 117㎖(16시간)
그후 세척공정 III을 수행하였다.
아세틸화:
염화메틸렌 900㎖ + 무수초산 10㎖ + 10% TEA/염화메틸렌 100㎖(1시간)
그후 세척공정 III을 수행하였다.
처리수지를 닌히드린 시험하였을 때, 그 결과는 음성이었다.
(3) 단계 2
과정(2)에서 얻어진 수지 모두 다음 용매와 연속 교반하였고 여과하였다.
보호기 제거:
50% TFA/염화메틸렌 (5분 및 25분, 각 1L)
그후 수지를 염화메틸렌, 메탄올 및 클로로포름 각 900㎖와 각 교반시 2분간 각 용매에 대하여 2회 교반시켜 세척한 다음 여과시켰다(이후 이 세척공정을 세척공정 II로 지칭함).
중화:
클로로포름 800㎖ + 10% TFA/염화메틸렌 200㎖(5분 및 15분)
그후 세척공정 I을 수행하였다.
짝지음:
염화메틸렌 1L + Boc - Thr(Bzl)45g(0.15mole) + 1M DCC/염화메틸렌 146㎖(16시간)
그후 세척공정 III을 수행하였다.
처리수지를 닌히드린 시험하였을 때, 그 결과는 음성이었다.
(4) 단계 3-11
표 17에 제시된 보호 아미노기가 연속 짝지음되는 것을 제외하고 과정(3)에서와 동일 방식으로 보호기 제거, 중화 및 세척을 과정(3)에서 얻어진 수지 모두에 수행하였다.
표 17에서, CHCl는 염화메틸렌을 나타내며, DMF는 디메틸포름아미드를 나타내며, HOBt는 1-히드록시벤조트리아졸을 나타낸다.
단계 11에서 티로신의 짝지음 및 세척후, 펩티드 수지를 반응관으로부터 취하고 건조시켰다.
(5) 단계 12-13
과정(4)에 의하여 얻어진 펩티드 수지 35g을 사용하여, 표18에 제시된 보호 아미노산이 연속으로 짝지음 되고 용매의 양이 과정(3)에 사용된 양 1/4으로 조절되는 것을 제외하고 과정(3)과 동일한 방식으로 보호기의 제거, 중화 및 세척을 수행하였다.
단계 13에서 티로신의 짝지음 및 세척후, 반응관으로부터 펩티드 수지를 취하고 건조시켰다.
(6) 단계 14-32
과정(5)에 의하여 얻어진 펩티드 수지 11g을 사용하여, 표19에 제시된 보호 아미노산이 연속으로 짝지음 되고 용매의 양이 과정(3)에 사용된 양 1/4으로 조절되는 것을 제외하고 과정(3)과 동일한 방식으로 보호기의 제거, 중화 및 세척을 수행하였다.
단계 32에서 시스테인의 짝지음 및 세척 후 펩티드 수지를 반응관으로부터 취한 다음 건조시켰다. 그후, 펩티드 수지를 실시예 1에 기재된 것과 동일방식으로 과정(9)의 공정 및 후속단계로 수행하였다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
ASP; 1.02(1), Thr; 3.56 (4), Ser; 2.53 (3)
Glu; 4.08 (4), Pro; 1.90 (2), Gly; 3.91 (4),
Ala; 0.98 (1), Cys; 1.64 (2), Met; 1.05 (1),
Ile; 1.13 (1), Leu; 5.16 (5), Tyr; 1.22 (1)
Lys; 2.01 (2), His; 0.97 (1)
아미노산 분석에 대한 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표 1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 5번이라는 결론을 뒷받침한다.
[실시예 6]
단계 14에서 로이신의 짝지음을 수행하지 않고 표20에 제시된 아미노산에 대한 짝지음 조건을 표20에 제시된 것처럼 변화시킨 것을 제외하고 실시예 5의 과정(5)에서 얻어진 펩티드수지 11g을 실시예 5에 기재된 것과 동일방식으로 과정(6)의 공정 및 후속단계로 수행시켜 정제 생성물을 얻었다.
정제 생성물의 아미노산 분석결과를 다음에 제시한다. 각 괄호수치는 이론치이다.
ASP; 1.00(1), Thr; 3.64 (4), Ser; 2.74 (3)
Glu; 4.14 (4), Pro; 2.01 (2), Gly; 3.85 (4),
Ala; 1.00 (1), Cys; 1.50 (2), Met; 0.90 (1),
Ile; 1.10 (1), Leu; 4.16 (5), Tyr; 1.15 (1)
Lys; 2.00 (2), His; 1.03 (1)
아미노산 분석결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 6번이라는 결론을 뒷받침한다.
[실시예 7]
실시예 5의 과정(5)에서 짝지음을 수행하지 않는 것을 제외하고 실시예 5에 기재된 것과 동일방식으로 실시예 5의 과정(4)에서 얻어진 펩티드 수지 11g을 과정(6)의 공정 및 후속단계로 수행시켜 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 0.99(1), Thr; 2.75 (4), Ser; 2.64 (3)
Glu; 3.11 (4), Pro; 2.02 (2), Gly; 3.90 (4),
Ala; 0.99 (1), Cys; 1.61 (2), Met; 0.99 (1),
Ile; 1.10 (1), Leu; 5.17 (5), Tyr; 1.14 (1)
Lys; 2.02 (2), His; 0.99 (1)
아미노산 분석결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 7번이라는 결론을 뒷받침한다.
[실시예 8]
실시예 5의 과정(5)에서 단계 14의 로이신 짝지음 대시에 동일위치에서 글리신의 짝지음이 표 21에 제시된 조건하에 수행되는 것을 제외하고 실시예 5에 기재된 동일방식으로 실시예 5의 과정(5)에서 얻어진 펩티드 수지 11g을 과정(6)의 공정 및 후속단계로 수행시켜 정제생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.00(1), Thr; 3.57 (4), Ser; 2.64 (3)
Glu; 4.10 (4), Pro; 2.08 (2), Gly; 4.89 (4),
Ala; 1.00 (1), Cys; 1.52 (2), Met; 0.99 (1),
Ile; 1.10 (1), Leu; 4.14 (5), Tyr; 0.98 (1)
Lys; 2.01 (2), His; 0.98 (1)
아미노산 분석결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 8번이라는 결론을 뒷받침한다.
[실시예 9]
(1) 실시예 1의 과정(4)에서 얻어진 수지 펩티드 75g을 사용하여, 표 22에 제시된 보호 아미노사이 연속 짝지음되고, 용매의 양이 실시예 1의 과정(3)에 사용된 양 2/3으로 조절되며, 에탈올이 세척공정 I및 II에서 메탄올 대신 사용되는 것을 제외하고 실시예 1의 과정(3)에서와 동일한 방식으로 보호기의 제거, 중화 및 세척을 수행하였다.
단계 24에서 로이신 짝지음 및 세척후, 펩티드 수지를 반응관으로부터 취하고 건조시켰다.
(2) 과정 (1)에서 얻어진 펩티드 수지 15g을 사용하여, 표 23에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하였다.
단계 32에서 시스테인 짝지음 및 세척후, 반응관으로부터 펩티드수지를 취하고 건조시켰다. 그후, 펩티드 수지를 실시예 1에 기재된 것과 동일방식으로 과정(9)의 공정 및 후속단계로 수행하였다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.02(1), Thr; 2.62 (3), Ser; 1.70 (2)
Gly; 4.03 (4), Pro; 2.09 (2), Gly; 4.90 (4),
Ala; 2.02 (2), Cys; 1.74 (2), Val; 1.08 (1),
Ile; 1.01 (1), Leu; 5.20 (5), Tyr; 1.08 (1)
Lys; 2.03 (2), His; 0.99 (1)
아미노산 분석결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 9번이라는 결론을 뒷받침한다.
[실시예 8]
실시예 9의 과정(2)에서 단계 25의 로이신 짝지음 대시에 동일위치에서 알라닌 짝지음을 수행하고 단계 30에서 아스파라긴의 짝지음을 표 24에 제시된 대로 2회 수행하는 것을 제외하고 실시예 9에 기재된 동일방식으로 실시예 9의 과정(1)에서 얻어진 펩티드 수지 15g을 과정(2)의 공정 및 후속단계로 수행시켜 정제생성물을 얻었다.
[표 24]
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.01(1), Thr; 2.59 (4), Ser; 1.72 (2)
Glu; 3.96 (4), Pro; 2.05 (2), Gly; 3.99 (4),
Ala; 3.03 (1), Cys; 1.62 (2), Val; 1.06 (1),
Ile; 1.02 (1), Leu; 4.94 (5), Tyr; 0.95 (1)
Lys; 2.01 (2), His; 1.05 (1)
아미노산 분석결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 10번이라는 결론을 뒷받침한다.
[실시예 11]
실시예 9의 과정(1)에서 얻어진 펩티드 수지 15g을 사용하여, 실시예 9의 과정(2)에서 단계 25의 글리신 짝지음 대신 표 25에 제시된 대로 동일위치에서 발린의 짝지음을 수행한 것을 제외하고 실시예 9에 기재된 것과 동일 방식으로 과정(2)의 공정 및 후속단계를 수행하여 정제생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 0.99(1), Thr; 2.66 (4), Ser; 1.79 (2)
Glu; 4.03 (4), Pro; 2.10 (2), Gly; 3.94 (4),
Ala; 2.04 (1), Cys; 1.75 (2), Val; 2.06 (2),
Ile; 0.94 (1), Leu; 5.10 (5), Tyr; 0.74 (1)
Lys; 2.01 (2), His; 1.05 (1)
아미노산 분석결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 11번이라는 결론을 뒷받침한다.
[실시예 12]
실시예 9의 과정(2)에서 단계 25의 글리신 짝지음 대신에 표 26에 제시된 대로 동일 위치에서 포롤린 짝지음을 수행한 것을 제외하고 실시예 9에 기재된 방식으로 실시예 9의 과정(1)에서 얻어진 펩티드 수지 15g을 과정(2)의 공정 및 후속단계를 수행하여 정제생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.02(1), Thr; 2.62 (4), Ser; 1.68 (2)
Glu; 4.00 (4), Pro; 3.19 (3), Gly; 3.93 (4),
Ala; 2.04 (1), Cys; 1.80 (2), Val; 1.10 (1),
Ile; 0.97 (1), Leu; 5.14 (5), Tyr; 0.94 (1)
Lys; 2.01 (2), His; 0.99 (1)
아미노산 분석결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 12번이라는 결론을 뒷받침한다.
[실시예 13]
실시예 9의 과정(2)에서 단계 25의 글리신 짝지음 대신에 동일 위치에서 로이신 짝지음을 수행하고 표 27에 제시된 대로 단게 30에서 아스파라긴 짝지음을 2회 수행하는 것을 제외하고 실시예 9에 기재된 것과 동일방식으로 실시예 9의 과정(1)에서 얻어진 펩티드 수지 15g을 과정(2)의 공정 및 후속단계를 수행하여 정제생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.02(1), Thr; 2.62 (3), Ser; 1.72 (2)
Glu; 3.99 (4), Pro; 2.09 (2), Gly; 3.90 (4),
Ala; 2.09 (2), Cys; 1.73 (2), Val; 1.09 (1),
Ile; 0.96 (1), Leu; 6.05 (6), Tyr; 0.89 (1)
Lys; 2.00 (2), His; 1.08 (1)
아미노산 분석결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 13번이라는 결론을 뒷받침한다.
[실시예 13]
표 28에 제시된 보호 아미노산을 실시예 1의 과정(7)에서 얻어진 펩티드 수지 11g에 짝지음 하였다. 보호기의 제거, 중화, 세척, 건조 및 펩티드의 분리를 실시예 1의 과정(8) 및 (9)에서와 동일 방식으로 수행하였다. 얻어진 용액의 pH값을 9로 조절하고 용액을 30분간 교반하였다. 그후, 실시예 1의 과정(11)에서와 동일 방식으로 정제시켰다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.03(1), Thr; 2.74 (3), Ser; 1.64 (2)
Glu; 4.08 (4), Pro; 2.02 (2), Gly; 4.00 (4),
Ala; 3.84 (4), Val; 1.01 (1), Met; 1.17 (1),
Ile; 1.12 (1), Leu; 5.33 (5), Tyr; 1.33 (1)
Lys; 2.02 (2), His; 1.08 (1)
아미노산 분석결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 14번이라는 결론을 뒷받침한다.
[실시예 15]
실시예 2에서 얻어진 펩티드 수지 11g을 사용하여 실시예 14의 단계 30에서 아스파라긴의 짝지음이 표 29에 제시된 대로 2회 수행하는 것을 제외하고 실시예 1의 과정(6)과 (7)에서의 동일한 처리를 수행하고 실시예 14에 기재된 것과 동일방식으로 이 펩티드 수지를 처리함으로써 정제생성물을 얻었다.
정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.00(1), Thr; 2.78 (3), Ser; 1.69 (2)
Glu; 4.09 (4), Pro; 2.00 (2), Gly; 3.99 (4),
Ala; 3.89 (4), Val; 1.06 (1), Met; 1.08 (1),
Ile; 1.07 (1), Leu; 4.23 (4), Tyr; 1.17 (1)
Lys; 2.03 (2), His; 1.07 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 따라 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 15번이라는 결론을 뒷받침한다.
[실시예 16]
실시예 14의 단계 29에서 로이신 짝지음 및 실시예 14의 단계 30에서 아스파라긴의 짝지음이 표 30에 제시된 대로 변화시킨 것을 제외하고, 실시예 3에서 얻어진 펩티드 수지 11g을 사용하여 실시예 1의 과정(6)과 (7)에서의 동일처리를 수행하고 실시예 14에 기재된 것과 동일방식으로 이 펩티드 수지를 처리함으로써 정제생성물을 얻었다.
상기 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.02(1), Thr; 1.92 (2), Ser; 1.82 (2)
Glu; 3.05 (3), Pro; 2.04 (2), Gly; 4.01 (4),
Ala; 3.87 (4), Val; 1.05 (1), Met; 1.10 (1),
Ile; 1.04 (1), Leu; 5.25 (5), Tyr; 1.01 (1)
Lys; 2.01 (2), His; 1.07 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 16번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 17]
실시예 14의 단계 27에서 트레오닌의 짝지음 및 실시예 14의 단계 30에서 아스파라긴의 짝지음을 표 31에 제시된 대로 변화시킨 것을 제외하고, 실시예 4에서 얻어진 펩티드 수지 11g을 사용하여 실시예 1의 과정(6)과 (7)에서의 동일한 처리를 수행하고 실시예 14에 기재된 것과 동일방식으로 이 펩티드-수지를 처리함으로써 정제생성물을 얻었다.
상기 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.00(1), Thr; 2.74 (3), Ser; 1.64 (2)
Glu; 4.12 (4), Pro; 2.00 (2), Gly; 4.95 (5),
Ala; 3.90 (4), Val; 1.01 (1), Met; 1.13 (1),
Ile; 1.11 (1), Leu; 4.32 (4), Tyr; 1.22 (1)
Lys; 2.03 (2), His; 1.09 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 17번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 18]
표 32에 제시된 보호 아미노산을 실시에 5의 과정(4)에서 얻어진 펩티드수지 15g에 연속 짝지음하였다.
단계 31에서 글리신 짝지음 및 세척후, 반응관으로부터 펩티드수지를 취하고 건조시킨 다음, 얻어진 펩티드 수지 8.7g을 사용하여 단계 32에서 알라닌을 짝지음하였다.
단계 32에서 알라닌 짝지음 및 세척후, 반응관으로부터 펩티드수지를 취하고 건조시킨 다음 실시예 14에서와 동일 방식으로 처리하여 정제 생성물을 얻었다.
표 32에서, Bop는 Bop시약을 나타내며 DIEA는 디이소프로필에틸아민을 나타낸다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.02(1), Thr; 3.60 (4), Ser; 2.73 (3)
Glu; 4.03 (4), Pro; 2.04 (2), Gly; 3.96 (4),
Ala; 2.98 (3), Met; 0.99 (1), Ile; 0.93 (1),
Leu; 5.16 (5), Tyr; 0.74 (1), Lys; 2.02 (2),
His; 0.96 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 18번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 19]
표 33에 제시된 보호 아미노산을 실시예 5의 과정(4)에서 얻어진 펩티드수지 8.5g에 연속 짝지음한다.
단계 31에서 글리신 짝지음 및 세척후, 반응관으로부터 펩티드수지를 취한 다음 건조시켰다. 건조 펩티드 수지 8.7g을 이용하여 단계 32에서 알라닌을 짝지음하였다.
단계 32에서 알라닌 짝지음 및 세척후, 반응관으로부터 펩티드수지를 실시예 14에서와 동일 방식으로 처리하였다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.01(1), Thr; 3.60 (4), Ser; 2.76 (3)
Glu; 4.02 (4), Pro; 2.02 (2), Gly; 3.95 (4),
Ala; 2.97 (3), Met; 1.02 (1), Ile; 0.93 (1),
Leu; 5.08 (5), Tyr; 0.76 (1), Lys; 2.03 (2),
His; 0.96 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 19번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 20]
(1) 실시예 1의 과정(4)에서 얻어진 펩티드수지 75g을 사용하여, 표 34에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하였다.
단계 21에서 로이신 짝지음 및 세척후, 펩티드수지를 반응관으로부터 취한 다음 건조시켰다.
(2) 과정(1)에서 얻어진 펩티드수지 15g을 사용하여, 표 35에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하였다.
단계 32에서 알라닌 짝지음 및 세척후, 반응관으로부터 펩티드수지를 취하고 건조시켰다. 그후, 펩티드수지를 실시예 14에서와 동일방식으로 처리하였다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.03(1), Thr; 2.78 (3), Ser; 1.76 (2)
Glu; 4.06 (4), Pro; 2.02 (2), Gly; 3.98 (4),
Ala; 3.93 (4), Met; 1.02 (1), Ile; 0.99 (1),
Leu; 6.09 (6), Tyr; 0.96 (1), Lys; 1.96 (2),
His; 1.09 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 20번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 21]
실시예 9의 과정(1)에서 얻어진 펩티드수지 5g을 사용하여, 표 36에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하였다.
표36에서 Asu(OBu )는 L-α-아미노수베르산- -삼차부틸 에스테르를 나타내며 OPf펜타플루오로페닐 에스테르를 나타낸다.
단계 31에서 글리신 짝지음 및 세척후, 펩티드수지를 다음 용매에서 연속 교반하고 여과시켰다.
75% TEA/염화메틸렌 100㎖ + 페놀 0.5g(30분)
염화메틸렌, 에탄올 및 클로로포름 (각 75㎖, 2회)
TEA 10㎖ + 클로로포름 65㎖
DMF 75㎖ (2회)
20% 피페리딘/DMF 100㎖(20분)
염화메틸렌, 에탄올 및 클로로포름 (각 75㎖, 2회)
2g Bop/DMF 75㎖ (16시간, 3회)
세척후, 반응관으로부터 펩티드수지를 취하고 건조시킨 다음, 실시예 14에서와 동일 방식으로 처리하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.02(1), Thr; 2.62 (3), Ser; 1.71 (2)
Glu; 4.06 (4), Pro; 2.02 (2), Gly; 3.96 (4),
Ala; 1.98 (4), Val; 0.97 (1), Met; 1.10 (1),
Ile; 1.03 (1), Leu; 5.43 (5), Tyr; 1.12 (1),
Lys; 1.96 (2), His; 1.10 (1), Asu; 1.63 (2)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 21번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 22]
실시예 20의 과정(1)에서 얻어진 펩티드수지 12g을 사용하여, 표 37에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하였다.
단계 31에서 글리신 짝지음 및 세척후, 펩티드수지를 다음 용매에서 연속 교반하고 여과시켰다.
75% TEA/염화메틸렌 125㎖ + 페놀 0.5g(5분 및 25분)
염화메틸렌, 에탄올 및 클로로포름 (각 75㎖, 2회)
TEA 10㎖ + 클로로포름 65㎖
염화메틸렌, 에탄올 및 클로로포름 (각 75㎖, 2회)
2g Bop/DMF 75㎖ (24시간)
세척후, 반응관으로부터 펩티드수지를 취한 다음 건조시켰고, 실시예 14에서와 동일 방식으로 처리하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.02(1), Thr; 2.65 (3), Ser; 1.99 (2)
Glu; 4.03 (4), Pro; 1.79 (2), Gly; 3.97 (4),
Ala; 1.94 (4), Val; 1.04 (1), Ile; 0.98 (1),
Leu; 6.26 (6), Tyr; 0.96 (1), Lys; 2.04 (2),
His; 1.02 (1), Asu; 1.62 (2)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 22번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 23]
실시예 20의 과정(1)에서 얻어진 펩티드수지 12g을 사용하여, 표 38에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하였다.
단계 31에서 아스파라긴 짝지음 및 세척후, Bop 4.3g을 1-메틸-2-피롤리돈 100㎖에 용해시키고 DIEA 3㎖를 용액에 첨가시킨 다음 혼합물을 24시간 동안 반응시킨 것을 제외하고 실시예 21에서와 동일한 방식으로 펩티드수지를 처리하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.94(2), Thr; 2.77 (3), Ser; 1.71 (2)
Glu; 4.13 (4), Pro; 2.05 (2), Gly; 3.02 (3),
Ala; 2.01 (2), Val; 1.01 (1), Met; 1.03 (1),
Ile; 1.07 (1), Leu; 5.19 (5), Tyr; 0.98 (1),
Lys; 2.91 (2), His; 1.03 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 23번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 24]
실시예 23의 단계 25에서 메티오닌 짝지음 대신 표 39에 제시된 것처럼 로이신의 짝지음을 수행할 것을 제외하고 실시예 20의 과정(1)에서 얻어진 펩티드 수지 12g을 실시예 23에서와 같이 공정수행시켜 정제생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.94(2), Thr; 2.80 (3), Ser; 1.70 (2)
Glu; 4.08 (4), Pro; 2.06 (2), Gly; 3.06 (3),
Ala; 2.01 (2), Val; 1.19 (1), Ile; 0.98 (1),
Leu; 6.09 (6), Tyr; 0.97 (1), Lys; 2.91 (3),
His; 1.17 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 24번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 25]
실시예 20의 과정 1에서 얻어진 펩티드 수지 12g을 사용하여 표 40에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하였다.
단계 31에서 아스파르트산 짝지음 및 세척후, 펩티드수지를 다음 용매에서 연속 교반하고 건조시켰다.
DMF 100㎖ (2분, 2회)
20% 피페리딘/DMF 125㎖ (20분)
염화메틸렌, 에탄올 및 염화 메틸렌 (각 100㎖, 2분, 2회)
7.8g Bop/1-메틸-2-피롤리돈 125㎖ + DIEA 5㎖ + HOBt 2.4g (15시간)
염화메틸렌, 에탄올 및 염화 메틸렌 (각 100㎖, 2분, 2회)
3.5g Bop/1-메틸-2-피롤리돈 100㎖ + DIEA 3㎖ + HOBt 1.2g (43시간)
염화메틸렌, 에탄올 및 클로로포름 (각 100㎖, 2분, 2회)
10% TEA 25㎖/클로로포름 100㎖(5분) + 무수초산 1.7㎖ (60분)
염화메틸렌, 에탄올 및 염화 메틸렌 (각 100㎖, 2분, 2회)
50% TEA /염화 메틸렌 125㎖(5분 및 30분)
염화메틸렌, 에탄올 및 클로로포름 (각 100㎖, 2분, 2회)
10% TEA 25㎖ + 클로로포름 100㎖(5분 및 15분)
염화메틸렌, 에탄올 및 클로로포름 (각 100㎖, 2분, 2회)
10% TEA 25㎖/ 클로로포름 100㎖(5분)+무수초산 1.7㎖ (60분)
염화메틸렌, 에탄올 및 염화 메틸렌 (각 100㎖, 2분, 2회)
세척후, 반응관으로부터 펩티드수지를 취한 다음 건조시켰고, 실시예 14에서와 동일 방식으로 처리하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.88(2), Thr; 2.81 (3), Ser; 1.97 (2)
Glu; 4.16 (4), Pro; 1.93 (2), Gly; 3.10 (3),
Ala; 1.97 (2), Val; 1.12 (1), Ile; 1.04 (1),
Leu; 6.44 (6), Tyr; 0.96 (1), Lys; 2.96 (3),
His; 1.01 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 25번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 26]
실시예 20의 과정(1)에서 얻어진 펩티드수지 12g을 사용하여, 표 41에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하였다.
단계 31에서 아스파르트산 짝지음 및 세척후, 펩티드수지를 다음 용매에서 교반하고 여과시켰다.
DMF 100㎖ (2분, 2회)
20% 피페리딘/DMF 125㎖ (20분)
염화메틸렌, 에탄올 및 염화 메틸렌 (각 100㎖, 2분, 2회)
7.8g Bop/1-메틸-2-피롤리딘 125㎖ + DIEA 5㎖ + HOBt 2.4g (15시간)
염화메틸렌, 에탄올 및 염화 메틸렌 (각 100㎖, 2분, 2회)
2.6g Bop/1-메틸-2-피롤리돈 125㎖ + DIEA 1.7㎖ + HOBt 0.8g (15시간, 2회)
세척후, 반응관으로부터 펩티드수지를 취한 다음 건조시켰고, 실시예 14에서와 동일 방식으로 처리하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.00(1), Thr; 2.67 (3), Ser; 1.90 (2)
Glu; 4.08 (4), Pro; 1.81 (2), Gly; 2.98 (3),
Ala; 1.94 (2), Val; 1.03 (1), Ile; 1.01 (1),
Leu; 6.29 (6), Tyr; 0.97 (1), Lys; 2.99 (3),
His; 1.04 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 26번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 27]
단계 26에서 리신 짝지음 대신에, 아스파르트산 짝지음을 표 42에 제시된 것처럼 수행하였고, 트레오닌의 짝지음 및 아스파라긴의 제2짝지음을 수행하지 않는 것을 제외하고 실시예 20의 과정(1)에서 펩티드 수지 12g을 실시예 23과 같이 공정 수행하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.98(2), Thr; 2.78 (3), Ser; 1.71 (2)
Glu; 4.13 (4), Pro; 2.04 (2), Gly; 2.98 (3),
Ala; 1.99 (2), Val; 1.09 (1), Met; 1.10 (1)
Ile; 1.16 (1), Leu; 5.25 (5), Tyr; 1.04 (1),
Lys; 2.92 (3), His; 1.13 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 27번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 28]
실시예 23의 공정(1)에서 단계 25의 메티오닌 짝지음 대신에 로이신의 짝지음을 수행하고, 단계 26의 리신 짝지음 대신에 아스파르트산 짝지음을 수행하며, 단계 31의 아스파르트산 짝지음 대신에 표 43에 제시된 바와 같이 리신 짝지음을 수행한 것을 제외하고 실시예 20의 과정(1)에서 펩티드 수지 12g을 실시예 23에서와 같이 공정 수행시켜 정제 생성물을 얻었다. 트레오닌의 짝지음 및 아스파라긴의 제2짝지음을 수행하지 않았다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.94(2), Thr; 2.77 (3), Ser; 1.73 (2)
Glu; 4.09 (4), Pro; 1.99 (2), Gly; 2.96 (3),
Ala; 2.14 (2), Val; 1.01 (1), Ile; 0.99 (1),
Leu; 6.07 (6), Tyr; 0.95 (1), Lys; 2.87 (3),
His; 1.09 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 28번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 29]
실시예 9의 과정 (1)에서 얻어진 펩티드 수지 13g을 사용하여 표 44에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하였다.
표 44에서, Orn은 오르니틴을 나타낸다.
단계 31에서 글루타민산 짝지음 및 세척후, 펩티드 수지를 실시예 26과 같은 방식으로 처리하였다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 0.99(1), Thr; 2.75 (3), Ser; 1.88 (2)
Glu; 5.16 (5), Pro; 1.92 (2), Gly; 3.01 (3),
Ala; 2.00 (2), Val; 1.05 (1), Ile; 0.99 (1),
Leu; 6.33 (6), Tyr; 0.97 (1), Lys; 1.91 (2),
His; 1.02 (1), Ornithine; 1.22 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 29번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 30]
단계 26에서 오르니틴 짝지음 대신에, 글루타민산 짝지음을 수행하고, 단계 31에서 글루타민산 짝지음 대신에, 오르니틴 짝지음을 표 45에 제시된 것처럼 수행한 것을 제외하고 실시예 9의 과정(1)에서 펩티드 수지 13g을 실시예 29와 같이 공정수행시켜 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 0.97(1), Thr; 2.64 (3), Ser; 1.73 (2)
Glu; 5.15 (5), Pro; 1.92 (2), Gly; 3.05 (3),
Ala; 2.01 (2), Val; 1.04 (1), Ile; 1.09 (1),
Leu; 6.42 (6), Tyr; 0.94 (1), Lys; 1.89 (2),
His; 1.02 (1), Ornithine; 1.21 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 30번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 31]
(1) 실시예 1의 과정 (4)에서 얻어진 펩티드 수지 20g을 사용하여 표 44에서 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하였다.
단계 24에서 로이신 짝지음 및 세척후, 펩티드 수지를 반응관으로부터 취한 다음 건조하였다.
(2) 과정(1)에서 얻어진 펩티드 수지 15g을 사용하여, 표 47에서 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하고, 펩티드 수지를 실시예 26에서와 같은 방식으로 처리하여 정제생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 3.85(4), Thr; 2.67 (3), Ser; 1.94 (2)
Glu; 2.07 (2), Pro; 2.00 (2), Gly; 3.03 (3),
Ala; 1.99 (2), Val; 1.10 (1), Ile; 1.02 (1),
Leu; 5.36 (5), Tyr; 0.99 (1), Phe; 1.06 (1),
Lys; 3.05 (3), His; 1.03 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 31번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 32]
실시예 31의 과정 (1)에서 얻어진 펩티드 수지 15g을 사용하여, 표 48에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하고, 펩티드 수지를 실시예 26에서와 같은 방식으로 처리하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 3.01(3), Thr; 2.87 (3), Ser; 1.78 (2)
Glu; 2.01 (2), Pro; 1.97 (2), Gly; 3.02 (3),
Ala; 1.99 (2), Val; 1.06 (1), Ile; 1.01 (1),
Leu; 5.19 (5), Tyr; 1.01 (1), Phe; 1.02 (1),
Lys; 3.00 (3), His; 1.12 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 32번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 33]
실시예 31의 과정 (4)에서 얻어진 펩티드 수지 16g을 사용하여, 표 49에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하였다.
단계 31에서 무수 숙신산 짝지음 및 세척후, 펩티드 수지를 실시예 26과 같은 방식으로 처리하였다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 2.97(3), Thr; 3.62 (4), Ser; 0.89 (1)
Glu; 2.00 (2), Pro; 2.08 (2), Gly; 3.07 (3),
Ala; 1.98 (2), Val; 1.05 (1), Ile; 0.99 (1),
Leu; 5.14 (5), Tyr; 1.14 (1), Phe; 1.00 (1),
Lys; 2.59 (3), His; 0.98 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 33번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 34]
(1) 수지의 활성화
실시예 1에 기재된 BHA수지 50g을 용매양이 실시예 1에 사용된 양 1/3으로 조절된 것을 제외하고 실시예 1의 과정(1)에서와 동일한 방식으로 활성화하였다.
(2) 단계 1-24
과정 (1)에서 얻어진 수지 모두를 사용하여, 표50에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하였다. 짝지음 용매로서 DMF를 사용하였고 짝지음제로서 BOP와 DIEA를 사용하였다.
단계 24에서 로이신 짝지음 및 세척후, 반응관으로부터 펩티드 수지를 취하고 건조시켰다.
(3) 단계 25-31
과정 (2)에서 얻어진 펩티드 수지 15g을 사용하여, 표 51에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하였다. 단계 30에서 제3의 짝지음용 짝지음제로서 DCC와 HOBt를 사용하였고, 단계 31에서 클로로포름내 TEA 10%용액을 짝지음 용매로서 상용하고 어떠한 짝지음제도 사용하지 않는 것을 제외하고 동일 짝지음 용매 및 짝지음제를 사용하였다.
단계 31에서 무수 숙신산 짝지음 및 세척후, 펩티드 수지를 실시예 26에 기재된 방식으로 처리하여 정제생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 2.99(3), Thr; 4.75 (5), Ser; 0.90 (1)
Glu; 2.04 (2), Pro; 1.95 (2), Gly; 2.97 (3),
Ala; 1.96 (2), Val; 1.00 (1), Met; 1.08 (1),
Ile; 1.02 (1), Leu; 2.02 (2), Tyr; 1.11 (1),
Phe; 3.11 (3), Lys; 2.02 (2), His; 1.03 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 34번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 35]
단계 25에서 메티오닌 짝지음 대신에, 표 52에 제시된 것처럼 발린의 짝지음을 수행한 것을 제외하고 실시예 34의 과정(2)에서 펩티드수지 15g을 실시예 34의 과정(3)에서 공정으로 수행시켜 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 2.96(3), Thr; 4.65 (5), Ser; 0.93 (1)
Glu; 2.02 (2), Pro; 2.01 (2), Gly; 2.99 (3),
Ala; 2.02 (2), Val; 2.10 (2), Ile; 1.01 (1),
Leu; 2.06 (2), Tyr; 0.90 (1), Phe; 2.85 (3),
Lys; 2.03 (2), His; 0.99 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 35번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 36]
단계 25에서 메티오닌 짝지음 대신에, 표 53에 제시된 것처럼 로이신의 짝지음을 수행한 것을 제외하고 실시예 34의 과정(2)에서 펩티드수지 15g을 실시예 34의 과정(3)에서 공정으로 수행하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 2.91(3), Thr; 4.52 (5), Ser; 0.84 (1)
Glu; 2.06 (2), Pro; 2.02 (2), Gly; 3.02 (3),
Ala; 2.01 (2), Val; 1.01 (1), Ile; 1.03 (1),
Leu; 3.15 (3), Tyr; 0.98 (1), Phe; 2.99 (3),
Lys; 1.98 (2), His; 1.07 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 36번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 37]
실시예 34의 과정(2)에서 얻어진 펩티드 수지 15g을 사용하여, 표 54에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하고 펩티드수지를 실시예 34에서와 같은 방식으로 처리하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 3.02(3), Thr; 4.58 (5), Ser; 0.88 (1)
Glu; 2.04 (2), Pro; 2.09 (2), Gly; 3.99 (4),
Ala; 2.00 (2), Val; 1.08 (1), Met; 1.00 (1)
Ile; 1.08 (1), Leu; 2.10 (2), Tyr; 0.86 (1),
Phe; 3.08 (3), Lys; 1.97 (2), His; 1.09 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 37번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 38]
단계 25에서 메티오닌 짝지음 대신에, 표 55에 제시된 것처럼 발린의 짝지음을 수행한 것을 제외하고 실시예 34의 과정(2)에서 펩티드수지 15g을 실시예 37의 과정(3)에서 공정으로 수행하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 3.01(3), Thr; 4.66 (5), Ser; 0.86 (1)
Glu; 2.03 (2), Pro; 2.06 (2), Gly; 3.90 (4),
Ala; 2.06 (2), Val; 2.08 (2), Ile; 0.96 (1),
Leu; 2.08 (2), Tyr; 1.01 (1), Phe; 3.12 (3),
Lys; 2.00 (2), His; 0.99 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 38번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 39]
단계 25에서 메티오닌 짝지음 대신에, 표 56에 제시된 것처럼 로이신의 짝지음을 수행한 것을 제외하고 실시예 34의 과정(2)에서 펩티드수지 15g을 실시예 37에서와 같이 공정수행하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 2.98(3), Thr; 4.72 (5), Ser; 0.92 (1)
Glu; 2.06 (2), Pro; 2.00 (2), Gly; 3.95 (4),
Ala; 1.99 (2), Val; 1.09 (1), Ile; 0.99 (1),
Leu; 3.08 (3), Tyr; 1.12 (1), Phe; 3.01 (3),
Lys; 2.01 (2), His; 1.04 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 39번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 40]
실시예 34의 과정(2)에서 얻어진 펩티드 수지 15g을 사용하여, 표 57에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하고 펩티드수지를 실시예 26에서와 같은 방식으로 처리하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 3.02(3), Thr; 4.64 (5), Ser; 0.87 (1)
Glu; 3.10 (3), Pro; 1.92 (2), Gly; 4.85 (5),
Ala; 2.03 (2), Val; 1.10 (1), Met; 1.03 (1)
Ile; 1.00 (1), Leu; 2.12 (2), Tyr; 1.05 (1),
Phe; 2.89 (3), Lys; 1.00 (1), His; 1.06 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 40번이라는 결론을 뒷받침한다.
[실시예 41]
단계 25에서 메티오닌 짝지음 대신에, 표 58에 제시된 것처럼 발린의 짝지음을 수행한 것을 제외하고 실시예 34의 과정(2)에서 펩티드수지 15g을 실시예 40에서와 같은 방식으로 공정수행하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 2.94(3), Thr; 4.65 (5), Ser; 0.89 (1)
Glu; 3.07 (3), Pro; 1.99 (2), Gly; 4.93 (5),
Ala; 2.04 (2), Val; 2.12 (2), Ile; 1.07 (1),
Leu; 2.07 (2), Tyr; 1.01 (1), Phe; 2.95 (3),
Lys; 0.99 (1), His; 1.07 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 41번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 42]
단계 25에서 메티오닌 짝지음 대신에, 표 59에 제시된 것처럼 로이신의 짝지음을 수행한 것을 제외하고 실시예 34의 과정(2)에서 펩티드수지 15g을 실시예 40에서와 같이 공정수행하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 2.96(3), Thr; 4.56 (5), Ser; 0.89 (1)
Glu; 3.01 (3), Pro; 2.01 (2), Gly; 4.96 (5),
Ala; 2.01 (2), Val; 1.04 (1), Ile; 1.06 (1),
Leu; 3.17 (3), Tyr; 0.95 (1), Phe; 2.99 (3),
Lys; 0.98 (2), His; 1.05 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 42번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 43]
(1) 수지의 활성화
용매의 양을 실시예 1에 사용된 양 1/3으로 조절된 것을 제외하고 실시예 1에서 기재된 BHA 수지 50g을 동일한 방식으로 활성화하였다.
(2) 단계 1-13
과정 (1)에서 얻어진 수지 모두를 사용하여, 표60에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하였다. 짝지음 용매로서 DMF를 사용하였고 짝지음제로서 BOP와 DIEA를 사용하였다.
단계 13에서 로이신 짝지음 및 세척후, 반응관으로부터 펩티드 수지를 취하고 건조시켰다.
(3) 단계 14-25
과정 (2)에서 얻어진 펩티드 수지 30g을 사용하여, 표 61에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하였다.
단계 25에서 발린 짝지음 및 세척후, 반응관으로부터 펩티드 수지를 취한 다음 건조시켰다.
(4) 단계 26-31
과정 (3)에서 얻어진 펩티드 수지 15g을 사용하여, 펩티드 수지를 실시예 34의 과정(3)에서 단계 26 및 후속단계와 동일한 방식으로 처리하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.94(2), Thr; 4.62 (5), Ser; 2.67 (3)
Glu; 3.00 (3), Pro; 2.05 (2), Gly; 3.02 (3),
Val; 1.05 (1), Leu; 5.00 (5), Tyr; 0.99 (1),
Lys; 2.93 (3), His; 1.00 (1), Arg; 1.01 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 43번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 44]
실시예 43의 과정(3)에서 단계 14의 로이신 짝지음을 수행하지 않는 것을 제외하고 실시예 43의 과정(2)에서 펩티드 수지 30g을 실시예 43의 과정 (3)과 (4)에서 공정 수행하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.94(2), Thr; 4.54 (5), Ser; 2.74 (3)
Glu; 3.05 (3), Pro; 2.06 (2), Gly; 2.98 (3),
Val; 1.02 (1), Leu; 4.05 (4), Tyr; 0.93 (1),
Lys; 2.90 (3), His; 1.09 (1), Arg; 0.94 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 44번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 45]
단계 31에서 글리신 짝지음 대신에, 세린의 짝지음을 표 62에 제시된 것처럼 수행한 것을 제외하고 실시예 34의 과정(3)에서 펩티드수지 15g을 실시예 40의 단계 26 및 후속단계와 동일한 공정수행하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.98(2), Thr; 4.70 (5), Ser; 3.64 (4)
Glu; 4.08 (4), Pro; 2.00 (2), Gly; 3.01 (3),
Val; 1.01 (1), Leu; 5.20 (5), Tyr; 1.04 (1),
Lys; 2.01 (2), His; 1.09 (1), Arg; 1.05 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 45번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 46]
실시예 44의 단계 25에서 얻어진 펩티드 수지 15g을 실시예 45에서와 같은 방식으로 처리하여 정제 생산물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.90(2), Thr; 4.66 (5), Ser; 3.58 (4)
Glu; 4.06 (4), Pro; 1.97 (2), Gly; 3.07 (3),
Val; 1.09 (1), Leu; 4.02 (4), Tyr; 0.89 (1),
Lys; 1.98 (2), His; 1.02 (1), Arg; 1.02 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 46번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 47]
(1) 수지의 활성화
실시예 1에 기재된 BHA 수지 50g을 용매의 양이 실시예 1에 사용된 양 1/3으로 조절된 것을 제외하고 실시예 1의 과정(1)에서와 같은 방식으로 활성화하였다.
(2) 단계 1-25
과정 (1)에서 얻어진 수지 모두를 사용하여, 표63에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하였다. 짝지음 용매로서 DMF를 사용하였고 짝지음제로서 BOP와 DIEA를 사용하였다.
단계 25에서 발린 짝지음 및 세척후, 반응관으로부터 펩티드 수지를 취한 다음 건조시켰다.
(3) 단계 26-31
과정 (2)에서 얻어진 펩티드 수지 15g을 실시예 34의 과정(3)에서 단계 26 및 후속단계와 동일한 방식으로 처리하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.92(2), Thr; 3.56 (4), Ser; 1.76 (2)
Glu; 3.06 (3), Pro; 2.02 (2), Gly; 3.05 (3),
Ala; 0.98 (1), Val; 2.18 (2), Leu; 5.25 (5),
Tyr; 1.07 (1), Lys; 2.95 (3), His; 1.03 (1),
Arg; 0.99 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 47번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 48]
실시예 47의 과정 (2)에서 얻어진 펩티드 수지 15g을 실시예 45에서와 같은 방식으로 처리하여 정제 생산물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.94(2), Thr; 3.60 (4), Ser; 2.72 (3)
Glu; 4.11 (4), Pro; 2.02 (2), Gly; 3.93 (4),
Ala; 1.01 (1), Val; 2.02 (2), Leu; 5.16 (5),
Tyr; 1.05 (1), Lys; 1.95 (2), His; 0.99 (1),
Arg; 0.98 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 48번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 49]
단계 30에서 아스파라긴 짝지음 대신에, 세린의 짝지음을 표 64에 제시된 것처럼 수행한 것을 제외하고 실시예 47의 과정(2)에서 펩티드 수지 15g을 실시예 34의 과정(3)에서 단계 26 및 후속단게와 동일한 공정 수행하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.00(1), Thr; 3.64 (4), Ser; 2.58 (3)
Glu; 3.05 (3), Pro; 1.93 (2), Gly; 2.99 (3),
Ala; 1.00 (1), Val; 2.04 (2), Leu; 5.28 (5),
Tyr; 0.99 (1), Lys; 2.88 (3), His; 1.04 (1),
Arg; 1.03 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 49번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 50]
단계 30에서 아스파라긴 짝지음 대신에, 세린의 짝지음을 수행하고, 단계 31에서 글리신 짝지음 대신 표 65에 제시된 것처럼 알라닌의 짝지음을 수행한 것을 제외하고 실시예 47의 과정(2)에서 펩티드 수지 15g을 실시예 40의 단계 26 및 후속단게와 동일한 공정 수행하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시한다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.01(1), Thr; 3.62 (4), Ser; 2.64 (3)
Glu; 4.09 (4), Pro; 1.99 (2), Gly; 3.97 (4),
Ala; 2.01 (2), Val; 2.14 (2), Leu; 5.08 (5),
Tyr; 0.94 (1), Lys; 2.00 (2), His; 1.05 (1),
Arg; 1.00 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 50번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 51]
단계 30에서 아스파라긴 짝지음 대신에, 세린의 짝지음을 수행하고, 단계 31에서 글리신 짝지음 대신에 아스파라긴 짝지움을 표66에 제시된 것처럼 수행한 것을 제외하고 실시예 47의 과정(2)에서 펩티드 수지 15g을 실시예 40의 단계 26 및 후속단계와 동일한 공정 수행하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 1.94(2), Thr; 3.54 (4), Ser; 2.70 (3)
Glu; 4.06 (4), Pro; 2.01 (2), Gly; 3.91 (4),
Ala; 0.99 (1), Val; 2.09 (2), Leu; 5.19 (5),
Tyr; 1.00 (1), Lys; 2.03 (2), His; 1.07 (1),
Arg; 1.02 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 51번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 52]
(1) 수지의 활성화
실시예 1에 기재된 BHA 수지 50g을 용매의 양이 실시예 1에 사용된 양 1/3으로 조절된 것을 제외하고 실시예 1의 과정(1)에서와 동일한 방식으로 활성화하였다.
(2) 단계 1-25
과정 (1)에서 얻어진 수지 모두를 사용하여, 표67에 제시된 보호 아미노산을 연속 짝지음하였다. 짝지음 용매로서 DMF를 사용하였고 짝지음제로서 BOP와 DIEA를 사용하였다.
단계 25에서 발린 짝지음 및 세척후, 반응관으로부터 펩티드 수지를 취한 다음 건조하였다.
(3) 단계 26-31
과정 (2)에서 얻어진 펩티드 수지 15g을 실시예 34의 과정(3)에서 단계 26 및 후속단계와 동일한 방식으로 처리하여 정제 생성물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 3.96(4), Thr; 1.87 (2), Ser; 2.68 (3)
Glu; 1.02 (1), Pro; 2.03 (2), Gly; 3.03 (3),
Ala; 1.00 (1), Val; 1.05 (1), Met; 0.96 (1),
Leu; 3.09 (3), Tyr; 1.02 (1), Phe; 2.99 (3)
Lys; 1.02 (1), His; 0.99 (1), Arg; 1.99 (2)
Trp; 0.85 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 52번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 53]
실시예 52의 과정 (2)에서 얻어진 펩티드 수지 15g을 실시예 45에서와 같은 방식으로 처리하여 정제 생산물을 얻었다.
얻어진 정제 생성물의 아미노산 분석결과는 다음에 제시된다. 각 괄호 수치는 이론치이다.
Asp; 4.01(4), Thr; 1.85 (2), Ser; 3.70 (4)
Glu; 2.03 (2), Pro; 1.99 (2), Gly; 3.92 (4),
Ala; 0.99 (1), Val; 1.07 (1), Met; 1.09 (1),
Leu; 3.02 (3), Tyr; 1.04 (1), Phe; 3.01 (3)
His; 1.04 (1), Arg; 2.05 (2), Trp; 0.88 (1)
아미노산 분석의 상기 결과는 상기 언급된 공정에 의하여 얻어진 정제 생성물이 표1에 제시된 아미노산 조성을 가진 펩티드 53번이라는 결정을 뒷받침한다.
[실시예 54]
실시예 1에서 얻어진 펩티드, 주사용 증류수, 염화 나타륨 및 젤라틴으로부터 통상의 주사제 제조공정에 의하여 주사제를 제조하였다.
[실시예 55]
실시예 2에서 얻어진 펩티드, 주사용 증류수, 염화 나트륨, 초산 나트륨, 벤질 알코올 및 젤라틴으로부터 통상의 주사제-제조공정에 의하여 주사제를 제조하였다.
[실시예 56]
실시예 3에서 얻어진 펩티드, 주사용 증류수, 염화 나트륨, 초산 나트륨, 젤라틴 및 페놀로부터 통상의 주사제-제조공정에 의하여 주사제를 제조하였다.
[실시예 57]
펩티드, 주사용 증류수, 염화 나트륨, 초산 나트륨, 메틸 p-히드록시벤조에이트, 에틸 p-히드록시벤조에이트, 프로필 p-히드록시벤조에이트 및 부틸 p-히드록시벤조에이트로부터 통상의 주사제-제조공정에 의하여 주사제를 제조하였다.
[실시예 58]
실시예 5에서 얻어진 펩티드, 염화 나트륨, 초산 나트륨, 염산, 메틸 p-히드록시벤조에이트, 에틸 p-히드록시벤조에이트프로필, p-히드록시벤조에이트, 프로필 p-히드록시벤조에이트 및 부틸 p-히드록시벤조에이트로부터 통상의 주사제 제조공정에 의하여 주사제를 제조하였다.
[실시예 59]
실시예 6에서 얻어진 펩티드와 만니톨을 함유한 수용액을 동결 건조시켰다. 투여시에 젤라틴 및 페놀함유 수용액에 건조 생성물을 용해시켜 주사제를 제조하였다.
[실시예 60]
실시예 7에서 얻어진 펩티드, 초산 나트륨, 및 사람의 알부민을 함유한 수용액을 동결 건조시켰다. 투여시에, 주사용 증류수에 건조 생성물을 용해시켜 주사제를 제조하였다.
[실시예 61]
실시예 8에서 얻어진 펩티드 및 카카오 지방 또는 화이트엡(whitep)용액으로부터 통상의 좌제-제조공정에 의하여 좌제를 제조하였다.
[실시예 62]
실시예 1에서 얻어진 펩티드, 빙초산, 초산 나트륨 및 염화 벤즈알코늄을 함유한 수용액을 코점막 약제로서 비강에 살포하였다.
[실시예 63]
실시예 2에서 얻어진 펩티드, 빙초산, 초산 나트륨 및 담즙산염을 함유한 수용액을 코점막 약제로서 비강에 살포하였다.
Claims (114)
- 다음 아미노산 시퀀스를 가진 신규의 생리적 활성 펩티드 또는 약리적으로 허용되는 그의 염.상기 시퀀스에서 X1은 Ser-Thr 또는 Thr-Ser을 나타내며, X2는 Met, Gly, Ala, Val, n-Val, Pro, Leu, n-Leu Ile, Phe 또는 α-아미노락트산을 나타내며 X3은 Asp 또는 Glu를 나타내며, X4는 Leu-Gln-Thr, Gln-Thr, Leu 또는 Gly-Gln-Thr을 나타내며, X5는 Val-Gly-Ala 또는 Ser-Gly-Thr을 나타내며, 그리고 R은 H, NH, N-아실 또는 N-알킬을 나타낸다.
- 제1항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제1항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제1항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제1항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제1항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제1항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제1항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제1항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제1항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제1항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제1항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제1항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제1항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 다음 아미노산 시퀀스를 가진 신규의 생리적 활성 펩티드 또는 약리적으로 허용되는 그의 염.상기 시퀀스에서 X1, X2, X3, X4, X5 및 R은 제1항에 정의된 것과 같음.
- 제15항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제15항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제15항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제15항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제15항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제15항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제15항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 다음 아미노산 시퀀스를 가진 신규의 생리적 활성 펩티드 또는 약리적으로 허용되는 그의 염.상기 시퀀스에서 X1, X2, X3, X4, 및 X5는 제1항에 정의된 것과 같음.
- 제23항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제15항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 다음 아미노산 시퀀스를 가진 신규의 생리적 활성 펩티드 또는 생리적으로 허용되는 그의 염.상기 시퀀스에서 R은 제1항에 정의된 것과 같고, X6는 CO-NH 또는 NH-CO를 나타내며, X7은 아미노산 0-6개인 순수 칼시토닌, 또는 그의 치환, 삭제 또는 첨가 유도체 2-6위치의 아미노산 시퀀스를 나타내며, X8는 순수 칼시토닌, 또는 그의 치환, 삭제 또는 첨가 유도체 8-32위치의 아미노산 시퀀스를 나타내며, 그리고 n, 및 n 각각은 1-19의 정수이며 n, +n는 2-20이다.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 제26항에 있어서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 펩티드.
- 유효 성분으로서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 신규의 생리적 활성 펩티드 또는 약리적으로 허용되는 그의 염으로 이루어진 칼슘 대사 조절제.상기 시퀀스에서 X1, X2, X3, X4, X5 및 R은 제1항에 정의된 것과 같음.
- 제58항에 있어서, 상기 펩티드가 다음 아미노산 시퀀스를 가지는 것을 특징으로 하는 조절제.
- 제58항에 있어서, 상기 펩티드가 다음 아미노산 시퀀스를 가지는 것을 특징으로 하는 조절제.
- 제58항에 있어서, 상기 펩티드가 다음 아미노산 시퀀스를 가지는 것을 특징으로 하는 조절제.
- 제58항에 있어서, 상기 펩티드가 다음 아미노산 시퀀스를 가지는 것을 특징으로 하는 조절제.
- 제58항에 있어서, 상기 펩티드가 다음 아미노산 시퀀스를 가지는 것을 특징으로 하는 조절제.
- 제58항에 있어서, 상기 펩티드가 다음 아미노산 시퀀스를 가지는 것을 특징으로 하는 조절제.
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- 유효성분으로서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 신규의 생리적 활성 펩티드 또는 약리적으로 허용되는 그의 염으로 이루어진 칼슘 대사 조절제.상기 시퀀스에서 X1, X2, X3, X4, X5 및 R은 제1항에 정의된 것과 동일함.
- 제72항에 있어서, 상기 펩티드가 다음 아미노산 시퀀스를 가지는 것을 특징으로 하는 조절제.
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- 유효성분으로서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 신규의 생리적 활성 펩티드 또는 약리적으로 허용되는 그의 염으로 이루어진 칼슘 대사 조절제.상기 시퀀스에서 X1, X2, X3, X4 및 X5 은 제1항에 정의된 것과 동일함.
- 제80항에 있어서, 상기 펩티드가 다음 아미노산 시퀀스를 가지는 것을 특징으로 하는 조절제.
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- 유효성분으로서, 다음 아미노산 시퀀스를 가진 신규의 생리적 활성 펩티드 또는 약리적으로 허용되는 그의 염으로 이루어진 칼슘 대사 조절제.상기 시퀀스에서 X1, X2, X3, X4, X5 및 R은 제1항에 정의된 것과 같고, X6, X7, n1및 n2는 제26항에 정의된 것과 같다.
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