SU845773A3 - Способ получени пептидов - Google Patents
Способ получени пептидов Download PDFInfo
- Publication number
- SU845773A3 SU845773A3 SU782639399A SU2639399A SU845773A3 SU 845773 A3 SU845773 A3 SU 845773A3 SU 782639399 A SU782639399 A SU 782639399A SU 2639399 A SU2639399 A SU 2639399A SU 845773 A3 SU845773 A3 SU 845773A3
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- solution
- pro
- boc
- ether
- arg
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/14—Angiotensins: Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ
I
Изобретение относитс к способу получени новых пептидов - биологичес- ки активных соединений, которые могут нййти применение в медицине.
Способ наращивани пептидной цепи Б методом активированных эфиров, например пентафторфениловых эфиров, широко известен в химии пептидов
Цель изобретени - получение новых пептидов, обладающих ценными фармако- .|0 логическими свойствами.
Поставленна цель достигаетс описываемым способом получени пептидов общей формулы I
X-Arg-Val-Tyr-lleu-His-Pro-Y 15 где X - остаток алифатической карбоновай кислоты, содержащей в оС--положении аминооксиацетильную или сзб-аминооксипропильную группу; 20
Y - Leu, lieu,
заключающийс в том, что реакционноспособное производное обшей формулы II H-Arg(A)(B)-Ileu-His(E)-Pro-Y-OG25
где А - тозил; В - бензил; Е - динитрофенил; G - водород или р-нитробензил; ,. У имеет значени , указанные
вьше, подвергают взаимодействию с реакци онноспособным производньм аминоокс}и карбоновой кислоты общей формулы 1
II
W-X-M где X - имеет значени , указанные
вьше;
W бензилоксикарбонильна ИЛ1
трет-бутилоксикарбоиильна$
группа;
пентафторфенокси,
М и от полученного соединени общей формулы IV
W-X-Arg(A)-Val-Tyr(B)-J1eu-His(E)-Pro-Y-OG , где A,8,E,G,W, и Y имеют значенш
указанные выше,
аотщепл ют одновременно или ступен то защитные группы.Используемые в качестве исходных веществ производи гептапептидов общей формулы 1I получа ЮТ известными методами пептидной хими ( например, методом активированных эфи ров, карбодиим1у ным методом и T.n.pfj Дл защиты функциональных групп примен ют защитные группы, стабильные в услови х ацидолиза, проводимого дл отщеплени защитных групп после завершени реакции образовани пептидной св зи. Предпочтительным дл временной защиты карбоксильной группы С-концевой аминокислоты вл етс использова ние п-нитробензильной группы (NB), дл защиты гидроксильной группы тирозина - бензильно группы (BzE) , дл защиты имидазольного цикла гистидйна - динитрофенильной группы (DNPh) и дл защиты гуанидино-группы аргинина - тозильной группы (Tos). Эти защитные группы устойчивы к действию слабых кислот, вследствие чего трет-б тилоксикарбонильна группа (ВОС) отщепл етс после образовани пептидной св зи селективно без затрагивани названных защитных групп. Динитрофениль на группа может быть удалена затем тиолизом, а остальные указанные fpynпы - действием жидкого фтористого водорода . Дл очистки полученных соединений используют известные методы, например ионообменную хроматографию на карбокснметилцеллюлозе . При этом большую часть продуктов получают в виде лиофи лизованных порошков. Такие продукты могут быть использованы непосредствен но дл образовани различных солей или комплексов. Антагонистическое действие новых соединений общей формулы исследуют на животных после введени им наркотика . Кров ное давление измер ют на сонной артери животного. Эксперимент провод т таким образом, что вызывают повышение давлени введением наркотика в вену бедра в дозе 0,5 мг/кг/мин. После стабилизации повьшени .давлени животному ввод т внутривенно или подкожно однократную дозу исследуемого вещества в водном физиологическом растворе, затем измер ют вызванное введенным веществом уменьшение кров ного давлени . Достигнутые величины уменьшени кров ного давлени при внутривенном 34 введении различных новых соединений приведены в табл. 1. Эти величины вл ютс средними из шести и-змерений, указаны также предельные отклонени от средних значений. Дп сравнени приведены величины, достигнутые с помощью известного саралазина, т.е. - (N-метил глицин) -5-1-Вуалин-8-1-аланин-ангиотензина II, в тех же услови х . Таблица Г И енение кров Действующее начало ного давлени (в мм рт.ст,) при внутривенном введении в дозе, мг/кг ( -Аминооксиацетил ,8-лейцин)-ан-33±3 ,6 -4214,2 .гиотензин Г1 ( 1-D-о аминооксипропионил , 8-лейцин ) -ангиотен-3013 ,4 -38t3,8 зин I I ( 1-Аминооксиацетил , 8-изолейцин )-ангиотен-40i5 ,7 -28±2,0 зин I I -41i2,5 Саралазин Из данных, приведенных в табл. 1,следует , что все аналоги ангиотензина ТГ, замещенные в первом положении алифатическим остатком карбоновой кислоты , содержащим о6-аминооксигруппу, существенно снижают кров ное давление. Размер этого действи пропорционален величине дозы. Проведено также исследование новых соединений при подкожном введении. В этом случае к физиологическому раствору поваренной соли, содержащему исследуемое вещество, добавл ют также карбоксиметилцеллюлозу или желатин. В табл. 2 приведены обобщенные результаты исследований - средние значени измерений. Проведенные у п ти животных, а также величины предельных отклонений от средних значений.
Таблица 2
(i-Аминооксиацетил, 200 КМЦ -21i5,8 8-лейцин )-ангиотензнн II200 }Клт -23±2,0 (1 -D-об-аминоокси- 200 пропионил, 8-лейцин)-ангиотензин 11 200 КМЦ - карбоксиметилцеллюло Клт - желатин. Результаты, приведенные в табл.2, свидетельствуют о том, что новые соединени при гюдкожном введении, даж через 60 мин, значительно снижают экспериментально вызванное повьшение кров ного давлени . Благодар таким свойствам предлаг емые соединени , а также их физиологически совместимые соли и комплексы могут найти применение в терапии как средства, понижающие кров ное давление . Под физиологически совместимыми комплексами этих новых пептидов следует понимать такие соединени , которые образуютс при добавлении известных , например, органических ве ществ и придают действующему началу запаздывающее действие. В качестве таких комплексообразующих веществ мо гут быть использованы,например,желатин ,карбоксиметилцеллюлоза ,сложные эфиры альгиновой кислоты, полифлоретинфосфа ты,полиаминокисло ты,а также другие полимеры и сополимеры. В качестве физиологически совместимых солей новых пептидов могут быть названы обычные, используемые в фармацевтической практике соли, образоран ные присоединением кислот, например ацетаты. Новые пептиды, а также их физиоло . гически сов1 естимые соли и комплексы используют в терапии в виде обычных лекарственных препаратов. Эти пр параты содержат новые соединени вместе с пригодными дл энтерального и парэнтерального введени неорганическими или органическш-т носител ми Лекарственные препараты могут быть
КМЦ -21±6,7 -24±5,7 -16±5,1 -1
Жлт -24±5,7 -21±5,6 -9t5,7 -3 : 26t7 ,2 -13t9,4 -5 21t2,2 -10±2,8 получены в виде твердых лиофилиз тов; в этам случае в качестве носителей могут быть использованы различные; не реагирующие с пептидами соединен1 , такие, например, как углеводы. Дглее в качестве лекарственных препаратов могут быть получены концентрированные или разбавленные суспензии или э tyльсии , которые нар ду с обычными з сидкимй носител ми содержат также ctaбилизпрующие и консервирующие вспомогательные вещества. Такие лекарственные препараты могут быть использованы прежде всегр в терапии дл лечени тех синдромов, в этиологии которых играет роль повышенный за счет ренина уровень давлени ; далее, они могут служить диагностическими средствами дл дифференцированной диагностики гипертонии ренального происхождени . Получение новых пептидов формулы I проиллюстрировано приведенными ниже примерами. Использовашые в примерах сокращени соответствзтот прин тым в специальной литератур Принадлежащие о -аминооксикислотам группы обозначают обычными символгами соответствующих аминокислот со сто щими перед ними О, например Or лиц - аминооксиуксусиа кислота Оал -об-амииооксипропионова кислота и т.д. Пентафторфенильный ост ток - ПФФ. При получении различных соеди е иий упаривание растворителей про звод т всегда с помощью роторного испарител . Температуры плавлени cngeдел ют с помощью аппарата Dr. TottoJ
(BUchu). Тонкослойную хроматографию ровод т на пластинах Kieselgel G ach Stahl (E.Merck. Darmstadt); л про влени хроматограмм использут следукшше системы растворителей: s
1.Этилацетат: (пиридин-уксусна кислота-вода 20:6:11) 95:5
2.Этилацетат: (пиридин-уксусна кислота - вода 20:6:11) 90:10
3.Этилацетат: (пиридин-уксусна 10 кислота - вода 20:6:11) - 80:30
4. Этилацетат: (пиридин-уксусна кислота - вода 20:6:11) 70:30
5.н-Бутанол : уксусна кислота : вода 4:1 :.515
6.н-Бутанол : уксусна кислота: :пиридин : вода 30:6:20:24
7.н-Бутанол : этилацетат : уксусна кислотй J вода 1:1:1:1
Цифра в степени при значении R 20 указьтает номер использованной системы растворителей, например Rj, .
Электрофоретические исследовани на бумаге провод т на горизонтальном приборе LMlM умеренного напр жени 25 на бумаге MN 214 в буферном растворе при рН 1,9, содержащем глутами-, новую кислоту. Напр жение составл ет 450 в, врем - 3 ч.
Тонкослойные хроматограммы про в- зо ют нингидрином после обычного хлорировани раствором о-толидина с йоистьм калием.
Очистку целевых продуктов провод т следующим общим методом.35
Снач;ала соли свободных пептидов с фтористым водородом чист т на смоле Sephacryl S-200 Superfine (производства Pharmacia Fine chemicals, Uppsala, Schweden) градиентной элю- цией 0,01 М (рН 4,5) и 0,4 М (рн 6,7) растворами ацетата аммони . Детекти- , рование элюата производ т с помощью прибора LKB Uvicord II (производства LKB, Uppsala, Швеци ), сбор - с по- ощью коллектора фракций.
Дальнейшую очистку основной фракии провод т на карбоксиметилцеллкшозе следующим образом.
0,5 л карбоксиметилцелпюлозы (КМЦ-52) привод т в состо ние равновеси в колонке с первым буферным раствором , затем в колонку заливают раствор 0,5 г пептида в 4 мл 0,01 М раст 55 вора ацетата аммони и вымывают проукт градиентной элюцией указанными буферными растворами. Скорость,элюровани 25 мп/ч. Собирают фракции
по 10 мл и детектируют их с помощью прибора LKB Uvicord II. Очищенный целевой продукт получают лиофилизацией основной фракции.
Пример 1. (1-Аминооксиацетил , 8-изолейцин)-ангиотензин II
Стади 1: ВОС - Arg (Tos) - Val -Туг (Bzl) - lie - His pNPh) - Pro lie - NB.
К 4,5 г (15 ммоль) хлоргидрата Iнитробензилового эфира изолейцина в 50 мл хлороформа добавл ют 2I1 мл триэтиламина и 3,81 г ( ммоль) пентафторфёнилового эфира БОК-пролина . Смесь перемешивают 20 мин при комнатной температуре, продукт экстргируют водой, затем 10%-ным водным раствором лимонной кислоты. Полученный после высушивани и упаривани растворител в виде остатка защищенный дипептид (Rr 0,8) раствор ют без дополнительной очистки в 20 мл 8 М раствора сол ной кислоты в диоксане . Через 10 мин раствор разбавл ют безводным эфиром и упаривают. Полученный в остатке хлоргидрат дипецтида (Rr 0,44) раствор ют в 30 мл хлороформа, добавл ют к раствору триэтиламин до рН 8 и затем 8 ,8 г (15 ммоль) пентафторфёнилового эфира ВОС-гистидина. Через 1,5 ч в раствор внос т 1,65 мл N,N-димeтиламиноэтиламина и еще через 15 мин раствор промывают 10%-ным водным рас вором лимонной кислоты, 1 н. сол ной кислотой, водой и 5%-ным водным раствором бикарбоната натри в указанной последовательности. Органическую фаз отдел ют,высушивают и упаривают. Полченньй в виде остатка сырой защищенный трипептид (R 0,50) без очиски раствор ют в 20 мл 8 М раствора сол ной кислоты в диоксане. Через 15 мин полученньй таким образом свободный трипептид (RJ. 0,25) осаждают добавлением сухого эфира, отфильтровывают и промывают эфиром. Продукт тотчас же раствор ют в смеси 50 мл хлороформа с 20 мл диметилформамида , величину рН раствора с помощью триэтиламина устанавливают равной 8 и затем добавл ют 6,0 г (15 ммоль) пентафторфёнилового эфира ВОС-изолейцина. Через 30 мин растворитель упаривают, остаток раствор ют в этилацетате. Полученный раствор промывают 10%-ным водным раствором лимонной кислоты и затем водой. Посл
высушивани и упаривани этилацетатиого раствора защищенный гексапептид (Re 0,56) выдел ют с помощью эфира и промывают эфиром.
Далее продукт раствор ют в 20 мл 8 М-раствора сол ной кислоты в диоксане и полученный таким образом свободный гексапептид (Rf 0,47) осаждают сухим эфиром, отфильтровывают и промывают эфиром. Полученный продукт тотчас раствор ют в 50 мл диметшгформамида , добавл ют триэтиламин до рН 8, после чего прибавл ют 7,2 г (12 ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-аргинина (Tos). Смесь перемешивают 1 ч, растворитель упаривают, оста|ток раствор ют в хлороформе и полученный раствор промывают 10%-ным водиым раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором сол ной кислоты и водой в указанной последовательности. Органическую фазу отдел ют, высушивают и упаривают,остаток растирают с эфиром и отфильтровывают. Получают 12,4 г защищенного гептапептида нитробензило вого эфира Arg (Tos) - Val -Tyr (Bzl) - lie - His(DNPh) - Pro -li ( выход 80% от теоретического, в расчете на исходное соединение - пентафторфениловый эфир ВОС-пролина). Т.пл. 189-l920c. Rjf- 0,55.
Стади 2: ВОС-Оглиц- Arg (Tos) Val - Туг - Jle - His - Pro - lie.
8,1 г (2 ммоль) нитробензилового эфира BOC-Arg(Tos)-Val-Tyr(Bz1)-JleHis (DNPh)-Pro-l e раствор ют в 5 мл диметилформамида и в раствор добавл ют 2,9 мл 2-меркаптоэтанола. Через 1 ч пептид осаждают сухим эфиром, отфильтровывают , пром 1вают эфиром и очищают переосаждением эфиром из метанола . Получают 2,0 г (74% от теории ) нитробензилового эфира ВОСг -Ai(Tos)-Val-Tyr(Bz1)-Ileu-His-Ile (Rj 0,1). Продукт раствор ют в 30 мл смеси метанол-уксусна кислота - вода 5:1:1 и добавл ют 1,0 г паллади на активированном угле. Через раствор в течение 5 часов ; пропускают водород, затем катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают и остаток растирают с эфиром. Получают 1,22 г (75% от теоретического) частично защищенного гептапептида (Rf 0,8). Продукт раствор ют в 5 мл 8 М раствора сол ной кислоты в диоксане и через 20 мин сухим эфиром осаждают свободный гептапептид ( -0,1).
Свободный гептапептид отфильтровы вают, промывают эфиром и раствор ют в 15 мл диметилформамида. Величину рН раствора с помощью триэтиламина устанавливают равной 8 и к растворз добавл ют 0,45 г (1,2 ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-Оглицина. Через 30 мин реакционную смесь ynai ивают , остаток раствор ют в 30 мл cifeси хпороформ-диметилформамид (3:1) и раствор промывают 10%-ным раствором лимонной кислоты и водой. После высушивани и упаривани раствора получают остаток, который растирают с этш ацетатом , отфильтровыв.ают и промыва ют этилацетатом. Получают 0,46 г ВОС-Оглиц-Агд(Tos)-Val-Tyr-l1e-HIs Pro-IIs (выход 72% от теоретическо го); R 0,23; 0,40.
Стади 3: .удаление защитных 0,46 г (0,35 ммоль) ВОС-ОглицArg (Tos)-Val-Tyr-ne-Hls-Pro-Ile р|асвор ют в 2 мл жидкого фтористого вод рода и добавл ют к раствору 0,5 мл тиоанизола. Раствор выдерживают 1 при 0, затем осаждают пептид эфи ром,- отфильтровывают и прймывают э$)Иром . Получают 0,35 г (выход 100% от теоретического) (1-аминооксиацетил 8-11е)-ангиотензина I I фторгидрата Продукт очищают, как описано выше (до примеров) . Характеристика чист)г продукта:
0,26; Rf 0,56; 0,57; 1,00.
Результаты аминокислотного анали за: Pro 1,01 (l); Val 1,0 (l); lie 1,98 (2); Туг.0,65 (l); His 1,0 (l); iArg 1,03 (1).
Пример 2. (l-L-oi-аминоокси пропионил, 8-изолейцин)-ангиотензин
Стади 1: BOC-OAla-Arg(Tos)-Val Tyr-Ile-Hls-Pro-Ile.
0,6 г (0,5 ммоль) BOC-Arg-(Tos) Val-Tyr-Ile-Hls-Pro-lle (пример 1, стади 2) раствор ют в 5 мл 8 М ра|створа сол ной кислоты в диоксане. Через 20 мин полученный свободный пептид (R 0,Г) осаждают сухим эфиром , отфильтровывают и промывают. Выделенный таким лбразом продукт тотчас раствор ют в 20 мл диметнлформамда , добавл ют; триэтиламин до рН 8 затем 0,7 г (1,9 ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-Оаланина. Чер|ез 30 мин раствор упаривают, остаток
раствор ют в 30 мл смеси хлороформдиметилформамид (3:1). Полученный раствор промывают 10%-ным водным раствором лимонной кислоты и водой. Органическую фазу высушивают, упаривают и остаток растирают с этилацетатом. Получают 0,55 г (выход 84% от теоретического ) ВОС-Ола-Агд(То5)-Уа1-ТугJle-His-Pro-lle .
Rf 0,43; 0,80. ю
Стади 2: удаление защитных групп.
0,53 г (0,42 ммоль) ВОС-ОА1а-; Arg(Tos)Va -Jyг-11е-Нi s-Pro-JIe раствор ют в 2 мл жидкого фтористого водорода и добавл ют. 0,55 мл тиоанизола. is Раствор выдерживают 1 ч при О-С, затем осаждают пептид сухим эфиром, отфильтровывают и прог ывают эфиром.
Получают 0,41-г (1-Оаланин, 8-изолейцин )-ангиотензина li; продукт очи- го щают, как описано вьппе. 0,32; Rf 0,58; Rj 0,59; ЬОРезультаты аминокислотного анализа: Pro 1,0(1) ; Val 1,1 (l) ; Не 2,02 (2); His 0,9 (l); Туг 0,95 (l); 25 Arg 1,05 ().
Пример 3. (1-Аминооксиацетил; 8-лейцин)-ангиотензин II.
Стади 1: ВОС-Агд(Tos)-Val-Tyr (Bzl)-ne-His-Pro-Leu 011Ъ. зо
4,2 г (12 ммоль) бромгидрата нитробензилового эфира лейцина раствор ют, в 50 мл хлороформа, и к полученному раствору добавл ют 1,68 мл триэтиламина и 3,81 г (Ю ммоль) пента- 35 фторфенилового эфира ВОС-пролина. Смесь перемешивают 20 мин при комнатной температуре и затем экстрагируюЧ 10%-ным водным раствором лимонной кислоты и водой. Органическую фазу высушивают и упаривают. Полученный в остатке защищенный дипептид (R. 0,8) без дополнительной очистки раствор ют в 20 мл 8 М раствора сол ной кислоты в диоксане, через 10 мин 5 раствор разбавл ют сухим диоксаном и упаривают.
Полученный в остатке свободный дипептид ( 0,5б) без дополнительной очистки раствор ют в 50 мл хлоро- 5 форма, в раствор добавл ют триэтиламин до рН 8 и затем 8,8 г (15 ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-гистидина (DNPh). Через 30 мин в раствор добавл ют 1,65 мл N,N-димeтилaминoэтил 5 амина и еще через 10 мин смесь промывают 10%-нь м водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором сол ной
кислоты, воднь1м раствором бикарбоната натри и водой в указанной последовательности .
Органическую фазу высушивают и упаривают , полученньш в виде остатка защищенный трипептид (Rf 0,65) без дополнительной очистки раствор ют в 25 мл 8 М раствора сол ной кислоты в диоксане и полученный свободньй трипептид (Rr i 0,47) осаждают сухим эфиром. Трипептид отфильтровывают, промывают эфиром и тотчас раствор ют в смеси 50 мл хлороформа с 20 мл диметилформа|Мида . В раствор добавл ют триэтиламин до рН 8 и 6,0 г (15 ммоль пентафторфенилового эфира ВОС-изолейцина . Через 30 мин растворитель упариьают, остаток раствор ют в этилацетате , раствор промывают 10%-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором сол ной кислоты и водой , органическую фазу высушивают и упаривают.
Полученньй в .остатке защищенный тетрапептид (Rj . 0,65) высаживают с помощью смеси н-гексан-эфир (7:3). Продукт раствор ют в 25 мл 8 М раствора сол ной кислоты в диоксане, через 15 мин свободный пептид (Rj. 0,65) осаждают сухим эфиром, отфильтровывают , промывают эфиром и сразу же раствор ют в 50 мл смеси хлороформ-диметилформамид (1:1). Величину рН раствора устанавливают равной 8 с помощью триэтиламина и добавл ют в раствор 6,0 г (11,5 ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-титрозина . Через 15 мин растворитель упаривают , остаток раствор ют в этилаце|гате ,к раствору добавл ют 0,66 мл Ы,М-диметиламиноэтиламина и через 15 мин смесь промывают 10%-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором сол ной кислоты и, наконец, водой . После высушивани и упаривани органической фазы с помощью эфира выдел ют защищенный пентапептид (Rj 0,8) и раствор ют его в 20 мл 8 М раствора сол ной кислоты в диоксане.
Claims (2)
- Полученный свободный пентапептид ( 0.,8) осаждают сухим эфиром, отфильтровывают, промывают эфиром и тотчас раствор ют в 50 мл диметилформамида . Величину рН раствора с помощью триэтиламина устанавливают равной 8 и добавл ют в раствор 3,85 г (Ю ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-валина. Через 1 ч отгон ют растворитель , остаток раствор ют в хлоро форме, органическую фазу обычным образом экстрагируют 10%-ным водным раствором лимонной кислоты, I н. рас вором сол ной кислоты.и водой. Полученный защищенный гексапептид .(R 0,82) выдел ют с помощью эфи ра. Продукт раствор ют в 20 мл 8 М раствора сол ной кислоты в диоксане и через 15 мин сухим эфиром осаждают свободный гексапептид (Rr 0,55 Свободный гексапептид сразу же раствор ют в 40 мл диметилформамида, добавл ют триэтиламин до рН 8 и 6,0 г (Ю ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-аргинина (Tos), Через 30 мин отг н ют растворитель, остаток раствор ю в хлороформе и этот раствор промывает 1 н. раствором сол ной кислоты и водой. После высушивани и упаривани растворител с помощью этанола выдел ют полученный защищенный гептапептид BOC-Arg(ToS)-VaI-Туг(Bz1)-11eHis (DNPh)-Pro-Leu-ONB ( 0,62) Выход 7,5 г (50% от теоретического в расчете на исходное соединение пентафторфениловьш эфир ВОС-Рго). Т.пл. 186-190 С. Стади 2: ВОС-Оглиц-Агд(Tos)-Va1 Tyr-rie-His-Pro-Leu 3,45 г (2,26 ммоль) BOC-Arg(Tos)-Val-Туг(Bz -Ile-His(DNPh)-Pro-Leu-ONB раствор ют в 10 мл диметилформамида, доба вл ют 6,6 мл 2-меркаптоэтанола и через 2 ч сухим эфиром осаждают частично защищенный гептапептид. Переосаждением эфиром из метанола получа ют 2,9 г очищенного нитробензилового эфира BOC-Arg(Tos)-Val-Туг(Bzl)-Ile-His-Pro-Leu (93% от теории). 0,12; 0,26. Продукт раствор ют в смеси метанол-уксусна кислота - вода (5:1:1), добавл ют 1,0 г 10%-ного паллади на активированном угле и в течение 6 ч {через раствор пропускают водород. Ка гализатор отфильтровывают, растворитель упаривают и остаток растирают с эфиром. Получают 2,15 г (89% от те оретического) BOC-Arg(Tos)-Val-Туг-Ile-His-Pro-Leu . .. ol-S) г, -7C. oW 0,75; R 0,20. 1,1 г (l ммоль) полученного продукта раствор ют в 10 мл 8 М раствор сол ной кислоты в диоксане, через 30 мин свободный гептапептид (Rr 0,08) осаждают сухим эфиром, отфильтровывают , промывают эфиром и сразу же раствор ют в 10 мл диметш формамида. В раствор добавл ют триэтиламин до рН 8 и затем 0,54 г (1,5 ммоль) пентафторфенилового эф1 ра -ВОК-Оглицина. Через 30 мин растиор разбавл ют 30 мл хлороформа и вают водой. После высушивани и уп ривани раствора остаток растирают с этилацетатом,. отфильтровьгаают и промывают этилацетатом. Получают 1,05 г (выход 86% от теоретического) BOC-Cглиц-Arg(Tos)-Val-Tyr-I e-His Pro-Leu. 0,23; Стади 3: удаление защитных rpyijin.. 0,9 г (0,73 ммоль) ВОС-ОглицАгд (Tos) -Val -Туг-Пе-HJs-Pro-Leu р створ ют в 5 мл жидкого ФТОРИСТОГО водорода и добавл ют 1,5 мл-тиоанизола Смесь ВЕедерживают 1,5 ч при ОС, з тем осаждают пептид сухим эфиром, отфильтровывают его и промывают зф ром. Получают 0,55 г (выход 80% от теоретического) (1-Оглицин; 8-лейцин )-ангиотензина II. Продукт очищ 0,33; ют. как описано выше. Ri 0,60; Rf 1 и,ои; л - 0,55; °° 8 Результаты аминокислотного анал за: Pro 1,0 (1); Va 1,0 (l); lie 1,0 (1); Leu 1,1 (l); His 0,95 (l) Arg 1,0 (1); Tyr 0,7 (l). Пример 4. (1-15-о6-Аминоокс; пропионил; 8-лейцин)-ангиотензин I Стади 1: BOC-DOAla-Arg(Tos)-Va Tyr-IIe-Hi s-Pro-Leu. 1,1 г (l ммоль) BOC-Arg(Tos)-Va «Tyr-Ile-His-Pro-Leu раствор ют в 10 мл 8 М раствора сол ной кислоты в диоксане и через 30 мин свободный пептид осаждают сухим эфиром, осад отфильтровывают и промывают эфиром Продукт немедленно раствор ют в 10 мл диметилформамида, в раствор добавл}:ют триэтиламин до рН 8 и затем 0,56 г (1,5 ммоль) пентафторфенилового. эф1фа BOC-D-Оаланина. Через 30 мин раств разбавл ют хлороформом и промывают водой. После высушивани и упарива1 и растворител остаток растирают с этилацетатом, отфильтровывают и прс мывают этилацетатом. Получают 0,95 (выход 77% от теоретического) ВОСОА1a-Arq (Tos)-Val-Туг- 1е-Н i s-Pro-i-eu; RJ.- 0,29. Стади 2:.удаление защитных гру п. 0,95 г (0,77 ммоль) BOC-D-OAlaArg (Tos)-Va1-Tyr-lI1e-H s-Pro-Leu р створ ют в 4 мл жидкого фтористого водорода и добавл ют 1 ,2 мл тиоанизола. Раствор выдерживают 1,5 ч при , тем продукт осаждают сухим эфиром, отфильтровывают и промывают эфиром. Получают 0,6 г (l-D-Оаланин; 8-лейцин )-ангиотензина II {выход 90% от теоретического), который очищают, к описано вьппе. Rj. 0,33; Rf 0,61; Rf 0,56; E(itu МОРезультаты аминокислотного анали Pro 1,02 (1); Val 1,0 (О; Leu 1,02 (1); Не 1,03 (1); His 1,01 (ij; Arg 0,92 (1); Туг 0,8 (l). Формула изобретени Способ получени пептидов общей формулы I X-Arg-Val-Tyr-lleu-His-Pro-Y где X - остаток алифатической карбо новой кислота, содержащей в Л-положении аминооксиацетильную илио -аминооксипропильную группу; Y - Leu, lieu, отличающийс тем, что р акционноспособное производное общей формулы II H-Arg{A)-Va1-Tyr(B)-Ileu His(E)-Pro -Y-OG где А - тозил; В - бензил; Е - динитрофенил; G - водород или п-нитробензил; У - имеет значени , указанные выше подвергают взаимодействию с реакционноспособным производным аминооксикарбоновой кислоты общей формулы III где X имеет значени ,указанные вьше, W - бензилоксикарбонильна или трет-бутилокси15арбонильна группа; М - пентафторфенокси, и от полученного соединени общей формулы IV W-X-Arg(А)-Val-Туг(В)-11 еи-Нi s(Е) -Pro-Y-OG где A,B,E,G,W,X и Y имеют указанные выше значени , отщепл ют одновременно или ступенчато защитные группы. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе f. Lajos Kisfaludy, M.Low, O.Nyeki , T.Szirtes, I.Shon, Die Verven dung von Pentaf1uorphenylestern bei .Peptidsynthesen, Justus Riebigs Annalen der chemie,T973, Heft 9,s..
- 2. Шредер Э,, Любке К. Пептиды, ч. I, М,, Мир, 1967, с. 116,
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
HU77RI640A HU177133B (en) | 1977-07-18 | 1977-07-18 | Process for preparing angiotensin ii analogues containing alpha- amino-oxy-acid in position 1 with angiotensin ii antagonist activity |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU845773A3 true SU845773A3 (ru) | 1981-07-07 |
Family
ID=11001037
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU782639399A SU845773A3 (ru) | 1977-07-18 | 1978-07-17 | Способ получени пептидов |
Country Status (24)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4179433A (ru) |
JP (1) | JPS5835504B2 (ru) |
AT (1) | AT361143B (ru) |
AU (1) | AU518229B2 (ru) |
BE (1) | BE869077A (ru) |
CA (1) | CA1108124A (ru) |
CH (1) | CH637915A5 (ru) |
CS (1) | CS201014B2 (ru) |
DD (1) | DD137220A5 (ru) |
DE (1) | DE2831534C2 (ru) |
DK (1) | DK319478A (ru) |
ES (1) | ES471793A1 (ru) |
FI (1) | FI64140C (ru) |
FR (1) | FR2398050A1 (ru) |
GB (1) | GB2001653B (ru) |
HU (1) | HU177133B (ru) |
IL (1) | IL55121A (ru) |
IN (1) | IN149489B (ru) |
NL (1) | NL7807676A (ru) |
NO (1) | NO148031C (ru) |
PL (1) | PL111979B1 (ru) |
SE (1) | SE443790B (ru) |
SU (1) | SU845773A3 (ru) |
YU (1) | YU41431B (ru) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
HU181009B (en) * | 1980-01-18 | 1983-05-30 | Richter Gedeon Vegyeszet | Process for preparing angiotensin-ii analogues with antagonictic activity containing in position 1 sarcosyl,hydroxyacetyl or l-alpha-aminoxy-propionyl group and in positiona 8 esteric group |
HU181008B (en) * | 1980-01-18 | 1983-05-30 | Richter Gedeon Vegyeszet | Process for producing angiotenzin-ii analogues of antagonistic activity containing sarcosyl-group at the 1-positon,and an alpha-hydroxy-carboxylic acid at the 8-position |
HU191961B (en) * | 1984-08-02 | 1987-04-28 | Richter Gedeon Vegyeszet | Process for producing 1,5 and 8 substituted peptides of angiotenzin-ii antagonistic activity |
US5182264A (en) * | 1986-03-07 | 1993-01-26 | Schering Corporation | Angiotensin II receptor blockers as antiglaucoma agents |
US5036048A (en) * | 1986-03-07 | 1991-07-30 | Schering Corporation | Angiotensin II receptor blockers as antiglaucoma agents |
US4772684A (en) * | 1987-01-20 | 1988-09-20 | Triton Biosciences, Inc. | Peptides affecting blood pressure regulation |
TWI268138B (en) * | 2000-05-11 | 2006-12-11 | Kanebo Seiyaku Ltd | Composition containing peptide and electrolyte excretion enhancing substance, and food containing the same |
AT508569A1 (de) * | 2009-07-23 | 2011-02-15 | Affiris Ag | Pharmaceutical compound |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3886134A (en) * | 1970-03-09 | 1975-05-27 | Morton Norwich Products Inc | Analogues of angiotensin II |
GB1320104A (en) * | 1971-05-20 | 1973-06-13 | Norwich Pharma Co | Hepta-and octapeptides |
US3907762A (en) * | 1971-12-27 | 1975-09-23 | Univ Sherbrooke | Angiotensin{hd II {B position 8 analogs |
HU167360B (ru) * | 1972-08-25 | 1975-09-27 | ||
US3975365A (en) * | 1975-01-27 | 1976-08-17 | G. D. Searle & Co. | Inhibitory octapeptides angiotensin II |
US3976770A (en) * | 1975-02-10 | 1976-08-24 | Francis Merlin Bumpus | Sar'-(OMe)Thr8 Angiotensin II as an angiotensin II antagonist |
-
1977
- 1977-07-18 HU HU77RI640A patent/HU177133B/hu not_active IP Right Cessation
-
1978
- 1978-07-11 US US05/923,681 patent/US4179433A/en not_active Expired - Lifetime
- 1978-07-11 IL IL55121A patent/IL55121A/xx unknown
- 1978-07-13 CH CH762578A patent/CH637915A5/de not_active IP Right Cessation
- 1978-07-13 AU AU38008/78A patent/AU518229B2/en not_active Expired
- 1978-07-13 SE SE7807823A patent/SE443790B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-07-14 IN IN781/CAL/78A patent/IN149489B/en unknown
- 1978-07-14 DD DD78206733A patent/DD137220A5/xx unknown
- 1978-07-14 CA CA307,439A patent/CA1108124A/en not_active Expired
- 1978-07-14 FI FI782250A patent/FI64140C/fi not_active IP Right Cessation
- 1978-07-17 DK DK319478A patent/DK319478A/da not_active Application Discontinuation
- 1978-07-17 CS CS784758A patent/CS201014B2/cs unknown
- 1978-07-17 GB GB787830047A patent/GB2001653B/en not_active Expired
- 1978-07-17 ES ES471793A patent/ES471793A1/es not_active Expired
- 1978-07-17 FR FR7821136A patent/FR2398050A1/fr active Granted
- 1978-07-17 NO NO782463A patent/NO148031C/no unknown
- 1978-07-17 YU YU1713/78A patent/YU41431B/xx unknown
- 1978-07-17 SU SU782639399A patent/SU845773A3/ru active
- 1978-07-18 BE BE189343A patent/BE869077A/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-07-18 PL PL1978208496A patent/PL111979B1/pl unknown
- 1978-07-18 NL NL7807676A patent/NL7807676A/xx not_active Application Discontinuation
- 1978-07-18 DE DE2831534A patent/DE2831534C2/de not_active Expired
- 1978-07-18 JP JP53087645A patent/JPS5835504B2/ja not_active Expired
- 1978-07-18 AT AT518478A patent/AT361143B/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4388304A (en) | Angiotensin-II analogues with antagonizing effects, containing an ester group in position 8, and a process for the preparation thereof | |
US4737487A (en) | VIP type peptides | |
US4619916A (en) | Tripeptide compounds containing pyroglutamic acid and tryptophan, process for their production and therapeutic applications | |
US4420424A (en) | New peptides and a process for their preparation | |
US4866039A (en) | Peptides containing the 18 to 23 residues of vasoactive intestinal peptide, and analogues | |
SU845773A3 (ru) | Способ получени пептидов | |
FUJINO et al. | A new procedure for the pentachlorophenylation of N-protected amino acids | |
JPS5973574A (ja) | 環状ジペプチド類 | |
US4209442A (en) | Angiotensin II analogs and process for the preparation thereof | |
JPS60226898A (ja) | 新規ゴナドリベリン誘導体およびその製造方法 | |
JPH09503200A (ja) | C反応性タンパク質断片から誘導されたオリゴペプチド | |
US4330532A (en) | Angiotensin-II analogues with antagonizing effects, containing an α-hydroxycarboxylic acid residue in position 8, and a process for the preparation thereof | |
US3299035A (en) | L-aspartyl-l-alanyl-l-phenylalanyl-l-isoleucyl-glycyl-l-leucyl-l-methioninamide and its acid addition salts | |
US4716149A (en) | Partially modified, retro-inverso neurotensin analogs | |
JPH0631314B2 (ja) | 新規なゴナドリベリン誘導体 | |
JPS6033854B2 (ja) | 中枢神経系作用を有するトリペプチド誘導体およびその製法 | |
US4117117A (en) | Tridecapetide having gastrin effect | |
US3352844A (en) | Nleu4-lys17-lys18-alpha1-25-acth-val25-amide | |
JPS6143199A (ja) | 1‐,5‐,及び8‐位置で置換されるアンギオテンシン‐2類似体の製造方法 | |
US4587233A (en) | Use of Arg-Phe-amide derivatives | |
SU1095587A1 (ru) | Циклический пентапептид, обладающий анальгетической активностью | |
JPS6136298A (ja) | トリペプチドアミド類 | |
US3374218A (en) | Protected derivatives of physalaemin | |
CN106432416B (zh) | 五甲氧色胺基羰丙酰-rgdv,其制备,活性和应用 | |
USRE30496E (en) | Tripeptide derivatives with central nervous system activity and preparation thereof |