DE2625834A1 - Verfahren zur bestimmung von substraten oder enzymaktivitaeten - Google Patents
Verfahren zur bestimmung von substraten oder enzymaktivitaetenInfo
- Publication number
- DE2625834A1 DE2625834A1 DE19762625834 DE2625834A DE2625834A1 DE 2625834 A1 DE2625834 A1 DE 2625834A1 DE 19762625834 DE19762625834 DE 19762625834 DE 2625834 A DE2625834 A DE 2625834A DE 2625834 A1 DE2625834 A1 DE 2625834A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- ascorbate oxidase
- determination
- oxidase
- buffer
- substrate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 20
- 108010024957 Ascorbate Oxidase Proteins 0.000 claims description 53
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 27
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 25
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 23
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 18
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 18
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 18
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 17
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 17
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 15
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 15
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 14
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 claims description 11
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 claims description 11
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 claims description 11
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 claims description 11
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 11
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 8
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 claims description 7
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 claims description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 6
- 238000006479 redox reaction Methods 0.000 claims description 6
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- JRBJSXQPQWSCCF-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dimethoxybenzidine Chemical compound C1=C(N)C(OC)=CC(C=2C=C(OC)C(N)=CC=2)=C1 JRBJSXQPQWSCCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 102000030523 Catechol oxidase Human genes 0.000 claims description 5
- 108010031396 Catechol oxidase Proteins 0.000 claims description 5
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 5
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 claims description 5
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 claims description 5
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 claims description 5
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims description 5
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 claims description 5
- HFZWRUODUSTPEG-UHFFFAOYSA-N 2,4-dichlorophenol Chemical compound OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl HFZWRUODUSTPEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 4
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims description 4
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims description 4
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 claims description 4
- RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N phenanthridine Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3C=NC2=C1 RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 claims description 3
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 claims description 3
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 3
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 claims description 3
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 claims description 3
- 239000012434 nucleophilic reagent Substances 0.000 claims description 3
- JGBAASVQPMTVHO-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydroperoxy-2,5-dimethylhexane Chemical compound OOC(C)(C)CCC(C)(C)OO JGBAASVQPMTVHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- CDOUZKKFHVEKRI-UHFFFAOYSA-N 3-bromo-n-[(prop-2-enoylamino)methyl]propanamide Chemical compound BrCCC(=O)NCNC(=O)C=C CDOUZKKFHVEKRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- WXMQHPKQCPCDQO-UHFFFAOYSA-N 4-dimorpholin-4-ylphosphorylmorpholine Chemical compound C1COCCN1P(N1CCOCC1)(=O)N1CCOCC1 WXMQHPKQCPCDQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 101000950981 Bacillus subtilis (strain 168) Catabolic NAD-specific glutamate dehydrogenase RocG Proteins 0.000 claims description 2
- 240000001980 Cucurbita pepo Species 0.000 claims description 2
- 235000009852 Cucurbita pepo Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000219130 Cucurbita pepo subsp. pepo Species 0.000 claims description 2
- 235000003954 Cucurbita pepo var melopepo Nutrition 0.000 claims description 2
- 102000016901 Glutamate dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 2
- 235000019329 dioctyl sodium sulphosuccinate Nutrition 0.000 claims description 2
- -1 γ-dimethylaminopropyl Chemical group 0.000 claims description 2
- 108060006004 Ascorbate peroxidase Proteins 0.000 claims 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical class OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 240000006982 Guaiacum sanctum Species 0.000 claims 1
- 235000004440 Guaiacum sanctum Nutrition 0.000 claims 1
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims 1
- XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O NADP(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O 0.000 claims 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims 1
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 claims 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 claims 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims 1
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 79
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 40
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 40
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 30
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 25
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 7
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 4
- SBJKKFFYIZUCET-JLAZNSOCSA-N Dehydro-L-ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(=O)C1=O SBJKKFFYIZUCET-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 3
- SBJKKFFYIZUCET-UHFFFAOYSA-N Dehydroascorbic acid Natural products OCC(O)C1OC(=O)C(=O)C1=O SBJKKFFYIZUCET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 3
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000020960 dehydroascorbic acid Nutrition 0.000 description 3
- 239000011615 dehydroascorbic acid Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- IEQAICDLOKRSRL-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-dodecoxyethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO IEQAICDLOKRSRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 2
- POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N allantoin Chemical compound NC(=O)NC1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000000852 hydrogen donor Substances 0.000 description 2
- 150000002432 hydroperoxides Chemical class 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 2
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- OBHRVMZSZIDDEK-UHFFFAOYSA-N urobilinogen Chemical compound CCC1=C(C)C(=O)NC1CC1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(CC3C(=C(CC)C(=O)N3)C)N2)CCC(O)=O)N1 OBHRVMZSZIDDEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JJMQRJKPLUACSO-UHFFFAOYSA-N 3-(4-iodophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-5-phenyl-1,3-dihydrotetrazol-3-ium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1N(C=2C=CC(I)=CC=2)[NH2+]C(C=2C=CC=CC=2)=N1 JJMQRJKPLUACSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N Allantoin Natural products NC(=O)N[C@@H]1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 108010089254 Cholesterol oxidase Proteins 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000028526 Dihydrolipoamide Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010028127 Dihydrolipoamide Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 239000004263 Guaiac resin Substances 0.000 description 1
- 229920000932 Gum guaicum Polymers 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 102000002247 NADPH Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010014870 NADPH Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000012445 acidic reagent Substances 0.000 description 1
- 229960000458 allantoin Drugs 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 235000019278 guaiac resin Nutrition 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 229920006267 polyester film Polymers 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung von Substraten
oder Enzymaktivitäten unter Anwendung einer Rexod-Reaktion als Meßreaktion.
In der klinischen und pharmazeutischen Chemie, der Biochemie und der Lebensmittelchemie sind Redox-Reaktionen zur Bestimmung
von Enzym- bzw. Substrat-Konzentrationen von großem Interesse. Die Auswertung dieser Reaktionen kann über photometrische
Messungen erfolgen. Sind in dem Testsystem neben den interessierenden Redox-Partnern nun noch weitere reduzierende
Substanzen vorhanden, so ist mit Störungen zu rechnen. Besonders häufig ist im Probenmaterial Ascorbinsäure anzutreffen.
Sie gibt als starkes Reduktionsmittel zu Störungen Anlaß, wenn
709850/0517
INSPECTED
Pharmaka oder physiologische Flüssigkeiten, wie Harn oder
Urin, ascorbinhaltige Pflanzensäfte oder sonstige Lebensmittel, die Ascorbinsäure enthalten oder denen sie zugesetzt
wurde, zur Untersuchung kommen. So ist z.B. bekannt, daß folgende Reaktionen durch Ascorbinsäure gestört werden:
A Reaktionen, bei denen H3O2 und ein Wasserstoffdonator mit
Peroxidase (POD) umgesetzt werden, werden durch die Reaktion
Ascorbinsäure + H9O0 ^ Dehydroascorbinsäure + H9O
gestört.
B Reaktionen, bei denen Tetrazoliumsalze mit Reduktionsmitteln zu Formazanen reduziert werden, werden durch die
Reaktion
Ascorbinsäure + Tetrazoliumsalz > Formazan + Dehydroascorbinsäure
gestört.
C Reaktionen, bei denen Phenole mit nucleophilen Reagentien oxidativ gekuppelt werden, werden dadurch gestört, daß
Ascorbinsäure in noch nicht geklärter Weise zu Nebenreaktionen führt, so daß uneinheitliche Kupplungsprodukte entstehen,
die in ihrem Absorptionsverhalten in normalem und UV-Licht von den normalerweise gebildeten Kupplungsprodukten
abwe i chen.
Zur Entfernung der Ascorbinsäure aus dem Probenmaterial sind die üblichen Oxidationsmethoden in der Regel ungeeignet. Oxidationsmittel
greifen auch Substrate und Enzyme an und zer-
709850/0517
stören sie. Ihre Reduktionsprodukte, meist zwei- oder dreiwertige Metallionen, hemmen häufig die Enzyme, die zur Indikatorreaktion
benutzt werden. Die Zerstörung der Ascorbinsäure mit Sauerstoff erfordert stark alkalisches Milieu, z.B.
25-proz. NaOH. Das führt ebenfalls zur Zerstörung von Substraten und Enzymen.
Der Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zur Bestimmung von Substraten oder Enzymaktivitäten unter Anwendung
einer Redox-Reaktion als Meßreaktion zu schaffen, welches durch Ascorbinsäure nicht mehr gestört wird.
Erfindungsgemäß wird diese Aufgabe dadurch gelöst, daß dem Reaktionsansatz Ascorbatoxidase zugesetzt wird.
Ascorbatoxidase katalysiert die Reaktion:
Ascorbinsäure + 1/2 O2 Dehydroascorbinsäure
+ H2O
Nach den Angaben der Literatur über Ascorbinsäure-Oxidase war
zu erwarten, daß sich dieses Enzym nicht für den erfindungsgemäßen Zweck verwenden läßt. Alle bisher gewonnenen Enzympräparate
produzieren nämlich in einer Nebenreaktion H3O2. Gleichzeitig
unterliegt die Ascorbatoxidase einer sehr raschen Inaktivierung, welche dem gleichzeitig gebildeten H„0„ zugeschrieben
wird (Biochemical Copper Proceedings Symposium Harriman New York 1965, S. 305 - 337). Das gilt auch für höchstgereinigte
Präparationen,« die in der Ultrazentrifuge und bei der Elektrophorese keinerlei Verunreinigungen mehr zeigen (Biochem.
£, 1362 - 137O (1965)). Die Reaktionsinaktivierung wird auf
die H2O2-Bildung zurückgeführt (Biochem. Biophys. Acta 5_6, 427
bis 439 (1962)). Nach den Berechnungen der letzteren Autoren kann 1 U Ascorbatoxidase in 1 mMol/1 Ascorbinsäurelösung
709850/0517 - 4 -
_2
0,7 10 mMol/1 H3O2 produzieren. Solche Ascorbat-Konzentrationen sind in Probelösungen häufig vorhanden. Das gebildete H3O2 steht ohne weiteres für enzymatische Reaktionen zur Verfügung, wie am Beispiel der Katalase nachgewiesen wurde.
0,7 10 mMol/1 H3O2 produzieren. Solche Ascorbat-Konzentrationen sind in Probelösungen häufig vorhanden. Das gebildete H3O2 steht ohne weiteres für enzymatische Reaktionen zur Verfügung, wie am Beispiel der Katalase nachgewiesen wurde.
In dem System
Wasserstoffdonator + H3O3 Farbstoff + 2 H3O
zum photometrischen Nachweis von H9O9 bewirkt es bei einem
molaren Extinktionskoeffizienten von ca. 20 cm /yu,Mol eine
extinktionsdifferenz von 0,14. Da der Meßbereich normaler photometrischer Reaktionen von ca. 0,01 - 1,00 reicht, wird
hier ein untragbarer Fehler hervorgerufen. In gleicher Weise werden Reaktionen gestört, bei denen anstelle von H3O3 organische
Hydroperoxide und anstelle von POD Hämoglobin oder andere Oxidationskatalysatoren verwendet werden.
Aber abgesehen von diesem durch das H3O3 hervorgerufenen Fehler
war aus der oben zuletzt angeführten Literaturstelle bekannt, daß die Umsetzung der Ascorbinsäure schon lange vor
ihrer vollständigen Entfernung zum Stillstand kommt.
Besonders gravierend mußte dies bei all solchen Redox-Reaktionen sein, bei denen H3O3 entsteht, da dieses H3O3 ja einerseits
die Inaktivierung des Enzyms noch beschleunigen mußte und andererseits die Neubildung von H3O3 durch die Ascorbatoxidase
selbst zu völlig unübersichtlichen Erscheinungen führt. Es ist daher höchst überraschend, daß es entgegen den Erwartungen
möglich ist, die auf dem Vorhandensein von Ascorbat beruhenden Störungen durch den Ascorbatoxxdasezusatz vollständig
zu beseitigen, ohne daß andere Störungen auftreten, die den Vorteil der Ascorbatbeseitigung wieder zunichte machen.
709850/0517
Vorzugsweise wird das erfindungsgemäße Verfahren bei enzymatischen
Reaktionen angewendet, insbesondere solchen, bei denen H2O2 gebildet wird, also bei Reaktionen, die durch Oxidasen
wie Glucoseoxidase, Uricase, Cholesterinoxidase und dergleichen katalysiert werden, ferner bei Reaktionen, bei denen
Tetrazoliumsalze reduziert werden und bei Reaktionen, bei denen Phenole mit nucleophilen Reagentien oxidativ gekuppelt
werden. Die zugesetzte Ascorbatoxidasemenge richtet sich nach der Höhe der zu erwartenden Ascorbinsäuremenge in der Probe.
In der Regel werden 0,002 bis 100 U-Ascorbatoxidase/ml, vorzugsweise
0,01 bis 30 U/ml Testansatz eingesetzt werden. Der pH-Wert der Reaktion richtet sich in erster Linie nach dem pH-itfert,
welcher für das oder die anderen beteiligten Enzyme erforderlich ist. PH-Werte zwischen 4,0 und 8,5 erwiesen sich dabei für
das Verfahren der Erfindung als geeignet. Besonders bevorzugt wird im Rahmen der Erfindung die Verwendung einer Ascorbatoxidase
aus Zucchini (Cucurbita pepo meriullosa) . Aber auch Ascorbatoxidase
anderer Herkunft ist geeignet.
Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Reagens zur Bestimmung
von Substraten oder Enzymaktivitäten, enthaltend ein System zur Bestimmung eines Substrats oder Enzyms mit einer
Redox-Reaktion als Meßreaktion, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß es zusätzlich Ascorbatoxidase enthält.
Bevorzugte Reagentien dieser Art enthalten, falls Glucose das zu bestimmende Substrat ist, Peroxidase, Glucoseoxidase, o-Dianisidin
oder Azino-di-3-äthylbenzylthiazolinsulfonat (6) zusammen
mit Puffer oder Hexokinase, Glucose-6-phosphatdehydrogenase, Diaphorase, NADP, ein Tetrazoliumsalz wie INT: 3-(4-Jodphenyl)-2-(4-nitrophenyl)-5-phenyl-2H-tetrazoliumchlorid
und Puffer. Bei Harnsäure aus dem zu bestimmenden Substrat besteht das System vorzugsweise aus Peroxidase, Uricase, einem
709850/0517
Phenol wie z.B. 2,4-Dichlorphenol, Aminoantipyrin und Puffer.
Im Falle der Glutamatbestimmung besteht das System bevorzugt aus Glutamatdehydrogenase, Diaphorase, NAD, INT und Puffer.
Für Tyrosin wird Tyrosinase, B-Methyl-ö-kaliumsulfonyl-benzthiazolonhydrazon(2),
für die Brenzcatechinbestimmung Diphenoloxidase, S-Methyl-ö-kaliumsulfonyl-benzthiazolonhydrazon
(2), jeweils zusammen mit Puffer, bevorzugt. Alle diese Systeme zur Bestimmung von Substraten sind aber bekannt. An ihrer
Stelle können jedoch auch andere bekannte Systeme zur Bestimmung von Substraten oder Enzymen im Rahmen des erfindungsgemäßen
Reagens verwendet werden.
Von besonderer Bedeutung ist die Erfindung auch für die Anwendung auf dem Gebiet der Schnelldiagnostika. Derartige Schnelldiagnostika
enthalten in der Regel die verschiedenen, für die Durchführung des Verfahrens benötigten Reagentien entweder in
einem saugfähigen Träger imprägniert oder mit einem geeigneten Bindemittel auf einer Trägerfolie als Überzug aufgebracht. Die
bevorzugte Ausführungsform ist hierbei der Zusatz der Ascorbatoxidase
zum Gemisch der übrigen Reagenzien mit nachfolgender Imprägnation auf einem saugfähigen Träger. Auf diese Weise werden
z.B. durch Ascorbinsäure praktisch nicht gestörte Testpapiere zum Nachweis von Glucose im Harn (z.B. gemäß DT-OS
2 3 38 9 32), von Blut im Harn (z.B. gemäß P 24 60 903-8 oder DBP 22 35 152) und von Blut im Stuhl erhalten. Daß die Ascorbatoxidase
in den Testpapieren für Blut im Harn funktionsfähig und lagerstabil bleibt, muß als höchst überraschend angesehen
werden. Diese Testpapiere enthalten nämlich überschüssige Mengen an organischen Hydroperoxiden, von denen ähnlich wie von
H^O« eine Inaktivierung der Ascorbatoxidase zu erwarten gewesen
wäre.
— 7 —
709850/0517
Die Ascorbatoxidase kann aber auch auf einem getrennten Träger
aufgebracht werden, der mit dem Träger der übrigen Reagentien vereinigt, beispielsweise darübergelegt, verklebt oder
gemeinsam eingesiegelt wird. Besonders bevorzugt als Träger für die Ascorbatoxidase wird in diesem Falle ein sogenanntes
wasserlösliches Papier (z.B. gemäß DT-OS 24 36 598), das die Farbreaktion auf dem Trägerpapier der anderen Reagentien besonders
gut erkennen läßt. Diese Ausführungsweise ist besonders dann von Vorteil, wenn in der Reagentienkombination
Substanzen vorhanden sind, die mit der Ascorbatoxidase unverträglich sind, beispielsweise stark saure Reagentien, wie sie
bei den Verfahren zur Bestimmung von ürobilinogen, Bilirubin und Nitrit verwendet werden.
Bei den obigen Ausführungsformen werden bis zu 5000 U Ascorbatoxidase
pro ml Imprägnierlösung, vorzugsweise bis 2000 U/ml Imprägnierlösung für die Reagensherstellung eingesetzt. Weniger
als 1 ü/ml werden im allgemeinen nicht den angestrebten Effekt sicherstellen.
Weiterhin können auch getrennte Zonen des Trägermaterials mit der Ascorbatoxidase bzw. den anderen Testreagentien imprägniert
werden. In diesem Falle wird zweckmäßig der Träger mit der zu untersuchenden Lösung derart in Berührung gebracht,
daß die Lösung zuerst mit der ascorbatoxidasehaltiqen Zone in Berührung kommt und von dort aus in die Zone gesaugt wird,
welche die übrigen Testreagentien enthält.
Gemäß einer weiteren Ausführungsform wird die Ascorbatoxidase
nach den bekannten Methoden der Enzymfixierung an unlöslichen Trägern am Trägermaterial gebunden. Geeignete Methoden sind
bekannt aus
DT-OSen 17 68 512 22 60 184
21 28 743 24 26 988
22 60 185 26 03 319
19 15 970. - 8 -
709850/0517
Bevorzugte Methoden für das erfindungsgemäße Verfahren sind die Glucosebestimmung mit Peroxidase und Glucoseoxidase und
o-Dianisidin oder 2,2'Azino-di- 3-äthylbenzthiazolinsulfonat-(6)
(ABTS), die Glucosebestimmung nach der Hexokinase/Glucose-6-phosphatdehydrogenase-Methode,
der Nachweis von Harnsäure mittels Phenol, Aminoantipyrin, Peroxidase und Uricase, die
Bestimmung von Thyrosin oder Brenzcatechin mittels SMBTH (4-Methyl-6-kaliumsulfonyl-benzthiazolonhydrazon(2)
und Thyrosinase bzw. Diphenoloxidase.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung weiter. Beispiel 1
Bestimmung von Glucose mit o-Dianisidin,· Peroxidase (POD) und Glucoseoxidase (GOD), gemessen im Photometer, Wellenlänge
4 32 nm, Meßtemperatur: 25°C.
Küvette Nr. 1
Phosphatpuffer pH 7,01 M |
2 | /5 | 2 | ,5 | 2 | ,1 | 2 | ,5 | 2 | ,5 |
o-Dianisidin 5 mg/ml |
0 | ,1 | 0 | ,1 | 0 | 0 | ,1 | 0 | ,1 | |
709850/0517
Küvette Nr.
POD, 180 U/ml 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05
Glucose-Lösung
1 mg/ml 0,03 0,03 0,03 0,03 0,03
Ascorbinsäure-
lösung 10 mM - 0,1 0,q-| 0,1 0,01
Wasser 0,12 0,02 0,11 - O,O9
Ascorbat-Oxidase
500 U/ml | 25° | — | — | — | 0, | 02 | 0,02 | 1 | 0,1 |
1 Min. bei | C inkubieren, | E1 | ablesen, | dann | starten mit | E1 das ΔΕ | |||
GOD 70 U/ml | 25 | O,1 0 | ,1 | 0,1 | o, | 540 | 0,543 | ||
30 Min. bei berechnen |
°C inkubieren | ' E2 | ablesen | , aus | |||||
A E | 0,541 0 | ,010 | 0,316 | o, | |||||
Küvette 1 entspricht einer ungestörten Messung (keine Ascorbinsäure)
.
Küvette 2 und 3 zeigen, daß 1 bzw. 0,1 /*Mol Ascorbat den Test
praktisch vollständig bzw. zu 41,5% hemmen, Küvette 4 und zeigen die vollständige Entstörung dieser Ascorbat-Konzentrationen
durch Zusatz von je 10 U Ascorbat-Oxidase.
Nachweis von Glucose mit 2,2'-Azino-di- Cs-äthyl-benzthiazolinsulfonat(6)J
(ABTS), POD und GOD im Photometer, Wellenlänge: 432 nm, Meßtemperatur: 25°C.
709850/0517 . . " 10 "
Küvette Nr. | 1 | 2 | 3 | 0,1 | 0,1 | 0,000 | 0,1 | 4 | 5 | mit | 0,1 |
Phosphatpuffer pH 5,6 0,1 M |
2,75 | 2,75 | 2,75 | inkubieren, E„ | ablesen | 2,75 | 2,75 | -E1 das Δ Ε | |||
ABTS 50 HiM | 0,05 | 0,05 | 0,05 | 0,505 | 0,40 | 0,O5 | 0,05 | 0,504 | |||
POD 250 U/ml | 0,02 | 0,02 | 0,02 | 0,02 | 0,02 | ||||||
Glucose-Lösung 0,1 mg/ml |
0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | 0,1 | ||||||
Ascorbinsäure- Lösung 1 mM |
— | 0,1 | 0,01 | 0,1 | 0,01 | ||||||
Wasser | 0,12 | 0,02 | 0,11 | - | 0,09 | ||||||
Ascorbat-Oxidase 500 U/ml |
- | - | - | 0,02 | 0,02 | ||||||
1 Min.bei 25°C inkubieren, E1 ablesen, | starten | ||||||||||
GOD 70 U/ml | 0,1 | ||||||||||
30 Min. bei 25°C berechnen |
, aus E„ | ||||||||||
Δ Ε | 0,502 |
Küvette 1 entspricht einer ungestörten Messung (kein Ascorbat).
Küvette2 und 3 zeigen, daß 0,1 bzw. 0,01^MoI Ascorbat den Test
vollständig bzw. zu 21% hemmen.
Küvette 4 und 5 zeigen die vollständige Entstörung dieser Ascorbat-Konzentrationen
durch je 10 U Ascorbat-Oxidase.
Nachweis von Harnsäure mittels Phenol, Aminoantipyrin, POD
und Uricase am Analysenautomaten (AutoAnalyzer).
-11-
709850/0517
Harnsäure + O3 + H3O
Allantoin + H3O3
2 H-O2 + 2,4-Dichlorphenol + 4-Aminoantipyrin >
Chinoider
Farbstoff + 2 H3O
1 Ascorbat-Oxidase-Feagens
In 600 ml bidest. Wasser wird der Inhalt einer Flasche 1 gelöst. Zusatz von 0,3 ml Brij -35. In dunkler Flasche bei
ca. A0C vier Wochen, bei ca. 25°C eine Woche haltbar.
2 Uricase-Reagens
In 800 ml bidest. Wasser wird der Inhalt einer Flasche 2 gelöst. Zusatz von 2,0 ml Brij -35. In dunkler Flasche
bei ca. 4°C vier Wochen, bei ca. 25°C eine Woche haltbar.
1 50 mM Phosphatpuffer, pH 5,6
Ascorbat-oxidase >
in den aus Fig.2 der Zeichnung ersichtlichen
Mengen.
2 31 mM Tris/Citronensäure, pH 8>9
Uricase > 0,08 U/ml
Uricase > 0,08 U/ml
POD >0,015 ü/ml . .
3,0 mM 2,4-Dichlorphenol, 4,0 mM 4-Aminoantipyrin
Zur Durchführung der Bestimmung wird das Schlauchsystem des Automaten gemäß dem in Fig. 1 der Zeichnung dargestellten
Fließschema zusammengestellt.
Fig. 2 der Zeichnung faßt in graphischer Darstellung die Ergebnisse
der Versuche zusammen.
Nachweis von Glucose mit HK/G6P-DH, NADP, INT und Diaphorase
im Photometer. Meßwellenlänge: 492 nm, Inkubationstemperatur:
25°c. 709850/0517
- 12 -
Küvette Nr.
Phosphatpuffer, pH 7,5 0,1 M NADP/INT je 1 mg/ml Diaphorase 5 U/ml
Glucose-Lösung 0,05 mg/ml Ascorbat-Lösung 10 mM Ascorbat-Oxidase 35 U/ml Wasser
Glucose-Lösung 0,05 mg/ml Ascorbat-Lösung 10 mM Ascorbat-Oxidase 35 U/ml Wasser
1,7 | 1,7 | 1,7 |
0,1 | 0,1 | 0,1 |
0,1 | 0,1 | 0,1 |
0,1 | 0,1 | 0,1 |
- | 0,01 | 0,01 |
- | - | 0,03 |
0,04 | 0,03 | — |
3 Min. bei 25°C inkubieren, E.. | ablesen, | ,05 | starten | mit |
HK/G6P-DH-Lösung je 56 U/ml | O | E2-I | 0,05 | 0, |
15 Min. inkubieren, E2 ablesen | , aus | ,234 | ϊ- das Λ | |
Δ Ε | O | 0,307 | ,05 . | |
fcE berechnen | ||||
0, | ||||
,230 |
Küvette 1 entspricht einer ungestörten Messung.
Küvette 2 zeigt, daß 0,01 ^MoI Ascorbat den Test um 34% zu hoch ausfallen läßt, Küvette 3 zeigt, daß 1 U Ascorbat-Oxidase diese Störung völlig beseitigt.
Küvette 2 zeigt, daß 0,01 ^MoI Ascorbat den Test um 34% zu hoch ausfallen läßt, Küvette 3 zeigt, daß 1 U Ascorbat-Oxidase diese Störung völlig beseitigt.
Bestimmung von Glutamat mittels GlDH, NAD/INT/Diaphorase im
Photometer. Meßwellenlänge 492 nm, Temperatur 25°C.
709850/0517
Küvette Nr. | 1 | 2 | 1,0 | 1,0 | 3 | 29 | 0 | 1 | 4 | ,0 | 5 |
Phosphatpuffer, pH 5,6, 0,01 inM |
1,30 | 1,20 | 0,2 | 0,2 | 1, | 1 | 2 | 0 | ,18 | ,2 | 1,27 |
Glutamat-Lösung 0,2 mg/ml |
0,1 | 0,1 | o, | 01 | 0 | ,1 | 0,1 | ||||
Ascorbat-Lösung 5 mM |
_ | 0,1 | 0, | 0 | ,1 | 0,01 | |||||
Ascorbat-Oxidase 100 U/ml |
- | - | - | die | ,02 | 0,02 | |||||
3 Min. bei 25°C inkubieren, dann pipettieren |
in | einzelnen | Küvetten | ||||||||
0,2 M TRA, 0,05 M Kaliumphosphat puffer, pH 8,6 mit 1,5% Triton-X-100 |
1, | 1 | 1,0 | ||||||||
NAD-Lösung, 5 mg/ml |
0, | 0 | 0,2 | ||||||||
Diaphorase-Lösung
10 U/ml ' 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 GlDH 1000 U/ml 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05
E- ablesen, | Reaktion starten mit | 0,05 | 0 | ,05 | ,186 | 0 | ,05 |
INT-Lösung, 2 mg/ml |
0,05 0,05 | ablesen, | aus E2-I | das Δ. Ε | |||
15 Min. bei errechnen. |
25°C inkubieren, E- | 0,380 | 0 | 0 | ,182 | ||
0,184 1,560 | |||||||
Küvette 1 entspricht einer ungestörten Messung.
Küvette 2 und 3 zeigen,daß 0,5 bzw. 0,05 /4,MoI Ascorbat den Test
um 700 bzw. um 100% zu hoch ausfallen lassen.
Küvette 4 und 5 zeigen die völlige Beseitigung dieser Störung durch 2 U Ascorbat-Oxidase.
709850/0517 - 14 -
Bestimmung von Tyrosin mit S-Methyl-ö-kaliumsulfonyl-benzthiazolon-hydrazon-(2)
(SMBTH) und Tyrosinase im Photometer, Meßwellenlänge 492 nm, Meßtemperatur 25 C.
Küvette Nr. 1
Phosphatpuffer, pH 5,2, 0,25 M 2,77 SMBTH 0,1 M
Ascorbinsäure-Lösung 10 mM Wasser
Ascorbat-Oxidase 500 U/ml Tyrosinase 60 U/ml
2,77 | 2,77 | 2,77 |
0,05 | 0,05 | 0,05 |
- | 0,1 | 0,1 |
0,12 | 0,02 | - |
- | - | 0,02 |
0,05 | 0,05 | 0,05 |
1 Min. bei | 25 | 0C | inkubieren, | E1 | ablesen, | starten | 05 | mit |
Tyrosin 2 | mM | 0,05 | 0, | «2- | 0,05 | |||
1 Std. bei berechnen |
25 | °C | inkubieren, | E2 | ablesen, | aus | 728 | S1 das AE |
A E | 1 ,113 | 0, | 1,100 |
Küvette 1 entspricht einer ungestörten Messung, in Küvette 2 erniedrigt 1 /tMol Ascorbat den theoretischen Wert um 35%, in
Küvette 3 ist diese Störung durch 10 U Ascorbat-Oxidase völlig beseitigt.
Bestimmung von Brenzcatechin mit SMBTH und Diphenol-Oxidase
709850/0517
Küvette Nr.
Phosphatpuffer, 0,25 M,
pH 5,2 | 2O mM | 2 | ,8O | 2, | 7O | 2 | ,68 |
SMBTH o,1 | 5OO U/ml | 0 | ,05 | o, | O5 | 0 | ,05 |
Ascorbat-Lösung | - | 1 | 0 | ,1 | |||
Ascorbat-Oxidase | — | — | 0 | ,02 | |||
1 Min. bei 25°C | inkubieren, | E1 | ablesen. | starten | ,05 | mit |
Diphenol-Oxidase | 200 U/ml | 0,05 | 0 | =2" | 0,05 | |
17 Min. bei 25°C berechnen |
inkubieren, | r E2 | ablesen | , aus | ,485 | E1 das ^\ E |
0,890 | 0 | 0,896 |
Küvette 1 entspricht einer ungestörten Messung. In Küvette 2 erniedrigen 2 ju-Viol Ascorbat den theoretischen
Wert um 47%, diese Störung ist in Küvette 3 durch 1OU Ascorbat-Oxidase
völlig beseitigt.
Harn
Filterpapier wird mit einer Lösung folgender Zusammensetzung getränkt und bei 50° getrocknet:
1,2 m Citratpuffer pH 5
9—(y-Dimethylaminopropy1)-6-chlor-3-amino
carbazol-dihydrochlorid
Glucoseoxidase (104 U/mg) Peroxidase (63 U/mg)
50,0 ml
0,75 g 0,25 g O,O5 g
709850/0517
- 16 -
Ascorbatoxidase (100 U/mg) 1,00g
Wasser 100,O ml.
Das Testpapier reagiert mit glucosehaltigen Urinen mit rotorangen bis schwärzlich-roten Farbtönen. Nach einer Reaktionszeit
von 2 Min. geben Urine gleichen Glucosegehaltes mit Ascor binSäuregehalten bis zu 150 mg/dl praktisch gleiche Reaktionsfarben.
Mit Testpapieren analoger Zusammensetzung, aber ohne Ascorbatoxidase,
sind je nach Glucosegehalt die Reaktionsfarben bei Ascorbinsäurekonzentrationen ab 50 mg/dl abgeschwächt oder völ
lig unterdrückt.
Filterpapier wird nacheinander mit folgenden Lösungen imprägniert und bei 40° getrocknet.
Lösung 1
1,2 m Citratpuffer pH 5,25 35,0 ml
Äthylendiamintetraessigsäure, Dinatriumsalz
Dioctylnatriumsulfosuccinat
2,5-Dimethylhexan-2,5-dihydroperoxid
(ca. 70%ig)
Phosphorsäuretrimorpholid
As corbatoxidase (100 U/mg) Methanol Wasser
- 17 "
709850/0517
0,1 | g |
0,5 | g |
1,6 | g |
12,7 | g |
0,3 | g |
30,0 | ml |
ad 100,O | ml |
Lösung 2
3,3', 5,5'-Tetramethylbenzidin 0,3 g
Phenanthridin 0,2 g
Toluol/Petroläther (30 : 70) ad 100,0 ml
Mit diesem Testpapier kann die Anwesenheit von 5 Erythrozyten/mm^
im Harn auch in Gegenwart von 30 bis 50 mg Ascorbinsäure/100 ml
nachgewiesen werden. Mit einem Testpapier gleicher Zusammensetzung, aber ohne Ascorbatoxidase gelingt dieser Nachweis schon
in Gegenwart von 10 - 20 mg Ascorbinsäure/100 ml nicht mehr.
Testpapier wie Beispiel 9, ohne Ascorbatoxidase
Wasserlösliches Papier aus Carboxymethylcellulose (Flächen-
2
gewicht 60 g/m ) wird mit einer Lösung von 20% Eisessig in Methanol zwecks Neutralisation getränkt und getrocknet. Danach wird mit einer wäßrigen Lösung von Ascorbatoxidase (10 U/ml) besprüht und gleich getrocknet.
gewicht 60 g/m ) wird mit einer Lösung von 20% Eisessig in Methanol zwecks Neutralisation getränkt und getrocknet. Danach wird mit einer wäßrigen Lösung von Ascorbatoxidase (10 U/ml) besprüht und gleich getrocknet.
Testpapier B wird auf Testpapier A gelegt und beide werden zusammen zwischen einer Polyesterfolie und einem Nylonnetz
eingesiegelt. Der zu untersuchende Urin wird auf den so hergestellten Teststreifen aufgetropft.
Die Ergebnisse entsprechen denen von Beispiel 9.
- 18 -
709850/0517
Filterpapier wird nacheinander mit folgenden Lösungen imprägniert und bei 40° getrocknet.
Lösung 1
1,2 m Citratpuffer, pH 5,25 10 ml
Ascorbatoxidase 100 U/mg 0,3 g
Wasser ad 100,0 ml
Lösung 2
Guajakharz 3 g
Toluol ad 100,0 ml
Die Lösung wird filtriert und nur das Filtrat zur Imprägnierung verwendet.
Man erhält ein Testpapier, welches mit Stuhl bestrichen wird. Wird auf die Rückseite eine 3%-ige wäßrige Lösung von Wasserstoffperoxid
getröpfelt, so erhält man eine blaue Färbung wenn der Stuhl ca. 2% Blut enthält. Diese Färbung tritt auch bei
ascorbinsäurehaltigen Stühlen (ca. 15 mg/100 g) auf, während
sie in diesen Fällen bei einem Testpapier ohne Ascorbatoxidase ausbleibt.
709850/0517
Claims (19)
- , t j,ρ?/^ ei 4Verfahren zur Bestimmung von Substraten oder Enzymaktivitäten unter Anwendung einer Redox-Reaktion als Meßreaktion, dadurch gekennzeichnet , daß in Anwesenheit von Ascorbatoxidase gearbeitet wird.
- 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß 0,002 bis 100 U Ascorbatoxidase/ml Testansatz eingesetzt werden.
- 3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet , daß die Ascorbatoxidase zusammen mit einem H0O9 bildenden Enzym eingesetzt wird.
- 4. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet , daß die Ascorbatoxidase zusammen mit einem Tetrazoliumsalz eingesetzt wird.
- 5. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet , daß die Ascorbatoxidase zusammen mit einem Phenol, welches mit nucleophilen Reagenzien oxidativ gekuppelt werden kann, eingesetzt wird.
- 6. Verfahren nach Anspruch 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet , daß es bei pH-Werten zwischen 4,0 und 8,5 durchgeführt wird.
- 7. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet , daß eine Ascorbatoxidase aus Zucchini (Cucurbita pepo medullosa) verwendet wird.
- 8. Reagens zur enzymatischen Bestimmung von Substraten oder Enzymaktivitäten, enthaltend ein System zur Bestimmung- 20 -709850/0517ORK&NÄL INSPECTEDeines Substrats oder Enzyms mit einer Redox-Reaktion als Meßreaktion, dadurch gekennzeichnet , daß es zusätzlich Ascorbatoxidase enthält.
- 9. Reagens nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das System zur Bestimmung eines Substrats für die Glucosebestimmung dient und Peroxidase, Glucoseoxidase, o-Dianisidin oder 2-Azino-di-3-äthylbenzthiazolinsulfonat(6) und Puffer enthält.
- 10. Reagens nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das System zur Bestimmung eines Substrats zur Harnsäurebestimmung dient und Peroxidase, Uricase, ein Phenol wie 2,4-Dichlorphenol, Aminoantipyrin und Puffer enthält.
- 11. Reagens nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das System zur Bestimmung eines Substrats zur Glucosebestimmung dient und Hexokinase, Glucose-6-Phosphatdehydrogenase, Nicotinamid-Adenin-Dinucleotidphosphat (NADP) Diaphorase, Tetrazoliumsalz und Puffer enthält.
- 12. Reagens nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das System zur Bestimmung eines Substrats zur Glutamatbestimirtung dient und Glutamatdehydrogenase, Diaphorase, Nicotinamid-adenin-dinucleotid, Tetrazoliumsalz und Puffer enthält.
- 13. Reagens nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das System zur Bestimmung eines Substrats zur Tyrosinbestimmung dient und Tyrosinase, 3-Methyl-6-kaliumsulfonyl-benzthiazolon-hydrazon-(2) und Puffer enthält.709850/0517
- 14. Reagens nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das System zur Bestimmung eines Substrats zur Brenzcatechinbestimmung dient und Diphenoloxidase, S-Methyl-e-kaliumsulfonyl-benzthiazolon-hydrazon-(2) und Puffer enthält.
- 15. Reagens nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß das System zum Nachweis eines Substrates und die Ascorbatoxidase auf einem saugfähigen Trägermaterial, vorzugsweise Papier, imprägniert vorliegen.
- 16. Reagens nach Anspruch 15, bestehend aus einem mit Glucoseoxidase, Peroxidase, Ascorbatoxidase, 9-(y-dimethylaminopropyl)-ö-chlor-S-aminocarbazolsalz und Puffer imprägnierten Trägerpapier.
- 17. Reagens nach Anspruch 15, bestehend aus mit Athylendiamintetraessigsäuresalz, Dioctylnatriumsulfosuccinat, 2,5-Dimethylhexan-2,5-dihydroperoxid, Phosphorsäuretrimorpholid, Ascorbatoxidase, 3,3', 5,5'Tetramethylbenzidin, Phenanthridin und Puffer imprägniertem Papier.
- 18. Reagens nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, daß die Ascorbatoxidase auf einem wasserlöslichen blattförmigen Trägermaterial, das System zur Bestimmung eines Substrats auf einem wasserunlöslichen blattförmigenr saugfähigen Trägermaterial imprägniert vorliegt und das wasserlösliche und/das wasserunlösliche Trägermaterial aufeinandergeschichtet sind.
- 19. Reagens nach Anspruch 15, bestehend aus mit Ascorbatoxidase, Guajakharz und Puffer imprägniertem Papier.709850/0517
Priority Applications (31)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE2625834A DE2625834B2 (de) | 1976-06-09 | 1976-06-09 | Verfahren zur Bestimmung von Substraten oder Enzymaktivitäten |
AT234077A AT354640B (de) | 1976-06-09 | 1977-04-04 | Verfahren zur bestimmung von substraten oder von enzymaktivitaeten |
CA276,113A CA1084393A (en) | 1976-06-09 | 1977-04-13 | Process for the determination of substrates or enzyme activities |
IE764/77A IE45546B1 (en) | 1976-06-09 | 1977-04-13 | Process for the determination of substrates or enzyme activities |
AR267337A AR212763A1 (es) | 1976-06-09 | 1977-04-25 | Reactivo para la determinacion enzimatica de substractos o actividades enximaticas empleando una reaccion redox como reaccion de medicion |
NLAANVRAGE7704591,A NL169503C (nl) | 1976-06-09 | 1977-04-27 | Werkwijze ter bepaling van substraten of enzymactiviteiten en werkwijze ter bereiding van een reagens voor de enzymatische bepaling van substraten en enzymactiviteiten. |
US05/792,073 US4168205A (en) | 1976-06-09 | 1977-04-28 | Method for the determination of substrates or enzyme activities |
FI771356A FI60719C (fi) | 1976-06-09 | 1977-04-28 | Foerfarande foer bestaemning av substrat eller enzymaktiviteter |
GB17993/77A GB1519134A (en) | 1976-06-09 | 1977-04-29 | Process for the determination of substrates or enzyme activities |
IT77@@A IT1075527B (it) | 1976-06-09 | 1977-05-03 | Procedimento per la determinazione di substrati oppure di attivita' enzimatiche |
YU01144/77A YU114477A (en) | 1976-06-09 | 1977-05-05 | Method of defining substrates or enzymatic activity |
JP5195377A JPS52150692A (en) | 1976-06-09 | 1977-05-06 | Activity measuring method of substrate or enzyme and reagent for carrying out the method |
NO771599A NO148340C (no) | 1976-06-09 | 1977-05-06 | Fremgangsmaate og reagens for bestemmelse av substrater eller enzymaktiviteter i naervaer av ascorbinsyre. |
ES458544A ES458544A1 (es) | 1976-06-09 | 1977-05-06 | Procedimiento para la determinacion de substratos o activi- dades de enzimas. |
IL52047A IL52047A (en) | 1976-06-09 | 1977-05-06 | Process for the determination of substrates or enzyme activities with the use of redox reaction as measurement reaction and reagents therefor |
PL1977197927A PL109224B1 (en) | 1976-06-09 | 1977-05-06 | Method of determining enzymatic substrates or enzymaticactivity |
ZA00772716A ZA772716B (en) | 1976-06-09 | 1977-05-06 | Process for the determination of substrates or enzyme activities |
CH571277A CH633887A5 (de) | 1976-06-09 | 1977-05-06 | Verfahren und reagens zur bestimmung von substraten oder enzymaktivitaeten. |
CS773018A CS207453B2 (en) | 1976-06-09 | 1977-05-06 | Method of determination of substrates or enzymatic effectiveness |
PL1977217830A PL114343B1 (en) | 1976-06-09 | 1977-05-06 | Preparation for determining enzymatic substrates or enzyme activity |
SE7705303A SE426601B (sv) | 1976-06-09 | 1977-05-06 | Forfarande for bestemning av substrat eller enzymaktivitet som paverkas av nervaro av askobinsyra och ett reagens for utforande av forfarandet |
CS781874A CS235068B2 (en) | 1976-06-09 | 1977-05-06 | Agent for enzymatic determination of substrates |
SU772481956A SU797592A3 (ru) | 1976-06-09 | 1977-05-06 | Способ определени субстрата или фер-МЕНТАТиВНОй АКТиВНОСТи B биОлОгичЕСКОММАТЕРиАлЕ |
HU77BO00001667A HU172931B (hu) | 1976-06-09 | 1977-05-06 | Sposob i reagent dlja opredelenija substratov ili aktivnosti enzimov |
BE177392A BE854407A (fr) | 1976-06-09 | 1977-05-09 | Procede pour le dosage des substrats ou la mesure des activites enzymatiques |
DK202677A DK144949C (da) | 1976-06-09 | 1977-05-09 | Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af substrater eller enzymaktiviteter |
LU77290A LU77290A1 (de) | 1976-06-09 | 1977-05-09 | |
FR7714090A FR2354561A1 (fr) | 1976-06-09 | 1977-05-09 | Procede pour le dosage des substrats ou la mesure des activites enzymatiques |
DD7700198825A DD130178A5 (de) | 1976-06-09 | 1977-05-09 | Verfahren zur bestimmung von substraten oder enzymaktivitaeten |
BR7703008A BR7703008A (pt) | 1976-06-09 | 1977-05-09 | Processo para determinacao de substratos ou atividades enzimaticas |
AU25021/77A AU500988B2 (en) | 1976-06-09 | 1977-05-09 | Determination of enzyme activities in presence of ascorbic acid |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE2625834A DE2625834B2 (de) | 1976-06-09 | 1976-06-09 | Verfahren zur Bestimmung von Substraten oder Enzymaktivitäten |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE2625834A1 true DE2625834A1 (de) | 1977-12-15 |
DE2625834B2 DE2625834B2 (de) | 1978-10-12 |
DE2625834C3 DE2625834C3 (de) | 1989-11-23 |
Family
ID=5980154
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE2625834A Granted DE2625834B2 (de) | 1976-06-09 | 1976-06-09 | Verfahren zur Bestimmung von Substraten oder Enzymaktivitäten |
Country Status (29)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4168205A (de) |
JP (1) | JPS52150692A (de) |
AR (1) | AR212763A1 (de) |
AT (1) | AT354640B (de) |
AU (1) | AU500988B2 (de) |
BE (1) | BE854407A (de) |
BR (1) | BR7703008A (de) |
CA (1) | CA1084393A (de) |
CH (1) | CH633887A5 (de) |
CS (2) | CS207453B2 (de) |
DD (1) | DD130178A5 (de) |
DE (1) | DE2625834B2 (de) |
DK (1) | DK144949C (de) |
ES (1) | ES458544A1 (de) |
FI (1) | FI60719C (de) |
FR (1) | FR2354561A1 (de) |
GB (1) | GB1519134A (de) |
HU (1) | HU172931B (de) |
IE (1) | IE45546B1 (de) |
IL (1) | IL52047A (de) |
IT (1) | IT1075527B (de) |
LU (1) | LU77290A1 (de) |
NL (1) | NL169503C (de) |
NO (1) | NO148340C (de) |
PL (2) | PL114343B1 (de) |
SE (1) | SE426601B (de) |
SU (1) | SU797592A3 (de) |
YU (1) | YU114477A (de) |
ZA (1) | ZA772716B (de) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104131765A (zh) * | 2014-07-22 | 2014-11-05 | 哈尔滨盛世华林科技有限公司 | 一种门底自动密封条 |
Families Citing this family (114)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE2834705B1 (de) * | 1978-08-08 | 1980-01-24 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und Reagenz zur Durchfuehrung enzymatischer Bestimmungen |
DE2907628C2 (de) * | 1979-02-27 | 1981-02-05 | C.A. Greiner Und Soehne Gmbh & Co Kg, 7440 Nuertingen | Proberöhrchen für die Untersuchung von Proben im klinischen Bereich, insbesondere von Urinproben |
DE2914487A1 (de) * | 1979-04-10 | 1980-10-30 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und mittel zur entfernung von ascorbinsaeure aus waessrigen fluessigkeiten |
JPS56109595A (en) * | 1980-02-01 | 1981-08-31 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Removal of reductive inhibitor |
DE3012368C2 (de) * | 1980-03-29 | 1982-04-15 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und diagnostische Mittel zum Nachweis von Redox-Reaktionen |
DE3012314A1 (de) * | 1980-03-29 | 1981-10-15 | W. Schlafhorst & Co, 4050 Mönchengladbach | Offenend-spinnvorrichtung |
US4310626A (en) * | 1980-06-02 | 1982-01-12 | Miles Laboratories, Inc. | Interference-resistant composition, device and method for determining a peroxidatively active substance in a test sample |
DE3046741A1 (de) * | 1980-12-11 | 1982-07-15 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Nachweis von nad(p)h oder salicylat |
DE3249743C2 (de) * | 1982-02-18 | 1990-10-04 | Amano Pharmaceutical Co., Ltd., Nagoya, Aichi, Jp | |
US4587220A (en) * | 1983-03-28 | 1986-05-06 | Miles Laboratories, Inc. | Ascorbate interference-resistant composition, device and method for the determination of peroxidatively active substances |
DE3313178A1 (de) * | 1983-04-12 | 1984-10-18 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur enzymatischen bestimmung von sulfit |
JPS59230161A (ja) * | 1983-06-13 | 1984-12-24 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 還元性物質の分解方法及び分解用試薬 |
US5002893A (en) * | 1985-09-19 | 1991-03-26 | Isolab, Inc. | Single color reading method for determining fructosamine |
DE3611227A1 (de) * | 1986-04-04 | 1987-10-08 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von substraten oder enzymaktivitaeten |
US5196314A (en) * | 1986-04-04 | 1993-03-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process and reagent for the determination of substrates or enzyme activities |
DE3620817A1 (de) * | 1986-06-21 | 1987-12-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur spezifischen bestimmung des serumfructosamingehalts sowie hierfuer geeignetes reagenzgemisch |
US4885240A (en) * | 1986-09-04 | 1989-12-05 | Eastman Kodak Company | Use of organic buffers to reduce dehydroascorbic acid interference in analytical methods |
US5387431A (en) * | 1991-10-25 | 1995-02-07 | Fuisz Technologies Ltd. | Saccharide-based matrix |
US5456932A (en) * | 1987-04-20 | 1995-10-10 | Fuisz Technologies Ltd. | Method of converting a feedstock to a shearform product and product thereof |
US5264104A (en) * | 1989-08-02 | 1993-11-23 | Gregg Brian A | Enzyme electrodes |
US5320725A (en) * | 1989-08-02 | 1994-06-14 | E. Heller & Company | Electrode and method for the detection of hydrogen peroxide |
US5264105A (en) * | 1989-08-02 | 1993-11-23 | Gregg Brian A | Enzyme electrodes |
CA2028625A1 (en) * | 1990-07-05 | 1992-01-06 | Daniel S. Daniel | Ethanol analytical element |
US5262305A (en) * | 1991-03-04 | 1993-11-16 | E. Heller & Company | Interferant eliminating biosensors |
US5593852A (en) | 1993-12-02 | 1997-01-14 | Heller; Adam | Subcutaneous glucose electrode |
CA2050057A1 (en) * | 1991-03-04 | 1992-09-05 | Adam Heller | Interferant eliminating biosensors |
US6129926A (en) * | 1991-05-17 | 2000-10-10 | Fuisz Technologies Ltd. | Flash flow processing of thermoplastic polymers and products made therefrom |
US5576042A (en) * | 1991-10-25 | 1996-11-19 | Fuisz Technologies Ltd. | High intensity particulate polysaccharide based liquids |
DE69231281T2 (de) * | 1991-12-17 | 2001-03-01 | Biovail Tech Ltd | Zusammensetzung und verfahren zur ulcusprävention und -behandlung |
US5346377A (en) * | 1993-10-07 | 1994-09-13 | Fuisz Technologies Ltd. | Apparatus for flash flow processing having feed rate control |
US5445769A (en) * | 1994-06-27 | 1995-08-29 | Fuisz Technologies Ltd. | Spinner head for flash flow processing |
US5582855A (en) * | 1994-07-01 | 1996-12-10 | Fuisz Technologies Ltd. | Flash flow formed solloid delivery systems |
US5556652A (en) * | 1994-08-05 | 1996-09-17 | Fuisz Technologies Ltd. | Comestibles containing stabilized highly odorous flavor component delivery systems |
JP2838866B2 (ja) * | 1995-05-10 | 1998-12-16 | 株式会社同仁化学研究所 | 酸化発色分析における還元物質の活性抑制方法 |
US5587198A (en) * | 1995-05-31 | 1996-12-24 | Fuisz Technologies Ltd. | Positive hydration method of preparing confectionery and product therefrom |
US5989845A (en) * | 1996-04-05 | 1999-11-23 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
US5776719A (en) * | 1997-07-07 | 1998-07-07 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
US6040151A (en) * | 1998-03-10 | 2000-03-21 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
US5824491A (en) * | 1996-05-17 | 1998-10-20 | Mercury Diagnostics, Inc. | Dry reagent test strip comprising benzidine dye precursor and antipyrine compound |
ATE227844T1 (de) | 1997-02-06 | 2002-11-15 | Therasense Inc | Kleinvolumiger sensor zur in-vitro bestimmung |
US6134461A (en) | 1998-03-04 | 2000-10-17 | E. Heller & Company | Electrochemical analyte |
US6103033A (en) | 1998-03-04 | 2000-08-15 | Therasense, Inc. | Process for producing an electrochemical biosensor |
US8688188B2 (en) | 1998-04-30 | 2014-04-01 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
US6949816B2 (en) | 2003-04-21 | 2005-09-27 | Motorola, Inc. | Semiconductor component having first surface area for electrically coupling to a semiconductor chip and second surface area for electrically coupling to a substrate, and method of manufacturing same |
US6175752B1 (en) | 1998-04-30 | 2001-01-16 | Therasense, Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
US9066695B2 (en) | 1998-04-30 | 2015-06-30 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
US8480580B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-07-09 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
US8465425B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-06-18 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
US8974386B2 (en) | 1998-04-30 | 2015-03-10 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
US8346337B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-01-01 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
US6251260B1 (en) | 1998-08-24 | 2001-06-26 | Therasense, Inc. | Potentiometric sensors for analytic determination |
US6591125B1 (en) | 2000-06-27 | 2003-07-08 | Therasense, Inc. | Small volume in vitro analyte sensor with diffusible or non-leachable redox mediator |
US6338790B1 (en) | 1998-10-08 | 2002-01-15 | Therasense, Inc. | Small volume in vitro analyte sensor with diffusible or non-leachable redox mediator |
EP2322645A1 (de) | 1999-06-18 | 2011-05-18 | Abbott Diabetes Care Inc. | Stofftransportbegrenzter in Vivo-sensor |
US6616819B1 (en) | 1999-11-04 | 2003-09-09 | Therasense, Inc. | Small volume in vitro analyte sensor and methods |
US6560471B1 (en) | 2001-01-02 | 2003-05-06 | Therasense, Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
EP1397068A2 (de) | 2001-04-02 | 2004-03-17 | Therasense, Inc. | Gerät und verfahren zur blutzuckerverfolgung |
US7381184B2 (en) | 2002-11-05 | 2008-06-03 | Abbott Diabetes Care Inc. | Sensor inserter assembly |
AU2003295600A1 (en) * | 2002-11-14 | 2004-06-15 | Dharmacon, Inc. | Functional and hyperfunctional sirna |
EP1578262A4 (de) | 2002-12-31 | 2007-12-05 | Therasense Inc | Kontinuierliches blutzuckerüberwachungssystem und anwendungsverfahren |
US8066639B2 (en) | 2003-06-10 | 2011-11-29 | Abbott Diabetes Care Inc. | Glucose measuring device for use in personal area network |
USD902408S1 (en) | 2003-11-05 | 2020-11-17 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte sensor control unit |
WO2005089103A2 (en) | 2004-02-17 | 2005-09-29 | Therasense, Inc. | Method and system for providing data communication in continuous glucose monitoring and management system |
US8545403B2 (en) | 2005-12-28 | 2013-10-01 | Abbott Diabetes Care Inc. | Medical device insertion |
US9351669B2 (en) | 2009-09-30 | 2016-05-31 | Abbott Diabetes Care Inc. | Interconnect for on-body analyte monitoring device |
US8571624B2 (en) | 2004-12-29 | 2013-10-29 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for mounting a data transmission device in a communication system |
US9572534B2 (en) | 2010-06-29 | 2017-02-21 | Abbott Diabetes Care Inc. | Devices, systems and methods for on-skin or on-body mounting of medical devices |
US10226207B2 (en) | 2004-12-29 | 2019-03-12 | Abbott Diabetes Care Inc. | Sensor inserter having introducer |
US9398882B2 (en) | 2005-09-30 | 2016-07-26 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for providing analyte sensor and data processing device |
US9788771B2 (en) | 2006-10-23 | 2017-10-17 | Abbott Diabetes Care Inc. | Variable speed sensor insertion devices and methods of use |
US7697967B2 (en) | 2005-12-28 | 2010-04-13 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for providing analyte sensor insertion |
US7731657B2 (en) | 2005-08-30 | 2010-06-08 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte sensor introducer and methods of use |
US9743862B2 (en) | 2011-03-31 | 2017-08-29 | Abbott Diabetes Care Inc. | Systems and methods for transcutaneously implanting medical devices |
US8613703B2 (en) | 2007-05-31 | 2013-12-24 | Abbott Diabetes Care Inc. | Insertion devices and methods |
US7883464B2 (en) | 2005-09-30 | 2011-02-08 | Abbott Diabetes Care Inc. | Integrated transmitter unit and sensor introducer mechanism and methods of use |
US8512243B2 (en) | 2005-09-30 | 2013-08-20 | Abbott Diabetes Care Inc. | Integrated introducer and transmitter assembly and methods of use |
US20090105569A1 (en) | 2006-04-28 | 2009-04-23 | Abbott Diabetes Care, Inc. | Introducer Assembly and Methods of Use |
US9259175B2 (en) | 2006-10-23 | 2016-02-16 | Abbott Diabetes Care, Inc. | Flexible patch for fluid delivery and monitoring body analytes |
US8333714B2 (en) | 2006-09-10 | 2012-12-18 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and system for providing an integrated analyte sensor insertion device and data processing unit |
US8112240B2 (en) | 2005-04-29 | 2012-02-07 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for providing leak detection in data monitoring and management systems |
US9521968B2 (en) | 2005-09-30 | 2016-12-20 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte sensor retention mechanism and methods of use |
US7766829B2 (en) | 2005-11-04 | 2010-08-03 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and system for providing basal profile modification in analyte monitoring and management systems |
US11298058B2 (en) | 2005-12-28 | 2022-04-12 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for providing analyte sensor insertion |
US7885698B2 (en) | 2006-02-28 | 2011-02-08 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and system for providing continuous calibration of implantable analyte sensors |
US7620438B2 (en) | 2006-03-31 | 2009-11-17 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and system for powering an electronic device |
US8226891B2 (en) | 2006-03-31 | 2012-07-24 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring devices and methods therefor |
WO2007143225A2 (en) | 2006-06-07 | 2007-12-13 | Abbott Diabetes Care, Inc. | Analyte monitoring system and method |
US8930203B2 (en) | 2007-02-18 | 2015-01-06 | Abbott Diabetes Care Inc. | Multi-function analyte test device and methods therefor |
US8732188B2 (en) | 2007-02-18 | 2014-05-20 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and system for providing contextual based medication dosage determination |
US8123686B2 (en) | 2007-03-01 | 2012-02-28 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for providing rolling data in communication systems |
US8456301B2 (en) | 2007-05-08 | 2013-06-04 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring system and methods |
US8461985B2 (en) | 2007-05-08 | 2013-06-11 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring system and methods |
US8665091B2 (en) | 2007-05-08 | 2014-03-04 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and device for determining elapsed sensor life |
US7928850B2 (en) | 2007-05-08 | 2011-04-19 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring system and methods |
JP5216968B2 (ja) * | 2007-08-07 | 2013-06-19 | 株式会社シノテスト | テトラゾリウム化合物を色原体として用いる試料中の測定対象物質の測定方法及び測定試薬、非特異的発色を抑制する方法、並びに非特異的発色抑制剤 |
US8103456B2 (en) | 2009-01-29 | 2012-01-24 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and device for early signal attenuation detection using blood glucose measurements |
US20100198034A1 (en) | 2009-02-03 | 2010-08-05 | Abbott Diabetes Care Inc. | Compact On-Body Physiological Monitoring Devices and Methods Thereof |
US20100213057A1 (en) | 2009-02-26 | 2010-08-26 | Benjamin Feldman | Self-Powered Analyte Sensor |
US9226701B2 (en) | 2009-04-28 | 2016-01-05 | Abbott Diabetes Care Inc. | Error detection in critical repeating data in a wireless sensor system |
EP2473099A4 (de) | 2009-08-31 | 2015-01-14 | Abbott Diabetes Care Inc | Analytüberwachungssystem und -verfahren zur leistungs- und rauschverwaltung |
WO2011026147A1 (en) | 2009-08-31 | 2011-03-03 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte signal processing device and methods |
WO2011041469A1 (en) | 2009-09-29 | 2011-04-07 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for providing notification function in analyte monitoring systems |
USD924406S1 (en) | 2010-02-01 | 2021-07-06 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte sensor inserter |
US9265453B2 (en) | 2010-03-24 | 2016-02-23 | Abbott Diabetes Care Inc. | Medical device inserters and processes of inserting and using medical devices |
US11064921B2 (en) | 2010-06-29 | 2021-07-20 | Abbott Diabetes Care Inc. | Devices, systems and methods for on-skin or on-body mounting of medical devices |
JP6443802B2 (ja) | 2011-11-07 | 2018-12-26 | アボット ダイアベティス ケア インコーポレイテッドAbbott Diabetes Care Inc. | 分析物モニタリング装置および方法 |
ES2967952T3 (es) | 2011-12-11 | 2024-05-06 | Abbott Diabetes Care Inc | Dispositivos sensores de analitos |
AU2016260547B2 (en) | 2015-05-14 | 2020-09-03 | Abbott Diabetes Care Inc. | Compact medical device inserters and related systems and methods |
US10213139B2 (en) | 2015-05-14 | 2019-02-26 | Abbott Diabetes Care Inc. | Systems, devices, and methods for assembling an applicator and sensor control device |
CA3050721A1 (en) | 2017-01-23 | 2018-07-26 | Abbott Diabetes Care Inc. | Systems, devices and methods for analyte sensor insertion |
CN108872220B (zh) * | 2018-07-11 | 2020-03-24 | 深圳华创生物医药科技有限公司 | 一种无汞对羟基苯丙氨酸检测试剂及制备方法和应用 |
JP6703722B1 (ja) * | 2019-10-16 | 2020-06-03 | 株式会社エンザイム・センサ | L−グルタミンの測定方法、及びそのためのキット |
US11878381B2 (en) | 2020-08-06 | 2024-01-23 | Mate Precision Technologies Inc. | Tooling base assembly |
US11759914B2 (en) | 2020-08-06 | 2023-09-19 | Mate Precision Technologies Inc. | Vise assembly |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3411887A (en) * | 1964-06-15 | 1968-11-19 | Miles Lab | Diagnostic composition |
US3862885A (en) * | 1970-11-25 | 1975-01-28 | Ono Pharmaceutical Co | Determination of uric acid in blood with uricase |
DE2532918A1 (de) * | 1974-07-23 | 1976-02-05 | Eastman Kodak Co | Integrales analytisches element fuer die analyse von fluessigkeiten |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AT308049B (de) * | 1970-08-28 | 1973-06-25 | Boehringer Mannheim Gmbh | Reagens zur Glucosebestimmung |
US3791988A (en) * | 1972-03-23 | 1974-02-12 | Hoffmann La Roche | Diagnostic test for glucose |
US3992158A (en) * | 1973-08-16 | 1976-11-16 | Eastman Kodak Company | Integral analytical element |
-
1976
- 1976-06-09 DE DE2625834A patent/DE2625834B2/de active Granted
-
1977
- 1977-04-04 AT AT234077A patent/AT354640B/de not_active IP Right Cessation
- 1977-04-13 IE IE764/77A patent/IE45546B1/en not_active IP Right Cessation
- 1977-04-13 CA CA276,113A patent/CA1084393A/en not_active Expired
- 1977-04-25 AR AR267337A patent/AR212763A1/es active
- 1977-04-27 NL NLAANVRAGE7704591,A patent/NL169503C/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-04-28 FI FI771356A patent/FI60719C/fi not_active IP Right Cessation
- 1977-04-28 US US05/792,073 patent/US4168205A/en not_active Expired - Lifetime
- 1977-04-29 GB GB17993/77A patent/GB1519134A/en not_active Expired
- 1977-05-03 IT IT77@@A patent/IT1075527B/it active
- 1977-05-05 YU YU01144/77A patent/YU114477A/xx unknown
- 1977-05-06 CS CS773018A patent/CS207453B2/cs unknown
- 1977-05-06 CS CS781874A patent/CS235068B2/cs unknown
- 1977-05-06 PL PL1977217830A patent/PL114343B1/pl unknown
- 1977-05-06 PL PL1977197927A patent/PL109224B1/pl unknown
- 1977-05-06 NO NO771599A patent/NO148340C/no unknown
- 1977-05-06 CH CH571277A patent/CH633887A5/de not_active IP Right Cessation
- 1977-05-06 HU HU77BO00001667A patent/HU172931B/hu unknown
- 1977-05-06 IL IL52047A patent/IL52047A/xx unknown
- 1977-05-06 ES ES458544A patent/ES458544A1/es not_active Expired
- 1977-05-06 SE SE7705303A patent/SE426601B/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-05-06 JP JP5195377A patent/JPS52150692A/ja active Granted
- 1977-05-06 SU SU772481956A patent/SU797592A3/ru active
- 1977-05-06 ZA ZA00772716A patent/ZA772716B/xx unknown
- 1977-05-09 BE BE177392A patent/BE854407A/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-05-09 DD DD7700198825A patent/DD130178A5/de unknown
- 1977-05-09 LU LU77290A patent/LU77290A1/xx unknown
- 1977-05-09 DK DK202677A patent/DK144949C/da not_active IP Right Cessation
- 1977-05-09 BR BR7703008A patent/BR7703008A/pt unknown
- 1977-05-09 AU AU25021/77A patent/AU500988B2/en not_active Expired
- 1977-05-09 FR FR7714090A patent/FR2354561A1/fr active Granted
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3411887A (en) * | 1964-06-15 | 1968-11-19 | Miles Lab | Diagnostic composition |
US3862885A (en) * | 1970-11-25 | 1975-01-28 | Ono Pharmaceutical Co | Determination of uric acid in blood with uricase |
DE2532918A1 (de) * | 1974-07-23 | 1976-02-05 | Eastman Kodak Co | Integrales analytisches element fuer die analyse von fluessigkeiten |
Non-Patent Citations (12)
Title |
---|
Advances in Chemistry Series 200, 1982, Top 10 Ascorbat Oxidase : Molekular Properties and Catalytic Activity, S. 224-248 |
Biochem. 4, 1965, S. 1362-1370 |
Biochimica et Biophysica Acta 56, 1962, S. 427- 439 * |
Chemical Abstracts, Bd. 79, 1973, S. 172, Nr. 1823p * |
DAWSON, C.R. und TOKUYAMA, K.: in Annals New York Academy of Sciences, Bd. 92, 1961, S. 213 |
DAWSON, C.R.: Ascorbate Oxidase, A Review, in The Biochemistry of Copper, Proceedings of the Symposium on Copper in Biological Systems Held at Arden House, Harriman, New York, Sept. 8-10, 1965, Academic Press, New York and London 1966, S. 305-337 * |
DIXON: Enzymes, 2. Aufl., Verlag Academic Press, Inc. New York, 1964, S. 373-375 * |
LEE, M.H. und DAWSON, C.R.: in The Journal of Biological Chemistry, 1973, Bd. 248, Nr. 19, S. 6596-6602 * |
LEVETT-JANISON, P.L. und NELSON, J.M.: in JACS 62, 1940, S. 1409-1412 |
PENTON, Z.G. und DAWSON, C.R.: On the Apoenzyme of Ascorbat Oxidase in T.E. King u.a., Heraus- geber, Oxidases and Related Redox Systems, 1965, John Wiley & Sons, Inc., New York, S. 222-239 * |
STARK, G.R., DAWSON, C.R.: in P.D. Boyer, H. * |
STARK,G.R., DAWSON,C.R.: in P.D.Boyer, H. Lardy und K.Myrbäck, Herausgeber, The Enzymes, Bd. VIII, Academic Press Inc., New York, 1963, S.297-311 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104131765A (zh) * | 2014-07-22 | 2014-11-05 | 哈尔滨盛世华林科技有限公司 | 一种门底自动密封条 |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE2625834A1 (de) | Verfahren zur bestimmung von substraten oder enzymaktivitaeten | |
DE3012368C2 (de) | Verfahren und diagnostische Mittel zum Nachweis von Redox-Reaktionen | |
EP0186134B1 (de) | Mittel zur Verbesserung des Nachweises Wasserstoffperoxid liefernder Oxidase-Reaktionen und seine Verwendung | |
EP0354441B1 (de) | Verfahren zur kolorimetrischen Bestimmung eines Analyten mittels enzymatischer Oxidation | |
DE1598133C3 (de) | ||
EP0068356B1 (de) | Mittel und Verfahren zum Nachweis von Wasserstoffperoxid oder Peroxidasen | |
EP0016947A1 (de) | Verfahren und Reagenz zur enzymatischen Bestimmung von Enzymsubstraten | |
EP0054146B1 (de) | Nachweis von NAD (P) H oder Salicylat | |
EP0239931B1 (de) | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Substraten oder Enzymaktivitäten | |
DE2653537C3 (de) | Verfahren und Mittel zur Bestimmung von Hydroperoxiden | |
DE3408062A1 (de) | Verfahren zur bestimmung von ss-hydroxibuttersaeure und eine zusammensetzung zur bestimmung von ss-hydroxibuttersaeure | |
EP0068438B1 (de) | Mittel und Verfahren zum Nachweis von Wasserstoffperoxid | |
US4910134A (en) | Ascorbic acid decomposing method | |
DE2512586B2 (de) | Mehrschichtiges analytisches element fuer die quantitative bestimmung des cholesteringehaltes von fluessigkeiten | |
EP0117550A2 (de) | Pyruvatoxidase | |
DE2737288C2 (de) | Verfahren zur Bestimmung des freien und/oder in Form von Triglyceriden vorliegenden gebundenen Glycerins in wäßrigen Flüssigkeiten sowie Bestimmungsreagenz für die Durchführung des Verfahrens und Bestimmungsreagenz für die Bestimmung von Adenosintriphosphat | |
CH646792A5 (de) | Testvorrichtung fuer die bestimmung von harnsaeure. | |
EP0100413B1 (de) | Verfahren und analytische Mittel zur Aktivitätsbestimmung von Glutamat-Oxalacetat-Transaminase | |
EP0089606A2 (de) | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Glycerin | |
DE2247608C3 (de) | Mittel und Verfahren zur enzymatischen Bestimmung von Glucose | |
DE2450726A1 (de) | Enzymatisches verfahren zur bestimmung der wasserstoffperoxid-konzentration | |
DE3302360A1 (de) | Reagenszusammensetzung zur bestimmung von p-hydroxybenzoesaeure | |
DE3114935A1 (de) | "verfahren zur bestimmung von wasserstoffperoxid" | |
DE2247608A1 (de) | Mittel und verfahren zur enzymatischen bestimmung von glucose |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
OD | Request for examination | ||
C3 | Grant after two publication steps (3rd publication) |