FI60719B - Foerfarande foer bestaemning av substrat eller enzymaktiviteter - Google Patents
Foerfarande foer bestaemning av substrat eller enzymaktiviteter Download PDFInfo
- Publication number
- FI60719B FI60719B FI771356A FI771356A FI60719B FI 60719 B FI60719 B FI 60719B FI 771356 A FI771356 A FI 771356A FI 771356 A FI771356 A FI 771356A FI 60719 B FI60719 B FI 60719B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- ascorbate
- oxidase
- determination
- ascorbate oxidase
- glucose
- Prior art date
Links
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 18
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims description 9
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 91
- 108010024957 Ascorbate Oxidase Proteins 0.000 claims description 50
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims description 46
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims description 46
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 26
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims description 25
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 claims description 22
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 21
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 18
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 18
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 16
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 16
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 13
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 13
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 claims description 9
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 claims description 9
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 claims description 9
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 8
- 238000006479 redox reaction Methods 0.000 claims description 8
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 claims description 7
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 5
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 claims description 5
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 5
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 claims description 5
- HFZWRUODUSTPEG-UHFFFAOYSA-N 2,4-dichlorophenol Chemical compound OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl HFZWRUODUSTPEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- JRBJSXQPQWSCCF-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dimethoxybenzidine Chemical compound C1=C(N)C(OC)=CC(C=2C=C(OC)C(N)=CC=2)=C1 JRBJSXQPQWSCCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 240000001980 Cucurbita pepo Species 0.000 claims description 2
- 235000009852 Cucurbita pepo Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000219130 Cucurbita pepo subsp. pepo Species 0.000 claims description 2
- 235000003954 Cucurbita pepo var melopepo Nutrition 0.000 claims description 2
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 claims description 2
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 claims description 2
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 claims 1
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 claims 1
- 235000009849 Cucumis sativus Nutrition 0.000 claims 1
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 claims 1
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 claims 1
- XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O NADP(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O 0.000 claims 1
- 239000012434 nucleophilic reagent Substances 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 29
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 10
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 8
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000030523 Catechol oxidase Human genes 0.000 description 4
- 108010031396 Catechol oxidase Proteins 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 108010029541 Laccase Proteins 0.000 description 4
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 4
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 3
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- IEQAICDLOKRSRL-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-dodecoxyethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO IEQAICDLOKRSRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- SBJKKFFYIZUCET-JLAZNSOCSA-N Dehydro-L-ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(=O)C1=O SBJKKFFYIZUCET-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- SBJKKFFYIZUCET-UHFFFAOYSA-N Dehydroascorbic acid Natural products OCC(O)C1OC(=O)C(=O)C1=O SBJKKFFYIZUCET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 2
- POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N allantoin Chemical compound NC(=O)NC1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 235000020960 dehydroascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011615 dehydroascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 150000002432 hydroperoxides Chemical class 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N phenanthridine Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3C=NC2=C1 RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- OBHRVMZSZIDDEK-UHFFFAOYSA-N urobilinogen Chemical compound CCC1=C(C)C(=O)NC1CC1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(CC3C(=C(CC)C(=O)N3)C)N2)CCC(O)=O)N1 OBHRVMZSZIDDEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CMCBDXRRFKYBDG-UHFFFAOYSA-N 1-dodecoxydodecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCCCCCCCCCCC CMCBDXRRFKYBDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MNCHAXQEWRVZRB-UHFFFAOYSA-N 1-sulfonyl-1,3-benzothiazole 1-oxide Chemical compound S(=O)(=O)=S1(C=NC2=C1C=CC=C2)=O MNCHAXQEWRVZRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JGBAASVQPMTVHO-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydroperoxy-2,5-dimethylhexane Chemical compound OOC(C)(C)CCC(C)(C)OO JGBAASVQPMTVHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JJMQRJKPLUACSO-UHFFFAOYSA-N 3-(4-iodophenyl)-2-(4-nitrophenyl)-5-phenyl-1,3-dihydrotetrazol-3-ium;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1N(C=2C=CC(I)=CC=2)[NH2+]C(C=2C=CC=CC=2)=N1 JJMQRJKPLUACSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDOUZKKFHVEKRI-UHFFFAOYSA-N 3-bromo-n-[(prop-2-enoylamino)methyl]propanamide Chemical compound BrCCC(=O)NCNC(=O)C=C CDOUZKKFHVEKRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WXMQHPKQCPCDQO-UHFFFAOYSA-N 4-dimorpholin-4-ylphosphorylmorpholine Chemical compound C1COCCN1P(N1CCOCC1)(=O)N1CCOCC1 WXMQHPKQCPCDQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PPMGNFFGNNRYQC-UHFFFAOYSA-N 9h-carbazole;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C1=CC=C2C3=CC=CC=C3NC2=C1 PPMGNFFGNNRYQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N Allantoin Natural products NC(=O)N[C@@H]1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N 0.000 description 1
- 101000950981 Bacillus subtilis (strain 168) Catabolic NAD-specific glutamate dehydrogenase RocG Proteins 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 108010089254 Cholesterol oxidase Proteins 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N D-Glucose 6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000028526 Dihydrolipoamide Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010028127 Dihydrolipoamide Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N Glc6P Natural products OP(=O)(O)OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016901 Glutamate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002211 L-ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 102000002247 NADPH Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010014870 NADPH Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000012445 acidic reagent Substances 0.000 description 1
- 229960000458 allantoin Drugs 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 235000019329 dioctyl sodium sulphosuccinate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015192 vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- -1 γ-dimethylaminopropyl Chemical group 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
F5SF*1 [Bl (111KUULUTUSJULKAISU ,λπ. Q
Jgljft l J (11) UTLÄGGNINGSSKRIFT OU /1 9 C (45) Patentti myönnetty 10 03 1932 Patent ecddelat T V (51) K».ik?/int.ci.3 C 12 Q 1/26 SUOMI—FINLAND (*) Pat«nttlhak*mu« — Patentanaöknlnj 771356 (22) Hakamitpilvl — An*0knlnf*4ag 28. 0U .77 ' ' (23) Alkupilvi — Glltighatadag 28.OU.77 (41) Tullut |ulklaakal — Bllvlt offtntllg 10.12*77
Patentti- ja rekisterihallitus .... ..... .. , ., ,,,., _ . , (44) Nlhtlvlkalpanon μ kuuLJulkalaun pvm. —
Patent- OCh registerstyrelsen Antttktn utltgd och utl.tkriften publtcarad 30.11.8l (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus—Bugird prlorltet 09.06.76
Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) P 262583U.U
(71) Boehringer Mannheim GmbH., Sandhofer Strasse 112-132, D-6800 Mannheim-Waldhof, Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (72) Josef Danninger, Gräfelfing, Ulfert Deneke, Peissenberg, Gunter Lang, Tutzing, Gerhard Michal, Tutzing, Peter Röschlau, Seeshaupt, Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (7^) Berggren Oy Ab (5U) Menetelmä, jonka avulla voidaan määrittää substraatteja tai entsyymien aktiivisuutta - Förfarande för bestämning av substrat eller enzymaktivi- teter
Keksintö koskee menetelmää, jonka avulla voidaan määrittää substraatteja tai entsyymien aktiivisuutta, kun käytetään redoks-reaktiota mittausreaktiona, siten että askorbiinihappo ei häiritse suoritettavaa määritystä.
Kliinisessä ja farmaseuttisessa kemiassa, biokemiassa ja elintarvikekemiassa ovat redoks-reaktiot (eli hapetus-pelkistys-reaktiot) entsyymi- tai substraatti-konsentraatioiden määrityksissä hyvin tärkeitä. Näiden reaktioiden tulkintaan voidaan käyttää fotometrisiä mittauksia. Jos testisysteemissä on siihen osallistuvien redoks-aineiden lisäksi vielä muita redusoivia aineita, on kuitenkin otettava huomioon häiriöiden mahdollisuus. Erikoisen usein esiintyy koemateriaalissa askorbiinihappoa. Se aiheuttaa voimakkaana pelkistävänä aineena häiriöitä, mikäli tutkimuksen kohteena ovat farmaseuttiset aineet tai fysiologiset nesteet, kuten seerumi tai virtsa, askorbiinihappoa sisältävät kasvismehut tai muut elintarvikkeet, jotka sisältävät askorbiinihappoa tai johon on lisätty sitä. Siten on esim. tunnettua, että askorbiinihappo häiritsee seuraavia reaktioita: 2 60719 A Reaktiot, joissa annetaan HjC^n ja vedyn luovuttajan reagoida peroksidaasin (POD) kanssa, häiriytyvät reaktiosta askorbiinihappo + H2O2 —D > dehydroaskorbiinihappo + B Reaktiot, joissa pelkistetään tetratsoliumsuoloja pelkistys-aineiden avulla formatsaaneiksi, häiriytyvät reaktiosta askorbiinihappo + tetratsoliumsuola -formatsaani + dehydro askorbiinihappo C Reaktiot, joissa fenolit liittyvät nukleofiilisiin reagens-seihin hapettavasti, häiriytyvät sen vuoksi, että askorbiinihappo aiheuttaa jostakin vielä selittämättömästä syystä sivu-reaktioita, niin että syntyy epäyhtenäisiä liityntätuotteita, jotka poikkeavat absorptio-ominaisuuksiensa puolesta normaalissa ja UV-valossa normaalisti muodostuneista liitäntätuotteista.
Askorbiinihapon poistamiseen koemateriaalista eivät yleensä sovellu tavalliset oksidointimenetelmät. Oksidoivat aineet vaikuttavat myös substraatteihin ja entsyymeihin ja tuhoavat niitä. Niiden reduktiotuotteet, useimmiten kaksi- tai kolmiarvoiset metalli-ionit, inhiboivat usein entsyymejä, joita käytetään indikaattorireaktioihin. Askorbiinihapon hävittäminen hapella vaatii voimakkaasti alkalista väliainetta, esimerkiksi 25-prosenttista NaOHrta. Tämä tuhoaa myös substraatteja ja entsyymejä .
Keksinnön tarkoituksena on saada aikaan sellainen menetelmä, jonka avulla voidaan määrittää substraatteja tai entsyymien aktiivisuutta siten, että askorbiinihappo ei häiritse suoritettavaa määritystä käytettäessä redoks-reaktiota mittareaktiona, esimerkiksi määrityksissä, joissa käytetään HjC^sta muodostavaa entsyymiä, tetrasoliumsuolaa tai fenolia, joka voi liittyä nuk-leofiilisten reagenssien kanssa oksidoivasti, ja keksinnön mukainen menetelmä on tunnettu siitä, että määritys suoritetaan pH-arvossa 4,0-8,5, ja että määrityksessä on läsnä 0,002-100 U askorbaattioksidaasia/ml testiliuosta.
Askorbaattioksidaasi katalysoi reaktiota: askorbiinihappo + 1/2 O2--► dehydroaskorbiini happo + H2O.
3 60719
Kirjallisuudessa olevien, askorbiinihappo-oksidaasia koskevien tietojen perusteella oli odotettavissa, ettei tätä entsyymiä voida käyttää keksinnön mukaiseen tarkoitukseen. Kaikki tähän asti käytetyt askorbaattioksidaasipreparaatit synnyttävät nimittäin sivureaktiossa H202:ta. Tällöin tapahtuu askorbaatti-oksidaasin hyvin nopea inaktivoituminen. Tämä koskee myös kaikkein puhtaimpiakin preparaatteja, joissa ei enää voida osoittaa minkäänlaisia epäpuhtauksia ultrasentrifugaalisessa eikä elektro-foreettisessa analyysissä (Biochem. _4, 1362-1370 (1965)) . Askor-baattioksidaasin inaktivoitumisen katsotaan johtuvan ^(^-muodostuksesta. (Biochemical Copper Procedings Symphosium Harriman New York 1965, sivut 305-337, Biochem. Biophys. Acta 5j), 427-439 (1962)). Jälkimmäisten tutkijoiden laskelmien mukaan voi 1 U
askorbaattioksidaasia liuoksessa, jossa on 1 mmol/1 askorbiini- _2 happoa synnyttää 0,7 x 10 mmol/1 H2°2:ta* Tällaisia askorbaat-tikonsentraatioita on koeliuoksissa usein läsnä. Muodostunut H2C>2 on käytettävissä ilman muuta entsymaattisiin reaktioihin, kuten katalaasin esimerkissä osoitettiin.
Systeemissä vetydonaattori + H2°2 * väriaine + 2 H20, jota käytetään H2C>2:n fotometriseen osoittamiseen, se aiheuttaa molaarisen ekstinktiovakion ollessa noin 20 cm^/yU mol ekstink-tioeron 0,14. Koska normaaleissa fotometrisissä reaktioissa mitta-alue on noin 0,1-1,00, aiheutuu tässä liian suuri virhe. Samalla tavoin häiriytyvät reaktiot, joissa käytetään H2C>2:n asemasta orgaanisia hydroperoksideja ja POD:n asemasta hemoglobiinia tai muita hapetuskatalysaattoreja.
Mutta paitsi tätä H2C>2:n aiheuttamaa virhettä, tunnetaan edellä viimeksi mainitusta kirjallisuuskohdasta, että askorbiinihapon reaktio pysähtyy jo kauan ennen sen täydellistä poistamista.
Tämän on täytynyt olla erikoisen hankalaa kaikissa niissä redoks-reaktioissa, joissa syntyy H202:ta, koska tämän H202:n täytyy toisaalta vielä nopeuttaa entsyymin inaktivoitumista ja toisaalta H202:n uudelleen muodostuminen askorbaattioksidaasin kautta johtaa etukäteen vaikeasti ennustettaviin ilmiöihin. Sen vuoksi on erittäin yllättävää, että odotusten vastaisesti on mahdollista poistaa täydelleen askorbaatin läsnäolosta aiheutuvat häiriöt li- 4 60719 säämällä askorbaattioksidaasia ilman että esiintyisi toisia häiriöitä, jotka taas tekisivät tyhjäksi askorbaatin poistamisesta koituvan edun.
Keksinnön mukaista menetelmää käytetään etupäässä entsymaattisissa reaktioissa, varsinkin sellaisissa, joissa muodostuu f^C^Jta, siis reaktioissa, joiden katalysaattoreina käytetään oksidaaseja kuten glukoosioksidaasia, urikaasia, kolesteriinioksidaasia yms., edelleen reaktioissa, joissa pelkistetään tetratsolium-suoloja ja reaktioissa, joissa fenolit liittyvät oksidoivasti nukleofiilisiin reagoiviin aineisiin. Käytettävä askorbaattioksidaasimäärä riippuu odotettavissa olevasta askorbiinihapon määrästä kokeessa. Yleensä lisätään 0,002 - 100 U askorbaattioksidaasia/ml, etupäässä 0,01 - 30 U/ ml testiliuosta kohti. Reaktion pH-arvo mukautetaan ensi sijassa siihen osallistuvan tai osallistuvien entsyymien tarvitseman pH-arvon mukaan. Keksinnön mukaisessa menetelmässä ovat pH-arvot välillä 4,0-8,5 osoittautuneet sopiviksi. Keksinnössä käytetään edullisiitmin askorbaattiaksi-daasia, joka on saatu zucchini-nimisistä pikku kurkuista (Cucurbita pepo medul-losa) . Mutta myös muunlaista alkuperää olevaa askorbaattioksidaasia voidaan käyttää.
Keksinnön kohteena on myös reagenssi, jonka avulla voidaan määrätä substraatteja tai entsyymien aktiivisuutta, käyttäen redoks-reakti-ota mittareaktiona, ja reagenssi on tunnettu siitä, että se sisältää tavanomaisten määritysreagenssien lisäksi askorbaattioksidaasia.
Parhaana pidetyt tämän kaltaiset reagenssit sisältävät askorbaatti-oksidaasin lisäksi, mikäli glukoosi on määritettävä substraatti, pe-roksidaasia, glukoosioksidaasia, o-dianisidiinia tai atsino-di-3-etyylibentsyylitiatsoliinisulfonaatti-(6):tta yhdessä puskurin kanssa, tai heksokinaasia, glukoosi-6-fosfaattidehydrogenaasia, diafo-raasia, NADP:tä, tetratsoliumsuolaa kuten INT:ä 3(4-jodifenyyli)-2-(4-nitrofenyyli)-5-fenyyli-2H-tetrasoliumkloridia ja puskuria. Kun virtsahappo on määritettävä substraatti, muodostuu reagenssi etupäässä peroksidaasista, urikaasista, fenolista kuten esimerkiksi 2,4-di-kloori-fenolista, aminoantipyriinistä ja puskurista. Kun kyseessä on glutamaattimääritys, muodostuu reagenssi edullisimmin glutamaattidehydrogenaasista, diaforaasista, NAD:stä, INT:stä ja puskurista. Tyrosiinia varten pidetään parhaana tyrosinaasia, 3-metyyli-6-kaliumsulfonyyli-bentstiatsolonihydratson-(2):a, pyrokate-kiinimääritykseen difenolioksidaasia, 3-metyyli-6-kaliumsulfonyyli-bentstiatsolonihydratson-(2) :a, kulloinkin puskurin kanssa. Kaikki edellä mainitut substraattien määrityksissä käytetyt reagenssit ovat tunnettuja. Niiden 5 60719 tilalla voidaan kuitenkin käyttää myös muita tunnettuja, substraattien tai entsyymien määrityksissä tunnettuja reagenssi-systeemejä.
Keksinnön mukaista reagenssia käytetään erityisesti pikadiagnoo-sivälineissä. Tällaisissa pikadiagnostisissa välineissä ovat erilaiset, menetelmän suoritukseen tarvittavat reagenssit tavallisesti joko impregnoituina imukykyiseen kantajaan tai ne on sivelty jonkin sopivan sideaineen kanssa kantajafolion päälle. Parhaana pidetty toteutusmuoto on tällöin se, että askorbaattioksidaasi lisätään muiden reagenssien seokseen, joka impregnoidaan tämän jälkeen imukykyiselle kantajalle. Tällä tavoin saadaan esimerkiksi glukoosin osoittamiseen virtsassa testipapereita, joissa ei ole käytännöllisesti katsoen lainkaan askorbiinihapon häiritsevää vaikutusta (esimerkiksi saksalaisen hakemusjulkaisun 23 38 932 mukaan, veren osoittamiseen virtsassa (esimerkiksi saksalaisen hakemuksen 24 60 903-8 tai saksalaisen patentin 22 35 152 mukaan) ja veren osoittamiseeen ulosteista. Voidaan pitää erittäin yllättävänä, että askorbaattioksidaasi pysyy tehokkaana ja kestää varastointia niissä testipapereissa, joilla osoitetaan veri virtsassa . Nämä testi-paperit sisältävät nimittäin ylimääriä orgaanisia hydroperoksideja, joiden voisi odottaa inaktivoivan askorbaattioksidaasia samalla tavoin kuin H202·
Mutta askorbaattioksidaasi voidaan sivellä myös erilliselle kantajalle, joka yhdistetään muut reagenssit sisältävään kantajaan, esimerkiksi pannaan sen päälle, liimataan siihen kiinni tai suljetaan sen kanssa yhteen. Tässä tapauksessa soveltuu askorbaattioksidaasin kantajaksi erikoisesti ns. vesiliukoinen paperi (esimerkiksi saksalaisen hakemusjulkaisun 24 36 598 mukainen), jonka ansiosta värireaktiot näkyvät erikoisen hyvin toiset reagenssit sisältävällä kantajapaperilla. Tämä toteutusmuoto on erityisesti silloin edullinen, kun reagenssiyhdistelmässä on mukana sellaisia aineita, jotka eivät sovellu yhteen askorbaattioksidaasin kanssa, esimerkiksi voimakkaasti happamia reagensseja, jollaisia käytetään menetelmissä urobilinogeenin, bilirubiinin ja nitriitin määräämiseksi.
Edellä olevissa suoritustavoissa käytetään 5000 Ue.n saakka askorbaattioksidaasia ml:aa kohti impregnoimisliuosta, etupäässä 2000 U saakka/ml impregnoimisliuosta reagenssien valmistuksessa. Vähempi kuin 1 U/ml ei yleensä takaa haluttua efektiä.
6 60719
Voidaan tehdä myös siten, että impregnoidaan kantajamateriaalin erillään olevia alueita askorbaattioksidaasilla ja muilla testirea-gensseilla. Tällöin on tarkoituksenmukaista, että kantaja joutuu tutkittavan liuoksen kanssa kosketuksiin siten, että liuos koskettaa ensiksi askorbaattioksidaasi-pitoista aluetta ja imeytyy sieltä siihen alueeseen, joka sisältää muut testireagenssit.
Erään toisen toteutusmuodon mukaan sidotaan askorbaattioksidaasi Kantajamateriaaliin niiden tunnettujen menetelmien mukaan, joita käytetään kiinnitettäessä entsyymiä liukenemattomiin kantajiin. Sopivia menetelmiä tunnetaan saksalaisista hakemusjulkaisuista n:ot 17 68 512, 21 28 743, 22 60 185, 22 60 184, 24 26 988, 26 03 153 ja 19 15 970.
Parhaina pidettyjä keksinnön mukaisia menetelmiä ovat glukoosin määrittäminen käyttäen peroksidaasia ja glukoosioksidaasia ja o-diani-sidiinia tai 2,2’-atsino-di-3-etyylibentstiatsoliinisulfonaatti-(6):ta (ABTS), glukoosin määrääminen heksokinaasi/glukoosi-6-fosfaattide-hydrogenaasi-menetelmän mukaan, virtsahapon osoittaminen käyttäen fenolia, aminoantipyriiniä, peroksidaasia ja urikaasia, tyrosiinin tai pyrokatekiinin määrääminen käyttäen SMBTH:ta (4-metyyli-6-ka-liumsulfonyyli-bentstiatsolonihydratsoni-(2):ta ja tyrosinaasia tai difenolioksidaasia.
Seuraavat esimerkit kuvaavat tarkemmin keksintöä.
Esimerkki 1
Glukoosin määrittäminen käyttäen o-dianisidiinia, peroksidaasia (POD) ja glukoosioksidaasia (GOD), mittaus fotometrin avulla, aallonpituus 432 nm, mittauslämpötila: 25°C.
Kyvetti n:o 1 2 3 4 5
Fosfaattipuskuri 2,5 2,5 2,5 2,5 2,5
pH 7,01 M
o-dianisidiini 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 5 mg/ml POD, 180 U/ml 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05
Glukoosi-liuos 0,03 0,03 0,03 0,03 0,03 1 mg/ml 7 60719
Kyvetti n:o 1 2 3 4 5
Askorbiinihappo- - 0,1 0,01 0,1 0,01
liuos 10 mM
Vesi 0,12 0,02 0,11 - 0,09
Askorbaatti-oksi- - - - 0,02 0,02 daasi 500 U/ml
Annetaan seistä 1 min lämpötilassa 25°C, luetaan E^, sen jälkeen aloitetaan käyttäen COD 70 U/ml 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
Annetaan seistä 30 min lämpötilassa 25°C, luetaan E2, lasketaan Ε2~Ε^
= Δ E
Δ E 0,541 0,010 0,316 0,540 0,543
Kyvetti 1 vastaa häiriötöntä mittausta (ei askorbiinihappoa). Kyvetit 2 ja 3 osoittavat, että 1 tai 0,1 y-umoolia askorbaattia estää testin lähes täysin tai 41,5-prosenttisesti, kyvetit 4 ja 5 osoittavat täydellisen häiriön poiston näissä askorbaatti-konsentraatioissa lisättäessä kuhunkin 3,33 U/ml askorbaatti-oksidaasia.
Esimerkki 2
Glukoosin osoittaminen käyttäen 2,2'-atsino-di-^3-etyyli-bentstiatso-liinisulfonaatti- (6)_7:a (ABTS) , POD:tä ja GOD:ia fotometrissä, aallonpituus: 432 nm, mittauslämpötila: 25°C.
Kyvetti n:o 1 2 3 4 5
Fosfaattipuskuri 2,75 2,75 2,75 2,75 2,75
pH 5,6 0,1 M
ABTS 50 mM 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 POD 250 U/ml 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02
Glukoosi-liuos 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 mg/ml
Askorbiinihappo- - 0,1 0,01 0,1 0,01
liuos 1 mM
Vesi 0,12 0,02 0,11 - 0,09
Askorbaatti-oksi- - - - 0,02 0,02 daasi 500 U/ml 8 60719
Annetaan seistä 1 min 25°:ssa, luetaan E^, aloitetaan käyttäen GOD 70 U/ml 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1
Annetaan seistä 30 min 25°0:ssa, luetaan 1&2' isketään E2~E^ = Δ E
Δ E 0,505 0,000 0,40 0,502 0,504
Kyvetti 1 vastaa häiriötöntä mittausta (ei askorbaattia) .Kyvetit 2 ja 3 osoittavat, että 0,1 tai 0,01^u mol askorbaattia estävät testin täydellisesti tai 21-prosenttisesti.
Kyvetit 4 ja 5 osoittavat täydelleen häiriön poiston näistä askorbaat-tikonsentraatioista, joihin on lisätty kuhunkin 3,33 U/ml askorbaatti- oksidaasia.
Esimerkki 3
Virtsahapon osoittaminen käyttäen fenolia, aminoantipyriiniä, PODrtä ja urikaasia analyysiautomaatissa (Autoanalyzer).
Testin periaate
Virtsahappo + C>2 + I^O ur^^aa-—> allantoini + 2 H202 + 2,4-dikloorifenoli + 4-aminoantipyriini PQD-> kinoidiväri-
aine + 2 H2O
Liuosten valmistus 1 Askorbaatti-oksidaasi-reagenssi 600 ml:aan kahdesti tislattua vettä liuotetaan pullon 1 sisältö. Lisätään 0,3 ml "Brij-35" (polyetyleeniglykolilauryylieetteri, Firma Atlas Chemie) . Säilyy tummassa pullossa noin 4°C:ssa neljä viikkoa, noin 25°C:ssa yhden viikon.
2 Urikaasi-reagenssi 800 ml:aan kahdesti tislattua vettä liuotetaan pullon 2 sisältö. Lisätään 2,0 ml Brij-35. Säilyy tummassa pullossa noin 4°C:ssa neljä viikkoa, noin 25°C:ssa yhden viikon.
Liuosten konsentraatiot pullo 1 50 mM fosfaattipuskuria, pH 5,6 askorbaatti-oksidaasia > kuviossa 2 ilmoitetuissa määrissä.
6071 9 pullo 2 31 mM Tris/sitruunahappo, pH 8,9 urikaasi ^ 0,08 U/ml POD >s 0,015 U/ml 3,0 mM 2,4-dikloorifenolia, 4,0 mM 4-aminoantipyriiniä.
Määritykseen suorittamista varten asennetaan automaatin letkusysteemi kuviossa 1 esitetyn virtauskaavan mukaisesti.
Kuviossa 2 on esitettynä graafisesti kokeiden tulokset.
Esimerkki 4
Glukoosin osoittaminen käyttäen HK/G6P-DH, NADP, INT ja diaforaasia fotometrissä. Mittauksen allonpituus: 492 nm, inkuboimislämpötila: 25°C.
Kyvetti n:o 1 23
Fosfaattipuskuri, pH 7,5 0/1 M 1,7 1,7 1,7 NADP/INT kumpaakin 1 mg/ml 0,1 0,1 0,1 diaforaasi 5 U/ml 0,1 0,1 0,1 glukoosi-liuos 0,05 mg/ml 0,1 0,1 0,1 askorbaatti-liuos 10 mM - 0,01 0,01 askorbaatti-oksidaasi 35 U/ml - - 0,03 vesi 0,04 0,03 -
Annetaan seistä 3 min 25°C:ssa, luetaan E^, aloitetaan käyttäen HK/G6P-DH-liuosta, kutakin 56 U/ml
Annetaan seistä 15 min, luetaan E2, lasketaan E2-E^ = Δ E Δ E 0,234 0,307 0,230
Kyvetti 1 vastaa häiriötöntä mittausta.
Kyvetti 2 osoittaa, että 0,01^u mol askorbaattia antaa 34 % liian korkeita testiarvoja, malja 5 osoittaa, että 0,5 U/ml askorbaatti-oksi-daasia poistaa tämän häiriön täydellisesti.
Esimerkki 5
Glutamaatin määritys käyttäen G1DH, NAD/INT/diaforaasia fotometrissä. Mittauksen aallonpituus 492 nm, lämpötila 25°C.
10 6071 9
Kyvetti n:o 1 2 3 4 5
Fosfaattipuskuri 1,30 1,20 1,29 1,18 1,27
pH 5,6, 0,01 mM
Glutamaatti-liuos 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,2 mg/ml
Askorbaatti-liuos - 0,1 0,01 0,1 0,01
5 mM
Askorbaatti-oksidaasi - - - 0,02 0,02 100 U/ml
Annetaan seistä 3 min 25°C:ssa, sitten pipetoidaan yksittäisiin kyvetteihin. 0,2 M TRA, 0,05 M
Kaliumfosfaattipuskuri, pH 8,6, jossa on 1,5 % Triton-X-100 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 NAD-liuos, 5 mg/ml 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 diaforaasi-liuos 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 10 U/ml GIDH 1000 U/ml 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05
Luetaan E^, aloitetaan reaktio käyttäen INT-liuosta, 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 2 mg/ml
Annetaan seistä 15 min 25°C:ssa, luetaan E2, lasketaan E2“E^ = Δ E Δ E 0,184 0,560 0,380 0,186 0,182
Kyvetti 1 vastaa häiriötöntä mittausta.
Kyvetit 2 ja 3 osoittavat, että 0,5 tai 0,05^u mol askorbaattia antaa testin arvoksi noin 700 tai noin 100 % liian korkeat arvot.
Kyvetit 4 ja 5 osoittavat tämän häiriön täydellisen poistamisen käytettäessä 0,73 (/ml askorbaatti-oksidaasia.
Esimerkki 6
Tyrosiinin määritys käyttäen 3-metyyli-6-kaliumsulfonyyli-bents-tiatsoloni-hydratsoni-(2):ta (SMBTH) ja tyrosinaasia fotometrissä, mittauksen aallonpituus 492 nm, mittauslämpötila 25°C.
11 6071 9
Kyvetti; nro 1 2 3
Fosfaattipuskuri, pH 5,2 0,25 M 2,77 2,77 2,77 SMBTH 0,1 M 0,05 0,05 0,05
Askorbiinihappo-liuos 10 mM - 0,1 0,1
Vesi 0,12 0,02 -
Askorbaatti-oksidaasi 500 U/ml - - 0,02
Tyrosinaasi 60 U/ml 0,05 0,05 0,05
Annetaan seistä 1 roin 25°C:ssa, luetaan E^, aloitetaan käyttäen Tyrosiinia 2 mM 0,05 0,05 0,05
Annetaan seistä 1 h 25°C:ssa,luetaan E2, lasketaan E2~E^ = Δ E Δ E 1,113 0,728 1,100
Kyvetti 1 vastaa häiriötöntä mittausta, kyvetissä 2 alentaa l^,u mol askorbaattia teoreettisen arvon noin 35 %:lla, maljassa 3 on tämä häiriö poistettu täydelleen käyttäen 3,33 U/ml askorbaatti-oksidaasia.
Esimerkki 7
Pyrokatekiinin määritys käyttäen SMBTH ja difenoli-oksidaasia.
Kyvetti n:o 1 23
Fosfaattipuskuri, 0,25 M 2,80 2,70 2,68 pH 5,2 SMBTH 0,1 0,05 0,05 0,05
Pyrokatekiini 0,5 M 0,10 0,10 0,10
Askorbaatti-liuos 20 mM - 0,1 0,1
Askorbaatti-oksidaasi 500 U/ml - - 0,02
Annetaan seistä 1 min 25°C:jBsa, luetaan E^, aloitetaan käyttäen Difenoli-oksidaasia 200 U/ml 0,05 0,05 0,05
Annetaan seistä 17 min 25°C:ssa, luetaan E2, lasketaan E2 - E^ = Δ E Δ E 0,890 0,485 0,896
Kyvetti 1 vastaa häiriötöntä mittausta.
Kyvetissä 2 alentaa 2^,u mol askorbaattia teoreettisen arvon noin 47 %:lla, tämä häiriö on poistettu täydelleen maljassa 3 lisäämällä 3,33 U/ml askorbaatti-oksidaasia.
12 6071 9
Esimerkki 8
Peroksidaasin (POD) määritys käyttäen 2,2'-atsino-di-i/3-etyyli-bentstiatsoliinisulfonaatti-(6)_7 s a (ABTS) , f otometrimittauksella aallonpituudella 432 nm lämpötilassa 25°C.
Kyvetti n:o 1 2 3 4 5
Fosfaattipuskuri 2,75 2,75 2,75 2,75 2,75 pH 5,6, 0,1 mol/1 ABTS 50 mmol/1 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 POD 0,1 U/ml 0,05 0,05 0,05 0,05 0,05
Askorbaatti 1 mmol/1 - 0,1 0,01 0,1 0,01 H20 0,12 0,02 0,11 - 0,09
Askorbaattioksidaasi - 0,02 0,02 500 U/mol
Annetaan seistä 1 min 25°C:ssa, aloitetaan käyttäen ^ 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 Määritetään ΔΕ/min
Kyvetti 1 vastaa häiriötöntä mittausta, joka osoittaa ΔΕ/min noin 0,052 heti mittauksen alusta. Kyvetissä 2 askorbaattihäiriö on ilmeinen, koska 30 minuutin aikana ei saada mittaustulosta. Kyve-tin 3 pieni askorbaattipitoisuus inhiboi täydellisesti reaktiota 2 minuutin ajan, ja vielä seuraavan 2 minuutin aikana reaktionopeudella on tasaantumisvaihe ennen kuin se saavuttaa maksimiarvon. Kyveteissä 4 ja 5 on tämä häiriövaikutus täydellisesti poistettu käyttämällä 3,3 U/ml askorbaattioksidaasia.
D
6071 9
Esimerkki 9
Testipaperi, jonka avulla voidaan osoittaa glukoosi virtsassa Suodatinpaperi kastetaan liuokseen, jonka kokoomus on seuraava ja kuivataan 50°C:ssa: 1.2 m sitraattipuskuria pH 5 50,0 ml 9- (γ-dimetyyliaminopropyyli)-6-kloori-3-amino- n __ u, / d g karbatsoli-dihydrokloridia
Glukoosioksidaasia (104 U/mg) 0,25 g
Peroksidaasia (63 U/mg) 0,05 g
Askorbaatti-oksidaasia (1000 U/ml) 1,00 g
Vettä 100,0 ml
Testipaperi reagoi glukoosia sisältävien virtsojen kanssa antaen värisävyjä, jotka ovat punaoranssista mustanpunaiseen. 2 minuutin reaktioajan jälkeen antavat virtsat, joiden glukoosipitoisuus on sama ja jotka sisältävät askorbiinihappoa 150 mg/dl saakka käytännöllisesti katsoen samat reaktiovärit.
Testipapereissa, joiden kokoomus on analoginen, mutta jotka eivät sisällä askorbaatti-oksidaasia, ovat reaktiovärit riippuen glukoosi-pitoisuudesta askorbiinihappokonsentraatioissa alkaen 50 mg/dl heikentyneet tai täysin peitossa.
Esimerkki 10
Testipaperi, jonka avulla voidaan osoittaa virtsassa oleva veri Suodatinpaperi impregnoidaan peräkkäin seuraavilla liuoksilla ja kuivataan 40°C:ssa.
Liuos 1 1.2 m sitraattipuskuria pH 5,25 35,0 ml
Etyleenidiamiinitetraetikkahappoa, 0,1 g dinatriumsuola
Dioktyylinatriumsulfosukkinaattia 0,5 g 2,5-dimetyyliheksaani-2,5-dihydroperoksi- dia (noin 70-prosenttista) 1,6 g
Fosforihappotrimorfolidia 12,7 g
Askorbaatti-oksidaasia (300 U/ml) 0,3 g
Metanolia 30,0 ml
Vettä ad 100,0 ml 14 6071 9
Liuos 2 3,3',5,51-tetrametyylibentsidiiniä 0,3 g
Fenantridiiniä 0,2 g
Tolueeni/petrolieetteri (30:70) ad 100,0 ml Tällä testipaperilla voidaan osoittaa 5 erytrosyytin olemassaolo mm3:ssa virtsaa myös silloin, kun mukana on 30-50 mg askorbiini-happoa/100 ml. Testipaperilla, jonka kokoomus on sama, mutta jossa ei ole askorbaatti-oksidaasia ei enää onnistuta osoittamaan sitä, jos mukana on 10-20 mg askorbiinihappoa/100 ml.
Esimerkki 11 Testipaperi A
Testipaperi kuten esimerkissä H) ilman askorbaatti-oksidaasia. Testipaperi B
Vesiliukoinen paperi karboksimetyyliselluloosaa (pintayksikön paino 60 g/m2) kastellaan 20-prosenttisella jääetikan metanoliliuoksella neutralisoimista varten ja kuivatetaan. Sen jälkeen pirskotellaan siihen askorbaattioksidaasin vesiliuosta (10 U/ml) ja kuivataan heti.
Testipaperi B pannaan testipaperi A:n päälle ja molemmat suljetaan polyesteritolion ja nailonverkon väliin. Tutkittava virtsa tiputetaan näin valmistetun testiliuskan päälle.
Tulokset vastaavat esimerkissä 10 saatuja.
Esimerkki 12
Testipaperi, jonka avulla voidaan osoittaa ulosteessa oleva veri Suodatinpaperi impregnoidaan peräkkäin seuraavilla liuoksilla ja kuivataan 40°C:ssa.
Liuos 1 1,2 m sitraattipuskuria, pH 5,25 10 ml
Askorbaatti-oksidaasia 300 U/ml 0,3 g
Vettä ad 100,0 ml
Liuos 2
Guajak-hartsia 3 g
Tolueenia ad 100,0 ml 6071 9
Liuos suodatetaan ja vain suodosta käytetään impregnoimiseen.
Saadaan testipaperi, johon sivellään ulostetta. Jos kääntöpuolelle tiputetaan 3-prosenttista vetyperoksidin vesiliuosta, niin saadaan sininen väri, jos uloste sisältää noin 2 % verta. Tämä väri tulee esiin myös askorbiinihappo-pitoisissa ulosteissa (noin 15 mg/100 g), kun taas testipapereissa ilman askorbaattioksidaasia jää vain näissä tapauksissa tulematta esiin.
Claims (14)
1. Menetelmä, jonka avulla voidaan määrittää substraatteja tai entsyymien aktiivisuutta siten, että askorbiinihappo ei häiritse suoritettavaa määritystä käytettäessä redoks-reaktiota mittareak-tiona, esimerkiksi määrityksissä, joissa käytetään H202:ta muodostavaa entsyymiä, tetrasoliumsuolaa tai fenolia, joka voi liittyä nukleofiilisten reagenssien kanssa oksidoivasti, tunnettu siitä, että määritys suoritetaan pH-arvossa 4,0-8,5 , ja että määrityksessä on läsnä 0,002-100 U askorbaattioksidaasia/ml testi-liuosta.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään askorbaattioksidaasia, jota on saatu zucchini-kurkuista (Cucurbita pepo medullosa).
3. Patenttivaatimuksen 1 mukaisen menetelmän suorittamiseksi tarkoitettu reagenssi, jonka avulla voidaan määrittää substraatteja tai entsyymien aktiivisuutta käyttämällä redoks-reaktiota mittareaktiona, tunnettu siitä, että se sisältää tavanomaisten määritysreagenssien lisäksi askorbaattioksidaasia.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen reagenssi glukoosin määrittämiseksi, tunnettu siitä, että se sisältää peroksidaasia, glukoosioksidaasia, o-dianisidiinia tai 2-atsino-di-3-etyyli-bentstiatsoliinisulfonaatti-(6):ta, puskuria ja askorbaattioksidaasia.
5. Patenttivaatimuksen 3 mukainen reagenssi virtsahapon määrittämiseksi, tunnettu siitä, että se sisältää peroksidaasia, urikaasia, fenolia kuten 2,4-dikloorifenolia, aminoantipyriiniä, puskuria, ja askorbaattioksidaasia.
6. Patenttivaatimuksen 3 mukainen reagenssi glukoosin määrittämiseksi, tunnettu siitä, että se sisältää heksokinaasia, glukoosi-6-fosfaattidehydrogenaasia, nikotiiniamidi-adeniini-dinukleotidifosfaattia (NADP), diaforaasia, tetratsoliumsuolaa, puskuria ja askorbaattioksidaasia.
7. Patenttivaatimuksen 3 mukainen reagenssi glutamaatin määrittämiseksi, tunnettu siitä, että se sisältää glutamaatti-dehydrogenaasia, diaforaasia, nikotiiniamidi-adeniini-dinukleo- « 60719 tidiä, tetratsoliumsuolaa, puskuria ja askorbaattioksidaasia.
8. Patenttivaatimuksen 3 mukainen reagenssi tyrosiinin määrittämiseksi, tunnettu siitä, että se sisältää tyrosinaasia, 3-metyyli-6-kaliumsulfonyyli-bentstiatsoloni-hydratsoni-(2):a, puskuria ja askorbaattioksidaasia.
9. Patenttivaatimuksen 3 mukainen reagenssi, bentskatekiinin määrittämiseksi, tunnettu siitä, että se sisältää difeno-lioksidaasia, 3-metyyli-6-kaliumsulfonyyli-bentstiatsoloni-hydrat-soni-(2):a, puskuria ja askorbaattioksidaasia.
10. Patenttivaatimuksen 3 mukainen reagenssi käytettäväksi substraatin määrittämiseen, tunnettu siitä, että substraatin määrittämiseen tarkoitetut reagenssit ja askorbaattioksidaasi on impregnoitu imukykyiselle kantaja-aineelle, edullisesti paperille.
11. Patenttivaatimuksen 10 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että vesiliukoinen, levymäinen kantajamateriaali on kyllästetty askorbaattioksidaasilla, ja veteen liukenematon, levymäinen, imukykyinen kantaja-aine on kyllästetty substraatin määrittämiseen tarkoitetuilla reagenseilla, ja että vesiliukoinen ja veteen liukenematon kantajamateriaali on kerrostettu päällekkäin.
12. Patenttivaatimuksen 10 mukaisen reagenssin käyttö glukoosin määrittämiseksi, tunnettu siitä, että käytetään glukoosi-oksidaasilla, peroksidaasilla, askorbaattioksidaasilla, 9-(y-di-metyyliaminopropyyli)-6-kloori-3-aminokarbatsolisuolalla ja puskurilla kyllästettyä kantajapaperia.
13. Patenttivaatimuksen 10 mukaisen reagenssin käyttö virtsassa olevan veren määrittämiseksi, tunnettu siitä, että käytetään etyleenidiaminotetraetikkahapposuolalla, dioktyylinatrium-sulfosukkinaatilla, 2,5-dimetyyliheksaani-2,5-dihydroperoksidilla, fosforihappotrimorfolidilla, askorbaattioksidaasilla, 3,3', 5,5' tetrametyylibentsidiinillä, fenantridiinillä ja puskurilla kyllästettyä paperia.
14. Patenttivaatimuksen 10 mukaisen reagenssin käyttö ulosteessa olevan veren määrittämiseksi, tunnettu siitä, että käyte tään askorbaattioksidaasilla, guajakhartsilla ja puskurilla kyl lästettyä paperia. 1 8 6071 9
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2625834 | 1976-06-09 | ||
| DE2625834A DE2625834B2 (de) | 1976-06-09 | 1976-06-09 | Verfahren zur Bestimmung von Substraten oder Enzymaktivitäten |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI771356A FI771356A (fi) | 1977-12-10 |
| FI60719B true FI60719B (fi) | 1981-11-30 |
| FI60719C FI60719C (fi) | 1982-03-10 |
Family
ID=5980154
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI771356A FI60719C (fi) | 1976-06-09 | 1977-04-28 | Foerfarande foer bestaemning av substrat eller enzymaktiviteter |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4168205A (fi) |
| JP (1) | JPS52150692A (fi) |
| AR (1) | AR212763A1 (fi) |
| AT (1) | AT354640B (fi) |
| AU (1) | AU500988B2 (fi) |
| BE (1) | BE854407A (fi) |
| BR (1) | BR7703008A (fi) |
| CA (1) | CA1084393A (fi) |
| CH (1) | CH633887A5 (fi) |
| CS (2) | CS235068B2 (fi) |
| DD (1) | DD130178A5 (fi) |
| DE (1) | DE2625834B2 (fi) |
| DK (1) | DK144949C (fi) |
| ES (1) | ES458544A1 (fi) |
| FI (1) | FI60719C (fi) |
| FR (1) | FR2354561A1 (fi) |
| GB (1) | GB1519134A (fi) |
| HU (1) | HU172931B (fi) |
| IE (1) | IE45546B1 (fi) |
| IL (1) | IL52047A (fi) |
| IT (1) | IT1075527B (fi) |
| LU (1) | LU77290A1 (fi) |
| NL (1) | NL169503C (fi) |
| NO (1) | NO148340C (fi) |
| PL (2) | PL114343B1 (fi) |
| SE (1) | SE426601B (fi) |
| SU (1) | SU797592A3 (fi) |
| YU (1) | YU114477A (fi) |
| ZA (1) | ZA772716B (fi) |
Families Citing this family (115)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2834705B1 (de) * | 1978-08-08 | 1980-01-24 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und Reagenz zur Durchfuehrung enzymatischer Bestimmungen |
| DE2907628C2 (de) * | 1979-02-27 | 1981-02-05 | C.A. Greiner Und Soehne Gmbh & Co Kg, 7440 Nuertingen | Proberöhrchen für die Untersuchung von Proben im klinischen Bereich, insbesondere von Urinproben |
| DE2914487A1 (de) * | 1979-04-10 | 1980-10-30 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und mittel zur entfernung von ascorbinsaeure aus waessrigen fluessigkeiten |
| JPS56109595A (en) * | 1980-02-01 | 1981-08-31 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Removal of reductive inhibitor |
| DE3012368C2 (de) * | 1980-03-29 | 1982-04-15 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und diagnostische Mittel zum Nachweis von Redox-Reaktionen |
| DE3012314A1 (de) * | 1980-03-29 | 1981-10-15 | W. Schlafhorst & Co, 4050 Mönchengladbach | Offenend-spinnvorrichtung |
| US4310626A (en) * | 1980-06-02 | 1982-01-12 | Miles Laboratories, Inc. | Interference-resistant composition, device and method for determining a peroxidatively active substance in a test sample |
| DE3046741A1 (de) * | 1980-12-11 | 1982-07-15 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Nachweis von nad(p)h oder salicylat |
| DE3249743C2 (fi) * | 1982-02-18 | 1990-10-04 | Amano Pharmaceutical Co., Ltd., Nagoya, Aichi, Jp | |
| US4587220A (en) * | 1983-03-28 | 1986-05-06 | Miles Laboratories, Inc. | Ascorbate interference-resistant composition, device and method for the determination of peroxidatively active substances |
| DE3313178A1 (de) * | 1983-04-12 | 1984-10-18 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur enzymatischen bestimmung von sulfit |
| JPS59230161A (ja) * | 1983-06-13 | 1984-12-24 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 還元性物質の分解方法及び分解用試薬 |
| US5002893A (en) * | 1985-09-19 | 1991-03-26 | Isolab, Inc. | Single color reading method for determining fructosamine |
| DE3611227A1 (de) * | 1986-04-04 | 1987-10-08 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von substraten oder enzymaktivitaeten |
| US5196314A (en) * | 1986-04-04 | 1993-03-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process and reagent for the determination of substrates or enzyme activities |
| DE3620817A1 (de) * | 1986-06-21 | 1987-12-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur spezifischen bestimmung des serumfructosamingehalts sowie hierfuer geeignetes reagenzgemisch |
| US4885240A (en) * | 1986-09-04 | 1989-12-05 | Eastman Kodak Company | Use of organic buffers to reduce dehydroascorbic acid interference in analytical methods |
| US5387431A (en) * | 1991-10-25 | 1995-02-07 | Fuisz Technologies Ltd. | Saccharide-based matrix |
| US5456932A (en) * | 1987-04-20 | 1995-10-10 | Fuisz Technologies Ltd. | Method of converting a feedstock to a shearform product and product thereof |
| US5320725A (en) * | 1989-08-02 | 1994-06-14 | E. Heller & Company | Electrode and method for the detection of hydrogen peroxide |
| US5264104A (en) * | 1989-08-02 | 1993-11-23 | Gregg Brian A | Enzyme electrodes |
| US5264105A (en) * | 1989-08-02 | 1993-11-23 | Gregg Brian A | Enzyme electrodes |
| CA2028625A1 (en) * | 1990-07-05 | 1992-01-06 | Daniel S. Daniel | Ethanol analytical element |
| US5593852A (en) | 1993-12-02 | 1997-01-14 | Heller; Adam | Subcutaneous glucose electrode |
| US5262305A (en) * | 1991-03-04 | 1993-11-16 | E. Heller & Company | Interferant eliminating biosensors |
| JPH04278450A (ja) * | 1991-03-04 | 1992-10-05 | Adam Heller | バイオセンサー及び分析物を分析する方法 |
| CA2102607A1 (en) * | 1991-05-17 | 1992-11-18 | Richard C. Fuisz | Enzyme systems |
| US5576042A (en) * | 1991-10-25 | 1996-11-19 | Fuisz Technologies Ltd. | High intensity particulate polysaccharide based liquids |
| DE69231281T2 (de) * | 1991-12-17 | 2001-03-01 | Biovail Technologies Ltd.(N.D.Ges.D.Staates Delaware), Chantilly | Zusammensetzung und verfahren zur ulcusprävention und -behandlung |
| US5346377A (en) * | 1993-10-07 | 1994-09-13 | Fuisz Technologies Ltd. | Apparatus for flash flow processing having feed rate control |
| US5445769A (en) * | 1994-06-27 | 1995-08-29 | Fuisz Technologies Ltd. | Spinner head for flash flow processing |
| US5582855A (en) * | 1994-07-01 | 1996-12-10 | Fuisz Technologies Ltd. | Flash flow formed solloid delivery systems |
| US5556652A (en) * | 1994-08-05 | 1996-09-17 | Fuisz Technologies Ltd. | Comestibles containing stabilized highly odorous flavor component delivery systems |
| JP2838866B2 (ja) * | 1995-05-10 | 1998-12-16 | 株式会社同仁化学研究所 | 酸化発色分析における還元物質の活性抑制方法 |
| US5587198A (en) * | 1995-05-31 | 1996-12-24 | Fuisz Technologies Ltd. | Positive hydration method of preparing confectionery and product therefrom |
| US5776719A (en) * | 1997-07-07 | 1998-07-07 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| US5989845A (en) * | 1996-04-05 | 1999-11-23 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| US6040151A (en) | 1998-03-10 | 2000-03-21 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| US5824491A (en) * | 1996-05-17 | 1998-10-20 | Mercury Diagnostics, Inc. | Dry reagent test strip comprising benzidine dye precursor and antipyrine compound |
| DE69809391T2 (de) | 1997-02-06 | 2003-07-10 | Therasense, Inc. | Kleinvolumiger sensor zur in-vitro bestimmung |
| US6134461A (en) | 1998-03-04 | 2000-10-17 | E. Heller & Company | Electrochemical analyte |
| US6103033A (en) * | 1998-03-04 | 2000-08-15 | Therasense, Inc. | Process for producing an electrochemical biosensor |
| US8974386B2 (en) | 1998-04-30 | 2015-03-10 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US6949816B2 (en) | 2003-04-21 | 2005-09-27 | Motorola, Inc. | Semiconductor component having first surface area for electrically coupling to a semiconductor chip and second surface area for electrically coupling to a substrate, and method of manufacturing same |
| US8480580B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-07-09 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US8688188B2 (en) | 1998-04-30 | 2014-04-01 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US8465425B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-06-18 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US8346337B2 (en) | 1998-04-30 | 2013-01-01 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US6175752B1 (en) | 1998-04-30 | 2001-01-16 | Therasense, Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US9066695B2 (en) | 1998-04-30 | 2015-06-30 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| US6251260B1 (en) | 1998-08-24 | 2001-06-26 | Therasense, Inc. | Potentiometric sensors for analytic determination |
| US6591125B1 (en) | 2000-06-27 | 2003-07-08 | Therasense, Inc. | Small volume in vitro analyte sensor with diffusible or non-leachable redox mediator |
| US6338790B1 (en) | 1998-10-08 | 2002-01-15 | Therasense, Inc. | Small volume in vitro analyte sensor with diffusible or non-leachable redox mediator |
| JP4801301B2 (ja) | 1999-06-18 | 2011-10-26 | アボット ダイアベティス ケア インコーポレイテッド | 物質移動が制限された生体内分析物センサー |
| US6616819B1 (en) | 1999-11-04 | 2003-09-09 | Therasense, Inc. | Small volume in vitro analyte sensor and methods |
| US6560471B1 (en) | 2001-01-02 | 2003-05-06 | Therasense, Inc. | Analyte monitoring device and methods of use |
| WO2002078512A2 (en) | 2001-04-02 | 2002-10-10 | Therasense, Inc. | Blood glucose tracking apparatus and methods |
| US7381184B2 (en) | 2002-11-05 | 2008-06-03 | Abbott Diabetes Care Inc. | Sensor inserter assembly |
| US8090542B2 (en) * | 2002-11-14 | 2012-01-03 | Dharmacon Inc. | Functional and hyperfunctional siRNA |
| AU2003303597A1 (en) | 2002-12-31 | 2004-07-29 | Therasense, Inc. | Continuous glucose monitoring system and methods of use |
| US8066639B2 (en) | 2003-06-10 | 2011-11-29 | Abbott Diabetes Care Inc. | Glucose measuring device for use in personal area network |
| USD914881S1 (en) | 2003-11-05 | 2021-03-30 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte sensor electronic mount |
| WO2005089103A2 (en) | 2004-02-17 | 2005-09-29 | Therasense, Inc. | Method and system for providing data communication in continuous glucose monitoring and management system |
| US9398882B2 (en) | 2005-09-30 | 2016-07-26 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for providing analyte sensor and data processing device |
| US9351669B2 (en) | 2009-09-30 | 2016-05-31 | Abbott Diabetes Care Inc. | Interconnect for on-body analyte monitoring device |
| US9572534B2 (en) | 2010-06-29 | 2017-02-21 | Abbott Diabetes Care Inc. | Devices, systems and methods for on-skin or on-body mounting of medical devices |
| US8512243B2 (en) | 2005-09-30 | 2013-08-20 | Abbott Diabetes Care Inc. | Integrated introducer and transmitter assembly and methods of use |
| US20090105569A1 (en) | 2006-04-28 | 2009-04-23 | Abbott Diabetes Care, Inc. | Introducer Assembly and Methods of Use |
| US7883464B2 (en) | 2005-09-30 | 2011-02-08 | Abbott Diabetes Care Inc. | Integrated transmitter unit and sensor introducer mechanism and methods of use |
| US8333714B2 (en) | 2006-09-10 | 2012-12-18 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and system for providing an integrated analyte sensor insertion device and data processing unit |
| US9788771B2 (en) | 2006-10-23 | 2017-10-17 | Abbott Diabetes Care Inc. | Variable speed sensor insertion devices and methods of use |
| US9743862B2 (en) | 2011-03-31 | 2017-08-29 | Abbott Diabetes Care Inc. | Systems and methods for transcutaneously implanting medical devices |
| US7697967B2 (en) | 2005-12-28 | 2010-04-13 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for providing analyte sensor insertion |
| US9259175B2 (en) | 2006-10-23 | 2016-02-16 | Abbott Diabetes Care, Inc. | Flexible patch for fluid delivery and monitoring body analytes |
| US7731657B2 (en) | 2005-08-30 | 2010-06-08 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte sensor introducer and methods of use |
| US8571624B2 (en) | 2004-12-29 | 2013-10-29 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for mounting a data transmission device in a communication system |
| US10226207B2 (en) | 2004-12-29 | 2019-03-12 | Abbott Diabetes Care Inc. | Sensor inserter having introducer |
| US8112240B2 (en) | 2005-04-29 | 2012-02-07 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for providing leak detection in data monitoring and management systems |
| US9521968B2 (en) | 2005-09-30 | 2016-12-20 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte sensor retention mechanism and methods of use |
| US7766829B2 (en) | 2005-11-04 | 2010-08-03 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and system for providing basal profile modification in analyte monitoring and management systems |
| US11298058B2 (en) | 2005-12-28 | 2022-04-12 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for providing analyte sensor insertion |
| EP1968432A4 (en) | 2005-12-28 | 2009-10-21 | Abbott Diabetes Care Inc | INTRODUCTION OF A MEDICAL DEVICE |
| US7885698B2 (en) | 2006-02-28 | 2011-02-08 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and system for providing continuous calibration of implantable analyte sensors |
| US7620438B2 (en) | 2006-03-31 | 2009-11-17 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and system for powering an electronic device |
| US8226891B2 (en) | 2006-03-31 | 2012-07-24 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring devices and methods therefor |
| US20080064937A1 (en) | 2006-06-07 | 2008-03-13 | Abbott Diabetes Care, Inc. | Analyte monitoring system and method |
| US8930203B2 (en) | 2007-02-18 | 2015-01-06 | Abbott Diabetes Care Inc. | Multi-function analyte test device and methods therefor |
| US8732188B2 (en) | 2007-02-18 | 2014-05-20 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and system for providing contextual based medication dosage determination |
| US8123686B2 (en) | 2007-03-01 | 2012-02-28 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and apparatus for providing rolling data in communication systems |
| US8456301B2 (en) | 2007-05-08 | 2013-06-04 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring system and methods |
| US7928850B2 (en) | 2007-05-08 | 2011-04-19 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring system and methods |
| US8665091B2 (en) | 2007-05-08 | 2014-03-04 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and device for determining elapsed sensor life |
| US8461985B2 (en) | 2007-05-08 | 2013-06-11 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring system and methods |
| WO2008150917A1 (en) | 2007-05-31 | 2008-12-11 | Abbott Diabetes Care, Inc. | Insertion devices and methods |
| JP5216968B2 (ja) * | 2007-08-07 | 2013-06-19 | 株式会社シノテスト | テトラゾリウム化合物を色原体として用いる試料中の測定対象物質の測定方法及び測定試薬、非特異的発色を抑制する方法、並びに非特異的発色抑制剤 |
| US8103456B2 (en) | 2009-01-29 | 2012-01-24 | Abbott Diabetes Care Inc. | Method and device for early signal attenuation detection using blood glucose measurements |
| US20100198034A1 (en) | 2009-02-03 | 2010-08-05 | Abbott Diabetes Care Inc. | Compact On-Body Physiological Monitoring Devices and Methods Thereof |
| US20100213057A1 (en) | 2009-02-26 | 2010-08-26 | Benjamin Feldman | Self-Powered Analyte Sensor |
| WO2010127050A1 (en) | 2009-04-28 | 2010-11-04 | Abbott Diabetes Care Inc. | Error detection in critical repeating data in a wireless sensor system |
| US8993331B2 (en) | 2009-08-31 | 2015-03-31 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte monitoring system and methods for managing power and noise |
| WO2011026147A1 (en) | 2009-08-31 | 2011-03-03 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte signal processing device and methods |
| EP2482720A4 (en) | 2009-09-29 | 2014-04-23 | Abbott Diabetes Care Inc | METHOD AND APPARATUS FOR PROVIDING NOTIFICATION FUNCTION IN SUBSTANCE MONITORING SYSTEMS |
| USD924406S1 (en) | 2010-02-01 | 2021-07-06 | Abbott Diabetes Care Inc. | Analyte sensor inserter |
| LT3622883T (lt) | 2010-03-24 | 2021-08-25 | Abbott Diabetes Care, Inc. | Medicinos prietaiso įvedikliai ir medicinos prietaisų įvedimo ir naudojimo būdai |
| US11064921B2 (en) | 2010-06-29 | 2021-07-20 | Abbott Diabetes Care Inc. | Devices, systems and methods for on-skin or on-body mounting of medical devices |
| JP6443802B2 (ja) | 2011-11-07 | 2018-12-26 | アボット ダイアベティス ケア インコーポレイテッドＡｂｂｏｔｔ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ Ｉｎｃ． | 分析物モニタリング装置および方法 |
| DK4056105T3 (da) | 2011-12-11 | 2024-01-02 | Abbott Diabetes Care Inc | Analytsensorindretninger |
| CN104131765A (zh) * | 2014-07-22 | 2014-11-05 | 哈尔滨盛世华林科技有限公司 | 一种门底自动密封条 |
| US10213139B2 (en) | 2015-05-14 | 2019-02-26 | Abbott Diabetes Care Inc. | Systems, devices, and methods for assembling an applicator and sensor control device |
| EP3294134B1 (en) | 2015-05-14 | 2020-07-08 | Abbott Diabetes Care Inc. | Inserter system for a compact medical device and corresponding method |
| CA3050721A1 (en) | 2017-01-23 | 2018-07-26 | Abbott Diabetes Care Inc. | Systems, devices and methods for analyte sensor insertion |
| CN108872220B (zh) * | 2018-07-11 | 2020-03-24 | 深圳华创生物医药科技有限公司 | 一种无汞对羟基苯丙氨酸检测试剂及制备方法和应用 |
| JP6703722B1 (ja) * | 2019-10-16 | 2020-06-03 | 株式会社エンザイム・センサ | Ｌ−グルタミンの測定方法、及びそのためのキット |
| US11878381B2 (en) | 2020-08-06 | 2024-01-23 | Mate Precision Technologies Inc. | Tooling base assembly |
| WO2022032178A1 (en) | 2020-08-06 | 2022-02-10 | Mate Precision Technologies Inc. | Vise assembly |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3411887A (en) * | 1964-06-15 | 1968-11-19 | Miles Lab | Diagnostic composition |
| AT308049B (de) * | 1970-08-28 | 1973-06-25 | Boehringer Mannheim Gmbh | Reagens zur Glucosebestimmung |
| JPS5033795B1 (fi) * | 1970-11-25 | 1975-11-04 | ||
| US3791988A (en) * | 1972-03-23 | 1974-02-12 | Hoffmann La Roche | Diagnostic test for glucose |
| US3992158A (en) * | 1973-08-16 | 1976-11-16 | Eastman Kodak Company | Integral analytical element |
| FR2280081A1 (fr) * | 1974-07-23 | 1976-02-20 | Kodak Pathe | Produit composite unitaire pour l'analyse chimique ou biologique |
-
1976
- 1976-06-09 DE DE2625834A patent/DE2625834B2/de active Granted
-
1977
- 1977-04-04 AT AT234077A patent/AT354640B/de not_active IP Right Cessation
- 1977-04-13 IE IE764/77A patent/IE45546B1/en not_active IP Right Cessation
- 1977-04-13 CA CA276,113A patent/CA1084393A/en not_active Expired
- 1977-04-25 AR AR267337A patent/AR212763A1/es active
- 1977-04-27 NL NLAANVRAGE7704591,A patent/NL169503C/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-04-28 FI FI771356A patent/FI60719C/fi not_active IP Right Cessation
- 1977-04-28 US US05/792,073 patent/US4168205A/en not_active Expired - Lifetime
- 1977-04-29 GB GB17993/77A patent/GB1519134A/en not_active Expired
- 1977-05-03 IT IT77@@A patent/IT1075527B/it active
- 1977-05-05 YU YU01144/77A patent/YU114477A/xx unknown
- 1977-05-06 SU SU772481956A patent/SU797592A3/ru active
- 1977-05-06 PL PL1977217830A patent/PL114343B1/pl unknown
- 1977-05-06 CS CS781874A patent/CS235068B2/cs unknown
- 1977-05-06 CS CS773018A patent/CS207453B2/cs unknown
- 1977-05-06 SE SE7705303A patent/SE426601B/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-05-06 IL IL52047A patent/IL52047A/xx unknown
- 1977-05-06 CH CH571277A patent/CH633887A5/de not_active IP Right Cessation
- 1977-05-06 NO NO771599A patent/NO148340C/no unknown
- 1977-05-06 ZA ZA00772716A patent/ZA772716B/xx unknown
- 1977-05-06 HU HU77BO00001667A patent/HU172931B/hu unknown
- 1977-05-06 ES ES458544A patent/ES458544A1/es not_active Expired
- 1977-05-06 JP JP5195377A patent/JPS52150692A/ja active Granted
- 1977-05-06 PL PL1977197927A patent/PL109224B1/pl unknown
- 1977-05-09 BR BR7703008A patent/BR7703008A/pt unknown
- 1977-05-09 DD DD7700198825A patent/DD130178A5/xx unknown
- 1977-05-09 DK DK202677A patent/DK144949C/da not_active IP Right Cessation
- 1977-05-09 LU LU77290A patent/LU77290A1/xx unknown
- 1977-05-09 AU AU25021/77A patent/AU500988B2/en not_active Expired
- 1977-05-09 BE BE177392A patent/BE854407A/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-05-09 FR FR7714090A patent/FR2354561A1/fr active Granted
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI60719B (fi) | Foerfarande foer bestaemning av substrat eller enzymaktiviteter | |
| KR920001449B1 (ko) | 효소적산화에 의한 검체의 비색적 측정방법 및 시약 | |
| Fossati et al. | Enzymic creatinine assay: a new colorimetric method based on hydrogen peroxide measurement. | |
| US4578245A (en) | Multilayer analytical element | |
| Castillo et al. | Determination of manganese peroxidase activity with 3-methyl-2-benzothiazolinone hydrazone and 3-(dimethylamino) benzoic acid | |
| US5094943A (en) | Process and reagent for the improved quantitative colorimetic determination of hydrogen peroxide | |
| US5264348A (en) | Ascorbate interference-resistant composition, device and method of assaying for predetermined analyte | |
| CAPEILLÈRE-BLANDIN | Oxidation of guaiacol by myeloperoxidase: a two-electron-oxidized guaiacol transient species as a mediator of NADPH oxidation | |
| EP0122641B1 (en) | Analytical reagent, analytical method, and multilayer chemical-analytical element | |
| CA1095818A (en) | Compositions, elements and method for the quantitative analysis of lactic or lactate using lactate oxidase | |
| JPS5819279B2 (ja) | Ｎａｄ（ｐ）ｈ又はサリチル酸塩を測定する方法及び試薬 | |
| JPS6359466B2 (fi) | ||
| US5182213A (en) | Method for detecting the presence of peroxidatively active substance in basic media | |
| US5610025A (en) | Inhibition of interfering endogenous enzyme activity in assays of biological fluids | |
| MX2007002224A (es) | Metodo para determinar la concentracion de analitos en muestras por mediacion directa de enzimas. | |
| EP0158964B1 (en) | Tester for detecting a substance in a body fluid | |
| KINOSHITA et al. | A fluorophotometric determination of serum creatinine and creatine using a creatinineamidohydrolase-creatineamidinohydrolase-sarcosine oxidase-peroxidase system and diacetyldichlorofluorescin | |
| IE61442B1 (en) | Test composition device and method for the visual determination of hydrogen peroxide | |
| EP0141244B1 (en) | Testing agent for detecting a subtance in a body fluid | |
| AU9202998A (en) | Uric acid assay device with stabilized uricase reagent composition | |
| DK167197B1 (da) | Middel og fremgangsmaade til bilirubinresistent bestemmelse af urinsyre | |
| US4695539A (en) | Process for quantitative determination of substrate treated with oxidase | |
| Foppoli et al. | Formation of homovanillic acid dimer by enzymatic or Fenton system—catalyzed oxidation | |
| JP4462395B2 (ja) | ポリフェノールセンサー | |
| Isono et al. | Laccase-like activity of nucleoside oxidase in the presence of nucleosides |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired | ||
| MA | Patent expired |
Owner name: BOEHRINGER MANNHEIM GMBH |