DE2615844A1 - Fibrinogen spaltendes enzymsystem - Google Patents
Fibrinogen spaltendes enzymsystemInfo
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Description
CHEMISCHE FABRIKEN
Patent- und Lizenz-Abteilung Ludwigshafen am Rhein, P I76 den 12. März 1976
Fibrinogen spaltendes Enzymsystem
Fibrinogenasen sind bereits bekannt [DT-OS 2.128.257;
DT-OS 2.440.254i Brit. J. Haemat. 13_, 58I (1967)1- Ihre
Aktivität wird in Einheiten gemessen, wobei 1 Einheit der Menge Enzym entspricht, die bei pH 7*5 und 37 C
0,1 ml 0,3%±ge Rinderfibrinogenlösung in 240 - 23 Sekunden
zum Gerinnen bringt. Fibrinogenasen werden u.a. in der Therapie zur Behandlung von chronischen peripheren
Durchblutungsstörungen verwendet.
Die Gewinnung der Fibrinogenasen erfolgt in der Regel aus tierischem Material. So erhält man z.B. Ancrod aus
dem Gift der malaiischen Grubenviper. Die Herstellung grösserer Mengen Fibrinogenase ist daher recht aufwendig.
Es wurde nun gefunden, dass die Aktivität von Fibrinogenasen durch die Zugabe bestimmter polymerer Substanzen
erheblich gesteigert werden kann, so dass man bei der Anwendung mit geringeren Mengen Enzym auskommt.
709842/0401
— 2 —
CHEMISCHE FABRIKEN \j^ V,
Gegenstand der Erfindung ist ein Fibrinogen spaltendes
Enzymsystem, welches aus einer Fibrinogenase und einem wasserlöslichen Polysaccharid besteht sowie ein Verfahren
zur Herstellung dieses Enzymsystems durch Zusammengeben der beiden Bestandteile in wässriger Lösung. Die
Erfindung betrifft weiter Arzneimittel und Diagnostika, welche das genannte Enzymsystem enthalten.
Als wasserlösliche Polysaccharide eignen sich besonders Dextrane, wasserlösliche Stärke oder Hydroxyäthylstärke,
mit denen die Fibrinogenasen in wässriger Lösung zusammengegeben werden. Das Polysaccharid wird in einer Menge
von 1-20 mg vorzugsweise 10 - 20 mg pro Enzymeinheit zugegeben. Der Zusatz grösserer Mengen Polysaccharid ist
zwar ohne weiteres möglich, dadurch wird die Enzymaktivität jedoch nicht mehr erhöht.
Die Wirkungssteigerung der Fibrinogenase durch die Polysaccharide lässt sich nur durch eine Wechselwirkung der
Moleküle untereinander erklären. Es konnte noch nicht eindeutig geklärt werden, ob die beiden Verbindungen eine
Art Komplex miteinander bilden oder sich nur locker zusammenlagern.
709842/0401 - 3 -
- JT-
CHEMISCHE FABRIKEN ijf'V
Das neue Fibrinogen spaltende Enzymsystem erlaubt es, auf
rationellere Weise den Fibrinogengehalt z.B. im Blut zu bestimmen. Die Ermittlung der Fibrinogenmenge im Blut ist
wichtig für die Diagnose der Hyper- und Hypofibrinogenämie,
für Leberfunktionsprüfungen und für die Kontrolle der Therapie mit Arzneimitteln, die den Fibrinogengehalt
im Blut senken.
Weiter ermöglicht das neue Enzymsystem die Behandlung
peripherer Durchblutungsstörungen mit geringeren Enzymmengen, wodurch die Gefahr des Auftretens von Allergieoder Resistenzerscheinungen vermindert wird.
peripherer Durchblutungsstörungen mit geringeren Enzymmengen, wodurch die Gefahr des Auftretens von Allergieoder Resistenzerscheinungen vermindert wird.
709842/0A01
(*■■; A._,fs:f tsrO»5 Ot'o Airb'Ct Vofstard- f "^s* B β it ft VorslfzendV' Peter Gernm. GC-nlhe·- Hcailmonn, fr.'z He:nsdi
- Jf-
CHEMISCHE FABRIKEN
1. Reagenz zur Bestimmung des Fibrinogengehalts
1 ml einer Ancrod-Lösung (hergestellt gemäss DT-PS 1.442.134), enthaltend 7Ö Einheiten Enzym, wird mit
4 ml einer lO^igen Dextranlösung (Molekulargewicht 40.000) und 5 ml einer 0,9$igen NaCl-Lösung gemischt.
2. Lösung zur intravenösen Applikation
Jeweils 0,5 ml Ancrod-Lösung (hergestellt wie in Beispiel
1 angegeben) werden mit 499?5 ml einer lO^igen
Dextranlösung (Molekulargewicht 6O.OOO) gemischt und
in Flaschen gefüllt.
Das Mischen der sterilen Lösungen erfolgte unter dem Schutz von Laminar-Airflow.
3· Lösung zur subkutanen Applikation
Jeweils 1 ml Ancrod-Lösung (hergestellt wie in Beispiel 1 angegeben) werden mit 9>0 ml einer lO^igen Dextranlösung
(Molekulargewicht 40.000) unter sterilen Bedingungen gemischt und in Ampullen abgefüllt.
709842/0401 - 5 -
CHEMISCHE FABRIKEN
Die Aktivität des neuen Fibrinogen spaltenden Enzymsystems wurde mit Hilfe folgender Lösungen bestimmt:
A) 0,3 mg Fibrinogen in 100 ml Puffer (pH 7,5), welcher 0,01 molar an Tris-(hydroxymethyl)-aminomethan und
0,15 molar an NaCl ist,
B) 1,4 Einheiten Ancrod in 10 ml 0,9$iger NaCl-Lösung,
C) 1,4 Einheiten Ancrod in 10 ml 0,9/oiger NaCl-Lösung,
welche 1000 mg Dextran (Molekulargewicht 60.000) enthält,
und
D) 1,4 Einheiten Ancrod in 10 ml 0,9/Siger NaCl-Lösung,
welche 1000 mg Dextran (Molekulargewicht 40.000) enthält.
2 ml der Lösungen B, C und D werden mit je 1 ml der Lösung
A versetzt und die Gerinnungszeit bei 25 C gemessen. Folgende Werte wurden erhalten:
Mischung Gerinnungszeit
| A) - | 597 | Sekunden |
| A) - | 43 | Sekunden |
| A) - | 6 | Sekunden |
| l· B) | ||
| l·· C) | ||
| r D) |
703842/0401
CHEMISCHE FABRIKEN kj}* \J
Daraus ersieht man, dass die Enzymwirkung um den Faktor 13 - 100 erhöht wird, wenn man gemäss der Erfindung ein
wasserlösliches Polysaccharxd zu dem Enzym gibt. Eine Dextran-Lösung allein bringt Fibrinogen nicht zur Gerinnung.
- 7 -709842/0401
Claims (2)
1.) Fibrinogen spaltendes Enzymsystem bestehend aus einer Fibrinogenase und einem wasserlöslichen Polysaccharid.
2.) Verfahren zur Herstellung eines Fibrinogen spaltenden Enzymsystems, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Fibrinogenase
und ein wasserlöslxches Polysaccharid in wässriger Lösung zusammengibt.
3·) Diagnostikum, enthaltend das Fibrinogen spaltende Enzymsystem
gemäss Anspruch 1.
4·) Arzneimittel, enthaltend das Fibrinogen spaltende Enzymsystem gemäss Anspruch 1.
Dr.WK/bu
709842/0401
Vorsitzender des Aufsichtsrats: Otto Ambros ■ Vorstand ι Ernst Biekert, Vorsitzender; Peter Clemm, Günther Hallmann, FiUz Heinsch Amisgeridil Ludwigjha^n/iih. Nr Ηΐ3 1252
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