DE2604196A1

DE2604196A1 - Neue amidine

Info

Publication number: DE2604196A1
Application number: DE2604196A
Authority: DE
Inventors: Klaus Dipl Chem Dr Hummel; Deszoe Dipl Chem Dr Peteri; Arthur Dr Scherm
Original assignee: Merz and Co GmbH and Co KG
Current assignee: Merz and Co GmbH and Co KG
Priority date: 1976-02-04
Filing date: 1976-02-04
Publication date: 1977-08-11
Also published as: DE2604196B2; DE2604196C3

Description

28. Januar 1976 A 1/76

Merz + Co., Frankfurt/Main

Neue Amidine

Die vorliegende Erfindung betrifft neue virostatisch wirksame Amidine der allgemeinen Formel

In der

R,

NH

»N-R-

a) 1-Adamanty1

b) 1-(3,5 Dimethyladamantyl),

c) 2-Norborny1,

d) Norborn-2-en-5-yl,

e) 2-Bicyclo-(2,2,2)-octyl,

f) -C H,

, wobei η = 3,4,5,6

g)

h) 2-Pyridin, 1) 4-Pyridin, j) 2-Furyl.

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- 48"-

= H oder CH₃

R- = H, wobei

= die für b) bis j) angegebene Bedeutung besitzt,

oder

wobei X = H-CH,-OCH-F-CF₃

und Y=X oder H

= Phenyl, = Cyclohexyl, = Adamantyl, = Piperazin, = Piperidin, = Pyridin, = Naphthalin,

sowie ihre pharmazeutisch vertretbaren Salze mit organischen oder anorganischen Säuren.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind neu. Die beanspruchten Verbindungen der obigen allgemeinen Formel weisen eine hohe virostatische Wirkung bei sehr geringer Toxizität auf und sind deshalb bei Menschen und Tieren vorteilhaft anwendbar.

Aus der Literatur ist die Wirksamkeit von Pentamidin, Hexamidin- und Heptamidin gegen Influenza und von Stilbamidin gegen Mumpsviren bekannt (vgl. M.D. Eaton et al., J. Immunology j5i3, 1 (1952) sowie M.D. Eaton et al., J. Immunology 6j3, 321 (1952).

In der DT-OS 2 3o6 784 wird ferner für Adamantylcarboxyamidin eine Wirksamkeit gegen Influenza angegeben.

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Demgegenüber wurden nun gefunden, daß auch Amidine der allgemeinen Formel

^,NH

R- —~~~—■· C

NR₃

^R2

in der R-, R₂ und R- die im Anspruch angegebene Bedeutung besitzen, ein breites antivirales Wirkungsspektrum vor allem gegen Influenza, Herpes, Vaccine, Rhino usw. aufweisen. Außerdem sind die erfindungsgemäßen Verbindungen im Vergleich zu den Verbindungen der o.g. DT-OS weit weniger toxisch, was ebenfalls als Vorteil angesehen werden kann.

Wie durch in vitro Untersuchungen in Plaque-Reduktionstests unter Verwendung verschiedener Viren festgestellt wurde, tritt eine Wachstumshemmung bei 1-1oo p/ml ein. Aufgrund der niedrigen Toxizität können die erfindungsgemäßen Substanzen vor allem als wirksame Prophylaktika gegen Grippe verwendet werden. Die Tagesdosis für Erwachsene beträgt während der Zeit der Erkrankung 5o-2oo mg Wirkstoff täglich.

Die Verabreichung der erfindungsgemäßen Verbindungen, bzw. ihrer pharmazeutisch vertretbaren Salze, kann parenteral, z.B. subkutan, intravenös, intramuskulär und intraperitoneal erfolgen.In diesem Falle stellen die Trägersubstanzen sterile Flüssigkeiten dar, wie Wasser oder öl, wobei pflanzliche, tierische oder synthetische öle eingesetzt werden können. Für Injektionslösungen dienen gewöhnlich Glucoselösungen. Die flüssigen Träger der injizierbaren Lösungen enthalten im allgemeinen o,5-25 Gew./% an' Wirksubstanz.

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Mit gleichem Erfolg können die erfindungsgemäßen Verbindungen oral verabreicht werden. Ebenso eignen sich die Verbindungen besonders gegen virale Pneumonien in Form von Dampf oder Spray zur Behandlung der Mund- und Nasengänge.

Für die orale Verabreichung kommen in erster Linie Zusammensetzungen in Tabletten-, Kapsel- oder Pulverform, als Lösungen, Suspensionen oder Elixier in Betracht. Der aktive Bestandteil beträgt in diesen Verabreichungen wenigstens 2 Gew./%, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung.

Als Träger für die erfindungsgemäßen, aktiven Bestandteile dienen feste oder flüssige Träger, wie sie üblicherweise bei Arzneiformen eingesetzt werden.

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung: Methode A

Darstellung von Cyclohexyl-N-(p-Chlor-phenyl)-amidin;

1. 3,o g Cyclohexancarbonitril, 3,8 g p-Chloranilin und 4,5 g wasserfreies AlCl, werden gemischt und unter Feuchtigkeitsausschluß 2 Stunden auf 21o° C erhitzt. Die etwas abgekühlte Schmelze wird in 5o ml angesäuertes Methanol gegossen. Die klare Lösung wird mit dem 5-fachen Volumen Wasser versetzt und drei mal ausgeäthert. Die wässrige Phase wird mit Natronlauge auf pH = 11 eingestellt und ausgeäthert. Der Ätherextrakt wird mit Kochsalzlösung gewaschen und getrocknet. Dann wird mit trockenem HCl-Gas das Amidinhydrochlorid gefällt, abgenutscht und getrocknet.

Ausbeute: 80 % d. Th., Fp: 231° C

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2. Darstellung von 1-Adamantyl-N-phenylamidin

5,36 g 1-Cyanadamantan, 3,1 g frisch destilliertes Anilin und 4,4 g wasserfreies Aluminiumchlorid werden gemischt und unter Feuchtigkeitsausschluß 2 Stunden auf 21o° C erhitzt. Die Aufarbeitung erfolgt wie oben angegeben.

Ausbeute: 5o % d. Th., Fp: 231° C

Methode B

3. Darstellung von 1-Adamantyl-N-(p-Äthoxyphenyl)-Amidin

24 g 1-Cyanadamantan und 45 g Phenetidiniumtosylat werden 2 1/2 Stunde auf 21o° C erhitzt. Die Schmelze wird in 25o ml Methanol gegossen und mit dem zehnfachen Volumen Wasser versetzt und drei mal ausgeäthert. Die wässrige Phase wird mit Natronlauge auf pH = 11 eingestellt und ausgeäthert. Der Ätherextrakt wird mit Kochsalzlösung gewaschen und getrocknet. Dann wird mit trockenem HCl-Gas das Amidinhydrochlorid gefällt, abgenutscht und getrocknet.

Ausbeute: 4o % d. Th., Fp: 216° C

Methode C

5. Darstellung von 2-Norbornylcarboxamidin

3,6 g 2-Norbornancarbosäurenitril wurden in 3o ml Chloroform gelöst, 1,2 ml Methanol zugegeben und unter Feuchtigkeitsausschluß bei 0° HCl-Gas bis zur Sättigung eingeleitet. Nach eintägigem Stehen im Kühl-

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- j£r~

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schrank wurden 4oo ml Äther zugegeben und das ausgefallene Produkt abgesaugt, mit Äther nachgewaschen und anschließend getrocknet. Das entstandene Produkt wurde in 1o ml Methanol gelöst und 1o ml 1o%ige methanolische Ammoniaklösung zugegeben. Nach dem Stehen über Nacht wurde das entsprechende Amidinhydrochlorid mit 2oo ml Äther ausgefällt, abgesaugt und getrocknet.

Ausbeute: 7o % d. Th., Fp: 241° C

6. Darstellung von Cyclohexylcarboxamidin

8,2 g Cyclohexancarbonitril wurden in 5o ml abs. Methanol gelöst und unter Feuchtigkeitsausschluß bei 0° C HCl-Gas bis zur Sättigung eingeleitet. Nach eintägigem Stehen im Kühlschrank wurde mit 8oo ml Äther gefällt, das Produkt mit Äther nachgewaschen und getrocknet. Das Iminoätherhydrochlorid wurde in 14o ml 1o%iger methanolischer Ammoniaklösung gelöst und nach dem Stehen über Nacht das Amidinhydrochlorid mit 1 1 Äther gefällt, abgesaugt und getrocknet.

Ausbeute: 8o % d. Th., Fp: 185° C

Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen wertvolle pharmakodynamische Eigenschaften und können deshalb in der Human- und Tiermedizin vorteilhaft angewandt werden.

Die überlegenen virostatischen Eigenschaften von Cyclohexyl-

-CH

carboxamidin (R₁ = '

, η = 4, R_ = R_ = Wasserstoff)

/ ' " CH₂

gegenüber 1-Aminoadamantan und 1-Adamantylcarboxamidin gehen aus in vitro Untersuchungen nach dem Hemmhoftest und nach der

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Plaque-Reduktionsmethode hervor. Folgende Virusstämme wurden eingesetzt:

Influenza A2, Vaccine-Virus, Herpes-Virus, Rhino-Virus Typ 14.

Bei dem Hemmhoftest werden Gewebekulturen mit den Virusstämmen Influenza und Vaccine (Küken-Vibroplasten), Parainfluenza (Affennierenzellen) und Herpes (menschliche Amnion-Zellen) in der Form infiziert, daß dichtstehende, jedoch einzelne, getrennte Plaques entstehen. Daraufhin wird die zu prüfende Substanz als 1%ige Lösung (in Wasser oder Äthanol) aufgebracht und nach dem Bebrüten der Hemmhofdurchmesser bestimmt. Die erhaltenen Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle aufgeführt.

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TABELLE I
PHYSIKALISCHE UND VIROSTATISCHE EIGENSCHAFTEN ANHAND DES HEi-IMHOFTESTS DER ERFINDUNGSGEMA'ßEN VERBINDUNGEN

NH

.N-R,

O ■ kein Hemmhof

+ « mäßig (HH 1o-2o mm)

++ » gut (HH 2o-3o mm)

+++ ■ sehr gut (HH Λ3o mm)

LD 5o	Physikalische Eigenschaften	R₂	R₃	Fp	'2	L	C ber./ gef.	•	Virostatische Eigenschaften
i.V. Maus mg/kg	^R1	H	p-Äthoxyphcmyl	257°	Formel	68,T9/67,49	H ber./gef.	Influenza Vaccinia Herpes
12,3	1-Adamantyl	H	p-Chlorphenyl	295° subl.	C₁₉H₂₇ClN₂O	62,8o/62,63	8,o6/8,14	+++ +++ +H ψ
14.7	1-Adamantyl	H	p-Hydroxyphenyl	290° zers.	^C17^H22^C12^N2	67,58/67,01	6,85/6,79
35,o	1-Adamantyl	H	p-Methoxyphenyl		C₁₇H₂₃ClN₂O	67,4o/65,25	7,31/7,66
	1-Adamantyl	H	H	241°	^C18^H25^C1N2°	55,03/54,76	7,8o/7,75	₊₊ ■· -
58,7	2-Norbornyl	H	p-Chlorphenyl	231°	C₈H₁₅ClN₂	57,14/56,67	8,59/8,71
	".yclohexyl	H	H		C₁₃H₁₈ClN₂	51,69/5o,32	6,59/6,78
88,0	Cyclohexyl		Zum Vergleich 1-Aminoadamantanhydrochlorid	C₇H₁₅ClN₂		9,23/9,16
	+++ 0 0

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Bei der Plaque-Reduktionsmethode wird ebenfalls in vitro die Wirkung der zu prüfenden Substanz auf verschiedene Viren untersucht. Nach Aufbringen der zu prüfenden Substanz, Infektion mit den entsprechenden Viren und Bebrütung wird die Anzahl der Plaques bestimmt, die von den Viren verursacht werden: je kleiner die Plaque-Anzahl gegenüber der Kontrollgruppe ist, desto wirksamer ist die getestete Substanz. Entsprechende Versuchsergebnisse gibt die folgende Tabelle II wieder.

TABELLE II

Virostatische Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen nach der Plaque-Reduktions-Methode

	Kon z.	Anzahl der Plaques	Influenza
Substanz		Herpes	65
Kontrolle	5o f /ml	98	12
1-Adamantyl-N-(p-Äthoxyphenyl)-amidin	5o f /ml	1	17
1-Adamantyl-N-(p-Chlorphenyl)-amidin	5o y/ml	14	16
1-Adamantyl-N-(p-Hydroxyphenyl)-amidin	5o f /ml	9	51
Vergleich Amantadin (Symmetrel)	5o f/ml	—	—
Vergleich Tromantadin		73	1o4
Kontrolle	5 f /ml	39	63
Cyclohexylcarboxamidin	2o ^/ml	19	52
Vergleich 1-Adamantylcarboxamidin	28

Ein Blick auf die Tabellen I und II belegt die überlegene virostatische Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen. (So ist z.B. bei einer vierfachen Konzentration von 1-Adamantylcarboxamidin die Hemmwirkung bei Herpes und Influenza schwächer als bei Cyclohexylcarboxamidin.)

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Tabelle III zeigt die im Vergleich zu 1-Adamantylcarboxamidin wesentlich abgesenkten akuten Toxizitäten.

TABELLE III

Substanz	LD 5o
1-Adamantyl-N-(p-Hydroxyphenyl)-amidin 2-Norbornylcarboxamidin Cyclohexylcarboxamidin	35,o mg/kg 58,7 mg/kg 88,ο mg/kg
Vergleich 1-Adamantylcarboxamidin	19,1 mg/kg

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Claims

PATENTANSPRÜCHE

In der R.. = a) 1-Adamantyl,

by 1-(3_r5 Dimethyladamantyl),

c) 2-Norbornyl,

di Norborn-2-en-5-yl,

*e) 2-Bicyclo-(2,2,2)-octyl,

f) -CH,

CCH₂) , wobei η = 3,4,5,6

CH₂

h) 2-Pyridin, i) 4-Pyridin, j) 2-Furyl,

H oder CH,

ORIGINAL INSPECTED

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= H, wobei R = die für b) bis J) angegebene

Bedeutung besitzt™

X oder s^iC wobei X = H-CH₃-OCH₃-OC₂H₅-Cl-OH-

NH₂-F-CF₃

und Y=X oder H

= Phenyl, = Cyclohexyl, = Adamantyl, = Piperazin, = Piperidin, = Pyridin, = Naphthalin,

sowie ihre pharmazeutisch vertretbaren Salze mit organischen oder anorganischen Säuren.
2. Arzneimittel mit virostatischen Eigenschaften, dadurch gekennzeichnet, daß _ Is Wirkstoff Amidine gem. Anspruch 1 oder deren pharmazeutisch akzeptable Säureadditionssalze enthalten.

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