DE2604196B2

DE2604196B2 -

Info

Publication number: DE2604196B2
Application number: DE19762604196
Authority: DE
Inventors: Klaus Dipl.- Chem. Dr. 6000 Frankfurt Hummel; Deszoe Dipl.-Chem. Dr. 6451 Hammersbach Peteri; Arthur Dr. 6380 Bad Homburg Scherm
Original assignee: Merz and Co GmbH and Co KG
Current assignee: Merz and Co GmbH and Co KG
Priority date: 1976-02-04
Filing date: 1976-02-04
Publication date: 1979-06-07
Also published as: DE2604196A1; DE2604196C3

Description

N-R₃

In der

R₁ = a) 1-Adamantyl,

b) 2-Norbornyl,

c) Norborn-2-en-5-yl,

d) 2-Bicyclo-(2,2,2)-octyI,

e) -CH

= H

CH,
wobei H = 3,4, 5, 6

R, =

a) H,

wobei R, = die für b) bis e) angegebene

Bedeutung besitzt

oder

wobei

X = H—CH₃-OCH₃-OQH₅-Cl-η
L-OH-NH₂-F-CF₃

c) Adamantyl

d) Naphthalin

sowie ihre pharmazeutisch vertretbaren Salze mit organischen oder anorganischen Säuren.

2. Arzneimittel mit virostatischen Eigenschaften, dadurch gekennzeichnet, daß sie als Wirkstoff Amidine gemäß Anspruch I oder deren pharmazeutisch akzeptable Säureadditionssalze enthalten.

Die vorliegende Erfindung betrifft neue virostatisch wirksame Amidine gemäß Anspruch I sowie Arzneimittel, die diese Verbindungen enthalten.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind neu. Die beanspruchten Verbindungen der obigen allgemeinen Formel weisen eine hohe virostatische Wirkung bei sehr geringer Toxizität auf und sind deshalb bei Menschen und Tieren vorteilhaft anwendbar.

Aus der Literatur ist die Wirksamkeit von Pentamidin, Hexamidin und Heptamidin gegen Influenza und von Stilbamidin gegen Mumpsviren bekannt (vgl. M. D.

R₁-C

NH

NR₃ R₁

in der Ri, R2 und R3 die im Anspruch angegebene Bedeutung besitzen, ein breites antivirales Wirkungsspektrum vor allem gegen Influenza, Herpes, Vaccine, Rhino usw. aufweisen. Außerdem sind die erfindungsgemäßen Verbindungen im Vergleich /u den Verbindungen der obengenannten DE-OS weit weniger toxisch, was ebenfalls als Vorteil angesehen werden kann.

Wie durch in vitro Untersuchungen in Plaque-Reduktionstests unter Verwendung verschiedener Viren festgestellt wurde, tritt eine Wachstumshemmung bei 1 — ΙΟΟμ/ml ein. Aufgrund der niedrigen Toxizität können die erfindungsgemäßen Substanzen vor allem als wirksame Prophyiaktika gegen Grippe verwendet

jo werden. Die Tagesdosis für Erwachsene beträgt während der Zeit der Erkrankung 50—200 mg Wirkstoff täglich.

Die Verabreichung der erfindungsgemäßen Verbindungen, bzw. ihrer pharmazeutisch vertretbaren Salze,

)5 kann parenteral, z. B. subkutan, intravenös, intramuskulär und intraperitoneal erfolgen. In diesem Falle stellen die Trägersubstanzen sterile Flüssigkeiten dar. wie Wasser oder Öl, wobei pflanzliche, tierische oder synthetische öle eingesetzt werden können. Für Injektionslösungen dienen gewöhnlich Glucoselösungen. Die flüssigen Träger der injizierbaren Lösungen enthalten im allgemeinen 0,5-25 Gew.-% an Wirksubstanz.

Mit gleichem Erfolg können die erfindungsgemäßen Verbindungen oral verabreicht werden. Ebenso eignen sich die Verbindungen besonders gegen virale Pneumonien in Form von Dampf oder Spray zur Behandlung der Mund- und Nasengänge.

Für die orale Verabreichung kommen in erster Linie

ίο Zusammensetzungen in Tabletten-, Kapsel- oder Pulverform, als Lösungen, Suspensionen oder Elixier in Betracht. Der iktive Bestandteil beträgt in diesen Verabreichungen wenigstens 2 Gew.-%, bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung.

M Als Träger für die erfindungsgemäßen, aktiven Bestandteile dienen feste oder flüssige Träger, wie sie üblicherweise bei Arzneiformen eingesetzt werden.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung:

Methode A

I. Darstellung von Cyclohexyl-N-(p-Chlor-phenyl)-amidin

3,0 g Cyclohexancarbonitril, 3,8 g p-Chloranilin und 4,5 g wasserfreies AICI3 werden gemischt und unter Feuchtigkeitsausschluß 2 Stunden auf 210⁰C erhitzt Die etwas abgekühlte Schmelze wird in 50 ml angesäuertes Methanol gegossen. Die klare

Lösung wird mit dem Stachen Volumen Wasser versetzt und dreimal ausgeäthert Die wäßrige Phase wird mit Natronlauge auf pH = 11 eingestellt und ausgeäthert Der Ätherextrakt wird mit Kochsalzlösung gewaschen und getrockent. Dann wird mit trockenem HCI-Gas das Amidinhydrochlorid gefällt, abgenutscht und getrocknet. Ausbeute: 80% d. Th, Fp: 231 ° C

Elementaranalyse:	Ber.	Gef.
	57,14 6,64 12,99	56,67 6,78 12,95
C H Cl

IO

15

2. Darstellung vcn 1-Adamantyl-N-phenylamidin

536 g 1-Cyanadamantan, 3,1g frisch destilliertes Anilin und 4,4 g wasserfreies Aluminiumchlorid werden gemischt und unter FeuchtigkeitsausschluB 2 Stunden auf 210⁰C erhitzt. Die Aufarbeitung erfolgt wie oben angegeben.
Ausbeute: 50% d. Th.,
Fp:231°C

Elementaranalyse:

20

JO

Ber.

Gef.

C	70,23	;j,io
H	7,91	7,87
Cl	12,20	12,45

Nach der gleichen Methode werden auch folgende w Verbindungen dargestellt:
a) l-Adamantyl-N-ip-ChlorphcnylJ-Amidin Ausbeute: 60%d.Th..

Fp:295\„biC

■1)

Elemcniaranalyse:	Ber.	Ger.	Ber.	Gef.
	62,80 6,85	62,63 6,79	67,58 7.31	67,01 7.66
C H		b) 1-Adamatityl-N-(p-Hydroxyphenyl)-Amidin Ausbeute: 65%d.Th., Fp: 290° 2 C
Elementaranalyse:

C H

b0

3, Darstellung nyl)-Amidin

Methode B
von l-Adamanty!-N-(p-Äthoxyphe-

24 g I-Cyanadamantan und 45 g Phenetidiniumtosylat werden 2·Λ> Stunde auf 210"C erhitzt. Die Schmelze wird in 250 ml Methanol gegossen und mit dem zehnfachen Volumen Wasser versetzt und dreimal ausgeäthert. Die wäßrige Phase wird mit Natronlauge auf pH = 11 eingestellt und ausgeäthert. Der Ätherextrakt wird mit Kochsalzlösung gewaschen und getrocknet. Dann wird mit trockenem HCI-Gas das Amidinhydrochlorid gefällt, abgenutscht und getrocknet
Ausbeute: 40%d.Th„
Fp:216°C

Elementaranalyse:

Ber.

Gef.

C
H

68,19
8,06

67,49
8,14

Nach der gleichen Methode werden auch folgende Verbindungen dargestellt:
a) I -Adamantyl-N-(p-Methoxyphcnyl)-Amidin
Ausbeute: 40%d.Th,
Fp.:262°C

Elementaranalyse:

	Ber.	Gef	30%d.Th„	Ber.	Gef.
C	67,40	65,25	Fp.: 130⁰C	58,96	58,72
H	7,80	7,75	Elementaranalyse:	6,31	6,28
b) 2-Norbornyl-N-(p-Chlorphcnyl)-Aniidin		Methode C
Ausbeute:	C
	H

5. Darstellung von 2-Norbornylcarboxamidin

3,6 g 2-Norbornancarbosäurenitril wurden in 30 ml Chloroform gelöst, 1,2 ml Methanol zugegeben und unter Feuchtigkeitsausschluß bei 0⁰C HCI-Gas bis zur Sättigung eingeleitet. Nach eintägigem Stehen im Kühlschrank wurden 400 ml Äther zugegeben und das ausgefallene Produkt abgesaugt, mit Äther nachgewaschen und anschließend getrocknet. Das entstandene Produkt wurde in 10 ml Methanol gelöst und 10 ml 10%ige methanolische Ammoniaklösung zugegeben. Nach dem Stehen über Nacht wurde das entsprechende Amidinhydrochlorid mit 200 ml Äther ausgefällt, abgesaugt und getrocknet.

Ausbeute:

70%d.Th„
Fp.:241°C

5 Elementaranalyse:	Ger.	26	04	196	6 Elementaranalyse:	Ger.
Ber.	54,76 8,71				Ber.	55,21 7JiO
C 55,03 H 8,59		5		C 55,66 H 7,53

6, Darstellung von Cyclohexylcarboxamidin

8,2 g Cyclohexancarbonitril wurden in 50 ml abs. Methanol gelöst und unter Feuchtigkeitsausschluß bei 0⁰C HCI-Gas bis zur Sättigung eingeleitet. Nach eintätigem Stehen im Kühlschrank wurde mit 800 ml Äther gefällt, das Produkt mit Äther nachgewaschen und getrocknet Das Iminoätherhydrochlorid wurde in 140 ml 10%iger methanolischer Ammoniaklösung gelöst und nach dem Stehen über Nacht das Amidinhydrochlorid mit 1 I Äther gefällt, abgesaugt und getrocknet. Ausbeute: 80%d.Th.
Fp.: 185° C

Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen wertvolle pharmakodynamische Eigenschaften und können deshalb in der Human- und Tiermedizin vorteilhaft angewandt werden.

Die überlegenen virostatischen Eigenschaften von Cyclohexylcarboxamidin

(R, = -CH

CH₂

(CH₂)„

20

Elementaranalyse:	Ber.	Ger.
	51,69 9,23 22,6	50,32 9,16 21,8
C H Cl

JO

Nach der gleichen Methode wurde auch folgende Verbindung dargestellt:

Bicyclo-[2.2.1]-hept-2-en-5-carboxamidin

Ausbeute: 20%d.Th„
Fp.: 203° C

η = 4, R₂ = R₃ = Wasserstoff)

gegenüber 1-Aminoadamantan und 1-Adamantylcarboxamidin gehen aus in vitro Untersuchungen nach dem Hemmhoftest und nach der Plaque-Reduktionsmethcde h< rvor.

Folgende Virusstämme wurden eingesetzt:

Influenza A2,
Vaccine-Virus.
Herpes-Virus.
Rhino-Virus Typ 14.

Bei dem Hemmhoftest werden Gewebekulturen mit den Virusstämmen Influenza und Vaccine (Küken-Vibroplasten), Parainfluenza (Affennierenzellen) und Herpes (menschliche Amnion-Zellen) in der Form infiziert, daß dichtstehende, jedoch einzelne, getrennte Plaques entstehen. Daraufhin wird die zu prüfende Substanz als l%ige Lösung (in (Wasser oder Äthdnol) .aufgebracht und nach dem Bebrüten der Hemmhofduchmesser bestimmt. Die erhaltenen Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle aufgeführt.

Tabelle 1

Physikalische und virostatische Eigenschaften anhand des Hemmhoftests der erfindungsgemäßen Verbindungen

NH

R₁-C

R₂

LDSO Physikalische Eigenschaften

Maus R₁ R₂ Rj

mg/kg

Fp Formel

ber./gef.

ber./gef

Virosiatische Eigenschaften

Influ- Vacci- Herpes enza nie

12,3 1-Adamantyl H p-Athoxyphenyl 267° Ci₉H₂₇ClN₂O 68,19/67,49 8,06/8,14 +++ +++ +++

14.7 1-Adamantyl H p-Chlorphenyl 295° C_nH₂₂Cl₂N₂ 62,80/62,63 6,85/6.79 ++ ++ ++

subl.

35,0 I-Adamantyl H p-Hydroxyphenyl 290° C₁₇H₂₃CIN₂O 67,58/67,01 7,31/7,66 +++ ++ +++

1-Adamanly, H p-Methoxyphenyl

C₁₈H₂₅ClN₂O 67,40/65,25 7,80/7,75 +++ ++ ++

LDSO Physikalische Eigenschaften

Maus R| R₂ Rj

Fp Formel C ber./gef.

H	Virostatische Eigen
	schaften
ber./gef.
	Influ- Vacci- Herpe
	enza ma
8,59/8,71	+++ +++ +++
6,59/6,78	+++ +++ +++
9,23/9,16	+++ +++ +++

241 231

2-Norbornyl H

Cyclohexyl H p-Chlorphenyl 88,0 Cyclohexyl H H

Zum Vergleich l-Aminoadamantanhydrochlorid

0 = kein Hemmhof

+ = mäßig (HH 10-20 mm)

+ + = gut (HH 20-30 mm)

+ + + = sehr gut 'IFl > 30 mm)

C₈H₁₅CIN₂

Ci₃H₁₈ClN₃

C₇Hi₅CIN₂ 55,03/54,76 57,14/56,67 51,69/50,32

Bei der Planne-Redi, ionsmethode wird ebenfalls in vitro die Wirkung der zu prüfenden Substanz auf verschiedene Viren untersucht. Nach Aufbringen der zu prüfenden Substanz, Infektion mit den entsprechenden Viren und Bebrütung wird die Anzahl der Plaques bestimmt, die von den Viren verursacht w >rden: je kleiner die Plaque-Anzahl gegenüber der Kontrollgruppe ist, desto wirksamer ist die getestete Substanz. Entsprechende Versuchsergebnisse gibt die folgende Tabelle Il wieder.

Tabelle II Virostatische Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen nach der PIaque-Reduktions-Methode

Substanz

Ko-/.

Anzahl der Plaques Herpes Influenza

Kontrolle

l-Adamantyl-N-(p-Äthoxyphenyl)-arnidin l-Adamantyl-N-(p-Chlorphenyl)-amidin l-Adamantyl-N-(p-Hydroxyphenyl)-amidin Vergleich Amantadin (Symmetrel) Vergleich Tromantadin

Kontrolle

Cyclohexylcarboxamidin Vergleich 1-Adamantylcarboxamidin

	98	65
50 y/ml	1	12
50 y/ml	14	17
50 y/ml	9	16
50 y/ml	-	51
50 y/ml	73	-
	39	104
5 y/ml	19	63
20 y/ml	28	52

Ein Blick auf die Tabellen I und Il belegt die -ti Hemmwirkung bei Herpes und Influenza schwächer als Überlegene virostatische Wirksamkeit der erfindungs- bei Cyclohexylcarboxamidin.)

Tabelle III zeigt die im Vergleich zu I-Adamantyl· carboxamidin wesentlich abgesenkten akuten Toxizitä-

gemäßen Verbindungen. (So ist z. B. bei einer vierfachen Konzentration von I-Adamantylcarboxamidin die

Tabelle III

Substanz LD 50

l-Adamantyl-N-(p-Hydroxyphenyl)- 35,0 mg/kg amidin

2-Norbornylcarboxamidin 58,7 mg/kg

Cyclohexylcarboxamidin 88,0 mg/kg Vergleich l-Adamantylcarboxamidin 19,1 mg/kg

Claims

Patentansprüche:
I. Amide der allgemeinen Formel
NH

R₁-C

Ea ton et al, J. Immunology 68, 1 [1952] sowie M. D. E a t ο η et aL, J. Immunology 68,321 [I952J.

In der DE-OS 23 06 784 wird ferner für Adamantylcarboxyamidin eine Wirksamkeit gegen Influenza angegebea

Demgegenüber wurden nun gefunden, daß auch Amidine der allgemeinen Formel