DE2011982A1

DE2011982A1 - Verfahren zur Herstellung eines neuen Antibioticums

Info

Publication number: DE2011982A1
Application number: DE19702011982
Authority: DE
Inventors: Dr Annemarie Closse; Thiele Dr Hans Hermann
Original assignee: Sandoz AG
Current assignee: Sandoz AG
Priority date: 1969-03-18
Filing date: 1970-03-13
Publication date: 1970-10-01
Also published as: SE353347B; NL7003224A; FR2035036B1; JPS5022117B1; AT309673B; BE747441A; CH516640A; SU520925A3; GB1300137A; PL80536B1; CS161872B2; DK124039B; FR2035036A1; US3764671A

Description

Sandoz AG

Basel . Case 100-3055

Patentanwälte

Dr. W. Schalk, D^;?!,hg. P. Wirth ' Dipl.-Ing. G Dann \iborg

Dr. V. Sc-.fnied IC'.yarzik . .

Dr. P. WeinhoiiJ, Oi. D. Gudel
6 Frankfurt/M., Gr. Eschenheimer Str. 39

Verfahren zur Herstellung eines neuen Antibioticums

Die vorliegende Erfindung betrifft ein neues Antibioticum, das nachstehend mit SL 3440 bezeichnet wird, Verfahren zur Herstellung dieses Antibioticums und pharmazeutische Zubereitungen davon. ,

Erfindungsgemäss gelangt man zu dem neuen Antibioticum SL 3440, indem man einen neuen Stamm der Pilzspecies Diheterospora chlamydosporia auf oder in einem Nährmedium züchtet und das Antibioticum aus der Fermentationsbrühe auf an sich bekannte Weise, z.B. durch Extraktion oder Adsorption, isoliert und reinigt.

Der neue, erfindungsgemäss verwendete Stamm von Diheterospora chlamydosporia wurde aus einer in Italien gefundenen Erdprobe isoliert und eine Probe davon beim United States Department of Agriculture (Northern

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Utilization Research and Development'Division), Peoria, 111., USA, unter der Nummer NRRL 3^72 deponiert.

Der neue Stamm der Pilzspecies Diheterospora chlamydosporia wächst auf einem Glucose-Malzextrakt-Hefeextrakt^-Pepton-Agar bei 18 - 27° und bildet weisses, niederes Luftmycel. Die Rückseite der Kolonie zeigt eine gelbbraune yerfärbung des Substrats.

Der Stamm NRRL 3^72 entspricht in seiner Morphologie und Physiologie der Beschreibung bei G.L. Barron und A.H.S. Onions, Canadian Journal of Botany, Vol. Hh, pages 861 869 [1966].

Der neue Stamm NRRL 3^72' der Pilzspecies Diheterospora chlamydosporia lässt sich auf vielerlei Nährböden, die die üblichen Nährstoffe enthalten, züchten. So verwendet ein solcher Stamm die für kohlenstoffheterotrophe Organismen üblicherweise benutzten Nährstoffe, beispielsweise Glucose, Stärke, Dextrin, Lactose, Rohrzucker usw. als Kohlenstoffquelle, organische und anorganische, stickstoffhaltige Verbindungen, wie Pepton, Hefe- oder Fleischextrakte, Ammoniumsulfat, Ammoniumnitrat, Aminosäuren usw. als Stickstoffquelle sowie die üblichen Mineralsalze und Spurenelemente.

Das neue Antibioticum kann man in der Weise herstellen, dass ein flüssiges Nährmedium mit einer Sporensuspension

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des neuen Stammes von Diheterospora chlamydosporla beimpft und die Kultur etwa 8 Tage bei l8° inkubiert wird. Die "

Züchtung kann unter aeroben Bedingungen in einer Oberflächenkultur oder submers unter Schütteln oder in Permentern mit Begasung durch Luft oder Sauerstoff unter Rühren erfolgen. Sobald eine maximale Menge an Antibioticum produziert worden ist, wird filtriert und das Antibioticum durch extraktive und/oder adsorptive Arbeitsmethoden auf an sich

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bekannte Weise aus-der mycelfreien Kulturlösung gewonnen.

Eine Methode, die sich als vorzugsweise geeignet erwiesen hat, besteht in der Extraktion der mycelfreien KuIturlösung mit Aethylenchlorid, jedoch können auch andere organische Lösungsmittel, wie z.B. Benzol, Chloroform, Butylacetat, Methylenchlorid oder Butanol, verwendet werden. Das neue Antibioticum kann chromatographisch aus dem Rohextrakt isoliert werden. *

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Das neue Antibioticum SL 344o kann wie folgt charakterisiert werden:

Farbloses, zähes OeI: C= 64,3 %\ H = 7,7 %\ N =10,3 % Spezifische Drehung:/ Mj;⁰ = -247,5° (c = 0,3 in Benzol) UV.-Spektrum (Methanol): . vergl. Pig* I IR.-Spektrum (Methylenchlorid): u.a. Banden bei 1685 und

.1635 cm"¹ (Fig. 2).

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Das neue Antibioticum zeichnet sich durch interessante pharmakologische Eigenschaften aus und kann daher als Heilmittel verwendet werden.

Das neue Antibioticum besitzt eine hohe fungistatische Wirksamkeit gegenüber verschiedenen Erregern von Pilzinfektionen. Besonders hervorzuheben ist die gute in vitro Aktivität gegen Trichophyton mentagrophytes (Mindesthemmkonzentration 10 γ/ml) Hlstoplasma capsulatum (Mindesthemmkonzentration 10 7/ml) Trichophyton tonsurans (Mindesthemmkonzentration 10 7/ml) Trichophyton rubrum (Mindesthemmkonzentration 10 7/ml) Epidermophyton floccosum (Mindesthemmkonzentration 10 7/ml) Microsporum canis (Mindesthemmkonzentration 10 7/ml) Microsporum audouinii (Mindesthemmkonzentration 10 7/ml) Histoplasma duboisii (Mindesthemmkonzentration 10 7/ml) Beastomyces brasiliensis (Mindesthemmkonzentration 10 7/ml) Beastomyces dermatitidis (Mindesthemmkonzentration 1 7/ml) Sporotrichum schenkii (Mindesthemmkonzentration 100 7/ml).

Ueberdies besitzt das neue Antibioticum eine ausgeprägte cytostatische Wirkung, wie sie in vitro an einem aus einem Maustumor herrührenden Zellstamm (P-8l5-Mastocytom) sowie in vivo am Walker-Tumor der Ratte gezeigt werden konnte. Das neue Antibioticum zeigt in vitro eine 50 #lge Hemmung der Zeil. Vermehrung bei einem Gehalt von 0,0004 7/ml; in vivo sind Dosen von 20 - 120 mg/kg (Tiergewicht eines Warmblüters) zu

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verabreichen, wobei die zu verabreichende Dosis von der gewünschten Wirkung sowie von der Applikationsart abhängt. Im allgemeinen hat sich für grosse Säugetiere eine Einzeldosis von 20 bis 1000 mg als vorteilhaft erwiesen, die vorzugsweise zweimal wöchentlich zu verabreichen ist» Für die orale Applikation enthält eine geeignete Verabreichungsform 20 bis 1000 mg der Wirksubstanz, vermischt mit einem flüssigen oder festen Träger. Für die topicale Anwendung können Pulverod. Sprays od. Salben od. Tinkturen, die 0,1 bis 2 % der Wirksubstanz enthalten, verwendet werden.

In dem nachfolgenden Beispiel, welches die Ausführung des Verfahrens erläutern, den Umfang der Erfindung aber in keiner Weise einschränken soll, erfolgen alle Temperaturangaben in Celsiusgraden.

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Beispiel;

In einem Fermenter werden 10 Liter einer Nährlösung, die pro Liter

40 g Cerelose

5 g Trypton

5 g NaNO

1 g K₂HPO₄

500 mg KCl

500 mg MgSO^ · 7 H₂O

10 mg PeSO₁^ · 7 H₂O und entmineralisiertes Wasser

enthält, mit einer Sporensuspension des Stammes NRRL ^472 von Diheterospora chlamydosporia beimpft und unter Belüftung (1,0 L Luft/toin./L Nährlösung) und unter Rühren (500 U./ Min.) 8 Tage bei l8° inkubiert. Das Mycel wird abgetrennt und das Kulturfiltrat mit Aethylenchlorid extrahiert. Der Rohextrakt wird an Kieselgel Merck (0,05 - 0,2 mm) chromatographiert und das aktive Material mit Chloroform/Methanol (99:1) eluiert.

Die zur Beimpfung verwendete Sporensuspension ist aus einer Kultur des ursprünglich isolierten Stammes hergestellt, welche 8 Tage bei 27° auf einem Agarmedium der folgenden Zusammensetzung gezüchtet wird:

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g Cerelose g Fadenagar

2 g Malzextrakt (Schweiz. Ferment AG)

2 g Hefe-Extrakt 2 g Pepton 2 g KH₂PO₄

2 g MgSO₄ * 7 H₂O '

und entmineralisiertes Wasser ad 1 L.

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Claims

100-5055

Patentansprüche:

il) Das Antibioticum SL 5440 mit folgenden Charakteristik^:

Farbloses, zähes OeI Elementaranalyse: Spezifische Drehung: UV.-Spektrum:

C = 64,5 %\ H = 7,7 %\ N = 10,5 %. [α]*^υ = -247,5° (c =0,5 in Benzol) Endabsorption, Schultern bei 255 nm (log V =0,8) und 285 nm (log V = -0,57) (in Methanol) (Vergl. Fig. 1)

IR.-Spektrum:

-1

u.a. Banden bei 1685 und I655 cm (in Methylenchlorid) (Vergl. Fig. 2)

2. Verfahren zur Herstellung des neuen Antibioticums SL 5440, dadurch gekennzeichnet, dass man den neuen Stamm NRRL 5472 der Pilzspecies Diheterospora chlamydosporia in einem Nährmedium züchtet und hierauf das Antibioticum SL 5440 nach an sich bekannten Methoden aus dem Nährmedium isoliert und reinigt.

5. Heilmittel, enthaltend das Antibioticum SL 5440.

5700/BA/PR

SANDOZ AG.

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